ES2608483T3

ES2608483T3 - Método mejorado de administración de beta-hidroxi-beta-metilbutirato (HMB)

Info

Publication number: ES2608483T3
Application number: ES10838355.5T
Authority: ES
Inventors: John Rathmacher; John Fuller; Shawn Baier; Steve Nissen; Naji Abumrad
Original assignee: Metabolic Technologies LLC
Current assignee: Metabolic Technologies LLC
Priority date: 2009-12-18
Filing date: 2010-12-20
Publication date: 2017-04-11
Anticipated expiration: 2030-12-20
Also published as: CN102762097A; CA2784836A1; CN102762097B; US20120053240A1; JP2016026181A; PT2512236T; HUE032486T2; DK2512236T3; EP2512236A1; PL2512236T3; EP2512236B1; EP2512236A4; CA2784836C; JP6077857B2; WO2011075741A1; JP2013515009A

Abstract

Una composición que comprende ácido beta-hidroxi-beta-metilbutírico (HMB) en forma de ácido libre (ácido HMB) para uso en la mejora de la efectividad de HMB tras la administración, en comparación con la administración de una dosificación similar de una composición HMB de sal de calcio en la disminución del daño muscular en el músculo sometido a estrés, la disminución del daño muscular en el músculo sometido a daño, mejorando la respuesta inmune de una persona o disminuyendo la emaciación asociada a la enfermedad.

Description

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DESCRIPCION

Metodo mejorado de administracion de beta-hidroxi-beta-metilbutirato (HMB)

Esta solicitud reivindica prioridad a la Solicitud de Patente de Estados Unidos con numero de serie 61/287,857 presentada el 18 de diciembre de 2009.

Campo de la invencion

La invencion se refiere en general a un sistema de suministro mas eficiente y mas efectivo de p-hidroxi-p- metilbutirato (HMB) y mas espedficamente a la administracion de acido libre de HMB dando como resultado una forma mas eficiente y mas efectiva de administrar HMB durante la administracion de una dosificacion similar de la forma de sal de calcio de HMB (CaHMB).

Antecedentes de la invencion

Se ha encontrado que HMB es util dentro del contexto de una variedad de aplicaciones. Espedficamente, en la Patente de Estados Unidos No. 5,360,613 (Nissen), se describe que HMB es util para reducir los niveles sangumeos de colesterol total y colesterol de lipoprotemas de baja densidad. En la patente de Estados Unidos No. 5,348,979 (Nissen et al.), se describe que HMB es util para promover la retencion de nitrogeno en humanos. La Patente de Estados Unidos No. 5,028,440 (Nissen) discute la utilidad de HMB para incrementar el desarrollo de tejido magro en animales. Tambien, en la Patente de Estados Unidos No. 4,992,470 (Nissen), se describe que HMB es efectiva para potenciar la respuesta inmune de mairnferos. La Patente de Estados Unidos No. 6,031,000 (Nissen et al.) describe el uso de HMB y al menos un aminoacido para tratar la emaciacion asociada a la enfermedad. En la Patente de los Estados Unidos No. 6,103,764, se describe HMB como para incrementar la capacidad aerobica del musculo de un animal sin un incremento sustancial en la masa del musculo. Ademas, se ha descrito que HMB es util para mejorar la percepcion del humano de su estado emocional en la Patente de Estados Unidos No. 6,291,525.

Se ha demostrado que HMB tiene efectos positivos sobre el mantenimiento y el incremento de la masa muscular magra en la caquexia por cancer y la emaciacion por SIDA. Ademas, se observa un efecto positivo sobre el dano muscular y la respuesta inflamatoria resultante provocada por el ejercicio que conduce a mialgia muscular, perdida de fuerza y un incremento de citoquinas proinflamatorias con el uso de HMB.

Se ha observado previamente que HMB solo o en combinacion con otros aminoacidos es un suplemento efectivo para restaurar la fuerza muscular y la funcion en atletas jovenes. Ademas, se ha observado que el HMB en combinacion con dos aminoacidos, arginina y lisina, es efectivo para incrementar la masa muscular en personas mayores.

HMB es un metabolito activo del aminoacido leucina. El uso de HMB para suprimir la proteolisis se origina en las observaciones de que la leucina tiene caractensticas de ahorro de protemas (18, 24). El aminoacido esencial leucina puede ser usado bien sea para la smtesis de protemas o transaminado al a-cetoacido (a-cetoisocaproato, KIC) (24). En una ruta, HMB se forma en el dgado a traves de la oxidacion del producto de transaminacion de leucina a- cetoisocaproato. Aproximadamente el 5% de la oxidacion de la leucina procede a traves de esta ruta (28). HMB es superior a la leucina en la potenciacion de la masa muscular y la fuerza. Los efectos optimos de HMB se pueden lograr a 3.0 gramos por dfa, o 0.038 g/kg de peso corporal por dfa, mientras que los de leucina requieren mas de 30.0 gramos por dfa (29).

Una vez producido o ingerido, HMB parece tener dos destinos. El primer destino es la simple excrecion en la orina. Despues de que el HMB es alimentado, las concentraciones de orina se incrementan, dando como resultado una perdida aproximada de 20-50% de HMB a la orina (26; 52). Otro destino se relaciona con la activacion de HMB a HMB-CoA (4; 6; 16; 17; 20; 35; 36; 41; 43; 54). Una vez convertido en HMB-CoA, puede producirse metabolismo adicional, bien sea deshidratacion de HMB-CoA a MC-CoA, o una conversion directa de HMB-CoA a HMGCoA (42), que provee sustratos para la smtesis intracelular de colesterol. Varios estudios han demostrado que el HMB se incorpora a la ruta sintetica del colesterol (2-4; 16) y podna ser una fuente de colesterol para las nuevas membranas celulares que se utilizan para la regeneracion de membranas celulares danadas (29). Los estudios en humanos han demostrado que el dano muscular despues del ejercicio intenso, medido por CPK plasmatica elevada (creatina fosfoquinasa), se reduce con la suplementacion con HMB. Se ha demostrado que el efecto protector de HMB se manifiesta por sf mismo durante al menos tres semanas con el uso diario continuado (14, 22, 23).

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Estudios in vitro en musculos de rata aislada muestran que el HMB es un potente inhibidor de la proteolisis muscular (32), especialmente durante penodos de estres. Estos hallazgos han sido confirmados en humanos; Por ejemplo, HMB inhibe la proteolisis muscular en sujetos que participan en entrenamiento de resistencia (26). Los resultados se han duplicado en muchos estudios (14; 22; 33; 46; 53) (9-11; 47; 48; 48). En celulas musculares C2C12, HMB atenua el catabolismo inducido experimentalmente (por ejemplo,

Se han informado los mecanismos moleculares por los que HMB disminuye la descomposicion de protemas e incrementa la smtesis de protemas (10, 44). En ratones que portan el tumor inductor de la caquexia MAC16, HMB atenuo la degradacion de las protemas mediante la subregulacion de los activadores claves de la ruta ubiquitina- proteasoma (47). Adicionalmente, HMB atenuo la activacion del factor inductor de proteolisis (PIF) y el aumento de la expresion genica de la ruta ubiquitina-proteasoma en los miotubos murmicos, reduciendo asf la degradacion de la protema (48). PIF inhibe la smtesis de protemas en los miotubos murmicos en un 50% y HMB atenua esta depresion en la smtesis de protemas (9). Eley et al demostraron que HMB incrementa la smtesis de protemas por varios mecanismos, incluyendo la subregulacion de la fosforilacion eucariotica de factor de iniciacion 2 (eIF2) a traves de un efecto sobre la protema quinasa dependiente de ARNds (PKR) y la sobrerregulacion del objetivo mairnfero de la ruta rapamicina/70-kDa ribosomal S6 quinasa (mTOR/p70s6k). El resultado neto es una mayor fosforilacion de la protema de enlazante a 4E (4EBP1) y un incremento en el complejo eIF4G.eIF4E activo. La leucina comparte muchos de estos mecanismos con HMB, pero HMB parece ser mas potente en la estimulacion de la smtesis de protemas (9).

El HMB tambien puede incrementar la smtesis de protemas atenuando la ruta comun que media los efectos de otros factores catabolicos como el lipopolisacarido (LPS), el factor de necrosis tumoral a/interferon-y (TNF-a /IFN-y) y la angiotensina II (Ang II) (10; 11). HMB actua atenuando la activacion de las caspasas-3 y -8, y la subsecuente atenuacion de la activacion de PKR y la formacion de especies reactivas de oxfgeno (ROS) mediante la subregulacion de la protema quinasa activada por mitogeno p38 (p38MAPK). Se sabe que la formacion aumentada de ROS induce la degradacion de la protema a traves de la ruta de la ubiquitina-proteasoma. HMB realiza esta atenuacion a traves de la autofosforilacion PKR y la subsecuente fosforilacion de eIF2a, y en parte, a traves de la activacion de la ruta mTOR.

Un informe reciente puso a prueba la hipotesis de que HMB, como la leucina, estimulana mTORc1 independiente de la senalizacion de PI3K en myotubes C2C12 (19). HMB estimulo la fosforilacion de AKTSer473 (+129%), S6K1Thr389 (+50%) y 4EBP1Thr65/70 (+51%). HMB estimulo la senalizacion anabolica con mayor potencia que la leucina, por ejemplo S6K1Thr389 + 50% vs. +17%; respectivamente. Como se esperaba, la incubacion de HMB con rapamicina (inhibidor de mTORc1) recorto los incrementos en senalizacion de mTORc1, pero no de fosforilacion de AKT (+188%). Por el contrario, la incubacion con LY290042 (inhibidor de PI3K) abolio incrementos inducidos por HMB tanto en AKT como en senalizacion mTORc1, lo que sugiere que HMB senaliza mTORc1 de una manera dependiente de PI3K. Estos datos sugieren que HMB, a pesar de ser un metabolito de leucina, senaliza a mTORc1 a traves de mecanismos distintos de los de leucina.

Numerosos estudios han demostrado que una dosis efectiva de HMB es de 3,0 gramos al dfa como CaHMB (~ 38 mg/kg de peso corporal-dfa'1). Como suplemento dietetico, HMB se ha utilizado como la sal de calcio monohidratada, cuya formula empmca es Ca(HMB)2-H20. Esta dosificacion incrementa la masa muscular y las ganancias de fuerza asociadas con el entrenamiento de resistencia, mientras que minimiza el dano muscular asociado con el ejercicio extenuante (14, 26, 30, 33). HMB ha sido probado por seguridad, no mostrando efectos colateales en jovenes sanos o adultos mayores (15; 25). Tambien se ha demostrado que HMB en combinacion con L-arginina y L-glutamina es seguro cuando se complementa a pacientes con SIDA y cancer (38).

Los estudios en humanos tambien han demostrado que la suplementacion dietetica con 3,0 gramos de CaHMB por dfa mas aminoacidos atenua la perdida de masa muscular en diversas condiciones tal como el cancer y el SIDA (5; 12). Un metanalisis de los suplementos para incrementar la masa magra y la fuerza con el entrenamiento con pesas mostro que HMB era uno de solo 2 suplementos dieteticos que incrementaban la masa magra y la fuerza con el ejercicio (30). Mas recientemente se demostro que el HMB y los aminoacidos arginina y lisina incrementaron la masa magra en una poblacion de edad avanzada sin ejercicio durante un ano de estudio.

La oxidacion de la leucina se incrementa despues del ejercicio, y los niveles optimos de HMB durante y justo despues del ejercicio se desean para la prevencion optima del dano muscular y subsecuente recuperacion. Ademas, el proceso inflamatorio se estimula durante una lesion, que si no se controla es deletereo y retrasa la cicatrizacion. La inflamacion cronica y las citoquinas pro-inflamatorias han demostrado ser un factor subyacente y causante

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importante en la enfermedad cardiovascular y la diabetes tipo II, asf como en el asma, enfermedades autoinmunes, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad pulmonar obstructiva cronica y artritis reumatoide.

Los estudios en humanos han demostrado un efecto positivo del ejercicio de resistencia en la smtesis de protemas musculares tan pronto como 1-2 horas despues del ejercicio y duran hasta 48 horas (8, 34). Los estudios tambien han demostrado que el momento en que la disponibilidad de nutrientes es cntica para la estimulacion maxima posterior al ejercicio de la smtesis de protemas, asf como la reduccion de la ruptura de las protemas (40). El momento mas optimo para el suministro de nutrientes parece estar dentro de las 2 horas posteriores al ejercicio. Dreyer al. (7) demostraron que la ingestion de una solucion nutritiva rica en leucina en 1 h despues de la recuperacion posterior al ejercicio dio como resultado una mejora significativa de la ruta de senalizacion de mTOR y la smtesis de protemas musculares.

La curva de disociacion de CaHMB es identica a la del acetato de calcio (49), lo que da como resultado niveles pico de HMB en plasma que oscilan entre 60 y 120 minutos despues de la ingestion dependiendo de la dosis dada. El tiempo hasta los niveles en plasma maximos despues de una dosificacion tfpica de 1 gramo fue de 2 horas (52), requiriendo asf que el CaHMB se tomara antes del ejercicio para un beneficio maximo.

Por lo tanto, el momento de administracion de HMB y el nivel de HMB en la sangre son importantes para la eficacia de HMB en el musculo. Existe la necesidad de un sistema de suministro mas rapido y mas eficiente para HMB.

Resumen de la invencion

La invencion se refiere a la administracion de HMB en forma de acido libre (“acido HMB”). La administracion usando acido libre de HMB mejora la disponibilidad de HMB a los tejidos y por lo tanto provee un metodo mas rapido y eficiente para obtener HMB a los tejidos que la administracion de CaHMB. La toma oral o administracion sublingual de un HMB de acido libre asociado con una matriz da como resultado una absorcion directa y rapida de HMB, ofreciendo un metodo de suministro mejorado que da como resultado una mayor disponibilidad de HMB para los tejidos.

En un ejemplo, el acido libre de HMB se suministra directamente neutralizando el acido libre de HMB en una matriz soluble tal como un gel. El acido libre de HMB se administra oralmente o sublingualmente a una persona en una cantidad efectiva.

Breve descripcion de las figuras

La Figura 1 muestra los niveles en plasma de CPK y LDH despues de una sesion de ejercicio extenuante.

La figura 2 muestra la fuerza muscular y la mialgia subjetiva despues de una sesion extenuante de ejercicio.

La Figura 3 muestra los niveles en plasma de HMB como se encuentran en el Ejemplo Experimental 1.

La Figura 4 muestra concentracion pico de HMB en plasma y el tiempo hasta la concentracion pico.

La Figura 5 muestra los niveles en plasma de HMB.

La Figura 6 muestra concentracion pico de HMB en plasma y el tiempo hasta la concentracion pico.

La Figura 7 muestra el porcentaje de la dosis de HMB excretada en la orina.

La Figura 8 muestra un regimen de tratamiento de la presente invencion.

La Figura 9 muestra los cambios en CPK despues de un episodio agudo de ejercicio excentrico.

Descripcion detallada de las realizaciones preferidas

La invencion se refiere a un metodo de suministro de HMB a una persona, y espedficamente a un metodo de administracion de acido HMB a una persona, de tal manera que la administracion de HMB de acido libre da como resultado un incremento en la efectividad de HMB durante la administracion de otras formas de HMB, Incluyendo CaHMB. El uso de acido HMB da como resultado la mejora de la disponibilidad de HMB a los tejidos de una persona. La administracion de acido HMB incrementa la efectividad para proteger contra el dano muscular y la

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respuesta inflamatoria que acompana durante la administracion de HMB en sus otras formas. Ademas, la administracion de acido libre de HMB tambien puede preservar el musculo en las condiciones caquecticas y de emaciacion y actuar para romper la inflamacion, incluyendo la inflamacion cronica que puede causar una serie de enfermedades, tal como las enfermedades cardiovasculares. El descubrimiento inesperado y sorprendente de que el acido libre de HMB disminuye el dano muscular mejor que CaHMB indica que tambien puede disminuir la respuesta inflamatoria resultante del dano. La administracion de acido libre de HMB tiene aplicaciones de dispersion amplia como suplemento nutricional o medico y puede afectar a una gran parte de la poblacion.

De acuerdo con la presente invencion, el HMB se administra a humanos en su forma de acido libre. El acido libre de HMB puede estar asociado con un vehfculo, tal como una matriz o un gel. En la realizacion preferida, el acido libre HMB se administra por ruta oral o sublingual, aunque cualquier medio de administracion de HMB es apropiado. El acido HMB esta disponible comercialmente.

HMB en su forma acida se denomina acido 3-hidroxi-3-metilbutmco, acido p-hidroxi-p-metilbutmco o acido p- hidroxiisovalarico y puede designarse "acido HMB". La formula estructural es (CH3)2C(OH)CH2COOH y la molecula es:

imagen1

En la presente invencion, el acido HMB se administra a un humano en una cantidad efectiva. Una cantidad efectiva incluye un rango de aproximadamente 0.01 gramos a aproximadamente 0.2 gramos de acido HMB por kilogramo de peso corporal en veinticuatro (24) horas. El acido HMB tambien se puede administrar a un humano en una cantidad efectiva de aproximadamente 0.5 gramos a aproximadamente 30 gramos de acido HMB por dfa. Una cantidad efectiva de acido HMB dara como resultado un mayor incremento de los niveles en plasma de HMB y/o dara como resultado un tiempo mas rapido para alcanzar los niveles pico en plasma de HMB en relacion con la administracion de una dosificacion similar de CaHMB. El incremento en la efectividad con la administracion de acido HMB puede ser del 10%, 20%, 30%, 50%, 75%, 100%, 200%, 400%, 500% o mayor que la administracion de una dosis similar de CaHMB. La comparacion del acido HMB con otras formas de HMB puede basarse en la efectividad o eficiencia de HMB usando indices estandar conocidos por los expertos en la tecnica.

En los Ejemplos, el acido HMB se administra como un gel soluble, aunque la invencion no se limita al uso de un gel o matriz soluble con acido HMB. El acido HMB en cualquier forma farmaceuticamente aceptable, incluyendo pero no limitado a solidos, tabletas, capsulas y lfquidos tales como soluciones intravenosas orales, esta dentro del alcance de esta invencion. El acido HMB puede administrarse utilizando cualquier vetuculo farmaceuticamente aceptable, incluyendo pero no limitado a diversos almidones y soluciones salinas. En la realizacion preferida, una cantidad efectiva de acido HMB se administra como dos o tres dosis diarias, aunque se entendera que una dosis individual de una cantidad efectiva de acido HMB por dfa esta dentro del alcance de la invencion, como sena cualquier otro numero de dosis de HMB durante el dfa.

La administracion de acido HMB, mas tfpicamente como una matriz soluble en acido HMB tal como un gel, da como resultado una mejora significativa del efecto anabolico de HMB con reducciones marcadas en CPK sobre la administracion de HMB como una sal, incluyendo CaHMB o administracion de HMB en otras formas tales como un ester o lactona. En una realizacion, la administracion de gel de acido HMB da como resultado una duplicacion del pico en plasma de HMB en aproximadamente del tiempo como la administracion de una dosificacion similar de CaHMB, y tiene un 25% de eficacia mejorada de suministro, medida por el aclaramiento en plasma sobre una dosificacion similar de CaHMB.

Este metodo de suministro tiene aplicaciones de dispersion amplia. Los usos o beneficios conocidos de HMB incluyen, pero no se limitan a, retencion de nitrogeno mejorada y ahorro de protemas, mejorando la masa corporal magra, mejorando la funcion muscular y/o el rendimiento muscular, disminuyendo el dano muscular en el musculo sometido a estres o dano, disminuyendo la respuesta inflamatoria despues de que el musculo se somete a estres o dano, mejora la respuesta inmune del cuerpo despues del estres o dano, el tratamiento de la emaciacion asociada con la enfermedad (como la emaciacion asociada con cancer, enfermedad pulmonar cronica, la edad, enfermedad

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renal cronica, hospitalizacion a largo plazo o SIDA), mejorar un perfil lip^dico tal lipoprotema de baja densidad (LDL) a lipoprotema de alta densidad (HDL) y mejorar el estado emocional de una persona. Una forma mas efectiva y mas eficiente de administrar HMB tiene aplicaciones de dispersion amplia en todos estos usos conocidos de HMB.

Aunque el uso de acido HMB se ha establecido anteriormente, se penso que HMB en forma de acido libre era equivalente a HMB en la sal de calcio y otras sales como formas de administracion propuestas en la tecnica anterior. Las diferencias en la efectividad de acido HMB y las sales de HMB no se probaron previamente.

Previamente, exisffan numerosos obstaculos tanto para pruebas extensas como para la utilizacion comercial de la forma de acido libre de HMB, y como se pensaba que no habfa diferencia, la sal de calcio se adopto como una fuente comercial de HMB. Hasta hace poco tiempo, el empaque y, en particular, la distribucion de suplementos dieteticos se ha adaptado mejor para manipular nutrientes en forma de polvo y por lo tanto la sal de calcio de HMB fue ampliamente aceptada. El acido HMB es un ffquido y mucho mas diffcil de suministrar o incorporar en los productos.

A diferencia de otras sales de calcio, se ha demostrado que los componentes de calcio y HMB de la molecula se disocian muy facilmente, por lo tanto, agregando a la suposicion de que no habna diferencia fisiologica entre el acido libre de HMB y la sal de calcio de HMB. (19)..(49).

Adicionalmente, la formacion y cristalizacion de la sal de calcio de HMB se habfa utilizado como una etapa de purificacion final en el proceso de fabricacion. Un compuesto en particular que la cristalizacion sirvio para limitar fue acido 3,3-dimetil acnlico. Este compuesto anade un sabor muy sobresaliente lo que es diffcil de enmascarar. En la actualidad, el proceso de fabricacion de HMB ha permitido que el acido libre HMB sea producido en una pureza que permita la ingestion oral del acido libre de HMB. Ademas de disponer actualmente de una fuente comercial suficientemente pura para la ingestion oral, el acido HMB necesita ser regulado para la ingestion oral, un proceso que se determino solo recientemente debido a los factores mencionados anteriormente que impidieron el uso previo de acido HMB.

Debido a que el calcio y HMB en la sal de calcio se asociaron de forma poco clara (49), se penso previamente que no habna diferencia en la administracion oral de HMB como acido libre o como una sal de calcio (19). Como se muestra en el Ejemplo 1, no solamente hay una sorprendente diferencia en los niveles en plasma alcanzados con la administracion oral de acido HMB, sino que hay un incremento del 25% en la eliminacion plasmatica lo que indica una mayor utilizacion de HMB por los tejidos con efectos mejorados resultantes sobre la masa y la funcion muscular. Cuando se da en equivalentes molares, HMB en forma de acido libre da como resultado el doble del nivel de HMB en plasma en aproximadamente un cuarto (1/4") el tiempo en comparacion con la sal de calcio de HMB. El efecto mejorado sobre el musculo se muestra claramente en el Ejemplo 2 en que el HMB administrado en forma de acido libre es mas protector que el CaHMB cuando el musculo se somete a ejercicio agudo.

Aunque se sabe que CaHMB es soluble en y se disocia facilmente en soluciones acuosas de pH neutro a acido, el experto en la tecnica predecina un corto tiempo de retraso en apariencia debido a esta etapa de disociacion. CaHMB administrado en una capsula de gelatina tiene un tiempo de disolucion de entre 10 y 15 minutos en el intestino. Por lo tanto, un experto en la tecnica esperana una absorcion similar y por tanto niveles pico en plasma de HMB si el HMB se administro como CaHMB o como acido HMB, sin embargo, se retraso ligeramente por las diferencias descritas. Contrario a estas expectativas, sin embargo, se encontro que habfa una diferencia significativa en plasma pico entre las dos formas. En algunos casos, la diferencia en los tiempos de plasma pico fue noventa (90) minutos, que es varias veces mas largo de lo que debena ser explicado por la disolucion de la capsula y la disociacion de la CaHMB.

Un experto en la tecnica tambien predecina picos y areas plasmaticas similares bajo la curva ya que una cantidad similar del nutriente HMB se estaba liberando en el intestino con la curva de CaHMB desplazada mas lejos en el tiempo. Un resultado inesperado de la administracion de acido HMB es la duplicacion de los niveles pico en plasma de HMB.

Un resultado adicional inesperado es el mayor aclaramiento (utilizacion) de HMB una vez en el plasma. Muchos nutrientes tienen perfiles en plasma y urinarios similares a menos que exista un mecanismo de conservacion en el rinon para ese nutriente. Ninguno se conoce actualmente para HMB y por lo tanto un experto en la tecnica podna suponer que un porcentaje mucho mayor de la dosificacion se excretana en la orina con la duplicacion del pico en plasma en las concentraciones de HMB. Una vez mas, esto no se observo y es un hallazgo inesperado. Esto junto

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con la mayor tasa de aclaramiento muestran una mejor utilizacion de HMB por los tejidos lo cual fue de nuevo un hallazgo sorprendente.

Como se muestra en los Ejemplos Experimentales, y espedficamente en el Ejemplo 2, la administracion de acido HMB es efectivo mas rapidamente para minimizar el dano muscular despues del ejercicio que CaHMB. Este segundo ejemplo muestra un beneficio que no se pudo predecir directamente a partir de los hallazgos del Ejemplo 1.

El metodo de esta invencion se ilustra adicionalmente mediante los siguientes ejemplos experimentales.

Parte experimental

Ejemplo 1 Absorcion de gel de acido HMB en comparacion con CaHMB en forma de capsula Materiales y metodos

Sujetos humanos. En el estudio 1, se estudiaron cuatro hombres y cuatro mujeres de edad universitaria. En el estudio 2, se estudiaron cuatro hombres y cuatro mujeres de edad universitaria adicionales. Los protocolos para ambos estudios fueron aprobados por el IRB de Iowa State University y cada sujeto dio su consentimiento informado para participar en el estudio. Debido a la naturaleza de los tratamientos, ni los sujetos ni los investigadores pudieron mantenerse a ciegas.

Tratamientos. Los mismos tratamientos se dieron a los sujetos en ambos grupos de estudio. Los tres tratamientos se dieron en orden aleatorio a cada sujeto con al menos un penodo de lavado de una semana entre los tratamientos. Los tratamientos fueron suministrados por Metabolic Technologies, Inc. (MTI, Ames, IA) y se prepararon con ingredientes de calidad alimentaria. Se administro a los sujetos un gramo de CaHMB o el HMB equivalente en acido libre en forma de gel. Las capsulas de CaHMB se obtuvieron de un fabricante comercial de suplementos (Optimum Nutrition, Aurora, IL) mientras que el gel de acido HMB se preparo en los laboratorios MTI. En resumen, el acido HMB se ajusto a un pH 4.5 con carbonato de potasio (K2CO3) y se anadieron entonces sabores y endulzantes. La capsula de CaHMB de 1.0 g se tomo con 355 ml de agua (aproximadamente 12 onzas). La dosificacion de gel de acido libre fue de 0.80 g y fue equivalente al acido libre contenido en el CaHMB en la capsula. Los tratamientos con gel de acido libre se tragaron (FASW) o se mantuvieron sublinguales durante 15 segundos y luego se tragaron (FASL). FASW consistio en expeler toda la dosis en la boca en una jeringa de 3 ml, tragar, y luego seguir esto con 355 ml de agua. Los sujetos FASL fueron instruidos para colocar toda la dosis bajo la lengua y mantener la dosis durante 15 segundos antes de tragar. Despues se enjuagaron y siguieron la dosis con 355 ml de agua.

Diseno de estudio 1. Para el estudio 1 los sujetos se reportaron al laboratorio en la manana despues de un ayuno durante la noche. Antes de la ingestion de uno de los tratamientos suplementarios, se inserto un cateter de polietileno esteril flexible en una vena del antebrazo utilizando procedimientos esteriles y se extrajo una muestra de sangre de pre-ingestion. Se tomaron muestras de sangre subsecuentes a 0, 2, 5, 10, 15, 25, 35, 45, 60, 90, 120 y 180 minutos despues de la ingestion del tratamiento. Se separo el plasma y se almacenaron las muestras congeladas a -70°C para el analisis de la concentracion de HMB. Ademas, se utilizo una parte de las muestras de sangre de la pre-ingestion y de 180 minutos para las mediciones (LabCorp, Kansas City, MO) de glucosa, acido urico, nitrogeno urico en sangre (BUN), creatinina, sodio, potasio, cloruro, dioxido de carbono, fosforoso, protema, albumina, globulina, relacion de albumina:globulina, bilirrubina total, bilirrubina directa, fosfatasa alcalina, lactato deshidrogenasa, aspartato aminotransferasa (AST), alanina aminotransferasa (ALT), gamma glutamil transpeptidasa (GGT) TIBC), capacidad de union a hierro, (TIBC) capacidad de union a hierro insaturado (UIBC), hierro, saturacion de hierro, colesterol total, trigliceridos, lipoprotema de alta densidad (HDL), lipoprotema de baja densidad (LDL) y relacion de colesterol. Tambien se realizo un hemograma completo (CBC) antes y despues del penodo de tratamiento de 180 min. Los sujetos tambien completaron un breve cuestionario para reportar cualquier smtoma ffsico (como nausea, dolor de cabeza, etc.) que pudieran haber experimentado durante el experimento.

Diseno de estudio 2. El estudio 2 se realizo similar al estudio 1 con las siguientes modificaciones. En el estudio 2, se midieron los niveles en plasma de HMB durante 1440 min (24 h) y se realizo tambien la recoleccion total de orina para medir la excrecion urinaria de HMB durante este penodo. Despues de la muestra de sangre de 180 minutos, se permitio a los sujetos abandonar el laboratorio y se les indico que regresaran al laboratorio para muestras de sangre adicionales a 360, 720 y 1440 minutos despues de la ingestion del suplemento. Como en el estudio 1, cada sujeto tomo cada uno de los tratamientos con al menos un penodo de lavado de una semana entre los tratamientos. Las muestras se almacenaron nuevamente congeladas a -70°C para el analisis de concentraciones de HMB en plasma y en orina. Las muestras de sangre de pre-ingestion, de 180 min y de 1440 min, se ensayaron nuevamente para las

mismas mediciones ya para el estudio 1. Los sujetos recibieron un almuerzo estandarizado despues del muestreo de sangre de 180 minutos y se les indico comer esto aproximadamente 240 minutes despues de la ingestion. Despues de la muestra de sangre de 720 min, a los sujetos se les indico que comieran una comida normal de la noche antes de las 10 pm. Los sujetos se repotaron de nuevo al laboratorio a la manana siguiente para la muestra de sangre de 5 1440 min en ayunas. Se proveyo un recipiente de recoleccion de orina y los sujetos recolectaron toda la orina

producida durante el pertedo experimental de 24 h experimental. La orina se almaceno refrigerada cuando ya no estaba siendo recogida. Se midieron los volumenes de orina y se tomaron muestras de la recoleccion total de orina y se almacenaron congeladas a -70°C hasta que se analizo para HMB.

Analisis de HMB. HMB en plasma y orina se analizo por cromatograffa de gases/espectrometna de masas (GC/MS) 10 como se describio anteriormente. (27)

Calculos y estadfsticas. Las areas bajo las curvas se calcularon para cada sujeto usando el metodo trapezoidal que suma el area sobre la lmea base (51). Se calculo la vida media del HMB en plasma para el estudio 2. Se usaron las siguientes ecuaciones:

k= (ln(Cp ico)-ln(Cdepresion))/T intervalo

tl/2=0.693/k

15 Para Cpico se usaron concentraciones pico en plasma para cada sujeto. Las concentraciones de depresion, Cdepresion

fueron las concentraciones medidas a 720 min, debido a que las concentraciones en plasma de 720 min no fueron significativamente diferentes de la lmea de base. Tpico fue el momento en que se midio Cpico y Tintervalo es el tiempo de Tpico hasta el tiempo en Cdepresion (720 min). Se supone que el compartimiento de fluido extracelular es 20% del peso corporal y se calcula usando la ecuacion 3 a continuacion (1). La depuracion en plasma de HMB se calculo entonces 20 multiplicando el compartimiento de fluido extracelular, Vd, por la constante de eliminacion, Kel, como se muestra en la ecuacion 4 {Thalhammer, 1998 9588/id}

Vd = Peso corporal(0.20)

Depuracion^ Vci(Ke])(50).

Los datos se analizaron utilizando un diseno de cruce con Proc GLM en SAS. (45) Para el muestreo cronometrado de HMB en plasma se utilizo un modelo polinomial de medidas repetidas. El modelo incluyo sujeto, orden y efectos 25 principales del tratamiento y el tiempo de interaccion del tratamiento cuando fue apropiado. Para otros parametros se uso tambien Proc GLM con sujeto, orden y efectos principales del tratamiento y se informaron los valores de p para el efecto principal del tratamiento. Se determino la significancia estadfstica para p <0.05 y se determino una tendencia para 0.05 <p <0.10.

Resultados

30 Los resultados de los estudios se muestran en las Figs. 1-7. La Figura 1 muestra los niveles en plasma de CPK y LDH despues de una sesion de ejercicio extenuante. La figura 2 muestra la fuerza muscular y la mialgia subjetiva despues de una extenuante sesion de ejercicio. La Figura 3 muestra los niveles en plasma de HMB en el estudio 1. Los valores son medias +/- SEM, n = 4 hombres y 4 mujeres. *= p,0.05, + =p,0.001, + p,0.0001 para tratamientos con acido libre versus capsulas de CaHMB. La figura 4 muestra la concentracion pico en plasma de HMB en el 35 Estudio 1 y el tiempo hasta la concentracion pico despues de que se ingirio una sola dosis de ya sea CaHMB, gel de acido HMB tragadas (FASW o gel de acido HMB mantenido sublingual y luego se trago (FASL) ** = p,0.0002. La Figura 5 muestra los niveles en plasma de HMB en el estudio 2. Los valores son medias +/- SEM, n = 4 hombres y 4 mujeres. *= p,0.05, += p,0.01, ++p,0.0001. La Figura 6 muestra la concentracion pico en plasma de HMB en el Estudio 2 y el tiempo hasta la concentracion pico despues de una sola dosis de ya sea CaHMB, gel de acido libre de 40 HMB tragado (FASW, o gel de acido libre de HMB retenido sublingual y luego tragado (FASL) **= p <0.0002 para concentracion y p <0.0001 para el tiempo. La Figura 7 muestra el porcentaje de la dosis de HMB excretada en la orina durante las 24 h posteriores a la ingestion y el porcentaje relativo de la dosis retenida *=p<0.002.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

Caractensticas del sujeto. La Tabla 1 muestra las caractensticas del sujeto para los estudios 1 y 2. Cada estudio fue balanceado para el genera y cada grupo de tratamiento mantuvo pesos constantes durante los 3 penodos de prueba. En cada estudio, todos los sujetos completaron los 3 protocolos de prueba. No se reportaron efectos adversos en el tratamiento, tales como nauseas despues de tomar los tratamientos, en ninguno de los estudios.

Resultados del estudio 1 (Tablas 2-4). La Tabla 2 ilustra las concentraciones pico en plasma (Cpico) y el tiempo para alcanzar las concentraciones pico en plasma (tpico). CaHMB tornado en capsulas dio como resultado un nivel pico de HMB en plasma de 131±10 nmol/mL, mientras que el HMB tomado por ya sea por suministro FASW en gel de acido libre o FASL dio como resultado significativamente mayor (259±24 y 231±21 nmol/mL respectivamente p <0.0001) y picos anteriores (33,1±4.6 y 36.3±1.3 min, respectivamente) en los niveles en plasma de HMB en comparacion con CaHMB por capsula a 121,9± 15.6 h (p <0.0001). A los 180 minutos, el HMB en plasma para todos los metodos de sministro segma siendo elevado por encima de la lmea base, y no hubo diferencias de tratamiento entre los tres grupos. Por consiguiente, las Areas bajo la Curva (AUC) para los niveles en plasma de HMB despues de los 3 tratamientos se muestran tambien en la Tabla 2. El HMB administrado en forma de gel de acido libre dio como resultado mayores areas bajo la curva (AUC) del 97% y 91% para FASW y FASL, respectivamente (p<0.0001). No hubo diferencias entre el gel de acido HMB suministrado por FASW o por FASL

La Tabla 3 muestra las qmmicas sangurneas para el estudio 1. No hubo diferencias significativas en el tratamiento del efecto principal para ninguno de los puntos o diferencias de tiempo medidos. La Tabla 4 muestra la hematologfa sangmnea medida en el estudio 1. El grupo FASW tuvo una disminucion significativamente mayor en el numero absoluto de linfocitos durante el penodo de medicion (p <0.04), debido principalmente al hecho de que el grupo FASW tendfa a tener un mayor numero de linfocitos al comienzo del estudio (p <0.09). No hubo diferencias significativas en el numero de linfocitos al final del estudio y todos los medios estaban dentro de los lfmites normales para el numero de linfocitos.

Resultados del estudio 2 (Tablas 2, 5-7). El estudio 2 se realizo para observar el HMB en plasma durante un penodo de 24 horas, asf como para medir las perdidas urinarias durante este mismo penodo de tiempo. Al igual que en el estudio 1, se observo un aumento rapido de HMB en plasma y significativamente mayor con HMB administrado en forma de gel de acido libre tanto para FASW como para FASL que con CaHMB en forma de capsula. A los 180 minutos, todos los tratamientos dieron como resultado niveles de HMB en plasmas similares (aproximadamente 110 nmol/ml). CaHMB por capsula mantuvo un nivel ligeramente mas alto de HMB plasma a 360 y 720 min (p <0.05).

La Tabla 5 lista las concentraciones pico de HMB en plasma (Cpico), el tiempo hasta las concentraciones pico de HMB en plasma (tpico) y la vida media de HMB en plasma. El nivel de HMB en plasma para CaHMB por capsula alcanzo un pico de 131,2±6.0 nmol/mL a 135.0±17.0 min, mientras que FASW y FASL dieron como resultado picos de HMB em plasma mayores (p <0.0003) en tiempo mas corto (p <0.0001), 238,6±16,0 nmol/Ml a 41,965,8 min y 247,6619,8 nmol/ml a 38,862,6 min para FASW y FASL, respectivamente.

La vida media en plasma como se muestra en la Tabla 5 para CaHMB por capsula fue 3.17±0.22 h. La vida media de HMB FASW y HMB FASL fueron 2.50±0.13 y 2.51±0.14 h, respectivamente (p <0.004). El area bajo la curva y el HMB urinario medido en el estudio 2 se muestran tambien en la Tabla 5. Durante el penodo de 24 horas, el AUC para HMB administrado como gel de acido libre fue significativamente mayor en 15.4 y 14.3% para FASW y FASL, respectivamente que para CaHMB administrado en capsulas (p <0.001). A pesar del incremento pico significativo de HMB en plasma y AUC, las perdidas urinarias de HMB no fueron significativamente mayores para los tratamientos con gel de acido libre; las perdidas urinarias de HMB fueron 14.7±2.0, 17.8±2.9 y 17.2±2.5% de la dosificacion inicial perdida para CaHMB, FASW y FASL, respectivamente. Hubo un incremento de aproximadamente 25% en el aclaramiento de HMB con la forma de gel de acido libre en comparacion con la forma CaHMB (P <0.003).

En la Tabla 6 se muestran las qmmicas sangurneas medidas durante el estudio 2 y la hematologfa hematica medida en el estudio 2 se muestra en la Tabla 7. El analisis estadfstico del cambio en los parametros durante el penodo de medicion de 24 h no mostro cambios estadfsticos significativos (p <0.05) para cualquiera de los valores de la qmmica o hematologfa medidos. Hubo una fuerte tendencia a la diferencia con el cloruro (p <0.06). FASL mostro un mayor incremento durante el penodo en comparacion con FASW; sin embargo, ni FASW ni FASL fue significativamente diferente de CaHMB. Tambien se observo una tendencia con el sodio donde FASW mostro un incremento mayor durante el penodo de medicion que FASW o CaHMB (p <0.07). Las medias para el cloruro y el sodio durante el penodo del estudio estaban bien dentro de valores normales.

Discusion

5

10

15

20

25

30

35

Es claro a partir de los presentes estudios que la administracion oral o sublingual de HMB en forma de gel de acido libre dio como resultado incrementos mas rapidos y sostenidos de HMB en plasma que cuando se comparo HMB administrado como la sal de calcio (CaHMB) en una capsula de gelatina dura. La administradon de gel de acido libre de HMB dio lugar a incrementos significativos (promedio + 14.8%) en el AUC para HMB en plasma sin ningun cambio mayor en la vida media de HMB en plasma o perdidas urinarias. Combinado esto dio como resultado una depuracion incrementada significativa de HMB y la utilizacion por los tejidos que fue un 25% mayor que la de la forma CaHMB. Los datos muestran la eficiencia mejorada de esta forma de suministro de HMB.

Los hallazgos de este estudio relacionados con la cinetica en plasma del suministro de CaHMB coinciden con los informados previamente por Vukovich et al. (52) Hay congruencia de los datos relacionados con los niveles pico en plasma, el tiempo hasta el pico y la vida media en plasma, se produjeron a pesar de las diferencias significativas en el modo de suministro de CaHMB Entrega de CaHMB (cuatro capsulas de 250 mg por Vukovich et al vs. 1 capsula de gramo en los presentes estudios). Curiosamente, el suministro de HMB como acido libre en forma de gel dio como resultado niveles pico mas rapidos (casi 90 minutos antes con el uso de la forma de acido libre), pero vidas medias similartes a pesar de que los niveles en plasma alcanzaron casi el doble de los obtenidos con la administradon oral de CaHMB. Varios estudios han apoyado el uso de HMB como suplemento nutricional durante el ejercicio. Se ha demostrado que HMB disminuye la protema muscular y la ruptura de membrana (22, 23, 26) y para potenciar la smtesis de protemas. (10) Por lo tanto, sena ventajoso tener altos niveles de HMB en plasma durante el penodo de ejercicio, y tener la retencion de HMB tan buena como o incluso mejor que la informada anteriormente (26; 29; 52). En este sentido, la administradon oral de CaHMB necesitana administrarse al menos 2 horas antes de cualquier sesion estresante seria de ejercicio, mientras que el gel de acido libre de HMB puede administrarse antes de la sesion de ejercicio y tener un efecto casi inmediato.

El suministro de la forma de acido libre de HMB tambien se asocio con retencion significativamente mayor de HMB. La administradon de la forma de gel de acido libre dio como resultado un incremento significativo en AUC sin incrementar significativamente la excrecion urinaria lo que indicana una mayor retencion y utilizacion de HMB por los tejidos en comparacion con la forma de CaHMB. La cantidad estimada de HMB retenida fue 25% mayor con el gel de acido HMB en comparacion con la forma de CaHMB basada en la eliminacion de plasma. Estudios previos de Vukovich et al demostraron que el suministro oral de 3 gramos de CaHMB dio como resultado niveles pico en plasma 3 veces superiores a los obtenidos con una dosis de 1 gramo (52). Nissen et al demostraron una respuesta dependiente de la dosis a la administradon oral de CaHMB dada dos veces al dfa a bien sea 1.5 o 3 gramos por dfa. Se demostro que la dosis optima de CaHMB es de 3.0 gramos por dfa, lo que resulta en una disminucion de la liberacion de creatina quinasa (CK), un indicador de dano muscular y 3-metilhistina, un indicador de la ruptura de las protemas (26). Hallazgos similares fueron informados por Gallagher quien tambien mostro que la administracion diaria de 6 gramos por dfa sena mas beneficiosa que 3 gramos por dfa (14). En conjunto, los estudios anteriores indican un beneficio de tener mas HMB disponible para los musculos durante el ejercicio.

El suministro de HMB por gel de acido libre da como resultado un pico mas rapido y mayor en los niveles en sangre de HMB, asf como niveles igualmente sostenidos cuando se compara con CaHMB administrado en una capsula. Esta forma de suministro es igualmente segura como las que se encuentran actualmente y previamente (15; 25) con la administracion oral de CaHMB.

Tabla 1. Descriptor de sujetos Tratamiento

Capsula de: Gel de acido Gel de

CaHMB: HMB Tragar acido HMB Sublingual

Estudio 1

Genero, masculino/femenino: 4/4 4/4 4/4

Edad, Peso corporal y, kg: 23.8±±1.3 23.8±1.3 23.8±1.3

Todos: 68.5±3.9 68.5±3.8 68.6±4.0

Mujeres: 63.2±4.5 63.5±4.5 63.5±4.9

Hombres: 73.7±5.6 73.5±5.6 73.8±5.9

Estudio 2

Genero, masculino/femenino: 4/4 4/4 4/4

Edad, Peso corporal y, kg: 22.4±1.0 22.4±1.0 22.4±1.0

Todos: 72.0±4.2 72.4±4.1 72.3±4.1

Mujeres: 66.8±3.2 67.4±3.3 67.0±3.5

Hombres: 77.2±7.2 77.4±7.2 77.7±6.9

Tabla 2. Estudio 1 de Area Bajo la Curva, concentracion pico (Cpico) y tiempo para alcanzar la concentracion pico

(tpico). Estudio 1 Tratamiento1 2

: CaHMB Gel de acido libre Gel de acido Valor p


: Tragar libre



: Sublingual

Cpico, nmol/mL: 131.2±10.1 259.1±23.9 231.2±21.0 0.0001

tpico, min: 121.9±15.6 33.1±4.6 36.3±1.3 0.0001

AUC, nmol/180 min: 13,997±1,534 27,532±1,742 26,778±1,980 0.0001

1Media±SEM.

2Valor P para diferencias de tratamiento.

5

CaHMB Gel de acido libre Tragar Gel de acido libre Sublingual Valor p2

: Antes Despues % de cambio Antes Despues % de cambio Antes Despues % de cambio

Glucosa, mg/dL: 72.6 ±1.6 76.4 ±3.2 6 5.2% 70.5±1.7 73.3±4.1 3.9% 74.1±1.7 77.4±2.5 4.4%

Acido urico, mg/dL: 4.5±0.3 4.5±0.4 -1.4% 4.9±0.4 4.9±0.4 0.8% 4.0±0.4 4.0±0.5 -2.2%

Nitrogeno urico en sangre, mg/dL: 12.1 ±1.0 11.3+0.9 -7.2 % 15.4±1.6 14.4±1.5 -6.5% 14.4±0.8 12.9±0.8 -10.4%

Creatinine, mg/dL: 0.9±0.1 0.9±0.1 0.5% 1.0±0.1 0.9±0.1 -4.7% 1.0±0.1 1.0±0.04 -1.5%

Sodio, mEq/L: 139.1±0.5 139.4±0.8 0.2% 138.5±1.1 138.3±0.9 -0.2% 139.3±0.8 137.8±0.9 -1.1 %

Potasio, mEq/L: 4.1 ±0.1 4.7±0.2 13.4% 4.2±0.1 4.6±0.3 11.4% 4.0±0.03 4.5±0.1 10.6%

Cloruro, mEq/L: 103.3±0.6 103.1±0.7 -0.1% 103.6±0.8 103.3±0.5 -0.4% 102.9±0.6 102.4±1.1 -0.5%

CO2, mEq/L: 23.4±0.6 24.8±0.5 5.9% 22.4±0.7 24.3±0.5 8.1% 24.0±0.5 24.3±0.6 1.0%

Fosforo. mg/dL: 3.9±0.2 3.5±0.3 -10.8% 4.0±0.1 3.4±0.1 -15.6% 4.1±0.05 3.5±0.2 -13.2%

Protefna, g/dL: 6.3±0.2 6.5±0.3 3.2 % 6.2±0.2 6.3±0.2 1.4% 6.3±0.2 6.4±0.2 1.6%

Albumina, g/dL: 4.0±0.1 4.1±0.1 0.3% 4.0±0.2 4.1±0.2 1.9% 4.1 ±0.1 4.1±0.2 1.5%

Globulina, g/dL: 2.3±0.2 2.5±0.2 8.2% 2.2±0.1 2.2±0.1 0.6% 2.3±0.2 2.3±0.1 1.6%

Relacion2 A:G: 1.8±0.1 1.7±0.1 -8.9% 1.9±0.1 1.9±0.1 0.0% 1.9±0.1 1.8±0.1 -2.0%

Bilirrubina Total, mg/dL: 0.5±0.07 0.5±0.08 7.9 % 0.4±0.05 0.5±0.07 23.3% 0.4±0.05 0.5±0.05 22.6%

Bilirrubina Directa, mg/dL: 0.1±0.02 0.1±0.01 5.8% 0.1±0.01 0.1±0.01 7.9% 0.1±0.01 0.1±0.01 8.6%

Alcalina Fosfatasa, IU/L: 66.5±6.5 68.4±8.4 2.8% 63.9±5.8 64.4±6.7 0.8% 66.0±6.3 66.8±6.8 1.1%

Lactato Deshidrogenasa, IU/L: 160.9±9.5 165.6±10.7 3.0% 168.8±10.4 166.3±11.1 -1.5% 164.8±12.5 167.3±12.2 1.5%

Aspartato Aminotransferasa, IU/L: 21.4±1.5 22.4±1.8 4.7 % 24.0±2.2 23.1±2.0 -3.6% 28.0±7.9 28.3±8.2 0.9%

Alanina Aminotransferasa, IU/L: 14.1 ±1.5 15.6±2.0 10.6% 15.9±1.5 15.6±1.3 -1.6% 17.4±2.7 17.3+2.7 -0.7%

Gamma-glutamil: 13.8±0.9 13.1±0.9 -4.5 % 14.4±1.6 13.5±1.1 -6.1 % 13.3±1.2 13.4±1.2 0.9%

Capacidad de enlazamiento a hierro, mg/dL: 330.4±32.9 342.8±35.9 3.7 % 328.6±31.0 333.4±35.2 1.4% 328.0±32.8 339.5±30.8 3.5%

UIBC, mg/dL: 247.1±45.0 249.8±47.7 1.1% 243.1 ±47.4 237.1±49.2 -2.5% 244.8±42.3 244.9±39.5 0.1%

Hierro, mg/dL: 83.3±16.7 93.0±16.8 11.7% 85.5±19.2 96.3±17.3 12.6% 83.3±16.4 94.6±16.6 13.7%

saturation de hierro, %: 29.9±9.5 31.1±8.9 4.2 % 30.6±9.4 33.5±8.4 9.4% 29.1±9.0 30.9±8.5 6.0%

Colesterol Total, mg/dL: 153.4±9.1 153.9±9.7 0.3% 153.5±5.3 153.3±5.6 -0.2% 154.4±6.9 155.5±5.8 0.7%

Trigliceridos, mg/dL: 80.4±11.6 71.6± 11.2 -10.9% 91.3±17.0 87.5±14.8 -4.1% 91.8±16.1 83.8±15.8 -8.7%

HDL, mg/dL: 51.3±3.2 53.1±3.8 3.7 % 46.9±3.4 48.5±3.7 3.5% 48.6±4.6 49.3±4.3 1.3%

LDL, mg/dL: 86.1±5.3 8±.5±5.7 0.4% 88.4±3.0 85.6±4.1 -3.1 % 87.5±5.7 89.4±4.9 2.1%

Relacion de colesterol: 3.0±0.1 3.0±0.1 -2.5 % 3.4±0.2 3.3±0.3 -3.3% 3.3±0.2 3.3±0.2 -0.4%

1 Medial Error estandar de la media

2Valor P para el efecto de tratamiento de la diferencia en los valores de inicio y finalizacion indicados por % de cambio para cada tratamiento.

Claims

5

10

15

20

25

30

35

Reivindicaciones

1. Una composicion que comprende acido beta-hidroxi-beta-metilbutmco (HMB) en forma de acido libre (acido HMB) para uso en la mejora de la efectividad de HMB tras la administracion, en comparacion con la administracion de una dosificacion similar de una composicion HMB de sal de calcio en la disminucion del dano muscular en el musculo sometido a estres, la disminucion del dano muscular en el musculo sometido a dano, mejorando la respuesta inmune de una persona o disminuyendo la emaciacion asociada a la enfermedad.
2. Una composicion para uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde el acido HMB se formula como un gel o un lfquido.
3. Una composicion de acuerdo con la reivindicacion 1 o la reivindicacion 2 en forma de una composicion oral.
4. Una composicion de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 en forma de una composicion sublingual.
5. Una composicion para uso de acuerdo con cualquier reivindicacion precedente, en donde el acido HMB esta presente en una cantidad de 0.5 gramos a 30 gramos.
6. Una composicion para uso de acuerdo con la reivindicacion 5, en donde el acido HMB se administra una vez por penodo de veinticuatro horas.
7. Una composicion de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde el acido HMB se administra en una cantidad de 0.01 a 0.2 gramos de acido HMB por kilogramo de peso corporal por veinticuatro horas.
8. Un metodo no terapeutico para mejorar la retencion de nitrogeno, mejorar el ahorro de protemas, mejorar la masa corporal magra, mejorar la funcion muscular, mejorar el rendimiento muscular, mejorar el perfil lipfdico de una persona o mejorar el estado emocional de una persona, incluyendo administrar acido beta-hidroxi-beta metilbutmco) en forma de acido libre (acido HMB)
9. Un metodo de acuerdo con la reivindicacion 8, en donde el acido HMB se formula como un gel o un lfquido.
10. Un metodo de acuerdo con la reivindicacion 8 o la reivindicacion 9, en donde el acido HMB esta en forma de una composicion oral o sublingual.
11. Un metodo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10, en donde el acido HMB esta presente en una cantidad de 0.5 gramos a 30 gramos.
12. Un metodo de acuerdo con la reivindicacion 11, en donde el acido HMB se administra una vez por penodo de veinticuatro horas.
13. Un metodo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 12, en donde el acido HMB se administra en una cantidad de 0.01 a 0.2 gramos de acido HMB por kilogramo de peso corporal por veinticuatro horas.
14. Una composicion que comprende acido beta-hidroxi-beta-metilbutmco (HMB) en forma de acido libre (acido HMB) como una formulacion en gel.
15. Una composicion que comprende acido beta-hidroxi-beta-metilbutmco (HMB) en forma de acido libre (acido HMB) como una formulacion lfquida
16. Una composicion de acuerdo con la reivindicacion 14 o 15 en forma de una composicion oral o una composicion sublingual.

imagen1

2000

LDH

1500

100 q

CPK >

500

Tiempo relacionado con sesion de ejercicio, h

FIG. I

Fuerza

S'

r ^

40

:_>

CTi

$1 Mialgia

Tiempo relacionado con sesion de ejercicio, h

FIG. 2

HMB mmol\mL en plasma

imagen2

30 60 90 120

Tiempo, min

150

180

FIG. 3

A) Concentration Pico

B) Tiempo para Concentracion Pico

imagen3

.

1

CaHMB FASW FASL

CaHMB FASW

FIG. 4

HMB nrnoI\mL en plasma

imagen4

200

400

600 800 Time,min

1000 1200 1400

FIG. 5

A) Concentracion Pico

B) Tiempo para Concentracion Pico

imagen5

CaHWE FASW FASL

CaHMB FASW

FIG. 6

imagen6

1 HMB lelemdo

S HuB unnana

CbHMB

FAS1N

FAS L

hlG. 7

30 min despues de primera dosis

Ejercicio agudo flexor de rodilla

Tiefnpo, h

Dosmcacion de tratamiento 3 veces por dia con placebo apropiado para cegar

Las muestras de sangre y onna se tomaron a 0, 24, 48, 72 y 96 h

HG.S

imagen7

450 1"

250

T lempo, h

fin 9 Cambio de creatmina fosfoquinasa en suero (CPK) despues de ura sesion de

ejercicio excentnco. — ■ — placebo, -A- HMB de calcio pro-, -X- gel de acido libre de HMB

pre-, HMB de calcio pre- y post ejercicio. andgel de acido libre de HMB Pre_ y P01*1

ejercicio. * P < 0.03 contrasts con todos los otros tratamientos; ** p < 0.005 contrasto con todos los

otros tratamientos y P < 0.06 contrasto con CaHMB solo y Placebo solo