ES2420479T3

ES2420479T3 - Procedimiento para la producción de microesferas cargadas con fármacos y microesferas cargadas con fármacos producidas mediante el mismo

Info

Publication number: ES2420479T3
Application number: ES07808011T
Authority: ES
Inventors: Hong Kee Sah
Original assignee: SK Chemicals Co Ltd; Industry Collaboration Foundation of Ewha University
Current assignee: SK Chemicals Co Ltd; Industry Collaboration Foundation of Ewha University
Priority date: 2006-08-31
Filing date: 2007-08-31
Publication date: 2013-08-23
Anticipated expiration: 2027-08-31
Also published as: US20090318569A1; CN101511347A; JP5302888B2; EP2063874A1; KR20080020580A; CN101511347B; EP2063874B1; JP2010502594A; KR100918092B1; EP2063874A4; US8202524B2; WO2008026894A1

Abstract

Un procedimiento para la producción de microesferas poliméricas cargadas con fármacos, comprendiendo elprocedimiento las etapas de: a) añadir una fase de dispersión que contiene un compuesto de alto peso molecular, un fármaco y un disolventeorgánico no hidrosoluble a un disolvente de dispersión para producir una emulsión de tipo O/5 W (aceite en agua)o de tipo O/O (aceite en aceite), o añadir una emulsión de tipo W/O (agua en aceite), que se prepara mediantela emulsión de una solución acuosa, en la que se disuelve un fármaco, en un disolvente orgánico nohidrosoluble, en el que se disuelve el compuesto de alto peso molecular, al disolvente de dispersión paraproducir una emulsión de tipo W/O/W (agua en aceite en agua); y b) añadir una solución de amoníaco a la emulsión producida en la etapa a) para convertir el disolvente orgánicono hidrosoluble en disolventes hidrosolubles.

Description

Procedimiento para la producción de microesferas cargadas con fármacos y microesferas cargadas con fármacos producidas mediante el mismo

Campo técnico

La presente invención se refiere a un procedimiento para la producción de microesferas poliméricas cargadas con fármacos y a microesferas poliméricas cargadas con fármacos producidas mediante el mismo; en particular, a un procedimiento para la producción de microesferas poliméricas cargadas con fármacos que comprende las etapas de producir una emulsión mediante la adición de una fase de dispersión que contiene un compuesto de alto peso molecular, un fármaco y un disolvente orgánico no hidrosoluble a un disolvente de dispersión, y añadir una solución de amoníaco a la emulsión producida para convertir el disolvente orgánico no hidrosoluble en disolventes hidrosolubles, y a las microesferas poliméricas cargadas con fármacos producidas mediante el procedimiento.

Antecedentes de la técnica

Las formulaciones inyectables convencionales, tales como soluciones, suspensiones y emulsiones, se eliminan rápidamente del organismo tras la administración intramuscular o subcutánea, y por lo tanto, resulta esencial realizar una administración frecuente de las mismas para el tratamiento de enfermedades crónicas. La microencapsulación se ha desarrollado para resolver este problema, y se refiere a un procedimiento de producción para la encapsulación de fármacos en microesferas (de aquí en adelante, el término "microesfera” incluirá el de “nanoesferas”) que consisten en compuestos de alto peso molecular. Las microesferas son normalmente de un tamaño del orden de los μm, y se pueden administrar a un ser humano o animal mediante inyección intramuscular o subcutánea. Además, es posible producir microesferas que tengan diversas tasas de liberación de fármaco, de modo que se pueda controlar el período de administración del fármaco. Por lo tanto, incluso con una sola administración de un fármaco terapéutico, es posible mantener su concentración eficaz durante un largo período de tiempo, pudiéndose minimizar la cantidad total de fármaco terapéutico administrado para mejorar el cumplimiento terapéutico por parte de los pacientes. Por consiguiente, famosas compañías farmacéuticas de todo el mundo están muy interesadas en la producción de microesferas poliméricas cargadas con fármacos.

En la producción de microesferas poliméricas mediante microencapsulación, el poli-d,l-lactida-co-glicolida (PLGA) ha sido el compuesto de alto peso molecular más ampliamente usado. El PLGA es un compuesto de alto peso molecular biocompatible que se hidroliza in vivo para convertirse en ácido láctico y ácido glicólico no tóxicos. Por lo tanto, las industrias farmacéuticas han realizado amplios estudios sobre el desarrollo de la formulación farmacológica con el uso de PLGA, y los ejemplos de productos de microesfera disponibles actualmente producidos en los que se usa PLGA incluyen Risperdal® Consta®, Sandostatin LAR®, Vivitrol® y Lupron Depot®. Cada uno de ellos se inyecta a un paciente una vez para controlar la liberación de risperidona, acetato de octreotida, naltrexona y acetato de leuprolida de 2 semanas a 4 meses.

Dichas microesferas poliméricas cargadas con fármacos se pueden producir de una manera convencional mediante un procedimiento de evaporación de disolventes o un procedimiento de extracción de disolventes, con el uso de un disolvente orgánico tal como cloruro de metileno y acetato de etilo.

En primer lugar, se describirá brevemente el procedimiento de evaporación de disolventes (véanse las patentes de Estados Unidos Nº 6.471.996, 5.985.309 y 5.271.945). Se dispersa o disuelve un fármaco en un disolvente orgánico, en el que se disuelve un compuesto de alto peso molecular, y luego se emulsiona en un medio de dispersión tal como agua para producir una emulsión de aceite en agua (O/W). A continuación, se difunde el disolvente orgánico de la emulsión en un medio de dispersión y se evapora a través de la interfase de aire/agua para formar las microesferas poliméricas cargadas con fármacos. En este momento, para acelerar la difusión del disolvente orgánico en el medio de dispersión, se usa el procedimiento de extracción de disolvente orgánico mediante una reducción de la presión, un aumento de la temperatura y una cantidad excesiva de agua. Un disolvente orgánico de dispersión usado generalmente para disolver el PLGA de alto peso molecular es el cloruro de metileno. El cloruro de metileno puede disolver bien un copolímero de PLGA con diversos pesos moleculares y proporciones de lactida:glicolida, y no se puede mezclar bien con agua debido a su baja hidrosolubilidad del 1,32 % en peso. Por lo tanto, el cloruro de metileno es un disolvente adecuado para la producción de la emulsión de aceite en agua. Además, debido al bajo punto de ebullición, de 39,8 ºC, a través de la interfase de agua/aire, se evaporan pequeñas cantidades de moléculas de cloruro de metileno que se difundieron desde gotitas líquidas de emulsión en el agua. Dicho procedimiento, se repite de manera continua para eliminar el cloruro de metileno de las gotitas de la emulsión, formando así las microesferas. Por último, el cloruro de metileno residual presente en las microesferas se seca fácilmente y se retira debido a su bajo punto de ebullición. Basado en el procedimiento de evaporación de disolventes, en la Fig. 1, se muestra un diagrama que muestra la conversión de las gotitas de emulsión en microesferas. Como se muestra en la Fig. 1, existe una fase de dispersión que consiste en PLGA/fármaco/cloruro de metileno en la fase externa, tal como el agua, en forma de emulsión de aceite en agua (el cloruro de metileno disuelto en el agua se representa como Δ) (A), y si se repiten la difusión de cloruro de metileno en agua y su evaporación, las gotitas de emulsión se convierten en micropartículas como se muestra en (B).

Asimismo, aunque el cloruro de metileno es el disolvente más óptimo usado para la producción de emulsiones en las que es muy volátil, no se mezcla bien con el agua y tiene un punto de ebullición más bajo que el agua, presenta los siguientes problemas: (a) es un carcinógeno demostrado experimentalmente; (b) destruye la capa de ozono de la atmósfera para generar un ambiente tóxico, causando un aumento del cáncer de piel en seres humanos; (c) es una de las 38 sustancias tóxicas y peligrosas anunciadas por la Agencia para Sustancias Tóxicas y el Registro de Enfermedades del Departamento de Sanidad y Servicios Humanos de EE.UU.; (d) se requiere una gran cantidad de tiempo para eliminar completamente el cloruro de metileno de las gotitas de emulsión, ya que tiene una baja hidrosolubilidad, del aproximadamente 1,32 % en peso, y solo se disuelven en agua y se evaporan pequeñas cantidades de cloruro de metileno. Por ejemplo, en la patente de Estados Unidos Nº 6.884.435, se agita la emulsión durante una noche para eliminar el cloruro de metileno de la misma, y se introducen condiciones tales como el aumento de la temperatura o la reducción de la presión en un reactor para acortar el tiempo de producción de las microesferas (véanse la patente de Estados Unidos Nº 3.691.090, 3.891.570, 6.270.700 y 6.572.894).

Por otro lado, el procedimiento de extracción de disolventes usado para la producción de microesferas poliméricas cargadas con fármacos es un procedimiento para extraer de manera eficaz el disolvente orgánico de las gotitas de emulsión usando una gran cantidad de disolvente solubilizante. Cuando el disolvente orgánico se extrae de las gotitas de emulsión, los compuestos de alto peso molecular disueltos se endurecen para convertir las gotitas de emulsión en microesferas. El disolvente solubilizante generalmente usado es el agua, y el grado de hidrosolubilidad del disolvente orgánico afecta en gran medida a la cantidad de agua necesaria. Por ejemplo, el cloruro de metileno tiene una hidrosolubilidad del 1,32 % en peso, con lo que se necesitaba una cantidad muy grande de agua para la extracción del cloruro de metileno de la emulsión. Sin embargo, se produce una gran cantidad de aguas residuales que contienen cloruro de metileno, por lo que el tratamiento de las aguas residuales se convierte en un problema. Por lo tanto, en el procedimiento de extracción de disolventes, se usa principalmente acetato de etilo, que tiene una mayor hidrosolubilidad que el cloruro de metileno. Como el acetato de etilo tiene una hidrosolubilidad del 8,7 % en peso, se puede extraer mediante el uso de una cantidad relativamente pequeña de agua en comparación con el cloruro de metileno y tiene la ventaja de ser un disolvente orgánico no halogenado. Sin embargo, su punto de ebullición es de 77 ºC, muy superior a 39,8 ºC, que es el del cloruro de metileno. Por lo tanto, el acetato de etilo tiene el inconveniente de que el disolvente residual es difícil de eliminar una vez seco. Por otra parte, un polímero de PLGA con un peso molecular y una proporción de lactida:glicolida específicos tiene la característica de no disolverse fácilmente en acetato de etilo.

Así pues, las tecnologías que emplean simultáneamente el procedimiento de evaporación de disolventes y el procedimiento de extracción de disolventes se revelan en las patentes de Estados Unidos Nº 4.389.840, 4.530.840, 6.544.559, 6.368.632 y 6.572.894. Es decir, en los procedimientos, se produce la emulsión y después se elimina parcialmente el disolvente orgánico mediante el procedimiento de evaporación, siendo el disolvente orgánico residual eliminado mediante el procedimiento de extracción de disolventes. Por ejemplo, la patente de Estados Unidos Nº 4.389.840 divulga un procedimiento para la producción de microesferas, en el que se disuelven un fármaco y un polímero de PLGA en cloruro de metileno, y después se emulsionan en agua para producir una emulsión de aceite en agua, a continuación, se retira del 40 al 60 % en peso del cloruro de metileno mediante el procedimiento de evaporación, siendo el cloruro de metileno residual extraído usando una gran cantidad de agua para producir microesferas.

Sin embargo, como todos los disolventes orgánicos usados en los procedimientos conocidos carecen de una hidrosolubilidad suficientemente elevada, se deberían usar cantidades excesivamente altas de agua (de más de 10 veces superior a la hidrosolubilidad del disolvente orgánico). Así pues, se necesita un reactor de gran volumen, y se produce una gran cantidad de aguas residuales que contienen disolvente orgánico, y como resultado de ello, se eleva el coste del tratamiento de las aguas residuales. Además, existe el problema de que el disolvente orgánico residual presente en las microesferas no se elimina de manera eficaz.

Por consiguiente, los presentes inventores han estudiado cómo resolver los problemas y un procedimiento para la producción sencilla de microesferas poliméricas cargadas con fármacos. Los presentes inventores han descubierto que es posible producir de manera sencilla microesferas poliméricas cargadas con fármacos mediante la disolución de un compuesto polimérico y un fármaco en un disolvente orgánico no hidrosoluble para producir una emulsión, y la conversión en un disolvente hidrosoluble a través de la amonólisis para endurecer gotitas de emulsión en microesferas, completándose así la presente invención.

Divulgación de la invención

Problema técnico

Por lo tanto, es un objetivo de la presente invención proporcionar un procedimiento para la producción de microesferas poliméricas cargadas con fármacos, en el que no se necesite un procedimiento de evaporación ni de extracción de disolventes conocido, produciéndose de este modo microesferas poliméricas cargadas con fármacos.

Solución técnica

Para lograr el objetivo, la presente invención proporciona un procedimiento para la producción de microesferas poliméricas cargadas con fármacos, procedimiento que comprende las etapas de: a) añadir una fase de dispersión que contiene un compuesto de alto peso molecular, un fármaco y un disolvente orgánico no hidrosoluble a un disolvente de dispersión para producir una emulsión de tipo O/W (aceite en aceite) o de tipo O/O (aceite en aceite), o añadir una emulsión de tipo W/O (agua en aceite), que se prepara mediante la emulsión de una solución acuosa, en la que se disuelve un fármaco, en un disolvente orgánico no hidrosoluble, en el que se disuelve el compuesto de alto peso molecular, al disolvente de dispersión para producir una emulsión de tipo W/O/W (agua en aceite en agua); y b) añadir una solución de amoníaco a la emulsión producida en la etapa a) para convertir el disolvente orgánico no hidrosoluble en disolventes hidrosolubles.

Además, la presente invención proporciona microesferas poliméricas cargadas con fármacos producidas mediante el procedimiento.

De aquí en adelante, se describirá con mayor detalle la presente invención.

El procedimiento de producción de acuerdo con la presente invención se caracteriza porque el disolvente orgánico no hidrosoluble presente en la emulsión se convierte en los disolventes hidrosolubles a través de amonólisis mediante la adición de una solución de amoníaco a la emulsión, con el fin de endurecer las gotitas de la emulsión en microesferas, obteniéndose de este modo la microesfera polimérica cargada con fármacos deseada.

Cada etapa del procedimiento para la producción de microesferas poliméricas de acuerdo con la presente invención se describirá detalladamente de la siguiente manera.

Etapa a): Etapa de producción de la emulsión

Se añade una fase de dispersión que contiene un compuesto de alto peso molecular, un fármaco y un disolvente orgánico no hidrosoluble a un disolvente de dispersión para producir una emulsión de tipo O/W (aceite en agua) o de tipo O/O (aceite en aceite), o se emulsiona una solución acuosa, en la que se disuelve el fármaco, en el disolvente orgánico no hidrosoluble, en el que se disuelve el compuesto de alto peso molecular, con el fin de producir una emulsión de tipo W/O (agua en aceite) y, a continuación, se añade al disolvente de dispersión para producir una emulsión de tipo W/O/W (agua en aceite en agua).

El disolvente de dispersión usado en la presente invención incluye un disolvente de dispersión acuoso o un disolvente de dispersión no acuoso que contiene un emulsionante, y el disolvente de dispersión acuoso se usa durante la preparación de una emulsión de tipo O/W y W/O/W, el disolvente de dispersión no acuoso se usa durante la preparación de una emulsión de tipo O/O. Como disolvente de dispersión acuoso, se puede usar una solución acuosa que contenga un emulsionante hidrófilo tal como alcohol polivinílico o la serie Tween, o uno de sus codisolventes. Como disolvente de dispersión no acuoso, se puede usar aceite de silicona, aceite vegetal, tolueno o xileno que contiene un emulsionante hidrófobo tal como los de la serie Span. El emulsionante del disolvente de dispersión puede estar contenido a una concentración del 0,05 al 15 % (p/v).

En la presente invención, se puede usar cualquier disolvente orgánico no hidrosoluble, siempre que no se mezcle con agua, pero que se descomponga mediante la reacción con amoníaco para convertirse en disolventes hidrosolubles. En particular, es preferible que el disolvente orgánico no hidrosoluble tenga una estructura cualquiera seleccionada de entre el grupo que consiste en ésteres carboxílicos, amidas carboxílicas, anhídridos, ésteres fosfóricos y anhídridos fosfóricos. Más específicamente, es preferible que el disolvente orgánico no hidrosoluble se seleccione de entre el grupo que consiste de dicloroacetato de metilo, cloroacetato de metilo, cloroacetato de etilo, dicloroacetato de etilo, fluoroacetato de metilo, difluoroacetato de metilo, fluoroacetato de etilo, difluoroacetato de etilo, acetato de etilo, acetato de metilo, formiato de metilo, formiato de etilo, formiato de isopropilo y formiato de propilo.

En general, los disolventes orgánicos no hidrosolubles no se han usado en el procedimiento conocido para la producción de microesferas, debido a su alto punto de ebullición. Sin embargo, en el procedimiento de producción de microesferas poliméricas de la presente invención, los disolventes orgánicos no hidrosolubles se hacen reaccionar con amoníaco para convertirlos en disolventes hidrosolubles, con lo que se usan preferentemente en la presente invención. En particular, como el dicloroacetato de metilo y el cloroacetato de metilo usados en los ejemplos de la presente invención tienen puntos de ebullición mucho más altos (142,9 ºC, 129,5 ºC) que el cloruro de metileno y el acetato de etilo que generalmente se usan en el procedimiento de evaporación de disolventes o procedimiento de extracción de disolventes conocido, no se pueden usar como disolvente orgánico en los procedimientos conocidos para producir microesferas. En la presente invención, cuando se hace reaccionar dicloroacetato de metilo o cloroacetato de metilo con amoníaco, se convierte en dicloroacetamida y metanol, o cloroacetamida y metanol, que se disuelven completamente en agua en un muy poco tiempo, con lo que se prefiere su uso. Si es necesario, se usa un codisolvente que sea una mezcla de dicloroacetato de metilo o cloroacetato de metilo y al menos uno de los otros disolventes orgánicos, mediante lo que es posible controlar la solubilidad de un fármaco que se vaya a encapsular en microesferas o la velocidad de endurecimiento de las gotitas de emulsión, según se desee.

Los ejemplos del compuesto de alto peso molecular usado en la presente invención incluyen ácido poliláctico, polilactida, ácido poliláctico-co-glicólico, polilactida-co-glicolida (PLGA), polifosfacina, poliiminocarbonato, polifosfoéster, polianhídrido, poliortoéster, un copolímero de ácido láctico y caprolactona, policaprolactona, polihidroxivalerato, polihidroxibutirato, ácido poliamino, un copolímero de ácido láctico y aminoácido, y una mezcla de los mismos, preferentemente polilactida-co-glicolida (PLGA).

El fármaco usado en la presente invención incluye todos los fármacos hidrófilos y fármacos hidrófobos. Los ejemplos del fármaco incluyen progesterona, haloperidol, tiotixeno, olanzapina, clozapina, bromperidol, pimozida, risperidona, ziprasidona, diazepam, loflazepato de etilo, alprazolam, nemonaprida, fluoxetina, sertralina, venlafaxina, donepezilo, tacrina, galantamina, rivastigmina, selegilina, ropinirol, pergolida, trihexifenidilo, bromocriptina, benztropina, colchicina, nordazepam, etizolam, bromazepam, clotiazepam, mexazolum, buspirona, acetato de goserelina, somatotropina, acetato de leuprolida, octreotida, cetrorelix, acetato de sandostatina, gonadotropina, fluconazol, itraconazol, mizoribina, ciclosporina, tacrolimus, naloxona, naltrexona, cladribina, clorambucilo, tretinoína, carmustina, anagrelida, doxorrubicina, anastrozol, idarrubicina, cisplatino, dactinomicina, docetaxel, paclitaxel, raltitrexed, epirubicina, letrozol, mefloquina, promaquina, oxibutinina, tolterodina, alilestrenol, lovastatina, simvastatina, pravastatina, atorvastatina , alendronato, salcatonina, raloxifeno, oxadrolona, estrógeno conjugado, estradiol, valerato de estradiol, benzoato de estradiol, estradiol de etinilo, etonogestrel, levonorgestrel, tibolona y noretisterona, preferentemente risperidona o progesterona.

Para la producción del fármaco hidrófobo, se disuelven un compuesto de alto peso molecular y un fármaco hidrófobo en un disolvente orgánico no hidrosoluble, y después se suspenden en un disolvente de dispersión acuoso o disolvente de dispersión no acuoso para producir una emulsión de tipo O/W o de tipo O/O. Para la producción del fármaco hidrófilo, primero se disuelve un fármaco hidrófilo en agua, y después se emulsiona la solución en un disolvente orgánico, en el que se disuelve el compuesto de alto peso molecular, con el fin de producir una emulsión de tipo W/O primaria. A continuación, se suspende la emulsión en un disolvente de dispersión acuoso para producir una emulsión de tipo W/O/W secundaria.

El compuesto de alto peso molecular se puede usar en una cantidad de 1 a 500 partes en peso, preferentemente de 1 a 50 partes en peso, por cada parte en peso de fármaco, y la concentración del compuesto de alto peso molecular contenido en el emulsión puede ser del 3 al 30 % (p/v).

Además, la proporción en volumen de la fase de dispersión o de la emulsión de tipo W/O (agua en aceite) y el disolvente de dispersión puede estar en un intervalo de 1:1 a 100, preferentemente de 1:3 a 15. La proporción en volumen de la solución acuosa, en la que se disuelve el fármaco, y del disolvente orgánico no hidrosoluble, en el que se disuelve el compuesto de alto peso molecular, puede estar en un intervalo de 1:1 a 50, preferentemente de 1:2 a

20.

Etapa b): Etapa de conversión de disolvente orgánico no hidrosoluble en disolvente hidrosoluble

Se añade una solución de amoníaco a la emulsión de tipo O/W, de tipo W/O/W o de tipo O/O producida en la etapa a), y se convierte el disolvente orgánico no hidrosoluble en disolventes que se disuelven completamente en agua mediante amonólisis. A continuación, se endurecen las gotitas de emulsión en forma de microesferas para producir las microesferas poliméricas deseadas cargadas con fármacos. En este momento, se inhibe la interacción entre las partículas de gotitas de emulsión debido al rápido endurecimiento de las gotitas de emulsión, obteniéndose de este modo las microesferas deseadas sin la cohesión de las gotitas.

En una realización de acuerdo con la presente invención, en la Fig. 2, se ilustra un diagrama que muestra el procedimiento de producción de una microesfera polimérica que contiene un fármaco (risperidona). En la Fig. 2, se emulsiona una fase de dispersión que consiste en PLGA/risperidona/dicloroacetato de metileno en una fase acuosa externa (0) en forma de gotitas de líquido (A), y luego mediante amonólisis, se convierte el dicloroacetato de metileno en dicloroacetamida (T) y metanol (.) que se disuelven completamente en agua para producir la microesfera deseada (B). La solución de amoníaco usada en la presente invención contiene adecuadamente una molaridad de amoníaco superior a la del disolvente orgánico no hidrosoluble.

En otra realización de acuerdo con la presente invención, en la Fig. 7, se ilustra un diagrama que muestra el procedimiento de producción de una microesfera polimérica que contiene un fármaco (progesterona). En la Fig. 7, se emulsiona una fase de dispersión que consiste en PLGA/progesterona/cloroacetato de metilo en una fase acuosa externa en forma de gotitas de líquido, y luego mediante amonólisis, el cloroacetato de metilo se convierte en cloroacetamida y metanol que se mezclan completamente con agua para producir la microesfera deseada.

Las microesferas poliméricas producidas mediante el procedimiento de la presente invención tienen un diámetro medio de 0,1 a 3.500 μm, preferentemente 10 a 350 μm, y pueden contener fármacos que tienen diversos pesos, según sea lo deseado.

Como se ha descrito anteriormente, es posible producir de manera sencilla microesferas poliméricas cargadas con fármacos en un corto período de tiempo de acuerdo con la presente invención, en la que no se requiere el procedimiento de evaporación ni de extracción de disolventes conocido, y se usa una pequeña cantidad de agua, reduciéndose al mínimo la generación de aguas residuales.

Efectos ventajosos

Por consiguiente, es posible producir de manera sencilla las microesferas poliméricas cargadas con fármacos deseadas en un corto período de tiempo de acuerdo con la presente invención, en la que no se requiere el procedimiento de evaporación ni de extracción de disolventes conocido, y se usa una pequeña cantidad de agua, reduciéndose al mínimo la generación de aguas residuales.

Breve descripción de las figuras

La Figura 1 es un diagrama que muestra la conversión de las gotitas de emulsión en microesferas en base a un procedimiento de evaporación de disolventes conocido; la Fig. 2 es un diagrama que muestra el procedimiento de producción de una microesfera polimérica que contiene un fármaco (risperidona) en una realización de acuerdo con la presente invención; las Fig. 3 y 4 son la RMN de 1H y la espectrometría de masas de ionización por electronebulización (EM-IEN) de la dicloroacetamida que se produce en el procedimiento de realización de una realización de acuerdo con la presente invención, respectivamente; la Fig. 5 es una curva que muestra la absorbancia de una solución de amoníaco que contiene el cloroacetato de metilo producido en presencia de fenolftaleína durante el procedimiento de realización de una realización de acuerdo con la presente invención, en el que la absorbancia se mide en función del tiempo,

•: en ausencia de cloroacetato de metilo;

0: en presencia de cloroacetato de metilo;

la Fig. 6 es la RMN de 1H y la espectrometría de masas de ionización por electronebulización (EM-IEN) (Fig. 6B) de la dicloroacetamida producida en el procedimiento de realización de una realización de acuerdo con la presente invención; la Fig. 7 es un diagrama que muestra el procedimiento de producción de una micropartícula mediante amonólisis; la Fig. 8 es una curva de análisis termogravimétrico de una microesfera polimérica que contiene un fármaco (risperidona) producida en una realización de acuerdo con la presente invención; la Fig. 9 es una fotografía de un microscopio electrónico de barrido que muestra la forma externa (Fig. 9A) e interna (Fig. 9B a 9D) de una microesfera polimérica que contiene un fármaco (risperidona) producida en una realización de acuerdo con la presente invención; la Fig. 10 es un gráfico que compara la eficacia de encapsulación del fármaco (progesterona) en la microesfera de MCA producida en una realización de acuerdo con la presente invención con la de una microesfera de DCM; la Fig. 11 es una curva de análisis termogravimétrico de una microesfera de MCA que contiene fármaco (progesterona) (Fig. 11B) producida en una realización de acuerdo con la presente invención y una microesfera de DCM (Fig. 11A); la Fig. 12 es una fotografía de un microscopio electrónico de barrido que compara la forma superficial de una microesfera de MCA que contiene un fármaco (progesterona) producida en una realización de acuerdo con la presente invención (Fig. 12B) con la de una microesfera de DCM (Fig. Fig.12A); la Fig. 13 es una fotografía de un microscopio electrónico de barrido que compara la forma interna de una microesfera de MCA que contiene un fármaco (progesterona) producida en una realización de acuerdo con la presente invención (Fig. 13B) con la de una microesfera de DCM (Fig. 13A); la Fig. 14 es una fotografía de un microscopio electrónico de barrido que compara la forma superficial de una microesfera de PLGA que contiene un fármaco (progesterona) producida en una realización de acuerdo con la presente invención (Fig. 14B) con la de una microesfera de PLGA que no contiene fármaco (progesterona) (Fig. 14A); y la Fig. 15 es una fotografía de un microscopio electrónico de barrido que compara la forma superficial de una microesfera de PLGA que contiene un fármaco (progesterona) producida en una realización de acuerdo con la presente invención (Fig. 15B) con la de una microesfera de PLGA que no contiene fármaco (progesterona) (Fig. 15A).

Mejor modo de llevar a cabo la invención

De aquí en adelante, la presente invención se describirá más detalladamente con referencia a los siguientes ejemplos. Sin embargo, estos ejemplos son meramente ilustrativos, y no se pretende limitar la invención a los mismos.

Amonólisis con el uso de dicloroacetato de metilo

<1-1> Amonólisis de dicloroacetato de metilo

Para confirmar la conversión de un disolvente orgánico no hidrosoluble en disolventes que están completamente mezclados con agua a través de amonólisis, los presentes inventores realizaron los siguientes experimentos con

dicloroacetato de metilo como disolvente orgánico no hidrosoluble.

Se añadieron 3 ml de dicloroacetato de metilo a 40 ml de agua que contenía alcohol polivinílico al 1 % (hidrolizado al 88 %, peso molecular: 25.000), y se agitó a 550 rpm, produciéndose una emulsión. Tras agitar durante 3 minutos, se añadieron 3 ml de solución de amoníaco (a una concentración del aproximadamente 30 %) a la emulsión. Transcurridos 5 minutos, las gotas de dicloroacetato de metilo dispersadas en el agua desaparecieron por completo, y la emulsión pasó a ser una solución monofásica. A partir de los resultados, se encontró que el dicloroacetato de metilo se había convertido en dicloroacetamida y metanol mediante amonólisis, mezclándose completamente con el agua (como referencia, la hidrosolubilidad de la dicloroacetamida es de 71 g/l).

<1-2> Separación de dicloroacetamida como producto de descomposición del dicloroacetato de metilo

Se añadió una cantidad excesiva de NaCl a una solución transparente obtenida en <1-1> para desalar el producto de descomposición del dicloroacetato de metilo, y después se añadió acetato de etilo a la misma. Se transfirió el producto desalado a la fase de acetato de etilo, y se separó de una capa acuosa. Se añadió MgSO4 anhidro para eliminar el agua presente en el acetato de etilo, se filtró, y luego se evaporó el acetato de etilo y se eliminó mediante un evaporador rotativo (Modelo N-1000 de Eyela). Para eliminar el acetato de etilo del residuo, se lavó el residuo con CHCl3 una vez, y luego se secó al vacío, obteniéndose un polvo blanco.

<1-3> Aislamiento de dicloroacetamida mediante experimentos de RMN y EM

Los experimentos de RMN y EM del polvo blanco obtenido en <1-2> se realizaron de la siguiente manera: se disolvió el polvo blanco en acetona-d6, y luego se observó el espectro de RMN de 1H mediante el uso de un espectrofotómetro de RMN, mostrándose el resultado en la Fig. 3. En este momento, se midió el desplazamiento químico de 1H con respecto a tetrametilsilano. Como se muestra en la Fig. 3, se observaron dos señales de protones amida en δH 7,46 y 7,08. Además, se observó una señal de protón ligada al carbono que tiene dos grupos cloruro en δH 6,30. La espectrometría de masas de ionización por electronebulización (ES-IEN) se observó mediante el uso de un espectrómetro de masas Q-tof™ 2, y el resultado se muestra en la Fig. 4. Como se muestra en la Fig. 4, se observó un pico [M+Na+] a m/z 149,93, se observó un pico [M+2+Na+] a m/z 151,93 y se observó un pico [M+4+Na+] a m/z 153,93. El valor medido del presente experimento correspondió completamente con el valor teórico, teniendo en cuenta que la intensidad de los picos [M+Na+], [M+2+Na+] y [M+4+Na+] de un compuesto que tiene dos grupos de cloruro son del 100, 65,3 y 10,6 %. A partir de los resultados de los experimentos de RMN de 1H y ES-IEN, se encontró dicloroacetato de metilo convertido en dicloroacetamida mediante amonólisis.

A partir de los resultados, se encontró que el dicloroacetato de metilo como disolvente orgánico no hidrosoluble se convirtió en dicloroacetamida y metanol, que son disolventes orgánicos hidrosolubles mediante amonólisis.

Amonólisis con el uso de cloroacetato de metilo

<2-1> Amonólisis de cloroacetato de metilo

Para confirmar la conversión de un disolvente orgánico no hidrosoluble en disolventes que están completamente mezclados con agua a través de amonólisis, los presentes inventores realizaron los siguientes experimentos con cloroacetato de metilo (hidrosolubilidad de 46 g/l a 25 ºC) como disolvente orgánico no hidrosoluble.

Se añadieron 4 ml de cloroacetato de metilo a 40 ml de agua, y se agitó usando un agitador de placa caliente (400 HPS/VWR Scientific) durante 3 minutos para producir una emulsión. A continuación, se añadieron 4 ml de solución de amoníaco (concentración del aproximadamente 30 %) a la emulsión. Tras 10 minutos, las gotas de cloroacetato de metilo dispersadas en agua habían desaparecido por completo, y la emulsión pasó a ser una solución monofásica.

Además, se añadieron 100 ul de solución de fenolftaleína metanólica a una solución acuosa, a la que se añadieron 4 ml de solución de amoníaco a 40 ml de agua, y se mezclaron con 4 ml de cloroacetato de metilo. Entonces, se tomó 1 ml de la mezcla y se midió su absorbancia en función del tiempo a 550 nm con un espectrómetro UV/Vis U3000 (Shimadzu Corp. Kioto, Japón), siendo el resultado mostrado en la Fig. 5. Como se muestra en la Fig. 5, cuando no se añadió nada de cloroacetato de metilo, no hubo cambios en la absorbancia. Sin embargo, cuando se añadió cloroacetato de metilo, la absorbancia disminuyó considerablemente.

A partir de los resultados, se encontró que el cloroacetato de metilo se convirtió en cloroacetamida y metanol mediante amonólisis, y se mezcló completamente con agua.

<2-2> Separación de cloroacetamida como producto de descomposición de cloroacetato de metilo

Se añadió una cantidad excesiva de NaCl a una solución transparente obtenida en <2-1>, y se desaló para hacer precipitar la cloroacetamida. A continuación, se añadieron 30 ml de acetato de etilo tres veces. Se transfirió la cloroacetamida a la fase de acetato de etilo, y se separó de una capa acuosa. Se añadió MgSO4 anhidro para

eliminar el agua presente en el acetato de etilo, se filtró a través de celita y luego se evaporó el acetato de etilo bajo presión reducida, obteniéndose un polvo blanco.

<2-3> Aislamiento de cloroacetamida mediante experimentos de RMN y EM

Los experimentos de RMN y EM del polvo blanco obtenido en <2-2> se realizaron de la siguiente manera: se disolvió el polvo blanco en triclorometano de deuterio (CDCl3), y luego se observó el espectro RMN de 1H mediante el uso de un espectrofotómetro de RMN, siendo el resultado mostrado en la Fig. 6A. En este momento, se midió el desplazamiento químico de 1H con respecto a tetrametilsilano. Como se muestra en la Fig. 6A, se observaron dos señales de protones amida en δH 6,55 y 6,04. Además, se observó una señal de protón ligada al carbono que tiene dos grupos cloruro en δH 4,05.

Además, se observó la espectrometría de masas de ionización por electronebulización (ES-IEN) mediante el uso de un espectrómetro de masas Q-tof™ 2, y el resultado se muestra en la Fig.6B. Como se muestra en la Fig. 6B, se observó un pico [M+Na+] a m/z 116,01, y se observó un pico [M+2+Na+] a m/z 118,01. La proporción de los dos picos fue de 3:1, lo que se corresponde con la abundancia de 37Cl.

A partir de los resultados obtenidos en los experimentos de RMN de 1H y ES-IEN, se encontró que el cloroacetato de metilo se había convertido en cloroacetamida (C2H4ClNO) mediante amonólisis. En particular, se descubrió que el cloroacetato de metilo como disolvente orgánico no hidrosoluble se había convertido en cloroacetamida y metanol que son disolventes orgánicos hidrosolubles mediante amonólisis (véase la Fig. 7).

Microesfera de PLGA con el uso de dicloroacetato de metilo

<3-1> Producción de microesfera de PLGA con el uso de dicloroacetato de metilo

Se usó poli-d,l-lactida-co-glicolida que tiene una proporción de lactida:glicolida de 75:25 (la viscosidad intrínseca en CHCl3 es 0,67 dl/g, representado de aquí en adelante por PLGA) como compuesto de alto peso molecular para la producción de las microesferas. Se usó risperidona (adquirida en Changzhou United Chemical Co., Ltd, China) como fármaco hidrófobo para ser encapsulado en las microesferas. Se disolvió por completo PLGA (250 mg) en 3 ml de dicloroacetato de metilo, y luego se añadió a esto risperidona (125, 175 o 225 mg). Se añadió una fase de dispersión que consistía en PLGA, risperidona y dicloroacetato de metilo a 40 ml de solución acuosa al 1 % de alcohol polivinílico (peso molecular = 25.000; hidrolizado al 88 %) y se emulsionó. En este momento, se usó un agitador magnético para producir una emulsión, y se mantuvo la velocidad de agitación de la barra magnética a 550 rpm. Tras agitar durante 3 minutos, se añadieron 3 ml de solución de amoníaco (concentración del aproximadamente 30 %) a la emulsión, y se agitó durante 15 minutos. Se hizo pasar la suspensión de microesferas formada a través de un tamiz que tenía un tamaño de 425 μm. A continuación, se recogieron las microesferas por filtración, y se dispersaron en 100 ml de solución acuosa al 0,1 % de alcohol polivinílico. Tras 45 minutos, se filtraron las microesferas y se separaron, y luego se volvieron a dispersar en 100 ml de solución acuosa al 0,1 % de alcohol polivinílico, y se agitaron durante 2 horas. Se secaron al vacío las microesferas tomadas por filtración durante una noche. Después del secado, se encontró que las microesferas tenían una buena fluidez, lo que indica que la cohesión entre las microesferas no fue fuerte durante el procedimiento de secado. Además, las microesferas resultaron tener un rendimiento del 76,4 al 86,4 %, lo que indica que las microesferas se produjeron de una manera eficaz mediante el procedimiento de la presente invención.

<3-2> Análisis termogravimétrico

Se llevó a cabo el análisis termogravimétrico de las microesferas producidas mediante el uso de 250 mg de PLGA y 125 mg de risperidona con el uso de un analizador gravimétrico térmico, TGA 2050 (TA Instruments, EE.UU.), y los resultados se muestran en la Fig. 8. A este respecto, se usó gas nitrógeno, y se midió el cambio en el peso de las microesferas al aumentar la temperatura a una velocidad de 10 ºC por minuto. Como se muestra en la Fig. 8, no se produjo un cambio drástico en su peso a 142,9 ºC, que es el punto de ebullición de la dicloroacetato de metilo. A partir de los resultados, se encontró que en la producción de microesferas, el dicloroacetato de metilo se convirtió en dicloroacetamida y metanol hidrosolubles, eliminándose de forma eficaz las gotitas de la emulsión, mediante lo que se formaron las microesferas.

<3-3> Análisis del fármaco mediante HPLC

Para el análisis del fármaco, se usó un sistema de HPLC Shimadzu. Como columna de análisis, se usó una columna C18 de simetría (5 μm) que tenía una longitud de 15 cm. Como fase móvil, se usó una solución mixta de acetato de amonio 10 mM y metanol (proporción en volumen de 6:4), y se mantuvo el caudal de la fase móvil a 1 ml/min. Se midió la fluencia del fármaco por la columna de HPLC a una longitud de onda UV de 260 nm. Se determinó la concentración de fármaco de la muestra a partir de la curva de calibración estándar construida con cuatro concentraciones diferentes.

<3-4> Determinación de la eficacia de encapsulación de la risperidona

Se midieron con precisión algunas de microesferas de PLGA que contenían risperidona y se disolvieron completamente en 4 ml de tetrahidrofurano. A esto, se añadieron 16 ml de metanol, y se filtró con un filtro de nylon que tenía un tamaño de poro de 0,45 μm. Se retiró el precipitado de PLGA y se preparó el filtrado. Se aplicó parte del filtrado (20 μl) a HPLC, y se determinó la concentración de fármaco. De acuerdo con las siguientes ecuaciones 1 a 3, se determinaron la dosis de carga teórica (%) y la dosis de carga práctica (%) del fármaco, definiéndose el porcentaje de las mismas como la eficacia de la encapsulación del fármaco (%).

[Ecuación 1]

[Ecuación 2]

[Ecuación 3]

En el caso de usarse 250 mg de PLGA y 125 mg de risperidona, el eficacia de encapsulación fue del 97,0 ± 2,1 %. En el caso de usarse una cantidad fija de PLGA y aumentarse la cantidad de la risperidona en 175 y 225 mg, cada una de las eficacias de encapsulación fue del 94,5 ± 2,0 y 92,7 ± 3,2 %. A partir de los resultados, se encontró que en el caso de la producción de microesferas de acuerdo con el procedimiento de la presente invención, la risperidona se puede encapsular en su mayoría en las microesferas de PLGA.

<3-5> Observación de la forma de las microesferas

Se observaron las formas interior y exterior de las microesferas producidas de acuerdo con la presente invención con un microscopio electrónico de barrido JSM-5200, y los resultados se muestran en las Fig. 9A a 9D. En la Fig. 9A, se muestra la forma exterior de las microesferas, en la que se pueden observar microesferas bien dispersadas de una forma esférica. En las Fig. 9B a 9D, se muestran las formas interiores de microesferas cortadas, en las que se encontró que las formas eran similares, independientemente de la dosis de carga de la risperidona, observándose una cavidad de pequeño tamaño en la matriz. Es decir, se puede observar que las microesferas producidas de acuerdo con la presente invención se dispersaron bien sin cohesión.

Producción de microesferas de DCM mediante el procedimiento de evaporación de disolventes

Con el fin de comparar la microesfera de PLGA producida mediante el procedimiento de la presente invención con la microesfera de PLGA producida mediante el procedimiento de evaporación de disolventes conocido, los presentes inventores produjeron microesferas de la siguiente manera. Se disolvió PLGA (250 mg) completamente en 4 ml de diclorometano, y después se añadió progesterona (60, 100, 160, 200 o 250 mg) y se disolvió. Se añadió una fase de dispersión que consistía en PLGA, progesterona y diclorometano a 40 ml de solución acuosa al 0,5 % de alcohol polivinílico, y se emulsionó. En este momento, se usó un agitador magnético para producir una emulsión, y la velocidad de agitación de la barra magnética se mantuvo a 550 rpm. Después de agitar durante 5 horas, se hizo pasar la suspensión de microesferas formada a través de un tamiz con un tamaño de 425 μm. A continuación, se recogieron las microesferas por filtración, y se secaron al vacío durante una noche. Por consiguiente, se produjeron las microesferas de PLGA. De aquí en adelante, las microesferas de PLGA producidas mediante el procedimiento descrito anteriormente se denominan "microesferas de DCM”.

Microesfera de PLGA con el uso de cloroacetato de metilo (de aquí en adelante “microesfera de MCA”)

<4-1>Producción de microesfera de MCA con el uso de cloroacetato de metilo

Se usó el PLGA usado en el Ejemplo <3-1> como polímero para la producción de microesferas. Se usó progesterona como fármaco hidrófobo para encapsularlo en microesferas. Se disolvió PLGA (250, 300 o 350 mg)

completamente en 4 ml de cloroacetato de metilo, y después se añadió a esto progesterona (60, 100, 160, 200 o 250 mg) y se disolvió. Se añadió una fase de dispersión que consistía en PLGA, progesterona y cloroacetato de metilo a 40 ml de solución acuosa al 0,5 % de alcohol polivinílico, y se emulsionó. En este momento, se usó un agitador magnético para producir una emulsión, y la velocidad de agitación de la barra magnética se mantuvo a 550 rpm. Después de agitar durante 3 minutos, se añadieron 4 ml de solución de amoníaco (concentración del aproximadamente 28 %) a la emulsión, y se agitó durante 10 minutos. A continuación, se añadieron 40 ml de agua y se siguió agitando durante 5 minutos. Se hizo pasar la suspensión de microesferas formada a través de un tamiz con un tamaño de 425 μm. A continuación, se recogieron las microesferas por filtración y se separaron, y se secaron al vacío durante una noche. Por consiguiente, se produjeron las microesferas de PLGA. De aquí en adelante, las microesferas de PLGA producidas mediante el procedimiento descrito anteriormente se denominan "microesferas de MCA”.

<4-2> Determinación de la eficacia de encapsulación de la progesterona

Se midieron con exactitud los tamaños medios de las microesferas que contenían progesterona del Ejemplo <4-1> (microesfera de “MCA”) con el uso de un Mastersizer 2000 (Malvern Instruments, Worcestershire, Inglaterra) y se disolvieron completamente en 4 ml de tetrahidrofurano. A esto, se añadieron 24 ml de metanol y se filtró con un filtro de nylon que tenía un tamaño de poro de 0,45 μm. Se retiró el precipitado de PLGA y se preparó el filtrado. Se aplicó parte del filtrado (20 μl) a HPLC, y se determinó la concentración de fármaco. Se calculó la eficacia de encapsulación del fármaco ( %) mediante las ecuaciones descritas en el Ejemplo <3-4>, así como la tasa de producción de microesferas mediante la siguiente Ecuación 4. Los resultados se muestran en la Tabla 1.

[Ecuación 4]

Tasa de producción = 100 x peso de las microesferas recuperadas / (cantidad de PLGA usada + cantidad de progesterona usada)

[Tabla 1]

Rendimiento de encapsulación de la progesterona en microesfera de MCA, tasa de producción y diámetro de la microesfera

Composición de la microesfera (mg): Rendimiento de encapsulación de la progesterona (%) Tasa de producción de la microesfera (%) Diámetro de la microesfera (mm)

PLGA: Progesterona

250: 160 68,9 ± 1,4 76,8 ± 6,4 167,2 ± 10,3

300: 160 67,1 ± 1,3 81,3 ± 4,4 178,9 ± 19,6

350: 160 65,9 ± 1,44 83,6 ± 5,0 181,1 ± 10,6

Entretanto, se determinaron las eficacias de encapsulación de acuerdo con las cantidades de progesterona, que se usaron en la “microesfera de MCA” producida en el Ejemplo <4-1> (limitada a 250 mg de PLGA usado) y la “microesfera de DCM” producida en el Ejemplo comparativo, y los resultados se muestran en la Fig. 10. Como se muestra en la Fig. 10, en la microesfera de MCA, a medida que se aumentaron las cantidades usadas de progesterona, fueron creciendo gradualmente las eficacias de encapsulación. En el caso de una cantidad usada de progesterona de 250 mg, la eficacia de encapsulación alcanzó 72,8 ± 0,3 %, y en la microesfera de DCM, se encontró que las eficacias de encapsulación fueron de 75,2 ± 3,8 % a 78,6 ± 3,1 %. En consecuencia, a medida que se aumentaban las cantidades usadas de progesterona, se encontró que la eficacia de encapsulación de la microesfera de MCA era cada vez más similar a la de la microesfera de DCM.

Por lo tanto, a medida que aumentaban las cantidades usadas de progesterona, mejoraba la eficacia de encapsulación de las microesferas de MCA producidas con el uso de cloroacetato de metilo por amonólisis, siendo por tanto usadas como buenas microesferas poliméricas cargadas con fármacos.

<4-3> Análisis termogravimétrico

El análisis termogravimétrico de las microesferas de MCA cargadas con 12,4, 27,4 y 36,4 % de progesterona que se produjeron de la misma manera que en el Ejemplo <4-1> y las microesferas de DCM con 15,2, 29,4 y 38,6 % de progesterona que se produjeron de la misma manera que en el Ejemplo comparativo se llevó a cabo mediante el uso de un analizador gravimétrico térmico, TGA 2050 (TA Instruments, EE.UU.), y los resultados se muestran en la Fig.

11. A este respecto, se usó gas nitrógeno, y se midió el cambio en el peso de las microesferas a medida que se iba aumentando la temperatura a un ritmo de 10 ºC por minuto.

Como se muestra en la Fig. 11A, en las microesferas de DCM, se encontró una pérdida de peso del 0,5 al 2,3 % debido a la evaporación del diclorometano a 150 ºC, que corresponde a lo que se produce normalmente durante la evaporación del disolvente (Benoit, T. S.; Courteille, F.; Thies, C. Int. J. Pharm. 1986, 29, 95-102). Sin embargo,

como se muestra en la Fig. 11b, en las microesferas de MCA, se encontró una pérdida de peso del 1,6 al 3,5 %, sin producirse una pérdida de peso drástica a 129,5 ºC, que es el punto de ebullición del cloroacetato de metilo. Los resultados indican que el disolvente de dispersión se elimina de forma eficaz de las gotitas de emulsión por amonólisis.

<4-5> Observación de la forma de las microesferas

Se observaron las formas interior y exterior de las microesferas producidas de la misma manera que en el Ejemplo <4-1> y el Ejemplo comparativo con un microscopio electrónico de barrido JSM-4.

Las formas superficiales de las microesferas de DCM, en las que las dosis de carga prácticas de progesterona son del 15,2, 21,7, 29,4 y 38,6 % de acuerdo con las Ecuaciones 2 del Ejemplo <3-4> se ilustran en a, b, c y d de la Fig. 12A, respectivamente. Como se muestra en la Fig. 12A, en las microesferas de DCM, a medida que aumenta el contenido de progesterona, se forman cristales de progesterona, dañándose la superficie de las microesferas.

Además, las formas superficiales de las microesferas de MCA, en las que las dosis de carga prácticas de progesterona son del 12,4, 18,7, 27,4 y 36,4 % se ilustran en a, b, c y d de la Fig. 12B, respectivamente. Como se muestra en la Fig. 12B, a medida que aumenta el contenido de progesterona, no se producen defectos, se forman microesferas esféricas y se inhibe la formación de cristales de fármaco en la microesfera de DCM.

Además, las formas internas de las microesferas de DCM, en las que las dosis de carga prácticas de progesterona son del 15,2, 21,7, 29,4 y 38,6 % se ilustran en a, b, c y d de la Fig. 13A, respectivamente. Como se muestra en la Fig. 13A, en las microesferas de DCM, a medida que aumenta el contenido de progesterona, se forman cristales de progesterona para acelerar la separación de fases entre la progesterona y el polímero de PLGA. Finalmente, se encontró que la matriz interna de la microesfera estaba distorsionada.

Además, las formas superficiales de las microesferas de MCA, en las que las dosis de carga prácticas de progesterona son del 12,4, 18,7, 27,4 y 36,4 % se ilustran en a, b, c y d de la Fig. 13B, respectivamente. Como se muestra en la Fig. 13B, se observa una cavidad de pequeño tamaño en la matriz. Sin embargo, no se observaron cambios de acuerdo con el contenido de progesterona en comparación de las microesferas de DCM.

En consecuencia, a pesar de cargarse una gran cantidad de progesterona, las formas exterior e interior de las microesferas de MCA se mantienen, usándose de ese modo como buenas microesferas poliméricas cargadas con fármacos.

Microesfera de PLGA con el uso de cloroacetato de etilo

<5-1> Producción de microesfera de PLGA con el uso de cloroacetato de etilo

Se usó el PLGA del Ejemplo <3-1> como polímero para la producción de microesferas. Se usó progesterona como fármaco hidrófobo para encapsularlo en microesferas. Se disolvieron 250 mg de PLGA completamente en 4 ml de cloroacetato de etilo, y después se añadió progesterona (60, 100, 160, 200 o 250 mg) y se disolvió. A continuación, se añadió la solución a 40 ml de solución acuosa al 0,5 % de alcohol polivinílico y se agitó a 550 rpm. Después de agitar durante 3 minutos, se añadieron 9 ml de solución de amoníaco (28 %) a la emulsión, y se volvió a agitar durante 60 minutos. Luego se produjeron las microesferas de PLGA de la misma manera que en el Ejemplo <4-1>.

<5-2> Determinación de la eficacia de encapsulación de la progesterona

Se midieron con exactitud los tamaños medios de las microesferas que contenían progesterona del Ejemplo <5-1> con el uso de un Mastersizer 2000 (Malvern Instruments, Worcestershire, Inglaterra) y se disolvieron completamente en 4 ml de tetrahidrofurano. A esto, se añadieron 24 ml de metanol, y se filtró con un filtro de nylon que tenía un tamaño de poro de 0,45 μm. Se retiró el precipitado de PLGA y se preparó el filtrado. Se aplicó parte del filtrado (20 μl) a HPLC, y se determinó la concentración de fármaco. Se calculó la eficacia de encapsulación del fármaco ( %) mediante las ecuaciones descritas en el Ejemplo <3-4>, mostrándose los resultados en la Tabla 2.

[Tabla 2]

Rendimiento de encapsulación de la progesterona en microesfera de PLGA

Composición de la microesfera (mg): Rendimiento de encapsulación de la progesterona (%)

PLGA: Progesterona

250: 60 87,96 ± 1,22

250: 100 87,06 ± 1,24

250: 160 84,77 ± 0,75

250: 200 85,01 ± 1,27

250
250: 86,22 ± 1,60

Como se muestra en la Tabla 2, se encontró que las eficacias de encapsulación de la progesterona en las microesferas de PLGA que se producen con el uso de cloroacetato de etilo mediante amonólisis alcanzaron 84,77 ± 0,75 a 87,96 ± 1,22, siendo de este modo usadas como buenas microesferas poliméricas cargadas con fármacos.

5 <5-3> Observación de la forma de las microesferas

Se observaron las formas superficiales de las microesferas de PLGA (Fig. 14B) producidas de la misma manera que en el Ejemplo <5-1>, en las que las dosis de carga prácticas de la progesterona son del 43,1 %, con un microscopio electrónico de barrido JSM-5200, en comparación con las microesferas de PLGA que no contienen progesterona (Fig. 14A).

10 Como se muestra en la Fig. 14, a pesar de cargarse progesterona, se mantienen las formas superficiales de las microesferas de PLGA, siendo de este modo usadas como buenas microesferas poliméricas cargadas con fármacos.

Microesferas de PLGA con el uso de fluoroacetato de etilo

15 <6-1> Producción de microesferas de PLGA con el uso de fluoroacetato de etilo

Se usó el PLGA del Ejemplo <3-1> como polímero para la producción de microesferas. Se usó progesterona como fármaco hidrófobo para encapsularlo en las microesferas. Se disolvieron 250 mg de PLGA completamente en 4 ml de fluoroacetato de etilo, y después se añadió progesterona (60, 100, 160, 200 o 250 mg) y se disolvió. A continuación, se produjeron las microesferas de PLGA de la misma manera que en el Ejemplo <5-1>.

20 <6-2> Determinación de la eficacia de encapsulación de la progesterona

Se midieron con exactitud los tamaños medios de las microesferas que contenían progesterona del Ejemplo <6-1> con el uso de un Mastersizer 2000 (Malvern Instruments, Worcestershire, Inglaterra) y se disolvieron completamente en 4 ml de tetrahidrofurano. A esto, se añadieron 24 ml de metanol, y se filtró con un filtro de nylon que tenía un tamaño de poro de 0,45 μm. Se retiró el precipitado de PLGA y se preparó el filtrado. Se aplicó parte del filtrado

25 (20 μl) a HPLC, y se determinó la concentración de fármaco. Se calculó la eficacia de encapsulación del fármaco ( %) mediante las ecuaciones descritas en el Ejemplo <3-4>, mostrándose los resultados en la Tabla 3.

[Tabla 3]

Eficacia de encapsulación de la progesterona en microesfera de PLGA

Composición de la microesfera (mg): Eficacia de encapsulación de la progesterona (%)

PLGA: Progesterona

250: 60 81,16 ± 2,40

250: 100 81,42 ± 1,90

250: 160 82,82 ± 1,36

250: 200 84,01 ± 2,31

250
250: 84,56 ± 2,02

Como se muestra en la Tabla 3, se encontró que las eficacias de encapsulación de la progesterona en las microesferas de PLGA que se producen con el uso de fluoroacetato de etilo mediante amonólisis alcanzaron 81,16 ± 2,40 a 84,56 ± 2,02, siendo de este modo usadas como buenas microesferas poliméricas cargadas con fármacos.

<6-3> Observación de la forma de las microesferas

5 Se observaron las formas superficiales de las microesferas de PLGA (Fig. 15B) producidas de la misma manera que en el Ejemplo <6-1>, en las que las dosis de carga prácticas de progesterona son del 42,3 %, con un microscopio electrónico de barrido JSM-5200, en comparación con las microesferas de PLGA que no contenían progesterona (Fig. 15A).

Como se muestra en la Fig. 15, se encontró que a pesar de cargarse progesterona, se mantienen las formas

10 superficiales de las microesferas de PLGA, siendo de este modo usadas como buenas microesferas poliméricas cargadas con fármacos.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un procedimiento para la producción de microesferas poliméricas cargadas con fármacos, comprendiendo el procedimiento las etapas de:

a) añadir una fase de dispersión que contiene un compuesto de alto peso molecular, un fármaco y un disolvente orgánico no hidrosoluble a un disolvente de dispersión para producir una emulsión de tipo O/W (aceite en agua)

o de tipo O/O (aceite en aceite), o añadir una emulsión de tipo W/O (agua en aceite), que se prepara mediante la emulsión de una solución acuosa, en la que se disuelve un fármaco, en un disolvente orgánico no hidrosoluble, en el que se disuelve el compuesto de alto peso molecular, al disolvente de dispersión para producir una emulsión de tipo W/O/W (agua en aceite en agua); y b) añadir una solución de amoníaco a la emulsión producida en la etapa a) para convertir el disolvente orgánico no hidrosoluble en disolventes hidrosolubles.
2.

El procedimiento para la producción de microesferas poliméricas cargadas con fármacos de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el disolvente de dispersión de la etapa a) es un disolvente de dispersión acuoso tal como una solución acuosa de alcohol polivinílico o uno de sus codisolventes, o un disolvente de dispersión no acuoso que está seleccionado de entre el grupo que consiste en aceite de silicona, aceite vegetal, tolueno y xileno que contenga un emulsionante de la serie Span.
3.

El procedimiento para la producción de microesferas poliméricas cargadas con fármacos de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el disolvente orgánico no hidrosoluble de la etapa a) es un codisolvente que se mezcla con un disolvente orgánico no hidrosoluble y al menos uno de los otros disolventes orgánicos.
4.

El procedimiento para la producción de microesferas poliméricas cargadas con fármacos de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el disolvente orgánico no hidrosoluble tiene una estructura seleccionada de entre el grupo que consiste en ésteres carboxílicos, amidas carboxílicas, anhídridos, ésteres fosfóricos y anhídridos fosfóricos.
5.

El procedimiento para la producción de microesferas poliméricas cargadas con fármacos de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el disolvente orgánico no hidrosoluble está seleccionado de entre el grupo que consiste en dicloroacetato de metilo, cloroacetato de metilo, cloroacetato de etilo, dicloroacetato de etilo, fluoroacetato de metilo, difluoroacetato de metilo, fluoroacetato de etilo, difluoroacetato de etilo, acetato de etilo, acetato de metilo, formiato de metilo, formiato de etilo, formiato de isopropilo y formiato de propilo.
6.

El procedimiento para la producción de microesferas poliméricas cargadas con fármacos de acuerdo con la reivindicación 5, en el que el disolvente orgánico no hidrosoluble está seleccionado de entre el grupo que consiste en dicloroacetato de metilo, cloroacetato de metilo, cloroacetato de etilo y fluoroacetato de etilo.
7.

El procedimiento para la producción de microesferas poliméricas cargadas con fármacos de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el compuesto de alto peso molecular de la etapa a) está seleccionado de entre el grupo que consiste en ácido poliláctico, polilactida, ácido poliláctico-co-glicólico, polilactida-co-glicolida (PLGA), polifosfacina, poliiminocarbonato, polifosfoéster, polianhídrido, poliortoéster, un copolímero de ácido láctico y caprolactona, policaprolactona, polihidroxivalerato, polihidroxibutirato, ácido poliamino, un copolímero de ácido láctico y aminoácido, y una mezcla de los mismos.
8.

El procedimiento para la producción de microesferas poliméricas cargadas con fármacos de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el compuesto de alto peso molecular de la etapa a) se mezcla en una cantidad de 1 a 500 partes en peso por cada parte en peso del fármaco.
9.

El procedimiento para la producción de microesferas poliméricas cargadas con fármacos de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la concentración del compuesto de alto peso molecular contenido en la emulsión de la etapa a) es del 3 al 30 % (p/v).
10.

El procedimiento para la producción de microesferas poliméricas cargadas con fármacos de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la proporción en volumen de la fase de dispersión o la emulsión de tipo W/O (agua en aceite) y el disolvente de dispersión de la etapa a) es de 1:1 a 100.
11.

El procedimiento para la producción de microesferas poliméricas cargadas con fármacos de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la proporción en volumen de la solución acuosa, en la que se disuelve el fármaco, y el disolvente orgánico no hidrosoluble, en el que se disuelve el compuesto de alto peso molecular, de la etapa a) es de

1:1 a 50.
12.

El procedimiento para la producción de microesferas poliméricas cargadas con fármacos de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la solución de amoníaco de la etapa b) contiene una molaridad de amoníaco superior a la del disolvente orgánico no hidrosoluble.
13.

Una microesfera polimérica cargada con fármacos producida mediante el procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12.