ES2546933T3 - Vacunas de subunidades contra el PRRSV - Google Patents
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Abstract
Una vacuna capaz de inducir una respuesta inmunitaria frente al PRRSV que comprende: una primera porción del ADN del ORF1 del PRRSV, seleccionándose dicha porción del grupo que consiste en los ID. SEC. Nº 2 - 6, 9, y combinaciones de los mismos; y un transportador farmacológico adecuado.
Description
E05766550
09-09-2015
Tabla 1
- Clones mediante inmunización secuencial con bibliotecas de expresión (SELI) del ORF1 del BIV del PRRSVa/1b
- ID. SEC.
- SELI del clon del ORF1 Tamaño (pares de bases) Región del clon Nucleótidos que abarca el clon (usando Genbank U87392 como referencia) Estado Clonado en el vector de expresión pVC1650 y orientación verificada Reacción de IFA después de la transfección mediante el uso de suelo de convaleciente porcino anti-PRRSV
- 2
- A 939 ORF1a 190 - 1128 ✓
- 3
- B 957 ORF1a 1126 - 2082 ✓
- 4
- C 976 ORF1a 2082 - 3057 ✓
- 5
- D 954 ORF1a 3037 - 3990 ✓
- 6
- E 939 ORF1a 3985 - 4923 ✓
- 7
- F 957 ORF1a 4924 - 5880 ✓ -
- 8
- G 957 ORF1a 5863 - 6819 ✓ -
- 9
- H * 852 ORF1a 6808 - 7659 ✓
- 10
- I * 917 ORF1b 7735 - 8651 ✓ -
- 11
- J 972 ORF1b 8634 - 9605 ✓ débil
- 12
- K 966 ORF1b 9588 - 10553 ✓ -
- 13
- L 783 ORF1b 10536 - 11318 ✓ -
- 14
- M 774 ORF1b 11298 - 12071 ✓ -
- * Nota: los clones originales H e I flanquean la región de cambio de marco del ORF1a/1b menos 1 y se diseñaron nuevos cebadores para dar unos productos ligeramente más pequeños en la RT-PCR.
Cada porción se utilizó después en varias combinaciones, así como solas, en preparaciones de vacuna que comprenden otros ORF del PRRSV.
5 En otro ejemplo se clonaron los clones A - M y los clones del ORF 2 - 6 en el vector de expresión pVC1650 y se clonó un clon para el ORF7 en el vector de expresión WRG720. Por supuesto, los expertos en la materia serán capaces de seleccionar los vectores adecuados. Adicionalmente, las secuencias de ácidos nucleicos de la presente invención pueden ser producidas mediante técnicas convencionales, que incluyen, sin limitación, clonación
10 molecular común, mutagénesis y técnicas de síntesis química de ácidos nucleicos.
En un aspecto de la presente divulgación, cada uno de los clones A - M se usó individualmente como un componente de vacuna. Los animales se inmunizaron con la vacuna mediante su administración a través de cualquier medio convencional. Algunos ejemplos de métodos de administración incluyen oral, transdérmica, 15 intravenosa, subcutánea, intramuscular, intraocular, intraperitoneal, intrarrectal, intravaginal, intranasal, intragástrica, intratraqueal, intrapulmonar o cualquier combinación de las mismas. Los modos de administración preferidos son intramuscular, subcutáneo e intranasal. Si se desea o si fuera necesario, pueden administrarse inmunizaciones de refuerzo una o varias veces en diversos intervalos. Después de la administración de dicha vacuna se desencadena una respuesta inmunitaria en el animal y se reducen los signos clínicos de la infección por el PRRSV en incidencia
20 y/o en gravedad después de la exposición a una forma virulenta del PRRSV.
En otro aspecto de la presente divulgación, se administran combinaciones de los clones A - M a los animales como se ha descrito anteriormente. Dichas combinaciones incluyen dos o más de los clones mencionados anteriormente. Debido a que algunos de estos clones (A, B, C, D, E, H y J) desencadenan una reacción de IFA después de la
25 transfección mediante el uso de suero de convalecientes porcinos anti-PRRSV, se prefieren las combinaciones de estos clones para los fines de la presente invención.
En otro aspecto de la presente divulgación, se usan los clones A - M, tanto individualmente como en combinaciones, como se ha descrito anteriormente, en combinaciones con otro(s) ORF del PRRSV en preparaciones de vacuna. 30 Algunos ORF adecuados incluyen los ORF 2 - 7.
En otro aspecto de la presente invención, se combina el ADN del ORF del PRRSV con otra vacuna del PRRSV, según se define en las reivindicaciones. Preferiblemente la vacuna es eficaz en la inducción de una respuesta inmunitaria antes de la adición del ADN del ORF1 del PRRSV.
35 En otro aspecto más de la presente invención, se proporciona un vector. Los vectores de acuerdo con la presente invención tienen insertado ADN foráneo (no derivado del vector) que comprende al menos una porción del ADN del
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Las temperaturas de los cerdos se controlaron desde los dos días anteriores a la exposición a lo largo de catorce días después de la exposición. La temperatura promedio en el momento inicial del grupo a lo largo del periodo de exposición para el grupo 4 de controles vacunados / no expuestos fue de 103,4 ºF.
5 Las temperaturas promedio por grupo entre todos los grupos expuestos al PRRSV fueron elevadas en el mismo punto después de la exposición, sin embargo había una diferencia temporal en los días después de la exposición en los que aparecía el pico de temperatura promedio del grupo. Los picos de temperatura promedio por grupo en todos los grupos expuestos al PRRSV variaban entre 105,9 y 106,1 ºF, mientras que el pico de temperatura promedio de los grupos de control negativo era de 103,9. El grupo 3 mostró un aumento gradual en la temperatura tras la
10 exposición, con un pico de 106,1 ºF nueve días después de la exposición. Los grupos 1 y 2 mostraron un abrupto aumento en las temperaturas a los dos días de la exposición, con unos picos de temperatura de 105,9 ºF y de 105,6 ºF, respectivamente. Es de destacar que la forma en la que las temperaturas posteriores a la exposición de los cerdos vacunados con el ADN del grupo 1 y 2 aumentaron rápidamente, es similar a la forma en la que los animales vacunados con el PRRS KV responden después de la exposición. Se ha observado que los cerdos vacunados con
15 prototipos experimentales del PRRS KV tienen habitualmente una "sensibilización humoral" (es decir, son seropositivos para el PRRSV después de la vacunación). Los animales vacunados con estos prototipos experimentales del PRRS KV también muestran un rápido aumento en la temperatura poco después de la exposición, según se observó en este estudio en los cerdos vacunados con el ADN de los grupos 1 y 2. Esta similitud en la rápida elevación de la temperatura después de la exposición al PRRSV es una indicación adicional de
20 que los sistemas inmunitarios de los cerdos vacunados con el ADN estaban de hecho sensibilizados frente al antígeno PRRSV.
Los cerdos del grupo 3 mostraron las lesiones pulmonares que se encuentran de forma característica en una exposición con éxito al PRRSV. Los cerdos del grupo 4 no presentaban lesiones pulmonares en la necropsia. Los 25 cerdos del grupo 1 y 2 tenían unas lesiones pulmonares promedio por grupo de 19,84 y de 28,42, respectivamente. Las puntuaciones pulmonares de los cerdos individuales se recogen en la Tabla 6.
Tabla 6 Grupo Animal Puntuaciones pulmonares 1 802 2,00 1 808 0,90 1 812 55,00 1 814 0,20 1 818 1,00 1 826 ND 1 830 70,00 1 832 2,90 1 839 26,75 1 842 ND Media 19,84
2 806 23,00 2 813 32,50 2 821 4,00 2 822 28,95 2 836 37,50 2 844 67,00 2 845 16,70 2 846 52,50 2 847 14,00 2 849 8,00
Media 28,42
3 811 2,75 3 815 33,50
12
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