ES2340328T3 - Metodo para la evaluacion de la artritis reumatoide mediante la medicion de anti-pcc e interleuquina 6. - Google Patents
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Abstract
Un método para valorar la eficacia de un tratamiento para la artritis reumatoide (AR) in vitro mediante marcadores biológicos, lo que comprende la medida en una muestra de la concentración de al menos a) anti-PCC y b) interleuquina 6, y c) la correlación de las concentraciones determinadas en los pasos a) y b) con la eficacia de un tratamiento.
Description
Método para la evaluación de la artritis
reumatoide mediante la medición de anti-PCC e
interleuquina 6.
La presente invención está relacionada con un
método que mejora la evaluación de la artritis reumatoide. El
método se utiliza especialmente en la evaluación de la presencia o
ausencia de artritis reumatoide in vitro. El método por
ejemplo se realiza mediante el análisis de marcadores biológicos, lo
que comprende la medida en la muestra de la concentración de
anti-PCC e interleuquina 6, y la correlación de las
concentraciones determinadas con la presencia o ausencia de
artritis reumatoide. Para mejorar aun más la evaluación de la AR en
un método de esta invención puede determinarse el nivel de uno o
más marcadores adicionales junto con el anti-PCC y
la interleuquina 6 y pueden correlacionarse con la presencia o
ausencia de AR. La solicitud también está relacionada con la
utilización de un panel de marcadores que comprende el
anti-PCC y la interleuquina 6 en el diagnóstico de
la artritis reumatoide e ilustra un equipo para la realización del
método de la invención.
La artritis reumatoide ("AR") es una
enfermedad crónica, inflamatoria, sistémica que se manifiesta de
forma más notable en las articulaciones afectadas, en particular
las de las manos y pies. La aparición de la artritis reumatoide
puede ser lenta, oscilando entre unas pocas semanas y algunos meses,
o la enfermedad puede surgir rápidamente de forma aguda.
La AR tiene una distribución mundial e involucra
a todos los grupos étnicos. Aunque la enfermedad puede aparecer a
cualquier edad, la prevalencia aumenta con la edad y el pico de
incidencia está entre los cuarenta y sesenta años. La estimación de
prevalencia en la población norteamericana varía entre el 0,3% y
1,5%. Actualmente, alrededor de 2.500.000 individuos están
diagnosticados de artritis reumatoide sólo en los Estados Unidos,
con algunas estadísticas que apuntan a entre 6,5 y 8 millones de
afectados potenciales por la enfermedad. Las mujeres se ven
afectadas 2-3 veces más frecuentemente que los
hombres.
Los síntomas iniciales de la artritis reumatoide
son principalmente específicos de las articulaciones, como el dolor
en las articulaciones con hinchazón o sensibilidad en éstas, pero
también puede incluir manifestaciones bastante inespecíficas como
rigidez, fiebre, nódulos subcutáneos, y fatiga. Es muy
característica la afectación simétrica de las articulaciones. Las
articulaciones de las manos, pies, rodillas y muñecas son las más
frecuentemente afectadas, con la implicación eventual de las
caderas, codos y hombros. A medida que la enfermedad progresa,
cualquier tipo de movimiento se convierte en doloroso y difícil lo
que conduce finalmente a una pérdida de la función de las
articulaciones implicadas. Los casos más severos de artritis
reumatoide pueden resultar en dolor intenso y destrucción de las
articulaciones. Anualmente, se realizan 300.000 procedimientos
quirúrgicos de reemplazo de huesos y articulaciones en un esfuerzo
para aliviar el dolor y la pérdida de movilidad resultante de la
destrucción de las articulaciones relacionada con la artritis.
El sistema de clasificación de la AR más
ampliamente utilizado son los criterios de clasificación de AR del
American College of Rheumatology revisados en 1987. (Arnett, F.C.,
et al., Arthritis Rheum. 31 (1988) 315-324).
De acuerdo con estos criterios (conocidos como criterios ARA), se
dice que un paciente sufre AR si el paciente cumple al menos cuatro
de los siete criterios siguientes, en el que los criterios
1-4 deben estar presentes durante al menos seis
semanas: 1) rigidez matutina durante al menos una hora, 2) artritis
de tres o más áreas en las articulaciones, 3) artritis de las
articulaciones de las manos, 4) artritis simétrica, 5) nódulos
reumatoides, 6) factor reumatoide ("FR")en suero, y 7) cambios
radiográficos. Estos criterios tienen una sensibilidad y
especificidad de aproximadamente un 90%.
El único marcador bioquímico generalmente
aceptado (véanse los anteriores criterios ARA) y que ayuda en el
diagnóstico de la AR es el factor reumatoide (FR) detectado en
suero.
Los cambios histológicos en la AR no son
específicos de la enfermedad sino que dependen en gran medida del
órgano involucrado. La lesión inflamatoria primaria en la
articulación involucra el sinovio. Los cambios iniciales son daños
en la microvasculatura sinovial con oclusión del lumen, hinchazón de
las células endoteliales, y espacios entre las células
endoteliales, como se ha documentado mediante microscopía
electrónica. Esta fase normalmente está asociada con una débil
proliferación de la capa celular de revestimiento superficial. Dos
tipos celulares constituyen el revestimiento sinovial: los
sinoviocitos de tipo A derivados de la médula ósea, que tiene
características de los macrófagos, y los sinoviocitos de tipo B
mesenquimales. Ambos tipos celulares contribuyen a la hiperplasia
sinovial, lo que sugiere una interacción paracrina entre estos dos
tipos de células. Esta fase de inflamación está asociada con
congestión, edema y exudación de fibrina. La infiltración celular
aparece en las fases iniciales de la enfermedad e inicialmente
consiste principalmente de linfocitos T. Como consecuencia de la
inflamación, el sinovio se convierte en hipertrófico por la
proliferación de vasos sanguíneos y fibroblastos sinoviales, y por
la multiplicación y engrosamientos de las capas de recubrimiento
sinovial.
El tejido de granulación se extiende al
cartílago y se conoce como panus. El tejido invade de forma activa
y destruye el hueso periarticular y el cartílago en el margen entre
el sinovio y el hueso, conocido como AR erosiva.
Las manifestaciones articulares de la AR pueden
situarse en dos categorías: signos reversibles y síntomas
relacionados con la sinovitis inflamatoria y el daño estructural
irreversible provocado por la sinovitis. Este concepto es útil no
solo para clasificar la enfermedad y determinar la prognosis sino
que también sirve para seleccionar el tratamiento médico o
quirúrgico. El daño estructural en el típico paciente normalmente
se inicia en algún punto entre el primer y el segundo año de la
enfermedad (Van der Heijde, D. M., et al., Br. J. Rheumatol.
34 (1995) 74-78). Aunque la sinovitis tiende a
seguir un patrón fluctuante, el daño estructural progresa como una
función linear de la cantidad de la sinovitis anterior.
La etiología de los eventos tempranos en la AR
permanecen desconocidos. Actualmente se acepta ampliamente un
componente autoinmune, pero todavía se discuten otros factores. La
posibilidad de una infección bacteriana o viral se ha perseguido
intensamente. Todos los esfuerzos para asociar un agente infeccioso
con la AR mediante aislamiento, microscopía electrónica o biología
molecular han fracasado. Es posible que no haya una causa primaria
única de la AR y que los diferentes mecanismos puedan llevar al daño
inicial en el tejido y precipitar la inflamación sinovial.
Los signos clínicos de sinovitis pueden ser
sutiles y a menudo subjetivos. El calentamiento, hinchazón,
articulaciones obviamente inflamadas, normalmente sólo se aprecian
en las fases más activas de la sinovitis inflamatoria. La pérdida
de cartílago y la erosión del hueso periarticular son los rasgos
característicos del daño estructural. Los rasgos clínicos
relacionados con el daño estructural están marcados por un deterioro
progresivo funcional y anatómico. El daño estructural en la
articulación es irreversible y acumulable.
El tratamiento efectivo de la artritis
reumatoide comprende generalmente una combinación de medicación,
ejercicio, descanso y una terapia adecuada de protección de las
articulaciones. La terapia para un paciente particular depende de
la gravedad de la enfermedad y las articulaciones involucradas. Son
utilizados ampliamente los fármacos anti- inflamatorios no
esteroideos, corticosteroides, sales de oro, metotrexato e
inmunosupresores sistémicos para reducir la inflamación y la
destrucción de las articulaciones. El uso de esteroides e
inmunosupresores, no obstante, presenta riesgos significativos y
efectos secundarios en términos de toxicidad y vulnerabilidad a
estados potencialmente letales. Más recientemente los fármacos
basados en "agentes biológicos" se han introducido en la
terapia de la AR. Tales fármacos, por ejemplo, son receptores
solubles o anticuerpos dirigidos contra el
TNF-\alpha que reduce significativamente la
inflamación. Aunque muy prometedores, los productos biológicos
tienen aún un uso limitado debido a su alto coste.
Los datos de los estudios clínicos
longitudinales y epidemiológicos proporcionan guías para el
tratamiento. Estos estudios enfatizan 1) la necesidad de un
diagnóstico precoz, 2) la identificación de factores de pronóstico,
y 3) un tratamiento agresivo precoz. El diagnóstico precoz y el
tratamiento, preferiblemente dentro de los primeros meses después
del inicio de los síntomas, puede ayudar a prevenir el daño
irreversible de las articulaciones.
Existe de hecho una necesidad de métodos,
especialmente basados en parámetros bioquímicos, que apoyen la
evaluación de la existencia de artritis reumatoide. La presente
solicitud proporciona tales métodos y los reactivos para evaluar la
presencia o ausencia de artritis reumatoide in vitro. El
método de la invención ayudará a la monitorización de la eficacia
del tratamiento en los pacientes que sufren de AR.
La presente solicitud está dirigida a un método
para evaluar la artritis reumatoide in vitro mediante
marcadores biológicos, que comprende la medición en una muestra de
la concentración de anti-PCC e interleuquina 6 y
correlacionar las concentraciones determinadas con la presencia o
ausencia de la artritis reumatoide.
La presente solicitud también está relacionada
con el uso de un panel marcador que comprende al menos
anti-PCC e interleuquina 6 en el diagnóstico de la
AR.
La presente solicitud también proporciona un
equipo para realizar el método de acuerdo con la presente invención
que comprende al menos los reactivos necesarios para medir
específicamente el anti-PCC y la interleuquina 6,
respectivamente, y opcionalmente reactivos auxiliares para realizar
la medición.
La presente solicitud está relacionada con un
método para evaluar la artritis reumatoide in vitro mediante
marcadores biológicos, que comprende medir en una muestra la
concentración de anti-PCC e interleuquina 6 y
correlacionar las concentraciones determinadas con la presencia o
ausencia de la artritis reumatoide.
Tal como se utiliza aquí, cada uno de los
siguientes términos posee el significado asociado con él en su
sección.
Los artículos "un" y "una" se utilizan
aquí para referirse a uno o más de uno (es decir, al menos uno) del
objeto gramatical del artículo. A modo de ejemplo, "un
marcador" significa un marcador o más de un marcador.
El término "marcador" o "marcador
bioquímico" tal y como se utiliza aquí se refiere a una molécula
a utilizar como la diana para analizar muestras de pacientes.
Ejemplos de tales dianas moleculares son proteínas o polipéptidos
así como anticuerpos presentes en una muestra. Las proteínas o
polipéptidos utilizados como marcador en la presente invención se
contemplan para incluir cualquier variante de dicha proteína así
como fragmentos de dicha proteína o dicha variante, en particular,
los fragmentos detectables inmunológicamente. Un experto en la
materia podrá reconocer que las proteínas que son liberadas por las
células o presentes en la matriz extracelular que son dañadas, por
ejemplo, durante la inflamación pueden ser degradadas o escindidas
en tales fragmentos. Ciertos marcadores se sintetizan en una forma
inactiva, que pueden ser posteriormente activados mediante
proteolisis. Tal como podrá apreciar un experto en la materia, las
proteínas o fragmentos de los mismos pueden también estar presentes
como parte de un complejo. Tal complejo también puede utilizarse
como un marcador en el sentido de la presente invención. Las
variantes de un polipéptido marcador están codificadas por el mismo
gen, pero difieren en su PI o PM, o en ambos (por ejemplo, como
resultado de un procesamiento alternativo del mRNA o
pre-mRNA, por ejemplo corte y empalme alternativo o
proteolisis limitada) y además, o de forma alternativa, puede
aparecer una modificación post-traduccional
diferencial (por ejemplo, glicosilación, acilación y/o
fosforilación).
El término marcador,como se ha mencionado antes,
en la presente solicitud también está relacionado con los
anticuerpos presentes en una muestra. En el caso de la AR estos
anticuerpos son autoanticuerpos, es decir, anticuerpos en la
muestra de un paciente que se unen a un antígeno presente o
producido por las propias células del paciente.
El término "muestra" tal y como se utiliza
aquí se refiere a una muestra biológica obtenida con el propósito
de la evaluación in vitro. En los métodos de la presente
solicitud, la muestra o muestra del paciente preferiblemente puede
comprender cualquier fluido corporal. Las muestras preferibles para
las pruebas incluyen sangre, suero, plasma, orina, saliva y fluido
sinovial. Las muestras preferidas son sangre completa, suero, plasma
o fluido sinovial, siendo el plasma o suero la más preferible.
Como un experto en la materia apreciará,
cualquiera de estos diagnósticos se realiza in vitro. La
muestra del paciente se deshecha tras esto. La muestra del paciente
se utiliza tan sólo para el método diagnóstico in vitro de
la invención y el material de la muestra del paciente no se
transfiere de vuelta al cuerpo del paciente. Normalmente, la
muestra es una muestra líquida.
El término "evaluación de la artritis
reumatoide" se utiliza para indicar que el método de acuerdo con
la presente solicitud ayudará al médico (junto con otras variables,
por ejemplo, los criterios ARA expuestos (véase más arriba)) a
establecer su diagnóstico para la AR. Preferiblemente, esta
evaluación relacionará la presencia o ausencia de AR. Tal como un
experto en la materia apreciará, ningún marcador bioquímico es
diagnóstico con un 100% de especificidad y a la vez con un 100% de
sensibilidad para una enfermedad determinada, más bien los
marcadores biológicos se utilizan para valorar con cierta
probabilidad o valor predictivo la presencia o ausencia de una
enfermedad. Preferiblemente el método de acuerdo con la presente
invención ayuda en la evaluación de la presencia o ausencia de
AR.
Tal como un experto en la materia apreciará, el
paso de correlacionar un nivel de marcador con la presencia o
ausencia de AR puede realizarse y lograrse de diferentes maneras. En
general, se selecciona una población de referencia y se establece
un rango normal. Establecer un rango normal utilizando una población
de referencia apropiada, para el anti-PCC así como
para la IL-6, forma parte de la experimentación de
rutina. Se acepta de forma generalizada que el rango normal en una
extensión cierta pero limitada depende de la población de
referencia en que éste se establece. La población de referencia
ideal tiene que ser numerosa, por ejemplo, de cientos a miles y
agrupados por edad, género y opcionalmente otras variables de
interés. El rango normal en términos de valores absolutos, como una
concentración determinada, también depende del ensayo utilizado y
la estandarización utilizada en producir el ensayo.
Los niveles dados para el
anti-PCC y la IL-6 en la sección de
ejemplos ha sido medido y establecido con los procedimientos de
ensayo proporcionados. Debe entenderse que los diferentes ensayos
pueden llevar a diferentes valores de corte, sin alejarse del
alcance de la presente invención.
Los péptidos citrulinados son antígenos para
autoanticuerpos bastante importantes como los encontrados en el
suero de pacientes con AR. Han sido estudiados de forma intensiva
durante los últimos años por varios grupos de investigadores (véase
por ejemplo, WO 98/08946; WO 98/22503; WO 99/28344; WO 99/35167, WO
01/46222 y WO 03/050542). Recientemente Schellekens y colaboradores
(Schellekens, G.A., Arthritis Rheum. 43 (2000)
155-163) describieron que un ensayo de ELISA basado
en péptidos cíclicos citrulinados específicos (PCC) mostraron
características de rendimiento superiores respecto a la exactitud
diagnóstica de la AR en comparación con el mismo ensayo utilizando
péptidos lineales.
Los auto-anticuerpos contra PCC,
es decir, los anticuerpos que tienen más probabilidad de reaccionar
con polipéptidos citrulinados circulantes en el suero de un
paciente y que se une a PCC en un ensayo in vitro se
denominan "anti-PCC". La solicitud de patente
de van Venroji et al. (WO 98/22503) describe ciertos péptidos
citrulinados y muestra que la ciclación conduce a una reactividad
mejorada de los respectivos péptidos. En un ejemplo específico se
muestra que, si un péptido con la fórmula general
HQCHQESTXGRSRGRCGRSGS (ID. DE SEC. Nº:1), en el que X significa
citrulina, se cicla mediante un puente disulfuro entre los dos
residuos de cisteína, la sensibilidad aumenta a un 63% en
comparación con el 36% del correspondiente péptido lineal. Como los
autoanticuerpos en el suero de paciente poseen una reactividad
ligeramente diferente a los diferentes péptidos cíclicos, en la WO
98/22503 se sugirió una combinación de péptidos para mejorar aún más
el ensayo.
Preferiblemente, el anti-PCC se
midió como se describe en van Venroij et al en la WO
03/050542. En resumen, se utiliza una combinación de péptidos que
contienen sitios de epítopos con la fórmula general
X-G y X-no-G en la
que X indica citrulina, G glicina y no-G cualquier
aminoácido H, I, W, S, R, K, Y, M, F, V, P, Cit o un análogo de los
mismos para evaluar el nivel de anticuerpos anti-PCC
(anti-PCC) en una muestra. Los péptidos específicos
útiles en tal evaluación se describen en la WO 03/050542. Tal como
un experto en la materia apreciará fácilmente, son posibles otras
mejoras y depuraciones respecto al antígeno del péptido citrulinado
cíclico utilizado en el ensayo para medir el
anti-PCC, que resultará por ejemplo en una secuencia
alterada de la secuencia del péptido citrulinado cíclico.
El anticuerpo que se une al PCC, es decir, el
anti-PCC, se midió en un ensayo serológico.
Preferiblemente tal ensayo se estableció utilizando uno o más PCC
como antígeno y detectando la unión de anticuerpos
anti-PCC comprendidos en una muestra al antígeno
PCC mediante los métodos apropiados.
Los métodos de detección preferidos son los
ensayos de unión específicos, especialmente inmunoensayos. Los
inmunoensayos son bien conocidos por los expertos en la materia. Los
métodos para llevar a cabo estos ensayos así como las aplicaciones
prácticas y procedimientos se resumen en los libros de texto
relacionados. Ejemplos de libros de texto relacionados son Tijssen,
P., en: Practice and theory of enzyme immunoassays, Ed. R.H. Burdon
y v.P.H. Knippenberg, Elsevier, Amsterdam, 1990,
221-278 y varios volúmenes de Methods in Enzymology,
Ed. S.P. Colowick, N.O. Caplan y S.P., Academic Press, relacionados
con los métodos de detección inmunológicos, especialmente los
volúmenes 70, 73, 74, 84, 92 y 121.
Los anticuerpos anti-PCC pueden
detectarse mediante formatos de ensayo homogéneos, por ejemplo,
mediante la aglutinación de partículas de látex recubiertas con
PCC.
Preferiblemente se utiliza un inmunoensayo
heterogéneo para medir el anti-PCC. Tal medición
heterogénea se basa en el recubrimiento directo o indirecto con PCC
de una fase sólida, la incubación de la fase sólida con una muestra
conocida o que se sospecha que contenga anticuerpos
anti-PCC bajo condiciones que permitan la unión de
anticuerpos anti-PCC al PCC, y la detección de forma
directa o indirecta de la unión de anticuerpo
anti-PCC. Otro formato de ensayo es el denominado
ensayo puente de doble antígeno, en el que, en el caso de una
medición de anti-PCC, los PCC se sitúan tanto en la
cara de la fase sólida como en la cara de la detección del
inmunoensayo, por lo que los autoanticuerpos en una muestra del
paciente forman un puente entre estos antígenos "dobles".
Cuando sea necesario o apropiado, se incluyen pasos de lavado
durante la realización de un inmunoensayo heterogéneo.
La interleuquina-6
(IL-6) es una proteína secretada de 21 kDa que posee
numerosas actividades biológicas que pueden dividirse en aquellas
involucradas en la hematopoyesis y aquellas involucradas en la
activación de la respuesta inmune innata. La IL-6
es un reactante de fase aguda y estimula la síntesis de una serie de
proteínas, incluyendo moléculas de adhesión. Su función principal
es mediar en la producción de proteínas hepáticas de fase aguda, y
su síntesis es inducida por las citoquinas IL 1 y
TNF-\alpha. La IL-6 se produce
normalmente en los macrófagos y los linfocitos T. La concentración
normal en suero de IL-6 es < 5 pg/ml.
Mientras que en el caso de los
anti-PCC, se miden los (auto-)anticuerpos
comprendidos en una muestra, para la IL-6 se
detecta la molécula marcadora IL-6 en sí. La
IL-6 por ejemplo puede ser medida mediante un tipo
de inmunoensayo competitivo o uno de tipo sándwich. La
IL-6 preferiblemente se mide en un inmunoensayo de
tipo sándwich que se basa esencialmente en un anticuerpo que se une
de forma específica a la IL-6, que se une directa o
indirectamente o es capaz de unirse a una fase sólida, un anticuerpo
que se une de forma específica a la IL-6 que está
marcado de forma detectable, y en la incubación de estos reactivos
bajo condiciones que permiten la unión de los anticuerpos
anti-IL-6 a la IL-6
de una muestra, la separación del anticuerpo no unido marcado, la
determinación de la cantidad de anticuerpo marcado unido por la
IL-6, y la correlación de la cantidad de anticuerpo
marcado unido a la concentración de IL-6 en la
muestra.
La situación ideal para el diagnóstico sería una
situación en la que un único evento o proceso provocara la
respectiva enfermedad como, por ejemplo, en las enfermedades
infecciosas. En el resto de casos, un diagnóstico correcto puede
ser muy difícil, especialmente cuando la etiología de la enfermedad
no se comprende por completo como es el caso de la AR. Por lo
tanto, para el diagnóstico de la AR en general se consideran
conjuntamente los diferentes síntomas clínicos y los marcadores
biológicos. Los marcadores pueden determinarse individualmente o
pueden medirse simultáneamente utilizando las tecnologías de chip o
matriz basada en cuentas. Las concentraciones de los biomarcadores
se interpretan entonces independientemente utilizando un límite
individual para cada marcador o se combinan para interpretarse.
Tal y como se muestra en la sección de Ejemplos,
la mera combinación de los dos marcadores anti-PCC e
IL-6 mejora significativamente la exactitud del
diagnóstico de la AR.
En un método de acuerdo con la presente
solicitud se determina al menos la concentración de los
biomarcadores y de la IL-6 respectivamente, y la
combinación de marcadores se correlaciona con la presencia o
ausencia de AR.
Como un experto en la materia apreciará, existen
varias vías para utilizar las mediciones de dos o más marcadores
para mejorar la incógnita diagnóstica de la investigación. En una
aproximación bastante sencilla, pero sin embargo bastante efectiva,
se asume un resultado positivo si una muestra es positiva para al
menos uno de los marcadores investigados. Este puede ser el caso del
diagnóstico de por ejemplo una enfermedad infecciosa, como el SIDA.
Frecuentemente, no obstante, se evalúa la combinación de
marcadores. Preferiblemente los valores medidos de los marcadores de
un panel de marcadores, por ejemplo para anti-PCC e
IL-6, se combinan matemáticamente y el valor
combinado se correlaciona con la incógnita diagnóstica subyacente.
Los valores marcador pueden combinarse mediante cualquier método
matemático apropiado del estado de la técnica. Los métodos
matemáticos bien conocidos para correlacionar una combinación de
marcadores con una enfermedad utiliza métodos como el análisis
discriminante (AD) (es decir, AD lineal, cuadrático, regularizado),
métodos Kernel (es decir, SVM), métodos no paramétricos (es decir, k
del clasificador por vecino más cercano), MCP (Mínimos Cuadrados
Parciales), métodos basados en árboles (es decir, Regresión lógica,
CART, métodos de bosque aleatorio, métodos Boosting/Bagging),
modelos lineales generalizados (es decir, Regresión Logística),
métodos basados en los componentes principales (es decir, SIMCA),
Modelos Aditivos Generalizados, métodos basados en la lógica
difusa, métodos basados en redes neuronales y en algoritmos
genéticos. El experto en la materia no tendrá problema en
seleccionar un método apropiado para evaluar una combinación de
marcadores de la presente invención.
Preferiblemente el método utilizado en la
correlación de la combinación de marcadores de la invención, por
ejemplo con la presencia o ausencia de AR, se selecciona de entre el
AD (es decir, AD lineal, cuadrático, regularizado), métodos Kernel
(es decir, SVM), métodos no paramétricos (es decir, k del
clasificador por vecino más cercano)), MCP (Mínimos Cuadrados
Parciales), Métodos basados en árboles (es decir, Regresión lógica,
CART, Métodos de bosque aleatorio, Métodos Boosting) y Modelos
Lineales Generalizados (es decir, Regresión Logística). Los
detalles relacionados con estos métodos estadísticos se encuentran
en las siguientes referencias: Ruczinski, I., Kooperberg C.,
LeBlanc, M., Logic regression, J. of Computational and Graphical
Statistics, 12 (2003) 475-511; Friedman, J. H.,
Regularized Discriminant Analysis, J. de la Asociación Estadística
Americana, 84 (1989) 165-175; Trevor Hastie, Robert
Tibshirani y Jerome Friedmann, The Elements of Statistical Learning,
Springer Verlag, 2001; Breiman, L., Friedman, J. H., Olshen, R. A.,
Stone, C. J. (1984) Classification and regression trees,
California: Wadsworth; Breiman, L., Random Forests, Machine
Learning, 45 (2001) 5-32; Pepe, M. S., The
Statistical Evaluation of Medical Tests for Classification and
Prediction, Oxford Statistical Science Series, 28 (2003); y Duda,
R. O., Hart, P. E., Stork, D. G., Pattern Classification, Wiley
Interscience, 2^{a} Edición (2001).
Es preferible utilizar un punto de corte
optimizado multivariado para la combinación subyacente de los
marcadores biológicos y para discriminar el estado A del estado B,
por ejemplo enfermo de sano. En este tipo de análisis los
marcadores no son independientes pero forman un panel de marcadores.
Puede establecerse que la combinación de mediciones de
anti-PCC y de IL-6 mejora
significativamente la exactitud diagnóstica de la AR en comparación
con los controles sanos o, si también se evalúa, en comparación con
los pacientes con osteoartritis (OA). Especialmente este último
hallazgo es de gran importancia, porque los pacientes con OA y AR,
respectivamente, pueden necesitar tratamientos bastante
diferentes.
La exactitud de un método diagnóstico se
describe mejor por sus características operativas del receptor (COR)
(véase especialmente Zweig, M. H., y Campbell, G., Clin. Chem. 39
(1993) 561-577). La gráfica de COR es una
representación de todos los pares de sensibilidad/especificidad
resultantes de la variación continua del umbral de decisión sobre
el rango completo de datos observados.
El funcionamiento clínico de una prueba de
laboratorio depende de su exactitud diagnóstica, o de la capacidad
de clasificar correctamente a los sujetos en subgrupos clínicamente
relevantes. La exactitud diagnóstica mide la capacidad de la prueba
para distinguir de forma adecuada dos condiciones diferentes de los
sujetos investigados. Tales condiciones son por ejemplo salud y
enfermedad o enfermedad benigna frente a maligna.
En cada caso, la representación de COR describe
la superposición entre las dos distribuciones mediante la
representación de la sensibilidad frente a 1 - especificidad para el
rango completo de los umbrales de decisión. En el eje y aparece la
sensibilidad, o la fracción de positivos verdaderos [definida como
(número de resultados de la prueba positivos verdaderos)/(número de
verdaderos positivos + número de resultados de la prueba falsos
negativos)]. Esto también ha sido denominado positividad de la
presencia de una enfermedad o estado. Se calculó sólo del subgrupo
afectado. En el eje x aparecen los falsos positivos, o 1 -
especificidad [definida como (número de resultados falsos
positivos)/(número de verdaderos negativos + número de resultados
falsos positivos)]. Es un índice de especificidad y se calcula por
completo del subgrupo no afectado. Debido a que las fracciones de
verdaderos y falsos positivos se calcularon de forma completamente
separada, utilizando los resultados de las pruebas de los dos
subgrupos diferentes, la representación de COR es independiente de
la prevalencia de la enfermedad en la muestra. Cada punto de la
representación de COR representa un par de
sensibilidad/1-especificidad que corresponde a un
umbral particular de decisión. Una prueba con una discriminación
perfecta (sin superposición en las dos distribuciones de
resultados) posee una representación de COR que pasa a través de la
esquina izquierda superior, en la que la fracción verdadera
positiva es 1,0 o 100% (sensibilidad perfecta), y la fracción falsa
positiva es 0 (especificidad perfecta). La representación teórica de
una prueba sin discriminación (distribuciones idénticas de
resultados para los dos grupos) es una línea diagonal de 45º desde
la esquina inferior izquierda hacia la esquina superior derecha. La
mayoría de representaciones están entre estos dos extremos. (Si la
representación de COR se sitúa completamente debajo de la diagonal
de 45º, se puede remediar fácilmente invirtiendo los criterios de
"positividad" de "mayor que" a "menor que" o
viceversa). Cualitativa-
mente, cuanto más cercana es la representación a la esquina superior izquierda, mayor es la exactitud total de la prueba.
mente, cuanto más cercana es la representación a la esquina superior izquierda, mayor es la exactitud total de la prueba.
Un objetivo conveniente en la cuantificación de
la exactitud diagnóstica de una prueba de laboratorio es expresar
su resultado mediante un único número. La medición global más común
es el área bajo la representación COR. Por convención, este área es
siempre \geq 0,5 (si no lo es, se puede invertir la regla de
decisión para hacerlo posible). Los valores oscilan entre 1,0
(separación perfecta de los valores de prueba de los dos grupos) y
0,5 (sin diferencia de distribución aparente entre los dos grupos de
los valores de prueba). El área no depende sólo de una porción
particular de la representación como el punto más cercano a la
diagonal o la sensibilidad con un 90% de especificidad, sino de su
representación completa. Esto es una expresión cuantitativa,
descriptiva de lo cerca que está la representación de COR con la
representación perfecta (área = 1,0).
La presente solicitud está relacionada con un
método para mejorar la exactitud diagnóstica de la artritis
reumatoide frente a controles sanos y/o pacientes que sufren de OA
midiendo en una muestra la concentración de al menos los
anti-PCC e interleuquina 6, y correlacionando las
concentraciones determinadas con la presencia o ausencia de
artritis reumatoide, y la mejora resulta en que más pacientes son
clasificados correctamente como afectados de AR frente a los
controles sanos y/o pacientes afectados de OA en comparación con una
clasificación basada en anti-PCC solo. El panel de
marcadores de la AR que comprende anti-PCC e
IL-6 puede utilizarse en la valoración de la
gravedad de la enfermedad de los pacientes que sufren AR.
Como un experto en la materia apreciará, pueden
utilizarse uno o más biomarcadores adicionales para mejorar aún más
la evaluación de la AR. Para ilustrar este potencial adicional de la
utilización de anti-PCC e IL-6 como
los marcadores clave de un panel de marcadores para la evaluación de
AR se ha utilizado el término "al menos" en las
reivindicaciones anexadas. Con otras palabras, el nivel medido para
uno o más marcadores adicionales puede combinarse con la medición
de anti-PCC e IL-6 en la evaluación
de la AR.
El marcador o marcadores adicionales utilizados
junto con anti-PCC e IL-6 pueden
considerarse como parte de un panel marcador de AR, es decir, una
serie de marcadores apropiados para refinar más la evaluación de la
AR. El número total de marcadores en un panel de marcadores de AR es
preferiblemente inferior a 20 marcadores, más preferiblemente
inferior a 15 marcadores, también preferiblemente inferior a 10
marcadores, siendo lo más preferible 8 o
menos marcadores. Son preferibles los paneles de marcadores de AR que comprenden 3, 4, 5, o 6 marcadores en total.
menos marcadores. Son preferibles los paneles de marcadores de AR que comprenden 3, 4, 5, o 6 marcadores en total.
La presente solicitud está relacionada con un
método para evaluar la presencia o ausencia de artritis reumatoide
in vitro mediante marcadores biológicos, lo que comprende la
medición en una muestra de la concentración de
anti-PCC, interleuquina 6 y además la concentración
de uno o más marcadores adicionales y la correlación de las
concentraciones de anti-PCC, IL-6 y
de los marcadores adicionales con la presencia o ausencia de
artritis reumatoide.
Será apreciado que uno o más marcadores
diferentes puedan combinarse con cualquier marcador conocido o
futuro de la AR. Un marcador se califica como un marcador de la AR
si la ABC para este marcador solo, cuando se evalúa la exactitud
diagnóstica comparando pacientes con AR con controles sanos, es de
al menos 0,65.
Preferiblemente el marcador o marcadores
adicionales se selecciona de entre el grupo que consiste en proteína
C-reactiva (=PCR), amiloide A sérica (=AAS), S100,
osteopontina, FR, metaloproteasa 1 de la matriz
(=MMP-1), metaloproteasa 3 de la matriz
(=MMP-3), ácido hialurónico, sCD14, marcadores de
angiogénesis y productos del metabolismo del hueso, cartílago o
sinovio.
La proteína C-reactiva (PCR) es
una proteína de fase aguda homopentamerica que se une al Ca^{2+},
con subunidades de 21 kDa, que está involucrada en la defensa del
huésped. La síntesis de la PCR está inducida por la
IL-6, e indirectamente por la IL-1,
ya que la IL-1 puede activar la síntesis de
IL-6 por las células de Kupffer en los sinusoides
hepáticos. La concentración normal en plasma de la PCR es < 3
\mug/ml (30 nM) en el 90% de la población sana, y < 10
\mug/ml (100 nM) en el 99% de los individuos sanos. Las
concentraciones en plasma de la PCR puede por ejemplo medirse
mediante formatos de ensayo homogéneo o ELISA. La proteína
C-reactiva es un marcador de la inflamación
sistémica subyacente.
El amiloide A sérica (=AAS) es una proteína de
fase aguda de bajo peso molecular de 11,7 kDa. Se sintetiza
principalmente en el hígado en respuesta a la estimulación de
IL-1, IL-6 o
TNF-\alpha y está involucrada en la regulación de
la respuesta inmune dependiente de las células T. En los eventos
agudos la concentración de AAS aumenta hasta 1000 veces alcanzando
un miligramo por mililitro. Se utiliza para monitorizar la
inflamación en enfermedades tan diversas como la fibrosis quística,
rechazo de trasplante renal, traumatismos o infecciones. En la
artritis reumatoide se ha utilizado en algunos casos como sustituto
para la PCR, pero el AAS no está aceptado todavía de forma
generalizada.
La osteopontina (=OPN) es una glicoproteína
fosforilada secretada, altamente acídica, que se une al calcio. Se
conocen tres isoformas que se originan de un corte y empalme
alternativo que pueden estar libres o unidas a la matriz
extracelular. A través del motivo RDG del esqueleto del péptido de
32 kDa, la OPN puede unirse a integrinas como la av\beta3. Aunque
se purificó originariamente a partir de la matriz ósea, se expresa
en numerosos fluidos corporales y tejidos incluyendo leche, orina,
células T activadas, macrófagos, fibroblastos, células musculares
lisas, tejido renal y algunas células tumorales. Su expresión se
estimula en respuesta a varias citoquinas, factores de crecimiento
o mediadores inflamatorios. Las concentraciones de OPN aumentadas
se han asociado con sepsis, cáncer metastático, isquemia cerebral,
placas ateroscleróticas, formación de granuloma en tuberculosis y
enfermedades autoinmunes como la esclerosis múltiple (Chabas, D.,
et al., Science 294 (2001) 1731-1735) o RA
(Petrow, P.K., et al., Arthritis Rheum. 43 (2000)
1597-1605).
Los factores reumatoides (=FR) son
autoanticuerpos dirigidos contra la región constante Fc de las
moléculas de inmunoglobulina G (Waaler, E., Acta Pathol. Microbiol.
Scand. 17 (1940) 172-188; Moore, T. L., y Dorner,
R. N., Clin. Biochem. 26 (1993) 75-84). Aunque el FR
presenta algunas limitaciones, es actualmente el único marcador
inmunológico de artritis reumatoide incluido en los criterios ARA.
Al margen de la AR también se ha encontrado en otras enfermedades
inflamatorias reumáticas, enfermedades no reumáticas e incluso en
personas sanas con edad superior a 60 años (Bartfeld, H., Ann. NY
Acad. Sci. 168 (1969) 30- 40). Los autoanticuerpos de FR pertenecen
a todas las clases de inmunoglobulinas y la mayoría de los ensayos
utilizados actualmente no diferencian entre los isotipos IgM, IgG e
IgA. Estos ensayos de FR también denominados ensayos de FR total
determinan mayoritariamente las IgM pero también cubren las IgG o
IgA en cierto grado dependiendo del formato del ensayo y del
proveedor (Bas, S., et al., Ann. Rheum. Dis. 61 (2002)
505-510). Más recientemente los isotipos IgG e IgA
de FR han pasado a ser de interés en el diagnóstico de la AR. Cuando
los tres isotipos de FR se encuentran elevados, el valor
diagnóstico del ensayo FR puede ser mayor (Swedler, W., et
al., J. Rheumatol 24 (1997) 1037-1044). Además
se atribuye cierto valor pronóstico a algunos de estos isotipos FR.
Especialmente, se ha detectado que una concentración elevada de FR
de tipo IgA es un indicador de una progresión grave de la
enfermedad (Jorgensen, C., et al., Clin. Exp. Rheum. 14
(1996) 301-304). En una combinación de marcadores de
acuerdo con la presente solicitud, el marcador de FR puede ser
cualquier forma de determi-
nación del FR, lo que incluye FR total, isotipos únicos específicos de FR o cualquier combinación de isotipos de FR.
nación del FR, lo que incluye FR total, isotipos únicos específicos de FR o cualquier combinación de isotipos de FR.
La familia de metaloproteasas de matriz (=MMP)
degrada casi todos los componentes de la matriz
extra-celular. Por ello, las MMP se han relacionado
con varios tipos de cáncer, pero también con los procesos
inflamatorios en la AR. La MMP-1 y la
MMP-3 son producidas por los fibroblastos,
osteoblastos y células endoteliales tras la estimulación por
citoquinas proinflamatorias como la IL-1 o el
TNF-\alpha. Generalmente las MMP se encuentran en
la circulación como una proforma inactiva y el marcador
MMP-1 y MMP-3, respectivamente, tal
y como se utiliza aquí también está relacionado con tal proforma
inactiva. MMP-1 y MMP-3 se han
detectado en el fluido sinovial de los pacientes con AR y los
niveles responden a la terapia
anti-TNF-\alpha. La metaloproteasa
más preferible para su utilización en un panel de marcadores de AR
de acuerdo con la presente invención es la
MMP-1.
En lugar de las metaloproteasas mencionadas
anteriormente, también es posible utilizar sus correspondientes
inhibidores, en conjunto denominados inhibidores tisulares de las
metaloproteasas de matriz (=TIMP), por ejemplo,
MMP-1 y MMP-3 son inactivadas in
vivo por TIMP-1, que es una sialoglicoproteína
de 29,5 kDa que forma un complejo estequiométrico 1:1 con las MMP.
Se ha investigado la relación de TIMP-1 y
TIMP-2 con la destrucción de cartílago en la AR
(Ishiguro, N., et al., Arthritis Rheum. 44 (2001)
2503-2511).
Las proteínas S100 forman una familia en
constante aumento de proteínas que se unen al Ca^{2+}, que
actualmente incluye más de 20 miembros. La estructura
fisiológicamente relevante de las proteínas S100 es un homodímero
pero algunas pueden formar también heterodímeros entre ellas, por
ejemplo la S100A8 y la S100A9. Las funciones intracelulares van
desde la regulación de la fosforilación de proteínas, de actividades
enzimáticas, la dinámica del citoesqueleto o la implicación en la
proliferación celular y en la diferenciación. Como algunas proteínas
S100 se liberan también desde las células, también se han descrito
funciones extracelulares, por ejemplo, supervivencia neuronal,
proliferación astrocitaria, inducción de apoptosis y regulación de
los procesos inflamatorios. La S100A8, S100A9, el heterodímero
S100A8/A9 y S100A12 se han encontrado en la inflamación, entre las
que S100A8 responde a inflamación crónica, mientras que S100A9,
S100A8/A9 y S100A12 aumentan en la inflamación aguda. S100A8,
S100A9, S100A8/A9 y S100A12 se relacionan con diferentes
enfermedades con componente inflamatorio, lo que incluye algunos
cánceres, el rechazo de aloinjerto renal, colitis y de forma más
importante con la AR. (Burmeister, G., y Gallacchi, G.,
Inflammopharmacology 3 (1995) 221-230; Foell, D.,
et al., Rheumathology 42 (2003) 1383-1389).
Los marcadores S100 más preferibles para su utilización en un panel
de marcadores de AR de acuerdo con la presente solicitud son S100A8,
S100A9, el heterodímero S100A8/A9 y S100A12.
El CD14 es una proteína de la membrana de
promonocitos, monocitos, macrófagos y granulocitos activados, en
los que sirve como receptor para el lipopolisacárido. Induce la
secreción de factores citotóxicos e inmunomoduladores como el
oxígeno reactivo (O_{2}), factor de necrosis tumoral
(TNF-\alpha), interleuquinas
(IL-1, IL-6 e IL-8)
y factor activador de plaquetas (PAF). El CD14 unido a membrana se
libera para proporcionar CD40 soluble (=sCD14) en respuesta a los
factores activadores o diferenciadores como el IFN\gamma.o el
TNF-\alpha. La función fisiológica del sCD14 no
está del todo clara todavía. Como en la AR y en otras enfermedades
autoinmunes están involucrados procesos inflamatorios e
inmunológicos, el sCD14 también se ha investigado en estas
enfermedades. Cuando se evaluó la terapia anti-CD14
como una nueva opción terapéutica en la AR, la concentración de
sCD14 anteriormente elevada se disminuyó rápidamente y se redujo la
sinovitis (Horneff, G., et al., Clin. Exp. Inmunol 91 (1993)
207-213).
El glicosaminoglicano ácido hialurónico es una
de las macromoléculas esenciales para el funcionamiento de una
articulación. Es sintetizado por los fibroblastos y otras células
especializadas del tejido conectivo. El ácido hialurónico está
involucrado en la formación de la matriz extracelular y en las
uniones de célula a célula. Se encuentran altas concentraciones en
el fluido sinovial, donde es responsable de la retención de agua,
contribuyendo de esta manera a la lubricación de las articulaciones.
En la artritis reumatoide la síntesis de ácido hialurónico es
estimulada por los mediadores proinflamatorios IL-1
y TNF-\alpha lo que conduce a un aumento de los
niveles en suero/plasma (Sawai, T., y Uzuki, M., Connective Tissue
33 (2001) 253-259).
Una característica de la artritis reumatoide es
la invasión de las articulaciones por un tejido sinovial
proliferante también conocido como panus. Una parte significativa
del panus consiste en vasos sanguíneos que suministran nutrientes
al tejido en crecimiento. Por lo tanto, también se han investigado
en la AR las moléculas relevantes en la angiogénesis, tanto como
marcadores de AR como posibles dianas terapéuticas (Brenchley,
P.E.C., Clin. Exp. Inmunol. 121 (2000) 426-429).
Entre estas, el factor de crecimiento endotelial vascular (=VEGF) se
ha evaluado en más detalle. El VEGF es una glicoproteína secretada
que se modifica para generar cuatro isoformas diferentes. Dos de
estas isoformas se difunden fácilmente mientras que el resto de
isoformas se unen fuertemente a la heparina y se encuentran
mayoritariamente en asociación con proteoglicanos que contienen
heparina. El VEGF actúa como una quimioquina sobre las células
endoteliales, monocitos y osteoblastos conduciendo en último
término a la neovascularización y a un aumento de la permeabilidad
microvascular. El VEGF se ha detectado en el fluido sinovial y el
suero de los pacientes con AR (Lee, S.S., et al., Clin. Exp.
Rheumathology 19 (2001) 321-324; Ballara, S.,
Arthritis Rheum. 44 (2001) 2055-2064).
Preferiblemente, el marcador de angiogénesis es el VEGF.
Los tejidos de las articulaciones más
importantes son hueso, cartílago y el sinovio. Como la artritis
reumatoide es una enfermedad destructiva estos tejidos serán los
más afectados. Estos son una fuente probable de potenciales
marcadores biológicos en el campo de la AR. En principio estos
marcadores pueden proceder no sólo de la destrucción del respectivo
tejido sino también de un proceso de reparación desregulado y/o
inefectivo. Un experto entenderá que los marcadores del metabolismo
del hueso, cartílago y sinovio pueden originarse por la síntesis o
por la destrucción de estos tejidos. Los diferentes marcadores del
metabolismo del hueso, cartílago y/o sinovio pueden perfilarse a
partir de dos grupos diferentes de proteínas. Proceden de los
numerosos tipos de colágeno o de proteínas no colágenas. Las
proteínas no colágenas a menudo están involucradas en la formación
de la matriz extracelular. Algunos de estos marcadores pueden
encontrarse en los tres tejidos en cantidades variables.
Los marcadores y productos del metabolismo del
hueso y/o cartílago incluyen tanto marcadores de la degradación del
hueso y/o cartílago como marcadores de la formación del hueso y/o
cartílago. Los marcadores preferibles derivados del metabolismo del
colágeno son marcadores como:
1. Piridinolina (=PYD), desoxipiridinolina
(=DPD) y Glc-Gal-PYD: La
piridinolina (=PYD) estabiliza el colágeno entrecruzando las
cadenas de la triple hélice de colágeno. La estructura química de la
PYD es muy estable y puede encontrarse en suero y orina como
subproducto de la degradación del colágeno (Knott, L., y Bailey,
A.J., Bone 22 (1998) 181-187). Se ha asociado con la
artritis (Kaufmann, J., et al., Rheumatology 42 (2003)
314-320). La PYD sirve para monitorizar la
afectación del cartílago en la destrucción de articulaciones ya que
es liberada desde el cartílago y sólo hasta cierto grado por el
hueso mientras su prima cercana desoxi-piridinolina
(=DPD) se origina mayoritariamente a partir del hueso. Los tres
marcadores se han asociado con la artritis (Kaufmann,
supra). La forma glicosilada
Glc-Gal-PYD se ha encontrado
mayoritariamente en el tejido sinovial (Gineyts, E., et al.,
Rheumatology 40 (2001) 315-323).
2. Telopéptidos entrecruzados:
CTX-I, CTX-II, NTX-I
y el epítopo LQ que son telopéptidos entrecruzados del extremo C- o
N-terminal de los colágenos tipo I o tipo II,
respectivamente, y de los que el
\beta-CTX-I es también conocido
como \beta-CrossLaps® (Bonde, M., et al.,
Clin. Chem. 40 (1994) 2022-2025). El telopéptido
carboxiterminal del colágeno tipo I (=ICTP) se refiere a un
fragmento y marcador del colágeno tipo I que originalmente se
derivó a partir de colágeno tipo I mediante escisión con
cianobromuro.
3. Péptidos lineales derivados del colágeno: El
ensayo denominado Cartilaps® mide un péptido lineal que se deriva
de la región C-terminal del colágeno tipo II.
4. Aminoácidos modificados: El colágeno
comprende aminoácidos modificados como la hidroxiprolina y
galactosil hidroxilisina que pueden utilizarse como marcador de la
ruptura del colágeno (Al-Dehaimi, A.W., et
al., Clin. Chem. 45 (1999) 676-681).
5. Neoepítopos del colágeno:
Col2-3/4 y CIIN son neoepítopos generados por la
escisión inicial del colágeno II por las colagenasas (Billinghurst,
R.C., et al., J. Clin. Invest. 99 (1997)
1534-1545).
6. Marcadores de colágeno que se considera que
reflejan la formación de hueso: el propéptido
N-terminal así como el C-terminal
del colágeno tipo I (=PINP y PICP), respectivamente, se escinden del
polipéptido precursor (procolágeno) durante/tras la síntesis y se
consideran marcadores de la formación de hueso. PIICP es el
propéptido correspondiente del colágeno tipo II, mientras PIIINP se
deriva del colágeno tipo III.
Preferiblemente el marcador del metabolismo del
hueso y/o cartílago también puede ser un marcador no colágeno,
como: CS846, que es un epítopo del condroitin sulfato generado
durante la síntesis de agrecano; proteína de matriz oligomérica del
cartílago (=PMOC) que tiene funciones de enlazante en el cartílago
(Saxne, T., y Heinegard, D., Br. J. Rheumatol. 31 (1992)
583-591); proteína de la capa intermedia del
cartílago (=PCIC), que es una proteína de la matriz del cartílago
(Lorenzo, P., et al., J. Biol. Chem. 273 (1998)
23463-23468); proteínas de la matriz del cartílago
1-3 también conocidas como matrilinas;
condromodulinas que actúan como moléculas señalización en el
cartílago (Suzuki, F., Connect. Tissue Res. 35 (1996) 303- 307);
proteína sensible al ácido retinoico derivada del cartílago
(=PARDC) o MIA, que tiene una función aun por definir en la
modulación de los condrocitos (Müller-Ladner, U.,
et al., Rheumatology 38 (1999) 148-154);
osteocalcina, sintetizada por los osteoblastos, es una importante
proteína de matriz no colágena del hueso y se utiliza para
monitorizar el recambio óseo (Gundberg, C. M., et al., J.
Clin. Ligand Assay 21 (1998) 128-138); y las
sialoproteínas del hueso, que son importantes proteínas de matriz
no colágenas del hueso, como la sialoproteína II del hueso, ahora
conocida como la sialoproteína del hueso, que por ejemplo, se ha
evaluado como marcador del recambio óseo (Saxne, T., et al.,
Arthritis Rheum. 38 (1995) 82-90).
Los productos del metabolismo del sinovio que
pueden utilizarse como marcador para la evaluación de la AR
incluyen: CTXIII, que es un telopéptido derivado del colágeno tipo
III, YKL40 que es una proteína de tipo quitinasa 3 de la matriz
extracelular (Johansen, J. S., et al., Scand. J. Rheumatol.
30 (2001) 297-304), y agrecano, que es un bloque de
construcción de los proteoglicanos así como su producto de
degradación, el queratán sulfato.
Preferiblemente el panel de marcadores de la AR
comprende al menos tres marcadores, entre los que figuran
anti-PCC, IL-6 y un tercer marcador
seleccionado de entre el grupo que consiste en PCR, AAS, S100,
osteopontina, FR, MMP-1, MMP-3,
ácido hialurónico y un producto del metabolismo del colágeno.
En la evaluación del panel de marcadores de la
AR que comprende anti-PCC, IL-6 y
S100, es especialmente preferible S100A12.
Un panel de marcadores de la AR más preferible
comprende anti-PCC, IL-6 y AAS.
Un panel de marcadores de la AR más preferible
comprende anti-PCC, IL-6 y la
proforma de la MMP-1, es decir,
pro-MMP-1.
Como se ha mencionado anteriormente (véanse los
criterios ARA), a pesar de las severas limitaciones, el factor
reumatoide (FR) actualmente es el único marcador bioquímico
generalmente aceptado para apoyar en el establecimiento de un
diagnóstico de AR. Se tiene claras expectativas de que la
combinación de marcadores de la presente solicitud mejorará
significativamente el diagnóstico de AR y complementará o podría
incluso finalmente reemplazar el ensayo del FR. La utilización de
un panel de marcadores que comprende al menos
anti-PCC e interleuquina 6 en diagnóstico de la AR
por lo tanto representa otro aspecto de la presente solicitud.
Tal y como un experto en la materia apreciará,
pueden utilizarse uno o más marcadores adicionales para mejorar aun
más la exactitud del diagnóstico, o, en caso necesario aumentar la
sensibilidad del diagnóstico a expensas de la especificidad o
viceversa. En algunas áreas diagnósticas, por ejemplo, en la
detección de una infección por VIH, la sensibilidad es de máxima
importancia. La elevada sensibilidad requerida puede conseguirse a
expensas de la especificidad, lo que conduce a un número aumentado
de casos falsos positivos. En otros casos, por ejemplo como ejemplo
simple, cuando se evalúan los antígenos de grupo sanguíneo, la
especificidad es de vital importancia.
Un aspecto más preferible está relacionado con
la utilización de un panel de marcadores en el diagnóstico de la
AR, cuando este panel comprende anti-PCC,
interleuquina 6 y al menos un marcador adicional seleccionado de
entre el grupo que consiste en PCR, AAS, S100, osteopontina, FR,
MMP-1, MMP-3, ácido hialurónico,
sCD14, marcadores de la angiogénesis y productos del metabolismo
del hueso, cartílago o sinovio.
El método de acuerdo con la presente solicitud
será de gran utilidad en la valoración de la severidad de la AR.
Cuanto mayor es el nivel de anti-PCC y/o mayor es el
nivel de IL-6 más severa es la enfermedad. Con las
combinaciones de marcadores o paneles de marcadores ahora
disponibles no será más que una experimentación rutinaria el
desarrollar por ejemplo, puntuaciones para la enfermedad como un
indicador de la gravedad de la enfermedad. Así, el método de
acuerdo con la presente solicitud es preferiblemente también
utilizado para evaluar la severidad de la enfermedad.
El método de la presente solicitud también será
de gran ayuda en la monitorización del curso de la enfermedad. Esto
se consigue más fácilmente midiendo en una muestra del paciente
anti-PCC e IL-6 así como marcadores
adicionales opcionales en varios momentos a lo largo del tiempo y
comparando los niveles absolutos y/o los niveles relativos de los
marcadores en esos diferentes momentos. Por lo tanto es más
preferible utilizar el método de acuerdo con la presente solicitud
para monitorizar el curso de la enfermedad en un paciente con
AR.
También se reconoce que la presente invención
será de gran ayuda en la valoración de la eficacia de cualquier
tratamiento de la AR. La eficacia del tratamiento se reflejará
mediante cambios en los niveles de marcadores. Si un tratamiento
tiene el efecto deseado al menos el nivel de uno de los dos de
marcadores, anti-PCC o IL-6, se
reducirá. El método de acuerdo con la presente invención por lo
tanto también se utiliza preferiblemente para evaluar la eficacia
del tratamiento. El mismo fenómeno, es decir, una reducción en el
nivel de marcador de al menos uno de entre anti-PCC
y IL-6, puede aplicarse fácilmente a la selección
del fármaco adecuado así como la dosificación más apropiada de los
fármacos en la AR. También es preferible la utilización de un método
de esta invención en la selección del fármaco adecuado y/o la
dosificación más apropiada.
El método de la presente solicitud también
permitirá la selección e identificación de nuevos fármacos en el
campo de la AR. Esta aplicación representa otro aspecto
preferible.
Será también una gran ventaja que los subgrupos
de pacientes puedan ser identificados para y en los estudios
clínicos por su diferencia en el nivel de anti-PCC e
IL-6, y correlacionar esta diferencia en el nivel de
marcador con la eficacia del fármaco bajo investigación.
La presente solicitud también está relacionada
con un equipo para realizar el método de esta invención que
comprende los reactivos necesarios para medir específicamente
anti-PCC e interleuquina 6, respectivamente. El
equipo puede comprender opcionalmente reactivos auxiliares para
realizar la medición de tanto anti-PCC como
IL-6.
Los siguientes Ejemplos, referencias, listado de
secuencias y figuras se proporciona para ayudar en la comprensión
de la presente invención, el verdadero alcance de la cual se indica
en las reivindicaciones anexas.
\vskip1.000000\baselineskip
"Puntuación DR" en todas las Figuras
significa ``puntuación discriminante regularizada regular, es decir,
la puntuación obtenida al aplicar un Análisis Discriminante
Regularizado; "ABC" en todas las Figuras significa "área
bajo la curva":
Fig. 1 Análisis de COR de los pacientes
diagnosticados de AR frente a los controles que incluyen OA
utilizando log FR total solo.
Fig. 2 Análisis de COR de los pacientes
diagnosticados de AR frente a los controles que incluyen OA
utilizando log anti-PCC solo.
Fig. 3 Análisis de COR de los pacientes
diagnosticados de AR frente a los controles que incluyen OA
utilizando la combinación de log anti-PCC y log
IL-6.
Fig. 4 Análisis de COR de los pacientes
diagnosticados de AR frente a los controles que incluyen OA
utilizando la combinación de log anti-PCC, log
IL-6 y log ácido hialurónico.
Fig. 5 Análisis de COR de los pacientes
diagnosticados de AR frente a los controles que incluyen OA
utilizando la combinación de log anti-PCC, log
IL-6 y log AAS.
\vskip1.000000\baselineskip
Muestras derivadas a partir de 389 pacientes de
AR altamente caracterizados con una duración máxima de enfermedad
de 15 años se recogieron en cinco centros europeos con un
seguimiento de dos años. Todos los individuos se diagnosticaron
como pacientes de AR de acuerdo con los criterios ARA y tenían un
estado funcional de \leqIII según la clasificación mediante los
criterios ARA (Hochberg, M.C., et al., Arthritis Rheum. 35
(1992) 498-502). Todos los pacientes se
documentaron con un cuaderno de recogida de datos (=CRD) extensivo.
El CRD incluye el cuestionario de evaluación de la salud, el
cuestionario SF36, el contaje de articulaciones hinchadas y
rígidas, la puntuación Larsen, parámetros de laboratorio, historial
clínico de cirugías relevantes, medicación,
co-morbilidades y medicación para las
co-morbilidades. Se realizaron rayos X cada año
siguiendo el procedimiento estandarizado. Sólo se han incluido en
el presente análisis muestras basales obtenidas de los sujetos
incluidos en este estudio.
También se recogieron muestras derivadas de 624
sujetos control. En estos controles se excluyeron sólo los sujetos
positivos para AR pero no otras formas de artritis. De esta cohorte
se escogieron 200 muestras con un rango de edad como el de las
muestras de AR del estudio. Como el objetivo del estudio era
discriminar la AR no sólo en sujetos sanos sino también de otras
enfermedades de las articulaciones, se añadieron 190 pacientes con
OA tibiofemoral o patelofemoral de la rodilla como controles
enfermos. En estos pacientes de OA se determinaron los parámetros
clínicos y de laboratorio y se calculó la puntuación radiográfica de
Kellgren y Lawrence (Kellgren, J. H., y Lawrence, J. S., Ann.
Rheum. Dis. 16 (1957) 494-502).
Los datos demográficos de la población del
estudio se proporcionan en la Tabla 1.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La Tabla 2 presenta una selección de los ensayos
utilizados y proporciona el formato de ensayo así como los
distribuidores de los ensayos. La mayoría de los ensayos eran en
formato de ELISA en placas microtituladas manuales (=PMT). FR y PCR
se determinaron en un formato de ensayo homogéneo en un analizador
automático Hitachi. Las concentraciones de marcador se determinaron
en muestras de suero con estos ensayos disponibles comercialmente
en los pacientes así como en los controles.
Las cohortes de pacientes se separaron al azar
en un grupo de entrenamiento (aprox. 67%) y en un grupo de prueba
(aprox. 33%). En el grupo de entrenamiento se desarrollo un
algoritmo de clasificación y en el grupo de prueba independiente se
validó el algoritmo. Como puede observarse en la Tabla 3 los
respectivos grupos se escogieron para que fueran muy parecidos en
tamaño así como en edad.
Los algoritmos de clasificación se generaron con
un Análisis Discriminante Regularizado (ADR), que es una
generalización del Análisis discriminante común, es decir, Análisis
discriminante cuadrático y lineal (McLachlan, G.J., Discriminant
Analysis and Statistical Pattern Recognition, Wiley Series in
probability and mathematical statistics, 1992). En el ADR se
utilizan alternativas a las estimaciones usuales de máxima
verosimilitud ("plug-in") para las matrices de
covarianza. Estas alternativas se caracterizan por dos parámetros
(\lambda, \gamma), los valores de los cuales se adaptan a la
situación individual minimizando conjuntamente una estimación basada
en muestras del riesgo de clasificación errónea futura (Friedman,
J.H., Regularized Discriminant Analysis, J. of the American
Statistical Association, Vol. 84 (1989) 165-175).
Como método alternativo los algoritmos de máquinas de soporte
vectorial (Hastie, Trevor, Tibshirani, Robert, Friedman, Jerome, The
Elements of Statistical Learning, Springer Series in Statistics,
2001) pueden ajustarse con resultados de clasificación
comparables.
Los paneles de marcadores se construyeron paso a
paso empezando por el mejor marcador único para el problema de
clasificación y acabando cuando el error de clasificación total ya
no cambia de forma notable. Para obtener distribuciones
centralizadas cada marcador único se transformó con la función
logarítmica natural. Se utilizó una validación cruzada 10 veces en
el grupo de entrenamiento para obtener estimaciones robustas del
error total (sensibilidad, especificidad). Una vez definido el
panel de marcadores, se validó sin ningún otro ajuste con un grupo
de prueba independiente.
La Tabla 4 presenta los resultados de
clasificación de los pacientes diagnosticados de AR frente a los
controles incl. OA en el grupo de entrenamiento. El primer marcador
seleccionado fue anti-PCC, el segundo
IL-6 y el tercero y último el ácido hialurónico
cuando el algoritmo se detuvo. Los resultados de clasificación de la
combinación de marcadores anti-PCC,
IL-6 y AAS se describen también a causa de que
fueron superados sólo por un estrecho margen por la combinación
anti-PCC, IL-6 y ácido hialurónico.
Como referencia se presentan los resultados de clasificación del FR
total, que como se ha mencionado anteriormente es actualmente el
único marcador bioquímico que forma parte de los criterios ARA.
El objetivo de la presente solicitud es mejorar
el diagnóstico correcto de la AR frente a controles que incluyen
OA. El valor diagnóstico del panel de marcadores identificado se
refleja mejor en la Tabla 4 mediante el error total de la
clasificación. El FR, actualmente el único marcador biológico
incluido en los criterios ARA, da lugar a un error total de 0,18.
El anti-PCC como marcador único ya lo reduce a 0,14.
La combinación preferible de anti-PCC y
IL-6 mejora significativamente la clasificación con
un error total de 0,12. Añadir un tercer marcador ayuda finalmente
a minimizar aun más la clasificación errónea. El panel de marcadores
anti-PCC, IL-6 más ácido
hialurónico tiene un error total de 0,11, y la combinación de
anti-PCC, IL-6 más AAS es comparable
dando lugar a un error total de 0,12.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
Lo más crítico de la aproximación escogida en
este estudio es la cuestión de si tiene una aplicabilidad general.
Para comprobarlo, el panel de marcadores identificado en el grupo de
entrenamiento se validó con un grupo de prueba independiente. Como
un experto en la materia comprenderá, los resultados de los grupos
de entrenamiento y de prueba pueden diferir ligeramente a causa de
que ambos grupos eran realmente independientes. La Tabla 5
proporciona los resultados de clasificación utilizando los mismos
marcadores únicos o panel de marcadores que en la Tabla 4. Como en
el grupo de entrenamiento la combinación e
anti-PCC, IL-6 y ácido hialurónico o
AAS reduce el error total de la clasificación. Los resultados
presentados en la Tabla 4 y 5 claramente muestran que la combinación
de anti-PCC, IL-6 y opcionalmente al
menos un marcador adicional mejora significativamente el
diagnóstico de la AR.
Las curvas de COR de los marcadores y
combinaciones de marcadores, respectivamente, de la Tabla 5 se
muestran en las Figuras de 1 a 5.
<110> Roche Diagnostics GmbH F.
Hoffmann-La Roche AG
\vskip0.400000\baselineskip
<120> Método para la evaluación de la
artritis reumatoide mediante la medición de anti-PCC
e interleuquina 6
\vskip0.400000\baselineskip
<130> 22353 WO
\vskip0.400000\baselineskip
<150> 03029658.6
\vskip0.400000\baselineskip
<151>
2003-12-23
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<170> PatentIn versión 3.2
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> péptido sintético
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> característica miscelánea
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (9)...(9)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa indica citrulina
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
Claims (6)
1. Un método para valorar la eficacia de un
tratamiento para la artritis reumatoide (AR) in vitro
mediante marcadores biológicos, lo que comprende la medida en una
muestra de la concentración de al menos
a) anti-PCC y
b) interleuquina 6, y
c) la correlación de las concentraciones
determinadas en los pasos a) y b) con la eficacia de un
tratamiento.
\vskip1.000000\baselineskip
2. El método de acuerdo con la reivindicación 1,
que además comprende la medida de al menos un marcador adicional
seleccionado de entre el grupo que consiste en PCR, AAS, S100,
osteopontina, FR, MMP-1, MMP-3,
ácido hialurónico, sCD14.
3. El método de acuerdo con la reivindicación 2,
en el que dicho marcador adicional es el marcador AAS.
4. La utilización de un panel de marcadores que
comprende al menos anti-PCC e interleuquina 6, para
evaluar en una muestra la eficacia de un tratamiento para la
AR.
5. La utilización de acuerdo con la
reivindicación 4 que comprende anti-PCC,
interleuquina 6 y al menos un marcador adicional seleccionado de
entre el grupo que consiste en PCR, AAS, S100, osteopontina, FR,
MMP-1, MMP-3, ácido hialurónico,
sCD14.
6. La utilización de un panel de marcadores que
comprende al menos anti-PCC, interleuquina 6 y el
marcador AAS para evaluar en una muestra la eficacia de un
tratamiento para la AR.
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2505843A1 (en) | 2002-11-12 | 2004-05-27 | Becton, Dickinson And Company | Diagnosis of sepsis or sirs using biomarker profiles |
| MXPA05005031A (es) | 2002-11-12 | 2005-11-17 | Becton Dickinson Co | Diagnostico de la sepsis o sirs usando perfiles de biomarcadores. |
| ATE364177T1 (de) * | 2004-07-07 | 2007-06-15 | Hoffmann La Roche | Kombinationen von markern zum nachweis von typ 1 und 2 diabetes |
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| WO2007013949A2 (en) * | 2005-07-21 | 2007-02-01 | Wayne State University | Asbestos exposure, pleural mesothelioma, and serum osteopontin levels |
| FI20050814A0 (fi) * | 2005-08-11 | 2005-08-11 | Procollagen Oy | Menetelmä nivelreumassa muodostuvien kollageeniautovasta-aineiden havaitsemiseksi |
| US20090142792A1 (en) * | 2007-06-21 | 2009-06-04 | Robinson William H | Biomarkers for the diagnosis of autoimmune disease |
| GB0803107D0 (en) * | 2008-02-20 | 2008-03-26 | Axis Shield Diagnostics Ltd | Method |
| WO2009115612A1 (en) * | 2008-03-21 | 2009-09-24 | Universiteit Hasselt | Biomarkers for rheumatoid arthritis |
| US8669113B2 (en) | 2008-04-03 | 2014-03-11 | Becton, Dickinson And Company | Advanced detection of sepsis |
| WO2010075249A2 (en) | 2008-12-22 | 2010-07-01 | Genentech, Inc. | A method for treating rheumatoid arthritis with b-cell antagonists |
| EP2204655A1 (en) | 2008-12-23 | 2010-07-07 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Diagnostic prediction of rheumatoid arthritis and systemic lupus erythematosus |
| CN101988924B (zh) * | 2009-07-31 | 2014-06-11 | 上海科新生物技术股份有限公司 | 检测血液抗环瓜氨酸多肽抗体的试纸条及制备方法 |
| CN102507918B (zh) * | 2011-11-09 | 2014-10-29 | 四川新健康成生物股份有限公司 | 抗环瓜氨酸肽抗体测定试剂盒 |
| US9829493B2 (en) | 2013-07-15 | 2017-11-28 | Steven J. Svoboda | Methods and apparatus for assessment of risk for joint injury |
| JP6220222B2 (ja) | 2013-10-28 | 2017-10-25 | シスメックス株式会社 | 関節リウマチの診断を補助するための方法、システム及びコンピュータプログラム製品 |
| CN107484423A (zh) | 2015-02-13 | 2017-12-15 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 通过测量抗ccp和抗pik3cd来评估类风湿性关节炎的方法 |
| WO2016183310A1 (en) | 2015-05-12 | 2016-11-17 | Steere Allen C | Autoantigens for diagnosis of rheumatoid arthritis |
| EP3463441B1 (en) | 2016-06-07 | 2023-10-25 | The General Hospital Corporation | Identification of a t cell epitope of prevotella copri that induces t cell responses in patients with rheumatoid arthritis |
| CN109929009B (zh) * | 2019-03-20 | 2021-06-04 | 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 | Ccp肽段、包含其的抗原、试剂、试剂盒及应用 |
| US11367521B1 (en) | 2020-12-29 | 2022-06-21 | Kpn Innovations, Llc. | System and method for generating a mesodermal outline nourishment program |
| US12512221B2 (en) | 2020-12-29 | 2025-12-30 | Kpn Innovations Llc | System and method for generating a mesodermal outline nourishment program |
Family Cites Families (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4208479A (en) * | 1977-07-14 | 1980-06-17 | Syva Company | Label modified immunoassays |
| SE500044C2 (sv) * | 1985-02-15 | 1994-03-28 | Gambro Lundia Ab | Peptidförening, antiserum framställt med användning av denna förening samt användning av föreningen |
| JP3399948B2 (ja) | 1992-06-26 | 2003-04-28 | ザ トラスティーズ オブ プリンストン ユニバーシティ | Ｐ９０抗体またはプローブを用いた前癌細胞または癌細胞の検出方法 |
| US5538897A (en) | 1994-03-14 | 1996-07-23 | University Of Washington | Use of mass spectrometry fragmentation patterns of peptides to identify amino acid sequences in databases |
| FR2752842B1 (fr) | 1996-08-30 | 1998-11-06 | Biomerieux Sa | Antigenes derives des filaggrines et leur utilisation pour le diagnostic de la polyarthrite rhumatoide |
| NL1004539C2 (nl) | 1996-11-15 | 1998-05-20 | Stichting Tech Wetenschapp | Peptide afgeleid van een door auto-antilichamen van patiënten met reumatoïde artritis herkend antigeen, antilichaam daartegen en werkwijze voor het detecteren van auto-immuunantilichamen. |
| WO1998045478A2 (en) | 1997-04-07 | 1998-10-15 | Institut Pasteur | Diagnostic means useful for predictive assessment of human hepatocellular carcinoma disease (hcc), as well as diagnostic methods using the same |
| CA2309534A1 (en) * | 1997-11-28 | 1999-06-10 | Innogenetics N.V. | Synthetic peptides containing citrulline recognized by rheumatoid arthritis sera as tools for diagnosis and treatment |
| FR2773157B1 (fr) | 1997-12-30 | 2001-10-05 | Bio Merieux | Epitopes peptidiques reconnus par des auto-anticorps antifilaggrine presents dans le serum des patients atteints de polyarthrite rhumatoide |
| US7632486B1 (en) | 1998-08-21 | 2009-12-15 | Etsuro Ogata | Method for diagnosing bone metastasis of malignant tumor |
| US6309888B1 (en) | 1998-09-04 | 2001-10-30 | Leuven Research & Development Vzw | Detection and determination of the stages of coronary artery disease |
| FR2795735B1 (fr) * | 1999-07-01 | 2001-09-07 | Univ Toulouse | Derives citrullines de la fibrine et leur utilisation pour le diagnostic ou le traitement de la polyarthrite rhumatoide |
| EP1240180A2 (en) | 1999-12-21 | 2002-09-18 | Innogenetics N.V. | Peptides designed for the diagnosis and treatment of rheumatoid arthritis |
| CA2410158A1 (en) | 2000-06-02 | 2001-12-13 | Large Scale Proteomics, Corp. | Protein markers for pharmaceuticals and related toxicity |
| IL137307A0 (en) | 2000-07-13 | 2001-07-24 | Biopreventive Ltd | A rapid non-invasive method for differential acute cardiac disease diagnosis |
| AU2001288921A1 (en) | 2000-09-11 | 2002-03-26 | Ciphergen Biosystems, Inc. | Human breast cancer biomarkers |
| US20020072492A1 (en) | 2000-09-12 | 2002-06-13 | Myers Timothy G. | Non-genetic based protein disease markers |
| HN2001000224A (es) * | 2000-10-19 | 2002-06-13 | Pfizer | Compuestos de imidazol condensado con arilo o heteroarilo como agentes anti - inflamatorios y analgesicos. |
| AU2002230997A1 (en) | 2000-12-15 | 2002-06-24 | Genetics Institute, Llc | Methods and compositions for diagnosing and treating rheumatoid arthritis |
| US6500630B2 (en) * | 2001-01-12 | 2002-12-31 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Marker for inflammatory conditions |
| NL1019540C2 (nl) * | 2001-12-11 | 2003-07-01 | Stichting Tech Wetenschapp | Werkwijze voor het detecteren van auto-antilichamen van patienten die lijden aan reumatoïde artritis, peptide en assaykit. |
| US20030224386A1 (en) * | 2001-12-19 | 2003-12-04 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of rheumatoid arthritis |
| US20030175713A1 (en) | 2002-02-15 | 2003-09-18 | Clemens Sorg | Method for diagnosis of inflammatory diseases using CALGRANULIN C |
| EP1664796B1 (en) * | 2003-09-15 | 2010-12-15 | Oklahoma Medical Research Foundation | Method of using cytokine assays to diagnose, treat, and evaluate ankylosing spondylitis |
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