ES2651619T3 - Uso de gelsolina para tratar esclerosis múltiple y diagnosticar enfermedades neurológicas - Google Patents

Abstract

Gelsolina para uso en un método para tratar un sujeto que tiene esclerosis múltiple, comprendiendo el método la administración múltiple de gelsolina al sujeto.

Description

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DESCRIPCION

Uso de gelsolina para tratar esclerosis multiple y diagnosticar enfermedades neurologicas Campo de la invencion

La invencion se refiere a usos diagnosticos y terapeuticos de gelsolina.

Antecedentes de la invencion

A pesar de los avances significativos en el diagnostico y la terapia, las enfermedades neurologicas siguen siendo una causa principal de morbimortalidad en todo el mundo. Las enfermedades neurologicas son habituales y costosas. Segun una estimacion reciente, el coste anual para tratar enfermedades neurologicas en los Estados Unidos de America supera los 600 mil millones de dolares. De este modo, existe una fuerte motivacion para identificar nuevos tratamientos para las enfermedades neurologicas.

Debido a que el resultado del tratamiento depende de un diagnostico apropiado, es importante tener ensayos apropiados para diagnosticar enfermedades neurologicas y monitorizar el tratamiento de esas enfermedades. Un diagnostico apropiado permite al medico instituir una terapia apropiada y oportuna. La monitorizacion apropiada del tratamiento permite al medico decidir sobre el curso del tratamiento y aconsejar a los pacientes y a sus familiares sobre el curso esperado de la enfermedad. De este modo, tambien hay una fuerte motivacion para identificar nuevos ensayos y enfoques mejorados para diagnosticar y evaluar los tratamientos de enfermedades neurologicas. Se ha descrito (documento WO 02/05904 A2) un metodo de diagnostico de la esclerosis multiple analizando fluido corporal en busca de la presencia de isoformas proteicas asociadas con la esclerosis multiple. Tambien se ha descrito (documento WO 2007/041245 A2) el uso de biomarcadores para evaluar la eficacia del tratamiento sobre la esclerosis multiple.

Recientemente se ha implicado a la gelsolina, descubierta por primera vez como una protema de union a actina intracelular implicada en la movilidad celular (Yin, H. L. y Stossel, T. P. (1979) Nature 281, 583-6), en un numero de enfermedades. Aunque la funcion verdadera de la gelsolina plasmatica es desconocida, los estudios clmicos y con animales han mostrado que el agotamiento de gelsolina plasmatica por lesion e inflamacion esta asociado con resultados adversos. El mecanismo propuesto de agotamiento de gelsolina es que se une a actina abundante en celulas expuestas por ruptura de tejidos. Mas recientemente, se encontro que gelsolina se une a mediadores inflamatorios bioactivos, acido lisofosfatfdico, fosfato de diadenosina, peptido Ap (un peptido implicado en la patogenesis de la enfermedad de Alzheimer), factor activador de plaquetas, y posiblemente otros.

Sumario de la invencion

La gelsolina (GSN), espedficamente la gelsolina citoplasmatica (cGSN), ademas de ser una protema que se une a actina intracelular implicada en la movilidad celular, tambien es una protema secretora abundante (Yin, H. L., Kwiatkowski, D. J., Mole, J. E. y Cole, F. S. (1984) J Biol Chem 259, 5271-6). La isoforma exportada de gelsolina, denominada gelsolina plasmatica (pGSN), tiene 25 aminoacidos adicionales, y se origina del ayuste alternativo de un unico gen (Kwiatkowski, D. J., Stossel, T. P., Orkin, S. H., Mole, J. E., Colten, H. R. y Yin, H. L. (1986) Nature 323, 455-8).

Segun un primer aspecto de la presente invencion, se proporciona gelsolina para uso en un metodo para tratar un sujeto que tiene esclerosis multiple, segun las reivindicaciones independientes 1 y 7. Tambien se proporciona un metodo para evaluar la eficacia de una terapia para tratar o reducir el riesgo de esclerosis multiple, segun la reivindicacion independiente 8. En las reivindicaciones dependientes se describen otras caractensticas de la invencion.

Esta invencion se basa en el descubrimiento sorprendente de que los niveles de gelsolina plasmatica se reducen en un modelo de animal de esclerosis multiple, y que la reduccion en los niveles de gelsolina plasmatica precede a las manifestaciones de la esclerosis multiple. La invencion tambien se basa en el hallazgo de que la administracion de gelsolina previene y/o suprime la manifestacion de la enfermedad. De este modo, la descripcion implica, en un aspecto, la administracion de gelsolina a un sujeto para tratar esclerosis multiple. La descripcion tambien se refiere a metodos para usar gelsolina para diagnosticar enfermedades neurologicas y monitorizar el efecto de la terapia.

Segun un aspecto de la descripcion, se proporciona un metodo para caracterizar un perfil de riesgo del sujeto de desarrollar una enfermedad neurologica futura (por ejemplo, esclerosis multiple). El metodo comprende obtener un nivel de gelsolina en el sujeto y comparar el nivel de gelsolina con un valor predeterminado. El perfil de riesgo del sujeto de desarrollar una enfermedad neurologica (por ejemplo, esclerosis multiple) se caracteriza basandose en el nivel de gelsolina en comparacion con el valor predeterminado. Un nivel de gelsolina en o por debajo del nivel predeterminado es indicativo de que el sujeto esta en un riesgo elevado de desarrollar la enfermedad neurologica, y un nivel de gelsolina en o por encima del nivel predeterminado es indicativo de que el sujeto no esta en un riesgo elevado de desarrollar la enfermedad neurologica.

En algunas realizaciones, el metodo comprende ademas llevar a cabo uno o mas ensayos para evaluar la

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enfermedad neurologica. Los ejemplos de ensayos para evaluar una enfermedad neurologica incluyen, pero no se limitan a, examen neurologico, electroencefalograffa (EEG), examen del fluido cerebroespinal (CSF), potenciales suscitados (sensorial, motor, visual, somatosensorial, o cognitivo), electromiograffa (EMG), conduccion nerviosa, formacion de imagenes mediante tomograffa computerizada (CT), formacion de imagenes mediante resonancia magnetica (MRI), angiograffa mediante resonancia magnetica (MRA), formacion de imagenes mediante MR ecoplanares, tomograffa de emision positronica (PET), mielograffa, y angiograffa.

Segun otro aspecto de la descripcion, se proporciona un metodo para tratar a un sujeto que tiene o esta en riesgo de desarrollar una enfermedad neurologica (por ejemplo, esclerosis multiple). El metodo comprende administrar una cantidad eficaz de gelsolina al sujeto que necesita de tal tratamiento para tratar el sujeto.

Segun otro aspecto de la descripcion, se proporciona un metodo para tratar un sujeto que tiene o esta en riesgo de desarrollar una enfermedad neurologica (por ejemplo, esclerosis multiple). El metodo comprende administrar una cantidad eficaz de gelsolina al sujeto que necesita de tal tratamiento para elevar el nivel de gelsolina en el sujeto por encima de un valor predeterminado.

En algunas realizaciones, el sujeto esta de otro modo libre de indicaciones que requieren el tratamiento con gelsolina. La gelsolina se administra preferiblemente de forma oral, sublingual, bucal, intranasal, intravenosa, intramuscular, intratecal, intraperitoneal, o subcutanea. La gelsolina se puede administrar profilacticamente.

En algunas realizaciones, los metodos de tratamiento comprenden ademas administrar un segundo agente para tratar la enfermedad neurologica (por ejemplo esclerosis multiple). Los ejemplos de agentes para tratar la enfermedad neurologica (por ejemplo, esclerosis multiple) incluyen, pero no se limitan a, interferon (IFN) - pib (Betaseron o Betaferon), IFN - pia (Avonex, Rebif), acetato de glatiramer (Copaxona), mitoxantrona (Novantrona), azatioprina, ciclosporina, metotrexato, ciclofosfamida, inmunoglobulina intravenosa, prednisona, metilprednisona, prednisolona, metilprednisolona, dexametasona, hormona adreno-corticotropica (ACTH), corticotropina, 2- clorodesoxiadenosina (2-CDA, cladribina), inosina, anticuerpo anti-interleucina-2 (Zenapax, daclizumab), leucovorina, teriflunomida, estroprogestagenos, desogestrel, etinilestradiol, BHT-3009, ABT-874, vacuna de Bacilo Calmette-Guerin (BCG), vacunacion con celulas T, CNTO 1275, Rituximab, Tysabri (natalizumab), N-acetilcistema, minociclina, RO0506997, y estatinas (por ejemplo, atorvastatina (Lipitor), lovastatina (Mevacor), pravastatina (Pravachol), fluvastatina (Lescol) y simvastatina (Zocor)).

Segun otro aspecto de la descripcion, se proporciona un metodo para tratar un sujeto para reducir el riesgo de una enfermedad neurologica (por ejemplo, esclerosis multiple). El metodo comprende seleccionar un sujeto sobre la base de que se sabe que el sujeto tiene un nivel de gelsolina por debajo del normal, y administrar al sujeto una cantidad eficaz de gelsolina y/o un segundo agente para reducir el riesgo del sujeto de desarrollar la enfermedad neurologica (por ejemplo, esclerosis multiple).

Segun otro aspecto de la descripcion, se proporciona un metodo para tratar un sujeto para reducir el riesgo de una enfermedad neurologica (por ejemplo, esclerosis multiple). El metodo comprende seleccionar un sujeto sobre la base de que se sabe que el sujeto tiene un nivel de gelsolina por debajo del normal, y administrar una cantidad eficaz de gelsolina y/o un segundo agente al sujeto para elevar el nivel de gelsolina en el sujeto por encima de un valor predeterminado.

En algunas realizaciones, el metodo comprende ademas administrar al sujeto un segundo agente para tratar la enfermedad neurologica (por ejemplo, esclerosis multiple). Los ejemplos de agentes para tratar la enfermedad neurologica se dan mas arriba.

Segun todavfa otro aspecto de la descripcion, se proporciona un metodo para tratar un sujeto con un nivel de gelsolina por debajo del normal. El metodo comprende tratar el sujeto con una primera terapia para tratar o reducir el riesgo de una enfermedad neurologica (por ejemplo, esclerosis multiple). Se obtiene un nivel de gelsolina en el sujeto. El nivel de gelsolina se compara con un valor predeterminado que corresponde a un nivel predeterminado de gelsolina (por ejemplo, en una poblacion de control aparentemente sana). Si el nivel predeterminado de gelsolina no se alcanza, el sujeto se trata con un segundo agente para tratar o reducir el riesgo de enfermedad neurologica (por ejemplo, esclerosis multiple) hasta que se alcance el nivel predeterminado de gelsolina.

Un “nivel de gelsolina por debajo del normal” es un nivel de gelsolina que es al menos 10% menor que el nivel medio medido para una poblacion dada de sujetos. El nivel medio de gelsolina puede depender de la poblacion particular de sujetos. Por ejemplo, una poblacion aparentemente sana tendra un intervalo “normal” diferente de gelsolina que el que tendra una poblacion de sujetos que ha tenido una afeccion previa. En algunas realizaciones, el nivel de gelsolina es al menos 10% menor que el nivel medio medido para una poblacion dada de sujetos. En otras realizaciones, el nivel de gelsolina es al menos 20% menor que el nivel medio medido para una poblacion dada de sujetos. En todavfa otras realizaciones, el nivel de gelsolina es al menos 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% o 100% menor que el nivel medio medido para una poblacion dada de sujetos. En una de las realizaciones, el nivel de gelsolina esta por debajo de alrededor de 250 mg/l de plasma. En otras realizaciones importantes, el nivel de gelsolina esta por debajo de alrededor de 2,4 |iM/l (micromoles/litro) de plasma.

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En algunas realizaciones, el sujeto esta de otro modo libre de indicaciones que requieran el tratamiento con el agente. Cuando el agente es gelsolina, un sujeto libre de indicaciones que requieran el tratamiento con gelsolina es un sujeto que no tiene signos o smtomas que requieran tratamiento con gelsolina. La gelsolina esta indicada para el tratamiento de septicemia e infecciones. La gelsolina esta indicada para el tratamiento de trastornos relacionados con la actina, tales como el smdrome disneico del adulto (ARDS), necrosis hepatica fulminante, insuficiencia renal aguda, lesion muscular, trastornos caracterizados por niveles elevados de BUN y/o creatinina. Los trastornos relacionados con la actina son conocidos por aquellos de pericia normal en la tecnica.

En otras realizaciones, el sujeto esta aparentemente sano. Como se usa aqrn, un “sujeto aparentemente sano” es un sujeto que no tiene signos y/o smtomas de una enfermedad.

Segun otro aspecto de la descripcion, se proporciona un metodo para evaluar la eficacia de una terapia para tratar o reducir el riesgo de una enfermedad neurologica (por ejemplo, esclerosis multiple). El metodo comprende obtener un nivel de gelsolina en un sujeto sometido a terapia con un agente para tratar o reducir el riesgo de enfermedad neurologica (por ejemplo, esclerosis multiple). El nivel de gelsolina obtenido se compara con un valor predeterminado que corresponde a un nivel de gelsolina (por ejemplo, en una poblacion de control aparentemente sana). Una determinacion de si el nivel de gelsolina esta por encima del nivel predeterminado es indicativo de si la terapia es eficaz. En algunas realizaciones, la obtencion de un nivel de la gelsolina se repite para monitorizar el nivel del paciente humano de la gelsolina a lo largo del tiempo.

La terapia puede ser con gelsolina, interferon (IFN) - pib (Betaseron o Betaferon), IFN - pia (Avonex, Rebif), acetato de glatiramer (Copaxona), mitoxantrona (Novantrona), azatioprina, ciclosporina, metotrexato, ciclofosfamida, inmunoglobulina intravenosa, prednisona, metilprednisona, prednisolona, metilprednisolona, dexametasona, hormona adreno-corticotropica (ACTH), corticotropina, 2-clorodesoxiadenosina (2-CDA, cladribina), inosina, anticuerpo anti-interleucina-2 (Zenapax, daclizumab), leucovorina, teriflunomida, estroprogestagenos, desogestrel, etinilestradiol, BHT-3009, ABT-874, vacuna de Bacilo Calmette-Guerin (BCG), vacunacion con celulas T, CNTO 1275, Rituximab, Tysabri (natalizumab), N-acetilcistema, minociclina, RO0506997, o una estatina (por ejemplo, atorvastatina (Lipitor), lovastatina (Mevacor), pravastatina (Pravachol), fluvastatina (Lescol) y simvastatina (Zocor)).

Segun todavfa otro aspecto de la descripcion, se proporciona un metodo para decidir sobre el curso de una terapia en un sujeto. El metodo comprende obtener un nivel de gelsolina en un sujeto sometido a terapia para tratar o reducir el riesgo de una enfermedad neurologica (por ejemplo, esclerosis multiple). El nivel de gelsolina se compara con un valor predeterminado que corresponde a un nivel de gelsolina (por ejemplo, en una poblacion de control aparentemente sana). Se determina si el nivel de gelsolina obtenido esta en o por encima o en o por debajo del nivel predeterminado, y se decide el curso de la terapia en base a tal determinacion. En algunas realizaciones, la obtencion de un nivel de gelsolina se repite para monitorizar el nivel del sujeto de gelsolina a lo largo del tiempo.

Las siguientes realizaciones se aplican a diversos aspectos de la invencion expuestos aqrn, excepto que se indique de otro modo.

La enfermedad neurologica puede ser una enfermedad desmielinizante. En algunas realizaciones importantes, la enfermedad neurologica es esclerosis multiple. La esclerosis multiple puede ser aguda, recidivante, remitente, estable, cronica, o probable.

La enfermedad neurologica puede ser enfermedad de Alzheimer, encefalomielitis diseminada aguda, mielitis transversal, leucoencefalopatfa multifocal progresiva, adrenoleucodistrofia, adrenomieloneuropatia, mielinolisis central pontina, neuritis optica, neuromielitis optica (smdrome de Devic), neuropatfa optica hereditaria de Leber, paraparesia espastica tropical (mielopatfa asociada a HTLV), smdrome de Guillain-Barre (tambien denominado polineuropatfa desmielinizante inflamatoria aguda, polirradiculoneuritis idiopatica aguda, polineuritis idiopatica aguda, Polio Francesa o paralisis ascendente de Landry).

El nivel de gelsolina puede estar en un fluido corporal del sujeto. Los ejemplos de fluidos corporales incluyen, pero no se limitan a, sangre, plasma, suero, fluido cerebroespinal (CSF), y orina.

El nivel de gelsolina puede estar en un tejido corporal del sujeto. En algunas realizaciones importantes, el tejido corporal es un tejido neuronal. En algunas realizaciones, el sujeto es un sujeto aparentemente sano.

En algunas realizaciones, el valor predeterminado es 250 mg/l de plasma o menor. En algunas realizaciones, el valor predeterminado de gelsolina es alrededor de 240 mg/l, 230 mg/l, 220 mg/l, 210 mg/l, 200 mg/l, 190 mg/l, 180 mg/l, 170 mg/l, 160 mg/l, 150 mg/l, 140 mg/l, 130 mg/l, 120 mg/l, 110 mg/l, 100 mg/l, 90 mg/l, 80 mg/l, 70 mg/l, 60 mg/l, 50 mg/l, 40 mg/l, 30 mg/l, 20 mg/l, o 10 mg/l de plasma o menor.

En algunas otras realizaciones, el valor predeterminado es 2,4 |iM/l de plasma o menor. En algunas realizaciones, el valor predeterminado de gelsolina es alrededor de 2,3 |iM/l, 2,2 |iM/l, 2,1 |iM/l, 2,0 |iM/l, 1,9 |iM/l, 1,8 |iM/l, 1,7 |iM/l,

1,6 |iM/l, 1,5 |iM/l, 1,4 |iM/l, 1,3 |iM/l, 1,2 |iM/l, 1,1 |iM/l, 1,0 |iM/l, 0,9 |iM/l, 0,8 |iM/l, 0,7 |iM/l, 0,6 |iM/l, 0,5 |iM/l, 0,4

|iM/l, 0,3 |iM/l, 0,2 |iM/l de plasma o menor.

Cada una de las limitaciones de la invencion puede englobar diversas realizaciones de la invencion. Por lo tanto, se

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anticipa que cada una de las limitaciones de la invencion que implican cualquier elemento o combinaciones de elementos se puede incluir en cada aspecto de la invencion. La invencion es capaz de otras realizaciones y de ponerse en practica o de ser llevada a cabo de diversas maneras. Tambien, la fraseologfa y terminolog^a usada aqrn es con fines descriptivos, y no se debe considerar como limitante. El uso de “que incluye”, “que comprende”, o “que tiene”, “que contiene”, “que implica”, y sus variaciones aqrn, engloba los artmulos enunciados despues y sus equivalentes, as^ como artmulos adicionales.

Estos y otros aspectos de la invencion, asf como diversas ventajas y utilidades, seran manifiestos con referencia a la Descripcion Detallada de la Invencion. Como se entendera, cada aspecto de la invencion puede englobar diversas realizaciones.

Breve descripcion de los dibujos

La FIG. 1 es un histograma que muestra los niveles de gelsolina en ratones de control (tratados con irradiacion per se) y en ratones con lesion primaria de encefalomielitis alergica experimental (EAE).

La FIG. 2 es una grafica que muestra la puntuacion de la enfermedad en ratones con EAE en funcion del tiempo para los tratamientos indicados.

La FIG. 3 es una grafica que muestra la puntuacion clmica en controles y animales con EAE (que carecen de la funcion de integrina) en funcion del tiempo para los tratamientos indicados.

Se entendera que los dibujos no son necesarios para llevar a cabo la invencion.

Descripcion detallada de la invencion

La presente invencion se basa, en parte, en el descubrimiento de que la administracion de gelsolina protege a un sujeto de esclerosis multiple. De este modo, en algunos aspectos, la descripcion implica administrar gelsolina a un sujeto para el tratamiento de esclerosis multiple en el sujeto. Hemos descubierto que el tratamiento con gelsolina retraso el comienzo, atenuo notablemente la gravedad, y apresuro la remision de los smtomas de la esclerosis multiple.

El termino “tratamiento” o “tratar” incluye profilaxis, mejora, prevencion o cura de la enfermedad.

Como se usa aqrn, el termino “sujeto” significa cualquier mairufero que pueda tener necesidad de tratamiento. Los sujetos incluyen, pero no se limitan a: seres humanos, primates no humanos, gatos, perros, ovejas, cerdos, caballos, vacas, roedores tales como ratones, hamster, y ratas. Los sujetos preferidos son sujetos humanos.

Como se usa aqrn, el termino “gelsolina” engloba gelsolina de tipo salvaje (n° de acceso GenBank: X04412), isoformas, analogos, variantes, fragmentos o derivados funcionales de gelsolina.

La gelsolina (GSN), a diferencia de otras protemas de mai^ero, tiene tanto isoformas citoplasmicas (cGSN) como segregadas o exportadas, tambien denominadas gelsolina plasmatica (pGSN), que derivan del ayuste alternativo del mensaje de un unico gen (Sun et al. J. Biol. Chem. 274:33179-33182 (1999)). Como se usa aqrn, las isoformas de gelsolina incluyen versiones de gelsolina con algunas pequenas diferencias en sus secuencias de aminoacidos, habitualmente una variante de ayuste, o el resultado de alguna modificacion post-traduccional.

La gelsolina engloba gelsolina nativa asf como sintetica y recombinante, y analogos de gelsolina. La gelsolina es una protema secretora abundante (Yin, H. L., Kwiatkowski, D. J., Mole, J. E. y Cole, F. S. (1984) J Biol Chem 259, 52716). La isoforma exportada de gelsolina pGSN, tiene 25 aminoacidos adicionales y se origina del ayuste alternativo de un unico gen (Kwiatkowski, D. J., Stossel, T. P., Orkin, S. H., Mole, J. E., Colten, H. R. y Yin, H. L. (1986) Nature 323, 455-8). La gelsolina humana recombinante (rhGSN) (Biogen IDEC, Inc., Cambridge, MA) es producida en E. coli, y aunque tiene la misma estructura primaria que la protema nativa, en condiciones estandar de purificacion, difiere de la gelsolina plasmatica humana natural por un enlace de disulfuro que esta presente en el protema natural. Por lo tanto, la protema recombinante se oxida apropiadamente tras la purificacion, y su estructura y funciones son indistinguibles de la gelsolina plasmatica humana (Wen et. al., Biochemistry 35:9700-9709 (1996)). En algunos de los aspectos terapeuticos importantes y realizaciones de la invencion, se prefiere el uso de rhGSN. En algunos de los aspectos de diagnostico importantes y realizaciones de la invencion, se prefiere el uso de pGSN.

Un “analogo de gelsolina” se refiere a un compuesto sustancialmente similar en funcion a la gelsolina nativa o a un fragmento de la misma. Los analogos de gelsolina incluyen secuencias de aminoacidos biologicamente activas sustancialmente similares a las secuencias de gelsolina, y pueden tener secuencias sustituidas, eliminadas, alargadas, reemplazadas, o de otro modo modificadas que poseen bioactividad sustancialmente similar a la de gelsolina. Por ejemplo, un analogo de gelsolina es aquel que no tiene la misma secuencia de aminoacidos que la gelsolina, pero que es suficientemente homologo a la gelsolina para retener la bioactividad de la gelsolina. La bioactividad se puede determinar, por ejemplo, determinando las propiedades del analogo de gelsolina y/o determinando la capacidad del analogo de gelsolina para tratar o prevenir la esclerosis multiple. Un ejemplo de un ensayo de bioactividad de la gelsolina es la capacidad de la gelsolina para estimular la nucleacion de la actina. Los

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ensayos de bioactividad de la gelsolina se describen en el Ejemplo, y son conocidos por aquellos de pericia normal en la tecnica.

Un “fragmento” incluye cualquier porcion de una molecula de gelsolina que proporcione un segmento de gelsolina que mantiene la bioactividad de gelsolina; el termino incluye fragmentos de gelsolina que estan hechos de cualquier fuente, tales como, por ejemplo, de secuencias peptfdicas de origen natural, secuencias peptidicas sinteticas o sintetizadas qmmicamente, y secuencias peptfdicas modificadas mediante ingeniena genetica.

Una “variante” de gelsolina se refiere a un compuesto sustancialmente similar en estructura y bioactividad a gelsolina nativa, o a un fragmento de la misma. El termino variante engloba la familia de protemas de gelsolina. La familia de protemas de gelsolina es un grupo de protemas que se unen a actina que comparten repeticiones de dominios homologos de alrededor de 15 kDa que adoptan un plegamiento similar. Los ejemplos de protemas de la familia de gelsolina incluyen, pero no se limitan a, advillina, villina, capG, protemas flightless, fragmina, severina, adseverina, protovillina, y supervillina.

Un “derivado funcional” de gelsolina es un derivado que posee una bioactividad que es sustancialmente similar a la bioactividad de gelsolina. Por “sustancialmente similar” se quiere decir la actividad que es cuantitativamente diferente pero cualitativamente la misma. Por ejemplo, un derivado funcional de gelsolina podna contener la misma cadena principal de aminoacidos que la gelsolina, pero tambien contiene otras modificaciones, tales como modificaciones post-traduccionales tales como, por ejemplo, fosfolfpidos unidos, o hidrato de carbono enlazado covalentemente, dependiendo de la necesidad de tales modificaciones para el comportamiento del ensayo de diagnostico o el tratamiento terapeutico. Como se usa aqm, el termino tambien incluye un derivado qmmico de gelsolina. Tales derivados pueden mejorar la solubilidad, absorcion, semivida biologica, etc., de la gelsolina. Los derivados tambien pueden disminuir la toxicidad de la gelsolina, o eliminar o atenuar cualquier efecto secundario indeseable de la gelsolina, etc. Los restos qmmicos capaces de mediar tales efectos se describen en Remington's Pharmaceutical Sciences (1980). Los procedimientos para acoplar tales restos a una molecula tal como gelsolina son bien conocidos en la tecnica. La expresion “derivado funcional” incluye los “fragmentos”, “variantes”, “analogos”, o “derivados qmmicos” de gelsolina.

La descripcion implica, en algunos aspectos, metodos para tratar una enfermedad (por ejemplo, una enfermedad neurologica tal como esclerosis multiple) en un sujeto. Se sabe que el sujeto tiene, se sospecha que tiene, o esta en riesgo de tener la enfermedad. La gelsolina se administra en una cantidad eficaz para tratar la enfermedad en el sujeto.

Una respuesta a un metodo de tratamiento de la descripcion se puede medir, por ejemplo, determinando los efectos fisiologicos del tratamiento, tal como la disminucion o falta de smtomas tras la administracion del tratamiento.

En otro aspecto de la descripcion, se proporciona un metodo para monitorizar la terapia en un sujeto. El metodo implica obtener un nivel de gelsolina en un sujeto sometido a terapia para tratar una enfermedad (por ejemplo, una enfermedad neurologica tal como esclerosis multiple). El nivel de gelsolina se compara con un valor predeterminado que corresponde a un nivel de control de gelsolina (por ejemplo, en una poblacion aparentemente sana). Una determinacion de si el nivel de gelsolina esta en o por debajo de un nivel predeterminado es indicativo de si el sujeto se beneficiana de la terapia continuada con la misma terapia, o se beneficiana de un cambio en la terapia. En algunas realizaciones, la obtencion de un nivel de gelsolina se repite para monitorizar los niveles de gelsolina del sujeto a lo largo del tiempo. En algunas realizaciones, el sujeto puede haber estado sometido a la terapia durante al menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 semanas o mas. En algunas realizaciones, el sujeto puede haber estado sometido a la terapia durante al menos 3, 4, 5, 6 meses o mas.

Un cambio en la terapia con gelsolina se refiere a un incremento en la dosis de la gelsolina, un cambio de gelsolina a otro agente, la adicion de otro agente al regimen terapeutico de gelsolina, o una combinacion de los mismos.

Segun otro aspecto de la descripcion, se proporciona un metodo para evaluar la eficacia de una terapia para tratar o reducir el riesgo de una enfermedad (por ejemplo, una enfermedad neurologica tal como esclerosis multiple). El metodo implica obtener un nivel de gelsolina en un sujeto sometido a terapia para tratar la enfermedad. El nivel de gelsolina se compara con un valor predeterminado que corresponde a un nivel de control de gelsolina (por ejemplo, en una poblacion aparentemente sana). Una determinacion de que el nivel de gelsolina esta en o por encima de un nivel predeterminado sena indicativo de que la terapia es eficaz. En algunas realizaciones, el sujeto puede haber estado sometido a la terapia durante al menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 o mas semanas. En algunas realizaciones, el sujeto puede haber estado sometido a la terapia durante al menos 3, 4, 5, 6 o mas meses.

Un aspecto de la descripcion se refiere a la medida de gelsolina para guiar los tratamientos a fin de mejorar el resultado en los sujetos. Los niveles de gelsolina en terapia tienen valor predictivo para la respuesta a tratamientos de la enfermedad (por ejemplo, una enfermedad neurologica tal como esclerosis multiple). Los niveles de gelsolina en terapia son aditivos a predictores de la tecnica anterior del resultado de la enfermedad.

Los sujetos que se beneficianan de este aspecto de esta descripcion son sujetos que estan sometidos a terapia para tratar o prevenir la enfermedad tal como, por ejemplo, esclerosis multiple (es decir, un sujeto “en terapia”). Un sujeto en terapia es un sujeto que ya ha sido diagnosticado y esta en el curso de tratamiento con una terapia para tratar la

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esclerosis multiple. La terapia puede ser cualquiera de los agentes terapeuticos citados aqm. La terapia tambien puede ser tratamientos no farmaceuticos. En realizaciones importantes, la terapia es aquella que incrementa los niveles de gelsolina. En una realizacion particularmente importante, la terapia es una terapia con gelsolina. Los sujetos preferidos son sujetos humanos. El sujeto que mas probablemente se beneficiara de esta descripcion es un sujeto humano en terapia y que tiene un nivel de gelsolina en o por debajo de alrededor de 250 mg/l (o 2,4 |iM/l) de plasma.

En algunas realizaciones, el sujeto ya tiene la enfermedad. En algunas realizaciones, el sujeto puede estar en un riesgo elevado de tener la enfermedad.

Los factores de riesgo para las enfermedades son conocidos por aquellos de pericia normal en la tecnica. Por ejemplo, los factores de riesgo para esclerosis multiple incluyen: edad (entre 20 y 40 anos), genero femenino, etnia caucasica, e historial familiar positivo. El grado de riesgo de esclerosis multiple depende de la multitud y la gravedad o la magnitud de los factores de riesgo que tiene el sujeto. Existen tablas de riesgo y algoritmos de prediccion para evaluar el riesgo de la esclerosis multiple en un sujeto en base a la presencia y gravedad de factores de riesgo. En algunas realizaciones, el sujeto que esta en riesgo elevado de tener la enfermedad puede ser un sujeto aparentemente sano. Un sujeto aparentemente sano es un sujeto que no tiene signos o smtomas de la enfermedad.

Otros metodos para evaluar el riesgo de esclerosis multiple en un sujeto son conocidos por aquellos de pericia normal en la tecnica.

El tratamiento preferido de la actual descripcion es la gelsolina. La gelsolina se puede administrar sola, en una composicion farmaceutica, o combinada con otros regfmenes terapeuticos. La gelsolina y opcionalmente otro agente o agentes terapeuticos se pueden administrar de forma simultanea o secuencial. Cuando los otros agentes terapeuticos se administran simultaneamente, se pueden administrar en las mismas formulaciones o en formulaciones independientes, pero se administran al mismo tiempo. Los otros agentes terapeuticos se pueden administrar secuencialmente entre sf y con gelsolina cuando la administracion de los otros agentes terapeuticos y la gelsolina se separan temporalmente. La separacion en el tiempo entre la administracion de estos compuestos puede ser una cuestion de minutos o puede ser mas prolongada.

Para la practica de ciertos metodos de la presente descripcion, es necesario obtener un nivel de gelsolina en un sujeto. Este nivel se compara entonces con un valor predeterminado, en el que el nivel de gelsolina en comparacion con el valor predeterminado es indicativo de la probabilidad de que el sujeto se beneficiara de la terapia continuada. El sujeto se puede caracterizar entonces en terminos del beneficio neto probablemente a obtener de un cambio en la terapia.

El nivel de la gelsolina para el sujeto se puede obtener mediante cualquier metodo reconocido en la tecnica. Tfpicamente, el nivel se determina midiendo el nivel de gelsolina en un fluido corporal, por ejemplo sangre, suero, plasma, linfa, saliva, orina, y similar. El nivel se puede determinar mediante ELISA, u otros inmunoensayos o tecnicas convencionales para determinar la presencia de gelsolina. Los metodos convencionales pueden incluir enviar una muestra o muestras de un fluido corporal del sujeto a un laboratorio comercial para su medida. Los metodos para medir gelsolina se describen en el Ejemplo.

La descripcion tambien implica comparar el nivel de gelsolina para el sujeto con un valor predeterminado. El valor predeterminado puede tomar una variedad de formas. Puede ser un unico valor de corte, tal como una mediana o una media. Se puede establecer basandose en grupos comparativos, tal como, por ejemplo, cuando el riesgo en un grupo definido es el doble del riesgo en otro grupo definido. Puede ser un intervalo, por ejemplo cuando la poblacion ensayada se divide por igual (o de forma no igualitaria) en grupos, tal como un grupo de bajo riesgo, un grupo de riesgo medio y un grupo de riesgo alto, o en cuartiles, siendo el cuartil mas bajo los sujetos con el riesgo mas elevado, y siendo el cuartil mas alto los sujetos con el riesgo mas bajo, o en terciles, siendo el tercil mas bajo los sujetos con el riesgo mas elevado, y siendo el tercil mas alto los sujetos con el riesgo mas bajo. El valor predeterminado puede ser un valor de corte que se predetermina por el hecho de que un grupo que tiene un nivel de gelsolina no menor que el valor de corte demuestra un incremento estadfsticamente significativo en el riesgo de desarrollar una enfermedad neurologica (por ejemplo, esclerosis multiple) en comparacion con un grupo comparativo. En algunas realizaciones, el grupo comparativo es un grupo que tiene un menor nivel de gelsolina.

El valor predeterminado puede depender de la poblacion particular de sujetos seleccionada. Por ejemplo, una poblacion aparentemente sana puede tener un intervalo “normal” diferente de gelsolina que el que tendran poblaciones de sujetos que tienen otras afecciones. En consecuencia, los valores predeterminados seleccionados pueden tomar en cuenta la categona en la que cae un sujeto. Los intervalos y categonas apropiados se pueden seleccionar con una experimentacion no mas alla de la habitual por aquellos de pericia normal en la tecnica.

El fluido corporal preferido es sangre. En algunas realizaciones, el valor predeterminado de gelsolina es alrededor de 250 mg/l de plasma o menor. En algunas realizaciones, el valor predeterminado de gelsolina es alrededor de 240 mg/l, 230 mg/l, 220 mg/l, 210 mg/l, 200 mg/l, 190 mg/l, 180 mg/l, 170 mg/l, 160 mg/l, 150 mg/l, 140 mg/l, 130 mg/l, 120 mg/l, 110 mg/l, 100 mg/l, 90 mg/l, 80 mg/l, 70 mg/l, 60 mg/l, 50 mg/l, 40 mg/l, 30 mg/l, 20 mg/l, o 10 mg/l de plasma o menor.

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En algunas realizaciones, el valor predeterminado de gelsolina es alrededor de 2,4 |iM/l de plasma o menor. En algunas realizaciones, el valor predeterminado de gelsolina es alrededor de 2,3 |iM/l, 2,2 |iM/l, 2,1 |iM/l, 2,0 |iM/l, 1,9 |iM/l, 1,8 |iM/l, 1,7 |iM/l, 1,6 |iM/l, 1,5 |iM/l, 1,4 |iM/l, 1,3 |iM/l, 1,2 |iM/l, 1,1 ^M/l, 1,0 |iM/l, 0,9 |iM/l, 0,8 |iM/l, 0,7 |iM/l, 0,6 |iM/l, 0,5 |iM/l, 0,4 |iM/l, 0,3 |iM/l, 0,2 |iM/l de plasma o menor.

Un valor predeterminado importante de gelsolina es un valor que es el promedio para una poblacion de sujetos sanos (es decir, sujetos que no tienen signos ni smtomas de la enfermedad). El valor predeterminado dependera, por supuesto, de las caractensticas de la poblacion del sujeto en la que se encuentra el sujeto. A la hora de caracterizar el riesgo, se pueden establecer numerosos valores predeterminados.

Actualmente, hay fuentes comerciales que producen reactivos para ensayos para gelsolina. Estas incluyen, por ejemplo, Cytoskeleton (Denver, CO), Sigma (St. Louis, MO) y Calbiochem (San Diego, CA).

En algunas realizaciones, la descripcion comprende ademas medir el nivel de gelsolina junto con un nivel de un segundo marcador de una enfermedad (por ejemplo, una enfermedad neurologica tal como esclerosis multiple). Los ejemplos de marcadores para esclerosis multiple incluyen, por ejemplo, Rantes, el anticuerpo anti-glicoprotema oligodendrocftica de mielina (MOG) (anti-MOG) y el anticuerpo anti-protema basica de mielina (MBP) (anti-MBP), y el microsatelite del gen ERBB3). Se obtiene un nivel de gelsolina en el sujeto. El nivel de gelsolina se compara con un valor predeterminado para establecer un primer valor de riesgo. Tambien se obtiene un nivel del segundo marcador en el sujeto. El nivel del segundo marcador en el sujeto se compara con un segundo valor predeterminado para establecer un segundo valor de riesgo. El perfil de riesgo del sujeto de desarrollar la enfermedad se caracteriza entonces basandose en la combinacion del primer valor de riesgo y el segundo valor de riesgo, en el que la combinacion del primer valor de riesgo y el segundo valor de riesgo establece un tercer valor de riesgo diferente de los valores de riesgo primero y segundo. En algunas realizaciones, el tercer valor de riesgo es mayor que cualquiera de los valores de riesgo primero y segundo. Los sujetos preferidos para ensayar valores predeterminados son como se describen anteriormente. La enfermedad puede ser una enfermedad neurologica, tal como cualquiera de las enfermedades neurologicas descritas anteriormente.

La descripcion proporciona metodos para determinar si un sujeto se beneficiara de la terapia continuada, o se beneficiana de un cambio en la terapia. El beneficio es tfpicamente una reduccion en los signos y smtomas, o una recuperacion mas rapida de las manifestaciones de la enfermedad. Los signos, smtomas y manifestaciones de la enfermedad son conocidos por aquellos de pericia normal en la tecnica. Por ejemplo, en la esclerosis multiple, los signos y smtomas de la enfermedad incluyen: debilidad de las extremidades, neuritis optica, diplopia, smtomas sensoriales, ataxia, disfuncion de la vejiga, disfuncion cognitiva, depresion, sensibilidad al calor, y fatiga.

La debilidad de las extremidades se puede manifestar como fatiga, perturbacion del andar, y/o perdida de destreza.

La neuritis optica generalmente se presenta como agudeza visual disminuida y/o penumbra o desaturacion del color en el campo de vision central. Los smtomas de la neuritis optica pueden ser leves, o pueden progresar a lo largo de las horas o dfas a perdida visual severa o a la perdida completa de la percepcion de la luz. Los smtomas visuales son generalmente monoculares, pero pueden ocurrir bilateralmente. El dolor periorbital puede preceder o acompanar a la agudeza visual disminuida.

La diplopia se puede manifestar como nistagmo prominente. Otra perturbacion de la mirada habitual en esclerosis multiple es la paralisis de la mirada horizontal.

Los smtomas sensoriales en la esclerosis multiple incluyen parestesias (hormigueo o quemazon dolorosa) o hiperestesias (embotamiento o sensacion de “muerte”). Son habituales las quejas de “sensaciones desagradables” en diferentes partes del cuerpo.

La ataxia del andar y de las extremidades son manifestaciones habituales de la esclerosis multiple.

La disfuncion de la vejiga se manifiesta como tenesmo vesical o dificultad para comenzar a orinar, vaciado incompleto de la vejiga, o incontinencia.

La disfuncion cognitiva se manifiesta como perdida de memoria, atencion alterada, dificultades para resolver problemas, procesamiento de la informacion ralentizado y dificultades para cambiar entre tareas cognitivas. El juicio alterado y la inestabilidad emocional pueden ser evidentes.

La aparicion de fatiga es habitual en la mayona de los pacientes con esclerosis multiple. Los smtomas de la fatiga incluyen debilidad motora generalizada, capacidad limitada para concentrarse o leer, laxitud, y somnolencia.

Otros smtomas de la esclerosis multiple incluyen disartria, estrenimiento o incontinencia del intestino, dolor facial, debilidad facial, mioquimia facial (contracciones intermitentes cronicas de los musculos faciales) y vertigo.

Estos metodos tienen implicaciones importantes para el tratamiento del paciente, y tambien para el desarrollo clmico de nuevas terapias. La determinacion de si un sujeto se beneficiara de la terapia continuada, o se beneficiana de un cambio en la terapia, es clmicamente util. Un ejemplo de la utilidad clmica de los metodos de esta invencion incluye

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identificar sujetos que probablemente responden menos o mas a una terapia. Los metodos de la descripcion tambien son utiles para predecir o determinar que un sujeto se beneficiana de la terapia continuada, o se beneficiana de un cambio en la terapia. Los medicos seleccionan los regfmenes terapeuticos para el tratamiento en base al beneficio neto esperado para el sujeto. El beneficio neto deriva de la relacion de riesgo a beneficio. La presente descripcion permite la determinacion de si un sujeto se beneficiara de la terapia continuada o se beneficiana de un cambio en la terapia, ayudando de ese modo al medico a seleccionar una terapia.

Otro ejemplo de utilidad clmica, por ejemplo en el caso de sujetos humanos, incluye ayudar a los investigadores clmicos en la seleccion de ensayos clmicos de sujetos con una alta probabilidad de obtener un beneficio neto. Se espera que los investigadores clmicos usaran ahora la presente descripcion para determinar criterios de entrada para ensayos clmicos.

Un sujeto que se beneficiana de la terapia continuada es un sujeto cuyo nivel de gelsolina en terapia alcanza un cierto valor predeterminado, o cuyo nivel de gelsolina esta creciendo. Los valores predeterminados de gelsolina se describen anteriormente. Un sujeto que se beneficiana de un cambio en la terapia es un sujeto cuyo nivel de la gelsolina en terapia no alcanzo un cierto valor predeterminado, o cuyo nivel de gelsolina en terapia no esta aumentando.

Como se usa aqm, un “cambio en la terapia” se refiere a un incremento o disminucion en la dosis de la terapia existente, un cambio de una terapia a otra terapia, la adicion de otra terapia a la terapia existente, o una combinacion de los mismos. Un cambio de una terapia a otra puede implicar un cambio a una terapia con un perfil de riesgo elevado, pero en la que se incrementa la probabilidad del beneficio esperado. En algunas realizaciones, las terapias preferidas son terapias que incrementan los niveles de gelsolina. Un sujeto que se beneficiana de un cambio en la terapia al incrementar la dosis de la terapia existente es un sujeto que, por ejemplo, estaba en la terapia pero no estaba recibiendo la dosis maxima tolerada o la dosis maxima permitida de la terapia y cuyo nivel de gelsolina no alcanzo un cierto valor predeterminado. En tales casos, la dosis de la terapia existente se incrementa hasta que el nivel de gelsolina alcanza un cierto valor predeterminado. En algunos casos, la dosis de la terapia existente se incrementa desde la dosis existente hasta una mayor dosis que no es la dosis maxima tolerada ni la dosis maxima permitida de la terapia. En otros casos, la dosis se incrementa hasta la dosis maxima tolerada o hasta la dosis maxima permitida de la terapia. Un sujeto que se beneficiana de un cambio en la terapia al disminuir la dosis de la terapia existente es, por ejemplo, un sujeto cuyo nivel de gelsolina en la terapia alcanza o puede alcanzar un cierto valor predeterminado con una menor dosis de la terapia.

Un sujeto que se beneficiana de un cambio de una terapia a otra terapia es, por ejemplo, un sujeto que estaba en la dosis maxima tolerada o en la dosis maxima permitida de la terapia y cuyo nivel de gelsolina no alcanzo un cierto valor predeterminado. Otro ejemplo es un sujeto que no estaba en la dosis maxima tolerada o en la dosis maxima permitida de la terapia pero que se determino por el medico que se beneficiana mas probablemente de otra terapia. Tales determinaciones se basan, por ejemplo, en el desarrollo en el sujeto de efectos secundarios indeseados en la terapia inicial, o una falta de respuesta a la terapia inicial.

Un sujeto que se beneficiana de un cambio en la terapia por la adicion de otra terapia a la terapia existente es, por ejemplo, un sujeto que estaba en una terapia pero cuyo nivel de gelsolina no alcanzo un cierto valor predeterminado. En tales casos, se anade otra terapia a la terapia existente. La terapia que se anade a la terapia existente puede tener un mecanismo de accion diferente incrementando el nivel de gelsolina que la terapia existente. En algunos casos, se puede usar una combinacion de los cambios en terapia mencionados anteriormente.

La descripcion tambien proporciona metodos para determinar la eficacia de una terapia. La eficacia es tfpicamente la eficacia de la terapia incrementando el nivel de gelsolina. Esto se denomina algunas veces como una respuesta positiva o una respuesta favorable. La eficacia se puede determinar mediante un ensayo o ensayos de gelsolina en sangre, para determinar si los niveles de gelsolina se incrementan como resultado de la terapia. En algunas realizaciones, la determinacion de la eficacia se basa en la eficacia de una terapia al incrementar tanto la gelsolina como normalizando los recuentos de globulos blancos (WBC).

La medida de la gelsolina se da tfpicamente en |iM/l (micromoles/litro), mg/dl (miligramos/decilitro), o mg/l (miligramos/litro).

La descripcion tambien proporciona metodos para decidir sobre el curso de una terapia en un sujeto sometido a terapia para una enfermedad (por ejemplo, una enfermedad neurologica tal como esclerosis multiple). Tal curso de la terapia se decide en base al nivel de gelsolina. En algunas realizaciones, el sujeto ya tiene la enfermedad o esta en riesgo de tener la enfermedad. En algunas realizaciones, el sujeto esta en un riesgo elevado de tener la enfermedad, el sujeto tiene uno o mas factores de riesgo para tener la enfermedad.

La cantidad de tratamiento se puede variar, por ejemplo, incrementando o disminuyendo la cantidad de gelsolina o de agente farmacologico o de una composicion terapeutica, cambiando la composicion terapeutica administrada, cambiando la via de administracion, cambiando el momento de la dosificacion, etc. La cantidad eficaz variara con la afeccion particular que se este tratando, con la edad y estado ffsico del sujeto que este siendo tratado, con la gravedad de la afeccion, con la duracion del tratamiento, con la naturaleza de la terapia concurrente (si la hay), con

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la via espedfica de administracion, y los factores similares estan dentro del conocimiento y experiencia del medico. Por ejemplo, una cantidad eficaz puede depender de la duracion durante la cual el individuo haya tenido la enfermedad.

Una cantidad eficaz es una dosis del agente terapeutico suficiente para proporcionar un resultado medicamente deseable. Una cantidad eficaz tambien puede depender, por ejemplo, del grado en el que un individuo ha disminuido anormalmente los niveles de gelsolina. Se entendena que los agentes terapeuticos de la descripcion se usan para tratar o prevenir la enfermedad (por ejemplo, esclerosis multiple), es decir, se pueden usar profilacticamente en sujetos con riesgo de desarrollar la enfermedad (por ejemplo, esclerosis multiple). De este modo, una cantidad eficaz es aquella cantidad que puede reducir el riesgo de, ralentizar, o quizas prevenir totalmente el desarrollo de esclerosis multiple. Se reconocera que cuando el agente terapeutico se usa en circunstancias agudas, se usa para prevenir uno o mas resultados medicamente indeseables que surgen tfpicamente de tales sucesos adversos.

Los factores implicados en determinar una cantidad eficaz son bien conocidos por aquellos de pericia normal en la tecnica, y se pueden abordar con una experimentacion no mas alla de la normal. Generalmente se prefiere usar una dosis maxima de los agentes farmacologicos de la descripcion (solos o en combinacion con otros agentes terapeuticos, es decir, la dosis segura mas elevada segun el juicio del medico. Se entendera por aquellos de pericia normal en la tecnica, sin embargo, que un paciente puede insistir en una dosis menor o dosis tolerable por razones medicas, razones psicologicas, o virtualmente por cualquier otra razon.

La cantidad terapeuticamente eficaz de un agente farmacologico de la descripcion es aquella cantidad eficaz para tratar la enfermedad. Por ejemplo, en el caso de una enfermedad neurologica tal como esclerosis multiple, la respuesta deseada es inhibir la progresion de la esclerosis multiple. Esto puede implicar solamente ralentizar la progresion de la esclerosis multiple de forma temporal, aunque mas preferiblemente implica detener permanentemente la progresion de la esclerosis multiple. Esto se puede monitorizar mediante metodos de diagnostico normales conocidos por aquellos de pericia normal en la tecnica. La respuesta deseada al tratamiento de esclerosis multiple tambien puede ser retrasar el comienzo o incluso prevenir el comienzo de la esclerosis multiple.

Los agentes farmacologicos usados en los metodos de la descripcion son preferiblemente esteriles, y contienen una cantidad eficaz de gelsolina para producir la respuesta deseada en una unidad de peso o volumen adecuada para la administracion a un sujeto. Las dosis de los agentes farmacologicos administradas a un sujeto se pueden escoger segun diferentes parametros, en particular segun el modo de administracion usado y el estado del sujeto. Otros factores incluyen el penodo de tratamiento deseado. En el caso en el que una respuesta en un sujeto sea insuficiente a la dosis inicial aplicada, se pueden emplear mayores dosis (o dosis eficazmente mayores mediante una via de suministro diferente, mas localizada) hasta el grado que lo permita la tolerancia del paciente. La dosis de un agente farmacologico se puede ajustar mediante un medico o veterinario individual, particularmente en el caso de cualquier complicacion. Una cantidad terapeuticamente eficaz vana tfpicamente de 0,01 mg/kg a alrededor de 1000 mg/kg, preferiblemente de alrededor de 0,1 mg/kg a alrededor de 500 mg/kg, y lo mas preferible, de alrededor de 0,2 mg/kg a alrededor de 250 mg/kg, en una o mas administraciones de dosis diarias, durante uno o mas dfas.

Aquellos de pericia normal en la tecnica conocen diversos modos de administracion que suministran de forma eficaz los agentes farmacologicos de la descripcion a un tejido, celula, o fluido corporal deseado. Los metodos de administracion se explican en cualquier otra parte en la solicitud. La descripcion no esta limitada por los modos particulares de administracion descritos aqrn. Las referencias estandar en la tecnica (por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 20a Edicion, Lippincott, Williams and Wilkins, Baltimore MD, 2001) proporcionan modos de administracion y formulaciones para el suministro de diversas preparaciones y formulaciones farmaceuticas en vehuculos farmaceuticos. Otros protocolos que son utiles para la administracion de agentes farmacologicos de la descripcion seran conocidos por alguien de pericia normal en la tecnica, en los que la cantidad de la dosis, el calendario de administracion, los sitios de administracion, el modo de administracion, y similares, vanan de los presentados aqrn.

La administracion de agentes farmacologicos de la descripcion a mamfferos distintos de seres humanos, por ejemplo para fines de ensayo o fines terapeuticos veterinarios, se lleva a cabo en sustancialmente las mismas condiciones como se describen anteriormente. Se entendera por alguien de pericia normal en la tecnica que esta descripcion es aplicable tanto a enfermedades humanas como de animales. De este modo, esta descripcion esta destinada a ser usada en medicina de cna de animales y veterinaria, asf como en terapeutica humana.

Cuando se administran, las preparaciones farmaceuticas de la descripcion se aplican en cantidades farmaceuticamente aceptables y en composiciones farmaceuticamente aceptables. La expresion “farmaceuticamente aceptable” significa un material no toxico que no interfiere con la eficacia de la actividad biologica de los ingredientes activos. Tales preparaciones pueden contener de forma habitual sales, agentes amortiguadores, conservantes, vedculos compatibles, y opcionalmente otros agentes terapeuticos. Cuando se usan en medicina, las sales debenan ser farmaceuticamente aceptables, pero las sales no farmaceuticamente aceptables se pueden usar convenientemente para preparar sus sales farmaceuticamente aceptables, y no se excluyen del alcance de la descripcion. Tales sales farmacologica y farmaceuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, las preparadas a partir de los siguientes acidos: bromddrico, sulfurico, mtrico, fosforico, maleico, acetico, salidlico,

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cftrico, formico, malonico, succmico, y similares. Tambien, las sales farmaceuticamente aceptables se pueden preparar como sales de metales alcalinos o alcalino-terreos, tales como sales de sodio, potasio o calcio.

Un agente farmacologico o composicion se puede combinar, si se desea, con un vehfculo farmaceuticamente aceptable. La expresion “vetnculo farmaceuticamente aceptable”, como se usa aqm, significa una o mas cargas, diluyentes o sustancias encapsulantes, solidas o Kquidas, compatibles, que son adecuados para administracion a un ser humano. El termino “vetnculo” significa un ingrediente organico o inorganico, natural o sintetico, con el que se combina el ingrediente activo para facilitar la aplicacion. Los componentes de las composiciones farmaceuticas tambien son capaces de ser comezclados con los agentes farmacologicos de la descripcion, y entre sf, de una manera tal que no hay ninguna interaccion que afectase sustancialmente a la eficacia farmaceutica deseada.

Las composiciones farmaceuticas pueden contener agentes amortiguadores adecuados, como se describe anteriormente, incluyendo: acetato, fosfato, citrato, glicina, borato, carbonato, bicarbonato, hidroxido (y otras bases), y sales farmaceuticamente aceptables de los compuestos anteriores. Las composiciones farmaceuticas tambien pueden contener, opcionalmente, conservantes adecuados, tales como: cloruro de benzalconio; clorobutanol; parabenos y timerosal.

Las composiciones farmaceuticas se pueden presentar convenientemente en una forma de dosificacion unitaria, y se pueden preparar mediante cualquiera de los metodos bien conocidos en la tecnica de farmacia. Todos los metodos incluyen la etapa de asociar el agente activo con un vetnculo, que constituye uno o mas ingredientes accesorios. En general, las composiciones se preparan asociando uniforme e mtimamente el compuesto activo con un vetnculo lfquido, un vetnculo solido finamente dividido, o ambos, y despues, si es necesario, conformando el producto.

Los compuestos, cuando es deseable suministrarlos sistemicamente, se pueden formular para administracion parenteral mediante inyeccion, por ejemplo mediante inyeccion de bolo o infusion continua. Las formulaciones para inyeccion se pueden presentar en forma de dosis unitaria, por ejemplo en ampollas, o en recipientes de multiples dosis, con un conservante anadido. Las composiciones pueden tomar formas tales como suspensiones, disoluciones o emulsiones en vetnculos oleosos o acuosos, y pueden contener agentes de formulacion tales como agentes de suspension, agentes estabilizantes y/o agentes dispersantes.

Las formulaciones farmaceuticas para administracion parenteral incluyen disoluciones acuosas de los compuestos activos en forma soluble en agua. Adicionalmente, las suspensiones de los compuestos activos se pueden preparar como suspensiones para inyeccion oleosas apropiadas. Los disolventes o vetnculos lipofilos adecuados incluyen aceites grasos tales como aceite de sesamo, o esteres de acidos grasos sinteticos, tales como oleato de etilo o trigliceridos, o liposomas. Las suspensiones para inyeccion acuosas pueden contener sustancias que incrementan la viscosidad de la suspension, tales como carboximetilcelulosa sodica, sorbitol, o dextrano. Opcionalmente, la suspension tambien puede contener estabilizantes adecuados o agentes que incrementan la solubilidad de los compuestos para permitir la preparacion de disoluciones muy concentradas.

Como alternativa, los compuestos activos pueden estar en forma de polvo para la constitucion con un vetnculo adecuado (por ejemplo, disolucion salina, amortiguador, o agua esteril libre de pirogenos) antes del uso.

Las composiciones adecuadas para administracion oral se pueden presentar como unidades discretas, tales como capsulas, comprimidos, pastillas, tabletas, conteniendo cada una una cantidad predeterminada del compuesto activo (por ejemplo, gelsolina). Otras composiciones incluyen suspensiones en lfquidos acuosos o lfquidos no acuosos, tales como un jarabe, elixir, una emulsion, o un gel.

Las preparaciones farmaceuticas para uso oral se pueden obtener como excipiente solido, triturando opcionalmente una mezcla resultante, y procesando la mezcla de granulos, tras anadir auxiliares adecuados, si se desea, para obtener comprimidos o nucleos de grageas. Los excipientes adecuados son, en particular, cargas tales como azucares, incluyendo lactosa, sacarosa, manitol, sorbitol o preparaciones de celulosa, tales como, por ejemplo, almidon de mafz, almidon de trigo, almidon de arroz, almidon de patata, gelatina, goma de tragacanto, metilcelulosa, hidroxipropilmetil celulosa, carboximetilcelulosa sodica, y/o polivinilpirrolidona (PVP). Si se desea, se pueden anadir agentes disgregantes, tales como la polivinilpirrolidona reticulada, agar, o acido algmico o una sal del mismo, tal como alginato de sodio. Opcionalmente, las formulaciones orales tambien se pueden formular en disolucion salina o amortiguadores, es decir, EDTA para neutralizar condiciones acidas internas, o se pueden administrar sin ningun vetnculo.

Tambien estan espedficamente contempladas las formas de dosificacion oral del componente o componentes anteriores. El componente o componentes se pueden modificar qmmicamente de manera que el suministro oral del derivado sea eficaz. En general, la modificacion qrnmica contemplada es la union de al menos un resto a la propia molecula del componente, en la que dicho resto permite (a) la inhibicion de la proteolisis y (b) la absorcion en el torrente sangumeo desde el estomago o el intestino. Tambien se desea el incremento en la estabilidad global del componente o componentes, y el incremento en el tiempo de circulacion en el cuerpo. Los ejemplos de tales restos incluyen: polietilenglicol, copolfmeros de etilenglicol y propilenglicol, carboximetilcelulosa, dextrano, alcohol polivimlico, polivinilpirrolidona, y poliprolina. Abuchowski y Davis, 1981, “Soluble Polymer-Enzyme Adducts” en: Enzymes as Drugs, Hocenberg y Roberts, eds., Wiley-Interscience, New York, NY, p. 367-383; Newmark, et al.,

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1982, J. Appl. Biochem. 4:185-189. Otros poKmeros que podnan usarse son poli-1,3-dioxolano y poli-1,3,6- trioxocano. Para uso farmaceutico se prefieren, como se indica anteriormente, restos de polietilenglicol.

Para el componente (o derivado), la localizacion de la liberacion puede ser el estomago, el intestino delgado (el duodeno, el yeyuno, o el Aeon), o el intestino grueso. Un experto en la tecnica tiene formulaciones disponibles que no se disolveran en el estomago, pero liberaran el material en el duodeno o en cualquier otra parte en el intestino. Preferiblemente, la liberacion evitara los efectos perjudiciales del entorno estomacal, ya sea mediante la proteccion de la gelsolina o mediante la liberacion del material biologicamente activo mas alla del entorno estomacal, tal como en el intestino.

Para asegurar una resistencia gastrica completa, es esencial un revestimiento impermeable a al menos pH 5,0. Los ejemplos de los ingredientes inertes mas comunes que se usan como revestimientos entericos son acetato- trimelitato de celulosa (CAT), ftalato de hidroxipropilmetilcelulosa (HPMCP), HPMCP 50, HPMCP 55, acetato-ftalato de vinilo (PVAP), Eudragit L30D, Aquateric, acetato-ftalato de celulosa (CAP), Eudragit L, Eudragit S, y goma laca. Estos revestimientos se pueden usar como pelfculas mixtas.

Tambien se puede usar en comprimidos un revestimiento o mezcla de revestimientos, que no estan destinados para la proteccion frente al estomago. Estos pueden incluir revestimientos de azucar, o revestimientos que hacen al comprimido mas facil de tragar. Las capsulas pueden consistir en una corteza dura (tal como gelatina) para el suministro de una sustancia terapeutica seca, es decir, polvo; para formas lfquidas, se puede usar una corteza de gelatina blanda. El material de corteza de las pfldoras podna ser almidon espeso u otro papel comestible. Para pastillas, tabletas, comprimidos moldeados o triturados de comprimidos, se pueden usar tecnicas de amasado en humedo.

La sustancia terapeutica se puede incluir en la formulacion como multiples partfculas finas en forma de granulos o peletes de un tamano de partfculas de alrededor de 1 mm. La formulacion del material para la administracion en capsulas tambien podna estar como un polvo, tapones ligeramente comprimidos, o incluso como comprimidos. La sustancia terapeutica se podna preparar mediante compresion.

Los colorantes y agentes saborizantes pueden estar todos ellos incluidos. Por ejemplo, la gelsolina se puede formular (tal como mediante encapsulamiento liposomico o de microesferas), y entonces se podna introducir posteriormente en un producto comestible, tal como una bebida refrigerada que contiene colorantes y agentes saborizantes.

Se puede diluir o incrementar el volumen de la sustancia terapeutica con un material inerte. Estos diluyentes podnan incluir hidratos de carbono, especialmente manitol, a-lactosa, lactosa anhidra, celulosa, sacarosa, dextranos modificados y almidon. Ciertas sales inorganicas tambien se pueden usar como cargas, incluyendo trifosfato calcico, carbonato magnesico y cloruro sodico. Algunos diluyentes comercialmente disponibles son Fast-Flo, Emdex, STA- Rx 1500, Emcompress y Avicell.

Los disgregantes se pueden incluir en la formulacion de la sustancia terapeutica en una forma de dosificacion solida. Los materiales usados como disgregantes incluyen, pero no se limitan a, almidon, incluyendo el disgregante comercial a base de almidon Explotab. Se pueden usar glicolato de almidon sodico, Amberlite, carboximetilcelulosa sodica, ultramilopectina, alginato sodico, gelatina, piel de naranja, carboximetilcelulosa acida, esponja natural y bentonita. Otra forma de los disgregantes son las resinas de intercambio cationico insolubles. Las gomas en polvo se pueden usar como disgregantes y como aglutinantes, y estas pueden incluir gomas en polvo tales como agar, karaya o tragacanto. El acido algmico y su sal sodica tambien son utiles como disgregantes.

Los aglutinantes se pueden usar para retener el agente terapeutico junto para formar un comprimido duro, e incluyen materiales procedentes de productos naturales tales como goma arabiga, tragacanto, almidon y gelatina. Otros incluyen metilcelulosa (MC), etilcelulosa (EC) y carboximetilcelulosa (CMC). La polivinilpirrolidona (PVP) y la hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) se podnan usar en disoluciones alcoholicas para granular la sustancia terapeutica.

Se puede incluir un agente contra la friccion en la formulacion de la sustancia terapeutica, para prevenir la pegajosidad durante el proceso de formulacion. Los lubricantes se pueden usar como una capa entre la sustancia terapeutica y la pared de la matriz, y estos pueden incluir, pero no se limitan a: acido estearico, incluyendo sus sales de magnesio y calcio, politetrafluoroetileno (PTFE), parafina lfquida, aceites vegetales y ceras. Tambien se pueden usar lubricantes solubles, tales como laurilsulfato de sodio, laurilsulfato de magnesio, polietilenglicol de diversos pesos moleculares, Carbowax 4000 y 6000.

Se pueden anadir agentes de deslizamiento que pueden mejorar las propiedades de fluidez del farmaco durante la formulacion y ayudar al reordenamiento durante la compresion. Los agentes de deslizamiento pueden incluir almidon, talco, sflice pirogena y silicoaluminato hidratado.

Para ayudar a la disolucion de la sustancia terapeutica en el entorno acuoso, se puede anadir un tensioactivo como agente humectante. Los tensioactivos pueden incluir detergentes anionicos tales como laurilsulfato de sodio, dioctilsulfosuccinato de sodio y dioctilsulfonato de sodio. Se pueden usar detergentes cationicos, y podnan incluir

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cloruro de benzalconio o cloruro de bencetonio. La lista de detergentes no ionicos potenciales que se podnan incluir en la formulacion como tensioactivos son lauromacrogol 400, estearato de polioxilo 40, aceite de ricino hidrogenado polioxietilenado 10, 50 y 60, monoestearato de glicerol, polisorbato 40, 60, 65 y 80, ester de acido graso con sacarosa, metilcelulosa y carboximetilcelulosa. Estos tensioactivos podnan estar presentes en la formulacion de gelsolina solos o como una mezcla en diferentes relaciones.

Las preparaciones farmaceuticas que se pueden usar oralmente incluyen capsulas de cierre a presion hechas de gelatina, asf como capsulas selladas blandas hechas de gelatina y un plastificante, tal como glicerol o sorbitol. Las capsulas de cierre a presion pueden contener los ingredientes activos en mezcla con carga tal como lactosa, aglutinantes tales como almidones, y/o lubricantes tales como talco o estearato de magnesio, y, opcionalmente, estabilizantes. En las capsulas blandas, los compuestos activos se pueden disolver o suspender en lfquidos adecuados, tales como aceites grasos, parafina lfquida, o polietilenglicoles lfquidos. Ademas, se pueden anadir estabilizantes.

Tambien se pueden usar microesferas formuladas para administracion oral. Tales microesferas se han definido bien en la tecnica. Todas las formulaciones para administracion oral debenan estar en dosis adecuadas para tal administracion.

Para administracion bucal, las composiciones pueden tomar las formas de comprimidos o tabletas formulados de manera convencional.

Para la administracion mediante inhalacion, los compuestos para uso segun la presente descripcion se pueden suministrar convenientemente en forma de una presentacion de pulverizacion en aerosol a partir de paquetes a presion o un nebulizador, con el uso de un propelente adecuado, por ejemplo diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dioxido de carbono u otro gas adecuado. En el caso de un aerosol a presion, la unidad de dosificacion se puede determinar proporcionando una valvula para suministrar una cantidad medida. Las capsulas y cartuchos de, por ejemplo, gelatina para uso en un inhalador o insuflador se pueden formular conteniendo una mezcla de polvo del compuesto y una base de polvo adecuada tal como lactosa o almidon.

Tambien se contempla aqu el suministro pulmonar de gelsolina. La gelsolina se suministra a los pulmones de un mairnfero mientras la inhala, y atraviesa el forro epitelial del pulmon hasta el torrente sangumeo. Otros informes de moleculas inhaladas incluyen Adjei et al., 1990, Pharmaceutical Research, 7:565-569; Adjei et al., 1990, International Journal of Pharmaceutics, 63:135-144 (acetato de leuprolida); Braquet et al., 1989, Journal of Cardiovascular Pharmacology, 13 (supl. 5):143-146 (endotelina-1); Hubbard et al., 1989, Annals of Internal Medicine, Vol. III, p. 206212 (al-antitripsina); Smith et al., 1989, J. Clin. Invest. 84:1145-1146 (a-1-proteinasa); Oswein et al., 1990, “Aerosolization of Proteins”, Proceedings of Symposium on Respiratory Drug Delivery II, Keystone, Colorado, March, (hormona del crecimiento humana recombinante); Debs et al., 1988, J. Immunol. 140:3482-3488 (interferon-y y factor alfa de necrosis tumoral) y Platz et al., patente U.S. n° 5.284.656 (factor estimulante de colonias de granulocitos). En la patente U.S. n° 5.451.569, expedida el 19 de septiembre de 1995 a Wong et al., se describe un metodo y una composicion para el suministro pulmonar de farmacos para efecto sistemico.

Se contempla para uso en la practica de esta descripcion un amplio intervalo de dispositivos mecanicos disenados para el suministro pulmonar de productos terapeuticos, incluyendo, pero sin limitarse a, nebulizadores, inhaladores de dosis medida, e inhaladores de polvo, todos los cuales son familiares para aquellos expertos en la tecnica.

Algunos ejemplos espedficos de dispositivos comercialmente disponibles utiles para la practica de esta descripcion son el nebulizador Ultravent, fabricado por Mallinckrodt, Inc., St. Louis, Missouri; el nebulizador Acorn II, fabricado por Marquest Medical Products, Englewood, Colorado; el inhalador de dosis medida Ventolin, fabricado por Glaxo Inc., Research Triangle Park, North Carolina; y el inhalador de polvo Spinhaler, fabricado por Fisons Corp., Bedford, Massachusetts.

Todos los citados dispositivos requieren el uso de formulaciones adecuadas para dispensar la gelsolina. Tfpicamente, cada formulacion es espedfica para el tipo de dispositivo empleado, y puede implicar el uso de un material propelente apropiado, ademas de los diluyentes, adyuvantes y/o vehfculos habituales utiles en la terapia. Tambien, se contempla el uso de liposomas, microcapsulas o microesferas, complejos de inclusion, u otros tipos de vehfculos. La gelsolina modificada qmmicamente tambien se puede preparar en diferentes formulaciones, dependiendo del tipo de modificacion qmmica o del tipo de dispositivo empleado.

Las formulaciones adecuadas para uso con un nebulizador, ya sea de chorro o ultrasonico, comprenderan tfpicamente gelsolina disuelta en agua a una concentracion de alrededor de 0,1 a 25 mg de gelsolina biologicamente activa por ml de disolucion. La formulacion tambien puede incluir un amortiguador y un azucar simple (por ejemplo, para la estabilizacion de la gelsolina y la regulacion de la presion osmotica). La formulacion del nebulizador tambien puede contener un tensioactivo, para reducir o prevenir la agregacion de la gelsolina inducida por la superficie causada por atomizacion de la disolucion al formar el aerosol.

Las formulaciones para uso con un dispositivo inhalador de dosis medida generalmente comprenderan un polvo finamente dividido que contiene la gelsolina suspendida en un propelente con la ayuda de un tensioactivo. El propelente puede ser cualquier material convencional empleado para este fin, tal como un clorofluorocarbono, un

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hidroclorofluorocarbono, un hidrofluorocarbono, o un hidrocarburo, incluyendo triclorofluorometano, diclorodifluorometano, diclorotetrafluoroetanol, y 1,1,1,2-tetrafluoroetano, o combinaciones de los mismos. Los tensioactivos adecuados incluyen trioleato de sorbitan y lecitina de soja. El acido oleico tambien puede ser util como un tensioactivo.

Las formulaciones para la dispensacion desde un dispositivo inhalador de polvo comprenderan un polvo seco finamente dividido que contiene gelsolina y que tambien puede incluir un agente para dar volumen, tal como lactosa, sorbitol, sacarosa, o manitol, en cantidades que facilitan la dispersion del polvo desde el dispositivo, por ejemplo 50 a 90% en peso de la formulacion. La gelsolina se debena preparar muy ventajosamente en forma de partfculas con un tamano promedio de partfculas menor que 10 mm (o micrometros), lo mas preferible 0,5 a 5 mm, para el suministro mas eficaz al pulmon distal.

Tambien se contempla el suministro nasal (o intranasal) de una composicion farmaceutica de la presente descripcion. El suministro nasal permite el paso de una composicion farmaceutica de la presente descripcion al torrente sangurneo directamente tras administrar el producto terapeutico a la nariz, sin la necesidad de depositar el producto en el pulmon. Las formulaciones para el suministro nasal incluyen aquellas con dextrano o ciclodextrano.

Para la administracion nasal, un dispositivo util es una botella dura pequena a la cual se adjunta un pulverizador de dosis medida. En una realizacion, la dosis medida se suministra extrayendo la composicion farmaceutica de la presente descripcion a una camara de volumen definido, camara la cual tiene una abertura de un tamano para aerosolizar una formulacion de aerosol formando una pulverizacion cuando se comprime un lfquido en la camara. La camara se comprime para administrar la composicion farmaceutica de la presente descripcion. En una realizacion espedfica, la camara es un montaje de piston. Tales dispositivos estan comercialmente disponibles.

Como alternativa, se usa una botella exprimible de plastico, con una apertura o abertura dimensionada para aerosolizar una formulacion de aerosol formando una pulverizacion cuando se exprime. La abertura se encuentra habitualmente en la parte superior de la botella, y la parte superior generalmente esta estrechada para ajustarse parcialmente en los conductos nasales para la administracion eficiente de la formulacion de aerosol. Preferiblemente, el inhalador nasal proporcionara una cantidad medida de la formulacion de aerosol, para administracion de una dosis medida del farmaco.

Los compuestos tambien se pueden formular en composiciones rectales o vaginales, tales como supositorios o enemas de retencion, por ejemplo, que contienen bases convencionales de supositorios tales como manteca de cacao u otros gliceridos.

Ademas de las formulaciones descritas previamente, los compuestos tambien se pueden formular como una preparacion de deposito. Tales formulaciones de accion prolongada se pueden formular con materiales polimericos o hidrofobos adecuados (por ejemplo como una emulsion en un aceite aceptable) o resinas de intercambio ionico, o como derivados apenas solubles, por ejemplo como una sal apenas soluble.

Las composiciones farmaceuticas tambien pueden comprender vehuculos o excipientes en fase solida o de gel adecuados. Los ejemplos de tales veldculos o excipientes incluyen, pero no se limitan a, carbonato de calcio, fosfato de calcio, diversos azucares, almidones, derivados de celulosa, gelatina, y polfmeros tales como polietilenglicoles.

Las formas de preparacion farmaceutica solidas o lfquidas adecuadas son, por ejemplo, disoluciones acuosas o salinas para inhalacion, microencapsuladas, encocleadas, revestidas sobre partfculas de oro microscopicas, contenidas en liposomas, nebulizadas, aerosoles, peletes para implante en la piel, o secas sobre un objeto afilado para ser raspado sobre la piel. Las composiciones farmaceuticas tambien incluyen granulos, polvos, comprimidos, comprimidos revestidos, (micro)capsulas, supositorios, jarabes, emulsiones, suspensiones, cremas, gotas o preparaciones con liberacion extendida de compuestos activos, en cuya preparacion se usan habitualmente excipientes y aditivos y/o auxiliares tales como disgregantes, aglutinantes, agentes de revestimiento, agentes de hinchamiento, lubricantes, saborizantes, edulcorantes o solubilizantes como se describen anteriormente. Las composiciones farmaceuticas son adecuadas para uso en una variedad de sistemas de suministro de farmacos. Para un breve repaso de los metodos para el suministro de farmacos, vease Langer, Science 249:1527-1533, 1990.

La gelsolina y opcionalmente otras sustancias terapeuticas se pueden administrar per se o en forma de una sal farmaceuticamente aceptable.

El agente o agentes terapeuticos, incluyendo espedficamente, pero sin limitarse a, gelsolina, se pueden proporcionar en partfculas. Las partfculas, como se usa aqm, significan nano o micropartfculas (o en algunos casos mas grandes) que pueden consistir en todo o en parte en gelsolina o el otro u otros agentes terapeuticos como se describe aqm. Las partfculas pueden contener el agente o agentes terapeuticos en un nucleo rodeado de un revestimiento, incluyendo, pero sin limitarse a, un revestimiento enterico. El agente o agentes terapeuticos tambien se pueden dispersar a lo largo de las partfculas. El agente o agentes terapeuticos tambien se pueden adsorber en las partfculas. Las partfculas pueden ser de cinetica de liberacion de cualquier orden, incluyendo liberacion de orden cero, liberacion de primer orden, liberacion de segundo orden, liberacion retrasada, liberacion sostenida, liberacion inmediata, y cualquier combinacion de las mismas, etc. La partfcula puede incluir, ademas del agente o agentes terapeuticos, cualquiera de aquellos materiales usados habitualmente en la tecnica de farmacia y medicina,

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incluyendo, pero sin limitarse a, material erosionable, no erosionable, biodegradable, o no biodegradable, o combinaciones de los mismos. Las partfculas pueden ser microcapsulas que contienen la gelsolina en una disolucion o en un estado semisolido. Las partfculas pueden ser de virtualmente cualquier forma.

Los materiales polimericos tanto no biodegradables como biodegradables se pueden usar en la fabricacion de partfculas para suministrar el agente o agentes terapeuticos. Tales poKmeros pueden ser polfmeros naturales o sinteticos. El poKmero se selecciona en base al penodo de tiempo a lo largo del cual se desea la liberacion. Los polfmeros bioadhesivos de particular interes incluyen hidrogeles bioerosionables descritos por H.S. Sawhney, C.P. Pathak y J.A. Hubell en Macromolecules, (1993) 26:581-587, cuyas ensenanzas se incorporan aqrn. Estos incluyen poliacidos hialuronicos, casema, gelatina, glutina, polianl^dridos, poliacido acnlico, alginato, quitosan, poli(metacrilatos de metilo), poli(metacrilatos de etilo), poli(metacrilatos de butilo), poli(metacrilato de isobutilo), poli(metacrilato de hexilo), poli(metacrilato de isodecilo), poli(metacrilato de laurilo), poli(metacrilato de fenilo), poli(acrilato de metilo), poli(acrilato de isopropilo), poli(acrilato de isobutilo), y poli(acrilato de octadecilo).

El agente o agentes terapeuticos pueden estar contenidos en sistemas de liberacion controlada. La expresion “liberacion controlada” esta destinada a referirse a cualquier formulacion que contenga farmaco en la que se controla la manera y el perfil de liberacion del farmaco desde la formulacion. Esto se refiere a formulaciones de liberacion inmediata asf como no inmediata, incluyendo las formulaciones de liberacion no inmediata, pero sin limitarse a, formulaciones de liberacion sostenida y de liberacion retrasada. La expresion “liberacion sostenida” (tambien denominada “liberacion extendida”) se usa en su sentido convencional para referirse a una formulacion farmaceutica que proporciona una liberacion gradual de un farmaco a lo largo de un penodo de tiempo prolongado, y que preferiblemente, aunque no necesariamente, da como resultado niveles sangumeos sustancialmente constantes de un farmaco a lo largo de un penodo de tiempo prolongado. La expresion “liberacion retrasada” se usa en su sentido convencional para referirse a una formulacion farmaceutica en la que hay un retraso de tiempo entre la administracion de la formulacion y la liberacion del farmaco a partir de ella. La “liberacion retrasada” puede implicar o no la liberacion gradual de farmaco a lo largo de un penodo de tiempo prolongado, y de este modo puede ser o no “liberacion sostenida”.

El uso de un implante de liberacion sostenida a largo plazo puede ser particularmente adecuado para el tratamiento de afecciones cronicas. La liberacion “a largo plazo”, como se usa aqrn, significa que el implante se construye y dispone para suministrar niveles terapeuticos del ingrediente activo durante al menos 7 dfas, y preferiblemente 30-60 dfas. Los implantes de liberacion sostenida a largo plazo son bien conocidos por aquellos de pericia normal en la tecnica, e incluyen algunos de los sistemas de liberacion descritos anteriormente.

La descripcion tambien contempla el uso de kits. En algunos aspectos de la descripcion, el kit puede incluir un vial de preparacion farmaceutica, un vial de diluyente de la preparacion farmaceutica, y gelsolina. El vial que contiene el diluyente para la preparacion farmaceutica es opcional. El vial del diluyente contiene un diluyente, tal como disolucion salina fisiologica, para diluir lo que podna ser una disolucion concentrada o polvo liofilizado de gelsolina. Las instrucciones pueden incluir instrucciones para mezclar una cantidad particular del diluyente con una cantidad particular de la preparacion farmaceutica concentrada, con lo que se prepara una formulacion final para inyeccion o infusion. Las instrucciones pueden incluir instrucciones para tratar un sujeto con una cantidad eficaz de gelsolina. Tambien se entendera que los recipientes que contienen las preparaciones, ya sea que el recipiente sea una botella, un vial con un tabique, una ampolla con un tabique, una bolsa de infusion, y similar, pueden contener senales tales como marcas convencionales que cambian de color cuando la preparacion se ha sometido a autoclave o se ha esterilizado de otro modo.

La presente invencion se ilustra adicionalmente mediante el siguiente Ejemplo, que de ningun modo debena interpretarse como limitante adicionalmente.

Ejemplo

La gelsolina plasmatica es una protema segregada que circula en los fluidos extracelulares de seres humanos a concentraciones promedio de 250 mg/l. Diversos tipos de lesion tisular conducen a reducciones prolongadas en los niveles de gelsolina plasmatica. Tras la lesion tisular grave encontrada en trauma grave, quemaduras, septicemia, cirugfa importante y pacientes con transplante de celulas madre hematopoyeticas, las disminuciones en los niveles de gelsolina hasta aproximadamente menos de 25% de lo normal preceden y, por lo tanto, predicen complicaciones asistenciales cnticas medidas mediante requisitos de ventilacion asistida, duracion de la residencia en unidades de cuidado intensivo y permanencias hospitalarias globales, muerte y secuelas espedficas tales como lesion pulmonar secundaria (por ejemplo, smdrome disneico del adulto (ARDS), lesion pulmonar aguda (ALI), smdromes de disfuncion multiorganica (MODS)). Reducciones similares de gelsolina plasmatica en modelos de animales preceden a los cambios de la permeabilidad pulmonar e inflamacion, y la infusion de gelsolina plasmatica recombinante mejora estos efectos.

El mecanismo propuesto de agotamiento de la gelsolina es que se une a abundante actina en celulas expuestas por ruptura tisular. La gelsolina se une a mediadores inflamatorios bioactivos, acido lisofosfatfdico, fosfato de diadenosina, peptido Ap (implicado como patogeno en la enfermedad de Alzheimer), factor activador de plaquetas, y posiblemente otros, y por lo tanto la perdida de esta union en la sangre mediante agotamiento de gelsolina periferica

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puede explicar la promocion de lesion tisular secundaria y su inhibicion por la reposicion de gelsolina. Ademas, el tratamiento de ratones con gelsolina plasmatica evita complicaciones letales de inyecciones de endotoxina, y retrasa significativamente la mortalidad en el modelo de septicemia bacteriana de ligadura y puncion cecal.

Aunque el mecanismo protector de accion de gelsolina no esta claro, las pruebas sugieren que inhibe multiples mediadores inflamatorios que, ya sea debido a que surgen tardfamente tras la lesion primaria o debido a su persistencia, infligen complicaciones asistenciales cnticas. La gelsolina esta geneticamente muy conservada, sin signos de inmunogenicidad en seres humanos. No ha aparecido toxicidad tras la instilacion de gelsolina plasmatica humana recombinante en las vfas respiratorias de seres humanos, o tras la infusion intravenosa en roedores y primates no humanos.

El curso de tiempo de la patogenesis de la encefalomielitis alergica experimental (EAE), en la que los linfocitos inician una respuesta inmune frente a mielina neuronal y despues mas tarde una variedad de celulas efectoras participan en la destruccion neuronal, se correlaciona con el comienzo retrasado de otras lesiones secundarias afectadas de forma favorable por la gelsolina. La hipotesis sugerida por esta informacion fue que los niveles de gelsolina plasmatica pueden caer en respuesta a la lesion inicial infligida en el modelo de EAE. Si es asf, la sustitucion de gelsolina periferica puede mejorar la lesion secundaria.

Se ensayo la hipotesis de que la administracion periferica de gelsolina podna reflejar e impactar sobre los procesos patologicos en el sistema nervioso central. Los experimentos se llevaron a cabo sobre ratones con encefalomielitis alergica experimental EAE (EAE), un modelo clasico de roedor para esclerosis multiple (MS) humana (Dittel B, Merchant R, Janeway C, Jr. Evidence for Fas-dependent and Fas-independent mechanisms in the pathogenesis of experimental autoimmune encephalomyelitis. J Immunol 1999; 162:6392-6400). En apoyo de esta hipotesis se encuentra la bibliograffa relativa al posible papel de la gelsolina en la enfermedad de Alzheimer (AD). Supuestamente, la gelsolina es un componente de placas de AD humanas, se une al peptido Ap, y cuando se administra intraperitonealmente, elimina el peptido Ap de los cerebros con AD de ratones con AD transgenicos que expresan niveles elevados de peptido Ap (Matsuoka Y, Saito M, LaFrancois J, et al. Novel therapeutic approach for the treatment of Alzheimer's disease by peripheral administration of agents with an affinity to p-amyloid. J. Neurosci 2003; 23:29-33).

Como se muestra en la Figura 1, los niveles de gelsolina cayeron tras el comienzo de la lesion primaria de EAE, que implico la transferencia adoptiva en ratones de ensayo irradiados de celulas T cebadas para unir protemas basicas de mielina. Las barras de “control” muestran que la irradiacion per se redujo de forma aguda los niveles de gelsolina plasmatica, consistente con hallazgos previos en seres humanos sometidos a transplante de celulas madre (DiNubile M, Stossel T, Ljunghusen O, Ferrara J, Antin J. Prognostic implications of declining plasma gelsolin levels after allogenic stem cell transplantation. Blood 2002; 100:4367-4371). Hacia el dfa 4, los animales del control y los irradiados tuvieron niveles equivalentes de gelsolina plasmatica. Sin embargo, los niveles de gelsolina de los animales de control continuaron elevandose hasta el dfa 7, y permanecieron constantes despues. Los niveles de los animales con EAE cayeron posteriormente, y, aunque se elevaron en cierto modo subsiguientemente, siguieron persistentemente menores que los de los controles durante el dfa 21. Como se muestra en la Figura 2, este intervalo corresponde al comienzo, empeoramiento y remision de las manifestaciones neurologicas de EAE.

Se llevo a cabo un ensayo terapeutico en el que un conjunto de animales de ensayo recibio subcutaneamente 8 mg de seroalbumina bovina u 8 mg de gelsolina plasmatica recombinante humana, una vez en el dfa diez (1x) o tres dosis en los dfas 2, 5 y 10 (3x). Se ha mostrado previamente que esta via de administracion y dosificacion eleva los niveles de gelsolina agotados 50% por septicemia hasta el normal. Los niveles cayeron con un tiempo medio de 24 horas. Como se muestra en la Figura 2, el tratamiento con gelsolina 3x retraso el comienzo, atenuo notablemente la gravedad, y apresuro la remision de los smtomas.

La Figura 3 muestra los resultados de publicaciones previas que describen el curso de EAE en animales que carecen de funciones de integrina, estando las integrinas implicadas en la destruccion neuronal de este modelo y de esclerosis multiple humana. Dos paneles muestran el efecto de un anticuerpo monoclonal dirigido contra integrinas a4, y otro representa el curso de EAE en ratones que carecen de integrinas p2 (Kent S, Karlik S, Cannon C, et al. A monoclonal antibody to a4 integrin suppresses and reverses active experimental allergic encephalomyelitis. J Neuroimmunol 1995; 58:1-10; Bullard D, Hu X, Schoeb T, Axtell R, Raman C, Barnum S. Critical requirement of CG11b (Mac-2) on T cells and accessory cells for development of experimental autoimmune encephalomyelitis. J Immunol 2005; 175:6327-62330). Los datos muestran que los efectos de la sustitucion de gelsolina son tan buenos o mejores en el modelo de EAE que con la seleccion de integrina como diana. Los anticuerpos dirigidos contra integrinas a4 son el ingrediente activo en el producto Tysabri, desarrollado por Biogen-Idec and Elan, aprobado por la FDA como extremadamente eficaz frente a la esclerosis multiple (Miller D, Khan O, Sheremata W, et al. A controlled trial of Natalizumab for relapsing multiple sclerosis. N. Engl J Med 2003; 348:15-23) y despues retirado del mercado debido a una complicacion grave, meningoleucoencefalitis polifocal (PML).

En resumen, los experimentos apoyan los dos aspectos de la hipotesis planteada, a saber, que las reducciones en los niveles de gelsolina plasmatica preceden a las manifestaciones neurologicas de EAE, y que el tratamiento sistemico con gelsolina plasmatica previene y/o suprime estas manifestaciones. Una correlacion clmica de estas observaciones es que la monitorizacion en serie de los niveles de gelsolina plasmatica podna formar parte de la

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estrategia del manejo de la esclerosis multiple, senalando cuando intensificar la terapia antes de que se establezca el dano neurologico. Otra correlacion es que parte de esta intensificacion de la terapia puede incluir terapia con gelsolina. Una tercera correlacion es que la elevacion profilactica de los niveles de gelsolina plasmatica puede proteger a los pacientes con esclerosis multiple de las secuelas neurologicas.

Medidas de gelsolina y albumina:

La gelsolina plasmatica se mide tipicamente en muestras por duplicado mediante su capacidad para estimular la nucleacion de actina (Janmey, P. A., Chaponnier, C., Lind, S. E., Zaner, K. S., Stossel, T. P. y Yin, H. L. (1985) Biochemistry 24, 3714-23). Se diluye plasma de raton 1:5 veces en 0,1 M de KCl, 0,2 mM de MgCh, 1 mM de EgTA, 0,5 mM de ATP, 0,5 mM de p-mercaptoetanol, 10 mM de amortiguador de Tris-HCl, pH 7,4 (Amortiguador B). De la muestra de plasma diluida, se anaden 5 |il a 280 |il de Amortiguador B suplementado con 1,5 mM de CaCl2 y 0,4 |iM de falacidina en tubos de cultivo de borosilicato de 6 x 50 mm. La reaccion de polimerizacion de la actina se inicia anadiendo 15 |il de 20 |iM de actina marcada con pireno en 0,5 mM de ATP, 5 mM de p-mercaptoetanol, 0,2 mM de CaCl2, 0,2 mM de amortiguador de Tris-HCl, pH 7,4 (Amortiguador A). La polimerizacion se monitoriza durante 200 segundos en un espectrofluonmetro a longitudes de onda de excitacion y de emision de 366 y 386 nm, respectivamente. Las concentraciones de gelsolina se estiman a partir de una curva patron usando pGSN humana recombinante. La actina marcada con pireno de la disolucion madre para estos ensayos, preparada mediante el metodo de Kouyama y Mihashi (Kouyama, T. y Mihashi, K. (1981) Eur J Biochem 114, 33-8), se almacena a -80°C en lotes, se descongela y se diluye 10x con Amortiguador A, se centrifuga a 250.000 x g durante 30 minutos despues de dejar reposar toda la noche.

La cuantificacion de la gelsolina mediante el ensayo de nucleacion de la actina se correlaciona bien con los niveles obtenidos de las medidas de transferencia Western (Mounzer, K. C., Moncure, M., Smith, Y. R. y Dinubile, M. J. (1999) Am J Respir Crit Care Med 160, 1673-81). El ensayo es muy espedfico. Sin embargo, el ensayo no discrimina entre cGSN y pGSN. Tampoco es espedfico de la especie, y de este modo es capaz de aproximar los niveles de gelsolina total en ratones tratados con pGSN humana recombinante. Los lfpidos que se complejan con pGSN no afectan a la actividad de nucleacion de la actina debida a pGSN (Janmey, P. A., lida, K., Yin, H. L. y Stossel, T. P. (1987) J Biol Chem 262, 12228-36).

Los niveles de albumina se miden colorimetricamente usando un kit comercial (Stanbio, Boerne, TX) segun las instrucciones del fabricante.

Equivalentes

Se considera que la memoria descriptiva escrita anteriormente es suficiente para permitir a alguien de pericia normal en la tecnica poner en practica la invencion. La presente invencion no estara limitada en el alcance por los ejemplos proporcionados, puesto que los ejemplos estan destinados a ser meras ilustraciones de uno o mas aspectos de la invencion. Otras realizaciones funcionalmente equivalentes se consideran dentro del alcance de la invencion. Diversas modificaciones de la invencion, ademas de aquellas mostradas y descritas aqrn, seran manifiestas para los expertos en la tecnica a partir de la descripcion anterior. Cada una de las limitaciones de la invencion puede englobar diversas realizaciones de la invencion. Por lo tanto, se anticipa que cada una de las limitaciones de la invencion que implica cualquier elemento o combinaciones de elementos se puede incluir en cada aspecto de la invencion. Esta invencion no esta limitada en su aplicacion a los detalles de construccion y el montaje de los componentes expuestos o ilustrados en los dibujos. La invencion es capaz de otras realizaciones y de ser puesta en practica o de ser llevada a cabo de diversas maneras.

Tambien, la fraseologfa y terminologfa usada aqrn es con fines descriptivos, y no se debe considerar limitante. El uso de “que incluye”, “que comprende”, o “que tiene”, “que contiene”, “que implica”, y sus variaciones aqrn, engloba los apartados enunciados despues y sus equivalentes, asf como apartados adicionales.

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   REIVINDICACIONES

   1. Gelsolina para uso en un metodo para tratar un sujeto que tiene esclerosis multiple, comprendiendo el metodo la administracion multiple de gelsolina al sujeto.
2. 2. Gelsolina para uso en un metodo para tratar un sujeto que tiene esclerosis multiple segun la reivindicacion 1, en el que el sujeto esta de otro modo libre de indicaciones que requieran el tratamiento con gelsolina.
3. 3. Gelsolina para uso en un metodo para tratar un sujeto que tiene esclerosis multiple segun la reivindicacion 1, en el que el metodo comprende ademas administrar un segundo agente para tratar esclerosis multiple.
4. 4. Gelsolina para uso en un metodo para tratar un sujeto que tiene esclerosis multiple segun la reivindicacion 3, en el que el segundo agente es interferon (IFN) - pib (Betaseron o Betaferon), IFN - pia (Avonex, Rebif), acetato de glatiramer (Copaxona), mitoxantrona (Novantrona), azatioprina, ciclosporina, metotrexato, ciclofosfamida, inmunoglobulina intravenosa, prednisona, metilprednisona, prednisolona, metilprednisolona, dexametasona, hormona adreno-corticotropica (ACTH), corticotropina, 2-clorodesoxiadenosina (2-CDA, cladribina), inosina, anticuerpo anti-interleucina-2 (Zenapax, daclizumab), leucovorina, teriflunomida, estroprogestagenos, desogestrel, etinilestradiol, BHT-3009, ABT-874, vacuna de Bacilo Calmette-Guerin (BCG), vacunacion con celulas T, CNTO 1275, Rituximab, Tysabri (natalizumab), N-acetilcistema, minociclina, RO0506997, o una estatina.
5. 5. Gelsolina para uso en un metodo para tratar un sujeto que tiene esclerosis multiple segun la reivindicacion 1, en el que el metodo comprende ademas

   seleccionar un sujeto sobre la base de que se sabe que el sujeto tiene un nivel de gelsolina al menos 10% menor que el nivel medio medido para una poblacion aparentemente sana de sujetos; y

   administrar gelsolina al sujeto en una cantidad eficaz para tratar al sujeto que tiene esclerosis multiple.
6. 6. Gelsolina para uso en un metodo para tratar un sujeto que tiene esclerosis multiple segun la reivindicacion 5, en combinacion con un segundo agente para tratar esclerosis multiple.
7. 7. Gelsolina para uso en un metodo para tratar un sujeto que tiene esclerosis multiple, comprendiendo el metodo:

   (i) tratar el sujeto con una primera terapia para tratar la esclerosis multiple,

   (ii) obtener un nivel de gelsolina en el sujeto,

   (iii) comparar el nivel de gelsolina obtenido en (ii) con un valor predeterminado que corresponde a un nivel predeterminado de gelsolina en una poblacion de control aparentemente sana, y, si no se alcanza el nivel predeterminado de gelsolina,

   (iv) tratar el sujeto con un segundo agente para tratar la esclerosis multiple, y repetir (ii) y (iii) hasta que se alcance el nivel predeterminado de gelsolina.
8. 8. Un metodo para evaluar la eficacia de una terapia para tratar o reducir el riesgo de esclerosis multiple en un sujeto, que comprende:

   (i) obtener in vitro un nivel de gelsolina en sangre, plasma o suero de un sujeto sometido a terapia con un agente para tratar la esclerosis multiple,

   (ii) comparar el nivel de gelsolina obtenido en (i) con un valor predeterminado que corresponde a un nivel predeterminado de gelsolina en una poblacion de control aparentemente sana, y

   (iii) determinar si el nivel de gelsolina en (i) esta en o por encima del nivel predeterminado, siendo dicha determinacion indicativa de si la terapia es eficaz.
9. 9. El metodo de la reivindicacion 8, en el que la etapa (i) y la etapa (ii) y/o la etapa (iii) se repiten para monitorizar los niveles de gelsolina del sujeto a lo largo del tiempo.
10. 10. El metodo de la reivindicacion 8, en el que el agente es gelsolina, interferon (IFN) - p1b (Betaseron o Betaferon), IFN - p1a (Avonex, Rebif), acetato de glatiramer (Copaxona), mitoxantrona (Novantrona), azatioprina, ciclosporina, metotrexato, ciclofosfamida, inmunoglobulina intravenosa, prednisona, metilprednisona, prednisolona, metilprednisolona, dexametasona, hormona adreno-corticotropica (ACTH), corticotropina, 2-clorodesoxiadenosina (2-CDa, cladribina), inosina, anticuerpo anti-interleucina-2 (Zenapax, daclizumab), leucovorina, teriflunomida, estroprogestagenos, desogestrel, etinilestradiol, BHT-3009, ABT-874, vacuna de Bacilo Calmette-Guerin (BCG), vacunacion con celulas T, CNTO 1275, Rituximab, Tysabri (natalizumab), N-acetilcistema, minociclina, RO0506997, o una estatina.