ES2347434T3 - Analogos de prostaglandina como agonistas del receptor ep4. - Google Patents

Analogos de prostaglandina como agonistas del receptor ep4. Download PDF

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ES2347434T3 ES04723484T ES04723484T ES2347434T3 ES 2347434 T3 ES2347434 T3 ES 2347434T3 ES 04723484 T ES04723484 T ES 04723484T ES 04723484 T ES04723484 T ES 04723484T ES 2347434 T3 ES2347434 T3 ES 2347434T3
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Abstract

Un compuesto que tiene la fórmula estructural I: **(Ver fórmula)** o sus sales farmacéuticamente aceptables, enantiómeros, diastereómeros, o sus mezclas, en la que: Q es (CH2)m, (CH2)m(arilo C6-10), (CH2)m(heterociclilo C5-10), (CH2)m(heterocicloalquilo C3-10), (CH2)m(cicloalquilo C3-8), C(halógeno)2, estando dicho cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo o heterociclilo no sustituido o sustituido con 1-3 grupos de Ra; X e Y representan independientemente CH2, O, NR9 o S, con la condición de que X e Y no son O, NR9 o S al mismo tiempo; U representa H, alquilo C1-3 o no está presente cuando W es =O; W representa OH u =O, con la condición de que U no esté presente cuando W es =O; R1 representa (CH2)phidroxi, (CH2)pCN, (CH2)pCO2R10, (CH2)nSO3R6, -(CH2)pCF2SO2NH2, -(CH2)pSO2NH2, -(CH2)pCONHSO2R2, -(CH2)pSO2NHCOR2, -(CH2)pPO(OH)2, (CH2)pCONHPO2R6, (CH2)pCONHR8, (CH2)p(alcoxi C1-4), -(CH2)pcicloalquilo, (CH2)phidroximetil cetona o (CH2)nheterociclilo, estando dicho heterociclilo no sustituido o sustituido con 1 a 3 grupos de Ra y contiene opcionalmente un grupo hidroxilo ácido; R2 representa independientemente alquilo C1-10, (CH2)m(arilo C6-10), (CH2)m(heterociclilo C5-10), (CH2)m(heterocicloalquilo C3-10), (CH2)m(cicloalquilo C3-8), O-alquilo C1-10, O-arilo C6-10, O-cicloalquilo C3-10, O-heterocicloalquilo C3-10, O-heterocicloalquilo C3-10, con la condición de que cuando R2 es O-alquilo C1-10, O-arilo C6-10, O-cicloalquilo C3-10, O-heterocicloalquilo C3-10, o O-heterocicloalquilo C3-10, R3 y R4 no son halógeno, dicho alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo o heterociclilo no está sustituido o está sustituido con 1-3 grupos de Ra; R3 y R4 representan independientemente halógeno; R6 y R7 representan independientemente hidrógeno, o alquilo C1-4; R8 representa hidrógeno, acilo, o sulfonilo; R9 representa hidrógeno, alquilo C1-6, estando dicho alquilo opcionalmente sustituido con 1-3 halógenos, CN, OH, alcoxi C1-6, aciloxi C1-6, o amino; R10 representa hidrógeno, alquilo C1-10, cicloalquilo C3-10, (CH2)p(arilo C6-10), (CH2)p(heterociclilo C5-10), CR6R7 OC(O)O(cicloalquilo C3-10), o CR6R7OC(O)O(alquilo C1-10); Z representa C≡C, O, S, (C(Rb)2)n, o CH=CH; Rb representa hidrógeno, alquilo C1-6, o halógeno; Ra representa alcoxi C1-6, alquilo C1-6, CF3, nitro, amino, ciano, alquilamino C1-6, halógeno, o Ra representa también para arilos y heterociclilo, S(alquilo C1-6), S(arilo C6-10), S(heterociclilo C5-10), CO2R6, O(arilo C6-10), O(heterociclilo C5-10), CH2O(alquilo C1-6), CH2S(alquilo C1-6), CH2Oarilo, CH2Sarilo; = representa un enlace doble o sencillo; p representa 0-3; n representa 0-4; y m representa 0-8.

Description

Análogos de prostaglandina como agonistas del receptor EP_{4}.
El glaucoma es una enfermedad degenerativa del ojo en la que la presión intraocular es demasiado alta para permitir la función normal del ojo. Como consecuencia pueden aparecer lesiones en la cabeza del nervio óptico que puede producir una pérdida irreversible de la función visual. Si no se trata el glaucoma puede conducir finalmente a la ceguera. La mayoría de los oftalmólogos ahora creen que la hipertensión ocular, es decir, el trastorno de una elevada presión intraocular sin lesiones en la cabeza del nervio óptico o defectos en el campo visual glaucomatosos característicos, representa simplemente la fase más temprana en la aparición del glaucoma.
Muchos de los fármacos que anteriormente se han utilizado para tratar el glaucoma han demostrado ser poco satisfactorios. Los procedimientos actuales para tratar el glaucoma incluyen la utilización de agentes terapéuticos, tales como pilocarpina, inhibidores de la anhidrasa carbónica, beta-bloqueantes, prostaglandinas y similares. Sin embargo, estas terapias a menudo producen efectos locales indeseables. Como puede observarse, existen varias terapias en la actualidad para tratar el glaucoma y la presión intraocular elevada, pero los perfiles de eficacia y efectos secundarios de estos agentes no son ideales. Por tanto, siguen siendo necesarias terapias nuevas y eficaces con pocos o ningún efecto secundario.
Una diversidad de trastornos en seres humanos y otros mamíferos implican o están asociados con una pérdida ósea anómala o excesiva. Estas trastornos incluyen, pero no se limitan a osteoporosis, osteoporosis inducida por glucocorticoides, enfermedad de Paget, recambio óseo anómalamente aumentado, enfermedad periodontal, pérdida de dientes, fracturas óseas, artritis reumatoide, osteolisis periprostética, osteogénesis imperfecta, enfermedad ósea metastásica, hipercalcemia de malignidad, y mieloma múltiple. Uno de estos trastornos más comunes es la osteoporosis, que en sus manifestaciones más frecuentes aparece en mujeres postmenopáusicas. Se sabe que las prostanglandinas, como la serie de PGE_{2}, estimulan la formación de hueso y aumentan la masa ósea en mamíferos, incluyendo el ser humano. Se cree que los cuatro subtipos de receptores diferentes, denominados EP_{1}, EP_{2}, EP_{3} y EP_{4}, están implicados en la mediación en los procesos de modelado y remodelación ósea de los osteoblastos y los osteoclastos. El prinpical receptor de prostaglandinas en el hueso es EP_{4}, que se cree que proporciona su efecto mediante la señalización a través del AMP cíclico. En la presente invención se indica que los agonistas del receptor de subtipo EP_{4} de fórmula I son útiles para estimular la formación de hueso. Los documentos WO 02/24647, WO 02/42268, EP 1114816, WO 01/46140 y WO 01/72268 describen agonistas de EP_{4}. Sin embargo, no describen los compuestos de la presente invención.
Sumario de la invención
Esta invención se refiere a agonistas del subtipo EP_{4} de receptores de prostaglandina E_{2} y a su uso, o a una formulación de éstos, para el tratamiento del glaucoma y de otros trastornos que están relacionados con una elevada presión intraocular en el ojo del paciente. En particular, esta invención se refiere a una serie de derivados de piperidin-2-ona 1,6-disustituidos, 1,3-oxazinan-2-ona 3,4-disustituidos, 1,3-tiazinan-2-ona 3,4-disustiduidos, y morfolin-3-ona 4,5-disustituidos y a su uso para tratar enfermedades oculares y para proporcionar un efecto neuroprotector al ojo de una especie de mamífero, en particular el ser humano. Esta invención se refiere también al uso de los compuestos de esta invención para mediar en procesos de modelado y remodelación ósea de los osteoblastos y los osteoclastos.
Más en concreto, esta invención se refiere a nuevos agonistas de EP_{4} que tienen la fórmula estructural I.
1
o sus sales farmacéuticamente aceptables, enantiómeros, diastereómeros, profármacos o sus mezclas, en la que:
Q es (CH_{2})_{m}, (CH_{2})_{m}(arilo C_{6-10}), (CH_{2})_{m}(heterociclilo C_{5-10}), (CH_{2})_{m}(heterocicloalquilo C_{3-10}), (CH_{2})_{m}(cicloalquilo C_{3-8}), C(halógeno)_{2}, estando dicho cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo o heterociclilo no sustituido o sustituido con 1-3 grupos de R^{a};
X e Y representan independientemente CH_{2}, O, NR^{9} o S, con la condición de que X e Y no son O, NR^{9} o S al mismo tiempo;
U representa H, alquilo C_{1-3} o no está presente cuando W es =O;
W representa OH u =O, con la condición de que U no esté presente cuando W es =O;
R^{1} representa (CH_{2})_{p}hidroxi, (CH_{2})_{p}CN, (CH_{2})_{p}CO_{2}R^{10}, (CH_{2})_{n}SO_{3}R^{6}, -(CH_{2})_{p}CF_{2}SO_{2}NH_{2}, -(CH_{2})_{p}SO_{2}NH_{2},
-(CH_{2})_{p}CONHSO_{2}R^{2}, -(CH_{2})_{p}SO_{2}NHCOR^{2}, -(CH_{2})_{p}PO(OH)_{2}, (CH_{2})_{p}CONHPO_{2}R^{6}, (CH_{2})_{p}CONHR^{8}, (CH_{2})_{p}(alcoxi C_{1-4}), -(CH_{2})_{p}cicloalquilo, (CH_{2})_{p}hidroximetil cetona o (CH_{2})_{n}heterociclilo, estando dicho heterociclilo no sustituido o sustituido con 1 a 3 grupos de R^{a} y contiene opcionalmente un grupo hidroxilo ácido;
R^{2} representa independientemente alquilo C_{1-10}, (CH_{2})_{m}(arilo C_{6-10}), (CH_{2})_{m}(heterociclilo C_{5-10}), (CH_{2})_{m}(heterocicloalquilo C_{3-10}), (CH_{2})_{m}(cicloalquilo C_{3-8}), O-alquilo C_{1-10}, O-arilo C_{6-10}, O-cicloalquilo C_{3-10}, O-heterocicloalquilo C_{3-10}, O-heterocicloalquilo C_{3-10}, con la condición de que cuando R^{2} es O-alquilo C_{1-10}, O-arilo C_{6-10}, O-cicloalquilo C_{3-10}, O-heterocicloalquilo C_{3-10}, o O-heterocicloalquilo C_{3-10}, R^{3} y R^{4} no son halógeno, dicho alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo o heterociclilo no está sustituido o está sustituido con 1-3 grupos de R^{a};
R^{3} y R^{4} representan independientemente hidrógeno, halógeno, o alquilo C_{1-6}, o R^{3} y R^{4} pueden tomarse conjuntamente para formar un anillo de carbonos de 3-7 miembros opcionalmente interrumpido con 1-2 heteroátomos elegidos de O, S, SO, SO_{2}, y NR^{9};
R^{6} y R^{7} representan independientemente hidrógeno, o alquilo C_{1-4};
R^{8} representa hidrógeno, acilo, o sulfonilo;
R^{9} representa hidrógeno, alquilo C_{1-6}, estando dicho alquilo opcionalmente sustituido con 1-3 halógenos, CN, OH, alcoxi C_{1-6}, aciloxi C_{1-6}, o amino;
R^{10} representa hidrógeno, alquilo C_{1-10}, cicloalquilo C_{3-10}, (CH_{2})_{p}(arilo C_{6-10}), (CH_{2})_{p}(heterociclilo C_{5-10}), CR^{6}R^{7}
OC(O)O(cicloalquilo C_{3-10}), o CR^{6}R^{7}OC(O)O(alquilo C_{1-10});
Z representa un triple enlace, O, S, (C(R^{b})_{2})_{n}, o CH=CH;
R^{b} representa hidrógeno, alquilo C_{1-6}, o halógeno;
R^{a} representa alcoxi C_{1-6}, alquilo C_{1-6}, CF_{3}, nitro, amino, ciano, alquilamino C_{1-6}, halógeno, o R^{a} representa también para arilos y heterociclilo, S(alquilo C_{1-6}), S(arilo C_{6-10}), S(heterociclilo C_{5-10}), CO_{2}R^{6}, O(arilo C_{6-10}), O(heterociclilo C_{5-10}), CH_{2}O(alquilo C_{1-6}), CH_{2}S(alquilo C_{1-6}), CH_{2}Oarilo, CH_{2}Sarilo;
= representa un enlace doble o sencillo;
p representa 0-3;
n representa 0-4; y
m representa 0-8.
Este y otros aspectos de la invención se realizarán tras examinar la invención como un todo.
Descripción detallada de la invención
La invención se describe en la presente con detalle utilizando los términos y las expresiones definidos a continuación a menos que se indique lo contrario.
La expresión "cantidad terapéuticamente eficaz", tal como se emplea en la presente, significa la cantidad del agonista del receptor de subtipo EP_{4} en la fórmula I, u otros compuestos activos de la presente invención, que producirán la respuesta o el efecto terapéutico deseado o que proporcionen los beneficios deseados cuando se administran según el régimen de tratamiento deseado. Una cantidad terapéuticamente eficaz preferida con relación al tratamiento de la reabsorción ósea anómala es una cantidad estimulante de formación de hueso. De manera similar, una cantidad terapéuticamente eficaz preferida con relación al tratamiento de la hipertensión ocular o del glaucoma es una cantidad eficaz para reducir la presión intraocular y/o para tratar la hipertensión ocular y/o el glaucoma.
"Farmacéuticamente aceptable", tal como se emplea en la presente, significa adecuada en general para la administración a un mamífero, incluyendo seres humanos, desde el punto de vista de la toxicidad o de la seguridad.
El término "profármaco" se refiere a compuestos que son precursores de fármacos que, tras su administración y absorción, liberan el fármaco reivindicado in vivo a través de algún proceso metabólico. Un ejemplo no limitante de un profármaco de los compuestos de esta invención sería un ácido del grupo pirrolidinona, en el que la funcionalidad ácido tiene una estructura que hace que sea fácilmente hidrolizable tras su administración a un paciente. Los ejemplos de profármacos incluyen derivados del ácido acético que sean fármacos no narcóticos, analgésicos/no esteroideos, antiinflamatorios que tengan un grupo CH_{2}COOH libre (que puede estar opcionalmente en forma de una sal farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, -CH_{2}COO-Na^{+}), unido de forma típica a un sistema de anillo, preferiblemente a un sistema de anillo aromático o heteroaromático.
El término "alquilo" se refiere a un radical derivado de un alcano (hidrocarburo) monovalente que contiene de 1 a 10 átomos de carbono, a menos que se indique lo contrario. Puede ser lineal, ramificado o cíclico. Los grupos alquilo preferidos incluyen metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, t-butilo, ciclopentilo y ciclohexilo. Cuando se indica que el grupo alquilo está sustituido con un grupo alquilo, esto se emplea de modo intercambiable con un "grupo alquilo ramificado".
El cicloalquilo es una especie de alquilo que contiene de 3 a 15 átomos de carbono, sin enlaces dobles alternantes o resonantes entre los átomos de carbono. Puede contener de 1 a 4 anillos, que están condensados. Los ejemplos de grupos cicloalquilo son ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y cicloheptilo.
Alcoxi se refiere a (alquil C_{1}-C_{6})-O-, estando el grupo alquilo opcionalmente sustituido como se describe en la presente. Los ejemplos de grupos alcoxi son metoxi, etoxi, propoxi, butoxi y sus grupos isoméricos.
Halógeno (halo) se refiere a cloro, flúor, yodo o bromo.
Arilo se refiere a anillos aromáticos, por ejemplo, fenilo, fenilo sustituido y similares, así como a anillos que están condensados, por ejemplo, naftilo, fenantrenilo y similares. Un grupo arilo, por tanto, contiene al menos un anillo que tiene al menos 6 átomos, estando presentes hasta cinco anillos de este tipo, que contienen hasta 22 átomos, con dobles enlaces alternantes (resonantes) entre átomos de carbono adyacentes o heteroátomos adecuados. Los grupos arilo preferidos son fenilo, naftilo y penantrenilo. Los grupos arilo, de forma similar, también pueden estar sustituidos como se define. Los arilos sustituidos preferidos incluyen fenilo y naftilo.
El término "heterocicloalquilo" se refiere a un grupo cicloalquilo (no aromático) que tiene de 3 a 10 átomos de carbono en el que uno de los átomos de carbono en el anillo está reemplazado por un heteroátomo seleccionado de O, S o N, y en el que hasta tres átomos de carbono adicionales pueden estar reemplazados por heteroátomos.
El término "cicloalquilo" se refiere a un grupo alquilo cíclico (no aromático) que tiene de 3 a 10 átomos de carbono.
El término "heteroátomo" significa O, S o N, seleccionados independientemente.
El témino "heteroarilo" se refiere a un grupo hidrocarburo aromático monocíclico que tiene 5 ó 6 átomos del anillo, o un grupo aromático bicíclico que tiene de 8 a 10 átomos, que contiene al menos un heteroátomo, O, S o N, en el que un átomo de carbono o de nitrógeno es el punto de unión, y en el que uno o dos átomos de carbono adicionales están opcionalmente reemplazados por un heteroátomo seleccionado de O o S, y en el que de 1 a 3 átomos de carbono adicionales están opcionalmente reemplazados por heteroátomos de nitrógeno, estando dicho grupo heteroarilo opcionalmente sustituido como se describe en la presente. Los ejemplos de este tipo son pirrol, piridina, oxazol, tiazol, tetrazol y oxazina. Para los fines de esta invención, el tetrazol incluye todas las formas tautómeras. Otros átomos de nitrógeno pueden estar presentes junto con el primer nitrógeno y el oxígeno o el azufre produciendo, por ejemplo, tiadiazol.
Los términos heterociclilo o heterocíclico, tal como se emplean en la presente, representan un anillo heterocíclico monocíclico de 5 a 7 miembros estable o bicíclico de 8 a 11 miembros estable que está saturado o insaturado, y que consiste en átomos de carbono y de uno a cuatro heteroátomos seleccionados del grupo que consiste en N, O y S, e incluyen cualquier grupo bicíclico en el que cualquiera de los anillos heterocíclicos definidos anteriormente se condensa con un anillo de benceno. El anillo heterocíclico puede estar unido a cualquier heteroátomo o átomo de carbono que produzca la creación de una estructura estable. Un sistema de anillos heterocíclico condensado puede incluir anillos carbocíclicos y sólo es necesario que incluya un anillo heterocíclico. Los términos heterociclilo o heterocíclico incluyen restos heteroarilo. Los ejemplos de dichos elementos heterocíclicos incluyen, pero no se limitan a azepinilo, benzimidazolilo, benzisoxazolilo, benzofurazanilo, benzopiranilo, benzotiopiranilo, benzofurilo, benzotiazolilo, benzotienilo, benzoxazolilo, cromanilo, cinnolinilo, dihidrobenzofurilo, dihidrobenzotienilo, dihidrobenzotiopiranilo, dihidrobenzotiopiranil sulfona, 1,3-dioxolanilo, furilo, imidazolidinilo, imidazolinilo, imidazolilo, indolinilo, indolilo, isocromanilo, isoindolinilo, isoquinolinilo, isotiazolidinilo, isotiazolilo, isotiazolidinilo, morfolinilo, naftiridinilo, oxadiazolilo, 2-oxoazepinilo, oxazolilo, 2-oxopiperazinilo, 2-oxopiperidinilo, 2-oxopirrolidinilo, piperidilo, piperazinilo, piridilo, pirazinilo, pirazolidinilo, pirazolilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirrolidinilo, pirrolilo, quinazolinilo, quinolinilo, quinoxalinilo, tetrahidrofurilo, tetrahidroisoquinolinilo, tetrahidroquinolinilo, tetrazolilo, tiamorfolinilo, sulfóxido de tiamorfolinilo, tiazolilo, tiazolinilo, tienofurilo, tienotienilo, tienilo y triazolilo.
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Para los fines de esta invención, los heterociclilos que contienen grupos hidroxilo ácidos son aquellos grupos heterociclilo que tienen un átomo de hidroxi ácido y que pueden tener un pKa en el intervalo de 3 a 7. Los ejemplos no limitantes de heterociclilos que contienen grupos hidroxilo ácidos son:
2
G es -C(R^{c})_{3},
3
-N(R^{e})_{2}, O, o S, y
cada R^{c} es independientemente H, flúor, ciano, o alquilo C_{1-4};
cada R^{d} es independientemente H, alquilo C_{1-4}, o un catión farmacéuticamente aceptable;
cada R^{e} es independientemente H, -C(=O)-R^{f}, o -SO_{2}R^{e}, en el que R^{f} es alquilo C_{1-4} lineal, o fenilo.
El término "agonista", tal como se emplea en la presente, significa compuestos de fórmula I de subtipo EP_{4} que interaccionan con el receptor EP_{4} para producir un efecto máximo, supermáximo o submáximo comparado con el agonista natural, PGE_{2}. Véase Goodman y Gilman, The Pharmacological Basis of Therapeutics, 9ª edición, 1996, capítulo 2.
Una realización de esta invención se realiza cuando R^{1} es (CH_{2})_{p}CN, (CH_{2})_{p}CO_{2}R^{10}, -(CH_{2})_{p}PO(OH)_{2},
(CH_{2})_{p}CONHPO_{2}R^{6}, (CH_{2})_{p}CONHR^{8}, o (CH_{2})_{n}heterociclilo, estando dicho heterociclilo no sustituido o sustituido con 1 a 3 grupos de R^{a} y todas las demás variables son como se describió en un principio. Una subrealización de esta invención se realiza cuando Z es un (C(R^{b})_{2})_{n}. Otra subrealización de esta invención es cuando Z es azufre. Cuando R^{1} es (CH_{2})_{p}CO_{2}R^{10}, y Z es azufre, el azufre es hexavalente. Otra realización de la invención es cuando Z es O.
Otra realización de esta invención se realiza cuando R^{1} es (CH_{2})_{p}CO_{2}R^{10} y todas las demás variables son como se describió en un principio. Una subrealización de esta invención se realiza cuando X e Y son CH_{2}, Z es (C(R^{b})2)_{n}, Q es (CH_{2})_{m}, R^{3} y R^{4} son halógeno y todas las demás variables son como se describió en un principio.
Otra realización de esta invención se realiza cuando R^{1} is (CH_{2})_{m}(heterociclilo C_{5-10}), estando dicho heterociclilo no sustituido o sustituido con 1 a 3 grupos de R^{a} y todas las demás variables son como se describió en un principio. Una subrealización de esta invención se realiza cuando Z es (C(R^{b})_{2})_{n}. Otra subrealización de esta invención se realiza cuando Z es S. Otra realización de esta invención es cuando Z es O.
Otra realización de esta invención se realiza cuando R^{2} es (CH_{2})_{m}(arilo C_{6-10}), estando dicho arilo no sustituido o sustituido con 1 a 3 grupos de R^{a} y todas las demás variables son como se describió en un principio.
Una subrealización de esta invención se realiza cuando R^{1} es (CH_{2})_{p}CO_{2}R^{10},-(CH_{2})_{p}PO(OH)_{2}, (CH_{2})_{p}CONHPO_{2}
R^{6}, (CH_{2})_{p}CONHR^{8}, o (CH_{2})_{p}-tetrazolilo, estando dicho tetrazolilo no sustituido o sustituido con un grupo R^{a} y todas las demás variables son como se describió en un principio. Una subrealización de esta invención se realiza cuando Z es (C(R^{b})_{2})_{n}. Otra subrealización de esta invención se realiza cuando Z es S. Otra realización de esta invención es cuando Z es O.
Otra realización de esta invención se realiza cuando R^{2} es un fenilo no sustituido o sustituido con 1 a 3 grupos de R^{a} y todas las demás variables son como se describió en un principio.
Otra realización de esta invención se realiza cuando R^{1} es (CH_{2})_{p}-tetrazolilo, y R^{2} es fenilo, estando dicho tetrazolilo no sustituido o sustituido con un grupo R^{a}, y dicho fenilo no está sustituido o está sustituido con 1-3 grupos de R^{a} y todas las demás variables son como se describió en un principio. Una subrealización de esta invención se realiza cuando Z es (C(R^{b})_{2})_{n}. Otra subrealización de esta invención se realiza cuando Z es S. Otra realización de esta invención es cuando Z es O.
Otra realización de esta invención se realiza cuando U es H, y W es OH.
Otra realización de esta invención se realiza cuando U es alquilo C_{1-3}, y W es OH.
Otra realización de esta invención se realiza cuando Q representa (CH_{2})_{n}, o C(halo)_{2}, y todas las demás variables son como se describió en un principio. Una subrealización de esta invención se realiza cuando Z es (C(R^{b})_{2})_{n}. Otra subrealización de esta invención se realiza cuando Z es S. Otra realización de esta invención es cuando Z es O.
Otra realización de esta invención se realiza cuando Y representa CH_{2}, X es O, S o CH_{2}, W es OH, U es H o metilo, R^{3} es H, F o CH_{2}, y R^{2} es fenilo, tienilo, naftilo, benzotioenilo, benzofuranilo o bifenilo, estando dicho fenilo, tienilo, naftilo, benzotioenilo, benzofuranilo o bifenilo no sustituido o sustituido con 1-3 grupos de R^{a} y todas las demás variables son como se describió en un principio.
Los compuestos de la invención son:
ácido 7-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoico;
ácido 7-{(4R)-4-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-2-oxo-1,3-oxazinan-3-il}heptanoico;
ácido 7-{(4R)-4-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-2-oxo-1,3-tiazinan-3-il}heptanoico;
ácido 7-{(2R)-2-[(3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbutil]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoico;
ácido 7-{(4S)-4-[(3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbutil]-2-oxo-1,3-oxazinan-3-il}heptanoico;
ácido 7-{(4S)-4-[(3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbutil]-2-oxo-1,3-tiazinan-3-il}heptanoico;
ácido 7-{(2R)-2-[(3R)-3-hidroxi-4-fenilbutil]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoico;
ácido 7-{(4S)-4-[(3R)-3-hidroxi-4-fenilbutil]-2-oxo-1,3-oxazinan-3-il}heptanoico;
ácido 7-{(4S)-4-[(3R)-3-hidroxi-4-fenilbutil]-2-oxo-1,3-tiazinan-3-il}heptanoico;
7-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoato de isopropilo;
7-{(4R)-4-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-2-oxo-1,3-oxazinan-3-il}heptanoato de isopropilo;
7-{(4R)-4-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-2-oxo-1,3-tiazinan-3-il}heptanoato de isopropilo;
(6R)-6-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-1-[6-(2H-tetrazol-5-il)hexil]piperidin-2-ona;
(4R)-4-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-3-[6-(2H-tetrazol-5-il)hexil]-1,3-oxazinan-2-ona;
(4R)-4-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-3-[6-(2H-tetrazol-5-il)hexil]-1,3-tiazinan-2-ona;
(5S)-5-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-4-[6-(2H-tetrazol-5-il)hexil]morfolin-3-ona;
(6S)-6-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-1-[6-(2H-tetrazol-5-il)hexil]piperazin-2-ona;
(5S)-5-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-4-[6-(2H-tetrazol-5-il)hexil]tiomorfolin-3-ona;
ácido 5-(3-{(2R)-2-[(1E,3S)-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}propil)tiofen-2-carboxílico;
ácido 5-(3-{(4R)-4-[(1E,3S)-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-2-oxo-1,3-oxazinan-3-il}propil)tiofen-2-carboxílico;
ácido 5-(3-{(4R)-4-[(1E,3S)-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-2-oxo-1,3-tiazinan-3-il}propil)tiofen-2-carboxílico;
ácido 5-(3-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}propil)tiofen-2-carboxílico;
ácido 5-(3-{(4R)-4-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-2-oxo-1,3-oxazinan-3-il}propil)tiofen-2-
carboxílico;
ácido 5-(3-{(4R)-4-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-2-oxo-1,3-tiazinan-3-il}propil)tiofen-2-carboxílico;
(6R)-6-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-1-{3-[5-(2H-tetrazol-5-il)tien-2-il]propil}piperidin-2-
ona;
(4R)-4-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-3-{3-[5-(2H-tetrazol-5-il)tien-2-il]propil}-1,3-oxazi-
nan-2-ona;
(4R)-4-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-3-{3-[5-(2H-tetrazol-5-il)tien-2-il]propil}-1,3-tiazinan-2-ona;
(6R)-6-[(3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbutil]-1-{3-[5-(2H-tetrazol-5-il)tien-2-il]propil}piperidin-2-ona;
(4S)-4-[(3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbutil]-3-{3-[5-(2H-tetrazol-5-il)tien-2-il]propil}-1,3-oxazinan-2-ona;
(4S)-4-[(3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbutil]-3-{3-[5-(2H-tetrazol-5-il)tien-2-il]propil}-1,3-tiazinan-2-ona;
5-(3-{(2R)-2-[(1E,3S)-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}propil)tiofen-2-carboxilato de isopropilo;
5-(3-{(4R)-4-[(1E,3S)-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-2-oxo-1,3-oxazinan-3-il}propil)tiofen-2-carboxilato de isopropilo;
5-(3-{(4R)-4-[(1E,3S)-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-2-oxo-1,3-tiazinan-3-il}propil)tiofen-2-carboxilato de isopropilo;
5-(3-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}propil)tiofen-2-carboxilato de isopropilo;
5-(3-{(4R)-4-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-2-oxo-1,3-oxazinan-3-il}propil)tiofen-2-carboxilato de isopropilo;
5-(3-{(4R)-4-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-2-oxo-1,3-tiazinan-3-il} propil)tiofen-2-carboxilato de isopropilo;
ácido (5E)-7-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}hept-5-enoico;
ácido (5E)-7-{(4R)-4-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-2-oxo-1,3-oxazinan-3-il}hept-5-enoico;
ácido (5E)-7-{(4R)-4-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-2-oxo-1,3-tiazinan-3-il}hept-5-enoico;
ácido (5E)-7-{(2R)-2-[(3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbutil]-6-oxopiperidin-1-il}hept-5-enoico;
ácido (5E)-7-{(4S)-4-[(3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbutil]-2-oxo-1,3-oxazinan-3-il}hept-5-enoico;
ácido (5E)-7-{(4S)-4-[(3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbutil]-2-oxo-1,3-tiazinan-3-il}hept-5-enoico;
ácido 2-(3-{(2R)-2-[(1E,3S)-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}propil)-1,3-tiazol-5-carboxílico;
ácido 5-(3-{(2R)-2-[(1E,3S)-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}propil)-1,3-tiazol-2-carboxílico;
ácido 5-(3-{(2R)-2-[(1E,3S)-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}propil)-1,3-oxazol-2-carboxílico;
ácido 2-(3-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}propil)-1,3-oxazol-5-
carboxílico;
ácido 5-(3-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}propil)-1H-imidazol-2-carboxílico;
ácido 2-(3-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}propil)-1H-imidazol-5-carboxílico;
ácido 2-(3-{(2R)-2-[(1E,3S)-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}propil)-1,3-oxazol-5-carboxílico;
ácido 5-(3-{(2R)-2-[(1E,3S)-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}propil)-1,2\lambda^{5},5\lambda^{5}-oxadiazol-2-car-
boxílico;
ácido 5-(3-{(2R)-2-[(1E,3S)-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}propil)-4H-1,2,4-triazol-3-carboxílico;
ácido 5-((1E)-3-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}prop-1-enil)tio-
fen-2-carboxílico;
ácido 5-(3-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}prop-1-inil)tiofen-2-
carboxílico;
ácido 5-((1Z)-3-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}prop-1-enil)tiofen-2-carboxílico;
(6R)-6-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-1-{(2Z)-4-[(1H-tetrazol-5-ilmetil)tio]but-2-enil}pi-
peridin-2-ona;
ácido [(4-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}but-2-inil)tio]acético;
ácido [((2Z)-4-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}but-2-enil)tio]acético;
ácido [(4-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}butil)tio]acético;
ácido (4-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}butoxi)acético;
ácido 3-[(3-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}propil)tio]propanoico;
ácido 7-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-3-metil-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoico;
ácido 7-{(2R)-2-[(1E,3S)-4,4-difluoro-3-hidroxi-3-metil-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoico;
ácido 7-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-(2-naftil)but-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoico;
(6R)-6-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-3-metil-4-fenilbut-1-enil]-1-[6-(1H-tetrazol-5-il)hexil]piperidin-2-ona;
(6R)-6-[(1E,3S)-4,4-difluoro-3-hidroxi-3-metil-4-fenilbut-1-enil]-1-[6-(1H-tetrazol-5-il)hexil]piperidin-2-ona;
ácido 7-{(2R)-2-[(1E,3R)-4-(1-benzotien-2-il)-4,4-difluoro-3-hidroxibut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoico;
(6R)-6-[(3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-3-metil-4-fenilbutil]-1-[6-(1H-tetrazol-5-il)hexil]piperidin-2-ona;
(6R)-6-[(3S)-4,4-difluoro-3-hidroxi-3-metil-4-fenilbutil]-1-[6-(1H-tetrazol-5-il)hexil]piperidin-2-ona;
ácido 7-{(2R)-2-[(1E,3R)-4-(1-benzofuran-2-il)-4,4-difluoro-3-hidroxibut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}hep-
tanoico;
ácido 7-{(2R)-2-[(1E,3R)-4-(3-clorofenil)-4,4-difluoro-3-hidroxibut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoico;
ácido 7-{(2R)-2-[(1E,3R)-4-(3-clorofenil)-4,4-difluoro-3-hidroxibut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoico;
ácido 7-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-(3-metoxifenil)but-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoico;
6-[(1E)-(3R)-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-1-[6-(1H-tetrazol-5-il)hexil]piperidin-2-ona;
ácido 7-{[(1E)-(2R)-2-(3S)-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoico;
7-{[(1E)-(2R)-2-(3S)-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoato de isopropilo;
7-{(2R)-2-[(3R)-3-hidroxi-4-fenilbutil]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoato de isopropilo;
ácido 7-{[(2R)-2-(3R)-3-hidroxi-4-fenilbutil]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoico;
5-{3-[(2R)-2-((1E)-(3S)-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil)-6-oxopiperidin-1-il]propil}tiofen-2-carboxilato de metilo;
ácido 5-{3-[(2R)-2-((1E)-(3S)-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil)-6-oxopiperidin-1-il]propil}tiofen-2-carboxílico;
ácido 5-{3-[(2R)-2-((3S)-3-hidroxi-4-fenilbutil)-6-oxopiperidin-1-il]propil}tiofen-2-carboxílico;
5-{3-[(2R)-2-((1E)-(3S)-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil)-6-oxopiperidin-1-il]propil}tiofen-2-carboxilato de isopropilo;
5-{3-[(2R)-2-((3S)-3-hidroxi-4-fenilbutil)-6-oxopiperidin-1-il]propil}tiofen-2-carboxilato de isopropilo;
6-[(3R)-3-hidroxi-4-fenilbutil]-1-[6-(1H-tetrazol-5-il)hexil]piperidin-2-ona;
7-{(2R)-2-[(1E)-4,4-difluoro-3-oxo-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoato de isopropilo;
ácido 7-{(2R)-2-[(3R)-4-(3-bromofenil)-4,4-difluoro-3-hidroxibutil]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoico;
5-{3-[(2R)-2-((1E)-(3S)-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil)-6-oxopiperidin-1-il]propil}tiofen-2-carboxilato de metilo;
ácido 5-{3-[(2R)-2-((3S)-3-hidroxi-4-fenilbutil)-6-oxopiperidin-1-il]propil}tiofen-2-carboxílico;
5-{3-[(2R)-2-((3S)-3-hidroxi-4-fenilbutil)-6-oxopiperidin-1-il]propil}tiofen-2-carboxilato de isopropilo;
6-[(3R)-3-hidroxi-4-fenilbutil]-1-[6-(1H-tetrazol-5-il)hexil]piperidin-2-ona;
(5Z)-7-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-en-1-il]-6-oxopiperidin-1-il}hept-5-enoato de isopropilo;
ácido (5Z)-7-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-en-1-il]-6-oxopiperidin-1-il}hept-5-enoico;
7-{(4R)-4-[(1E)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-en-il]-2-oxo-1,3-oxanzinan-3-il}heptanoato de isopropilo;
ácido 7-{(4R)-4-[(1E)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-en-il]-2-oxo-1,3-oxanzinan-3-il}heptanoico;
o sus sales farmacéuticamente aceptables, enatiómeros, diastereómeros, profármacos o sus mezclas.
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Otra realización de esta invención se dirige a una composición que contiene un agonista de EP_{4} de fórmula I y opcionalmente un vehículo farmacéuticamente aceptable.
Otra realización de esta invención se dirige a un procedimiento para disminuir la presión intraocular elevada o para tratar el glaucoma mediante la administración, preferiblemente la administración tópica o intracamaral, de una composición que contiene un agonista de EP_{4} de fórmula I y opcionalmente un vehículo farmacéuticamente aceptable. En la invención también se incluye el uso de los compuestos de fórmula I para la fabricación de un medicamento para tratar la presión intraocular elevada o el glaucoma o una combinación de ambos.
Esta invención se refiere también a un proceso para fabricar una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula I.
Esta invención se refiere también a un proceso para fabricar una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula I, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
Los compuestos reivindicados se unen con fuerza y actúan sobre el receptor de PGE_{2}, en particular al receptor de subtipo EP_{4} y, por tanto, son útiles para prevenir y/o tratar el glaucoma y la hipertensión ocular.
El ojo seco es una enfermedad de la superficie ocular habitual que afecta a millones de personas. Aunque parece que el ojo seco puede ser el resultado de una serie de causas patogénicas no relacionadas, el resultado final habitual es la degradación de la película de lágrimas, que produce la deshidratación de la superficie externa expuesta del ojo (Lemp, Report of the Nation Eye Institute/Industry Workshop on Clinical Trials in Dry Eyes, The CLAO Journel, 21(4):221-231 (1995)). Se han descubierto receptores EP_{4} funcionales en células epiteliales de la conjuntiva humana (véase la patente de EEUU 6.344.477) y se aprecia que tanto las células epiteliales corneales humanas (Progess in Retinal and Eye Research, 16:81-98(1997)) como las células de la conjuntiva (Dartt et al. Localization of nerves adjacent to goblet cells in rat conjunctiva, Current Eye Research, 14:993-1000 (1995)) son capaces de segregar mucinas. Por tanto, los compuestos de fórmula I son útiles para tratar el ojo seco.
El edema macular es un hinchamiento en el interior de la retina, dentro de la zona visual central críticamente importante en el polo posterior del ojo. Se cree que los agonistas de EP_{4} que disminuyen la IOP son útiles para tratar enfermedades de la mácula, tales como edema macular o degeneración macular. Por tanto, otro aspecto de esta invención es un procedimiento para tratar el edema macular o la degeneración macular.
El glaucoma se caracteriza por la atrofia progresiva del nervio óptico y con frecuencia está asociado con una elevada presión intraocular ("intraocular pressure", IOP). Sin embargo, es posible tratar el glaucoma sin afectar necesariamente a la IOP utilizando fármacos que imparten un efecto neuroprotector. Véase, Arch. Ophthalmol. vol. 112, enero de 1994, pp. 37-44; Investigative Ophthamol. & Visual Science, 32, 5, abril de 1991, pp. 1593-1599. Se cree que los agonistas de EP_{4} que disminuyen la IOP son útiles para proporcionar un efecto neuroprotector. También se cree que son eficaces para aumentar la velocidad de la sangre retiniana y de la cabeza del nervio óptico, y para aumentar el oxígeno retiniano y del nervio óptico, mediante la disminución de la IOP, que cuando se juntan benefician a la salud del nervio óptico. Como resultado, esta invención se refiere además a un procedimiento para aumentar la velocidad de la sangre retiniana y de la cabeza del nervio óptico, o para aumentar la tensión de oxígeno retiniana y del nervio óptico, o para proporcionar un efecto neuroprotector o una combinación de éstos, mediante el uso de un agonista de EP_{4} de fórmula I.
Los compuestos producidos en la presente invención se combinan con facilidad con excipientes farmacéuticamente aceptables adecuados y conocidos para producir composiciones que pueden administrarse a mamíferos, incluyendo seres humanos, para lograr una eficaz disminución de la IOP. Por tanto, esta invención se refiere también a composiciones y procedimientos para tratar la hipertensión ocular, el glaucoma, el edema macular, la degeneración macular, para aumentar la velocidad de la sangre retiniana y de la cabeza del nervio óptico, para aumentar la tensión de oxígeno retiniana y del nervio óptico, para proporcionar un efecto neuroprotector o para una combinación de éstos, mediante la administración a un paciente que lo necesite de uno de los compuestos de fórmula I solo o en combinación con uno o más de los siguientes ingredientes activos: un agente bloqueante \beta-adrenérgico, tal como timolol, betaxolol, levobetaxolol, carteolol, levobunolol, un agente parasimpatomimético, tal como pilocarpina, un agente simpatomimético, tal como epinefrina, yopidina, brimonidina, clonidina, para-aminoclonidina, un inhibidor de la anhidrasa carbónica, tal como dorzolamida, acetazolamida, metazolamida o brinzolamida; COSOPT®, un bloqueante del canal de maxi-K, tal como penitrem A, paspalicina, caribdotoxina, iberiotoxina, paxicilano, aflitram, verroculogeno, y según se describe en los documentos WO 03/105868 (USSN 60/389,205), WO 03/105724 (60/389.222), WO 03/105847 (60/458.981), 60/424790, presentado el 8 de noviembre, 2002 (expediente del abogado 21260PV), 60/424808, presentado el 8 de noviembre, 2002 (expediente del abogado 21281PV), 09/765716, presentado el 17 de enero, 2001, 09/764738, presentado el 17 de enero, 2001, y publicaciones PCT WO 02/077168 y WO 02/02060863, incorporadas como referencia de bloqueantes del canal de maxi-K, 1-(1-isobutil-6-metoxi-1H-indazol-3-il)-2-metilpropan-1-ona; 1-[1-(2,2-dimetilpropil)-6-metoxi-1H-indazol-3-il]-2-metilpropan-1-ona; 1-[1-(ciclohexilmetil)-6-metoxi-1H-indazol-3-il]-2-metilpropan-1-ona; 1-(1-hexil-6-metoxi-1H-indazol-3-il)-2-metilpropan-1-ona; 1-[1-(2-etilhexil)-6-metoxi-1H-indazol-3-il]-2-metilpropan-1-ona; 1-(3-isobutiril-6-metoxi-1H-indazol-1-il)butan-2-ona; 1-(3-isobutiril-6-metoxi-1H-indazol-1-il)-3,3-dimetilbutan-2-ona; 1-(3-ciclopentilcarbonil)-6-metoxi-1H-indazol-1-il)-3,3-dimetilbutan-2-ona; ácido 1-(3,3-dimetil-2-oxobutil)-6-metoxi-1H-indazole-3-carboxílico; y 1-[3-(3-hidroxipropanoil)-6-metoxi-1H-indazol-1-il]-3,3-dimetilbutan-2-ona, una prostaglandina, tal como latanoprost, travaprost, unoprostona, rescula, S1033 (los compuestos indicados en las patentes de EEUU nº 5.889.052; 5.296.504; 5.422.368; y 5.151.444); un lípido hipotensor, tal como lumigán y los compuestos indicados en la patente de EEUU nº 5.352.708; un neuroprotector descrito en la patente de EEUU nº 4.690.931, en particular eliprodilo y R-eliprodilo, tal como se indica en el documento WO 94/13275, incluyendo memantina; y/o un agonista de los receptores 5-HT2 tal como se indica en el documento PCT/US00/31247, en particular fumarato de 1-(2-aminopropil)-3-metil-1H-imidazol-6-ol y 2-(3-cloro-6-metoxiindazol-1-il)-1-metiletilamina.
El uso de los compuestos de fórmula I para la fabricación de un medicamento para tratar la hipertensión ocular, el glaucoma, el edema macular, la degeneración macular, para aumentar la velocidad de la sangre retiniana y de la cabeza del nervio óptico, para aumentar la tensión de oxígeno retiniana y del nervio óptico, para proporcionar un efecto neuroprotector o para una combinación de éstos, también se incluye en esta invención.
El agonista de EP_{4} utilizado en la presente invención puede administrarse en una cantidad terapéuticamente eficaz por vía intravenosa, subcutánea, tópica, transdérmica, parenteral o mediante cualquier otra vía conocida por los expertos en la técnica. Las composiciones farmacéuticas oftálmicas están preferiblemente adaptadas para la administración tópica al ojo en forma de disoluciones, suspensiones, ungüentos, cremas o como un inserto sólido. Las formulaciones oftálmicas de este compuesto pueden contener del 0,001% al 5%, y en especial del 0,001% al 0,1% de medicamento. Pueden emplearse unas dosificaciones mayores, como por ejemplo hasta aproximadamente 10%, o dosificaciones menores, con la condición de que la dosis sea eficaz para reducir la presión intraocular, tratar el glaucoma, aumentar la velocidad del flujo sanguíneo o la tensión de oxígeno. Para una única dosis pueden aplicarse entre 0,001 a 5,0 mg, preferiblemente de 0,005 a 2,0 mg, y en especial de 0,005 a 1,0 mg del compuesto al ojo humano.
La preparación farmacéutica que contiene el compuesto puede mezclarse de modo conveniente con un vehículo orgánico farmacéutico no tóxico, o con un vehículo inorgánico farmacéutico no tóxico. Los vehículos farmacéuticamente aceptables típicos son, por ejemplo, agua, mezclas de agua y disolventes miscibles en agua, tales como alcanoles o aralcanoles inferiores, aceites vegetales, aceite de cacahuete, polialquilenglicoles, gelatina basada en petróleo, etilcelulosa, oleato de etilo, carboximetilcelulosa, polivinilpirrolidona, miristato de isopropilo y otros vehículos aceptables empleados de modo convencional. La preparación farmacéutica también puede contener sustancias auxiliares no tóxicas, tales como agentes emulgentes, conservantes, humectantes, agentes formadores de masa y similares, como por ejemplo polietilenglicoles 200, 300, 400 y 600, carboceras 1.000, 1.500, 4.000, 6.000 y 10.000, componentes antibacterianos, tales como compuestos de amonio cuaternario, sales fenilmercúricas conocidas por tener propiedades esterilizantes en frío y que no son perjudiciales en uso, timerosal, metil- y propilparabeno, alcohol bencílico, feniletanol, ingredientes tamponantes, tales como borato de sodio, acetatos de sodio, tampones de gluconato, y otros ingredientes convencionales, tales como monolaurato de sorbitán, trietanolamina, oleato, monopalmitilato de polioxietilensorbitán, sulfosuccinato de dioctilo sodio, monotioglicerol, tiosorbitol, ácido etilendiaminatetraacético y similares. Además pueden utilizarse vehículos oftálmicos adecuados como medio vehículo para los presentes objetivos, incluyendo sistemas de vehículo de tampón fosfato convencionales, vehículos de ácido bórico isotónicos, vehículos de cloruro de sodio isotónicos, vehículos de borato de sodio isotónicos y similares. La preparación farmacéutica también puede estar en forma de una formulación de micropartículas. La preparación farmacéutica también puede estar en forma de un inserto sólido. Por ejemplo, se puede utilizar un polímero hidrosoluble sólido como vehículo para el medicamento. El polímero utilizado para formar el inserto puede ser cualquier polímero no tóxico hidrosoluble, por ejemplo derivados de celulosa, tales como metilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio, hidroxi(alquilo inferior)celulosa, hidroxietilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa; acrilatos, tales como sales de poli(ácido acrílico), acrilatos de etilo, poliactilamidas; productos naturales, tales como gelatina, alginatos, pectinas, tragacanto, karaya, alga Chondrus, agar, goma arábiga; derivados del almidón, tales como acetato de almidón, hidroximetil almidón éteres, hidroxipropilalmidón, así como otros derivados sintéticos, tales como poli(alcohol vinílico), polivinilpirrolidona, poli(vinil metil éter), óxido de polietileno, carbopol neutralizado y goma de xantano, goma de gelano y mezclas de dichos polímeros.
Los sujetos adecuados para la administración de la formulación de la presente invención incluyen primates, seres humanos y otros animales, en particular seres humanos y animales domesticados, tales como gatos, conejos y perros.
La preparación farmacéutica puede contener sustancias auxiliares no tóxicas, tales como componentes antibacterianos que no sean perjudiciales en uso, por ejemplo timerosal, cloruro de benzalconio, metil- y propilparabeno, bromuro de bencildodecinio, alcohol bencílico o feniletanol; ingredientes tamponantes, tales como cloruro de sodio, borato de sodio, acetato de sodio, citrato de sodio o tampones gluconato; y otros ingredientes convencionales, tales como monolaurato de sorbitán, trietanolamina, monopalmitilato de polioxietilensorbitán, ácido etilendiaminatetraacético y similares.
La disolución o suspensión oftálmica puede administrarse tan a menudo como sea necesario para mantener un nivel de IOP aceptable en el ojo. Se contempla que la administración al ojo de ma1míferos se realizará de una hasta tres veces diarias.
Para la administración ocular tópica, las nuevas formulaciones de la invención pueden tomar la forma de disoluciones, geles, ungüentos, suspensiones, o insertos sólidos, formulándose de forma que una dosificación unitaria comprenda una cantidad terapéuticamente eficaz del componente activo o de algunos múltiplos de ésta en el caso de una terapia de combinación.
Los compuestos de la presente invención también son útiles para mediar en procesos de modelado y remodelación ósea de los osteoblastos y los osteoclastos. Véase el documento PCT US99/23757, presentado el 12 de octubre, 1999. El principal receptor de prostaglandina en el hueso es EP_{4}, que se cree que proporciona su efecto mediante la señalización a través del AMPc. Véase, Ikeda T., Miyaura C., Ichikawa A., Narumiya S., Yoshiki S. y Suda T., 1995, In situ localization of three subtypes (EP_{1}, EP_{3} and EP_{4}) of prostaglandin E receptors in embryonic and newborn mice, J. Bone Miner. Res.,10 (supl. 1):S 172.
Los usos de los compuestos de fórmula I para la fabricación de un medicamento para mediar en procesos de modelado y remodelación ósea también se incluyen en esta invención.
Por tanto, otro objeto de la presente invención es proporcionar procedimientos para estimular la formación de hueso, es decir, la osteogénesis, en un mamífero, que comprende administrar a un mamífero que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz de un agonista del receptor de subtipo EP_{4} de fórmula I.
Otro objeto de la presente invención es proporcionar procedimientos para estimular la formación de hueso en un mamífero que lo necesite, que comprende administrar a dicho mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz de un agonista del receptor de subtipo EP_{4} de fórmula I, y un bisfosfonato activo. El uso de los compuestos de fórmula I para la fabricación de un medicamento para estimular la formación de hueso también se incluye en esta invención.
Otro objeto de la presente invención es proporcionar composiciones farmacéuticas que comprenden una cantidad terapéuticamente eficaz de un agonista del receptor de subtipo EP_{4} de fórmula I, y un bisfosfonato activo.
Otro objeto de la presente invención es proporcionar procedimientos para tratar o reducir el riesgo de contraer un estado de enfermedad o un trastorno relacionado con la reabsorción ósea anómala en un mamífero que necesite dicho tratamiento o prevención, que comprende administrar a dicho mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz de un agonista del receptor de subtipo EP_{4} de fórmula I. El uso de los compuestos de fórmula I para la fabricación de un medicamento para tratar o reducir el riesgo de contraer un estado de enfermedad o un trastorno relacionado con reabsorción ósea anómala también se incluye en esta invención.
Los estados de enfermedad o los trastornos relacionados con una reabsorción ósea anómala incluyen, pero no se limitan a osteoporosis, osteoporosis inducida por glucocorticoides, enfermedad de Paget, recambio óseo anómalamente aumentado, enfermedad periodontal, pérdida de dientes, fracturas óseas, artritis reumatoide, osteolisis periprostética, osteogénesis imperfecta, enfermedad ósea metastásica, hipercalcemia de malignidad, y mieloma múltiple.
Dentro del procedimiento que comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un agonista del receptor de subtipo EP_{4} de fórmula I y un bisfosfonato activo, se considera que la administración concurrente y secuencial del agonista del receptor de subtipo EP_{4} de fórmula I y del bisfosfonato activo están dentro del alcance de la presente invención. En general, se preparan formulaciones que contienen 5 ó 10 mg de un bisfosfonato activo, basado en el ácido bisfosfónico activo. Con la administración secuencial, el agonista y el bisfosfonato pueden administrarse en cualquier orden. En una subclase de administración secuencial, el agonista y el bisfosfonato se administran de modo típico dentro del mismo periodo de 24 horas de diferencia.En una subclase de administración secuencial, el agonista y el bisfosfonato se administran de modo típico con aproximadamente 4 horas de diferencia.
Una clase no limitante de compuestos activos de bisfosfonato útiles en la presente invención se seleccionan del
grupo que consiste en alendronato, cimadronato, clodronato, tiludronato, etidronato, ibandronato, neridronato, olpandronato, risedronato, piridronato, pamidronato, zolendronato, sus sales farmacéuticamente aceptables y sus
mezclas.
Una subclase no limitante de la clase mencionada anteriormente en el presente caso se selecciona del grupo que comprende alendronato, sus sales farmacéuticamente aceptables y sus mezclas.
Un ejemplo no limitante de la subclase es el alendronato monosodio trihidrato.
En la presente invención, con relación a la estimulación ósea, el agonista se administra de modo típico durante un periodo de tiempo suficiente hasta que se logra el efecto terapéutico deseado. La expresión "hasta que se logra el efecto terapéutico deseado", tal como se emplea en la presente, significa que el agente o los agentes terapéuticos se administran de modo continuo, según el programa de dosificación elegido, hasta el momento en que el efecto clínico o médico buscado para la enfermedad o el trastorno que se está mediando es observado por el médico o el investigador. Para los procedimientos de tratamiento de la presente invención, los compuestos se administran de modo continuo hasta que se observa el cambio deseado en la masa o en la estructura ósea. En estos casos, los objetivos deseados son lograr un aumento en la masa ósea o una sustitución de una estructura ósea anómala por una estructura ósea normal. Para los procedimientos para reducir el riesgo de un estado de enfermedad o de un trastorno, los compuestos se administran de modo continuo durante el tiempo necesario para evitar el trastorno indeseado. En estos casos, el objetivo a menudo es mantener la densidad de masa ósea.
Los ejemplos no limitantes de periodos de administración pueden variar de aproximadamente 2 semanas hasta el resto de la vida del mamífero. Para los seres humanos, los periodos de administracón pueden variar de aproximadamente 2 semanas al resto de la vida del ser humano, preferiblemente de aproximadamente 2 semanas a aproximadamente 20 años, más preferiblemente de aproximadamente 1 mes a aproximadamente 20 años, más preferiblemente de aproximadamente 6 meses a aproximadamente 10 años, y lo más preferiblemente de aproximadamente 1 año a aproximadamente 10 años.
Los presentes compuestos también son útiles en combinación con agentes conocidos útiles para tratar o prevenir la pérdida ósea, las fracturas óseas, la osteoporosis, la osteoporosis inducida por glucocorticoides, la enfermedad de Paget, el recambio óseo anómalamente aumentado, la enfermedad periodontal, la pérdida de dientes, la artritis reumatoide, la osteolisis periprostética, la osteogénesis imperfecta, la enfermedad ósea metastásica, la hipercalcemia de malignidad, y el mieloma múltiple. Las combinaciones de los compuestos descritos en la presente con otros agentes útiles para tratar o prevenir la osteoporosis u otros trastornos óseos están dentro del alcance de la invención. Los expertos en la técnica serán capaces de discernir cuáles combinaciones de agentes serán útiles basándose en las características particulares de los fármacos y de la enfermedad implicada. Estos agentes incluyen los siguientes: un bisfosfonato orgánico; un inhibidor de catepsina K; un estrógeno o un modulador del receptor de estrógenos; un modulador del receptor de andrógenos; un inhibidor de la ATPasa de protón de osteoclastos; un inhibidor de la HMG-CoA reductasa; un antagonista del receptor de integrina; un agente anabólico de osteoblastos, tal como PTH; calcitonina; vitamina D o un análogo de vitamina D sintético; y sus sales farmacéuticamente aceptables y sus mezclas. Una combinación preferida es un compuesto de la presente invención y un bisfosfonato orgánico. Otra combinación preferida es un compuesto de la presente invención y un modulador del receptor de estrógenos. Otra combinación preferida es un compuesto de la presente invención y un estrógeno. Otra combinación preferida es un compuesto de la presente invención y un modulador del receptor de andrógenos. Otra combinación preferida es un compuesto de la presente invención y un agente anabólico de osteoblastos.
Con respecto al tratamiento de la reabsorción ósea anómala y de trastornos oculares, los agonistas de fórmula I en general tienen un valor de EC_{50} de aproximadamente 0,001 nM a aproximadamente 100 microM, aunque los agonistas con actividades fuera de este intervalo pueden ser útiles dependiendo de la dosificación y de la vía de administración. En una subclase de la presente invención, los agonistas tienen un valor de EC_{50} de aproximadamente 0,01 microM a aproximadamente 10 microM. En otra subclase de la presente invención, los agonistas tienen un valor de EC_{50} de aproximadamente 0,1 microM a aproximadamente 10 microM. La EC_{50} es una medida habitual de la actividad agonista muy conocida por los expertos en la técnica y se define como la concentración o la dosis de un agonista necesaria para producir la mitad, es decir, 50% del efecto máximo. Véase también, Goodman and Gilman's, The Pharmacologic Basis of Therapeutics, 9ª edición, 1996, capítulo 2; E.M. Ross, Pharmacodynamics, Mechanisms of Drug Action and the Relationship Between Drug Concentration and Effect; y el documento PCT US99/23757, presentado el 12 de octubre, 1999.
Los ejemplos en la presente ilustran pero no limitan la invención reivindicada. Cada uno de los compuestos reivindicados son agonistas de EP_{4} y son útiles para una serie de trastornos óseos y oculares fisiológicos.
Los compuestos de esta invención pueden prepararse, con alguna modificación, según la patente de EEUU nº 6.043.275, los documentos EP0855389, WO 03/047417 (USSN 60/337228), WO 03/047513 (USSN 60/338.117), USSN 60/406.530 (nº de expediente de Merck MC060) y WO 01/46140. Los siguientes esquemas y ejemplos no limitantes ofrecidos como ilustración son demostrativos de la presente invención.
Esquema I
4 
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Ejemplo preparativo 1
5
A una suspensión de ácido (+/-)-pipecolínico (395 g, 3,06 moles) en MeOH (1,8 l) a 60ºC se le añadió ácido L-tartárico (459 g, 3,06 moles). La suspensión se calentó a reflujo y se envejeció durante 1 h (hora). La suspensión se enfrió hasta 23ºC, se filtró, y la torta del filtro del ácido (R)-pipecolínico deseado/ácido L-tartárico se lavó con MeOH (200 ml). La torta del filtro se secó al aire y se aisló un sólido blanco. La sal tartrato del ácido pipecolínico se ensayó de forma típica a 85-89% e.e.
Una suspensión de la sal (383 g) en H_{2}O/acetona 2:1 (380 ml/190 ml) se calentó a reflujo (60-65ºC) hasta que todos los sólidos se hubieron disuelto. Se añadió acetona (1330 ml) a lo largo de 2 h mientras se mantenía el reflujo. La suspensión se dejó enfriar hasta 15-20ºC a lo largo de 1 h y después se filtró, se lavó con acetona/H_{2}O 4:1 (380 ml) y después se secó al aire al vacío. Se aislaron 313 g de la sal tartrato del ácido pipecolínico (>99% e.e.).
A una suspensión de la sal tartrato del ácido pipecolínico (312 g) en MeOH (3,0 l) se le añadió NH_{4}OH al 28% (83 ml, 1,1 eq.) a lo largo de 0,5 h. La suspensión blanca se envejeció durante 0,5 h a temperatura ambiente y después se retiró mediante filtración el precipitado de tartrato de amonio. La torta del filtro se enjuagó con MeOH (300 ml). El filtrado reunido y el enjuagado se concentraron para producir un sólido blanco de (1).
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Ejemplo preparativo 2
6
A una suspensión del ácido pipecolínico (109,7 g) y BOC_{2}O (222,4 g) en tetrahidrofurano (THF)/H_{2}O 1:1 (550/550 ml) se le añadió NaOH al 50% (45 ml). La suspensión se calentó a reflujo y se envejeció durante 5 h a reflujo. La disolución se enfrió hasta 23ºC y después se lavó con heptano (550 ml) para eliminar el BOC_{2}O sin reaccionar. La capa acuosa entonces se acidificó con HCl 5 N (170 ml) hasta pH 4-5. La suspensión resultante se extrajo con 550 ml de terc-butil metil éter (MTBE). La capa orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4} y después se concentró para producir un sólido blanco de (2).
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Ejemplo preparativo 3
7
A una disolución de ácido N-BOC-pipecolínico (166,5 g, 726 mmoles) en 500 ml de dimetilformamida (DMF) se le añadió MeI (123,7 g, 871 mmoles) y K_{2}CO_{3} (100,4 g, 726 moles). La mezcla de reacción fue lentamente exotérmica hasta 40ºC después de 0,5 h durante un periodo de envejecimiento de 4 h a temperatura ambiente. Se le añadio MTBE (830 ml) y después se lavó con H_{2}O (2 x 830 ml) y salmuera al 20% (300 ml). La capa orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró para producir un aceite (3).
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Ejemplo preparativo 4
8
A una disolución de butoxicarbonil (Boc)-Me éster (152,6 g, 627 mmol) en MeCN (305 ml) se le añadió RuCl_{3} (2,6 g, 12,5 mmol). Se añadió una disolución de NaBrO_{3} (142,0 g, 941 mmol) en H_{2}O (760 ml) a lo largo de 2 h. La disolución se envejeció durante 12 h a temperatura ambiente. Se añadió EtOAc (760 ml) y se cortó la capa acuosa. La capa orgánica oscura se lavó con Na_{2}SO_{3} al 10% (305 ml), mientras que la capa orgánica se volvió transparente y la capa acuosa se volvió de un color gris turbio. La capa orgánica se lavó con salmuera saturada (150 ml) y después se secó sobre Na_{2}SO_{4} para producir un aceite (4).
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Ejemplo preparativo 5
9
A una disolución de BOC-lactama (135,4 g, 526 mmol) en 135 ml de alcohol isopropílico (IPA) se le añadió HCl 5 N en 263 ml/1316 mmol de alcohol isopropílico (IPA) a lo largo de 15 min. Se produjo una vigorosa evolución de gas durante 15 min y después la disolución se envejeció durante 2,5 h a temperatura ambiente. Se añadió EtOAc (800 ml) y se lavó con Na_{2}CO_{3} al 15% (350 ml). La capa acuosa se extrajo con EtOAc (400 ml). Las capas orgánicas reunidas se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron para producir un aceite (5). La pureza enantiomérica se ensayó a
>99% e.e.
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Ejemplo preparativo 6
10
A una disolución del éster de lactama (8,10 g, 51,7 mmol) en etanol anhidro (500 ml) se le añadió borohidruro de sodio (2,5 g, 1,2 eq.) en incrementos de 0,5 g a lo largo de 30 minutos. La disolución se agitó durante 3,5 horas a temperatura ambiente. La mezcla entonces se trató con ácido acético glacial (2,8 eq.) y el precipitado se retiró mediante filtración a través de un lecho corto de Celite. El filtrado entonces se concentró al vacío y el aceite resultante se solidificó tras dejarlo en reposo al vacío. El producto bruto se disolvió en CH_{2}Cl_{2} (50 ml), se trató con KHCO_{3} (1,5 eq.), se envejeció durante 1 h, se filtró a través de un lecho corto de Celite y el filtrado resultante se concentró al vacío para producir el compuesto del título 6, que se empleó directamente en la siguiente etapa sin más purificación.
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Ejemplo preparativo 7
11
A una disolución del alcohol de lactama (10 g, 77,5 mmol, 1,0 eq.) en CH_{2}Cl_{2} anhidro (50 ml) a 0ºC bajo una atmósfera de N_{2} se le añadió imidazol (6,9 g, 100,8 mmol, 1,3 eq.) (la cantidad de imidazol se ajustó para neutralizar cualquier rastro de AcOH de la etapa anterior) y 14 g/93,0 mmol/1,2 eq. de cloruro de terc-butildimetilsililo (TBSCI). La mezcla resultante se calentó hasta la temperatura ambiente (TA) y se envejeció durante 4 horas. Cuando se consideró que la reacción se hubo completado se añadió CH_{2}Cl_{2} (100 ml), seguido de una disolución de HCl 1 N (30 ml). La capa orgánica se separó y la capa acuosa se retroextrajo con CH_{2}Cl_{2} (2 x 50 ml). La capa orgánica reunida se lavó con una disolución de NaHCO_{3} al 20% (40 ml), salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró al vacío para producir el compuesto deseado como un sólido blanco. Los subproductos que contiene silicio pueden separarse lavando el sólido con heptano frío (3 ml/g) a -78ºC para producir el compuesto del título (7).
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Ejemplo preparativo 8
12
A una disolución a 15ºC de la lactama 7 (2,0 g, 8,22 mmoles) en THF (KF < 200 ppm) se le añadió 1,90 g/9,04 mmoles de bis[trimetilsilil]amida de potasio sólida (KHMDS) en 20 ml de tetrahidrofurano (THF) y se envejeció durante 10 min a temperatura ambiente (TA). Se añadió mesilato recién preparado (0,93 g, 8,22 mmoles, KF < 800 ppm) a la disolución como un aceite puro, y la reacción se calentó hasta 50ºC y se envejeció durante 2,5-3,5 h. La reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se diluyó con MTBE (20 ml) y agua (20 ml). La capa acuosa se cortó y los extractos orgánicos se lavaron con salmuera saturada (10 ml). Tras secar sobre Na_{2}SO_{4}, el disolvente se eliminó para producir un aceite amarillo bruto (8).
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Ejemplo preparativo 9
13
A una disolución de la lactama protegida con terc-butildimetilsililo (TBS) (10 g, 24,2 mmol, 1 eq.) en MTBE seco (40 ml) a 0ºC bajo una atmósfera de N_{2} se le añadió una disolución al 70% de HF\cdotpiridina (4,84 g, 169 mmol, 7 eq.) a lo largo de 15 min. La mezcla resultante se dejó que se calentase hasta la temperatura ambiente y se envejeció durante 12 h, tras lo cual se consideró que la reacción se había completado mediante un análisis de HPLC y de RMN de ^{1}H. La mezcla entonces se diluyó con MTBE (100 ml) y se lavó con H_{2}O fría (30 ml). La capa orgánica entonces se trató con Na_{2}CO_{3} (25 ml), salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró al vacío. El aceite bruto resultante (9) se utilizó directamente en la siguiente etapa. Si se desea, el alcohol puede purificarse mediante una cromatografía en columna de resolución rápida en gel de SiO_{2} (CH_{2}Cl_{2}:MeOH 40:1).
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Ejemplo preparativo 10
14
A una disolución fría (0ºC) del alcohol 9 (9,46 g, 31,6 mmol), DMSO (237,3 mmol, 16,9 ml, 7,5 eq.) y base de Hunig (16,5 ml, 94,9 mmol, 3 eq.) en diclorometano (95 ml) se le añadió SO_{3}\cdotpiridina (15 g, 94,9 mmol, 3 eq.) como un sólido a lo largo de 15 min. La disolución resultante se envejeció a 0ºC durante 1,5 h, tras lo cual se observó el consumo completo del material de partida. La mezcla de reacción entonces se diluyó con EtOAc (150 ml) y se lavó con HCl acuoso frío 4 N (35 ml). La capa orgánica se separó y se trató sucesivamente con una disolución saturada de NaHCO_{3} y salmuera. La disolución entonces se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró al vacío para producir el correspondiente aldehído (7,8 g, 83% de rendimiento del ensayo), que se utilizó en la siguiente etapa sin más purificación.
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Ejemplo preparativo 11
Preparación del fosfonato de sodio 14
Etapa 1
15
A una disolución pura de benzoilformiato de metilo (PhCOCO_{2}Me, 25 g, 0,15 mol, 1 eq.) a 15ºC bajo una atmósfera de N_{2} se le añadió trifluoruro de dietilaminoazufre puro (DAST, 34,4 g, 0,21 mmol, 1,4 eq.) a una velocidad tal que la temperatura interna se mantuvo por debajo de 45ºC. Al final de la adición, la disolución marrón resultante se dejó que se enfriase hasta la temperatura ambiente y se envejeció durante 3 horas más, tras lo cual se observó el consumo completo del material de partida mediante una cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) y una cromatografía de gases/espectroscopía de masas (GC/MS). La mezcla de reacción entonces se vertió lentamente en una mezcla de hielo/H_{2}O (NOTA: hay exotermia) y el producto se extrajo con MTBE (3 x). La capa orgánica reunida entonces se neutralizó lentamente hasta pH 7 con una disolución fría de Na_{2}CO_{3} acuoso al 20% (NOTA: hay evolución de gas), se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró al vacío. El producto bruto se purificó mediante una destilación al vacío (p.e. = 103-105ºC a 3,2-3,33 kPa) para producir el producto deseado (13) como un aceite ligeramente amarillo.
Etapa 2
16
A una disolución de metilfosfonato de dimetilo (28 g, 0,23 mol, 1,05 eq.) en THF seco (400 ml, KF = 30 ppm) bajo una atmósfera de N_{2} a -78ºC se le añadió lentamente una disolución 2 M de bis(trimetilsilil)amida de sodio en THF (115 ml, 0,23 mol, 1,05 eq.) a lo largo de 15 min. La disolución resultante se envejeció durante 30 min y después se trató con difluoroéster metílico puro (PhCF_{2}CO_{2}Me, 40 g, 0,22 mol, 1,0 eq.) a lo largo de 15 min. La mezcla de reacción se envejeció a -78ºC durante 1 h, se calentó lentamente hasta la temperatura ambiente y se concentró a aproximadamente un cuarto de su volumen original, y se añadió MTBE (400 ml) a lo largo de 0,5 h. La suspensión resultante se volvió a envejecer a temperatura ambiente durante 0,5 h y se filtró. La torta húmeda se lavó con MTBE (100 ml) y se secó al vacío bajo una corriente de N_{2}. El producto se aisló como un sólido blanco (14).
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Ejemplo preparativo 12
Preparación del compuesto 16
Etapa 1
17 
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A una disolución a 10ºC de agua (250 ml), IPA (1250 ml) y ácido sulfúrico concentrado (600 ml, 11,1 moles) se le añadió persulfato de potasio sólido (600 g, 2,22 moles) en una porción. Se diluyó cicloheptanona (131,5 ml) hasta un volumen total de 250 ml con IPA y esta disolución se añadió a través de un embudo de adición a la suspensión de persulfato a lo largo de 15 min manteniéndose la temperatura < 15ºC a lo largo de la adición. La reacción se envejeció a 15ºC durante 16-20 h. Cuando toda la cicloheptanona hubo reaccionado, la reacción se filtró para eliminar las sales, manteniendo el filtrado frío. El filtrado se diluyó con MTBE (1250 ml), salmuera saturada (1 l) y agua (500 ml) manteniéndose la temperatura < 30ºC. Tras una transferencia a un embudo de separación, las fases se dejaron en reposo durante 1 h para que se asentaran y se cortó la capa acuosa. La capa orgánica se lavó con Na_{2}CO_{3} saturado (2 x 1 l), o hasta que el corte acuoso se mantuvo básico. La disolución se diluyó con hexanos (1,25 l) y se secó sobre Na_{2}SO_{4} durante 1 h. El disolvente se eliminó al vacío y el aceite se destiló al vacío para producir el éster puro (16) (p.e. = 125ºC, a 4 mm Hg).
Etapa 2
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18 
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A una disolución a -10ºC del éster (10 g, 0,05 moles) y trietilamina (11,1 ml, 0,08 moles) en THF seco (100 ml) se le añadió cloruro de metansulfonilo (MsCl-4,75 ml, 0,06 moles) (diluido 1:1 en THF) manteniéndose la temperatura < 10ºC a lo largo de la adición. La reacción se envejeció durante 30 min a 0,5ºC. Tras completarse, la reacción se diluyó con hexanos (100 ml) y se extinguió con agua (50 ml). La capa acuosa se cortó y la capa orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4} durante 30 min. El disolvente se eliminó al vacío y se produjo un aceite amarillo (16). El mesilato debe prepararse fresco antes de la alquilación de la lactama para minimizar la impurezas.
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Ejemplo 1 7-{(2R)-2-[(1E)-4,4-difluoro-3-oxo-4-fenilbut-1-en-1-il]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoato de isopropilo 
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19 
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A una disolución de fosfonato de sodio 14 (13,7 g, 45,7 mmol, 1,4 eq.) en THF (130 ml) a 0ºC bajo una atmósfera de nitrógeno se le añadió ZnCl_{2} (3,33 g, 24,5 mmol, 0,75 eq.). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos y después se trató con una disolución de aldehído 10 (9,7 g, 32,66 mmol, 1 eq.) en THF (10 ml). La suspensión resultante entonces se calentó hasta 50ºC durante 50 h, tras lo cual se observó una conversión del 94-97%. La mezcla entonces se concentró hasta aproximadamente una tercera parte de su volumen, se diluyó con EtOAc (130 ml), se lavó con H_{2}O (30 ml) y salmuera. La capa orgánica entonces se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró para producir un aceite amarillo (11), que puede purificarse mediante una cromatografía de resolución rápida en SiO_{2} (tolueno:acetona 19:1 \rightarrow 9:1).
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Ejemplo 2 7-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-en-1-il]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoato
20
A una disolución de la enona (450 mg, 1 mmol, 1,0 eq.) en 0,5 M/aproximadamente 4,5 ml/g de PhCH_{3} anhidro o diclorometano (DCM) bajo una atmósfera de N_{2} se le añadió Et_{3}N (0,14 ml, 1 mmol, 1,0 eq.) y HCO_{2}H (0,05 ml, 1,2 mmol, 1,2 eq.) a temperatura ambiente (TA). La disolución resultante se agitó durante 10 min y después se trató con complejo de (R,R)-(-)-Ru-TsDPEN-cimeno^{1} sólido (19 mg, 0,03 mmol, 0,03 eq.) al mismo tiempo. La mezcla de reacción entonces se envejeció a temperatura ambiente durante 2 h, tras lo cual se observó el consumo completo del material de partida. Se añadió terc-butil metil éter (MTBE) (5 ml), seguido de HCl 1 N (2 ml). La capa orgánica se separó, se lavo con Na_{2}CO_{3} saturado, salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró al vacío para producir el compuesto final como un aceite viscoso.
El catalizador también puede generarse in situ mezclando 0,02 eq. mol de [RuCl_{2}(p-cimeno)_{2}] y 0,04 eq. mol de (R,R)-N-tosil-1,2-difeniletilen-1,2-diamina en DCM (diclorometano) en presencia de 0,04 eq. mol de una disolución de KOtBu 1 M en THF (tetrahidrofurano). Después de envejecer durante 10 min a temperatura ambiente se añadió Et_{3}N, seguido de HCO_{2}H y una disolución de la enona en DCM.
El catalizador se preparó mezclando 1 eq. mol de [RuCl_{2}(p-cimeno)_{2}], 2 eq. mol de (R,R)-N-tosil-1,2-difeniletilen-1,2-diamina y 4,2 eq. mol de Et_{3}N en iPrOH a 80ºC durante 1 h (hora). Después de la eliminación del disolvente, el sólido se lavó con H_{2}O fría y se recristalizó en MeOH para producir el catalizador como un sólido naranja.
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Ejemplo 3 Ácido 7-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-en-1-il]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoico
Esquema 2
21
Etapa 1
7-[(2R)-2-({[terc-butil(dimetil)silil]oxi}metil)-6-oxopiperidin-1-il]heptanoato de isopropilo
22
A una disolución de 7 (1,0 g, 4,1 mmol, sintetizado en siete etapas según el procedimiento de la bibliografía en Synthesis, 1998, 1141-1144) en 12 ml de DMF (dimetilformamida) se le añadió hidruro de sodio al 60% (172 mg, 4,3 mmol) y la disolución resultante se agitó durante 30 min a 50ºC, tras lo cual se añadió 7-yodoheptanoato de isopropilo 17 (1,9 g, 1,6 ml, 8,2 mmol) y yoduro de tetrabutilamonio (50 mg). La disolución se agitó a 50ºC durante la noche, tras lo cual se enfrió hasta la temperatura ambiente, se vertió lentamente en una disolución acuosa saturada de cloruro de amonio y se extrajo con éter. Las fases orgánicas entonces se reunieron y se lavaron secuencialmente con H_{2}O, salmuera, y se secaron sobre Na_{2}SO_{4}, se filtraron y se concentraron al vacío. El compuesto se purificó mediante una cromatografía de resolución rápida utilizando acetato de etilo al 75-100%/hexanos para producir 9 como un aceite incoloro. RMN de ^{1}H (500 MHz, acetona-d6): \delta 4,95 (m, 1H), 3,75 (m, 3H), 3,50 (m, 1H), 2,97 (m, 1H), 2,25 (2t, 4H), 2,00 (m, 1H), 1,93 (m, 1H), 1,82 (m, 1H), 1,70-1,56 (m, 4H), 1,52 (m, 1H), 1,40-1,28 (m, 4H), 1,22 (2s, 6H), 0,93 (s, 9H), 0,11 (s, 6H).
Etapa 2
7-[(2R)-2-(hidroximetil)-6-oxopiperidin-1-il]heptanoato de isopropilo
23
A una disolución de 8 (0,80 g, 2,3 mmol) en 10 ml se le añadió TBAF (fluoruro de tetrabutilamonio) (0,25 ml de una disolución 1 M en THF) a temperatura ambiente y se agitó durante 18 horas. La disolución entonces se extinguió con NaHCO_{3} saturado y se extrajo con acetato de etilo. Las capas orgánicas se reunieron y se lavaron con agua, después con salmuera, se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron al vacío para producir 9 como un aceite incoloro. RMN de ^{1}H (500 MHz, acetona-d6): \delta 4,95 (m, 6H), 3,97 (t, 1H, OH), 3,76 (m, 1H), 3,66 (m, 2H), 3,48 (m, 1H), 2,98 (m, 1H), 2,24 (m, 4H), 2,08 (m, 1H), 1,90 (m, 1H), 1,79 (m, 1H), 1,70-1,56 (m, 4H), 1,50 (m, 1H), 1,40-1,27 (m, 4H), 1,22 (2s, 6H).
Etapa 3
7-{(2R)-2-[(1E)-4,4-difluoro-3-oxo-4-fenilbut-1-en-1-il]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoato de isopropilo
24
A un matraz purgado con N_{2} (g) se le añadió CH_{2}Cl_{2} (40 ml) y después se le añadió dimetilsulfóxido (0,115 g, 0,10 ml, 1,48 mmol). La disolución entonces se enfrió hasta -78ºC y, durante una agitación vigorosa, se añadió gota a gota cloruro de oxalilo (0,17 g, 0,12 ml, 1,3 mmol). Después de 30 min se añadió una disolución de 9 (0,35 g, 1,2 mmol) en 5 ml de CH_{2}Cl_{2} a través de una cánula. Se continuó la agitación durante 30 min más a -78ºC. Se añadió trietilamina (0,31 g, 0,43 ml, 3,1 mmol) gota a gota y después de 15 minutos de agitación se concentró al vacío sin el uso del baño. Se empleó una disolución de éter dietílico/acetato de etilo 1:1 (100 ml) para filtrar las sales de trietilamina, y la disolución se concentró al vacío. El aldehído bruto, 10, entonces se diluyó en 5 ml de THF y se añadió a una disolución de éster dimetílico del ácido (2-oxo-3-fenilpropil)fosfónico (0,34 g, 1,4 mmol) e hidruro de sodio al 60% (52 mg, 1,3 mmol) en 15 ml de THF a 0ºC que se había premezclado durante una hora. Se añadió cloruro de cinc (x ml de una disolución 1 M en THF) y la mezcla de reacción se agitó durante la noche a 50ºC. La disolución se extinguió con una disolución acuosa saturada de cloruro de amonio y se extrajo con acetato de etilo. Las fases orgánicas entonces se reunieron y se lavaron secuencialmente con H_{2}O, salmuera y se secaron sobre Na_{2}SO_{4}, se filtraron y se concentraron al vacío. El compuesto se purificó mediante una cromatografía de resolución rápida utilizando acetato de etilo al 50-80%/hexanos para producir 11 como un aceite incoloro. RMN de ^{1}H (400 MHz, acetona-d6): \delta 7,65-7,55 (m, 5H), 7,11 (dd, 1H), 6,67 (d, 1H), 4,95 (m, 1H), 4,40 (m, 1H), 3,78 (m, 1H), 2,60 (m, 1H), 2,25 (m, 4H), 2,02 (m, 1H), 1,90 (m, 1H), 1,68 (m, 2H), 1,53-1,36 (m, 4H), 1,35-1,17 (m, 10H).
Etapa 4
7-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-en-1-il]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoato de isopropilo 
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25 
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A. Síntesis de butil-(S)-CBS en tolueno: A una disolución de ligando (S)-CBS (11,53 g, 45,5 mmol) en tolueno (110 ml) se le añadió ácido butilborónico (5,1 g, 47,8 mmol) y la mezcla se calentó a reflujo durante la noche con un condensador Dean-Stark. Esta disolución final era 0,48 M y se empleó directamente.
B. Reducción: A una disolución de catecolborano (3,35 ml, 31,4 mmol) en tolueno (400 ml) enfriada hasta -78ºC se le añadieron 68 ml (32,6 mmol) de una disolución de (S)-2-butil-CBS-oxazaborolidina bajo una atmósfera de nitrógeno y la mezcla se agitó a esa temperatura durante 1 hora (h). Se añadió la cetona 11 (7 g, 15,6 mmol) en tolueno (420 ml) gota a gota durante 1 h bajo una atmósfera de nitrógeno, y la mezcla se agitó a esa temperatura hasta que todo el material de partida desapareció (normalmente en 30 min). A la mezcla entonces se le añadieron 200 ml de HCl 1 N y se dejó que la mezcla se calentase hasta la temperatura ambiente con agitación vigorosa. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (se formó una emulsión durante la extracción y la suspensión se filtró a través de Celite para eliminar la emulsión). El producto bruto se purificó mediante una cromatografía de resolución rápida. Una elución con AE/hexanos (al 70-100%) produjo el alcohol deseado como una mezcla de dos diastereómeros en una proporción de 12:1. La mezcla se separó con facilidad mediante una HPLC (cromatografía líquida de alta resolución) preparativa utilizando una columna Pak AD® quiral, empleando iPrOH al 54% en hexanos como eluyentes (controlando a \lambda 214 nm). El isómero no deseado eluyó primero, seguido del isómero deseado 12. RMN de ^{1}H (400 MHz, acetona-d6): \delta 7,6-7,5 (m, 2H), 7,5-7,4 (m, 3H), 5,80 (dd, 1H), 5,6 (dd, 1H), 5,0-4,9 (m, 2H), 4,7-4,6 (m, 1H), 4,1-4,0 (m, 1H), 3,8-3,7 (m, 1H),
2,6-2,5 (m,1H), 2,3-2,2 (m, 4H), 1,9-1,8 (m, 1H), 1,75-1,55 (m, 5H), 1,55-1,4 (m, 2H), 1,4-1,22 (m, 4H), 1,22 (d, 6H).
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Etapa 5
Ácido 7-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-en-1-il]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoico
26
A una disolución de 12 (39 mg, 0,089 mmol) en 2,75 ml de THF:MeOH:agua 2,5:2,5:1 a 0ºC se le añadió hidróxido de litio (145 \mul de una disolución 2 M en agua) y se dejó que la disolución resultante se calentase hasta la temperatura ambiente y se agitó durante la noche. A la disolución se le añadió una disolución acuosa 1 M de HCl (1 ml) y la disolución se extrajo con acetato de etilo. Las fases orgánicas entonces se reunieron, se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron al vacío. El compuesto se purificó mediante una cromatografía de resolución rápida utilizando CH_{2}Cl_{2}/metanol/ácido acético 49-45%/1-5%/1 gota para producir 18 como un aceite incoloro. RMN de ^{1}H (500 MHz, acetona-d6): \delta 7,6-7,5 (m, sit, 5,8 (dd, 1H), 5,6 (dd, 1H), 5,6 (sa, 1H), 4,6 (m, 1H), 4,1 (m, 1H), 3,7 (m, 1H), 2,6 (m, 1H), 2,4-2,2 (m, 4H), 1,9-1,2 (m, 12H).
Los siguientes ejemplos 4 a 13 pueden prepararse según los ejemplos 1-3 con las modificaciones apropiadas.
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Ejemplo 4 Ácido 7-{(2R)-2-[(3R)-4-(3-bromofenil)-4,4-difluoro-3-hidroxibutil]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoico
MS (+ESI): M/Z 490,1 (M+1)^{+}.
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27 
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Ejemplo 5 Ácido 7-{[(2R)-2-(3R)-3-hidroxi-4-fenilbutil]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoico
RMN de ^{1}H (400 MHZ, CD_{3}OD) \delta 7,3-7,1 (M, 5H), 3,8-3,7 (M, 2H), 3,4 (M, 1H), 2,9-2,7(M, 3H), 2,3 (M, 4H), 1,9-1,3 (M, 16H); MS (-ESI): M/Z 374,2 (M-1)^{-}.
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28 
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Ejemplo 6 5-{3-[(2R)-2-((1E)-(3S)-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil)-6-oxopiperidin-1-il]propil}tiofen-2-carboxilato de metilo
RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 7,6 (d, 1H), 7,2-7,1 (m, 5H), 6,7 (d, 1H), 5,5 (m, 2H), 4,3 (m, 1H), 3,8-3,7 (m, 2H), 3,8 (s, 3H), 2,8-2,6 (m, 6H), 2,3-2,2 (m, 2H), 1,9-1,2 (m, 6H).
29 
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Ejemplo 7 Ácido 5-{3-[(2R)-2-((1E)-(3S)-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil)-6-oxopiperidin-1-il]propil}tiofen-2-carboxílico
RMN de ^{1}H (400 MHZ, CD_{3}OD): \delta 7,6 (D, 1H), 7,2-7,1 (M, 5H), 6,9 (D, 1H), 5,5 (M, 2H), 4,3 (M, 1H), 3,9 (M, 1H), 3,7 (M, 1H), 2,9-2,6 (M, 5H), 2,2 (M, 2H), 1,9-1,5 (M, 6H); MS (-ESI): M/Z 412,1 (M-1)^{-}.
30 
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Ejemplo 8 Ácido 5-{3-[(2R)-2-((3S)-3-hidroxi-4-fenilbutil)-6-oxopiperidin-1-il]propil}tiofen-2-carboxílico
RMN de ^{1}H (400 MHZ, CD_{3}OD): \delta 7,6 (D, 1H), 7,3-7,1 (M, 5H), 6,9 (D, 1H), 3,8 (M, 2H), 3,4 (M, 1H), 3,0-2,9 (M, 1H), 2,8-2,5 (M, 4H), 2,3 (M, 2H), 2,0-1,3 (M, 10H); MS (-ESI): M/Z 414,1 (M-1)^{-}.
31 
\newpage
Ejemplo 9 5-{3-[(2R)-2-((1E)-(3S)-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil)-6-oxopiperidin-1-il]propil}tiofen-2-carboxilato de isopropilo
RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 7,6 (d, 1H), 7,3-7,1 (m, 5H), 6,8 (d, 1H), 5,5 (m, 2H), 5,1 (m, 1H), 4,4 (m, 1H), 3,9-3,8 (m, 2H), 3,3 (sa, 1H), 2,8 (m, 4H), 2,7 (m, 1H), 2,3 (m, 2H), 1,9-1,6 (m, 6H), 1,3 (dd, 6H); MS (+ESI): M/Z 456,4 (M+1)^{+}.
32
Ejemplo 10 5-{3-[(2R)-2-((3S)-3-hidroxi-4-fenilbutil)-6-oxopiperidin-1-il]propil}tiofen-2-carboxilato de isopropilo
RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 7,6 (d, 1H), 7,3-7,1 (m, 5H), 6,8 (d, 1H), 5,2 (m, 1H), 3,9-3,8 (m, 2H), 3,3 (m, 1H), 2,9-2,8 (m, 4H), 2,7-2,6 (m, 1H), 2,4-2,3 (m, 3H), 2,0-1,2 (m, 10H), 1,3 (d, 6H); MS (+ESI): M/Z 458,2 (M+1)^{+}.
33
Ejemplo 11 6-[(3R)-3-hidroxi-4-fenilbutil]-1-[6-(1H-tetrazol-5-il)hexil]-piperidin-2-ona
RMN de ^{1}H (400 MHz, CD_{3}OD): \delta 7,3-7,1 (m, 5H), 3,8-3,7 (m, 2H), 3,3 (m, 1H), 2,9-2,7 (m, 5H), 2,3 (m, 2H), 1,9-1,3 (m, 16H); MS (+ESI): M/Z 400,3 (M+1)^{+}.
34
Ejemplo 12 (5Z)-7-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-en-1-il]-1-oxopiperidin-1-il}hept-5-enoato de isopropilo
MS (+ESI): M/Z 450,3 (M+1)^{+}.
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35 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 13 Ácido (5Z)-7-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-en-1-il]-6-oxopiperidin-1-il}hept-5-enoico
MS (-ESI): m/z 406,1 (M-1)^{-}.
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36 
\newpage
Ejemplo 14 7-{(4R)-4-[(1E)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-en-il]-2-oxo-1,3-oxanzinan-3-il}heptanoato de isopropilo
MS (+ESI): M/Z 454 (M+1)^{+}.
Esquema 3
37 
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Etapa 1
Preparación de (4S)-4-[2-(4-metoxifenoxi)etil]-2,2-dimetil-1,3-dioxolano
A una disolución de 2-[(4S)-2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il]etanol (Aldrich, 5 g, 34,2 mmol) en THF se le añadió hidruro de sodio al 60% (1,504 g, 37,6 mmol, 1,1 eq.) de modo discontinuo y la mezcla se agitó durante 1 h (disolución turbia). La mezcla se enfrió hasta 0ºC y a ésta se le añadió cloruro de 4-metoxibencilo (5,89 g, 37,6 mmol, 1,1 eq.) en una porción, y la mezcla se agitó a esa temperatura durante 30 min y se calentó hasta 65-70ºC durante la noche. Después de enfriar hasta la temperatura ambiente y extinguir con NH_{4}Cl saturado/agua, la mezcla se extrajo con acetato de etilo (2 x) y los extractos orgánicos se lavaron con agua, salmuera y se secaron sobre MgSO_{4}. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró al vacío. El producto bruto se purificó mediante una cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 15%/hexanos) para producir el producto deseado como un aceite incoloro. RMN de ^{1}H (400 MHz, acetona-d_{6}): \delta 7,28 (2 H, d), 6,93-6,91 (2 H, m), 4,43 (2 H, s), 4,20-4,14 (1 H, m), 4,04-3,98 (1 H, m), 3,80 (3 H, s), 3,56-3,50 (3 H, m), 1,88-1,76 (2 H, m), 1,31 (3 H, s), 1,28 (3 H, s).
Etapa 2
Preparación de (2S)-4-(4-metoxifenoxi)butan-1,2-diol
Una disolución de (4S)-4-[2-(4-metoxifenoxi)etil]-2,2-dimetil-1,3-dioxolano (8,2 g, 30,8 mmol) en AcOH/agua se agitó a temperatura ambiente durante 5 h y se concentró al vacío. El residuo se coevaporó con tolueno (3 x) y después se bombeó a un vacío elevado para producir el producto deseado. RMN de ^{1}H (400 MHz, acetona-d_{6}): \delta 7,28 (2 H, d), 6,91 (2 H, d), 4,43 (2 H, s), 3,80 (3 H, s), 3,77 (1H, m), 3,66-3,42 (5 H, m),1,86-1,76 (1 H, m), 1,68-1,60 (1 H, m).
\newpage
Etapa 3
Preparación de metansulfonato de (1S)-1-({[terc-butil(dimetil)silil]oxi}metil)-3-(4-metoxifenoxi)propilo
A una disolución de (2S)-4-(4-metoxifenoxi)butan-1,2-diol (7 g, 30,9 mmol) e imidazol (4,21 g) en DMF (50 ml) se le añadió cloruro de t-butildimetilsililo (4,88 g, 32,4 mmol, 1,05 eq.) en una porción a 0ºC y la mezcla se agitó a esa temperatura durante 1 h y se diluyó con agua/éter. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con éter (2 x). Los extractos se reunieron, se lavaron con agua, salmuera, se secaron y se filtraron. El filtrado se concentró al vacío para producir 10,8 g del producto bruto de (2S)-1-{[terc-butil(dimetil)silil]oxi}-4-(4-metoxifenoxi)butan-2-ol como un aceite incoloro. La RMN del producto bruto indicó que el producto era más del 95% puro y por tanto se utilizó directamente sin purificación. RMN de ^{1}H (400 MHz, acetona-d_{6}): \delta 7,28 (2 H, d), 6,92-6,90 (2 H, m), 4,43 (2 H, s), 3,80 (3 H, s), 3,75 (1H, m), 3,67-3,51 (5 H, m), 1,89-1,81 (1 H, m), 1,66-1,58 (1 H, m), 0,91 (s, 9 H), 0,09 (s, 6 H).
A una disolución de (2S)-1-{[terc-butil(dimetil)silil]oxi}-4-(4-metoxifenoxi)butan-2-ol (10,5 g, 30,8 mmol) en diclorometano (DCM) (50 ml) a 0ºC se le añadió trietilamina (6,5 ml), seguido de MsCl (2,9 ml) gota a gota y la mezcla (suspensión de color amarillo claro) se agitó durante 1 h y se extinguió con agua. Las capas se separaron y la capa orgánica se secó sobre MgSO_{4}. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró al vacío para producir el metansulfonato deseado. RMN de ^{1}H (400 MHz, acetona-d_{6}): \delta 7,29 (2 H, d), 6,91 (2 H, d), 4,84-4,78 (1 H, m), 4,49-4,41 (2 H, m), 3,90 (1 H, dd), 3,84 (1 H, dd), 3,80 (3 H, s), 3,62-3,54 (2 H, m), 3,09 (3 H, s), 2,04-1,90 (2 H, m), 0,91 (s, 9 H), 0,12-0,06 (6 H, m).
Etapa 4
Preparación de {[(2R)-2-azido-4-(4-metoxifenoxi)butil]oxi}-(terc-butil)dimetilsilano
Una mezcla de metansulfonato de (1S)-1-({[terc-butil(dimetil)silil]oxi}metil)-3-(4-metoxifenoxi)propilo (13 g) y NaN_{3} (10 g) en DMF (50 ml) se calentó hasta 60-70ºC bajo una atmósfera de N_{2} durante la noche y se enfrió hasta la temperatura ambiente. La mezcla se diluyó con éter/agua y se extrajo con éter (3 x). Los extractos etéreos se lavaron con agua, salmuera y luego se trataron como se hace de modo habitual. El producto bruto se purificó mediante una cromatografía de resolución rápida (acetato de etilo al 5%/hexanos) para producir el producto de azido deseado. RMN de ^{1}H (400 MHz, acetona-d_{6}): \delta 7,29 (2 H, d), 6,92 (2 H, d), 4,45 (2 H, s), 3,87 (1 H, dd), 3,80 (3 H, s), 3,70-3,54 (4 H, m), 1,85-1,77 (1 H, m), 1,68-1,60 (1 H, m), 0,93 (9 H, s), 0,11 (6 H, s).
Etapa 5
Preparación de (3R)-3-amino-4-{[terc-butil(dimetil)silil]oxi}butan-1-ol
A una disolución de {[(2R)-2-azido-4-(4-metoxifenoxi)butil]oxi}-(terc-butil)dimetilsilano (4,7 g, 12,86 mmol) en DCM/agua 19:1 a 0ºC se le añadió DDQ (2,3-dicloro-5,6-diciano-1,4-benzoquinona) (3,5 g, 15,43 mmol, 1,2 eq.) y la mezcla se agitó (desde 0ºC hasta la temperatura ambiente) hasta que todo el material de partida hubo desaparecido según indicó un análisis de TLC (cromatografía en capa fina). Entonces se eliminó la mayor parte del DCM al vacío y el residuo se disolvió en acetato de etilo. La disolución de acetato de etilo se lavó con agua y NaHCO_{3} saturado repetidas veces hasta que se obtuvo una disolución orgánica de color amarillo pálido. La disolución orgánica se secó y el producto bruto se purificó mediante una cromatografía en gel de sílice (acetona al 5%/tolueno) para producir el producto deseado, (3R)-3-azido-4-{[terc-butil(dimetil)silil]oxi}butan-1-ol. RMN de ^{1}H (400 MHz, acetona-d_{6}): \delta 3,89 (1 H, dd), 3,73-3,65 (5 H, m), 1,76-1,68 (1 H, m), 1,62-1,54 (1 H, m), 0,94 (9 H, s), 0,13 (6 H, s).
Una mezcla de (3R)-3-azido-4-{[terc-butil(dimetil)silil]oxi}butan-1-ol (2,94 g) y catalizador de Lindlar (Pd al 5%/CaCO_{3}, 1,27 g) en etanol (50 ml) se hidrogenó bajo 3523,22 kPa de H_{2} durante 3,5 h y se filtró. El filtrado se concentró para producir 2,97 g del producto bruto, (3R)-3-amino-4-{[terc-butil(dimetil)silil]oxi}butan-1-ol con buena pureza. RMN de ^{1}H (CDCl_{3}, 400 MHz): 3,85 (2 H, t), 3,54 (1 H, dd), 3,42 (1 H, dd), 3,03-2,97 (1 H, m), 2,44 (3 H, sa), 1,64-1,52 (2 H, m), 0,92 (9 H, s), 0,08 (6 H, s).
Etapa 6
Preparación de (4R)-4-({[terc-butil(dimetil)silil]oxi}metil)-1,3-oxazinan-2-ona
A una disolución de (3R)-3-amino-4-{[terc-butil(dimetil)silil]oxi}butan-1-ol (2,63 g, 12 mmol) en DCM (100 ml) a 0ºC se le añadió piridina (3 ml), seguido de fosgeno (disolución al 20% en tolueno, 1,9 M, 8,5 ml) gota a gota y la mezcla se agitó durante 30 min y se dejó que se calentase hasta la temperatura ambiente y se extinguió con agua. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con DCM una vez. Las capas orgánicas se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron. El producto deseado, (4R)-4-({[terc-butil(dimetil)silil]oxi}metil)-1,3-oxazinan-2-ona, se obtuvo a partir de una cristalización en éter/hexanos a -20ºC como un sólido de color amarillo claro. RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}) 5,52 (sa, 1H), 4,38-4,33 (m, 1H), 4,28-4,22 (m, 1H), 3,70-3,59 (m, 2H), 3,46 (t, 1H), 1,97-1,93 (m, 1H), 1,72-1,67 (m, 1H), 0,91 (s, 9H), 0,90 (s, 6H).
\newpage
Etapa 7
Preparación de 7-[(4R)-4-(hidroximetil)-2-oxo-1,3-oxazinan-3-il]heptanoato de isopropilo
A una disolución de (4R)-4-({[terc-butil(dimetil)silil]oxi}metil)-1,3-oxazinan-2-ona (0,51 g, 2,078 mmol) en DMF (10 ml) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de N_{2} se le añadió KHMDS (0,5 M en tolueno, 5 ml) gota a gota (se formó un precipitado con aspecto de gel) y la mezcla se agitó durante 10 min. Entonces se añadió 7-yodoheptanoato de isopropilo (1,24 g, 4,16 mmol, 2 eq.) en una porción y la mezcla se agitó a 65ºC durante 5 h más y se enfrió hasta la temperatura ambiente y se diluyó con agua/éter. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con éter. Las capas orgánicas se reunieron, se lavaron con agua y salmuera, se secaron sobre MgSO_{4} y se filtraron. El filtrado se concentró al vacío y el residuo se purificó mediante una cromatografía en columna (acetona al 15-30%/tolueno) para producir el producto deseado, 7-[(4R)-4-({[terc-butil(dimetil)silil]oxi}metil)-2-oxo-1,3-oxazinan-3-il]heptanoato de isopropilo, como un aceite incoloro. RMN de ^{1}H (400 MHz, acetona-d_{6}): \delta 4,98-4,90 (1 H, m), 4,38-4,30 (1 H, m), 4,16-4,12 (1 H, m), 3,83-3,77 (2 H, m), 3,56-3,48 (2 H, m), 3,15-3,07 (1 H, m), 2,26 (2 H, t), 2,11-2,09 (2 H, m), 1,69-1,53 (4 H, m), 1,41-1,27 (4H, m), 1,21 (6 H, d), 0,92 (9 H, s), 0,12 (6 H, s).
Al producto obtenido de esta manera (0,6 g, 1,444 mmol) en THF (5 ml) se le añadió AcOH (0,06 ml) y TBAF (1 M en THF, 2,9 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 min y después se concentró. El producto bruto se purificó mediante una cromatografía de resolución rápida (acetona al 30-50%/tolueno) para producir el producto deseado, 7-[(4R)-4-(hidroximetil)-2-oxo-1,3-oxazinan-3-il]heptanoato de isopropilo. RMN de ^{1}H (400 MHz, acetona-d_{6}): \delta 5,00-4,90 (1 H, m), 4,37-4,31 (1 H, m), 4,16-4,10 (2 H, m), 3,75-3,65 (2 H, m), 3,54-3,46 (2 H, m), 3,15-3,07 (1 H, m), 2,26 (2 H, t), 2,18-1,99 (2 H, m), 1,67-1,52 (4 H, m), 1,41-1,27 (4 H, m), 1,21 (6 H, d, J = 6,2 Hz).
Etapa 8
Preparación de 7-{(4R)-4-[(1E)-4,4-difluoro-3-oxo-4-fenilbut-1-en-1-il]-2-oxo-1,3-oxazinan-3-il}heptanoato de isopropilo
A: Oxidación del alcohol. A una disolución de DMSO (dimetilsulfóxido) (113 ul, 1,592 mmol, 1,2 eq.) en DCM (5 ml) a -78ºC se le añadió cloruro de oxalilo (128 ul, 1,46 mmol, 1,1 eq.) gota a gota y la mezcla se agitó a esa temperatura durante 15 min. Se añadió 7-[(4R)-4-(hidroximetil)-2-oxo-1,3-oxazinan-3-il]heptanoato de isopropilo (400 mg, 1,327 mmol) en DCM (3 ml) mediante una cánula y la mezcla se agitó durante 15 min más. Entonces se añadió trietilamina (429 ul, 3,05 mmol, 2,3 eq.) en una porción y la mezcla se agitó a -78ºC durante 30 min y se dejó que se calentase hasta 0ºC lentamente y se concentró al vacío. La mezcla se resuspendió en acetato de etilo y se filtró. El filtrado se concentró al vacío para producir el aldehído de 7-[(4R)-4-formil-2-oxo-1,3-oxazinan-3-il]heptanoato de isopropilo bruto con una buena pureza. RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 9,69 (1 H, d), 5,04-4,96 (1 H, m), 4,29-4,23 (1 H, m), 4,16-4,00 (2 H, m), 3,79-3,71 (1 H, m), 3,02-2,94 (1 H, m), 2,30-2,24 (4 H, m), 1,66-1,58 (4 H, m), 1,42-1,28 (4 H, m), 1,24 (6 H, d).
B: Preparación de la sal sódica del (3,3-difluoro-2-oxo-3-fenilpropil)fosfonato de dimetilo. A una disolución de (3,3-difluoro-2-oxo-3-fenilpropil)fosfonato de dimetilo (5,24 g, 18,84 mmol) en éter (50 ml) se le añadió hidruro de sodio (dispersión en aceite al 60%, 791 mg, 19,78 mmol, 1,05 eq.) de modo discontinuo y la suspensión blanca se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla se filtró y el sólido blanco se lavó con éter/hexano. El sólido obtenido de esta forma se secó a un vacío elevado para producir un polvo blanco.
C: Reacción de Horner-Emmons-Smith. A una disolución de 7-[(4R)-4-formil-2-oxo-1,3-oxazinan-3-il]heptanoato de isopropilo (207 mg, 0,691 mmol) en THF (3 ml) se le añadió cloruro de cinc (0,5 M en THF, 1,52 ml, 0,76 mmol, 1,1 eq.), seguido de la sal sódica del (3,3-difluoro-2-oxo-3-fenilpropil)fosfonato de dimetilo (270 mg, 0,898 mmol, 1,3 eq.) como un sólido, y la mezcla se calentó hasta 60ºC durante la noche y se concentró. El residuo se purificó mediante una cromatografía en columna (acetato de etilo al 80%/hexanos) para producir el producto deseado, 7-{(4R)-4-[(1E)-4,4-difluoro-3-oxo-4-fenilbut-1-en-1-il]-2-oxo-1,3-oxazinan-3-il}heptanoato de isopropilo, como un aceite de color amarillo claro. MS (+ESI): m/z 452 (M+1)^{+}.
Etapa 9
Compuesto 29: 7-{(4R)-4-[(1E)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-en-1-il]-2-oxo-1,3-oxazinan-3-il}heptanoato de isopropilo
A una disolución de catecolborano (107 mg) en tolueno (1 ml) se le añadió (S)-2-metil-CBS-oxoborolidina (1 M en tolueno, 0,89 ml) bajo una atmósfera de N_{2} a -78ºC y la mezcla se agitó a esa temperatura durante 1 h. Se añadió 7-{(4R)-4-[(1E)-4,4-difluoro-3-oxo-4-fenilbut-1-en-1-il]-2-oxo-1,3-oxazinan-3-il}heptanoato de isopropilo (200 mg) en tolueno (2 ml) mediante una cánula lentamente, y la mezcla se agitó durante una hora más y se extinguió con HCl 1 N. Se dejó que la mezcla se calentase hasta la temperatura ambiente y se extrajo con DCM (2 x). Las capas orgánicas se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se filtraron. El filtrado se concentró al vacío y el residuo se purificó mediante una cromatografía en columna (acetato de etilo al 80-100%/hexanos) para producir el compuesto del título. MS (+ESI): m/z 454 (M+1)^{+}.
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Ejemplo 15 Ácido 7-{(4R)-4-[(1E)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-en-1-il]-2-oxo-1,3-oxazinan-3-il}heptanoico
MS (-ESI): m/z 410 (M-1)^{-}.
38
El éster de isopropilo del compuesto 29 primero se trató con una mezcla de LiOH en metanol/agua, seguido de una acidificación con HCl 1 N y una extracción con acetato de etilo para producir el compuesto del título. MS (-ESI): m/z 410 (M-1)^{-}.
I. Efectos de un agonista de EP4 sobre la presión intraocular (IOP) en conejos y monos Animales
Se emplean conejos Dutch Belted machos que no habían sido expuestos a fármacos y monos cynomolgus hembra en este estudio. El cuidado y el tratamiento de los animales en esta investigación cumplen las directrices del National Institute of Health (NIH) y el acuerdo de the Association for Research in Vision and Ophtalmology (ARVO) sobre el uso de animales en investigación. Todos los procedimientos experimentales están aprobados por the Institutional Animal Care and Use Committee of Merck and Company.
Preparación y administración de los fármacos
Las concentraciones de fármacos se expresan en términos del ingrediente activo (base). Los compuestos de esta invención se disuelven en disolución salina fisiológica a 0,01%, 0,001%, 0,0001% para el estudio con conejos, y a 0,05%, 0,005% para los estudios con monos. Se administran por vía tópica partes alícuotas del fármaco o de vehículo (25 ul) de forma unilateral o bilateral. En aplicaciones unilaterales, los ojos contralaterales reciben un volumen igual de disolución salina. Se aplica proparacaína (al 0,5%) a la córnea antes de una tonometría para minimizar las molestias. Se registra la presión intraocular (IOP) utilizando un tonómetro neumático (Alcon Application Pneumatonograph) o un aparato equivalente.
Análisis
Los resultados se expresan como los cambios en la IOP desde el nivel basal medido justo antes de la administración del fármaco o del vehículo, y representan la media más o menos la desviación estándar. Se realizan las comparaciones estadísticas utilizando el ensayo de la t de Student para datos no apareados entre las respuestas de los animales tratados con fármacos y tratados con vehículo, y para datos apareados entre los ojos ipsilaterales y contralaterales en intervalos de tiempo comparables. La significancia de los datos también se determina como la diferencia con respecto al valor "t-0" utilizando el ensayo de la t de Dunnett. Los asteriscos representan un nivel de significancia de p<0,05.
A. Medición de la presión intraocular en conejos
Se mantuvieron conejos Dutch Belted macho con un peso de 2,5-4,0 kg en un ciclo de luz/oscuridad de 12 horas y con pienso para conejos. Todos los experimentos se realizaron en el mismo momento del día para minimizar la variabilidad relacionada con el ritmo diurno. Se mide la IOP antes del tratamiento y después se instilan los compuestos de esta invención o vehículo (una gota de 25 ul) en uno o ambos ojos, y se mide la IOP a 30, 60, 120, 180, 240, 300 y 360 minutos después de la instilación. En algunos casos, se evalúa el mismo número de animales tratados de modo bilateral sólo con vehículo y se compara con los animales tratados con fármaco como controles paralelos.
B. Mediciones de la presión intraocular en monos
Se induce una hipertensión ocular unilateral del ojo derecho en monos cynomolgus hembra con un peso de entre 2 y 3 kg mediante fotocoagulación de la red trabecular con un sistema de láser de argón (Coherent NOVUS 2000, Palo Alto, EEUU) utilizando el procedimiento de Lee et al. (1985). El aumento prolongado en la presión intraocular (IOP) produce cambios en la cabeza del nervio óptico que son similares a los encontrados en pacientes con glaucoma.
Para las mediciones de la IOP, los monos se mantuvieron en posición sentada en sillas de contención durante la duración del experimento. Los animales se anestesiaron ligeramente mediante una inyección intramuscular de clorhidrato de quetamina (3-5 mg/kg) aproximadamente cinco minutos antes de cada medición de la IOP, y se instiló una gota de proparacaína al 0,5% antes de registrar la IOP. La IOP se mide utilizando un tonómetro neumático (Alcon Applanation Tonometer) o un neumatonómetro Digilab (Bio-Rad Ophtalmic Division, Cambridge, MA, EEUU).
La IOP se mide antes del tratamiento y en general a los 30, 60, 124, 180, 300 y 360 minutos después del tratamiento. También se obtienen los valores de la línea de base en estos momentos del tiempo en general dos o tres días antes del tratamiento. El tratamiento consiste en instilar una gota de 25 ul de los compuestos de la invención (al 0,05 y al 0,005%) o de vehículo (disolución salina). Se emplea un periodo de eliminación de al menos una semana antes de ensayar en el mismo animal. El ojo normotenso (contralateral al hipertenso) se trata de una manera exactamente similar al ojo hipertenso. Las mediciones de la IOP para ambos ojos se comparan con los correspondientes valores de la línea de base en el mismo momento. Los resultados se expresan como la media más o menos la desviación estándar en mm Hg. El intervalo de actividad de los compuestos de esta invención para un uso ocular es de entre 0,01 y 100.000 nM.
II. Ensayos de unión de radioligandos
Los ensayos utilizados para ensayar estos compuestos se realizaron fundamentalmente como se describe en Abramovitz M., Adam M., Boie Y., Carriere M., Denis D., Godbout C., Lamontagne S., Rochette C., Sawyer N., Tremblay N.M., Belley M., Gallant M., Dufresne C., Gareau Y., Ruel R., Juteau H., Labelle M., Ouimet N., Metters K.M., The utilization of recombinant prostanoid receptors to determine the affinities and selectivities of prostaglandins and related analogs, Biochim. Biophys. Acta, 2000, 17 de enero, 1483(2):285-293, y se analizan a continuación:
Expresión estable de receptores de prostanoides en la línea celular de riñón embriónica humana (HEK) 293(EBNA)
Se subclonaron ADNc del receptor de prostanoides (PG) que se corresponden con las secuencias codificadoras de longitud completa, en los sitios apropiados del vector de expresión de mamífero pCEP4 (Invitrogen). Se preparó el ADN del plásmido pCEP4PG utilizando el kit de preparación de plásmidos Qiagen (QIAGEN) y se transfectó en células HEK 293(EBNA) utilizando LipofectAMINE® (GIBCO-BRL) según las instrucciones del fabricante. Las células HEK 293(EBNA) que expresan el ADNc junto con el gen de resistencia a higromicina se seleccionaron en medio de Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) suplementado con suero bovino fetal inactivado con calor al 10%, piruvato de sodio 1 mM, penicilina-G 100 U/ml, sulfato de estreptomicina 100 \mug/ml, GENETICIN^{TM} (G418) activo 250 \mug/ml (todos de Life Technologies, Inc., BRL) e higromicina 200 \mug/ml (Calbiochem). Las colonias individuales se aislaron después de 2-3 semanas de crecimiento con selección utilizando el procedimiento del anillo de clonación y posteriormente se expandieron en líneas celulares clónicas. Se evaluó la expresión del ADNc del receptor mediante ensayos de unión al receptor.
Las células HEK 293(EBNA) se cultivaron en medio completo DMEM suplementado a 37ºC en una atmósfera humidificada de CO_{2} al 6% en aire, después se recolectaron y se prepararon las membranas mediante centrifugación diferencial (1000 x g durante 10 min, después 160.000 x g durante 30 min, todo a 4ºC) tras la lisis de las células mediante cavitación de nitrógeno a 5515,81 kPa durante 30 min sobre hielo en presencia de inhibidores de proteasas (fluoruro de fenilmetilsulfonilo 2 mM, E-64 10 \muM, leupeptina 100 \muM y pepstatina 0,05 mg/ml). Los sedimentos de 160.000 x g se resuspendieron en HEPES 10 mM/KOH (pH 7,4) que contenía EDTA 1 mM a aproximadamente 5-10 mg/ml de proteína mediante homogeneización Dounce (Dounce A; 10 golpes), se congelaron en nitrógeno líquido y se conservaron a -80ºC.
Ensayos de unión al receptor de prostanoides
Los ensayos de unión al receptor de prostanoides se realizaron en un volumen de incubación final de 0,2 ml en MES 10 mM/KOH (pH 6,0) (subtipos EP, FP y TP) o HEPES 10 mM/KOH (pH 7,4) (DP e IP) que contenía EDTA 1 mM, MgCl_{2} 10 mM (subtipos EP) o MnCl_{2} 10 mM (DP, FP, IP y TP) y radioligando [[^{3}H]PGE_{2} 0,5-1,0 nM (181 Ci/mmol) para los subtipos EP, [^{3}H]PGD_{2} 0,7 nM (115 Ci/mmol) para DP, [^{3}H]FGF_{2\alpha} 0,95 nM (170 Ci/mmol) para FP, [^{3}H]iloprost 5 nM (16 Ci/mmol) para IP, y [^{3}H]SQ 29548 1,8 nM (46 Ci/mmol) para TP]. Los ensayos de EP_{3} también contenían GTP-\gammaS 100 \muM. La reacción se inició mediante la adición de la proteína de membrana (aproximadamente 30 \mug para EP_{1}, 20 \mug para EP_{2}, 2 \mug para EP_{3}, 10 \mug para EP_{4}, 60 \mug para FP, 30 \mug para DP, 10 \mug para IP, y 10 \mug para TP) procedente de la fracción de 160.000 x g. Los ligandos se añadieron en dimetilsulfóxido (Me_{2}SO) que se mantuvo constante al 1% (en v/v) en todas las incubaciones. Se determinó la unión no específica en presencia de 1 \muM del correspondiente prostanoide no radiactivo. Las incubaciones se realizaron durante 60 min (subtipos EP, FP e IP) o 30 min (DP y TP) a 30ºC (subtipos EP, DP, FP y TP) o a temperatura ambiente (IP), y se terminaron mediante una filtración rápida a través de un Unifilter GF/C de 96 pocillos (Canberra Packard) prehumedecido en tampón de ensayo de incubación sin EDTA (a 4ºC) y utilizando un recolector de células semiautomático de 96 pocillos Tomtec Mach III. Los filtros se lavaron con 3-4 ml del mismo tampón, se secaron durante 90 min a 55ºC y se determinó la radiactividad residual unida a los filtros individuales mediante recuento de centelleo con la adición de 50 \mul de Ultima Gold F (Canberra Packard) utilizando un MicroBeta 1450 (Wallac). Se calculó la unión específica restando la unión no específica de la unión total. La unión específica representa 90-95% de la unión total y era lineal con respecto a las concentraciones de radioligando y proteína utilizadas. La unión total representa 5-10% del radioligando añadido al medio de incubación.
El intervalo de actividad de los compuestos de esta invención para su uso con huesos es de entre 0,01 y
100.000 nM.
Ensayos de reabsorción ósea 1. Procedimientos con animales
Para los experimentos de localizacón de ARNm se eutanizaron ratas Sprague-Dawley de 5 semanas de edad (Charles River) con CO_{2}, se extirparon las tibias y las calvarias, se limpiaron de tejidos blandos y se congelaron inmediatamente en nitrógeno líquido. Para los experimentos de regulación de EP_{4}, ratas de 6 semanas recibieron una única inyección de vehículo (etanol al 7% en agua estéril) o una dosis anabólica de PGE_{2} (Cayman Chemical, Ann Arbor, MI), 3-6 mg/kg en el mismo vehículo) por vía intraperitoneal. Los animales se eutanizaron en varios momentos del tiempo después de la inyección, y las tibias y las calvarias, así como muestras de tejidos pulmonar y renal, se congelaron en nitrógeno líquido.
2. Cultivos celulares
Células periosteales RP-1 se inmortalizan de modo espontáneo a partir de cultivos primarios de células periosteales de tibias de ratas Sprague-Dawley de 4 semanas de edad, y se cultivan en DMEM (BRL, Gaithersburg, MD) con suero bovino fetal al 10% (JRH Biosciences, Lenexa, KS). Estas células no expresan marcadores fenotípicos osteoblásticos en cultivo temprano, pero tras la confluencia expresan colágeno de tipo I, fosfatasa alcalina y osteocalcina, y producen una matriz extracelular mineralizada.
RCT-1 y RCT-3 son líneas celulares clónicas inmortalizadas por el antígeno T grande de SV-40 a partir de células liberadas de calvaria de rata fetal mediante una combinación de digestión con colagenasa/hialuronidasa. Las células RCT-1, derivadas de células liberadas durante los primeros 10 minutos de digestión (fracción I), se cultivan en medio RPMI 1640 (BRL) con suero bovino fetal al 10% y G418 0,4 mg/ml (BRL). Estas células se diferencian y expresan características osteoblásticas tras un tratamiento con ácido retinoico. Las células RCT-3 inmortalizadas a partir de células de la fracción III enriquecidas con osteoblastos, se cultivan en medio F-12 (BRL) con suero bovino fetal al 5% y G418 0,4 mg/ml. También se inmortalizan células TRAB-11 con el antígeno T grande de SV40 procedentes de tibia de rata adulta y se cultivan en medio RPMI 1640 con FBS al 10% y G418 0,4 mg/ml. Se cultivan células de osteosarcoma de rata ROS 17/2.8 en F-12 que contenía FBS al 5%. Se obtienen células de calvaria de rata fetal primarias (fracción III) enriquecidas con osteoblastos mediante una digestión con colagenasa/hialuronidasa de calvarias de fetos de rata de 19 días de edad. Véase, Rodan et al., Growth stimulation of rat calvaria osteoblastic cells by acidic FGF, Endocrinology, 121, 1919-1923 (1987). Las células se liberaron durante una digestión de 30-50 minutos (fracción III) y se cultivaron en medio F-12 que contenía FBS al 5%.
Se emplean células P815 (de mastocitoma de ratón), cultivadas en MEM de Eagle con FBS al 10%, y células NRK (fibroblastos de riñón de rata normales), cultivadas en DMEM con FBS al 10%, como controles positivo y negativo para la expresión de EP_{4}, respectivamente. Véase, Abramovitz et al., Human prostanoid receptors: cloning and characterization, en: Samulesson B. et al. (ed.), Advances in prostaglandin, Thrombosznes and leukotriene research, vol. 23, pp. 499-504 (1995), y de Larco et al., Epithelioid and fibroblastic rat kidney cell clones: EGF receptors and the effect of mouse sarcoma virus transformation, Cell Physiol., 94, 335-342 (1978).
3. Análisis de la transferencia Northern
El ARN total se extrae de la diáfisis o la metáfisis de la tibia y de la calvaria utilizando el procedimiento de isotiocianato de guanidinio-fenol-cloroformo después de pulverizar muestras de hueso congeladas con un homogeneizador de tejidos. Véase, P. Chomczynski et al., Single-step method or RNA isolation by acid guanidium thiocyanate-phenol-chloroform extraction., Analyt. Biochem., 162, 156-159 (1987). Se separan muestras de ARN (20 mg) en geles de agarosa al 0,9%/formaldehído y se trasladan a membranas de nailon (Boehringer Mannheim, Alemania). Las membranas se prehibridan en Hybrisol I (Oncor, Gaithersburg, MD) y ADN de esperma de salmón sonicado 0,5 mg/ml (Boehringer) a 42ºC durante 3 horas, y se hibridan a 42ºC con sondas de ADNc de EP_{2} de rata y EP_{4} de ratón marcadas con [^{32}P]-dCTP (Amersham, Buckinghamshire, Reino Unido) mediante cebado aleatorio utilizando el kit Rediprime (Amersham). Después de la hibridación, las membranas se lavaron 4 veces en 2 x SSC + SDS al 0,1% a temperatura ambiente durante un total de 1 hora y una vez con 0,2 x SSC + SDS al 0,1% a 55ºC durante 1 hora, y después se expusieron a una película Kodak XAR 2 a -70ºC utilizando pantallas intensificadoras. Después de revelar las películas, las sondas unidas se retiraron dos veces con SDS al 0,1% a 80ºC y las membranas se hibridaron con una sonda de ADNc de GAPDH (gliceraldehído 3-fosfato deshidrogenasa) humana (adquirida en Clontech, Palo Alto, CA) para el control de carga.
4. Hibridación in-situ
Se cortan coronalmente tibias congeladas con un espesor de 7 mm y las secciones se montan en portaobjetos cargados (Probe On Plus, Fisher Scientific, Springfield, NJ) y se mantienen a -70ºC hasta la hibridación. Se marcan sondas de ARNc con ^{35}S-UTPgS (ICN, Costa Mesa, CA) utilizando un kit Riboprobe II (Promega, Madison, WI). La hibridación se realiza durante la noche a 50ºC. Véase, M. Weinreb et al., Different pattern of alkaline phosphatase, osteopontin and osteocalcin expression in developing rat bone visualized by in-situ hybridization, J. Bone Miner Res., 5, 831-842 (1990), y D. Shinar et al., Expression of alphav and beta3 integrin subunits in rat osteoclasts in situ, J. Bone Miner. Res., 8, 403-414 (1993). Tras la hibridación y el lavado, las secciones se sumergieron en emulsión Ilford K5 diluida 2:1 con glicerol al 6% en agua a 42ºC y se expusieron a la oscuridad a 4ºC durante 12-14 días. Los portaobjetos se revelaron en Kodak D-19 diluido 1:1 con agua a 15ºC, se fijaron, se lavaron en agua destilada y se montaron con glicerol-gelatina (Sigma) después de una tinción con hematoxilina. Las secciones teñidas se visualizaron al microscopio (Olympus, Hamburgo, Alemania), utilizando una óptica de campo brillante o de campo oscuro.
5. Expresión de EP_{4} en líneas celulares osteoblásticas y en tejido óseo
La expresión de ARN de EP_{4} y EP_{2} se estudia en diversas células derivadas del hueso, incluyendo células de calvaria de rata primarias enriquecidas con osteoblastos, líneas celulares osteoblásticas inmortalizadas procedentes de calvaria de rata fetal o de tibia de rata adulta, y una línea celular de osteosarcoma osteoblástico. La mayoría de las células osteoblásticas y líneas celulares muestran cantidades significativas de ARNm de EP_{4} de 3,8 kb, excepto la línea celular de osteosarcoma de rata ROS 17/2.8. De modo coherente con este descubrimiento, en células ROS 17/2.8, la PGE_{2} no tiene efecto sobre el AMPc intracelular, que resulta notablemente inducido en células RCT-3 y TRAB-11. El tratamiento de células RCT-1 con ácido retinoico, que estimula su diferenciación, reduce los niveles de ARNm de EP_{4}. Los fibroblastos NRK no expresan ARNm de EP_{4}, mientras que las células de mastocitoma P815, utilizadas como control positivo, expresan grandes cantidades de ARNm de EP_{4}. Por contraste con el ARNm de EP_{4}, ninguna de las células osteoblásticas ni de las líneas celulares expresan cantidades detectables de ARNm de EP_{2} en muestras de ARN total. Con respecto a la expresión de ARNm de EP_{4} en células osteoblásticas, el EP_{4} también se expresa en ARN total aislado a partir de tibias y calvarias de ratas de 5 semanas de edad. Por contraste, no se encuentra ARNm de EP_{2} en el ARN de diáfisis de tibia.
6. La PGE_{2} induce la expresión de ARNm de EP_{4} en células periosteales RP-1 y en tibias de ratas adultas
La PGE_{2} potencia su propia producción mediante la sobrerregulación de la expresión de la ciclooxigenasa 2 en osteoblastos y en tejido óseo, amplificando con ello sus propios efectos. La PGE_{2} también aumenta los niveles de ARNm de EP_{4}. Se inmortalizan células RP-1 a partir de un cultivo primario de periostio de tibia de rata adulta. Estas células expresan marcadores fenotípicos de osteoblastos tras la confluencia y forman una matriz ósea mineralizada cuando se implantan en ratones atímicos. De modo similar a las otras células osteoblásticas estudiadas, las células periosteales RP-1 expresan un transcripción de EP_{4} de 3,8 kb. Un tratamiento con PGE_{2} (10^{-6} M) aumenta rápidamente los niveles de ARNm de EP_{4} que alcanzan el pico a las 2 horas después del tratamiento. La PGE_{2} no tiene efecto sobre los niveles de ARN de EP_{2} en las células RCT-3, más diferenciadas, lo cual apunta a una regulación específica de células de la expresión de EP_{4} por PGE_{2}. El ARNm de EP_{2} no se expresa en células RP-1 antes o después del tratamiento con PGE_{2}.
Para estudiar si la PGE_{2} regula los niveles de ARNm de EP_{4} in vivo en tejido óseo, se inyectó PGE_{2} (3-6 mg/kg) a ratas macho de cinco semanas. La administración sistémica de PGE_{2} aumenta rápidamente los niveles de ARNm de EP_{4} en la diáfisis de la tibia, que alcanza el pico a las 2 h después de la inyección. Se observa un efecto similar de la PGE_{2} sobre el ARNm de EP_{4} en la metáfisis de la tibia y en la calvaria. La PGE_{2} induce unos niveles de ARNm de EP_{4} in vitro en células periosteales osteogénicas, e in vivo en tejido óseo de una manera específica del tipo celular y específica del tejido. La PGE_{2} no induce ARNm de EP_{2} en células RP-1 ni en tejido óseo.
7. Localización de la expresión del ARNm de EP_{4} en tejido óseo
Se emplea la hibridación in situ para localizar células que expresan EP_{4} en hueso. En ratas del experimento control (inyectadas con vehículo) se detecta una baja expresión de EP_{4} en células de médula ósea. La administración de una única dosis anabólica de PGE_{2} aumenta la expresión de EP_{4} en células de médula ósea. La distribución de granos de plata sobre la médula ósea no es uniforme y aparece en agrupaciones o parches en muchas áreas de la metáfisis. Dentro de la metáfisis de la tibia, la expresión de EP_{4} se restringe al área esponjosa secundaria y no se observa en la esponjosa primaria. La hibridación de secciones similares con una sonda detectora (control negativo) no muestra ninguna señal.
El EP_{4} se expresa en células osteoblásticas in vitro y en células de médula ósea in vivo, y es sobrerregulado por su ligando, PGE_{2}.
8. Agonistas de la presente invención
Utilizando procedimientos convencionales para medir la actividad agonista, se evaluaron los siguientes compuestos en cultivos celulares y en sistemas sin células con el receptor EP_{4} para determinar la actividad agonista de los compuestos en términos de su valor de EC_{50}.

Claims (19)

1. Un compuesto que tiene la fórmula estructural I:
39
o sus sales farmacéuticamente aceptables, enantiómeros, diastereómeros, o sus mezclas, en la que:
Q es (CH_{2})_{m}, (CH_{2})_{m}(arilo C_{6-10}), (CH_{2})_{m}(heterociclilo C_{5-10}), (CH_{2})_{m}(heterocicloalquilo C_{3-10}), (CH_{2})_{m}(cicloalquilo C_{3-8}), C(halógeno)_{2}, estando dicho cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo o heterociclilo no sustituido o sustituido con 1-3 grupos de R^{a};
X e Y representan independientemente CH_{2}, O, NR^{9} o S, con la condición de que X e Y no son O, NR^{9} o S al mismo tiempo;
U representa H, alquilo C_{1-3} o no está presente cuando W es =O;
W representa OH u =O, con la condición de que U no esté presente cuando W es =O;
R^{1} representa (CH_{2})_{p}hidroxi, (CH_{2})_{p}CN, (CH_{2})_{p}CO_{2}R^{10}, (CH_{2})_{n}SO_{3}R^{6}, -(CH_{2})_{p}CF_{2}SO_{2}NH_{2}, -(CH_{2})_{p}SO_{2}NH_{2},
-(CH_{2})_{p}CONHSO_{2}R^{2}, -(CH_{2})_{p}SO_{2}NHCOR^{2}, -(CH_{2})_{p}PO(OH)_{2}, (CH_{2})_{p}CONHPO_{2}R^{6}, (CH_{2})_{p}CONHR^{8}, (CH_{2})_{p}(alcoxi C_{1-4}), -(CH_{2})_{p}cicloalquilo, (CH_{2})_{p}hidroximetil cetona o (CH_{2})_{n}heterociclilo, estando dicho heterociclilo no sustituido o sustituido con 1 a 3 grupos de R^{a} y contiene opcionalmente un grupo hidroxilo ácido;
R^{2} representa independientemente alquilo C_{1-10}, (CH_{2})_{m}(arilo C_{6-10}), (CH_{2})_{m}(heterociclilo C_{5-10}), (CH_{2})_{m}(heterocicloalquilo C_{3-10}), (CH_{2})_{m}(cicloalquilo C_{3-8}), O-alquilo C_{1-10}, O-arilo C_{6-10}, O-cicloalquilo C_{3-10}, O-heterocicloalquilo C_{3-10}, O-heterocicloalquilo C_{3-10}, con la condición de que cuando R^{2} es O-alquilo C_{1-10}, O-arilo C_{6-10}, O-cicloalquilo C_{3-10}, O-heterocicloalquilo C_{3-10}, o O-heterocicloalquilo C_{3-10}, R^{3} y R^{4} no son halógeno, dicho alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo o heterociclilo no está sustituido o está sustituido con 1-3 grupos de R^{a};
R^{3} y R^{4} representan independientemente halógeno;
R^{6} y R^{7} representan independientemente hidrógeno, o alquilo C_{1-4};
R^{8} representa hidrógeno, acilo, o sulfonilo;
R^{9} representa hidrógeno, alquilo C_{1-6}, estando dicho alquilo opcionalmente sustituido con 1-3 halógenos, CN, OH, alcoxi C_{1-6}, aciloxi C_{1-6}, o amino;
R^{10} representa hidrógeno, alquilo C_{1-10}, cicloalquilo C_{3-10}, (CH_{2})_{p}(arilo C_{6-10}), (CH_{2})_{p}(heterociclilo C_{5-10}), CR^{6}R^{7}
OC(O)O(cicloalquilo C_{3-10}), o CR^{6}R^{7}OC(O)O(alquilo C_{1-10});
Z representa C\equivC, O, S, (C(R^{b})_{2})_{n}, o CH=CH;
R^{b} representa hidrógeno, alquilo C_{1-6}, o halógeno;
R^{a} representa alcoxi C_{1-6}, alquilo C_{1-6}, CF_{3}, nitro, amino, ciano, alquilamino C_{1-6}, halógeno, o R^{a} representa también para arilos y heterociclilo, S(alquilo C_{1-6}), S(arilo C_{6-10}), S(heterociclilo C_{5-10}), CO_{2}R^{6}, O(arilo C_{6-10}), O(heterociclilo C_{5-10}), CH_{2}O(alquilo C_{1-6}), CH_{2}S(alquilo C_{1-6}), CH_{2}Oarilo, CH_{2}Sarilo;
= representa un enlace doble o sencillo;
p representa 0-3;
n representa 0-4; y
m representa 0-8.
2. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R^{1} es (CH_{2})_{p}CN, (CH_{2})_{p}CO_{2}R^{10}, -(CH_{2})_{p}PO(OH)_{2},
(CH_{2})_{p}CONHPO_{2}R^{6}, (CH_{2})_{p}CONHR^{8}, o (CH_{2})_{n}heterociclilo, estando dicho heterociclilo no sustituido o sustituido con 1 a 3 grupos de R^{a} y todas las demás variables son como se describió en un principio.
3. Un compuesto según la reivindicación 2, en el que Z es un enlace o S, Y es CH_{2}, y X es O, S o CH_{2}.
4. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R^{1} es (CH_{2})_{p}CO_{2}R^{10}, X e Y son CH_{2}, Z es (C(R^{b})_{2})_{n}, Q es (CH_{2})_{m}, R^{3} y R^{4} son halógeno, y R^{2} es (CH_{2})_{m}(arilo C_{6-10}), estando dicho arilo no sustituido o sustituido con 1 a 3 grupos de R^{a}.
5. Un compuesto según la reivindicación 2, en el que R^{1} es (CH_{2})_{m}(heterociclilo C_{5-10}), U es H, o alquilo C_{1-3}, W es OH, Z es un enlace o S, R^{2} es (CH_{2})_{m}(arilo C_{6-10}), estando dicho arilo no sustituido o sustituido con 1 a 3 grupos de R^{a}, estando dicho heterociclilo no sustituido o sustituido con 1 a 3 grupos de R^{a}, y todas las demás variables son como se describió en un principio.
6. Un compuesto según la reivindicación 1, que es:
ácido 7-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-b-oxopiperidin-1-il}heptanoico;
ácido 7-{(4R)-4-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-2-oxo-1,3-oxazinan-3-il}heptanoico;
ácido 7-{(4R)-4-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-2-oxo-1,3-tiazinan-3-il}heptanoico;
ácido 7-{(2R)-Z-[(3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbutil]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoico;
ácido 7-{(4S)-4-[(3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbutil]-2-oxo-1,3-oxazinan-3-il}heptanoico;
ácido 7-{(4S)-4-[(3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbutil]-2-oxo-1,3-tiazinan-3-il}heptanoico;
7-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoato de isopropilo;
7-{(4R)-4-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-2-oxo-1,3-oxazinan-3-il}heptanoato de isopropilo;
7-{(4R)-4-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-2-oxo-1,3-tiazinan-3-il}heptanoato de isopropilo;
(6R)-6-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-1-[6-(2H-tetrazol-5-il)hexil]piperidin-2-ona;
(4R)-4-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-3-[6-(2H-tetrazol-5-il)hexil]-1,3-oxazinan-2-ona;
(4R)-4-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-3-[6-(2H-tetrazol-5-il)hexil]-1,3-tiazinan-2-ona;
(5S)-5-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-4-[6-(2H-tetrazol-5-il)hexil]morfolin-3-ona;
(6S)-6-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-1-[6-(2H-tetrazol-5-il)hexil]piperazin-2-ona;
(5S)-5-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]4-[6-(2H-tetrazol-5-il)hexil]tiomorfolin-3-ona;
ácido 5-(3-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}propil)tiofen-2-carboxílico;
ácido 5-(3-{(4R)-4-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-2-oxo-1,3-oxazinan-3-il}propil)tiofen-2-
carboxílico;
ácido 5-(3-{(4R)-4-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-2-oxo-1,3-tiazinan-3-il}propil)tiofen-2-carboxílico;
(6R)-6-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-1-{3-[5-(2H-tetrazol-5-il)tien-2-il]propil}piperidin-2-
ona;
(4R)-4-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-3-{3-[5-(2H-tetrazol-5-il)tien-2-il]propil}-1,3-oxazi-
nan-2-ona;
(4R)-4-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-3-{3-[5-(2H-tetrazol-5-il)tien-2-il]propil}-1,3-tiazinan-2-ona;
(6R)-6-[(3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbutil]-1-{3-[5-(2H-tetrazol-5-il)tien-2-il]propil}piperidin-2-ona;
(4S)-4-[(3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbutil]-3-{3-[5-(2H-tetrazol-5-il)tien-2-il]propil}-1,3-oxazinan-2-ona;
(4S)-4-[(3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbutil]-3-{3-[5-(2H-tetrazol-5-il)tien-2-il]propil}-1,3-tiazinan-2-ona;
5-(3-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}propil)tiofen-2-carboxilato de isopropilo;
5-(3-{(4R)-4-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-2-oxo-1,3-oxazinan-3-il}propil)tiofen-2-carbo-
xilato de isopropilo;
5-(3-{(4R)-4-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-2-oxo-1,3-tiazinan-3-il}propil)tiofen-2-carbo-
xilato de isopropilo;
ácido (5E)-7-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}hept-5-enoico;
ácido (5E)-7-{(4R)-4-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-2-oxo-1,3-oxazinan-3-il}hept-5-enoico;
ácido (5E)-7-{(4R)-4-[(1E,3R)-4,4-fluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-2-oxo-1,3-tiazinan-3-il}hept-5-enoico;
ácido (5E)-7-{(2R)-2-[(3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbutil]-6-oxopiperidin-1-il}hept-5-enoico;
ácido (5E)-7-{(4S)-4-[(3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbutil]-2-oxo-1,3-oxazinan-3-il}hept-5-enoico;
ácido (5E)-7-{(4S)-4-[(3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbutil]-2-oxo-1,3-tiazinan-3-il}hept-5-enoico;
ácido 2-(3-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}propil)-1,3-oxazol-5-
carboxílico;
ácido 5-(3-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}propil)-1H-imidazol-2-carboxílico;
ácido 2-(3-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}propil)-1H-imidazol-5-carboxílico;
ácido 5-((1E)-3-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}prop-1-enil)tio-
fen-2-carboxílico;
ácido 5-(3-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}prop-1-inil)tiofen-2-
carboxílico;
ácido 5-((1Z)-3-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}prop-1-enil)tiofen-2-carboxílico;
(6R)-6-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-1-{(2Z)-4-[(1H-tetrazol-5-ilmetil)tio]but-2-enil}piperi-
din-2-ona;
ácido [(4-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}but-2-inil)tio]acético;
ácido [((2Z)-4-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}but-2-enil)tio]acético;
ácido [(4-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}butil)tio]acético;
ácido (4-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}butoxi)acético;
ácido 3-[(3-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}propil)tio]propa-
noico;
ácido 7-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-3-metil-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoico;
ácido 7-{(2R)-2-[(1E,3S)-4,4-difluoro-3-hidroxi-3-metil-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoico;
ácido 7-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-(2-naftil)but-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoico;
(6R)-6-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-3-metil-4-fenilbut-1-enil]-1-[6-(1H-tetrazol-5-il)hexil]piperidin-2-ona;
(6R)-6-[(1E,3S)-4,4-difluoro-3-hidroxi-3-metil-4-fenilbut-1-enil]-1-[6-(1H-tetrazol-5-il)hexil]piperidin-2-ona;
ácido 7-{(2R)-2-[(1E,3R)-4-(1-benzotien-2-il)-4,4-difluoro-3-hidroxibut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoico;
(6R)-6-[(3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-3-metil-4-fenilbutil]-1-[6-(1H-tetrazol-5-il)hexil]piperidin-2-ona;
(6R)-6-[(3S)-4,4-difluoro-3-hidroxi-3-metil-4-fenilbutil]-1-[6-(1H-tetrazol-5-il)hexil]piperidin-2-ona;
ácido 7-{(2R)-2-[(1E,3R)-4-(1-benzofuran-2-il)-4,4-difluoro-3-hidroxibut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoico;
ácido 7-{(2R)-2-[(1E,3R)-4-(3-clorofenil)-4,4-difluoro-3-hidroxibut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoico;
ácido 7-{(2R)-2-[(1E,3R)-4-(3-clorofenil)-4,4-difluoro-3-hidroxibut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoico;
ácido 7-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-(3-metoxifenil)but-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoico;
7-1(2R)-2-[(1E)-4,4-difluoro-3-oxo-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoato de isopropilo;
ácido 7-{(2R)-2-[(3R)-4-(3-bromofenil)-4,4-difluoro-3-hidroxibutil]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoico;
(5Z)-7-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-en-1-il]-6-oxopiperidin-1-il}hept-5-enoato de isopropilo;
ácido (5Z)-7-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-en-1-il]-6-oxopiperidin-1-il}hept-5-enoico;
7-{(4R)-4-[(1E)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-en-il]-2-oxo-1,3-oxanzinan-3-il}heptanoato de isopropilo;
ácido 7-{(4R)-4-[(1E)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-en-il]-2-oxo-1,3-oxanzinan-3-il}heptanoico;
o sus sales farmacéuticamente aceptables, enantiómeros, diastereómero o sus mezclas.
\vskip1.000000\baselineskip
7. Un compuesto según la reivindicación 6, que es:
ácido 7-{(ZR)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoico;
ácido 7-{(4R)-4-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-2-oxo-1,3-oxazinan-3-il}heptanoico;
7-{(2R)-2-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoato de isopropilo;
7-{(4R)-4-[(1E,3R)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-enil]-2-oxo-1,3-oxazinan-3-il}heptanoato de isopropilo;
7-{(2R)-2-[(1E)-4,4-difluoro-3-oxo-4-fenilbut-1-enil]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoato de isopropilo;
ácido 7-{(2R)-2-[(3R)-4-(3-bromofenil)-4,4-difluoro-3-hidroxibutil]-6-oxopiperidin-1-il}heptanoico;
7-{(4R)-4-[(1E)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-en-il]-2-oxo-1,3-oxazinan-3-il}heptanoato de isopropilo;
ácido 7-{(4R)-4-[(1E)-4,4-difluoro-3-hidroxi-4-fenilbut-1-en-il]-2-oxo-1,3-oxazinan-3-il}heptanoico;
o sus sales farmacéuticamente aceptables, enantiómeros, diastereómero o sus mezclas.
\vskip1.000000\baselineskip
8. Una composición farmacéutica que comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y un compuesto de fórmula I, según se indica en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7.
9. La composición farmacéutica de la reivindicación 8 en forma de una formulación tópica como una disolución o una suspensión.
10. La composición de la reivindicación 9, en la que uno o más ingredientes activos que pertenecen al grupo que consiste en un agente bloqueante \beta-adrenérgico, un agente parasimpatomimético, un agente simpatomimético, un inhibidor de la anhidrasa carbónica, un bloqueante del canal de maxi-K, y una prostaglandina, un lípido hipotensor, un neuroprotector y un agonista del receptor 5-HT2 se añaden a la formulación tópica.
11. La composición según la reivindicación 10, en el que el agente bloqueante \beta-adrenérgico es timolol, betaxolol, levobetaxolol, carteolol, o levobunolol; el agente parasimpatomimético es pilocarpina; el agente simpatomimético es epinefrina, brimonidina, yopidina, clonidina, o para-aminoclonidina; el inhibidor de la anhidrasa carbónica es dorzolamida, acetazolamida, metazolamida, o brinzolamida; el bloqueante del canal de maxi-K es penitrem A, paspalicina, caribdotoxina, iberiotoxina, paxicilano, aflitram, verroculogeno, 1-(1-isobutil-6-metoxi-1H-indazol-3-il)-2-metilpropan-1-ona; 1-[1-(2,2-dimetilpropil)-6-metoxi-1H-indazol-3-il]-2-metilpropan-1-ona; 1-[1-(ciclohexilmetil)-6-metoxi-1H-indazol-3-il]-2-metilpropan-1-ona; 1-(1-hexil-6-metoxi-1H-indazol-3-il)-2-metilpropan-1-ona; 1-[1-(2-etilhexil)-6-metoxi-1H-indazol-3-il]-2-metilpropan-1-ona; 1-(3-isobutiril-6-metoxi-1H-indazol-1-il)butan-2-ona; 1-(3-isobutiril-6-metoxi-1H-indazol-1-il)-3,3-dimetilbutan-2-ona; 1-(3-ciclopentilcarbonil)-6-metoxi-1H-indazol-1-il)-3,3-dimetilbutan-2-ona; ácido 1-(3,3-dimetil-2-oxobutil)-6-metoxi-1H-indazole-3-carboxílico; y 1-[3-(3-hidroxipropanoil)-6-metoxi-1H-indazol-1-il]-3,3-dimetilbutan-2-ona; la prostaglandina es latanoprost, travaprost, unoprostone, rescula, or S1033; el lípido hipotensor es lumigán; el neuroprotector es eliprodilo, R-eliprodilo, o memantina; y el agonista del receptor 5-HT2 es fumarato de 1-(2-aminopropil)-3-metil-1H-imidazol-6-ol y 2-(3-cloro-6-metoxiindazol-1-il)-1-metiletilamina.
12. La composición según la reivindicación 9, en la que la formulación tópica contiene goma de xantano o goma de gelano.
13. Un compuesto de fórmula I, según se define en las reivindicaciones 1 a 7, o su sal farmacéuticamente aceptable, enantiómero, diastereómero, o sus mezclas, para su uso en una terapia medicinal.
14. El uso de un compuesto de fórmula I, según se define en las reivindicaciones 1 a 7, o su sal farmacéuticamente aceptable, enantiómero, diastereómero, o sus mezclas, para la fabricación de un medicamento para tratar la hipertensión ocular o el glaucoma.
15. El uso de un compuesto de fórmula I, según se define en las reivindicaciones 1 a 7, o su sal farmacéuticamente aceptable, enantiómero, diastereómero, o sus mezclas, para la fabricación de un medicamento para tratar el edema macular o la degeneración macular, el ojo seco, para aumentar la velocidad de la sangre retiniana y de la cabeza del nervio óptico, para aumentar la tensión de oxígeno retiniana y del nervio óptico o para proporcionar neuroprotección.
16. El uso de un compuesto de fórmula I, según se define en las reivindicaciones 1 a 7, o su sal farmacéuticamente aceptable, enantiómero, diastereómero, o sus mezclas, para la fabricación de un medicamento para estimular la formación de hueso, o para tratar o reducir el riesgo de contraer un estado de enfermedad o trastorno relacionado con una reabsorción ósea anómala en un mamífero.
17. El uso según la reivindicación 16, en el que dicho estado de enfermedad o trastorno se selecciona del grupo que consiste en osteoporosis, osteoporosis inducida por glucocorticoides, enfermedad de Paget, recambio óseo anómalamente aumentado, pérdida de dientes, fracturas óseas, artritis reumatoide, osteolisis periprostética, osteogénesis imperfecta, enfermedad ósea metastásica, hipercalcemia de malignidad, y mieloma múltiple.
18. El uso según la reivindicación 16, en el que se añade un bisfosfonato activo seleccionado del grupo que consiste en alendronato, cimadronato, clodronato, tiludronato, etidronato, ibandronato, neridronato, olpandronato, risedronato, piridronato, pamidronato, zolendronato, sus sales farmacéuticamente aceptables y sus mezclas.
19. El uso según la reivindicación 16, que comprende administrar otro agente seleccionado de un bisfosfonato orgánico, un inhibidor de catepsina K, un estrógeno, un modulador del receptor de estrógenos, un modulador del receptor de andrógenos, un inhibidor de la ATPasa de protón de osteoclastos, un inhibidor de la HMG-CoA reductasa, un antagonista del receptor de integrina, un agente anabólico de osteoblastos, calcitonina, vitamina D, un análogo de vitamina D sintético, o un sal farmacéuticamente aceptable de sus mezclas.
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