ES2642340T3 - Selección automática de microorganismos e identificación usando MALDI - Google Patents
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Description
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DESCRIPCION
Seleccion automatica de microorganismos e identificacion usando MALDI CAMPO DE LA INVENCION
En general, la presente invencion se refiere a un metodo para localizar y seleccionar una colonia de microorganismos e identificar microorganismos usando MALDI, en particular, MALDI-TOF-MS (desorcion e ionizacion laser asistida por matriz/espectroscopfa de masas por tiempo de vuelo) y los sistemas para realizar dichos metodos.
El analisis MALDI es una herramienta util para resolver problemas estructurales en bioqmmica, inmunolog^a, genetica y biolog^a. Las muestras se ionizan en la fase gaseosa y se usa un analizador de tiempo de vuelo (TOF) para medir las masas de iones. El analisis TOF comienza cuando se forman iones y se aceleran a una energfa cinetica constante a medida que ingresan en una region de desplazamiento. Llegan a un detector luego de tiempos de vuelo proporcionales a la rafz cuadrada de sus masas. Se crea un espectro de masas dado que iones de distinta masa llegan al detector en distintos momentos.
La espectrometna de masas puede ser una herramienta potente en el campo de descubrimiento y desarrollo de farmacos, genotipado e investigacion proteomica. Ademas, ya se ha utilizado MALDI para la caracterizacion e identificacion de bacterias y microorganismos. La tendencia de investigacion actual es analizar una cantidad cada vez mayor de muestras usando cantidades de muestras individuales que oscilan entre los niveles de micromoles y los niveles de atomoles. Como resultado, las muestras se estan volviendo mas pequenas y existe la necesidad de adquisicion eficaz y confiable de la cantidad correcta de microorganismos y depositar de forma precisa una muestra de la cantidad adquirida en una placa diana utilizada en el instrumento MALDI.
En una operacion MALDI TOF MS habitual, la muestra que se analizara se localiza o deposita en una placa de metal (tambien denominada placa diana o placa MALDI), se agregan reactivos (matriz) que permiten ionizacion, y luego se secan para formar cristales. En estos instrumentos, la placa diana se ubica en una posicion fija en el instrumento MALDI. La placa diana tiene multiples puntos de deposito (por ejemplo, de 24 a 384 puntos de deposito en una unica placa diana) y estos puntos de deposito tienen una orientacion fija con respecto a los bordes de la placa diana. La placa diana se ubica en una plataforma X-Y, de manera que se pueda depositar una muestra obtenida de una colonia de microorganismos en un punto de deposito seleccionado. Se mantiene un potencial de alto voltaje entre la placa diana y una rejilla de metal. Este voltaje puede mantenerse o pulsarse, dependiendo de los resultados deseados y se genera un vado en la camara. Se emite un laser hacia la muestra/matriz y se forma una pluma de iones. La diferencia de voltaje se usa para acelerar los iones por un tubo de vuelo para que se puedan analizar. El analisis relaciona directamente el tiempo de vuelo con la masa del componente ionizado.
Diversos parametros pueden afectar la calidad de los resultados, incluida la planitud de la diana, la cantidad y el tipo de matriz, la concentracion de la muestra, la conductividad de la diana de muestra, la precision de la colocacion en el punto de deposito, asf como otras variables.
En particular, un aspecto importante es la manipulacion de la muestra y la concentracion de la muestra. Se sabe que se crea una suspension de una muestra de una colonia de microorganismos y que un investigador coloca con pipeta una gota de la suspension obtenida que contiene la muestra sobre un punto de deposito de la placa diana de forma manual. Para proporcionar un analisis correcto, sin embargo, la suspension debe contener una concentracion suficiente de la muestra desde el inicio.
Al preparar dicha suspension de una muestra de microorganismos, un dispositivo portatil que comprende un mando. El mando comprende una cubierta con un motor de impulsion giratorio contenido allf, y un conector que esta configurado para la union desmontable del dispositivo de adquisicion de muestras al mando. El dispositivo de adquisicion de muestras comprende una region de recoleccion de muestras que, en primer lugar, se pone en contacto con el material biologico (cultivado, en su mayona, en una placa de cultivo) para que se analice. Luego, la region de recoleccion de muestras se une al mando giratorio, se pone en contacto con un medio lfquido contenido en un tubo y se activa el mando giratorio durante un penodo de tiempo determinado de manera que se libere una muestra del material biologico en el dispositivo de adquisicion de muestras en el medio lfquido. Luego de que se retira la region de recoleccion de muestras del tubo, el tubo de suspension sostiene una suspension que contiene la muestra que, por ejemplo, se puede usar para realizar el analisis MALDI.
Sin embargo, en algunos casos, la eficacia de liberacion de la muestra de la region de adquisicion de muestras puede ser insuficiente para realizar un analisis correcto del microorganismo suspendido en el medio lfquido. Esto puede generar una suspension preparada inutilizable, lo que puede generar perdida de tiempo y dinero. Ademas, dado que la region de recoleccion de muestras gira dentro del tubo, el tubo debe ser de una dimension suficiente para permitir dicha rotacion sin que la region de adquisicion de muestras entre en contacto con la pared interior del tubo, lo que puede ser perjudicial para la liberacion del microorganismo en el medio lfquido. Por lo tanto, dicho tubo de tamano relativamente grande contiene un volumen relativamente grande de medio lfquido, lo que conlleva un penodo correspondientemente prolongado de procesamiento adicional de dicho medio de suspension lfquido. Por ejemplo, el tiempo durante el cual la suspension ifquida que contiene la muestra debe incubarse en una incubadora es proporcional a la cantidad de lfquido de suspension.
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Por lo tanto, existe la necesidad de un metodo en el cual se realice la preparacion de una suspension de una muestra de microorganismos de forma automatica, lo que conlleva una manera mucho mas reproducible de preparar dicha suspension. Ademas, existe la necesidad de liberar, de forma confiable y reproducible, la muestra en un punto de deposito de una placa diana.
A modo de informacion previa, DE 10 2004 020885 A1 describe un aparato y metodo para obtener y depositar de forma automatica una muestra de microorganismos en una placa diana. US 2012/0009558 A1 se refiere a un metodo y aparato para la identificacion de bacterias mediante analisis de susceptibilidad antimicrobiana (AST) y MALDI. US 2010/0209293 A1 se refiere a un metodo y aparato de esterilizacion. JP 2004 305062 A describe un metodo para preparar un amonio de acido carboxflico usando un biocatalizador usando un medidor de turbidez. WO 2012/004545 se refiere a un metodo y dispositivo para generar muestras y depositar material biologico usando una sonda de enfriamiento.
COMPENDIO DE LA INVENCION
A los efectos de resolver al menos uno de los problemas mencionados anteriormente, la presente invencion proporciona un metodo para localizar y seleccionar una colonia de microorganismos en una placa de cultivo e identificar microorganismos en dicha colonia seleccionada usando MALDI, en donde dicho metodo comprende las etapas automaticas de: localizar y seleccionar una colonia de microorganismos en una placa de cultivo; obtener una muestra de dicha colonia de microorganismos seleccionada; depositar al menos una parte de dicha muestra de dicha colonia de microorganismos seleccionada en una placa diana; y transferir dicha placa diana con dicha muestra en un aparato para realizar MALDI para la identificacion de dicha muestra de dicha colonia de microorganismos seleccionada. Parece que los problemas mencionados anteriormente en su mayona son causados por el hecho de que las etapas se llevan a cabo de forma manual y, por lo tanto, estas etapas tienden a divergencia y errores no deseados, lo que conlleva resultados incorrectos del instrumento MALDI, costos adicionales y perdida de tiempo. Al automatizar cada una de las etapas, se pueden superar estos problemas en gran medida. En el campo de la presente, se ha dado por sentado que al menos algunas de las etapas solamente podnan llevarse a cabo de forma manual, sin embargo, por el contrario, la presente invencion proporciona la posibilidad por primera vez de automatizar todas las etapas necesarias para localizar y seleccionar una colonia de microorganismos e identificar microorganismos en dicha colonia seleccionada usando MALDI.
En una realizacion de un metodo segun la invencion, la etapa de depositar al menos una parte de dicha muestra de dicha colonia de microorganismos seleccionada en una placa diana se lleva a cabo colocando directamente dicha muestra obtenida de dicha colonia de microorganismos seleccionada en dicha placa diana. Al colocar directamente una muestra en una placa diana, no hay necesidad de preparar en primer lugar una suspension de dicha muestra, omitiendo asf todo problema que pudiera surgir de la preparacion de dicha suspension. Preferiblemente, el metodo comprende la etapa automatica adicional de recubrir una gota de una solucion de matriz MALDI sobre la parte de la muestra depositada en la placa diana. La realizacion descrita en este parrafo deposita directamente la colonia seleccionada en una placa de cultivo de prueba y no forma parte de la invencion reivindicada en la presente.
En una realizacion alternativa de un metodo segun la invencion, la etapa de depositar al menos una parte de dicha muestra de dicha colonia de microorganismos seleccionada en una placa diana se lleva a cabo mediante las etapas automaticas de: transferir dicha muestra obtenida a un tubo de suspension que contiene una cantidad de un medio de suspension; preparar una suspension de muestra mediante la transferencia de al menos una parte de dicha muestra obtenida a dicho medio de suspension; obtener una gota de dicha suspension de muestra; y transferir dicha gota de suspension de muestra a dicha placa diana. Al automatizar por completo la preparacion de una suspension, la invencion proporciona un metodo preciso y reproducible de utilizar suspensiones para identificar microorganismos usando MALDI. En particular, cuando el metodo comprende ademas la etapa automatica de recubrir una gota de una solucion de matriz MALDI sobre dicha gota de suspension de muestra depositada en la placa diana, el metodo de la invencion es extremadamente adecuado para la caracterizacion de microorganismos. Pueden obtenerse los mejores resultados del analisis en una realizacion adicional de un metodo segun la invencion en el cual dicha gota de suspension de muestra depositada en la placa diana se deja secar antes de que dicha gota de solucion de matriz MALDI se recubra. Este metodo alternativo de usar una suspension, ademas, es extremadamente util en caso de que deba llevarse a cabo otra prueba o analisis en la muestra de la colonia de microorganismos. Dicho analisis adicional puede, de manera particularmente reproducible y eficaz, realizarse en una realizacion de un metodo segun la invencion en la que el metodo comprende ademas las etapas automaticas de obtener una segunda gota de dicha suspension de muestra; depositar dicha segunda gota de suspension de muestra en una placa de cultivo de prueba; y transferir dicha placa de cultivo de prueba a un aparato para realizar una prueba de susceptibilidad u otro analisis adicional. Por consiguiente, el metodo de la invencion se puede utilizar para obtener o seleccionar automaticamente una muestra que puede suministrarse en instrumentos ID/AsT disponibles que incluyen, pero no se limitan a, BACTEC™, Phoenix, MGIT, BacT/Alert.
La presente invencion tambien proporciona la posibilidad de realizar dicho analisis adicional en caso de que no se elabore una suspension de una muestra obtenida. En esta situacion, una realizacion ventajosa particular de un metodo segun la invencion comprende ademas las etapas automaticas de obtener una segunda muestra de una colonia de microorganismos de la placa de cultivo; transferir dicha segunda muestra de dicha colonia de microorganismos seleccionada; depositar al menos una parte de dicha segunda muestra de dicha colonia de microorganismos seleccionada en una placa de cultivo de prueba; y transferir dicha placa de cultivo de prueba a un aparato para realizar una prueba de susceptibilidad u otra prueba adicional. La realizacion descrita en este parrafo se refiere a depositar directamente la colonia seleccionada en una placa de cultivo de prueba y no forma parte de la invencion reivindicada en la presente.
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Dado que, para realizar caracterizacion e identificacion de microorganismos, normalmente se cultivan multiples colonias en una placa de cultivo, ademas es importante que se obtenga una muestra de una colonia de interes. Si se toman muestras de colonias no interesantes, se ve comprometido el uso eficaz del tiempo y el instrumento MALDI. De acuerdo con el conocimiento del solicitante hasta el momento, no existe un proceso o aparato automatico para distinguir colonias interesantes de colonias no interesantes. Sin embargo, el proceso para distinguir colonias puede automatizarse al menos parcialmente al mantener una certeza muy alta de distincion correcta en una realizacion de un metodo segun la invencion en la que el metodo comprende, antes de la etapa automatica de localizar y seleccionar una colonia de microorganismos en una placa de cultivo, la etapa de proporcionar una placa de cultivo que comprende una cantidad de colonias de microorganismos, obtener una imagen inicial de dicha placa de cultivo que incluye todas las colonias de microorganismos, mostrar dicha imagen inicial de dicha placa de cultivo que incluye todas las colonias de microorganismos en una pantalla, y seleccionar al menos una colonia de microorganismos en dicha imagen inicial. De esta manera, un investigador o analista puede seleccionar las colonias de interes en funcion del conocimiento y formacion exhaustivos. En una realizacion particular, a dicha placa de cultivo se le proporciona una identificacion individual que identifica dicha placa de cultivo, tal como un codigo de barras, y el metodo comprende ademas la etapa de almacenar dicha imagen inicial de dicha placa de cultivo que incluye todas las colonias, almacenar informacion con respecto a dicha al menos una colonia de microorganismos seleccionada, almacenar dicha identificacion de dicha placa de cultivo en una memoria de una computadora de control central. En una realizacion adicional, el investigador o analista puede ingresar de forma manual instrucciones de procesamiento con respecto al procesamiento al que debe someterse una colonia de microorganismos seleccionada de dicha placa de cultivo, donde dichas instrucciones de procesamiento se almacenan en dicha memoria de dicha computadora de control central para su posterior uso.
En una realizacion adicional de la invencion, el metodo comprende las etapas automaticas de ubicar dicha placa de cultivo en una plataforma para una placa de cultivo, obtener una imagen de dicha placa de cultivo ubicada en dicha plataforma, obtener la identificacion de dicha placa de cultivo, comparar la imagen obtenida por el dispositivo de imagenologfa de dicho dispositivo de herramienta de seleccion con la imagen inicial almacenada de dicha placa de cultivo para obtener informacion con respecto a la ubicacion de la colonia de microorganismos seleccionada y opcionalmente para obtener las instrucciones de procesamiento con respecto a los procesos que se realizaran en dicha colonia de microorganismos seleccionada. Al comparar la imagen de la placa de cultivo cuando se coloca en el dispositivo de herramienta de seleccion con la imagen inicial, la ubicacion de las colonias seleccionadas puede obtenerse de forma automatica, por ejemplo, mediante comparacion de imagenes computarizadas.
En una realizacion adicional de un metodo segun la invencion, el metodo comprende la etapa de preparar automaticamente una suspension de una muestra de microorganismos que comprende las etapas de:
- proporcionar una primera herramienta de seleccion y proporcionar un dispositivo de colocacion con un soporte de la herramienta de seleccion para sostener una herramienta de seleccion, donde dicho dispositivo de colocacion se dispone para colocar una herramienta de seleccion en una posicion inicial por encima de la ubicacion obtenida de la colonia de microorganismos seleccionada en la placa de cultivo y para hacer descender y elevar de forma automatica una herramienta de seleccion hacia y en sentido contrario a la placa de cultivo y para colocar una herramienta de seleccion en una posicion de transferencia, respectivamente;
- colocar dicha primera herramienta de seleccion en dicho soporte de la herramienta de seleccion del dispositivo de colocacion;
- mediante la colocacion de dicho dispositivo de colocacion de la primera herramienta de seleccion en la posicion inicial por encima de la ubicacion obtenida de la colonia de microorganismos seleccionada en la placa de cultivo, hacer descender de forma automatica la primera herramienta de seleccion hacia la placa de cultivo para que entre en contacto con el microorganismo para seleccionar una muestra de dicho microorganismo, elevar de forma automatica la primera herramienta de seleccion con dicha muestra del microorganismo en sentido contrario a la placa de cultivo hacia la posicion de transferencia;
- proporcionar un soporte del tubo de suspension para sostener un tubo de suspension;
- colocar un tubo de suspension en el soporte del tubo de suspension;
- proporcionar un dispensador del medio de suspension automatico para dispensar automaticamente un medio de suspension en un tubo de suspension sostenido por el soporte del tubo de suspension;
- al suministrar de forma automatica el dispensador automatico una cantidad inicial de medio de suspension en el tubo de suspension sostenido por el soporte del tubo de suspension;
- proporcionar un dispositivo de transferencia para transferir de forma automatica una herramienta de seleccion de la posicion de transferencia del dispositivo de colocacion a una posicion por encima de un tubo de suspension sostenido por el soporte del tubo de suspension, y para hacer descender y elevar una herramienta de seleccion hacia y en sentido contrario a un medio de suspension contenido en un tubo de suspension, y para colocar una herramienta de seleccion en una posicion de espera por encima de un tubo de suspension sostenido por el soporte del tubo de suspension, respectivamente;
- al transferir de forma automatica dicho dispositivo de transferencia dicha primera herramienta de seleccion con la muestra del microorganismo de la posicion de transferencia del dispositivo de colocacion a una posicion por encima del tubo de suspension sostenido por el soporte del tubo de suspension, hacer descender dicha primera herramienta de seleccion con la muestra del microorganismo en el medio de suspension contenido en el tubo de suspension; al hacer oscilar el dispositivo de transferencia la primera herramienta de seleccion en un movimiento
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vertical lineal durante un penodo de tiempo mientras que la primera herramienta de seleccion con la muestra de dicho microorganismo se sumerge en el medio de suspension; y despues de que ha transcurrido dicho penodo de tiempo, elevar la primera herramienta de seleccion en sentido contrario al medio de suspension contenido en el tubo de suspension hacia la posicion de espera;
- proporcionar un medidor de turbidez para realizar mediciones de la turbidez de un medio de suspension contenido en un tubo de suspension sostenido por el soporte del tubo de suspension;
- al menos despues de transcurrido el penodo de tiempo durante el cual la herramienta de seleccion oscila medir la turbidez del medio de suspension contenido en el tubo de suspension sostenido por el soporte del tubo de suspension mediante el medidor de turbidez y proporcionar un valor de medicion final que indica la turbidez medida;
- proporcionar un controlador conectado de forma comunicativa al dispositivo de colocacion, el dispositivo de transferencia, el dispensador del medio de suspension automatico y el medidor de turbidez para controlar de forma automatica el movimiento del dispositivo de colocacion, el movimiento del dispositivo de transferencia, el funcionamiento del dispensador del medio de suspension automatico y el funcionamiento del medidor de turbidez, respectivamente; mediante dicho controlador:
a) determinar si el valor de medicion final se encuentra por encima de un primer valor umbral previamente almacenado en una memoria del controlador, en caso afirmativo, realizar la etapa b); o si el valor de medicion final es identico o inferior al primer valor de umbral e identico o superior al segundo valor de umbral previamente almacenado en la memoria del controlador, donde dicho primer valor de umbral es igual o superior al segundo valor de umbral, en caso afirmativo, realizar la etapa c); o si el valor de medicion final es inferior al segundo valor de umbral, en caso afirmativo, realizar la etapa d);
b) controlar el dispensador del medio de suspension automatico para suministrar una cantidad adicional de medio de suspension en el tubo de suspension;
c) proporcionar una senal de que se puede retirar el tubo de suspension con la suspension del soporte del tubo de suspension para el procesamiento adicional; o
d) proporcionar una herramienta de seleccion adicional; colocar dicha herramienta de seleccion adicional en dicho soporte de la herramienta de seleccion del dispositivo de colocacion; al colocar dicho dispositivo de colocacion la herramienta de seleccion adicional en la posicion inicial encima de la placa de cultivo, hacer descender de forma automatica la herramienta de seleccion adicional hacia la placa de cultivo en contacto con el microorganismo para seleccionar una muestra adicional de dicho microorganismo, elevar de forma automatica la herramienta de seleccion adicional con dicha muestra del microorganismo de la placa de cultivo a la posicion de transferencia; al transferir de forma automatica el dispositivo de transferencia dicha herramienta de seleccion adicional con la muestra adicional del microorganismo de la posicion de transferencia del dispositivo de colocacion a una posicion encima del tubo de suspension sostenido por el soporte del tubo de suspension, hacer descender dicha herramienta de seleccion adicional con la muestra adicional del microorganismo en el medio de suspension contenido en el tubo de suspension; al oscilar el dispositivo de transferencia la herramienta de seleccion adicional en un movimiento vertical lineal durante un penodo de tiempo durante el cual la herramienta de seleccion adicional con la muestra adicional de dicho microorganismo se sumerge en el medio de suspension; y despues de transcurrido dicho penodo de tiempo elevar la herramienta de seleccion adicional del medio de suspension contenido en el tubo de suspension hasta la posicion de espera; al menos despues de transcurrido el penodo de tiempo durante el cual la herramienta de seleccion adicional oscila medir la turbidez del medio de suspension contenido en el tubo de suspension sostenido por el soporte del tubo de suspension mediante el medidor de turbidez y proporcionar un valor de medicion final adicional que indica la turbidez medida;
y realizar la etapa a). De esta manera, es posible preparar una suspension de una muestra de un microorganismo de manera automatica avanzada mientras que, mediante el controlador y el medidor de turbidez, es posible proporcionar un tubo de suspension que contiene un medio de suspension que contiene una cantidad de microorganismo que siempre es suficiente (y reproducible) para realizar un analisis correcto del microorganismo.
En una realizacion de un metodo para la preparacion automatica de una suspension de una muestra de microorganismos segun la invencion, el controlador se ubica de manera que la etapa de medir la turbidez del medio de suspension contenido en el tubo de suspension sostenido por el soporte del tubo de suspension mediante el medidor de turbidez se realice ademas durante el penodo de tiempo durante el cual oscila la herramienta de seleccion, en donde el medidor de turbidez se ubica para proporcionar un valor de medicion en lmea que indica la turbidez medida durante el penodo de tiempo durante el cual oscila la herramienta de seleccion al controlador. De esta manera, se puede obtener una determinacion automatica extremadamente rapida de la cantidad de microorganismo en la suspension. En particular, si durante la oscilacion el valor de medicion en lmea de la turbidez es igual o inferior al primer valor de umbral e igual o superior al segundo valor de umbral, el controlador controla el movimiento del dispositivo de transferencia, de manera que la herramienta de seleccion se eleve hasta la posicion de espera, y el controlador proporciona ademas una senal de que se puede retirar el tubo de suspension con la suspension del soporte del tubo de suspension para el procesamiento adicional. De esta manera, la oscilacion de la herramienta de seleccion se detiene cuando el medio de suspension contiene una cantidad suficiente de microorganismos, de manera que el metodo pueda realizarse de manera extremadamente eficaz en terminos de tiempo.
La disposicion mutua de la herramienta de seleccion y los sensores del medidor de turbidez es tal que durante la
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oscilacion de la herramienta de seleccion la herramienta de seleccion no obstruya la trayectoria del medidor de turbidez.
En una realizacion adicional de un metodo para la preparacion automatica de una suspension de una muestra de
microorganismos segun la invencion, el controlador se ubica de manera de controlar el medidor de la turbidez que la etapa
de medir la turbidez del medio de suspension contenido en el tubo de suspension sostenido por el soporte del tubo de suspension mediante el medidor de turbidez se inicie antes de sumergir la herramienta de seleccion en el medio de
suspension contenido en el tubo de suspension. De esta manera, por ejemplo, es posible comprobar si el medio de
suspension inicial utilizado no esta contaminado. Ademas, esto proporciona una indicacion del valor inicial de la turbidez que es util para determinar el valor de medicion final.
En una realizacion adicional de un metodo para la preparacion automatica de una suspension de una muestra de microorganismos segun la invencion, el metodo comprende ademas la etapa de proporcionar un soporte del tubo de suspension para sostener un tubo de suspension, un soporte giratorio del tubo de suspension para girar un tubo de suspension sostenido por el soporte giratorio del tubo de suspension, la etapa de ubicar el controlador de manera que se conecte de forma comunicativa al soporte giratorio del tubo de suspension para controlar la rotacion del soporte del tubo de suspension, y la etapa de ubicar el controlador de manera que el tubo de suspension gire durante la medicion de la turbidez del medio de suspension contenido en el tubo de suspension. Dicha rotacion del tubo de suspension permite que se realicen las mediciones de turbidez en diversas posiciones dentro del tubo de suspension que estan separadas de forma giratoria entre sf, lo que genera una medicion final mas correcta de la turbidez de la suspension. La rotacion como tal no es necesaria para liberar la muestra de la herramienta de seleccion, el movimiento vertical lineal de oscilacion de la herramienta de seleccion es mas que suficiente para liberar la muestra.
Si bien se puede utilizar una herramienta de seleccion adicional que es distinta de la primera herramienta de seleccion, donde el metodo se puede realizar de manera economica cuando en la etapa d) la primera herramienta de seleccion se proporciona como una herramienta de seleccion adicional; y la colocacion de dicha herramienta de seleccion adicional en dicho soporte de herramienta de seleccion del dispositivo de colocacion se realiza mediante el dispositivo de transferencia controlado por el controlador.
En una realizacion adicional de un metodo para la preparacion automatica de una suspension de una muestra de microorganismos segun la invencion, la cantidad adicional del medio de suspension se determina mediante el controlador en funcion de la cantidad inicial del medio de suspension, el valor de medicion final y el valor del primer y/o segundo valor de umbral. Esto hace posible utilizar medio de suspension adicional apenas suficiente segun sea necesario y, por lo tanto, en esta realizacion, se puede utilizar la menor cantidad posible de medio de suspension.
Dado que, de acuerdo con el metodo inventivo para la preparacion automatica de una suspension de una muestra de microorganismos, la herramienta de seleccion oscila en un movimiento lineal vertical con respecto al tubo de suspension, la dimension del tubo de suspension puede ser relativamente pequena. Esto hace posible que, en una realizacion de un metodo segun la invencion, el controlador se puede ubicar para controlar el dispensador del medio de suspension automatico, de manera que la cantidad inicial suministrada sea de aproximadamente 0,5 - 2 ml, preferiblemente aproximadamente 1 ml. Dicha cantidad relativamente pequena del medio de suspension es suficiente para la preparacion de una suspension correcta de una muestra de microorganismos. En dicho metodo para la preparacion automatica de una suspension de una muestra de microorganismos, es posible utilizar como tubo de suspension un tubo de suspension con una seccion transversal sustancialmente circular con un diametro de aproximadamente 6 a aproximadamente 12 mm, preferiblemente aproximadamente 10 mm, que es relativamente pequeno en comparacion con los tubos tradicionales que tienen un diametro de aproximadamente l6 mm. Con dicho tubo de suspension relativamente pequeno, se obtiene una liberacion correcta de la muestra de la herramienta de seleccion cuando el controlador se ubica para controlar la oscilacion del dispositivo de transferencia, de manera que la herramienta de seleccion oscile a una frecuencia de entre aproximadamente 5 Hz a aproximadamente 120 Hz, preferiblemente aproximadamente 30 Hz a aproximadamente 90 Hz, mas preferiblemente aproximadamente 50 Hz. Preferiblemente, el controlador se dispone para controlar la oscilacion del dispositivo de transferencia, de manera que la herramienta de seleccion oscile con una amplitud de aproximadamente 0.5 mm a aproximadamente 4 mm, preferiblemente aproximadamente 2 mm a aproximadamente 3 mm, lo que genera una liberacion optima de la muestra de la herramienta de seleccion. En caso de que el controlador se disponga para controlar la oscilacion del dispositivo de transferencia de manera que el penodo de tiempo durante el cual la herramienta de seleccion oscila sea de aproximadamente 3 segundos hasta aproximadamente 10 segundos, preferiblemente aproximadamente 6 segundos, parece que practicamente en todos los casos se puede liberar toda la muestra de la herramienta de seleccion.
Los valores para la frecuencia, amplitud y duracion dependen de las propiedades del microorganismo espedfico y, por ejemplo, su adherencia a la herramienta de seleccion. A partir de la inspeccion mediante imagenologfa, se puede deducir si la muestra se ha liberado en su mayor parte o no de la herramienta de seleccion utilizando en primer lugar los valores preferidos mencionados anteriormente. Si todavfa queda algo de material en la herramienta de seleccion, se repite la oscilacion vertical dentro de los intervalos determinados en distintos valores.
Se puede obtener un metodo automatico para la preparacion de una suspension de una muestra de microorganismos segun la invencion cuando el metodo comprende ademas la etapa de proporcionar un dispositivo de colocacion y retiro automatico de la placa de cultivo para colocar y retirar de forma automatica una placa de cultivo que comprende dicho
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microorganismo en y sobre la plataforma, respectivamente. Luego, el controlador se dispone de manera que se conecte de forma comunicativa al dispositivo de colocacion y retiro automatico de la placa de cultivo para controlar el funcionamiento del dispositivo de colocacion y retiro automatico de la placa de cultivo. De esta manera, la colocacion de una placa de cultivo que comprende dicho microorganismo en la plataforma se puede realizar de forma automatica bajo el control del controlador. Una automatizacion adicional se realiza al proporcionar un dispositivo de colocacion y retiro automatico del tubo de suspension para colocar y retirar de forma automatica un tubo de suspension en y del soporte del tubo de suspension, respectivamente. Luego, el controlador se dispone de manera que se conecte de forma comunicativa al dispositivo de colocacion y retiro automatico del tubo de suspension para controlar el funcionamiento del dispositivo de colocacion y retiro automatico del tubo de suspension, de manera que la colocacion de un tubo de suspension en el soporte del tubo de suspension se pueda realizar de forma automatica bajo el control del controlador. De manera ventajosa, el controlador se dispone de manera que se permita retirar de forma automatica una placa de cultivo de la plataforma mediante el dispositivo de colocacion y retiro automatico de la placa de cultivo solamente despues de que se haya proporcionado la senal de que se puede retirar el tubo de suspension con la suspension del soporte del tubo de suspension para el procesamiento adicional. Ademas, es preferible que el controlador se disponga de manera que se retire de forma automatica un tubo de suspension del soporte del tubo de suspension mediante el dispositivo de colocacion y retiro automatico del tubo de suspension solamente despues de que se haya proporcionado la senal de que se puede retirar el tubo de suspension con la suspension del soporte del tubo de suspension para el procesamiento adicional.
En una realizacion adicional de un metodo segun la invencion, el metodo comprende la etapa de proporcionar una marca de identificacion en el tubo de suspension, y la etapa de almacenar la marca de identificacion de dicho tubo de suspension junto con las propiedades de la suspension con un enlace con la identidad de la placa de cultivo de la que se obtuvo la colonia de microorganismos seleccionada en la memoria de dicha computadora de control central, el metodo no solamente puede funcionar automaticamente de manera extremadamente eficaz sino que tambien se mejora el procesamiento correcto y rapido de los resultados del analisis.
En una realizacion adicional de un metodo segun la invencion, en donde las instrucciones de procesamiento para una colonia de microorganismos seleccionada indican colocar directamente dicha muestra obtenida de dicha colonia de microorganismos seleccionada en dicha placa diana, donde el metodo comprende las siguientes etapas automaticas: proporcionar una primera herramienta de seleccion y proporcionar un dispositivo de colocacion con un soporte de la herramienta de seleccion para sostener una herramienta de seleccion, dicho dispositivo de colocacion se dispone para colocar una herramienta de seleccion en una posicion inicial por encima de la ubicacion obtenida de la colonia de microorganismos seleccionada en la placa de cultivo y para hacer descender y elevar de forma automatica una herramienta de seleccion hacia y en sentido contrario a la placa de cultivo y para colocar una herramienta de seleccion en una posicion de transferencia, respectivamente; colocar dicha primera herramienta de seleccion en dicho soporte de la herramienta de seleccion del dispositivo de colocacion; al colocar dicho dispositivo de colocacion la primera herramienta de seleccion en la posicion inicial por encima de la ubicacion obtenida de la colonia de microorganismos seleccionada en la placa de cultivo, hacer descender de forma automatica la primera herramienta de seleccion hacia la placa de cultivo en contacto con el microorganismo para seleccionar una muestra de dicho microorganismo, elevar de forma automatica la primera herramienta de seleccion con dicha muestra del microorganismo en sentido contrario a la placa de cultivo hasta la posicion de transferencia; proporcionar un soporte de la placa diana para sostener una placa diana, donde dicha placa diana tiene multiples puntos de deposito; colocar una placa diana en el soporte de la placa diana; proporcionar un dispositivo de transferencia para transferir de forma automatica la herramienta de seleccion de la posicion de transferencia del dispositivo de colocacion a una posicion por encima de uno de los puntos de deposito de la placa diana, y para hacer descender la herramienta de seleccion de manera que la muestra de la colonia de microorganismos presente en la herramienta de seleccion entre en contacto con la placa diana, mover la herramienta de seleccion en un plano paralelo al plano de la placa diana de manera que la muestra de la colonia de microorganismos se deposite en el punto de deposito, en particular, cubriendo como maximo aproximadamente la mitad de uno de los puntos de deposito mencionados de la placa diana; y elevar dicha herramienta de seleccion de la placa diana. Al realizar el deposito de la muestra de forma automatica, se puede obtener un deposito mas reproducible y preciso de la muestra en el punto de deposito que al depositar una muestra de forma manual. Ademas, parece que cuando una muestra cubre como maximo aproximadamente la mitad de uno de los puntos de deposito mencionados de la placa diana, los resultados del analisis obtenidos del instrumento MALDI de la parte del punto de deposito que inicialmente no estaba cubierto con la muestra son, sorprendentemente, extremadamente mas precisos que los resultados del analisis obtenidos del instrumento MALDI de la parte del punto de deposito que inicialmente estaba cubierto con la muestra. Si bien los inventores no desean limitarse a una teona en particular, se cree que la cristalizacion que tiene lugar despues de que una gota de material de matriz se recubre sobre la muestra que cubre parte del punto de deposito garantiza que tambien la parte del punto de deposito que no esta cubierta contenga una cantidad de material de muestra, y que esta cantidad sea extremadamente adecuada para proporcionar excelentes resultados de analisis. La realizacion descrita en este parrafo se refiere a depositar directamente la muestra en la placa diana y no forma parte de la invencion reivindicada en la presente.
En una realizacion alternativa de un metodo segun la invencion, en donde en caso de que las instrucciones de procesamiento para una colonia de microorganismos seleccionada indiquen obtener una gota de dicha suspension de muestra y transferir dicha gota a dicha placa diana, el metodo comprende las siguientes etapas automaticas: proporcionar una herramienta de pipeteado en dicho dispositivo de herramienta de seleccion y proporcionar un dispositivo de colocacion con un soporte de la herramienta de pipeteado para sostener dicha herramienta de pipeteado, donde dicho
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dispositivo de colocacion se dispone para colocar dicha herramienta de pipeteado en una posicion inicial encima del tubo de suspension y para hacer descender y elevar de forma automatica la herramienta de pipeteado hacia el interior y exterior de la suspension y para colocar la herramienta de pipeteado en una posicion de transferencia, respectivamente; colocar dicha herramienta de pipeteado en dicho soporte de la herramienta de pipeteado del dispositivo de colocacion; al colocar dicho dispositivo de colocacion la herramienta de pipeteado en la posicion inicial encima del tubo de suspension, hacer descender la herramienta de pipeteado hacia el interior de la suspension en dicho tubo de suspension, hacer funcionar la herramienta de pipeteado para seleccionar una cantidad de suspension, elevar la herramienta de pipeteado con dicha cantidad de suspension hasta la posicion de transferencia; donde dicha herramienta de pipeteado comprende una camara presurizable encerrada por una valvula controlada para contener la cantidad de medio de suspension; proporcionar un soporte de la placa diana para sostener una placa diana, donde dicha placa diana tiene multiples puntos de deposito; colocar una placa diana en el soporte de la placa diana; proporcionar un dispositivo de transferencia para transferir de forma automatica la herramienta de pipeteado de la posicion de transferencia del dispositivo de colocacion a una posicion encima de uno de los puntos de deposito de la placa diana, y para hacer descender la herramienta de pipeteado hasta una distancia predefinida encima de la placa diana, presurizar la camara a una presion en un intervalo de aproximadamente 0,5 bar a 1,1 bar, y abrir la valvula durante un penodo tal que se deposite una gota de suspension con un volumen en un intervalo de aproximadamente 0,5 a 3,0 ml en el punto de deposito, en particular, cubriendo como maximo aproximadamente la mitad de uno de los puntos de deposito mencionados de la placa diana; y elevar dicha herramienta de pipeteado de la placa diana. Dependiendo de las propiedades del microorganismo espedfico, por ejemplo, su pegajosidad, el valor de presion y el momento de apertura pueden ajustarse para obtener una pequena gota de suspension que puede prepararse de forma reproducible y que, como resultado del proceso automatico, puede depositarse de forma precisa en la placa diana.
A los efectos de evitar la contaminacion cruzada, en una realizacion preferida de un metodo segun la invencion, la forma de la herramienta de pipeteado, en particular, la punta dispensadora de esta, es tal que el deposito de la gota de suspension en la placa diana tiene lugar sin salpicaduras. Parece que, dependiendo del tipo de microorganismo utilizado, y particularmente el espesor de este, ademas de elegir una presion correcta en el intervalo mencionado anteriormente y el momento de apertura de la valvula en el intervalo mencionado anteriormente, una forma adecuada de la herramienta de pipeteado garantiza que se pueda depositar una gota de suspension sin salpicaduras.
En una realizacion adicional de un metodo segun la invencion en la cual el metodo comprende la etapa de proporcionar una marca de identificacion en la placa diana y, opcionalmente, proporcionar una marca de identificacion en los puntos de deposito de dicha placa diana, y la etapa de almacenar la marca de identificacion de dicha placa diana y los puntos de deposito junto con las propiedades de la suspension con un enlace con la identidad de la placa de cultivo de la que se obtuvo la colonia de microorganismos seleccionada en la memoria de dicha computadora de control central, el metodo no solamente puede funcionar automaticamente de manera extremadamente eficaz sino que tambien se mejora el procesamiento correcto y rapido de los resultados del analisis obtenidos.
La presente invencion se refiere ademas a un metodo para la preparacion automatica de una suspension de una muestra de microorganismos, donde dicho metodo comprende las etapas de:
- proporcionar una plataforma para una placa de cultivo que comprende dicho microorganismo;
- colocar una placa de cultivo que comprende dicho microorganismo en la plataforma;
- proporcionar una primera herramienta de seleccion y proporcionar un dispositivo de colocacion con un soporte de la herramienta de seleccion para sostener una herramienta de seleccion, donde dicho dispositivo de colocacion se dispone para colocar una herramienta de seleccion en una posicion inicial por encima de la placa de cultivo y para hacer descender y elevar de forma automatica una herramienta de seleccion hacia y en sentido contrario a la placa de cultivo y para colocar una herramienta de seleccion en una posicion de transferencia, respectivamente;
- colocar dicha primera herramienta de seleccion en dicho soporte de la herramienta de seleccion del dispositivo de colocacion;
- mediante la colocacion de dicho dispositivo de colocacion de la primera herramienta de seleccion en la posicion inicial por encima de la placa de cultivo, hacer descender de forma automatica la primera herramienta de seleccion hacia la placa de cultivo para que entre en contacto con el microorganismo para seleccionar una muestra de dicho microorganismo, elevar de forma automatica la primera herramienta de seleccion con dicha muestra del microorganismo en sentido contrario a la placa de cultivo hacia la posicion de transferencia;
- proporcionar un soporte del tubo de suspension para sostener un tubo de suspension;
- colocar un tubo de suspension en el soporte del tubo de suspension;
- proporcionar un dispensador del medio de suspension automatico para dispensar automaticamente un medio de suspension en un tubo de suspension sostenido por el soporte del tubo de suspension;
- al suministrar de forma automatica el dispensador automatico una cantidad inicial de medio de suspension en el tubo de suspension sostenido por el soporte del tubo de suspension;
- proporcionar un dispositivo de transferencia para transferir de forma automatica una herramienta de seleccion de la posicion de transferencia del dispositivo de colocacion a una posicion por encima de un tubo de suspension sostenido por el soporte del tubo de suspension, y para hacer descender y elevar una herramienta de seleccion hacia y en sentido contrario a un medio de suspension contenido en un tubo de suspension, y para colocar una herramienta de seleccion en una posicion de espera por encima de un tubo de suspension sostenido por el soporte del tubo de suspension, respectivamente;
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- al transferir de forma automatica dicho dispositivo de transferencia dicha primera herramienta de seleccion con la muestra del microorganismo de la posicion de transferencia del dispositivo de colocacion a una posicion por encima del tubo de suspension sostenido por el soporte del tubo de suspension, hacer descender dicha primera herramienta de seleccion con la muestra del microorganismo en el medio de suspension contenido en el tubo de suspension; al hacer oscilar el dispositivo de transferencia la primera herramienta de seleccion en un movimiento vertical lineal durante un penodo de tiempo mientras que la primera herramienta de seleccion con la muestra de dicho microorganismo se sumerge en el medio de suspension; y despues de que ha transcurrido dicho penodo de tiempo, elevar la primera herramienta de seleccion en sentido contrario al medio de suspension contenido en el tubo de suspension hacia la posicion de espera;
- proporcionar un medidor de turbidez para realizar mediciones de la turbidez de un medio de suspension contenido en un tubo de suspension sostenido por el soporte del tubo de suspension;
- al menos despues de transcurrido el penodo de tiempo durante el cual la herramienta de seleccion oscila medir la turbidez del medio de suspension contenido en el tubo de suspension sostenido por el soporte del tubo de suspension mediante el medidor de turbidez y proporcionar un valor de medicion final que indica la turbidez medida;
- proporcionar un controlador conectado de forma comunicativa al dispositivo de colocacion, el dispositivo de transferencia, el dispensador del medio de suspension automatico y el medidor de turbidez para controlar de forma automatica el movimiento del dispositivo de colocacion, el movimiento del dispositivo de transferencia, el funcionamiento del dispensador del medio de suspension automatico y el funcionamiento del medidor de turbidez, respectivamente;
- mediante dicho controlador:
a) determinar si el valor de medicion final se encuentra por encima de un primer valor umbral previamente almacenado en una memoria del controlador, en caso afirmativo, realizar la etapa b); o si el valor de medicion final es identico o inferior al primer valor de umbral e identico o superior al segundo valor de umbral previamente almacenado en la memoria del controlador, donde dicho primer valor de umbral es igual o superior al segundo valor de umbral, en caso afirmativo, realizar la etapa c); o si el valor de medicion final es inferior al segundo valor de umbral, en caso afirmativo, realizar la etapa d);
b) controlar el dispensador del medio de suspension automatico para suministrar una cantidad adicional de medio de suspension en el tubo de suspension;
c) proporcionar una senal de que se puede retirar el tubo de suspension con la suspension del soporte del tubo de suspension para el procesamiento adicional; o
d) proporcionar una herramienta de seleccion adicional; colocar dicha herramienta de seleccion adicional en dicho soporte de la herramienta de seleccion del dispositivo de colocacion; al colocar dicho dispositivo de colocacion la herramienta de seleccion adicional en la posicion inicial encima de la placa de cultivo, hacer descender de forma automatica la herramienta de seleccion adicional hacia la placa de cultivo en contacto con el microorganismo para seleccionar una muestra adicional de dicho microorganismo, elevar de forma automatica la herramienta de seleccion adicional con dicha muestra del microorganismo de la placa de cultivo a la posicion de transferencia; al transferir de forma automatica el dispositivo de transferencia dicha herramienta de seleccion adicional con la muestra adicional del microorganismo de la posicion de transferencia del dispositivo de colocacion a una posicion encima del tubo de suspension sostenido por el soporte del tubo de suspension, hacer descender dicha herramienta de seleccion adicional con la muestra adicional del microorganismo en el medio de suspension contenido en el tubo de suspension; al oscilar el dispositivo de transferencia la herramienta de seleccion adicional en un movimiento vertical lineal durante un penodo de tiempo durante el cual la herramienta de seleccion adicional con la muestra adicional de dicho microorganismo se sumerge en el medio de suspension; y despues de transcurrido dicho penodo de tiempo elevar la herramienta de seleccion adicional del medio de suspension contenido en el tubo de suspension hasta la posicion de espera; al menos despues de transcurrido el penodo de tiempo durante el cual la herramienta de seleccion adicional oscila medir la turbidez del medio de suspension contenido en el tubo de suspension sostenido por el soporte del tubo de suspension mediante el medidor de turbidez y proporcionar un valor de medicion final adicional que indica la turbidez medida; y realizar la etapa a). De esta manera, es posible preparar una suspension de una muestra de un microorganismo de manera automatica avanzada mientras que, mediante el controlador y el medidor de turbidez, es posible proporcionar un tubo de suspension que contiene un medio de suspension que contiene una cantidad de microorganismo que siempre es suficiente (y reproducible) para realizar un analisis correcto del microorganismo.
En una realizacion de un metodo para la preparacion automatica de una suspension de una muestra de microorganismos segun la invencion, el controlador se ubica de manera que la etapa de medir la turbidez del medio de suspension contenido en el tubo de suspension sostenido por el soporte del tubo de suspension mediante el medidor de turbidez se realice ademas durante el penodo de tiempo durante el cual oscila la herramienta de seleccion, en donde el medidor de turbidez se ubica para proporcionar un valor de medicion en lmea que indica la turbidez medida durante el penodo de tiempo durante el cual oscila la herramienta de seleccion al controlador. De esta manera, se puede obtener una determinacion automatica extremadamente rapida de la cantidad de microorganismo en la suspension. En particular, si durante la oscilacion el valor de medicion en lmea de la turbidez es igual o inferior al primer valor de umbral e igual o superior al segundo valor de umbral, el controlador controla el movimiento del dispositivo de transferencia, de manera que la herramienta de seleccion se eleve hasta la posicion de espera, y el controlador proporciona ademas una senal de que se puede retirar el tubo de suspension con la suspension del soporte del tubo de suspension para el procesamiento
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adicional.
En una realizacion adicional de un metodo para la preparacion automatica de una suspension de una muestra de microorganismos segun la invencion, el controlador se ubica de manera de controlar el medidor de la turbidez que la etapa de medir la turbidez del medio de suspension contenido en el tubo de suspension sostenido por el soporte del tubo de suspension mediante el medidor de turbidez se inicie antes de sumergir la herramienta de seleccion en el medio de suspension contenido en el tubo de suspension. De esta manera, por ejemplo, es posible comprobar si el medio de suspension inicial utilizado no esta contaminado. Esto se puede realizar, por ejemplo, al realizar una medicion de la turbidez de un tubo de suspension y comparar el valor obtenido con un valor predeterminado que indica que la suspension no esta contaminada. En caso de que la diferencia supere un valor de umbral, entonces, por ejemplo, se puede proporcionar una senal de advertencia que indica que la suspension esta contaminada.
En una realizacion adicional de un metodo para la preparacion automatica de una suspension de una muestra de microorganismos segun la invencion, el metodo comprende ademas la etapa de proporcionar un soporte del tubo de suspension para sostener un tubo de suspension, un soporte giratorio del tubo de suspension para girar un tubo de suspension sostenido por el soporte giratorio del tubo de suspension, la etapa de ubicar el controlador de manera que se conecte de forma comunicativa al soporte giratorio del tubo de suspension para controlar la rotacion del soporte del tubo de suspension, y la etapa de ubicar el controlador de manera que el tubo de suspension gire durante la medicion de la turbidez del medio de suspension contenido en el tubo de suspension. Dicha rotacion del tubo de suspension permite que se realicen las mediciones de turbidez en diversas posiciones dentro del tubo de suspension que estan separadas de forma giratoria entre sf, lo que genera una medicion final mas correcta de la turbidez de la suspension. La rotacion como tal no es necesaria para liberar la muestra de la herramienta de seleccion, el movimiento vertical lineal de oscilacion de la herramienta de seleccion es mas que suficiente para liberar la muestra.
Si bien se puede utilizar una herramienta de seleccion adicional que es distinta de la primera herramienta de seleccion, donde el metodo se puede realizar de manera economica cuando en la etapa d) la primera herramienta de seleccion se proporciona como una herramienta de seleccion adicional; y la colocacion de dicha herramienta de seleccion adicional en dicho soporte de herramienta de seleccion del dispositivo de colocacion se realiza mediante el dispositivo de transferencia controlado por el controlador.
En una realizacion adicional de un metodo para la preparacion automatica de una suspension de una muestra de microorganismos segun la invencion, la cantidad adicional del medio de suspension se determina mediante el controlador en funcion de la cantidad inicial del medio de suspension, el valor de medicion final y el valor del primer y/o segundo valor de umbral. Esto hace posible utilizar medio de suspension adicional apenas suficiente segun sea necesario y, por lo tanto, en esta realizacion, se puede utilizar la menor cantidad posible de medio de suspension. En caso de que el valor medido indique que la cantidad de microorganismos es demasiado baja, el sistema de control controla la herramienta de seleccion para obtener una muestra adicional de la misma colonia seleccionada, y se repite el proceso.
Dado que, de acuerdo con el metodo inventivo para la preparacion automatica de una suspension de una muestra de microorganismos, la herramienta de seleccion oscila en un movimiento lineal vertical solamente, la dimension del tubo de suspension puede ser relativamente pequena. Esto hace posible que, en una realizacion de un metodo segun la invencion, el controlador se puede ubicar para controlar el dispensador del medio de suspension automatico, de manera que la cantidad inicial suministrada sea de aproximadamente 0,5 - 2 ml, preferiblemente aproximadamente 1 ml. Dicha cantidad relativamente pequena del medio de suspension es suficiente para la preparacion de una suspension correcta de una muestra de microorganismos. En dicho metodo para la preparacion automatica de una suspension de una muestra de microorganismos, es posible utilizar como tubo de suspension un tubo de suspension con una seccion transversal sustancialmente circular con un diametro de aproximadamente 6 a aproximadamente 12 mm, preferiblemente aproximadamente 10 mm, que es relativamente pequeno en comparacion con los tubos tradicionales que tienen un diametro de aproximadamente 16 mm. Con dicho tubo de suspension relativamente pequeno, se obtiene una liberacion correcta de la muestra de la herramienta de seleccion cuando el controlador se ubica para controlar la oscilacion del dispositivo de transferencia, de manera que la herramienta de seleccion oscile a una frecuencia de entre aproximadamente 5 Hz a aproximadamente 120 Hz, preferiblemente aproximadamente 30 Hz a aproximadamente 90 Hz, mas preferiblemente aproximadamente 50 Hz. Preferiblemente, el controlador se dispone para controlar la oscilacion del dispositivo de transferencia, de manera que la herramienta de seleccion oscile con una amplitud de aproximadamente 0.5 mm a aproximadamente 4 mm, preferiblemente aproximadamente 2 mm a aproximadamente 3 mm, lo que genera una liberacion optima de la muestra de la herramienta de seleccion. En caso de que el controlador se disponga para controlar la oscilacion del dispositivo de transferencia de manera que el penodo de tiempo durante el cual la herramienta de seleccion oscila sea de aproximadamente 3 segundos hasta aproximadamente 10 segundos, preferiblemente aproximadamente 6 segundos, parece que practicamente en todos los casos se puede liberar toda la muestra de la herramienta de seleccion.
La invencion se refiere ademas a un aparato para la preparacion automatica de una suspension de una muestra de microorganismos para realizar un metodo para localizar y seleccionar una colonia de microorganismos en una placa de cultivo e identificar los microorganismos en dicha colonia seleccionada usando MALDI o para realizar una etapa de un metodo para la preparacion automatica de una suspension de una muestra de microorganismos de acuerdo con los metodos de la invencion, donde dicho aparato comprende:
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- una plataforma para una placa de cultivo que comprende dicho microorganismo;
- una primera herramienta de seleccion y una adicional y un dispositivo de colocacion con un soporte de la herramienta de seleccion para sostener una herramienta de seleccion, donde dicho dispositivo de colocacion se dispone para colocar una herramienta de seleccion en una posicion inicial por encima de la placa de cultivo y para hacer descender y elevar de forma automatica una herramienta de seleccion hacia y en sentido contrario a la placa de cultivo y para colocar una herramienta de seleccion en una posicion de transferencia, respectivamente;
- un soporte del tubo de suspension para sostener un tubo de suspension;
- un dispensador del medio de suspension automatico para dispensar automaticamente un medio de suspension en un tubo de suspension sostenido por el soporte del tubo de suspension;
- un dispositivo de transferencia para transferir de forma automatica una herramienta de seleccion de la posicion de transferencia del dispositivo de colocacion a una posicion por encima de un tubo de suspension sostenido por el soporte del tubo de suspension, y para hacer descender y elevar una herramienta de seleccion hacia y en sentido contrario a un medio de suspension contenido en un tubo de suspension, y para colocar una herramienta de seleccion en una posicion de espera por encima de un tubo de suspension sostenido por el soporte del tubo de suspension, respectivamente, donde dicho dispositivo de transferencia se dispone ademas para hacer oscilar una herramienta de seleccion en un movimiento vertical lineal durante un penodo de tiempo;
- un medidor de turbidez para realizar mediciones de la turbidez de un medio de suspension contenido en un tubo de suspension sostenido por el soporte del tubo de suspension y para proporcionar un valor de medicion final que indique la turbidez medida;
- un controlador conectado de forma comunicativa al dispositivo de colocacion, el dispositivo de transferencia, el dispensador del medio de suspension automatico y el medidor de turbidez para controlar de forma automatica el movimiento del dispositivo de colocacion, el movimiento del dispositivo de transferencia, el funcionamiento del dispensador del medio de suspension automatico y el funcionamiento del medidor de turbidez, respectivamente;
- donde dicho controlador se dispone para:
a) determinar si el valor de medicion final se encuentra por encima de un primer valor umbral previamente almacenado en una memoria del controlador, en caso afirmativo, dicho controlador se dispone para realizar la etapa b); o si el valor de medicion final es identico o inferior al primer valor de umbral e identico o superior al segundo valor de umbral previamente almacenado en la memoria del controlador, donde dicho primer valor de umbral es igual o superior al segundo valor de umbral, en caso afirmativo, dicho controlador se dispone para realizar la etapa c); o si el valor de medicion final es inferior al segundo valor de umbral, en caso afirmativo, dicho controlador se dispone para realizar la etapa d);
b) controlar el dispensador del medio de suspension automatico para suministrar una cantidad adicional de medio de suspension en el tubo de suspension;
c) proporcionar una senal de que se puede retirar el tubo de suspension con la suspension del soporte del tubo de suspension para el procesamiento adicional; o
d) colocar dicha herramienta de seleccion adicional en dicho soporte de la herramienta de seleccion del dispositivo de colocacion; al colocar dicho dispositivo de colocacion la herramienta de seleccion adicional en la posicion inicial encima de la placa de cultivo, hacer descender de forma automatica la herramienta de seleccion adicional hacia la placa de cultivo en contacto con el microorganismo para seleccionar una muestra adicional de dicho microorganismo, elevar de forma automatica la herramienta de seleccion adicional con dicha muestra del microorganismo de la placa de cultivo a la posicion de transferencia; al transferir de forma automatica el dispositivo de transferencia dicha herramienta de seleccion adicional con la muestra adicional del microorganismo de la posicion de transferencia del dispositivo de colocacion a una posicion encima del tubo de suspension sostenido por el soporte del tubo de suspension, hacer descender dicha herramienta de seleccion adicional con la muestra adicional del microorganismo en el medio de suspension contenido en el tubo de suspension; al oscilar el dispositivo de transferencia la herramienta de seleccion adicional en un movimiento vertical lineal durante un penodo de tiempo durante el cual la herramienta de seleccion adicional con la muestra adicional de dicho microorganismo se sumerge en el medio de suspension; y despues de transcurrido dicho penodo de tiempo elevar la herramienta de seleccion adicional del medio de suspension contenido en el tubo de suspension hasta la posicion de espera; al menos despues de transcurrido el penodo de tiempo durante el cual la herramienta de seleccion adicional oscila medir la turbidez del medio de suspension contenido en el tubo de suspension sostenido por el soporte del tubo de suspension mediante el medidor de turbidez y proporcionar un valor de medicion final adicional que indica la turbidez medida; y realizar la etapa a).
En una realizacion adicional de un aparato segun la invencion, el controlador se dispone de manera de controlar el medidor de la turbidez, de manera que la medicion de la turbidez del medio de suspension contenido en el tubo de suspension sostenido por el soporte del tubo de suspension mediante el medidor de turbidez se inicie antes de sumergir la herramienta de seleccion en el medio de suspension contenido en el tubo de suspension.
En una realizacion adicional de un aparato segun la invencion, el soporte del tubo de suspension para sostener un tubo de suspension es un soporte giratorio del tubo de suspension para girar un tubo de suspension sostenido por el soporte giratorio del tubo de suspension, donde el controlador se dispone para que se conecte de forma comunicativa al soporte giratorio del tubo de suspension para controlar la rotacion del soporte del tubo de suspension, y donde dicho controlador
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se dispone para que el tubo de suspension gire durante la medicion de la turbidez del medio de suspension contenido en el tubo de suspension.
En una realizacion ventajosa de un aparato segun la invencion en la etapa d) se proporciona la primera etapa de seleccion como una herramienta de seleccion adicional; y dicho controlador se dispone para controlar el dispositivo de transferencia para colocar dicha herramienta de seleccion adicional en dicho soporte de la herramienta de seleccion del dispositivo de colocacion.
Preferiblemente, el controlador se dispone para determinar la cantidad adicional de medio de suspension en funcion de la cantidad inicial de medio de suspension, el valor de medicion final y el valor del primer y/o segundo valor de umbral. En particular, el controlador se dispone para controlar el dispensador del medio de suspension automatico de manera que la cantidad inicial suministrada sea de aproximadamente 0,5 - 2 ml, preferiblemente aproximadamente 1 ml. En una realizacion adicional de un aparato segun la invencion, el controlador se dispone para controlar la oscilacion del dispositivo de transferencia de manera que la herramienta de seleccion oscile a una frecuencia de entre aproximadamente 5 Hz y aproximadamente 120 Hz, preferiblemente aproximadamente 30 Hz y aproximadamente 90Hz, mas preferiblemente aproximadamente 50 Hz. Ademas, el controlador puede estar dispuesto para controlar la oscilacion del dispositivo de transferencia de manera que la herramienta de seleccion oscile con una amplitud de aproximadamente 0.5 mm a aproximadamente 4 mm, preferiblemente aproximadamente 2 mm a aproximadamente 3 mm, y para controlar la oscilacion del dispositivo de transferencia de manera que el penodo de tiempo durante el cual la herramienta de seleccion oscila sea de aproximadamente 3 segundos a aproximadamente 10 segundos, preferiblemente aproximadamente 6 segundos.
En un dispositivo inventivo para la preparacion automatica de una suspension de una muestra de microorganismos, el tubo de suspension puede tener una seccion transversal sustancialmente circular con un diametro de aproximadamente 6 a aproximadamente 12 mm, preferiblemente aproximadamente 10 mm.
Un dispositivo completamente automatico segun la invencion cuando el aparato comprende un dispositivo de colocacion y retiro automatico de la placa de cultivo para colocar y retirar de forma automatica una placa de cultivo que comprende dicho microorganismo en y desde la plataforma, respectivamente, donde dicho controlador se dispone para que se conecte de forma comunicativa al dispositivo de colocacion y retiro automatico de la placa de cultivo para controlar el funcionamiento del dispositivo de colocacion y retiro automatico de la placa de cultivo, y para colocar de forma automatica una placa de cultivo que comprende dicho microorganismo en la plataforma, y cuando el aparato comprende un dispositivo de colocacion y retiro automatico del tubo de suspension para colocar y retirar de forma automatica un tubo de suspension en y desde el soporte del tubo de suspension, respectivamente, donde dicho controlador se dispone para que se conecte de forma comunicativa al dispositivo de colocacion y retiro automatico del tubo de suspension para controlar el funcionamiento del dispositivo de colocacion y retiro automatico del tubo de suspension, y para colocar de forma automatica un tubo de suspension en el soporte del tubo de suspension. En este caso, es preferible que el controlador se disponga de manera que se permita retirar de forma automatica una placa de cultivo de la plataforma mediante el dispositivo de colocacion y retiro automatico de la placa de cultivo solamente despues de que se haya proporcionado la senal de que se puede retirar el tubo de suspension con la suspension del soporte del tubo de suspension para el procesamiento adicional. Ademas, es preferible que el controlador se disponga para retirar de forma automatica un tubo de suspension del soporte del tubo de suspension mediante el dispositivo de colocacion y retiro automatico del tubo de suspension solamente despues de que se haya proporcionado la senal de que se puede retirar el tubo de suspension con la suspension del soporte del tubo de suspension para el procesamiento adicional.
La invencion se refiere ademas a un metodo para depositar de forma automatica una muestra de una colonia de microorganismos en un punto de deposito de una placa diana para MALDI, en donde el metodo comprende la etapa de depositar la muestra de la colonia de microorganismos en el punto de deposito de manera que la muestra cubra como maximo aproximadamente la mitad de uno de los puntos de deposito mencionados de la placa diana. Se ha descubierto que cuando la muestra cubre como maximo aproximadamente la mitad de uno de los puntos de deposito mencionados de la placa diana, los resultados del analisis obtenidos del instrumento MALDI de la parte del punto de deposito que inicialmente no estaba cubierto con la muestra son, sorprendentemente, extremadamente mas precisos que los resultados del analisis obtenidos del instrumento MALDI de la parte del punto de deposito que inicialmente estaba cubierto con la muestra. Se supone que la cristalizacion que tiene lugar despues de que una gota de material de matriz se recubre sobre la muestra que cubre parte del punto de deposito garantiza que tambien la parte del punto de deposito que no esta cubierta contenga una cantidad de material de muestra, y que esta cantidad sea extremadamente adecuada para proporcionar excelentes resultados de analisis. Los procesos ffsicos o qmmicos que causan este efecto, actualmente, no son claros, pero tal vez pueda lograrse una mayor claridad cuando se conozcan los procesos fundamentales subyacentes de MALDI. El metodo descrito en este parrafo incluye las etapas en las cuales se deposita directamente una colonia de microorganismos seleccionada en un punto de deposito de una placa diana para MALDI y no forma parte de la invencion reivindicada en la presente.
En una realizacion de dicho metodo, la muestra de una colonia de microorganismos se encuentra en forma de una suspension, en donde la muestra de la suspension se deposita en un punto de deposito de la placa diana en forma de una gota con un volumen en un intervalo de aproximadamente 0,5 a 3,0 ml.
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La invencion se refiere ademas a un metodo para depositar de forma automatica una gota de una suspension que contiene una muestra de una colonia de microorganismos en un punto de deposito de una placa diana para MALDI, en donde
el metodo comprende las siguientes etapas automaticas:
- proporcionar una herramienta de pipeteado en un dispositivo de la herramienta de seleccion y proporcionar un dispositivo de colocacion con un soporte de la herramienta de pipeteado para sostener dicha herramienta de pipeteado, donde dicho dispositivo de colocacion se dispone para colocar dicha herramienta de pipeteado en una posicion inicial por encima de un tubo de suspension que sostiene dicha suspension que contiene una muestra de una colonia de microorganismos, y para hacer descender y elevar de forma automatica la herramienta de pipeteado hacia el interior y exterior de la suspension y para colocar la herramienta de pipeteado en una posicion de transferencia, respectivamente;
- colocar dicha herramienta de pipeteado en dicho soporte de la herramienta de pipeteado del dispositivo de colocacion;
- al colocar dicho dispositivo de colocacion la herramienta de pipeteado en la posicion inicial por encima del tubo de suspension, hacer descender la herramienta de pipeteado hacia el interior de la suspension en dicho tubo de suspension, hacer funcionar la herramienta de pipeteado para seleccionar una cantidad de suspension, elevar la herramienta de pipeteado con dicha cantidad de suspension hasta la posicion de transferencia; donde dicha herramienta de pipeteado comprende una camara presurizable encerrada por una valvula controlada para contener la cantidad de medio de suspension;
- proporcionar un soporte de la placa diana para sostener la placa diana, donde dicha placa diana tiene multiples puntos de deposito;
- colocar la placa diana en el soporte de la placa diana;
- proporcionar un dispositivo de transferencia para transferir de forma automatica la herramienta de pipeteado de la posicion de transferencia del dispositivo de colocacion a una posicion por encima de uno de los puntos de deposito de la placa diana, y para hacer descender la herramienta de seleccion hasta una distancia predefinida por encima de la placa diana, presurizar la camara hasta una presion en un intervalo de aproximadamente 0,5 bar a 1,1 bar, y abrir la valvula durante un penodo tal que se deposite una gota de suspension con un volumen en un intervalo de aproximadamente 0,5 a 3,0 ml en uno de los puntos de deposito mencionados;
- elevar dicha herramienta de pipeteado de la placa diana. Preferiblemente, la forma de la herramienta de pipeteado es tal que el deposito de la gota de suspension en la placa diana tenga lugar sin salpicaduras. En particular, el metodo comprende presurizar la camara a una presion en un intervalo de aproximadamente 0,5 bar a 1,1 bar, y abrir la valvula durante un penodo tal que se deposite una gota de suspension con un volumen en un intervalo de aproximadamente 0,5 a 3,0 ml como maximo en la mitad de uno de los puntos de deposito mencionados. Se ha descubierto que cuando la muestra cubre como maximo aproximadamente la mitad de uno de los puntos de deposito mencionados de la placa diana, los resultados del analisis obtenidos del instrumento MALDI de la parte del punto de deposito que inicialmente no estaba cubierto con la muestra son, sorprendentemente, extremadamente mas precisos que los resultados del analisis obtenidos del instrumento MALDI de la parte del punto de deposito que inicialmente estaba cubierto con la muestra. Se supone que la cristalizacion que tiene lugar despues de que una gota de material de matriz se recubre sobre la muestra que cubre parte del punto de deposito garantiza que tambien la parte del punto de deposito que no esta cubierta contenga una cantidad de material de muestra, y que esta cantidad sea extremadamente adecuada para proporcionar excelentes resultados de analisis. Los procesos ffsicos o qrnmicos que causan este efecto, actualmente, no son claros, pero tal vez pueda lograrse una mayor claridad cuando se conozcan los procesos fundamentales subyacentes de MALDI.
BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS
La invencion se explicara de manera adicional con referencia a la Figura 1, en la cual se muestra un ejemplo no taxativo de una realizacion de un aparato de la invencion, la Figura 1 se usara para explicar los ejemplos de realizaciones del metodo segun la invencion.
DESCRIPCION DETALLADA DE EJEMPLOS DE REALIZACIONES
En la presente invencion, se usa MALDI o MALDI-TOF- MS para identificar microorganismos. En una operacion MALDI TOF MS, se localiza o deposita una muestra de una colonia de microorganismos en una placa diana que se mantiene en una posicion fija en el instrumento MALDI. Dicha placa diana tiene multiples puntos de deposito (por ejemplo, de 24 a 384 puntos de deposito en una unica placa diana) y estos puntos de deposito tienen una orientacion fija con respecto a los bordes de la placa diana. La placa diana se ubica en una plataforma X-Y de manera de poder depositar una muestra obtenida de una colonia de microorganismos en un punto de deposito seleccionado, en donde la ubicacion en la que se ha depositado una muestra espedfica se indica segun los parametros X-Y y se almacena en una memoria de una computadora de control central.
Si bien no se ilustra en detalle en la Figura 1, la placa diana se ubica debajo de una via de transferencia 18 en una posicion indicada por B. Una muestra se puede transferir a lo largo de la via de transferencia 18 desde una placa de cultivo 3 y/o un tubo de suspension 11 hasta arriba de la placa diana en una posicion B, donde la muestra se hace descender para que se deposite en un punto de deposito de la placa diana.
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La invencion se describira en detalle mas adelante con referencia a la preparacion de una suspension que contiene una muestra y el deposito de una gota de dicha suspension en un punto de deposito de una placa diana. La invencion reivindicada en la presente no menciona las etapas o aparatos que depositan directamente una muestra obtenida (seleccionada) de una placa de cultivo en un punto de deposito de una placa diana.
En general, en el metodo mencionado anteriormente, se ubica y detecta una colonia de microorganismos de forma automatica en una placa de cultivo. Se obtiene una muestra de dicha colonia de microorganismos seleccionada de forma automatica, por ejemplo, mediante una herramienta de seleccion que se pone en contacto con la colonia. Al menos una parte de dicha muestra de dicha colonia de microorganismos seleccionada se deposita directamente en una placa diana de forma automatica, al hacer descender la herramienta de seleccion de manera que la muestra de la colonia de microorganismos presente en la herramienta de seleccion entre en contacto con la placa diana, y mover la herramienta de seleccion en un plano paralelo al plano de la placa diana de manera que la muestra de la colonia de microorganismos se deposite en el punto de deposito, en particular, cubriendo como maximo aproximadamente la mitad de uno de los puntos de deposito mencionados de la placa diana. Luego, la placa diana con dicha muestra se transfiere de forma automatica a un aparato para realizar MALDI para la identificacion de dicha muestra de dicha colonia de microorganismos seleccionada. La realizacion descrita en este parrafo describe depositar directamente una colonia seleccionada en un punto de deposito en una placa diana y no forma parte de la presente invencion.
Mas detalladamente, este metodo comprende las siguientes etapas automaticas:
- proporcionar una primera herramienta de seleccion y proporcionar un dispositivo de colocacion con un soporte de la herramienta de seleccion para sostener una herramienta de seleccion, donde dicho dispositivo de colocacion se dispone para colocar una herramienta de seleccion en una posicion inicial por encima de la ubicacion obtenida de la colonia de microorganismos seleccionada en la placa de cultivo y para hacer descender y elevar de forma automatica una herramienta de seleccion hacia y en sentido contrario a la placa de cultivo y para colocar una herramienta de seleccion en una posicion de transferencia, respectivamente;
- colocar dicha primera herramienta de seleccion en dicho soporte de la herramienta de seleccion del dispositivo de colocacion;
- mediante la colocacion de dicho dispositivo de colocacion de la primera herramienta de seleccion en la posicion inicial por encima de la ubicacion obtenida de la colonia de microorganismos seleccionada en la placa de cultivo, hacer descender de forma automatica la primera herramienta de seleccion hacia la placa de cultivo para que entre en contacto con el microorganismo para seleccionar una muestra de dicho microorganismo, elevar de forma automatica la primera herramienta de seleccion con dicha muestra del microorganismo en sentido contrario a la placa de cultivo hacia la posicion de transferencia;
- proporcionar un soporte de la placa diana para sostener una placa diana, donde dicha placa diana tiene multiples puntos de deposito;
- colocar una placa diana en el soporte de la placa diana;
- proporcionar un dispositivo de transferencia para transferir de forma automatica la herramienta de seleccion desde la posicion de transferencia del dispositivo de colocacion hasta una posicion encima de uno de los puntos de deposito de la placa diana, y para hacer descender la herramienta de seleccion de manera que la muestra de la colonia de microorganismos presente en la herramienta de seleccion entre en contacto con la placa diana, mover la herramienta de seleccion en un plano paralelo al plano de la placa diana de manera que la muestra de la colonia de microorganismos se deposite en el punto de deposito, en particular, cubriendo como maximo aproximadamente la mitad de uno de los puntos de deposito mencionados de la placa diana; y elevar dicha herramienta de seleccion desde la placa diana. Luego, una gota de una solucion de matriz MALDI se recubre de forma automatica sobre la cantidad de la muestra depositada en la placa diana. El metodo que antecede incluye las etapas en las cuales se deposita directamente una colonia seleccionada en un punto de deposito de una placa diana y no forma parte de la presente invencion.
En caso de que la misma colonia de microorganismos deba someterse a otro analisis o prueba, tal como, pero no se limitan a, una prueba de susceptibilidad de antibiotico (AST), se puede obtener una segunda muestra de dicha colonia de microorganismos seleccionada de manera similar a obtener la muestra inicial. Dado que la ubicacion de la colonia de microorganismos en la placa de cultivo ya se ha seleccionado, y, por lo tanto, es "conocida" por la computadora de control central, es posible obtener de manera facil y reproducible una segunda muestra de la misma colonia. Luego, al menos una parte de la segunda muestra de dicha colonia de microorganismos seleccionada se transfiere y deposita en una placa de cultivo de prueba que, por ejemplo, puede colocarse de forma automatica en otra posicion debajo de la via de transferencia 18. Luego, dicha placa de cultivo de prueba se transfiere de forma automatica a un aparato para realizar una prueba de susceptibilidad u otro analisis adicional. El parrafo que antecede describe una etapa en la cual se deposita directamente una colonia seleccionada en una placa de cultivo de prueba y no forma parte de la presente invencion.
Dado que para realizar caracterizacion e identificacion de microorganismos normalmente se cultivan multiples colonias en una placa de cultivo, y, ademas, se utilizan multiples placas de cultivo distintas, la invencion proporciona la posibilidad de identificar cada placa de cultivo por separado, por ejemplo, mediante un codigo de barras, y, ademas, se selecciona cada colonia de interes en una unica placa de cultivo y se le proporciona una marca de identificacion. Hasta el momento, la etapa automatica de localizar y seleccionar una colonia de microorganismos en una placa de cultivo, el metodo segun la invencion comprende una etapa de proporcionar una placa de cultivo que comprende una cantidad de colonias de
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microorganismos, obtener una imagen inicial de dicha placa de cultivo que incluye todas las colonias de microorganismos, mostrar dicha imagen inicial de dicha placa de cultivo que incluye todas las colonias de microorganismos en una pantalla, y seleccionar al menos una colonia de microorganismos en dicha imagen inicial. De esta manera, un investigador o analista puede seleccionar las colonias de interes en funcion del conocimiento y formacion exhaustivos. Dado que a cada placa de cultivo se le proporciona una identificacion individual que identifica dicha placa de cultivo, tal como un codigo de barras, se almacena la imagen inicial de dicha placa de cultivo que incluye todas las colonias, y se almacena informacion relacionada con dicha al menos una colonia de microorganismos seleccionada (preferiblemente con enlaces proporcionados en la imagen inicial (electronica)), almacenar toda dicha informacion e identificaciones de la placa de cultivo en una memoria de una computadora de control central permite un muy correcto procesamiento adicional. De esta manera, la unica operacion manual es la accion de seleccionar las colonias interesantes, mientras que se procesan todos los datos pertinentes de forma automatica. Opcionalmente, el investigador o analista puede ingresar de forma manual instrucciones de procesamiento con respecto al procesamiento al que debe someterse una colonia de microorganismos seleccionada de dicha placa de cultivo, donde dichas instrucciones de procesamiento tambien se almacenan en dicha memoria de dicha computadora de control central para su posterior uso. Despues de esta accion manual, se realizan todas las etapas adicionales de forma completamente automatica de manera confiable y eficaz. Para este procesamiento adicional automatico, la placa de cultivo se ubica de forma automatica en una plataforma para una placa de cultivo de un dispositivo de la herramienta de seleccion que comprende un dispositivo de imagenologfa. Se obtiene una imagen de dicha placa de cultivo ubicada en dicho dispositivo de la herramienta de seleccion, y junto con la identificacion de dicha placa de cultivo, es posible comparar esta imagen obtenida por el dispositivo de imagenologfa de dicho dispositivo de la herramienta de seleccion con la imagen inicial almacenada de dicha placa de cultivo y, por lo tanto, obtener informacion relacionada con la ubicacion de la colonia de microorganismos seleccionada y, opcionalmente, relacionada con las instrucciones de procesamiento relacionadas con los procesos que deben realizarse en dicha colonia de microorganismos seleccionada. Al comparar la imagen de la placa de cultivo cuando se coloca en el dispositivo de herramienta de seleccion con la imagen inicial, la ubicacion de las colonias seleccionadas puede obtenerse de forma automatica, por ejemplo, mediante comparacion de imagenes computarizadas. Ademas, a cada placa diana se le proporciona una marca de identificacion y, opcionalmente, cada punto de deposito de dicha placa diana tiene una marca de identificacion o identificador de ubicacion individual, por lo tanto, despues de almacenar la marca de identificacion de dicha placa diana y puntos de deposito junto con las propiedades de la suspension con un enlace a la identidad de la placa de cultivo de la que se obtuvo la colonia de microorganismos seleccionada en la memoria de dicha computadora de control central es posible establecer un enlace correcto de los resultados de MALDI obtenidos con la colonia de microorganismos espedfica que se este analizando de manera correcta y automatica.
A continuacion, se describira una realizacion de un metodo de la invencion en el cual se genera una suspension a partir de una muestra de una colonia de microorganismos seleccionada de una placa de cultivo junto con una realizacion de un aparato para realizar dicho metodo.
La Figura 1 muestra de forma esquematica una realizacion de un aparato 1 para la preparacion automatica de una suspension de una muestra de un microorganismo segun la invencion. Dicho aparato 1 comprende una plataforma 2 para una placa de cultivo 3 que comprende un microorganismo 4 en una capa nutritiva 5, tal como una capa de gel agar.
El aparato 1 comprende ademas una primera herramienta de seleccion 6 y una herramienta de seleccion adicional 7. Un dispositivo de colocacion 8 comprende un soporte de la herramienta de seleccion 9 para, en la realizacion que se muestra, sostener de forma removible una herramienta de seleccion, en la realizacion que se muestra en la Figura 1, el soporte de la herramienta de seleccion 9 sostiene la primera herramienta de seleccion 6. El dispositivo de colocacion 8 se dispone para colocar la primera herramienta de seleccion 6 en una posicion inicial (que se muestra con lmeas continuas en la Figura 1) encima de la placa de cultivo 3 y se dispone para hacer descender y elevar de forma automatica la primera herramienta de seleccion 6 hacia y en sentido contrario a la placa de cultivo 3, de manera que la primera herramienta de seleccion 6 pueda ubicarse en una posicion (indicada con las lmeas discontinuas 6') en la cual entra en contacto con el microorganismo 4 y selecciona una muestra de dicho microorganismo. Despues de que la primera herramienta de seleccion 6 ha seleccionado una muestra, el dispositivo de colocacion 8 eleva y coloca la primera herramienta de seleccion 6 en una posicion de transferencia, que, en la realizacion que se muestra en la Figura 1, es identica a la posicion inicial. En otras realizaciones, las posiciones inicial y de transferencia pueden ser distintas entre sf.
El aparato 1 segun la invencion comprende ademas un soporte del tubo de suspension 10 para sostener un tubo de suspension 11 que puede contener un medio de suspension que se dispensa desde un dispensador del medio de suspension automatico 12 que, en la realizacion que se muestra, tiene una boquilla dispensadora 13 para dispensar de forma automatica un medio de suspension 14 en el tubo de suspension 11 sostenido en el soporte del tubo de suspension 10. En la presente realizacion, el soporte del tubo de suspension 10 es un soporte del tubo de suspension giratorio para hacer girar el tubo de suspension 11 alrededor de un eje vertical A.
Se incorpora un dispositivo de transferencia 15 en el aparato de la invencion 1 para transferir de forma automatica una herramienta de seleccion desde la posicion de transferencia del dispositivo de colocacion 8 hasta una posicion encima del tubo de suspension 11 sostenido en el soporte del tubo de suspension 10. En la realizacion que se muestra, el dispositivo de transferencia 15 comprende un soporte de transferencia 16 con un medio de sujecion 17 para sostener de forma removible una herramienta de seleccion. El dispositivo de transferencia 15, de manera conocida de por sf, puede montarse sobre una via de transferencia 18, tal como un riel, para el movimiento lineal sobre este, como se indica
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mediante las flechas. De esta manera, el dispositivo de transferencia 15 puede moverse hasta el dispositivo de colocacion 8, de manera que el medio de sujecion 17 pueda relevar a la herramienta de seleccion desde el dispositivo de colocacion 8, donde el soporte de la herramienta de seleccion 9 de este libera la herramienta de seleccion despues de que el medio de sujecion l7 ha sujetado la herramienta de seleccion. En la realizacion que se muestra en la Figura 1, la segunda herramienta de seleccion o adicional 7, habiendo seleccionado previamente una muestra 19 del microorganismo 4, se coloca sobre el tubo de suspension 11 mediante el dispositivo de transferencia 15 en una posicion inicial indicada por las lmeas continuas. El dispositivo de transferencia 15 se dispone para hacer descender la segunda herramienta de seleccion 7 hacia el interior del medio de suspension 14 contenido en el tubo de suspension 11, donde la posicion de la segunda herramienta de seleccion 7' con la muestra 19 se sumerge en el medio de suspension 14 como se indica con las lmeas discontinuas en la Figura 1. En esta posicion, el dispositivo de transferencia 15 se activa para hacer oscilar la segunda herramienta de seleccion 7 en un movimiento vertical lineal durante un penodo de tiempo que es suficiente para la muestra 19 que se deba liberar de la segunda herramienta de seleccion 7. Luego, el dispositivo de transferencia 15 coloca la segunda herramienta de seleccion 7 en una posicion de espera encima del tubo de suspension 11 que, en la realizacion que se muestra en la Figura 1, es identica a la posicion inicial. En otras realizaciones, la posicion de espera y la posicion inicial pueden ser distintas entre sf.
El aparato de la invencion 1 se proporciona ademas con un medidor de la turbidez 20 para realizar mediciones de la turbidez del medio de suspension 14 contenido en el tubo de suspension 11 sostenido por el soporte del tubo de suspension 10. Como se conoce generalmente en la tecnica, un medidor de turbidez puede proporcionar valores de medicion que constituyen una medida de la concentracion del material, en el caso de la presente, la concentracion de un microorganismo suspendido en el medio de suspension. En la realizacion que se muestra en la Figura 1, el medidor de la turbidez 20 comprende un laser 21 que transmite luz laser hacia y a traves del medio de suspension y un sensor 22 que detecta la cantidad de luz laser transmitida a traves del medio de suspension. Ademas, hay un sensor adicional (que no se indica en el dibujo) que, por ejemplo, se dispone en sentido perpendicular a la trayectoria de la luz laser para detectar la cantidad de luz laser que se ha dispersado mediante la suspension.
El funcionamiento del dispositivo de la invencion es controlado por un controlador 23, por ejemplo, que comprende un microprocesador, que se conecta de forma comunicativa (como se indica mediante las lmeas de senal) al dispositivo de colocacion 8, el dispositivo de transferencia 15, el dispensador del medio de suspension automatico 12 y el medidor de turbidez 20 para controlar de forma automatica el movimiento del dispositivo de colocacion 8, el movimiento del dispositivo de transferencia 15, el funcionamiento del dispensador del medio de suspension automatico 12 y el funcionamiento del medidor de turbidez 20, respectivamente. Ademas, el controlador 23 puede estar directamente conectado de forma comunicativa a otras partes del aparato, tales como, por ejemplo, el soporte de la herramienta de seleccion 9, el soporte de transferencia 16, el laser 21 y el sensor 22.
En la realizacion que se muestra en la Figura 1, el controlador 23 se dispone para controlar el medidor de turbidez 20, de manera que la medicion de la turbidez del medio de suspension 14 comience antes de que la segunda herramienta de seleccion 7 se sumerja en el medio de suspension 14. Ademas, el controlador 23 controla el soporte del tubo de suspension giratorio 10 para iniciar la rotacion del tubo de suspension 11 sostenido por el soporte 10 antes de que la segunda herramienta de seleccion 7 se sumerja en el medio de suspension 14, y para mantener la rotacion del tubo de suspension 11 durante la medicion de la turbidez del medio de suspension 14. En la realizacion que se muestra, el controlador 23 controla el medidor de turbidez 20 de manera que la medicion de la turbidez se realice durante el penodo de tiempo total durante el cual oscila la segunda herramienta de seleccion 7. De esta manera, el medidor de turbidez 20 proporciona un valor de medicion en lmea al controlador 23 que indica la turbidez medida y, por lo tanto, la concentracion del microorganismo, durante el penodo de tiempo durante el cual oscila la segunda herramienta de seleccion.
El controlador 23 comprende una memoria en la cual se almacenan un primer y un segundo valor de umbral, donde dicho primer valor de umbral es igual o superior al segundo valor de umbral. Si el valor de medicion de la turbidez proporcionado por el medidor de turbidez es igual o intermedio al primer y segundo valor de umbral, la concentracion/cantidad de microorganismo en el medio de suspension es suficiente para permitir que el tubo de suspension con la suspension se procese adicionalmente. En dicho caso, el controlador 23 proporciona una senal de que el tubo de suspension puede procesarse adicionalmente. Ademas, en esta situacion, la segunda herramienta de seleccion 7 puede desecharse, por ejemplo, mediante la transferencia del dispositivo de transferencia hasta una posicion C en la cual se activa el medio de sujecion 17 para liberar la segunda herramienta de seleccion 7.
En caso de que el valor de medicion final del medidor de la turbidez sea superior al primer valor de umbral previamente almacenado en una memoria del controlador 23, la concentracion del microorganismo es demasiado alta para permitir que el tubo de suspension se procese adicionalmente. En esta situacion, el controlador 23 controla el dispensador del medio de suspension automatico 12 para suministrar una cantidad adicional de medio de suspension en el tubo de suspension 11. Esta cantidad adicional de medio de suspension se basa en la cantidad inicial de medio de suspension, el valor de medicion final y el valor del primer y/o segundo valor de umbral, de manera que la adicion de la cantidad adicional del medio de suspension al medio de suspension que ya se encuentra presente en el tubo de suspension 11 conllevara una concentracion de microorganismo en el medio de suspension que satisface el requisito de procesamiento adicional, como lo puede confirmar una medicion adicional de la turbidez mediante el medidor de turbidez 20.
En caso de que el valor de medicion final del medidor de turbidez 20 sea inferior al segundo valor de umbral, lo que
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significa que la concentracion de microorganismo en el medio de suspension es demasiado baja, el controlador 23 controla el aparato 1 de manera que se seleccione una cantidad adicional del microorganismo mediante la primera herramienta de seleccion 6 (de manera alternativa, la segunda u otra herramienta de seleccion se puede usar para seleccionar una muestra adicional). Por lo tanto, el controlador 23, en este caso, controla la colocacion del dispositivo de transferencia 15, de manera que la segunda herramienta de seleccion 7 se deseche, como se describio anteriormente. Luego (o de forma simultanea), la primera herramienta de seleccion 6 en el soporte de la herramienta de seleccion 9 del dispositivo de colocacion 8 se hace descender desde la posicion inicial por encima de la placa de cultivo 3 hacia la placa de cultivo y en contacto con el microorganismo 4 para seleccionar una muestra adicional de dicho microorganismo. Luego, la primera herramienta de seleccion 6 se eleva de forma automatica con la muestra adicional del microorganismo en sentido contrario a la placa de cultivo hasta la posicion de transferencia. Luego, dicho dispositivo de transferencia transfiere de forma automatica la primera herramienta de seleccion con la muestra adicional del microorganismo desde la posicion de transferencia del dispositivo de colocacion 8 hasta una posicion por encima del tubo de suspension 11. La primera herramienta de seleccion 6 con la muestra adicional del microorganismo se hace descender hacia el interior del medio de suspension 14 y oscila mediante el dispositivo de transferencia 15 en un movimiento vertical lineal para un penodo de tiempo para liberar la muestra adicional de dicho microorganismo en el medio de suspension. Nuevamente, la turbidez se mide durante la oscilacion, y el valor medido se compara con el primer y el segundo valor de umbral almacenados en la memoria del controlador 23. En este caso, el controlador 23 se puede disponer para controlar el movimiento del dispositivo de transferencia 15 de manera que la primera herramienta de seleccion 6 se eleve hasta la posicion de espera si durante la oscilacion el valor de medicion en lmea de la turbidez realizado por el medidor de turbidez 20 es igual o inferior al primer valor de umbral e igual o superior al segundo valor de umbral.
Los tubos de suspension que son particularmente utiles en el aparato de la invencion tienen una seccion transversal sustancialmente circular con un diametro de aproximadamente 6 a aproximadamente 12 mm, preferiblemente aproximadamente 10 mm. En estos tubos de suspension relativamente pequenos, el controlador 23 puede controlar el dispensador del medio de suspension automatico 12 de manera que la cantidad inicial suministrada de medio de suspension sea de aproximadamente 0,5 - 2 ml, preferiblemente aproximadamente 1 ml.
La oscilacion del dispositivo de transferencia 15 es controlada por el controlador 23, de manera que la herramienta de seleccion oscile a una frecuencia de entre aproximadamente 5 Hz y aproximadamente 120 Hz, preferiblemente aproximadamente 30 Hz y aproximadamente 90Hz, mas preferiblemente aproximadamente 50 Hz, con una amplitud de aproximadamente 0.5 mm a aproximadamente 4 mm, preferiblemente aproximadamente 2 mm a aproximadamente 3 mm. El controlador, ademas, se dispone para controlar la oscilacion del dispositivo de transferencia 15, de manera que el penodo de tiempo durante el cual oscila la herramienta de seleccion sea de aproximadamente 3 segundos a aproximadamente 10 segundos, preferiblemente aproximadamente 6 segundos.
El aparato de la invencion 1, ademas, comprende un transportador 24, del cual la posicion de extremo puede formar la plataforma 2 para la placa de cultivo o, como se muestra en la Figura 1, un transportador 24 y una plataforma 2, que se ubican mutuamente de forma que una placa de cultivo pueda transportarse hacia la plataforma y retirarse de la plataforma mediante el funcionamiento apropiado del transportador 24. El transportador 24 es controlado por el controlador 23 para colocar y retirar de forma automatica una placa de cultivo que comprende dicho microorganismo sobre y de la plataforma, respectivamente. Cabe destacar que, en otras realizaciones que no se muestran, se pueden usar distintos medios para colocar y retirar de forma automatica una placa de cultivo sobre y de la plataforma, respectivamente. En particular, el controlador 23 se dispone para permitir retirar de forma automatica una placa de cultivo de la plataforma mediante el dispositivo de colocacion y retiro automatico de la placa de cultivo solamente despues de que se haya proporcionado la senal de que se puede retirar el tubo de suspension con la suspension del soporte del tubo de suspension para el procesamiento adicional. Esto garantiza que siempre sea posible seleccionar una muestra adicional, si fuera necesario.
Como se muestra en la Figura 1, el aparato de la invencion 1 comprende ademas un dispositivo de colocacion y retiro automatico del tubo de suspension 25 para colocar y retirar de forma automatica un tubo de suspension en y del soporte del tubo de suspension, respectivamente. En la realizacion que se muestra, el dispositivo de colocacion y retiro automatico del tubo de suspension 25 comprende el medio de sujecion 26 para sujetar de forma removible un tubo de suspension 11'. Nuevamente, el controlador 23 se dispone para conectarse de forma comunicativa al dispositivo de colocacion y retiro automatico del tubo de suspension 25, 26 para controlar el funcionamiento del dispositivo de colocacion y retiro automatico del tubo de suspension, y para colocar de forma automatica un tubo de suspension en el soporte del tubo de suspension. El controlador 23, en particular, se dispone para retirar de forma automatica un tubo de suspension del soporte del tubo de suspension mediante el dispositivo de colocacion y retiro automatico del tubo de suspension 25, 26 solamente despues de que se haya proporcionado la senal de que se puede retirar el tubo de suspension con la suspension del soporte del tubo de suspension para el procesamiento adicional. En la realizacion que se muestra, el dispositivo de colocacion y retiro automatico del tubo de suspension 25 puede moverse a lo largo del riel 18 de forma independiente del movimiento del dispositivo de transferencia 15. En la posicion indicada por C, se pueden traer tubos de suspension vados y se pueden entregar tubos de suspension con un medio de suspension que contiene una concentracion suficiente de microorganismo al equipo para el procesamiento adicional, tal como una incubadora. Cabe destacar que la posicion C, por ejemplo, puede estar formada por un sistema multipista que puede llevar el dispositivo de colocacion y retiro del tubo de suspension 25 y el dispositivo de transferencia 15 hasta una ubicacion distinta en la cual hay componentes distintos o se pueden realizar procesos.
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La suspension de muestra as^ preparada se utiliza para realizar caracterizacion o identificacion de los microorganismos usando MALDI y, opcionalmente, se utiliza para otros analisis, tal como AST. Para identificar microorganismos usando MALDI, se obtiene una gota de dicha suspension de muestra; y esta gota se transfiere a dicha placa diana. Se puede obtener una gota mediante el uso de otra herramienta de seleccion que es sostenida por el medio de sujecion 17 y que se hace descender de forma automatica en la suspension. Cuando esta herramienta de seleccion se eleva y se retira de la suspension, aparece una gota de suspension en la punta de esta herramienta de seleccion, que puede transferirse a lo largo del riel hasta la posicion B, donde la herramienta de seleccion con la gota se hace descender hasta que la gota entra en contacto con el punto de deposito en la placa diana, y al menos una parte de la gota permanecera en el punto de deposito despues de que la herramienta de seleccion se ha elevado de la placa diana. De manera alternativa, una herramienta de pipeteado, que se describira mas adelante, se puede utilizar para seleccionar una cantidad de suspension del tubo de suspension, transferir esta cantidad hasta la posicion B y depositar una gota de suspension sobre la placa diana. Despues de haber depositado una gota de suspension sobre la placa diana y, en particular, cuando se ha permitido secar esta gota, se recubre de forma automatica una gota de una solucion de matriz MALDI sobre la cantidad o parte de la muestra depositada sobre la placa diana. Para realizar otras pruebas u otro analisis, se puede obtener una segunda gota de dicha suspension de muestra de manera similar, y dicha gota puede transferirse y depositarse de forma automatica sobre, por ejemplo, una placa de cultivo de prueba que se transfiere de manera adicional de forma automatica para realizar una prueba de susceptibilidad u otro analisis adicional.
Cada tubo de suspension comprende una marca de identificacion unica, que se almacena junto con las propiedades de la suspension con un enlace a la identidad de la placa de cultivo de la cual se obtuvo la colonia de microorganismos seleccionada en la memoria de dicha computadora de control central para, entre otras cosas, relacionar de forma correcta y rapida los resultados obtenidos del analisis con la placa de cultivo y la colonia que pertenece a dichos resultados.
Si bien no se muestra en la Figura 1, se puede tomar una cantidad de suspension de la suspension del tubo de suspension mediante una herramienta de pipeteado que puede ser sostenida y colocada de forma automatica por el medio de sujecion (que funciona como soporte de la herramienta de pipeteado) 17 y el dispositivo de transferencia o colocacion 15 de la misma manera que la herramienta de seleccion. El dispositivo de colocacion 15 se dispone para colocar dicha herramienta de pipeteado en una posicion inicial por encima del tubo de suspension y para hacer descender y elevar de forma automatica la herramienta de pipeteado hacia el interior y exterior de la suspension y para colocar la herramienta de pipeteado en una posicion de transferencia, respectivamente. Cuando la herramienta de pipeteado se hace descender hacia el interior de la suspension en dicho tubo de suspension, la herramienta de pipeteado funciona de manera conocida por sf misma (por ejemplo, usando sub presion) para seleccionar una cantidad de suspension. Luego, la herramienta de pipeteado con dicha cantidad de suspension se eleva hasta la posicion de transferencia. Para contener la cantidad, la herramienta de pipeteado comprende una camara presurizable encerrada por una valvula controlada. La herramienta de pipeteado se transfiere de forma automatica mediante el dispositivo de transferencia 15 hasta la posicion B encima de uno de los puntos de deposito de la placa diana. En esta posicion, la herramienta de pipeteado se hace descender hasta una distancia predefinida encima de la placa diana, luego de lo cual la camara se presuriza hasta una presion en un intervalo de aproximadamente 0,5 bar a 1,1 bar. Luego, la valvula se abre durante un penodo que permita depositar una gota de suspension con un volumen en un intervalo de aproximadamente 0,5 a 3,0 ml en el punto de deposito, en particular, cubriendo como maximo aproximadamente la mitad de uno de dichos puntos de deposito de la placa diana. Despues de haber depositado la gota, la herramienta de pipeteado se eleva desde la placa diana y puede transferirse hasta la posicion C, donde puede desecharse o limpiarse para reutilizarse.
Claims (11)
- 5101520253035404550556065REIVINDICACIONES1. Un metodo para localizar y seleccionar una colonia de microorganismos en una placa de cultivo e identificar microorganismos en dicha colonia seleccionada usando MALDI, en donde dicho metodo comprende las etapas automaticas de:- localizar y seleccionar una colonia de microorganismos (4) en una placa de cultivo (3);- obtener una muestra de dicha colonia de microorganismos seleccionada;en donde las etapas de obtener una muestra de dicha colonia de microorganismos seleccionada se realizan mediante las etapas automaticas de:- proporcionar una primera herramienta de seleccion (6) y proporcionar un dispositivo de colocacion (8) con un soporte de la herramienta de seleccion (9 ) para sostener una herramienta de seleccion (6), donde dicho dispositivo de colocacion (8) se dispone para colocar una herramienta de seleccion (6) en una posicion inicial por encima de una ubicacion obtenida de la colonia de microorganismos seleccionada (4) en la placa de cultivo (3) y para hacer descender y elevar de forma automatica una herramienta de seleccion (6) hacia y en sentido contrario a la placa de cultivo (3) y para colocar una herramienta de seleccion (6) en una posicion de transferencia, respectivamente;- colocar dicha primera herramienta de seleccion (6) en dicho soporte de la herramienta de seleccion (9) del dispositivo de colocacion (8);- mediante la colocacion de dicho dispositivo de colocacion (8) de la primera herramienta de seleccion (6) en la posicion inicial por encima de la ubicacion obtenida de la colonia de microorganismos seleccionada (4) en la placa de cultivo (3), hacer descender de forma automatica la primera herramienta de seleccion (6) hacia la placa de cultivo (3) para que entre en contacto con el microorganismo (4) para seleccionar una muestra de dicho microorganismo, elevar de forma automatica la primera herramienta de seleccion (6) con dicha muestra del microorganismo (4) en sentido contrario a la placa de cultivo (3) hacia la posicion de transferencia; y- depositar al menos una parte de dicha muestra de dicha colonia de microorganismos seleccionada (4) en una placa diana;en donde la etapa de depositar al menos una parte de dicha muestra de dicha colonia de microorganismos seleccionada en una placa diana se realiza mediante las etapas automaticas de:- proporcionar un soporte del tubo de suspension (10) para sostener un tubo de suspension (11);- colocar un tubo de suspension (11) en el soporte del tubo de suspension (10);- proporcionar un dispensador del medio de suspension automatico (12) para dispensar automaticamente un medio de suspension (14) en un tubo de suspension (11) sostenido por el soporte del tubo de suspension (10);- al suministrar de forma automatica el dispensador automatico (12) una cantidad inicial de medio de suspension(14) en el tubo de suspension (11) sostenido por el soporte del tubo de suspension (10);- proporcionar un dispositivo de transferencia (15) para transferir de forma automatica una herramienta de seleccion de la posicion de transferencia del dispositivo de colocacion (8) a una posicion por encima de un tubo de suspension (11) sostenido por el soporte del tubo de suspension (10), y para hacer descender y elevar una herramienta de seleccion (6) hacia y en sentido contrario a un medio de suspension (14) contenido en un tubo de suspension (11), y para colocar una herramienta de seleccion (6) en una posicion de espera por encima de un tubo de suspension (11) sostenido por el soporte del tubo de suspension (10), respectivamente;- al transferir de forma automatica dicho dispositivo de transferencia (15) dicha primera herramienta de seleccion (6) con la muestra del microorganismo de la posicion de transferencia del dispositivo de colocacion (8) a una posicion por encima del tubo de suspension (11) sostenido por el soporte del tubo de suspension (10), hacer descender dicha primera herramienta de seleccion (6) con la muestra del microorganismo hacia el interior del medio de suspension (14) contenido en el tubo de suspension (11); al hacer oscilar el dispositivo de transferencia(15) la primera herramienta de seleccion (6) en un movimiento vertical lineal durante un penodo de tiempo mientras que la primera herramienta de seleccion (6) con la muestra de dicho microorganismo se sumerge en el medio de suspension (14); y despues de que ha transcurrido dicho penodo de tiempo, elevar la primera herramienta de seleccion (6) en sentido contrario al medio de suspension (14) contenido en el tubo de suspension (11) hacia la posicion de espera;- proporcionar un medidor de turbidez (20) para realizar mediciones de la turbidez de un medio de suspension (14) contenido en un tubo de suspension (11) sostenido por el soporte del tubo de suspension (10);- al menos despues de transcurrido el penodo de tiempo durante el cual la herramienta de seleccion (6) oscila medir la turbidez del medio de suspension (14) contenido en el tubo de suspension (11) sostenido por el soporte del tubo de suspension (10) mediante el medidor de turbidez (20) y proporcionar un valor de medicion final que indica la turbidez medida;- proporcionar un controlador (23) conectado de forma comunicativa al dispositivo de colocacion (8), el dispositivo de transferencia (15), el dispensador del medio de suspension automatico (12) y el medidor de turbidez (20) para controlar de forma automatica el movimiento del dispositivo de colocacion (8), el movimiento del dispositivo de transferencia (15), el funcionamiento del dispensador del medio de suspension automatico (12) y el funcionamiento del medidor de turbidez (20), respectivamente;- en donde dicho controlador (23) realiza las etapas de:5101520253035404550556065a) determinar si el valor de medicion final se encuentra por encima de un primer valor umbral previamente almacenado en una memoria del controlador (23), en caso afirmativo, realizar la etapa b); o si el valor de medicion final es identico o superior al segundo valor de umbral previamente almacenado en la memoria del controlador (23), donde dicho primer valor de umbral es igual o superior al segundo valor de umbral, en caso afirmativo, realizar la etapa c); o si el valor de medicion final es inferior al segundo valor de umbral, en caso afirmativo, realizar la etapa d);b) controlar el dispensador del medio de suspension automatico (12) para suministrar una cantidad adicional de medio de suspension (14) en el tubo de suspension (11);c) proporcionar una senal de que se puede retirar el tubo de suspension (11) con la suspension del soporte del tubo de suspension (10) para el procesamiento adicional; od) proporcionar una herramienta de seleccion adicional (7) en donde proporcionar la herramienta de seleccion adicional (7) comprende colocar dicha herramienta de seleccion adicional (7) en dicho soporte de la herramienta de seleccion (9) del dispositivo de colocacion (8);y el metodo comprende ademas las etapas automaticas de:- obtener una gota de dicha suspension de muestra; y- transferir dicha gota de suspension de muestra a dicha placa diana- transferir dicha placa diana con dicha muestra a un aparato para realizar MALDI para la identificacion de dicha muestra de dicha colonia de microorganismos seleccionadaen donde el metodo comprende ademas las etapas automaticas de:- obtener una segunda gota de dicha suspension de muestra;- depositar dicha segunda gota de suspension de muestra en una placa de cultivo de prueba; y- transferir dicha placa de cultivo de prueba a un aparato para realizar una prueba de susceptibilidad u otro analisis adicional.
- 2. Un metodo segun la reivindicacion 1, en donde el metodo comprende ademas la etapa automatica de recubrir una gota de una solucion de matriz MALDI sobre dicha gota de suspension de muestra depositada en la placa diana.
- 3. Un metodo segun la reivindicacion 2, en donde dicha gota de suspension de muestra depositada en la placa diana se permite secar antes de que se recubra dicha gota de solucion de matriz MALDI.
- 4. Un metodo segun la reivindicacion 1, en donde en caso de que las instrucciones de procesamiento para una colonia de microorganismos seleccionada indiquen preparar una suspension de una muestra de dicha colonia de microorganismos, donde el metodo comprende la etapa de preparar de forma automatica una suspension de una muestra de microorganismos que comprende las etapas automaticas de:al colocar dicho dispositivo de colocacion (8) la herramienta de seleccion adicional (7) en la posicion inicial encima de la placa de cultivo, hacer descender de forma automatica la herramienta de seleccion adicional (7) hacia la placa de cultivo (3) en contacto con el microorganismo para seleccionar una muestra adicional de dicho microorganismo, elevar de forma automatica la herramienta de seleccion adicional (7) con dicha muestra del microorganismo de la placa de cultivo (3) a la posicion de transferencia; al transferir de forma automatica el dispositivo de transferencia dicha herramienta de seleccion adicional (7) con la muestra adicional del microorganismo de la posicion de transferencia del dispositivo de colocacion a una posicion encima del tubo de suspension (11) sostenido por el soporte del tubo de suspension (10), hacer descender dicha herramienta de seleccion adicional (7) con la muestra adicional del microorganismo en el medio de suspension (14) contenido en el tubo de suspension (11); al oscilar el dispositivo de transferencia (15) la herramienta de seleccion adicional (7) en un movimiento vertical lineal durante un penodo de tiempo durante el cual la herramienta de seleccion adicional (7) con la muestra adicional de dicho microorganismo se sumerge en el medio de suspension (14); y despues de transcurrido dicho penodo de tiempo elevar la herramienta de seleccion adicional (7) del medio de suspension (14) contenido en el tubo de suspension (11) hasta la posicion de espera; al menos despues de transcurrido el penodo de tiempo durante el cual la herramienta de seleccion adicional (7) oscila medir la turbidez del medio de suspension (14) contenido en el tubo de suspension (11) sostenido por el soporte del tubo de suspension (10) mediante el medidor de turbidez (20) y proporcionar un valor de medicion final adicional que indica la turbidez medida; y realizar el metodo de la reivindicacion 1.
- 5. Un metodo segun la reivindicacion 1, en donde el metodo comprende proporcionar un dispositivo de colocacion y retiro automatico de la placa de cultivo para colocar y retirar de forma automatica una placa de cultivo (3) que comprende dicho microorganismo (4) en y de la plataforma (2), respectivamente, la etapa de disponer el controlador (23), de manera que se conecte de forma comunicativa al dispositivo de colocacion y retiro automatico de la placa de cultivo para controlar el funcionamiento del dispositivo de colocacion y retiro automatico de la placa de cultivo, en donde la etapa de colocar una placa de cultivo (3) que comprende dicho microorganismo (4) en la plataforma (2) se realiza de forma automatica bajo el control del controlador (23).5101520253035404550556065
- 6. Un metodo segun la reivindicacion 7, en donde el controlador (23) se dispone de manera que se permita retirar de forma automatica una placa de cultivo (3) de la plataforma (2) mediante el dispositivo de colocacion y retiro automatico de la placa de cultivo solamente despues de que se haya proporcionado la senal de que se puede retirar el tubo de suspension (11) con la suspension del soporte del tubo de suspension (1) para el procesamiento adicional.
- 7. Un metodo para preparar de forma automatica una suspension de una muestra de microorganismos segun la reivindicacion 1, en donde el metodo comprende proporcionar un dispositivo de colocacion y retiro automatico del tubo de suspension (25) para colocar y retirar de forma automatica un tubo de suspension (11) en y del soporte del tubo de suspension (10), respectivamente, la etapa de disponer el controlador (23), de manera que se conecte de forma comunicativa al dispositivo de colocacion y retiro automatico del tubo de suspension (25) para controlar el funcionamiento del dispositivo de colocacion y retiro automatico del tubo de suspension, en donde la etapa de colocar un tubo de suspension (11) en el soporte del tubo de suspension (10) se realiza de forma automatica bajo el control del controlador (23).
- 8. Un metodo para preparar de forma automatica una suspension de una muestra de microorganismos segun la reivindicacion 7, en donde el controlador (23) se dispone de manera que se retire de forma automatica el tubo de suspension (11) del soporte del tubo de suspension (10) mediante el dispositivo de colocacion y retiro automatico del tubo de suspension (25) solamente despues de que se haya proporcionado la senal de que se puede retirar el tubo de suspension (11) con la suspension del soporte del tubo de suspension (11) para el procesamiento adicional.
- 9. Un metodo segun la reivindicacion 1, en donde el metodo comprende la etapa de proporcionar una marca de identificacion en el tubo de suspension (11), y la etapa de almacenar la marca de identificacion de dicho tubo de suspension (11) junto con las propiedades de la suspension con un enlace con la identidad de la placa de cultivo (3) de la que se obtuvo la colonia de microorganismos seleccionada (4) en la memoria de dicha computadora de control central.
- 10. Un aparato para la preparacion automatica de una suspension de una muestra de microorganismos para realizar un metodo o una etapa de un metodo para la preparacion automatica de una suspension de una muestra de microorganismos segun la reivindicacion 1, donde dicho aparato (1) comprende:- una plataforma (2) para una placa de cultivo (3) que comprende dicho microorganismo (4);- una primera (6) y una herramienta de seleccion adicional (7) y un dispositivo de colocacion (8) con un soporte de la herramienta de seleccion (9) para sostener una herramienta de seleccion (6), donde dicho dispositivo de colocacion (8) se dispone para colocar una herramienta de seleccion (6) en una posicion inicial por encima de la placa de cultivo (3) y para hacer descender y elevar de forma automatica una herramienta de seleccion (6) hacia y en sentido contrario a la placa de cultivo (3) y para colocar una herramienta de seleccion (6) en una posicion de transferencia, respectivamente;- un soporte del tubo de suspension (10) para sostener un tubo de suspension (11);- un dispensador del medio de suspension automatico (12) para dispensar automaticamente un medio de suspension (14) en un tubo de suspension (11) sostenido por el soporte del tubo de suspension (10);- un dispositivo de transferencia (15) para transferir de forma automatica una herramienta de seleccion (6) de la posicion de transferencia del dispositivo de colocacion (8) a una posicion por encima de un tubo de suspension (11) sostenido por el soporte del tubo de suspension (10), y para hacer descender y elevar una herramienta de seleccion (6) hacia y en sentido contrario a un medio de suspension (14) contenido en un tubo de suspension (11), y para colocar una herramienta de seleccion (6) en una posicion de espera por encima de un tubo de suspension (11) sostenido por el soporte del tubo de suspension (10), respectivamente, donde dicho dispositivo de transferencia (15) se dispone ademas para hacer oscilar una herramienta de seleccion (6) en un movimiento vertical lineal durante un penodo de tiempo;- un medidor de turbidez (20) para realizar mediciones de la turbidez de un medio de suspension (14) contenido en un tubo de suspension (11) sostenido por el soporte del tubo de suspension (10) y para proporcionar un valor de medicion final que indique la turbidez medida;- un controlador (23) conectado de forma comunicativa al dispositivo de colocacion (8), el dispositivo de transferencia (15), el dispensador del medio de suspension automatico (12) y el medidor de turbidez (20) para controlar de forma automatica el movimiento del dispositivo de colocacion (8), el movimiento del dispositivo de transferencia (15), el funcionamiento del dispensador del medio de suspension automatico (12) y el funcionamiento del medidor de turbidez (20), respectivamente;- donde dicho controlador (23) se dispone para:a) determinar si el valor de medicion final se encuentra por encima de un primer valor umbral previamente almacenado en una memoria del controlador (23), en caso afirmativo, dicho controlador (23) se dispone para realizar la etapa b); o si el valor de medicion final es identico o inferior al primer valor de umbral e identico o superior al segundo valor de umbral previamente almacenado en la memoria del controlador (23), donde dicho primer valor de umbral es igual o superior al segundo valor de umbral, en caso afirmativo, dicho controlador (23) se dispone para realizar la etapa c); o si el valor de medicion final es inferior al segundo valor de umbral, en caso afirmativo, dicho controlador (23) se dispone para realizar la etapa d);5101520253035b) controlar el dispensador del medio de suspension automatico (12) para suministrar una cantidad adicional de medio de suspension (14) en el tubo de suspension (11);c) proporcionar una senal de que se puede retirar el tubo de suspension (11) con la suspension del soporte del tubo de suspension (10) para el procesamiento adicional; od) colocar dicha herramienta de seleccion adicional (7) en dicho soporte de la herramienta de seleccion (9) del dispositivo de colocacion (8); al colocar dicho dispositivo de colocacion (8) la herramienta de seleccion adicional (7) en la posicion inicial por encima de la placa de cultivo (3), hacer descender de forma automatica la herramienta de seleccion adicional (7) hacia la placa de cultivo (3) en contacto con el microorganismo (4) para seleccionar una muestra adicional de dicho microorganismo, elevar de forma automatica la herramienta de seleccion adicional (7) con dicha muestra del microorganismo desde la placa de cultivo (3) hasta la posicion de transferencia; al transferir de forma automatica dicho dispositivo de transferencia (15) dicha herramienta de seleccion adicional (7) con la muestra adicional del microorganismo desde la posicion de transferencia del dispositivo de colocacion (8) hasta una posicion por encima del tubo de suspension (11) sostenido por el soporte del tubo de suspension (10), hacer descender dicha herramienta de seleccion adicional (7) con la muestra adicional del microorganismo hacia el interior del medio de suspension (14) contenido en el tubo de suspension (11); al hacer oscilar el dispositivo de transferencia (15) la herramienta de seleccion adicional (7) en un movimiento vertical lineal durante un penodo de tiempo durante el cual la herramienta de seleccion adicional (7) con la muestra adicional de dicho microorganismo se sumerge en el medio de suspension (14); y despues de transcurrido un penodo de tiempo, elevar la herramienta de seleccion adicional (7) desde el medio de suspension (14) contenido en el tubo de suspension (11) hasta la posicion de espera; al menos despues de transcurrido el penodo de tiempo durante el cual la herramienta de seleccion adicional (7) oscila, medir la turbidez del medio de suspension (14) contenido en el tubo de suspension (11) sostenido por el soporte del tubo de suspension (10) mediante el medidor de turbidez (20) y proporcionar un valor de medicion final adicional que indique la turbidez medida; y realizar la etapa a).
- 11. Un aparato (1) para la preparacion automatica de una suspension de una muestra de microorganismos segun la reivindicacion 10, en donde el controlador (23) se dispone de manera que la etapa de medir la turbidez del medio de suspension (14) contenido en el tubo de suspension (11) sostenido por el soporte del tubo de suspension (10) mediante el medidor de turbidez (20) se realiza adicionalmente durante el penodo de tiempo durante el cual oscila la herramienta de seleccion (6), en donde el medidor de turbidez (20) se dispone para proporcionar un valor de medicion en lmea que indique la turbidez medida durante el penodo de tiempo durante el cual oscila la herramienta de seleccion (6) al controlador (23);en donde controlar el medidor de turbidez (20), de manera que medir la turbidez del medio de suspension (14) contenido en el tubo de suspension (11) sostenido por el soporte del tubo de suspension (10) mediante el medidor de turbidez (20) se inicie antes de que la herramienta de seleccion (6) se sumerja en el medio de suspension (14) contenido en el tubo de suspension (11).
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