ES2439393A1 - Método para incrementar la producción de flores, semillas y/o frutos en una planta - Google Patents
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Abstract
Método para incrementar la producción de flores, semillas y/o frutos en una planta, que comprende la etapa de poner en contacto dicha planta con una composición que comprende el microorganismo Colletotrichum tofieldiae y/o extractos de dicho microorganismo y/o filtrados de dicho microorganismo. Dicho microorganismo puede ser una cepa de Colletotrichum tofieldiae depositada con el número de depósito CECT 20833, CECT 20834, CECT 20835 o CECT 20836.
Description
METODO PARA INCREMENTAR LA PRODUCCION DE FLORES. SEMILLAS Y/O
FRUTOS EN UNA PLANTA
CAMPO DE LA INVENCION El campo de la presente invenci6n es el sector agron6mico, en particular metodos para incrementar la producci6n de flores, semillas y/o frutos utilizando el microorganismo
10 Colletotrichum tofieldiae. ANTECEDENTES DE LA INVENCION Las plantas en la naturaleza establecen asociaciones simbi6ticas con microorganismos
15 llamados mututalistas que les confieren beneficios en su crecimiento, supervivencia y multiplicaci6n. Estos microorganismos se pueden aislar, y utilizar sus propiedades beneficiosas en cultivos para mejorar su rendimiento. El genero Colletotrichum (Ascomyceto, teleomorpho Glomerella) comprende mas de 60
20 especies y complejos de especies. Morfol6gicamente se caracteriza por tener conidiomas tipicamente acervulares, que pueden llevar cerdas o no, con conidias unicelulares hialinas que pueden ser rectas o curvadas, de un tamano preferentemente mayor de 12 �, tipicamente granuladas. Las conidias pueden formarse tambien a partir del micelio u otras conidias (conidias microciclicas). Las conidias al germinar forman apresorios. Algunas
25 especies forman estromas o esclerocios. El genero Colletotrichum comprende especies que son pat6genos importantes de cultivos y que, por ello, son las especies mas conocidas y mejor estudiadas. Sin embargo, dentro del genero existen muchas especies que han sido citadas como end6fitos o epifitos que no causan ningun dano a la planta huesped (llamadas comensales) o que incluso pueden ser
30 beneficiosas para la planta (mutualistas). En Hyde y col. (Fungal Diversity 39 (2009) 147182) se hace una descripci6n exhaustiva de todas las especies del genero Colletotrichum actualmente conocidas, con la lista de huespedes de estas especies citados en la literatura y especificando el tipo de interacciones establecidas con cada huesped (patogenica, comensal o mutualista). La evidencia citada en esta publicaci6n indica que, dentro de las
35 especies o complejos de especies consideradas como pat6genas, pueden existir cepas asintomaticas. Incluso se dan casos de cepas que se pueden comportar como pat6genos, comensales o mutualistas dependiendo del huesped en el que se inoculen. Un ejemplo de este caso es C. orbiculare, que se comporta como pat6geno en cucurbitaceas pero se puede comportar como mutualista en tomate, confiriendo resistencia a pat6genos y a sequia y promoviendo el crecimiento vegetativo de la planta cuando es inoculada por la raiz.
DESCRIPCION DE LA INVENCION
Una realizaci6n preferida de la presente invenci6n es un metodo para incrementar la producci6n de flores, semillas y/o frutos en una planta, caracterizado por que comprende la
10 etapa de poner en contacto dicha planta con una composici6n que comprende el microorganismo Colletotrichum tofieldiae y/o extractos de dicho microorganismo y/o filtrados de dicho microorganismo, en adelante metodo de la invenci6n.
De aqui en adelante el termino quot;microorganismo de la invenci6nquot; hace referencia al 15 microorganismo de la especie Colletotrichum tofieldiae.
Se entiende por incrementar la producci6n de flores, semillas y/o frutos en una planta tratada segun el metodo de la invenci6n como el aumento de numero, tamano y/o peso de flores, semillas y/o frutos de esa planta en relaci6n con una planta que no haya sido tratada
20 segun el metodo de la invenci6n.
La especie Colletotricum tofieldiae se describe en Damm y col. (Fungal Diversity 39 (2009) 45-87). Esta especie se caracteriza por tener conidias curvadas y acevulos con cerdas que pueden ser de color marr6n o negro. Las conidias y las cerdas se pueden formar 25 directamente sobre las hifas. Las esporas germinan formando apresorios de variada morfologia y coloraci6n. La definici6n de la especie tambien se debe a caracteristicas moleculares con respecto a secuencias de la subunidad 5.8S del ribosoma con las dos regiones flanqueantes espaciadoras (ITS), un intr6n de 200�bp del gen de la gliceraldehido� 3�fosfato deshidrogenasa (GAPDH), una secuencia parcial del gen de la actina (ACT), el gen 30 de la quitina sintasa 1 (CHS� 1), el gen de la beta�tubulina (Tub2) y el gen de la histona 3 (HIS3). Los aislados tipo utilizados para describir la especie C. tofieldiae proceden de Tofieldia spp. (monocotiled6nea), Lupinus polyphyllus y Dianthus sp. (ambas dicotiled6neas), por lo que esta especie es capaz de colonizar distintas especies de huespedes tanto de mono como de dicotiled6neas. C. tofieldiae no ha sido citado como
35 pat6geno ni mutualista de ningun huesped.
En la presente invenci6n se han aislado, identificado y caracterizado unos nuevos aislados de Colletotrichum tofieldiae que sorprendentemente tienen la capacidad de aumentar significativamente la producci6n de flores, semillas y/o frutos en plantas. Aislados de otras especies de hongos de la misma zona no presentaban esta capacidad. Las plantas 5 incrementan la producci6n de flores, semillas y/o frutos como consecuencia del contacto de cualquier parte de la planta con el microorganismo Colletotrichum tofieldiae para establecer una relaci6n duradera que induce el incremento de producci6n identificado. En la presente invenci6n se muestra que el microorganismo C. tofieldiae se trasloca o dispersa a los distintos 6rganos de la planta tratada, y puede permanecer en ella al menos dos meses tras
10 el tratamiento. Esta caracteristica hace que el efecto del microorganismo sobre la planta pueda ser mas duradero, prolongandose durante el ciclo de la planta y mejorando el rendimiento al final del mismo. Esta caracteristica hace que este microorganismo sea mas efectivo que otros microorganismos utilizados para fines similares.
15 El metodo de la invenci6n mejora la producci6n de flores, frutos y semillas en una mayor proporci6n que el aumento del crecimiento vegetativo de la planta. Es decir, la planta utiliza los recursos de una manera mas eficiente, produciendo mas y/o mayores flores, frutos y semillas en relaci6n con el tamano global de la planta. Es la primera vez que se describe esta caracteristica en las cepas de Colletotrichum tofieldiae de la invenci6n. Se trata de un
20 fen6meno general a la especie Colletotrichum tofieldiae porque se han obtenido efectos similares con distintas cepas de esta especie.
El metodo de la invenci6n produce un aumento del tamano y/o peso y/o numero de flores y/o frutos y/o semillas que puede ser tambien debido a la mejor salud o viabilidad del cultivo (por
25 ejemplo debida a la reducci6n en la aplicaci6n de riego, abonos y/o pesticidas, aumento de la resistencia sistemica o aumento de la resistencia a herbicidas) y/o al aumento de la germinaci6n de semillas y/o caracteristicas de bio� control como la disminuci6n de enfermedades por la disminuci6n de la sensibilidad a pat6genos y/o la mejora de infecciones previas.
El metodo de la invenci6n produce al menos uno de los efectos siguientes:
un aumento en el rendimiento global de la planta;
un aumento en la calidad del material de la planta;
35 un aumento del numero y/o tamano de flores un aumento del numero, tamano y/o peso de frutos
un aumento del numero, tamano, y/ o peso de semillas.
Un aumento en el rendimiento global indica preferiblemente un aumento en el rendimiento de las partes cosechables de la planta. El aumento en el rendimiento puede ser, por 5 ejemplo, cualquier tipo de aumento como que el numero de partes cosechables haya aumentado y/o aumento de su peso y/o aumento del contenido de sustancias de almacenamiento, metabolitos interesantes etc. Un aumento del rendimiento de las plantas significa que las partes cosechables de la planta son al menos un 2%, preferiblemente al menos un 25%, mas preferiblemente un 70% y particularmente preferido al menos un 500%
10 mayor cuando la planta se pone en contacto con la composici6n que comprende esporas, micelio y/o cualquier otra parte del microorganismo de la invenci6n, el medio de cultivo o el filtrado de acuerdo a la invenci6n en comparaci6n con las plantas no tratadas
Un aumento en calidad preferiblemente indica una mejora de las cualidades deseables de
15 una planta. Este aumento de la calidad puede diferir de planta a planta. Respecto a las plantas ornamentales, por ejemplo, Petunia, un aumento en la calidad puede significar un aumento en el numero de flores u hojas. Respecto a los cereales un aumento de la calidad puede significar un aumento en la cantidad de proteinas o contenido de almid6n en las semillas o una alteraci6n deseada en la estructura o composici6n de sustancias de
20 almacenamiento.
En el metodo de la invenci6n, se pone en contacto una planta con una composici6n que comprende el microorganismo Colletotrichum tofieldiae, el medio de cultivo o el filtrado de acuerdo a la invenci6n. La composici6n se puede aplicar en la totalidad de la planta o en 25 cualquiera de sus partes, como en las hojas, en los brotes, en las flores, en los frutos, en las mazorcas, en semillas, en bulbos, en tuberculos, en raices y en plantulas. La aplicaci6n de la composici6n a la planta se puede realizar en cualquier estadio, y como ejemplo se puede aplicar a la semilla antes de la siembra, durante la siembra, despues de la siembra, y antes
o despues de la emergencia, durante el periodo vegetativo, como durante el cultivo en 30 semillero, o en el momento del transplante de las plantulas, o en el momento del esquejado
o enraizado de esquejes, o en el momento de crecimiento en una plantaci6n, o incluso en el periodo reproductivo antes de la floraci6n o durante la floraci6n o durante el proceso de maduraci6n del fruto.
35 Por tanto, otra realizaci6n es el metodo de la invenci6n, donde dicha composici6n se aplica a las semillas de dicha planta.
Otra realizaci6n es el metodo de la invenci6n, donde dicha composici6n se aplica a las partes aereas de dicha planta.
5 Otra realizaci6n es el metodo de la invenci6n, donde dicha composici6n se aplica a las raices de dicha planta o a otras partes subterraneas de dicha planta.
El metodo de la invenci6n incluye el tratamiento por spray o pulverizaci6n sobre plantas completas o cualquiera de sus partes de una diluci6n adecuada de la composici6n de 10 acuerdo a la invenci6n, o la inmersi6n de plantas completas o de cualquiera de sus partes en dicha diluci6n. El metodo de la invenci6n tambien incluye el tratamiento por espolvoreado en seco de plantas completas o de cualquiera de sus partes de una composici6n de acuerdo a la invenci6n. El metodo de la invenci6n incluye el peleteado, o recubrimiento de semillas con una pelicula fina de una composici6n de acuerdo a la invenci6n. La composici6n de
15 acuerdo a la invenci6n tambien puede mezclarse con el liquido de irrigaci6n. El metodo de la invenci6n tambien incluye el tratamiento mediante fragmentos de agar con micelio que se pone en contacto con una parte de la planta, ya sea raiz, tallo u hojas o incluso sobre la superficie de la tierra cerca de las raices del cultivo.
20 En la presente memoria, se entiende por quot;filtradoquot; a un medio de cultivo liquido obtenido del cultivo del microorganismo de la invenci6n. Es posible obtener un medio de cultivo liquido, libre o esencialmente libre del microorganismo de la invenci6n. Este medio de cultivo puede ser preparado primero cultivando el microorganismo de la invenci6n en un medio de cultivo liquido y despues separando el medio de cultivo liquido del microorganismo de la invenci6n.
25 La separaci6n puede ser llevada a cabo por diferentes metodos conocidos por la persona experta en la materia, por ejemplo, por centrifugaci6n o filtraci6n. Es posible, por ejemplo, calentar el medio con el microorganismo de la invenci6n dos veces hasta alrededor de 80 'C durante 30 min y despues eliminar el material fungico por centrifugaci6n.
30 Preferiblemente, el filtrado se obtiene por filtraci6n del medio de cultivo a traves de un filtro con un tamano de poro de no mas de 2 m, preferiblemente a traves de un filtro con un tamano de poro de no mas de 0,2 m. El paso de filtraci6n permite la extracci6n de esencialmente todas las hifas del microorganismo de la invenci6n, mas preferiblemente la filtraci6n tambien eliminaria las esporas e incluso mas preferiblemente esto deberia eliminar
35 todo tipo de material fungico.
La presente invenci6n tambien se refiere a las plantas que, segun el metodo de la invenci6n, se han puesto en contacto con una composici6n que comprende el microorganismo Colletotrichum tofieldiae y/o extractos de dicho microorganismo y/o filtrados de dicho microorganismo, y a los productos producidos a partir de las partes cosechadas de dichas
5 plantas.
Otra realizaci6n es el metodo de la invenci6n, donde dicho microorganismo es una cepa de Colletotrichum tofieldiae depositada con el numero de dep6sito CECT 20833, CECT 20834, CECT 20835 o CECT 20836.
10 Las cepas de Colletotrichum tofieldiae han sido depositadas el 30/05/2013 (cepas con numeros de dep6sito CECT 20833, CECT 20834 y CECT 20835) y el 7/05/2013 (cepa con numero de dep6sito CECT 20836) en la autoridad internacional de dep6sito Colecci6n Espanola de Cultivos Tipo (CECT) con direcci6n Parc Cientific Universitat de Valencia,
15 Catedratico Agustin Escardino, 9. 46980, Paterna, (Valencia), Espana, por Universidad Politecnica de Madrid, con direcci6n en c/ Ramiro de Maeztu, 7, 28040 Madrid, Espana.
El microorganismo de la invenci6n puede ser cultivado sobre una amplia variedad de sustratos naturales o sinteticos. Por ejemplo, puede ser cultivado en diferentes tipos de
20 medios de cultivo s6lidos o liquidos, tales como medio Patata/Dextrosa/Agar (PDA) o Caldo (PDB), y puede ser propagada por tecnicas per se conocidas por expertos. Tambien puede crecer sobre varias fuentes naturales, tales como hojas de varias plantas, granos de polen, harina de avena, patata, zanahoria y celulosa. Tambien puede crecer sobre fuentes artificiales como papel o cart6n y polimeros.
25 El medio de cultivo puede ser constantemente agitado durante el cultivo, por ejemplo con aproximadamente 1 rps. Ademas, la temperatura de cultivo se puede situar en el rango entre 20 y 30 'C.
30 Otra realizaci6n es el metodo de la invenci6n, donde dicho microorganismo esta en forma de esporas, hifas, micelio o esclerocios.
Otra realizaci6n es el metodo de la invenci6n, donde dicha composici6n se aplica al sustrato para el cultivo de dicha planta.
El sustrato es preferiblemente tratado de modo que el microorganismo de la invenci6n se cultiva en el antes que el sustrato se use para el cultivo de plantas. Ejemplos de tratamiento del sustrato incluyen perfusi6n de un liquido al sustrato (por riego, inyecci6n o goteo), pulverizaci6n, espolvoreo o mezcla directa con el sustrato. El metodo de la invenci6n
5 tambien comprende el tratamiento de un medio hidrop6nico, para el cultivo en hidroponia. El metodo de la invenci6n comprende el tratamiento del sustrato o medio hidrop6nico con una composici6n que comprenda la concentraci6n adecuada de micelio y/o esporas y/o cualquier otra parte del microorganismo de la invenci6n, el medio de cultivo o el filtrado de acuerdo a la invenci6n en forma liquida y/o en forma s6lida como granulado o polvo.
10 El metodo de la invenci6n puede realizarse con una composici6n que incluye el microorganismo de la invenci6n solo o formulado con ingredientes inertes. Ejemplos de ingredientes inertes incluyen polvos finos o granulos como minerales, como arcillas, bentonita, calcita, diatomeas y materiales organicos como polvo de maiz o polvo de piel de
15 nuez, materiales organicos sinteticos como urea, sales como carbonato calcico y sulfato am6nico, materiales sinteticos inorganicos como 6xido de silicona; o diluyentes liquidos como hidrocarbonos aromaticos como xileno, alkil benceno, metil naftaleno, alcoholes como el 2 �5 propanol, etilenglicol, glicol propileno, y eter mono etil etilen glicol, cetonas como la acetona, la ciclohexanona e isoforona, aceites vegetales como aceite de soja o aceite de
20 algod6n, hidrocarbonos alifaticos derivados del petr6leo, esteres, dimetil sulf6xido, acetonitrilo y agua. Ejemplos de surfactantes incluyen surfactantes ani6nicos como sales de esteres de alkil sulfato, sales de alkilaril sulfonato, sales de dialkil sufosuccinato, sales de esteres de eter fosfato de alkilaril de polioxietileno, sales de lignosulfonato y policondensados de formaldehido, y surfactantes no i6nicos como eteres de alkil aril
25 polioxietileno, bloques de copolimeros de alkilpolioxipropileno, polioxietileno y esteres de acidos grasos, y surfactantes cati6nicos como sales de alkil trimetilamonio. Ejemplos de otros agentes de formulaci6n auxiliares incluyen polimeros hidrosolubles como el alcohol de polivinilo o la polivinilpirrolidona, polisacaridos como el agar, la goma arabiga, el acido alginico y sus sales, la carboxi metil celulosa, la goma xantano, materiales inorganicos como
30 el silicato de aluminio y magnesio, preservantes, agentes colorantes, agentes estabilizadores como el acido isopropil fosfato y el BHT.
Por tanto, otra realizaci6n es el metodo de la invenci6n, donde dicha composici6n comprende minerales, materiales organicos, compuestos organicos, compuestos 35 inorganicos, diluyentes liquidos, alcoholes, cetonas, aceites vegetales, hidrocarburos alifaticos, esteres, dimetil sulf6xido, acetonitrilo, agua, surfactantes ani6nicos, surfactantes no i6nicos, surfactantes cati6nicos, polimeros hidrosolubles, polisacaridos, preservantes, agentes colorantes, y/o agentes estabilizadores. De forma particular, dichos minerales estan seleccionados del grupo compuesto por arcillas, bentonita, calcita y diatomeas, dichos materiales organicos estan seleccionados del grupo compuesto por polvo de maiz o polvo 5 de piel de nuez, dicho compuesto organico es urea, dichos compuestos inorganicos estan seleccionados del grupo compuesto por carbonato calcico, sulfato am6nico, 6xido de silicona, silicato de aluminio y magnesio, dichos diluyentes liquidos estan seleccionados del grupo compuesto por hidrocarburos aromaticos, hidrocarburos alifaticos, alcoholes, cetonas, aceites vegetales, esteres, dimetil sulf6xido, acetonitrilo y agua, dichos surfactantes 10 ani6nicos estan seleccionados del grupo compuesto por sales de esteres de alkil sulfato, sales de alkilaril sulfonato, sales de dialkil sulfosuccinato, sales de esteres de eter fosfato de alkilaril de polioxietileno, sales de lignosulfonato y policondensados de formaldehido, dichos surfactantes no i6nicos estan seleccionados del grupo compuesto por eteres de alkil aril polioxietileno, bloques de copolimeros de alkilpolioxipropileno, polioxietileno y esteres de 15 acidos grasos, dichos surfactantes cati6nicos son sales de alkil trimetilamonio, dichos polimeros hidrosolubles son alcohol de polivinilo o polivinilpirrolidona, dichos polisacaridos estan seleccionados del grupo compuesto por agar, goma arabiga, acido alginico, sales de acido alginico, carboxi metil celulosa y goma xantano y dichos agentes estabilizadores son acido isopropil fosfato o BHT. De forma particular, dichos hidrocarburos aromaticos estan
20 seleccionados del grupo compuesto por xileno, alkil benceno, metil naftaleno, dichos alcoholes estan seleccionados del grupo compuesto por 2 �5 propanol, etilenglicol, glicol propileno y eter mono etil etilen glicol, dichas cetonas estan seleccionadas del grupo compuesto por acetona, ciclohexanona e isoforona y dichos aceites vegetales son aceite de soja o aceite de algod6n.
25 Otra realizaci6n es el metodo de la invenci6n, donde dicha composici6n comprende sales de fertirrigaci6n, fertilizantes, insecticidas, nematocidas, fungicidas, bactericidas y/o herbicidas.
Otra realizaci6n es el metodo de la invenci6n, donde dicha composici6n es un liquido, un 30 s6lido, una pasta o un gel.
Otra realizaci6n es el metodo de la invenci6n, donde dicha composici6n es un polvo, pastilla, comprimido, granulado o concentrado emulsionable.
35 Otra realizaci6n es el metodo de la invenci6n, donde dicha composici6n se aplica por spray, pulverizaci6n, inmersi6n, irrigaci6n o espolvoreado.
Otra realizaci6n es el metodo de la invenci6n, donde dicha planta esta seleccionada del grupo compuesto por gimnospermas, monocotiled6neas y dicotiled6neas. De forma particular, dicha planta es una planta de la familia Brassicaceae.
En la presente invenci6n, la planta puede ser una planta natural o transgenica.
El metodo de la invenci6n puede ser realizado con todas las posibles plantas y celulas o tejidos derivados de tales plantas. En particular, pueden ser llevados a cabo con todas las 10 Gimnospermas y Angiospermas (monocotiled6neas o dicotiled6neas) o material de planta derivado de tales plantas, incluyendo arboles, arbustos, hierbas y cespedes. Preferiblemente, los usos y procesos se aplican para usar en plantas utiles o materiales o celulas de tales plantas, mas preferiblemente para la agricultura, horticultura, plantas forestales, ornamentales, o de cualquier otro interes comercial. Entre otras, a titulo ilustrativo
15 y sin que limite el alcance de la presente invenci6n: arroz, trigo, cebada, maiz, soja, colza, tomate, judia, asi como diferentes especies frutales (naranjo, limonero, etc.) y de ornamentales.
Otra realizaci6n de la invenci6n es un material de propagaci6n de una planta que
20 comprende el microorganismo Colletotrichum tofieldiae y/o extractos de dicho microorganismo y/o filtrados de dicho microorganismo. De forma particular, dicho material de propagaci6n esta seleccionado del grupo compuesto por semillas, plantulas, plantas j6venes, esquejes, bulbos y tuberculos.
25 En la presente memoria se entiende por quot;material de propagaci6nquot; a cualquier tipo de material celular del cual pueda germinar o desarrollarse una planta. Ejemplos de material de propagaci6n incluyen, pero no estan limitados a: semillas, esquejes, suspensiones celulares, cultivo de callos, cultivo de tejidos, protocormos, explantes o germoplasma. El material de propagaci6n puede tener distinto origen. Por ejemplo, puede estar recien recolectado, o
30 derivar de un stock, como una muestra de semillas o un stock de celulas congeladas.
Otra realizaci6n de la invenci6n es un sustrato para el cultivo de plantas que comprende el microorganismo Colletotrichum tofieldiae y/o extractos de dicho microorganismo y/o filtrados de dicho microorganismo.
El sustrato para el cultivo de plantas puede comprender la espora, el micelio o cualquier otra parte del microorganismo de la invenci6n o el medio de cultivo o filtrado de los mismos o alguna de las posibles combinaciones de algunos de estos componentes. El sustrato puede ser liquido o s6lido.
Ejemplos de sustratos para el cultivo de plantas son medios naturales o sinteticos solidificados y para el cultivo de las plantas, especialmente in vitro. Otros ejemplos son tierra, arena, humus o turba o mezclas de estos.
10 Otra realizaci6n de la invenci6n es una cepa del microorganismo Colletotrichum tofieldiae, depositada con el numero de dep6sito CECT 20833, CECT 20834, CECT 20835 Y CECT 20836.
Otra realizaci6n de la invenci6n es el uso del microorganismo Colletotrichum tofieldiae y/o
15 extractos de dicho microorganismo y/o filtrados de dicho microorganismo para incrementar la producci6n de flores, semillas y/o frutos en una planta
BREVE DESCRIPCION DE LAS FIGURAS
20 Figura 1. Reaislamiento de C. tofieldiae de 6rganos no inoculados de plantas de A. thaliana a los 60 dias post inoculaci6n. A. Aislado CECT 20834 reaislado de hoja (circulo) y tallos (flechas). B. Aislado CECT 20833 reaislado de raiz (flecha) y cuello (circulo).
MODOS DE REALIZACION PREFERENTE
Ejemplo 1: Cribado de hongos que aumentan la productividad de las plantas
Se recolectaron plantas de Arabidopsis thaliana creciendo en condiciones naturales. Estas plantas carecian de sintomas de enfermedad tales como clorosis, manchas foliares y otros
30 tipos de lesiones inducidas por pat6genos. Fragmentos de las hojas de la roseta de las plantas recolectadas se desinfectaron sumergiendolas en 20% de lejia comercial (1% cloro activo) y agitando suavemente durante 5 minutos. Despues, los fragmentos se aclararon dos veces en agua esteril y se pusieron en camara humeda a temperatura ambiente (20 24°C).
35 Los fragmentos se inspeccionaron peri6dicamente, aislando el micelio emergente en placas petri con medio patata dextrosa agar (PDA) con 200 mg/L de cloranfenicol. De entre los aislados obtenidos, se realiz6 un cribado para encontrar hongos que fueran beneficiosos al producir un aumento de producci6n de semilla en la planta (Tabla 1). Para realizar los ensayos del cribado, semillas de Arabidopsis thaliana accesi6n Col� 0 esterilizadas superficialmente se sembraron en sustrato esteril (turba y vermiculita en proporci6n 3:1). Se
5 estratificaron a 4 °C durante 3 dias y despues se mantuvieron en camara de crecimiento controlado a 23 °C. Las plantas se trataron a las 3 semanas de edad (con 4�6 hojas) aplicando un trozo de micelio de alguno de los aislados de 3 mm de diametro sobre una hoja. El micelio se habia obtenido subcultivando el micelio del hongo, obtenido de una planta de Arabidopsis thaliana silvestre sin sintomas de enfermedad, en placas PDA.
10 A las plantas control no se les aplic6 ningun tratamiento y se dispusieron aleatoriamente entre las plantas tratadas. Al comenzar la dehiscencia de los escapos foliares, estos se cubrieron con bolsas de papel para recoger las semillas. Cuando las plantas se secaron, se recogieron las semillas y se pesaron. Tambien se pes6 el resto de la parte aerea de la
15 planta. De entre todos los analizados, seleccionamos el aislado CECT 20833 del genero Colletotrichum, ya que las plantas tratadas con este aislado aumentaron significativamente (Plt;0.04) su producci6n de semilla, siendo el peso de las semillas de las plantas tratadas tres veces mayor que el de las plantas sin tratar (Tabla 1). El peso del resto de la planta no fue significativamente distinto (Pgt;0.05, Tabla 1).
Plantas control Plantas tratadas Peso de Peso seco Peso de semillas por resto planta semillas por Peso seco resto
TRATAMIENTO planta (mg) (mg) planta (mg) planta (mg)
Alternaria sp. 28.0 ± 2.9a 177.9 ± 12.1a 21.6 ± 2.2b 151.1 ± 5.8b
2.8 ±1.1a 85.1 ±7.7 8.8 ±1.7b 90.7 ±4.1
CECT20833
Plectosphaerella sp. 30.3 ± 5.8 218.9 ± 17.2 27.8 ± 4.1 233.6 ± 12.1 Trichoderma sp. 14.9 ± 1.6 143.8 ± 10.1a 16.5 ± 1.5 184.8 ± 11.6b Trichoderma sp. 15.2 ± 1.8 101.5 ± 11.7 16.2 ± 1.6 126.3 ± 10.2 Ulocladium sp. 20.3 ± 3.1 169.7 ± 10.4 19.6 ± 1.8 166.0 ± 7.2
Tabla 1. Pesos (media ± error estandar) de las semillas y peso seco del resto de la planta de
las plantas tratadas o no con micelio segun se describe en el Ejemplo 1. Diferentes letras
indican diferencias significativas entre las plantas tratadas y las plantas control (Plt;0.05) segun un ANOVA. Las plantas tratadas con el aislado CECT 20833 del genero Colletotrichum (en negrita) tuvieron un peso de semilla significativamente mayor que las plantas control, mientras que el peso seco del resto de la planta no fue significativamente
5 mayor.
Ejemplo 2: Identificaci6n de aislados de Colletotrichum sp. de plantas silvestres de Arabidopsis thaliana como Colletotrichum tofieldiae.
10 El aislado CECT 20833 del genero Colletotrichum del cribado del Ejemplo 1 presentaba un micelio oscuro y conidias curvas hialinas en acervulos con cerdas oscuras. Otros aislados obtenidos de la misma manera, identificados como CECT 20834, CECT 20835, y CECT 20836, presentaban una morfologia similar. Todos estos aislados se identificaron como
15 Colletotrichum tofieldiae segun la morfologia y las secuencias de varios loci descritos en Damm y col. (Fungal Diversity 39 (2009) 45-87) que se compararon con secuencias de aislados tipo depositados en la base de datos accesible en http://���.cbs.kna�.nl/Colletotrichum/, albergada en la Oficina Central de Cultivos de Hongos (CBS, Centraalbureau voor Schimmelcultures).
20 La morfologia de estos aislados coincide con la descrita en Damm y col. (Fungal Diversity 39 (2009) 45-87) para C. tofieldiae, anadiendo que el cultivo en medio PDA (agar dextrosa patata) o equivalente, o en papel de filtro o en hojas de A. thaliana produce colonias muy oscuras, que el micelio en cultivo se oscurece y endurece con el tiempo y que puede
25 presentar estructuras engrosadas tipo clamidosporas y/o tipo microesclerocios.
Las similitudes de secuencia (n° de nucle6tidos identicos/n° de nucle6tidos solapantes) de las secuencias comparadas entre los aislados CECT 20833, CECT 20834, CECT 20835 y CECT 20836 y los aislados tipo CBS 168.49, CBS 495. 85 y IMI 288810 de la Oficina
30 Central de Cultivos de Hongos, utilizados en Damm y col. (Fungal Diversity 39 (2009) 4587) para definir la especie C. tofieldiae, fueron superiores al 92%. Las secuencias comparadas fueron las de la subunidad 5.8S del ribosoma con las dos regiones flanqueantes espaciadoras (ITS, similitud gt; 95%), un intr6n de 200� bp del gen de la gliceraldehido� 3�fosfato deshidrogenasa (GAPDH, similitud gt;92%), una secuencia parcial del
35 gen de la actina (ACT, similitud gt;99%), y el gen de la histona 3 (HIS3, similitud gt; 98%). Estas comparaciones se han realizado con la herramienta MycoID de alineamientos pareados de secuencias albergada en la pagina �eb MycoBank (���.mycobank.org) de la Asociaci6n Internacional de Micologia.
El conjunto de estas caracteristicas define la especie o especies de Colletotrichum 5 correspondiente al microorganismo de la presente invenci6n.
Ejemplo 3: Aislados de Colletotrichum tofieldiae persistieron en plantas tratadas al menos dos meses post inoculaci6n y se traslocaron o dispersaron a otros 6rganos diferentes de la hoja inoculada tales como raiz, corona, otras hojas y tallos.
10 Semillas de Arabidopsis thaliana accesi6n Col� 0 esterilizadas superficialmente se sembraron en sustrato esteril (turba y vermiculita en proporci6n 3:1). Se estratificaron a 4 °C durante 3 dias y despues se mantuvieron en camara de crecimiento controlado a 23 °C, en ciclo corto (10 horas diarias de luz). Las plantas se trataron a las 3 semanas de edad con los aislados
15 CECT 20833, CECT 20834 y CECT 20835 de Colletotrichum tofieldiae mediante la aplicaci6n en tres hojas de una gota de suspensi6n de esporas a 106 esporas/ml. Las plantas completas se recolectaron a los 60 dias post inoculaci6n (dpi).
Raices, hojas de la roseta y tallos se separaron y cortaron en fragmentos de 25 mm2
20 aproximadamente, se desinfectaron segun se ha descrito previamente y se incubaron en camara humeda a temperatura ambiente. Despues de una semana, Colletotrichum tofieldiae fue reaislado de al menos una muestra de todas las plantas inoculadas. El hongo se reaisl6 de hojas diferentes de las inoculadas, de la corona, de las raices y del tallo (Tabla 2, Figura 1). No se observ6 crecimiento de C. tofieldiae en ninguna de las plantas control tratadas con
25 agua destilada.
Porcentaje de reaislamiento Aislado Hojas Tallo Cuello Raiz Total1 CECT 20833 80% 0% 67% 33% 100% CECT 20834 100% 17% 50% 83% 100% CECT 20835 100% 8% 75% 67% 100% Tabla 2. Porcentaje de plantas de las que reaisl6 C. tofilediae de 6rganos distintos a los inoculados (hojas, tallos, cuello o raiz) a los 60 dias tras el tratamiento. 1 Porcentaje de plantas de las que se ha reaislado C. tofieldiae en al menos una muestra de un 6rgano no
30 inoculado.
Ejemplo 4: El aislado CECT 20834 de Colletotrichum tofieldiae increment6 la producci6n de semillas y el peso de semillas por planta en plantas tratadas con micelio o esporas
Semillas de Arabidopsis thaliana accesi6n Col� 0 esterilizadas superficialmente se sembraron
5 en sustrato esteril (turba y vermiculita en proporci6n 3:1), se estratificaron a 4 °C durante 3 dias y despues se mantuvieron en camara de crecimiento controlado a 23 °C. A las tres semanas de edad, se sometieron a alguno de los siguientes tratamientos a) Tratamiento con un trozo de micelio del aislado CECT 20834 de la misma forma que en el ejemplo 1; b) Aplicaci6n de una suspensi6n de esporas del aislado CECT 20834 en agua destilada esteril
10 a una concentraci6n de 106 esporas/ml aplicada en spray sobre toda la planta y el sustrato debajo de la misma; c) Tratamiento control consistente en la aplicaci6n de agua destilada esteril en spray sobre toda la planta y el sustrato debajo de la misma.
En el caso del tratamiento b, las esporas se obtuvieron resuspendiendo en agua destilada
15 esteril las esporas obtenidas del cultivo del hongo en medio PDA. Las plantas sometidas a cada uno de los tratamientos se dispusieron de manera aleatorizada. Al comenzar la dehiscencia de los escapos foliares, estos se cubrieron con bolsas de papel para recoger las semillas. Cuando las plantas se secaron, se recogieron las semillas y se pesaron. Tambien se pes6 el resto de la parte aerea de la planta.
20 La producci6n de semilla por planta se midi6 como el peso de todas las semillas cosechadas de cada planta al final del ciclo. La producci6n de semilla de las plantas tratadas con CECT 20834 fue significativamente mayor que la de las plantas control (Plt;0.001), con un incremento de peso del 37% para las plantas tratadas con micelio y del 56% para las plantas
25 tratadas con la suspensi6n de esporas en spray (Tabla 2). El incremento de la producci6n de semilla se debe en parte a la producci6n de semillas de mayor peso, ya que el peso de 100 semillas de las plantas tratadas con CECT 20834 mostr6 un incremento significativo (Plt;0.06) de hasta el 42% respecto a las plantas control. El peso seco del resto de la planta no fue significativamente distinto (Pgt;0.10). El hongo se reaisl6, a las 6 semanas tras el
30 tratamiento, del 75% de las plantas inoculadas con micelio y del 100% de las plantas inoculadas con spray. Este ejemplo demuestra que la capacidad de incrementar la producci6n de semillas no es exclusiva del aislado CECT 20833, sino que se puede extender a otros aislados de C. tofieldiae y que el tratamiento con esporas da resultados similares al tratamiento con micelio.
- Peso de 100
- Peso seco de la
- Peso de semillas
- semillas por planta planta sin semillas
- TRATAMIENTO
- por planta (mg)� (mg)� (mg)�
Spray con agua 35.0 ± 3.6a 1.17 ± 0.11a 213.9 ± 12.0
destilada Micelio 47.5 ± 3.7b (37%) 1.66 ± 0.13b (42%) 249.3 ± 15.3 (16%) Spray con suspensi6n
56.1 ± 2.9b (56%) 1.65 ± 0.19b (41%) 239.6 ± 16.9 (12%)
de esporas Tabla 3. Pesos (media ± error estandar) de las semillas por planta y de 100 semillas por cada planta y peso seco del resto de la planta (planta sin semillas) de las plantas tratadas con micelio o suspensi6n de esporas del aislado CECT 20834 o spray de agua destilada segun se describe en el Ejemplo 4. �Diferentes letras muestran diferencias significativas
5 segun un ANOVA (Plt;0.001, para el peso de semillas por planta y Plt;0.06 para el peso de 100 semillas). No se encontraron diferencias significativas en el peso de la planta sin semilla (Pgt;0.10). El incremento en porcentaje, comparando plantas tratadas y no tratadas, se indica entre parentesis.
10 Ejemplo 5: Los aislados CECT 20835 y CECT 20836 de Colletotrichum tofieldiae incrementan la producci6n de semillas (peso de semilla por planta) en plantas tratadas con una suspensi6n de esporas aplicadas en spray. El incremento es proporcional a la persistencia del hongo en la planta.
15 Semillas de Arabidopsis thaliana accesi6n Col� 0 esterilizadas superficialmente se sembraron en sustrato esteril (turba y vermiculita en proporci6n 3:1), se estratificaron a 4 °C durante 3 dias y despues se mantuvieron en camara de crecimiento controlado a 23°C. A las tres semanas de edad, se sometieron a alguno de los siguientes tratamientos a) Aplicaci6n de una suspensi6n de esporas del aislado CECT 20835 de Colletotrichum sp; b) Aplicaci6n de
20 una suspensi6n de esporas del aislado CECT 20836 de Colletotrichum sp; c) Tratamiento control consistente en la aplicaci6n de agua destilada esteril. Todos los tratamientos se aplicaron en spray por toda la planta y el suelo debajo de la misma.
El in6culo de los tratamientos a, b y c procede de suspensiones esporales mantenidas en
25 glicerol al 30% a 80°C y diluidas en agua destilada esteril a una concentraci6n de 106 esporas/ml. Tras la aplicaci6n del tratamiento, las plantas se mantuvieron a 25 °C, ciclo corto. A las dos semanas tras el tratamiento, el hongo se reaisl6 del 17% de las plantas inoculadas con CECT 20835, del 20% de las plantas inoculadas con CECT 20836 y de ninguna planta tratada s6lo con agua. A las seis semanas tras el tratamiento, el hongo se reaisl6 del 60% de las plantas tratadas con CECT 20835 y de ninguna de las plantas tratadas con CECT 20836 o s6lo agua. Al comenzar la dehiscencia de los escapos foliares,
5 estos se cubrieron con bolsas de papel para recoger las semillas. Cuando las plantas se secaron, se recogieron las semillas y se pesaron. Tambien se pes6 el resto de la parte aerea de la planta.
La producci6n de semilla por planta se midi6 como el peso de todas las semillas cosechadas
10 de cada planta al final del ciclo. El ANOVA de los pesos de las semillas indica diferencias significativas en el peso medio de semillas por planta entre plantas sometidas a los distintos tratamientos (Plt;0.0001, Tabla 4): Las plantas tratadas con CECT 20835 tuvieron el mayor peso medio de semillas por planta, con un incremento del 550% respecto a las plantas tratadas con s6lo agua y las plantas tratadas con CECT 20836 tuvieron un incremento del
15 peso medio de semillas del 400% respecto a las plantas tratadas s6lo con agua. No se encontraron diferencias significativas en el peso de la planta sin semilla (Pgt;0.10). Este ejemplo muestra que el efecto de aplicar Colletotrichum tofieldiae puede ser proporcional a la persistencia del hongo en la planta.
Peso de semillas por Peso seco de la planta sin TRATAMIENTO planta (mg)� semillas (mg)
Spray con agua destilada 5.7 ± 2.7a 273.6 ± 14.9 Spray con suspensi6n de esporas de
CECT 20835 Spray con suspensi6n de esporas de
30. ± 2.7c (400%) 232.9 ± 15.5
CECT 20836
Tabla 4. Pesos (media ± error estandar) de las semillas por planta y peso seco del resto de la planta de las plantas (planta sin semillas) tratadas segun se describe en el Ejemplo 5. � Diferentes letras muestran diferencias significativas segun un ANOVA entre los distintos tratamientos (Plt;0.0001). El peso del resto de la planta no fue significativamente distinto
25 entre los distintos tratamientos (Pgt;0.10). El incremento en porcentaje, comparado entre plantas tratadas con los distintos aislados y las plantas control, se indica entre parentesis.
Ejemplo 6: Colletotrichum tofieldiae increment6 el numero de frutos de las plantas tratadas con una suspensi6n de esporas tanto en plantas sembradas en sustrato esteril como en plantas sembradas en sustrato no esteril.
5 Semillas de Arabidopsis thaliana accesi6n Col� 0 esterilizadas superficialmente se sembraron en sustrato esteril y no esteril (turba y vermiculita en proporci6n 3:1). Se estratificaron a 4 °C durante 3 dias y despues se mantuvieron en camara de crecimiento controlado a 23°C. A las tres semanas de edad, se sometieron a alguno de los siguientes tratamientos a) Aplicaci6n de una suspensi6n de esporas del aislado CECT 20833 de C. tofieldiae; b) aplicaci6n de una
10 suspensi6n de esporas del aislado CECT 20835 de C. tofieldiae; c) aplicaci6n de agua destilada esteril. Todos los tratamientos se aplicaron en spray por toda la planta. El in6culo de los tratamientos a y b procede de suspensiones esporales mantenidas en glicerol al 30% a �80°C, lavadas y diluidas en agua destilada esteril a una concentraci6n de 106 esporas/ml. Las plantas se distribuyeron al azar. El numero de frutos por planta se cont6 en el momento
15 del inicio de la apertura de las silicuas. Los resultados se muestran en la Tabla 5. Las plantas tratadas con los aislados CECT 20833 y CECT 20835 de C. tofieldiae presentaron un incremento significativo de frutos de hasta un 39%. Este experimento demuestra que el incremento en la producci6n de semillas se debe en parte a la producci6n de un mayor numero de frutos por planta. Este experimento demuestra que el efecto del hongo se
20 mantiene en plantas sobre sustrato no esteril.
N° de frutos�
Sustrato esteril Sustrato no esteril
Spray con agua destilada 53.3 ± 6.5a 11.3 ± 0.7a
C. tofieldiae CECT 20833 73.9 ± 7.0b (39%) 14.7 ± 1.4b (31%)
C. tofieldiae CECT 20835 60.4 ± 5.8b (13%) 14.3 ± 0.8b (27%) Tabla 5. Numero de frutos (media ± error estandar) por planta tratadas con una suspensi6n de esporas de diferentes aislados de C. tofieldiae segun se describe en el Ejemplo 6. �Letras distintas indican diferencias significativas en un ANOVA (Plt;0.08 para el sustrato esteril y
25 Plt;0.04 para el sustrato no esteril). El incremento en porcentaje, comparado entre plantas tratadas y no tratadas, se indica entre parentesis.
Ejemplo 7: Colletotrichum tofieldiae increment6 el numero de frutos de las plantas sembradas en sustratos (esteril o no esteril) tratados con una suspensi6n de esporas.
Semillas de Arabidopsis thaliana accesi6n Col� 0 esterilizadas superficialmente se sembraron en sustrato esteril y no esteril (turba y vermiculita en proporci6n 3:1). Se estratificaron a 4 °C durante 3 dias y despues se mantuvieron en camara de crecimiento controlado a 23°C. 5 Cuando las plantas tenian tres semanas de edad se depositaron en el sustrato, al lado de la planta, 200 l por planta de a) una suspensi6n de esporas del aislado CECT 20833 de C. tofieldiae; b) una suspensi6n de esporas del aislado CECT 20835 de C. tofieldiae; c) agua destilada esteril. El in6culo de los tratamientos a y b procede de suspensiones esporales mantenidas en glicerol al 30% a 80°C lavadas y diluidas en agua destilada esteril a una
10 concentraci6n de 106 esporas/ml. Las plantas se distribuyeron al azar. El numero de frutos por planta se cont6 en el momento del inicio de la apertura de las silicuas. Los resultados se muestran en la Tabla 6. Las plantas tratadas con los aislados CECT 20833 y CECT 20835 de C. tofieldiae presentan un incremento de frutos de hasta un 27%.
N° de frutos� Sustrato esteril Sustrato no esteril
Spray con agua destilada 53.8 ± 6.0 16.6 ± 1.5
C. tofieldiae CECT 20833 64.8 ± 7.0 (20%) 17.9 ± 1.5 (8%)
C. tofieldiae CECT 20835 68.4 ± 7.3 (27%) 17.6 ± 5.1 (6%) Tabla 5. Numero de frutos (media ± error estandar) por planta tratadas con una suspensi6n 15 de esporas de diferentes aislados de Colletotrichum aplicada directamente en el sustrato
segun se describe en el Ejemplo 7. � El incremento en porcentaje, comparado entre plantas tratadas y no tratadas, se indica entre parentesis.
Claims (17)
- REIVINDICACIONES1. Metodo para incrementar la producci6n de flores, semillas y/o frutos en una planta, caracterizado por que comprende la etapa de poner en contacto dicha planta con una composici6n que comprende el microorganismo Colletotrichum tofieldiae y/o extractos de5 dicho microorganismo y/o filtrados de dicho microorganismo.
- 2. Metodo segun la reivindicaci6n 1, caracterizado por que dicho microorganismo es una cepa de Colletotrichum tofieldiae depositada con el numero de dep6sito CECT 20833, CECT 20834, CECT 20835 o CECT 20836.
- 3. Metodo segun una de las reivindicaciones 1 6 2, caracterizado por que dicho 10 microorganismo esta en forma de esporas, hifas, micelio o esclerocios.
-
- 4.
- Metodo segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado por que dicha composici6n se aplica a las semillas de dicha planta.
-
- 5.
- Metodo segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado por que dicha composici6n se aplica a las partes aereas de dicha planta.
- 15 6. Metodo segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado por que dicha composici6n se aplica a las raices de dicha planta o a otras partes subterraneas de dicha planta.
- 7. Metodo segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado por que dicha composici6n se aplica al sustrato para el cultivo de dicha planta.
- 20 8. Metodo segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado por que dicha composici6n comprende minerales, materiales organicos, compuestos organicos, compuestos inorganicos, diluyentes liquidos, alcoholes, cetonas, aceites vegetales, hidrocarburos alifaticos, esteres, dimetil sulf6xido, acetonitrilo, agua, surfactantes ani6nicos, surfactantes no i6nicos, surfactantes cati6nicos, polimeros hidrosolubles,
25 polisacaridos, preservantes, agentes colorantes, y/o agentes estabilizadores. - 9. Metodo segun la reivindicaci6n 8, caracterizado por que dichos minerales estan seleccionados del grupo compuesto por arcillas, bentonita, calcita y diatomeas, dichos materiales organicos estan seleccionados del grupo compuesto por polvo de maiz o polvo de piel de nuez, dicho compuesto organico es urea, dichos compuestos30 inorganicos estan seleccionados del grupo compuesto por carbonato calcico, sulfato am6nico, 6xido de silicona, silicato de aluminio y magnesio, dichos diluyentes liquidos estan seleccionados del grupo compuesto por hidrocarburos aromaticos, hidrocarburos alifaticos, alcoholes, cetonas, aceites vegetales, esteres, dimetil sulf6xido, acetonitrilo y agua, dichos surfactantes ani6nicos estan seleccionados del grupo compuesto por sales35 de esteres de alkil sulfato, sales de alkilaril sulfonato, sales de dialkil sulfosuccinato, sales de esteres de eter fosfato de alkilaril de polioxietileno, sales de lignosulfonato y policondensados de formaldehido, dichos surfactantes no i6nicos estan seleccionados del grupo compuesto por eteres de alkil aril polioxietileno, bloques de copolimeros de alkilpolioxipropileno, polioxietileno y esteres de acidos grasos, dichos surfactantes cati6nicos son sales de alkil trimetilamonio, dichos polimeros hidrosolubles son alcohol5 de polivinilo o polivinilpirrolidona, dichos polisacaridos estan seleccionados del grupo compuesto por agar, goma arabiga, acido alginico, sales de acido alginico, carboxi metil celulosa y goma xantano y dichos agentes estabilizadores son acido isopropil fosfato o BHT.
- 10. Metodo segun la reivindicaci6n 9, caracterizado por que dichos hidrocarburos aromaticos10 estan seleccionados del grupo compuesto por xileno, alkil benceno, metil naftaleno, dichos alcoholes estan seleccionados del grupo compuesto por 2 �5 propanol, etilenglicol, glicol propileno y eter mono etil etilen glicol, dichas cetonas estan seleccionadas del grupo compuesto por acetona, ciclohexanona e isoforona y dichos aceites vegetales son aceite de soja o aceite de algod6n.15 11. Metodo segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, caracterizado por que dicha composici6n comprende sales de fertirrigaci6n, fertilizantes, insecticidas, nematocidas, fungicidas, bactericidas y/o herbicidas.
- 12. Metodo segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, caracterizado por que dicha composici6n es un liquido, un s6lido, una pasta o un gel.20 13. Metodo segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, caracterizado por que dicha composici6n es un polvo, pastilla, comprimido, granulado o concentrado emulsionable.
-
- 14.
- Metodo segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, caracterizado por que dicha composici6n se aplica por spray, pulverizaci6n, inmersi6n, irrigaci6n o espolvoreado.
-
- 15.
- Metodo segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, caracterizado por que dicha
25 planta esta seleccionada del grupo compuesto por gimnospermas, monocotiled6neas y dicotiled6neas. - 16. Metodo segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, caracterizado por que dicha planta es una planta de la familia Brassicaceae.
- 17. Material de propagaci6n de una planta que comprende el microorganismo Colletotrichum 30 tofieldiae y/o extractos de dicho microorganismo y/o filtrados de dicho microorganismo.
-
- 18.
- Material de propagaci6n segun la reivindicaci6n 17, que esta seleccionado del grupo compuesto por semillas, plantulas, plantas j6venes, esquejes, bulbos y tuberculos.
-
- 19.
- Sustrato para el cultivo de plantas que comprende el microorganismo Colletotrichum tofieldiae y/o extractos de dicho microorganismo y/o filtrados de dicho microorganismo.
35 20. Cepa del microorganismo Colletotrichum tofieldiae, depositada con el numero de dep6sito CECT 20833, CECT 20834, CECT 20835 o CECT 20836. - 21. Uso del microorganismo Colletotrichum tofieldiae y/o extractos de dicho microorganismo y/o medios de filtrado de dicho microorganismo para incrementar la producci6n de flores, semillas y/o frutos en una planta.FIG. 1OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCASN.º solicitud: 201331839ESPAÑAFecha de presentación de la solicitud: 17.12.2013Fecha de prioridad:INFORME SOBRE EL ESTADO DE LA TECNICA51 Int. Cl. : Ver Hoja AdicionalDOCUMENTOS RELEVANTES
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- DAMM U et al. Colletotrichum species with curved conidia from herbaceous hosts. Fungal Diversity. 2009 VOL: 39 Págs: 45-87 ISSN 1560-2745 (print) ISSN 1878-9129 (electronic), página 51. 17,18
- A
- EP 0485229 A1 (SHELL INT RESEARCH) 13.05.1992, reivindicaciones. 1-21
- A
- WO 9929177 A1 (MAX PLANCK GESELLSCHAFT et al.) 17.06.1999, reivindicaciones. 1-21
- A
- VAINGANKAR J D et al. Screening for efficient AM (arbuscular mycorrhizal) fungal bioinoculants for two commercially important ornamental flowering plant species of Asteraceae. Biological Agriculture & Horticulture. 2012. VOL: 28 No: 3 Págs: 167-176 ISSN 0144-8765 (print) ISSN 2165-0616 (electronic) Doi: doi:10.1080/01448765.2012.727541, resumen. 1-21
- Categoría de los documentos citados X: de particular relevancia Y: de particular relevancia combinado con otro/s de la misma categoría A: refleja el estado de la técnica O: referido a divulgación no escrita P: publicado entre la fecha de prioridad y la de presentación de la solicitud E: documento anterior, pero publicado después de la fecha de presentación de la solicitud
- El presente informe ha sido realizado • para todas las reivindicaciones • para las reivindicaciones nº:
- Fecha de realización del informe 09.01.2014
- Examinador I. Rueda Molíns Página 1/4
INFORME DEL ESTADO DE LA TÉCNICANº de solicitud: 201331839CLASIFICACIÓN OBJETO DE LA SOLICITUD C12N1/14 (2006.01)A01H3/00 (2006.01) C12R1/665 (2006.01) Documentación mínima buscada (sistema de clasificación seguido de los símbolos de clasificación)C12N, A01H, C12RBases de datos electrónicas consultadas durante la búsqueda (nombre de la base de datos y, si es posible, términos de búsqueda utilizados) INVENES, EPODOC, WPI, BIOSISInforme del Estado de la Técnica Página 2/4OPINIÓN ESCRITANº de solicitud: 201331839Fecha de Realización de la Opinión Escrita: 09.01.2014Declaración- Novedad (Art. 6.1 LP 11/1986)
- Reivindicaciones Reivindicaciones 1-21 SI NO
- Actividad inventiva (Art. 8.1 LP11/1986)
- Reivindicaciones Reivindicaciones 1-16, 19-21 17, 18 SI NO
Se considera que la solicitud cumple con el requisito de aplicación industrial. Este requisito fue evaluado durante la fase de examen formal y técnico de la solicitud (Artículo 31.2 Ley 11/1986).Base de la Opinión.-La presente opinión se ha realizado sobre la base de la solicitud de patente tal y como se publica.Informe del Estado de la Técnica Página 3/4OPINIÓN ESCRITANº de solicitud: 2013318391. Documentos considerados.-A continuación se relacionan los documentos pertenecientes al estado de la técnica tomados en consideración para la realización de esta opinión.- Documento
- Número Publicación o Identificación Fecha Publicación
- D01
- DAMM U et al. Colletotrichum species with curved conidia from herbaceous hosts .Fungal Diversity. VOL: 39 Págs: 45-87 ISSN 1560-2745 (print) ISSN 1878-9129 (electronic) 2009
- D02
- EP 0485229 A1 (SHELL INT RESEARCH) 1992
- D03
- WO 9929177 A1 (MAX PLANCK GESELLSCHAFT et al.) 1999
- D04
- VAINGANKAR J D et al. Screening for efficient AM (arbuscular mycorrhizal) fungal bioinoculants for two commercially important ornamental flowering plant species of Asteraceae. Biological Agriculture & Horticulture. VOL: 28 No: 3 Págs: 167-176 ISSN 0144-8765 (print) ISSN 2165-0616 (electronic) Doi: doi:10.1080/01448765.2012.727541 2011
- 2. Declaración motivada según los artículos 29.6 y 29.7 del Reglamento de ejecución de la Ley 11/1986, de 20 de marzo, de Patentes sobre la novedad y la actividad inventiva; citas y explicaciones en apoyo de esta declaraciónNOVEDAD Y ACTIVIDAD INVENTIVA (artículos 6 y 8 de la LP11/1986)En las reivindicaciones 1-16, de la solicitud de patente se reivindica un método para incrementar la producción de flores, semillas y/o frutos en una planta, caracterizado por que comprende la etapa de poner en contacto dicha planta con una composición que comprende el microorganismo Colletotrichum tofieldiae y/o extractos de dicho microorganismo y/o filtrados de dicho microorganismo.En las reivindicaciones 17 y 18 se reivindica el material de propagación de una planta que comprende el microorganismo Colletotrichum tofieldiae y/o extractos de dicho microorganismo y/o filtrados de dicho microorganismo.En la reivindicación 19 se reivindica un sustrato para el cultivo de plantas que comprende el microorganismo Colletotrichum tofieldiae y/o extractos de dicho microorganismo.En la reivindicación 20 se reivindican diferentes cepas del microorganismo Colletotrichum tofieldiae depositadas con números de depósito específicos.En la reivindicación 21 se reivindica el uso del microorganismo Colletotrichum tofieldiae y/o extractos de dicho microorganismo y/o medios de filtrado de dicho microorganismo para incrementar la producción de flores, semillas y/o frutos en una planta.El documento D01 muestra un estudio de diferentes especies pertenecientes al género Colletotrichum. En la tabla 1, de la página 51, se muestra como Colletotrichum tofieldiae se encuentra asociado con las especies vegetales Tofieldia calyculata y Lupinus polyphyllus. Por ello, las reivindicaciones 17 y 18 de la solicitud de patente, que reivindican el material de propagación de una planta que comprende el microorganismo Colletotrichum tofieldiae, presentan novedad, pero no actividad inventiva, según lo establecido en los artículos 6 y 8 de la LP11/1986.Los documentos D02, D03 y D04 reflejan el uso de diferentes especies de hongos para modificar patrones de desarrollo en determinadas especies vegetales.Informe del Estado de la Técnica Página 4/4
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