ES2351956T3 - Derivados de 9-alquilamino-1-nitroacridina. - Google Patents

Abstract

Un compuesto de 1-nitro-9-alquilaminoacridina que tiene la estructura I **Fórmula** en la que cuando R1 es H, R2 es H o CO(CH2)nCH3, en la que n = 1-8, R3 es (CH2)nCH3, en la que n = 0­- 1, o O(CH2)nCH3, en la que n = 0-1 y R4 es H, (CH2)nCH3, o O(CH2)nCH3, en la que n = 0-1, y n' es 2-4; o cuando R1 es O(CH2)nCH3, en la que n = 0-1, R2 es CO(CH2)nCH3, en la que n = 1-8, R3 es (CH2)nCH3, en la que n = 0-1, o O(CH2)nCH3, en la que n = 0-1, y R4 es H, (CH2)nCH3, o O(CH2)nCH3, en la que n = 0=1, y n' es 2-4; o una sal de adición de ácidos no tóxica del mismo.

Description

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La invención está dirigida a nuevos compuestos de 9-hidroxialquilamino-y 9alcoxialquilamino-1-nitroacridina. Los procedimientos de preparación, composiciones que comprenden dichos compuestos y su uso médico también se incluyen en la presente invención. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Las acridinas son moléculas biológicas potentes que se unen al ADN e inhiben el crecimiento celular. Se han estudiado varios derivados de acridina para determinar su actividad antitumoral. Un trabajo anterior demostró que las 1-nitro-9-alquilaminoalquilaminoacridinas tenían una buena actividad antitumoral (véase, por ejemplo, la Patente de Estados Unidos Nº 4.139.531, Gniazdowsk y col., 1995, Gen. Pharmacol. 26: 473, Ledochowski, 1976, Mat. Med. Pol. 3:237, Mazerska y col., 1984, Eur. J. Med. Chem. 19:199, Pawlak y col., 1984, Cancer Res. 44:4289, Mazerska y col., 1990, Anti-Cancer Drug Des. 5:169, Hrabowska y col., 1982, Arzneim-Forsch. /Drug. Res. 32:1013-1016). Se ha descubierto que la introducción de un grupo hidroxialquilamino en la posición 9 de 1-nitroacridina también proporciona compuestos activos (documento EP 38572).

A pesar de la existencia de un gran volumen de datos sobre derivados de acridinas (Mazerska, Z. y col., 1984 Eur. J. Med. Chem. 19: 1999; Mazerska, Z. y col., 1990, Anticancer Drug Des. 5:169), la introducción de nuevos sustituyentes en el sistema todavía puede proporcionar resultados inesperados. Como una ilustración, estudios de mutagenicidad sobre varios derivados de nitracrina demostraron características diferentes para compuestos individuales (Ferguson y col. 1987, Mutagenesis 2: 253). También se descubrió que la introducción del sustituyente 4-metoxi en el resto de nitracrina disminuía el metabolismo global en comparación con el compuesto sin sustituir en ratas (Robertson y col., 1996, Xenobiotica 26:559). Se descubrió que un derivado de 3,4-dimetoxiacridina que tiene en la posición 9 un sustituyente hidroxietilamino era menos potente que el compuesto de dimetilaminoetilamino correspondiente (Monge, A. y col., 1994, J. Heterocyclic Chem. 31:1455).

Los derivados multi-sustituidos de acridina que poseen sustituyentes nitro, metoxi, metilo, aminoalquilamino o hidroxialquilamino son conocidos, y algunos se han estudiado como potentes agentes anticancerosos (Horowska y col., 1968, Rocz. Chem. 42:1351; Steck, E.A. y col., 1957, J. Am. Chem. Soc. 79:4414; Monge. y col., 1994, J. Heterocyclic Chem. 31: 1455; Wilson y col., 1989, J. Med Chem. 32:23; Wysocka-Skrzela y col., 1981, Pol. J. Chem. 55:2211; Cholody, y col., 1983, Pol. J. Chem. 57:285; Cain y col., 1974, J. Med. Chem. 173:922; Cholody, y col., 1991, J. Heterocyclic Chem. 28: 209; Patente de Estados Unidos Nº 2.762.809; Yekundi, y col., 1957, Chem. Ber. 90:2448). Sin embargo, la eficacia de estos compuestos en la inhibición del crecimiento tumoral varía.

Existe la necesidad de más agentes antitumorales no tóxicos y eficaces. Un objetivo de la presente invención es proporcionar nuevos compuestos de 9-alquilamino-1-nitroacridina como agentes anticancerosos con un índice terapéutico mejorado. SUMARIO DE LA INVENCIÓN

La invención está dirigida a nuevos compuestos de 1-nitroacridina, a procedimientos para su preparación, así como a que comprenden dichos compuestos. La invención también está dirigida a dichos compuestos y composiciones para su uso para inhibir o prevenir el crecimiento de tumores y/o prevenir o inhibir las metástasis en un mamífero, particularmente un paciente humano, mediante la administración a dicho mamífero de una cantidad de dichos compuestos o composiciones eficaces para inhibir o prevenir el crecimiento de un tumor o tumores y/o prevenir o inhibir las metástasis en dicho mamífero. La invención también está dirigida al uso de estos compuestos para la preparación de un medicamento para la prevención

o inhibición del crecimiento tumoral y/o para la prevención de las metástasis. En una realización particular, el tumor se selecciona entre el grupo que consiste en cáncer de próstata, cáncer de colon, linfoma, cáncer de mama, leucemia, sarcoma y/o linfoma. En la realización más particular, el cáncer es cáncer de próstata.

La invención también está dirigida a dichos compuestos y composiciones para su uso para inhibir o prevenir el crecimiento o infección viral, parasitaria, bacterial (por ejemplo, Staphylococcus, Streptococcus, Niseria) y/o fúngica que comprende administrar a un mamífero, particularmente a un paciente humano, una cantidad de dichos compuestos y composiciones eficaces para inhibir o prevenir el crecimiento o infección de microorganismos, particularmente, viral, bacteriana, parasitaria y/o fúngica. La invención también está dirigida al uso de estos compuestos para la preparación de un medicamento para la prevención o inhibición del crecimiento o infección viral, bacteriana, parasitaria y/o fúngica.

Los compuestos de la presente invención son 9-(2'-hidroxietilamino)-7-metoxi-4-metil-1nitroacridina, 9-(2'-acetoxietilamino)-4-metil-1-nitroacridina, 9-(3'-acetoxipropilamino)-4-metil-1nitroacridina o 9-(2'-acetoxietilamino)-7-metoxi-4-metil-1-nitroacridina, o tienen la estructura I

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en la que cuando R1 es H, R2 es H o CO(CH2)nCH3, en la que n = 1-8, R3 es (CH2)nCH3, en la que n = 0-1 u O(CH2)nCH3, en la que n = 0-1 y R4 es H, (CH2)nCH3, o O(CH2)nCH3, en la que n = 0-1; y en la que cuando R1 es O(CH2)nCH3, en la que n = 0-1 y R2 es CO(CH2)nCH3, en la que n = 1-8, R3 es (CH2)nCH3, en la que n = 0-1 u O(CH2)nCH3, en la que n = 0-1, y R4 es H, (CH2)nCH3, o O(CH2)nCH3, en la que n = 0-1; y sales de los mismos.

Los ejemplos de sales incluyen, pero sin limitación, las sales de adición de ácidos, particularmente, las sales de adición de ácidos no tóxicas. Los ácidos útiles para preparar las sales de adición de ácidos incluyen, entre otros, ácidos inorgánicos, tales como ácidos hidrohálicos (por ejemplo, ácido clorhídrico y ácido bromhídrico), ácido sulfúrico y ácidos orgánicos, tales como ácido láctico, metanosulfónico, oxálico, maleico, tartárico, cítrico, acético y ácido succínico.

En una realización específica, los compuestos de 1-nitroacridina de la fórmula I se seleccionan entre el grupo que consiste en 9-(2'-hidroxietilamino)-4-metil-1-nitroacridina, 9-(3'hidroxipropilamino)-4-metil-1-nitroacridina, 9-(2'-propionoxietilamino)-4-metil-1-nitroacridina, 9(3'-propionoxipropilamino)-4-metil-1-nitroacridina, 9-(2'-hidroxietilamino)-4-metoxi-1nitroacridina, 9-(3'-hidroxipropilamino)-4-metoxi-1-nitroacridina y 9-(4'-hidroxibutilamino)-4metoxi-1-nitroacridina. BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS

La Figura 1 compara el efecto antitumoral de 1-nitro-9-hidroxietilaminoacridina y 9-(2'

hidroxietilamino)-4-metil-1-nitroacridina en ratas Copenhague.

imagen1 muestra el efecto de (0,8

mg/kg) de 1-nitro-9-hidroxietilaminoacridina,

imagen1 muestra el efecto de (0,8 mg/kg) de 9-(2'

hidroxietilamino)-4-metil-1-nitroacridina y

imagen1 muestra el efecto de (1,0 mg/kg) de 9-(2'hidroxietilamino)-4-metil-1-nitroacridina. La Figura 2 muestra el efecto de 9-(2'-hidroxietilamino)-4-metil-1-nitroacridina sobre la reducción de xenoinjertos de tumor de próstata humano en ratones desnudos

imagen1 muestra el control.

imagen1 muestra el efecto de 0,8 mg/kg de 9-(2'hidroxietilamino)-4-metil-1-nitroacridina y

imagen1 muestra el efecto de (0,6 mg/kg) de mitoxantrona. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Procedimientos Sintéticos

Los compuestos de la presente invención pueden prepararse por una serie de reacciones como las que se muestran en el Esquema 1 Esquema 1

imagen1

en las que R1-R4 son como se han definido anteriormente en el presente documento y X es Cl, fenoxi o sal de piridinio.

5 El compuesto III, que puede emplearse como material de partida en la práctica de la presente invención, puede prepararse de acuerdo con las enseñanzas expuestas en Ledochowski, A. Mat. Med. Pol. 1976, 3: 237 para compuestos de 9-amino-1-nitroacridina (R1 = R3 = H) ; en Yekundi, K.G. y col. Chem. Ber. 1957, 90:2448 para 9-amino-7-metoxi-1nitroacridinas (R1 = OCH3, R3 = H); y en Horowska, B.; Ledóchowski, A. Rocz. Chem. 1968,

10 42:1351 para 9-amino-4-metilo o 4-metoxi-1-nitroacridinas (R1 = H, R3 = OCH3 o CH3). En el Esquema 2 se ofrece un procedimiento para obtener III (9-amino-7-metoxi-4-metil-1nitroacridinas). Esquema 2

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Las 1-nitroacridinas sustituidas de la presente invención de fórmula general III pueden prepararse por condensación de un ácido o-halogenobenzoico sustituido apropiado y un compuesto de anilina o, como alternativa, de ácidos antranílico sustituido y un compuesto de halogenobenceno, viéndose afectada la condensación por el calentamiento de cantidades al menos equimolares de los reactivos en presencia de un aceptor de ácidos y cantidades catalíticas de cobre y/o sus sales. Preferentemente, el compuesto de ácidos benzoico puede usarse en forma de sus sales con metales alcalinos, tales como sales de sodio o potasio. El calentamiento de los reactivos tiene lugar sin un disolvente o en un disolvente adecuado a temperaturas de 80 a 180ºC. Los disolventes adecuados incluyen, pero sin limitación, disolventes orgánicos tales como dimetilformamida, dimetilacetamida, éter difenílico, nitrobenceno y alcoholes alifáticos superiores, tales como alcohol amílico. Los aceptores de ácidos adecuados incluyen aminas terciarias y sales de metales alcalinos, tales como carbonatos sódicos y potásicos y similares. Si se desea, el propio disolvente de reacción puede servir como aceptor de ácidos, tal como cuando se emplea dimetilanilina como disolvente. El producto de condensación deseado de fórmula general VI preferentemente se separa en forma de una solución de su sal en agua, y precipita por una adición de ácido mineral, tal como ácido clorhídrico. Después, el producto deseado se retira de la mezcla acuosa por filtración, y opcionalmente, se purifica por técnicas habituales, tal como por cristalización en un disolvente orgánico adecuado. Los productos de condensación de fórmula general VI pueden ciclarse para dar el derivado de acridina por procedimientos habituales conocidos en la técnica (Acheson, R.M. Ed., Acridines, Interscience Publishers, NY, Londres, 1973). En una realización preferida de la ciclación, el derivado de ácido N-fenilantranílico se calentó en una solución de oxicloruro de fósforo a una temperatura de 60ºC a la temperatura de reflujo, un exceso del reactivo se retira por evaporación y el producto se aísla por precipitación o extracción usando un disolvente adecuado. Los disolventes adecuados incluyen disolventes orgánicos tales como cloroformo, cloruro de metileno, benceno, tolueno o éter. El derivado de 9-cloroacridina formado III se aísla adicionalmente y se purifica por las técnicas habituales. Cuando R3 es H, se forman dos isómeros. Los isómeros pueden separarse por calentamiento de III en el que X=Cl para dar sales de piridinio de III que pueden separarse fácilmente. Esos isómeros se calentaron con fenol y dan III, en el que X=OPh.

Un procedimiento de la presente invención para obtener compuestos de 1-nitro-9(hidroxialquilamino)acridina o sus sales de la fórmula II, en la que los sustituyentes R1 y R3 son como se han definido anteriormente en el presente documento, comprende hacer reaccionar un compuesto 9-cloro-adecuado de fórmula III o un derivado 9-fenoxi-relacionado o sal de piridinio acridinil-9 relacionada con un compuesto de hidroxialquilamina apropiado en fenol a temperaturas de 40 a 120ºC. Después, el producto deseado se aísla por precipitación de su sal con un disolvente orgánico no polar. Los disolventes orgánicos adecuados incluyen éter etílico, benceno, tolueno y tetrahidrofurano. Como alternativa, el producto deseado puede aislarse por alcalización de la mezcla de reacción y extracción del producto con un disolvente inmiscible en agua adecuado. Los disolventes inmiscibles en agua adecuados éter etílico, benceno, tolueno, cloroformo, acetato de etilo y similares.

Como alternativa, la condensación de un compuesto 9-cloro-adecuado de fórmula III o un compuesto 9-fenoxi-relacionado o una sal de piridinio acridinil-9 relacionada con un compuesto de hidroxialquilamina apropiado puede realizarse en un disolvente polar adecuado en presencia de un catalizador ácido. Los disolventes polares adecuados incluyen alcoholes, disolventes apróticos polares o la propia hidroxialquilamina. Los catalizadores ácidos adecuados incluyen ácidos minerales, ácidos orgánicos fuertes o fenol.

Un procedimiento de la presente invención para obtener compuestos de 1-nitro-9(alcoxialquilamino)acridina o sus sales de la fórmula I, en la que los sustituyentes R1-R4 son como se han definido anteriormente en el presente documento, comprende hacer reaccionar un compuesto de 1-nitro-9-(hidroxi-alquilamino)acridina adecuado con un agente de acilación adecuado. Un agente de acilación adecuado incluye, pero sin limitación, ácidos carboxílicos, cloruros de ácido relacionados, anhídridos de ácidos u otros conocidos en la técnica. En una realización preferida de la reacción en la presente invención, el agente de acilación se forma a partir de ácido carboxílico in situ en la mezcla de reacción. La reacción se realiza preferentemente en disolventes adecuados. Los disolventes adecuados incluyen disolventes orgánicos tales como haloalcanos, por ejemplo, cloroformo, hidrocarbonos aromáticos, por ejemplo benceno y tolueno, éteres alifáticos o éteres cíclicos alifáticos, o ácidos carboxílicos, preferentemente el mismo ácido que sirve como agente de acilación. La condensación se realiza típicamente a baja temperatura, preferentemente de -30ºC a la temperatura ambiente, y los productos se aíslan por procedimientos habituales.

Por lo tanto, la presente invención también proporciona un procedimiento para producir un compuesto de 1-nitro-9-aminoacridina de estructura I en la que R1-R4 y n1 tienen los significados dados anteriormente, o una sal del mismo, que comprende

(a) hacer reaccionar un compuesto que tiene la fórmula III

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en la que X es Clofenoxi, y en la que cuando R1 es H, R3 es (CH2)nCH3, en la que n = 0-1 u O(CH2)nCH3, en la que

5 n = 0-1 y R4 es H, (CH2)nCH3, u O(CH2)nCH3, en la que n = 0-1, o en la que cuando R1 es O(CH2)nCH3, en la que n = 0-1, R3 es (CH2)nCH3, en la que n = 0-1, o O(CH2)nCH3, en la que n = 0-1, y R4 es H, (CH2)nCH3, o O(CH2)nCH3, en la que n = 0-1, con un compuesto de hidroxialquilamino y

(b) aislar dicho compuesto de 1-nitro-9-alquilaminoacridina 10 La presente invención también proporciona un compuesto que tiene la fórmula III

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en la que cuando X es Cl, R1 es O(CH2)nCH3, en la que n = 0-1, R3 es (CH2)nCH3, en la que n = 1 y R4 es H,(CH2)nCH3, en la que n = 0-1 u O(CH2)nCH3, en la que n = 0-1 y en la que cuando X es fenoxi, R1 es H, O(CH2)nCH3, en la que n = 0-1, R3 es (CH2)nCH3, en la que n = 0-1 y R4 es

15 H, (CH2)nCH3, en la que n = 0-1 u O(CH2)nCH3, en la que n = 0-1. Los compuestos de la presente invención también pueden estar unidos químicamente a uno o más restos o conjugados que mejoran la actividad, distribución celular, dirección o captación del compuesto de la presente invención. Estos restos pueden incluir, pero sin limitación, péptidos, anticuerpos, proteínas, ácidos nucleicos y adenovirus. En una realización

20 específica, el compuesto de la presente invención pueden estar conjugados con una proteína o

polipéptido dirigido a células tumorales usando los procedimientos descritos en la Patente de Estados Unidos Nº 5,759,514.

Composiciones

Una cantidad terapéutica eficaz de esta mezcla está sola o en combinación con vehículos farmacéuticamente aceptables, formulada en la formulación farmacéutica adecuada para administración parenteral u oral que puede administrarse por vía parenteral u oral para inhibir el crecimiento de un tumor en un mamífero y particularmente un ser humano. La composición también se puede administrar por vía tópica a lesiones cutáneas. La administración parenteral incluye infusión o inyección intravenosa, intraarterial, subcutánea, intraperitoneal o intramuscular; o administración intracraneal, por ejemplo, intratecal o intraventricular. Los cánceres específicos que se pueden tratar con la composición de la presente invención pueden incluir, pero sin limitación, cáncer de próstata, cáncer de colon, linfoma, cáncer de mama, leucemia, sarcoma y/o linfoma.

Las composiciones y formulaciones para administración oral incluyen polvos o gránulos, suspensiones o soluciones en agua o medio no acuoso, cápsulas, sobres o comprimidos. Pueden ser deseables espesantes, agentes saporíferos, diluyentes, emulsionantes, auxiliares de dispersión o aglutinantes.

Las composiciones y formulaciones para la administración parenteral, intratecal o intraventricular pueden incluir soluciones acuosas estériles que también pueden contener tampones, diluyentes y otros aditivos adecuados tales como, pero sin limitación, potenciadores de penetración, compuestos vehículo y otros excipientes o vehículos farmacéuticamente aceptables.

Las composiciones farmacéuticas y formulaciones para administración tópica pueden incluir parches transdérmicos, pomadas, lociones, cremas, geles, gotas, supositorios, pulverizadores, líquidos y polvos. Pueden ser necesarios o deseables vehículos, bases oleosas, en polvo o acuosas, espesantes farmacéuticos convencionales y similares.

Las composiciones de la presente invención pueden comprender un “vehículo farmacéuticamente aceptable” o “excipiente”. Dicho vehículo o excipiente es un disolvente, agente de suspensión o cualquier otro vehículo farmacológicamente inerte farmacéuticamente aceptable para el suministro de uno o más de los compuestos de la presente invención a un animal. El excipiente puede ser líquido o sólido y se selecciona, teniendo en cuenta el modo de administración planificado, para proporcionar el volumen o consistencia deseados, cuando se combina con el compuesto de la presente invención y los otros componentes de una composición farmacéutica dada. Los vehículos farmacéuticos típicos incluyen, pero sin limitación, agentes aglutinantes (por ejemplo almidón de maíz pregelatinizado, polivinilpirrolidona o hidroxipropilmetilcelulosa); agentes de relleno (por ejemplo, lactosa y otros azúcares, celulosa microcristalina, pectina, gelatina, sulfato de calcio, etilcelulosa, poliacrilatos

o hidrogenofosfato de calcio); lubricantes (por ejemplo, estearato de magnesio, talco, sílice, dióxido de silicio coloidal, ácido esteárico, estearatos metálicos, aceites vegetales hidrogenados, almidón de maíz, polietilenglicoles, benzoato de sodio, acetato de sodio); disgregantes (por ejemplo, almidón, glicolato sódico de almidón); y agentes humectantes (por ejemplo, lauril sulfato sódico).

Los excipientes farmacéuticamente aceptables adecuados incluyen, pero sin limitación, agua, soluciones salinas, alcohol, polietilenglicoles, gelatina, lactosa, amilosa, estearato de magnesio, talco, ácido silícico, parafina viscosa, hidroximetilcelulosa, polivinilpirrolidona y similares.

Las composiciones farmacéuticas de la presente invención incluyen, pero sin limitación, soluciones, emulsiones y formulaciones que contienen liposomas. Estas composiciones se pueden generar a partir de una diversidad de componentes que incluyen, pero sin limitación, líquidos preformados, sólidos autoemulsionantes y semisólidos autoemulsionantes.

Las emulsiones son sistemas típicamente heterogéneos de un líquido disperso en otro en forma de pequeñas gotas que normalmente exceden 0,1 µm en diámetro (Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger y Banker (Ed.), 1988, Marcel Dekker, Inc., Nueva York, N. Y., volumen 1, pág. 199; Rosoff, en Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger y Banker (Ed.), 1988, Marcel Dekker, Inc., Nueva York. N. Y., Volumen 1, pág. 245; Block in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger y Banker (Ed.), 1988, Marcel Dekker, Inc., Nueva York, N. Y., volumen 2, pág. 335; Higuchi y col., en Remington’s Pharmaceutical Sciences. Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1985, pág. 301). A menudo las emulsiones son sistemas bifásicos comprendidos de dos fases líquidas inmiscibles mezcladas íntimamente y dispersadas entre ellas. En general, las emulsiones pueden ser de la diversidad agua en aceite (a/o) o de la de aceite en agua (o/a). Cuando una fase acuosa está dividida finamente en y dispersada como pequeñas gotas mínimas en una fase oleosa a granel, la composición resultante se denomina emulsión agua en aceite (a/o). Como alternativa, cuando una fase oleosa se divide finamente en y se dispersa como pequeñas gotas mínimas en una fase acuosa a granel la composición resultante se denomina una emulsión aceite en agua (o/a). Las emulsiones pueden contener componentes adicionales además de las fases dispersadas y el fármaco activo que puede estar presente como una solución en la fase acuosa, fase oleosa o por si mismo como una fase separada. Los excipientes farmacéuticos tales como emulsionantes, estabilizantes, tintes y antioxidantes también pueden estar presentes en emulsiones según se necesite. Las emulsiones farmacéuticas también pueden ser emulsiones múltiples que están comprendidas de más de dos fases tales como, por ejemplo, en el caso de emulsiones aceite en agua en aceite (o/a/o) y agua en aceite en agua (a/o/a). A menudo dichas formulaciones complejas proporcionan determinadas ventajas que las emulsiones binarias simples no. Las emulsiones múltiples en las que las pequeñas gotas de aceite individuales de una emulsión o/a encierran gotas muy pequeñas de agua constituyen una emulsión a/o/a. De la misma manera un sistema de gotas pequeñas de aceite encerradas en glóbulos de agua estabilizados en un continuo oleoso proporciona una emulsión o/a/o.

Como se usa en la presente invención, el término “liposoma” significa una vesícula compuesta de lípidos anfifílicos organizados en una bicapa o bicapas esféricas. Los liposomas son vesículas unilamerales o multilamelares que tienen una membrana formada a partir de un material lipófilo y un interior acuoso. La parte acuosa contiene la composición a suministrar. Los liposomas catiónicos poseen la ventaja de ser capaces de fusionarse con la pared celular. Los liposomas no catiónicos, aunque no sean capaces de fusionarse tan eficazmente con la pared celular, los captan macrófagos in vivo. Un tipo principal de composición liposomal incluye fosfolípidos distintos que la fosfatidilcolina derivada de manera natural. Las composiciones de liposomas neutros, por ejemplo, pueden formarse a partir de dimiristoilfosfatidilcolina (DMPC) o dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC). Las composiciones de liposomas aniónicos generalmente se forman a partir de dimiristoilfosfatidilglicerol, mientras que los liposomas fusogénicos aniónicos se forman principalmente a partir de dioleoilfosfatidiletanolamina (DOPE). Otro tipo de composición liposomal se forma a partir de fosfatidilcolina (PC) tal como, por ejemplo, PC de soja y PC de huevo. Otro tipo se forma a partir de mezclas de fosfolípidos y/o fosfatidilcolina y/o colesterol.

Las composiciones farmacéuticas de la presente invención, que pueden presentarse convenientemente en forma de dosificación unitaria, se pueden preparar de acuerdo con técnicas convencionales bien conocidas en la industria farmacéutica. Dichas técnicas incluyen la etapa de poner en asociación los principios activos con el vehículo o vehículos o excipiente o excipientes farmacéuticos. En general, las formulaciones se preparan poniendo en asociación de manera uniforme e íntima los principios activos con vehículos líquidos o vehículos sólidos finamente divididos o ambos, y después, si es necesario, dando forma al producto.

Las composiciones de la presente invención se pueden formular en cualquiera de muchas formas de dosificación posibles tales como, pero sin limitación, comprimidos, cápsulas, jarabes líquidos, geles blandos, supositorios y enemas. Las composiciones de la presente invención también pueden estar formuladas como suspensiones en medio acuoso, no acuoso

o mixto. Las suspensiones acuosas pueden contener adicionalmente sustancias que aumentan la viscosidad de la suspensión incluyendo, por ejemplo, carboximetilcelulosa sódica, sorbitol

y/o dextrano. La suspensión también puede contener estabilizantes.

A pesar de que la cantidad eficaz de la composición de acuerdo con la presente invención se puede variar dependiendo de diversos factores que incluyen el sujeto a administrar, gravedad del cáncer a tratar, etc, generalmente en un hombre adulto (en base a un peso corporal de 60 kg), la dosificación puede estar en el intervalo de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 2 mg/kg de peso corporal por día por administración oral de aproximadamente 0,2 a aproximadamente 1 mg/kg de peso corporal por día por administración intravenosa y en el intervalo de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 0,5 mg/kg de peso corporal, por día, para inyecciones intramusculares.

La composición de la presente invención puede incluir otros componentes medicinales que tienen actividad inmunoadyuvante o actividad anticancerosa o se pueden administrar en combinación con otro inmunoadyuvante o agente anticanceroso. Como el inmunoadyuvante que puede incluir en o combinar con la composición de acuerdo con la presente invención, se puede mencionar lo siguiente: anticuerpos monoclonales, inmunoagitadores, inmonuglobulinas

o citoquinas humanas, tales como interferones o interleucinas o proteínas específicas de azúcar, tales como lecitinas. Como el agente anticáncer que se puede usar para este fin, se puede mencionar lo siguiente: agentes anticancerosos sintéticos, por ejemplo, agentes alquilantes tales como clorambucil, melfalan, ciclofosfamida, compuestos de amina de nitrosourea tales como manomustina, etilendiaminas tales como uredepa; agentes antimetabólicos, por ejemplo, antagonistas de ácido fólico tales como metrotrexato, aminofterina, antagonistas de purina tales como mercaptopurina, antagonistas de pirimidina tales como proxuridina, 6-azauridina, antagonistas basados en azúcares tales como mitobronitol o cisplatina, picivanil, 5-fluorouracilo(5-FU), antibióticos anticancerosos, por ejemplo, actinomicina, THP-adriamicina, mitomicina, antagonistas de hormonas tales como tamoxifeno y componentes vegetales alcaloides tales como demecolcina. Adicionalmente, la composición de la presente invención puede comprender más de un derivado de 1nitroacridina.

EJEMPLOS

Síntesis de Compuestos

1-Nitro-9-Hidroxietilaminoacridina (comparativo)

Este compuesto se sintetiza generalmente usando los procedimientos descritos en el documento EP 38579. Específicamente, se añadieron 2 g de clorhidrato de 2-amino-etanol a 6,4 g de 1-nitro-9-fenoxiacridina disuelta en 20 g de fenol recién destilado. La mezcla se calentó durante 40 minutos a una temperatura de 80ºC y después se enfrió y se diluyó con éter. Después, se vertió en un éter seco que se acidificó con una solución etérea de cloruro de hidrógeno. El precipitado de color naranja de clorhidrato de 1-nitro-9-(2-hidroxietilamino)acridina obtenido de esta manera se filtró y cristalizó en etanol seco. El punto de fusión de los compuestos obtenidos fue de 170ºC, con descomposición. Rendimiento del 91%. Análisis elemental para la fórmula: C15H14N3O3Cl: calculado: 56,47% C, 4,42% H, 13,17% N; determinado: 56,44% C, 4,40% H, 13,03% N 9-(2'-hidroxietilamino)-4-metil-1-nitroacridina

Se disolvió 4-metil-1-nitro-9-fenoxiacridina (0,33 g) en fenol (10 g), se añadió clorhidrato de etanolamina (0,2 g) y la mezcla se calentó a 80ºC durante 0,5 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con éter, se vertió lentamente en éter seco (200 ml) y se acidificó con una solución etérea de cloruro de hidrógeno. El precipitado resultante se retiró por filtración, se lavó con éter y cristalizó en etanol absoluto, dando monoclorhidrato de 9(2'-hidroxietilamino)-4-metil-1-nitroacridina en forma de cristales de color naranja (0,27 g, 84%),

p.f. 238ºC (descomp.) RMN 1H (d6DMSO): δ 2,45 (s, 3H, CH3), 3,48(c, 2H, H-2'), 3,65 (t, 2H, H1'), 4,3 (t, 1H, OH), 7,1 (t, 1H, H-7), 7,24 (d, 1H, J = 7,8 Hz, H-2), 7,35 (d, 1H, J = 7,8 Hz, H-3), 7,5 (t, 1H, H-6), 7,65 (d, 1H, J = 8 Hz, H-5), 7,75 (d, 1H, J = 8,0 Hz, H-8). 9-(2'-hidroxietilamino)-7-metoxi-4-metil-1-nitroacridina

Se disolvió 7-metoxi-4-metil-1-nitro-9-fenoxiacridina (0,72 g) en fenol (20 g). Se añadió clorhidrato de etanolamina (0,2 g) y la mezcla se calentó a 80ºC durante 1,5 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con éter seco, se vertió lentamente en éter seco (300 ml) y se acidificó con una solución etérea de cloruro de hidrógeno. El precipitado resultante se retiró por filtración, se lavó dos veces con éter y cristalizó en metanol absoluto, dando monoclorhidrato de 9-(2'-hidroxietilamino)-7-metoxi-4-metil-1-nitroacridina en forma de cristales de color naranja (0,6 g, 86%), p.f. 200ºC (descomp.) RMN 1H (d6DMSO): δ 2,60 (s, 3H, CH3), 3,50 (s, 4H, H-1', H-2'), 4,00 (s, 3H, OCH3), 7,66 (dd, 1H, J1 = 9,3, Hz, J2 = 2,5 Hz, H-6), 7,85 (d, 1H, J = 8,2 Hz, H-3), 8,02 (s, 1H, H-8), 8,15 (d, 1H, J = 7,8 Hz, H-2), 8,22 (d, 1H, J = 7,8 Hz, H-5). 9-(2'-Hidroxietilamino)-4-metoxi-1-nitroacridina

Se disolvió 4-metoxi-1-nitro-9-fenoxiacridina (0,346 g) en fenol (30 g), se añadió clorhidrato de etanolamina (0,12 g) y la mezcla se calentó a 80ºC durante 1,5 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con éter seco (20 ml), se vertió lentamente en éter seco (200 ml) y se acidificó con una solución etérea de cloruro de hidrógeno. El precipitado resultante se retiró por filtración, se lavó varias veces con éter y cristalizó en etanol absoluto-éter (5: 1), dando monoclorhidrato de 9-(2'-hidroxietilamino)-4metoxi-1-nitroacridina en forma de cristales de color amarillo (0,27 g, rendimiento del 77%), p.f. 210 -212ºC (descomp.) RMN 1H (para una base libre) (d6DMSO): δ 10,18 (s, 1H, NH), 7,78 (d,

1H, J = 7,8 Hz, H-8), 7,67 (d, 1H, J = 8,3 Hz, H-5), 7,47 (t, 1H, J = 7,8 Hz, H-6), 7,36 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,10 (m, 2 H, H-3, H-7), 4,31 (t, 1 H, J = 5,4 Hz, OH), 3,70 (t, 2 H, J = 6,4 Hz, H-1'), 3,64 (c, 2 H, J = 6,3 Hz, H-2'). 9-Cloro-7-metoxi-4-metil-1-nitroacridina

Se calentó ácido N-(2'-metil-5'-nitrofenil)-5-metoxiantranílico (7,2 g) en oxicloruro de fósforo (60 ml) a 120ºC durante 1 hora. El exceso de oxicloruro de fósforo se retiró por destilación a presión reducida y el residuo se vertió lentamente en una mezcla agitada de cloroformo, hidróxido de amonio concentrado y hielo. La fase clorofórmica separada se lavó con agua y se secó usando sulfato de magnesio. El cloroformo se evapora a sequedad y el residuo se cristalizó en benceno, dando 9-cloro-7-metoxi-4-metil-1-nitroacridina (6,1 g, rendimiento del 68%), p.f. 227-228ºC. RMN 1H (d6DMSO): δ 8,23 (d, 1H, J = 9,3 Hz), 8,13 (d, 1H, J = 7,3 Hz), 7,79 (d a, 1 H, J = 8,3 Hz), 7,71 (dd, 1H, J1 = 9,3 Hz, J2 = 2,9 Hz), 7,58 (d, 1H, J = 2,9 Hz), 4,02 (s, 3 H), 2,85 (s, 3 H). ácido N-(2'-metil-5'-nitrofenil)-5-metoxiantranílico

Se agitaron sal potásica del ácido 2-bromo-5-metoxibenzoico (23 g) y 2-metil-5nitroanilina (40 g) y se calentaron a 110ºC en presencia de 50 mg de cobre catalítico durante 50 minutos. Después, la mezcla de reacción se vertió sobre una solución al 5% de hidróxido potásico en agua (600 ml) y se enfrió. El precipitado formado se retiró por filtración, se lavó con agua y las soluciones recogidas se acidificaron con ácido clorhídrico a pH 5. El sólido formado se retiró por filtración y cristalizó en metanol -acetona (2:1), dando ácido N-(2'-metil-5'nitrofenil)-5-metoxiantranílico (11,2 g, rendimiento del 56%), p.f. 219-221ºC. RMN 1H (d6DMSO): δ 9,20 (s a, 1H), 7,88 (d, 1H, J = 1,9 Hz), 7,65 (dd, 1H, J1 = 7,8 Hz, J2 = 1,9 Hz), 7,44 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 7,43 (d, 1H, J = 2,9 Hz), 7,26 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,19 (dd, 1H, J 1 = 8,8 Hz, J2 = 2,9 Hz), 3,68 (s. 3 H), 2,27 (s, 3 H). 9-(3'-hidroxipropilamino)-4-metil-1-nitroacridina

Se disolvió 4-metil-1-nitro-9-fenoxiacridina (0,66 g) en fenol (15 g), se añadió clorhidrato de 3-aminopropanol y la mezcla se calentó a 80ºC durante 1,5 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con éter seco (50 ml) y se acidificó con una solución en etanol de cloruro de hidrógeno. El precipitado resultante se retiró por filtración, se lavó varias veces con éter y cristalizó en etanol absoluto, dando clorhidrato de 9-(3'hidroxipropilamino)-4-metil-1-nitroacridina en forma de cristales de color amarillo (0,54 g, rendimiento del 76%), p.f. 205-206ºC, anál. C17H18N3O3Cl (C, H, N). RMN 1H (D2O): δ 1,65 (m, 2H, H-2'), 2,40 (s, 3H,CH3), 3,20 (c, 2H, H-3'), 3,40 (m, 2H, H-1'), 7,22 (t, 1H, H-7), 7,48 (d, 1H, J = 7,8 Hz, H-3), 7,48 (d, 1H, J = 7,8 Hz, H-3), 7,54 (d, 1H, J = 8,3 Hz.H-6), 7,60 (t, 1H, H-5), 7,74 (t, 1H, H-8).

9-(2'-acetoxietilamino)-4-metil-1-nitroacridina

Se añadió cloruro de tionilo (8 ml) a ácido acético agitado y enfriado a -20ºC (30 ml). A la misma temperatura, se añadió en porciones clorhidrato de 9-(2-hidroxietilamino)-4-metil-1nitroacridina (0,6 g). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas. Después, el disolvente se retiró por destilación a presión reducida y el residuo se lavó varias veces con dicarbonato sódico acuoso al 10% y agua, se secó al vacío y cristalizó en una solución de metanol seco-éter, dando 9-(2'-acetoxietilamino)-4-metil-1-nitroacridina (rendimiento del 72%), p.f. 210-212ºC, anál. C18H18N3O4Cl (C, H, N). RMN 1H (D2O): δ 2,45 (s, 3H, CH3'), 2,6 (s, 3H CH3), 3,25 (t, 2H, H-1'), 3,65 (t, 2H, H-2'), 7,35 (t, 1H, H-7), 7,58 (d, 1H, J = 8,8 Hz, H-2), 7,66 (d, 1H, J = 8,3 Hz, H-3), 7,7 (t, 1H, H-6), 7,84 (d, 1H, J = 7,8 Hz, H-5), 7,9 (d, 1H, J = 8,1 Hz, H-8). 9-(2'-propionoxietilamino)-4-metil-1-nitoacridina

Se añadió cloruro de tionilo (10 ml) a ácido propiónico agitado y enfriado a -20ºC (50 ml), a la misma temperatura se añadió en porciones 9-(2-hidroxietilamino)-4-metil-1nitroacridina (0,55 g) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas. La mezcla de reacción se retiró por destilación a presión reducida, se lavó varias veces con dicarbonato sódico acuoso al 10% y agua, se secó al vacío y cristalizó en una solución en metanol absoluto-etanol de cloruro de hidrógeno, dando clorhidrato de 9-(2-propionoxietilamino)-4-metil1-nitroacridina con rendimiento del 68%, p.f. 228-230ºC, anál. C19H19N3O4Cl (C, H, N). RMN 1H (d6DMSO): δ 1,20 (t, 3H, H-3"), 2,0 (c, 2H, H-2"), 2,8 (s, 3H,CH3), 3,9 (t, 2H, H-1), 4,0 (t, 2H, H2'), 7,4 (t, 1H, H-7), 7,5 (d, 1H, J = 7,8 Hz, H-3), 7,6 (d, 1H, J = 8,3 Hz, H-6), 8,0 (t, 1H, H-5), 8,4 (m,1H, H-8). 9-(3'-acetoxipropilamino)-4-metil-1-nitroacridina

Se añadió cloruro de tionilo (20 ml) a ácido acético agitado y enfriado a -20ºC (35 ml) y a la misma temperatura se añadió en porciones 9-(3'-hidroxipropilamino)-4-metil-1-nitroacridina (0,5 g). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas. El disolvente se retiró por destilación a presión reducida y el residuo se lavó varias veces con dicarbonato sódico acuoso al 10% y agua, se secó al vacío y cristalizó en etanol absoluto, dando 9-(3'acetoxipropilamino)-4-metil-1-nitroacridina con un rendimiento del 67%, p.f. 150-152ºC, anál. C19H19N3O4 (C, H, N). RMN 1H (d6DMSO): δ 1,20 (t, 3H, H-3"), 1,75 (t, 2H, H-2'), 2,4 (s, 3H,CH3),4,0 (t, 2H, H-1'),7,1 (t, 1H, H-7),7,2 (d, 1H, J = 7,8 Hz, H-2), 7,4 (d, 1H, J = 7,8 Hz, H3), 7,48 (t, 1H, H-6), 7,65 (d, 1H, J = 8,3 Hz, H-5), 7,7 (d, 1H, J = 8,3 Hz, H-8). 9-(3'-propionoxipropilamino)-4-metil-1-nitroacridina

Se añadió cloruro de tionilo (25 ml) a ácido propiónico agitado y enfriado a -20ºC (40 ml) y a la misma temperatura se añadió en porciones clorhidrato de 9-(3-hidroxipropilamino)-4metil-1-nitroacridina (0,6 g). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas. El disolvente se retiró por destilación a presión reducida y el residuo (aceite) se lavó varias veces con bicarbonato sódico acuoso al 10% y agua, se secó al vacío y cristalizó en metanol seco acidificado con solución en etanol de cloruro de hidrógeno, dando clorhidrato de 9-(3'-propionoxipropilamino)-4-metil-1-nitroacridina (rendimiento del 78%), p.f. 161-163ºC, anál. C20H22N3O1Cl (C, H, N). RMN 1H (d6DMSO): δ 1,0 (t, 3H, H-3"), 2,35 (c, 2H, H-2"), 2,5 (s, 3H,CH3), 4,30 (t, 2H, H-1'), 7,15 (t, 1H, H-7), 7,26 (d, 1H, J = 7,8 Hz, H-2), 7,38 (d, 1H, J = 7,8 Hz, H-3), 7,5 (t, 1H, H-6), 7,62 (d, 1H, J = 8,0 Hz, H-5), 7,8 (d, 1H, J = 8,2 Hz, H-8). 9-(3'-hidroxipropilamino)-4-metoxi-1-nitroacridina

Se disolvió 9-cloro-4-metoxi-1-nitro-9-acridina (0,4 g) en fenol (20 g), se añadió 3aminopropanol (1,5 g) y la mezcla se calentó a 80ºC durante 1 hora. La mezcla de reacción se enfrió, se diluyó con éter seco y se acidificó con una solución en etanol de cloruro de hidrógeno. El precipitado resultante se retiró por filtración, se lavó con éter seco y cristalizó en metanol absoluto, dando cristales de clorhidrato de 9-(3-hidroxipropilamino)-4-metil-1nitroacridina (rendimiento del 74%), p.f. 180-183ºC, anál. C17H18N3O4Cl (C, H, N). RMN 1H (D2O): 81,68 (s, 2H, H-2'), 3,40 (t, 2H, H-3'), 3,50 (c, 2H, H-1'), 4,0 (s, 3H, OCH3), 7,0 (d, 1H, J = 8,8 Hz, H-3), 7,27 (t, 1H, H-7), 7,49 (d, 1H, J = 8,3 Hz, H-5), 7,65 (t, 1H, H-6), 7,77 (d, 1H, J = 8,3 Hz, H-8), 7,90 (d, 1H, J = 8,3 Hz, H-2). 9-(4'-hidroxibutilamino)-4-metoxi-1-nitroacridina

Se disolvió 4-metoxi-1-nitro-9-fenoxiacridina (0,34 g) en 20 g de fenol, se añadió clorhidrato de 4-hidroxiaminobutanol (0,15 g) y la mezcla se calentó a 110ºC durante 1,5 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con éter seco y se acidificó con una solución en etanol de cloruro de hidrógeno. El precipitado se filtró, se lavó con éter seco y cristalizó en etanol absoluto, dando clorhidrato de 9-(4'-hidroxibutilamino)-4-metoxi-1nitroacridina (rendimiento del 69%), p.f. 149-152ºC, anál. C18H20N3O4Cl (C, H, N). RMN 1H (D2O): δ 1,25 (t, 2H, H-2'), 3,3 (c, 2H, H-4'), 3,4 (t, 2H, H-1'), 4,0 (s, 3H,OCH3), 7,1 (d, 1H, J = 8,8 Hz, H-3), 7,5 (d, 1H, J = 8,8 Hz, H-5), 7,6 (t, 1H, H-6), 7,7 (d, 1H, J = 7,3 Hz, H-8), 7,9 (m, 1H, H-2). 9-(2'-acetoxietilamino)-7-metoxi-4-metil-1-nitroacridina

Se añadió cloruro de tionilo (5 ml) a ácido acético agitado y enfriado a -20ºC (20 ml), a la misma temperatura se añadió en porciones clorhidrato de 9-(2'-hidroxietilamino)-7-metoxi-4metil-1-nitroacridina (0,3 g) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. El disolvente se retiró por destilación a presión reducida, el residuo se lavó varias veces con bicarbonato sódico acuoso al 10% y agua, se secó al vacío y cristalizó en benceno, dando 9(2'-acetoxietilamino)-7-metoxi-4-metil-1-nitroacridina (rendimiento del 82%), p.f. 145-148ºC, anál. C19H19N3O5Cl (C, H, N). RMN 1H (d6DMSO): δ 1,6 (t, 3H, H-2'), 2,6 (s, 3H,CH3), 3,4 (s, 4H, H-2', H-1'), 4,0 (s, 3H, CH3), 7,66 (dd, 1H,J1 = 9,3 Hz, J2 = 2,5 Hz, H-6), 7,85 (d, 1H, J = 8,2 Hz, H-3), 8,00 (s, 1H, H-8), 7,7 (t, 1H, H-6), 8,15 (d, 1H, J = 7,8 Hz, H-2), 8,20 (d, 1H, J = 7,8 Hz, H-5).

5 Actividad antitumoral frente a ascitis por adenocarcinoma de Walker 256 en ratas

Los tumores se trasplantan semanalmente en ratas Wistar por inoculación intraperitoneal de 106 células tumorales. En los experimentos, las células del carcinosarcoma 256 de Walker se transplantan el día 0 en ratas Wistar que pesaban 75-100 g por inyección intraperitoneal de 106 células por animal. Cada acridina se administra por vía intraperitoneal los

10 días 3, 4 y 5 después del transplante del tumor. En cada grupo hay cinco ratas a un nivel de dosis farmacológica dado y un grupo de 10 ratas sirvió como control para todos los grupos de ensayo. Los niveles de dosis se separan normalmente por intervalos de dosis de 0,3 log. desde la dosis inactiva hasta la dosis claramente tóxica. Cada acridina se ensaya a cinco dosis diferentes. La actividad del fármaco T/C (%) se expresa como % de aumento en el tiempo de

15 supervivencia medio (en días) de grupos de ensayo (T) respecto al tiempo de supervivencia medio (en días) del control (C ). Normalmente, la actividad antitumoral se presenta sólo en la dosis óptima (D.O. mg/kg/día) de los compuestos ensayados, a la que se observa la actividad antitumoral más alta. Los resultados se muestran en la Tabla 1 a continuación

20

Compuesto

Dosis óptima [mg/kg] Actividad antitumoral frente a Walker256 (Supervivencia) Ensayo/Control [%]

9-(2’-hidroxietilamino)-4-metil-1nitroacridina

4 217

9-(2’-hidroxietilamino)-7-metoxi-4-metil-1nitroacridina

16 233

9-(3’-hidroxipropilamino)-4-metil-1nitroacridina

2 233

9-(2’-acetoxietilamino)-4-metil-1nitroacridina

8 233

9-(2’-propionoxietilamino)-4-metil-1nitroacridina

8 214

(continuación)

Compuesto

Dosis óptima [mg/kg] Actividad antitumoral frente a Walker256 (Supervivencia) Ensayo/Control [%]

9-(3’-acetoxipropilamino)-4-metil-1nitroacridina

8 157

9-(3’-propionoxipropilamino)-4-metil-1nitroacridina

8 257

9-(2’-hidroxietilamino)-4-metoxi-1nitroacridina

16 200

9-(3’-hidroxipropilamino)-4-metoxi-1nitroacridina

2 157

9-(4’-hidroxibutilamino)-4-metoxi-1nitroacridina

32 200

9-(2’-acetoxietilamino)-7-metoxi-4-metil1-nitroacridina

25 133

Actividad antitumoral de 9-(2’-hidroxietilamino)-4-metil-1-nitroacridina en Tumores Dunning G Inducidos en Ratas Copenhagen

5 Se obtienen ratas Copenhagen de cuatro a cinco semanas de edad de Harlan Sprague Dawley, Indianapolis, IN, y se permite que se aclimaten durante una semana, se alimentan con comida de rata Purina 5001. Al final de una semana, se aleatoriza a las ratas a grupos experimentales diferentes. Los pesos corporales de los animales se miden dos veces a la semana.

10 Se inyectan por vía subcutánea células Dunning G vivas (un millón/rata) en todos los animales para inducir tumores. Las células Dunning G son células de cáncer de próstata que producen tumores no metastáticos que proceden de tumores espontáneos de ratas Copenhagen. Las células Dunning G y MAT-LyLu (Yedavelli y col., 1999, Int. J. Mol. Med. 4: 243-248) se cultivan en RPMI 1640 que contiene suero bovino fetal al 10% (SBF)

15 complementado con penicilina (50 IU/ml), estreptomicina (50 µg/ml), L-glutamina 2 mM y dexametasona 2,5 mM. Las células se alimentan dos días a la semana y se tratan con tripsina, con tripsina-EDTA al 0,05% al 70-80 por ciento de confluencia celular. Se inyecta a los animales por vía intraperitoneal dos veces a la semana con 9-(2’

hidroxietilamino)-4-metil-1-nitroacridina (0,8 ó 1,0 mg/kg peso corporal) 1-nitro-9hidroxietilaminoacridina (0,6 mg/kg peso corporal) dos veces a la semana durante tres semanas. Las inyecciones comienzan el día 25 para animales inyectados con células Dunning G cuando los tumores son palpables (0,5 cm). Todos los animales se alojan en jaulas colgantes con tres/cuatro animales por jaula y tienen acceso a voluntad a alimento y a beber agua y se mantienen en un ciclo diurno de doce horas. Todas las inyecciones y medidas tumorales se realizan bajo anestesia ligera (inhalación de metofano). Las medidas de criterios de valoración experimentales incluyen peso corporal, incidencia tumoral. El experimento se termina cuando el tamaño del tumor en los animales de control es de 3 cm de diámetro. El sacrificio de los animales se hace por asfixia con dióxido de carbono.

La solución madre de 9-(2’-hidroxietilamino)-4-metil-1-nitroacridina se prepara en dimetilsulfóxido a 0,16 mg/ml. Todos los fármacos para inyectar a animales se diluyen en PBS de modo que el volumen total que se inyecta está entre de 0,1 a 0,2 ml. La solución madre de 1-nitro-9-hidroxietilaminoacridina se prepara en dimetilsulfóxido a 0,12 mg/ ml.

Los resultados obtenidos se muestran en la Figura 1. Parece que la reducción tumoral es evidente dos semanas después de la retirada del tratamiento. El tratamiento de 1-nitro-9hidroxietilaminoacridina da como resultado una reducción del 50% de tumores; el tratamiento con 0,8 mg/kg de 9-(2’-hidroxietilamino)-4-metil-1-nitroacridina da como resultado una reducción del 65% de tumores y el tratamiento con 1,0 mg/kg de 9-(2’-hidroxietilamino)-4-metil1-nitroacridina da como resultado una reducción del 75% de tumores. Actividad antitumoral de 9-(2’-hidroxietilamino)-4-metil-1-nitroacridina en Tumores en Ratones Desnudos

Se inducen en ratones de seis semanas de edad que se permiten aclimatar durante dos semanas los tumores Balb c/nu/un por inyección subcutánea de 2 x 106 células TSU por ratón. Las células TSU son células de cáncer de próstata humano (Lizumi y col., 1987, J. Urol. 137: 1304-1306). Las células TSU se cultivan en medio RPMI-1640 complementado con suero bovino fetal al 10% y los antibióticos penicilina (50 IU/ml), estreptomicina (50 µg/ml) y Lglutamina 2 mM. Se suministró a las células medio fresco dos veces a la semana y se tratan con tripsina usando tripsina-EDTA al 0,05%. Las células usadas para la inyección están siempre en la fase logarítmica de su matraz confluente de crecimiento (70-80%) y se comprueba la viabilidad celular por ensayo de exclusión por azul tripan antes de la inyección. Sólo se usan las células >95% confluentes.

Los tumores son palpables en los ratones el día 7 cuando se inicia el tratamiento con los dos fármacos, mitoxantrona (0,6 mg/kg) y 9-(2’-hidroxietilamino)-4-metil-1-nitroacridina (0,8 mg/kg). El tratamiento se continua dos veces por semana durante tres semanas. Se anestesia ligeramente a los ratones y se miden y se pesan los tumores semanalmente. Las concentraciones madre del fármaco son 0,12 mg/ml en PBS para mitoxantrona y 0,16 mg/ml en dimetilsulfóxido (DMSO) para 9-(2’-hidroxietilamino)-4-metil-1-nitroacridina. Se alojan los ratones a 5 animales/jaula. Como es evidente para la Figura 2, el tratamiento durante tres

5 semanas con 9-(2’-hidroxietilamino)-4-metil-1-nitroacridina ocasiona una reducción de los tumores hasta la ausencia total de tumores en cinco semanas y se mantiene en vigor hasta 11 semanas, el periodo de observación máximo. Durante ese periodo, el grupo tratado con mitoxantrona mostró una reducción hasta las tres semanas y los tumores empezaron creciendo ocho semanas después de la retirada de la terapia.

10 La invención descrita y reivindicada en el presente documento no debe limitarse en ámbito por las realizaciones específicas desveladas en el presente documento, puesto que estas realizaciones están diseñadas como ilustraciones de varios aspectos de la invención. Cualquier realización equivalente pretende estar dentro del ámbito de la presente invención. De hecho, diversas modificaciones de la invención además de las mostradas y descritas en el

15 presente documento se harán evidentes para los expertos en la materia a partir de la descripción anterior. Dichas modificaciones pretenden estar dentro del ámbito de las reivindicaciones adjuntas. Se citan diversas referencias en el presente documento, las divulgaciones de las cuales se incorporan por referencia en su totalidad.

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Claims (7)

1. REIVINDICACIONES

   1. Un compuesto de 1-nitro-9-alquilaminoacridina que tiene la estructura I

   imagen1

   5 en la que cuando R1 es H, R2 es H o CO(CH2)nCH3, en la que n = 1-8, R3 es (CH2)nCH3, en la que n = 01, o O(CH2)nCH3, en la que n = 0-1 y R4 es H, (CH2)nCH3, o O(CH2)nCH3, en la que n = 0-1, y n' es 2-4; o cuando R1 es O(CH2)nCH3, en la que n = 0-1, R2 es CO(CH2)nCH3, en la que n = 1-8, R3 es

   10 (CH2)nCH3, en la que n = 0-1, o O(CH2)nCH3, en la que n = 0-1, y R4 es H, (CH2)nCH3, o O(CH2)nCH3, en la que n = 0=1, y n' es 2-4;

   o una sal de adición de ácidos no tóxica del mismo.
2. 2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 que se selecciona entre el grupo que

   15 consiste en 9-(2'-hidroxietilamino)-4-metil-1-nitroacridina, 9-(3'-hidroxipropilamino)-4-metil-1nitroacridina, 9-(2'-propionoxietilamino)-4-metil-1-nitroacridina, 9-(3'-propionoxipropilamino)-4metil-1-nitroacridina, 9-(2'-hidroxietilamino)-4-metoxi-1-nitroacridina, 9-(3'-hidroxipropilamino)-4metoxi-1-nitroacridina y 9-(4'-hidroxibutilamino)-4-metoxi-1-nitroacridina, y sales de adición de ácidos no tóxicas del mismo.

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3. 3. Un compuesto seleccionado entre el grupo que consiste en 9-(2'-hidroxietilamino)-7metoxi-4-metil-1-nitroacridina, 9-(2'-acetoxietilamino)-4-metil-1-nitroacridina, 9-(3'acetoxipropilamino)-4-metil-1-nitroacridina y 9-(2'-acetoxietilamino)-7-metoxi-4-metil-1nitroacridina, y sales de adición de ácidos no tóxicas del mismo.

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4. 4.

   Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

5. 5.

   Una composición farmacéutica de la reivindicación 4, que comprende adicionalmente una segunda sustancia inhibidora de tumores.

   5 6. Uso de un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, para la fabricación de un medicamento para inhibir o prevenir el crecimiento tumoral e inhibir o prevenir la infección en un mamífero por un microorganismo seleccionado entre el grupo que consiste en un virus, bacteria, parásito y hongo.

   10 7. Un procedimiento para producir un compuesto de 1-nitro-9-alquilaminoacridina de la reivindicación 1 que comprende (a) hacer reaccionar un compuesto que tiene la fórmula III

   imagen1

   en la que X es Clofenoxi, y en la que cuando R1 es H, R3 es (CH2)nCH3, en la que n = 0-1 u O(CH2)nCH3, en la que

   15 n = 0-1 y R4 es H, (CH2)nCH3, o O(CH2)nCH3, en la que n = 0-1, o en la que cuando R1 es O(CH2)nCH3, en la que n = 0-1, R3 es (CH2)nCH3, en la que n = 0-1, o O(CH2)nCH3, en la que n = 0-1, y R4 es H, (CH2)nCH3, o O(CH2)nCH3, en la que n = 0-1, con un compuesto de hidroxialquilamino y

   20 (b) aislar dicho compuesto de 1-nitro-9-alquilaminoacridina
6. 8. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 7 que comprende adicionalmente hacer reaccionar el compuesto de 1-nitro-9-alquilaminoacridina con un agente de acilación.

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7. 9. Un compuesto que tiene la fórmula III

   imagen1

   en la que cuando X es Cl, R1 es O(CH2)nCH3, en la que n = 0-1, R3 es (CH2)nCH3, en la que n = 1 y R4 es H, (CH2)nCH3, en la que n = 0-1 u O(CH2)nCH3, en la que n = 0-1 y en la que cuando X es fenoxi, R1 es H, O(CH2)nCH3, en la que n = 0-1, R3 es (CH2)nCH3, en la que n = 0-1 y R4 es H, (CH2)nCH3, en la que n = 0-1 u O(CH2)nCH3, en la que n = 0-1.