ES2569330T3

ES2569330T3 - Derivados del 1-bencil-3-hidroximetilindazol y su utilización en el tratamiento de enfermedades basadas en la expresión de MCP-1, CX3CR1

Info

Publication number: ES2569330T3
Application number: ES09718467.5T
Authority: ES
Inventors: Angelo Guglielmotti; Guido Furlotti; Giorgina Mangano; Nicola Cazzolla; Barbara Garofalo
Original assignee: Aziende Chimiche Riunite Angelini Francesco ACRAF SpA
Current assignee: Angelini Acraf SpA
Priority date: 2008-03-07
Filing date: 2009-03-05
Publication date: 2016-05-10
Anticipated expiration: 2029-03-05
Also published as: CN101952256A; IL207131A; US20110003874A1; GEP20135912B; KR20100131432A; PL2254869T3; SG188177A1; SI2254870T1; CY1117584T1; JP5509099B2; KR101599867B1; AU2009221083A1; AU2009221089A1; EP2254869A2; LT2254869T; CA2712403A1; AR070811A1; SI2254869T1; HUE027098T2; US8283348B2

Abstract

Compuesto de fórmula (I)**Fórmula** en el que: A puede ser -X1- o -X1-OC(R9)(R10)-, en el que X1 puede ser un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 átomos de carbono, sustituido opcionalmente con uno o más grupos alquilo que presentan de 1 a 5 átomos de carbono o uno o más grupos alcoxi que presentan de 1 a 3 átomos de carbono, y R9 y R10, que pueden ser iguales o diferentes entre sí, pueden ser hidrógeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 átomos de carbono o un grupo alcoxi que presenta de 1 a 3 átomos de carbono, Y puede ser N(R11)(R12), N(R13)O(R14), N(R13)N(R14)(R15), N(R13)-X2-N(R14)(R15), N(R13)-X2-CO-X3, en el que R11 puede ser hidrógeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 átomos de carbono, un grupo alcoxi que presenta de 1 a 3 átomos de carbono, o R11, junto con R12, forma un heterociclo de 4 a 7 miembros, R12 puede ser hidrógeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 átomos de carbono, un grupo alcoxi que presenta de 1 a 3 átomos de carbono, COR', COOR', CON(R')(R''), con R' y R'', que pueden ser iguales o diferentes entre sí, representados por hidrógeno y un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 átomos de carbono, o R12, junto con R11, forma un heterociclo de 4 a 7 miembros, R13 y R15, que pueden ser iguales o diferentes entre sí, pueden ser hidrógeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 átomos de carbono o un grupo alcoxi que presenta de 1 a 3 átomos de carbono, R14 puede ser hidrógeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 átomos de carbono, COR', COOR', CON(R')(R''), con R' y R'', que pueden ser iguales o diferentes entre sí, representados por hidrógeno y un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 átomos de carbono, X2 puede ser un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 átomos de carbono, sustituido opcionalmente con uno o más grupos alquilo que presentan de 1 a 5 átomos de carbono o uno o más grupos alcoxi que presentan de 1 a 3 átomos de carbono, X3 puede ser OH, NH2, NHOH o NHNH2, R1 y R2, que pueden ser iguales o diferentes entre sí, pueden ser hidrógeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 átomos de carbono o un grupo alcoxi que presenta de 1 a 3 átomos de carbono, R3, R4 y R8, que pueden ser iguales o diferentes entre sí, pueden ser hidrógeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 átomos de carbono, un grupo alcoxi que presenta de 1 a 3 átomos de carbono, un átomo de halógeno, -OH, -N(R')(R''), -N(R')COR'', -CN, -CONR'R'', -SO2NR'R'', -SO2R', nitro y trifluorometilo; con R' y R'', que pueden ser iguales o diferentes entre sí, representados por hidrógeno y un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 átomos de carbono, R5 puede ser hidrógeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 átomos de carbono, un grupo alcoxi que presenta de 1 a 3 átomos de carbono, un átomo de halógeno, -OH, -N(R')(R''), -N(R')COR'', nitro y trifluorometilo, o R5, junto con uno de entre R6 y R7, forma un anillo que presenta 5 o 6 átomos de carbono; con R' y R'', que pueden ser iguales o diferentes entre sí, representados por hidrógeno y un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 átomos de carbono, R6 y R7, que pueden ser iguales o diferentes entre sí, pueden ser hidrógeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 átomos de carbono, o juntos forman un grupo C>=O, o uno de entre R6 y R7, junto con R5, forma un anillo que presenta 5 o 6 átomos de carbono.

Description

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

DESCRIPCION

Derivados del 1-bencil-3-hidroximetilindazol y su utilizacion en el tratamiento de enfermedades basadas en la expresion de MCP-1, CX3CR1.

La presente invencion se refiere a derivados del 1-bencil-3-hidroximetilindazol, a una composicion farmaceutica que los comprende y a su utilizacion en el tratamiento de enfermedades basadas en la expresion de MCP-1, CX3CR1 y p40.

En particular, la presente invencion se refiere a nuevos derivados del 1-bencil-3-hidroximetilindazol segun la formula (I), indicada a continuacion, y a una composicion farmaceutica que los comprende, junto con un vehfculo farmaceuticamente aceptable. Ademas, la presente invencion se refiere a la utilizacion de derivados del 1 -bencil-3- hidroximetilindazol para preparar una composicion farmaceutica activa en el tratamiento de enfermedades basadas en la expresion de MCP-1, CX3CR1 y p40, y a su utilizacion en un metodo para tratar o prevenir enfermedades basadas en la expresion de MCP-1, CX3CR1 y p40.

Antecedentes de la tecnica

Tal como es conocido, la MCP-1 (protefna quimiotactica de monocitos 1) es una protefna que pertenece a la subfamilia p de las quimiocinas. La MCP-1 tiene una potente accion quimiotactica en los monocitos y tambien ejerce su accion en los linfocitos T, los mastocitos y los basofilos (Rollins B.J., Chemokines, Blood 1997; 90: 909-928; M. Baggiolini, Chemokines and leukocyte traffic, Nature 1998; 392: 565-568).

Otras quimiocinas que pertenecen a la subfamilia p son, por ejemplo, la MCP-2 (protefna quimiotactica de monocitos 2), la MCP-3, la MCP-4, la MIP-1a, la MIP-1 p y la RANTES.

La subfamilia p se diferencia de la subfamilia a porque, en la estructura, en la subfamilia p las dos primeras cistefnas son adyacentes, mientras que en la subfamilia a estan separadas por un aminoacido intercalado.

La MCP-1 esta producida por diversos tipos de celulas (leucocitos, plaquetas, fibroblastos, celulas endoteliales y celulas del musculo liso).

Entre todas las quimiocinas conocidas, la MCP-1 muestra la mayor especificidad por los monocitos y los macrofagos, para los que constituye no solo un factor quimiotactico, sino tambien un estfmulo de activacion, con lo que se inducen procesos para la produccion de numerosos factores inflamatorios (superoxidos, acido araquidonico y sus derivados, citocinas/quimiocinas) y se amplifica la actividad fagocftica.

Habitualmente, la secrecion de las quimiocinas en general, y de la MCP-1 en particular, esta inducida por diversos factores proinflamatorios, por ejemplo, la interleucina 1 (IL-1), la interleucina 2 (IL-2), el TNFa (factor de necrosis tumoral a), el interferon y y los lipopolisacaridos (LPS) bacterianos.

La prevencion de la respuesta inflamatoria mediante el bloqueo del sistema quimiocina/receptor de quimiocina representa uno de los principales objetivos de la intervencion farmacologica (Gerard C. y Rollins B.J., Chemokines and disease. Nature Immunol. 2001; 2:108-115).

Muchos datos sugieren que la MCP-1 tiene un papel clave en los procesos inflamatorios y ha sido indicada como nueva diana validada en diversos estados patologicos.

Se han obtenido indicios de una contribucion fisiopatologica considerable de la MCP-1 en el caso de pacientes con enfermedades inflamatorias articulares y renales (artritis reumatoide, nefritis lupica, nefropatfa diabetica y rechazo despues de un trasplante).

Sin embargo, mas recientemente, la MCP-1 se ha senalado entre los factores que intervienen en las patologfas inflamatorias del sistema nervioso central (esclerosis multiple, enfermedad de Alzheimer, demencia asociada al VIH) y otros estados patologicos y trastornos, con o sin un componente inflamatorio evidente, incluidas la dermatitis atopica, la colitis, las enfermedades pulmonares intersticiales, la restenosis, la aterosclerosis, las complicaciones despues de una intervencion quirurgica (por ejemplo, angioplastia, aterectomfa, trasplante, sustitucion de organos

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

y/o tejidos, implante protesico), el cancer (adenomas, carcinomas y metastasis) e incluso las enfermedades metabolicas, tales como la resistencia a la insulina y la obesidad.

Ademas, a pesar del hecho de que el sistema de quimiocinas participa en el control y la superacion de las infecciones virales, estudios recientes han demostrado que la respuesta de determinadas quimiocinas, y en particular de la MCP-1, puede tener un papel perjudicial en el caso de interacciones huesped-patogeno. En particular, se ha senalado la MCP-1 entre las quimiocinas que contribuyen a danar organos y tejidos en patologfas mediadas por virus alfa caracterizadas por la infiltracion de monocitos/macrofagos en las articulaciones y los musculos (Mahalingam S. y otros, Chemokines and viruses: friend or foes? Trends in Microbiology 2003; 11: 383-391; Rulli N. y otros, Ross River Virus: molecular and cellular aspects of disease pathogenesis. 2005; 107: 329-342).

Los monocitos son los principales precursores de los macrofagos y las celulas dendrfticas, y tienen un papel clave como mediadores de los procesos inflamatorios. El CX3CR1, con su ligando CX3CL1 (fractalquina), representa un factor clave en la regulacion de la migracion y la capacidad de adherencia de los monocitos. El CX3CR1 se expresa en los monocitos, mientras que el CX3CL1 es una quimiocina transmembranaria de las celulas endoteliales. Los estudios geneticos en el hombre y en modelos animales han demostrado un papel importante del CX3CR1 y el CX3CL1 en la fisiopatologfa de las enfermedades inflamatorias. De hecho, existen muchos datos que sugieren una contribucion clave del CX3CR1 y de su ligando en la patogenesis y la progresion de las enfermedades inflamatorias articulares, renales, gastrointestinales y vasculares (por ejemplo, artritis reumatoide, nefritis lupica, nefropatfa diabetica, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, restenosis y aterosclerosis).

La expresion del CX3CR1 esta sobrerregulada en los linfocitos T, de los que se cree que se acumulan en la membrana sinovial de los pacientes afectados de artritis reumatoide. Ademas, la expresion del CX3CL1 esta sobrerregulada en las celulas endoteliales y los fibroblastos presentes en la membrana sinovial de dichos pacientes. En consecuencia, el sistema CX3CR1/CX3CL1 tiene un papel importante en el control del tipo de celula y el modo de infiltracion de la membrana sinovial, y contribuye a la patogenesis de la artritis reumatoide (Nanki T. y otros, “Migration of CX3CR1-positive T cells producing type 1 cytokines and cytotoxic molecules into the synovium of patients with rheumatoid arthritis”, Arthritis & Rheumatism (2002), vol. 46, n° 11, pags. 2878-2883).

En los pacientes afectados de lesion renal, la mayorfa de los leucocitos inflamatorios que penetran los rinones expresan el CX3CR1, que se expresa particularmente en dos de los principales tipos de celulas que participan en las patologfas renales inflamatorias mas comunes y en el rechazo del trasplante de rinon, los linfocitos T y los monocitos (Segerer S. y otros, Expression of the fractalkine receptor (CX3CR1) in human kidney diseases, Kidney International (2002) 62, pags. 488-495).

Tambien se ha sugerido la participacion del sistema CX3CR1/CX3CL1 en las enfermedades inflamatorias intestinales (EII). De hecho, en los pacientes afectados de EII (por ejemplo, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa), se ha demostrado un aumento significativo de la produccion de CX3CL1 por parte del sistema capilar intestinal y un aumento significativo de las celulas positivas a CX3CR1, tanto en el sistema circulatorio como en las mucosas (Sans M. y otros, “Enhanced recruitment of CX3CR1 + T cells by mucosal endothelial cell-derived fractalkine in inflammatory bowel diseases”, Gastroenterology 2007, vol. 132, n° 1, pags. 139-153).

Todavfa mas interesante resulta la demostracion del papel clave que desempena el sistema CX3CR1/CX3CL1 en las lesiones vasculares y, en particular, en los estados patologicos, por ejemplo, la aterosclerosis y la restenosis. El CX3CR1 se ha senalado como un factor crftico en el proceso de infiltracion y acumulacion de monocitos en la pared vascular, y el polimorfismo del CX3CR1 en el hombre se asocia con una reduccion de la prevalencia de la aterosclerosis, los trastornos coronarios y la restenosis (Liu P. y otros, “Cross-talk among Smad, MAPK and integrin signalling pathways enhances adventitial fibroblast functions activated by transforming growth factor-1 and inhibited by Gax” Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 2008; McDermott D.H. y otros, “Chemokine receptor mutant CX3CR1-M280 has impaired adhesive function and correlates with protection from cardiovascular diseases in humans”, J. Clin. Invest. 2003; Niessner A. y otros, Thrombosis and Haemostasis 2005).

La IL-12 y la IL-23 son miembros de una pequena familia de citocinas proinflamatorias heterodimericas. Ambas citocinas comparten una subunidad comun, la p40, que esta unida covalentemente a la subunidad p35, para producir la forma madura de la IL-12, o a la subunidad p19, para producir la forma madura de la IL-23. El receptor de la IL-12 esta constituido por las subunidades IL-12Rp1 e IL-12Rp2, mientras que el receptor de la IL-23 esta constituido por

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

las subunidades IL-12Rp1 e IL-23R.

La IL-12 y la IL-23 estan expresadas principalmente por las celulas dendrfticas activadas y los fagocitos. Los receptores de las dos citocinas se expresan en los linfocitos T y NK, y en los linfocitos NK T, pero tambien estan presentes niveles bajos de complejos del receptor de la IL-23 en los monocitos, los macrofagos y las celulas dendrfticas.

A pesar de estas similitudes, existen muchos datos que sugieren que la IL-12 y la IL-23 controlan diferentes circuitos inmunitarios. De hecho, mientras que la IL-12 controla el desarrollo de las celulas Th1, que son capaces de producir interferon gamma (IFN-y), y aumenta la respuesta citotoxica, antimicrobiana y antitumoral, la IL-23 regula un circuito que conduce a la generacion de celulas CD4+, que son capaces de producir IL-17. La induccion de los procesos dependientes de la IL-23 conduce a la movilizacion de diversos tipos de celulas inflamatorias, por ejemplo, la Th-17, y se ha demostrado crucial para la patogenesis de numerosas patologfas inflamatorias mediadas por respuestas inmunitarias.

Son ejemplos tfpicos de patologfas asociadas con la expresion de p40 las enfermedades inflamatorias cronicas del aparato articular (por ejemplo, la artritis reumatoide), del sistema dermico (por ejemplo, la psoriasis) y del aparato gastrointestinal (por ejemplo, la enfermedad de Crohn). Sin embargo, la IL-23 tambien desempena un papel en la promocion de la incidencia y el crecimiento tumorales. De hecho, la IL-23 regula una serie de circuitos en el microambiente tumoral, con lo que se estimula la angiogenesis y la produccion de mediadores inflamatorios.

La psoriasis es una enfermedad inflamatoria cronica de la piel que afecta al 3% de la poblacion mundial (Koo J. Dermatol. Clin. 1996; 14:485-96; Schon M.P. y otros, N. Engl. J. Med. 2005; 352: 1899-912). Se ha correlacionado una respuesta inmunitaria aberrante de tipo 1 con la patogenesis de la psoriasis, y las citocinas que inducen esta respuesta, tales como la IL-12 y la IL-23, pueden representar objetos terapeuticos adecuados. La expresion de la IL-12 y la IL-23, que comparten la subunidad p40, esta significativamente aumentada en las placas de psoriasis, y los estudios preclfnicos han demostrado que estas citocinas participan en la patogenesis de la psoriasis. Mas recientemente, el tratamiento con anticuerpos monoclonales anti-IL-12 y anti-IL-23 de pacientes afectados de psoriasis ha demostrado ser eficaz en la mejorfa de los signos de progresion y gravedad de la enfermedad, lo que ha reforzado el papel de la IL-12 y la IL-23 en la fisiopatologfa de la psoriasis.

La enfermedad de Crohn es una patologfa inflamatoria cronica del aparato digestivo y puede afectar a cualquier zona del mismo, desde la boca hasta el ano. Habitualmente, afecta a la porcion terminal del fleon y a areas bien definidas del intestino grueso. A menudo se asocia con trastornos autoinmunitarios sistemicos, tales como ulceras bucales y artritis reumatica. La enfermedad de Crohn afecta a mas de 500.000 personas en Europa y 600.000 personas en los Estados Unidos.

La enfermedad de Crohn es una patologfa asociada con una actividad excesiva de las citocinas mediada por las celulas Th1. La IL-12 es una citocina clave en la iniciacion de la respuesta inflamatoria mediada por las celulas Th1. La enfermedad de Crohn se caracteriza por una mayor produccion de IL-12 por parte de celulas que presentan el antfgeno en el tejido intestinal, y de interferon gamma (IFN-y) y TNFa por parte de los linfocitos y los macrofagos intestinales. Estas citocinas inducen y favorecen el proceso inflamatorio y el engrosamiento de la pared intestinal, que son signos caracterfsticos de la patologfa. Los datos preclfnicos y clfnicos han demostrado que la inhibicion de la IL-12 es eficaz en el control de la respuesta inflamatoria en modelos de inflamacion intestinal y/o en pacientes afectados por la enfermedad de Crohn.

Actualmente, la relacion entre el cancer y la inflamacion es un hecho establecido. Muchas formas de tumores se originan en puntos de inflamacion y, en los tumores, a menudo se producen mediadores de la inflamacion.

La IL-23 se ha identificado como una citocina asociada con el cancer y, en particular, la expresion de la IL-23 es significativamente alta en muestras de carcinomas humanos en comparacion con los tejidos normales adyacentes. Ademas, la ausencia de una expresion significativa de IL-23 en los tejidos normales adyacentes sugiere una sobrerregulacion de la IL-23 en los tumores, lo que refuerza su papel en la genesis tumoral.

La patente europea EP-B-0 382 276 describe una serie de derivados del 1-bencil-3-hidroximetilindazol dotados de actividad analgesica. A su vez, la patente europea EP-B-0 510 748 describe, por otro lado, la utilizacion de estos derivados para preparar una composicion farmaceutica activa en el tratamiento de enfermedades autoinmunitarias.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

Por ultimo, la patente europea EP-B-1 005 332 describe la utilizacion de estos derivados para preparar una composicion farmaceutica activa en el tratamiento de enfermedades derivadas de la produccion de MCP-1. Se cree que el acido 2-metil-2-{[1-(fenilmetil)-1H-indazol-3-il]metoxi}propanoico es capaz de inhibir, de un modo dependiente de la dosis, la produccion de MCP-1 y TNF-a inducidas in vitro en monocitos de LPS y Candida albicans, mientras que el mismo compuesto no ha mostrado efectos en la produccion de las citocinas IL-1 e IL-6 y de las quimiocinas IL-8, MIP-1a y RANTES (Sironi M. y otros, “A small synthetic molecule capable of preferentially inhibiting the production of the CC chemokine monocyte chemotactic protein-1”, European Cytokine Network., vol. 10, n° 3, 43741, septiembre de 1999).

La solicitud de patente europea EP-A-1 185 528 se refiere a la utilizacion de derivados de triazina para inhibir la produccion de la IL-12. Las solicitudes de patente europea EP-A-1 188 438 y EP-A-1 199 074 se refieren a la utilizacion de inhibidores de la enzima PDE4, por ejemplo, Rolipram, Ariflo y derivados de diazepina-indol, en el tratamiento y la prevencion de enfermedades asociadas con una produccion excesiva de IL-12. La solicitud de patente europea EP-A-1 369 119 se refiere a la utilizacion de hialuronano con un peso molecular comprendido entre 600.000 daltons y 3.000.000 daltons para el control y la inhibicion de la expresion de la IL-12. La solicitud de patente europea EP-A-1 458 687 se refiere a la utilizacion de derivados de la pirimidina para el tratamiento de enfermedades relacionadas con una sobreproduccion de IL-12. La solicitud de patente europea EP-A-1 819 341 se refiere a la utilizacion de compuestos heterocfclicos nitrogenados, por ejemplo, derivados de piridina, pirimidina y triazina, para inhibir la produccion de la IL-12 (o de otras citocinas, tales como IL-23 e IL-27, que estimulan la produccion de la IL-12). La solicitud de patente europea EP-A-1 827 447 se refiere a la utilizacion de derivados de la pirimidina para el tratamiento de enfermedades relacionadas con una sobreproduccion de IL-12, IL-23 e IL-27.

Las solicitudes de patente europea EP-A-1 869 055, EP-A-1 869 056 y EP-A-1 675 862 describen derivados de la 1,3-tiazolo-4,5-pirimidina capaces de actuar como antagonistas del receptor de CX3CR1.

A pesar de la actividad desarrollada hasta el momento, sigue persistiendo la necesidad de encontrar composiciones y compuestos farmaceuticos nuevos que sean eficaces en el tratamiento de enfermedades basadas en la expresion de MCP-1, CX3CR1 y p40.

Sorprendentemente, el presente solicitante ha descubierto nuevos derivados del 1-bencil-3-hidroximetilindazol con actividad farmacologica.

Sorprendentemente, el presente solicitante ha descubierto que los nuevos derivados del 1 -bencil-3- hidroximetilindazol de formula (I) segun la presente invencion son capaces de reducir la produccion de la quimiocina MCP-1.

Mas sorprendentemente, el presente solicitante ha descubierto que los nuevos derivados del 1 -bencil-3- hidroximetilindazol de formula (I) segun la presente invencion son capaces de reducir la expresion de la quimiocina MCP-1.

Aun mas sorprendentemente, el presente solicitante ha descubierto que los derivados del 1 -bencil-3- hidroximetilindazol de formula (I) segun la presente invencion son capaces de reducir la expresion de la subunidad p40, que participa en la produccion de las citocinas IL-12 e IL-23, asf como la expresion del receptor CX3CR1.

Asf, en un primer aspecto, la presente invencion consiste en un compuesto de formula (I)

imagen1

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

en el que:

A puede ser -Xi- o -Xi-OC(Rg)(Ri0)-, donde

Xi puede ser un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono, opcionalmente sustituido con uno o mas grupos alquilo que presentan de 1 a 5 atomos de carbono, o uno o mas grupos alcoxi que presentan de 1 a 3 atomos de carbono,

Rg y R10, que pueden ser iguales o diferentes entre si, pueden ser hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono o un grupo alcoxi que presenta de 1 a 3 atomos de carbono,

Y puede ser N(Rn)(R12), N(R13)O(R14), N(R13)N(R14)(R15), N(R13)-X2-N(R14)(R15), N(R13)-X2-CO-X3, donde

R11 puede ser hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono, un grupo alcoxi que

presenta de 1 a 3 atomos de carbono, o R11, junto con R12, forma un heterociclo de entre 4 y 7 miembros,

R12 puede ser hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono, un grupo alcoxi que

presenta de 1 a 3 atomos de carbono, COR', COOR', CON(R')(R''), estando representados R' y R'', que pueden

ser iguales o diferentes entre si, por hidrogeno y un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono, o R12, junto con R11, forma un heterociclo de entre 4 y 7 miembros,

R13 y R15, que pueden ser iguales o diferentes, pueden ser hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono o un grupo alcoxi que presenta de 1 a 3 atomos de carbono,

R14 puede ser hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono, COR', COOR', CON(R')(R''), estando representados R' y R'', que pueden ser iguales o diferentes entre si, por hidrogeno y un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono,

X2 puede ser un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono, opcionalmente sustituido con uno o mas grupos alquilo que presentan de 1 a 5 atomos de carbono, o uno o mas grupos alcoxi que presentan de 1 a 3 atomos de carbono,

X3 puede ser OH, NH2, NHOH o NHNH2,

R1 y R2, que pueden ser iguales o diferentes entre si, pueden ser hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono o un grupo alcoxi que presenta de 1 a 3 atomos de carbono,

R3, R4 y R8, que pueden ser iguales o diferentes entre si, pueden ser hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono, un grupo alcoxi que presenta de 1 a 3 atomos de carbono, un atomo de halogeno, -OH, -N(R')(R''), -N(R')COR'', -CN, -CONR'R'', -SO2NR'R'', -SO2R', nitro y trifluorometilo; estando representados R' y R'', que pueden ser iguales o diferentes entre si, por hidrogeno y un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono,

R5 puede ser hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono, un grupo alcoxi que presenta de 1 a 3 atomos de carbono, un atomo de halogeno, -OH, -N(R')(R''), -N(R')COR'', nitro y trifluorometilo, o R5, junto con uno de entre R6 y R7, forma un anillo que presenta de 5 a 6 atomos de carbono; estando representados R' y R'', que pueden ser iguales o diferentes entre si, por hidrogeno y un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono,

R6 y R7, que pueden ser iguales o diferentes entre si, pueden ser hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono, o juntos forman un grupo C=O, o uno de entre R6 y R7, junto con R5, forma un anillo que presenta 5 o 6 atomos de carbono.

En un segundo aspecto, la presente invencion se refiere a una composicion farmaceutica que comprende los nuevos derivados del 1-bencil-3-hidroximetilindazol de formula (I), o una sal farmaceuticamente aceptable de los mismos, junto con, por lo menos, un vehfculo farmaceuticamente aceptable.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

La sobrerregulacion y/o el aumento de la expresion de las MCP-1, CX3CR1 y p40 mencionadas anteriormente, que en el ultimo caso da lugar a la expresion/produccion de IL-12 y/o IL-23, lo que provoca el desarrollo de una patologfa y/o una enfermedad, suele denominarse en la tecnica con el termino “sobreexpresion”. Para el proposito de la presente invencion, el termino expresion pretende incluir la sobreexpresion, tal como se conoce en la tecnica.

Sorprendentemente, el presente solicitante ha descubierto que los nuevos derivados del 1-bencil-3- hidroximetilindazol se pueden utilizar para la preparacion de una composicion farmaceutica que es activa en enfermedades basadas en la expresion de la quimiocina MCP-1, de la subunidad p40 y, en consecuencia, de las citocinas IL-12 e IL-23, y del receptor CX3CR1.

Asf, en otro aspecto, la presente invencion se refiere a la utilizacion de un compuesto de formula (I)

imagen2

en el que:

A puede ser -X1- o -X1-OC(Rg)(R10)-, donde

X1 puede ser un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono, opcionalmente sustituido con uno o mas grupos alquilo que presentan de 1 a 5 atomos de carbono, o uno o mas grupos alcoxi que presentan de 1 a 3 atomos de carbono,

Y puede ser N(R11)(R12), N(Rr3)O(R14), N(Rr3)N(R14)(R15), N(R1a)-X2-N(R14)(R15), N(R13)-X2-CO-X3, donde

R11 puede ser hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono, un grupo alcoxi que presenta de 1 a 3 atomos de carbono, o R11, junto con R12, forma un heterociclo de entre 4 y 7 miembros,

R12 puede ser hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono, un grupo alcoxi que presenta de 1 a 3 atomos de carbono, COR', COOR', CON(R')(R''), estando representados R' y R'', que pueden ser iguales o diferentes entre si, por hidrogeno y un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono, o R12, junto con R11, forma un heterociclo de entre 4 y 7 miembros,

R13 y R15, que pueden ser iguales o diferentes entre si, pueden ser hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono o un grupo alcoxi que presenta de 1 a 3 atomos de carbono,

X3 puede ser OH, NH2, NHOH o NHNH2,

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

R3, R4 y R8, que pueden ser iguales o diferentes entre si, pueden ser hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono, un grupo alcoxi que presenta de 1 a 3 atomos de carbono, un atomo de halogeno, -OH, -N(R')(R”), -N(R')COR', -CN, -CONR'R”, -SO2NR'R”, -SO2R', nitro y trifluorometilo; estando representados R' y R'', que pueden ser iguales o diferentes entre si, por hidrogeno y un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono,

R5 puede ser hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono, un grupo alcoxi que presenta de 1 a 3 atomos de carbono, un atomo de halogeno, -OH, -N(R')(R''), -N(R')COR'', nitro y trifluorometilo, o R5, junto con uno de entre R6 y R7, forma un anillo que presenta de 5 a 6 atomos de carbono; estando representados R' y R'', que pueden ser iguales o diferentes entre si, por hidrogeno y un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono, y

R6 y R7, que pueden ser iguales o diferentes entre si, pueden ser hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono, o juntos forman un grupo C=O, o uno de entre R6 y R7, junto con R5, forma un anillo que presenta 5 o 6 atomos de carbono,

para preparar una composicion farmaceutica para el tratamiento de enfermedades basadas en la expresion de MCP-1, CX3CR1 y p40.

Ademas, en otro aspecto, la presente invencion se refiere a un metodo para tratar o prevenir enfermedades basadas en la expresion de MCP-1, CX3CR1 y p40, caracterizado por la administracion de una cantidad eficaz del compuesto de formula (I) descrito anteriormente a una persona que lo necesita.

Descripcion detallada de la invencion

Preferentemente, en la formula (I) descrita anteriormente, el residuo A esta representado por el grupo X1 o X-i-OC(Rg)(R10), donde X1 es un grupo alquilo que presenta de 1 a 3 atomos de carbono, opcionalmente sustituido con uno o mas grupos alquilo que presentan de 1 a 3 atomos de carbono, o uno o mas grupos alcoxi que presentan 1 o 2 atomos de carbono, y Rg y R10, que pueden ser iguales o diferentes entre si, son hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 3 atomos de carbono o un grupo alcoxi que presenta 1 o 2 atomos de carbono.

Mas preferentemente, el residuo A esta representado por el grupo X1 o X-i-OC(Rg)(R10), donde X1 es el grupo CH2, el grupo CH2CH2 o el grupo C(CH3)2, y Rg y R10, que pueden ser iguales o diferentes entre si, son hidrogeno o un grupo CH3.

Ventajosamente, el residuo A se selecciona del grupo que comprende un grupo CH2, un grupo CH2CH2, un grupo C(CH3)2, un grupo CH2CH2OCH2, un grupo CH2CH2OC(CH3)2 y un grupo CH2CH2CH2OC(CH3)2.

Preferentemente, en la formula (I) descrita anteriormente, el residuo Y esta representado por el grupo N(Rn)(R12), N(R13)N(R14)(R15), N(R13)-X2-N(R14)(R15) o N(R13)-X2-CO-X3.

Mas preferentemente, en la formula (I) descrita anteriormente, el residuo Y esta representado por el grupo N(R11)(R12), N(R13)N(R14)(R15) o N(R13)-X2-N(R14)(R15).

Ventajosamente, R11 esta representado por un atomo de hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 3 atomos de carbono, un grupo alcoxi que presenta 1 o 2 atomos de carbono, o R11, junto con R12, forma un heterociclo de 5 o 6 miembros.

Mas preferentemente, R11 esta representado por un atomo de hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 3 atomos de carbono, o R11, junto con R12, forma un heterociclo de 5 o 6 miembros.

Ventajosamente, R12 esta representado por un atomo de hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 3 atomos de carbono, un grupo alcoxi que presenta 1 o 2 atomos de carbono, CON(R')(R''), estando representados R' y R'', que pueden ser iguales o diferentes entre si, por hidrogeno y un grupo alquilo que presenta de 1 a 3 atomos de carbono, o R12, junto con R11, forma un heterociclo de 5 o 6 miembros.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

Mas preferentemente, R12 esta representado por un atomo de hidrogeno, un grupo alquilo que presenta 1 o 2 atomos de carbono, un grupo alcoxi que presenta 1 o 2 atomos de carbono, CON(R')(R''), estando representados R' y R'', que pueden ser iguales o diferentes entre si, por hidrogeno y un grupo alquilo que presenta de 1 a 3 atomos de carbono, o R12, junto con R11, forma un heterociclo de 5 o 6 miembros.

Preferentemente, R13 y R15, que pueden ser iguales o diferentes entre si, estan representados por un atomo de

hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 3 atomos de carbono o un grupo alcoxi que presenta 1 o 2 atomos

de carbono.

Mas preferentemente, R13 y R15, que pueden ser iguales o diferentes entre si, estan representados por un atomo de hidrogeno, un grupo alquilo que presenta 1 o 2 atomos de carbono o un grupo alcoxi que presenta 1 o 2 atomos de carbono.

Preferentemente, R14 esta representado por un atomo de hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 3 atomos de carbono, COR', COOR', CON(R')(R''), estando representados R' y R'', que pueden ser iguales o diferentes entre si, por hidrogeno y un grupo alquilo que presenta de 1 a 3 atomos de carbono.

Mas preferentemente, R14 esta representado por un atomo de hidrogeno, un grupo alquilo que presenta 1 o 2 atomos de carbono, o CON(R')(R''), estando representados R' y R'', que pueden ser iguales o diferentes entre si, por hidrogeno y un grupo alquilo que presenta de 1 a 3 atomos de carbono.

Ventajosamente, X2 esta representado por un grupo alquilo que presenta de 1 a 3 atomos de carbono,

opcionalmente sustituido con uno o mas grupos alquilo que presentan de 1 a 3 atomos de carbono, o uno o mas grupos alcoxi que presentan 1 o 2 atomos de carbono.

Ventajosamente, X3 esta representado por los grupos OH, NH2, NHOH o NHNH2.

Preferentemente, R1 y R2, que pueden ser iguales o diferentes entre si, estan representados por un atomo de hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 3 atomos de carbono o un grupo alcoxi que presenta 1 o 2 atomos de carbono.

Preferentemente, R3, R4 y Rs, que pueden ser iguales o diferentes entre si, estan representados por un atomo de hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 3 atomos de carbono, un grupo alcoxi que presenta 1 o 2 atomos de carbono, un atomo de Br, Cl o F, un grupo OH, un grupo nitro, un grupo trifluorometilo o un grupo N(R')(R'') o N(R')COR''; -CN, -CONR'R'', -SO2NR'R'', -SO2R', estando representados R' y R'', que pueden ser iguales o diferentes entre si, por un atomo de hidrogeno y un grupo alquilo que presenta de 1 a 3 atomos de carbono.

Ventajosamente, R5 esta representado por un atomo de hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 3 atomos de carbono, un grupo alcoxi que presenta 1 o 2 atomos de carbono, un atomo de halogeno, un grupo OH, o R5, junto con uno de entre R6 y R7, forma un anillo que presenta 5 o 6 atomos de carbono.

Preferentemente, R6 y R7, que pueden ser iguales o diferentes entre si, estan representados por un atomo de hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 3 atomos de carbono, o juntos forman un grupo C=O, o uno de entre R6 y R7, junto con R5, forma un anillo que presenta 5 o 6 atomos de carbono.

En el caso de determinados sustituyentes, el compuesto de formula (I) segun la presente invencion puede ser un atomo de carbono asimetrico y puede, por consiguiente, encontrarse en forma de estereoisomeros y enantiomeros.

Dependiendo de la naturaleza de los sustituyentes, el compuesto de formula (I) puede formar sales de adicion con acidos o bases organicos o minerales fisiologicamente aceptables.

Entre los ejemplos tfpicos de acidos minerales adecuados fisiologicamente aceptables se incluyen el acido clorhfdrico, el acido bromhfdrico, el acido sulfurico, el acido fosforico y el acido nftrico.

Entre los ejemplos tfpicos de acidos organicos fisiologicamente aceptables adecuados se incluyen el acido acetico, el acido ascorbico, el acido benzoico, el acido cftrico, el acido fumarico, el acido lactico, el acido maleico, el acido metanosulfonico, el acido oxalico, el acido para-toluenosulfonico, el acido bencenosulfonico, el acido succfnico, el

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

acido tanico y el acido tartarico.

Entre los ejemplos tfpicos de bases minerales adecuadas fisiologicamente aceptables se incluyen hidroxidos, carbonatos e hidrogenocarbonatos de amonio, calcio, magnesio, sodio y potasio, por ejemplo, hidroxido de amonio, hidroxido de calcio, carbonato de magnesio, hidrogenocarbonato de sodio e hidrogenocarbonato de potasio.

Entre los ejemplos tfpicos de bases organicas adecuadas fisiologicamente aceptables se incluyen: arginina, betafna, cafefna, colina, N,N-dibenciletilendiamina, dietilamina, 2-dietilaminoetanol, 2-dimetilaminoetanol, etanolamina, etilendiamina, N-etilmorfolina, N-etilpiperidina, N-metilglucamina, glucamina, glucosamina, histidina, N-(2-hidroxietil)piperidina, N-(2-hidroxietil)pirrolidina, isopropilamina, lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperidina, teobromina, trietilamina, trimetilamina, tripropilamina y trometamina.

Dependiendo de la naturaleza de los sustituyentes, el compuesto de formula (I) puede formar esteres con acidos o bases organicos fisiologicamente aceptables.

Entre los compuestos de la presente invencion, tambien se incluyen profarmacos, estereoisomeros, enantiomeros y sales o esteres farmaceuticamente aceptables de los compuestos representados por la formula (I), que se describen en las reivindicaciones. El profarmaco de un compuesto de formula (I) es una sustancia en forma sustancialmente inactiva que, cuando se administra a un ser vivo, se metaboliza y da lugar a un compuesto de formula (I).

Los terminos “farmaceuticamente aceptable” y “fisiologicamente aceptable” tienen por objeto definir, sin ninguna limitacion particular, cualquier material adecuado para preparar una composicion farmaceutica para su administracion a un ser vivo.

Los compuestos segun la formula (I) de la presente invencion pueden utilizarse para la preparacion de una composicion farmaceutica activa en el tratamiento de enfermedades (o patologfas) basadas en la expresion de la quimiocina MCP-1, la citocina p40, la subunidad p40 (que participa en la produccion de las citocinas IL-12 e IL-23) y el receptor CX3CR1.

Preferentemente, las patologfas asociadas con la expresion de MCP-1 y CX3CR1 son enfermedades articulares, enfermedades renales, enfermedades cardiovasculares, sfndrome metabolico, obesidad, diabetes, resistencia a la insulina y cancer.

En particular, las patologfas asociadas a la expresion de MCP-1 son artritis reumatoide, artritis inducida por infecciones virales, artritis psoriasica, artrosis, nefritis lupica, nefropatfa diabetica, glomerulonefritis, rinon poliqufstico, enfermedad pulmonar intersticial, fibrosis, esclerosis multiple, enfermedad de Alzheimer, demencia asociada al VIH, dermatitis atopica, psoriasis, vasculitis, restenosis, aterosclerosis, infarto de miocardio, angina de pecho, enfermedades coronarias agudas, adenomas, carcinomas y metastasis, y enfermedades metabolicas, trasplantes, sustituciones de organos, sustituciones de tejidos e implantes protesicos.

En particular, las patologfas asociadas a la expresion de CX3CR1 son artritis reumatoide, nefritis lupica, nefropatfa diabetica, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, trastornos coronarios, restenosis, aterosclerosis, infarto de miocardio, angina de pecho.

Preferentemente, las patologfas asociadas a la expresion de p40, y por consiguiente de IL-12 e IL-23, son las enfermedades autoinmunitarias, tales como las enfermedades inflamatorias degenerativas cronicas, y el cancer.

En particular, las patologfas asociadas a la expresion de p40 son artritis reumatoide, psoriasis, glomerulonefritis, diabetes, lupus eritematoso, diabetes, enfermedad de Crohn y tumores, tales como, por ejemplo, carcinomas de colon, carcinomas de mama, carcinomas de pulmon y carcinomas de prostata, y neoplasias de piel y del sistema nervioso central.

Preferentemente, las composiciones farmaceuticas de la presente invencion se preparan en formas farmaceuticas adecuadas, que comprenden una dosis eficaz, por lo menos, de un compuesto de formula (I), o una sal o ester farmaceuticamente aceptable del mismo, y, por lo menos, un vehfculo farmaceuticamente aceptable.

Entre los ejemplos de vehfculos farmaceuticamente aceptables conocidos en la tecnica anterior se incluyen, por

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

ejemplo, deslizantes, aglutinantes, disgregantes, rellenos, diluyentes, aromatizantes, colorantes, fluidificantes, lubricantes, agentes conservantes, humectantes, absorbentes y edulcorantes.

Entre los ejemplos utiles de excipientes farmaceuticamente aceptables se incluyen azucares, tales como lactosa, glucosa o sacarosa, almidones, tales como almidon de mafz y almidon de patata, celulosa y sus derivados, tales como carboximetilcelulosa sodica, etilcelulosa y acetato de celulosa, goma de tragacanto, malta, gelatina, talco, manteca de cacao, ceras, aceites, tales como aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodon, aceite de cartamo, aceite de sesamo, aceite de oliva, aceite de mafz y aceite de soja, glicoles, tales como propilenglicol, polioles, tales como glicerol, sorbitol, manitol y polietilenglicol, esteres, tales como oleato de etilo y laurato de etilo, agar agar y similares.

Entre los ejemplos de formas farmaceuticas adecuadas se encuentran comprimidos, capsulas, comprimidos recubiertos, granulos, soluciones y jarabes para su administracion oral; emplastos medicinales, soluciones, pastas, cremas y pomadas para administracion transdermica; supositorios para administracion rectal y soluciones esteriles para inyeccion o administracion mediante aerosol.

Otras formas de dosificacion adecuadas son formas de liberacion controlada y formas a base de liposomas, para las vfas oral o de inyeccion.

Las formas farmaceuticas tambien pueden contener otros ingredientes convencionales, tales como: conservantes, estabilizantes, tensioactivos, tampones, reguladores de la presion osmotica, emulsionantes, edulcorantes, colorantes, aromatizantes y similares.

Cuando se requiera para determinadas terapias, la composicion farmaceutica segun la presente invencion puede contener otros ingredientes farmacologicamente activos cuya administracion simultanea resulte util.

La cantidad de compuesto de formula (I), o de sal o ester farmaceuticamente aceptable del mismo, en la composicion farmaceutica de la presente invencion puede variar dentro de un amplio intervalo en funcion de factores conocidos, tales como el tipo de patologfa a tratar, la gravedad de la enfermedad, el peso corporal del paciente, la forma farmaceutica, la via de administracion elegida, el numero de administraciones diarias y la eficacia del compuesto de formula (I) seleccionado. Sin embargo, el experto en la materia podra determinar la cantidad optima de forma sencilla y rutinaria.

Tfpicamente, la cantidad de compuesto de formula (I), o de sal o ester farmaceuticamente aceptable del mismo, en la composicion farmaceutica de la presente invencion es tal que se asegura un nivel de administracion comprendido entre 0,001 mg/kg/dfa y 100 mg/kg/dfa. Preferentemente, el nivel de administracion esta comprendido entre 0,05 mg/kg/dfa y 50 mg/kg/dfa, y aun mas preferentemente entre 0,1 mg/kg/dfa y 10 mg/kg/dfa.

Las formas farmaceuticas de la composicion farmaceutica segun la presente invencion se pueden preparar mediante tecnicas bien conocidas por los qufmicos farmaceuticos, incluidas el mezclado, la granulacion, el prensado, la disolucion, la esterilizacion y similares.

La actividad de los compuestos de la presente invencion sobre MCP-1 y CX3CR1 se demostro in vitro en monocitos humanos por tecnicas de analisis de la expresion genica con RT-PCR “en tiempo real” y por analisis de la produccion de protefnas mediante un ensayo inmunoenzimatico. Como saben los expertos en la materia, los modelos experimentales mencionados anteriormente se consideran utiles para controlar la actividad de los compuestos con respecto a la expresion y produccion de MCP-1 y la expresion de CX3CR1. En consecuencia, los modelos mencionados anteriormente pueden considerarse predictivos de la actividad en el hombre para el tratamiento de patologfas caracterizadas por la expresion y produccion de MCP-1, por la expresion de CX3CR1 y por condiciones inflamatorias con presencia de infiltrados ricos en monocitos y macrofagos.

La actividad de los compuestos de la presente invencion sobre la p40 se demostro in vitro en monocitos humanos por tecnicas de analisis de la expresion genica por RT-PCR “en tiempo real”. Como saben los expertos en la materia, el modelo experimental mencionado anteriormente es util para controlar la actividad de los compuestos con respecto a la expresion de p40 y puede considerarse predictivo de la actividad en el hombre para el tratamiento de estados patologicos caracterizados por la expresion de p40.

5

10

15

20

25

30

35

40

La preparacion de los compuestos de formula general (I) se puede llevar a cabo segun uno de los siguientes metodos.

Metodo A:

imagen3

En el metodo A, los compuestos de formula general (III) se hacen reaccionar con los compuestos de formula (IV). Los sustituyentes Ri a Re, A e Y tienen los significados indicados anteriormente para los compuestos de formula (I), y Q indica un grupo saliente seleccionado dentro del grupo que comprende halogeno, CH3SO3- y p-CH3PhSO3-.

El metodo A se lleva a cabo segun tecnicas convencionales. Por ejemplo, los alcoholes de formula (III) se hacen reaccionar, respectivamente, con los derivados de formula (IV), en los que Q es un grupo saliente, preferentemente seleccionado dentro del grupo que comprende un atomo de cloro, un atomo de bromo y un grupo metanosulfonilo. La reaccion se lleva a cabo en presencia de una base adecuada y en un disolvente adecuado. Las bases que pueden utilizarse preferentemente son NaH, butil-litio y diisopropilamida de litio, mientras que los disolventes adecuados para este tipo de reaccion son, preferentemente, disolventes aproticos polares, tales como tetrahidrofurano, eter dietflico o 1,4-dioxano. Preferentemente, la temperatura de reaccion esta comprendida entre la temperatura ambiente y la temperatura de reflujo del disolvente utilizado. Las reacciones de este tipo pueden durar de unas horas a unos dfas.

Metodo B:

imagen4

En el metodo B, los compuestos de formula general (V) se hacen reaccionar con los compuestos de formula (VI). Los sustituyentes Ri a Re, A e Y tienen los significados indicados anteriormente para los compuestos de formula (I), y Q indica un grupo saliente seleccionado dentro del grupo que comprende halogeno, CH3SO3- y p-CH3PhSO3-.

El metodo B se lleva a cabo segun tecnicas convencionales. Por ejemplo, los alcoholes de formula (VI) se hacen reaccionar, respectivamente, con los derivados de formula (V), en los que Q es un grupo saliente, preferentemente seleccionado dentro del grupo que comprende un atomo de cloro, un atomo de bromo y un grupo metanosulfonilo. La reaccion se lleva a cabo en presencia de una base adecuada y en un disolvente adecuado. Las bases que pueden utilizarse preferentemente son NaH, butil-litio y diisopropilamida de litio, mientras que los disolventes adecuados para este tipo de reaccion son, preferentemente, disolventes aproticos polares, tales como tetrahidrofurano, eter dietflico o 1,4-dioxano. Preferentemente, la temperatura de reaccion esta comprendida entre la temperatura ambiente y la temperatura de reflujo del disolvente utilizado. Las reacciones de este tipo pueden durar de unas horas a unos dfas.

Metodo C

5

10

15

20

25

30

imagen5

En el metodo C, los productos de formula general (IX) se hacen reaccionar con los productos de formula general (X). Los sustituyentes R1 a R8, A e Y tienen los significados indicados anteriormente para los compuestos de formula (I), y T puede ser hidrogeno o un grupo alquilo.

El metodo C se lleva a cabo segun tecnicas convencionales.

Cuando T es hidrogeno, el metodo comprende la utilizacion de un agente adecuado para activar el acido carboxflico, tal como cloruro de tionilo, y un disolvente aprotico. Preferentemente, los disolventes utilizados son tolueno, tetrahidrofurano y diclorometano. La reaccion se puede llevar a cabo en presencia de una base, que puede ser organica, tal como trietilamina o diisopropiletilamina, o mineral, tal como metoxido de sodio. Preferentemente, la reaccion se lleva a cabo a temperaturas comprendidas entre 0°C y la temperatura de reflujo del disolvente utilizado. Generalmente, el tiempo de reaccion esta comprendido entre 1 hora y 24 horas.

Si T es un grupo alquilo, el metodo comprende la utilizacion de una base mineral adecuada, tal como metoxido de sodio o NaOH, y un exceso de amina de formula general (X). En general, la reaccion se puede llevar a cabo utilizando un disolvente aprotico adecuado, preferentemente tolueno o dioxano, o la misma amina reactiva (X), si su estado ffsico lo permite. Preferentemente, la reaccion se lleva a cabo a temperaturas superiores a la temperatura ambiente y durante perfodos que van de unas horas a varios dfas.

Los siguientes ejemplos pretenden ilustrar la presente invencion sin limitarla, sin embargo, en ningun aspecto. Ejemplos de preparacion

Los compuestos de formula (I) indicados en la siguiente tabla A se prepararon mediante los metodos de preparacion descritos anteriormente.

TABLA A

No.: A Y Grupos R

1: 2 3 4 5 6 7 8

9: C(CHa)2 NH2 H H H H H H H H

10: NHOH

11: NHNH2

12: NHNHCONH2

13: NH(CH2)2N(CHa)2

14*: NH-(2-piridina)

15*: NH-[1-(4-CH3)-piperazinal

26: NHCH2COOH

27*: NH-NH-Ph

28: N-morfolina

29: NH2 5-OCH3

30: “ p-Cl H

31: “ p-Cl m-Cl “

32: NHOH H H 5-CN

33: “ p-OCH3 “ 5-CN

5

10

15

20

25

30

34: “ “ “ “ H “ “ CO H

35: “ “ “ “ “ “ (CH2)3 H H

36: CH2 “ “ “ p-OCH3 “ H H “ “

37: “ NH2 “ “ H “ “ “ “ 5-CONH2

38: C(CH3)2C H2OC(CH 3)2 H

39: C(CH3)2C H2OCH2 “ “ “ “ “ “ “ “ “

40: “ NHOH “ “ “ “ “ “ “ “

41: “ “ “ “ p-OCH3 “ “ “ “ “

42: CH2CH2O C(CH3)3 “ “ “ H “ “ “ “ “

43: CH2CH2C H2OC(CH 3)2

44: CH2CH2C H2OCH2 “ “ “ “ “ “ “ “ “

45: “ NH2 “ “ “ “ “ “ “ “

46: CH2CH2O CH2 “ “ “ “ “ “ “ “ “

47: “ NHOH “ “ “ “ “ “ “ “

48: “ NHNH2 “ “ “ “ “ “ “ “

* Compuesto de referencia que no forma parte de la invencion

Los detalles de la preparacion de la mayona de los compuestos de la tabla A se indican a continuacion. Los demas compuestos se prepararon con tecnicas similares, utilizando productos de partida y reactivos adecuados.

Preparacion del compuesto 9

2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]-2-metilpropanamida

9a) 2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]-2-metilpropanoato de metilo

Una suspension de acido 2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]-2-metilpropanoico (20 g; 0,062 mol) [preparada tal como se describe en la solicitud de patente EP 382 276] en metanol (300 ml) se trato a 0°C con HCl gaseoso durante 4 horas. A continuacion, la mezcla se vertio sobre agua (500 ml) y el producto se extrajo con eter dietflico (3 x 250 ml). Las fases organicas combinadas se lavaron con solucion de bicarbonato de sodio al 5% (2 x 100 ml) seguido de agua (50 ml). El disolvente se evaporo a presion reducida y el residuo crudo se purifico por cristalizacion en hexano.

Se obtuvieron 18,5 g de 2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]-2-metilpropanoato de metilo. p. f. = 66°-67°C

1H-RMN (CDCla, 6 ppm): 1,56 (s, 6 H), 3,77 (s, 3 H), 4,87 (s, 2 H), 5,54 (s, 2 H), 7,0-7,4 (m, 8 H), 8,03 (d, J = 7,61 Hz, 1 H).

9b) 2-[(1-bencil-1 H-indazol-3-il)metoxi]-2-metilpropanamida

Una solucion de 2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]-2-metil-propanoato de metilo (15 g; 0,044 moles) en metanol (250 ml) agitada a temperatura ambiente se trato con NH3 gaseoso durante 48 horas. A continuacion, el disolvente se evaporo a presion reducida y el residuo crudo se purifico por cristalizacion en acetato de etilo.

Se obtuvieron 7,3 g de 2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]-2-metilpropanamida.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

p. f. = 111°-112°C

1H-RMN (CDCI3, 8 ppm): 1,58 (s, 6 H), 4,88 (s, 2 H), 5,57 (s, 2 H), 5,64 (bs, 1 H), 6,94 (bs, 1 H), 7,08-7,43 (m, 8 H), 7,77 (d, J = 8,04 Hz, 1 H).

Preparacion del compuesto 10

2-[(1-benciI-1H-indazoI-3-iI)metoxi]-N-hidroxi-2-metiIpropanamida 10a) 2-[(1-benciI-1H-indazoI-3-iI)metoxi]-2-metiIpropanoato de metiIo

Una suspension de acido 2-[(1-benciI-1H-indazoI-3-iI)metoxi-2-metiIpropanoico (20 g; 0,062 moI) en metanoI (300 mI) se trato a 0°C con HCI gaseoso durante 4 horas. A continuacion, Ia mezcIa se vertio sobre agua (500 mI) y eI producto se extrajo con eter dietfIico (3 x 250 mI). Las fases organicas combinadas se Iavaron con soIucion de bicarbonato de sodio aI 5% (2 x 100 mI) seguido de agua (50 mI). EI disoIvente se evaporo a presion reducida y eI residuo crudo se purifico por cristaIizacion en hexano.

De este modo se obtuvieron 18,5 g de 2-[(1-benciI-1H-indazoI-3-iI)metoxi]-2-metiIpropanoato de metiIo. p. f. = 66°-67°C

1H-RMN (CDCI3, 8 ppm): 1,56 (s, 6 H), 3,77 (s, 3 H), 4,87 (s, 2 H), 5,54 (s, 2 H), 7,0-7,4 (m, 8 H), 8,03 (d, J = 7,61 Hz, 1 H).

10b) 2-[(1-benciI-1H-indazoI-3-iI)metoxi]-N-hidroxi-2-metiIpropanamida

Se anadio una soIucion de KOH (9,7 g, 0,173 moI) en metanoI (25 mI) a temperatura ambiente a una soIucion de cIorhidrato de hidroxiIamina (8,0 g, 0,115 moI) en metanoI (45 mI). La mezcIa resuItante se agito a 0°C durante 30 minutos y despues se fiItro, y Ia soIucion se anadio a una soIucion de 2-[(1-benciI-1H-indazoI-3-iI)metoxi]-2- metiIpropanoato de metiIo (19 g, 0,057 moI) en metanoI (30 mI) y CHCI3 (15 mI). La mezcIa se agito a temperatura ambiente durante 72 horas. La reaccion se detuvo mediante Ia concentracion deI disoIvente a presion reducida y eI Iavado deI residuo recogido en agua (100 mI) con eter dietfIico (3 x 50 mI). La fase acuosa se acidifico con HCI 2 N y eI producto se extrajo con eter dietfIico (3 x 100 mI). A continuacion, Ia fase organica se concentro a presion reducida y eI residuo crudo resuItante se purifico por dobIe cristaIizacion en una mezcIa de hexano/acetato de etiIo 1/1.

Se obtuvieron 6 g de 2-[(1-benciI-1H-indazoI-3-iI)metoxi]-N-hidroxi-2-metiIpropanamida.

p. f. = 115°-116°C

1H-RMN (CDCI3, 8 ppm): 1,58 (s, 6 H), 4,87 (s, 2 H), 5,57 (s, 2 H), 7,12-7,41 (m, 8 H), 8,10 (bs, 1 H), 7,72 (d, J = 8,09 Hz, 1 H), 10,05 (bs, 1 H).

Preparacion deI compuesto 11

2-[(1-benciI-1H-indazoI-3-iI)metoxi]-2-metiIpropanohidrazida

A una soIucion de hidrato de hidrazina 1 M (100 mI, 0,100 moI) agitada a 80°C se Ie anadio en porciones 2-[(1- benciI-1H-indazoI-3-iI)metoxi]-2-metiIpropanoato de metiIo (20 g, 0,060 moI). Una vez compIetada Ia adicion, Ia mezcIa se agito durante 30 minutos a Ia misma temperatura y, a continuacion, se caIento a 120°C durante 2 horas. La reaccion se detuvo diIuyendo Ia mezcIa con agua (600 mI) y extrayendo eI producto con eter dietfIico (4 x 200 mI). A continuacion, Ias fases organicas combinadas se extrajeron con HCI 2 N (4 x 200 mI). A continuacion, Ia fase acida se IIevo a un pH basico con NaOH 10 N y se extrajo de nuevo con eter dietfIico (4 x 200 mI). Las fases organicas combinadas se concentraron a presion reducida y eI residuo crudo resuItante se purifico por cristaIizacion en una mezcIa de hexano/acetato de etiIo 1/1.

Se obtuvieron 16 g de 2-[(1-benciI-1H-indazoI-3-iI)metoxi]-2-metiIpropanohidrazida.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

p. f. = 92°-93°C

1H-RMN (DMSO-d6, 6 ppm): 1,41 (s, 6 H), 4,30 (s, 2 H), 4,73 (s, 2 H), 5,62 (s, 2 H), 7,15 (ddd, J = 8,00; 6,98; 0,80 Hz, 1 H), 7,20-7,34 (m, 5 H), 7,38 (ddd, J = 8,37; 6,98; 1,17 Hz, 1 H), 7,66 (d, J = 8,48 Hz, 1 H), 7,90 (dt, J = 8,11; 0,91 Hz, 1 H), 8,84 (s, 1 H).

Preparacion del compuesto 12

2-{2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]-2-metilpropanoil}hidrazina-carboxamida

A una solucion de 2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]-2-metilpropanohidrazida (7,0 g, 0,021 mol) en agua (100 ml) y HCl 3 N (15 ml) agitada a temperatura ambiente se le anadio lentamente una solucion de KOCN (1,8 g, 0,022 mol) en agua (30 ml). La mezcla se agito a esta misma temperatura durante 30 minutos y a continuacion se detuvo la reaccion por filtracion del solido formado de este modo. El solido aislado se cristalizo a partir de etanol de 95°.

Se obtuvieron 6,0 g de 2-{2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]-2-metilpropanoil}-hidrazina-carboxamida

p. f. = 174°-175°C

1H-RMN (DMSO-d6, 6 ppm): 1,43 (s, 6 H), 4,80 (s, 2 H), 5,62 (s, 2 H), 5,90 (s, 2 H), 7,14 (t, J = 7,45 Hz, 1 H), 7,207,43 (m, 6 H), 7,66 (d, J = 8,48 Hz, 1 H), 7,77 (s, 1 H), 7,96 (d, J = 8,04 Hz, 1 H), 9,37 (s, 1 H).

Preparacion del compuesto 13

Clorhidrato de 2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]-N-[2-(dimetilamino)etil]-2-metilpropanamida

A una solucion de acido 2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]-2-metilpropanoico, preparado tal como se describe en el documento EP 382 276 (19,5 g, 0,060 mol), en tolueno (150 ml) agitada a temperatura ambiente se le anadio trietilamina (8,4 ml, 0,060 mol). A continuacion, la mezcla se enfrio a 0°C y se anadio una solucion de cloroformiato de etilo (7,0 ml, 0,073 mol) en tolueno (30 ml). Una vez completada la adicion, la mezcla se agito a esta misma temperatura durante 30 minutos se anadio N,N-dimetiletan-1,2-diamina (7,0 ml, 0,064 mol) disuelta en tolueno (30 ml). Una vez completada la adicion, la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 24 horas. A continuacion, la mezcla se diluyo con eter dietflico (500 ml) y se extrajo con HCl 1 N (4 x 150 ml). Las fases acuosas acidas combinadas se lavaron con eter dietflico (3 x 50 ml), se llevaron a pH basico con NaOH 10 N y se extrajeron de nuevo con eter dietflico (4 x 150 ml). A continuacion, la fase organica se lavo con agua (2 x 50 ml) y con solucion saturada de NaCI (2 x 50 ml). La solucion se seco con Na2SO4 anhidro y el disolvente se evaporo a presion reducida.

El residuo obtenido se disolvio en acetato de etilo (150 ml) y se trato a temperatura ambiente con una solucion de HCl en etanol (aproximadamente 5 N). El solido formado se filtro y se purifico por cristalizacion en una mezcla de acetato de etilo/etanol 9/1.

Se obtuvieron 12,1 g de clorhidrato de 2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]-N-[2-(dimetilamino)-etil]-2- metilpropanamida.

p. f. = 136°-137°C

1H-RMN (CDCla, 6 ppm): 1,54 (s, 6 H), 2,75 (d, J = 4,76 Hz, 6 H), 3,01-3,13 (m, 2 H), 3,69 (q, J = 6,46 Hz, 2 H), 4,87 (s, 2 H), 5,61 (s, 2 H), 7,13-7,41 (m, 8 H), 7,69 (t, J = 5,85 Hz, 1 H), 7,80 (d, J = 8,05 Hz, 1 H), 12,68 (bs, 1 H).

Preparacion del compuesto 14 (compuesto de referencia)

2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]-2-metil-N-pirid-2-il-propanamida

Se trataron 8 g (0,024 mol) de acido 2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]-2-metil-propanoico a temperatura ambiente con metoxido de sodio al 30% (4,33 ml, 0,024 mol) durante 5 minutos. A continuacion, el disolvente se evaporo a presion reducida y el residuo obtenido se suspendio en tolueno (160 ml), seguido de la adicion, a temperatura

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

ambiente, de 2-aminopiridina (6,8 g, 0,072 mol). A la mezcla agitada a temperatura ambiente se anadio lentamente una solucion de cloruro de tionilo (2,1 ml, 0,029 mol) en tolueno (40 ml). Una vez completada la adicion, la mezcla se agito durante 24 horas. A continuacion, el solido obtenido se filtro y el disolvente se evaporo a presion reducida. El residuo crudo obtenido se purifico por cristalizacion en isopropanol.

Se obtuvieron 3 g de 2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]-2-metil-N-pirid-2-il-propanamida.

p. f. = 121°-122°C

1H-RMN (CDCl3, 8 ppm): 1,65 (s, 6 H), 4,97 (s, 2 H), 5,60 (s, 2 H), 6,98-7,04 (m, 1 H), 7,15 (ddd, J = 8,04; 5,77; 2,12 Hz, 1 H), 7,20-7,37 (m, 7 H), 7,64-7,73 (m, 1 H), 7,84 (d, J = 8,18 Hz, 1 H), 8,22-8,27 (m, 2 H), 9,32 (bs, 1 H).

Preparacion del compuesto 15 (compuesto de referencia)

1-bencil-3-{[1,1-dimetil-2-(4-metilpiperazin-1-il)-2-oxoetoxi]metil}-1H-indazol

Se trataron 50 ml de 1-metilpiperazina (0,452 mol) a temperatura ambiente con una solucion metanolica de metoxido de sodio al 30% (9 ml, 0,045 mol) en metanol (5 ml). A dicha solucion, agitada a temperatura ambiente, se anadio 2- [(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]-2-metilpropanoato de metilo (15 g, 0,045 mol). La mezcla se agito a reflujo durante 18 horas. La reaccion se detuvo vertiendo la mezcla en agua (500 ml) y extrayendo el producto con eter dietflico (3 x 150 ml). A continuacion, las fases organicas combinadas se extrajeron con HCl 3 N (3 x 100 ml). A continuacion, la fase acida se llevo a un pH basico con NaOH 10 N y se extrajo con eter dietflico (3 x 150 ml). Las fases organicas combinadas se concentraron a presion reducida. El residuo obtenido se purifico por cristalizacion en una mezcla de hexano/acetato de etilo 1/3.

Se obtuvieron 6 g de 1-bencil-3-{[1,1-dimetil-2-(4-metilpiperazin-1-il)-2-oxoetoxi]metil}-1H-indazol. p. f. = 97°-98°C

1H-RMN (CDCla, 8 ppm): 1,60 (s, 6 H), 2,21 (s, 3 H), 2,24-2,47 (m, 4 H), 3,47-4,16 (m, 4 H), 4,82 (s, 2 H), 5,56 (s, 2 H), 7,09-7,38 (m, 8 H), 7,76 (d, J = 8,18 Hz, 1 H).

Preparacion del compuesto 26

N-{2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]-2-metilpropanoil}glicina

Se trataron 4,17 g de ester etflico de glicina (0,040 mol) a temperatura ambiente con una solucion de metoxido de sodio al 30% en metanol (0,46 ml) y el disolvente se evaporo a presion reducida. El residuo obtenido se anadio a una solucion de acido 2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]-2-metilpropanoico (10 g, 0,04 mol) en diclorometano (DCM) (100 ml) con agitacion a temperatura ambiente. A continuacion, la mezcla se enfrio a 0°C y se le anadio una solucion de N,N'-diciclohexilcarbodiimida (6,73 g, 0,033 mol) en DCM (25 ml). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 24 horas.

La reaccion se detuvo filtrando el solido formado y concentrando el disolvente a presion reducida. El residuo crudo se purifico por cromatograffa en columna rapida sobre gel de sflice, utilizando una mezcla de hexano/acetato de etilo 1/1 como eluyente.

El producto obtenido se suspendio en agua (100 ml) y se le anadio NaOH (1,28 g, 0,032 mol). La mezcla se agito a 50°C durante 16 horas, y despues se enfrio y se acidifico con HCl concentrado. El solido obtenido se purifico por cristalizacion en etanol.

Se obtuvieron 5,2 g de N-{2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]-2-metilpropanoil}-glicina. p. f. = 157°-158°C

1H-RMN (CDCla, 8 ppm): 1,55 (s, 6 H), 3,95 (d, J = 5,74 Hz, 2 H), 4,89 (s, 2 H), 5,52 (s, 2 H), 7,0-7,4 (m, 8 H), 7,6 (bt, 1 H), 7,77 (d, J = 7,82 Hz, 1 H), 10,38 (bs, 1 H).

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

Preparacion del compuesto 27 (compuesto de referencia) 2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]-2-metil-N'-fenilpropanohidrazida

Se trataron 24 g de acido 2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]-2-metilpropanoico (0,074 mol) a temperatura ambiente con una solucion de metoxido de sodio en metanol al 30% (13 ml, 0,074 mol) durante 10 minutos, el disolvente se evaporo a presion reducida y el residuo se suspendio en tolueno (240 ml) y se le anadio fenilhidrazina (29,1 ml, 0,296 mol). A la mezcla, mantenida en agitacion a esta misma temperatura, se anadio lentamente una solucion de cloruro de tionilo (6,3 ml, 0,088 mol) en tolueno (50 ml). Una vez completada la adicion, la mezcla se agito durante 24 horas.

A continuacion, el solido formado se filtro y el disolvente se evaporo a presion reducida. El residuo crudo se lavo con hexano (3 x 100 ml) y con una mezcla de hexano/acetato de etilo 10/1 (30 ml).

El residuo crudo obtenido se purifico mediante cristalizaciones sucesivas en isopropanol.

Se obtuvieron 11 g de 2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]-2-metil-N'-fenil-propanohidrazida.

p. f. = 124°-125°C

1H-RMN (CDCla, 6 ppm): 1,61 (s, 2 H), 4,94 (s, 2 H), 5,53 (s, 2 H), 6,10 (bd, J = 4,70 Hz, 1 H), 6,7-7,0 (m, 3 H), 7,17,4 (m, 13 H), 7,78 (dt, J1, J2 = 7,78; 1,19 Hz, 1 H), 8,99 (bd, J = 4,70 Hz, 1 H).

Preparacion del compuesto 28

1- bencil-3-[(1,1-dimetil-2-morfolin-4-il-2-oxoetoxi)metil]-1H-indazol

Se trataron 72 g (0,222 mol) de acido 2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]-2-metil-propanoico a temperatura ambiente con una solucion metanolica de metoxido de sodio al 30% (39 ml; 0,222 mol) durante 10 minutos, el disolvente se evaporo a presion reducida y el residuo obtenido se suspendio en tolueno anhidro (750 ml). A la suspension, agitada a temperatura ambiente, se anadio morfolina (77,6 ml; 0,888 mol), seguida de la adicion lenta de una solucion de cloruro de tionilo (19,3 ml; 0,266 mol) en tolueno (150 ml). La mezcla se agito durante 24 horas y a continuacion se detuvo la reaccion filtrando el solido obtenido. La solucion se concentro a presion reducida y el residuo crudo obtenido se purifico por cristalizacion en isopropanol.

Se obtuvieron 14 g de 1-bencil-3-[(1,1-dimetil-2-morfolin-4-il-2-oxoetoxi)metil]-1H-indazol. p. f. = 135°-137°C

1H-RMN (DMSO-d6, 6 ppm): 1,47 (s, 6 H), 3,1-4,0 (2bs, 8 H), 4,73 (s, 2 H), 5,83 (s, 2 H), 7,0-7,9 (m, 9 H).

Preparacion del compuesto 29

2- [(1-bencil-5-metoxi-1H-indazol-3-il)metoxi]-2-metilpropanamida 29a) 1-bencil-5-metoxi-1H-indazol-3-carboxilato de bencilo

Una suspension de acido 5-metoxi-1H-indazol-3-carboxflico (21,5 g; 0,11 mol) y NaH al 60% (10,5 g; 0,44 mol) en N,N-dimetilformamida (DMF) (200 ml) se agito a 70°C durante 1 hora. A continuacion, a la suspension se le anadio lentamente cloruro de bencilo (32,9 g; 0,26 mol) y la mezcla se agito a 70°C durante 4 horas. La reaccion se detuvo enfriando la mezcla a temperatura ambiente y vertiendo la mezcla en agua y hielo. El producto se extrajo con acetato de etilo (3 x 250 ml). Las fases organicas combinadas se concentraron a presion reducida. El residuo crudo obtenido se purifico mediante cristalizaciones sucesivas en etanol de 95°, obteniendose 18 g de 1-bencil-5-metoxi- 1H-indazol-3-carboxilato de bencilo con un punto de fusion de 107-109°C.

1H-RMN (CDCla, 6 ppm): 3,78 (s, 3 H), 5,51 (s, 2 H), 6,9-7,6 (m, 13 H).

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

A una solucion de 1-bencil-5-metoxi-1H-indazol-3-carboxilato de bencilo (17,7 g; 0,05 mol), eter dietflico (100 ml) y tetrahidrofurano (THF) (170 ml), agitads a temperatura ambiente, se le anadio lentamente LiAlH4 (3,8 g; 0,1 mol). Una vez completada la adicion, la suspension se agito a reflujo durante 24 horas. La reaccion se detuvo destruyendo el exceso de LiAlH4 mediante la adicion de agua (40 ml) y NaOH 5 N (10 ml). La fase organica se separo y el disolvente se evaporo a presion reducida. El residuo crudo obtenido se purifico por cristalizacion en etanol de 95°, obteniendose 14 g de (1-bencil-5-metoxi-1H-indazol-3-il)metanol con un punto de fusion de 97-98°C.

1H-RMN (CDCla, 6 ppm): 3,3 (bs, 1 H), 3,80 (s, 3 H), 4,92 (s, 2 H), 5,47 (s, 2 H), 6,9-7,5 (m, 8 H).

29c) 1-bencil-3-(clorometil)-5-metoxi-1H-indazol

A una solucion de (1-bencil-5-metoxi-1H-indazol-3-il)metanol (18 g; 0,07 mol) en cloroformo (200 ml) agitada a temperatura ambiente se le anadio lentamente cloruro de tionilo (15,8 g; 0,13 mol). Una vez completada la adicion, la solucion se sometio a reflujo durante 24 horas. A continuacion, la reaccion se detuvo enfriando la mezcla a temperatura ambiente y evaporando el disolvente a presion reducida. A continuacion, el residuo se recogio varias veces en tolueno y se concentro a presion reducida. El residuo crudo obtenido se purifico por cristalizacion en hexano, obteniendose 9,5 g de 1-bencil-3-(clorometil)-5-metoxi-1H-indazol con un punto de fusion de 78-80°C.

1H-RMN (CDCla, 6 ppm): 3,85 (s, 3 H), 4,97 (s, 2 H), 5,51 (s, 2 H), 6,9-7,4 (m, 8 H).

29d) Acido 2-[(1-bencil-5-metoxi-1 H-indazol-3-il)metoxi]-2-metilpropanoico

A una solucion que contenfa 1-bencil-3-(clorometil)-5-metoxi-1H-indazol (2,95 g; 0,01 mol) y 3-hidroxi-3- metilbutanoato de etilo (1,98 g; 0,015 mol) en DMF (30 ml) agitada a temperatura ambiente se le anadio lentamente NaH al 60% (0,36 g; 0,015 mol). La mezcla se calento a 40°C durante 24 horas. La reaccion se detuvo enfriando la suspension a temperatura ambiente y anadiendo agua (200 ml). El disolvente se evaporo a presion reducida y el residuo se trato a reflujo con NaOH (0,84 g; 0,021 mol) en agua (6 ml) y etanol de 95° (6 ml) durante 6 horas. A continuacion, la mezcla se enfrio a temperatura ambiente y se diluyo con agua (50 ml). La fase alcalina se lavo con eter dietflico (2 x 20 ml), y a continuacion se acidifico con HCl concentrado y se extrajo con eter dietflico (3 x 30 ml).

Las fases organicas combinadas se concentraron a presion reducida y el residuo crudo obtenido se purifico por cristalizacion en una mezcla de hexano/acetato de etilo 10/1, obteniendose 0,8 g de acido 2-[(1-bencil-5-metoxi-1H- indazol-3-il)metoxi]-2-metilpropanoico con un punto de fusion de 128-130°C.

1H-RMN (DMSO-d6, 6 ppm): 1,44 (s, 6 H), 3,77 (s, 3 H), 4,69 (s, 2 H), 5,55 (s, 2 H), 7,02 (dd, J = 9,15; 2,38 Hz, 1 H), 7,17-7,33 (m, 5 H), 7,41 (d, J = 2,38 Hz, 1 H), 7,55 (d, J = 9,15 Hz, 1 H), 12,79 (s, 1 H).

29e) 2-[(1-bencil-5-metoxi-1H-indazol-3-il)metoxi]-2-metilpropanamida

El producto se preparo mediante los procedimientos descritos en la preparacion del compuesto 9, utilizando acido 2-[(1-bencil-5-metoxi-1H-indazol-3-il)metoxi]-2-metilpropanoico como reactivo de partida.

Preparacion del compuesto 30

2-{[1-(4-clorobencil)-1H-indazol-3-il]metoxi}-2-metilpropanamida 30a) [1-(4-clorobencil)-1 H-indazol-3-il]metanol

A una suspension de NaH al 60% (2,7 g; 0,07 mol) en tolueno (200 ml) se le anadio 1-bencil-3-hidroximetilindazol (10 g; 0,07 mol). La mezcla se llevo al punto de ebullicion y se mantuvo agitada a reflujo durante 1 hora. A continuacion se anadio cloruro de 4-clorobencilo (14,4 g; 0,09 mol). A continuacion, la mezcla se agito a reflujo durante 4 horas. La reaccion se detuvo enfriando la mezcla a temperatura ambiente y anadiendo agua (50 ml). La fase organica se separo y se lavo, respectivamente, con HCl 2 N (50 ml) y agua (5 x 50 ml). El disolvente se evaporo a presion reducida. El residuo crudo obtenido se purifico por cromatograffa en columna rapida sobre gel de sflice,

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

utilizando una mezcla de hexano/acetato de etilo 3/1 como eluyente. El producto obtenido se cristalizo en una mezcla de hexano/acetato de etilo 5/1, obteniendose 4,4 g de [1-(4-clorobencil)-1H-indazol-3-il]metanol.

p. f. = 102°-104°C

1H-RMN (CDCl3, 8 ppm): 3,5 (bs, 1 H), 5,01 (s, 2 H), 5,37 (s, 2 H), 6,8-7,5 (m, 7 H), 7,81 (d, J = 7,82 Hz, 1 H).

30b) Acido 2-{[1-(4-clorobencil)-1 H-indazol-3-il]metoxi}-2-metilpropanoico

A una suspension de NaOH (15,6 g; 0,39 mol) en acetona (50 ml) se le anadio [1-(4-clorobencil)-1H-indazol-3- il]metanol (9,1 g; 0,03 mol). A la mezcla se anadio lentamente una solucion de cloroformo (7,2 ml; 0,09 mol) y acetona (7,2 ml; 0,1 mol). La adicion provoco el reflujo de la mezcla de disolventes. Una vez completada la adicion, la mezcla se sometio a reflujo durante 1 hora. La reaccion se detuvo enfriando la mezcla a temperatura ambiente y evaporando el disolvente a presion reducida. El residuo crudo resultante se recogio en tolueno (100 ml) y agua (50 ml). Luego, la fase organica se separo de la fase acuosa y se lavo con tolueno (2 x 50 ml). Las fases organicas combinadas se extrajeron con agua (3 x 50 ml). Las fases acuosas combinadas se lavaron con hexano (2 x 30 ml), y a continuacion se acidificaron con HCl 2 N y se agitaron a temperatura ambiente. El solido obtenido se filtro y se cristalizo primero en una mezcla de agua/acido acetico 5/1, y luego en tolueno, obteniendose 4,0 g de acido 2-{[1-(4- clorobencil)-1H-indazol-3-il]metoxi}-2-metilpropanoico.

p. f. = 186°-188°C.

1H-RMN (CDCla, 8 ppm): 1,61 (s, 6 H), 4,91 (s, 2 H), 5,54 (s, 2 H), 7,0-7,5 (m, 7 H), 8,07 (s, 1 H), 10,3 (bs, 1 H).

30c) 2-{[1-(4-clorobencil)-1H-indazol-3-il]metoxi}-2-metilpropanamida

El producto se preparo mediante los procedimientos descritos en la preparacion del compuesto 9, utilizando acido 2-{[1-(4-clorobencil)-1H-indazol-3-il]metoxi}-2-metilpropanoico como reactivo de partida.

Preparacion del compuesto 31

2-{[1-(3,4-diclorobencil)-1H-indazol-3-il]metoxi}-2-metilpropanamida 31a) [1-(3,4-diclorobencil)-1H-indazol-3-il]metanol

El producto se obtuvo mediante el procedimiento descrito en el ejemplo 30a), utilizando cloruro de 3,4-clorobencilo como reactivo. El producto obtenido se purifico por cristalizacion en una mezcla de hexano/acetato de etilo 1/1.

p. f. = 118°-120°C

1H-RMN (CDCla, 8 ppm): 3,1-3,3 (m, 1 H), 4,9-5,2 (m, 2 H), 5,38 (s, 2 H), 6,89 (dd, J1, J2 = 8,27; 2,05 Hz, 1 H), 7,17,5 (m, 5 H), 7,82 (dt, J1, J2 = 8,01; 0,93, 1 H).

31 b) Acido 2-{[1-(3,4-diclorobencil)-1 H-indazol-3-il]metoxi}-2-metil-propanoico

El producto se obtuvo mediante el procedimiento descrito en el ejemplo 30b), utilizando [1-(3,4-diclorobencil)-1H- indazol-3-il]metanol como reactivo de partida. El producto obtenido se purifico por cristalizacion en tolueno.

p. f. = 174°-176°C

1H-RMN (DMSO-d6, 8 ppm): 1,44 (s, 6 H), 4,76 (s, 2 H), 5,64 (s, 2 H), 7,12-7,22 (m, 2 H), 7,41 (t, J = 7,68 Hz, 1 H), 7,54 (d, J = 2,01 Hz, 1 H), 7,58 (d, J = 8,42 Hz, 1 H), 7,72 (d, J = 8,42 Hz, 1 H), 7,95 (d, J = 8,05 Hz, 1 H), 12,81 (bs, 1 H).

31c) 2-{[1-(3,4-diclorobencil)-1H-indazol-3-il]metoxi}-2-metilpropanamida

El producto se preparo mediante los procedimientos descritos en la preparacion del compuesto 9, utilizando acido

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

Preparacion del compuesto 34

2-[(1-benzoil-1H-indazol-3-il)metoxi]-N-hidroxi-2-metilpropanamida 34a) (1-tritilindazol-3-il)metanol

A una solucion que contenfa 1H-indazol-3-carboxilato de isobutilo (280 g; 1,28 mol) en cloroformo (2 l), agitada a temperatura ambiente, se le anadieron trietilamina (300 ml; 2,16 mol) y trifenilclorometano (400 g; 1,4 mol). La solucion se agito a temperatura ambiente durante 4 dfas, y a continuacion se anadio agua (500 ml). La fase organica se separo y se concentro a presion reducida. El residuo crudo obtenido se utilizo sin purificacion adicional en la siguiente etapa.

A una solucion del 1 -tritilindazol-3-carboxilato de isobutilo crudo (180 g; 0,39 mol) en THF (1 l), agitada a temperatura ambiente, se le anadio lentamente una suspension de LiAlH4 (18 g; 0,48 mol) en THF (100 ml). Una vez completada la adicion, la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 30 minutos, y a continuacion se detuvo la reaccion enfriando la mezcla a 0°C y anadiendo sucesivamente agua (40 ml), NaOH 2 N (40 ml) y agua (60 ml). El solido formado se separo por filtracion y la solucion se concentro a presion reducida. El residuo crudo obtenido se purifico por cristalizacion en una mezcla de hexano/acetato de etilo 1/1. Se obtuvieron 120 g de (1-tritilindazol-3- il)metanol.

p. f. = 192°-193°C

1H-RMN (CDCla; 6 ppm): 2,51 (t, J = 6,98 Hz, 1 H), 4,90 (d, J = 6,98 Hz, 2 H), 6,2-6,5 (m, 1 H), 6,9-7,4 (m, 17 H), 7,67,8 (m, 1 H).

34b) Acido 2-(1-tritilindazol-3-il-metoxi)-2-metilpropanoico

A una suspension de (1-tritilindazol-3-il)metanol (78 g; 0,20 mol), acetona (260 ml) y agua (0,5 ml), agitada a temperatura ambiente, se le anadio NaOH (76 g; 1,9 mol) y, lentamente, una mezcla de cloroformo/acetona 1/1 (100 ml). La reaccion es exotermica y la velocidad de adicion se ajusto de modo que la temperatura de reaccion se mantuviera cercana al punto de ebullicion. 30 minutos despues de la complecion de la adicion, la reaccion se detuvo enfriando la mezcla a temperatura ambiente y evaporando el disolvente a presion reducida. El residuo se recogio en agua (500 ml) y se lavo con eter dietflico (3 x 100 ml). A continuacion, la fase acuosa se acidifico con HCl concentrado y el producto se extrajo con tolueno (3 x 250 ml). Las fases organicas combinadas se concentraron a presion reducida y el residuo crudo obtenido se purifico por cristalizacion en una mezcla de hexano/acetato de etilo 3/7, obteniendose 22 g de acido 2-(1-tritilindazol-3-il-metoxi)-2-metilpropanoico.

p. f. = 179°-180°C.

1H-RMN (CDCla, 6 ppm): 1,53 (s, 6 H), 4,88 (s, 2 H), 6,3-6,5 (m, 1 H), 6,9-7,5 (m, 17 H), 7,8-8,0 (m, 1 H), 9,3 (bs, 1 H).

34c) Acido 2-(1H-indazol-3-il-metoxi)-2-metilpropanoico

A una solucion de acido 2-(1-tritilindazol-3-il-metoxi)-2-metilpropanoico (83 g; 0,174 mol) en diclorometano (DCM) (900 ml), agitada a temperatura ambiente, se le anadio acido para-toluenosulfonico (PTSA) (50 g; 0,29 mol). La mezcla se agito durante 30 minutos a temperatura ambiente y, a continuacion, se vertio sobre NaOH 5 N (400 ml). La fase organica se separo y se lavo con agua (300 ml). Las fases acuosas combinadas se acidificaron con HCl concentrado y, a continuacion, se extrajeron con acetato de etilo (5 x 300 ml). Las fases organicas combinadas se evaporaron a presion reducida y el residuo crudo resultante se purifico por cristalizacion en una mezcla de hexano/acetato de etilo 1/1.

Se obtuvieron 42 g de acido 2-(1H-indazol-3-il-metoxi)-2-metilpropanoico. p. f. = 135°-137°C.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

1H-RMN (DMSO-d6, 6 ppm): 1,46 (s, 6 H), 4,77 (s, 2 H), 7,0-7,6 (m, 3 H), 7,94 (d, J = 7,88 Hz, 1 H).

34d) Acido 2-[(1-benzoil-1 H-indazol-3-il)metoxi]-2-metilpropanoico

A una solucion de acido 2-(1H-indazol-3-il-metoxi)-2-metilpropanoico (6 g; 0,026 mol) en acetona (50 ml), agitada a temperatura ambiente, se le anadio K2CO3 (6,8 g; 0,049 mol) y, a continuacion, lentamente, una solucion de cloruro de benzoflo (5 ml; 0,043 mol) en acetona (30 ml). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 24 horas y, a continuacion, se vertio sobre agua (1 l). A continuacion, la solucion se llevo a un pH basico con NaOH 5 N y se lavo con eter dietflico (3 x 150 ml). A continuacion, la fase alcalina se acidifico con HCl concentrado y se extrajo con eter dietflico (3 x 300 ml). Las fases organicas combinadas se concentraron a presion reducida y el residuo crudo obtenido se purifico por cristalizacion en una mezcla de hexano/acetato de etilo 1/1. Se obtuvieron 2 g de acido 2-[(1-benzoil-1H-indazol-3-il)metoxi]-2-metilpropanoico.

p. f. = 132°-135°C.

1H-RMN (CDCla, 6 ppm): 1,61 (s, 6 H), 4,93 (s, 2 H), 7,41 (t, J = 7,60 Hz, 1 H), 7,46-7,66 (m, 4 H), 8,02-8,09 (m, 3 H), 8,68 (bs, 1 H), 8,53 (d, J = 8,42 Hz, 1 H).

34e) 2-[(1-benzoil-1H-indazol-3-il)metoxi]-N-hidroxi-2-metilpropanamida

El producto se preparo mediante los procedimientos descritos en la preparacion del compuesto 10, utilizando acido 2-[(1-benzoil-1H-indazol-3-il)metoxi]-2-metilpropanoico como reactivo de partida.

Se obtuvieron 0,34 g de 2-[(1-benzoil-1H-indazol-3-il)metoxi]-N-hidroxi-2-metilpropanamida.

Preparacion del compuesto 35

2-{[1-(1,2,3,4-tetrahidronaft-1-il)-1H-indazol-3-il]metoxi}-N-hidroxi-2-metilpropanamida 35a) Acido 2-metil-2-{[1-(1,2,3,4-tetrahidronaft-1-il)-1H-indazol-3-il]metoxi}-propanoico

A una solucion de acido 2-metil-2-[(1H-indazol-3-il)metoxi]propanoico (26 g; 0,093 mol) en DMF (200 ml) se le anadio NaH al 60% (10 g; 0,25 mol) y la mezcla se agito durante 10 minutos a 60°C. A continuacion, se anadio 1- cloro-1,2,3,4-tetrahidronaftaleno (0,217 mol) a la mezcla y el conjunto se agito a 60°C durante 18 horas. La reaccion se detuvo vertiendo la mezcla en agua (1 l), seguido de acidificacion con HCl 5 N y extraccion del producto con eter dietflico (3 x 250 ml). El residuo obtenido se disolvio en etanol de 95° (100 ml) y se sometio a reflujo con NaOH 1 N (200 ml) durante 2 horas. A continuacion, la solucion se enfrio a temperatura ambiente y se lavo con eter dietflico (3 x 200 ml). A continuacion, la fase alcalina se acidifico con HCl concentrado y se extrajo con acetato de etilo (3 x 300 ml). Las fases organicas combinadas se concentraron a presion reducida y el residuo crudo obtenido se purifico por cristalizacion en acetato de etilo. Se obtuvieron 31 g de acido 2-meti l-2-{[ 1-(1,2,3,4-tetra hidronaft- 1-il)- 1H-indazol-3-il]metoxi}-propanoico.

p. f. = 132°-134°C

1H-RMN (CDCla, 6 ppm): 1,60 (d, J = 2,15 Hz, 6 H), 1,84-2,02 (m, 1H), 2,03-2,18 (m, 1 H), 2,23-2,46 (m, 2 H), 2,90 (dt, J = 16,50; 4,85 Hz, 1 H), 2,98-3,12 (m, 1 H), 4,95 (s, 2 H), 5,92 (dd, J = 8,83; 6,52 Hz, 1 H), 6,71 (d, J = 7,76 Hz, 1 H), 6,93-7,05 (m, 2 H), 7,08-7,32 (m, 4 H), 7,85 (d, J = 8,09 Hz, 1 H).

35b) 2-{[1-(1,2,3,4-tetrahidronaft-1-il)-1H-indazol-3-il]metoxi}-N-hidroxi-2-metilpropanamida.

El producto se obtuvo utilizando el mismo procedimiento descrito en la preparacion del compuesto 10, utilizando acido 2-metil-2-{[1-(1,2,3,4-tetrahidronaft-1-il)-1H-indazol-3-il]metoxi}-propanoico como material de partida.

Preparacion del compuesto 36

{[1-(4-metoxibencil)-1H-indazol-3-il]metoxi}-N-hidroxiacetamida

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

A una suspension de NaH al 60% (2,7 g; 0,07 mol) en tolueno (200 ml) se le anadio 1-bencil-3-hidroximetilindazol (10 g; 0,07 mol). La mezcla se llevo al punto de ebullicion y se mantuvo agitada a reflujo durante 1 hora. A continuacion se anadio cloruro de 4-metoxibencilo (14 g; 0,09 mol). A continuacion, la mezcla se agito a reflujo durante 4 horas. La reaccion se detuvo enfriando la mezcla a temperatura ambiente y anadiendo agua (50 ml). La

fase organica se separo y se lavo, respectivamente, con HCl 2 N (50 ml) y agua (5 x 50 ml). El disolvente se evaporo

a presion reducida. El residuo crudo obtenido se purifico por cromatograffa en columna rapida sobre gel de sflice, utilizando una mezcla de hexano/acetato de etilo 3/2 como eluyente. El producto obtenido se cristalizo en una mezcla de hexano/acetato de etilo 5/1, obteniendose 5,1 g de [1-(4-metoxibencil)-1H-indazol-3-il]metanol con un punto de fusion de 95-97°C.

1H-RMN (CDCla, 6 ppm): 3,43 (t, J = 6,9 Hz, 1 H), 3,67 (s, 3 H), 4,98 (d, J = 6,9 Hz, 2 H), 5,36 (s, 2 H), 6,5-6,8

(m, 2 H), 6,9-7,4 (m, 7 H), 7,80 (d, J = 7,86 Hz, 1 H).

36b) Acido {[1-(4-metoxibencil)-1H-indazol-3-il]metoxi}acetico

Una suspension que contenfa [1-(4-metoxibencil)-1H-indazol-3-il]metanol (6 g; 0,022 mol), acido bromoacetico (4 g; 0,03 mol) y NaH al 50% (3 g; 0,066 mol) en THF (170 ml) se agito a reflujo durante 72 horas. A continuacion, la reaccion se detuvo diluyendo con una suspension con agua y hielo (300 ml) y lavando la fase acuosa con eter dietflico (3 x 150 ml). La fase acuosa se acidifico con HCl concentrado. El solido formado se filtro y se purifico por cristalizacion en isopropanol. Se obtuvieron 4,5 g de acido {[1-(4-metoxibencil)-1H-indazol-3-il]metoxi}acetico.

36c) {[1-(4-metoxibencil)-1H-indazol-3-il]metoxi}-N-hidroxiacetamida

El producto se obtuvo por el metodo descrito para la preparacion del compuesto 10, utilizando acido {[1-(4- metoxibencil)-1H-indazol-3-il]metoxi}acetico como material de partida.

Preparacion del compuesto 39

{2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]-2-metilpropoxi}acetamida 39a) 2-[(1-bencil-1 H-indazol-3-il)metoxi]-2-metilpropan-1-ol

A una suspension de LiAlH4 (4,48 g; 0,118 mol) en eter dietflico (100 ml), agitada a temperatura ambiente, se le anadio lentamente una solucion de 2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]-2-metilpropanoato de metilo, preparada segun el metodo descrito en el documento EP 0 382 276 (20 g; 0,06 mol) en eter dietflico (200 ml) y THF (50 ml). Una vez completada la adicion, la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 30 minutos y a continuacion se completo la reaccion anadiendo NaOH 10 N (20 ml) y agua (40 ml). El disolvente se evaporo a presion reducida y el residuo oleoso se purifico por destilacion a 0,01 mmHg y a 190°C. El producto solido obtenido se cristalizo en isopropanol.

Se obtuvieron 11 g de 2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]-2-metilpropan-1-ol. p. f. = 52°-53°C

1H-RMN (CDCla, 6 ppm): 1,34 (s, 6 H), 2,50 (bs, 1 H), 3,51 (s, 2 H), 4,87 (s, 2 H), 5,55 (s, 2 H), 7,14 (ddd, J = 8,04; 6,21; 1,68 Hz, 1 H), 7,17-7,38 (m, 7 H), 7,78 (dt, J = 8,08; 1,00 Hz, 1H).

39b) Acido {2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]-2-metilpropoxi}acetico

A una solucion de 2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]-2-metilpropan-1-ol (11,0 g, 0,04 mol) en tetrahidrofurano seco (THF) (100 ml), agitada a temperatura ambiente, se le anadio hidruro de sodio al 60% (1,6 g, 0,04 mol). La mezcla se calento a la temperatura de ebullicion durante 2 horas y a continuacion se enfrio a temperatura ambiente y se anadio lentamente una solucion de bromoacetato de etilo (7,4 g, 0,044 mol) en THF (7 ml). Una vez completada la adicion, la mezcla se sometio a reflujo durante 2 horas mas. La reaccion se detuvo enfriando a temperatura

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

ambiente y evaporando el disolvente a presion reducida. El residuo se recogio en NaOH 2 N (100 ml) y el producto se extrajo con eter dietflico (3 x 150 ml). Las fases organicas combinadas se concentraron a presion reducida.

El residuo crudo se recogio en una solucion de NaOH (1,9 g, 0,045 mol) en una mezcla de agua/etanol 1/1 (160 ml). A continuacion, la mezcla se agito a reflujo durante 2 horas. La reaccion se detuvo mediante la concentracion del disolvente a presion reducida, y el residuo se recogio en agua (100 ml) y se lavo con eter dietflico (3 x 50 ml). A continuacion, la fase alcalina se acidifico con HCl concentrado y el solido formado se filtro. El producto se purifico por doble cristalizacion en una mezcla de hexano/acetato de etilo 1/2. Se obtuvieron 4,6 g de acido {2-[(1-bencil-1H- indazol-3-il)metoxi]-2-metilpropoxi}acetico.

39c) {2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]-2-metilpropoxi}acetamida

El producto se preparo mediante los procedimientos descritos en la preparacion del compuesto 9, utilizando acido {2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]-2-metilpropoxi}acetico como reactivo de partida.

Preparacion del compuesto 40

{2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]-2-metilpropoxi}-N-hidroxiacetamida

El producto se preparo mediante los procedimientos descritos en la preparacion del compuesto 10, utilizando acido {2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]-2-metilpropoxi}acetico como reactivo de partida.

Preparacion del compuesto 41

(2-{[1-(4-metoxibencil)-1H-indazol-3-il]metoxi}-2-metilpropoxi)-N-hidroxi-acetamida 41a) [1-(4-metoxibencil)-1H-indazol-3-il]metanol

A una suspension de NaH al 60% (2,7 g; 0,07 mol) en tolueno (200 ml) se le anadio 1-bencil-3-hidroximetilindazol (10 g; 0,07 mol). La mezcla se llevo al punto de ebullicion y se mantuvo agitada a reflujo durante 1 hora. A continuacion, se anadio cloruro de 4-metoxibencilo (14 g; 0,09 mol). A continuacion, la mezcla se agito a reflujo durante 4 horas. La reaccion se detuvo enfriando la mezcla a temperatura ambiente y anadiendo agua (50 ml). La

(m, 2 H), 6,9-7,4 (m, 7 H), 7,80 (d, J = 7,86 Hz, 1 H).

41 b) Acido 2-{[1-(4-metoxibencil)-1 H-indazol-3-il]metoxi}-2-metilpropanoico

A una suspension de NaOH (15,6 g; 0,39 mol) en acetona (50 ml) se le anadio [1-(4-metoxibencil)-1H-indazol-3- il]metanol (8,7 g; 0,03 mol). A la mezcla se anadio lentamente una solucion de cloroformo (7,2 ml; 0,09 mol) y acetona (7,2 ml; 0,1 mol). La adicion provoco el reflujo de la mezcla de disolventes. Una vez completada la adicion, la mezcla se sometio a reflujo durante 1 hora. La reaccion se detuvo enfriando la mezcla a temperatura ambiente y evaporando el disolvente a presion reducida. El residuo crudo resultante se recogio en tolueno (100 ml) y agua (50 ml). Luego, la fase organica se separo de la fase acuosa y se lavo con tolueno (2 x 50 ml). Las fases organicas combinadas se extrajeron con agua (3 x 50 ml). Las fases acuosas combinadas se lavaron con hexano (2 x 30 ml), y a continuacion se acidificaron con HCl 2 N y se agitaron a temperatura ambiente. El solido obtenido se filtro y se cristalizo primero en una mezcla de agua/acido acetico 5/1, y luego en tolueno, obteniendose 4,8 g de acido 2-{[1-(4- metoxibencil)-1H-indazol-3-il]metoxi}-2-metilpropanoico con un punto de fusion de 169-171°C.

1H-RMN (DMSO-d6, 6 ppm): 1,44 (s, 6 H), 3,69 (s, 3 H), 4,74 (s, 2 H), 5,52 (s, 2 H), 6,82-6,90 (m, 2 H), 7,13 (t, J = 7,50 Hz, 1 H), 7,18-7,26 (m, 2 H), 7,36 (t, J = 7,23 Hz, 1 H), 7,66 (d, J = 8,42 Hz, 1 H), 7,92 (dd, J = 8,14; 1,01 Hz, 1 H), 12,76 (s, 1 H).

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

El producto se obtuvo por el metodo descrito para la preparacion del compuesto 39a, utilizando acido 2-{[1-(4- metoxibencil)-1H-indazol-3-il]metoxi}2-metilpropanoico como material de partida.

41 d) Acido (2-{[1-(4-metoxibencil)-1H-indazol-3-il]metoxi}-2-metilpropoxi)acetico

El producto se obtuvo por el metodo descrito para la preparacion del compuesto 39b, utilizando acido 2-{[1-(4- metoxibencil)-1H-indazol-3-il]metoxi}2-metilpropan-1-ol como material de partida.

41e) (2-{[1-(4-metoxibencil)-1H-indazol-3-il]metoxi}-2-metilpropoxi)-N-hidroxi-acetamida

El producto se obtuvo por el metodo descrito para la preparacion del compuesto 10, utilizando acido (2-{[1-(4- metoxibencil)-1H-indazol-3-il]metoxi}-2-metilpropoxi)acetico como material de partida.

Preparacion del compuesto 42

2-{2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]etoxi}-N-hidroxi-2-metilpropanamida 42a) 2-[(1-bencil-1 H-indazol-3-il)metoxi]etanol

A una solucion de NaOH (2,8 g; 0,07 mol) en etilenglicol (150 ml), agitada a temperatura ambiente, se le anadio 1-bencil-3-clorometilindazol, preparado tal como se describe en el documento EP 0 382 276 (17,6 g; 0,07 mol). La solucion se calento a 130°C durante 4 horas, y a continuacion se enfrio a temperatura ambiente y el disolvente se evaporo a presion reducida. El residuo se recogio en agua (100 ml) y el producto se extrajo con acetato de etilo (3 x 100 ml). Las fases organicas combinadas se concentraron a presion reducida y el residuo crudo obtenido se purifico por cristalizacion en una mezcla de hexano/acetato de etilo aproximadamente 1/1.

Se obtuvieron 13,8 g de 2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]etanol.

p. f. = 67°-69°C

1H-RMN (CDCla, 6 ppm): 2,15 (bs, 1 H), 3,61-3,82 (m, 4 H), 4,97 (s, 2 H), 5,57 (s, 2 H), 7,11-7,38 (m, 8 H), 7,81 (dt, J = 8,15; 0,97 Hz, 1 H).

42b) Acido 2-{2-[(1-bencil-1 H-indazol-3-il)metoxi]etoxi}-2-metilpropanoico

A una mezcla de 2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]etanol (35 g, 0,124 mol) y NaOH (63 g, 1,57 mol) en acetona (180 ml) y agua (1 ml), agitada a temperatura ambiente, se le anadio lentamente una mezcla de cloroformo/acetona 1/1 (80 ml). Durante la adicion, la temperatura se elevo al punto de reflujo. Una vez completada la adicion, el disolvente se evaporo a presion reducida, y el residuo se recogio en agua (100 ml) y se lavo con eter dietflico (3 x 50 ml). La fase acuosa se acidifico con acido acetico glacial y, a continuacion, se extrajo con eter dietflico (3 x 150 ml). Las fases organicas combinadas se concentraron a presion reducida. El residuo crudo obtenido se purifico por cristalizacion en una mezcla de hexano/acetato de etilo 1/1.

Se obtuvieron 12,4 g de acido 2-{2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]etoxi}-2-metil-propanoico. p. f. = 94°-95°C

1H-RMN (CDCla, 6 ppm): 1.43 (s, 6 H), 3.56-3.63 (m, 2 H), 3.65-3.71 (m, 2 H), 5.03 (s, 2 H), 5.58 (s, 2 H), 7.13-7.39 (m, 8 H), 7.83 (dt, J = 8.05; 0.82 Hz, 1 H), 9.60 (bs, 1 H).

42c) 2-{2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]etoxi}-N-hidroxi-2-metilpropanamida

El producto se obtuvo por el metodo descrito para la preparacion del compuesto 34e), utilizando acido 2-{2-[(1- bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]etoxi}-2-metilpropanoico como material de partida.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

Preparacion del compuesto 43

2-{3-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]propoxi}-N-hidroxi-2-metilpropanamida 43a) 3-[(1-bencil-1 H-indazol-3-il)metoxi]propan-1-ol

A una solucion de NaOH (2,8 g; 0,07 mol) en 1,3-propanodiol (150 ml), agitada a temperatura ambiente, se le anadio 1-bencil-3-clorometilindazol, preparado tal como se describe en el documento EP 0 382 276 (17,6 g; 0,07 mol). La solucion se calento a 130°C durante 4 horas, y a continuacion se enfrio a temperatura ambiente y el disolvente se evaporo a presion reducida. El residuo se recogio en agua (100 ml) y el producto se extrajo con acetato de etilo (3 x 100 ml). Las fases organicas combinadas se concentraron a presion reducida y el residuo crudo obtenido se purifico por cromatograffa en columna rapida sobre gel de sflice, utilizando una mezcla de hexano/acetato de etilo aproximadamente 1/1 como eluyente.

Se obtuvieron 10,5 g de 3-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]propan-1-ol.

1H-RMN (CDCla, 6 ppm): 1,85 (q, J = 5,83 Hz, 2 H), 2,75 (bs, 1 H), 3,71 (t, J = 7,74 Hz, 4 H), 4,91 (s, 2 H), 5,55 (s, 2 H), 7,0-7,4 (m, 8 H), 7,80 (d, J = 7,77 Hz, 1H).

43b) Acido 2-{3-[(1-bencil-1 H-indazol-3-il)metoxi]propoxi}-2-metil-propanoico

El producto se obtuvo mediante el metodo descrito en el ejemplo 42b), utilizando 3-[(1-bencil-1H-indazol-3- il)metoxi]propan-1-ol como material de partida. El producto se purifico por doble cristalizacion en una mezcla de hexano/acetato de etilo 7/3.

p. f. = 57°-59°C

1H-RMN (DMSO-d6, 6 ppm): 1,25 (s, 6 H), 1,72 (quint,, J = 6,40 Hz, 2 H), 3,37 (t, J = 6,40 Hz, 2 H), 3,53 (t, J = 6,40 Hz, 2 H), 4,77 (s, 2 H), 5,62 (s, 2 H), 7,14 (ddd, J = 8,00; 7,00; 0,73 Hz, 1 H), 7,19-7,33 (m, 5 H), 7,38 (ddd, J = 8,37; 7,00; 0,91 Hz, 1 H), 7,66 (d, J = 8,42 Hz, 1 H), 7,79 (dt, J = 8,05; 0,91 Hz, 1 H), 12,46 (s, 1 H).

43c) 2-{3-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]propoxi}-N-hidroxi-2-metilpropanamida

El producto se obtuvo por el metodo descrito para la preparacion del compuesto 10, utilizando acido 2-{3-[(1-bencil- 1H-indazol-3-il)metoxi]propoxi}-2-metilpropanoico como material de partida.

Preparacion del compuesto 46

{2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]etoxi}acetamida

46a) 2-[(1-bencil-1 H-indazol-3-il)metoxi]etanol

Se obtuvieron 13,8 g de 2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]etanol.

p. f. = 67°-69°C

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

A una solucion de 2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]etanol (11,28 g, 0,04 mol) en tetrahidrofurano seco (THF) (100 ml), agitada a temperatura ambiente, se le anadio hidruro de sodio al 60% (1,6 g, 0,04 mol). La mezcla se calento a la temperatura de ebullicion durante 2 horas y a continuacion se enfrio a temperatura ambiente y se anadio lentamente una solucion de bromoacetato de etilo (7,4 g, 0,044 mol) en THF (7 ml). Una vez completada la adicion, la mezcla se sometio a reflujo durante 2 horas mas. La reaccion se detuvo enfriando a temperatura ambiente y evaporando el disolvente a presion reducida. El residuo se recogio en NaOH 2 N (100 ml) y el producto se extrajo con eter dietflico (3 x 150 ml). Las fases organicas combinadas se concentraron a presion reducida.

El residuo crudo se recogio en una solucion de NaOH (1,9 g, 0,045 mol) en una mezcla de agua/etanol 1/1 (160 ml). A continuacion, la mezcla se agito a reflujo durante 2 horas. La reaccion se detuvo mediante la concentracion del disolvente a presion reducida, y el residuo se recogio en agua (100 ml) y se lavo con eter dietflico (3 x 50 ml). A continuacion, la fase alcalina se acidifico con HCl concentrado y el solido formado se filtro. El producto se purifico por doble cristalizacion en una mezcla de hexano/acetato de etilo 1/3.

Se obtuvieron 5,8 g de acido {2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]etoxi}acetico.

p. f. = 101°-103°C

1H-RMN (CDCla, 6 ppm): 3,66-3,79 (m, 4H), 4,13 (s, 2 H), 5,01 (s, 2 H), 5,58 (s, 2 H), 7,66 (bs, 1 H), 7,14-7,40 (m, 8 H), 7,84 (dt, J = 8,11; 0,99 Hz, 1 H).

46c) {2-[(1-bencil-1 H-indazol-3-il)metoxi]etoxi}acetamida

El producto se obtuvo por el metodo descrito para la preparacion del compuesto 9, utilizando acido {2-[(1-bencil-1H- indazol-3-il)metoxi]etoxi}acetico como material de partida.

Preparacion del compuesto 47

{2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]etoxi}-N-hidroxi-acetamida

El producto se obtuvo por el metodo descrito para la preparacion del compuesto 10, utilizando acido {2-[(1-bencil-1H- indazol-3-il)metoxi]etoxi}acetico como material de partida.

Preparacion del compuesto 48

{2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]etoxi}-acetohidrazida

Una suspension de acido 2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]etoxi}acetico (19 g; 0,06 mol) en metanol (300 ml) se trato a 0°C con HCl gaseoso durante 4 horas. A continuacion, la mezcla se vertio sobre agua (500 ml) y el producto se extrajo con eter dietflico (3 x 250 ml). Las fases organicas combinadas se lavaron con solucion de bicarbonato de sodio al 5% (2 x 100 ml) seguido de agua (50 ml). El disolvente se evaporo a presion reducida y el residuo crudo se purifico por cristalizacion en hexano. Se obtuvieron 16 g de 2-[(1-benzoil-1H-indazol-3-il)metoxi]-acetato de metilo.

A una solucion de hidrato de hidrazina 1 M (100 ml, 0,100 mol), agitada a 80°C, se le anadio en porciones 2-[(1- bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]-acetato de metilo (19 g, 0,06 mol). Una vez completada la adicion, la mezcla se agito durante 30 minutos a la misma temperatura y, a continuacion, se calento a 120°C durante 2 horas. La reaccion se detuvo diluyendo la mezcla con agua (600 ml) y extrayendo el producto con eter dietflico (4 x 200 ml). A continuacion, las fases organicas combinadas se extrajeron con HCl 2 N (4 x 200 ml). A continuacion, la fase acida se llevo a un pH basico con NaOH 10 N y se extrajo de nuevo con eter dietflico (4 x 200 ml). Las fases organicas combinadas se concentraron a presion reducida y el residuo crudo resultante se purifico por cristalizacion en una mezcla de hexano/acetato de etilo 1/1.

Se obtuvieron 15 g de 2-[(1-bencil-1H-indazol-3-il)metoxi]-acetohidrazida.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

Ejemplo 1

Analisis de la expresion genica de MCP-1 en una linea de monocitos humanos

Se evaluo la capacidad de los compuestos para inhibir la expresion de MCP-1 por parte de celulas MonoMac-6 estimuladas con lipopolisacaridos (LPS). Las celulas se colocaron en placas de 96 pocillos a una concentracion de

50.000 celulas/pocillo. Los compuestos se sometieron a ensayo a la concentracion maxima soluble indicada en la tabla 1 (dentro del intervalo 30-300 pM) y se incubo durante 1 hora. A continuacion, las celulas se estimularon con LPS (100 ng/ml) durante 4 horas.

Se extrajo el ARN total del sedimento celular utilizando el minikit RNeasy (Qiagen), se retrotranscribio con el kit de sfntesis de reactivos de retrotranscripcion TaqMan Reverse (Applied Biosystems) y el ADNc obtenido se utilizo en la reaccion de PCR en tiempo real. La amplificacion se obtuvo en placas de 96 pocillos utilizando el sistema de deteccion de secuencia ABI Prism 7000 (Applied Biosystems), aplicando el siguiente perfil de temperatura: 50°C durante 2 minutos, 95°C durante 10 minutos y 45 ciclos a 95°C durante 15 segundos y 60°C durante 1 minuto. Para la amplificacion, se utilizo un conjunto de cebadores y sonda especfficos para la MCP-1 humana (Applied Biosystems, RefSeq NM_002982.3). Se utilizo un conjunto de cebadores y sonda para la p-actina en pocillos separados como control interno de las muestras con fines de normalizacion. Una vez que la reaccion habfa tenido lugar, se analizaron los datos de fluorescencia mediante el software ABI Prism 7000 SDS, calculando el ciclo umbral (Ct) para cada muestra y llevando a cabo, a continuacion, una cuantificacion relativa por el metodo AACt.

Los resultados obtenidos, expresados como porcentaje de inhibicion, se recopilan en la siguiente tabla 1.

TABLA 1

No.: % de inhibicion [pM]

9: 99 300

10: 61 150

11: 68 150

12: 20 300

13: 72 75

14*: 49 30

15*: 40 75

* Compuesto de referencia que no forma parte de la invencion

Como muestran los resultados obtenidos y recogidos en la tabla 1, los compuestos fueron capaces de inhibir significativamente la expresion inducida por LPS de MCP-1 en una linea de monocitos humanos, mostrando una reduccion de los niveles de ARNm especifico comprendida entre el 20% y el 99%.

Ejemplo 2

Medicion de la produccion de MCP-1 en una linea de monocitos humanos

Se evaluo la capacidad de los compuestos para inhibir la expresion de la protefna MCP-1 por parte de celulas MonoMac-6 estimuladas con lipopolisacaridos (LPS). Las celulas se colocaron en placas de 96 pocillos a una concentracion de 50.000 celulas/pocillo. Los compuestos se sometieron a ensayo a la concentracion maxima soluble indicada en la tabla 2 (dentro del intervalo 30-300 pM) y se incubo durante 1 hora. A continuacion, las celulas se estimularon con LPS (100 ng/ml) durante 20 horas.

La cantidad de MCP-1 producida se midio en los sobrenadantes, adecuadamente diluidos con tampon, mediante un ensayo inmunoenzimatico (ELISA), utilizando un kit comercial (ELISA MCP-1/JE, R&D Systems).

Los resultados obtenidos, expresados como porcentaje de inhibicion, se recopilan en la siguiente tabla 2.

5

10

15

20

25

30

35

TABLA 2

No.: % de inhibicion [pM]

9: 98 300

10: 91 150

11: 79 150

12: 48 300

13: 74 75

14*: 70 30

15*: 59 75

27*: 82 30

* Compuesto de referencia que no forma parte de la invencion

Como muestran los resultados obtenidos y recogidos en la tabla 2, los compuestos fueron capaces de inhibir significativamente la expresion inducida por LPS de MCP-1 en una lfnea de monocitos humanos, mostrando una reduccion de los niveles de protefna producida comprendida entre el 48% y el 98%.

Ejemplo 3

Analisis de la expresion genica de CX3CR1 en una lfnea de monocitos humanos

Se evaluo la capacidad de los compuestos para inhibir la expresion de CX3CR1 por parte de celulas MonoMac-6 estimuladas con lipopolisacaridos (LPS). Las celulas se colocaron en placas de 96 pocillos a una concentracion de

50.000 celulas/pocillo. Los compuestos se sometieron a ensayo a la concentracion maxima soluble indicada en la tabla 3 (dentro del intervalo 30-300 pM) y se incubo durante 1 hora. A continuacion, las celulas se estimularon con LPS (100 ng/ml) durante 20 horas.

Se extrajo el ARN total del sedimento celular utilizando el minikit RNeasy (Qiagen), se retrotranscribio con el kit de sfntesis de reactivos de retrotranscripcion TaqMan Reverse (Applied Biosystems) y el ADNc obtenido se utilizo en la reaccion de PCR en tiempo real. La amplificacion se obtuvo en placas de 96 pocillos utilizando el sistema de deteccion de secuencia ABI Prism 7000 (Applied Biosystems), aplicando el siguiente perfil de temperatura: 50°C durante 2 minutos, 95°C durante 10 minutos y 45 ciclos a 95°C durante 15 segundos y 60°C durante 1 minuto. Para la amplificacion, se utilizo un conjunto de cebadores y sonda especfficos para la CX3CR1 humana (Applied Biosystems, RefSeq NM_001337.3). Se utilizo un conjunto de cebadores y sonda para la p-actina en pocillos separados como control interno de las muestras con fines de normalizacion. Una vez que la reaccion habfa tenido lugar, se analizaron los datos de fluorescencia mediante el software ABI Prism 7000 SDS, calculando el ciclo umbral (Ct) para cada muestra y llevando a cabo, a continuacion, una cuantificacion relativa por el metodo AACt.

Los resultados obtenidos, expresados como porcentaje de inhibicion, se recopilan en la siguiente tabla 3.

TABLA 3

No.: % de inhibicion [pM]

9: 99 300

10: 95 150

11: 90 150

12: 83 300

13: 100 75

14*: 44 30

15*: 89 75

* Compuesto de referencia que no forma parte de la invencion

Como muestran los resultados obtenidos y recogidos en la tabla 3, los compuestos fueron capaces de inhibir significativamente la expresion inducida por LPS de CX3CR1 en una lfnea de monocitos humanos, mostrando una reduccion de los niveles de ARNm especffico comprendida entre el 44% y el 100%.

5

10

15

20

25

Ejemplo 4

Analisis de la expresion genica de p40 en una linea de monocitos humanos

Se evaluo la capacidad de los compuestos para inhibir la expresion de p40 por parte de celulas MonoMac-6 estimuladas con lipopolisacaridos (LPS). Las celulas se colocaron en placas de 96 pocillos a una concentracion de

50.000 celulas/pocillo. Los compuestos se sometieron a ensayo a la concentracion maxima soluble indicada en la tabla 4 (dentro del intervalo 30-300 pM) y se incubo durante 1 hora. A continuacion, las celulas se estimularon con LPS (100 ng/ml) durante 4 horas.

Se extrajo el ARN total del sedimento celular utilizando el minikit RNeasy (Qiagen), se retrotranscribio con el kit de sfntesis de reactivos de retrotranscripcion TaqMan Reverse (Applied Biosystems) y el ADNc obtenido se utilizo en la reaccion de PCR en tiempo real. La amplificacion se obtuvo en placas de 96 pocillos utilizando el sistema de deteccion de secuencia ABI Prism 7000 (Applied Biosystems), aplicando el siguiente perfil de temperatura: 50°C durante 2 minutos, 95°C durante 10 minutos y 45 ciclos a 95°C durante 15 segundos y 60°C durante 1 minuto. Para la amplificacion, se utilizo un conjunto de cebadores y sonda especfficos para la p40 humana (Applied Biosystems, RefSeq NM_002187.2). Se utilizo un conjunto de cebadores y sonda para la p-actina en pocillos separados como control interno de las muestras con fines de normalizacion. Una vez que la reaccion habia tenido lugar, se analizaron los datos de fluorescencia mediante el software ABI Prism 7000 SDS, calculando el ciclo umbral (Ct) para cada muestra y llevando a cabo, a continuacion, una cuantificacion relativa por el metodo AACt.

Los resultados obtenidos, expresados como porcentaje de inhibicion, se recopilan en la siguiente tabla 4.

TABLA 4

No.: % de inhibicion [pM]

9: 96 300

10: 54 150

11: 44 150

13: 59 75

14*: 27 30

15*: 33 75

* Compuesto de referencia que no forma parte de la invencion

Como muestran los resultados obtenidos y recogidos en la tabla 4, los compuestos fueron capaces de inhibir significativamente la expresion inducida por LPS de p40 en una linea de monocitos humanos, mostrando una reduccion de los niveles de ARNm especifico comprendida entre el 33% y el 96%.

Claims

5

10

15

20

25

30

35

40

45

REIVINDICACIONES

1. Compuesto de formula (I)

imagen1

en el que:

A puede ser -X1- o -X1-OC(R9)(R10)-, en el que

Xi puede ser un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono, sustituido opcionalmente con uno o mas grupos alquilo que presentan de 1 a 5 atomos de carbono o uno o mas grupos alcoxi que presentan de 1 a 3 atomos de carbono, y

R9 y R10, que pueden ser iguales o diferentes entre si, pueden ser hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono o un grupo alcoxi que presenta de 1 a 3 atomos de carbono,

Y puede ser N(Rn)(R12), N(R13)O(R14), N(R13)N(R14)(R15), N(R13)-X2-N(R14)(R15), N(R13)-X2-CO-X3, en el que

R11 puede ser hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono, un grupo alcoxi que presenta de 1 a 3 atomos de carbono, o R11, junto con R12, forma un heterociclo de 4 a 7 miembros,

R12 puede ser hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono, un grupo alcoxi que presenta de 1 a 3 atomos de carbono, COR', COOR', CON(R')(R''), con R' y R'', que pueden ser iguales o diferentes entre si, representados por hidrogeno y un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono, o R12, junto con R11, forma un heterociclo de 4 a 7 miembros,

R13 y R15, que pueden ser iguales o diferentes entre si, pueden ser hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono o un grupo alcoxi que presenta de 1 a 3 atomos de carbono,

R14 puede ser hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono, COR', COOR', CON(R')(R''), con R' y R'', que pueden ser iguales o diferentes entre si, representados por hidrogeno y un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono,

X2 puede ser un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono, sustituido opcionalmente con uno o mas grupos alquilo que presentan de 1 a 5 atomos de carbono o uno o mas grupos alcoxi que presentan de 1 a 3 atomos de carbono,

X3 puede ser OH, NH2, NHOH o NHNH2,

R1 y R2, que pueden ser iguales o diferentes entre si, pueden ser hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono o un grupo alcoxi que presenta de 1 a 3 atomos de carbono,

R3, R4 y R8, que pueden ser iguales o diferentes entre si, pueden ser hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono, un grupo alcoxi que presenta de 1 a 3 atomos de carbono, un atomo de halogeno, -OH, -N(R')(R''), -N(R')COR'', -CN, -CONR'R'', -SO2NR'R'', -SO2R', nitro y trifluorometilo; con R' y R'', que pueden ser iguales o diferentes entre si, representados por hidrogeno y un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono,

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

R5 puede ser hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono, un grupo alcoxi que presenta de 1 a 3 atomos de carbono, un atomo de halogeno, -OH, -N(R')(R”), -N(R')COR”, nitro y trifluorometilo, o R5, junto con uno de entre R6 y R7, forma un anillo que presenta 5 o 6 atomos de carbono; con R' y R'', que pueden ser iguales o diferentes entre si, representados por hidrogeno y un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono,

R6 y R7, que pueden ser iguales o diferentes entre si, pueden ser hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono, o juntos forman un grupo C=O, o uno de entre R6 y R7, junto con R5, forma un anillo que presenta 5 o 6 atomos de carbono.
2. Compuesto segun la reivindicacion 1, caracterizado por que X1 es un grupo alquilo que presenta de 1 a 3 atomos de carbono, sustituido opcionalmente con uno o mas grupos alquilo que presentan de 1 a 3 atomos de carbono, o uno o mas grupos alcoxi que presentan 1 o 2 atomos de carbono.
3. Compuesto segun la reivindicacion 1, caracterizado por que X1 se selecciona de entre el grupo que comprende un grupo CH2, un grupo CH2CH2 o un grupo C(CH3)2, y R9 y R10, que pueden ser iguales o diferentes entre si, son hidrogeno o un grupo CH3.
4. Compuesto segun la reivindicacion 1, caracterizado por que el residuo A se selecciona de entre el grupo que comprende un grupo CH2, un grupo CH2CH2, un grupo C(CH3)2, un grupo CH2CH2OCH2, un grupo CH2CH2OC(CH3)2 y un grupo CH2CH2CH2OC(CH3)2.
5. Compuesto segun la reivindicacion 1, caracterizado por que R11 es un atomo de hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 3 atomos de carbono, un grupo alcoxi que presenta 1 o 2 atomos de carbono, o R11 junto con R12 forma un heterociclo de 5 o 6 miembros.
6. Compuesto segun la reivindicacion 1, caracterizado por que R12 es un atomo de hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 3 atomos de carbono, un grupo alcoxi que presenta 1 o 2 atomos de carbono, CON(R')(R''), con R' y R'', que pueden ser iguales o diferentes entre si, representados por hidrogeno y un grupo alquilo que presenta de 1 a 3 atomos de carbono, o R12 junto con R11 forma un heterociclo de 5 o 6 miembros.
7. Compuesto segun la reivindicacion 1, caracterizado por que R13 y R15, que pueden ser iguales o diferentes entre si, son un atomo de hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 3 atomos de carbono, o un grupo alcoxi que presenta 1 o 2 atomos de carbono.
8. Compuesto segun la reivindicacion 1, caracterizado por que R14 es un atomo de hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 3 atomos de carbono, COR', COOR', CON(R')(R''), con R' y R'', que pueden ser iguales o diferentes entre si, representados por hidrogeno y un grupo alquilo que presenta de 1 a 3 atomos de carbono.
9. Compuesto segun la reivindicacion 1, caracterizado por que X2 es un grupo alquilo que presenta de 1 a 3 atomos de carbono, sustituido opcionalmente con uno o mas grupos alquilo que presentan de 1 a 3 atomos de carbono, o uno o mas grupos alcoxi que presentan 1 o 2 atomos de carbono.
10. Compuesto segun la reivindicacion 1, caracterizado por que X3 se selecciona de entre el grupo que comprende OH, NH2, NHOH y NHNH2.
11. Compuesto segun la reivindicacion 1, caracterizado por que R1 y R2, que pueden ser iguales o diferentes entre si, son un atomo de hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 3 atomos de carbono, o un grupo alcoxi que presenta 1 o 2 atomos de carbono.
12. Compuesto segun la reivindicacion 1, caracterizado por que R3, R4 y R8, que pueden ser iguales o diferentes entre si, se seleccionan de entre el grupo que comprende un atomo de hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 3 atomos de carbono, un grupo alcoxi que presenta 1 o 2 atomos de carbono, un atomo de Br, Cl o F, un grupo OH, un grupo nitro, un grupo trifluorometilo o un grupo N(R')(R'') o -N(R')COR'', -CN, -CONR'R'', -SO2NR'R'', - SO2R', con R' y R'', que pueden ser iguales o diferentes entre si, representados por un atomo de hidrogeno y un grupo alquilo que presenta de 1 a 3 atomos de carbono.

5

10

15

20

25

30

35

40

45
13. Compuesto segun la reivindicacion 1, caracterizado por que R5 se selecciona de entre el grupo que comprende un atomo de hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 3 atomos de carbono, un grupo alcoxi que presenta 1 o 2 atomos de carbono, un atomo de halogeno, un grupo OH, o R5, junto con uno de entre R6 y R7, forma un anillo que presenta 5 o 6 atomos de carbono.
14. Compuesto segun la reivindicacion 1, caracterizado por que R6 y R7, que pueden ser iguales o diferentes entre si, se seleccionan de entre el grupo que comprende un atomo de hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 3 atomos de carbono, o juntos forman un grupo C=O, o uno de entre R6 y R7, junto con R5, forma un anillo que presenta 5 o 6 atomos de carbono.
15. Composicion farmaceutica que comprende el compuesto de formula (I) segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, o una sal o ester farmaceuticamente aceptables del mismo, y por lo menos un vehfculo farmaceuticamente aceptable.
16. Composicion farmaceutica segun la reivindicacion 15, caracterizada por que dicha sal farmaceuticamente aceptable es una sal de adicion con acidos o bases organicos o minerales fisiologicamente aceptables.
17. Composicion farmaceutica segun la reivindicacion 16, caracterizada por que dichos acidos fisiologicamente aceptables se seleccionan de entre el grupo que comprende acido clorhfdrico, acido bromhfdrico, acido sulfurico, acido fosforico, acido nftrico, acido acetico, acido ascorbico, acido benzoico, acido cftrico, acido fumarico, acido lactico, acido maleico, acido metanosulfonico, acido oxalico, acido para-toluenosulfonico, acido bencenosulfonico, acido succfnico, acido tanico y acido tartarico.
18. Composicion farmaceutica segun la reivindicacion 16, caracterizada por que dichas bases fisiologicamente aceptables se seleccionan de entre el grupo que comprende hidroxido de amonio, hidroxido de calcio, carbonato de magnesio, hidrogenocarbonato de sodio, hidrogenocarbonato de potasio, arginina, betafna, cafefna, colina, N,N-dibenciletilendiamina, dietilamina, 2-dietilaminoetanol, 2-dimetilaminoetanol, etanolamina, etilendiamina, N-etilmorfolina, N-etilpiperidina, N-metilglucamina, glucamina, glucosamina, histidina, N-(2-hidroxietil)piperidina, N-(2-hidroxietil)pirrolidina, isopropilamina, lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperidina, teobromina, trietilamina, trimetilamina, tripropilamina y trometamina.
19. Composicion farmaceutica segun la reivindicacion 15, caracterizada por que dicho ester farmaceuticamente aceptable esta formado con alcoholes o acidos organicos fisiologicamente aceptables.
20. Composicion farmaceutica segun cualquiera de las reivindicaciones 15 a 19, caracterizada por que dicha composicion contiene un estereoisomero o un enantiomero del compuesto de formula (I), o una sal o un ester farmaceuticamente aceptables del mismo, o una mezcla de los mismos.
21. Composicion farmaceutica segun cualquiera de las reivindicaciones 15 a 20, caracterizada por que dicho vehfculo farmaceuticamente aceptable se selecciona de entre el grupo que comprende deslizantes, aglutinantes, disgregantes, rellenos, diluyentes, aromatizantes, colorantes, fluidificantes, lubricantes, agentes conservantes, humectantes, absorbentes y edulcorantes.
22. Utilizacion de un compuesto de formula (I)

imagen2

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

en el que:

A puede ser -Xi- o -Xi-OC(Rg)(Ri0)-, en el que

Xi puede ser un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono, sustituido opcionalmente con uno o mas grupos alquilo que presentan de 1 a 5 atomos de carbono, o uno o mas grupos alcoxi que presentan de 1 a 3 atomos de carbono, y

Rg y R10, que pueden ser iguales o diferentes entre si, pueden ser hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono o un grupo alcoxi que presenta de 1 a 3 atomos de carbono,

Y puede ser N(Rn)(R12), N(R13)O(R14), N(R13)N(R14)(R15), N(R13)-X2-N(R14)(R15), N(R13)-X2-CO-X3, en el que

R11 puede ser hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono, un grupo alcoxi que presenta de 1 a 3 atomos de carbono, o R11 junto con R12 forma un heterociclo de 4 a 7 miembros,

R12 puede ser hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono, un grupo alcoxi que presenta de 1 a 3 atomos de carbono, COR', COOR', CON(R')(R''), con R' y R'', que pueden ser iguales o diferentes entre si, representados por hidrogeno y un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono,

0 R12 junto con R11 forma un heterociclo de 4 a 7 miembros,

R13 y R15, que pueden ser iguales o diferentes entre si, pueden ser hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono o un grupo alcoxi que presenta de 1 a 3 atomos de carbono,

R14 puede ser hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono, COR', COOR', CON(R')(R''), con R' y R'', que pueden ser iguales o diferentes entre si, representados por hidrogeno y un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono,

X2 puede ser un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono, sustituido opcionalmente con uno o mas grupos alquilo que presentan de 1 a 5 atomos de carbono, o uno o mas grupos alcoxi que presentan de

1 a 3 atomos de carbono,

X3 puede ser OH, NH2, NHOH o NHNH2,

R1 y R2, que pueden ser iguales o diferentes entre si, pueden ser hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono o un grupo alcoxi que presenta de 1 a 3 atomos de carbono,

R3, R4 y R8, que pueden ser iguales o diferentes entre si, pueden ser hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono, un grupo alcoxi que presenta de 1 a 3 atomos de carbono, un atomo de halogeno, -OH, -N(R')(R''), -N(R')COR'', -CN, -CONR'R'', -SO2NR'R'', -SO2R', nitro y trifluorometilo; con R' y R'', que pueden ser iguales o diferentes entre si, representados por hidrogeno y un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono,

R5 puede ser hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono, un grupo alcoxi que presenta de 1 a 3 atomos de carbono, un atomo de halogeno, -OH, -N(R')(R''), -N(R')COR'', nitro y

trifluorometilo, o R5 junto con uno de entre R6 y R7 forma un anillo que presenta 5 o 6 atomos de carbono; con R' y R'', que pueden ser iguales o diferentes entre si, representados por hidrogeno y un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono,

R6 y R7, que pueden ser iguales o diferentes entre si, pueden ser hidrogeno, un grupo alquilo que presenta de 1 a 5 atomos de carbono, o formar conjuntamente un grupo C=O, o uno de entre R6 y R7, junto con R5, forma un anillo que presenta 5 o 6 atomos de carbono,

para la preparacion de una composicion farmaceutica para tratar enfermedades basadas en la expresion de MCP-1, CX3CR1 y p40, en la que dichas enfermedades basadas en la expresion de MCP-1 y CX3CR1 se seleccionan de entre el grupo que comprende enfermedades articulares, enfermedades renales, enfermedades

cardiovasculares, sfndrome metabolico, obesidad, diabetes, resistencia a la insulina y cancer, y dichas enfermedades basadas en la expresion de p40 se seleccionan de entre el grupo que comprende enfermedades autoinmunitarias, enfermedades inflamatorias degenerativas cronicas y cancer.

5 23. Utilizacion segun la reivindicacion 22, caracterizada por que dichas enfermedades basadas en la expresion de

MCP-1 se seleccionan de entre el grupo que comprende artritis reumatoide, artritis inducida por infecciones vfricas, artritis psoriasica, artrosis, nefritis lupica, nefropatfa diabetica, glomerulonefritis, poliquistosis renal, enfermedad pulmonar intersticial, fibrosis, esclerosis multiple, enfermedad de Alzheimer, demencia asociada al VIH, dermatitis atopica, psoriasis, vasculitis, restenosis, ateroesclerosis, infarto de miocardio, angina de pecho, enfermedades 10 coronarias agudas, adenomas, carcinomas y metastasis, y enfermedades metabolicas.
24. Utilizacion segun la reivindicacion 22, caracterizada por que dichas enfermedades basadas en la expresion de CX3CR1 se seleccionan de entre el grupo que comprende artritis reumatoide, nefritis lupica, nefropatfa diabetica, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, trastornos coronarios, restenosis, ateroesclerosis, infarto de miocardio y

15 angina de pecho.
25. Utilizacion segun la reivindicacion 22, caracterizada por que dichas enfermedades basadas en la expresion de p40 se seleccionan de entre el grupo que comprende artritis reumatoide, psoriasis, glomerulonefritis, diabetes, lupus eritematoso, diabetes, enfermedad de Crohn y tumores.