ES2605164T3

ES2605164T3 - Inhibidores del canal de potasio de la médula renal externa

Info

Publication number: ES2605164T3
Application number: ES12826237.5T
Authority: ES
Inventors: Alexander Pasternak; Timothy Blizzard; Harry Chobanian; Reynalda DE JESUS; Fa-Xiang Ding; Shuzhi DONG; Candido Gude; Dooseop Kim; Haifeng Tang; Shawn Walsh; Barbara Pio; Jinlong Jiang
Original assignee: Merck Sharp and Dohme LLC
Current assignee: Merck Sharp and Dohme LLC
Priority date: 2011-08-19
Filing date: 2012-08-16
Publication date: 2017-03-13
Anticipated expiration: 2032-08-16
Also published as: AU2012299227A1; EP2744499A4; US20140206618A1; EP2744499A1; CN103874493A; BR112014003801A2; EP2744499B1; MX2014001946A; WO2013028474A1; CA2844310A1; JP2014521751A; US9062070B2; KR20140052034A; RU2014110401A

Abstract

Un compuesto que tiene la Formula estructural Ia:**Fórmula** o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en la que: Z es**Fórmula** R1 es**Fórmula** en la que *** indica una union al carbono del carbonilo y ** indica la union al anillo tetrazolilo en la Formula Ia; X es O, NH o S; m es un numero entero seleccionado entre 1 o 2; n es un numero entero seleccionado entre 1 o 2; cada uno de X1, X2 y X3 se selecciona independientemente entre C(R7) o N, con la condicion de que al menos uno de X1, X2 y X3 deba ser N y como mucho dos de X1, X2 y X3 sean N; Ra es -CN; Rb es -H o -alquilo C1-6; R2 es -H, -F, -Cl, -alquilo C1-6, -cicloalquilo C3-6 u -Oalquilo C1-6; R3 es -H, -F, -Cl, -CN, -alquilo C1-6, -cicloalquilo C3-6 u -Oalquilo C1-6; R4 es -F, -Cl, -CN, -alquilo C1-6, -cicloalquilo C3-6, -Oalquilo C1-4 o N-tetrazolilo; o R3 y R4 se acoplan junto con los atomos de carbono en el anillo fenilo al que estan unidos para formar: en las que R es -H o -alquilo C1-4; R5 es -H, -Cl, -F, -CN, -alquilo C1-4, -cicloalquilo C3-6 u -Oalquilo C1-4; con la condicion de que cuando R3 y R4 no estan unidos entre si, entonces uno, y solo uno de R3, R4 o R5 es -CN; R6 es -H o -alquilo C1-4; y R7 es -H, -F, -Cl o -alquilo C1-4.

Description

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dosificación descritas en este documento.

La cantidad de compuesto activo de Fórmula Ia y/o sus sales farmacéuticamente aceptables en la composición farmacéutica puede ser, por ejemplo, aunque sin limitación, de 0,1 a 200 mg, particularmente de 0,1 a 100 mg y más

5 particularmente de 0,1 a 50 mg, por dosis en una base en peso de ácido libre/base libre, pero dependiendo del tipo de la composición farmacéutica, potencia del ingrediente activo y/o la afección médica que se está tratando, también podría ser inferior o mayor. Las composiciones farmacéuticas habitualmente comprenden de un 0,5 a un 90 por ciento en peso del compuesto activo sobre una base en peso de ácido libre/base libre.

Los compuestos de Fórmula Ia inhiben ROMK. Debido a esta propiedad, aparte del uso como compuestos farmacéuticamente activos en medicina humana y medicina veterinaria, también pueden emplearse como una herramienta científica o como auxiliar para investigaciones bioquímicas en que se pretende dicho efecto sobre ROMK, y también con fines de diagnóstico, por ejemplo, en el diagnóstico in vitro de muestras celulares o muestras tisulares. Los compuestos de Fórmula Ia también pueden emplearse como intermedios para la preparación de otros compuestos

15 farmacéuticamente activos.

Puede administrarse uno o más principios activos farmacológicos adicionales en combinación con un compuesto de Fórmula Ia. El agente (o agentes) activo adicional pretende indicar un compuesto que es diferente del compuesto de Fórmula Ia y que es un agente (o agentes) farmacéuticamente activo que es activo en el organismo, incluyendo profármacos que se convierten en una forma farmacéuticamente activa después de su administración, y también incluye el ácido libre, base libre y sales farmacéuticamente aceptables de dichos principios activos adicionales cuando dichas formas se venden en el mercado o son químicamente posibles de otro modo. Generalmente, cualquier agente o principios activos adicionales adecuados, incluyendo, aunque sin limitación, agentes anti-hipertensivos, diuréticos adicionales, agentes anti-ateroscleróticos tales como un compuesto modificador de lípidos, agentes antidiabéticos y/o 25 agentes anti-obesidad pueden usarse en cualquier combinación con el compuesto de Fórmula Ia en una única formulación de dosificación (una combinación de fármaco de dosis fija), o pueden administrarse al paciente en una o más formulaciones de dosificación separadas que permite la administración concurrente o secuencial de los principios activos (co-administración de los principios activos separados). Ejemplos de principios activos adicionales que pueden emplearse incluyen, aunque sin limitación, inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina (por ejemplo, alacepril, benazepril, captopril, ceronapril, cilazapril, delapril, enalapril, enalaprilat, fosinopril, imidapril, lisinopril, moveltipril, perindopril, quinapril, ramipril, espirapril, temocapril, o trandolapril); antagonistas del receptor de angiotensina II también conocidos como bloqueantes del receptor de angiotensina ARB (por ejemplo, losartán es decir, COZAAR®, valsartán, candesartán, olmesartán, telmesartán, eprosartán, irbesartán y cualquiera de estos fármacos usados en combinación con hidroclorotiazida tal como HYZAAR®); diuréticos, por ejemplo hidroclorotiazida (HCTZ); 35 diuréticos moderadores de potasio tales como amilorida HCl, espironolactona, epleranona, triamtereno, cada uno con

o sin HCTZ; inhibidores de endopeptidasa neutra (por ejemplo, tiorfano y fosforamidona); antagonistas de aldosterona; inhibidores de la aldosterona sintasa; inhibidores de renina (por ejemplo, derivados de urea de di- y tripéptidos (véase la patente de Estados Unidos n.º 5.116.835), aminoácidos y derivados (patentes de Estados Unidos n.º 5.095.119 y 5.104.869), cadenas de aminoácidos unidas por enlaces no peptídicos (patente de Estados Unidos n.º 5.114.937), derivados de di- y tripéptidos (patente de Estados Unidos n.º 5.106.835), peptidil amino dioles (patentes de Estados Unidos n.º 5.063.208 y 4.845.079) y peptidil beta-aminoacil aminodiol carbamatos (patente de Estados Unidos n.º 5.089.471); también de otros diversos análogos peptídicos descritos en las siguientes patentes de Estados Unidos n.º 5.071.837; 5.064.965; 5.063.207; 5.036.054; 5.036.053; 5.034.512 y 4.894.437 e inhibidores de renina de molécula pequeña (incluyendo sulfonamidas de diol y sulfinilos (patente de Estados Unidos n.º 5.098.924), derivados de 45 N-morfolino (patente de Estados Unidos n.º 5.055.466), alcoholes N-heterocíclicos (patente de Estados Unidos n.º 4.885.292) y pirolimidazolonas (patente de Estados Unidos n.º 5.075.451); también, derivados de pepstatina (patente de Estados Unidos n.º 4.980.283) y fluoro- y cloro-derivados de péptidos que contienen estatona (patente de Estados Unidos n.º 5.066.643); enalcreína; RO 42-5892; A 65317; CP 80794; ES 1005; ES 8891; SQ 34017; alisquireno (hemifumarato de 2(S),4(S),5(S),7(S)-N-(2-carbamoil-2-metilpropil)-5-amino-4-hidroxi-2,7-diisopropil-8-[4-metoxi-3-(3metoxipropoxi)-fenil]-octanamida) SPP600, SPP630 y SPP635); antagonistas del receptor de endotelina; vasodilatadores (por ejemplo, nitroprúsido); bloqueantes del canal de calcio (por ejemplo, amlodipina, nifedipina, verapamil, diltiazem, , felodipina, gallopamil, niludipina, nimodipina, nicardipina); activadores del canal de potasio (por ejemplo, nicorandil, pinacidil, cromacalim, minoxidil, aprilcalim, loprazolam); simpaticolíticos; fármacos bloqueantes beta-adrenérgicos (por ejemplo, acebutolol, atenolol, betaxolol, bisoprolol, carvedilol, metoprolol, tartato de metoprolol, 55 nadolol, propranolol, sotalol, timolol); fármacos bloqueantes alfa adrenérgicos (por ejemplo, doxazocina, prazocina o alfa metildopa); agonistas centrales alfa adrenérgicos; vasodilatadores periféricos (por ejemplo, hidralazina); agentes reductores de lípidos, por ejemplo, inhibidores de HMG-CoA reductasa tales como simvastatina y lovastatina que están comercializados como ZOCOR® y MEVACOR® en forma de profármaco lactona y funcionan como inhibidores después de su administración, y sales farmacéuticamente aceptables de inhibidores de la HMG-CoA reductasa ácidos de anillo abierto dihidroxi tales como atorvastatina (particularmente la sal de calcio vendida como LIPITOR®), rosuvastatina (particularmente la sal de calcio vendida como CRESTOR®), pravastatina (particularmente la sal de sodio vendida como PRAVACHOL®), y fluvastatina (particularmente la sal de sodio vendida como LESCOL®); un inhibidor de la absorción de colesterol tal como ezetimibe (ZETIA®), y ezetimibe en combinación con cualquier otro agente reductor de lípidos tales como los inhibidores de la HMG-CoA reductasa indicados anteriormente y

65 particularmente con simvastatina (VYTORIN®) o con atorvastatina de calcio; niacina en formas de liberación inmediata

o de liberación controlada, y particularmente niacina en combinación con un antagonista DP tal como laropiprant

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Los intermedios 2 (en el Esquema 1) pueden prepararse de diversas maneras dependiendo de la estructura de 2; en la sección experimental posterior se muestran varios métodos.

5 Los epóxidos 3 pueden prepararse por diversos métodos. Un enfoque se describe mediante el Esquema 6. Pueden acoplarse haluros de arilo o heterociclo (bromuro 12 mostrado) para formar los productos de alqueno 13 de diversas maneras, por ejemplo por reacción de Heck o por reacción con tetrafluoroborato de vinil (Molander, G.; Luciana, A. Journal of Organic Chemistry, 2005, 70(10), 3950-3956) en condiciones de acoplamiento catalizado por paladio con un

10 ligando de fosfina adecuado (Molander, G.; Brown, A. Journal of Organic Chemistry, 2006, 71(26), 9681-9686). Después, los alquenos 13 pueden convertirse en los epóxidos correspondientes 3 de varias maneras, incluyendo tratamiento con ácido metacloroperoxibenzoico (Fringuelli, F. et al. Organic Preparations and Procedures International, 1989, 21(6), 757-761).

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Las bromometilcetonas 7 pueden prepararse de diversas maneras; una ruta se representa en el Esquema 7. De acuerdo con el Esquema, pueden hacerse reaccionar haluros de arilo o heterocíclicos (bromuro 12 mostrado) con tributil(1-etoxivinil)estaño en presencia de un catalizador metálico, tal como PdCl2(PPh3)2 para proporcionar un

20 etilenoléter intermedio. Posteriormente, este se trata en el mismo recipiente de reacción con N-bromosuccinimida (NBS) con agua y tetrahidrofurano añadido para proporcionar las bromometilcetonas 7. Pueden prepararse de modo similar clorometil cetonas empleando N-clorosuccinimida en lugar de N-bromosuccinimida.

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43D: TFA; EM (M+H)+ 289 44A HCl; EM (M+H)+ 303

44B: HCl 44C HCl

44E: HCl 44F HCl;

44G: HCl; EM (M+H)+ 303 45B TFA; EM (M+H)+ 315

46A: TFA; EM (M+H)+ 303 47A HCl; EM (M+H)+ 307

48A: HCl; EM (M+H)+ 321 48C HCl; EM (M+H)+ 321

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48D: HCl; EM (M+H)+ 321 48F HCl; EM (M+H)+ 321

48G: HCl; EM (M+H)+ 321 48H HCl; EM (M+H)+ 321

49A: TFA; EM (M+H)+ 303 49B TFA; EM (M+H)+ 303

49C: TFA; EM (M+H)+ 303 49D TFA; EM (M+H)+ 303

50A: TFA; EM (M+H)+ 262 50D HCl;

51A: TFA; CL/EM: [(M+1)]+ = 292 52A TFA; CL/EM: [(M+1)]+ = 280

52B: TFA; CL/EM: [(M+1)]+ = 280 52C TFA; CL/EM: [(M+1)]+ = 280

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52D: TFA; CL/EM: [(M+1)]+ = 280 53C TFA; CL/EM: [(M+1)]+ = 292

54A: TFA; CL/EM: [(M+1)]+ = 292 55A TFA; CL/EM: [(M+1)]+ = 258

55D: HCl; CL/EM: [(M+1)]+ = 258 56A TFA; CL/EM: [(M+1)]+ = 264

57A: TFA; CL/EM: [(M+1)]+ = 305 58A TFA; CL/EM: [(M+1)]+ = 296

58B: TFA; CL/EM: [(M+1)]+ = 296 58C TFA; CL/EM: [(M+1)]+ = 296

58D: TFA; CL/EM: [(M+1)]+ = 296 59B HCl; CL/EM: (IE, m/z) [M+1]+ = 276

60C: TFA; CL/EM: [(M+1)]+ = 292

1-50D: RMN 1H (400 MHz, MeOD) δ: 7,84 ~ 7,86 (m, 1H), 7,77 ~ 7,81 (m, 1H), 7,40 (t, J= 8,0 Hz, 1H), 5,02 ~ 5,07 (m, 1H), 4,20 ~ 4,23 (m, 1H), 3,89 ~ 3,93 (m, 1H), 3,55 ~ 3,63 (m, 6H), 3,33 ~ 3,34 (m, 1H), 3,19 ~ 3,24 (m, 1H), 3,01 ~ 3,12 (m, 1H).

INTERMEDIO 61

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El disolvente se evaporó para producir la sal de HCl de cada diastereómero. Isómero 2G, sal de HCl: RMN 600 MHz (CD3OD) (mezcla de rotámeros de amida) 10,012 (s, 0,5H); 10,007 (s, 0,5H); 8,72 (s, 0,5H); 8,68 (s, 0,5H); 8,00 (t ap a, 1H); 7,31 (dt, 1H); 5,11 (t, 1H); 4,60-4,72 (m, 2H); 4,41 (d, 0,5H); 4,09-4,31 (m, 3H); 3,91 (t, 0,5H); 3,88 (dd, 1,5H); 3,31-3,62 (m, 4H); 3,20-3,28 (m, 2,5H); 2,72-2,86 (m, 1H); 2,61 (s, 3H); 2,30-2,37 (m, 0,5H); 2,21-2,27 (m, 0,5H);

5 CL/EM 531 (M+H+CH3CN). Isómero 2H, sal de HCl: RMN 600 MHz (CD3OD) (mezcla de rotámeros de amida) 10,02 (s, 1H); 8,72 (s, 0,6H); 8,69 (s, 0,4H); 8,02 (t ap., 0,4H); 7,98 (t ap., 0,6H); 7,28-7,33 (m, 1H); 5,09 (d, 1H); 4,72-4,77 (m, 1H); 4,64 (d, 0,5H); 4,57 (d, 3H); 4,34 (d, 0,5H); 4,28 (d, 0,5H); 4,05-4,20 (m, 2,5H); 3,86 (t, 1H); 3,75 (c, 1H); 3,48-3,63 (m, 2H); 3,26 (t, 1H); 3,23 (t, 1H); 2,74-2,81 (m, 1H); 2,61 (s, 3H); 2,30-2,36 (m, 0,5H); 2,20-2,27 (m, 0,5H); CL/EM 531 (M+H+CH3CN).

10 Los siguientes Ejemplos en la Tabla 3 se prepararon de una manera análoga a la descrita para la síntesis de los Ejemplos 1AB a 1L y 2AB a 2H, a partir de la amina e intermedios de ácido carboxílico adecuados (preparados como se ha descrito anteriormente) usando uno de los agentes de acoplamiento de amida EDC o HATU. El acoplamiento de amida proporciona dos productos diastereoméricos que son epímeros en el centro quiral alfa con respecto al carbonilo

15 de amida (es decir, el centro quiral aza-indano). Los dos productos diastereoméricos se separan normalmente de una manera similar a la descrita en los Ejemplos anteriores. La columna de HPLC quiral usada para cada Ejemplo se indica en la Tabla 3, así como el orden de elusión observado. Para muchos de los Ejemplos en la Tabla 3, los dos diastereómeros no se separaron y se incluye la mezcla de dos diastereómeros resultantes.

20 En las Tablas 3 y 4, elusión más rápida y elusión más lenta se refiere al orden de elusión observado de un diastereómero aza-indano individual tras separación de su mezcla de isómero aza-indano. La estereoquímica absoluta de los otros estereocentros en cada compuesto se conoce basándose en sus intermedios y síntesis correspondientes y son según se representan.

25 TABLA 3

Número de EJEMPLO

3

isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC: columna Chiralcel AS-H (elusión más rápida). CL/EM 544 (M+H+CH3CN). RMN 500 MHz (CD3OD+D2O) (mezcla de rotámeros de amida) 10,01 (s, 1H); 8,73 (s a, 0,75H); 8,70 (s a, 0,25H); 7,87 (dd, 1H); 7,80 (dd, 1H); 5,42 (ab q, 2H); 5,25 (dt a, 1H); 4,74 (dd, 1H); 4,60 (dt a, 0,5H); 4,40 (d, 0,5H); 4,20-4,34 (m, 3H); 3,80-3,95 (m, 1,5H); 3,33-3,76 (m, 5,5H); 3,21-3,28 (m, 2H); 2,73-2,84 (m, 1H); 2,41 (s, 3H); 2,20-2,39 (m, 1H). 4-metil-5-[(3S,9aS)-8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-5il]carbonil} octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il-2-benzofuran-1(3H)-ona

4: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AS, elusión más rápida; CL/EM 489 (M+H)+ 6-fluoro-2-metil-3-[(3S,9aS)- 8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il ]benzonitrilo

5: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AS, elusión más lenta; CL/EM 489 (M+H)+ 6-fluoro-2-metil-3-[(3S,9aS)-8-{[2-(1Htetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3- il)benzonitrilo

73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88

6: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna OJ-H, elusión más rápida; CL/EM 489 (M+H)+ . 6-fluoro-2-metil-3-[(3R,9aS)-8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}- octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3- il]benzonitrilo

7: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna OJ-H, elusión más lenta; CL/EM 489 (M+H)+ 6-fluoro-2-metil-3-[(3R,9aS)-8-{[2-(1H-tetrazol1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3- il]benzonitrilo

8: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AS, elusión más rápida; CL/EM 503 (M+H)+ 6-fluoro-2-metil-3-[(3S,9aS)- 8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-5,6,7,8-tetrahidroquinolin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3- il]benzonitrilo

9: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AS, elusión más lenta; CL/EM 503 (M+H)+ 6-fluoro-2-metil-3-[(3S,9aS)- 8-{[2-(1H-tetrazol-il)-5,6,7,8-tetrahidroquinolin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3- il]benzonitrilo

10: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AS, elusión más rápida; CL/EM 503 (M+H)+ 6-fluoro-2-metil-3-[(3R,9aS]-8-{[2-(1 Htetrazol-1-il)-5,6,7,8-tetrahidroquinolin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3- il]benzonitrilo

11: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AS, elusión más lenta; CL/EM 503 (M+H)+ 6-fluoro-2-metil-3-[(3R,9aS)- 8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-5,6,7,8-tetrahidroquinolin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3- il]benzonitrilo

12: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AS, elusión más rápida; CL/EM 503 (M+H)+ 6-fluoro-2-metil-3-[(3R,9aR)- 8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-5,6,7,8-tetrahidroquinolin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3- il]benzonitrilo

13: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AS, elusión más rápida; CL/EM 503 (M+H)+ 6-fluoro-2-metil-3-[(3S,9aR)- 8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-5,6,7,8-tetrahidroquinolin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3- il]benzonitrilo

14: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AS, elusión más rápida; CL/EM 516 (M+H)+ 6-[(3R,9aS)-8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-5,6,7,8-tetrahidroquinolin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin

3-il]-3,4-dihidro-1H-isocromen-1-ona

15: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AD, elusión más rápida; CL/EM 477 (M+H)+ 3-metil-4-[(3R,9aS)-8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}octahidropirazino- [2,1-c][1,4]oxazin-3- il]tiofeno-2-carbonitrilo

16: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna IC, elusión más rápida; CL/EM 502 (M+H)+ 6-[(3S,9aR)-8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]-3,4-dihidro-1H-isocromen-1-ona

17: Mezcla de dos diastereómeros en centro aza-indano (no separados); CL/EM 502 (M+H)+ 6-[(3R,9aS)- 8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3- il]-3,4-dihidro-1H-isocromen-1-ona

17A: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna IC, elusión más rápida; CL/EM 502 (M+H)+ 6-[(3R,9aS)-8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro- 5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]-3,4-dihidro-1H-isocromen-1-ona

18: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak IC, elusión más rápida; CL/EM 493 (M+H)+ 2,6-difluoro-3-[(3R,9aS)-8-{2-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}octahidro- pirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3- il]benzonitrilo

19: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak IC, elusión más rápida. CL/EM 493 (M+H)+ 2,6-difluoro-3-[(3S,9aS)-8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}octahidro- pirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3- il]benzonitrilo

20: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AD, elusión más rápida; CL/EM 493 (M+H)+ 2,6-difluoro-3-[(3R,9aR)-8-{[2-(1 H-tetrazol- 1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3- il]benzonitrilo

21: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AD, elusión más rápida; CL/EM 493 (M+H)+ 2,6-difluoro-3-[(3S,9aR)-8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}- octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]benzonitrilo

22: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak IC, elusión más lenta; CL/EM 493 (M+H)+ 2,6-difluoro-3-[(3R,9aS)-8-{[3-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[c]piridin-7-il]carbonil}- octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]benzonitrilo

23: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AD, elusión más rápida; CL/EM 493 (M+H)+ 2,6-difluoro-3-[(3S,9aR)-8-{[3-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[c]piridin-7-il]carbonil}- octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]benzonitrilo

24: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AD, elusión más rápida; CL/EM 493 (M+H)+ 2,6-difluoro-3-[(3R,9aR)-8-{[3-(1H- tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[c]piridin-7-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3- il]benzonitrilo

25: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna IC, elusión más lenta; CL/EM 493 (M+H)+ 2,6-difluoro-3-[(3S,9aS)-8-{3-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[c]piridin-7-il}carbonil}- octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]benzonitrilo

26: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak IC, elusión más rápida; CL/EM 509 (M+H)+ . 2-cloro-6-fluoro-3-[(3R,9aS)-8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}- octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]benzonitrilo

27: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak IC, elusión más lenta; CL/EM 509 (M+H)+. 2-cloro-6-fluoro-3-[(3R,9aS)-8-{[2-(1Htetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3- il]benzonitrilo

28: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak IC, elusión más rápida; CL/EM 509 (M+H)+ .2-cloro-6-fluoro-3-[(3S,9aS)- 8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il] benzonitrilo

29: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak IC, elusión más lenta; CL/EM 509 (M+H)+. 2-cloro-6-fluoro-3-[(3S, 9aS)- 8-{[2-(1H-tetrazo-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il] benzonitrilo

30: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AS, elusión más rápida; CL/EM 509 (M+H)+ .2-cloro-6-fluoro-3-[(3S,9aR)- 8-{[2-(1H-tetrazo-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il] benzonitrilo

31: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak IC, elusión más lenta; CL/EM 509 (M+H)+ 2-cloro-6-fluoro-3-[(3R,9aS)- 8-{[3-1H-tetrazo-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[c]piridin-7-incarbonil)octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]b

enzonitrilo

32: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak IC, elusión más lenta; CL/EM 509 (M+H)+ 2-cloro-6-fluoro-3-[(3S,9aS)-8-{3-(1H tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[c]piridin-7-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3- il]benzonitrilo

33: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AS, elusión más lenta; CL/EM 502 (M+H)+ 4-metil-5-[(3S,9aS)-8-{[2-(1H-tetrazol1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]-2- benzofuran-1(3H)-ona

34: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AS, elusión más rápida; CL/EM 489 (M+H)+. 6-fluoro-2-metil-3-[(3S,9aR)- 8-{[2-(1H-tetrazo-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il] benzonitrilo

35: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AD-H, elusión más rápida; CL/EM 489 (M+H)+ 6-fluoro-2-metil-3-[(3S,9aS)8-{[3-(1H-tetrazo-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[c]piridin-7-incarbonil}octahidropirazino[2,1-c][14]oxazin-3-il] benzonitrilo

36: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AD-H, elusión más lenta; CL/EM 489 (M+H)+ 6-fluoro-2-metil-3-[(3S,9aS)-8-{[3- (1Htetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[c]piridin-7-carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3- il]benzonitrilo

37: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AS-H, elusión más rápida; CL/EM 489 (M+H)+. 6-fluoro-2-metil-3-[(3R,9aS)8-{[3-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-7-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]

benzonitrilo

38: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AS-H, elusión más lenta; CL/EM 489 (M+H)+. 6-fluoro-2-metil-3-[(3R,9aS)- 8-{[3-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-7-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]

benzonitrilo

39: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak OJ-H, elusión más lenta; CL/EM 489 (M+H)+. 6-fluoro-2-metil-3-[(3S,9aR)- 8-{[3-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-7-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]

benzonitrilo

40: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AD-H, elusión más rápida; CL/EM 489 (M+H)+ 6-fluoro-2-metil-3-[(3S,9aR)-8-{[3(1Htetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[c]piridin-7-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3- il]benzonitrilo

41: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AD-H, elusión más lenta; CL/EM 489 (M+H)+ 6-fluoro-2-metil-3-[(3S,9aR)- 8-{[3-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[c]piridin-7-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]

benzonitrilo

42: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AD-H, elusión más rápida; CL/EM 489 (M+H)+ 6-fluoro-2-metil-3-[(3R,9aR)- 8-{[3-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[c]piridin-7-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]

benzonitrilo

43: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AD-H, elusión más lenta; CL/EM 489 (M+H)+. 6-fluoro-2-metil-3-[(3R,9aR)- 8-{[3-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclo-penta[c]piridin-7-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il

]benzonitrilo

44: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak IC-H, elusión más lenta; CL/EM 489 (M+H)+ 6-fluoro-2-metil-3-[(3R,9aS)- 8-{[3-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[c]piridin-7-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3- il]benzonitrilo

45: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak IC-H, elusión más lenta; CL/EM 502 (M+H)+ 6-[(3R,9aS)-8-{[3-(1H-tetrazol-1- il-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[c]piridin-7-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]-3,4-dihidro- 1H-isocromen-1-ona

46: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak IC-H, elusión más lenta; CL/EM 516 (M+H)+. (3R)-3-metil-6-[(3S,9aS)- 8-{[3-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[c]piridin-7-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]

-3,4-dihidro-1H-isocromen-1-ona

47: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak IC-H, elusión más rápida; CL/EM 516 (M+H)+. (3R)-3-metil-6-[(3R,9aS)-8-{[3- (1Htetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[c]piridin-7-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]- 3,4-dihidro-1H-isocromen-1-ona

48: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak IC-H, elusión más lenta; CL/EM 516 (M+H)+. (3R)-3-metil-6-[(3R,9aS)- 8-{[3-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[c]piridin-7-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]

-3,4-dihidro-1H-isocromen-1-ona

49: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AS-H, elusión más rápida; CL/EM 502 (M+H)+. 4-metil-5-[(3S,9aS)-8-{[3-(1H- tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[c]piridin-7-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]-2- benzofuran-1(3H)-ona

50: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AS-H, elusión más rápida; CL/EM 502 (M+H)+ 4-metil-5-[(3R,9aS)-8-{[3-(1H- tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[c]piridin-7-incarbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il-2benzofuran-1(3H)-ona

51: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AD, elusión más lenta; CL/EM 487 (M+H)+ 2-metoxi-4-[(3S,9aS)-8-{[2- (1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-incarbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3- il]benzonitrilo

52: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AD-H, elusión más lenta; CL/EM 505 (M+H)+ 6-fluoro-2-metoxi-3-[(3R,9aS)8-{[3-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[dpiridin-7-il]carbonil}octahidropirazin[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]b enzonitrilo

53: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AD-H, elusión más rápida; CL/EM 488 (M+H)+ 5-[(3R,9aS)-8-{3-(1H-tetrazol- 1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[c]piridin-7-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]-2-benzofuran- 1(3H)-ona

54: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AD-H, elusión más lenta; CL/EM 488 (M+H)+ 5-[(3R,9aS)-8-{[3-(1H-tetrazol-1-il)6,7-dihidro-5H-ciclopenta[c]piridin-7-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]-2-benzofuran- 1(3H)-ona

55: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AD-H, elusión más rápida; CL/EM 488 (M+H)+ 5-[(3S,9aS)-8-{[3-(1H- tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[c]piridin-7-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]-2- benzofuran-1(3H)-ona

56: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AD-H, elusión más lenta; CL/EM 488 (M+H)+ 5-[(3S,9aS)-8-{[3-(1H-tetrazol-1-il)6,7-dihidro-5H-ciclopenta[c]piridin-7-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]-2-benzofuran- 1(3H)-ona

57: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AS, elusión más rápida; CL/EM 488 (M+H)+ 5-[(3R,9aS)-8-{[2-(1H-tetrazol- 1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]-2-benzofuran- 1(3H)-ona

58: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AS, elusión más lenta; CL/EM 488 (M+H)+ 5-[(3S,9aS)-8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-6,7dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]-2-benzofuran- 1(3H)-ona

59: aislado de HPLC quiral en columna Chiralcel OD-H, pico 1; CL/EM 530 (M+H)+. (3S)-3-metil-6-(9a- metil-8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c] [1,4]oxazin-3-il)-3,4-dihidro-1H-isocromen-1-ona

60: aislado de HPLC quiral en columna Chiralcel OD, pico 2; CL/EM 530 (M+H)+. (3S)-3-metil-6-(9a-metil- 8-{[2-(1H-tetrazo-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il) -3,4-dihidro-1H-isocromen-1-ona

61: SFC en columna Chiralpak OJ-H, elusión más lenta; cis R,R o S,S en octahidro-2H- pirazino[1,2-d][1,4]oxazepina; desconocido en aza-indano, isómero individual; CL/EM 516 (M+H)+; 4-metil-5(2-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}octahidro-2H-pirazino[1,2-d][1,4] oxazepin-7-il)-2-benzofuran-1(3H)-ona

62: SFC en columna Chiralpak OJ-H, elusión más lenta; trans R,S o S,R en octahidro-2H-pirazino[1,2d][1,4]oxazepina; desconocido en aza-indano, isómero individual; CL/EM 516 (M+H)+; 4-metil-5(2-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}octahidro-2H-pirazino[1,2-d][1,4] oxazepin-7-il)-2-benzofuran-1(3H)-ona

63: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AS, elusión más lenta; CL/EM 487 (M+H)+ 2-metoxi-4-[(3R,9aR)-8-{[2-(1H- tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3- il]benzonitrilo

64: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AD-H, elusión más rápida; CL/EM 509 (M+H)+ .2-cloro-6-fluoro-3-[(3R,9aR)- 8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]

benzonitrilo

65: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AD-H, elusión más lenta; CL/EM 509 (M+H)+. 2-cloro-6-fluoro-3-[(3R,9aR)- 8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]

benzonitrilo

66: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AD-H, elusión más rápida; CL/EM 502 (M+H)+ 4-metil-5-[(3R,9aS)- 8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3- il]-2-benzofuran-1(3H)-ona

67: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AS, elusión más rápida; CL/EM 502 (M+H)+ 4-metil-5-[3R,9aR)-8-{[2- (1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]-2- benzofuran-1(3H)-ona

68: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna ChiralCel OD-H, elusión más rápida; CL/EM 493 (M+H)+ 2,4-difluoro-5-[(3R,9aS)- 8-{[3-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[c]piridin-7-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]

benzonitrilo

69: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna Chiralcel AS, elusión más lenta; CL/EM 516 (M+H)+ 4-etil-5-[(3S,9aS)-8-{[2-(1H-tetrazol-1il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]-2benzofuran-1(3H)-ona

70: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak IC, elusión más lenta; CL/EM 505 (M+H)+ 2-fluoro-3-metoxi-4-[(3R,9aS)- 8-{[3-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[c]piridin-7-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]

benzonitrilo

71: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralcel IC, elusión más rápida; CL/EM 471 (M+H)+ 2-metil-3-[(3R,9aS)- 8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]

benzonitrilo

72: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralcel AS, elusión más rápida; CL/EM 518 (M+H)+ 4-metil-5-[(3S,9aS)8-{[3-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[c]piridin-7-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]tiazin-3-il]2- benzofuran-1(3H)-ona

73: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna Chiralcel AS, elusión más lenta; CL/EM 518 (M+H)+ 4-metil-5-[(3S,9aS)-8-{[3-(1H-tetrazol1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[c]piridin-7-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]tiazin-3-il]-2- benzofuran-1(3H)-ona

74: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AD-H, elusión más rápida; CL/EM 501 (M+H)+ 6-metoxi-2-metil-3-[(3S,9aR)- 8-{[3-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[c]piridin-7-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]

benzonitrilo

75: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna Chiralcel AS, elusión más lenta; CL/EM 490 (M+H)+. 6-fluoro-2-metil-3-[(3R,9aR)- 8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-6-il]carbonil}octahidropirazino[2,1- c][1,4loxazin-3-il]benzonitrilo

76: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna OJ, elusión más lenta; CL/EM 490 (M+H)+. 6-fluoro-2-metil-3-[(3S,9aS)-8-{[2-(1H-tetrazol-1il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-6-il]carbonil]octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3- il)benzonitrilo

77: SFC en columna IA, elusión más rápida; CL/EM 505 (M+H)+. 4-fluoro-2-metoxi- 5-[(3S,9aR)-8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c] [1,4]oxazin-3-il]benzonitrilo

78: SFC en columna Chiralcel OJ-H, elusión más lenta; CL/EM 520 (M+H)+ 5-fluoro-6-[(3R,9aS)- 8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3- il]-3,4-dihidro-1H-isocromen-1-ona

79: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralcel OJ-H, elusión más rápida; CL/EM 476 (M+H)+ 2-fluoro-5-[(3R,9aS)- 8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3

-il]benzonitrilo

80: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralcel OJ-H, elusión más rápida; CL/EM 476 (M+H)+ 2-fluoro-5-[(3R,9aR)- 8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3

-il]benzonitrilo

81: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralcel IA, elusión más rápida; CL/EM 510 (M+H)+. 2-cloro-6-fluoro-3-[(3R,9aR)- 8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3

-il]benzonitrilo

82: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna Chiralcel IA, elusión más lenta; CL/EM 510 (M+H)+. 2-cloro-6-fluoro-3-[(3R,9aR)- 8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclo-penta[d]pirimidin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin3-il]benzonitrilo

83: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna Chiralcel IA, elusión más lenta; CL/EM 510 (M+H)+. 2-cloro-6-fluoro-3-[(3S,9aR)- 8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3

-il]benzonitrilo

84: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralcel AS, elusión más rápida; CL/EM 534 (M+H)+. (3S)-5-fluoro-3-metil-6-[(3R,9aR)- 8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]

-3,4-dihidro-1H-isocromen-1-ona

85: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna Chiralcel AS, elusión más lenta; CL/EM 534 (M+H)+. (3S)-5-fluoro-3-metil-6-[(3R,9aR)- 8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-incarbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3- il]-3,4-dihidro-1H-isocromen-1-ona

86: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralcel AS, elusión más rápida; CL/EM 534 (M+H)+. (3S)-5-fluoro-3-metil-6-[(3S,9aR)- 8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-incarbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3- il]-3,4-dihidro-1H-isocromen-1-ona

87: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralcel AS, elusión más rápida; CL/EM 534 (M+H)+. (3S)-5-fluoro-3-metil-6-[(3S,9aS)- 8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]

-3,4-dihidro-1H-isocromen-1-ona

88: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralcel IC, elusión más rápida; CL/EM 534 (M+H)+. (3S)-5-fluoro-3-metil-6-[(3R,9aS)8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihdro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3- il]-3,4-dihidro-1H-isocromen-1-ona

89: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralcel AS, elusión más rápida; CL/EM 534 (M+H)+. (3R)-5-fluoro-3-metil-6-[(3R,9aR)- 8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclo-penta[b]piridin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3- il]-3,4-dihidro-1H-isocromen-1-ona

90: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralcel IC, elusión más rápida; CL/EM 534 (M+H)+. (3R)-5-fluoro-3-metil-6-[(3R,9aS)8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]

-3,4-dihidro-1H-isocromen-1-ona

91: Mezcla de dos diastereómeros en centro aza-indano (no separados); CL/EM (M+H) 489. 6-fluoro-2-metil3-[(3R,9aR)-8-{[3-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-7-il]carbonil} octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3-il]benzonitrilo

92: Mezcla de dos diastereómeros en centro aza-indano (no separados). 6-fluoro-2-metil-3-[(3R,9aS)-8-{3-(1H tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[c]piridin-7-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]tiazin-3- il]benzonitrilo: CL/EM (M+H) 505

93: SFC en columna Chiralcel OD, elusión más rápida; CL/EM (M+H) 489. 2-fluoro-3-metil-4-[(3S,9aS)-8-{[3-(1Htetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[c]piridin-7-il]carbonil}octahidropirazino[2,1-c][1,4]oxazin-3- il]benzonitrilo

imagen69

TABLA 4

Número de EJEMPLO

97: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AS-H, elusión más rápida; CL/EM 488 (M+H)+. 6-fluoro-2-metil-3-[(3S,9aR)- 8-{[3-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[c]piridin-7-il]carbonil}octahidro-2H-pirazino[1,2- a]pirazin-3-il]benzonitrilo

98: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AS, elusión más rápida; CL/EM 488 (M+H)+. 6-fluoro-2-metil-3-[(3R,9aR)- 8-{[2-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-5-il]carbonil}octahidro-2H-pirazino[1,2- a]pirazin-3-il]benzonitrilo

99: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AS, elusión más rápida; CL/EM 488 (M+H)+. 6-fluoro-2-metil-3-[(3R,9aR)- 8-{[3-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-7-il]carbonil}octahidro-2H-pirazino[1,2- a]pirazin-3-il]benzonitrilo

100: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AS, isómero de elusión más lenta; CL/EM 488 (M+H)+. 6-fluoro-2-metil-3- [(3R,9aR)-8-{[3-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[b]piridin-7-incarbonil}octahidro-2H-pirazino[1,2- a]pirazin-3-il]benzonitrilo

101: Mezcla de dos diastereómeros en centro aza-indano; CL/EM (M+H) 501. 4-metil-5-[(3S,9aR)-8-{[3-(1Htetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[c]piridin-7-il]carbonil}octahidro-2H-pirazino[1,2-a]pirazin-3-il]- 2-benzofuran-1(3H)-ona

102: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna Chiralcel OD-H, elusión más lenta; CL/EM 489 (M+H)+. 6-fluoro-2-metil-3-[(3S,9aR)-8{[2-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-5-il]carbonil}octahidro-2H-pirazino[1,2-a]pirazin-3- il]benzonitrilo

90

103: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AS-H, elusión más rápida; CL/EM 488 (M+H)+. 6-fluoro-2-metil-3-[(3S,9aS)- 8-{[3-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[c]piridin-7-il]carbonil}octahidro-2H-pirazino[1,2- a]pirazin-3-il]benzonitrilo

104: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AS-H, elusión más lenta; CL/EM 488 (M+H)+. 6-fluoro-2-metil-3-[(3S,9aS)- 8-{[3-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[c]piridin-7-il]carbonil}octahidro-2H-pirazino[1,2- a]pirazin-3-il]benzonitrilo

105: isómero de elusión más rápida de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AS-H, elusión más rápida; CL/EM 488 (M+H)+. 6-fluoro-2-metil-3- [(3R,9aS)-8-{[3-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[c]piridin-7-il]carbonil}octahidro-2H-pirazino[1,2-a] pirazin-3-il]benzonitrilo

106: isómero de elusión más lenta de la HPLC quiral SFC en columna Chiralpak AS-H, elusión más lenta; CL/EM 488 (M+H)+. 6-fluoro-2-metil-3-[(3R,9aS)- 8-{[3-(1H-tetrazol-1-il)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[c]piridin-7-il]carbonil}octahidro-2H-pirazino[1,2- a]pirazin-3-il]benzonitrilo

Los siguientes ensayo de flujo de talio y/o ensayo electrofisiología se realizaron en cada uno de los compuestos de producto final en los Ejemplos.

5 Ensayo de flujo de talio

Condiciones de cultivo celular-Se cultivaron células HEK293 que expresaban de forma estable hROMK (hKir1.1) a 37 ºC en una incubadora humidificada de CO2 al 10 % en medio de crecimiento completo: medio de Eagle modificado por Dulbecco suplementado con aminoácidos no esenciales, penicilina/estreptomicina/glutamina, G418 y FBS. A >80 % 10 de confluencia, se aspira el medio del matraz y se aclara con 10 ml de PBS sin calcio/magnesio. Se añaden 5 ml de tripsina 1x (preparada en PBS sin Ca/Mg) al matraz T-225 y se devuelve el matraz a la incubadora a 37 ºC/CO2 durante 2-3 minutos. Para desalojar la célula, se golpea suavemente el lateral del matraz con la mano. Se trituran las células completamente y después se transfieren las células a 25 ml de medio completo. Se centrifugan a 1.500 rpm durante 6 minutos seguido por resuspensión en medio de crecimiento completo y se determina la concentración celular. Para

15 una resiembra típica, células 4E6/matraz T-225 conseguirá >80 % de confluencia en 4 días. En condiciones ideales de crecimiento y prácticas de cultivo tisular apropiadas, esta línea celular es estable durante 40-45 pases.

Componentes del kit FluxOR (Invitrogen F10017)

20 ● Reactivo FluxOR™ (Componente A)

●: Tampón de ensayo FluxOR™ (Componente B) - concentrado 10x

●: Concentrado PowerLoad™ (Componente C) - concentrado 100x

●: Probenecid (Componente D) -la muestra liofilizada se mantiene a -20 ºC. Soluble en agua, 100x después de

solubilización en 1 ml de agua. Almacenar a 4 ºC. 25 ● Tampón sin cloruro FluxOR™ (Componente E) - concentrado 5x

91

imagen70

solución intracelular consistía en (en mM): 80 de gluconato de K, 40 de KCl, 20 de KF, 3,2 de MgCl2, 3 de EGTA, 5 de Hepes, pH 7,4. El acceso eléctrico al citoplasma se consiguió por perforación en 0,13 mg/ml anfotericina B durante 4 minutos. La anfotericina B (Sigma A-4888) se preparó como una solución de 40 mg/ml en DMSO.

5 Se realizaron protocolos de voltaje y registros de corriente usando el sistema de software/hardware IonWorks HT. Las corrientes se muestrearon a 1 kHz. No se usó corrección para los potenciales de unión de líquidos. El pulso de ensayo, que consistía en una etapa de 100 ms hasta 0 mV desde un potencial de mantenimiento de -70 mV, seguido por una rampa de voltaje de 100 ms desde -70 mV a +70 mV, se aplicó antes y después de un periodo de incubación con compuesto de 6 minutos. Los compuestos de ensayo se prepararon diluyendo soluciones madre de DMSO en la

10 solución de baño a 3x la concentración final y se colocaron en el instrumento en placas de polipropileno de 96 pocillos. Se midieron las amplitudes de la corriente usando el software lonWorks. Para evaluar la potencia del compuesto, se calculó el bloqueo fraccionado durante la etapa de voltaje hasta 0 mV en Microsoft Excel (Microsoft, Redmond, CA), y se ajustaron las curvas de respuesta a dosis con Igor Pro 4.0 (WaveMetrics, Lake Cswego, CR). Normalmente, se incluye un compuesto de control para dar soporte de que el ensayo está dando resultados coherentes en comparación

15 con las mediciones previas, aunque el control no es necesario para obtener los resultados para los compuestos de ensayo. El control puede ser cualquier compuesto de Fórmula Ia de la presente invención, preferiblemente con una potencia de CI50 de menos de 1 µM en este ensayo. Como alternativa, el control podría ser otro compuesto (fuera del alcance de la Fórmula Ia) que tiene una potencia de CI50 en este ensayo de menos de 1 µM.

20 Los datos recogidos para los compuestos en los Ejemplos de la presente invención usando el ensayo de flujo de talio y el ensayo de electrofisiología se muestran en la Tabla 5 a continuación. Todos los compuestos de producto final en los Ejemplos (mezclas diasteroméricas y diasterómeros individuales) tenían potencias de CI50 de 1 µM o menos en uno

o ambos del ensayo de flujo de talio y el ensayo de electrofisiología salvo que se indique de otro modo en la sección de Ejemplos.

25 TABLA 5

N.º de ejemplo: Flujo de talio CI50 (µM) Electrofisiología CI50 (µM)

1A: 0,34 0,19

1C: 0,31 0,18

1E: 0,57 0,2

1F: 0,76 0,28

1G: 0,35 0,18

1l: 0,38 0,12

1J: 0,45 0,10

1K: 0,35 0,18

2A: 0,22 0,10

2B: 0,35 0,10

2C: 0,12 0,15

2D: 0,13 0,10

2E: 0,13

2G: 0,27 0,13

2F: 0,39

2H: 0,14 0,10

3: 0,25 0,53

4: 0,46 0,18

5: 0,17 0,10

6: 0,24 0,10

7: 0,14 0,08

8: 0,35 0,24

9: 0,61 0,19

10: 0,41 0,18

11: 0,36 0,24

12: 0,45 0,16

13: 0,32 0,26

14: 0,47 0,21

15: 0,54 0,06

16: 0,39 0,39

17: 0,09 0,13

17A: 0,19 0,10

18: 0,40 0,11

19: 0,42 0,09

20: 0,23 0,08

21: 0,24 0,08

22: 0,16 0,04

93 94

23: 0,54 0,15

24: 0,11 0,2

25: 0,10 0,06

26: 0,22 0,11

27: 0,23 0,12

28: 0,22 0,12

29: 0,45 0,14

30: 0,29 0,19

31: 0,11 0,08

32: 0,13 0,07

33: 0,39 0,17

34: 0,12 0,16

35: 0,18 0,11

36: 0,66 0,14

37: 0,81 0,24

38: 0,9 0,28

39: 0,60 0,39

40: 0,27 0,12

41: 0,72 0,11

42: 0,35 0,13

43: 0,85 0,13

44: 0,17 0,17

45: 0,60 0,22

46: 0,54 0,54

47: 0,63 0,31

48: 0,63 0,42

49: 0,32 0,08

50: 0,56 0,15

51: 0,58 0,19

52: 0,42 0,22

53: 0,81 0,11

54: 0,44 0,11

55: 0,14 0,06

56: 0,22 0,11

57: 0,11 0,09

58: 0,42 0,15

59: 0,27 0,23

60: 0,60 0,33

61: 0,14 0,19

62: 0,45 0,13

63: 0,74 0,27

64: 0,12 0,1

65: 0,34 0,14

66: 0,32 0,14

67: 0,38 0,15

68: 0,20 0,2

69: 0,79 0,63

70: 0,50 0,10

71: 0,44 0,12

72: 0,32 0,17

73: 0,66 0,2

74: 0,50 0,28

75: 0,25 0,15

76: 0,46 0,13

77: 0,40 0,29

78: 0,50 0,16

79: 0,21 0,19

80: 0,26 0,12

81: 0,17 0,06

82: 0,14 0,05

83: 0,36 0,08

84: 0,57 0,1

85: 0,60 0,21

imagen71

Claims

imagen1

imagen2

imagen3

imagen4

imagen5