ES2560449T3

ES2560449T3 - Una mezcla para administración transdérmica de compuestos de peso molecular bajo y alto

Info

Publication number: ES2560449T3
Application number: ES05826138.9T
Authority: ES
Inventors: Frederick Jordan; Geoff E. Dolbear
Original assignee: ORYXE
Current assignee: ORYXE
Priority date: 2004-05-28
Filing date: 2005-05-25
Publication date: 2016-02-19
Anticipated expiration: 2025-05-25
Also published as: HUE026644T2; HK1222789A1; HK1102290A1; US20140200531A1; US20080154210A1; PT1765310E; AU2005294805B2; EP3001990A1; AU2005294805A1; DK1765310T3

Abstract

Una composición de suministro transdérmico que comprende una lipoesfera, en la cual dicha lipoesfera comprende un resto graso etoxilado o resto lipídico y un agente suministrado, en la cual la cantidad de etoxilación de dicho resto graso o resto lipídico es 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, ó 19 etoxilaciones por molécula, y en la cual dicho resto graso o resto lipídico comprende 10 residuos de carbono.

Description

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La Figura 3A representa esquemáticamente una sección transversal de la porción superior de una cámara dosificadora parcialmente llena que tiene una pared superior configurada para permitir el escape del aire, pero que evita el escape de líquido.

5 La Figura 3B representa esquemáticamente la porción superior de la cámara dosificadora de la Figura 3A, en la cual la cámara dosificadora está llena y se evita el escape de líquido.

La Figura 4A representa esquemáticamente una sección transversal del dispensador de la Figura 2, tomada a lo largo de la línea 4, en la cual el miembro deslizable se encuentra en una primera posición que permite el llenado de la cámara dosificadora.

La Figura 4B representa esquemáticamente la sección transversal de la Figura 4A, en la cual el miembro deslizable se encuentra en una segunda posición que permite el suministro del fluido dosificado.

15 DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

Varias composiciones de suministro transdérmico y dispositivos para proporcionar dichas composiciones a un individuo se describen en esta memoria. Las realizaciones de la invención pueden utilizarse para suministrar a un individuo transdérmicamente productos farmacéuticos, profilácticos, diagnósticos, y agentes cosméticos de peso molecular bajo o alto (o a la vez bajo y alto). Las composiciones de suministro transdérmico dadas a conocer en esta memoria son útiles para el suministro de diversos tipos de compuestos que incluyen, pero sin carácter limitante, ácidos nucleicos, péptidos, péptidos modificados, moléculas pequeñas, preparaciones inmunógenas, y análogos. Algunas realizaciones incluyen composiciones de suministro transdérmico que pueden administrar compuestos que tienen pesos moleculares mayores que 6000 daltons. Una realización, por ejemplo, incluye una composición de 25 suministro transdérmico que puede administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un fármaco anti-inflamatorio no esteroidal (NSAID). Aun así, más realizaciones se refieren a composiciones de suministro transdérmico que pueden administrar hormonas, anestésicos, preparaciones de colágeno, (v.g., colágenos solubles, colágenos hidrolizados y fragmentos de colágeno), compuestos farmacéuticos cardiovasculares, compuestos anti-infecciosos (v.g., antibióticos y compuestos antivirales), tratamientos relacionados con la diabetes, composiciones inmunógenas, vacunas, modificadores de la respuesta inmune, inhibidores de enzimas, analgésicos, (v.g., una formulación que comprende capsaicina o boswellina o ambas), terapias contra la migraña, sedantes, compuestos de obtención de imágenes y compuestos de contraste. Estos ejemplos se proporcionan para demostrar que las realizaciones de la invención pueden utilizarse para administrar por vía transdérmica compuestos de peso molecular bajo y alto, debiendo entenderse que pueden suministrarse eficazmente al cuerpo muchas otras moléculas, utilizando las

35 realizaciones descritas en esta memoria, en cantidades que son beneficiosas terapéutica, profiláctica, o cosméticamente.

Algunas composiciones de suministro transdérmico descritas en esta memoria comprenden una lipoesfera que está configurada para suministrar una gran diversidad de agentes administrados. Como se utiliza en esta memoria, el término "lipoesfera" se refiere a una estructura esférica o de forma ovoide que comprende un resto graso etoxilado o propoxilado, que contiene o está asociada con (v.g., unida a) un agente suministrado. Es decir, el término "lipoesferas" incluye, pero sin carácter limitante, liposomas que comprenden un aceite etoxilado o propoxilado, ácido graso, amina grasa, o alcohol graso. De acuerdo con ello, el término "resto graso" puede hacer referencia a un ácido graso, un alcohol graso, amina grasa, u otro derivado de ácido graso. El resto graso o resto lipídico etoxilado tiene a

45 la vez propiedades hidrófobas e hidrófilas, en el sentido de que la cadena hidrocarbonada del resto graso o resto lipídico es hidrófoba, y los grupos polietoxi confieren carácter hidrófilo a la molécula. La preparación de restos grasos y restos lipídicos propoxilados es bien conocida (véase, v.g., Raths et al., supra). Debido a su semejanza en estructura, los restos grasos propoxilados y los lípidos comparten muchas de las mismas características que los restos grasos y lípidos etoxilados. De acuerdo con ello, restos grasos y restos lipídicos que están propoxilados o etoxilados y propoxilados son mejoradores de la penetración y mejoradores del suministro transdérmico contemplados.

En las realizaciones descritas en esta memoria, el número de etoxilaciones se ajusta a un número entre 10 y 19 etoxilaciones por molécula para conseguir un suministro transdérmico óptimo del agente suministrado. Ácidos

55 grasos, alcoholes grasos, y aminas grasas etoxilados(as), están disponibles comercialmente (v.g., Ethox Chemicals, LLC, Greenville, SC; A&E Connock, Ltd., Hampshire, Inglaterra; Floratech, Glibert, AZ). Alternativamente, restos grasos etoxilados se sintetizan utilizando métodos conocidos por los expertos en la técnica (Véanse Patente U.S. No. 6, 300,508 otorgada a Raths et al.; Patente U.S. No. 5, 936,107 otorgada a Raths et al.) por reacción de restos grasos con óxido de etileno.

A modo de ejemplo, se pueden preparar aceites etoxilados utilizando un proceso de dos pasos que comienza con la transesterificación con adición de glicerol seguida por etoxilación del producto de esta reacción. La transesterificación se realiza por cualquier método disponible para los expertos en la técnica, tal como calentamiento de un éster, tal como los glicerol-ésteres presentes en aceites vegetales naturales, en presencia de otro alcohol o 65 poliol, tal como glicerol, en presencia de un catalizador. Catalizadores útiles en la reacción de transesterificación

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incluyen catalizadores gaseosos, tales como ácido clorhídrico borboteado a través de la mixtura de reacción. Alternativamente, pueden utilizarse también catalizadores sólidos tales como óxido de cinc o los acetatos de cobre, cobalto o cinc. La reacción de transesterificación produce uno o dos ácidos grasos unidos a una molécula de glicerol. La ratio de mono-y di-ésteres puede controlarse por la cantidad de glicerol utilizada en la reacción (a saber,

5 ratios más altas de aceite:glicerol producirán más -OH reactivo, y menos restos de ácido graso por molécula, y una ratio más baja de glicerol:aceite proporcionaría más ácidos grasos, como es evidente para los expertos en la técnica. Los grupos hidroxilo se hacen reaccionar subsiguientemente con óxido de etileno en presencia de un catalizador apropiado (v.g. aluminio) utilizando métodos conocidos por los expertos en la técnica.

Restos grasos purificados disponibles comercialmente de una diversidad de fuentes (v.g., SIGMA-Aldrich, St. Louis, MO), son adecuados para uso en las composiciones de suministro transdérmico arriba descritas.

Realizaciones alternativas de composiciones de suministro transdérmico descritas en esta memoria comprenden un mejorador de la penetración que incluye un resto lipídico etoxilado. Se descubrió que los lípidos etoxilados (v.g., 15 aceites etoxilados) pueden utilizarse como mejoradores de la penetración transdérmica en el sentido de que los mismos transportan eficazmente compuestos de peso molecular bajo y alto a través de la piel. Se descubrió también que los aceites etoxilados, por sí mismos, tienen aplicaciones terapéuticas y cosméticas (v.g., la reducción de la aparición de las arañas venosas y marcas de estiramiento o la promoción de la recuperación acelerada de las quemaduras en la piel). Los lípidos etoxilados pueden crearse de muchas maneras; sin embargo, un método preferido implica la reacción de óxido de etileno con un aceite vegetal, de nueces (v.g., nuez de macadamia), animal,

o sintético. En realizaciones en las que la composición de suministro transdérmico comprende un aceite etoxilado, se contempla que, en algunas realizaciones, se utilizan los restos grasos etoxilados para reforzar o suplementar los aceites etoxilados en algunas realizaciones. A modo de ejemplo, el aceite de nuez de macadamia etoxilado puede reforzarse con ácido palmítico u oleico etoxilado.

25 Varios mejoradores del suministro transdérmico descritos en esta memoria son compuestos que tienen una cadena principal multifuncional. La cadena principal multifuncional puede ser una de muchas estructuras químicas que tienen al menos dos residuos hidrógeno reactivos, de tal modo que la cadena principal multifuncional es la base de un mejorador del suministro transdérmico con al menos un resto graso y al menos un grupo polietoxi. Los residuos de hidrógeno reactivo (R) están presentes en grupos -OH, -COOH, -SH, y -NH2.

El grupo polietoxi tiene la estructura:

-O-(CH2-CH2-O-)nH

35 Las realizaciones en las que n está comprendido entre 10 y 19 por molécula del mejorador de suministro transdérmico poseen propiedades de suministro transdérmico excelentes.

En realizaciones preferidas, el componente del resto graso del mejorador del suministro transdérmico tiene una cadena de carbonos de al menos 10 residuos de carbono. La longitud de cadena del resto graso puede ser por ejemplo 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, ó 24 residuos. Adicionalmente, el resto graso puede ser saturado, insaturado, o poliinsaturado.

Deseablemente, la cadena principal multifuncional tiene al menos tres grupos reactivos. Los grupos reactivos

45 pueden ser homogéneos. Por ejemplo, en algunas realizaciones, la cadena principal multifuncional es un tri-alcohol que comprende tres grupos -OH, tal como 1,2,3-butanotriol, 1,2,4-butanotriol, pirogalol (1,2,3-bencenotriol), hidroxiquinol (1,2,4-bencenotriol), trimetilolpropano, 1,2,6-hexanotriol y análogos. Otros ejemplos de cadenas principales multifuncionales adecuadas como la base de un intensificador del suministro transdérmico incluyen triácidos, que comprenden tres grupos carboxilato, tales como ácido hemi-melítico, ácido trimelítico, ácido trimésico, ácido nitrilotriacético, y análogos. Los expertos en la técnica apreciarán que otros ácidos tricarboxílicos son adecuados como cadenas principales multifuncionales.

Cadenas principales multifuncionales alternativas tienen grupos reactivos heterogéneos (v.g, una combinación de al menos dos grupos reactivos diferentes (v.g., un grupo COOH y un grupo NH2). Por ejemplo, aminoácidos tales como

55 ácido glutámico, ácido aspártico, cisteína, glutamina, serina, treonina, tirosina, y lisina tienen tres grupos reactivos y son adecuados como cadenas principales multifuncionales. Análogamente, di-y tri-péptidos tendrán tres o más grupos reactivos y son por tanto adecuados como cadenas principales multifuncionales.

Trietanolamina, dietanolamina, dimetilolurea, y glucosamina son otras cadenas principales multifuncionales ilustrativas con grupos reactivos heterogéneos.

Los carbohidratos simples son aldehídos y cetonas pequeños de cadena lineal con varios grupos hidroxilo, usualmente uno en cada carbono excepto el grupo funcional. Debido a la presencia de los grupos -OH múltiples en los carbohidratos tales como tetrosas, pentosas, hexosas, etcétera, estos compuestos son otra fuente de cadenas 65 principales multifuncionales útiles como componentes de los mejoradores de suministro transdérmico. Carbohidratos

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ilustrativos que son componentes útiles de los mejoradores del suministro transdérmico incluyen glucosa, manosa, fructosa, ribosa, xilosa, treosa, eritosa, y análogos.

Azúcar-alcoholes tales como sorbitol, manitol, xilitol, eritritol, pentaeritritol, e inositol son componentes útiles de los 5 mejoradores de suministro transdérmico.

Sin desear quedar ligados a ningún mecanismo o modo de acción particular y ofrecidos sólo para aumentar el conocimiento en el campo, se contempla que el resto graso etoxilado, resto lipídico etoxilado, o cadena principal multifuncional etoxilada encapsula el agente suministrado en una composición de tipo esfera, formando una "lipoesfera" que exhibe propiedades de suministro transdérmico notablemente mejoradas.

Cada una de las composiciones de suministro transdérmico descritas puede contener compuestos adicionales tales como alcoholes, solubilizadores no iónicos o emulsificadores. En algunas composiciones, estos compuestos se añaden para mejorar la solubilidad del agente suministrado o la eficacia o fluidez de la lipoesfera, el mejorador de

15 penetración, o el mejorador del suministro transdérmico. Componentes hidrófilos adecuados incluyen, pero sin carácter limitante, etilenglicol, propilenglicol, dimetil-sulfóxido (DMSO), dimetil-polisiloxano (DMPX), ácido oleico, ácido caprílico, alcohol isopropílico, 1-octanol, etanol (desnaturalizado o anhidro), y otros alcoholes de grado farmacéutico o absolutos.

Otras realizaciones de las composiciones de suministro transdérmico comprenden un adyuvante acuoso. Adyuvantes acuosos incluyen, pero sin carácter limitante, agua (destilada, desionizada, filtrada, o preparada de otro modo), jugo de Aloe Vera, y otros extractos de plantas tales como clorofila o Spirulina. Así, varias realizaciones de la invención tienen un componente hidrófobo/hidrófilo que comprende un resto graso etoxilado (v.g. ácido palmitoleico, ácido oleico, o ácido palmítico) o un aceite etoxilado (v.g., aceite de nuez de macadamia, aceite de coco, aceite de

25 eucalipto, aceites sintéticos, aceite de ricino, glicerol, aceite de maíz, aceite de jojoba, o aceite de emú) y pueden contener un componente hidrófilo que comprende un alcohol, un solubilizador no iónico, o un emulsificador (v.g., alcohol isopropílico) y/o, opcionalmente, un adyuvante acuoso, tal como agua y/o extracto de Aloe Vera.

Otros materiales pueden ser también componentes de una composición de suministro transdérmico que incluye perfume, cremas, ungüentos, colorantes, y otros compuestos con tal que el componente añadido no afecte desfavorablemente al suministro transdérmico del agente administrado. Se ha encontrado que el Aloe Vera, que permite el suministro transdérmico de agentes suministrados de peso molecular alto, con inclusión de colágeno que tiene un peso molecular mayor que 6000 daltons, puede eliminarse de las composiciones de suministro transdérmico que comprenden un aceite ligero (v.g., aceite de nuez de macadamia) que ha sido etoxilado hasta el intervalo de 10

35 19 etoxilaciones/molécula. Las formulaciones que carecen de Aloe Vera proporcionan el beneficio inesperado de un suministro transdérmico eficiente, aplicación uniforme y penetración rápida, haciendo estas formulaciones superiores a las formulaciones que contienen Aloe Vera.

Análogamente, las formulaciones de composiciones de suministro transdérmicos que carecen de alcohol proporcionan el beneficio esperado de suministro transdérmico eficiente, aplicación uniforme, y penetración rápida sin el secado o la irritación producidos por el alcohol. Adicionalmente, las formulaciones que carecen de agua u otros adyuvantes acuosos proporcionan suministro transdérmico eficiente en tanto que mantienen la concentración máxima posible de agente suministrado y, asimismo, proporcionan penetración rápida sin los efectos de secado de la piel observados con algunas formulaciones que contienen alcohol.

45 Una molécula o una mixtura de moléculas (v.g., un agente farmacéutico, químico o cosmético) que se suministran al cuerpo utilizando una realización de una composición de suministro transdérmico se conoce(n) como "agentes suministrados". Un agente suministrado que puede administrarse al cuerpo utilizando una realización de la invención puede incluir, por ejemplo, una proteína o péptido, un azúcar, un ácido nucleico, un producto químico, un lípido, o derivados de los mismos. Agentes suministrados deseables incluyen, pero sin carácter limitante, glicoproteínas, enzimas, genes, ácidos nucleicos, péptidos, fármacos, y ceramidas. Agentes suministrados preferidos incluyen NSAIDs, colágenos o fragmentos de los mismos, capsaicina) y boswellina. En algunas realizaciones, una composición de suministro transdérmico comprende una combinación de dos cualesquiera de los agentes suministrados mencionados anteriormente. Otros agentes suministrado incluyen, por ejemplo, hormonas, fármacos

55 anti-inflamatorios, anestésicos, analgésicos, sedantes, terapias contra la migraña, productos farmacéuticos cardiovasculares, agentes anti-infecciosos, terapias relacionadas con la diabetes, vacunas, agentes de obtención de imágenes, agentes de contraste, glucosamina, sulfato de condroitina, MSM, perfumes, melasina, nicotina, análogos de nicotina, péptidos, aminoácidos, ácidos nucleicos, y peptidomiméticos.

Además de las composiciones arriba mencionadas, se proporcionan métodos de fabricación y utilización de las realizaciones de la invención. En un aspecto, se prepara una composición de suministro transdérmico por mezcla de un resto graso etoxilado con un agente suministrado.

En otro aspecto, se prepara una composición de suministro transdérmico por mezcla de un componente hidrófilo con 65 un componente hidrófobo y un adyuvante acuoso. Dependiendo de la solubilidad del agente suministrado, el agente

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uso de un hepsil de peso molecular medio como agente suministrado tiene por objeto demostrar que realizaciones de la invención pueden suministrar muchos compuestos de peso molecular medio a las células del cuerpo.

En algunas realizaciones, aminoácidos, péptidos, nucleótidos, nucleósidos, y ácidos nucleicos se suministran

5 transdérmicamente a las células del cuerpo utilizando una realización de la composición de suministro transdérmico descrita en esta memoria. Es decir, cualquier aminoácido o péptido que tenga al menos, menos de, más de, o igual a 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 75, 100, 125, 150, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500, 5000, 7000, o 10.000 aminoácidos puede incorporarse en una composición de suministro transdérmico descrita en esta memoria, y dicho agente suministrado puede suministrarse a las células del cuerpo poco tiempo después de la aplicación de la composición. Estas realizaciones pueden utilizarse, por ejemplo, para estimular una respuesta inmune, promover la curación de las heridas, inducir la síntesis de colágeno, o suplementar el colágeno. Estas realizaciones son útiles también para el suministro de hormonas peptídicas. Ejemplos no limitantes de hormonas peptídicas que son agentes suministrados en ciertas

15 realizaciones incluyen oxitocina (SEQ ID No: 2), vasopresina (SEQ ID No: 3), hormona estimulante de los melanocitos (SEQ ID No: 4) (alfa), SEQ ID No: 5 (beta), SEQ ID No: 6 (gamma)), corticotropina (SEQ ID No: 7), lipotropina (SEQ ID No: 8 (beta), SEQ ID No: 9 (gamma)), tirotropina (SEQ ID No: 10), hormona del crecimiento (SEQ ID No: 1), prolactina (SEQ ID No: 11), hormona luteinizante (SEQ ID No: 12), gonadotropina coriónica humana (disponible de SIGMA-Aldrich, St. Louis, MO, Cat. No. C1063), hormona estimulante del folículo, factor de liberación de corticotropina (SEQ ID No: 13), factor liberador de gonadotropina (SEQ ID No: 43), factor liberador de prolactina (SEQ ID No: 14), factor inhibidor de prolactina (SEQ ID No: 15), factor liberador de hormona del crecimiento (SEQ ID No: 16), somatostatina (SEQ ID No: 17), factor liberador de tirotropina (SEQ ID No: 18), calcitonina (SEQ ID No: 19), péptido relacionado con el gen de calcitonina (SEQ ID No: 20), hormona paratiroidea (SEQ ID No: 21), péptido 1 afín a glucagón (SEQ ID No: 22), polipéptido insulinotrópico dependiente de glucosa (SEQ ID No: 23), gastrina (SEQ ID

25 No: 24), secretina (SEQ ID No: 25), colecistoquinina (SEQ ID No: 26), motilina (SEQ ID No: 27), péptido vasoactivo intestinal (SEQ ID No: 28), sustancia P (SEQ ID No: 30), polipéptido pancreático (SEQ ID No: 31), tirosina-quinasa peptídica (SEQ ID No: 32), tirosina neuropeptídica (SEQ ID No: 33), anfirregulina (SEQ ID No: 34), insulina (disponible de SIGMA-Aldrich, St. Louis, MO, Cat. No. I643), glucagón (SEQ ID No: 35), lactógeno placentario (SEQ ID No: 37), relaxina (SEQ ID No: 38), inhibina A (SEQ ID No: 39), inhibina B (SEQ ID No: 40), endorfinas (v.g., SEQ ID No: 41), angiotensina II (SEQ ID No: 42), péptido natriurético atrial (SEQ ID No:).

Varias otras hormonas no son hormonas peptídicas, pero son sin embargo agentes suministrados adecuados en realizaciones de la invención. De acuerdo con ello, realizaciones de la invención incluyen cortisol (disponible de SIGMA-Aldrich, St. Louis, MO, Cat. No. H3160), corticosterona (disponible de SIGMA-Aldrich, St. Louis, MO, Cat.

35 No. C27840), aldosterona (disponible de SIGMA-Aldrich, St. Louis, MO, Cat. No. 05521), epinefrina (disponible de SIGMA-Aldrich, St. Louis, MO, Cat. No. 02252), norepinefrina (disponible de SIGMA-Aldrich, St. Louis, MO, Cat. No. 74460), calcitriol (androstieno (disponible de SIGMA-Aldrich, St. Louis, MO, Cat. No. 17936), progesterona (disponible de SIGMA-Aldrich, St. Louis, MO, Cat. No. P8783), testosterona (disponible de SIGMA-Aldrich, St. Louis, MO, Cat. No. T1500), androsteno (disponible de SIGMA-Aldrich, St. Louis, MO), y melatonina (disponible de SIGMA-Aldrich, St. Louis, MO, Cat. No. 63610).

Cualquier nucleótido o nucleósido, nucleótido o nucleósido modificado, o ácido nucleico que tenga al menos 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 75, 100, 125, 150, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900,

45 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500, 5000, 7000, o 10.000 o más nucleótidos puede incorporarse en una composición de suministro transdérmico descrita en esta memoria, y dicho agente suministrado puede suministrarse a las células del cuerpo poco después de la aplicación de la composición. Estas realizaciones pueden utilizarse también, por ejemplo, para estimular una respuesta inmune, promover la curación de las heridas, o inducir la síntesis de colágeno.

Varios inmunógenos de ácido nucleico y/o vacunas y terapias se conocen en la técnica y son útiles como agentes suministrados en realizaciones de las composiciones de suministro transdérmico descritas en esta memoria. Varios inmunógenos de ácido nucleico que inducen una respuesta inmune (tanto humoral como celular) después de administración a un hospedador han sido descritos. Se conocen vacunas de DNA para varios virus, así como para 55 tumores. Los expertos en la técnica apreciarán que los inmunógenos de ácido nucleico contienen elementos reguladores esenciales tales que después de administración a un hospedador, el inmunógeno es capaz de dirigir la maquinaria celular del hospedador para producir productos de traducción codificados por los ácidos nucleicos suministrados respectivos. Adicionalmente, los expertos en la técnica apreciarán que las secuencias específicas descritas en esta memoria no son limitantes, y que si bien los Solicitantes hacen referencia a ácidos nucleicos específicos, varias alélicas, fragmentos de ácido nucleicos, así como ortólogos y parálogos, actualmente conocidos

o que se descubran más adelante tales como los que están puestos a disposición pública en bases de datos tales como GenBankTM se contemplan en la presente invención.

Varios inmunógenos para el Virus de la Inmunodeficiencia Humana (HIV), han sido descritos. La Publicación 65 Internacional No. WO 01/46393 enseña que composiciones que comprenden el ácido nucleico que codifica el gen

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Nef de HIV, fragmentos del mismo, o variantes que están optimizadas en cuanto a eficacia como vacunas en humanos, son capaces de inducir una respuesta inmune celular en un hospedador. Se ha demostrado que la proteína Nef de HIV promueve la replicación viral. Se sabe que secuencias de DNA que comprenden la secuencia Nef, con inclusión de las secuencias de SEQ ID NOs: 52, 53 y 54 son capaces de inducir una respuesta inmune

5 celular en los individuos. La Publicación Internacional No. WO 04/050856 describe que vacunas de DNA que comprenden las secuencias y variantes de ácido nucleico de HIV gp120 (SEQ ID NOs: 153, 154, 155, 156) y un ácido nucleico optimizado en codones que codifica HIV-1 Gag (SEQ ID No: 152) son capaces de inducir respuestas inmunes de anticuerpos y humorales. Se ha demostrado también que ácidos nucleicos que codifican HIV-1 Gag y variantes de los mismos inducen una respuesta inmune cuando se administran a un hospedador (Qui et al., 2000, J. Virology, 74 (13): 5997-6005). Cualquiera de las secuencias anteriores de HIV son agentes útiles suministrados para las composiciones de suministro transdérmico descritas en esta memoria.

Influenza A es el agente causante de la gripe en humanos. Las epidemias de gripe causan morbilidad y mortalidad en todo el mundo, y cada año, sólo en los Estados Unidos, ingresan en los hospitales más de 200.000 pacientes

15 debido a la gripe y se registran aproximadamente 36.000 muertes causadas por la gripe. Los inmunógenos dirigidos contra Influenza A comprenden generalmente cepas atenuadas del virus. WO 04/060720 expone que una vacuna de DNA que comprende ácidos nucleicos de la secuencia SEQ ID No: 51 son capaces de inducir una respuesta inmune celular contra el virus Influenza A.

Se ha realizado también mucho trabajo sobre inmunógenos basados en ácido nucleico y vacunas para los virus de la hepatitis, tales como hepatitis C, hepatitis B y hepatitis A. ("HCV", "HBV", y "HAV"). Se proporciona la secuencia de aminoácidos codificada por la secuencia codificante completa del prototipo del genoma HCV-1 (HCVgp1) (SEQ ID No: 128). Houghton et al. (U.S.S.N. 2002/0002272) dan a conocer ácidos nucleicos que codifican varias porciones de HCVgp1 que son capaces de inducir una respuesta inmune humoral. Por ejemplo, los ácidos nucleicos que

25 codifican la proteína de la envoltura de HCVE2 o porciones de la misma (SEQ ID NOs: 129, 130, 131, 132), o ácidos nucleicos que codifican a la vez las proteínas de la envoltura HCVE1/E2 (SEQ ID NOs: 133, 134) eran capaces de suscitar una respuesta inmune. Schiver et al. (Publicación Internacional No. WO 01/43693) dan a conocer otras secuencias de ácido nucleico de HCV que suscitan respuestas inmunes protectoras, con inclusión de las secuencias de SEQ ID NO's: 52, 53 y 54.

Realizaciones de la presente invención contemplan también secuencias de HBV, tales como ácidos nucleicos que codifican el antígeno de núcleo de HBV (SEQ ID No: 135); HBVsAg (No. de acceso a GenBankTM AR141190), y análogos. Adicionalmente, secuencias de ácido nucleico del genoma de HAV (No. de acceso a GenBankTM NC_001489) se contemplan como agentes suministrados.

35 Diversos otros inmunógenos y vacunas basados en ácido nucleico contra patógenos virales han sido descritos en la técnica, tales como vacunas que comprenden ácidos nucleicos de Hantavirus. Hantavirus es el agente causante del Síndrome Pulmonar de Hantavirus (HPS), una forma del síndrome de enfermedad respiratoria de los adultos que es potencialmente fatal en humanos. WO 04/058808 da a conocer secuencias (SEQ ID NOs: 126. 127) que son agentes administrados útiles. Chen (Pub. International No. WO 04/110483 da a conocer varias secuencias de aminoácidos, (SEQ ID NOs: 147, 148, 140, 150), cuyas secuencias de ácido nucleico codificantes son útiles como agentes suministrados para vacunas SARS.

Vacunas e inmunógenos que comprenden ácidos nucleicos que codifican un miembro de la familia de proteínas

45 Inhibidoras de Apoptosis (IAP) son también útiles en el contexto del tratamiento del cáncer. Por ejemplo, Xiang et al., (Publicación Internacional No. WO 04/099389) presentan vacunas de DNA que comprenden secuencias de codifican miembros de la familia de proteínas inhibidoras de la apoptosis (IAP), tales como ácidos nucleicos que codifican las secuencias de ácido nucleico SEQ ID NO's: 136, 137, 138, y 139. Estas secuencias son útiles también como agentes suministrados en uno o más de los sistemas de suministro transdérmicos descritos aquí para los propósitos de terapia anti-tumoral.

Las globulinas constituyen un grupo diverso de proteínas que comparten la característica común de ser solubles en agua o soluciones salinas diluidas. Debido a su capacidad para fijarse específicamente a antígenos diana, los anticuerpos son un ejemplo extremadamente valioso de globulinas. Ofrecidos como ejemplos no limitantes de

55 terapias con anticuerpos terapéuticamente valiosos que se contemplan como agentes suministrados son: v.g. RituxinTM para el linfoma; globulina inmune de la rabia humana (HRIG) para la rabia; inmunoglobulina del polisacárido bacteriano (BPIG) para inmunización pasiva de los niños pequeños contra las infecciones bacterianas; inmunoglobulina de la tosferina, y HerceptinaTM para el cáncer de mama. Los expertos en la técnica apreciarán que una gran diversidad de terapias de anticuerpos -anticuerpos policlonales, monoclonales, con inclusión de anticuerpos modificados química o físicamente -pueden utilizarse como agentes suministrados en las composiciones de suministro transdérmico descritas en esta memoria.

Otras globulinas están implicadas en el transporte de una diversidad de sustancias, con inclusión de lípidos, hormonas, e iones inorgánicos. Por ejemplo, la globulina de fijación de hormonas sexuales se fija a y transporta 65 testosterona, y en menor grado estrógenos, y la globulina de fijación de tironina se fija a la tiroxina. Globulinas

17

imagen12

imagen13

En algunas realizaciones, el colágeno disponible comercialmente "Hidrocoll EN-55" se proporcionó como el agente suministrado y se suministró a las células de un individuo de test. Esta forma de colágeno es colágeno hidrolizado y tiene un peso molecular de 2.000 daltons. En otra realización, se proporcionó el "ictiocolágeno", o colágeno marino 5 disponible comercialmente (Sederma o Croda de Parsippany, New Jersey) como el agente suministrado y se suministró a un individuo de test. Esta forma de colágeno soluble tiene un peso molecular mayor que 100.000 daltons. En otra realización, se proporcionó el colágeno comercialmente disponible "Solu-Coll" como el agente suministrado y se suministró a las células de un individuo de test. Esta forma de colágeno es un colágeno soluble que tiene un peso molecular de 300.000 daltons. Una realización adicional incluye el colágeno disponible

10 comercialmente "Plantsol", que se obtiene a partir de levadura y tiene un peso molecular de 500.000 daltons. Este colágeno se proporcionó también como agente suministrado y se suministró a las células de un individuo de test.

Las composiciones de suministro transdérmico que contienen una forma de colágeno o fragmento del mismo comprenden deseablemente en peso o volumen entre 0,1% y 85,0% del agente suministrado, dependiendo del tipo y 15 la forma del colágeno, su solubilidad, y la aplicación propuesta. Es decir, algunas composiciones de suministro transdérmico comprenden en peso o volumen menos de o igual a o más de 0,1%, 0,15%, 0,2%, 0,25%, 0,3%, 0,35%, 0,4%, 0,45%, 0,5%, 0,55%, 0,6%, 0,65%, 0,7%, 0,75%, 0,8%, 0,85%, 0,9%, 0,95%, 1,0%, 1,25%, 1,5%, 1,75%, 2,0%, 2,25%, 2,5%, 2,75%, 3,0%, 3,25%, 3,5%, 3,75%, 4,0%,, 4,25%, 4,5%, 4,75%, 5,0%, 5,25%, 5,5%, 5,75%, 6,0%, 6,25%, 6,5%, 6,75%, 7,0%, 7,25%, 7,5%, 7,75%, 8,0% 8,25%, 8,5%, 8,75%, 9,0%, 9,25%, 9,5%, 20 9,75%, 10,0%, 10,25%, 10,5%, 10,75%, 11,0%,, 11,25%, 11,5%, 11,75%, 12,0%, 12,25%, 12,5%, 12,75%, 13,0%, 13,25%, 13,5%, 13,75%, 14,0%, 14,25%, 14,5%, 14,75%, 15,0%, 15,5%, 16,0%, 16,5%, 17,0%, 17,5%, 18,0%, 18,5%, 19,0%, 19,5%, 20,0%, 20,5%, 21,0%, 21,5%, 22,0%, 22,5%, 23,0%, 23,5%, 24,0%, 24,5%, 25,0%, 25,5%, 26,0%, 26,5%, 27,0%, 27,5%, 28,0%, 28,5%, 29,0%, 29,5%, 30,0%, 30,5%, 31,0%, 31,5%, 32,0%, 32,5%, 33,0%, 33,5%, 34,0%, 34,5%, 35,0%, 35,5%, 36,0%, 36,5%, 37,0%, 37,5%, 38,0%, 38,5%, 39,0%, 39,5%, 40,0%, 41,0%,

25 42,0%, 43,0%, 44,0%, 45,0%, 46,0%, 47,0%, 48,0%, 49,0%, 50,0%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, o 85% de colágeno o fragmento del mismo.

Por ejemplo, realizaciones que tienen Hidrocoll-EN55 pueden comprender en peso o volumen menos de o igual a o

30 más de 1,0%, 1,25%, 1,5%, 1,75%, 2,0%, 2,25%, 2,5%, 2,75%, 3,0%, 3,25%, 3,5%, 3,75%, 4,0%,, 4,25%, 4,5%, 4,75%, 5,0%, 5,25%, 5,5%, 5,75%, 6,0%, 6,25%, 6,5%, 6,75%, 7,0%, 7,25%, 7,5%, 7,75%, 8,0% 8,25%, 8,5%, 8,75%, 9,0%, 9,25%, 9,5%, 9,75%, 10,0%, 10,25%, 10,5%, 10,75%, 11,0%,, 11,25%, 11,5%, 11,75%, 12,0%, 12,25%, 12,5%, 12,75%, 13,0%, 13,25%, 13,5%, 13,75%, 14,0%, 14,25%,-14,5%, 14,75%, 15,0%, 15,5%, 16,0%, 16,5%, 17,0%, 17,5%, 18,0%, 18,5%, 19,0%, 19,5%, 20,0%, 20,5%, 21,0%, 21,5%, 22,0%, 22,5%, 23,0%, 23,5%,

35 24,0%, 24,5%, 25,0%, 25,5%, 26,0%, 26,5%, 27,0%, 27,5%, 28,0%, 28,5%, 29,0%, 29,5%, 30,0%, 30,5%, 31,0%, 31,5%, 32,0%, 32,5%, 33,0%, 33,5%, 34,0%, 34,5%, 35,0%, 35,5%, 36,0%, 36,5%, 37,0%, 37,5%, 38,0%, 38,5%, 39,0%, 39,5%, 40,0%, 41,0%, 42,0%, 43,0%, 44,0%, 45,0%, 46,0%, 47,0%, 48,0%, 49,0%, 50,0%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, o 85% Hidrocoll-EN-55.

40 Realizaciones que tienen colágeno marino pueden comprender en peso o volumen menos de o igual a o más de 1,0%, 1,25%, 1,5%, 1,75%, 2,0%, 2,25%, 2,5%, 2,75%, 3,0%, 3,25%, 3,5%, 3,75%, 4,0%,, 4,25%, 4,5%, 4,75%, 5,0%, 5,25%, 5,5%, 5,75%, 6,0%, 6,25%, 6,5%, 6,75%, 7,0%, 7,25%, 7,5%, 7,75%, 8,0% 8,25%, 8,5%, 8,75%, 9,0%, 9,25%, 9,5%, 9,75%, 10,0%, 10,25%, 10,5%, 10,75%, 11,0%,, 11,25%, 11,5%, 11,75%, 12,0%, 12,25%,

45 12,5%, 12,75%, 13,0%, 13,25%, 13,5%, 13,75%, 14,0%, 14,25%, 14,5%, 14,75%, 15,0%, 15,5%, 16,0%, 16,5%, 17,0%, 17,5%, 18,0%, 18,5%, 19,0%, 19,5%, 20,0%, 20,5%, 21,0%, 21,5%, 22,0%, 22,5%, 23,0%, 23,5%, 24,0%, 24,5%, 25,0%, 25,5%, 26,0%, 26,5%, 27,0%, 27,5%, 28,0%, 28,5%, 29,0%, 29,5%, 30,0%, 30,5%, 31,0%, 31,5%, 32,0%, 32,5%, 33,0%, 33,5%, 34,0%, 34,5%, 35,0%, 35,5%, 36,0%, 36,5%, 37,0%, 37,5%, 38,0%, 38,5%, 39,0%, 39,5%, 40,0%, 41,0%, 42,0%, 43,0%, 44,0%, 45,0%, 46,0%, 47,0%, 48,0%, 49,0%, 50,0%, 51%, 52%, 53%, 54%,

50 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, o 85% de colágeno marino.

Adicionalmente, composiciones de suministro transdérmico que contienen Solu-Coll pueden comprender en peso o volumen menos de o igual a o más de 1,0%, 0,15%, 0,2%, 0,25%, 0,3%, 0,35%, 0,4%, 0,45%, 0,5%, 0,55%, 0,6%,

55 0,65%, 0,7%, 0,75%, 0,8%, 0,85%, 0,9%, 0,95%, 1,0%, 1,1%, 1,15%, 1,2%, 1,25%, 1,3%, 1,35%, 1,4%, 1,45%, 1,5%, 1,55%, 1,6%, 1,65%, 1,7%, 1,75%, 1,8%, 1,85%, 1,9%, 1,95%, o 2,0% de Solu-Coll.

Adicionalmente, composiciones de suministro transdérmico que contienen Plantsol pueden comprender en peso o volumen menos de o igual a o más de 1,0%, 0,15%, 0,2%, 0,25%, 0,3%, 0,35%, 0,4%, 0,45%, 0,5%, 0,55%, 0,6%,

60 0,65%, 0,7%, 0,75%, 0,8%, 0,85%, 0,9%, 0,95%, 1,0%, 1,1%, 1,15%, 1,2%, 1,25%, 1,3%, 1,35%, 1,4%, 1,45%, 1,5%, 1,55%, 1,6%, 1,65%, 1,7%, 1,75%, 1,8%, 1,85%, 1,9%, 1,95%, 2,0%, 2,1%, 2,15%, 2,2%, 2,25%, 2,3%, 2,35%, 2,4%, 2,45%, 2,5%, 2,55%, 2,6%, 2,65%, 2,7%, 2,75%, 2,8%, 2,85%, 2,9%, 2,95%, 3,0%, 3,1%, 3,15%, 3,2%, 3,25%, 3,3%, 3,35%, 3,4%, 3,45%, 3,5%, 3,55%, 3,6%, 3,65%, 3,7%, 3,75%, 3,8%, 3,85%, 3,9%, 3,95%, o 4,0% Plantsol.

65

20

En otras realizaciones de la invención, se proporciona una composición de suministro transdérmico que puede proporcionar una solución de colágeno que comprende dos o más formas de colágeno (v.g., Hidro-Coll EN-65, colágeno marino, Solu-Coll, o Plantsol). Las composiciones de suministro transdérmico que incluyen dos o más formas de colágeno comprenden deseablemente una cantidad de agente suministrado que puede estar incluida en 5 un agente suministrado que tiene el tipo específico de colágeno por sí mismo. Por ejemplo, si la mixtura de agentes suministrados comprende Hidro-Coll EN55, la cantidad de Hidro-Coll EN55 en la composición de suministro transdérmico puede comprender en peso o volumen menos de o igual o más de 1,0%,1.25%, 1.5%, 1.75%, 2.0%, 2.25%, 2.5%, 2.75%, 3.0%, 3.25%, 3.5%, 3.75%, 4.0%, 4,25%, 4,5%, 4,75%, 5,0%, 5,25%, 5,5%, 5,75%, 6,0%, 6,25%, 6,5%, 6,75%, 7,0%, 7,25%, 7,5%, 7,75%, 8,0% 8,25%, 8,5%, 8,75%, 9,0%, 9,25%, 9,5%, 9,75%, 10,0%, 10 10,25%, 10,5%, 10,75%, 11,0%,, 11,25%, 11,5%, 11,75%, 12,0%, 12,25%, 12,5%, 12,75%, 13,0%, 13,25%, 13,5%, 13,75%, 14,0%, 14,25%, 14,5%, 14,75%, 15,0%, 15,5%, 16,0%, 16,5%, 17,0%, 17,5%, 18,0%, 18,5%, 19,0%, 19,5%, 20,0%, 20,5%, 21,0%, 21,5%, 22,0%, 22,5%, 23,0%, 23,5%, 24,0%, 24,5%, 25,0%, 25,5%, 26,0%, 26,5%, 27,0%, 27,5%, 28,0%, 28,5%, 29,0%, 29,5%, 30,0%, 30,5%, 31,0%, 31,5%, 32,0%, 32,5%, 33,0%, 33,5%, 34,0%, 34,5%, 35,0%, 35,5%, 36,0%, 36,5%, 37,0%, 37,5%, 38,0%, 38,5%, 39,0%, 39,5%, 40,0%, 41,0%, 42,0%, 43,0%,

15 44,0%, 45,0%, 46,0%, 47,0%, 48,0%, 49,0%, 50,0%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, o 85% Hidrocoll-EN-55.

Si la mixtura de agentes suministrados tiene colágeno marino, entonces la cantidad de colágeno marino en el sistema de suministro puede comprender en peso o volumen menos de o igual a o más de 1,0%, 1,25%, 1,5%, 20 1,75%, 2,0%, 2,25%, 2,5%, 2,75%, 3,0%, 3,25%, 3,5%, 3,75%, 4,0%,, 4,25%, 4,5%, 4,75%, 5,0%, 5,25%, 5,5%, 5,75%, 6,0%, 6,25%, 6,5%, 6,75%, 7,0%, 7,25%, 7,5%, 7,75%, 8,0% 8,25%, 8,5%, 8,75%, 9,0%, 9,25%, 9,5%, 9,75%, 10,0%, 10,25%, 10,5%, 10,75%, 11,0%,, 11,25%, 11,5%, 11,75%, 12,0%, 12,25%, 12,5%, 12,75%, 13,0%, 13,25%, 13,5%, 13,75%, 14,0%, 14,25%, 14,5%, 14,75%, 15,0%, 15,5%, 16,0%, 16,5%, 17,0%, 17,5%, 18,0%, 18,5%, 19,0%, 19,5%, 20,0%, 20,5%, 21,0%, 21,5%, 22,0%, 22,5%, 23,0%, 23,5%, 24,0%, 24,5%, 25,0%, 25,5%,

25 26,0%, 26,5%, 27,0%, 27,5%, 28,0%, 28,5%, 29,0%, 29,5%, 30,0%, 30,5%, 31,0%, 31,5%, 32,0%, 32,5%, 33,0%, 33,5%, 34,0%, 34,5%, 35,0%, 35,5%, 36,0%, 36,5%, 37,0%, 37,5%, 38,0%, 38,5%, 39,0%, 39,5%, 40,0%, 41,0%, 42,0%, 43,0%, 44,0%, 45,0%, 46,0%, 47,0%, 48,0%, 49,0%, 50,0%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, o 85% de colágeno marino.

30 Análogamente, si la mixtura de agentes suministrados tiene Solu-Coll, entonces la cantidad de Solu-Coll en el sistema de suministro puede comprender en peso o volumen menos de o igual a o más de 1,0%, 0,15%, 0,2%, 0,25%, 0,3%, 0,35%, 0,4%, 0,45%, 0,5%, 0,55%, 0,6%, 0,65%, 0,7%, 0,75%, 0,8%, 0,85%, 0,9%, 0,95%, 1,0%, 1,1%, 1,15%, 1,2%, 1,25%, 1,3%, 1,35%, 1,4%, 1,45%, 1,5%, 1,55%, 1,6%, 1,65%, 1,7%, 1,75%, 1,8%, 1,85%,

35 1,9%, 1,95%, o 2,0% de Solu-Coll. Adicionalmente, si la mixtura de agentes suministrados tiene Plantsol, entonces la cantidad de Plantsol en el sistema de suministro puede comprender en peso o volumen menos de o igual a o más de 1,0%, 0,15%, 0,2%, 0,25%, 0,3%, 0,35%, 0,4%, 0,45%, 0,5%, 0,55%, 0,6%, 0,65%, 0,7%, 0,75%, 0,8%, 0,85%, 0,9%, 0,95%, 1,0%, 1,1%, 1,15%, 1,2%, 1,25%, 1,3%, 1,35%, 1,4%, 1,45%, 1,5%, 1,55%, 1,6%, 1,65%, 1,7%, 1,75%, 1,8%, 1,85%, 1,9%, 1,95%, 2,0%, 2,1%, 2,15%, 2,2%, 2,25%, 2,3%, 2,35%, 2,4%, 2,45%, 2,5%, 2,55%,

40 2,6%, 2,65%, 2,7%, 2,75%, 2,8%, 2,85%, 2,9%, 2,95%, 3,0%, 3,1%, 3,15%, 3,2%, 3,25%, 3,3%, 3,35%, 3,4%, 3,45%, 3,5%, 3,55%, 3,6%, 3,65%, 3,7%, 3,75%, 3,8%, 3,85%, 3,9%, 3,95%, o 4,0% de Plantsol.

Adicionalmente, se contemplan colágenos o derivados de colágeno modificados o estabilizados para uso en algunas de las realizaciones descritas en esta memoria. Se prefieren particularmente colágenos que son resistentes a las 45 proteasas. Puede utilizarse ingeniería recombinante para generar colágenos o fragmentos de los mismos que carecen de sitios de escisión por las proteasas, por ejemplo. Colágenos existentes o fragmentos de los mismos pueden prepararse también por incorporación de D-aminoácidos en colágenos preparados por síntesis o fragmentos de los mismos. Pueden utilizarse también colágenos reticulados. (Véase, v.g., Charulatha, Biomaterials, feb. 24(5): 759-67 (2003)). Todavía adicionalmente, pueden prepararse colágeno o fragmentos de colágeno amidados

50 utilizando química de síntesis, y estos derivados de colágeno pueden mezclarse con un aceite etoxilado con o sin agua o alcohol a fin de formar una composición de suministro transdérmico que contiene colágeno. Varios métodos para crear colágenos sintéticos, recombinantes, o reticulados son conocidos por los expertos en la técnica y muchos de ellos están disponibles comercialmente.

55 Además, pueden prepararse y aislarse fragmentos de colágeno resistentes a las proteasas utilizando técnicas convencionales. En un enfoque, colágeno marino, procolágeno, o colágeno obtenido de placenta humana se incuba con suero de bovino, pepsina, o colagenasa bacteriana durante una hora y la preparación se separa luego por electroforesis en gel, cromatografía de exclusión de tamaños, de fase inversa, o de intercambio iónico (v.g., FPLC o HPLC). Fragmentos de colágeno resistentes a las proteasas (v.g., 15 kDa o 30 kDa; véase v.g., Tasab et al., JBC

60 277 (38): 35007 (2002) o 38 kDa, véase v.g., Odermatt et al., Biochem J. mayo 1: 211 (2): 295-302 (1983), los dos cuales se incorporan expresamente en esta memoria por referencia en sus totalidades) se separan de los productos de hidrólisis, y estos fragmentos se aíslan de la columna y se concentran (v.g., filtros Centricon) o se liofilizan utilizando técnicas convencionales. Los fragmentos de colágeno resistentes a las proteasas se incorporan luego en una composición de suministro transdérmico, como se describe en esta memoria. Alternativamente, el dominio de

21

colágeno resistente a las proteasas puede prepararse por síntesis u obtenerse comercialmente (v.g., colágenos pepsinizados pueden obtenerse también de Chemicon de Temacula, CA).

Un agente suministrado adicional que puede incluirse en una composición de suministro transdérmico es Etiolina

5 (Sederma o Croda, de Parsippany, New Jersey). Etiolina es un inhibidor de tirosinasa fabricado a partir del extracto Mitracarpe y uva de oso, que blanquea eficazmente la piel. Formulaciones de una composición de suministro transdérmico descritas en esta memoria que contienen Etiolina (v.g., a 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, o 20%) son también realizaciones de la invención. Otra formulación de abrillantamiento o blanqueo de la piel de una composición de suministro transdérmico comprende

10 Melaslow (Sederma, de Parsippany, New Jersey). Melaslow es un extracto fabricado a partir de Citrus Reticulato Blanco, var. Unshiu. Melaslow es también un inhibidor de la melanogénesis y formulaciones de una composición de suministro transdérmico descritas en esta memoria que contienen Melaslow (v.g., a 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, o 20%) son también realizaciones de la invención. Un agente suministrado adicional que puede incluirse en una composición de suministro transdérmico es Matrixil

15 (Sederma o Croda, de Parsippany, New Jersey). Matrixil es un compuesto que comprende el péptido KTTKS (SEQ ID NO: 2), que se ha demostrado estimula la síntesis de colágeno. Véase Katayama et al., J. Biol. Chem. 268, 9941 (1993). Formulaciones de una composición de suministro transdérmico descritas en esta memoria que contienen Matrixil o el péptido KTTKS (SEQ. ID. NO:2) (v.g., a 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, o 20%) son también realizaciones de la invención. La sección que sigue describe

20 la fabricación y uso de varios mejoradores de la penetración que suministran a la vez moléculas de peso molecular bajo y alto a las células del cuerpo.

Mejoradores de la Penetración

25 Un mejorador de la penetración incluido en muchas realizaciones de la invención está constituido por dos componentes -un componente hidrófobo y un componente hidrófilo. Deseablemente, el componente hidrófobo comprende un compuesto poliéter, tal como un resto graso etoxilado, preferiblemente, un aceite etoxilado, tal como un aceite vegetal, de nueces, sintético, o animal, que tiene la capacidad de reducir la tensión superficial de los materiales que se disuelven en él. Sin desear quedar ligados por mecanismo o modo de acción particular alguno y

30 ofrecido únicamente para expandir el conocimiento en el campo, se contempla que la fijación de poli(óxido de etileno) a los componentes de un aceite particular ocurre no sólo en un grupo funcional particular sino que más bien las cadenas de poli(óxido de etileno) comienzan a crecer a partir de enlaces insaturados C=C y a partir de la unidad glicerol ocasional. Dado que un aceite etoxilado, tal como aceite etoxilado de nuez de macadamia, es una mixtura de diversos ácidos grasos, alcoholes grasos, y aminas grasas, los componentes del aceite pueden tener cantidades

35 variables de etoxilación. De acuerdo con ello, las medidas de etoxilación/molécula (v.g., 16 etoxilaciones/molécula) son un promedio de la cantidad de etoxilación presente en los componentes del aceite, más bien que en cualquier componente específico propiamente dicho.

Aceites etoxilados preferidos pueden obtenerse o crearse a partir de, por ejemplo, aceite de nuez de macadamia,

40 espuma de prado, aceite de ricino, aceite de jojoba, aceite de maíz, aceite de girasol, aceite de sésamo, y aceite de emú. Muchos de estos aceites están disponibles comercialmente de Floratech de Gilbert, Arizona u otros suministradores. Alternativamente, pueden prepararse aceites etoxilados por reacción del aceite con óxido de etileno. Aceites portadores puros que son adecuados para etoxilación a fin de crear un mejorador de la penetración para uso con las composiciones de suministro transdérmico descritas en esta memoria se incluyen en las TABLAS

45 3-17 y pueden obtenerse de Esoteric Oil Pty. Ltd., Pretoria, Sudáfrica. Las TABLAS 3-17 enumeran también los ácidos grasos componentes de estos aceites, todos los cuales son individualmente adecuados para etoxilación e incorporación en una realización de una composición de suministro transdérmico. Es decir, se contempla que ácidos grasos etoxilados, alcoholes grasos etoxilados, y aminas grasas etoxiladas, en particular ácidos grasos etoxilados, alcoholes grasos etoxilados y aminas grasas etoxiladas que contienen 11 13, 14, 15, 16, 17, 18, ó 19 etoxilaciones

50 son mejoradores de la penetración adecuados para uso en las composiciones de suministro transdérmico descritas en esta memoria. Estos componentes de aceites etoxilados pueden utilizarse individualmente como mejoradores de la penetración o como suplementos para otros mejoradores de la penetración (v.g., aceite de nuez de macadamia etoxilado).

55 TABLA 3

ACEITE DE NUEZ DE MACADAMIA

Ácidos grasos: imagen14 Intervalo

Mirístico: C14 0,6 -1,6 %

Palmítico: C16 7,0 -11,0 %

Palmitoleico: C16:1 18,0 -25,0 %

Esteárico: C18 2,0 -4,0 %

22

imagen15

imagen16

imagen17

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imagen19

imagen20

imagen21

imagen22

imagen23

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imagen26

imagen27

imagen28

derecha, y central de primer plano con una cámara Pentax que tenía una lente de zoom 60X y film Kodak-Gold 100 antes del comienzo del estudio. Poco después, cada individuo recibió un frasco que tenía una formulación de la composición de suministro transdérmico y fue instruido en el sentido de que se aplicara la solución en el lado derecho de la cara y el cuello, dejando el lado izquierdo sin tratar, dos veces al día durante 15 días. Se testó 5 primeramente la formulación F4, llevándose a cabo la aplicación después de ducha o lavado y antes de la aplicación de cualquier otro producto al área tratada de la cara. Después del periodo de 15 días, se tomaron de nuevo 3 fotografías de primer plano, los individuos registraron sus observaciones acerca de la eficacia de la formulación en un cuestionario, y se dejó un periodo de 7 días sin aplicación de un producto de colágeno. El cuestionario requería que el individuo asignara un registro (v.g., un valor numérico que representa la eficacia) en cuanto a las

10 características de la formulación de la composición de suministro transdérmico. Las características que se evaluaron incluían pegajosidad, olor, comerciabilidad, y eficacia global de la formulación, así como si la formulación tensaba la piel, reducía las líneas, acondicionaba o suavizaba la piel, y tenía cualesquiera efectos secundarios negativos. La escala para el registro era 1-10, siendo 1 la peor calificación y 10 la calificación óptima.

15 Después del test de F4, se realizó la evaluación arriba detallada sobre la formulación P1. Una vez más, se tomaron fotografías antes y después del segundo protocolo de 15 días, se completó un cuestionario que evaluaba la eficacia de la formulación particular, y se dejó un periodo de 7 días sin aplicación de ningún producto de colágeno. Ulteriormente, después del test de P1, se realizó la misma evaluación sobre la formulación P2, se tomaron fotografías antes y después de la prueba, y se completó un cuestionario de evaluación de la eficacia de la

20 formulación particular.

Los datos de los 3 cuestionarios de evaluación se reunieron, se analizaron utilizando una "tabla t" y se hicieron los cálculos de la desviación estándar. Véase la TABLA 19. Se asignó una calificación global para cada formulación particular. Un registro perfecto para este sistema era una evaluación global 7,875, se encontró que P1 tenía una

25 calificación global de 4,25 (aproximadamente 54% de eficacia), se encontró que P2 tenía una evaluación global de 4,625 (aproximadamente 59% de eficacia), y se encontró que F4 tenía una evaluación global de 5,625 (aproximadamente 71% de eficacia).

Las fotografías tomadas antes y después del tratamiento revelaban también que las tres composiciones de

30 suministro transdérmico testadas proporcionaban beneficio terapéutico. Se observó una disminución en las arrugas y puede verse un aumento en el estiramiento y firmeza de la piel. Es decir, P1, P2 y F4 proporcionaban todas ellas beneficio terapéutico y/o cosmético en el sentido de que restauraban la tonicidad de la piel en los individuos testados. Los resultados presentados arriba demuestran también que las composiciones de suministro transdérmico de la invención pueden utilizarse para administrar agentes suministrados de peso molecular alto.

35

TABLA 18

ECO: Aloe IPA Plantsol EN-55 Solu-coll DMPX YYO Score ID

imagen29: imagen30 imagen31 imagen32 imagen33 imagen34 imagen35 imagen36 imagen37 imagen38

29,7% *: 50,0%* 5,0%* 0* 8,3%* 0* 0* 0* 2 F-1

10,4%: 79,0% 5,3% 0 8,7% 0 0 0 3 F-2

5,2%: 63,0% 5,3% 0 17,4% 0 0 0 3 F-3

5,0%: 70,0% 5,0% 0 11,0% 0 0 0 3+ F-4 t

4,5%: 18,2% 4,6% 0 0 0,7% to 1,5% 0 0 3+ P-1 †

8,3%
8,3%
8,3%: 0,7% to 1,4% 4,6% 0,3% to 0,7% 0 0 2 Y-500

0,7%: 22,2% 11,1% 1,3% to 2,7% 0 0 0 0 3+ P-501

0,4%: 35,7% 3,6% 1,1% to 2,1% 0 0 0 0 2 P-502

0,9%: 8,7% 0 0 0 2,3% to 4,6% 0 0 1 SC-1

1,8%: 18,5% 0 0 44,8% 0 0 0 3+ SC-2

1,8%: 17,9% 7,1% 0 43,2% 0 0 0 3 SC-3

0,9%: 9,4% 4,7% 0 34,3% 0,3% to 0,6% 0 0 1 PSC EN

1,8%: 31,3% 6,3% 1,3% to 2,5% 0 0 0 0 3+ P-1A

0,8%: 19,2% 3,8% 1,5% to 3,1% 0 0 7,7% 0,3% 5 P-1C

0,7%: 17,9% 7,1% 1,4% to 2,9% 0 0 1,1% 0,3% 5 P-2 †

0,7%: 22,2% 11,1% 1,3% to 2,7% 0 0 0 0 3+ P-501

Abreviaturas:

37

imagen39

imagen40

imagen41

imagen42

imagen43

imagen44

imagen45

imagen46

imagen47

imagen48

Análisis de la penetración

La- composición de suministro transdérmico que contenía colágeno marino o colágeno nativo se aplicó a los

5 sistemas modelo de piel de cadáver humano y piel de acetato de celulosa. Los estudios de penetración se realizaron en una cámara de difusión, y los resultados se registraron a los 10 minutos, 30 minutos y 1 hora más tarde. Secciones de piel o acetato de celulosa se tiñeron con un tinte específico de colágeno y se utilizó un microscopio óptico para visualizar el colágeno transportado. La TABLA 21 proporciona los resultados de estos experimentos. Obsérvese que el colágeno nativo penetraba en la piel en menos tiempo que el colágeno marino. Esto puede ser

10 debido a las diferentes concentraciones de colágeno utilizadas en las composiciones de suministro transdérmico (a saber, la concentración del colágeno nativo era 0,40 mg/ml y la concentración del colágeno marino era 1,14 mg/ml). No obstante, al cabo de 1 hora, prácticamente la totalidad de ambos tipos de colágeno habían penetrado en la piel en los sistemas modelo empleados.

15 TABLA 21

Producto hidrodérmico: Penetración porcentual conforme al intervalo de tiempo

Colágeno marino Vial A: 10 minutes 20 minutos 30 minutos 60 minutos

Muestra A1: 40% 60% 75% 95%

Muestra A2: 40% 60% 75% 95%

Muestra A3: 40% 60% 75% 95%

Colágeno marino vial B: imagen49 imagen50

Muestra B1: 40% 60% 75% 95%

Muestra B1: 40% 60% 75% 95%

Muestra B1: 40% 60% 75% 95%

Colágeno marino vial C: imagen51 imagen52

Muestra C1: 40% 60% 75% 95%

Muestra C1: 40% 60% 75% 95%

Muestra C1: 40% 60% 75% 95%

Colágeno nativo*: imagen53 imagen54

Muestra 1: 80% 95% imagen55

Muestra 2: 80% 95% imagen56

Muestra 3: 80% 95% imagen57 imagen58

Cuando se utilizaron concentraciones similares de colágeno nativo y colágeno marino en una composición de suministro transdérmico, el colágeno nativo y el colágeno marino penetraban en las tres capas superiores de la

20 epidermis en aproximadamente 1 hora. El colágeno marino y el colágeno nativo se localizaron en las tres capas superiores de la epidermis de cadáver humano utilizando un tinte específico de colágeno. Una distribución similar del colágeno se confirmó por el modelo de piel de acetato de celulosa. Véanse las TABLAS 22 y 23.

TABLA 22

PENETRACIÓN EN LAS CAPAS DE LA EPIDERMIS DE LA PIEL HUMANA

Penetración de las capas de la epidermis de la piel (estudio de la cámara de difusión de piel humana)

Colágeno marino Vial A: Stratum Corneum Stratum Lucidum Stratum Granulosum Stratum Spinosum Stratum Basale

Muestra A1: √ √ √ - -

Muestra A2: √ √ √ - -

Muestra A3: √ √ √ - -

Colágeno marino Vial B

Muestra B1: √ √ √ - -

48

Muestra B1: √ √ √ - -

Muestra B1: √ √ √ - -

Colágeno marino Vial C

Muestra C1: √ √ √ - -

Muestra C1: √ √ √ - -

Muestra C1: √ √ √ - -

Colágeno nativo

Muestra 1: √ √ √ - -

Muestra 2: √ √ √ - -

Muestra 3: √ √ √ - -

Nota: (√) indica la presencia del producto en las capas superiores de la epidermis como se determinó por tinción específica de colágeno observada por microscopía óptica 1 hora después de la aplicación del producto. (-) indica la ausencia de productos en estas capas de la epidermis.

TABLA 23

Penetración de Hidroderm en las capas de la epidermis de la piel (estudio de la cámara de difusión de piel modelo acetato de celulosa)

Muestra A1: √ √ √ - -

Muestra A2: √ √ √ - -

Muestra A3: √ √ √ - -

Colágeno marino Vial B

Muestra B1: √ √ √ - -

Muestra B1: √ √ √ - -

Muestra B1: √ √ √ - -

Colágeno marino Vial C

Muestra C1: √ √ √ - -

Muestra C1: √ √ √ - -

Muestra C1: √ √ √ - -

Colágeno nativo

Muestra 1: √ √ √ - -

Muestra 2: √ √ √ - -

Muestra 3: √ √ √ - -

Nota: (√) indica la presencia del producto en las capas superiores de la epidermis como se determinó por la tinción 10 específica de colágeno observada por microscopía óptica 1 hora después de la aplicación del producto. (-) indica la ausencia de productos en estas capas de la epidermis.

Análisis Espectrofotométrico

15 El análisis espectrofotométrico del material difundido reveló que la composición de suministro transdérmico permitía un transporte importante de ambos tipos de colágenos. Véase la TABLA 24.

TABLA 24

Número de muestra: Absorbancia espectral a la longitud de onda de 280nm

imagen59: Colágeno nativo tipo 1 Colágeno marino tipo 1

49

Número de muestra: Absorbancia espectral a la longitud de onda de 280nm

imagen60: Colágeno nativo tipo 1 Colágeno marino tipo 1

Mu-estra 1: 2.35 2.832

Muestra 2: 2.766 2.772

Muestra 3: 2.751 2.683

Promedio: 2.622 2.762

Error estándar: 0.136 0.043

Varianza: 0.0557 0.0056

Desviación estándar: 0.24 0.07

Análisis por Electroforesis

5 Una porción del material difundido se separó luego por electroforesis y se visualizó por tinción con un tinte específico de colágeno. El colágeno marino penetrado se mantenía intacto durante y después del análisis, puesto que se observó que el colágeno marino etiquetado detectado en el material difundido tenía el mismo peso molecular que el colágeno marino que no se había sometido a análisis (muestra de control). Los resultados demostraron que el colágeno marino antes del estudio de penetración y después del estudio de penetración mantenía su estructura

10 molecular alrededor de 500 kilodaltons (KD). El colágeno nativo mantenía también un peso molecular aproximado de 500 KD antes y después de la penetración de la epidermis, demostrando que el colágeno nativo que se suministraba a la composición de suministro transdérmico, al igual que el colágeno marino, se mantenía intacto en la epidermis.

Análisis de Inmunoprecipitación

15 Cuando la composición de suministro transdérmico que contenía colágeno marino se inmunoprecipitó utilizando anticuerpos policlonales específicos para los tipos de colágeno 1-7 antes y después del estudio de penetración, se obtuvo más evidencia de que el colágeno marino se mantenía intacto después del suministro transdérmico. Los estudios de inmuno-difusión demostraron que el colágeno marino antes de la penetración de la piel y después de la

20 penetración de la piel consistía principalmente en colágeno tipo I. Esto confirmó adicionalmente que el colágeno se mantenía intacto después de la penetración.

El estudio de penetración arriba descrito proporcionó evidencia fuerte de que las composiciones de suministro transdérmico descritas en esta memoria son eficaces-para transportar moléculas de peso molecular alto a las 25 células de la piel. Se encontró, por ejemplo, que el colágeno marino tipo I (~ 500 kD) penetraba eficazmente en las tres capas superiores de la epidermis y se mantenía intacto al cabo de 1 hora. Estos descubrimientos fueron respaldados por histología, análisis espectrofotométrico, análisis de separación electroforética, análisis de inmunoprecipitación, y análisis de inmunodifusión. El ejemplo siguiente describe un estudio clínico que se realizó, demostrando que las composiciones de suministro transdérmico descritas en esta memoria reducen eficazmente las

30 arrugas y mejoran la tonicidad de la piel en humanos que se encuentran en necesidad de ello.

EJEMPLO 6

Se realizó un estudio clínico para evaluar la capacidad de una composición de suministro transdérmico que contenía

35 colágeno, preparada como se describe en esta memoria, para reducir las arribas y las líneas finas y restaurar de otro modo la tonicidad de la piel en individuos que se encuentran en necesidad de ello. La mitad central de la región facial que incluía las áreas del cuello y tórax superior se asignaron como las regiones objeto de investigación. Durante una aplicación rutinaria del producto a un individuo, tres veces al día, se tomaron imágenes digitales los días 0, 3, 7, 14 y 21 de las regiones objeto de investigac-ión de la cara con inclusión de la región simétrica de la cara

40 en la que no se aplicó el producto. Se realizaron luego medidas micrométricas de las arrugas a partir de las imágenes digitales y también de las áreas faciales objeto de investigación.

Los individuos invitados a participar en el estudio tenían arrugas faciales y eran de 25 años o de mayor edad. Individuos que no presentaban arrugas faciales fueron invitados también y sirvieron como grupo de control. La

45 procedencia de los individuos para el estudio se seleccionó aleatoriamente de grupos de población étnicamente diversos con edades comprendidas entre 25 años y 88 años.

TABLA 25

Descripción de los individuos participantes en el estudio

50

imagen61

Los individuos que firmaron el consentimiento para el estudio recibieron 30 mililitros de una composición de suministro transdérmico que comprendía colágeno marino. Se realizaron medidas micrométricas de las arrugas utilizando una pieza objetivo-ocular de 10 aumentos. Las medidas se registraron y se tabularon junto con las 5 fotografías digitales antes y después de la aplicación del producto. Las medidas de las arrugas se determinaron dentro del transcurso de las 3 semanas de duración del estudio. Los resultados tabulados se proporcionan en la TABLA 26, que indica las observaciones generales realizadas por los individuos que utilizaron el producto, y la TABLA 27, que muestra las medidas de las arrugas. La TABLA 28 muestra el porcentaje medio de datos de reducción de las arrugas generados después de 21 días de aplicación de la composición de suministro transdérmico

10 que comprendía colágeno.

TABLA 26

Número de Identificación: Días de aplicación del producto en una mitad de la cara que incluía las regiones del tórax superior y el cuello

imagen62: Día 3 Día 7 Día 14 Día 21

F101601: La piel se sentía suave, y limpia, cuando se comparaba con la otra mitad sin aplicación del producto, ligera sensación de ardor durante 3-5 minutos después de aplicación del producto. La mitad derecha de la cara estaba más limpia y se sentía suave, la ligera sensación de ardor estaba todavía presente durante 3-5 minutos. La mitad derecha de la cara estaba más limpia y se sentía suave, la ligera sensación de ardor ya no estaba presente. La mitad derecha de la cara estaba más limpia y se sentía suave, la ligera sensación de ardor ya no estaba presente.

F101602: La piel se sentía suave, y limpia, cuando se comparaba con la otra mitad sin aplicación del producto, ligera sensación de ardor durante 3-5 minutos después de aplicación del producto. La mitad derecha de la cara estaba más limpia y se sentía suave, la ligera sensación de ardor estaba todavía presente durante 3-5 minutos. La mitad derecha de la cara estaba más limpia y se sentía suave, la ligera sensación de ardor ya no estaba presente. La mitad derecha de la cara estaba más limpia y se sentía suave, la ligera sensación de ardor ya no estaba presente.

F101603: La piel se sentía suave, y limpia, cuando se comparaba con la otra mitad sin aplicación del producto, ligera sensación de ardor durante 3-5 minutos después de aplicación del producto. La mitad derecha de la cara estaba más limpia y se sentía suave, la ligera sensación de ardor estaba todavía presente durante 3-5 minutos. La mitad derecha de la cara estaba más limpia y se sentía suave, la ligera sensación de ardor ya no estaba presente. La mitad derecha de la cara estaba más limpia y se sentía suave, la ligera sensación de ardor ya no estaba presente.

F101604: La piel se sentía suave, y limpia, cuando se comparaba con la otra mitad sin aplicación del producto, ligera sensación de ardor durante 3-5 minutos después de aplicación del producto La piel se sentía lisa y muy suave en la región facial en la que se aplicó el producto. Aparecieron erupci ones en la región del cuello, que cesaban al utilizar el producto Las erupciones se aclararon, y el cuello tenía su aspecto normal como la otra mitdad en la que no se aplicó el producto.

M101605: La piel se sentía suave, y limpia, cuando se - La mitad derecha de la cara estaba más La mitad derecha de la cara estaba más limpia La mitad derecha de la cara estaba más

51

imagen63: Día 3 Día 7 Día 14 Día 21

imagen64: comparaba con la otra mitad sin aplicación del producto, ligera sensación de ardor durante 3-5 minutos después de aplicación del producto. limpia y se sentía suave, la ligera sensación de ardor estaba todavía presente durante 3-5 minutos. y se sentía suave, la ligera sensación de ardor estaba todavía presente durante 3-5 minutos. limpia y se sentía suave, la ligera sensación de ardor estaba todavía presente durante 3-5 minutos.

TABLA 27

Número de Identificación del Individuo: Medidas Medias de las Arrugas con aplicación del producto en una mitad de la cara que incluía las áreas superiores del tórax y el cuello en µm

imagen65: Regiones de la cara Día 0 Día 3 Día 5 Día 7 Día 14 Día 21

F101601: Alrededor de los ojos 6 µm 6 µm 6 µm 5 µm 4.5 µm 4.5 µm

Mejilla temporal: 7 µm 7 µm 7 µm 7 µm 6 µm 5.5 µm

Barbilla: 7.5 µm 7.5 µm 7.5 µm 7.5 µm 7.0 µm 6.5 µm

Alrededor de la boca: 6.5 µm 6.5 µm 6.5 µm 6.5 µm 6.0 µm 5.5 µm

F101602: Alrededor de los ojos 3.5 µm 3.5 µm 3.5 µm 3.5 µm 3.5 µm 3.2 µm

Mejilla temporal: 4.1 µm 4.1 µm 4.1 µm 4.1 µm 3.9 µm 3.5 µm

Mejilla temporal: 2.5 µm 2.5 µm 2.5 µm 2.5 µm 2.0 µm 2.0 µm

Alrededor de la boca: 2.0 µm 2.0 µm 2.0 µm 2.0 µm 2.0 µm 2.0 µm

F101603: Alrededor de los ojos 1.5 µm 1.5 µm 1.5 µm 1.5 µm 1.5 µm 1.2 µm

Mejilla temporal: 1.0 µm 1.0 µm 1.0 µm 1.0 µm 1.0 µm 1.0 µm

Barbilla: 0.9 µm 0.9 µm 0.9 µm 0.9 µm 0.9 µm 0.85 µm

Alrededor de la boca: 0.5 µm 0.5 µm 0.5 µm 0.5 µm 0.5 µm 0.45 µm

F101604: Alrededor de los ojos 0.2 µm 0.2 µm 0.2 µm 0.2 µm 0.2 µm **

Mejilla temporal: 1.5 µm 1.5 µm 1.5 µm 1.5 µm 1.5 µm **

Barbilla: 1.0 µm 1.0 µm 1.0 µm 1.0 µm 1.0 µm **

Alrededor de la boca: 0.5 µm 0.5 µm 0.5 µm 0.5 µm 0.5 µm **

M101605: Alrededor de los ojos 1.5 µm 1.5 µm 1.5 µm 1.5 µm 1.5 µm 1.0 µm

Mejilla temporal: 0.5 µm 0.5 µm 0.5 µm 0.5 µm 0.5 µm 0.3 µm

Barbilla: 1.0 µm 1.0 µm 1.0 µm 1.0 µm 1.0 µm 0.9 µm

Alrededor de la boca: 1.5 µm 1.5 µm 1.5 µm 1.5 µm 1.5 µm 1.2 µm

Nota ** Indica que el individuo dejó de utilizar el producto.

TABLA 28

Número de Identificación del Individuo: Porcentaje de reducción de la medida de las arrugas en las regiones de la cara el día 21 de aplicación del producto Hidroderm

imagen66: Alrededor de los ojos Mejilla temporal Barbilla Alrededor de la boca

F101601: 25% 21.4% 13.3% 15.4%

F101602: 8.6% 14.6% 20.0% 0.0%

F101603: 20.0% 0.0% 5.6% 10.0%

F101604: 0.0% 0.0% 0.0% 0.0%

52

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imagen68

Claims

imagen1

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