ES2572638T3

ES2572638T3 - 4-Aminopirimidinas condensadas y su uso como estimuladores de la guanilatociclasa soluble

Info

Publication number: ES2572638T3
Application number: ES11745710.1T
Authority: ES
Inventors: Markus Follmann; Johannes-Peter Stasch; Gorden Redlich; Jens Ackerstaff; Nils Griebenow; Andreas Knorr; Frank Wunder; Volkhart Min-Jian Li
Original assignee: Bayer Intellectual Property GmbH
Current assignee: Bayer Intellectual Property GmbH
Priority date: 2010-07-09
Filing date: 2011-07-05
Publication date: 2016-06-01
Anticipated expiration: 2031-07-05
Also published as: CN103180327A; CN103180327B; JP5940062B2; US20130172372A1; KR20130132392A; JP2013533250A; US8765769B2; HK1182697A1; WO2012004259A1; CA2804471A1; EP2590987A1; EP2590987B1

Abstract

Compuesto de fórmula (I)**Fórmula** en la que A representa alcanodiílo (C1-C3) o un grupo de fórmula**Fórmula** en la que * representa el sitio de unión al anillo de pirimidina, representa el sitio de unión al grupo carbonilo, el anillo Q representa un heterociclo de 4 a 6 miembros, y pudiendo estar sustituido alcanodiílo (C1-C3) con 1 o 2 sustituyentes seleccionados independientemente entre sí del grupo de flúor, trifluorometilo, alquilo (C1-Ca), hidroxilo y amino, pudiendo estar sustituido alquilo (C1-C4) con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente entre sí del grupo de flúor, trifluorometilo e hidroxilo, R1 representa hidrógeno o flúor, R2 representa bencilo, estando sustituido bencilo con 1 a 3 sustituyentes flúor, así como sus N-óxidos, sales, solvatos, sales de los N-óxidos y solvatos de los N-óxidos y sales.

Description

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en la que A tiene el significado indicado anteriormente y T1 representa alquilo (C1-C4), para dar un compuesto de fórmula (I)

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en la que A, R1 y R2 tienen en cada caso los significados indicados anteriormente, o

[B] se hace reaccionar un compuesto de fórmula (III) en un disolvente inerte en presencia de una base adecuada con un compuesto de fórmula (V)

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10 en la que

A1 representa alcanodiílo (C2-C3), pudiendo estar sustituido alcanodiílo (C2-C3) con 1 o 2 sustituyentes seleccionados independientemente entre sí del grupo flúor, trifluorometilo y alquilo (C1-C4), pudiendo estar sustituido alquilo (C1-C4) con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente

15 entre sí del grupo flúor, trifluorometilo e hidroxilo,

y T2 representa alquilo (C1-C4), para dar un compuesto de fórmula (I-A)

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en la que A1, R1 y R2 tienen en cada caso los significados indicados anteriormente,

opcionalmente los compuestos resultantes de fórmulas (I) y (I-A) se convierten opcionalmente con los (i) disolventes y/o (ii) ácidos o bases correspondientes en sus solvatos, sales y/o solvatos de las sales.

La reacción (II) → (III) tiene lugar de acuerdo con los procedimientos conocidos por el experto en un proceso de dos etapas, en primer lugar con la formación del iminoéter con metanolato de sodio en metanol a de 0 °C a +40 °C y

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[a): 1. Metilato de sodio, metanol 2. Cloruro de amonio, ácido acético; b): KOt-Bu, t-BuOH].

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[a): NaOMe, metanol, 65 °C].

Los compuestos de fórmula (II) se conocen por la bibliografía (véase por ejemplo el documento WO 03/095451, Ejemplo 4A) o pueden prepararse, ciclándose un compuesto de fórmula (VI)

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dimetilsulfóxido (DMSO), N,N'-dimetilpropilenurea (DMPU), N-metilpirrolidona (NMP), piridina o acetonitrilo. Se prefiere DMF.

Como ácidos de Lewis para la etapa de procedimiento (VII) → (VIII) son adecuados complejo de trifluoruro de borodietil éter, nitrato de amonio y de cerio (IV) (CAN), cloruro de estaño (II), perclorato de litio, cloruro de cinc (II), cloruro de indio (III) o bromuro de indio (III). Se prefiere complejo de trifluoruro de boro-dietil éter.

La reacción (VII) → (VIII) se lleva a cabo en general en un intervalo de temperatura de -78 °C a +40 °C, preferentemente a de 0 °C a +20 °C. La reacción puede tener lugar a presión normal, elevada o a presión reducida (por ejemplo de 0,05 a 0,5 MPa (de 0,5 a 5 bar)). En general se trabaja a presión normal.

Disolventes inertes para la reacción (VIII) + (IX) → (X) son por ejemplo hidrocarburos halogenados tal como diclorometano, triclorometano, tetraclorometano, tricloroetileno o clorobenceno, éteres tal como dietil éter, dioxano, tetrahidrofurano, glicoldimetil éter o dietilenglicoldimetil éter, u otros disolventes tal como dimetilformamida (DMF), dimetilsulfóxido (DMSO), N,N'-dimetilpropilenurea (DMPU), N-metilpirrolidona (NMP), piridina, acetonitrilo. Se prefiere DMF.

Bases adecuadas para la etapa de procedimiento (VIII) + (IX) → (X) son hidruros alcalinos tal como hidruro de potasio o hidruro de sodio, carbonatos alcalinos tal como carbonato de litio, de sodio, de potasio o de cesio, hidrogenocarbonatos alcalinos tal como hidrogenocarbonato de sodio o de potasio, alcoholatos alcalinos tal como metanolato de sodio o de potasio, metanolato de sodio o de potasio o terc-butilato de potasio, amidas tal como amida de sodio, bis-(trimetilsilil)amida de litio, de sodio o de potasio o diisopropilamida de litio, compuestos organometálicos tal como butil-litio o fenil-litio, o aminas orgánicas tal como trietilamina, diisopropiletilamina, piridina, 1,8-diazabiciclo[5,4.0]undec-7-eno (DBU) o 1,5-diazabiciclo[4,3.0]non-5-eno (DBN). Se prefiere carbonato de cesio.

La reacción (VIII) + (IX) → (X) se lleva a cabo en general en un intervalo de temperatura de 0 °C a +60 °C, preferentemente a de +10 °C a +25 °C. La reacción puede tener lugar a presión normal, elevada o a presión reducida (por ejemplo de 0,05 a 0,5 MPa (de 0,5 a 5 bar)). En general se trabaja a presión normal.

Disolventes inertes para la etapa de procedimiento (X) → (II) son por ejemplo éteres tal como dietil éter, dioxano, tetrahidrofurano, glicoldimetil éter o dietilenglicoldimetil éter, hidrocarburos tal como benceno, xileno, tolueno, hexano, ciclohexano o fracciones de petróleo, u otros disolventes tal como dimetilformamida (DMF), dimetilsulfóxido (DMSO), N,N'-dimetilpropilenurea (DMPU), N-metilpirrolidona (NMP), piridina o acetonitrilo. Así mismo es posible utilizar mezclas de los disolventes mencionados. Se prefiere DMSO.

La reacción (X) → (II) se lleva a cabo en general en un intervalo de temperatura de +20 °C a +180 °C, preferentemente a de +100 °C a +160 °C, opcionalmente en un microondas. La reacción puede tener lugar a presión normal, elevada o a presión reducida (por ejemplo de 0,05 a 0,5 MPa (de 0,5 a 5 bar)). En general se trabaja a presión normal.

El procedimiento de preparación descrito puede ilustrarse mediante el siguiente esquema de síntesis (esquema 3) a modo de ejemplo:

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[a): Hidrato de hidrazina, 1,2-etanodiol; b): iso-pentilnitrito, NaI, THF; b): Bromuro de 2-fluorobencilo, Cs2CO3, DMF;

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quirúrgicas), nevos, retinopatía diabética, vitrorretinopatía proliferativa y enfermedades del tejido conjuntivo (por ejemplo sarcoidosis).

Además, los compuestos de acuerdo con la invención son adecuados para combatir cicatrizaciones postoperatorias, por ejemplo como consecuencia de operaciones de glaucoma.

Los compuestos de acuerdo con la invención pueden utilizarse así mismo de manera cosmética en piel envejecida y queratinizada.

Además, los compuestos de acuerdo con la invención son adecuados para el tratamiento y/o la profilaxis de hepatitis, neoplasma, osteoporosis, glaucoma y gastroparesis.

Otro objeto de la presente invención es el uso de los compuestos de acuerdo con la invención para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades, en particular de las enfermedades mencionadas anteriormente.

Otro objeto de la presente invención es el uso de los compuestos de acuerdo con la invención para el tratamiento y/o la profilaxis de insuficiencia cardiaca, angina de pecho, hipertonía, hipertonía pulmonar, isquemias, enfermedades vasculares, insuficiencia renal, enfermedades tromboembólicas, enfermedades fibróticas y arteriosclerosis.

Otro objeto de la presente invención son los compuestos de acuerdo con la invención para su uso en un procedimiento para el tratamiento y/o la profilaxis de insuficiencia cardiaca, angina de pecho, hipertonía, hipertonía pulmonar, isquemias, enfermedades vasculares, insuficiencia renal, enfermedades tromboembólicas, enfermedades fibróticas y arteriosclerosis.

Otro objeto de la presente invención es el uso de los compuestos de acuerdo con la invención para la preparación de un fármaco para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades, en particular de las enfermedades mencionadas anteriormente.

Otro objeto de la presente invención es el uso de los compuestos de acuerdo con la invención para la preparación de un fármaco para el tratamiento y/o la profilaxis de insuficiencia cardiaca, angina de pecho, hipertonía, hipertonía pulmonar, isquemias, enfermedades vasculares, insuficiencia renal, enfermedades tromboembólicas, enfermedades fibróticas y arteriosclerosis.

Otro objeto de la presente invención es un procedimiento para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades, en particular de las enfermedades mencionadas anteriormente, con el uso de una cantidad efectiva de al menos uno de los compuestos de acuerdo con la invención.

Otro objeto de la presente invención es un procedimiento para el tratamiento y/o la profilaxis de insuficiencia cardiaca, angina de pecho, hipertonía, hipertonía pulmonar, isquemias, enfermedades vasculares, insuficiencia renal, enfermedades tromboembólicas, enfermedades fibróticas y arteriosclerosis, con el uso de una cantidad efectiva de al menos uno de los compuestos de acuerdo con la invención.

Los compuestos de acuerdo con la invención pueden utilizarse solos o, según sea necesario, en combinación con otros principios activos. Otro objeto de la presente invención son fármacos, que contienen al menos uno de los compuestos de acuerdo con la invención y uno o varios principios activos adicionales, en particular para el tratamiento y/o la profilaxis de las enfermedades mencionadas anteriormente. Como principios activos de combinación adecuados se mencionan a modo de ejemplo y preferentemente:

•: nitratos orgánicos y donadores de NO, tales como por ejemplo nitroprusiato de sodio, nitroglicerina, mononitrato de isosorbida, dinitrato de isosorbida, molsidomina o SIN-1, así como NO inhalado;

•: compuestos, que inhiben la degradación de guanosinmonofosfato cíclico (cGMP), tales como por ejemplo inhibidores de las fosfodiesterasas (PDE) 1, 2 y/o 5, en particular inhibidores de PDE 5 tales como sildenafilo, vardenafilo y tadalafilo;

•: agentes de acción antitrombótica, a modo de ejemplo y preferentemente del grupo de los inhibidores de la agregación de trombocitos, de los anticoagulantes o de las sustancias profibrinolíticas;

•: principios activos de disminución de la tensión arterial, a modo de ejemplo y preferentemente del grupo de los antagonistas del calcio, antagonistas de angiotensina AII, inhibidores de ACE, antagonistas de endotelina, inhibidores de renina, bloqueantes de receptores alfa, bloqueantes de receptores beta, antagonistas de receptores de mineralocorticoides así como de los diuréticos; y/o

•: principios activos modificadores del metabolismo lipídico, a modo de ejemplo y preferentemente del grupo de los agonistas de receptores tiroideos, inhibidores de la síntesis de colesterol tales como a modo de ejemplo y preferentemente inhibidores de la síntesis de escualeno o HMG-CoA-reductasa, de los inhibidores de ACAT, inhibidores de CETP, inhibidores de MTP, agonistas de PPAR-alfa, PPAR-gamma y/o PPAR-delta, inhibidores de la absorción de colesterol, inhibidores de lipasa, adsorbedores poliméricos de ácidos biliares, inhibidores de la reabsorción de ácidos biliares y antagonistas de lipoproteína(a).

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MS (ESIpos): m/z = 372 (M+H)+

1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ = 5,73 (s, 2H), 7,13 -7,26 (m, 3H), 7,33 -7,41 (m, 1H), 7,94 (dd, 1H), 8,69 -8,73 (m, 1H).

Ejemplo 8A

5-Fluoro-1-(2-fluorobencil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-carbonitrilo

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Una suspensión de 16,03 g (43,19 mmoles) de 5-fluoro-1-(2-fluorobencil)-3-yodo-1H-pirazolo[3,4-b]piridina (Ejemplo 7A) y 4,25 g (47,51 mmoles) de cianuro de cobre se dispuso en DMSO (120 ml) y se agitó durante 2 h a 150 °C. Después de enfriar se enfrió el contenido del matraz hasta aproximadamente 40 °C, se vertió sobre una disolución de agua amoniacal conc. (90 ml) y agua (500 ml), se mezcló con éster etílico de ácido acético (200 ml) y se agitó brevemente. La fase acuosa se separó y se extrajo dos veces más con éster etílico de ácido acético (respectivamente 200 ml). Las fases orgánicas reunidas se lavaron dos veces con disolución acuosa al 10 % de cloruro de sodio (respectivamente 100 ml), se secaron y se concentraron a vacío. El producto bruto se hizo reaccionar sin purificación adicional.

Rendimiento: 11,1 g (91 % del teórico)

1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ = 5,87 (s, 2H), 7,17 -7,42 (m, 4H), 8,52 (dd, 1H), 8,87 (dd, 1H).

Ejemplo 9A

Acetato de 5-fluoro-1-(2-fluorobencil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-carboximidamida

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A 2,22 g (41,07 mmoles) de metanolato de sodio en metanol (270 ml) se añadieron 11,1 g (41,07 mmoles) de 5fluoro-1-(2-fluorobencil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-carbonitrilo (Ejemplo 8A) y se agitó durante 2 h a TA. Después se añadieron 2,64 g (49,29 mmoles) de cloruro de amonio y ácido acético (9,17 ml) y durante la noche se calentó a reflujo. Después se concentró hasta sequedad y se recogió el residuo en agua (100 ml) y éster etílico de ácido acético (100 ml) y se ajustó a pH 10 de hidróxido de sodio 2 N. Se agitó intensamente durante aproximadamente 1 h a TA. La suspensión obtenida se succionó y se lavó posteriormente con éster etílico de ácido acético (100 ml), agua (100 ml) y de nuevo éster etílico de ácido acético (100 ml). El residuo se secó sobre pentóxido de fósforo a alto vacío.

Rendimiento: 9,6 g (78 % d. t.)

MS (ESIpos): m/z = 288 (M+H)+

1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ = 1,85 (s, 3H), 5,80 (s, 2H), 7,14 -7,25 (m, 3H), 7,36 (m, 1H), 8,42 (dd, 1H), 8,72 (dd, 1H).

Ejemplo 10A

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En DMF (170 ml) se dispusieron 10,00 g (40,813 mmoles) del Ejemplo 15A y a continuación se agregaron 12,30 g (44,894 mmoles) de 1,1,1,2,2-pentafluoro-4-yodobutano en DMF (30 ml) así como 14,628 g (44,894 mmoles) de carbonato de cesio. La mezcla se agitó durante 2 días a TA. A continuación se añadieron de nuevo 12,30 g (44,894 5 mmoles) de 1,1,1,2,2-pentafluoro-4-yodobutano así como 14,628 g (44,894 mmoles) de carbonato de cesio y se agitó durante 2 días a TA. Después se añadieron 3,485 g (12,720 mmoles) de 1,1,1,2,2-pentafluoro-4-yodobutano y 4,145 g (12,720 mmoles) de carbonato de cesio y se agitó durante la noche a TA. Después de este tiempo se añadieron a su vez 5,00 g (18,250 mmoles) de 1,1,1,2,2-pentafluoro-4-yodobutano y 5,946 g (18,250 mmoles) de carbonato de cesio y se agitó durante 6 días a temperatura ambiente. A continuación se agitó durante 2 días a

10 70 °C. Se aspiró de los sólidos, se lavó posteriormente con DMF y a continuación se concentró a alto vacío. El residuo se purificó por medio de HPLC preparativa (metanol:agua (con ácido fórmico al 0,1 %) -gradiente). Se obtuvieron 5,48 g (34 % d. t.) del compuesto del título como sólido.

LC-MS (Método 3): Rt = 1,23 min

MS (ESIpos): m/z = 392 (M+H)+

15 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ = 2,87-3,00 (m, 2H), 4,81 (t, 2H), 7,33 (dd, 1H), 7,97 (dd, 1H), 8,65 (dd, 1H).

Ejemplo 17A

1-(3,3,4,4,4-Pentafluorobutil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-carbonitrilo

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Una suspensión de 5,480 g (14,012 mmoles) del Ejemplo 16A y 1,380 g (15,414 mmoles) de cianuro de cobre (I) se

20 dispusieron en DMSO (50 ml) y se agitó durante 3 h a 150 °C. Después de enfriar se filtró a través de Celite y se lavó posteriormente con acetato de etilo y THF. Después se lavó cuatro veces con una disolución de disolución acuosa saturada de cloruro de amonio y agua amoniacal conc. (3:1, v/v) y a continuación se lavó con disolución acuosa saturada de cloruro de sodio. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró y a continuación se secó a alto vacío.

25 Rendimiento: 3,59 g (88 % del teórico)

LC-MS (Método 1): Rt = 1,04 min

MS (ESIpos): m/z = 291 (M+H)+

1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ = 2,97-3,10 (m, 2H), 4,94 (t, 2H), 7,55 (dd, 1H), 8,51 (dd, 1H), 8,81 (dd, 1H).

Ejemplo 18A

30 Acetato de 1-(3,3,4,4,4-pentafluorobutil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-carboximidamida

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A 0,668 g (12,371 mmoles) de metanolato de sodio en metanol (40 ml) se añadieron 3,59 g (12,371 mmoles) del

Ejemplo 17A en metanol (20 ml) y se agitó durante 2 h a TA. Después se añadieron 0,794 g (14,845 mmoles) de

cloruro de amonio y ácido acético (2,762 ml) y se calentó durante la noche a reflujo. Después se concentró hasta

5 sequedad y el residuo se mezcló con éster etílico de ácido acético e hidróxido de sodio 1 N. Se agitó intensamente

durante aproximadamente 1 h a TA. El sólido obtenido se succionó y se lavó posteriormente con éster etílico de

ácido acético y agua. El residuo se secó a alto vacío. Se obtuvieron 0,507 g (11 % del teórico, pureza 100 %). En las

fracciones de lavado se separaron las fases y la fase acuosa se extrajo dos veces con acetato de etilo. Las fases

orgánicas reunidas se lavaron con agua y disolución acuosa saturada de cloruro de sodio, se secaron sobre sulfato 10 de sodio, se filtraron y se concentraron y a continuación se secaron a alto vacío. Se obtuvieron así 2,76 g más (43 %

del teórico, pureza 71 %).

LC-MS (Método 1): Rt = 0,58 min

MS (ESIpos): m/z = 308 (M+H)+

1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ = 1,84 (s, 3H), 2,95-3,08 (m, 2H), 4,85 (t, 2H), 7,39 (dd, 1H), 8,63-8,67 (m, 2H).

15 Ejemplo 19A

5-Fluoro-3-yodo-1-(3,3,4,4,4-pentafluorobutil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridina

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En DMF (100 ml) se dispusieron 5,0 g (19,010 mmoles) de 5-fluoro-3-yodo-1H-pirazolo[3,4-b]piridina y a continuación se añadieron 20,83 g (76,042 mmoles) de 1,1,1,2,2-pentafluoro-4-yodobutano así como 14,86 g (45,65

20 mmoles) de carbonato de cesio y 0,63 g (3,802 mmoles) de yoduro de potasio. La mezcla se agitó durante la noche a 140 °C. A continuación se enfrió y se reunió con un ensayo previo, que partió de manera análoga de 200 mg de 5fluoro-3-yodo-1H-pirazolo[3,4-b]piridina. Se aspiró de los sólidos, se lavó posteriormente con DMF y a continuación se concentró a alto vacío. El residuo se purificó por medio de HPLC preparativa (metanol:agua -gradiente). Se obtuvieron 4,34 g (52 % d. t.) del compuesto del título como sólido.

25 LC-MS (Método 3): Rt = 1,30 min

MS (ESIpos): m/z = 410 (M+H)+

1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ = 2,84-3,00 (m, 2H), 4,79 (t, 2H), 7,93 (dd, 1H), 8,71 (dd, 1H).

Ejemplo 20A

5-Fluoro-1-(3,3,4,4,4-pentafluorobutil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-carbonitrilo

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Una suspensión de 4,34 g (10,609 mmoles) del Ejemplo 19A y 1,045 g (11,670 mmoles) de cianuro de cobre (I) se dispuso en DMSO (30 ml) y se agitó durante 2 h a 150 °C. Después de enfriar se filtró la preparación a través de Celite, se lavó posteriormente con éster etílico de ácido acético y THF y a continuación se extrajo cuatro veces con

5 una disolución de disolución acuosa saturada de cloruro de amonio y agua amoniacal conc. (3:1 v/v). Las fases orgánicas reunidas se lavaron con disolución acuosa sat. de cloruro de sodio, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a vacío.

Rendimiento: 3,19 g (97 % del teórico)

1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ = 2,94-3,09 (m, 2H), 4,93 (t, 2H), 8,54 (dd, 1H), 8,88 (dd, 1H).

10 Ejemplo 21A

Acetato de 5-fluoro-1-(3,3,4,4,4-pentafluorobutil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-carboximidamida

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A 0,559 g (10,351 mmoles) de metanolato de sodio en metanol (25 ml) se añadieron 3,19 g (10,351 mmoles) del Ejemplo 20A y se agitó durante 2 h a TA. Después se añadieron 0,664 g (12,421 mmoles) de cloruro de amonio y 15 ácido acético (2,31 ml) y se calentó durante la noche a reflujo. Después se concentró hasta sequedad y el residuo se mezcló con éster etílico de ácido acético y con hidróxido de sodio 1 N. Las fases se separaron. La fase acuosa se extrajo una vez más con éster etílico de ácido acético. Las fases orgánicas reunidas se reunieron y se concentraron.

Rendimiento: 2,67 g (37 % del teórico, pureza aproximadamente 56 %)

LC-MS (Método 1): Rt = 0,68 min

20 MS (ESIpos): m/z = 326 (M+H)+

Ejemplos de realización:

Ejemplo 1

4-Amino-2-[1-(2-fluorobencil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-il]-5,7-dihidro-6H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-6-ona

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Se dispusieron 5,887 g (19,256 mmoles) del Ejemplo 1A en terc-butanol (50 ml) y se mezclaron con 2,593 g (23,107 mmoles) de terc-butilato de potasio. A continuación se añadieron gota a gota 3,2 g (19,256 mmoles) del Ejemplo 10A en terc-butanol (25 ml) y la mezcla se calentó durante la noche a reflujo. Al día siguiente se añadieron de nuevo 0,64

5 g (3,851 mmoles) del Ejemplo 10A y se calentó durante un día más a reflujo. Después de enfriar se separó por filtración un precipitado, que se lavó posteriormente con dietil éter. A continuación se suspendió en agua y se separó por filtración una vez más y se lavó posteriormente con dietil éter. Después de secar a alto vacío pudieron obtenerse 6,65 g del compuesto objetivo (85 % d. t.).

LC-MS (Método 1): Rt = 0,90 min; MS (ESIpos): m/z = 404 (M+H)+

10 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,35 (s, 6H), 5,82 (s, 2H), 6,82 (s a, 2H), 7,14-7,25 (m, 3H), 7,33-7,40 (m, 2H), 8,63 (dd, 1H), 9,03 (dd, 1H), 10,98 (s a, 1H).

Ejemplo 3

4-Amino-2-[5-fluoro-1-(2-fluorobencil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-il]-5,5-dimetil-5,7-dihidro-6H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-6ona

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15 De manera análoga a la preparación del Ejemplo 2 se hicieron reaccionar 4,18 g (12,035 mmoles) del Ejemplo 9A con 2,20 g (13,239 mmoles) del Ejemplo 10A. Se obtuvieron 3,72 g del compuesto objetivo (73 % d. t.). LC-MS (Método 1): Rt = 0,98 min; MS (ESIpos): m/z = 422 (M+H)+ 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,34 (s, 6H), 5,81 (s, 2H), 6,85 (s a, 2H), 7,13-7,25 (m, 3H), 7,36 (m, 1H), 20 8,69 (dd, 1H), 8,84 (dd, 1H), 10,96 (s a, 1H).

Ejemplo 4

4'-Amino-2'-[1-(2-fluorobencil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-il]-4,5-dihidrospiro[furan-3,5'-pirrolo[2,3-d]pirimidin]-6'(7'H)ona

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De manera análoga a la preparación del Ejemplo 2 se hicieron reaccionar 2,257 g (7,382 mmoles) del Ejemplo 1A con 1,434 g (7,382 mmoles) del Ejemplo 12A. Se obtuvieron 566 mg del compuesto objetivo (17 % d. t.).

LC-MS (Método 1): Rt = 0,84 min; MS (ESIpos): m/z = 432 (M+H)+

1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 2,20-2,37 (m, 2H), 3,71 (d, 1H), 3,90 (c, 1H), 4,10 (d, 1H), 4,25-4,31 (m, 1H), 5,82 (s, 2H), 6,57 (s a, 2H), 7,12-7,25 (m, 3H), 7,33-7,41 (m, 2H), 8,64 (dd, 1H), 9,02 (dd, 1H), 11,96 (s a, 1H).

Ejemplo 5

4-Amino-2-[1-(2-fluorobencil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-il]-5-metil-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona

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10 Se dispusieron 2,174 g (7,112 mmoles) del Ejemplo 1A y 1,3 g (7,823 mmoles) del Ejemplo 13A en 20 ml de metanol y a continuación se mezcló a temperatura ambiente en porciones con 422 mg (7,823 mmoles) de metanolato de sodio. Se agitó durante 10 min a temperatura ambiente y se calentó a continuación durante la noche a reflujo. Después de enfriar se mezcló la preparación con ácido acético (0,5 ml) y agua (20 ml) y se enfrió en el baño de hielo. El precipitado se succionó, se lavó con agua y metanol y a continuación se secó a alto vacío. Se obtuvieron

15 2,51 g del compuesto objetivo (87 % d. t.).

LC-MS (Método 1): Rt = 0,85 min; MS (ESIpos): m/z = 404 (M+H)+

1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,04 (d, 3H), 2,31 (d, 1H), 2,79 (dd, 1H), 3,13-3,19 (m, 1H), 5,81 (s, 2H), 6,93 (s a, 2H), 7,12-7,25 (m, 3H), 7,34-7,37 (m, 2H), 8,62 (dd, 1H), 9,14 (dd, 1H), 10,56 (s, 1H).

Ejemplo 6

20 4-Amino-2-[1-(2-fluorobencil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-il]-5-(trifluorometil)-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona

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5

10

15

20

25

30

Ejemplo 8

(Ejemplo de referencia)

4-Amino-2-[5-fluoro-1-(3,3,4,4,4-pentafluorobutil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-il]-5,5-dimetil-5,7-dihidro-6H-pirrolo[2,3d]pirimidin-6-ona

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Se dispusieron 520 mg (1,350 mmoles) del Ejemplo 21A en terc-butanol (10 ml) y se mezcló con 181 mg (1,620 mmoles) de terc-butilato de potasio. A continuación se añadieron 224 mg (1,350 mmoles) del Ejemplo 10A en tercbutanol (2,5 ml) y la mezcla se calentó durante la noche a reflujo. A continuación se añadieron otra vez 112 mg (0,675 mmoles) del Ejemplo 10A y se calentó durante 7,5 h más a reflujo. Después de enfriar se mezcló con agua y etanol y se trató durante 1 h en el baño de ultrasonidos. Se generó un precipitado, que se succionó y se lavó posteriormente con agua. La torta del filtro se agitó con un poco de etanol (2-3 ml) y se succionó otra vez. El sólido se secó a alto vacío. Se obtuvieron 212 mg del compuesto del título (34 % d. t.). LC-MS (Método 1): Rt = 1,01 min; MS (ESIpos): m/z = 460 (M+H)+ 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,36 (s, 6H), 2,92-3,04 (m, 2H), 4,87 (t, 2H), 6,88 (s a, 2H), 8,71 (s a, 1H), 8,85 (dd, 1H), 11,01 (s a, 1H).

B. Evaluación de la eficacia farmacológica

El efecto farmacológico de los compuestos de acuerdo con la invención puede mostrarse en los siguientes ensayos:

B-1. Efecto relajante vascular in vitro

Se anestesian y se desangran conejos mediante un golpe en la nuca. Se extrae la aorta, se libera del tejido adherido, se corta en anillos de 1,5 mm de grosor y se llevan individualmente, con una pretensión, a baños para órganos de 5 ml con disolución de Krebs-Henseleit gasificada con carbógeno, calentada a 37 °C, de la siguiente composición (en cada caso mM): cloruro de sodio: 119; cloruro de potasio: 4,8; dihidrato de cloruro de calcio: 1; heptahidrato de sulfato de magnesio: 1,4; dihidrogenofosfato de potasio: 1,2; hidrogenocarbonato de sodio: 25; glucosa: 10. La concentración se detecta con células UC2, se amplifica y se digitaliza a través de conversores A/D (DAS-1802 HC, Keithley Instruments München) así como se registra en paralelo en registradores de curvas. Para la generación de una contracción se añade fenilefrina al baño de manera acumulativa en concentración creciente. Después de varios ciclos de control, se añade la sustancia que va a examinarse en cada pase adicional en una dosificación respectivamente creciente y se compara el nivel de concentración con el nivel de la concentración alcanzada en el último pase previo. A partir de ahí se calcula la concentración que es necesaria para reducir el nivel del valor de control en un 50 % (valor CI50). El volumen de aplicación estándar asciende a 5 µl, el porcentaje de DMSO en la disolución de baño corresponde al 0,1 %.

Valores de CI50 representativos de los compuestos de acuerdo con la invención se reproducen en la siguiente tabla (Tabla 1):

Tabla 1:

N.º de Ejemplo: CI50 [nM]

2: 48

3: 9,3

4: 24

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Claims

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