ES2326307T3

ES2326307T3 - Combinacion de un inhibidor del receptor abl, receptor pdgf y/o receptor de kit de la tirosina quinasa con un compuesto organico capaz de unirse a la glicoproteina acida-alfa1.

Info

Publication number: ES2326307T3
Application number: ES00985244T
Authority: ES
Inventors: Carlo Gambacorti-Passerini; Philipp Lecoutre
Original assignee: Novartis AG
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 1999-12-27
Filing date: 2000-12-22
Publication date: 2009-10-07
Anticipated expiration: 2020-12-22
Also published as: EP1250140B1; US20030125343A1; PT1250140E; HK1050993A1; PE20010991A1; ITMI992711A1; CN1414858A; DE60042283D1; AU2171901A; ATE432069T1; CO5271710A1; CA2394944A1; AR030179A1; WO2001047507A2; BR0016817A; EP1250140A2; ITMI992711A0; TWI246917B; JP2003523325A; US20090221519A1

Abstract

El uso de una combinación de (a) al menos un inhibidor del receptor abl-, PDGF-R-(receptor del factor de crecimiento derivado de las plaquetas) y/o receptor de kit de la tirosina quinasa y (b) al menos un compuesto orgánico capaz de unirse a la glicoproteína ácida-alfa 1, en donde cualquier componente (a) y/o (b) también puede estar presente en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable, si al menos un grupo que forma una sal está presente, para producir una preparación farmacéutica para utilizar como composiciones contra una enfermedad proliferativa que se puede tratar mediante la administración de un inhibidor del receptor abl-, PDGF-R- y/o receptor de kit de la tirosina quinasa, el cual o, durante el tratamiento con 4-(4-metilpiperazin-1-ilmetil)-N-[4-metil-3-(4-piridin-3-il)pirimidin-2-ilamino)fenil]benzamida, se convierte o llega a ser completa o parcialmente resistente a dicho tratamiento.

Description

Combinación de un inhibidor del receptor abl, receptor PDGF y/o receptor de kit de la tirosina quinasa con un compuesto orgánico capaz de unirse a la glicoproteína ácida-\alpha_{1}.

Esta invención se relaciona con las combinaciones de un inhibidor del receptor abl, PDGF y/o del receptor de kit de la tirosina quinasa con un compuesto orgánico capaz de unirse a la glicoproteína ácida-\alpha_{1} (AGP), así como con las preparaciones farmacéuticas, en relación con estados de enfermedad que responden a la inhibición del receptor abl, PDGF y/o del receptor de kit de la tirosina quinasa. En particular, la invención se relaciona con productos o combinaciones que comprenden un inhibidor del receptor abl, PDGF y/o del receptor de kit de la tirosina quinasa con un compuesto orgánico capaz de unirse a la glicoproteína ácida-\alpha_{1}, ya sea en combinación fija o para la administración cronológicamente escalonada o simultánea, y el uso combinado de ambas clases de compuestos, ya sea en combinación fija o para la administración cronológicamente escalonada o simultánea para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades proliferativas, especialmente enfermedades tumorales, especialmente aquellas que se pueden tratar mediante la inhibición de la actividad del receptor abl, PDGF y/o receptor de kit de la tirosina
quinasa.

Antecedentes de la invención

Un número de compuestos conocidos por inhibir la proliferación de células, por medio de la inhibición de ya sea el receptor abl-, el receptor PDGF y/o el receptor del kit de la tirosina quinasa. Por ejemplo, Aplicación Internacional No. WO 97/02266, Aplicación de la Patente Internacional WO98/35958 y especialmente Aplicación de la Patente Europea EP 0 564 409-A, así como Aplicación Internacional No. WO99/03854 mencionan los compuestos que son inhibidores de al menos una de las tirosinas quinasas mencionadas anteriormente. Otros compuestos que son de interés son Tirfostin AG957 (ver Kaur et al., Anticancer Drugs 5, 213-222 (1994), Herbimicina A (Okabe and Uehara, Leukemia and Lymphoma 12, 2156-2162 (1994), Blood 80, 1330-1338 (1994) and Leuk. Res. 18, 213-220 (1994), así como Rioran et al., Oncogene 16, 133-1542 (1998)); Tirfostinas AG 1295, AG 1296 (ver Kovalenko et al., Cancer Res. 54, 6106-6114 (1994), Lipson et al., Pharmacol & Exp- Therap. 285, 844-852 (1998), Krystal et al., Cancer Res. 57, 2203-2208 (1997)); SU 101 (Leflunomide), así como su metabolito (ver Shawer et al., Clin. Cancer Res. 3, 1167-1177 (1997), Mattar et al., FEBS Lett. 334, 161-164 (1993), Cherwinskyi et al., Inflamm. Res. 3, 1167-1177 (1997), and Strawn et al., Exp. Opin. Invest. Drugs 7, 533-573 (1998)); y Piridopirimidinas (ver por ejemplo, Hamby et al., J. Med. Chem. 40, 2296-2303 (1997), Dahring et al., J. Pharmacol. Exp. Ther. 281, 1446-1456 (1997), Klutcho et al., Life Sci. 62,143-150 (1998), Panek et al., J. Pharmacol. Exp. Ther. 283, 1433-1444 (1997), Boschelli et al., J. Med. Chem. 41, 4365-4377 (1998)).

Estos compuestos, como se describe en las aplicaciones de las patentes mencionadas y otras publicaciones, se han demostrado que son efectivas en la profilaxis y especialmente el tratamiento de enfermedades que se causan por la desregulación de la fosforilación y/o actividad de las tirosinas quinasas que se acaban de mencionar.

La fosforilación de las proteínas se ha conocido durante mucho tiempo, como una etapa esencial en la diferenciación y división de las células. La fosforilación se cataliza mediante proteína quinasas subdivididas en serina/treonina y tirosinas quinasas. Las tirosinas quinasas comprenden el receptor PDGF (Factor de Crecimiento Derivado de las Plaquetas) de la tirosina quinasa = PDGF-R TK, abl tirosina quinasa (abl), y receptor de kit de la tirosina quinasa (kit R TK). Cuando estas tirosinas quinasas se desregulan, por ejemplo, por medio de mutación o activación a través de factores externos, por ejemplo, compuestos (compuestos naturales internos, tales como PDGF, o compuestos externos) unidos a ellos, inter alia, el resultado es la desregulación del crecimiento celular.

El PDGF (factor de crecimiento derivado de las plaquetas) es un factor de crecimiento que ocurre muy frecuentemente, el cual juega un papel importante tanto en el crecimiento normal y en la proliferación celular patológica, tal como en carcinogénesis y desórdenes de las células del músculo liso de los vasos sanguíneos, por ejemplo, en aterosclerosis y trombosis. Su inhibición se puede medir en analogía con el procedimiento descrito en EP 0 564 409 mencionado anteriormente (ver también E. Andrejauskas-Buchdunger and U. Regenass in Cancer Research 52, 5353-5358 (1992)).

La inhibición de la abl quinasa, por ejemplo, v-abl-tirosina quinasa se determina de acuerdo con los métodos de N. Lydon et al., Oncogene Research 5, 161-173 (1990) and J. F. Geissler et al., Cancer Research 52, 4492-4498 (1992). En aquellos métodos [Val^{5}]-angiotensina II y [\gamma^{32}P]-ATP se utilizan como sustratos.

La inhibición del receptor de kit de la tirosina quinasa se puede medir por ejemplo, como el ensayo c-Kit quinasa in vitro:

El ensayo c-Kit quinasa in vitro se realiza en placas de 96-pozos como un ensayo de enlace por filtración, utilizando el dominio c-Kit quinasa fusionado a GST(glutationa S transferasa- recombinante, expresada en baculovirus y purificada sobre glutationa-Sefarosa. La proteína GST-fusión se incuba bajo condiciones optimizadas en la presencia o ausencia de fármacos y se determina la inhibición de la quinasa, detectando la disminución en la fosforilación del poli(GluTir)(4:1) péptido P-275. Gamma-[^{33}P]-ATP se utiliza como donante fosfato. Alternativamente, es posible utilizar un ensayo celular par c-Kit: las células que sobre expresan C-Kit están ausentes de suero y se incuban por 90 min a 37ºC con el fármaco antes de la estimulación con el factor de célula madre humana recombinante. Cantidades iguales de proteína a partir de lisados celulares se analizaron para la inhibición de la fosforilación c-Kit por Western blotting utilizando anticuerpos anti-fosfotirosina.

Debido a las propiedades descritas, los compuestos que muestran la inhibición de una de las tirosinas quinasas mencionadas anteriormente se pueden utilizar como terapéuticos, especialmente para el tratamiento de enfermedades proliferativas, tales como cáncer, especialmente tumores y leucemias.

Los compuestos, por otra parte, se pueden utilizar no solamente como ingredientes activos que inhiben el tumor sino también como fármacos contra enfermedades proliferativas no-malignas, por ejemplo, aterosclerosis, trombosis, psoriasis, esclerodermitis y fibrosis. También son apropiados, para las otras aplicaciones mencionadas anteriormente para C-moduladores de la proteína quinasa y se pueden utilizar especialmente en el tratamiento de enfermedades que responden a la inhibición del receptor PDGF de la quinasa.

Un inhibidor de la tirosina quinasa, como se describe anteriormente también inhibe la BCR/Abi quinasa (ver Nature Medicine 2, 561-566 (1996)) y es de esta manera apropiado para el tratamiento de enfermedades tumorales y de cáncer BCR/Abl-positivo, tales como leucemias (especialmente leucemia mieloide crónica y leucemia linfoblástica aguda, donde especialmente los mecanismos apópticos de acción se encontraron), y también muestra los efectos sobre el subgrupo de células madre leucémicas así como potencial para la purificación de estas células in vitro después de la eliminación de dichas células (por ejemplo, eliminación de la médula ósea) y reimplantación de las células una vez se han retirado de células cancerosas (por ejemplo, reimplantación de las células de la médula ósea purificadas).

Además, un inhibidor de la tirosina quinasa como se describe anteriormente puede mostrar efectos útiles en el tratamiento de desórdenes que surgen como resultado del transplante, por ejemplo, transplante alogénico, especialmente rechazo de tejido, tal como especialmente Bronquiolitis obliterante (OB), i.e. un rechazo crónico de trasplantes de pulmón alogénico. En contraste con pacientes sin OB, aquellos con OB con frecuencia muestran una elevada concentración de PDGF en fluidos de lavado broncoalveolar. Los inhibidores de la tirosina quinasa, también pueden ser efectivos en enfermedades asociadas con la proliferación y migración celular del músculo liso vascular (donde PDGF y PDGF-R con frecuencia también juegan un papel), tales como restenosis y aterosclerosis. También pueden ser capaces de inhibir la angiogénesis.

Todos estos usos se describen con detalle en EP 0 564 409, WO 97/02266, WO 99/03854 y WO 98/35958, o las otras referencias mencionadas anteriormente.

Un ejemplo de un compuesto que muestra actividad inhibidora sobre las tirosinas quinasas mencionadas anteriormente, es el compuesto denominado 4-(4-metilpiperazin-1-ilmetil)-N-[4-metil-3-(4-piridin-3-il)pirimidin-2-ilamino)fenil]benzamida, el cual se describe en EP 0 564 409 y, en la forma de la sal sulfonato metano (a partir de ahora STI571), preferiblemente en la forma \beta-cristal, en WO 99/03854.

Este compuesto es un potente inhibidor de bcr/abl, una proteína de fusión oncogénica que causa Leucemia Mieloide Crónica (CML). Sin embargo, se ha observado en un ensayo clínico en curso, que los pacientes de CML en crisis blástica y pacientes de Leucemia Linfoblástica Aguda Positiva del Cromosoma Filadelfia reincidente (Ph+-ALL) muestran solo respuestas temporales a STI571, que se siguen en un breve periodo de tiempo por el desarrollo de la resistencia.

Anteriormente demostramos, que este compuesto puede curar ratones inyectados con células leucémicas + BCR/
ABL humanas, si la continua inhibición de la actividad de la quinasa de bcr/abl se mantiene. Este modelo se utilizó para estudiar el posible desarrollo de resistencia a STI571. Cuando se trataron animales que tienen tumores grandes (>400 mg), la reducción del tumor se observó en todos los animales, con desaparición en algunos. Sin embargo, ningún animal se curó, los animales reincidentes no respondieron a otro tratamiento, y la actividad de la bcr/abl quinasa no se inhibió por la administración STI571 in vivo, aunque se obtuvieron concentraciones en plasma activas (\approx10 \muM). Los tumores fueron removidos a partir de los animales resistentes, reincidentes, se colocaron en cultivo, y se examinaron dentro de 24 horas para la sensibilidad in vitro a Stet571. 5/5 tumores examinados mostraron una IC_{50} (0.1-0.3 \muM) no significantemente diferente de aquella de la línea KU612 parental.

La resistencia se puede desarrollar, como el resultado de varios factores, que operan ya sea a nivel celular o solamente in vivo. La resistencia al fármaco se puede desarrollar, por ejemplo, como un resultado de la mutación/amplifi-
cación del gen diana, inducción del metabolismo, y, paradójicamente, el aumento de la degradación pos-traduccional de la proteína diana, y similares.

Sorprendentemente, se ha encontrado que los datos farmacocinéticos indican que, los animales reincidentes alcanzaron concentraciones pico similares como controles, pero mostraron una disminución significantemente inferior en concentraciones de ST1571 durante el tiempo. En la actualidad hemos encontrado que esto se debe a la presencia de un factor de enlace en el plasma de animales reincidentes, capaz de disminuir la distribución tisular y la compensación de STI571. Un número de proteínas se examinaron in vitro por su capacidad para inhibir la actividad biológica de STI571. Mientras que la albúmina no influye la inhibición de STI571 de la proliferación de KU812, la glicoproteína ácida-\alpha_{1} (AGP) en concentraciones fisiológicas, aumenta la IC_{50} para STI571 hasta 90 veces. AGP también inhibe el efecto de STI571 sobre la fosforilación de bcr/abl in vitro. La constante de asociación (Ka) para el enlace específico con STI571 se calcula y encuentra que es 60 veces más alta en AGP que en la albúmina. Los niveles de AGP se determinaron en ratones, mediante un inmunoensayo. Una fuerte correlación se encuentra entre la carga del tumor y las concentraciones de AGP. Además, el pretratamiento con STI571 in vivo también incrementa los niveles en plasma de AGP. Por consiguiente, los animales pre-tratados con STI571, y luego inyectados con células KU812 y tratados con STI571, 24 horas después, son menos sensibles al tratamiento que los controles (animales curados: 8/16 vs. 16/16, p<0.01). Estos resultados sugieren que los niveles de AGP incrementados, ya sean inducidos a partir del tumor o del tratamiento en sí, son responsables del desarrollo de la resistencia a STI571.

La presente invención tiene el cometido de proporcionar un medio para superar la resistencia que desarrolla en animales de sangre caliente si STI571 o cualquier otro de los inhibidores de la tirosina quinasa mencionadas anteriormente se aplica durante el tratamiento de una enfermedad como se menciona anteriormente.

El sorprendente resultado que la resistencia contra un inhibidor de la tirosina quinasa, especialmente STI571, se puede deber al enlace de AGP y de esta manera una concentración libre inferior del fármaco activo en plasma sanguíneo forma una base para la búsqueda de una solución, ya sea por medio del bloqueo de una molécula reguladora, por ejemplo, una proteína reguladora, de permitir la activación de la transcripción del gen de AGP, por medio del bloqueo de la amplificación del gen de AGP, por medio de la inhibición de transcripción genética de la AGP que codifica el mARN, por medio de la inhibición de la traducción de dicho mARN en la proteína madura, por medio de la influencia de su distribución y terminación con la glicoproteína final, por medio de la inhibición de su secreción en plasma sanguíneo, por medio de una amplia dosificación del inhibidor de la tirosina quinasa, por medio de la neutralización de AGP por ejemplo, con anticuerpos, por medio de la activación del metabolismo o eliminación a partir del plasma, por medio de la activación de la degradación pos-traduccional de AGP o sus precursores, y similares.

Inesperadamente, en vista de los reportes que afirman que existe duda sobre la relevancia del desplazamiento del fármaco durante, la terapia de fármaco combinado (ver por ejemplo, Kremer et al., Pharmacological Rev. 40 (1), 1-47 (1988)), actualmente se ha encontrado que es posible, mediante la combinación de uno o más enlaces de los compuestos de AGP con un inhibidor del receptor abl, PDGF y/o receptor de kit de la tirosina quinasa, superar este tipo de resistencia.

Por lo tanto, la presente invención permite una mejora importante en la terapia de pacientes que tienen una de las enfermedades mencionadas en la presente divulgación.

Resumen de la invención

Esta invención se relaciona con una combinación de (a) un inhibidor del receptor abl, PDGF y/o receptor de kit de la tirosina quinasa (componente (a)) y (b) un compuesto orgánico capaz de unirse a la glicoproteína ácida-\alpha_{1} (AGP) (componente (b)), así como con las preparaciones farmacéuticas, en relación con estados de enfermedad que responden a la inhibición del receptor abl-, PDGFR y/o receptor de kit de la tirosina quinasa. En particular, la invención se relaciona con productos o combinaciones que comprenden (a) un inhibidor del receptor abl, PDGF y/o receptor de kit de la tirosina quinasa y (b) un compuesto orgánico capaz de unirse a la glicoproteína ácida-\alpha_{1} (AGP), ya sea en combinación fija o para la administración cronológicamente escalonada o simultánea, y el uso combinado de ambas clases de compuestos, ya sea en combinación fija o para la administración cronológicamente escalonada o simultánea para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades proliferativas, especialmente enfermedades tumorales, especialmente, aquellas que se pueden tratar mediante la inhibición del actividad del receptor abl, PDGF y/o receptor de kit de la tirosina quinasa.

Descripción de las figuras

Fig. 1A y B muestran los efectos de la carga inicial del tumor y de la duración del tratamiento con STI571.

Fig. 1A: Dos grupos de 15 ratones desnudos se inyectaron con 50 x 10^{6} de células leucémicas KU812. El tratamiento con STI571 (160 mg/kg p.o. cada 8 horas por 11 días) se inicia después de 1 día (grupo I; cuadrados) o después de 8 días (grupo II; diamantes) en la presencia de un peso medio del tumor de 276697 mg. Los números en paréntesis indican el número de animales libres de tumor.

Fig. 1B: Los ratones desnudos inyectados con las células KU812 se trataron con STI571 (160 mg/kg p.o. cada 8 horas por 11 días) después de 1 día (grupo I), después de 8 días (grupo II, peso medio del tumor 253\pm122 mg), o después de 15 días (grupo III, peso medio del tumor 1054\pm258 mg). Los resultados representan la media de los tres experimentos consecutivos.

Fig. 1C: Los animales que pertenecen al grupo II se dejan sin tratar (controles) o se tratan con STI571 (160 mg/kg p.o. cada 8 horas) por 11 o 18 días con STI571.

Fig. 2 muestra el efecto del re-tratamiento con STI571 sobre el tumor que reincide después de una respuesta inicial a STI571. Las líneas de puntos se refieren al crecimiento si los tumores sin tratar (ver parte de los métodos en los ejemplos).

Fig. 3 muestra la sensibilidad in vitro a STI571 de dos in vivo tumores resistentes. Los valores se expresaron como % de los controles que se incorporaron 129'362\pm6329 cpm.

Fig. 4 muestra la inhibición in vivo de la actividad de Bcr/Abl de la quinasa por STI571. Los ratones que tienen tumores, se trataron agudamente con STI571 vía oral (160 mg/kg) y se mataron en diferentes puntos de tiempo. Las muestras del tumor se extrajeron y utilizaron para el análisis de western blot con anti-fosfotirosina (pTyr) o anti-Abelson (Abl). STI571 inhibe eficientemente la fosforilación del BCR/ABL tirosina quinasa en los controles (Ctrl) a 2 y 4 horas (80% y 50% de inhibición, mediante análisis densitométrico) comparado con los animales no-tratados (n.t.), mientras que los extractos a partir de animales reincidentes (Rel) son resistentes al tratamiento con STI571.

Fig. 5 muestra las concentraciones en plasma y tumor de STI571 en ratones que tienen tumor pre-tratados o no con STI571. Los animales se trataron agudamente con STI571 (160 mg/kg p.o.) y se mataron 0.5, 2 y 5 horas después. STI571 se determina por HPLC en las muestras de plasma y en extractos de tumor. Los ratones control nunca recibieron un tratamiento previo con STI571, mientras que los ratones pre-tratados se sometieron a dos ciclos de 11 días de STI571 (como en la Fig. 2). Los pesos medios del tumor son 450\pm129 mg en controles y 684\pm283 mg en ratones pre-tratados.

Fig. 6 muestra la sensibilidad in vitro a STI571 de las células KU812 en la presencia de la glicoproteína ácida-\alpha_{1} (A) y Albúmina (B) (ver absorción de la 3H-timidina por los métodos).

Fig. 7 muestra el efecto de dos muestras de suero que contienen diferentes cantidades de AGP sobre la actividad in vitro de STI571 sobre las células KU812.

Fig. 8A y B muestran la determinación de AGP en ratones normales y que tienen tumor.

Fig. 8A: Las concentraciones en plasma de AGP promedio, en ratones con diferentes estados de enfermedad o tratamiento. El grupo 1 (n=11) se refiere a ratones normales, grupo 2 (n=8) a ratones tratados con STI571 por 11 días (y muestreados 3 días después de la descontinuación del tratamiento), grupo 3 (n=6) a ratones que tienen tumor de 8 días (peso medio 304\pm116 mg), grupo 4 (n=7) a ratones que tienen tumor de 15 días (peso medio 1184\pm295 mg).

Fig. 8B: La determinación directa de AGP en ratones que tienen tumor y normales por isoelectrofocalización: las sendas 1-2 se refieren a los ratones normales, las sendas 3-4 a animales que tienen tumores grandes (>1 g). Las diferentes isoformas de AGP se indican y se componen de pH 3.4 y 4.0.

Fig. 9 muestra el efecto de AGP (a 1 mg/ml) y la eritromicina sobre la actividad de STI571 (a 1 \muM) sobre las células KU812.

Fig. 10 muestra el efecto de AGP y la eritromicina sobre la inhibición de autofosforilación de bcr/abl inducida por STI571. 3 x 10^{6} células por pozo incubadas a 37ºC con eritromicina base (100 \muM), STI571 (3 \muM), AGP (2 mg/ml). Después de 1 hora, las células se lavaron dos veces con solución salina reguladora de fosfato fría (PBS) y posteriormente se lisaron en 500 ml de 1 x solución reguladora de Laemmli. Los lisados celulares correspondientes a 90,000 células se analizaron por Electroforesis SDS en 7.5% de poliacrilamida. Se detectaron bcr/abl endogena y bcr/abl tirosina-fosforilada con el correspondiente anticuerpo monoclonal de ratón.

Fig. 11A y B muestra el efecto in vivo de la eritromicina sobre la co-administración con STI571 a ratones que tienen tumor. Los animales que tienen tumores de 11 días se asignaron aleatoriamente a dos grupos separados. 15 ratones se trataron con STI571 y eritromicina (peso medio del tumor 385\pm53 mg), Mientras que otros 15 ratones recibieron solamente STI571 (peso medio del tumor 390\pm114 mg). Los grupos control recibieron solo eritromicina resuspendida en metil celulosa al 5% (5 ratones) o solo metil celulosa al 5% (6 ratones).

Fig. 11A: Peso medio del tumor durante el tratamiento (día 0-20).

Fig. 11B: El porcentaje de ratones que tienen tumor: en cada punto de tiempo el porcentaje de ratones que tienen tumor palpable se calcula sobre el número total de ratones vivos en este momento. El número de ratones vivos en un cierto punto de tiempo se indica por los números en paréntesis (durante el experimento 2 y 3 animales se mataron accidentalmente en el grupo que recibe solo STI571 y en el grupo que recibe el tratamiento combinado, respectivamente).

Fig. 12 muestra el efecto del pretratamiento sobre el efecto anti-leucémico de STI571. Dos grupos de ratones desnudos se trataron con STI571 (160 mg/kg cada 8 horas) por 11 días, iniciando el día 1, después de la inyección de la célula leucémica. La línea discontinua se refiere a los animales control, no pre-tratados. La línea sólida se refiere a animales que han recibido un tratamiento idéntico con STI571, 14 días antes de ser inyectados con bcr/abl de KU812 + células leucémicas.

Descripción detallada de la invención

Sorprendentemente, positivo y incluso preferiblemente, se han observado efectos sinergistas entre los inhibidores del receptor abl-, PDGF-R- y o receptor de kit de la tirosina quinasa y compuestos orgánicos capaces de unirse a la glicoproteína ácida-\alpha_{1} (AGP) en modelos de injerto heterólogo en ratón desnudo. Esto es la evidencia de que los inhibidores de la tirosina quinasa se pueden utilizar no solamente como agentes únicos, sino también especialmente en terapias de combinación con compuestos orgánicos capaces de unirse a la AGP para el tratamiento de enfermedades de cáncer.

Esta combinación ofrece un montón de ventajas: En primer lugar, los inhibidores de la tirosina quinasa pueden jugar efectos secundarios significantes hasta efectos realmente tóxicos, por lo que simplemente el enlace de AGP compensa, mediante un aumento de la dosis de un inhibidor de la tirosina quinasa, es con frecuencia muy difícil o imposible con el fin de obtener un balance responsable entre el uso terapéutico y los efectos secundarios. En las nuevas combinaciones descritas en este punto, sin embargo, es posible disminuir la cantidad de inhibidor de la tirosina quinasa necesaria y de esta manera aliviar los efectos secundarios. En segundo lugar, el compuesto orgánico que se puede utilizar como compuesto capaz de unirse a la AGP, se puede seleccionar a partir de compuestos con una capacidad de tolerancia muy alta, permitiendo de esta manera gran flexibilidad en el tratamiento de pacientes con cáncer. En tercer lugar, debido al hecho de que la liberación de los inhibidores de la tirosina quinasa farmacéuticamente activos, a partir del enlace de AGP en plasma se abre una ruta de tratamiento totalmente nueva, también es posible tratar tipos de cáncer, los cuales han sido muy difíciles de tratar o incluso prácticamente no afectados por la terapia con quimioterapéuticos estándar. Más considerablemente, es posible para superar desensibilización in vivo (resistencia) de células proliferantes para un inhibidor de la tirosina quinasa, que pueden estar presentes, o bien ya en el inicio del tratamiento (por ejemplo, preferiblemente debido a los niveles altos de AGP en plasma sanguíneo) o puede haber desarrollado o se desarrolla durante el tratamiento con un inhibidor del receptor abl-, PDGF-R- y/o receptor de kit de la tirosina quinasa como se describe en la presente divulgación. La presente invención preferiblemente se relaciona con el uso de una combinación de (a) al menos un inhibidor del receptor abl-, PDGF-R- y/o receptor de kit de la tirosina quinasa y (b) al menos un compuesto orgánico capaz de unirse a la glicoproteína ácida-\alpha_{1} (AGP); o sales farmacéuticamente aceptables de cualquier componente (a), (b) o (a) y (b) si al menos un grupo que forma una sal está presente, para producir una preparación farmacéutica para utilizar como composiciones contra una enfermedad proliferativa que se puede tratar mediante la administración de un inhibidor del receptor abl-, PDGF-R- y/o receptor de kit de la tirosina quinasa, el cual es o, durante el tratamiento con 4-(4-metilpiperazin-1-ilmetil)-N-[4-metil-3-(4-piridin-3-il)pirimidin-2-ilamino)fenil]benzamida, se convierte o llega a ser completa o parcialmente resistente a dicho tratamiento.

La invención también se relaciona con un producto que comprende

(a) al menos un inhibidor del receptor abl-, PDGF-R- y/o receptor de kit de la tirosina quinasa y

(b) al menos un compuesto orgánico capaz de unirse a la glicoproteína ácida-\alpha_{1} (AGP),

en donde cualquier componente (a) y/o (b) también puede estar presente en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable, si al menos un grupo que forma una sal está presente.

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En la presencia o ausencia de uno o más materiales portadores farmacéuticamente aceptables, como una preparación de combinación para uso simultáneo o cronológicamente escalonado dentro de un periodo de tiempo, el cual es suficientemente pequeño para que los compuestos activos tanto del componente (a) y del componente (b) mejoren la actividad antiproliferativa del compuesto (a) contra las células proliferantes, especialmente en un paciente, para tratar una enfermedad proliferativa que responde a dicho compuesto, en donde el inhibidor del receptor abl, PDGF y/o receptor de kit de la tirosina quinasa se selecciona del grupo que consiste de

(i) 1-(4-cloro-anilino)-4-(4-piridil-metil)-ftalazina y

(ii) un derivado de la N-fenil-2-pirimidina-amina de fórmula I

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1

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en donde

R_{1} es el pirazinil,1-metil-1H-pirrolil, fenil sustituido por un alquil amino- o amino-inferior en donde el grupo amino en cada caso es libre, alquilado o acilado, 1H-indolil o 1H-imidazolil unido a un átomo de carbono de anillo de cinco miembros, o piridil sustituido o no sustituido por un alquilo inferior-unido a un átomo de carbono de anillo y no sustituido o sustituido en el átomo de nitrógeno por un oxígeno,

R_{2} y R_{3} son cada uno independientemente del otro hidrógeno o alquilo inferior,

uno o dos de los radicales R_{4}, R_{5}, R_{6}, R_{7} y R_{8} son cada uno nitro, alcoxi inferior sustituido por un flúor o un radical de fórmula II

(II)-N(R_{9})-C(=X)-(Y)n-R_{10}

en donde

R_{9} es un hidrógeno o alquilo inferior,

X es oxo, tio, imino, N-alquilo inferior-imino, hidroximino o O-alquilo inferior-hidroximino,

Y es un oxígeno o el grupo NH,

n es 0 o 1 y

R_{10} es un radical alifático que tiene al menos 5 átomos de carbono, o un radical aromático, aromático-alifático, cicloalifático, cicloalifático-alifático heterociclico o heterociclico-alifático, y los radicales restantes R_{4}, R_{5}, R_{6}, R_{7} y R_{8} son cada uno independientemente del otro hidrógeno, alquilo inferior, es decir no sustituido o sustituido por un amino libre o alquilado, piperazinil, piperidinil, pirrolidinil o por un morfolinil, o alcanoil inferior, trifluorometil, hidroxi libre, eterificado o esterificado, amino libre, alquilado o acilado o carboxi libre o esterificado; o una sal de tales compuestos que tiene al menos un grupo que forma una sal;

y el compuesto orgánico capaz de unirse a la glicoproteína ácida-\alpha_{1} (AGP) (b) se selecciona del grupo que consiste de:

Nicergolina, Prazosina, Alfentanil, Ketamina, Etidocaina, Fentanil, Meperidina, Metadona, Fenilbutazona, Bupivacaina, Etidocaina, Fenciclidina, Lidocaina, Fenciclidina, Aprindina, Disopiramida, Quinidina, Verapamilo, Eritromicina, Acenocoumarol, Dipiridamol, Ticlopidina, Warfarina, Fenitoina, Carbamazepina, Naproxeno, Alprenolol, Metoprolol, Oxprenolol, Pindolol, Propranolol, Timolol, Progesterona, Cortexona, Testosterona, Estradiol, Prednisolona, Metocurina, d-Tubocurarina, Amitriptilina, Clorpromazina, Ciclazindol, Desmetilimipramina; Diazepam, Doxepina, Flurazepam, Flufenazina, Haloperidol, Imipramina, Loxapina, Mianserin, Nortriptilina, Norzimelidina, Perazina, Perfenazina, Fenobarbital, derivados de la Fenotiazina, Promazina, Acepromazina, Protipendil, Tioridazina, Tiotixeno, Triazolam, Trifluoperazina, Zimelidina, Vitamina B12, ácido fólico, 1,8-Anilino-naftaleno sulfonato, Aminopirina, Amoxapina, Bupropion, Maprolitina, Nornifensina, Trazodona, Ritodrina, Doxazosina, Trimazosina, Binedalina, Amsacrina, Apazona, Ciclazindol, Indometacina, Probenecid, Ácido Retinoico, Sulfinpirazona, Tolmetina, Benoxaprofeno, Heparina, Sufentanil, Lofentanil, Metoclopramida, Nicardipina, Pirmenol, mifepristona, Aprindil, Auramina O, Bepridil, Desipramina, Desmetilclomipraine; Moxaprindina, Quinina, Lorcainida, Protipendil., Protriptilina, Trihexifenidil, Biperideno, Metacualona, Difenhidramina, Glutetimida, Chlordiazapoxid, L-Triptofano, Mepivacaina, Levometadona, Opipramol, Trifluopromazina, Trimipramina, tris-butoxietil fosfato, estaurosporina, N-benzoil-estaurosporina y 7-hidroxi estaurosporina; en donde cualquier componente (a) y/o (b) también puede estar presente en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable, si al menos un grupo que forma una sal está presente.

\vskip1.000000\baselineskip

La invención también se relaciona con una preparación farmacéutica que comprende una cantidad, la cual es en conjunto efectiva para tratar una enfermedad proliferativa que se puede tratar mediante la administración de un receptor abl-, PDGF-R- y/o receptor de kit de la inhibidor de la tirosina quinasa, de

(b) al menos un compuesto orgánico capaz de unirse a la glicoproteína ácida-\alpha_{1},

en donde cualquier componente (a) y/o (b) también puede estar presente en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable, si al menos un grupo que forma una sal está presente,

con uno o más materiales portadores farmacéuticamente aceptables,

en donde el inhibidor del receptor abl, PDGF y/o receptor de kit de la tirosina quinasa (a) se selecciona del grupo que consiste de

(i) 1-(4-cloro-anilino)-4-(4-piridil-metil)-ftalazina

y

\newpage

(ii) un derivado de la N-fenil-2-pirimidina-amina de fórmula I

100

en donde

R_{1} es pirazinil, 1-metil-1H-pirrolil, amino-o amino-alquilo inferior-sustituido fenil en donde el grupo amino en cada caso es libre, alquilado o acilado, 1H-indolil o 1H-imidazolil unido a un átomo de carbono de anillo de cinco miembros, o piridil sustituido o no sustituido por un alquilo inferior unido a un anillo de carbono, átomo y no sustituido o sustituido en el átomo de nitrógeno por un oxígeno,

R_{2} y R_{3} son cada uno independientemente del otro hidrógeno o alquilo inferior, uno o dos de los radicales R_{4}, R_{5}, R_{6}, R_{7} y R_{8} son cada uno nitro, alcoxi inferior sustituido por un flúor o un radical de fórmula II

(II),-N(R_{9})-C(=X)-(Y)n-R_{10}

en donde

R_{9} es un hidrógeno o alquilo inferior,

Y es un oxígeno o el grupo NH,

n es 0 o 1 y

R_{10} es un radical alifático que tiene al menos 5 átomos de carbono, o un radical aromático, aromático-alifático, cicloalifático, cicloalifático-alifático, heterociclico o heterociclico-alifático; y los radicales restantes R_{4}, R_{5}, R_{6}, R_{7} y R_{8} son cada uno independientemente del otro hidrógeno, alquilo inferior, es decir no sustituido o sustituido por un amino libre o alquilado, piperazinil, piperidinil, pirrolidinil o por un morfolinil, o alcanoil inferior, trifluorometil, hidroxi libre, eterificado o esterificado, amino libre, alquilado o acilado o carboxi libre o esterificado,

o una sal de tales compuestos que tiene al menos un grupo que forma una sal;

y los compuestos orgánicos capaces de unirse a la glicoproteína ácida-\alpha_{1} (AGP) (b) se seleccionan del grupo que consiste de:

Nicergolina, Prazosina, Alfentanil, Ketamina, Etidocaina, Fentanil, Meperidina, Metadona, Fenilbutazona, Bupivacaina, Etidocaina, Fenciclidina, Lidocaina, Fenciclidina, Aprindina, Disopiramida, Quinidina, Verapamilo, Eritromicina, Acenocoumarol, Dipiridamol, Ticlopidina, Warfarina, Fenitoina, Carbamazepina, Naproxeno, Alprenolol, Metoprolol, Oxprenolol, Pindolol, Propranolol, Timolol, Progesterona, Cortexona, Testosterona, Estradiol, Prednisolona, Metocurina, d-Tubocurarina, Amitriptilina, Clorpromazina, Ciclazindol, Desmetilimipramina, Diazepam, Doxepina, Flurazepam, Flufenazina, Haloperidol, Imipramina, Loxapina, Mianserin, Nortriptilina, Norzimelidina, Perazina, Perfenazina, Fenobarbital, derivados de la Fenotiazina, Promazina, Acepromazina, Protipendil, Tioridazina, Tiotixeno, Triazolam, Trifluoperazina, Zimelidina, Vitamina B_{12}, ácido fólico, 1,8-Anilino-naftaleno sulfonato, Aminopirina, Amoxapina, Bupropion, Maprolitina, Nomifensina, Trazodona, Ritodrina, Doxazosina, Trimazosina, Binedalina, Amsacrina, Apazona, Ciclazindol, Indometacina, Probenecid, Ácido Retinoico, Sulfinpirazona, Tolmetina, Benoxaprofeno, Heparina, Sufentanil, Lofentanil, Metoclopramida, Nicardipina, Pirmenol, mifepristona, Aprindil, Auramina. O, Bepridil, Desipramina, Desmetilomipraine, Moxaprindina, Quinina, Lorcainida, Protipendil, Protriptilina, Trihexifenidil, Biperideno, Metacualona, Difenhidramina, Glutetimida, Clordiazepoxido, L-Triptofano, Mepivacaina, Levometadona, Opipramol, Trifluopromazina, Trimipramina, tris-butoxietil fosfato, estaurosporina, N-benzoil-estaurosporina y 7-hidroxi estaurosporina;

\vskip1.000000\baselineskip

Los términos generales utilizados anteriormente y a partir de ahora preferiblemente tienen los siguientes significados, si no se indica de otra manera:

El término "al menos un" hace referencia a a) inhibidor del receptor abl-, PDGF-R- y/o receptor de kit de la tirosina quinasa o b) compuestos orgánicos capaces de unirse a la glicoproteína ácida-\alpha_{1} se refiere a uno o más, especialmente 1 a 5, miembros de cada grupo a) o b), preferiblemente a un compuesto del grupo a) y 1 o más, especialmente 1 a 5, más especialmente 1 o 2 compuestos del grupo b).

Por el término "inhibidor del receptor abl-, PDGF-R- y/o receptor de kit de la tirosina quinasa" preferiblemente, se entiende uno de los siguientes compuestos:

Un compuesto mencionado en la Aplicación Internacional No. WO 97/02266, Aplicación de la Patente Internacional WO98/3595 y especialmente Aplicación de la Patente Europea EP 0 564 409-A, así como Aplicación Internacional No. WO99/03854, Tirfostin AG957 (ver Kaur et al., Anticancer Drugs 5, 213-222 (1994); Herbimicina A(Okabe and Uehara, Leukemia and Lymphoma 12, 2156-2162 (1994), Blood 80, 1330-1338 (1994) and Leuk. Res. 18, 213-220 (1994), así como Rioran et al., Oncogeno 16, 133-1542 (1998)); Tirfostinas AG 1295, AG 1296 (ver Kovalenko et al., Cancer Res. 54, 6106-6114 (1994), Lipson et al., Pharmacol & Exp- Therap. 285, 844-852 (1998), Krystal et al., Cancer Res. 57, 2203-2208 (1997));SU101 (Leflunomida), así como su metabolito (ver Shawer et al., Clin. Cancer Res. 3,1167-1177 (1997), Mattar et al., FEBS Lett 334, 161-164 (1993), Cherwinskyi et al., Inflamm. Res. 3, 1167-1177 (1997), and Strawn et al., Exp. Opin. Invest. Drugs 7, 533-573 (1998)); y Piridopirimidinas (ver por ejemplo, Hamby et al., J. Med. Chem. 40, 2296-2303 (1997), Dahring et al., J. Pharmacol. Exp, Ther. 281. 1446-1456 (1997), Klutcho et al., Life Sci. 62,143-150 (1998), Panek et al., J. Pharmacol. Exp. Ther. 283; 1433-1444 (1997), Boschelli et al., J. Med. Chem. 41, 4365-4377 (1998)). Los inhibidores de la tirosina quinasa, su síntesis y su uso se puede deducir a partir de estas referencias.

El término "y/o" utilizado en "inhibidor del receptor abl-, PDGF-R- y/o receptor de kit de la tirosina quinasa" significa que ya sea una o más de las tirosinas quinasas mencionadas se inhibe por unos compuestos abarcados por esta expresión.

Preferiblemente, uno de los siguientes compuestos se entiende por el término "inhibidor del receptor abl-, PDGF-R- y/o receptor de kit de la tirosina quinasa":

(A) Un compuesto de la fórmula IV,

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2

\vskip1.000000\baselineskip

en donde

r es 0 a 2;

n es 0 a 2;

m es 0 a 4;

R_{1} y R_{2} (i) son alquilo inferior, especialmente metil, o

(ii) juntos forman un puente en la subfórmula I*

3

el enlace que se logra vía los dos átomos de carbono terminales, o

\newpage

(iii) juntos forman un puente en la subfórmula I**

\vskip1.000000\baselineskip

4

\vskip1.000000\baselineskip

en donde uno o dos de los miembros del anillo T_{1}, T_{2}, T_{3} y T_{4} son nitrógeno, y los otros son en cada caso CH, y el enlace se logra vía T_{1} y T_{4};

A, B, D, y E son, independientemente uno del otro, N o CH, con la cláusula que no más de 2 de estos radicales son N;

G es un alquileno inferior, alquileno inferior sustituido por un aciloxi o hidroxi, -CH_{2}O-, -CH2-S-, -CH_{2}-NH-, oxa (-O-), tia(-S-), o imino (-NH-);

Q es un alquilo inferior, especialmente metil;

R es H o alquilo inferior;

X es imino, oxa, o tia;

Y es aril, piridil, o cicloalquil no sustituido o sustituido; y

Z es mono- o amino disustituido, halógeno, alquil, alquil sustituido, hidroxi, hidroxi eterificado o esterificado, nitro, ciano, carboxi, carboxi esterificado, alcanoil, carbamoil, N-mono- o N,N-carbamoil disustituido, amidino, guanidino, mercapto, sulfo, feniltio, fenil alquiltio inferior, alquilfeniltio, fenilsulfinil, fenil-alquilsuilfinil inferior, alquilfenilsulfinil, fenilsulfonyl, fenil-alquilsuilfonil inferior, o alquilfenilsulfonil, en donde - si más de 1 radical Z (m = \geq2) está presente - los sustituyentes Z son iguales o diferentes uno del otro; y en donde los enlaces caracterizados, si están presentes, por una línea curva son tanto enlaces dobles o sencillos;

o un N-óxido del compuesto definido, en donde 1 o más átomos de N llevan un átomo de oxígeno;

con la cláusula que, si Y es piridil o cicloalquil no sustituido, X es imino, y los radicales restantes son como se definen, G se selecciona del grupo que comprende alquileno inferior, -CH_{2}-O-, -CH_{2}-S-, oxa y tia; o una sal de estos.

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Preferiblemente, las definiciones de los sustituyentes dadas anteriormente tienen los significados, especialmente los significados preferidos, descritos en la Aplicación de la Patente Internacional WO 98/35958. El compuesto más preferido de estos compuestos es el de la fórmula V

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5

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con la denominación 1-(4-cloro-anilino)-4-(4-piridil-metil)-ftalazina, o una sal farmacéuticamente aceptable de esta;

\newpage

(B) un compuesto 7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina de la fórmula VI

6

en donde

q es 0 o 1,

n es de 1 a 3 cuando q es 0, o n es de 0 a 3 cuando q es 1,

R es un halógeno, alquilo inferior, hidroxi, alcanoiloxi inferior, alcoxi inferior, carboxi, inferior alcoxicarbonil, carbamoil, N alquilo inferior-carbamoil, N,N-di-alquilo inferior-carbamoil, ciano, amino, alcanoilamino inferior, alquilamino inferior, N,N-di-alquilamino inferior o tri-fluorometil, siendo esto posible cuando varios radicales R están presentes en la molécula para aquellos radicales que son idénticos o diferentes;

a) R_{1} y R_{2} son cada uno independientemente del otro

\alpha) fenil sustituido por un carbamoil-metoxi, carboxi-metoxi, benzoiloxicarbonil-metoxi, inferior-alcoxicarbonil-metoxi, fenil, amino, alcanoilamino inferior, alquilamino inferior, N,N-di-alquilamino inferior, hidroxi, alcanoiloxi inferior, carboxi, alcoxicarbonil inferior, carbamoil, N-alquilcarbamoil inferior, N,N-di-alquilo inferior-carbamoil, ciano o por un nitro;

\beta) hidrógeno;

\gamma) piridil no sustituido o halo- o alquilo inferior-sustituido;

\delta) N-benzil-piridinio-2-il; naftil; ciano; carboxi; alcoxicarbonil inferior; carbamoil; N-alquilcarbamoil inferior; N,N-di-alquilcarbamoil inferior; N-benzil-carbamoil; formil; alcanoil inferior; alquenil inferior; alqueniloxi inferior; o

\varepsilon) alquilo inferior sustituido por un

\varepsilon\alpha) halógeno, amino, alquilamino inferior, piperazino, di-alquilamino inferior,

\varepsilon\beta) fenilamino es decir no sustituido o sustituido en la fracción fenil por un halógeno, alquilo inferior, hidroxi, alcanoiloxi inferior, alcoxi inferior, carboxi, alcoxicarbonil inferior, carbamoil, N-alquilcarbamoil inferior, N,N-di-alquilcarbamoil inferior, ciano, amino, alcanoilamino inferior, alquilamino inferior, N,N-di-alquilamino inferior o por un trifluorometil,

\varepsilon\gamma) hidroxi, alcoxi inferior, ciano, carboxi, alcoxicarbonil inferior, carbamoil, N-alquilcarbamoil inferior, N,N-di alquil inferior-carbamoil, mercapto, o

\varepsilon\delta) por un radical de la fórmula R_{3}-S(O)m- en donde R_{3} es un alquilo inferior y m es 0, 1 o 2, o

b) cuando q es 1, uno de los radicales R_{1} y R_{2} es un alquilo inferior no sustituido o fenil no sustituido y el otro de los radicales R_{1} y R_{2} tiene uno de los significados dados anteriormente en el párrafo a) con la excepción del hidrógeno, o

c) R_{1} y R_{2} juntos son 1,4-alcadienileno C_{4}-C_{10} sustituido por un amino, alcanoilamino inferior, alquilamino inferior, N,N-di-alquilamino inferior, nitro, halógeno, hidroxi, alcanoiloxi inferior, carboxi, alcoxicarbonil inferior, carbamoil, N-alquilcarbamoil inferior, N,N-di-alquilo inferior-carbamoil o por un ciano, o son aza-1,4-alcadienileno que tiene hasta 9 átomos de carbono, o

d) cuando q es 1, R_{1} y R_{2} son, cada uno independientemente del otro, alquilo inferior no sustituido o fenil no sustituido o tienen uno de los significados dados anteriormente en el párrafo a), y

R_{6} es un hidrógeno, alquilo inferior, alcoxicarbonil inferior, carbamoil, N-alquilo inferior-carbamoil o N,N-di-alquilo inferior-carbamoil, o una sal de estos.

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Preferiblemente, las definiciones de los sustituyentes dadas anteriormente tienen los significados, especialmente los significados preferidos, descritos en la Aplicación de la Patente Internacional WO 97/02266. El compuesto más preferido de estos compuestos es el de la fórmula VII

7

que tiene la denominación (R)-6-(4-hidroxi-fenil)-4-[(1-feniletil)-amino]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina; o más preferido

(C) un derivado de la N-fenil-2-pirimidina-amina de fórmula I

8

en donde

R_{1} es pirazinil, 1-metil-1H-pirrolil, fenil sustituido por un alquil amino- o amino-inferior en donde el grupo amino en cada caso es libre, alquilado o acilado, 1H-indolil o 1H-imidazolil unido a un átomo de carbono de anillo de cinco miembros, o piridil sustituido o no sustituido por un alquilo inferior unido a un átomo de carbono de anillo y no sustituido o sustituido en el átomo de nitrógeno por un oxígeno,

(II),-N(R_{9})-C(=X)-(Y)n-R_{10}

en donde

R_{9} es un hidrógeno o alquilo inferior,

Y es un oxígeno o el grupo NH,

n es 0 o 1 y

R_{10} es un radical alifático que tiene al menos 5 átomos de carbono, o un radical aromático, aromático-alifático, cicloalifático, cicloalifático-alifático, heterociclico o heterociclico-alifático, y los radicales restantes R_{4}, R_{5}, R_{6}, R_{7} y R_{8} son cada uno independientemente del otro hidrógeno, alquilo inferior es decir no sustituido o sustituido por un amino libre o alquilado, piperazinil, piperidinil, pirrolidinil o por un morfolinil, o alcanoil inferior, trifluorometil, hidroxi libre, eterificado o esterificado, amino libre, alquilado o acilado o carboxi libre o esterificado, o una sal de tales compuestos que tiene al menos un grupo que forma una sal.

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Preferiblemente, las definiciones de los sustituyentes dados anteriormente tienen los significados, especialmente los significados preferidos, descritos en la Aplicación de la Patente Europea EP 0 564 409. El compuesto más preferido de estos compuestos es el de la fórmula III

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9

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con la denominación 4-(4-metilpiperazin-1-ilmetil)-N-(4-metil-3-(4-piridin-3-il)pirimidin-2-ilamino)fenil]benzamida, preferiblemente en la forma de la sal sulfonato metano como se describe en WO 99/03854, más preferiblemente en la forma de la sal sulfonato metano en la forma \beta-cristal como se describe en WO 99/03854. Este compuesto (la forma sal sulfonato metano) se denomina STI571 a partir de ahora.

Un "compuesto orgánico capaz de unirse a la glicoproteína ácida-\alpha_{1} (AGP)" generalmente es un fármaco básico o neutro, pero también un fármaco ácido, especialmente seleccionado a partir del grupo que consiste de

alfa-bloqueadores, especialmente Nicergolina o Prazosina;

anestésicos/analgésicos, especialmente Alfentanil, Ketamina o Etidocaina;

analgésicos, especialmente Fentanil, Meperidina, Metadona o Fenilbutazona;

anestésicos, especialmente Bupivacaina, Etidocaina o Fenciclidina;

anestésicos/antiarrítmicos, especialmente Lidocaina o Fenciclidina;

antiarrítmicos, especialmente Aprindina, Disopiramida, Quinidina o Verapamilo;

antibióticos, especialmente Eritromicina;

anticoagulantes, especialmente Acenocoumarol, Dipiridamol, PCR2362 (derivado de la tienopiridina), Ticlopidina o Warfarina;

antiepilépticos, especialmente Fenitoina o Carbamazepina;

agentes antiinflamatorios, especialmente Naproxeno;

beta-bloqueadores, especialmente Alprenolol, Metoprolol, Oxprenolol, Pindolol y compuestos relacionados, Propranolol o Timolol;

esteroides, tales como Progesterona, Cortexona, Cortisol, Testosterona, Estradiol o Prednisolona; bloqueadores neuromusculares, especialmente Metocurina o d-Tubocurarina;

psicotrópicos, especialmente Amitriptilina, Clorpromazina, Ciclazindol, Desmetilimipramina, Diazepam, Doxepina, Flurazepam, Flufenazina, Haloperidol, Imipramina, Loxapina, Mianserin, Nortriptilina, Norzimelidina, Perazina, Perfenazina, Fenobarbital, derivados de la Fenotiazina, Promazina, Acepromazina, Protipendil, Tioridazina, Tiotixeno, Triazolam, Trifluoperazina o Zimelidina;

vitaminas y provitaminas, especialmente Vitamina B_{12} o ácido fólico;

sondas fluorescentes, especialmente DAPN (derivado del propranolol), 1,8-Anilino-naftaleno sulfonato;

otros fármacos, especialmente Aminopirina, Amoxapina, Bupropion, Maprotilina, Nomifensina, Trazodona, fármacos con grupo amonio cuaternario, Ritodrina, Doxazosina, Trimazosina, Binedalina, Amsacrina, Apazona, SKF 525A, Ciclazindol, PCR 2362, Indometacina, Probenecid, Ácido Retinoico, Sulfinpirazona, Tolmetina, Benoxaprofeno, Heparina, Sufentanil, Lofentanil, Metoclopramida, Nicardipina, Pirmenol, mifepristona,RU42 633, Aprindil, Auramina O, Bepridil, Desipramina, Desmetilclomipramina, Moxaprindina, Quinina, Lorcainida, Protipendil, Protriptilina, Trihexifenidil, Biperideno, Metacualona, Difenhidramina, Glutetimida, Clordiazepoxido, L-Triptofano, Mepivacaina, Levometadona, Opipramol, Trifluopromazina o Trimipramina;

plastificantes, tales como tris-butoxietil fosfato (TBEP);

estaurosporina (ver US4,107,297) o derivados de la estaurosporina, preferiblemente aquellos revelados en Aplicación de la Patente Europea EP 0 296 110 y/o EP 0 238 011, especialmente N-benzoil-estaurosporina (PTK412 - ver Aplicación de la Patente Europea No. EP 0 296 110) o 7-hidroxi estaurosporina (UCN-01 - ver Aplicación de la Patente Europea No. EP 0 238 011; así como un metabolito de cualquiera de estos compuestos;

o una sal - especialmente farmacéuticamente aceptable - de estos.

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EP 0 238 011, US 4,107,297 y EP 0 296 110; Kremer et al., Pharmacol. Rev. 40(1), 1-47 (1988); Cancer Res. 58, 3248-3253 (1998); Br. J. Clin. Pharmacol. 22, 499-506 (1986); Physiol. Functions, and Pharmacol., páginas 321-336: F. Bree et al., "Binding to \alpha1- acidic glycoprotein y relevant apparent volume of distribución", Alan R. Liss Inc., 1989; Protein Binding and Drug Transport (Tillement and Lindenlaub, eds.): "Drug binding to human \alpha1-acidic glycoprotein - focus on a single binding site", Stuttgart 1986; En todas estas publicaciones, se mencionan los compuestos capaces de unirse a la AGP, que son modalidades preferidas de la presente invención.

Más preferido es uno de los compuestos mencionados anteriormente diferentes de un esteroide. Para un segundo uso médico (por ejemplo, en grupos de pacientes donde se ha desarrollado resistencia, más especialmente pacientes de CML en crisis blástica y pacientes de Ph+-ALL reincidentes), también son útiles los esteroides.

Un compuesto orgánico capaz de unirse a la AGP que se utiliza en la combinación de acuerdo con la invención además de un receptor abl-, PDGF-R- o receptor de kit de la tirosina quinasa también se puede seleccionar de uno o más receptor(s) abl-, PDGF-R- o receptor de kit de la tirosina quinasa adicional(s), lo que significa que el componente (b) en las modalidades de la invención también pueden ser el citado compuesto.

Preferiblemente, el receptor abl-, PDGF-R- y/o receptor de kit de la tirosina quinasa (componente (a)) se selecciona del grupo que consiste de 1-(4-cloro-anilino)-4-(4-piridil-metil)-ftalazina, (R)-6-(4-hidroxi-fenil)-4-[(1-feniletil)-amino]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina y preferiblemente 4-(4-metilpiperazin-1-ilmetil)-N-[4-metil-3-(4-piridin-3-il)pirimidin-2-ilamino)fenil]-benzamida; o una sal de estos; más preferiblemente la sal sulfonato metano de 4-(4-metilpiperazin-1-ilmetil)-N-[4-metil-3-(4-piridin-3-il)pirimidin-2-ilamino)fenil]-benzamida, más preferiblemente en la forma \beta-cristal como se describe en WO 99/03854.

El compuesto orgánico capaz de unirse a la glicoproteína ácida-\alpha_{1} (componente (b)) es preferiblemente un antibiótico, especialmente la Eritromicina, o estaurosporina o un derivado de la estaurosporina, especialmente N-benzoil-estaurosporina (PKC412) o 7-hidroxi-estaurosporina (UCN-01), o una sal de estos, más especialmente la Eritromicina, o una sal farmacéuticamente aceptable de esta.

Una o más de cada uno del inhibidor de la tirosina quinasa y el compuesto orgánico capaz de unirse a la AGP se puede utilizar en una combinación o terapias de combinación de acuerdo con la presente invención.

Enlace significa especialmente un enlace competitivo, pero también puede ser cualquier otro tipo de enlace (por ejemplo, a sitios de enlace que muestra efectos alostéricos sobre el sitio de enlace componente (a)) que conduce al enlace disminuido de un receptor abl-, PDGF-R y/o receptor de kit de la inhibidor de la tirosina quinasa con AGP. Este enlace se puede determinar in vitro en analogía con los métodos descritos en los Ejemplos mencionados a continuación.

El enlace puede ser irreversible (por ejemplo, por enlace covalente o iónico) o preferiblemente reversible.

"Capaz de unirse" significa que el compuesto tiene una afinidad a AGP que permite el enlace, como se describe anteriormente, preferiblemente con una concentración en el enlace máximo medio en el rango milimolar al sub-nanomolar, especialmente en el rango entre 100 \muM y 1 nM.

Por el término "una enfermedad proliferativa que se puede tratar mediante la administración de un receptor abl-, PDGF-R- y/o receptor de kit de la tirosina quinasa" se entiende cualquier enfermedad mencionada en este punto; preferiblemente se entiende cualquier enfermedad que responde a tales compuestos; especialmente, una enfermedad proliferativa seleccionada de un enfermedad cancerosa, especialmente una enfermedad tumoral o leucemia, o una enfermedad proliferativa no-maligna, por ejemplo, aterosclerosis, trombosis, psoriasis, esclerodermitis o fibrosis, se entiende. Más preferiblemente, se entiende una enfermedad seleccionada a partir del grupo que consiste de CML (leucemia mieloide crónica) y ALL (leucemia linfoblástica aguda), o un tumor sólido, especialmente seleccionado de cáncer de pulmón, especialmente cáncer de pulmón de célula no-pequeña, y a partir de cáncer de la próstata.

Por el término "cantidad que es en conjunto terapéuticamente efectiva contra una enfermedad proliferativa que se puede tratar mediante la administración de un inhibidor del receptor abl-, PDGF-R- y/o receptor de kit de la tirosina quinasa" preferiblemente significa cualquier cantidad de los componentes de las combinaciones que, en la combinación, se disminuye la proliferación de células responsables por cualquiera de las enfermedades proliferativas mencionadas (por ejemplo, disminuye el crecimiento del tumor) o, preferiblemente, incluso causa la regresión, más preferiblemente incluso la desaparición parcial o completa, de tales células (por ejemplo, regresión del tumor, preferiblemente la cura).

Preferiblemente, en cualquiera de las modalidades de la presente invención la dosis de cada uno de los componentes de la combinación (componente (a) y (b)) se elige de forma que un nivel en plasma sanguíneo que está por encima de la concentración de enlace máximo medio del componente (b), el compuesto orgánico capaz de unirse a la AGP, se logra in vivo al menos una parte del tiempo cuando el componente (a), el inhibidor del receptor abl-, PDGF-R- y/o receptor de kit de la tirosina quinasa, está presente. Esta concentración se puede determinar por ejemplo, in vitro de acuerdo con procedimientos estándar, por ejemplo, en analogía con los métodos descritos en los ejemplos para la determinación de Ka, mientras que la concentración en plasma sanguíneo de los componentes (a) y (b) en un animal de sangre caliente (significando especialmente un paciente humano) también se puede determinar de acuerdo con métodos rutinarios.

Preferiblemente, la dosificación del componente (b) se elige de manera que la concentración del componente (b) sea más de 0.05 \muM en plasma, más preferiblemente más de 0.1 \muM, y más preferiblemente entre 0.5 y 100 \muM, especialmente entre 1 y 50 \muM, del individuo tratado, al menos parte del tiempo donde el componente (a) también está presente. Más preferiblemente, la concentración de cualquiera de los componentes (a) y (b) sea más de 0.1 \muM, más preferiblemente más de 1 \muM, y más preferiblemente entre 0.5 y 100 \muM, especialmente entre 1 y 50 \muM, en el plasma sanguíneo del individuo tratado, al menos parte del tiempo donde el componente (a) o el componente (b), respectivamente, también está presente.

Las concentraciones en plasma se pueden determinar de acuerdo con métodos estándar, por ejemplo, empleando HPLC de las muestras del tratamiento final de acuerdo con procedimientos estándar.

Por el término ``un producto que comprende

en donde cualquier componente (a) y/o (b) también puede estar presente en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable, si al menos un grupo que forma una sal está presente, en la presencia o ausencia de uno o más materiales portadores farmacéuticamente aceptables, como una preparación de combinación para uso simultáneo o cronológicamente escalonado dentro de un periodo de tiempo el cual es suficientemente pequeño para los compuestos activos tanto del componente (a) y del componente (b) para mejorar la actividad antiproliferativa del compuesto (a) contra las células proliferantes, especialmente en un paciente, para tratar una enfermedad proliferativa que responde a dicho compuesto'', se entiende ahí especialmente un "kit" o "kit de partes" en el sentido que los componentes (a) y (b) efectivos de la combinación, se pueden dosificar independientemente o mediante el uso de diferentes combinaciones fijas con cantidades distinguidas de cualquiera de los componentes (a) y (b) en diferentes puntos de tiempo. Las partes del kit de partes luego, se pueden administrar simultáneamente o de una manera cronológicamente escalonada, es decir en diferentes puntos de tiempo y con intervalos de tiempo iguales o diferentes para cualquier parte del kit de partes, con la condición de que los intervalos de tiempo se eligen, de manera que el efecto sobre la enfermedad proliferativa en el uso combinado de las partes es mayor que el efecto que se podría obtener mediante el uso del componente (a) solo, es decir, una fuerte inhibición de la proliferación o, preferiblemente, una fuerte regresión o incluso se encuentra la cura de la enfermedad proliferativa que cuando la misma dosis del componente (a) solo se administra completamente solo. Lo que se entiende por el término "para mejorar la actividad antiproliferativa contra las células proliferantes, especialmente en un paciente"; preferiblemente, se entiende ahí, una mejora del efecto por el componente (b), especialmente un cambio parcial o completo de la resistencia de una enfermedad proliferativa a uno o más compuestos del componente (a) tipo y/o la causa de la regresión de las células proliferantes, hasta e incluyendo su total destrucción.

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Por el término "células proliferantes", de preferencia se entiende las células anormalmente proliferantes, tales como las células cancerosas.

Se prefieren las combinaciones, que muestran actividad antiproliferativa mejorada cuando se compara con el componente (a) único completamente solo, especialmente las combinaciones que muestran sinergismo (combinaciones sinergistas) o combinaciones que conducen a la regresión de tejidos proliferativos y/o la cura de las enfermedades proliferativas, más preferiblemente combinaciones donde una resistencia (significando resistencia ya en el inicio del tratamiento, o resistencia es decir un resultado de más o menos periodos extendidos de tratamiento con el componente (a)) de una enfermedad proliferativa en un animal de sangre caliente, especialmente un humano, a uno o más compuestos del tipo del componente (a) se supera parcial o completamente.

Los "materiales portadores farmacéuticamente aceptables" se explican abajo en la definición de preparaciones farmacéuticas.

En cualquier combinación o tratamiento de combinación de acuerdo con la invención descrito en este documento, el uso en combinación con el fin de revertir completa o parcialmente la resistencia (presente antes del tratamiento o desarrollada o en desarrollo durante el tratamiento con un fármaco que comprende un componente (a) como se define en este documento) de una enfermedad proliferativa al tratamiento con un fármaco que comprende un componente (a) como se define en este documento in vivo, especialmente, se prefiere en un animal de sangre caliente, especialmente un humano.

La resistencia parcial o completa, en especial significa que una eficiencia inferior, por ejemplo, en términos de bloqueo o atraso de la proliferación, causando la regresión o incluso cura, por ejemplo, menor inhibición de la proliferación o una duración mayor del tratamiento hasta una respuesta esperada si no se presenta la resistencia, por ejemplo, de un tumor o leucemia, se encuentra que en un animal, por ejemplo, humano, que no muestra resistencia, o que el tratamiento inicial triunfa (especialmente en un paciente que desarrolla resistencia solo durante el tratamiento con un componente (a)) ya no se encuentran en etapas posteriores del tratamiento, especialmente en pacientes con CML en crisis blástica y pacientes reincidentes de Ph+-ALL.

Se debe entender que la invención se relaciona también con cualquier uso de combinaciones de un componente (a) y un componente (b), como se define anteriormente y abajo, en un método de tratamiento de células fuera del cuerpo con el fin de reemplazar las células hiperproliferantes en el cuerpo de un sujeto con células hiperproliferantes por células normales; por ejemplo, sangre con células del sistema inmune se puede tomar a partir de un sujeto, se trata fuera del cuerpo con un componente (a) y un componente (b) para seleccionar las células no-hiperproliferantes, las células madre y células sanguíneas remanentes del sistema inmune se pueden destruir en el sujeto por ejemplo, por irradiación o quimioterapia y luego las células normales seleccionadas se pueden reimplantar en el sujeto, por ejemplo, por inyección
etc. Los métodos que se emplean en dichos tipos de tratamiento se conocen por alguien de habilidad en el oficio.

Siempre que uno o más grupos que forman sales estén presentes, las sustancias del fármaco correspondiente al componente (a) y/o (b) también pueden estar presentes en la forma de sales.

Las sales son especialmente, sales farmacéuticamente aceptables, por ejemplo, sales sustancialmente no-tóxicas.

Tales sales se forman, por ejemplo, a partir de compuestos que tienen un grupo ácido, por ejemplo un grupo carboxi, fosfodiéster o fosforotioato, y son, por ejemplo, sus sales con bases apropiadas, tales como sales metálicas no-tóxicas derivadas de metales de los grupos Ia, Ib, IIa y IIb de la Tabla Periódica de los Elementos, especialmente apropiadas las sales de metal alcalino, por ejemplo sales de litio, sodio o potasio, o sales de metal alcalinotérreo, por ejemplo sales de magnesio o calcio, adicionalmente sales de zinc o amonio, también aquellas sales que se forman con aminas orgánicas, tales como mono-, di- o tri-alquilaminas no sustituidas o hidroxi-sustituidas, especialmente mono-, di- o tri-alquilaminas inferiores, o con compuestos de amonio cuaternario, por ejemplo con N-metil-N-etilamina, dietilamina, trietilamina, mono-, bis- o tris-(2-hidroxi-alquilo inferior)aminas, tales como mono-, bis- o tris-(2-hidroxietil)amina, 2-hidroxi-ter-butilamina o tris(hidroximetil)metilamina, N,N-di-alquilo inferior-N-(hidroxi-alquilo inferior)-aminas, tales como N,N-dimetil-N-(2-hidroxietil)-amina o tri-(2-hidroxietil)-amina, o N-metil-D-glucamina, o sales de amonio cuaternario, tales como sales de tetrabutilamonio. Los compuestos que tienen un grupo básico, por ejemplo un grupo amino o imino, pueden formar sales de adición de ácido, por ejemplo con ácidos inorgánicos, por ejemplo un ácido hidrogenado, tal como ácido clorhídrico, ácido sulfúrico o ácido fosfórico, o con ácidos carboxílico orgánico, sulfónico, sulfo o fosfo o ácidos sulfámicos N-sustituidos, tales como, por ejemplo, ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido succínico, ácido maleico, ácido hidroximaleico, ácido metilmaleico, ácido fumárico, ácido málico, ácido tartárico, ácido glucónico, ácido glucárico, ácido glucurónico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido cinámico, ácido mandélico, ácido salicílico, ácido 4-aminosalicílico, ácido 2-fenoxibenzoico, ácido 2-acetoxibenzoico, ácido embónico, ácido nicotínico o ácido isonicotínico, también con aminoácidos, por ejemplo, \alpha-aminoácidos, y también con ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, 2-ácido hidroxietanosulfónico, ácido etano-1,2-disulfónico, ácido bencenosulfónico, ácido 4-metilbencenosulfónico, ácido naftaleno-2-sulfónico, 2- o 3-fosfoglicerato, glucosa-6-fosfato, ácido N-ciclohexilsulfámico (con formación de los ciclamatos) o con otros compuestos orgánicos ácidos, tales como ácido ascórbico. Los compuestos que tienen grupos ácidos y básicos, también pueden formar sales internas. Sí más de un grupo que forma una sal está presente, también es posible que sales mezcladas estén presentes.

Para el propósito del aislamiento o purificación, también es posible utilizar sales farmacéuticamente inaceptables, por ejemplo sales de picrato o perclorato.

Los términos "compuestos" "componentes" y "sales" también incluyen expresamente compuestos individuales o sales individuales.

Como se puede entender a partir del presente texto, el término "combinación" en los párrafos precedentes y especialmente en los siguientes párrafos que describen variantes más específicos y preferidas de la presente invención tienen la intención de referirse a

(i) una preparación de combinación que comprende (a) al menos un inhibidor del receptor abl-, PDGF-R- y/o receptor de kit de la tirosina quinasa y (b) al menos un compuesto orgánico capaz de unirse a la glicoproteína ácida-\alpha_{1} (AGP); o sales farmacéuticamente aceptables de cualquier componente (a), (b) o (a) y (b) si al menos un grupo que forma una sal está presente;

(ii) un método para tratar una enfermedad proliferativa que se puede tratar mediante la administración de un inhibidor del receptor abl-, PDGF-R- y/o receptor de kit de la tirosina quinasa, en donde (a) al menos un inhibidor del receptor abl-, PDGF-R- y/o receptor de kit de la tirosina quinasa

y

(b) al menos un compuesto orgánico capaz de unirse a la glicoproteína ácida-\alpha_{1} (AGP) se administran a un mamífero en combinación de una cantidad, la cual es en conjunto terapéuticamente efectiva contra una enfermedad proliferativa que se puede tratar mediante la administración de un inhibidor del receptor abl-, PDGF-R- y/o receptor de kit de la tirosina quinasa, en donde cualquier componente (a) y/o (b) también puede estar presente en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable, si al menos un grupo que forma una sal está presente;

(iii) un producto que comprende

en donde cualquier componente (a) y/o (b) también puede estar presente en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable, si al menos un grupo que forma una sal está presente, en la presencia o ausencia de uno o más materiales portadores farmacéuticamente aceptables, como una preparación de combinación para uso simultáneo o cronológicamente escalonado dentro de un periodo de tiempo el cual es suficientemente pequeño para los compuestos activos tanto del componente (a) y del componente (b) para mejorar la actividad antiproliferativa del compuesto (a) contra las células proliferantes, especialmente en un paciente, para tratar una enfermedad proliferativa que responde a dicho compuesto;

(iv) una preparación farmacéutica que comprende una cantidad, la cual es en conjunto efectiva para tratar una enfermedad proliferativa que se puede tratar mediante la administración de un receptor abl-, PDGF-R y/o receptor de kit de la inhibidor de la tirosina quinasa, de

en donde cualquier componente (a) y/o (b) también puede estar presente en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable, si al menos un grupo que forma una sal está presente, con uno o más materiales portadores farmacéuticamente aceptables; y/o

(v) el uso de una combinación de

en donde cualquier componente (a) y/o (b) también puede estar presente en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable, si al menos un grupo que forma una sal está presente, para producir preparaciones farmacéuticas para utilizar como composiciones contra una enfermedad proliferativa que se puede tratar mediante la administración de un inhibidor del receptor abl-, PDGF-R- y/o receptor de kit de la tirosina quinasa;

o cualquier combinación de estos temas de la invención, en la medida de lo permitido por las respectivas leyes de la patente; o las variantes más específicas y preferidas de estos tal como se proporcionan a continuación;

en donde cualquier componente (a) y/o (b) también puede estar presente en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable, si al menos un grupo que forma una sal está presente; si no se define de otra manera o es evidente de otra manera a partir del contexto.

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Dentro de los siguientes grupos de las modalidades más preferidas de la invención, las definiciones más generales se pueden reemplazar por definiciones más específicas de acuerdo con aquellas dadas anteriormente o (especialmente en relación con la definición de las composiciones farmacéuticas y métodos de uso) a continuación.

Se prefiere una combinación de (a) al menos un, preferiblemente un, receptor abl-, PDGF y/o receptor de kit de la inhibidor de la tirosina quinasa seleccionado de

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(i) un compuesto 7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina de la fórmula VI

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en donde

q es 0 o 1,

n es de 1 a 3 cuando q es 0, o n es de 0 a 3 cuando q es 1,

R es un halógeno, alquilo inferior, hidroxi, alcanoiloxi inferior, alcoxi inferior, carboxi, alcoxicarbonil inferior, carbamoil, N alquilo inferior-carbamoil, N,N-di-alquilo inferior-carbamoil, ciano, amino, alcanoilamino inferior, alquilamino inferior, N,N-di-alquilamino inferior o tri-fluorometil, siendo esto posible cuando varios radicales R están presentes en la molécula para aquellos radicales que son idénticos o diferentes;

a) R_{1} y R_{2} son cada uno independientemente del otro

hidrógeno;

\gamma) piridil no sustituido o halo- o alquilo inferior-sustituido;

\varepsilon) alquilo inferior sustituido por un

\varepsilon\gamma) hidroxi, alcoxi inferior, ciano, carboxi, alcoxicarbonil inferior, carbamoil, N-alquilcarbamoil inferior, N,N-di alquilo inferior-carbamoil, mercapto, o

d) cuando q es 1, R_{1} y R_{2} son, cada uno independientemente del otro, alquilo inferior no sustituido o fenil no sustituido o tiene uno de los significados dados anteriormente en el párrafo a), y

R_{6} es un hidrógeno, alquilo inferior, alcoxicarbonil inferior, carbamoil, N-alquilo inferior-carbamoil

o N,N-di-alquilcarbamoil inferior, o una sal de este (preferiblemente, las definiciones de los sustituyentes dados anteriormente tienen los significados, especialmente los significados preferidos, descritos en la Aplicación de la Patente Internacional WO 97/02266 - el compuesto más preferido de estos, es el compuesto de la fórmula VII

11

que tiene la denominación (R)-6-(4-hidroxi-fenil)-4-[(1-feniletil)-amino]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina);

y

(ii) un derivado de la N-fenil-2-pirimidina-amina de fórmula I

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en donde

R_{1} es el pirazinil, 1-metil-1H-pirrolil, fenil sustituido por un alquil amino- o amino-inferior en donde el grupo amino en cada caso es libre, alquilado o acilado, 1 H-indolil o 1 H-imidazolil unido a un átomo de carbono de anillo de cinco miembros, o piridil sustituido o no sustituido por un alquilo inferior unido a un átomo de carbono de anillo y no sustituido o sustituido en el átomo de nitrógeno por un oxígeno,

(II),-N(R_{9})-C(=X)-(Y)_{n}-R_{10}

en donde

R_{9} es un hidrógeno o alquilo inferior,

Y es un oxígeno o el grupo NH,

n es 0 o 1 y

R_{10} es un radical alifático que tiene al menos 5 átomos de carbono, o un radical aromático, aromático-alifático, cicloalifático, cicloalifático-alifático, heterociclico o heterociclico-alifático, y los radicales restantes R_{4}, R_{5}, R_{6}, R_{7} y R_{8} son cada uno independientemente del otro hidrógeno, alquilo inferior es decir no sustituido o sustituido por un amino libre o alquilado, piperazinil, piperidinil, pirrolidinil o por un morfolinil, o alcanoil inferior, trifluorometil, hidroxi libre, eterificado o esterificado, amino libre, alquilado o acilado o carboxi libre o esterificado, o

una sal de tales compuestos que tiene al menos un grupo que forma una sal (preferiblemente, las definiciones de los sustituyentes dados anteriormente tienen los significados, especialmente los significados preferidos, descritos en Aplicación de la Patente Europea EP 0 564 409. El compuesto más preferido de estos compuestos es el de la fórmula III

13

con la denominación 4-(4-metilpiperazin-1-ilmetil)-N-[4-metil-3-(4-piridin-3-il)pirimidin-2-ilamino)fenil]benzamida, preferiblemente en la forma de la sal sulfonato metano como se describe en WO 99/03854, más preferiblemente en la forma de la sal sulfonato metano en la forma \beta-cristal como se describe en WO 99/03854);

con (b) al menos un (preferiblemente un) compuesto orgánico capaz de unirse a la glicoproteína ácida-\alpha_{1} (AGP) seleccionada a partir del grupo que consiste de:

Nicergolina, Prazosina, Alfentanil, Ketamina, Etidocaina, Fentanil, Meperidina, Metadona, Fenilbutazona, Bupivacaina, Etidocaina, Fenciclidina, Lidocaina, Fenciclidina, Aprindina, Disopiramida, Quinidina, Verapamilo, Eritromicina, Acenocoumarol, Dipiridamol, PCR2362, Ticlopidina, Warfarina, Fenitoina, Carbamazepina, Naproxeno, Alprenolol, Metoprolol, Oxprenolol, Pindolol, Propranolol, Timolol, Progesterona, Cortexona, Cortisol, Testosterona, Estradiol, Prednisolona, Metocurina, d-Tubocurarina, Amitriptilina, Clorpromazina, Ciclazindol, Desmetilimipramina, Diazepam, Doxepina, Flurazepam, Flufenazina, Haloperidol, Imipramina, Loxapina, Mianserin, Nortriptilina, Norzimelidina, Perazina, Perfenazina, Fenobarbital, derivados de la Fenotiazina, Promazina, Acepromazina, Protipendil, Tioridazina, Tiotixeno, Triazolam, Trifluoperazina, Zimelidina, Vitamina B_{12}, ácido fólico, DAPN, 18-Anilino-naftaleno sulfonato, Aminopirina, Amoxapina, Bupropion, Maprofilina, Nomifensina, Trazodona, Ritodrina, Doxazosina, Trimazosina, Binedalina, Amsacrina, Apazona, SKF 525A, Ciclazindol, PCR 2362, Indometacina, Probenecid, Ácido Retinoico, Sulfinpirazona, Tolmetina, Benoxaprofeno, Heparina, Sufentanil, Lofentanil, Metoclopramida, Nicardipina, Pirmenol, mifepristona, RU 42 633, Aprindil, Auramina O, Bepridil, Desipramina, Desmetilclomipramina, Moxaprindina, Quinina, Lorcainida, Protipendil, Protriptilina, Trihexifenidil, Biperideno, Metacualona, Difenhidramina, Glutetimida, Clordiazepoxido, L-Triptofano, Mepivacaina, Levometadona, Opipramol, Trifluopromazina, Trimipramina, tris-butoxietil fosfato, estaurosporina, N-benzoil-estaurosporina y 7-hidroxi estaurosporina; así como un metabolito de cualquiera de estos compuestos;

en donde cualquier componente (a) y/o (b) puede preferiblemente estar presente en la forma libre o en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable, si al menos un grupo que forma una sal está presente.

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Más preferida es una combinación de (a) al menos un, preferiblemente un, inhibidor del receptor abl, PDGF y/o receptor del kit de la tirosina quinasa seleccionado a partir del grupo que consiste de 1-(4-cloro-anilino)-4-(4-piridil-metil)-ftalazina, (R)-6-(4-hidroxi-fenil)-4-[(1-feniletil)-amino]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina y preferiblemente 4-(4-metilpiperazin-1-ilmetil)-N-[4-metil-3-(4-piridin-3-il)pirimidin-2-ilamino)fenil]benzamida; o una sal farmacéuticamente aceptable de uno o más de estos compuestos; más preferiblemente la sal sulfonato metano de 4-(4-metilpiperazin-1-ilmetil)-N-(4-metil-3-(4-piridin-3-il)pirimidin-2-ilamino)fenil]benzamida, más preferiblemente en la forma \beta-cristal; con (b) al menos un, preferiblemente un, compuesto capaz de unirse a la glicoproteína ácida-\alpha_{1} el cual es preferiblemente un antibiótico, especialmente la Eritromicina, o estaurosporina o un derivado de la estaurosporina, especialmente N-benzoil-estaurosporina o 7-hidroxiestaurosporina, o una sal farmacéuticamente aceptable de esta, más especialmente la Eritromicina, o una sal farmacéuticamente aceptable de ésta.

Más preferiblemente, en todas las modalidades mencionadas anteriormente la enfermedad que se trata es una enfermedad de cáncer, especialmente una leucemia o un tumor sólido, preferiblemente una enfermedad seleccionada a partir del grupo que consiste de CML (leucemia mieloide crónica) y ALL (leucemia linfoblástica aguda), o un tumor sólido, especialmente seleccionado a partir del cáncer de pulmón, especialmente cáncer de pulmón de célula no-pequeña, y a partir de cáncer de la próstata.

Preferiblemente, una combinación de acuerdo con la presente invención se utiliza en el tratamiento de un animal de sangre caliente, especialmente un humano, que tiene una enfermedad proliferativa la cual (especialmente debido al más alto de los niveles normales de AGP) es o, durante el tratamiento con un inhibidor del receptor abl-, PDGF-R- y/o receptor de kit de la tirosina quinasa, se convierte o llega a ser completa o parcialmente resistente a dicho tratamiento, dichos animales de sangre caliente que representan un grupo especial de las pruebas.

En otra modalidad preferida de la presente invención, la combinación se utiliza apuntando a un animal de sangre caliente, especialmente un humano, con el fin de evitar profilácticamente ya la aparición de una resistencia parcial o completa durante el tratamiento de una enfermedad proliferativa con un inhibidor del receptor abl-, PDGF-R- y/o receptor de kit de la tirosina quinasa.

Composiciones farmacéuticas (= Preparaciones) y Procesos

Cuando en lo siguiente "componente (a) y/o (b)" se mencione, se pretende que este signifique uno o más de los compuestos definidos anteriormente como componente (a) y componente (b) como tal o una sal farmacéuticamente aceptable de uno o más de los componentes respectivos.

Las composiciones farmacéuticas que pueden encontrar uso en una combinación de acuerdo con la invención que comprenden ya sea uno o más de los componentes (a) y (b) con las propiedades de acuerdo con la invención como ingrediente activo. Las combinaciones se pueden utilizar completamente solas (por ejemplo, como combinación fija) o como kit de partes. Especialmente preferidas son las composiciones para administración enteral, especialmente oral, o parenteral. Las composiciones comprenden uno o más de los componentes (a) y (b) o combinaciones de estos como tal o, preferiblemente, juntos con un portador farmacéuticamente aceptable. La dosis de cualquier ingrediente activo depende de la enfermedad que se trata y de la especie, edad, peso y condición individual, así como el método de administración.

Se prefiere una composición farmacéutica o combinación es decir apropiada para la administración a un animal de sangre caliente, especialmente un humano, que padece de cualquier enfermedad mencionada en este documento; preferiblemente cualquier enfermedad que se entiende responde a un inhibidor del receptor abl-, PDGF-R- y/o receptor de kit de la tirosina quinasa; especialmente, una enfermedad proliferativa seleccionada de una enfermedad cancerosa, especialmente una enfermedad tumoral o leucemia, o una enfermedad proliferativa no-maligna, por ejemplo, se entiende aterosclerosis, trombosis, psoriasis, esclerodermitis o fibrosis; más preferiblemente, se entiende una enfermedad seleccionada a partir del grupo que consiste de CML (leucemia mieloide crónica) y ALL (leucemia linfoblástica aguda), o un tumor sólido, especialmente seleccionada de cáncer de pulmón, especialmente cáncer de pulmón de célula no-pequeña, y de cáncer de la próstata; más preferiblemente, se entiende cualquiera de las enfermedades que se acaban de mencionar que llegan a ser o se hacen resistentes al tratamiento con uno o más de los inhibidores de la tirosina quinasa mencionados, o ya era resistente a dicho tratamiento antes del tratamiento con cualquiera de dicho inhibidor de la tirosina quinasa, especialmente debido a concentraciones más altas de AGP que se presentan en el plasma sanguíneo del individuo que se trata.

Las composiciones farmacéuticas comprenden desde aproximadamente 0.0001% a aproximadamente 95% de cualquier componente (a) y/o (b), forma de dosificación que está en forma de dosis única, que preferiblemente comprende de aproximadamente 10% a aproximadamente 90% del componente (a) o (b), y formas de dosificación que no están en la forma de dosis única que preferiblemente comprenden de aproximadamente 10% a aproximadamente 60% de cada componente. La forma de dosis única, tal como grageas, tabletas, ampollas o cápsulas, comprenden de aproximadamente 5 mg a aproximadamente 1.5 g del componente (a) y/o del componente (b), preferiblemente de 5 mg a aproximadamente 1 g.

Las composiciones farmacéuticas se preparan de una manera conocida per se, por ejemplo por medio de procesos convencionales de mezcla, granulación, manufactura, disolución o liofilización. Por ejemplo, las composiciones farmacéuticas para administración oral se pueden obtener por combinación del componente (a) y/o (b) con uno o más portadores sólido o líquido, donde la granulación necesaria de una mezcla resultante y el proceso de la mezcla o los gránulos, si se desea o es apropiado con la adición de otros excipientes, para formar tabletas o núcleos de gragea o soluciones, respectivamente.

Los portadores apropiados son especialmente rellenos, tales como azúcares, por ejemplo, lactosa, sacarosa, manitol o sorbitol, preparaciones de celulosa y/o fosfatos de calcio, por ejemplo, fosfato de tricalcio o fosfato hidrógeno de calcio, y aglutinantes, tales como almidones, por ejemplo, almidón de maíz, trigo, arroz o patata, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio y/o polivinilpirrolidona, y/o, si se desea, desintegrantes, tales como los almidones mencionados anteriormente, y también almidón carboximetil, polivinilpirrolidona entrecruzada o ácido algínico o una sal de estos, tal como alginato de sodio. Excipientes adicionales son especialmente acondicionadores de flujo y lubricantes, por ejemplo, ácido silícico, talco, ácido esteárico o sales de estos, tales como magnesio o estearato de calcio, y/o pilietilenglicol, o derivados de estos.

Los núcleos de grageas pueden ser provistos con recubrimientos apropiados, opcionalmente entéricos, que se utilizan, inter alia, soluciones concentradas de azúcar que pueden contener goma arábiga, talco, polivinilpirrolidona, polietilenglicol y/o dióxido de titanio, o soluciones de recubrimiento en solventes orgánicos apropiados o mezclas de solventes, o, para la preparación de recubrimientos entéricos, soluciones de preparaciones de celulosa apropiadas, tales como acetilcelulosa ftalato o hidroxipropilmetilcelulosa ftalato. Colorantes o pigmentos se pueden adicionar a los recubrimientos de tabletas o grageas, por ejemplo, para propósitos identificación o para indicar diferentes dosis del ingrediente activo.

Las composiciones farmacéuticas administrables vía oral, también son cápsulas de llenado seco que consiste de gelatina, y también cápsulas de sellado suave que consiste de gelatina y un plastificante, tales como glicerol o sorbitol. Las cápsulas de llenado seco pueden contener el componente (a) y/o (b) en la forma de gránulos, por ejemplo en mezcla con rellenos, tales como almidón de maíz, aglutinantes y/o deslizantes, tales como talco o estearato de magnesio, y, cuando sea apropiado, estabilizantes (ver anteriormente para "portadores apropiados"). En cápsulas suaves, el ingrediente activo preferiblemente se disuelve o suspende en apropiados excipientes líquidos, por ejemplo, aceites grasos, ®Lauroglycol (Gattefossé S.A., Saint Priest, france), ®Gelucire (Gattefossé S.A., Saint Priest, France) o aceite de ajonjolí, aceite de parafina o polietilenglicoles líquidos, tales como PEG 300 o 400 (Fluka, Switzerland), o polipropilenglicoles, para cada uno de los cuales estabilizantes o detergentes también se pueden adicionar, o en agua que comprenden otros portadores solubles como se menciona anteriormente, tales como metilcelulosa o manitol.

Otras formas de administración oral son, por ejemplo, soluciones o jarabes preparados de manera habitual que contienen el componente (a) y/o (b) por ejemplo, en forma suspendida y en una concentración aproximada de 0.001% a 20%, se prefiere aproximadamente 0.001% a cerca del 2%, o en una concentración similar que proporcione una dosis única apropiada cuando se administra, por ejemplo, en medidas de 0.5 a 10 ml. También apropiados, por ejemplo, son los concentrados en polvo o líquido para preparar batidos, por ejemplo, en leche. Tales concentrados también se pueden empacar en cantidades de dosis única.

Los Sistemas de Entrega Trasndérmicos son posibles, especialmente con ingredientes activos neutros. Las formulaciones apropiadas comprenden, por ejemplo, aproximadamente 0.0001% a cerca de 2% en peso del componente (a) y/o (b). En un aspecto preferido, siempre hay formulaciones que comprenden aproximadamente 2% a 99.9999% (o la estabilidad al 100%) de un alcohol alifático de cadena corta. Los alcoholes apropiados incluyen etanol, isopropanol, propilenglicol y glicerol. En un aspecto más preferido, estas formulaciones adicionalmente pueden comprender un potenciador de flujo. Los potenciadores de flujo apropiados incluyen, por ejemplo, decilmetilsulfoxido, dimetilsulfoxido así como cetonas cíclicas, lactonas, anhídridos y ésteres. Algunos de estos potenciadores de flujo también aumentan la retención del componente (a) y/o (b) y de esta manera actúan para aumentar la concentración de este en la propia piel. Para formulaciones para tratamiento directo (local), tales como aplicación tópica en la piel, se prefiere utilizar un potenciador de flujo que no solamente maximiza el flujo transdérmico, sino que incrementa la retención del componente (a) y/o (b) en la piel. Cierta cetona cíclica y potenciadores de lactona han sido reportadas por aumentar la retención local adicionalmente y, de esta manera, comprenden una clase preferida de potenciadores para la administración tópica del componente (a) y/o (b). En formulaciones para el tratamiento sistémico, es preferible utilizar un potenciador de flujo que maximiza el flujo con una retención local mínima del ingrediente activo.

Las composiciones farmacéuticas administrables vía rectal apropiadas son por ejemplo, supositorios que consisten de una combinación del ingrediente activo con una base de supositorio. Las apropiadas bases de supositorios son por ejemplo, triglicéridos naturales o sintéticos, hidrocarburos de parafina, polietilenglicoles o alcanoles superiores.

Para administración parenteral, existen apropiadas soluciones, especialmente, acuosas de un ingrediente activo en forma soluble en agua, por ejemplo, en la forma de una sal soluble en agua, en la presencia o ausencia de sales, tales como cloruro de sodio, y/o alcoholes de azúcar, tales como manitol, o suspensiones de inyección acuosas que comprenden sustancias que aumentan la viscosidad, por ejemplo, carboximetilcelulosa de sodio, sorbitol y/o dextran, y, cuando sea apropiado, estabilizantes. El componente (a) y/o (b), cuando sea apropiado junto con los excipientes, también puede estar en la forma de un liofilizado y se puede hacer en una solución antes de la administración parenteral mediante la adición de solventes apropiados.

Las soluciones como se utilizan por ejemplo, para la administración parenteral también se pueden utilizar como soluciones de infusión.

Las formulaciones preferidas que comprenden cualquier componente (b) son aquellas que son habituales para el uso clínico respectivo de uno o más agentes que pertenecen a este grupo de compuestos que se conocen en el oficio.

Las formulaciones preferidas para el componente (a) son aquellas mencionadas en los ejemplos. Las combinaciones como se describen anteriormente cualquiera de los componentes (a) y/o (b), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, se pueden administrar profiláctica o terapéuticamente, preferiblemente en una cantidad, que es efectiva contra las mencionadas enfermedades, a un animal de sangre caliente, por ejemplo, hombre, que necesita de dicho tratamiento, preferiblemente en la forma de una composición farmacéutica. La dosis de cualquier componente (a) y/o (b) depende de la especie del animal de sangre caliente que se trata, su peso corporal, su edad y estado individual, circunstancias farmacocinéticas individuales, la enfermedad que se trata y la ruta de administración. Preferiblemente, por un peso corporal de aproximadamente 70 kg una dosis diaria desde 10 mg a 2500 mg, más preferiblemente de aproximadamente 50 mg a aproximadamente 2000 mg, más preferiblemente de aproximadamente 100 mg a aproximadamente 1500 mg, de cualquiera de los componentes (a) y/o (b) se administra. Los niños recibieron una dosis inferior correspondiente basándose en su área superficial de la piel (el área superficial de la piel de un adulto de 70 kg como referencia es 1.73 m^{2}).

La presente invención se puede ilustrar por los siguientes ejemplos que no tienen la intención de limitar el alcance de la presente invención sino que sirven solamente como modalidades paradigmáticas:

Ejemplos Introducción

El gen de fusión oncogénica de BCR/ABL codifica para la proteína bcr/abl híbrido que causa, debido a su mejorada y constitutiva actividad de la tirosina de la quinasa, tres diferentes enfermedades: Leucemia Mieloide Crónica (CML), parte de Leucemia Linfoblástica Aguda (ALL) y de Leucemia Mieloide Aguda (AML).

El bloqueo de la actividad de bcr/abl de la quinasa representa una estrategia novedosa y racional para el tratamiento de CML y de los otros cánceres causados por esta proteína de fusión oncogénica (Druker BJ, et al.: Effects of a selective inhibitor of the Abl tyrosine kinase on the growth of Bcr/Abl positive cells. Nat. Med. 2: 561-6, 1996).

ST1571 (previamente conocido como CGP57148) representa un inhibidor activo y relativamente específico de la actividad de bcr/abl de la quinasa. ST1571 bloquea la proliferación e induce la apoptosis en BCR/ABL+ células in vitro; inhibe el crecimiento de células de médula ósea clonogénicas obtenidas de pacientes con CML, y pueden erradicar el crecimiento celular leucémico in vivo. La actividad de ST1571 in vivo se condiciona al logro de la inhibición de bcr/abl estable y continua, la cual requiere administraciones diarias múltiples en el modelo murina que se estudio (le Coutre et al., J. Natl. Cancer Inst. 91, 163-168 (1999)).

Basándose en esto y la información adicional, ST1571 está siendo probado en ensayos clínicos iniciales en CML y en otras enfermedades asociadas con BCR/ABL. Información muy limitada está disponible en consideración con la posible emergencia de la resistencia a ST1571. Dos líneas celulares han sido seleccionadas para estudiar la resistencia a ST1571 in vitro (le Coutre P, et al., Blood 90:496a, 1997). El mecanismo de resistencia se desconoce en un caso, mientras que se involucra la amplificación de BCR/ABL y sobreexpresión de la proteína en el segundo. La relevancia biológica de estas sublíneas seleccionadas in vitro, permanecen sin embargo para ser establecidas, dado que las condiciones de selección in vitro son diferentes y usualmente más rigurosas que la situación in vivo.

Ninguna información se dispone en el desarrollo y caracterización de la resistencia in vivo a ST1571. En nuestro modelo de ratón descrito previamente (le Coutre P, et. al., J. Natl. Cancer Inst. 91,163-168, 1999), el fracaso del tratamiento se notó en algunos animales, cuando el tratamiento se retrasó por una semana después de la inyección de la célula leucémica, y una masa tumoral medible ya estaba presente. Dicho modelo por consiguiente podría ser útil para estudiar y caracterizar la posible aparición de la resistencia a ST1571 in vivo.

Aquí, se establece un modelo in vivo para la resistencia a STI571. La caracterización molecular de dicho modelo, así como una estrategia para superar la presencia de la resistencia también se identifica y se valida experimentalmente.

Materiales y métodos ST1571

ST1571 (previamente conocido como CGP57148B) se obtiene como se describe en EP 0 564 409 y WO 99/03854. Para los experimentos in vitro, se preparan soluciones stock de este compuesto a 1 y a 10 mM con agua destilada, se filtran y almacenan a -20ºC y luego se descongelan antes de iniciar el experimento y se utilizan a una concentración de 0.1-10 \muM. Las preparaciones utilizadas para experimentos de animales se preparan diariamente a una concentración de 16 mg/ml y se disuelven en agua o en una solución de metil celulosa al 5% (Methocell, Fluka) y se mantiene a 4ºC.

Eritromicina

Para los experimentos in vitro se utiliza eritromicina base (Sigma). Una nueva solución stock se prepara justo antes de cada experimento a una concentración de 20 mM y se utiliza a una concentración de 1 -100 \muM. La eritromicina se disuelve en etanol y además se diluye con agua destilada. Para experimentos in vivo la eritromicina estolato (proporcionada por Gist-Brocades Italy SPA, Capua, Italy) se utiliza a una concentración de 35 mg/ml en una solución de metil celulosa al 5% y 16 mg/ml de STI571.

Administración In vivo de STI571

Ratones hembras de siete a 9 semanas de edad CD1 nu/nu se compraron en Charles River Breedin Laboratories (Calco, Italy) se mantuvieron bajo condiciones estándar de laboratorio de acuerdo con la guía del National Cancer Institutes, Milan, Italy. Este estudio se aprueba por el comité ético institucional para animales de laboratorio utilizados en la investigación experimental. La línea celular bcr/abl positiva KU812 se inyecta (50 x 10^{6} células por animal) vía subcutánea en el flanco izquierdo del animal. El tratamiento oral se administra a través de una jeringa conectada a un tubo plástico suave introducido en el esófago (cebadura). El peso del tumor (TW) y el peso total se monitorean cada 3-4 días. El TW se calcula, mediante la fórmula TW [mg] = (d^{2} x D), donde d y D son los diámetros más pequeños y grandes del tumor, respectivamente, medidos en milímetros. El tratamiento se inicia 1-15 días después de la inyección de la célula leucémica.

Líneas celulares

Se utiliza la línea celular de leucemia humana positiva de Bcr/Abl KU812 (ver Kishi K. A new leukemia cell line with Philadelphia chromosome characterized as basophil precursors. Leuk Res 9: 381-90, 1985). La línea KU812 se ha obtenido de un paciente CML en crisis blástica, y se mantiene en RPMI 1640 (Bio Whittaker Europe) suplementada con 10% de Suero Fetal Bovino (FCS) bajo condiciones de cultivo celular estándar.

La línea celular KU812 es accesible vía Deutsche Sammlung für Mikroorganismen und Zellkulturen (DSMZ), Mascheroder Weg, Braunschweig, Germany, que tiene el número de acceso DSMZ No: ACC 378.

Otras líneas celulares análogas que se pueden utilizar en las pruebas descritas abajo son

Línea Celular: BV-173 (Tipo de Célula: leucemia precursor de célula B humana) DSMZ No: ACC 20;

Línea Celular: K-562 (Tipo de Célula: leucemia mieloide crónica humana en crisis blástica) DSMZ No: ACC 10;

Línea Celular: LAMA-84 (Tipo de Célula: leucemia mieloide crónica humana en crisis blástica) DSMZ No: ACC 168;

Línea Celular: EM-3 (Tipo de Célula: leucemia mieloide crónica humana en crisis blástica) DSMZ No: ACC 134;

Línea Celular: MEG-01 (Tipo de Célula: leucemia mieloide crónica humana en crisis blástica megacariocitica) DSMZ No: ACC 364; o

Línea Celular: NALM-1 (Tipo de Célula: leucemia mieloide crónica humana en crisis blástica) DSMZ No: ACC 131.

Determinación del ensayo de absorción de la actividad de la proliferación in vitro (timidina tritiada [^{3}HtdR])

Doscientos microlitros de cada línea celular (KU 812, LAMA 84), que contiene 104 células, se siembra a varias concentraciones de STI571, oscilando de 0 a 10 \muM en placas de microtitulación de 96 pozos (Coming Costar Corp., Cambrige, MA) en seis replicas. Después de 54 horas a 37ºC, 20 \mul de RPMI 1640 + FCS al 10% que contiene timidina tritiada (1 \muCi/pozo) se adiciona a cada pozo. Después de unas 18 horas adicionales, las células se cosecharon y transfirieron a un filtro (Spot-on filtermat, Pharmacia Biotech Europe, Brussels, Belgium). La absorción de la timidina triatiada se determinó por un contador de centelleo líquido del tipo betaplate 1205 (Wallac Inc., Turku, Finland). IC_{5}0 (concentración inhibidora 50) se define como la concentración del compuesto que produce 50% de disminución de la proliferación en comparación con los controles sin tratar.

Análisis Western blot

La inmunotransferencia se realiza como se describe antes de (Gambacorti-Passerini C et al.: Blood Cells, Molecules, and Diseases 23, 380-94, 1997). La células se lavaron dos veces con solución salina reguladora de fosfato fría (PBS) y posteriormente se lisaron en 200 \mul de 1 x solución reguladora de Laemmli (Tris-HCl 50 mM pH 6.8, SDS 2%, 0. 1% azul de bromofenol, glicerol al 10%, \beta-mercaptoetanol al 5%). Los lisados celulares, correspondientes a 90,000-150,000 células, se hirvieron a 95ºC por 10 minutos, se sonicaron por 1 minuto y se analizaron por Electroforesis de Gel SDS sobre geles de poliacrilamida al 7.5%. La tirosina bcr/abl endógena, bcr/abl fosforilada y la actina endógena se detectaron con el correspondiente anticuerpo monoclonal de ratón o antisuero de conejo y luego de visualiza mediante la detección de quimioluminisencia mejorada (ECL, Amersham Corp.) utilizando inmunoglobulina G anti-conejo o anti-ratón de cabra unida de peroxidasa de rábano, como el anticuerpo secundario (Amersham Corp.). El anticuerpo anti-abl monoclonal (Clon Ab-3) se compró de Calbiochem. El anticuerpo monoclonal anti-fosfotirosina (clon 4G10) se compró de Upstate Biotechnology. La anti-actina policlonal de conejo se compró de Sigma. El análisis densitométrico se realiza con un Fotodensitómetro Eagle Eye 11 (Stratagene) y las intensidades de las bandas bcr/abl de la tirosina fosforilada se normalizaron contra los niveles de expresión de bcr/abl y actina.

Determinación de AGP

Los niveles de suero de la glicoproteína ácida-\alpha_{1} (AGP) se detectaron, ya sea por el método de inmunodifusión o de isoelectrofocalización. Para la inmunodifusión 5.0 ml de cada muestra se sembraron en placas dentro de un pozo pequeño de una placa de agar (SRID, prueba de placa de inmunodifusión radial única, Cardiotech Services JINIC Louisville, 1 KY, USA) que contiene antisuero de AGP. La placa se incuba 24 horas a 37ºC. La cantidad específica de AGP dentro de la muestra se determina por el tamaño del anillo de precipitina y se determina por comparación con estándares a 1000, 250 y 125 \mug/ml, proporcionados con cada kit de prueba. Las determinaciones se realizan por duplicado. Para la isoelectrofocalización de un IPG (gradiente de pH inmovilizado) (Gianazza, E., Celentano, F., Ettori, C., Righetti, P. G., Immobilized pH gradients: Theory and methodology. Electroforesis 1989, 10, 806-808) en el rango de pH 2.5-5 se monta entre una solución ácida que contiene Immobiline pK 1, 3 mM, pK 3.6, 11.83 mM, pK 9.3, 0.76 mM, y Tris 12.9 mM, y una solución básica que contiene Immobiline pK 3.6, 9.28 mM, pK 4.6, 9.50 mM, y pK 9.3, 16.13 mM (Amersham Pharmacia, Uppsala, Sweden). Después de la polimerización, el gel se lava 3 veces en 1% de glicerol, se seca y rehidrata en urea 8M-0.5% de anfolitos portador, rango de pH 2.5-5 (Pharmacia). Posteriormente, alícuotas de suero de 7.5 \mul, diluido a 25 \mul con 2% de 2-mercaptoetanol, se cargan cerca del cátodo. Después de una corrida durante la noche a 55 V/cm, las muestras se concentraron por 90 min a 165 V/cm. El patrón de la proteína se tiñe con Coomassie.

Estimación de los parámetros de enlace

El plasma o AGP humana purificada (Sigma) o Albúmina (diluida en PBS) se incubaron con varias concentraciones de STI571 a temperatura ambiente por 30 min. Las concentraciones de STI571 se determinaron por HPLC, con un límite inferior de detección de 0.1 \muM. STI571 libre se determina por ultrafiltración con un corte a 30 KD. Las gráficas Scatchard Modificadas se construyen. La constante de asociación (Ka) se calcula como se describe previamente (Fuse E, Tanii H, Kurata N et al., Cancer Res., 58, 3248-53, 1998).

Análisis estadístico

El análisis estadístico se realiza con el test exacto de Fisher o T Student utilizando el programa análisis Prism. Para análisis de supervivencia, los datos se comparan mediante el test logrank. Los valores P <0.05 se consideran estadísticamente significante y se derivan a partir de pruebas estadísticas bilaterales.

Ejemplo 1 Eficacia de STI571 se relaciona con la carga inicial del tumor

Los ratones desnudos se inyectaron s.c. con 50 millones de células KU812. El tratamiento se inicia después de 1, 8 y 15 días respectivamente (grupos I a III), en la presencia de aproximadamente, 50, 300 millones y 1 billón de las células leucémicas. Aunque la regresión del tumor se observa en todos los grupos, las curas se obtienen solo en el primero de dos grupos. Fig. 1A muestra los resultados de un experimento representativo. Mientras todos los animales en el grupo I se curan reproduciblemente, los ratones en el grupo II desarrolla entre 33% y 40% de reincidencias; ninguna cura se observa en el grupo III. Usualmente se desarrollan reincidencias 1 a 3 semanas después de la descontinuación del tratamiento. Fig. 1B presenta los resultados combinados de 3 experimentos diferentes. Es evidente, una clara relación entre la cantidad de tumor presente ya en el inicio del tratamiento y el resultado de la terapia. Una posible explicación para estos resultados podría residir en la longitud insuficiente de la administración de STI571 en el grupo II y III. Para probar estos ratones de hipótesis en el grupo II se trataron por 11 o 18 días. El resultado de un experimento representativo se muestra en la Fig. 1C e indica que el aumento de la duración de tratamiento no mejora la velocidad de cura. Estos resultados indican que en este modelo el tratamiento con STI571 puede curar solamente los animales si el tumor se erradica en los primeros 11 días de tratamiento. Si esto no ocurre, la cura no se puede lograr, incluso con exposición mayor con el compuesto. En otras palabras: algún tipo de resistencia ha surgido.

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Ejemplo 2 Los tumores reincidentes muestran resistencia in vivo pero retienen sensibilidad in vitro a STI571

Los animales que presentan tumores recurrentes se volvieron a tratar con el mismo cronograma de STI571 (11 días de régimen). El tratamiento inicia tan pronto como los tumores se vuelven nuevamente medibles. La Fig. 2 muestra un experimento representativo. Es evidente que los tumores reincidentes responden pobremente a los nuevos tratamientos, y eventualmente comienzan a crecer de manera similar a los tumores en animales sin tratar (líneas discontinuas). Aunque las células leucémicas sean resistentes in vivo a STI571, su sensibilidad intrínseca a STI571 no se conoce. Para investigar este asunto, los tumores se remueven a partir de los animales resistentes, se obtienen suspensiones celulares y las células se colocaron en el cultivo y se examinaron para su sensibilidad in vitro a STI571 dentro de 24-48 horas, como se describe previamente (le Coutre P, et al., J. Natl. Cancer Inst. 91,163-168, 1999). La Fig. 3 presenta los resultados obtenidos de dos de estos tumores. Es evidente que las células leucémicas obtenidas de animales resistentes retienen su sensibilidad a STI571, como su IC_{50} no difiere de aquella de la línea celular KU812 parental. Estos resultados nos condujeron a evaluar si la actividad de la quinasa de la proteína bcr/abl a pesar de todo se inhibe, mediante la administración de STI571. Para este objetivo experimentos de farmacocinética molecular (descritos en: le Coutre P, et al., J. Natl. Cancer Inst. 91,163-168, 1999) se realizan, para investigar el grado y duración de inhibición de Bcr/Abl in vivo en animales que no se pre-trataron o en ratones que reinciden después del tratamiento inicial y fueron resistentes a un segundo ciclo de administración de STI571. Los ratones que tienen tumores se tratan agudamente y matan a 2 y 4 horas. Los niveles de la actividad de la Bcr/Abl quinasa (medida como autofosforilación) obtenidos en un experimento representativo se muestran en la Fig. 4. Mientras ninguno de los ratones pre-tratados muestran la inhibición reportada previamente en la fosforilación de bcr/abl a ambos 2 y 4 horas (sendas 4 y 6), animales reincidentes resistentes a STI571 no se inhiben por el tratamiento (sendas 3 y 5). Estos experimentos indican que los ratones reincidentes son resistentes a otro tratamiento y que la inhibición de la actividad de la bcr/abl quinasa no se logró en esta situación. Las células leucémicas sin embargo retienen su sensibilidad in vitro a STI571.

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Ejemplo 3 Niveles de STI571 en plasma en ratones reincidentes

Una posible explicación para los resultados reportados anteriormente podría residir en un aumento del metabolismo de STI571 en animales pre-tratados, con los consiguientes inferiores niveles en plasma STI571. Para investigar este asunto, los ratones que tienen tumor, ya sea pre-tratados con STI571 o no (controles), se mataron a las 0.5, 2.0 y 5.0 horas después de un tratamiento agudo con STI571 y las concentraciones totales de STI571 en plasma, se determinaron por HPLC. Los resultados se presentan en la Fig. 5. Mientras los animales control y pre-tratados alcanzan niveles similares en plasma a 30', la disminución de los niveles de STI571 más rápidamente en animales control, comparado con los ratones pre-tratados (p<0.01). Las concentraciones intra tumor muestran un patrón opuesto, los tumores presentes en animales pre-tratados contienen concentraciones inferiores de STI571 en todos los puntos de tiempo, este fenómeno que alcanza la significancia estadística en la punto de tiempo de 5 horas. Estos resultados no confirmaron nuestra hipótesis, e incluso muestran que los animales resistentes mantienen más altas concentraciones de STI571 en su sangre durante un tiempo más largo. Estos datos, entre otras alternativas, podrían ser más bien compatibles con la presencia, en la sangre de ratones resistentes, de un "factor" capaz de unir y disminuir la liquidación y actividad biológica de STI571.

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Ejemplo 4 Glicoproteina Ácida-\alpha_{1} (AGP) se une a STI571 e inhibe su efecto

Dos proteínas de plasma que pueden unir fármacos son la albúmina y AGP. AGP preferencialmente une moléculas básicas (Kremer et al., Drug binding to human \alpha1-acidic glycoprotein in health and disease, Pharmacological Reviews 40, 1-47, 1988). Las células KU812 se utilizan in vitro para evaluar el efecto de AGP sobre la actividad biológica de STI571. Dado que AGP murina no es disponible en cantidades suficientes para este tipo de experimentos (Fuse E, et al., Cancer Res. 58, 3248-53, 1998), se utiliza AGP humana. Los resultados de un experimento representativo se presentan en la Fig. 6A. Es evidente que AGP inhibe la actividad de STI571 (medido como IC_{50}); este efecto es proporcional a la concentración de AGP. La IC_{50} incrementa a partir de la usual 0.05 \muM en la ausencia de AGP (Gambacorti-Passerini C, et al., Blood Cells, Molecules, and Diseases 23, 380-94, 1997), a más de 3.0 \muM a una concentración de AGP de 2 mg/ml. En un experimento separado la IC_{50} a 2.0 mg/ml de AGP se calcula a 4.5 \muM (los datos no se muestran). La albúmina no aumenta sustancialmente la IC_{50} para STI571, incluso a 50 mg/ml (Fig. 6B). Por lo tanto, AGP pero no la albúmina puede aumentar la IC_{50} para STI571 hasta valores 90 veces más alto que en los controles.

Dado que un efecto inhibidor de AGP se percibe, se calcula la constante de asociación (Ka) de STI571 para AGP y para la albúmina. Para este objetivo una cantidad fija de AGP (5 mM) se incuba con diferentes concentraciones de STI571 y la cantidad de un fármaco no unido (fracción libre) se evalúa por ultrafiltración. Las curvas de las gráficas de Scatchard se obtienen para ambas AGP y albúmina. En el caso de AGP un valor de 8.7 litros/moles se encuentra, el cual es aproximadamente 60 veces más alto que el Ka calculado para la albúmina (0.15). Estos resultados indican que aunque ambas albúmina y AGP pueden unir a STI571, la última se une a STI571 con mucha más alta afinidad y, como resultado, inhibe la actividad biológica de STI571.

Para confirmar los resultados mencionadas anteriormente, las células KU812 se desafían in vitro con suero que contiene una cantidad diferente de AGP. La Fig. 7 presenta un experimento representativo en el cual dos sueros que contienen 130 \mug/ml de AGP (triángulos) y 1150 \mug/ml de AGP (cuadrados), respectivamente, se adicionan (a una concentración final de 15%) a cultivos de KU812 (control: 0% de suero; diamantes). Es evidente que la inhibición de actividad de STI571 se asocia con el respectivo contenido de AGP de cada muestra de suero. El cambio en el porcentaje de suero presente en los procedimientos de cultivo de un aumento o disminución proporcional en su actividad inhibidora (no se muestran). Se concluye que AGP puede unir a STI571, este enlace tiene importantes consecuencias biológicas y bloquea la capacidad de STI571 para inhibir la actividad enzimática de la Bcr/Abl quinasa.

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Ejemplo 5 Relación entre los niveles de suero de AGP, carga del tumor y tratamiento con STI571

Los resultados previamente presentes indican que AGP, una inducible proteína de plasma, potencialmente inhibe la actividad de STI571 in vitro. Los niveles en plasma de AGP se determinaron en ratones desnudos en varias etapas de la enfermedad por inmunodifusión, para evaluar si aquellos valores se pueden asociar a la sensibilidad in vivo de células leucémicas KU812 al tratamiento con STI571. La Fig. 8A presenta los valores de AGP en ratones en varias etapas de enfermedad. Los valores de AGP basales en ratones son muy bajos (96 \pm 21 \mug/ml). Las concentraciones de AGP suben proporcionalmente a la carga del tumor presente. Los ratones con una carga de tumor de aproximadamente 200 mg (correspondiente a aproximadamente 200 millones de células leucémicas) muestran un aumento de cuatro veces en valores de AGP (383 \pm 131 \mug/ml), mientras que los ratones con 0.8-1 g de tumores muestran valores de AGP en exceso de 1 mg/ml (1580 \pm 234 \mug/ml). Los animales con tumores medibles que se curan mostraron una disminución progresiva en concentraciones de AGP y regresan a los niveles normales en 4-8 semanas. Los experimentos con AGP purificado indican que las variaciones en las concentraciones de AGP observadas entre ratones normales y animales que llevan tumores grandes causan un cambio en la fracción STI571 unida a AGP del 42% a más del 99% (no se muestran). Interesantemente el tratamiento con STI571 (160 mg/kg p.o. por 11 días) también produce un aumento inferior pero estadísticamente significante de los valores de AGP (213 \pm 43 \mug/ml). Los niveles de aumento de AGP en ratones que tienen tumores también son evidentes por isoelectrofocalización (Fig. 8B). Estos resultados, tomados en conjunto, muestran que la carga del tumor (y en una menor medida el pretratamiento con STI571) induce la síntesis de AGP, una proteína de plasma que, a su vez, pueden unir e inactivar la STI571.

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Ejemplo 6 Eritromicina, un ligante de AGP, puede relevar el bloqueo mediado de AGP de la actividad de STI571 in vitro

(a) Varios fármacos se conocen para unir AGP, incluyendo eritromicina (Kremer et al., Pharmacological reviews 40, 1-47,1988). Si el mecanismo por el cual AGP bloquea STI571 se media por el enlace de AGP a STI571, luego una tercera molécula capaz de unir AGP podría competir con STI571 para el enlace de AGP, de esta manera haciendo STI571 más disponible para la actividad biológica. Para validar tal hipótesis, se adiciona eritromicina a 5 a 30 \muM a los cultivos de KU812 que contienen STI571 (1 \muM). AGP (1 mg/ml), o ambos STI571 (1 \muM) y AGP (1 mg/ml). Los resultados de un experimento representativo se presentan en la Fig. 9 (STI solo: cuadrados; AGP sola: triángulos; STI y AGP: diamantes). La eritromicina restituye la sensibilidad a STI571 con una clara relación dosis-respuesta. La eritromicina no modifica la IC_{50} para STI571 en la ausencia de AGP, de esta manera excluyendo un efecto directo sobre el efecto anti-leucémico de STI571 (no se muestra).

(b) Los efectos de la eritromicina también se evalúan sobre el bloqueo mediado de STI571 de la actividad de la bcr/abl quinasa (Fig. 10). Las células KU812 se trataron in vitro con STI571, AGP y eritromicina, se incubaron a 37ºC por 1 hora y se lisaron; la cantidad de actividad de la quinasa luego se evaluó utilizando un anticuerpo anti-fosfotirosina. La Fig. 10 muestra que AGP inhibe la actividad de STI571. La actividad de STI571 se puede restaurar por la adición de la eritromicina.

Los experimentos (a) y (b) proporcionan la evidencia en dos ensayos diferentes, que la eritromicina puede restaurar la sensibilidad de STI571 in vitro.

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Ejemplo 7 Efectos In vivo de la administración de la eritromicina y del pretratamiento de STI571

(a) Habiendo demostrado el efecto inhibidor de AGP y su cambio por la eritromicina in vitro, validamos experimentalmente la modulación in vivo de los valores de AGP o de su capacidad de enlace. Los ratones se inyectaron con células KU812 y el tratamiento se inicia 11 días después en la presencia de una carga aproximada del tumor de 400 mg. En esta situación poca o ninguna cura se esperan de un tratamiento estándar con STI571. Los ratones se trataron con STI571 (160 mg/kg p.o. cada 8 horas) completamente solo o en combinación con eritromicina estolato (350 mg/kg cada 8 horas) por 18 días. La formulación de estolato de eritromicina se elige dada su buena biodisponibilidad oral en ratones se demostró previamente, la dosis seleccionada que se espera para producir concentraciones pico más altas de 20 \muM. Como se ilustra en la Fig. 11A, el tratamiento combinado produce una reducción del tumor significantemente mayor en el día 6, y del día 16 en adelante. Es importante señalar que mientras que la regresión del tumor es progresiva en ratones que reciben el tratamiento combinado, algunos tumores comienzan a crecer de nuevo durante los últimos días de tratamiento en el grupo tratado con STI571 solo. El efecto de adición de la eritromicina a STI571 es incluso más evidente cuando la velocidad de curación en los dos grupos se compara (Fig. 11 B). En la serie que recibe STI571 completamente solo, 5/15 animales muestran desaparición del tumor. Sin embargo 4 animales reinciden entre el día 25 y 40, con solo 1/13 animales que se curan en el día 120 (último día de seguimiento). En el grupo que recibe la terapia combinada de eritromicina/STI571, 14/15 ratones llegan a estar libres de tumores, y solo 1 animal reincide, en el día 30. Por lo tanto, 10/12 animales se curan, mediante el tratamiento combinado; este valor es significantemente diferente (p<0.01) del (1/13) obtenido en el grupo de STI571 solo. Los grupos control que reciben eritromicina completamente sola no muestran ninguna evidencia de la regresión del tumor (no se muestra).

(b) Los efectos biológicos del pretratamiento con STI571 también se evaluaron. Los ratones se pre-trataron o no con STI571 por 14 días, se inyectaron con células KU812 y luego se trataron con STI571 (160 mg/kg cada 8 horas por 11 días), iniciando 24 horas después de la inyección de células leucémicas. bajo estas circunstancias, el 100% de los animales se espera que se curen mediante STI571. Los resultados se presentan en la Fig. 12. En el grupo control (ningún ratón pre-tratado) 0/14 animales desarrollaron el crecimiento del tumor. En el grupo de ratones pre-tratados, el crecimiento del tumor sucede en 7/14 animales (p<0.05), indicando que el aumento de AGP asociado con el tratamiento previo con STI571 también puede producir un efecto biológico significante. Estos resultados, tomados en conjunto, soportan la evidencia experimental a los efectos negativos de AGP sobre la actividad terapéutica de STI571; también sugieren y proporcionan validación experimental parcial de una estrategia destinada a evitar la resistencia in vivo mediada por AGP, utilizando moléculas capaces de unir a AGP en competición con STI571.

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Ejemplo 8 Tabletas con 4-[(4-metil-1-piperazin-1-ilmetil)-N-[4-metil-3-[[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]amino]-fenil]benzamida metanosulfonato. Forma \beta-cristal

Las tabletas que contienen 100 mg de la sustancia activa denominada en el título usualmente se preparan en la siguiente composición:

14

Preparación: La sustancia activa se mezcla con materiales portadores y se comprimen en una máquina de tableteado (Korsch EKO, diámetro de punzón 10 mm).

Avicel es celulosa microcristalina (FMC, Philadelphia, USA).

PVPPXL es la polivinilpolipirrolidona, entrecruzada (BASF, Germany).

Aerosil es dioxido de silicio (Degussa, Germany).

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Ejemplo 9 Cápsulas con 4-[(4-metil-1-piperazin-1-ilmetil)-N-[4-metil-3-[[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]amino]fenil]benzamida metanosulfonato. Forma \beta-cristal

Las cápsulas que contienen 100 mg del compuesto denominado en el título como sustancia activa usualmente se preparan en la siguiente composición:

15

Las cápsulas se preparan mezclando los componentes y llenando la mezcla en cápsulas de gelatina dura, tamaño 1. PVPPXL = Crospovidona XL (ver Ejemplo 10).

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Ejemplo 10 Cápsulas con 4-[(4-metil-1-piperazin-1-ilmetil)-N-[4-metil-3-[[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]amino]fenil]benzamida metanosulfonato. Forma \beta-cristal

Crospovidona XL: Povidona entrecruzada = homopolímero entrecruzado insoluble en agua de N-vinil-2-pirrolidona

Aerosil 200: silica gel pura (área superficial de acuerdo con BET 200 \pm 25 m^{2}/g. tamaño de grano medio 12 nm).

Avicel: celulosa microcristalina.

\newpage

La composición del llenado de la cápsula para las cápsulas de 100, 50 y 25 mg es idéntica. Las potencias de diferentes dosificaciones se obtienen, variando solamente el peso de llenado de la cápsula. Los tamaños pretendidos de las cápsulas son, tamaño 1 100 mg, tamaño 3 50 mg y tamaño 4 25 mg.

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TABLA 1 Composición para las cápsulas (Cantidades utilizadas por cada lote en [kg])

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TABLA 2

17

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Ejemplo 11 Composición de formulación de la Eritromicina típica

Aquí cualquier formulación estándar para la eritromicina conocida se puede utilizar.

Un ejemplo de una formulación con eritromicina estolato se proporciona en la Tabla 3.

TABLA 3 (Cantidades utilizadas por cada lote en [kg])

18

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Ejemplo 12 Posible composición combinada con ambos Eritromicina y STI571

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TABLA 4 (Cantidades utilizadas por cada lote en [kg])

19

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Referencias citadas en la descripción Esta lista de referencias citada por el aspirante es solamente para conveniencia del lector. No forma parte del documento de la patente Europea. Aún cuando se ha tenido gran cuidado en recopilar las referencias, los errores u omisiones no se pueden excluir y la EPO desconoce toda responsabilidad a este respecto. Documentos de patentes citadas en la descripción

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Claims

```
\global\parskip0.950000\baselineskip
```
1. El uso de una combinación de

(a) al menos un inhibidor del receptor abl-, PDGF-R-(receptor del factor de crecimiento derivado de las plaquetas) y/o receptor de kit de la tirosina quinasa y

(b) al menos un compuesto orgánico capaz de unirse a la glicoproteína ácida-\alpha_{1},

en donde cualquier componente (a) y/o (b) también puede estar presente en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable, si al menos un grupo que forma una sal está presente, para producir una preparación farmacéutica para utilizar como composiciones contra una enfermedad proliferativa que se puede tratar mediante la administración de un inhibidor del receptor abl-, PDGF-R- y/o receptor de kit de la tirosina quinasa, el cual o, durante el tratamiento con 4-(4-metilpiperazin-1-ilmetil)-N-[4-metil-3-(4-piridin-3-il)pirimidin-2-ilamino)fenil]benzamida, se convierte o llega a ser completa o parcialmente resistente a dicho tratamiento.
```
\vskip1.000000\baselineskip
```
2. Una preparación de combinación que comprende (a) al menos un inhibidor del receptor abl-, PDGF-R- (receptor del factor de crecimiento derivado de las plaquetas) y/o receptor de kit de la tirosina quinasa y (b) al menos un compuesto orgánico capaz de unirse a la glicoproteína ácida-\alpha_{1} (AGP); o sales farmacéuticamente aceptables de cualquier componente (a), (b) o (a) y (b) si al menos un grupo que forma una sal está presente, y un portador farmacéuticamente aceptable, en donde el inhibidor del Receptor abl-, PDGF y/o receptor de kit de la tirosina quinasa (a) se selecciona de

(i) 1-(4-cloro-anilino)-4-(4-piridil-metil)-ftalazina

y

(ii) un derivado de la N-fenil-2-pirimidina-amina de fórmula I

20

en donde

R_{1} es pirazinil, 1-metil-1H-pirrolil, fenil sustituido por un alquil amino- o amino-inferior en donde el grupo amino en cada caso es libre, alquilado o acilado, 1 H-indolil o 1 H-imidazolil unido a un átomo de carbono de anillo de cinco miembros, o piridil sustituido o no sustituido por un alquilo inferior unido a un átomo de carbono de anillo y no sustituido o sustituido en el átomo de nitrógeno por un oxígeno,

R_{2} y R_{3} son cada uno independientemente del otro hidrógeno o alquilo inferior, uno o dos de los radicales R_{4}, R_{5}, R_{6}, R_{7} y R_{8} son cada uno nitro, alcoxi inferior sustituido por un flúor o un radical de fórmula II

(II),-N(R_{9})-C(=X)-(Y)_{n}-R_{10}

en donde

R_{9} es un hidrógeno o alquilo inferior,

X es oxo, tio, imino, N-alquilo inferior-imino, hidroximino o O-alquilo inferior-hidroximino,

Y es un oxígeno o el grupo NH,

n es 0 o 1 y

R_{10} es un radical alifático que tiene al menos 5 átomos de carbono, o un radical aromático, aromático-alifático, cicloalifático, cicloalifático-alifático, heterociclico o alifático-heterociclico, y los radicales restantes R_{4}, R_{5}, R_{6}, R_{7} y R_{8} son cada uno independientemente del otro hidrógeno, alquilo inferior es decir no sustituido o sustituido por un amino libre o alquilado, piperazinil, piperidinil, pirrolidinil o por un morfolinil, o alcanoil inferior; trifluorometil, hidroxi libre, eterificado o esterificado, amino libre, alquilado o acilado o carboxi libre o esterificado, o
```
\global\parskip1.000000\baselineskip
```
una sal de tales compuestos que tiene al menos un grupo que forma una sal;

y el compuesto orgánico capaz de unirse a la glicoproteína ácida-\alpha_{1} (AGP) (b) se selecciona de:

Nicergolina, Prazosina, Alfentanil, Ketamina, Etidocaina, Fentanil, Meperidina, Metadona, Fenilbutazona, Bupivacaina, Etidocaina, Fenciclidina, Lidocaina, Fenciclidina, Aprindina, Disopiramida, Quinidina, Verapamilo, Eritromicina, Acenocoumarol, Dipiridamol, Ticlopidina, Warfarina, Fenitoina, Carbamazepina, Naproxeno, Alprenolol, Metoprolol, Oxprenolol, Pindolol, Propranolol, Timolol, Progesterona, Cortexona, Testosterona, Estradiol, Prednisolona, Metocurina, d-Tubocurarina, Amitriptilina, Clorpromazina, Ciclazindol, Desmetilimipramina, Diazepam, Doxepina, Flurazepam, Flufenazina, Haloperidol, Imipramina, Loxapina, Mianserin, Nortriptilina, Norzimelidina, Perazina, Perfenazina, Fenobarbital, derivados de la Fenotiazina, Promazina, Acepromazina, Protipendil, Tioridazina, Tiotixeno, Triazolam, Trifluoperazina, Zimelidina, Vitamina B_{12}, ácido fólico 1,8-Anilino-naftaleno sulfonato, Aminopirina, Amoxapina, Bupropion, Maprotilina, Nomifensina, Trazodona, Ritodrina, Doxazosina, Trimazosina, Binedalina, Amsacrina, Apazona, Ciclazindol, Indometacina, Probenecid, Ácido Retinoico, Sulfinpirazona, Tolmetina, Benoxaprofeno, Heparina, Sufentanil, Lofentanil, Metoclopramida, Nicardipina, Pirmenol, mifepristona, Aprindil, Auramina O, Bepridil, Desipramina, Desmetilclomipramina, Moxaprindina, Quinina, Lorcainida, Protipendil, Protriptilina, Trihexifenidil, Biperideno, Metacualona, Difenhidramina, Glutetimida, Clordiazepoxido, L-Triptofano, Mepivacaina, Levometadona, Opipramol, Trifluopromazina, Trimipramina, tris-butoxietil fosfato, estaurosporina, N-benzoil-estaurosporina y 7-hidroxi estaurosporina; en donde cualquier componente (a) y/o (b) también puede estar presente en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable, si al menos un grupo que forma una sal está presente.
3. Una preparación de combinación de acuerdo con la reivindicación 2, en donde (a) al menos un inhibidor de receptor abl, PDGF y/o receptor Kit de la tirosina quinasa seleccionado a partir del grupo que consiste de 1-(4-cloro-anilino)-4-(4-piridil-metil)-ftalazina y 4-(4-metilpiperazin-1-ilmetil)-N-[4-metil-3-(4-piridin-3-il)pirimidin-2-ilamino)fenil]benzamida; o una sal farmacéuticamente aceptable de uno o más de estos compuestos; y

(b) al menos un compuesto capaz de unirse a la glicoproteína ácida-\alpha_{1} seleccionado a partir del grupo que consiste de un antibiótico, estaurosporina, N-benzoil-estaurosporina y 7-hidroxi-estaurosporina, o una sal farmacéuticamente aceptable de esta, se combinan.
4. Una preparación de combinación de acuerdo con la reivindicación 2, en donde (a) el inhibidor de receptor abl, PDGFy/o receptor de kit de la tirosina quinasa es la 4-(4-metilpiperazin-1-ilmetil)-N-[4-metil-3-(4-piridin-3-il)pirimidin-2-ilamino)fenil]benzamida, o una sal farmacéuticamente aceptable de esta, y (b) el compuesto capaz de unirse a la glicoproteína ácida-\alpha_{1} es la Eritromicina, o una sal farmacéuticamente aceptable de esta.
5. Un producto que comprende

(a) al menos un inhibidor del receptor abl-, PDGF-R- (receptor del factor de crecimiento derivado de las plaquetas) y/o receptor de kit de la tirosina quinasa y

(b) al menos un compuesto orgánico capaz de unirse a la glicoproteína ácida-\alpha_{1},

en donde cualquier componente (a) y/o (b) también puede estar presente en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable, si al menos un grupo que forma una sal está presente, en la presencia o ausencia de uno o más materiales portadores farmacéuticamente aceptables, como una preparación de combinación para uso simultáneo o cronológicamente escalonado dentro de un periodo de tiempo el cual es suficientemente pequeño para los compuestos activos tanto del componente (a) y del componente (b) para mejorar la actividad antiproliferativa del compuesto (a) contra células proliferantes, especialmente en un paciente, para tratar una enfermedad proliferativa que responde a dicho compuesto, en donde el inhibidor del receptor abl, PDGF y/o receptor de kit de la tirosina quinasa se selecciona del grupo que consiste de

(i) 1-(4-cloro-anilino)-4-(4-piridil-metil)-ftalaxina y

(ii) un derivado de la N-fenil-2-pirimidina-amina de fórmula I

21

en donde

R_{1} es pirazinil, 1-metil-1H-pirrolil, fenil sustituido por un alquil amino- o amino-inferior en donde el grupo amino en cada caso es libre, alquilado o acilado, 1H-indolil o 1 H-imidazolil unido a un átomo de carbono de anillo de cinco miembros, o piridil sustituido o no sustituido por un alquilo inferior unido a un átomo de carbono de anillo y no sustituido o sustituido en el átomo de nitrógeno por un oxígeno,

R_{2} y R_{3} son cada uno independientemente del otro hidrógeno o alquilo inferior,

uno o dos de los radicales R_{4}, F_{5}, R_{6}, R_{7} y R_{8} son cada uno nitro, alcoxi inferior sustituido por un flúor o un radical de fórmula II

(II),-N(R_{9})-C(=X)-(Y)_{n}-F_{10}

en donde

R_{9} es un hidrógeno o alquilo inferior,

X es oxo, tio, imino, N-alquilo inferior-imino, hidroximino o O-alquilo inferior-hidroximino,

Y es un oxígeno o el grupo NH,

n es 0 o 1 y

R_{10} es un radical alifático que tiene al menos 5 átomos de carbono, o un radical aromático, aromático-alifático, cicloalifático, cicloalifático-alifático, heterociclico o heterociclico-alifático, y los radicales restantes R_{4}, R_{5}, R_{6}, R_{7} y R_{8} son cada uno independientemente del otro hidrógeno, alquilo inferior es decir no sustituido o sustituido por un amino libre o alquilado, piperazinil, piperidinil, pirrolidinil o por un morfolinil, o alcanoil inferior, trifluorometil, hidroxi libre, eterificado o esterificado, amino libre, alquilado o acilado o carboxi libre o esterificado, o

una sal de tales compuestos que tiene al menos un grupo que forma una sal;

y el compuesto orgánico capaz de unirse a la glicoproteína ácida-\alpha_{1} (AGP) (b) se selecciona de.

Nicergolina, Prazosina, Alfentanil, Ketamina, Etidocaina, Fentanil, Meperidina, Metadona, Fenilbutazona, Bupivacaina, Etidocaina, Fenciclidina, Lidocaina, Fenciclidina, Aprindina, Disopiramida, Quinidina, Verapamilo, Eritromicina, Acenocoumarol, Dipiridamol, Ticlopidina, Warfarina, Fenitoina, Carbamazepina, Naproxeno, Alprenolol, Metoprolol, Oxpronolol, Pindolol, Propranolol, Timolol, Progesterona, Cortexona, Testosterona, Estradiol, Prednisolona, Metocurina, d-Tubocurarina, Amitriptilina, Clorpromazina, Ciclazindol, Desmetilimipramina, Diazepam, Doxepina, Flurazepam, Flufenazina, Haloperidol, Imipramina, Loxapina, Mianserin, Nortriptilina, Norzimelidina, Perazina, Perfenazina, Fenobarbital, derivados de la Fenotiazina, Promazina, Acepromazina, Protipendil, Tioridazina, Tiotixeno, Triazolam, Trifluoperazina, Zimelidina, Vitamina B_{12}, ácido fólico, 1,8-Anilino-naftaleno sulfonato, Aminopirina, Amoxapina, Bupropion, Maprotilina Nomifensina, Trazodona, Ritodrina, Doxazosina, Trimazosina, Binedalina, Amsacrina, Apazona, Ciclazindol, Indometacina, Probenecid, Ácido Retinoico, Sulfinpirazona, Tolmetina, Benoxaprofeno, Heparina, Sufentanil. Lofentanil, Metoclopramida. Nicardipina, Pirmenol, mifepristona, Aprindil, Auramina O, Bepridil, Desipramina, Desmetilclomipramina Moxaprindina, Quinina, Lorcainida, Protipendil, Protriptilina, Trihexifenidil, Biperideno, Metacualona, Difenhidramina, Glutetimida, Clordiazepoxido, L-Triptofano, Mepivacaina, Levometadona, Opipramol, Trifluopromazina, Trimipramina, tris-butoxietil fosfato, estaurosporina, N-benzoil-estaurosporina y 7-hidroxi estaurosporina;

en donde cualquier componente (a) y/o (b) también puede estar presente en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable, si al menos un grupo que forma una sal está presente.
6. El producto de acuerdo con la reivindicación 5, en donde (a) el inhibidor de receptor abl, PDGF y/o receptor de kit de la tirosina quinasa se selecciona de la 1-(4-cloro-anilino)-4-(4-piridil-metil)-ftalazina y 4-(4-metilpiperazin-1-ilmetil)-N-[4-metil-3-(4-piridin-3-il)pirimidin-2-ilamino)fenil]benzamida; o una sal farmacéuticamente aceptable de uno o más de estos compuestos; y

(b) el compuesto capaz de unirse a la glicoproteína ácida-\alpha_{1} se selecciona de un antibiótico, estaurosporina, N-benzoil-estaurosporina y 7-hidroxi-estaurosporina, o una sal farmacéuticamente aceptable de uno o más de estos compuestos.
```
\vskip1.000000\baselineskip
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7. El producto de acuerdo con la reivindicación 5, en donde (a) el inhibidor del receptor abl, PDGF y/o del receptor de kit de la tirosina quinasa es la 4-(4-metilpiperazin-1-ilmetil)-N-[4-metil-3-(4-piridin-3-il)pirimidin-2-ilamino)fenil]benzamida, o una sal farmacéuticamente aceptable de esta, y (b) el compuesto capaz de unirse a la glicoproteína ácida-\alpha_{1} es la Eritromicina, o una sal farmacéuticamente aceptable de esta.
8. Una preparación farmacéutica que comprende una cantidad, el cual es en conjunto efectiva para tratar una enfermedad proliferativa que se puede tratar mediante la administración de un de inhibidor del receptor abl-, PDGF-R-(receptor del factor de crecimiento derivado de las plaquetas) y/o del receptor de kit de la tirosina quinasa, de una combinación de acuerdo con la reivindicación 2, en donde cualquier componente (a) y/o (b) también puede estar presente en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable, si al menos un grupo que forma una sal está presente, con uno o más materiales portadores farmacéuticamente aceptables.