CN115813863A - 一种可自发团聚的微球及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种可自发团聚的微球及其制备方法，包括如下步骤：将可降解的生物材料溶解在非水溶性有机溶剂中，作为油相；配制含表面活性剂的水溶液，作为水相；将油相与水相混合后，乳化，得到乳液；将乳液部分氨解后，再加入酸，得到混悬液；将混悬液进行离心、洗涤，即得可自发团聚的微球。本发明的微球可自发相互团聚或者融合形成一个或者多个团块，具有可团聚性、安全性、稳定性，可以作为载体用于药物，特别是眼内施用药物的长期持续递送。

Description

一种可自发团聚的微球及其制备方法

技术领域

本发明属于高分子材料技术领域，具体涉及一种可自发团聚的微球的制备方法及应用。

背景技术

眼睛是人类最敏感的器官之一。传统的眼部给药剂型以滴眼剂和眼膏剂为主，然而，由于眼部的解剖学和生理学的限制(如泪液分泌、鼻泪管消除和血-眼、血-房水、血-视网膜等屏障)使得药物的渗透和递送变得尤为困难，导致传统剂型的药物利用度很低，尤其是采用传统剂型的药物治疗眼后部疾病更难以取得疗效。目前，眼后部疾病常采用的治疗方式是眼周注射或玻璃体内注射，虽然将药物直接注射到眼后部组织克服了部分生理屏障，但是，其注射方法不仅导致患者痛苦，而且还会造成如感染、眼内炎、白内障、视网膜脱离等许多并发症，并且实际操作过程中，在眼后部的生理环境下，想要达成保证药物在治疗浓度下进行释放，并维持足够的给药时间以实现疗效是不容易做到的。

微球是一种以微型成球技术制成的微米级新型药物载体，通常由聚乳酸等可生物降解的材料制成，具有使药物在靶区浓集、缓慢释放的特点，具有良好的生物相容性、降解性以及靶向性，是一种极具潜力的药物递送系统，采用微球作为眼部制剂具有广阔的而应用前景。

现有技术已有将微球作为药物递送载体，用作眼部用药的技术，但是，仍然存在一些缺点，比如，专利文献CN108367079A公开了一种表面处理的载药固体(例如无孔)微粒，其采用了经温和表面处理的固体生物可降解微粒，其表面处理包括用合适的试剂和温度处理微粒，以低于18℃的温度下进行处理除去微粒表面的表面活性剂、低聚物等，例如以氢氧化钠水溶液和乙醇的预冷溶液对非表面处理的微粒(NSTMP)进行表面处理，经过处理后的微粒可以在体内聚集以形成用于药物治疗的大颗粒。但是，上述含有治疗剂、聚合物和表面活性剂的微粒经过表面处理后，其表面处理试剂会对微粒中的一些对酸、碱或温度敏感的治疗剂的疗效产生影响。另外，专利文献CN101511347A公开了一种含有药物的高分子微球，能够将生物可降解高分子化合物、药物和与水不溶的有机溶剂的分散相添加到分散溶液中，制作成乳剂，后通过添加氨溶液将与水不溶的有机溶剂氨解成成水溶性溶剂去除，形成微球。但是，该现有技术中其所含药物的高分子微球在体内环境中并不能保证可团聚，也就不能保证该微球在体内环境中可以起到缓释药物的作用，其分散的微球会造成药物释放过快，单位时间的药物浓度过高，药效时间不能持续，以及微球上的表面活性剂或低聚物可能具有副作用。

综上所述，亟需开发一种能够在眼部环境中的兼顾可团聚性、安全性、稳定性的微球制剂，为眼部疾病的治疗提供更好的治疗方式。

发明内容

本发明的目的是提供一种可自发团聚的空白微球，其在体内可以聚集成大的颗粒，兼顾在眼部环境中的可团聚性、缓释作用、安全性、稳定性，可以作为载体用于药物，特别是眼内施用药物的长期持续递送。

为了实现上述目的，本发明提供的技术方案如下：

本发明第一方面提供一种可自发团聚的微球的制造方法，包括如下步骤：

将可降解的生物材料溶解在非水溶性有机溶剂中，作为油相；

配制含表面活性剂的水溶液，作为水相；

将油相与水相混合后，乳化，得到乳液；

将乳液部分氨解后，再加入酸，得到混悬液；

将混悬液进行离心、洗涤，即得可自发团聚的微球。

进一步的，所述部分氨解包括：向乳液加入氨水，搅拌1～20min，包括但不限于1min、2min、3min、4min、5min、6min、7min、8min、9min、10min、11min、12min、13min、14min、15min、16min、17min、18min、19min或20min，优选的，所述搅拌1～10min，更优选的，所述搅拌的时间为1～5min。

所述乳化时间为1～10min，优选为4～6min，更优选为4min；

所述乳化转速为500～2000rmp，包括不限于500rmp、1000rmp、1500rmp和2000rmp优选为1500rmp。

乳化的时间会影响微球的粒径分布，时间越久，反应越完全，但时间过久会导致微球被剪切成碎片，乳化的转速也影响微球的粒径和形态。

优选的，所述氨水的浓度按质量分数为10～40wt％，包括不限于10wt％、15wt％、20wt％、25wt％、30wt％、35wt％或40wt％；

更优选的，所述氨水的浓度按质量分数为28wt％；

优选的，所述搅拌转速为200rmp～500rmp，包括但不限于200rmp、300rmp、400rmp或500rmp，更优选为400rmp；

优选的，所述搅拌时间为5～10min。

进一步的，所述加入的酸和氨水的摩尔比为0.8-3:1；包括但不限于0.8、0.9、1、1.2、1.5、1.8、2、2.2、2.5、2.8或3，优选的，所述加入的酸和氨水的摩尔比为1:1；

优选的，加入酸后继续搅拌1～3h，可以为搅拌1h、2h或3h，更优选为搅拌2h；

优选的，所述的酸为冰醋酸，更优选的，所述冰醋酸的浓度按质量分数为1～10wt％，包括但不限于1wt％、2wt％、3wt％、4wt％、5wt％、6wt％、7wt％、8wt％、9wt％或10wt％，特别优选的，所述冰醋酸的浓度按质量分数为3～8wt％；

优选的，所述冰醋酸的温度为3～8℃，包括但不限于3℃、4℃、5℃、6℃、7℃或8℃，优选为5℃。

进一步的，所述可降解的生物材料与非水溶性有机溶剂的质量体积比为1:5～20，包括但不限于1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19或1:20，优选为1:10。

当可降解的生物材料浓度过高时，不规则结晶增多，不易成球。但如果可降解的生物材料浓度过低，微球固化时容易塌陷，也无法较好的成球，具体的，可降解的生物材料浓度过高，油相的(内分散相)的粘度就越大，相同剪切力下更不易分散，成球粒径也就变大，而可降解的生物材料浓度过高浓度越小，油相的(内分散相)粘度就越小，相同剪切力下更较易分散，成球粒径也就变小。但可降解的生物材料的浓度过小，会造成微球表面塌陷。

进一步的，所述可降解的生物材料包括：聚乳酸(PLA)、聚乙醇酸(PGA)、聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)、聚己内酯、聚酐或其中一种或多种的共聚物；

优选的，所述可降解的生物材料为聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)。

所述表面活性剂质量浓度为0.01～1％，包括不限于0.1％、0.2％、0.5％、0.8％或1％，优选的，所述水溶液中表面活性剂的质量浓度为0.2～1％；更优选为0.5％。

所述可降解生物材料的平均粒径为0.1～3500μm，优选为10～350μm的平均粒径。

优选的，所述表面活性剂包括：氧乙二醇、聚氧丙二醇、癸基葡糖苷、月桂基葡糖苷、辛基葡糖苷、聚氧乙二醇辛基酚、TritonX-100、甘油烷基酯、月桂酸甘油酯、椰油酰胺MEA、椰油酰胺DEA、十二烷基二甲基胺氧化物、泊洛沙姆、聚乙烯醇、聚乙酸乙烯酯、维生素E-TPGS、泊洛沙姆、胆酸钠盐、磺基琥珀酸二辛酯钠、十六烷基三甲基溴化铵、皂苷、吐温20、吐温80、糖酯、磷脂酰胆碱(PC)、1，2-二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、油酸、脱水山梨糖醇三油酸酯、脱水山梨糖醇单油酸酯、脱水山梨糖醇单月桂酸酯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯、聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯、天然卵磷脂、油基聚氧乙烯醚、硬脂基聚氧乙烯醚、月桂基聚氧乙烯醚、氧乙烯和氧丙烯的嵌段共聚物、合成卵磷脂、二乙二醇二油酸酯、油酸四氢糠酯、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯、单油酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、单蓖麻油酸甘油酯、鲸蜡醇、十八烷醇、十六烷基吡啶翁、氯化苄烷铵、橄榄油、单月桂酸甘油酯、玉米油、棉籽油、葵花籽油、卵磷脂、油酸或山梨糖醇酐三油酸酯中的一种或多种。

所述泊洛沙姆的实例包括泊洛沙姆188、237、338或407中的一种或多种。

更优选的，所述表面活性剂为聚乙烯醇。

表面活性剂可以使界面张力下降，减少乳化的能量，减少表面自由能，从而使界面更加稳定，本申请采用的聚乙烯醇为非离子表面活性剂，其作用主要是使微球分散均匀，减少凝聚现象。主要作用机理就是增加溶液的粘度，使得微球之间碰撞的阻力增大，由于在非离子表面活性剂的水溶液中，水分子与表面活性剂以氢键结合，当加热溶液时，氢键结合力会变弱甚至消失，超过某一温度范围(浊点)时，便面活性剂不再与水结合，无法发挥作用故本发明的乳化阶段选择在室温下进行。

进一步的，所述非水溶性有机溶剂包括：羧酸酯(carboxylic esters)、羧酰胺(carboxylic amides)、酸酐(anhydrides)、磷酸酯(phosphoric esters)和磷酸酐(phosphoric anhydrides)一种或多种的混合溶剂；

优选自二氯乙酸甲酯(methyl dichloroacetate)、氯乙酸甲酯(methylchloroacetate)、氯乙酸乙酯(ethyl chloroacetate)、二氯乙酸乙酯(ethyldichloroacetate)、氟乙酸甲酯(methyl fluoroacetate)、二氟乙酸甲酯(methyldifluoroacetate)、氟乙酸乙酯(ethyl fluoroacetate)、二氟乙酸乙酯(ethyldifluoroacetate)、乙酸乙酯(ethyl acetate)、乙酸甲酯(methyl acetate)、甲酸甲酯(methyl formate)、甲酸乙酯(ethyl formate)、甲酸异丙酯(isopropyl formate)或甲酸丙酯(propyl formate)中一种或多种的混合溶剂；

更优选的，所述非水溶性有机溶剂为甲酸异丙酯(isopropyl formate)。

进一步的，所述方法还包括在油相或者水相中加入生物活性物质。

进一步的，所述生物活性物质包括疏水性或亲水性药物，所述药物包括：甾体抗炎剂、非甾体抗炎剂、蛋白质、抗组胺剂、β阻断剂、抗肿瘤剂、免疫抑制剂、抗病毒剂、抗氧化剂或抗生素或其中任一种或多种的组合。

所述的甾体抗炎剂包括皮质类固醇、阿氯米松、阿尔孕酮、安西奈德、倍氯米松、二丙酸倍氯米松、倍他米松、布地奈德、氯泼尼松、氯倍他索、氯倍他松、氯可托龙、氯泼尼醇、皮质酮、可的松、可的伐唑、地夫可特、地奈德、去羟米松、地塞米松、二氟拉松、二氟可龙、醋丁二氟龙、甘草次酸、氟扎可特、氟氯奈德、氟米松、氟尼缩松、氟轻松、醋酸氟轻松、氟考丁酯、氟可龙、氟米龙、醋酸氟培龙、醋酸氟泼尼定、氟泼尼龙、氟氢缩松、丙酸氟替卡松、福莫可他、哈西奈德、丙酸卤倍他索、卤米松、醋酸卤泼尼松、氢可他酯、氢可的松、氯替泼诺、马泼尼酮、甲羟松、甲基强的松、甲泼尼龙、糠酸莫米松、帕拉米松、泼尼卡酯、2泼尼松龙磷酸钠、泼尼松、泼尼松龙戊酸酯、泼尼立定、利美索龙、替可的松、曲安西龙、曲安奈德、苯曲安缩松或己酸丙炎松或其中任一种或多种的组合。

所述的非甾体抗炎剂包括酮咯酸、阿司匹林、双氯芬酸、氟比洛芬、布洛芬、萘普生或舒洛芬或其中任一种或多种的组合。

所述的蛋白质包括抗体，优选抗VEGF的抗体。

所述的抗组胺剂包括并且不限于，氯雷他定、羟嗪、苯海拉明、氯苯那敏、溴苯那敏、赛庚啶、特非那定、氯马斯汀、曲普利啶、卡比沙明、二苯拉林、苯茚胺、阿扎他定、曲吡那敏、右氯苯那敏、右溴苯那敏、甲地嗪、和阿利吗嗪、多西拉敏、非尼拉敏、吡拉明、氯环嗪、松齐拉敏及其衍生物或其中任一种或多种的组合。

所述的β阻断剂包括醋丁洛尔、阿替洛尔、拉贝洛尔、美托洛尔、普萘洛尔或噻吗洛尔或其中任一种或多种的组合。

所述的抗肿瘤剂包括阿霉素、环磷酰胺、放线菌素、博莱霉素、柔红霉素、多柔比星、表柔比星、丝裂霉素、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、卡铂、卡莫司汀、顺铂、依托泊苷、干扰素、喜树碱及其衍生物、苯芥胆甾醇、紫杉醇和其衍生物、泰索帝及其衍生物、长春碱、长春新碱、他莫昔芬、依托泊苷、哌泊舒凡、环磷酰胺或氟他胺或其中任一种或多种的组合。

所述的免疫抑制剂包括环孢菌素、硫唑嘌呤或他克莫司或其中任一种或多种的组合。

所述的抗病毒剂包括干扰素γ、齐多夫定、盐酸金刚烷胺、病毒唑、阿昔洛韦、缬昔洛韦、双脱氧胞苷、膦酰甲酸或更昔洛韦或其中任一种或多种的组合。

所述的抗氧化剂包括抗坏血酸、α-生育酚、甘露醇、还原型谷胱甘肽、各种类胡萝卜素、半胱氨酸、尿酸、牛磺酸、酪氨酸、超氧化物歧化酶、叶黄素、玉米黄质、隐黄素、虾青素、番茄红素、N-乙酰基-半胱氨酸、肌肽、γ-谷酰基半胱氨酸、槲皮素、乳铁蛋白、二氢硫辛酸、柠檬酸盐、银杏提取物、茶儿茶素、越桔提取物、维生素E或维生素E的酯或棕榈酸视黄酯或其中任一种或多种的组合。

所述的抗生素可以是β-内酰胺类抗生素、氨基糖苷类抗生素、四环素类抗生素、氯霉素类抗生素、大环内酯类抗生素、糖肽类抗生素、喹诺酮类抗生素、硝基咪唑类抗生素、利福霉素类抗生素、棘白菌素类抗生素、多烯类抗生素、嘧啶类抗生素、烯丙胺类抗生素、或氮唑类抗生素或其中任一种或多种的组合。

所述抗生素可以包括以下一种或多种：β-内酰胺类抗生素，包括青霉素类(例如青霉素V)、阿莫西林、氨苄西林、巴坎西林、羧苄西林、氯唑西林、双氯西林、氟氯西林、美洛西林、萘夫西林、苯唑西林、青霉素G、哌拉西林、匹氨西林、匹美西林、替卡西林，头孢菌素类如头孢乙腈、头孢羟氨苄、头孢氨苄、头孢甘氨酸、头孢洛宁、头孢噻啶、头孢噻吩、头孢匹林、头孢曲嗪、头孢氮氟、头孢西酮、头孢唑啉、头孢拉定、头孢沙定、头孢替唑、头孢克洛、头孢孟多、头孢美唑、头孢尼西、头孢替坦、头孢西丁、头孢丙烯、头孢呋辛、头孢唑喃、头孢卡品、头孢达肟、头孢地尼、头孢托仑、头孢他美、头孢克肟、头孢甲肟、头孢地嗪、头孢噻肟、头孢咪唑、头孢泊肟、头孢特仑、头孢布烯、头孢噻呋、头孢噻林、头孢唑肟、头孢曲松、头孢哌酮、头孢他啶、头孢克啶、头孢吡肟、头孢瑞南、头孢噻利、头孢唑兰、头孢匹罗、头孢喹肟、头孢吡普、头孢洛林、头孢氯嗪、头孢洛仑、头孢派罗、头孢卡奈、头孢屈洛、头孢吡酮、头孢三唑、头孢维曲、头孢马替林(cefmatilen)、头孢氯铵(cefmepidium)、头孢维星、头孢噁唑、头孢罗替、头孢舒米、头孢呋汀、头孢噻氧，噻烯霉素类，单内酰环类，β-内酰胺酶抑制剂，甲氧西林类；氨基糖苷类抗生素，包括链霉素、庆大霉素、卡那霉素(例如，卡那霉素A)、妥布霉素、阿米卡星、新霉素(例如，新霉素B、新霉素C、新霉素E)、核糖霉素、小诺霉素、阿奇霉素、地贝卡星、西索米星、奈替米星、巴龙霉素、短霉素等；四环素类抗生素，包括四环素、氧四环素、金霉素和强力霉素等；氯霉素类抗生素，包括氯霉素、甲砜霉素等；大环内酯类抗生素，包括红霉素、白霉素、无味红霉素、乙酰螺旋霉素、麦迪霉素、交沙霉素、阿奇霉素、克拉霉素、地红霉素、罗红霉素、泰利霉素等；糖肽类抗生素，包括万古霉素、去甲万古霉素、替考拉宁等；喹诺酮类抗生素，包括诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、培氟沙星、加替沙星、依诺沙星、洛美沙星、萘啶酮酸、左氧氟沙星、莫西沙星、贝西沙星；硝基咪唑类抗生素，包括甲硝唑、替硝唑、奥硝唑等；利福霉素类抗生素，包括利福平；棘白菌素类抗生素；多烯类抗生素；嘧啶类抗生素；烯丙胺类抗生素；氮唑类抗生素；其他抗生素：磷霉素、卷曲霉素、环丝氨酸、林可霉素、克林霉素、丝裂霉素、放线菌素D、博莱霉素、阿霉素、异烟肼、吡嗪酰胺、环孢霉素、多粘菌素B组合诸如多粘菌素B/甲氧苄啶、多粘菌素B/杆菌肽和多粘菌素B/新霉素/短杆菌肽等。

所述的抗生素还可以选自阿米卡星、阿莫西林、氨苄西林、胂凡纳明、阿奇霉素、阿洛西林、氨曲南、杆菌肽、卷曲霉素、羧苄青霉素、头孢克洛、头孢羟氨苄、头孢氨苄、头孢噻吩、头孢孟多、头孢唑啉、头孢地尼、头孢托仑、头孢克肟、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢西丁、头孢泊肟、头孢丙烯、头孢他啶、头孢布烯、头孢唑肟、头孢曲松、头孢呋辛、氯霉素、西司他丁、克拉霉素、克拉维酸、克林霉素、氯法齐明、氯唑西林、粘菌素、环丝氨酸、达福普汀、氨苯砜、达托霉素、双氯西林、地红霉素、多利培南、强力环素、红霉素、乙胺丁醇、乙硫异烟胺、氟氯西林、磷霉素、呋喃唑酮、夫西地酸、庆大霉素、亚胺培南、异烟肼、卡那霉素、林可霉素、利奈唑胺、氯拉卡比、磺胺米隆、美罗培南、甲氧西林、甲硝唑、美洛西林、米诺环素、莫匹罗星、萘夫西林、新霉素、奈替米星、呋喃妥因、苯唑西林、氧四环素、巴龙霉素、青霉素G、青霉素V、哌拉西林、平板霉素、多粘菌素B、吡嗪酰胺、奎奴普丁、雷帕霉素、利福布汀、利福平(Rifampicin)、利福霉素(Rifampin)、利福喷丁、利福昔明、罗红霉素、磺胺嘧啶银、壮观霉素、链霉素、舒巴坦、磺胺醋酰、磺胺嘧啶、磺胺甲二唑、磺胺甲噁唑、磺胺二甲异噁唑、柳氮磺吡啶、磺胺异噁唑、他唑巴坦、替考拉宁、替拉万星(Telavancin)、替利霉素、替莫西林、四环素、甲砜霉素、替卡西林、替加环素、替硝唑、妥布霉素、甲氧苄啶、醋竹桃霉素、万古霉素、依诺沙星、洛美沙星、萘啶酮酸、环丙沙星、左氧氟沙星、加替沙星、莫西沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、头孢替坦、头孢尼西、头孢拉定、头孢匹林、头孢噻吩、头孢美唑、头孢噻肟、拉氧头孢、头孢吡肟、头孢洛林酯、头孢吡普、达巴万星、地美环素、美他环素、厄他培南、非达霉素、格尔德霉素、除莠霉素、泼斯唑来(Posizolid)、雷得唑来(Radezolid)、特地佐利(Torezolid)、奥利万星(Oritavancin)、螺旋霉素、磺胺二甲嘧啶、磺酰氨基柯衣定(Sulfonamidochrysoidine)、吉米沙星、那氟沙星、曲伐沙星、格雷沙星、司帕沙星、替马沙星、泰斯巴汀(Teixobactin)或美拉希汀(Malacidins)或其中一种或多种的组合。

优选的，所述混悬液进行离心步骤之前还包括将混悬液进行过筛，过筛选用的筛网为200～300目，优选为250目；

所述离心采用条件为：离心转速为500～1200rmp，优选为800rpm，离心时间为4～6min，优选为5min；

优选的，所述离心的温度为1～4℃，更优选为4℃；

所述步骤还包括洗涤和干燥，所述洗涤采用水进行洗涤，所述洗涤采用水离心洗涤，所述水离心条件为：离心转速为500～1200rmp，优选为1000rpm，离心时间为4～6min，优选为5min；

所述洗涤次数为1～5次，比如可以为1、2、3、4或5次，优选为3次；

所述干燥包括：置于真空干燥箱中真空干燥10～20h，优选为17h。

本发明第二方面还提供一种第一方面所述的方法制备的可自发团聚的微球。

本发明第三方面还提供一种可自发团聚的微球制剂，包括如下成分：本发明第二方面所述的微球和复溶液。

进一步的，所述的制剂为眼内制剂。

进一步的，所述的复溶液中还包括增稠剂、增塑剂、pH调节剂、渗透压调节剂中的一种或几种；

所述的增稠剂选自透明质酸、壳聚糖、甲基纤维素、羟丙甲纤维素或聚乙烯醇中的一种或几种；

所述的增塑剂选自三乙酸甘油酯、二醋精、柠檬酸三乙酯、柠檬酸乙酰基三甲酯、邻苯二甲酸二甲氧基-乙酯、邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲酸二芳酯、羟乙酸甲基邻苯二甲酰基乙酯甘油、甘油酯、二乙酰基甘油、单乙酰基甘油、甘油、酒石酸二丁酯、邻苯甲酰苯甲酸乙酯、羟乙酸乙基邻苯二甲酰基乙酯、羟乙酸甲基邻苯二甲酰基乙酯、N-乙基甲苯磺酰胺、对甲苯磺酸邻甲苯酯、磷酸三甲酯、磷酸三乙酯、磷酸三丁酯、磷酸三苯酯、苯甲酸、三丙酸甘油酯或聚己内酯中的一种或几种，优选为苯甲醇和柠檬酸脂。

所述的pH调节剂选自氨基酸，更优选的，选自组氨酸或其盐，特别优选的，选自盐酸组氨酸。

所述渗透压调节剂包括甘露醇、甘油、葡萄糖或氯化钠中的一种或几种，特别优选为甘露醇。

本发明第四方面还提供一种第三方面所述制剂的制备方法，取本发明第二方面所述的微球，加入复溶液，使微球均匀分散，将分散后的微球混悬液置于负压条件下促使其复溶浸润，得到微球混悬液。

优选的，所述负压条件气压为100mbar，所述复溶液浸润时间为15min～60min，更优选为30min。

本发明第五方面还提供第二方面所述的微球或第三方面所述的微球制剂在制备治疗眼部疾病药物中的应用，所述药物施用于玻璃体内、基质内、前房内、眼筋膜下、视网膜下、眼球后、眼球周、脉络膜上腔、结膜、结膜下、巩膜上、后巩膜旁、角膜周或泪腺注射中。

进一步的，所述眼部病症或疾病包括巨细胞病毒(CMV)感染、脉络膜新血管生成、急性黄斑视神经视网膜病、黄斑水肿(如囊样黄斑水肿和糖尿病性黄斑水肿)、白塞病、视网膜病、糖尿病视网膜病变(包括增殖性糖尿病视网膜病变)；视网膜动脉闭塞性疾病、视网膜中央静脉阻塞、葡萄膜炎性视网膜疾病、视网膜脱离、眼外伤、由眼部激光治疗或光动力疗法引起的损伤、光凝固、放射性视网膜病变、视网膜前膜病症、视网膜分支静脉阻塞、前部缺血性视神经病变、非视网膜病变的糖尿病视网膜功能障碍、眼部炎症、眼部感染和色素性视网膜炎、干性或湿性年龄相关性黄斑变性和青光眼中的任一种或多种；

优选的，所述眼部病症或疾病包括：碱性糜烂性角膜结膜炎、变应性结膜炎、过敏性角膜炎、前葡萄膜炎、白塞病、睑炎、血-水屏障破裂、脉络膜炎、慢性葡萄膜炎、结膜炎、隐形眼镜诱发的角膜结膜炎、角膜磨损、角膜创伤、角膜溃疡、结晶性视网膜病、囊样黄斑水肿、泪囊炎、糖尿病性角膜病、糖尿病性黄斑水肿、糖尿病视网膜病、干眼病、干性年龄相关性黄斑变性、嗜酸性肉芽肿、巩膜外层炎、渗出性黄斑水肿、福克斯(Fuchs)营养障碍、巨细胞动脉炎、巨乳头状结膜炎、青光眼、青光眼手术失败、移植排斥、带状疱疹、白内障术后炎症、虹膜角膜内皮综合征、虹膜炎、干燥性角膜结膜炎、角结膜炎炎症性疾病、圆锥形角膜、格子状角膜营养障碍、地图状-点状-指纹状营养障碍、坏死性角膜炎、涉及视网膜、葡萄膜道或角膜的新生血管性疾病，例如新生血管性青光眼、角膜新血管生成、在玻璃体切除术和晶状体切除术后产生的新血管形成、视神经的新血管形成，和由于眼穿透或挫伤性眼损伤引起的新血管形成、神经麻痹性角膜炎、非感染性葡萄膜炎眼疱疹、眼淋巴瘤、眼红斑痤疮、眼部感染、眼部类天疱疮、视神经炎、全葡萄膜炎、乳头炎、睫状体扁平部炎、持续性黄斑水肿、晶状体蛋白过敏症、后葡萄膜炎、手术后炎症、增殖性糖尿病视网膜病变、增殖性镰状细胞视网膜病变、增殖性玻璃体视网膜病变、视网膜动脉闭塞、视网膜脱离、视网膜静脉阻塞、色素性视网膜炎、早产儿视网膜病变、虹膜炎、巩膜炎、史蒂芬-约翰逊综合征、交感性眼炎、颞动脉炎、甲状腺相关眼病、葡萄膜炎、春季结膜炎、维生素A不足引起的角膜软化、玻璃体炎或湿性年龄相关性黄斑变性中的任一种或多种。

经过本发明特定的方法制备的可自发团聚的微球可在眼内环境中自发相互团聚或者融合形成一个或者多个团块，兼顾在眼部环境中的可团聚性、缓释作用、安全性、稳定性，可以作为载体用于药物，特别是眼内施用药物的长期持续递送。

附图说明

图1为实施例1制备得到的微球SEM图；

图2为实施例2制备得到的微球制剂可团聚性测试试管底部团聚物照片；

图3为实施例2制备得到的微球制剂可团聚性测试底部团聚物SEM图；

图4为实施例4中组别1可团聚性测试底部团聚物SEM图；

图5为实施例2中组别2可团聚性测试底部团聚物SEM图；

图6为实施例2中组别3可团聚性测试底部团聚物SEM图。

具体实施方式

除非另有定义，本发明中所使用的所有科学和技术术语具有与本发明涉及技术领域的技术人员通常理解的相同的含义。

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

实施例1可团聚微球的制备方法

(1)将1.6gPLGA(

753H)加入16ml甲酸异丙酯中，超声溶解；

(2)配制400g质量浓度为0.5％的PVA(4-88)水溶液，使用4.5μm孔径滤膜对PVA水溶液进行抽滤，得到过滤后的聚乙烯醇水溶液；

(3)用一次性滴管将(1)中的油相溶液逐滴滴加入(2)中的聚乙烯醇水溶液中进行乳化，乳化时间为4min，乳化转速为1500rpm；

(4)将(3)得到的乳液分成4份，每份100g，常温400rpm搅拌，搅拌约1min后分别加入28wt％的氨水7.5ml，持续搅拌5min后，加入5℃的6.77wt％冰醋酸100g，使醋酸和氨水的摩尔比为1:1，持续搅拌2h；

(5)将(4)中氨解结束后的微球混悬液过筛2次后离心收集，筛网为250目，离心转速为800rpm，离心时间为5min。收集后保持相同离心参数用纯化水对微球进行离心洗涤，洗涤3次，将收集到的微球置于真空干燥箱中真空干燥17h，即得，图1为制备得到的微球的SEM图。

实施例2含有可团聚微球的制剂的制备方法

按照质量百分比配制含1wt％柠檬酸三乙酯TEC、0.05wt％透明质酸HA及0.01M盐酸组氨酸的复溶液，加入甘露醇调节渗透压至278mOsm/kg，使用孔径为0.22μm的滤头过滤后得到无菌复溶液；

称取实施例1制备得到的微球33.9mg于2ml EP管中，加入复溶液137.5mg后轻敲确保微球均匀分散，将分散后的微球混悬液置于真空干燥箱中负压促使复溶液浸润，气压为100mbar，放置时间为30min，即得。

实施例3可团聚微球可团聚性测试

用BD 1ml注射器搭配BD 18G针头吸取实施例3中经负压处理后的微球混悬液，排尽气泡后换JBP 27G针头将混悬液注射50μl至装有37℃ PBS溶液的2ml EP管底部，保持37℃放置约20h，观察团聚状况，图2为EP管底部微球团聚物照片，图3为EP管底部微球团聚物SEM图。

实施例4氨解程度对微球可团聚性的影响实验

按照实施例1中的方法制备微球，其中组1、组2和组3的制备过程中在加入28wt％的氨水7.5ml，持续搅拌10min、20min、30min后，加入5℃的6.77wt％冰醋酸100g。

组4的制备方法如下：

(1)将1.6gPLGA(

753H)加入16ml甲酸异丙酯中，超声溶解；

(2)配制400g质量浓度为0.5％的PVA(4-88)水溶液，使用4.5μm孔径滤膜对PVA水溶液进行抽滤，得到过滤后的聚乙烯醇水溶液；

(3)用一次性滴管将(1)中的油相溶液逐滴滴加入(2)中的聚乙烯醇水溶液中进行乳化，乳化时间为4min，乳化转速为1500rpm；

(4)将(3)得到的乳液分成4份，每份100g，常温400rpm搅拌，搅拌约1min后分别加入28wt％的氨水7.5ml，持续搅拌2h，充分氨解；

(5)将(4)中氨解结束后的微球混悬液过筛2次后离心收集，筛网为250目，离心转速为800rpm，离心时间为5min。收集后保持相同离心参数用纯化水对微球进行离心洗涤，洗涤3次，将收集到的微球置于真空干燥箱中真空干燥17h。

将组2～4获得的微球按照实施例2的方法配制成混悬液后，按照实施例3的方法观察团聚状况，其中组1和组2的EP管底部微球仍然能够观察微球发生团聚，但是组3和组4的EP管底部微球不发生团聚，其中图4～6分别为组1～3的EP管底部微球团聚物SEM图。

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (15)

1.一种可自发团聚的微球的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

将可降解的生物材料溶解在非水溶性有机溶剂中，作为油相；

配制含表面活性剂的水溶液，作为水相；

将油相与水相混合后，乳化，得到乳液；

将乳液部分氨解后，再加入酸，得到混悬液；

将混悬液进行离心、洗涤，即得可自发团聚的微球。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述部分氨解包括：向乳液加入氨水，搅拌1～20min，优选的，所述搅拌的时间为1～10min，更优选的，所述搅拌的时间为1～5min；

优选的，所述氨水的浓度按质量分数为10～40wt％；

更优选的，所述氨水的浓度按质量分数为28wt％；

优选的，所述搅拌转速为200rmp～500rmp，更优选为400rmp。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述加入的酸和氨水的摩尔比为0.8～3:1；优选的，所述加入的酸和氨水的摩尔比为1:1；

优选的，加入酸后继续搅拌1～3h，更优选的，加入酸后继续搅拌2h；

优选的，所述的酸为冰醋酸，更优选的，所述冰醋酸的浓度按质量分数为1～10wt％，特别优选的，所述冰醋酸的浓度按质量分数为3～8wt％。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述可降解的生物材料与非水溶性有机溶剂的质量体积比为1:5～20，优选为1:10。

5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述可降解的生物材料选自聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸-羟基乙酸共聚物、聚己内酯、聚酐或其中一种或多种的共聚物；

优选的，所述可降解的生物材料为聚乳酸-羟基乙酸共聚物。

6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述表面活性剂质量浓度为0.01～1％，优选的，所述表面活性剂的质量浓度为0.2～1％；更优选为0.5％；

优选的，所述表面活性剂选自氧乙二醇、聚氧丙二醇、癸基葡糖苷、月桂基葡糖苷、辛基葡糖苷、聚氧乙二醇辛基酚、TritonX-100、甘油烷基酯、月桂酸甘油酯、椰油酰胺MEA、椰油酰胺DEA、十二烷基二甲基胺氧化物、泊洛沙姆、聚乙烯醇、聚乙酸乙烯酯、维生素E-TPGS、泊洛沙姆、胆酸钠盐、磺基琥珀酸二辛酯钠、十六烷基三甲基溴化铵、皂苷、吐温20、吐温80、糖酯、磷脂酰胆碱、1，2-二棕榈酰磷脂酰胆碱、油酸、脱水山梨糖醇三油酸酯、脱水山梨糖醇单油酸酯、脱水山梨糖醇单月桂酸酯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯、聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯、天然卵磷脂、油基聚氧乙烯醚、硬脂基聚氧乙烯醚、月桂基聚氧乙烯醚、氧乙烯和氧丙烯的嵌段共聚物、合成卵磷脂、二乙二醇二油酸酯、油酸四氢糠酯、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯、单油酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、单蓖麻油酸甘油酯、鲸蜡醇、十八烷醇、十六烷基吡啶翁、氯化苄烷铵、橄榄油、单月桂酸甘油酯、玉米油、棉籽油、葵花籽油、卵磷脂、油酸或山梨糖醇酐三油酸酯中的一种或多种；

更优选的，所述表面活性剂为聚乙烯醇。

7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述非水溶性有机溶剂包括：二氯乙酸甲酯、氯乙酸甲酯、氯乙酸乙酯、二氯乙酸乙酯、氟乙酸甲酯、二氟乙酸甲酯、氟乙酸乙酯、二氟乙酸乙酯、乙酸乙酯、乙酸甲酯、甲酸甲酯、甲酸乙酯、甲酸异丙酯或甲酸丙酯中一种或多种的混合溶剂；

更优选的，所述非水溶性有机溶剂为甲酸异丙酯。

8.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述方法还包括在油相或者水相中加入生物活性物质。

9.如权利要求1～8任一项所述的方法制备的可自发团聚的微球。

10.一种可自发团聚的微球制剂，其特征在于，包括如下成分：

权利要求1～8任一项所述的方法制备的可自发团聚的微球和复溶液。

11.如权利要求10所述的制剂，其特征在于，所述的制剂为眼内制剂。

12.如权利要求10所述的制剂，其特征在于，所述的复溶液中还包括增稠剂、增塑剂、pH调节剂、渗透压调节剂中的一种或几种；

所述的增稠剂选自透明质酸、壳聚糖、甲基纤维素、羟丙甲纤维素或聚乙烯醇中的一种或几种；

所述的增塑剂选自三乙酸甘油酯、二醋精、柠檬酸三乙酯、柠檬酸乙酰基三甲酯、邻苯二甲酸二甲氧基-乙酯、邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲酸二芳酯、羟乙酸甲基邻苯二甲酰基乙酯甘油、甘油酯、二乙酰基甘油、单乙酰基甘油、甘油、酒石酸二丁酯、邻苯甲酰苯甲酸乙酯、羟乙酸乙基邻苯二甲酰基乙酯、羟乙酸甲基邻苯二甲酰基乙酯、N-乙基甲苯磺酰胺、对甲苯磺酸邻甲苯酯、磷酸三甲酯、磷酸三乙酯、磷酸三丁酯、磷酸三苯酯、苯甲酸、三丙酸甘油酯或聚己内酯中的一种或几种，优选为苯甲醇和柠檬酸脂；

所述的pH调节剂选自氨基酸，更优选的，选自组氨酸或其盐；

所述渗透压调节剂为甘露醇、甘油、葡萄糖或氯化钠中的一种或几种。

13.权利要求10或11所述的制剂的制备方法，其特征在于，取权利要求9所述的微球，加入复溶液，使微球均匀分散，将分散后的微球混悬液置于负压条件下促使复溶浸润，得到微球混悬液。

14.权利要求9所述的微球或权利要求10所述的微球制剂在制备治疗眼部疾病药物中的应用，其特征在于，所述药物施用于玻璃体内、基质内、前房内、眼筋膜下、视网膜下、眼球后、眼球周、脉络膜上腔、结膜、结膜下、巩膜上、后巩膜旁、角膜周或泪腺中。

15.如权利要求14所述的应用，其特征在于，所述眼部病症或疾病包括巨细胞病毒感染、脉络膜新血管生成、急性黄斑视神经视网膜病、黄斑水肿、白塞病、视网膜病、糖尿病视网膜病变；视网膜动脉闭塞性疾病、视网膜中央静脉阻塞、葡萄膜炎性视网膜疾病、视网膜脱离、眼外伤、由眼部激光治疗或光动力疗法引起的损伤、光凝固、放射性视网膜病变、视网膜前膜病症、视网膜分支静脉阻塞、前部缺血性视神经病变、非视网膜病变的糖尿病视网膜功能障碍、眼部炎症、眼部感染和色素性视网膜炎、干性或湿性年龄相关性黄斑变性和青光眼中的任一种或多种；

优选的，所述眼部病症或疾病包括：碱性糜烂性角膜结膜炎、变应性结膜炎、过敏性角膜炎、前葡萄膜炎、白塞病、睑炎、血-水屏障破裂、脉络膜炎、慢性葡萄膜炎、结膜炎、隐形眼镜诱发的角膜结膜炎、角膜磨损、角膜创伤、角膜溃疡、结晶性视网膜病、囊样黄斑水肿、泪囊炎、糖尿病性角膜病、糖尿病性黄斑水肿、糖尿病视网膜病、干眼病、干性年龄相关性黄斑变性、嗜酸性肉芽肿、巩膜外层炎、渗出性黄斑水肿、福克斯营养障碍、巨细胞动脉炎、巨乳头状结膜炎、青光眼、青光眼手术失败、移植排斥、带状疱疹、白内障术后炎症、虹膜角膜内皮综合征、虹膜炎、干燥性角膜结膜炎、角结膜炎炎症性疾病、圆锥形角膜、格子状角膜营养障碍、地图状-点状-指纹状营养障碍、坏死性角膜炎、涉及视网膜、葡萄膜道或角膜的新生血管性疾病、神经麻痹性角膜炎、非感染性葡萄膜炎眼疱疹、眼淋巴瘤、眼红斑痤疮、眼部感染、眼部类天疱疮、视神经炎、全葡萄膜炎、乳头炎、睫状体扁平部炎、持续性黄斑水肿、晶状体蛋白过敏症、后葡萄膜炎、手术后炎症、增殖性糖尿病视网膜病变、增殖性镰状细胞视网膜病变、增殖性玻璃体视网膜病变、视网膜动脉闭塞、视网膜脱离、视网膜静脉阻塞、色素性视网膜炎、早产儿视网膜病变、虹膜炎、巩膜炎、史蒂芬-约翰逊综合征、交感性眼炎、颞动脉炎、甲状腺相关眼病、葡萄膜炎、春季结膜炎、维生素A不足引起的角膜软化、玻璃体炎或湿性年龄相关性黄斑变性中的任一种或多种。

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