CN117462688A - 一种包含kras g12d抑制剂的组合物 - Google Patents

Abstract

本公开提供一种包含KRAS G12D抑制剂的组合物。具体而言，该KRAS G12D抑制剂的组合物，其中包含KRAS G12D抑制剂、促渗剂以及外排抑制剂。该组合物具有良好的口服吸收和生物利用度，适合临床应用。

Description

一种包含KRAS G12D抑制剂的组合物

技术领域

本公开涉及一种KRAS G12D抑制剂的组合物，属于制药领域。

背景技术

RAS是在肿瘤中突变率最高的致癌基因之一，约30％的人类恶性肿瘤与RAS基因的突变有关。RAS家族包括KRAS，NRAS和HRAS，其中KRAS突变最为常见，约占85％。KRAS突变常见于实体瘤，在人类三大致命性癌症—肺癌(17％)、结直肠癌(33％)和胰腺癌(61％)中均存在高频突变。在KRAS的基因突变中，97％是第12号或者第13号氨基酸残基发生了突变，其中G12D是一个重要突变。对欧美人群的数据分析显示：在胰腺癌、结直肠癌及非小细胞肺癌中，G12D突变分别占病人的36％、12％和4％。

KRAS被激活以后，通过以RAF-MEK-ERK，PI3K-AKT-mTOR及TIAM1-RAc为代表的众多下游信号通路，调控细胞增殖、存活、迁移及代谢等多个方面的功能。KRAS基因突变后，蛋白持续处于活化状态，导致下游信号通路持续激活而促进肿瘤发生。

由于KRAS蛋白表面缺乏传统意义上的小分子结合位点，并与鸟苷酸有着超高亲和力而极难被抑制，长久以来被认为是不可成药的药物靶点。但基于KRAS异常激活在癌症进展中的重要性和普遍性，KRAS一直并仍然是药物开发非常关注的靶点。目前除了KRAS G12C抑制剂以外，仍缺乏对其他突变有效的KRAS抑制剂，使得大部分KRAS突变的病人依然无药可治。G12D，作为一个在多种肿瘤中广泛高表达的突变体，开发针对它的抑制剂有着重要的临床意义。

目前MRTX1133等KRAS G12D抑制剂具有良好的KRAS G12D抑制作用，这些化合物的哌嗪部分和突变蛋白的Asp12残基之间形成盐桥(参见文献J.Med.Chem.2022,65,4,3123-3133和Cell Discovery.2022Jan 25；8(1):5)。

发明内容

本公开提供一种组合物，包含：KRAS G12D抑制剂、促渗剂以及外排抑制剂。

在一些实施方案中，所述的KRAS G12D抑制剂的化学结构中包含式(SF)所示的结构片段，

其中，所述环Af选自4至8元单环杂环、6至14元螺杂环、6至14元稠杂环和6至14元桥杂环，所述环Af任选被n0个取代基R^f所取代，n0为1、2、3、4、5、6、7或8。所述式(SF)所示的结构片段与KRAS G12D抑制剂的化学结构中的其他片段相连(例如通过化学键)。

在一些实施方案中，取代基R^f各自独立地选自卤素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、氰基、氨基、-(CH₂)_w-NR^jR^k、

-(CH₂)_w1-(O)_z1-C(O)NR^j1R^k1、-(CH₂)_w2-(O)_z2-C(O)OR^j2、硝基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；

R^j、R^k、R^j1、R^k1和R^j2相同或不同，且各自独立地选自氢原子、烷基、烯基、炔基、卤代烷基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；

w、w1和w2相同或不同，且各自独立地选自0、1、2和3；

z1为0或1；

z2为0或1。

在一些实施方案中，式(SF)所示的结构片段作为取代基与KRAS G12D抑制剂化学结构中的其他片段相连。

在一些实施方案中，式(SF)所示的结构片段与KRAS G12D抑制剂化学结构中的其他环共同形成螺环、稠环或桥环。

在一些实施方案中，所述环Af选自

其中，W各自独立地选自N和CR^f0；n1各自独立地选自1、2、3或4；n2各自独立地选自1、2、3或4；n3各自独立地选自0、1、2、3或4；n4各自独立地选自0、1、2、3或4；

W’各自独立地选自N和CR^f1；m1各自独立地选自0、1、2、3或4；m2各自独立地选自0、1、2、3或4；m3各自独立地选自0、1、2、3或4；m4各自独立地选自0、1、2、3或4；m5各自独立地选自0、1、2、3、4或5。

所述环Af任选被n0个取代基R^f所取代；

R^f、R^f0、R^f1各自独立地选自卤素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、氰基、氨基、-(CH₂)_w-NR^jR^k、-(CH₂)_w1-(O)_z1-C(O)NR^j1R^k1、

-(CH₂)_w2-(O)_z2-C(O)OR^j2、硝基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；

R^j、R^k、R^j1、R^k1和R^j2相同或不同，且各自独立地选自氢原子、烷基、烯基、炔基、卤代烷基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；

w、w1和w2相同或不同，且各自独立地选自0、1、2和3；

z1为0或1；

z2为0或1。

在一些实施方案中，所述的KRAS G12D抑制剂的化学结构中包含式(SF1)或式(SF2)所示的结构片段，

其中，环Af如前所述，环Bf选自碳环、杂环、芳环和杂芳环；

Q各自独立地为N或CR^2a；

q0为0、1、2、3或4；q1为0、1、2或3；

R^2a各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、氰基、氨基、-(CH₂)_v-NR^hRⁱ、羟基、羟烷基和环烷基；

R^f2、R^f3各自独立地选自卤素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、氰基、氨基、-(CH₂)_w-NR^jR^k、-(CH₂)_w1-(O)_z1-C(O)NR^j1R^k1、

-(CH₂)_w2-(O)_z2-C(O)OR^j2、硝基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；

R^h、Rⁱ、R^j、R^k、R^j1、R^k1和R^j2相同或不同，且各自独立地选自氢原子、烷基、烯基、炔基、卤代烷基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；

v、w、w1和w2相同或不同，且各自独立地选自0、1、2和3；

z1为0或1；

z2为0或1。

在一些实施方案中，所述的KRAS G12D抑制剂为通式(I)所示的化合物或其可药用的盐：

其中：

G⁰选自O、S、S(O)、S(O)₂、CR^G0aR^G0b和NR^G0c；

G¹选自CR^G1aR^G1b、CR^G1aR^G1bCR^G1cR^G1d、C＝O和C(O)CR^G1aR^G1b；

G²为NH；

T为化学键或选自CR^aR^b、NR^T和O；

Q为N或CR^2a；

环A为芳基或杂芳基；

环B选自环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；

L选自单键、O和NR^e；

R^a、R^b、R^G0a、R^G0b、R^G1a、R^G1b、R^G1c和R^G1d相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、氰基、氨基、硝基、羟基、羟烷基、环烷基和杂环基；或者，R^G1a、R^G1b与相连的碳原子一起形成环烷基；或者，R^G1c、R^G1d与相连的碳原子一起形成环烷基；

各个R¹相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、氰基、氨基、-(CH₂)_u-NR^fR^g、羟基和羟烷基；

R^2a和R^4a相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、氰基、氨基、-(CH₂)_v-NR^hRⁱ、羟基、羟烷基和环烷基；

各个R³和R⁶相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、氰基、氨基、-(CH₂)_w-NR^jR^k、-(CH₂)_w1-(O)_z1-C(O)NR^j1R^k1、-(CH₂)_w2-(O)_z2-C(O)OR^j2、硝基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；

R^5a和R^5b相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、卤代烷基、氰基、羟基和羟烷基；或者

R^5a、R^5b与所连的碳原子一起形成环烷基或杂环基，所述的环烷基或杂环基各自独立地任选被选自卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、氰基、氨基、羟基和羟烷基中的一个或多个相同或不同的取代基取代；

R^G0c、R^T、R^e、R^f、R^g、R^h、Rⁱ、R^j、R^k、R^j1、R^k1和R^j2相同或不同，且各自独立地选自氢原子、烷基、烯基、炔基、卤代烷基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；

u、v、w、w1和w2相同或不同，且各自独立地选自0、1、2和3；

z1为0或1；

z2为0或1；

r为0、1、2或3；

p为0、1、2、3、4或5；

q为0、1、2、3、4或5；且

t为0、1、2、3、4或5。

在一些实施方案中，其中G¹为CH₂。

在一些实施方案中，其中G⁰为O。

在一些实施方案中，通式(I)所示的化合物或其可药用的盐为通式(II)所示的化合物或其可药用的盐：

其中，环A、环B、G²、Q、L、R¹、R³、R^4a、R^5a、R^5b、R⁶、p、q、r和t如权利要求1中所定义。

在一些实施方案中，其中Q为N。

在一些实施方案中，其中环A为萘基。

在一些实施方案中，其中环B为3至8元杂环基。

在一些实施方案中，其中R^4a为氢原子或卤素。

在一些实施方案中，其中G²为NH。

在一些实施方案中，其中L为O。

在一些实施方案中，其中R¹为氢原子。

在一些实施方案中，其中各个R³相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、C_1-6烷基、C_2-6炔基、C_1-6卤代烷基、羟基、C_1-6羟烷基和3至8元环烷基。

在一些实施方案中，其中R^5a和R^5b为氢原子；或者R^5a、R^5b与所连的碳原子一起形成3至6元环烷基。

在一些实施方案中，其中各个R⁶相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、C_1-6羟烷基和-CH₂-O-C(O)NR^j1R^k1，R^j1和R^k1相同或不同，且各自独立地为氢原子或C_1-6烷基。

在一些实施方案中，所述的KRAS G12D抑制剂为

本公开中所述的促渗剂包括但不限于：乙二胺四乙酸(EDTA)、癸酸钠、精氨酸、N-(8-[2-羟基苯甲酰基]氨基)辛酸(SNAC)、N-(5-氯水杨酰基)-8-氨基辛酸(5-CNAC)、N-(10-[2-羟基苯甲酰基]氨基癸酸(SNAD)、琥珀磺酸二辛钠、月桂基硫酸钠、水杨酸钠、油酸、卵磷脂、无水醇、吐温、司盘、硬脂酸聚烃氧40酯、聚氧乙烯50硬脂酸酯、聚乙二醇、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮/乙酸乙烯酯(VP/VA)共聚物、聚(乳酸-共-羟基乙酸)、依地酸二钠、丙二醇、甘油单油酸酯、夫西地酸盐(fusieate)、胆汁盐、辛苯昔醇、非离子表面活性剂、阴离子表面活性剂和阳离子表面活性剂。

在一些实施方案中，所述促渗剂选自EDTA、癸酸钠、精氨酸或SNAC中的一种或多种。

在一些实施方案中，所述促渗剂为SNAC。

在一些实施方案中，KRAS G12D抑制剂与促渗剂的重量比范围1:50-100:1，优选1:40至20:1，更优选1:15至10:1。

本公开中所述的外排抑制剂选自乳腺癌耐药蛋白(BCRP)抑制剂、P-糖蛋白(P-gp)抑制剂或多药耐药蛋白(MRP)抑制剂中的一种或多种。

在一些实施方案，所述外排抑制剂为P-gp抑制剂。

本公开中所述的P-gp抑制剂包括但不限于：维拉帕米、环孢素A、奎尼丁、右旋维拉帕米、泊洛沙姆、维生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS)、吐温80、吐温20、聚乙二醇、PSC833、LY335979、GF120918、ONT-093、XR9576、HM30181、阿芬太尼、阿米洛利、胺碘酮、阿米替林、阿司咪唑、阿托伐醌、阿托伐他汀、氮斯汀、azidopine、阿奇霉素、bepidil、比立考达、溴隐亭、卡马西平、卡维地洛、氯喹、氯丙嗪、克拉霉素、环孢菌素、赛庚啶、地瑞那韦、脱乙基胺碘酮、地昔帕明、右尼古地平、右雷佐生、地尔硫双嘧达莫、双硫仑、多沙唑嗪、elicridqr、吐根碱、红霉素、非洛地平、非诺贝特、芬太尼、黄酮类、氟西汀、氟奋乃静、氟伏沙明、梭链孢酸钠(fucidin)、加洛帕米、格列本脲、短杆菌肽D、柚子汁、大蒜、绿茶(儿茶素)、氟哌啶醇、氢化可的松、羟嗪、交沙霉素、酮康唑、丙咪嗪、伊曲康唑、伊维菌素、酮康唑、laniquidar、兰索拉唑、左甲状腺素钠、利多卡因、洛哌丁胺、洛匹那韦-急性、氯雷他定、洛伐他汀、马普替林、甲氟喹、美沙酮、米贝拉地尔、咪达唑仑、丝裂霉素C、奈法唑酮、奈非那韦、尼卡地平、尼群地平、nobilitin、去甲维拉帕米、奥美拉唑、塞维利亚橙汁、氧氟沙星、帕罗西汀、吩噻嗪类、胡椒碱、匹莫齐特、丙磺舒、孕激素、异丙嗪、普罗帕酮、普萘洛尔、槲皮素、阿的奎尼丁、奎宁、利血平、利托那韦、沙奎那韦、舍曲林、辛伐他汀、安体舒通、舒芬太尼、他克莫司、他莫昔芬、他立喹达、泰利霉素、特非那定、睾酮、四苯喹嗪(tetrabenzine)、硫利达嗪、三氟拉嗪、三氟普马嗪(trifluopromazine)、曲米帕明、缬氨霉素、钒酸盐、文拉法辛、长春碱、FK506、RU486(米非司酮)、伐司扑达(Valspodar)PSG 833、zosuquidar、2-正丙基喹啉和ONT-093。

在一些实施方案中，KRAS G12D抑制剂与外排抑制剂重量比范围1:20-100:1，优选1:10至80:1，更优选1:10至60:1。

在一些实施方案中，所述的组合物中还含有碱。

在一些实施方案中，所述碱选自有机碱或无机碱。

在一些实施方案中，所述碱包括但不限于NaHCO₃、高岭土、Na₂HPO₄、精氢酸、MgO、Na₂CO₃中的一种或多种。

在一些实施方案中，所述碱选自Na₂CO₃

本公开所述的组合物，进一步还可以含有填充剂、崩解剂或、润滑剂、包衣剂、增塑剂、增塑剂、抗黏剂和遮光剂中的至少一种。

在一些实施方案中，填充剂包括但不限于乳糖、预胶化淀粉、微晶纤维素、磷酸氢钙、甘露醇、海藻糖中的一种或多种。基于组合物的总重量，所述填充剂含量可以是5％～90％。

在一些实施方案中，崩解剂包括但不限于交联羧甲基纤维素钠、淀粉、羧甲基淀粉钠、交联聚维酮中的一种或多种。基于组合物的总重量，所述崩解剂含量可为1％～20％。

在一些实施方案中，润滑剂包括但不限定限于硬脂酸镁、硬脂酸锌、山嵛酸甘油酯、月桂基硫酸钠、氢化植物油、微粉硅胶、滑石粉、胶态二氧化硅、硬脂富马酸钠中的一种或多种。基于组合物的总重量，润滑剂的含量可为0.5％～5％。

本公开所述组合物为口服或非静脉组合物，制剂形式包括但不限于固体分散体、片剂、胶囊、颗粒、粉末、溶液、混悬液等。

在一些实施方案中，所述组合物包含：

(i)含有KRAS G12D抑制剂和促渗剂的药物组合物，以及含有外排抑制剂的药物组合物；或(ii)含有外排抑制剂和促渗剂的药物组合物，以及含有KRAS G12D抑制剂的药物组合物；或(iii)含有KRAS G12D抑制剂、促渗剂和外排抑制剂的药物组合物；或(iiii)含有KRAS G12D抑制剂和促渗剂的药物组合物，以及含有外排抑制剂和促渗剂的药物组合物。

本公开还提供了一种组合物，其包含：式(III)所示化合物和外排抑制剂，

在一些实施方案中，所述组合物包含：

(i)含有式(III)所示化合物的药物组合物，以及含有外排抑制剂的药物组合物；或(ii)含有式(III)所示化合物和外排抑制剂的药物组合物。

本公开另一方面提供前述组合物在制备用于抑制KRAS G12D的药物中的用途。

本公开另一方面提供前述组合物在制备用于治疗和/或预防疾病或病症的药物中的用途，所述的疾病或病症为癌症。

本公开中所述的疾病或病症选自脑癌、甲状腺癌、头颈癌、鼻咽癌、咽喉癌、口腔癌、唾液腺癌、食道癌、胃癌、肺癌、肝癌、肾癌、胰腺癌、胆囊癌、胆管癌、结直肠癌、小肠癌、胃肠道间质瘤、尿路上皮癌、尿道癌、膀胱癌、乳腺癌、阴道癌、卵巢癌、子宫内膜癌、宫颈癌、输卵管癌、睾丸癌、前列腺癌、血管瘤、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、皮肤癌、脂肪瘤、骨癌、软组织肉瘤、神经纤维瘤、神经胶质瘤、成神经细胞瘤和胶质母细胞瘤。

在一些实施方案中，所述的疾病或病症选自胰腺癌、结直肠癌和非小细胞肺癌。

本公开另一方面提供外排抑制剂和促渗剂的组合用于提高KRAS G12D抑制剂口服生物利用度的用途。

本公开另一方面提供提高KRAS G12D抑制剂口服生物利用度的方法，包括将KRASG12D抑制剂与外排抑制剂和促渗剂形成组合物。

本公开所述的“组合物”表示一种或多种本文所述化合物或其生理学上可药用的盐或前体药物与其他化学组分的组合形式，所述组合物中还可包含其他组分例如生理学可药用的载体和赋形剂。例如，本公开所述的“组合物”可以包含KRAS G12D抑制剂、外排抑制剂以及其他组分，所述KRAS G12D抑制剂以及外排抑制剂可以同时给药、独立地配制并共给药或独立地配制并相继给药，其中给予的药物都显示药理学作用。给药的时间期限可以是一个给药周期内，可以同时或依次给予KRAS G12D抑制剂与外排抑制剂。在一些实施方案中，所述组合物还包含促渗剂。所述促渗剂可以存在于包含KRAS G12D抑制剂以及外排抑制剂的药物组合物中，也可以存在于包含KRAS G12D抑制剂的药物组合物和/或包含外排抑制剂的药物组合物中(例如相继给药时)。

“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学可药用的载体和赋形剂。

本公开中数值为仪器测量值或仪器测量后计算值，存在一定程度的误差，一般而言，正负10％均属于合理误差范围内。当然需要考虑该数值所用之处的上下文，例如，总杂质的含量，该数值为测量后误差变化不超过正负10％，可以为正负9％、正负8％、正负7％、正负6％、正负5％、正负4％、正负3％、正负2％或正负1％，优选正负5％。

除非有相反陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。

术语“烷基”指饱和脂肪族烃基团，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，优选为具有1至12个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12个)碳原子的烷基(即C_1-12烷基)，更优选为具有1至6个碳原子的烷基(即C_1-6烷基)。非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基，及其各种支链异构体等。烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，其可以在任何可使用的连接点上被取代，取代基优选选自D原子、卤素、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个。

术语“亚烷基”指饱和的直链或支链脂肪族烃基，其为从母体烷的相同碳原子或两个不同的碳原子上除去两个氢原子所衍生的残基，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，优选为具有1至12个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12个)碳原子(即C_1-12亚烷基)，更优选具有1至6个碳原子的亚烷基(即C_1-6亚烷基)。亚烷基的非限制性实例包括但不限于亚甲基(-CH₂-)、1,1-亚乙基

(-CH(CH₃)-)、1,2-亚乙基(-CH₂CH₂)-、1,1-亚丙基(-CH(CH₂CH₃)-)、1,2-亚丙基(-CH₂CH(CH₃)-)、1,3-亚丙基(-CH₂CH₂CH₂-)、1,4-亚丁基(-CH₂CH₂CH₂CH₂-)等。亚烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，其可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选选自烯基、炔基、烷氧基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基和氧代基中的一个或多个。

术语“烯基”指分子中含有至少一个碳碳双键的烷基，其中烷基的定义如上所述，优选为具有2至12个(例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12个)碳原子(即C_2-12烯基)，更优选具有2至6个碳原子的烯基(即C_2-6烯基)。非限制性的实例包括：乙烯基、丙烯基、异丙烯基、丁烯基等。烯基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选选自烷氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个。

术语“炔基”指分子中含有至少一个碳碳三键的烷基，其中烷基的定义如上所述。优选具有2至12个(例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12个)碳原子(即C_2-12炔基)，更优选具有2至6个碳原子的炔基(即C_2-6炔基)。非限制性的实例包括：乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基等。炔基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选选自烷氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个。

术语“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，环烷基环包含3至20个碳原子，优选包含3至14个(例如3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13和14个)碳原子(即3至14元环烷基)，优选包含3至8个(例如3、4、5、6、7和8个)碳原子(即3至8元环烷基)，更优选包含3至6个碳原子(即3至6元环烷基)。单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等；多环环烷基包括螺环烷基、稠环烷基和桥环烷基。

术语“螺环烷基”指5至20元，单环之间共用一个碳原子(称螺原子)的多环基团，其可以含有一个或多个双键。优选为6至14元，更优选为7至10元(例如7、8、9或10元)。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺环烷基或多螺环烷基(例如双螺环烷基)，优选为单螺环烷基和双螺环烷基。更优选为3元/4元、3元/5元、3元/6元、4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/3元、5元/4元、5元/5元、5元/6元、5元/7元、6元/3元、6元/4元、6元/5元、6元/6元、6元/7元、7元/5元或7元/6元单螺环烷基。螺环烷基的非限制性实例包括：

术语“稠环烷基”指5至20元，系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对碳原子的全碳多环基团，其中一个或多个环可以含有一个或多个双键。优选为6至14元，更优选为7至10元(例如7、8、9或10元)。根据组成环的数目可以分为双环或多环稠环烷基(例如三环、四环)，优选为双环或三环，更优选为3元/4元、3元/5元、3元/6元、4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/3元、5元/4元、5元/5元、5元/6元、5元/7元、6元/3元、6元/4元、6元/5元、6元/6元、6元/7元、7元/5元或7元/6元双环烷基。稠环烷基的非限制性实例包括：

术语“桥环烷基”指5至20元，任意两个环共用两个不直接连接的碳原子的全碳多环基团，其可以含有一个或多个双键。优选为6至14元，更优选为7至10元(例如7、8、9或10元)。根据组成环的数目可以分为双环或多环(例如三环、四环)桥环烷基，优选为双环、三环或四环，更优选为双环或三环。桥环烷基的非限制性实例包括：

所述环烷基环包括如上所述的环烷基(包括单环、螺环、稠环和桥环)稠合于芳基、杂芳基或杂环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基，非限制性实例包括等；优选/>

环烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，其可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个。

术语“烷氧基”指-O-(烷基)，其中烷基的定义如上所述。烷氧基的非限制性实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基和丁氧基。烷氧基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选选自D原子、卤素、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基。

术语“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状取代基，其包含3至20个(例如3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个)环原子(即3至20元杂环基)，其中一个或多个环原子为选自氮、氧和硫的杂原子，所述的硫可任选被氧代(即形成亚砜或砜)，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。优选包含3至14个(例如3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13和14个)环原子(即3至14元杂环基)，其中1～4个(例如1、2、3和4个)是杂原子；更优选包含3至8个环原子(例如3、4、5、6、7和8个)(即3至8元杂环基)或6至14个环原子(例如6、7、8、9、10、11、12、13和14个)，其中1-3是杂原子(例如1、2和3个)；更优选包含3至8个环原子，其中1-3个(例如1、2和3个)是杂原子；最优选包含5或6个环原子(即5元或6元杂环基)，其中1-3个是杂原子。单环杂环基的非限制性实例包括吡咯烷基、四氢吡喃基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基等。多环杂环基包括螺杂环基、稠杂环基和桥杂环基。

术语“螺杂环基”指5至20元，单环之间共用一个原子(称螺原子)的多环杂环基团，其中一个或多个环原子为选自氮、氧和硫的杂原子，所述的硫可任选被氧代(即形成亚砜或砜)，其余环原子为碳。其可以含有一个或多个双键。优选为6至14元(例如6、7、8、9、10、11、12、13和14元)(即6至14元螺杂环基)，更优选为7至10元(例如7、8、9或10元)(即7至10元螺杂环基)。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺杂环基分为单螺杂环基或多螺杂环基(例如双螺杂环基)，优选为单螺杂环基和双螺杂环基。更优选为3元/4元、3元/5元、3元/6元、4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/3元、5元/4元、5元/5元、5元/6元、5元/7元、6元/3元、6元/4元、6元/5元、6元/6元、6元/7元、7元/5元或7元/6元单螺杂环基。螺杂环基的非限制性实例包括：

术语“稠杂环基”指5至20元，系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对原子的多环杂环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，其中一个或多个环原子为选自氮、氧和硫的杂原子，所述的硫可任选被氧代(即形成亚砜或砜)，其余环原子为碳。优选为6至14元(例如6、7、8、9、10、11、12、13和14元)(即6至14元稠杂环基)，更优选为7至10元(例如7、8、9或10元)(即7至10元稠杂环基)。根据组成环的数目可以分为双环或多环(例如三环、四环)稠杂环基，优选为双环或三环，更优选为3元/4元、3元/5元、3元/6元、4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/3元、5元/4元、5元/5元、5元/6元、5元/7元、6元/3元、6元/4元、6元/5元、6元/6元、6元/7元、7元/5元或7元/6元双环稠杂环基。稠杂环基的非限制性实例包括：

术语“桥杂环基”指5至20元，任意两个环共用两个不直接连接的原子的多环杂环基团，其可以含有一个或多个双键，其中一个或多个环原子为选自氮、氧和硫的杂原子，所述的硫可任选被氧代(即形成亚砜或砜)，其余环原子为碳。优选为6至14元(例如6、7、8、9、10、11、12、13和14元)(即6至14元桥杂环基)，更优选为7至10元(例如7、8、9或10元)(即7至10元桥杂环基)。根据组成环的数目可以分为双环或多环(例如三环、四环)桥杂环基，优选为双环、三环或四环，更优选为双环或三环。桥杂环基的非限制性实例包括：

所述杂环基环包括如上所述的杂环基(包括单环、螺杂环、稠杂环和桥杂环)稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基，其非限制性实例包括：

等。

杂环基可以是取代的或非取代的，当被取代时，其可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个。

术语“芳基”指具有共轭的π电子体系的6至14元全碳单环或稠合多环(稠合多环是共享毗邻碳原子对的环)基团，优选为6至10元，例如苯基和萘基。所述芳基环包括如上所述的芳基环稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，其非限制性实例包括：

芳基可以是取代的或非取代的，当被取代时，其可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个。

术语“杂芳基”指包含1至4个(例如1、2、3和4个)杂原子、5至14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子选自氧、硫和氮。杂芳基优选为5至10元(例如5、6、7、8、9或10元)(即5至10元杂芳基)，进一步优选为8至10元(例如8、9或10元)，更优选为5元或6元(即5元或6元杂芳基)，例如呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基等。所述杂芳基环包括如上述的杂芳基稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，其非限制性实例包括：

杂芳基可以是取代的或非取代的，当被取代时，其可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个。

上述环烷基、杂环基、芳基和杂芳基包括从母体环原子上除去一个氢原子所衍生的残基，或从母体的相同环原子或两个不同的环原子上除去两个氢原子所衍生的残基即“二价环烷基”、“二价杂环基”、“亚芳基”和“亚杂芳基”。

术语“氨基保护基”是为了使分子其它部位进行反应时氨基保持不变，用易于脱去的基团对氨基进行保护。非限制性实施例包含(三甲基硅)乙氧基甲基(SEM)、四氢吡喃基、叔丁氧羰基(Boc)、乙酰基、苄基、烯丙基、对甲基苯磺酰基(Ts)和对甲氧苄基等。这些基团可任选地被选自卤素、烷氧基和硝基中的1-3个取代基所取代；氨基保护基优选为Boc。

术语“羟基保护基”是指通常用于阻断或保护羟基而反应在化合物的其它官能团上进行的羟基衍生物。作为示例，优选地，所述的羟基保护基例如：三乙基硅基、三异丙基硅基、叔丁基二甲基硅基(TBS)、叔丁基二苯基硅基、甲基、叔丁基、烯丙基、苄基、甲氧基甲基(MOM)、乙氧基乙基、2-四氢吡喃基(THP)、甲酰基、乙酰基、苯甲酰基和对硝基苯甲酰基等；羟基保护基优选为MOM。

术语“炔基保护基”是指为了使分子其它部位进行反应时乙炔或末端炔烃中的活泼氢保持不变，在炔基上引入的易于脱去的基团。非限制性的实例包括：三甲基硅基(TMS)、三乙基硅基(TES)、叔丁基二甲基硅基(TBS)、三异丙基硅基(TIPS)、叔丁基二甲基硅基(TBDMS)、叔丁基二苯基硅基(TBDPS)、甲基、叔丁基、烯丙基、苄基、甲氧基甲基(MOM)、乙氧基乙基、2-四氢吡喃基(THP)、甲酰基、乙酰基、苯甲酰基、对硝基苯甲酰基等；炔基保护基优选为TIPS。

术语“环烷基氧基”指环烷基-O-，其中环烷基如上所定义。

术语“杂环基氧基”指杂环基-O-，其中杂环基如上所定义。

术语“芳基氧基”指芳基-O-，其中芳基如上所定义。

术语“杂芳基氧基”指杂芳基-O-，其中杂芳基如上所定义。

术语“烷硫基”指烷基-S-，其中烷基如上所定义。

术语“卤代烷基”指烷基被一个或多个卤素取代，其中烷基如上所定义。

术语“卤代烷氧基”指烷氧基被一个或多个卤素取代，其中烷氧基如上所定义。

术语“氘代烷基”指烷基被一个或多个氘原子取代，其中烷基如上所定义。

术语“羟烷基”指烷基被一个或多个羟基取代，其中烷基如上所定义。

术语“卤素”指氟、氯、溴或碘。

术语“羟基”指-OH。

术语“巯基”指-SH。

术语“氨基”指-NH₂。

术语“氰基”指-CN。

术语“硝基”指-NO₂。

术语“氧代基”或“氧代”指“＝O”。

术语“羰基”指C＝O。

术语“羧基”指-C(O)OH。

术语“羧酸酯基”指-C(O)O(烷基)、-C(O)O(环烷基)、(烷基)C(O)O-或(环烷基)C(O)O-，其中烷基和环烷基如上所定义。

MOM指甲氧基甲基。

Boc指叔丁氧羰基。

TIPS指三异丙基硅基。

TBS指叔丁基二甲基硅基。

本公开的化合物可包含其所有方式的旋转异构体和构象上受限的状态。还包括阻转异构体，术语“阻转异构体”为由于围绕单键的旋转受阻而产生的立体异构体，其中归因于立体应变或其他促成因素的能量差异形成足够高的旋转壁垒以允许个别构象异构体分离。例如，某些本公开化合物可以以阻转异构体的混合物的形式(如等比例混合物、富集一种阻转异构体的混合物等)或经纯化的一种阻转异构体的形式存在。非限制性的实例包括：

本公开的化合物和中间体还可以以不同的互变异构体形式存在，并且所有这样的形式包含于本公开的范围内。术语“互变异构体”或“互变异构体形式”是指可经由低能垒互变的不同能量的结构异构体。例如，质子互变异构体(也称为质子转移互变异构体)包括经由质子迁移的互变，如酮-烯醇及亚胺-烯胺、内酰胺-内酰亚胺异构化。酮-烯醇平衡实例是在如下所示：

所有的互变异构形式在本公开的范围内。化合物的命名不排除任何互变异构体。

本公开化合物可以存在特定的立体异构体形式。术语“立体异构体”是指结构相同但原子在空间中的排列不同的异构体。其包括顺式和反式(或Z和E)异构体、(-)-和(+)-异构体、(R)-和(S)-对映异构体、非对映异构体、(D)-和(L)-异构体、互变异构体、阻转异构体、构象异构体及其混合物(如外消旋体、非对映异构体的混合物)。本公开化合物中的取代基可以存在另外的不对称原子。所有这些立体异构体以及它们的混合物，均包括在本公开的范围内。对于所有的碳-碳双键，即使仅命名了一个构型，Z型和E型均包括在内。可以通过手性合成、手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(-)-和(+)-异构体、(R)-和(S)-对映异构体以及(D)-和(L)-异构体。本公开某化合物的一种异构体，可以通过不对称合成或者具有手性助剂的衍生作用来制备，或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常规方法进行非对映异构体拆分，得到纯的异构体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过色谱法完成。

本公开所述化合物的化学结构中，键表示未指定构型，即如果化学结构中存在手性异构体，键/>可以为/>或/>或者同时包含/>和/>两种构型。

本公开的化合物包括其化合物的所有合适的同位素衍生物。术语“同位素衍生物”是指至少一个原子被具有相同原子序数但原子质量不同的原子替代的化合物。可引入到本公开化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯、溴和碘等的稳定和放射性的同位素，例如分别为²H(氘，D)、³H(氚，T)、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁷O、¹⁸O、³²p、³³p、³³S、³⁴S、³⁵S、³⁶S、¹⁸F、³⁶Cl、⁸²Br、¹²³I、¹²⁴I、¹²⁵I、¹²⁹I和¹³¹I等，优选氘。

相比于未氘代药物，氘代药物有降低毒副作用、增加药物稳定性、增强疗效、延长药物生物半衰期等优势。本公开的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本公开的范围之内。与碳原子连接的各个可用的氢原子可独立地被氘原子替换，其中氘的替换可以是部分或完全的，部分氘的替换是指至少一个氢被至少一个氘替换。

“任选地”或“任选”是指意味着随后所描述的事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生的场合。例如“任选的被卤素或者氰基取代的C_1-6烷基”是指卤素或者氰基可以但不必须存在，该说明包括烷基被卤素或者氰基取代的情形和烷基不被卤素和氰基取代的情形。

“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为1～6个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下(通过实验或理论)确定可能或不可能的取代。

本公开全文引用PCT/CN2022/100016中的内容。

具体实施方式

通过以下实施例进一步详细说明本公开。这些实施例仅用于说明性目的，而并不用于限制本公开的范围。

化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或/和质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ)以10^-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker AVANCE-400核磁仪或Bruker AVANCE NEO 500M，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d₆)、氘代氯仿(CDCl₃)、氘代甲醇(CD₃OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)。

MS的测定用Agilent 1200/1290DAD-6110/6120Quadrupole MS液质联用仪(生产商：Agilent，MS型号：6110/6120Quadrupole MS)。

waters ACQuity UPLC-QD/SQD(生产商：waters，MS型号：waters ACQuity QdaDetector/waters SQ Detector)

THERMO Ultimate 3000-Q Exactive(生产商：THERMO，MS型号：THERMO QExactive)

高效液相色谱法(HPLC)分析使用Agilent HPLC 1200DAD、Agilent HPLC 1200VWD和Waters HPLC e2695-2489高压液相色谱仪。

手性HPLC分析测定使用Agilent 1260DAD高效液相色谱仪。

高效液相制备使用Waters 2545-2767、Waters 2767-SQ Detecor2、Shimadzu LC-20AP和Gilson GX-281制备型色谱仪。

手性制备使用Shimadzu LC-20AP制备型色谱仪。

CombiFlash快速制备仪使用Combiflash Rf200(TELEDYNE ISCO)。

薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。

硅胶柱色谱法一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。

激酶平均抑制率及IC₅₀值的测定用NovoStar酶标仪(德国BMG公司)。

本公开的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买自ABCR GmbH&Co.KG，Acros Organics，Aldrich Chemical Company，韶远化学科技(AccelaChemBio Inc)、达瑞化学品等公司。

实施例中无特殊说明，反应均能够在氩气氛或氮气氛下进行。

氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气或氮气气球。

氢气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氢气气球。

加压氢化反应使用Parr 3916EKX型氢化仪和清蓝QL-500型氢气发生器或HC2-SS型氢化仪。

氢化反应通常抽真空，充入氢气，反复操作3次。

微波反应使用CEM Discover-S 908860型微波反应器。

实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。

实施例中无特殊说明，反应的温度为室温，为20℃～30℃。

实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(TLC)，反应所使用的展开剂，纯化化合物采用的柱层析的洗脱剂的体系和薄层色谱法的展开剂体系包括：A：二氯甲烷/甲醇体系，B：正己烷/乙酸乙酯，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺和醋酸等碱性或酸性试剂进行调节。

实施例中的化合物含有两个或更多个手性中心时，这些化合物的相对立体化学是通过NMR研究和/或X-射线衍射鉴定的。在这些情况中，使用前缀“rel”、随后使用R/S命名法鉴定这些化合物，此时的R/S仅提供相对立体化学信息，不表示绝对立体化学。例如，表示/>的1:1混合物，即外消旋体。

实施例1

(±)-rel-(1R,2R,5S)-2-(羟甲基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯1g

第一步

(±)-5-甲氧基-3,4-二氢-2H-吡咯-2-羧酸甲酯1b

将(±)-2-吡咯烷酮-5-甲酸甲酯1a(100g，698.61mmol，上海毕得)，硫酸二甲酯(110g，872.10mmol)混合，60℃反应16小时，反应液冷却至室温，冰浴下倒入三乙胺(100g)和甲基叔丁基醚(150mL)的溶液中，用甲基叔丁基醚(300mL×6)萃取后,减压浓缩即得到粗品标题化合物1b(90g，产率：81.9％)，产品不经纯化直接用于下步反应。

MS m/z(ESI):158.1[M+1]。

第二步

(±)-5-(2-甲氧基-1-硝基-2-氧代乙亚基)吡咯烷-2-羧酸甲酯1c

将粗品化合物1b(90g，572.64mmol)，硝基乙酸甲酯(68.18g，572.63mmol)混合，加热至60℃搅拌反应30小时，反应液冷却至室温后，加入乙酸乙酯(300mL)，搅拌0.5小时后过滤，滤饼干燥后即得到标题化合物1c(70g，产率：50％)，产品不经纯化直接用于下步反应。

MS m/z(ESI):245.1[M+1]。

第三步

4-氧代-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-2-羧酸甲酯(非对映体混合物)1d

将粗品化合物1c(14g，57.3mmol)溶于600mL甲醇中，加入10％钯炭催化剂(湿)(14g)，氢气置换三次，搅拌反应48小时。反应液通过硅藻土过滤，将滤液浓缩即得到粗品标题化合物1d(10g，产率：94.6％)，产品不经纯化直接用于下步反应。

MS m/z(ESI):185.2[M+1]。

第四步

8-(叔丁基)2-甲基(±)-rel-(1R,2R,5S)-4-氧代-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-2,8-二甲酸酯1e

将粗品化合物1d(10g，54.2mmol)溶于300mL二氯甲烷中，冰浴下加入三乙胺(16g，158.12mmol)，二碳酸二叔丁酯(11g，50.4mmol，上海韶远)，搅拌反应14小时，反应液减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化得到标题化合物1e(3.3g，产率：21.3％)。

MS m/z(ESI):285.2[M+1]。

HPLC分析:保留时间1.02分钟，纯度：98.5％(色谱柱:ACQUITYBEH,C18,1.7μm,2.1*50mm；流动相：水(10mM碳酸氢铵)，乙腈，梯度配比：乙腈10％-95％)。

第五步

8-(叔丁基)2-甲基(±)-rel-(1R,2R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-2,8-二甲酸酯1f

将化合物1e(400mg，1.4mmol)溶于2mL四氢呋喃中，加入3.5mL 2M的硼烷二甲硫醚络合物四氢呋喃溶液，搅拌反应14小时，反应液加入甲醇淬灭，继续50℃反应14小时，反应液减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化得到标题化合物1f(176mg，产率：46.2％)。

MS m/z(ESI):271.2[M+1]。

第六步

(±)-rel-(1R,2R,5S)-2-(羟甲基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯1g

将化合物1f(1g，3.69μmol)溶于15mL四氢呋喃中，加入4.4mL 1M的氢化铝锂的四氢呋喃溶液，0℃搅拌反应1小时，反应液依次加入0.2mL水，0.2mL15％氢氧化钠水溶液，0.4mL水，再加入无水硫酸钠搅拌10分钟，过滤，将滤液浓缩即得到标题化合物1g(430mg，产率：47.9％)，产品不经纯化直接用于下步反应。MS m/z(ESI):243.1[M+1]。

实施例2

2,6-二氯-3-氟吡啶-4-胺2a

将化合物1h(5g，30.6mmol，上海毕得)溶于20mL N,N-二甲基甲酰胺和20mL乙腈中，加入1-氯甲基-4-氟-1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷二(四氟硼酸)盐(13g，36.8mmol)，80℃反应0.5小时，反应液减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化得到标题化合物3a(2.2g，产率：39.6％)。

MS m/z(ESI):180.9[M+1]。

实施例3

5-乙基-4-((5aS,6S,9R)-1-氟-12-(((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-5a,6,7,8,9,10-六氢-5H-4-氧杂-3,10a,11,13,14-五氮杂-6,9-甲桥萘并[1,8-ab]并庚环-2-基)萘-2-酚3-p1

5-乙基-4-((5aR,6R,9S)-1-氟-12-(((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-5a,6,7,8,9,10-六氢-5H-4-氧杂-3,10a,11,13,14-五氮杂-6,9-甲桥萘并[1,8-ab]并庚环-2-基)萘-2-酚3-p2

/>

第一步

(±)-rel-(1R,2R,5S)-2-(((叔丁基二甲基硅)氧基)甲基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-

羧酸叔丁酯3a

将化合物1g(8.8g，36.3mmol)，叔丁基二甲基氯硅烷(16g,106.1558mmol)，4-二甲氨基吡啶(4g,32.4739mmol)溶于200mL二氯甲烷中，加入三乙胺(15g,148.23mmol,21.4286mL)，搅拌反应16小时，反应液减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化得到标题化合物3a(8g，产率：61.7％)。

MS m/z(ESI):357.1[M+1]。

第二步

4-((叔丁氧基羰基)氨基)-2,6-二氯-5-氟烟酸叔丁酯3b

将化合物2a(1.8g，9.94mmol)溶于四氢呋喃(50mL)，冰浴下加入20mL 2M的双三甲基硅基氨基钠四氢呋喃溶液，搅拌反应0.5小时后，加入二碳酸二叔丁酯(6.5g，29.7mmol)，搅拌反应14小时，反应液中加入饱和氯化铵水溶液淬灭，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，有机相合并，用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂后滤液减压浓缩，残余物以洗脱剂体系B纯化得到标题化合物3b(1g，产率：26.3％)，产品不经纯化直接用于下步反应。

MS m/z(ESI):381.1[M+1]。

第三步

4-氨基-2,6-二氯-5-氟烟酸叔丁酯3c

将化合物3b(1g，2.62mmol)溶于乙酸乙酯(8mL)中，加入3mL 4M的盐酸二氧六环溶液，搅拌反应2小时，冰浴下用4M的氢氧化钠水溶液调节pH至中性，乙酸乙酯萃取(10mL×3)，有机相合并，用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂后滤液减压浓缩，残余物以洗脱剂体系B纯化得到粗品标题化合物3c(500mg，产率：67.8％)。

MS m/z(ESI):281.1[M+1]。

第四步

2,6-二氯-5-氟-4-(3-(2,2,2-三氯乙酰基)脲基)烟酸叔丁酯3d

将粗品化合物3c(500mg，1.77mmol)溶于四氢呋喃(10mL)，加入三氯乙酰异氰酸酯(670mg，3.55mmol)，搅拌反应30分钟，反应液减压浓缩即得到粗品标题化合物3d(835mg，产率：99.7％)，产品不经纯化直接用于下步反应。

MS m/z(ESI):467.9[M+1]。

第五步

5,7-二氯-8-氟-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4-二酚3e

将粗品化合物3d(835mg，1.77mmol)溶于7M的氨甲醇溶液(10mL)，搅拌反应1小时，反应液减压浓缩，残余物中加入甲基叔丁基醚(10mL)，搅拌0.5小时后过滤，滤饼干燥后即得到粗品标题化合物3e(400mg，产率：89.9％)，产品不经纯化直接用于下步反应。

MS m/z(ESI):249.9[M+1]。

第六步

2,4,5,7-四氯-8-氟-吡啶并[4,3-d]嘧啶3f

将粗品化合物3e(300mg，1.19mmol)溶于三氯氧磷(6mL)，加入N,N-二异丙基乙胺(800mg，6.19mmol)，110℃搅拌反应3小时，反应液冷却至室温后减压浓缩，得粗品标题化合物3f(344mg，产率：97.7％)，产物不经纯化直接用于下一步。MS m/z(ESI):285.8[M+1]。

第七步

(±)-rel-(1R,2R,5S)-2-(((叔丁基二甲基硅基)氧基)甲基)-3-(2,5,7-三氯-8-氟吡啶并

[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯3g

将化合物3f(1.0g，3.48mmol)，N,N-二异丙基乙胺(0.9g，6.9mmol)溶于15mL二氯甲烷中，-78℃加入3a(1.25g，3.5mmol)，保持温度搅拌反应1小时后恢复室温反应16小时，反应液减压浓缩，残余物以洗脱剂体系B纯化得到粗品标题化合物3g(1.56g，产率：73.7％)。

MS m/z(ESI):606.2[M+1]。

第八步

(1S,2S,5R)-2-(((叔丁基二甲基硅基)氧基)甲基)-3-(5,7-二氯-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]

辛烷-8-羧酸叔丁酯3h-1

和

(1R,2R,5S)-2-(((叔丁基二甲基硅基)氧基)甲基)-3-(5,7-二氯-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]

辛烷-8-羧酸叔丁酯3h-2的非对映体混合物

将化合物3g(1.4g，2.3mmol)溶于1,4-二氧六环(20mL)，加入((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲醇(650mg，4.08mmol，药明)，N,N-二异丙基乙胺(1.5g，11.6mmol)，4A分子筛(1.4g)，105℃搅拌反应6小时，反应液冷却至室温后过滤，减压浓缩，得粗品标题化合物3h-1和3h-2的非对映体混合物(1.68g，产率：99.8％)，产物不经纯化直接用于下一步。

MS m/z(ESI):729.2[M+1]

第九步

(5aS,6S,9R)-2-氯-1-氟-12-(((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-5a,6,7,8,9,10-六氢-5H-4-氧杂-3,10a,11,13,14-五氮杂-6,9-甲桥萘并[1,8-ab]并庚环-14-羧酸叔丁酯3i-1

和

(5aR,6R,9S)-2-氯-1-氟-12-(((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-5a,6,7,8,9,10-六氢-5H-4-氧杂-3,10a,11,13,14-五氮杂-6,9-甲桥萘并[1,8-ab]并庚环-14-羧酸叔丁酯3i-2的非对映体混合物

将粗品化合物3h-1和3h-2的非对映体混合物(1.68g，2.3mmol)，加入四丁基氟化铵(2.59g，11.51mmol)，室温搅拌16小时；反应液减压浓缩，残余物以洗脱剂体系B纯化得到标题化合物3i-1和3i-2的非对映体混合物(1.0g，产率：75.0％)。

MS m/z(ESI):579.2[M+1]。

第十步(5aS,6S,9R)-2-(8-乙基-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-1-氟-12-(((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-5a,6,7,8,9,10-六氢-5H-4-氧杂-3,10a,11,13,14-五氮杂-6,9-

甲桥萘并[1,8-ab]并庚环-14-羧酸叔丁基酯3j-1

和(5aR,6R,9S)-2-(8-乙基-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-1-氟-12-(((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-5a,6,7,8,9,10-六氢-5H-4-氧杂-3,10a,11,13,14-五氮杂-6,9-甲桥萘并[1,8-ab]并庚环-14-羧酸叔丁基酯3j-2的非对映体1:1混合物

将化合物3i-1和3i-2的非对映体混合物(1.9g，3.28mmol)，2-(8-乙基-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(1.5g，4.38mmol，采用专利申请“WO2021/041671”中说明书第111页的中间体21公开的方法制备而得)，四(三苯基膦)钯(1.16g，1mmol，adamas)，碳酸铯(4.7g，14.4mmol)溶于36mL 1,4-二氧六环和水(V:V＝5:1)的混合溶液中。氮气氛围下，100℃反应6小时，反应液减压浓缩即得粗品标题化合物3j-1和3j-2的非对映体1:1混合物(2.5g，产率：100％)。MS m/z(ESI):759.2[M+1]。

第十一步

5-乙基-4-((5aS,6S,9R)-1-氟-12-(((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-5a,6,7,8,9,10-六氢-5H-4-氧杂-3,10a,11,13,14-五氮杂-6,9-甲桥萘并[1,8-ab]并庚环-2-基)萘-2-酚3p-1

5-乙基-4-((5aR,6R,9S)-1-氟-12-(((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-5a,6,7,8,9,10-六氢-5H-4-氧杂-3,10a,11,13,14-五氮杂-6,9-甲桥萘并[1,8-ab]并庚环-2-基)萘-2-酚3p-2

将粗品化合物3j-1和3j-2的非对映体混合物(2.4g，3.16mol)溶于乙酸乙酯(40mL)中，加入17mL 4M的盐酸二氧六环溶液，0℃反应2小时，反应液减压浓缩，残余物用高效液相色谱法(Waters-2545，色谱柱：SharpSil-T C18,30*150mm,5μm；流动相：水相(10mmol/L碳酸氢铵)和乙腈，梯度配比：乙腈38％-45％，流速：30mL/min)纯化得到标题化合物3p-1和3p-2的非对映体1:1混合物(620mg，产率：32.6％)。

MS m/z(ESI):615.2[M+1]。

¹H NMR(500MHz,CD₃OD):δ7.63(d,1H),7.37(q,1H),7.29(q,1H),7.18(dd,1H),7.08(t,1H),5.48-5.29(m,2H),4.55-4.28(m,4H),4.17(dd,1H),3.84-3.75(m,1H),3.70(t,1H),3.47(q,1H),3.31-3.07(m,3H),2.57-2.17(m,5H),2.15-1.79(m,7H),1.63(t,1H),1.08-0.87(m,3H)。

化合物3p-1和3p-2的非对映体混合物经手性柱拆分(Shimadzu LC-20AP，色谱柱：DAICELIC,25*250mm,10μm；流动相A：正己烷，流动相B：乙醇(0.1％7M NH3in MeOH))和，梯度配比：A:B：30:70，流速：30mL/min)得到标题化合物3p-1(50mg，产率：35.7％)和3p-2(50mg，产率：35.7％)。单一构型化合物(较短保留时间)3p-2：(50mg，产率：35.7％)。

MS m/z(ESI):615.2[M+1]。

手性HPLC分析：保留时间9.85分钟，纯度：99％(色谱柱：DAICELIC，250*4.6mm，5μm；流动相：正己烷和乙醇(含0.2％二乙胺)，流速：1.0mL/min)。

¹H NMR(500MHz,CD₃OD):δ7.61-7.59(m,1H),7.36-7.32(m,1H),7.26-7.25(m,1H),7.18-7.13(m 1H),7.05-6.95(m,1H),5.37-5.22(m,2H),5.09-5.00(m,1H),4.61-4.56(m,1H),4.49-4.41(m,1H),4.30(dd,1H),4.24-4.18(m,1H),4.16-4.09(m,1H),3.72(dd,1H),3.62(dd,1H),3.27-3.17(m,3H),3.01(td,1H),2.48(dt,1H),2.40-2.10(m,5H),1.99(td,2H),1.94-1.75(m,4H),0.99-0.88m,3H)。

单一构型化合物(较长保留时间)3p-1：(50mg，产率：35.7％)。

MS m/z(ESI):615.2[M+1]。

手性HPLC分析：保留时间16.0分钟，纯度：99％(色谱柱：DAICELIC，250*4.6mm，5μm；流动相：正己烷和乙醇(含0.2％二乙胺)，流速：1.0mL/min)。

¹H NMR(500MHz,CD₃OD):δ7.61-7.59(m,1H),7.36-7.32(m,1H),7.26-7.25(m,1H),7.18-7.13(m 1H),7.05-6.94(m,1H),5.36-5.33(m,2H),5.10-5.01(m,1H),4.61-4.56(m,1H),4.49-4.41(m,1H),4.30(dd,1H),4.24-4.22(m,1H),4.16-4.10(m,1H),3.73-3.72(m,1H),3.64-3.61(m,1H),3.26-3.20(m,3H),3.04-2.99(m,1H),2.48(dt,1H),2.38-2.17(m,5H),2.03-1.96(m,2H),1.93-1.78(m,4H),0.99-0.88m,3H)。

实施例4

5-乙基-6-氟-4-((5aS,6S,9R)-1-氟-12-(((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-5a,6,7,8,9,10-六氢-5H-4-氧杂-3,10a,11,13,14-五氮杂-6,9-甲桥萘并[1,8-ab]并庚环-2-基)萘-2-酚4p-1

5-乙基-6-氟-4-((5aR,6R,9S)-1-氟-12-(((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-5a,6,7,8,9,10-六氢-5H-4-氧杂-3,10a,11,13,14-五氮杂-6,9-甲桥萘并[1,8-ab]并庚环-2-基)萘-2-酚4p-2

第十步(5aS,6S,9R)-2-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-1-氟-12-(((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-5a,6,7,8,9,10-六氢-5H-4-氧杂-3,10a,11,13,14-五氮杂

-6,9-甲桥萘并[1,8-ab]并庚环-14-羧酸叔丁酯4a-1

和(5aR,6R,9S)-2-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-1-氟-12-(((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-5a,6,7,8,9,10-六氢-5H-4-氧杂-3,10a,11,13,14-五氮杂-6,9-甲桥萘并[1,8-ab]并庚环-14-羧酸叔丁酯4a-2的非对映体1:1混合物

将化合物3i-1和3i-2的非对映体混合物(300mg，518.1μmol)，2-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(280mg，777.2μmol，采用专利申请“WO2021/041671”中说明书第104页的中间体18公开的方法制备而得)，四(三苯基膦)钯(120mg，103.8μmol)，碳酸铯(506mg，1.55mmol)溶于6mL 1,4-二氧六环和水(V:V＝5:1)的混合溶液中。氮气氛围下，100℃反应6小时，反应液减压浓缩即得粗品标题化合物4a-1和4a-2的非对映体1:1混合物(400mg)，产物不经纯化，直接用于下步反应。

MS m/z(ESI):777.2[M+1]。

第十一步

5-乙基-6-氟-4-((5aS,6S,9R)-1-氟-12-(((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-5a,6,7,8,9,10-六氢-5H-4-氧杂-3,10a,11,13,14-五氮杂-6,9-甲桥萘并[1,8-ab]并庚环-2-基)萘-2-酚4p-1

5-乙基-6-氟-4-((5aR,6R,9S)-1-氟-12-(((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-5a,6,7,8,9,10-六氢-5H-4-氧杂-3,10a,11,13,14-五氮杂-6,9-甲桥萘并[1,8-ab]并庚环-2-基)萘-2-酚4p-2

将粗品化合物4a-1和4a-2的非对映体混合物(160mg，205.9μmol)溶于乙酸乙酯(5mL)中，加入1mL 4M的盐酸二氧六环溶液，0℃反应2小时，反应液减压浓缩，残余物用高效液相色谱法(Waters-2545，色谱柱：SharpSil-T C18,30*150mm,5μm；流动相：水相(10mmol/L碳酸氢铵)和乙腈，梯度配比：乙腈38％-45％，流速：30mL/min)纯化得到标题化合物4p-1和4p-2的非对映体1:1混合物(10mg，产率：7.2％)。

MS m/z(ESI):633.2[M+1]。

¹H NMR(500MHz,CD₃OD):δ7.67(ddd,1H),7.32-7.21(m,2H),7.11-7.01(m,1H),5.38-5.35(m,2H),5.11-5.03(m,1H),4.64-4.59(m,1H),4.52-4.46(m,1H),4.34-4.29(m,1H),4.25(dd,1H),4.18-4.12(m,1H),3.74(br,1H),3.65(br,1H),3.26-3.23(m,3H),3.05-3.01(m,1H),2.61-1.81(m,12H),0.94-0.82(m,3H)。

化合物4p-1和4p-2的非对映体混合物经手性柱拆分(Shimadzu LC-20AP，色谱柱：DAICELIC,25*250mm,10μm；流动相A：正己烷，流动相B：乙醇(0.1％7M NH3in MeOH))和，梯度配比：A:B：40:60，流速：30mL/min)得到标题化合物4p-1(26mg，产率：43.3％)和4p-2(26mg，产率：43.3％)。

单一构型化合物(较短保留时间)4p-2：(26mg，产率：43.3％)。

MS m/z(ESI):633.2[M+1]。

手性HPLC分析：保留时间7.89分钟，纯度：99％(色谱柱：DAICELIC，250*4.6mm，5μm；流动相：正己烷和乙醇(含0.2％二乙胺)，流速：1.0mL/min)。

¹H NMR(500MHz,CD₃OD):δ7.67(ddd,1H),7.32-7.21(m,2H),7.11-7.01(m,1H),5.38-5.27(m,2H),5.11-5.03(m,1H),4.64-4.59(m,1H),4.52-4.44(m,1H),4.33(d,1H),4.24(dd,1H),4.18-4.12(m,1H),3.75(br,1H),3.66(br,1H),3.27-3.18(m,3H),3.05-3.03(m,1H),2.60-1.81(m,12H),0.93-0.82(m,3H)。

单一构型化合物(较长保留时间)4p-1：(26mg，产率：43.3％)。

MS m/z(ESI):633.2[M+1]。

手性HPLC分析：保留时间13.8分钟，纯度：99％(色谱柱：DAICELIC，250*4.6mm，5μm；流动相：正己烷和乙醇(含0.2％二乙胺)，流速：1.0mL/min)。

¹H NMR(500MHz,CD₃OD):δ7.67(ddd,1H),7.32-7.21(m,2H),7.11-7.01(m,1H),5.38-5.35(m,2H),5.11-5.03(m,1H),4.64-4.59(m,1H),4.52-4.46(m,1H),4.34-4.29(m,1H),4.25(dd,1H),4.18-4.12(m,1H),3.74(br,1H),3.65(br,1H),3.26-3.23(m,3H),3.05-3.01(m,1H),2.61-1.81(m,12H),0.94-0.82m,3H)。

实施例5

化合物4p-1约210mg，碳酸氢钠约56mg，THF/H2O约2:2ml，加入氯甲酸乙酯约44mg，30℃反应12h，TLC检测原料反应完全，加入20ml DCM和20ml去离子水，分离有机相，干燥柱层析，得到淡黄色固体约180mg，即为化合物5。

生物学评价

测试例1：AGS细胞ERK磷酸化抑制实验生物学评价(HTRF法)

一、测试目的

本实验通过检测化合物3p-1和4p-1对细胞ERK磷酸化抑制作用，根据IC₅₀大小评价化合物对KRAS靶点的抑制作用。

二、实验方法

AGS细胞(南京科佰，CBP60476)用含有10％胎牛血清的RPMI1640(Hyclone，SH30809.01)完全培养基进行培养。实验第一天，使用完全培养基将AGS细胞以40000个/孔的密度种于96孔板，每孔190μL细胞悬液，放置37℃，5％ CO₂细胞培养箱培养过夜。

第二天，每孔加入10μL用完全培养基配制的梯度稀释的待测化合物，化合物的终浓度是从10μM开始进行5倍梯度稀释的9个浓度点，设置含有0.5％ DMSO的空白对照，孔板放置37℃，5％ CO₂的细胞培养箱孵育1个小时。孵育完成后，取出96孔细胞培养板，吸掉培养基，每孔加入200μL PBS(上海源培生物科技股份有限公司，B320)洗一遍。吸掉PBS，每孔加入50μL含封闭液(blocking reagent，Cisbio，64KB1AAC)的裂解缓冲液(lysis buffer，Cisbio，64KL1FDF)，孔板放置振荡器上室温震荡裂解40分钟。裂解后用移液器吹打混匀，每孔各转移16μL裂解液分别至两块HTRF 96孔检测板(Cisbio，66PL96100)中，之后两块板分别加入4μL预混的磷酸化ERK1/2抗体溶液(Cisbio，64AERPEG)或4μL预混的总ERK1/2抗体溶液(Cisbio，64NRKPEG)。微孔板用封板膜密封，在微孔板离心机中离心1分钟，室温避光孵育过夜。

第三天，使用ENVISION多功能酶标仪(PerkinElmer，ENVISION)读取337nm波长激发，665nm和620nm波长发射的荧光值。

三、数据分析与结果

用Graphpad Prism软件根据化合物浓度和磷酸化ERK/总ERK的比值计算化合物抑制活性的IC₅₀值。结果参见下表1。

表1AGS细胞ERK磷酸化抑制活性数据

化合物编号	AGS/IC50(nM)
		3p-1	2.0
4p-1	0.4

结论：化合物3p-1和4p-1对AGS细胞ERK磷酸化具有较好的抑制作用。

测试例2：GP2d、AGS细胞3D增殖抑制实验生物学评价

一、测试目的

通过测试化合物3p-1和4p-1对GP2d、AGS细胞的3D增殖抑制作用，评价化合物4p-1对KRAS靶点的抑制作用。

二、实验方法

GP2d细胞(南京科佰，CBP60010)用完全培养基即含有10％胎牛血清(Corning，35-076-CV)的DMEM/高糖培养基(Hyclone，SH30243.01)进行培养。实验第一天，使用完全培养基将GP2d细胞以1000个细胞/孔的密度种于96孔低吸附板(Corning，CLS7007-24EA)，每孔90μL细胞悬液，2000rpm室温离心5分钟后放置37℃，5％ CO₂细胞培养箱培养过夜。

AGS细胞(南京科佰，CBP60476)用完全培养基即含有10％胎牛血清(Corning，35-076-CV)的RPMI1640培养基(Hyclone，SH30809.01)进行培养。实验第一天，使用完全培养基将AGS细胞以1000个细胞/孔的密度种于96孔低吸附板(Corning，CLS7007-24EA)，每孔90μL细胞悬液，2000rpm室温离心5分钟后放置37℃，5％ CO₂细胞培养箱培养过夜。

第二天，每孔加入10μL用完全培养基配制的梯度稀释的待测化合物，GP2d细胞的化合物终浓度是从1μM开始进行3倍梯度稀释的9个浓度点，AGS细胞的化合物终浓度是从10μM开始进行3倍梯度稀释的9个浓度点，都设置含有0.5％DMSO的空白对照。孔板放置37℃，5％ CO₂的细胞培养箱培养120小时。第七天，取出96孔细胞培养板，每孔加入50μLCellTiter-3D试剂(Promega，G9682)，室温震荡25分钟后，吹吸混匀并取出50μL转移至白色不透底的96孔板(PE，6005290)中，使用多功能微孔板酶标仪(PerkinElmer，ENVISION)读取发光信号值。

三、数据分析与结果

用Graphpad Prism软件计算化合物抑制活性的IC₅₀值，结果参见下表2。

表2AGS、GP2d细胞3D增殖抑制活性数据

结论：化合物3p-1和4p-1对AGS、GP2d细胞3D增殖具有较好的抑制作用。测试例3：SPR方法检测化合物与KRAS蛋白亚型G12D或WT的亲和力

先将生物素化的Avi-KRAS-WT或Avi-KRAS-G12D用含有100mM MgCl₂的1×HBS-P+(Cat.#BR1006-71)缓冲液稀释至20μg/mL，然后流过SA(Cat.#BR1005-31)生物传感芯片通道2，持续420s，获得大约5000 -7000RU的偶联水平。再将化合物样品从高到低依次进样120s，之后解离720s。试验采用单循环动力学模式。Biacore 8K仪器实时检测反应信号获得结合解离曲线。试验结束后用Biacore8K评价软件进行数据分析，采用1:1模型进行数据拟合并获得亲和力数据，结果参见下表3。

表3

结论：化合物3p-1和4p-1与KRAS蛋白亚型G12D或WT具有较好的亲和力。

实施例6体外Caco-2细胞试验

1.1样品制备

配制2mM原料的DMSO母液，分别以HBSS空白溶液(25mM MES，pH6.0)、含0.015％(w/v)TPGS的HBSS溶液、含0.003％(w/v)泊洛沙姆407的HBSS溶液、含0.12％(w/v)SNAC的HBSS溶液或含0.015％(w/v)TPGS+0.12％(w/v)SNAC的HBSS溶液稀释至10μM作为工作溶液。普萘洛尔及地高辛作为对照药，分别以DMSO配制2mM的母液并以HBSS溶液稀释至10μM作为工作溶液。

1.2试验方法

(1)制备Caco-2细胞；

(2)评价细胞膜完整性；

(3)准备工作液；

(4)检测药物转运：

将Caco-2细胞培养板从培养器中取出，以HBSS溶液清洗两次；测定药物在A侧→B侧渗透性：将125uL的工作溶液加入培养板顶侧(apical compartment)，并立即将50uL样品从A侧转移到200uL含内标(100nM阿普唑仑，200nM咖啡因和100nM甲磺丁酰胺)的乙腈中，在新的96孔板中作为初始供体样品(A-B)。以每分钟1000转的速度旋转10分钟。移取235ul缓冲液至接收板(basolateral compartment)；测定药物B侧→A侧渗透性：将285uL工作溶液加入接收板(basolateral compartment)，并立即将50uL样品从接收板转移到新的96孔板中200uL含内标(100nM阿普唑仑，200nM咖啡因和100nM甲磺丁酰胺)的乙腈中作为初始供体样品(B-A)。以每分钟1000转的速度旋转10分钟。移取75uL缓冲液加入培养板顶侧(apicalcompartment)。

(5)数据计算，结果如表4所示。

表4

结论：体外Caco-2细胞试验表明化合物4p-1存在明显的外排作用，加入外排抑制剂如TPGS或泊洛沙姆可抑制外排。

实施例7大鼠灌胃PK试验1

1.1样品制备

化合物4p-1溶液：称取适量化合物，加入DMF(5％总体积)，震摇或超声使溶解，继续加入丙二醇(45％总体积)，震摇使混合均匀，最后加含10％(w/v)的HS15水溶液定容至目标体积。

含SNAC的化合物4p-1溶液：称取适量化合物，DMF(5％总体积)，震摇或超声使溶解，继续加入丙二醇(45％总体积)，震摇使混合均匀，最后加含10％(w/v)的HS15水溶液定容至目标体积，称取SNAC加入上述溶液，震摇使溶解即制备含SNAC的化合物4p-1溶液。

盐酸维拉帕米溶液：称取适量盐酸维拉帕米，加入0.5％(w/v)吐温80，轻微震摇即可使之溶解完全。

1.2试验方法

将雄性SD大鼠随机分为3组，每组3只，1-1组灌胃给予化合物4p-1溶液(浓度：3mg/ml，剂量：10ml/Kg)；1-2组在给予化合物4p-1前30min先灌胃给予盐酸维拉帕米溶液(浓度：6.25mg/ml，剂量：8ml/Kg)，然后灌胃给予化合物4p-1溶液(浓度：3mg/ml，剂量：10ml/Kg)；1-3组在给予含SNAC的化合物4p-1前30min先灌胃给予盐酸维拉帕米溶液(浓度：6.25mg/ml，剂量：8ml/Kg)，然后灌胃给予含SNAC(20mg/ml，10ml/Kg)的化合物4p-1溶液(浓度：3mg/ml，剂量：10ml/Kg)。

给药后分别于0.083，0.25，0.5，1，2，4，6，8，12，24h取全血检测血药浓度并计算药代动力学参数，结果如表5所示。

表5

结论：1-2组与1-1组相比，盐酸维拉帕米将化合物4p-1的生物利用度由0.92％提高至2.16％，提高了135％；1-3组与1-2组相比，SNAC将生物利用度从2.18％进一步提高至4.22％，提高了94％。

实施例8小鼠灌胃PK试验

1.1样品制备

2-1：称取适量化合物4p-1，加入DMF(5％总体积)，震摇或超声使溶解，继续加入丙二醇(45％总体积)，震摇使混合均匀，最后加含10％(w/v)的HS15水溶液定容至目标体积，称取EDTA加入上述溶液，震摇使溶解；

2-2：称取适量化合物4p-1，加入DMF(5％总体积)，震摇或超声使溶解，继续加入丙二醇(45％总体积)，震摇使混合均匀，最后加含10％(w/v)的HS15水溶液定容至目标体积，称取癸酸钠加入上述溶液，震摇使溶解；

2-3：称取适量化合物4p-1，加入DMF(5％总体积)，震摇或超声使溶解，继续加入丙二醇(45％总体积)，震摇使混合均匀，最后加含10％(w/v)的HS15水溶液定容至目标体积，称取精氨酸加入上述溶液，震摇使溶解；

2-4：称取适量化合物4p-1，加入DMF(5％总体积)，震摇或超声使溶解，继续加入丙二醇(45％总体积)，震摇使混合均匀，最后加含10％(w/v)的HS15水溶液定容至目标体积，称取SNAC加入上述溶液，震摇使溶解。

1.2试验方法

将小鼠随机分为4组，每组3只，2-1组在给予化合物前15min先灌胃给予盐酸维拉帕米溶液(浓度：4mg/ml，剂量：10ml/Kg)，然后灌胃给予含EDTA(浓度：50mg/ml，剂量：10ml/Kg)的组2-1溶液(浓度：4mg/ml，剂量：10ml/Kg)；2-2组在给予化合物前15min先灌胃给予盐酸维拉帕米溶液(浓度：4mg/ml，剂量：10ml/Kg)，然后灌胃给予含癸酸钠(浓度：10mg/ml，剂量：10ml/Kg)的组2-2溶液(浓度：4mg/ml，剂量：10ml/Kg)；2-3组在给予化合物前15min先灌胃给予盐酸维拉帕米溶液(浓度：4mg/ml，剂量：10ml/Kg)，然后灌胃给予含精氨酸(浓度：25mg/ml，剂量：10ml/Kg)的组2-3溶液(浓度：4mg/ml，剂量：10ml/Kg)；2-4组在给予化合物前15min先灌胃给予盐酸维拉帕米溶液(浓度：4mg/ml，剂量：10ml/Kg)，然后灌胃给予含SNAC(浓度：40mg/ml，剂量：10ml/Kg)的组2-4溶液(浓度：4mg/ml，剂量：10ml/Kg)。

给药后分别于0.083，0.25，0.5，1，2，4，6，8，12，24h取全血检测血药浓度并计算药代动力学参数，结果如表6所示。

表6

结论：在小鼠体内SNAC促渗效果最好，其次是精氨酸。

实施例9犬PK试验1

1.1样品制备

3-1：25mg化合物4p-1与50mg共聚维酮VA64溶于甲醇和二氯甲烷(1:1，v/v)，在B290喷雾干燥仪喷干制备固体分散体，然后与300mg SNAC及TPGS颗粒(含37.5mg TPGS)混合后灌装胃溶型胶囊；

3-2及3-5：25mg化合物4p-1、50mg共聚维酮VA64与300mg SNAC溶于甲醇和二氯甲烷(1:1，v/v)，在B290喷雾干燥仪喷干制备固体分散体，然后与TPGS颗粒(含37.5mg TPGS)混合，并加碳酸钠片(100mg)后灌装肠溶型胶囊；

3-3及3-4：25mg化合物4p-1、50mg共聚维酮VA64与300mg SNAC溶于甲醇和二氯甲烷(1:1，v/v)，在B290喷雾干燥仪喷干制备固体分散体，然后TPGS颗粒(含37.5mg TPGS)混合，并加碳酸钠片(100mg)后灌装胃溶型胶囊；

HM30181固体分散体：以二氯甲烷：乙醇：水＝70:30:5(v:v:v)作为溶剂，依次加入15mg HM30181、30mg HPMC、15mg二氧化硅和10mg磷酸，固含量约3％，持续搅拌呈均一的混悬液，以B290小型喷干仪进行喷干。进风温度100℃，风机频率10％，进料泵转速25rpm，雾化器氮气流量60mm。

HM30181固体分散体的0.5％甲基纤维素水混悬液：量取100ml纯化水，磁力搅拌状态下缓慢加入0.5g甲基纤维素，持续搅拌至澄清透明溶液，称取HM30181固体分散体(折算成HM30181甲磺酸盐为50mg)，避光状态下缓慢加入持续搅拌的甲基纤维素水溶液，直至呈均一的混悬液，备用。

1.2试验方法

18只犬(10-12Kg)随机分为6组，每组3只。

3-1组为空腹给药；3-2组在给药前30min给予HM30181固体分散体的0.5％甲基纤维素水混悬液(浓度：0.5mg/ml，剂量：60ml)，然后给予组3-2胶囊；3-3组在给药前30min给予HM30181固体分散体的0.5％甲基纤维素水混悬液(浓度：0.5mg/ml，剂量：60ml)，然后给予组3-3胶囊；3-4组在给药前2h给予食物，然后再给药前30min给予HM30181固体分散体的0.5％甲基纤维素水混悬液(浓度：0.5mg/ml，剂量：60ml)，然后给予3-4胶囊；3-5组在给药前2h给予食物，然后再给药前30min给予HM30181固体分散体的0.5％甲基纤维素水混悬液(浓度：0.5mg/ml，剂量：60ml)，然后给予3-5胶囊。各组必要时给予止吐药盐酸帕洛诺司琼以防止呕吐。

给药后分别于0.083，0.25，0.5，1，2，4，6，8，12，24h(3-5及3-6组不含0.083h时间点)取全血检测血药浓度并计算药代动力学参数，结果如表7所示。

表7

结论：(1)3-3与3-1相比，提前30min给予外排抑制剂HM30181，与给予相同体积的空白溶媒相比，可将化合物4p-1的生物利用度由7.04％提高至16.4％，提高了133％；(2)3-4与3-3相比，饱腹条件相对空腹条件下化合物4p-1的生物利用度由16.4％提高至24.4％，提高了49％；(3)3-4与3-5相比，速释制剂和肠溶制剂的生物利用度无显著差异。

实施例10犬PK试验2

1.1样品制备

3-6：25mg化合物4p-1、50mg共聚维酮VA64与300mg SNAC溶于甲醇和二氯甲烷(1:1，v/v)，在B290喷雾干燥仪喷干制备固体分散体，然后与TPGS颗粒(含37.5mg TPGS)混合，然后灌装胃溶型胶囊；

3-7及3-8：25mg化合物4p-1、50mg共聚维酮VA64与300mg SNAC溶于甲醇和二氯甲烷(1:1，v/v)，在B290喷雾干燥仪喷干制备固体分散体，然后与TPGS颗粒(含37.5mg TPGS)混合，并加碳酸钠片(100mg)后灌装胃溶型胶囊；

HM30181胶囊：HM30181固体分散体(含HM30181甲磺酸盐30mg)灌装胃溶性胶囊。

1.2试验方法

9只犬(10-12Kg)随机分为3组，每组3只。

所有组别均在给药前2h给予食物。3-6组提前30min给予1粒HM30181固体分散体胶囊，然后给予组3-6胶囊；3-7组提前30min给予1粒HM30181固体分散体胶囊，然后给予组3-6胶囊；3-8组HM30181固体分散体胶囊与化合物3-8胶囊同时给药。

给药后分别于0.083，0.25，0.5，1，2，4，6，8，12，24h取全血检测血药浓度并计算药代动力学参数，结果如表8所示。

表8

注：^*先后是指提前30min给予外排抑制剂后再给予API，^**同时是指同时给予外排抑制剂与API。

结论：外排抑制剂与API先后给药或者同时给药的生物利用度无显著差异；处方中加碱与不加碱的生物与利用度也无显著差异。

实施例11大鼠灌胃PK试验2

1.1样品制备

化合物4p-1溶液：称取适量化合物4p-1，加入DMF(5％总体积)，震摇或超声使溶解，继续加入丙二醇(45％总体积)，震摇使混合均匀，最后加含10％(w/v)的HS15水溶液定容至目标体积；

化合物4p-1溶液(含SNAC)：称取适量化合物4p-1，加入DMF(5％总体积)，震摇或超声使溶解，继续加入丙二醇(45％总体积)，震摇使混合均匀，最后加含10％(w/v)的HS15水溶液定容至目标体积，称取SNAC加入上述溶液，震摇使溶解即制备含SNAC的化合物4p-1溶液；

化合物5溶液：称取适量化合物5，加入DMF(5％总体积)，震摇或超声使溶解，继续加入丙二醇(45％总体积)，震摇使混合均匀，最后加含10％(w/v)的HS15水溶液定容至目标体积；

化合物5溶液(含SNAC)：称取适量化合物5，加入DMF(5％总体积)，震摇或超声使溶解，继续加入丙二醇(45％总体积)，震摇使混合均匀，最后加含25％(w/v)的HS15水溶液定容至目标体积，称取SNAC加入上述溶液，震摇使溶解即制备含SNAC的化合物5溶液。

1.2试验方法

将15只雄性SD大鼠随机分为5组，每组3只。除组1-4外，组1-5～组1-8均在给药前30min均给予盐酸维拉帕米0.5％甲基纤维素水溶液(浓度：6.25mg/ml，剂量：8ml/Kg)，然后各组分别给予化合物4p-1溶液、化合物4p-1溶液(含SNAC)、化合物5溶液或化合物5溶液(含SNAC)。

给药后分别于0.25，0.5，1，2，4，6，8，12，24h取全血检测血药浓度并计算药代动力学参数，结果如表9所示。

表9

结论：1-6与1-5相比，SNAC将化合物4p-1的生物利用度从2.18％进一步提高至4.22％，提高了94％；1-8与1-7相比，SNAC的加入对于化合物5几乎无促渗透作用。

Claims (38)

1.一种组合物，包含：KRAS G12D抑制剂、促渗剂以及外排抑制剂。

2.根据权利要求1所述的组合物，所述KRAS G12D抑制剂的化学结构中包含式(SF)所示的结构片段，

其中，所述环Af选自4至8元单环杂环、6至14元螺杂环、6至14元稠杂环和6至14元桥杂环，所述环Af任选被n0个取代基R^f所取代，n0为1、2、3、4、5、6、7或8。

3.根据权利要求2所述的组合物，所述KRAS G12D抑制剂的化学结构中的环Af选自

其中，W各自独立地选自N和CR^f0；n1各自独立地选自1、2、3或4；n2各自独立地选自1、2、3或4；n3各自独立地选自0、1、2、3或4；n4各自独立地选自0、1、2、3或4；

W’各自独立地选自N和CR^f1；m1各自独立地选自0、1、2、3或4；m2各自独立地选自0、1、2、3或4；m3各自独立地选自0、1、2、3或4；m4各自独立地选自0、1、2、3或4；m5各自独立地选自0、1、2、3、4或5。

所述环Af任选被n0个取代基R^f所取代；

R^f、R^f0、R^f1各自独立地选自卤素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、氰基、氨基、-(CH₂)_w-NR^jR^k、-(CH₂)_w1-(O)_z1-C(O)NR^j1R^k1、-(CH₂)_w2-(O)_z2-C(O)OR^j2、硝基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；

R^j、R^k、R^j1、R^k1和R^j2相同或不同，且各自独立地选自氢原子、烷基、烯基、炔基、卤代烷基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；

w、w1和w2相同或不同，且各自独立地选自0、1、2和3；

z1为0或1；

z2为0或1。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的组合物，所述KRAS G12D抑制剂的化学结构中包含式(SF1)或式(SF2)所示的结构片段，

其中，环Af如权利要求2所定义，环Bf选自环Bf选自碳环、杂环、芳环和杂芳环；

Q各自独立地为N或CR^2a；

q0为0、1、2、3或4；q1为0、1、2或3；

R^2a各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、氰基、氨基、-(CH₂)_v-NR^hRⁱ、羟基、羟烷基和环烷基；

R^f2、R^f3各自独立地选自卤素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、氰基、氨基、-(CH₂)_w-NR^jR^k、-(CH₂)_w1-(O)_z1-C(O)NR^j1R^k1、-(CH₂)_w2-(O)_z2-C(O)OR^j2、硝基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；

R^h、Rⁱ、R^j、R^k、R^j1、R^k1和R^j2相同或不同，且各自独立地选自氢原子、烷基、烯基、炔基、卤代烷基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；

v、w、w1和w2相同或不同，且各自独立地选自0、1、2和3；

z1为0或1；

z2为0或1。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的组合物，其中所述的KRAS G12D抑制剂为通式(I)所示的化合物或其可药用的盐：

其中：

G⁰选自O、S、S(O)_、S(O)₂、CR^G0aR^G0b和NR^G0c；

G¹选自CR^G1aR^G1b、CR^G1aR^G1bCR^G1cR^G1d、C＝O和C(O)CR^G1aR^G1b；

G²为NR^d；

T为化学键或选自CR^aR^b、NR^T和O；

Q为N或CR^2a；

环A为芳基或杂芳基；

环B选自环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；

L选自单键、O和NR^e；

R^a、R^b、R^G0a、R^G0b、R^G1a、R^G1b、R^G1c和R^G1d相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、氰基、氨基、硝基、羟基、羟烷基、环烷基和杂环基；或者，R^G1a、R^G1b与相连的碳原子一起形成环烷基；或者，R^G1c、R^G1d与相连的碳原子一起形成环烷基；

各个R¹相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、氰基、氨基、-(CH₂)_u-NR^fR^g、羟基和羟烷基；

R^2a和R^4a相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、氰基、氨基、-(CH₂)_v-NR^hRⁱ、羟基、羟烷基和环烷基；

各个R³和R⁶相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、氰基、氨基、-(CH₂)_w-NR^jR^k、-(CH₂)_w1-(O)_z1-C(O)NR^j1R^k1、-(CH₂)_w2-(O)_z2-C(O)OR^j2、硝基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；

R^5a和R^5b相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、卤代烷基、氰基、羟基和羟烷基；或者

R^5a、R^5b与所连的碳原子一起形成环烷基或杂环基，所述的环烷基或杂环基各自独立地任选被选自卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、氰基、氨基、羟基和羟烷基中的一个或多个相同或不同的取代基取代；

R^G0c、R^T、R^d、R^e、R^f、R^g、R^h、Rⁱ、R^j、R^k、R^j1、R^k1和R^j2相同或不同，且各自独立地选自氢原子、烷基、烯基、炔基、卤代烷基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；

u、v、w、w1和w2相同或不同，且各自独立地选自0、1、2和3；

z1为0或1；

z2为0或1；

r为0、1、2或3；

p为0、1、2、3、4或5；

q为0、1、2、3、4或5；且

t为0、1、2、3、4或5。

6.根据权利要求5所述的组合物，其中G¹为CH₂。

7.根据权利要求5或6所述的组合物，其中G⁰为O。

8.根据权利要求5-7中任一项所述的组合物，其为通式(II)所示的化合物或其可药用的盐：

其中，环A、环B、G²、Q、L、R¹、R³、R^4a、R^5a、R^5b、R⁶、p、q、r和t如权利要求1中所定义。

9.根据权利要求5-8中任一项所述的组合物，其中Q为N。

10.根据权利要求5-9中任一项所述的组合物，其中环A为萘基。

11.根据权利要求5-10中任一项所述的组合物，其中环B为3至8元杂环基。

12.根据权利要求5-11中任一项所述的组合物，其中R^4a为氢原子或卤素。

13.根据权利要求5-12中任一项所述的组合物，其中G²为NH。

14.根据权利要求5-13中任一项所述的组合物，其中L为O。

15.根据权利要求5-14中任一项所述的组合物，其中R¹为氢原子。

16.根据权利要求5-15中任一项所述的组合物，其中各个R³相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、C_1-6烷基、C_2-6炔基、C_1-6卤代烷基、羟基、C_1-6羟烷基和3至8元环烷基。

17.根据权利要求5-16中任一项所述的组合物，其中R^5a和R^5b为氢原子；或者R^5a、R^5b与所连的碳原子一起形成3至6元环烷基。

18.根据权利要求5-17中任一项所述的组合物，其中各个R⁶相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、C_1-6羟烷基和-CH₂-O-C(O)NR^j1R^k1，R^j1和R^k1相同或不同，且各自独立地为氢原子或C_1-6烷基。

19.根据权利要求5-18中任一项所述的组合物，其中所述的KRAS G12D抑制剂为：

20.根据权利要求1-19中任一项所述的组合物，所述促渗剂选自乙二胺四乙酸(EDTA)、癸酸、癸酸钠或钾、N-(10-[2-羟基苯甲酰基]氨基癸酸(SNAD)、精氨酸、辛酸、辛酸钠或钾、N-(8-[2-羟基苯甲酰基]氨基)辛酸(SNAC)中、N-(5-氯水杨酰基)-8-氨基辛酸(5-CNAC)、、8-(水杨酰氨基)辛酸钠、非离子表面活性剂、阴离子表面活性剂和阳离子表面活性剂中的一种或多种，优选EDTA、癸酸钠、精氨酸和SNAC中的一种或多种，更优选SNAC。

21.根据权利要求1-20中任一项所述的组合物，所述KRAS G12D抑制剂与促渗剂的重量比范围1:50-100:1，优选1:40至20:1，更优选1:15至10:1。

22.根据权利要求1-21中任一项所述的组合物，所述外排抑制剂选自乳腺癌耐药蛋白(BCRP)抑制剂、P-糖蛋白(P-gp)抑制剂或多药耐药蛋白(MRP)抑制剂中的一种或多种。

23.根据权利要求22所述的组合物，所述外排抑制剂为P-gp抑制剂。

24.根据权利要求23所述的组合物，所述P-gp抑制剂选自维拉帕米或其盐、环孢素A、奎尼丁、右旋维拉帕米、泊洛沙姆、维生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS)、吐温80、吐温20、聚乙二醇、PSC833、LY335979、GF120918、ONT-093、XR9576、HM30181中的一种或多种。

25.根据权利要求1-24中任一项所述的组合物，所述KRAS G12D抑制剂与外排抑制剂的重量比范围1:20-100:1，优选1:10至80:1，更优选1:10至60:1。

26.根据权利要求1-25中任一项所述的组合物，其中还含有碱。

27.根据权利要求26所述的组合物，所述碱选自NaHCO₃、高岭土、Na2HPO4、精氨酸、MgO、KOH、Na₂CO₃中的一种或多种，优选Na₂CO₃。

28.根据权利要求1-27任一项所述的组合物，所述组合物包含：

(i)含有KRAS G12D抑制剂和促渗剂的药物组合物，以及含有外排抑制剂的药物组合物；或

(ii)含有外排抑制剂和促渗剂的药物组合物，以及含有KRAS G12D抑制剂的药物组合物；或

(iii)含有KRAS G12D抑制剂、促渗剂和外排抑制剂的药物组合物；

或(iiii)含有KRAS G12D抑制剂和促渗剂的药物组合物，以及含有外排抑制剂和促渗剂的药物组合物。

29.一种组合物，包含：式(III)所示化合物和外排抑制剂，

30.根据权利要求29所述的组合物，所述外排抑制剂选自乳腺癌耐药蛋白(BCRP)抑制剂、P-糖蛋白(P-gp)抑制剂或多药耐药蛋白(MRP)抑制剂中的一种或多种。

31.根据权利要求30所述的组合物，所述外排抑制剂为P-gp抑制剂。

32.根据权利要求31所述的组合物，所述P-gp抑制剂选自维拉帕米或其盐、环孢素A、奎尼丁、右旋维拉帕米、泊洛沙姆、维生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS)、吐温80、吐温20、聚乙二醇、PSC833、LY335979、GF120918、ONT-093、XR9576、HM30181中的一种或多种，优选HM30181。

33.根据权利要求19-32任一项所述的组合物，所述组合物包含：

(i)含有式(III)所示化合物的药物组合物，以及含有外排抑制剂的药物组合物；或

(ii)含有式(III)所示化合物和外排抑制剂的药物组合物。

34.根据权利要求1-33任一项所述的组合物，所述组合物的为口服组合物。

35.根据权利要求1-34中任一项所述的组合物在制备用于抑制KRAS G12D的药物中的用途。

36.根据权利要求1-34中任一项所述的组合物在制备用于治疗和/或预防疾病或病症的药物中的用途，所述的疾病或病症为癌症。

37.根据权利要求1-34中任一项所述的组合物在制备用于治疗和/或预防疾病或病症的药物中的用途，所述的疾病或病症选自脑癌、甲状腺癌、头颈癌、鼻咽癌、咽喉癌、口腔癌、唾液腺癌、食道癌、胃癌、肺癌、肝癌、肾癌、胰腺癌、胆囊癌、胆管癌、结直肠癌、小肠癌、胃肠道间质瘤、尿路上皮癌、尿道癌、膀胱癌、乳腺癌、阴道癌、卵巢癌、子宫内膜癌、宫颈癌、输卵管癌、睾丸癌、前列腺癌、血管瘤、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、皮肤癌、脂肪瘤、骨癌、软组织肉瘤、神经纤维瘤、神经胶质瘤、成神经细胞瘤和胶质母细胞瘤；优选选自胰腺癌、结直肠癌和非小细胞肺癌。

38.外排抑制剂和促渗剂的组合用于提高KRAS G12D抑制剂口服生物利用度的用途。