ES2552587A2 - Péptido derivado de socs1 para su uso en complicaciones crónicas de la diabetes - Google Patents
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Abstract
Péptido derivado de SOCS1 para su uso en complicaciones crónicas de la diabetes, especialmente complicaciones oculares, renales, nerviosas y vasculares, así como composiciones que lo contienen y polinucleótidos aislados que lo codifican.
Description
mismas, puede encontrarse modificado, preferiblemente fosforilado. De acuerdo con una realización preferida, el aminoácido fosforilado o uno de los aminoácidos fosforilados será una tirosina (Y). Asimismo, la proteína SOCS1 según las definiciones previas, puede encontrarse unida a una región de permeabilidad celular, preferiblemente a un grupo lisina-palmitato. De acuerdo con una realización preferida, la región de permeabilidad celular se encuentra unida por el extremo N-terminal del polipéptido, siendo más preferiblemente la región de permeabilidad celular un grupo lisina-palmitato.
La variante idéntica en al menos el 85% incluye las proteínas SOCS1 de otros mamíferos, tales como Ratus Norvergicus, Gorilla, Oryctolagus cuniculus, Pan troglodytes, Pongo abelii, Cavia porcellus o Sus Scrofa.
De acuerdo con realizaciones particulares, la variante a las secuencias de SOCS1 de origen humano o murino son idénticas en al menos un 90%, aún más preferiblemente en aproximadamente un 94%, a dichas secuencias.
Todas las realizaciones preferidas indicadas para este primer aspecto de la invención son aplicables también al resto de aspectos de la invención, detallados a continuación.
Un aspecto adicional de la invención es el uso de un polipéptido aislado que contiene
a) la secuencia de SEQ ID NO 2 (DTHFRTFRSHADYRRI); o
b) una variante a la secuencia de a) que sea idéntica en al menos el 85 % a la SEQ ID NO 2, basándose en la identidad de la totalidad de los aminoácidos de dicha secuencia;
para la preparación de un medicamento para la prevención o tratamiento de complicaciones crónicas de la diabetes.
De acuerdo con otro aspecto de la invención, esta se refiere a una composición que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un polipéptido de acuerdo con cualquiera de las definiciones anteriores, y al menos un vehículo o un excipiente farmacéuticamente aceptables, para su uso en la prevención o tratamiento de complicaciones crónicas de la diabetes, según la definición dada anteriormente.
En una realización preferida de la invención la composición es adecuada o está destinada a su uso en la prevención o tratamiento de trastornos oculares en pacientes diabéticos, preferentemente retinopatía diabética. También podría ser utilizada para otras enfermedades de la retina que cursen con neurodegeneración, como degeneración macular asociada a la edad, glaucoma y retinitis pigmentaria.
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Así según una realización particular, el vehículo o excipiente es un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable adecuado para la administración por vía oftálmica.
Las composiciones según la presente invención comprenden al menos un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptables. El término “vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable” se refiere a sustancias o entidades moleculares junto a los cuales es administrado el péptido de la invención. Tales vehículos o excipientes serán adecuados para la vía de administración elegida, y serán evidentes a un experto de la materia dependiendo de la vía de administración. Los vehículos pueden ser líquidos estériles, tales como agua o aceites, incluyendo aquellos derivados de petróleo, de origen animal, vegetal o sintético, excipientes, disgregantes, agentes humectantes,
- o diluyentes. Vehículos y excipientes adecuados se describen por ejemplo en "Remington's Pharmaceutical Sciences" de E.W. Martin, el cual se incorpora por referencia a la presente solicitud.
Las composiciones según la presente invención pueden ser administradas por cualquier vía conocida, incluyendo vía oral, vía gastroentérica, vía parenteral, vía rectal, vía respiratoria y vía tópica, en particular por vía oftálmica. Asimismo las composiciones podrán contener otros principios activos o adyuvantes adecuados que serán evidentes al experto en la materia. Asimismo las composiciones podrían contener únicamente un solo polipéptido según la invención
- o dos o más polipéptidos según la invención.
En el caso de la vía oftálmica, el vehículo o excipiente debe ser adecuado para esta vía de administración. Las composiciones en este caso serán preparadas de manera conveniente, bien como una solución o una suspensión acuosa, en un vehículo o solución base oftálmico farmacéuticamente aceptable. Además del principio activo, en este caso el polipéptido según la invención, puede contener otros adyuvantes, tales como agentes antimicrobianos, conservantes, agentes quelantes, agentes reguladores de la tonicidad, agentes reguladores del pH, incluyendo soluciones tampón, agentes viscosantes, etc.
En las composiciones según la invención el péptido estará contenido en un rango de concentración de 1-12 mg/mL. En el caso particular de administración por vía ocular, el péptido estará contenido en una concentración de al menos 5 mg/mL, en realizaciones particulares estará contenido en una concentración de al menos 8 mg/mL, al menos 9 mg/mL, al menos 10 mg/mL, de acuerdo con una realización preferida en una concentración de 10mg/mL ± 5%, es decir, 10 mg/mL ± 0.5 mg/mL. En el caso particular de administración por vía intraperitoneal, el péptido estará contenido en una concentración de entre 1 y 5 mg/mL, de acuerdo con una realización particular estará contenido en una concentración de entre 1 y 3 mg/mL, de acuerdo con realizaciones preferidas, en una concentración de 2 mg/mL ± 10% o ± 5%, es decir, ± 0.2 mg/mL o ± 0.1 mg/mL.
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“kinase inhibitory region” de la proteína SOCS1, unido a una región de permeabilidad celular (lisina-palmitato), en el cual la tirosina (Y) está fosforilada. A lo largo de los ejemplos se denominará miS1 el derivado péptido formado por SEQ ID NO 1 y el grupo lisina-palmitato. En algunos casos éste se conjugó con un marcador fluorescente para posibilitar su posterior seguimiento en tejidos y células. Asimismo se sintetizó también un péptido no funcional mutado (Mut) reemplazando F (Phe) por A (Ala): SEQ ID NO 3, DTHARTARSHSDYRRI, Asp Thr His Ala Arg Thr Ala Arg Ser His Ser Asp Tyr Arg Arg Ile; unido igualmente a la región de permeabilidad celular lisina-palmitato, para su uso como control de los experimentos. Los péptidos se disolvieron (<1% DMSO en solución salina) y se esterilizaron por filtración.
Animales:
Se emplearon dos modelos experimentales, concretamente un modelo experimental de diabetes tipo 2 (ratones db/db) y otro de diabetes tipo 1 (inyección de estreptozotocina en ratones apoE). Los ratones se mantuvieron en jaulas de tamaño estándar en condiciones controladas de temperatura (20ºC) y humedad (60%), con ciclos de luz/oscuridad de 12 horas y con acceso a comida (dieta estándar) y agua ad libitum. Estos estudios se han realizado según la legislación española vigente en cuanto al empleo, protección y cuidado de los animales de experimentación (Real Decreto 53/2013), siguiendo recomendaciones de la CEE (86/609/CEE) y ARVO (Associationfor Research in Vision and Ophthalmology) y han sido aprobados previamente por los Comités Éticos de las dos instituciones participantes (IIS-FundaciónJiménez Díaz/Universidad Autónoma de Madrid e Institut de Recerca Hospital Universitari Vall d’Hebron).
Tratamiento de la neurodegeneración de la retina causada por la diabetes mediante tratamiento tópico ocular con un péptido derivado de SOCS1
Ratones diabéticos (db/db) de 8 semanas recibieron el péptido miS1 en forma de colirio (gotas de 5 μL en cada ojo; 10 mg/mL; dos veces al día durante 15 días; n=4 ratones). Como controles se emplearon ratones diabéticos tratados con el péptido no funcional Mut (n=4), tratados con vehículo y no diabéticos (db/+). Se controló el peso y la glucemia (ensayo colorimétrico) a lo largo del periodo de estudio. En el día 15 se realizó eutanasia a los animales por dislocación cervical y los ojos enucleados se congelaron inmediatamente y se cortaron secciones dorsoventrales de 8mm para analizar la morfología de la retina y otros análisis inmunohistoquímicos. La activación glial se evaluó mediante inmunofluorescencia de GFAP (Glial fibrillar acidic protein). Las secciones fijadas se bloquearon (1% BSA y 10% suero de cabra en PBS, 2h a RT) y se incubaron con anticuerpos anti-GFAP (dilución 1:500, 16h a 4ºC) seguido de un anticuerpo secundario (cabra anti-conejo, conjugado con Alexa 488, dilución 1:200). Las muestras se contrastaron con Hoesch y
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