ES2640019T3 - Dispositivo para la detección de analitos en bioensayos de afinidad - Google Patents

Abstract

Un dispositivo para la detección de analitos en bioensayos de afinidad que comprende: - al menos una porción de pared transparente (2; 93), - al menos un ahuecamiento de prueba (6) adaptado para recibir al menos una tira reactiva (7) y dispuesto de manera tal que dicha tira reactiva (7) sea visible a través de la porción de pared transparente (2; 93), - al menos una cavidad (3; 911) adaptada para recibir un recipiente (4) conteniendo una muestra fluida, estando dicha cavidad (3; 911) en comunicación fluida con dicho al menos un ahuecamiento de prueba (6), y - medios de perforación (5; 95) dispuestos en correspondencia con dicha al menos una cavidad (3; 911), de tal manera que al presionar hacia abajo un recipiente (4) hacia dentro la cavidad (3; 911), hacia el final del movimiento de presión hacia abajo, una porción inferior del recipiente (4) se apoya contra los medios de perforación (5; 95) con lo que el recipiente (4) es perforado y al menos una porción de la muestra es liberada del recipiente (4) y alcanza el ahuecamiento de prueba (6), en el que la porción de pared transparente (2; 93) está dispuesta en un lado del dispositivo que es opuesto a aquel en el cual se proporciona la al menos una cavidad (3; 11); en el que la presencia de dicha porción de pared transparente (2; 93) a través de la cual la tira reactiva (7) es visible permite leer los resultados desde el exterior del dispositivo.

Description

Dispositivo para la deteccion de analitos en bioensayos de afinidad

5 La presente invencion se refiere a dispositivos para analizar una muestra de fluido y en concreto a dispositivos para la deteccion de analitos en bioensayos de afinidad. La invencion se refiere ademas al uso de tales dispositivos para la deteccion de analitos de una reaccion de amplificacion del acido nucleico como la reaccion en cadena de la polimerasa (PCR).

10 Ademas, la invencion se refiere a kits de deteccion que comprenden dichos dispositivos y una tira reactiva.

ESTADO DE LA TECNICA

El analisis de muestras biologicas relevantes para el diagnostico para la deteccion de patogenos infecciosos esta 15 adquiriendo importancia en los ultimos anos. Uno de los metodos mas ampliamente utilizados para la identificacion de patogenos implica el uso de la Reaccion en Cadena de la Polimerasa (PCR) para la amplificacion de fragmentos deseados de acidos nucleicos que posteriormente pueden ser detectados utilizando cualquier ensayo conocido.

La amplificacion por PCR es muy bien conocida por su velocidad, facilidad de uso, sensibilidad y robustez, puesto 20 que las muestras de baja calidad tambien pueden ser analizadas. La amplificacion por PCR de acidos nucleicos de objetivo especfficos, por ejemplo un gen o un fragmento del gen de un patogeno en concreto, es habitualmente seguida por la deteccion de los productos amplificados, por ejemplo, por medio de un bioensayo de afinidad/union.

Por bioensayo afinidad o union se quiere decir un tipo de ensayo para detectar bioanalitos por medio de la 25 interaccion especffica de una fraccion de fijacion con el bioanalito objetivo, siendo tales fracciones de fijacion moleculas o segmentos de molecula capaces de unirse especfficamente al bioanalito objetivo. La naturaleza del bioanalito a menudo determina la molecula de union a ser utilizada en su deteccion. Habitualmente, los bioensayos de afinidad o de union utilizan un soporte solido en el cual se deposita la fraccion de fijacion. Estos ensayos de union / afinidad son ensayos muy conocidos utilizados en biotecnologfa.

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Un inconveniente muy conocido del diagnostico de patogenos infecciosos por medio de PCR es que la contaminacion puede producirse facilmente lo cual conduce a falsos positivos. Se sabe que una de las principales causas de resultados falsos positivos se refiere a la contaminacion de los productos de amplificacion de PCR, debido a su manipulacion antes de o durante la deteccion. Por tanto, es deseable reducir tal riesgo de 35 contaminacion.

Un grado de reduccion de falsos positivos se ha obtenido mediante la realizacion de reacciones de PCR en ambientes cerrados combinando los procesos de amplificacion y deteccion. Por ejemplo, el documento US2010291668 divulga tal dispositivo. Otros sistemas pueden comprender un elemento que permite la fijacion al 40 tubo de reaccion, una vez que la PCR se ha completado, en el cual dicho elemento y el tubo de reaccion pueden estar conectados entre si de forma estanca.

Mas aun, los dispositivos de deteccion portatiles tambien se estan desarrollando, los cuales mantienen la muestra en un entorno relativamente cerrado, son relativamente faciles de manipular y son relativamente economicos. Por 45 ejemplo EP2048245 y US20090181388 describen tal dispositivo, pero este tipo de solucion puede ser relativamente engorrosa de manejar y por lo tanto el proceso de deteccion puede ser costoso de automatizar. Ademas, dichos dispositivos no son muy versatiles cuando hay mas de una muestra amplificada para ser detectada, especialmente, al mismo tiempo.

50 Por lo tanto existe una necesidad de proporcionar un dispositivo para la deteccion de analitos, y en particular los productos de amplificacion de PCR, en bioensayos de afinidad que sea simple de operar y economico a la vez que evite la contaminacion, y que tambien permita una automatizacion facil del proceso de deteccion.

DESCRIPCION DE LA INVENCION 55

La presente invencion se refiere de manera general a un dispositivo para la deteccion de analitos en bioensayos de afinidad segun se define en la reivindicacion 1. El dispositivo comprende al menos una porcion de pared transparente, al menos un ahuecamiento de prueba adaptado para recibir al menos una tira reactiva y dispuesto de tal manera que dicha tira reactiva sea visible a traves de la porcion de pared transparente, al menos una cavidad 60 adaptada para recibir un recipiente que contiene una muestra fluida, estando dicha cavidad en comunicacion fluida con dicho al menos un ahuecamiento de prueba, y medios de perforacion dispuestos en correspondencia con dicha al menos una cavidad, de tal manera que al presionar hacia abajo un recipiente hacia dentro de la cavidad, hacia el final del movimiento de presion hacia abajo, una porcion inferior del recipiente se apoya contra los medios de

perforacion con lo que el recipiente es perforado y al menos una porcion de la muestra es liberada del recipiente y alcanza al ahuecamiento de prueba; en el que la porcion de pared transparente esta dispuesta en un lado del dispositivo que es opuesto a aquel en el cual se proporciona la al menos una cavidad; en el que la presencia de dicha porcion de pared transparente a traves de la cual es visible la tira reactiva permite leer los resultados desde 5 afuera del dispositivo. El dispositivo funciona como una unidad de deteccion sustancialmente cerrada en combinacion con una tira reactiva para la deteccion de los analitos, por ejemplo analitos de un acido nucleico amplificado. La contaminacion de la muestra puede ser evitada debido a que el recipiente es perforado solo una vez que esta dentro del dispositivo, y es entonces cuando la muestra es liberada en la tira reactiva. La contaminacion de la muestra puede ser evitada, ademas, debido a que la insercion del recipiente en el dispositivo no implica la 10 apertura del dispositivo. El dispositivo puede estar hecho de una sola pieza y cuando se fabrica a partir de varias piezas puede estar sellado. El dispositivo no requiere ninguna disposicion especial o manipulacion, sino solo la insercion del recipiente con la muestra en la cavidad. El recipiente es presionado hacia dentro de la cavidad, y hacia el final del movimiento, la porcion inferior del recipiente se apoya contra la cuchilla u otros medios de perforacion, y por lo tanto, se perfora. Esto significa que es el mismo movimiento de introduccion del recipiente en la cavidad, es 15 decir, el movimiento para presionar el recipiente hacia abajo dentro de la cavidad, el que provoca la perforacion del recipiente. Esto es una consecuencia directa de disponer los medios de perforacion en correspondencia con la cavidad de manera tal que al insertar el recipiente en la cavidad el recipiente es perforado. De esta manera, es bastante facil de manejar y el proceso de deteccion puede ser automatizado facilmente dado que la unica accion que necesita automatizacion es en una direccion, la direccion de insercion del recipiente con la muestra en el dispositivo 20 o, lo que es lo mismo, la direccion de presionar hacia abajo el recipiente dentro de la cavidad. Por tanto, tambien es una solucion economica.

Ademas, la presencia de una porcion de pared transparente a traves del cual la tira reactiva es visible permite la lectura de los resultados desde fuera del dispositivo. La porcion de pared transparente esta dispuesta en un lado del 25 dispositivo que es opuesto a aquel en el cual puede proporcionarse la al menos una cavidad. De esta manera, el dispositivo se puede disponer facilmente por ejemplo en un bloque termico (termobloque), a traves del cual la temperatura puede ser controlada relativamente facil. Esto puede ser de interes concreto en aplicaciones en las cuales la reaccion de deteccion es una hibridacion de ADN en la cual el control de la temperatura puede ser importante.

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Mas aun, en algunas aplicaciones en cuales la tira reactiva puede comprender un gran numero de lfneas o alternativamente una matriz de puntos, la porcion de pared transparente puede ser colocada facilmente en un escaner para la interpretacion automatica de los resultados.

35 En algunas realizaciones, el dispositivo puede comprender, ademas, al menos una abertura dispuesta en una pared del ahuecamiento de prueba, opuesta a la porcion de pared transparente. La al menos una abertura puede estar dispuesta para permitir la comunicacion fluida entre el ahuecamiento de prueba y un espacio hueco interno del dispositivo. Tales aberturas mejoran la lectura de la tira de reactiva ya que cualquier evaporacion de la muestra liberada puede pasar a traves de las aberturas al espacio hueco interno y expandirse, en lugar de condensarse en la 40 porcion de pared transparente del ahuecamiento de prueba. Estas realizaciones son especialmente adecuadas para reacciones que tienen lugar a alta temperatura tales como, por ejemplo, la hibridacion aDN-ADN.

En algunas realizaciones, el dispositivo puede comprender dos o mas cavidades adaptadas para recibir un recipiente que contiene una muestra. De esta manera, dos o mas muestras, por ejemplo, muestras de productos de 45 amplificacion de PCR, se pueden detectar al mismo tiempo y en la misma tira reactiva. En algunos de estos casos, la reaccion de deteccion puede ser una hibridacion de ADN y la tira reactiva puede estar provista de reactivos qufmicos deshidratados utilizados para la reaccion de hibridacion. Estos tipos de ensayos, llamados "ensayos multitest", son de interes especial en aquellos casos en los cuales serfa deseable detectar mas de un producto de amplificacion de PCR puesto que mezclar diversos productos de amplificacion de PCR puede ir, al menos en parte, en contra de su 50 eficiencia. En realizaciones alternativas, las cavidades adicionales pueden ser utilizadas para los reactivos que pueden ayudar con la reaccion de deteccion. De esta manera, tras la liberacion de los fluidos de los recipientes que pueden estar insertados en las cavidades, los fluidos pueden ponerse en contacto con la tira reactiva simultaneamente o en una manera escalonada. Estos reactivos se pueden utilizar, por ejemplo, para mejorar el rendimiento de reaccion. Por ejemplo, el uso de una solucion de lavado astringente puede mejorar la especificidad 55 de la prueba, lo que reduce la serial de fondo. En otro ejemplo, los conjugados o los reactivos de desarrollo pueden anadirse utilizando la segunda (o tercera) cavidad, despues de la introduccion del primer recipiente con la muestra en la primera cavidad.

En algunas de estas realizaciones que comprenden dos o mas cavidades, al menos dos cavidades pueden estar 60 dispuestas en un angulo y pueden ser convergentes hacia la misma zona del ahuecamiento de prueba. De esta manera, los fluidos contenidos en cada recipiente insertado en cada cavidad pueden reaccionar simultaneamente en una tira reactiva proporcionada en el ahuecamiento de prueba. En otras realizaciones, al menos dos cavidades pueden estar dispuestas en un angulo y pueden estar dirigidas hacia zonas diferentes del ahuecamiento de prueba.

De esta manera, las reacciones de los fluidos contenidos en los recipientes insertados en estas cavidades pueden ser consecutivas. Esta alternativa es especialmente interesante en aquellos casos en los cuales las cavidades adicionales contienen los reactivos.

5 En algunas realizaciones, al menos una cavidad puede comprender una porcion de protuberancia dispuesta en una pared de la cavidad de tal manera que cuando el recipiente que contiene una muestra se inserta en la cavidad, la porcion de protuberancia genera un incremento de presion dentro del recipiente. Tal incremento de presion dentro del recipiente asegura la liberacion de la muestra fuera del recipiente y hacia el ahuecamiento de prueba una vez que el recipiente introducido en la cavidad y es por tanto perforado.

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En algunas realizaciones, el dispositivo puede ser un dispositivo desechable de un solo uso y la unidad desechada puede ser dejada en un lugar seguro.

Otro aspecto se refiere al uso de un dispositivo sustancialmente segun se ha descrito anteriormente para la 15 deteccion de analitos de una reaccion de amplificacion del acido nucleico.

En un aspecto adicional se proporciona un kit de deteccion que comprende un dispositivo sustancialmente segun se ha descrito anteriormente y una tira reactiva. La tira reactiva puede tener al menos una zona de ensayo que comprende los reactivos qufmicos deshidratados utilizados para los bioensayos de afinidad.

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En algunas realizaciones, la tira reactiva puede comprender ademas una zona de control y la zona de ensayo puede comprender una almohadilla que tiene los reactivos qufmicos deshidratados utilizados para la reaccion de hibridacion. En otros casos, tambien puede comprender ademas una zona de control y la zona de ensayo puede comprender los reactivos qufmicos deshidratados utilizados para un inmunoensayo.

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Otros objetos, ventajas y caracterfsticas de realizaciones de la invencion seran evidentes para aquellos expertos en la materia examinando la descripcion, o se pueden aprender por la practica de la invencion.

BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS 30

A continuacion se describen realizaciones particulares de la presente invencion por medio de ejemplos no limitantes, con referencia a los dibujos adjuntos, en los cuales:

La figura 1 muestra una vista explosionada de un dispositivo de acuerdo con una primera realizacion;

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La figura 2 muestra una vista lateral del dispositivo de la figura 1;

La figura 3 muestra una vista en perspectiva del dispositivo de la figura 1;

40 La figura 4 muestra una vista en planta de un dispositivo de acuerdo con una segunda realizacion;

La figura 5 muestra una vista explosionada del dispositivo de la figura 4;

Las figuras 6a y 6b muestran, respectivamente, una vista frontal y una vista lateral del dispositivo de la figura 4;

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La figura 7 muestra una vista inferior del dispositivo de la figura 4; y Las figuras 8a a 8f muestran otra realizacion.

50 DESCRIPCION DETALLADA DE REALIZACIONES

La figura 1 muestra una vista explosionada de un dispositivo de acuerdo con una primera realizacion. La figura 1 muestra un dispositivo que puede estar hecho a partir de dos primeros cuerpos 1 y una cubierta 2. Cada primer

cuerpo 1 puede tener una primera concavidad 10 y una segunda concavidad 11. Los dos primeros cuerpos 1

55 pueden unirse entre sf con sus concavidades 10 y concavidades 11 coincidentes respectivamente (ver figura 3). De esta manera una cavidad (ver figura 3) puede ser definida por las dos primeras concavidades 10 y un alojamiento 9 (ver figura 2) puede ser definido por las dos segundas concavidades 11. En tal alojamiento 9 pueden disponerse medios de perforacion, por ejemplo, una cuchilla 5.

60 Mas aun, las segundas concavidades 11 pueden estar dispuestas en correspondencia con las primeras concavidades 10 de tal manera que la cuchilla 5 dispuesta en el alojamiento 9 puede proyectar dentro de la cavidad 3 y puede perforar un recipiente 4 cuando es insertado en la misma. De esta manera, con una sola accion o movimiento, es decir, insertando el recipiente dentro de la cavidad, el recipiente se coloca al mismo tiempo en la

cavidad y se perfora, y asf la muestra puede liberarse. Ademas, este unico movimiento puede realizarse en una unica direccion: la direccion de presion hacia abajo. Esto significa que el dispositivo es bastante simple de operar y que el proceso de deteccion, incluyendo la introduccion y perforacion de recipientes, puede ser facilmente automatizado.

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Ademas, la figura 1 muestra que la cubierta 2, que puede ser una cubierta transparente, puede comprender una tercera concavidad (vease la flecha 21). Cuando la cubierta transparente 2 se monta junto con los dos primeros cuerpos 1, tal tercera concavidad 21 puede definir un ahuecamiento de prueba (ver figura 2) en comunicacion fluida con la cavidad 3 definida por las dos primeras concavidades 10. Puede disponerse una tira reactiva 7 en el 10 ahuecamiento de prueba. La tira reactiva 7 puede estar dispuesta de tal manera que puede ser visible desde el exterior del dispositivo a traves de la cubierta transparente 2. En implementaciones alternativas, se puede disponer mas de una tira reactiva en el ahuecamiento de prueba. Debe entenderse que en otras implementaciones, se pueden prever otras maneras de formar el ahuecamiento de prueba, por ejemplo, salientes desde la cubierta como se muestra en el ejemplo de las figuras 8a - 8f.

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La figura 2 muestra una vista lateral de la figura 1 en la cual un primer cuerpo se ha hecho transparente con el fin de mostrar el interior del dispositivo. La figura 2 muestra que el ahuecamiento de prueba 6 pueden estar en comunicacion fluida con la cavidad 3 y que la cuchilla 5 puede perforar una porcion inferior de un recipiente 4 insertado en la cavidad 3. Esto significa que al insertar el recipiente 4 en la cavidad 3, el recipiente 4 puede por tanto 20 perforarse y al menos una porcion de la muestra es liberada del recipiente 4 y alcanza una tira reactiva 7 que puede estar dispuesta en el ahuecamiento de prueba 6.

La figura 3 muestra una vista en perspectiva de la figura 1. La figura 3 muestra una cavidad 3 que puede estar definida por las dos primeras concavidades 10. Un recipiente 4 que contiene una muestra de fluido puede ser 25 insertado en la cavidad 3.

La figura 4 muestra una vista en planta de un dispositivo de acuerdo con una segunda realizacion. Los mismos numeros de referencia se utilizaran para las partes coincidentes. La figura 4 muestra un dispositivo que puede tener dos cavidades 31 adaptadas para recibir un recipiente 4 que contiene una muestra de fluido. A diferencia del 30 ejemplo de la figura 1, el ejemplo de la figura 4 muestra un dispositivo que puede comprender un segundo cuerpo 8 que se puede montar entre los dos primeros cuerpos 1. Tal segundo cuerpo 8 puede tener dos cuartas concavidades 81. Cada cuarta concavidad 81 puede coincidir con una primera concavidad de los primeros cuerpos 1. De esta manera, cuando los cuerpos 1 y 8 estan montados junto con la cubierta (ver figura 5), se pueden definir dos cavidades 31 en lugar de solo una como en el ejemplo de la figura 1. Se debe entender que en otras 35 implementaciones mas concavidades pueden estar presentes definiendo mas cavidades. El dispositivo tambien puede hacerse en una sola pieza o de varias piezas o cuerpos sustancialmente segun lo descrito anteriormente.

La figura 5 muestra una vista explosionada de la figura 4. La figura 5 muestra un segundo cuerpo 8, que puede comprender dos cuartas concavidades 81. Cada cuarta concavidad 81 junto con cada primera concavidad 10 40 provista en los dos primeros cuerpos 1 puede definir una cavidad (Ver figura 4). La figura 5 muestra que las cuartas concavidades 81 pueden estar cada una en correspondencia con una cuchilla 51 de tal manera que cuando un recipiente 4 se inserta en cada cavidad 31 una cuchilla 51 se proyecta en cada cavidad 31 y perfora una porcion inferior de cada recipiente 4.

45 Las figuras 6a y 6b muestran, respectivamente, una vista frontal y una vista lateral de la figura 4 en las cuales los primeros cuerpos se han hecho transparentes con el fin de mostrar el interior del dispositivo.

La figura 6a muestra dos recipientes 4 que pueden ser insertados en las dos cavidades (ver figura 4). Un eje de simetrfa 41 de cada recipiente 4 muestra que cuando estan insertados en las cavidades pueden estar dispuestos en 50 un angulo a y pueden ser convergentes hacia la misma porcon de la tercera concavidad 21 provista en la cubierta 2 en la cual puede haber dispuesta una tira reactiva. De esta manera, dos muestras diferentes contenidas en dos recipientes 4 diferentes insertados en las dos cavidades pueden fluir hacia la misma zona y pueden reaccionar de forma simultanea en la tira reactiva 7. En una realizacion preferida, en un ejemplo de un dispositivo que tiene dos cavidades, el angulo a puede ser alrededor de 30 °.

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En realizaciones alternativas, las dos cavidades pueden estar dispuestas en un angulo y pueden estar dirigidas hacia zonas diferentes del ahuecamiento de prueba en el cual puede disponerse una tira reactiva. De esta manera, las reacciones de los fluidos contenidos en los recipientes insertados en las cavidades pueden ser consecutivas y una muestra se puede hacer reaccionar con reactivos diferentes consecutivamente.

La figura 6b muestra que las cuchillas 51 (solo se muestra una) estan dispuestas con una inclinacionp con respecto a la horizontal. Asf las cuchillas 51 pueden perforar una porcion inferior de un recipiente 4 cuando es insertado en cada cavidad 31. De esta manera, al menos una porcion de muestra es liberada del recipiente 4 y alcanza una tira

reactiva 7 que puede estar dispuesta en el ahuecamiento de prueba. En una realizacion preferida, en un ejemplo de un dispositivo que tiene dos cavidades, el angulo p puede ser alrededor de 13 °.

La figura 7 muestra una vista desde abajo del dispositivo de la figura 4. La tira reactiva 7 puede ser visible desde el 5 exterior del dispositivo a traves de la cubierta transparente 2. Mas aun, la figura 7 muestra los dos recipientes 4 que convergen hacia la misma porcion del ahuecamiento de prueba 6. La cubierta 2 puede ser una superficie plana sin protuberancias en ella y por lo tanto puede ser colocada facilmente en un escaner (no mostrado) para la interpretacion automatica de los resultados. En realizaciones alternativas, otros tipos de lectores se pueden utilizar, portatiles o no, o el escaner puede combinarse con un ordenador que puede proporcionar resultados cuantitativos o 10 cualitativos.

Ademas, la cubierta puede ser colocada facilmente por ejemplo en un bloque termico (termobloque) a traves del cual la temperatura puede ser relativamente facil de controlar. Esto puede ser de interes concreto en aplicaciones en las cuales la reaccion de deteccion es una hibridacion de ADN en la cual el control de la temperatura puede ser 15 importante.

En algunas de las realizaciones anteriores, el bioanalito a ser detectado puede ser una molecula de ADN o de ARN. En algunos de estos casos, puede ser el producto de amplificacion de una reaccion de PCR. En este caso, la molecula de union puede a menudo ser una sonda de hibridacion, es decir, un fragmento de ADN o ARN de longitud 20 variable (normalmente 100-1000 bases), el cual puede detectar la presencia de una secuencia objetivo que es complementaria a la secuencia en la sonda. Con ello la sonda se hibrida al acido nucleico (ADN o ARN) cuya secuencia de base permite el apareamiento sonda-objetivo base debido a la complementariedad entre la sonda y el objetivo.

25 En otros, el bioanalito a ser detectado puede ser una protefna y por lo tanto la molecula de union a ser utilizada puede ser un anticuerpo. Los bioensayos de afinidad que utilizan anticuerpos o moleculas que tienen funciones del tipo de las de los anticuerpos tales como aptameros, son llamados generalmente inmunoensayos. Un ejemplo tfpico de un inmunoensayo es un ensayo por inmunoabsorcion ligado a enzimas (ELISA).

30 La figura 8a muestra una vista en perspectiva de un dispositivo de acuerdo con una realizacion adicional. La figura 8b muestra una vista lateral, la figura 8c una vista en seccion transversal a lo largo de la lfnea A-A de la figura 8b, la figura 8d muestra una vista inferior del dispositivo, la figura 8e muestra una seccion longitudinal a lo largo de la lfnea B-B de la figura 8d y la figura 8f muestra una seccion a lo largo de la lfnea C-C de la figura 8d. Se utilizaran los mismos numeros de referencia para las partes coincidentes.

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Las figuras 8a-8c, 8e y 8f muestran un dispositivo que puede estar hecho de un primer cuerpo 91 y un segundo cuerpo 92. El primer cuerpo 91 puede estar dispuesto de una manera sustancialmente apilada sobre el segundo cuerpo 92. El primer cuerpo 91 puede comprender dos cavidades 911 adaptadas para recibir cada una de ellas un recipiente 4 que contiene una muestra de fluido.

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La figura 8d muestra que el segundo cuerpo 92 puede comprender, ademas, un orificio 923 en correspondencia con las cavidades 911 del primer cuerpo 91 para permitir la insercion del recipiente y la comunicacion fluida entre las cavidades 911 y un ahuecamiento de prueba 6 puede ser definido por el segundo cuerpo 92 y una cubierta transparente 93.

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Como se muestra en la figura 8c, el primer cuerpo 91 y el segundo cuerpo 92 pueden comprender cada uno una o mas muescas 912 y 922 para alojar una o mas cuchillas 95. Las cuchillas 95 pueden ademas proyectarse en las cavidades 911 y el orificio 923 perforando por tanto un recipiente 4 cuando es presionado hacia abajo para su insercion.

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La figura 8c muestra ademas que la cubierta transparente 93 puede alojarse en una concavidad 921 del segundo cuerpo 92. Como se muestra en la figura 8d, la cubierta transparente 93 puede permitir una vista desde el fondo del segundo cuerpo 92 cuando no hay una tira de prueba alojada en el ahuecamiento de prueba 6 y, cuando hay una tira de prueba (no mostrada) alojada en el ahuecamiento de prueba, puede ser lefda desde el exterior a traves de la 55 cubierta transparente. El ahuecamiento de prueba 6 puede hacerse, por ejemplo, a partir de una protrusion continua 931 (vease tambien la figura 8f) de la cubierta transparente 93.

Las figuras 8d a 8f muestran que las aberturas 96 pueden estar dispuestas en una pared del ahuecamiento de prueba 6, opuesta a la cubierta transparente 93, para reducir la condensacion dentro del ahuecamiento de prueba 6. 60 Ademas, las aberturas 96 pueden estar dispuestas para permitir la comunicacion de fluida entre el ahuecamiento de prueba 6 y un espacio hueco interno 97 del dispositivo dispuesto entre el primer cuerpo 91 y el segundo cuerpo 92 (vease la figura 8f). De esta manera, cualquier evaporacion de la muestra liberada puede pasar a traves de las

aberturas 96 hacia el espacio hueco interno 97 y expandirse, en lugar de condensarse en la cubierta transparente 93 del ahuecamiento de prueba.

En algunas realizaciones, un volumen del espacio hueco interno puede ser mayor que el del ahuecamiento de 5 prueba. Esto mejora el paso de la evaporacion de la muestra hacia el espacio hueco interno.

En las figuras 8d y 8e solo se muestran tres aberturas 96, pero tambien es posible otro numero e incluso es posible solo una abertura.

10 La realizacion representada en las figuras 8a - 8f es especialmente adecuada para reacciones que tienen lugar a temperatura elevada, es decir, 37-60°C, por ejemplo, para la deteccion de productos de amplificacion de acido nucleico (PCR, SDA, TMA) detectando la reaccion de hibridacion ADN- ADN (no hapteno-antihapteno).

Aunque en el ejemplo representado en las figuras 8a - 8f estan presentes dos cavidades, debe entenderse que en 15 otras realizaciones, tambien se pueden prever otro numero de cavidades e incluso solo se puede proporcionar una cavidad. El dispositivo tambien puede estar hecho de una sola pieza o de varias piezas / cuerpos sustancialmente segun se ha explicado anteriormente.

En algunas realizaciones, un dispositivo sustancialmente segun lo descrito anteriormente puede comprender 20 ademas una porcion de protuberancia dispuesta en una pared de la al menos una cavidad. De esta manera, cuando el recipiente que contiene la muestra se inserta en la cavidad de la porcion de protuberancia puede generar un incremento de presion dentro del recipiente. El tamano de la al menos una cavidad puede depender del tamano del recipiente que contiene la muestra que se utilizara. De esta manera, algo de presion puede tener que ser ejercida sobre el recipiente con el fin de encajarlo en la al menos una cavidad.

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En algunas realizaciones, el recipiente que contiene una muestra puede ser cualquier recipiente cerrado, tal como tubos de microcentrifugacion, por ejemplo, un recipiente con un fondo conico y un tapon integral encajable conocido generalmente como Eppendorf. Una ventaja de un dispositivo sustancialmente segun lo descrito anteriormente utilizado en combinacion con un recipiente tal como un Eppendorf se refiere a evitar la necesidad de abrir el 30 recipiente con la muestra despues de, por ejemplo, haber llevado a cabo la reaccion de amplificacion y antes de o durante la deteccion. El dispositivo solo necesita que se inserte en la al menos una cavidad el Eppendorf que contiene la muestra amplificada. Esto minimiza las posibilidades de contaminacion de la muestra y, por lo tanto los falsos positivos en el analisis.

35 En algunas realizaciones, la tira reactiva puede ser reemplazada por cualquier soporte que tenga elementos de union tal como un sustrato que tiene una superficie que contiene una o mas unidades de captura sintetica capaces de unirse especfficamente con una unidad de union sintetica de un analito objetivo. Por ejemplo, el sustrato puede incluir una pluralidad de unidades de captura sinteticas que se colocan sobre el substrato de manera de formar una o mas lfneas dirigibles. Tal substrato puede ser colocado en el ahuecamiento de prueba del dispositivo a fin de evitar 40 el movimiento del sustrato, aunque no necesariamente tiene que estar recubierto dentro del ahuecamiento de prueba. Pueden utilizarse una variedad de materiales como sustrato; tales materiales son conocidos por los expertos en la tecnica.

En algunas realizaciones, el dispositivo puede comprender ademas un material de sellado dispuesto en parte de su 45 superficie exterior o entre los diferentes cuerpos que forman el dispositivo. Esto puede ayudar a garantizar su cierre.

A pesar que esta invencion ha sido divulgada en el contexto de algunas realizaciones y ejemplos preferidos, los expertos en la material entenderan que la presente invencion se extiende mas alla de las realizaciones especfficamente reveladas a otras realizaciones y/o usos alternativos de la invencion y a las modificaciones 50 evidentes y equivalentes de la misma. Mas aun, la presente invencion cubre todas las posibles combinaciones de las realizaciones particulares descritas. Asf, se pretende que el alcance de la presente invencion no se este limitado por la divulgacion de las realizaciones particulares descritas anteriormente, sino que dicho alcance venga determinado por una lectura razonable de las reivindicaciones que siguen.

Claims (12)

1. Un dispositivo para la deteccion de analitos en bioensayos de afinidad que comprende:

5 - al menos una porcion de pared transparente (2; 93),

- al menos un ahuecamiento de prueba (6) adaptado para recibir al menos una tira reactiva (7) y

dispuesto de manera tal que dicha tira reactiva (7) sea visible a traves de la porcion de pared transparente (2; 93),

- al menos una cavidad (3; 911) adaptada para recibir un recipiente (4) conteniendo una muestra fluida, estando dicha cavidad (3; 911) en comunicacion fluida con dicho al menos un ahuecamiento de prueba (6), y

10 - medios de perforacion (5; 95) dispuestos en correspondencia con dicha al menos una cavidad (3;

911), de tal manera que al presionar hacia abajo un recipiente (4) hacia dentro la cavidad (3; 911), hacia el final del movimiento de presion hacia abajo, una porcion inferior del recipiente (4) se apoya contra los medios de perforacion (5; 95) con lo que el recipiente (4) es perforado y al menos una porcion de la muestra es liberada del recipiente (4) y alcanza el ahuecamiento de prueba (6), en el que la porcion de pared transparente (2; 93) esta dispuesta en un lado 15 del dispositivo que es opuesto a aquel en el cual se proporciona la al menos una cavidad (3; 11); en el que la presencia de dicha porcion de pared transparente (2; 93) a traves de la cual la tira reactiva (7) es visible permite leer los resultados desde el exterior del dispositivo.

2. Dispositivo segun la reivindicacion 1, que comprende, ademas, una o mas aberturas (96) en una pared 20 del ahuecamiento de prueba (6) que es opuesta a la porcion de pared transparente (2; 93), estando las aberturas

(96) dispuestas para permitir comunicacion fluida entre el ahuecamiento de prueba (6) y un espacio hueco interior

(97) del dispositivo.

3. Dispositivo segun la reivindicacion 2, en el que un volumen del espacio hueco interior (97) es mayor 25 que aquel del ahuecamiento de prueba (6).

4. Dispositivo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 3, que comprende dos o mas cavidades (911) adaptadas para recibir un recipiente que contiene una muestra.

30 5. Dispositivo segun la reivindicacion 4, en el que al menos dos cavidades (911) estan dispuestas en

angulo y son convergentes hacia la misma zona del ahuecamiento de prueba (6).

6. Dispositivo segun la reivindicacion 4, en el que al menos dos cavidades (911) estan dispuestas en angulo y son dirigidas hacia zona distintas del ahuecamiento de prueba (6).

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7. Dispositivo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en el que al menos una cavidad (3; 911) comprende una porcion de protuberancia dispuesta en una pared de la cavidad de tal manera que cuando el recipiente (4) que contiene una muestra es insertado en la cavidad (3; 911), la porcion de protuberancia genera un incremento de presion dentro del recipiente (4).

40

8. Dispositivo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en el que los medios de perforacion (5; 95) son una o mas cuchillas dispuestas de manera tal que cortan una porcion del fondo del recipiente (4).

9. Dispositivo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1-8 que comprende al menos dos cuerpos (1 45 2; 8) que tienen concavidades (10, 11; 81) que definen la al menos una cavidad (3; 31) adaptada para recibir un

recipiente (4) y el al menos un ahuecamiento (9) para alojar a los medios de perforacion (5; 95).

10. Dispositivo segun la reivindicacion 9, que comprende ademas una cubierta transparente (2; 3) que tiene otra concavidad (21; 921) dispuesta de manera tal que el ahuecamiento de prueba (6) esta definido entre los

50 dos cuerpos (1; 92) y la otra concavidad de la cubierta transparente.

11. Dispositivo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1-10, en el que es un dispositivo desechable de un solo uso.

55 12. Kit de deteccion que comprende un dispositivo segun cualquiera de las reivindicaciones 1 - 11 y una

tira de ensayo que tiene al menos un area de ensayo que comprende reactivos qufmicos secos usados para bioensayos de afinidad.

13. Kit de deteccion segun la reivindicacion 12, en el que la tira de ensayo comprende ademas una zona

60 de control y la zona de ensayo comprende una almohadilla que tiene los reactivos qufmicos secos usados para la reaccion de hibridacion.

14. Uso de un dispositivo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1-11 para la deteccion de analitos

de una reaccion de amplificacion de acido nucleico.