BR112020005039A2 - combinação de um inibidor de btk e um inibidor de cdk9 para tratar câncer - Google Patents

combinação de um inibidor de btk e um inibidor de cdk9 para tratar câncer Download PDF

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BR112020005039A2
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inhibitor
acalabrutinib
azd4573
cdk9
btk inhibitor
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Scott BOIKO
Justin CIDADO
Lisa DREW
Theresa Proia
Maryann San Martin
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Astrazeneca Ab
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Abstract

A presente invenção refere-se a uma combinação de um inibidor de BTK e um inibidor de CDK9 para uso no tratamento de câncer em um sujeito. O inibidor de BTK pode ser acalabrutinibe, ibrutinibe ou ONO/GS-4059; e o inibidor de CDK9 pode ser AZD4573, BAY-1251152, BAY-1143572, CYC065, alvocidibe, AT7519, voruciclibe, roniciclibe ou dinaciclibe.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMBINAÇÃO DE UM INIBIDOR DE BTK E UM INIBIDOR DE CDK9 PARA TRATAR CÂNCER".
ANTECEDENTES
[0001] As proteínas quinases dependentes de ciclina (CDKs) representam uma família de serina/treonina proteínas quinases que se tornam ativas após ligação a um parceiro regulador de ciclina. Os complexos CDK/ciclina foram inicialmente identificados como reguladores da progressão do ciclo celular. Os complexos CDK/ciclina também foram implicados na transcrição e processamento de RNAm. CDK9/PTEFb (fator positivo b de alongamento de transcrição, sigla do inglês "positive transcription elongation factor b") fosforila o domínio carboxila-terminal (CTD, do inglês "carboxyl-terminal domain") da subunidade grande da RNA polimerase II (RNAP II, do inglês "RNA polymerase II"), predominantemente em Ser-2, regulando o alongamento da transcrição. A inibição de CDK9 e a repressão da transcrição resultam na rápida depleção de transcritos de RNAm de vida curta e de proteínas associadas, incluindo Mcl1 e c-myc, levando à indução de apoptose em células tumorais que são hiperdependentes dessas proteínas de sobrevivência.
[0002] A tirosina quinase de Bruton (BTK), um membro da família TEC de quinases, é um componente importante na via de sinalização do receptor de células B (BCR), onde fica entre o BCR e os sinais de sobrevivência a jusante. A BTK é expressa em células da linhagem hematopoiética, exceto nas células T, e sua expressão está aumentada em células de leucemia linfocítica crônica (LLC) em relação às células B normais. A BTK também é essencial para a proliferação e sobrevivência de algumas malignidades de células B. Em particular, a redução da expressão de BTK induz a morte de células tumorais em células de LLC primárias e linhagens celulares de linfoma que são dependentes da sinalização de BCR. Além disso, a ablação genética de BTK inibe a progressão da doença em modelos de LLC em camundongos, indicando sua importância contínua para malignidades de células B.
SUMÁRIO
[0003] A presente invenção refere-se a tratamentos de combinação para uso no tratamento de certas doenças, tais como o câncer.
[0004] Em um aspecto, uma combinação de um inibidor de BTK e um inibidor de CDK9 para uso no tratamento de câncer em um sujeito. O inibidor de BTK pode ser administrado ao sujeito antes que o inibidor de CDK9 seja administrado ao sujeito. O inibidor de BTK pode ser acalabrutinibe (também chamado de ACP-196), ibrutinibe ou ONO/GS-
4059. O inibidor de BTK pode ser acalabrutinibe. O inibidor de CDK9 pode ser AZD4573 ou dinaciclibe. O inibidor de CDK9 pode ser AZD4573.
[0005] O câncer pode ser selecionado a partir de linfoma difuso de grandes células B, linfoma de células do manto, leucemia linfocítica crônica, leucemia linfocítica crônica de pequenas células, macroglobulinemia de Waldentröm, linfoma da zona marginal, doença crônica do enxerto contra hospedeiro, linfoma folicular e leucemia linfoblástica aguda.
[0006] Em outro aspecto, uma combinação de acalabrutinibe e AZD4573 pode ser usada no tratamento de câncer em um sujeito, em que o acalabrutinibe deve ser administrado ao sujeito antes que o AZD4573 seja administrado ao sujeito e em que o câncer é selecionado a partir de linfoma difuso de grandes células B, linfoma de células do manto, leucemia linfocítica crônica, leucemia linfocítica crônica de pequenas células, macroglobulinemia de Waldentröm, linfoma da zona marginal, doença crônica do enxerto contra hospedeiro, linfoma folicular e leucemia linfoblástica aguda.
[0007] Em outro aspecto, um método de tratamento de câncer em um sujeito pode incluir: administrar uma quantidade eficaz de um inibidor de BTK ao sujeito; e administrar uma quantidade eficaz de um inibidor de CDK9 ao sujeito.
[0008] O inibidor de BTK pode ser administrado ao sujeito antes que o inibidor de CDK9 seja administrado ao sujeito. O inibidor de CDK9 pode ser um inibidor seletivo de CDK9. O inibidor de BTK pode ser acalabrutinibe, ibrutinibe ou ONO/GS-4059. O inibidor de BTK pode ser acalabrutinibe. O inibidor de CDK9 pode ser AZD4573 ou dinaciclibe. O inibidor de CDK9 pode ser AZD4573. O câncer pode ser selecionado a partir de linfoma difuso de grandes células B, linfoma de células do manto, leucemia linfocítica crônica, leucemia linfocítica crônica de pequenas células, macroglobulinemia de Waldentröm, linfoma da zona marginal, doença crônica do enxerto contra hospedeiro, linfoma folicular e leucemia linfoblástica aguda.
[0009] Em outro aspecto, um método de tratamento de câncer em um sujeito pode incluir: administrar uma quantidade eficaz de acalabrutinibe ao sujeito; e administrar uma quantidade eficaz de AZD4573 ao sujeito; em que o acalabrutinibe é administrado ao sujeito antes que o AZD4573 seja administrado ao sujeito; e em que o câncer é selecionado a partir de linfoma difuso de grandes células B, linfoma de células do manto, leucemia linfocítica crônica, leucemia linfocítica crônica de pequenas células, macroglobulinemia de Waldentröm, linfoma da zona marginal, doença crônica do enxerto contra hospedeiro, linfoma folicular e leucemia linfoblástica aguda.
[0010] Em outro aspecto, um estojo pode incluir: uma primeira composição farmacêutica compreendendo um inibidor de BTK e um veículo farmaceuticamente aceitável; e uma segunda composição farmacêutica compreendendo um inibidor de CDK9 e um veículo farmaceuticamente aceitável. O inibidor de BTK pode ser acalabrutinibe,
ibrutinibe ou ONO/GS-4059. O inibidor de CDK9 pode ser AZD4573 ou dinaciclibe. O inibidor de BTK pode ser acalabrutinibe. O inibidor de CDK9 pode ser AZD4573. O inibidor de BTK pode ser acalabrutinibe e o inibidor de CDK9 pode ser AZD4573.
[0011] Outras características, objetos e vantagens da invenção se tornarão evidentes a partir da descrição e desenhos, e a partir das reivindicações.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[0012] A Figura 1 mostra o efeito do tratamento com acalabrutinibe em três linhagens celulares de LDGCB diferentes.
[0013] A Figura 2 ilustra o efeito de uma combinação de AZD4573 com pré-tratamento com acalabrutinibe em linhagens celulares sensíveis a inibidor de BTK (OCILy10 e TMD8) e uma linhagem celular insensível a BTKi (Karpas422).
[0014] A Figura 3 ilustra o efeito do acalabrutinibe, AZD4573, uma combinação de AZD4573 e acalabrutinibe dosados simultaneamente, e uma combinação de AZD4573 e acalabrutinibe dosados sequencialmente, na apoptose em três linhagens celulares de LDGCB diferentes.
[0015] As Figuras 4a, 4b e 4c ilustram os efeitos de um tratamento de combinação de acalabrutinibe e AZD4573 em modelos in vivo de LDGCB.
DESCRIÇÃO DETALHADA
[0016] São divulgados no presente documento tratamentos de combinação úteis para o tratamento de doenças proliferativas, tais como o câncer. Em particular, os tratamentos de combinação são úteis no tratamento de doenças proliferativas, tais como o câncer, incluindo, mas sem limitação, linfoma difuso de grandes células B (DLBCL), linfoma de células do manto (MCL), leucemia linfocítica crônica (CLL), leucemia linfocítica crônica de pequenas células (SLL), macroglobulinemia de
Waldentröm, linfoma da zona marginal, doença crônica do enxerto contra hospedeiro, linfoma folicular e leucemia linfoblástica aguda (ALL) e outros cânceres sensíveis à BTK.
[0017] Um tratamento de combinação usando mais de um agente pode fornecer eficácia aprimorada em relação ao tratamento com qualquer um dos agentes sozinho. (Embora esta patente discuta frequentemente combinações de dois agentes, é reconhecido que combinações com três ou mais agentes são possíveis.)
[0018] O termo "combinação" pode se referir à administração simultânea, separada ou sequencial de dois ou mais agentes. Em um aspecto, "combinação" pode se referir à administração simultânea (por exemplo, administração de ambos os agentes em uma única forma de dosagem). Em outro aspecto, "combinação" refere-se à administração separada (por exemplo, administração de ambos os agentes em formas de dosagem separadas, mas substancialmente ao mesmo tempo). Em um aspecto adicional da invenção, "combinação" refere-se à administração sequencial (por exemplo, onde um primeiro agente é administrado, seguido por um atraso, seguido pela administração de um segundo ou outro agente). Onde a administração é sequencial ou separada, o atraso na administração do componente posterior não deve ser muito longo nem muito curto, para não perder o benefício da combinação.
[0019] Como usado no presente documento, o termo "um inibidor de CDK9" refere-se a um composto que pode inibir a CDK9 e, opcionalmente, pode inibir uma ou mais outras CDKs. Um composto que inibe uma ou mais outras CDKs além da CDK9 é um inibidor não seletivo de CDK9, mesmo que o alvo primário do composto não seja CDK9. Por exemplo, o dinaciclibe inibe várias CDKs, incluindo a CDK9. Assim, o dinaciclibe é um inibidor não seletivo de CDK9, tal como o termo é usado no presente documento. Um inibidor seletivo de CDK9 é um composto que inibe a CDK9 e tem pouca ou nenhuma atividade inibidora em relação a outras CDKs. Assim, "um inibidor de CDK9", como usado no presente documento, inclui inibidores tanto não seletivos como seletivos de CDK9.
[0020] Os termos "tratar", "tratando" e "tratamento" referem-se a pelo menos parcialmente aliviar, inibir, prevenir e/ou melhorar uma patologia, distúrbio ou doença, tal como o câncer. Os termos "tratamento de câncer" ou "tratamento de células cancerosas" incluem tratamentos tanto in vitro como in vivo, incluindo em animais de sangue quente, tais como seres humanos. A eficácia do tratamento de células cancerosas pode ser avaliada de várias maneiras, incluindo, mas não se limitando a: inibição da proliferação de células cancerosas (incluindo a reversão do crescimento do câncer); promoção da morte de células cancerosas (por exemplo, promoção de apoptose ou outro mecanismo de morte celular); melhora dos sintomas; duração da resposta ao tratamento; atraso na progressão da doença; e prolongamento da sobrevivência. Os tratamentos também podem ser avaliados em relação à natureza e extensão dos efeitos colaterais associados ao tratamento. Além disso, a eficácia pode ser avaliada em relação a biomarcadores, tais como níveis de expressão ou fosforilação de proteínas conhecidas por estarem associadas a fenômenos biológicos particulares. Outras avaliações da eficácia são conhecidas pelos especialistas na técnica.
[0021] Uma combinação de um inibidor de BTK e um inibidor de CDK9 pode ser mais eficaz do que qualquer um sozinho no tratamento de células cancerosas (seja in vitro ou in vivo). Em particular, o tratamento de células cancerosas responsivas a BTK pode sensibilizar essas células para o tratamento com um inibidor de CDK9. A este respeito, a eficácia de um tratamento de combinação pode ser avaliada de uma ou mais das maneiras descritas acima. Por conseguinte, em algumas modalidades, uma combinação de um inibidor de BTK e um inibidor de CDK9, quando usada no tratamento de células cancerosas, pode ser mais eficaz do que qualquer agente sozinho. O tratamento de combinação pode ser mais eficaz em um ou mais de: promoção da morte de células cancerosas; inibição do crescimento do câncer (por exemplo, inibição de um aumento do volume do tumor); e duração da resposta.
[0022] Os inibidores de BTK incluem, por exemplo, acalabrutinibe, ibrutinibe e ONO/GS-4059.
[0023] Acalabrutinibe, também conhecido como ACP-196 ou (S)-4- (8-amino-3-(1-but-2-inoilpirrolidin-2-il)imidazo[1,5-a]pirazin-1-il)-N- (piridin-2-il)benzamida, tem a fórmula:
[0024] Métodos de preparação de acalabrutinibe são descritos, por exemplo, no documento WO 2013/010868, que é incorporado por referência na sua totalidade.
[0025] Os inibidores de CDK9 incluem, por exemplo, AZD4573, BAY-1251152, BAY-1143572, CYC065, alvocidibe, AT7519, voruciclibe, roniciclibe e dinaciclibe. Os inibidores seletivos de CDK9 incluem AZD4573, BAY-1251152 e BAY-1143572. Os inibidores não seletivos de CDK9 incluem CYC065, alvocidibe, AT7519, voruciclibe, roniciclibe e dinaciclibe.
[0026] AZD4573, um inibidor seletivo de CDK9, também chamado de (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-cloro-4-(5,5-dimetil-5,6-di-hidro-4H-
pirrolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)ciclo-hexanocarboxamida, tem a fórmula:
[0027] Métodos de preparação de AZD4573 são descritos, por exemplo, no documento WO 2017/001354, que é incorporado por referência na sua totalidade.
[0028] Em algumas modalidades, a combinação pode incluir acalabrutinibe, ibrutinibe ou ONO/GS-4059. Em algumas modalidades, a combinação pode incluir AZD4573, BAY-1251152, BAY-1143572, CYC065, alvocidibe, AT7519, voruciclibe, roniciclibe e dinaciclibe. Em algumas modalidades, a combinação pode incluir acalabrutinibe. Em algumas modalidades, a combinação pode incluir AZD4573. Em algumas modalidades, a combinação pode incluir acalabrutinibe e AZD4573.
[0029] Em algumas modalidades, a administração sequencial do inibidor de BTK e inibidor de CDK9 pode ter maior eficácia do que a administração simultânea. Em algumas modalidades, o inibidor de BTK pode ser administrado antes que o inibidor de CDK9 seja administrado em um ciclo de dosagem.
[0030] Em algumas modalidades, o inibidor de BTK pode ser administrado pelo menos 2 horas, pelo menos 4 horas, pelo menos 6 horas, pelo menos 8 horas, pelo menos 12 horas, pelo menos 16 horas, pelo menos 24 horas ou pelo menos 48 horas antes que o inibidor de CDK9 seja administrado em um ciclo de dosagem.
[0031] Em algumas modalidades, o inibidor de BTK pode ser administrado no máximo 2 horas, no máximo 4 horas, no máximo 6 horas, no máximo 8 horas, no máximo 12 horas, no máximo 16 horas,
no máximo 24 horas ou no máximo 48 horas antes que o inibidor de CDK9 seja administrado em um ciclo de dosagem.
[0032] Em algumas modalidades, o inibidor de BTK pode ser administrado de 2 a 4 horas antes; de 4 a 6 horas antes; de 6 a 8 horas antes; de 8 a 12 horas antes; de 12 a 16 horas antes; de 16 a 24 horas antes; de 20 a 28 horas antes ou de 24 a 48 horas antes que o inibidor de CDK9 seja administrado em um ciclo de dosagem.
[0033] Em algumas modalidades, a administração do inibidor de BTK em um esquema de dosagem intermitente pode ter maior eficácia do que uma dosagem em um esquema de dosagem contínua. Em algumas modalidades, a administração do inibidor de CDK9 em um esquema de dosagem intermitente pode ter maior eficácia do que uma dosagem em um esquema de dosagem contínua. Em algumas modalidades, a administração tanto do inibidor de BTK como do inibidor de CDK9 em um esquema de dosagem intermitente pode ter maior eficácia do que uma dosagem em um esquema de dosagem contínua.
[0034] Um esquema de dosagem intermitente pode incluir interrupções temporárias da dosagem ("dosage holidays"). Para fins ilustrativos, em um ciclo de dosagem de sete dias, um agente dosado intermitentemente pode ser administrado nos dias um e dois, mas não nos dias três, quatro, cinco, seis ou sete. O ciclo de dosagem seria então repetido. Essa ilustração poderia ser chamada de um esquema 2 com/5 sem, em que o agente é fornecido por dois dias seguidos por uma interrupção temporária de cinco dias.
[0035] Um esquema de dosagem contínua, ao contrário, não inclui interrupções temporárias durante um ciclo de dosagem. Assim, para fins ilustrativos, em um ciclo de dosagem de sete dias, um agente dosado continuamente seria administrado nos dias um, dois, três, quatro, cinco, seis e sete. O ciclo de dosagem seria então repetido.
[0036] Em algumas modalidades, o ciclo de dosagem pode ser de
5 a 30 dias, de 7 a 24 dias, de 9 a 16 dias ou de 13 a 15 dias. Em algumas modalidades, o ciclo de dosagem pode ser de 5 dias, 7 dias, 10 dias, 12 dias, 14 dias, 21 dias ou 28 dias.
[0037] Em algumas modalidades, o inibidor de BTK pode ser dosado continuamente em um ciclo de dosagem.
[0038] Em algumas modalidades, o inibidor de CDK9 pode ser dosado intermitentemente, em um ciclo de dosagem.
[0039] Em algumas modalidades, o inibidor de BTK pode ser dosado continuamente e o inibidor de CDK9 pode ser dosado intermitentemente, em um ciclo de dosagem.
[0040] Em algumas modalidades, o inibidor de CDK9 pode ser administrado em 2 a 4 dias, e não administrado nos dias restantes, em um ciclo de dosagem de 6 a 16 dias.
[0041] Em algumas modalidades, o inibidor de CDK9 pode ser administrado em 2 a 3 dias consecutivos, e não administrado nos dias restantes, em um ciclo de dosagem de 13 a 15 dias.
[0042] Em algumas modalidades, o inibidor de CDK9 pode ser administrado em 2 dias consecutivos, e não administrado nos dias restantes, em um ciclo de dosagem de 14 dias.
[0043] Em algumas modalidades, o inibidor de BTK pode ser administrado todos os dias, e o inibidor de CDK9 administrado em apenas dois dias, e não administrado nos dias restantes, em um ciclo de dosagem.
[0044] Em algumas modalidades, o inibidor de BTK pode ser administrado todos os dias, e o inibidor de CDK9 administrado em apenas dois dias consecutivos, e não administrado nos dias restantes, em um ciclo de dosagem de 14 dias.
[0045] Em algumas modalidades, o acalabrutinibe pode ser dosado continuamente e o AZD4573 dosado intermitentemente, em um ciclo de dosagem.
[0046] Em algumas modalidades, o acalabrutinibe pode ser administrado todos os dias, e o AZD4573 administrado em apenas dois dias, e não administrado nos dias restantes, em um ciclo de dosagem.
[0047] Em algumas modalidades, o acalabrutinibe pode ser administrado todos os dias, e o AZD4573 administrado em apenas dois dias consecutivos, e não administrado nos dias restantes, em um ciclo de dosagem de 14 dias.
[0048] Em algumas modalidades, o inibidor de BTK pode ser dosado continuamente, o inibidor de CDK9 pode ser dosado intermitentemente, e o inibidor de BTK pode ser administrado antes que o inibidor de CDK9 seja administrado, em um ciclo de dosagem.
[0049] Em algumas modalidades, o inibidor de CDK9 pode ser administrado em 2 a 4 dias, e não administrado nos dias restantes, e o inibidor de BTK pode ser administrado antes que o inibidor de CDK9 seja administrado, em um ciclo de dosagem de 6 a 16 dias.
[0050] Em algumas modalidades, o inibidor de CDK9 pode ser administrado em 2 dias consecutivos, e não administrado nos dias restantes, e o inibidor de BTK pode ser administrado antes que o inibidor de CDK9 seja administrado, em um ciclo de dosagem de 14 dias.
[0051] Em algumas modalidades, o inibidor de BTK pode ser administrado todos os dias, e o inibidor de CDK9 pode ser administrado em apenas dois dias, e não administrado nos dias restantes, e o inibidor de BTK pode ser administrado antes que o inibidor de CDK9 seja administrado, em um ciclo de dosagem.
[0052] Em algumas modalidades, o inibidor de BTK pode ser administrado todos os dias, e o inibidor de CDK9 pode ser administrado em apenas dois dias consecutivos, e não administrado nos dias restantes, e o inibidor de BTK pode ser administrado antes que o inibidor de CDK9 seja administrado, em um ciclo de dosagem de 14 dias.
[0053] Em algumas modalidades, o acalabrutinibe pode ser dosado continuamente, e o AZD4573 pode ser dosado intermitentemente, e o acalabrutinibe pode ser administrado antes que o AZD4573 seja administrado, em um ciclo de dosagem.
[0054] Em algumas modalidades, 100 mg de acalabrutinibe podem ser administrados duas vezes a cada dia, e o AZD4573 pode ser dosado intermitentemente, e o acalabrutinibe pode ser administrado antes que o AZD4573 seja administrado, em um ciclo de dosagem.
[0055] Em algumas modalidades, o acalabrutinibe pode ser administrado todos os dias, e o AZD4573 pode ser administrado em apenas dois dias, e não administrado nos dias restantes, e o acalabrutinibe pode ser administrado antes que o AZD4573 seja administrado, em um ciclo de dosagem.
[0056] Em algumas modalidades, o acalabrutinibe pode ser administrado todos os dias, e o AZD4573 administrado em apenas dois dias consecutivos, e não administrado nos dias restantes, e o acalabrutinibe pode ser administrado antes que o AZD4573 seja administrado, em um ciclo de dosagem de 14 dias.
[0057] Em algumas modalidades, 100 mg de acalabrutinibe podem ser administrados duas vezes a cada dia, e o AZD4573 administrado em apenas dois dias consecutivos, e não administrado nos dias restantes, e o acalabrutinibe pode ser administrado antes que o AZD4573 seja administrado, em um ciclo de dosagem de 14 dias.
[0058] Em algumas modalidades, o inibidor de BTK pode ser dosado continuamente e o inibidor de CDK9 pode ser dosado intermitentemente, e o inibidor de BTK pode ser administrado de 2 a 4 horas antes; de 4 a 6 horas antes; de 6 a 8 horas antes; de 8 a 12 horas antes; de 12 a 16 horas antes; de 16 a 24 horas antes; de 20 a 28 horas antes ou de 24 a 48 horas antes que o inibidor de CDK9 seja administrado, em um ciclo de dosagem.
[0059] Em algumas modalidades, o inibidor de CDK9 pode ser administrado em 2 a 4 dias, e não administrado nos dias restantes, e o inibidor de BTK pode ser administrado de 2 a 4 horas antes; de 4 a 6 horas antes; de 6 a 8 horas antes; de 8 a 12 horas antes; de 12 a 16 horas antes; de 16 a 24 horas antes; de 20 a 28 horas antes ou de 24 a 48 horas antes que o inibidor de CDK9 seja administrado, em um ciclo de dosagem de 6 a 16 dias.
[0060] Em algumas modalidades, o inibidor de CDK9 pode ser administrado em 2 dias consecutivos, e não administrado nos dias restantes, e o inibidor de BTK pode ser administrado de 2 a 4 horas antes; de 4 a 6 horas antes; de 6 a 8 horas antes; de 8 a 12 horas antes; de 12 a 16 horas antes; de 16 a 24 horas antes; de 20 a 28 horas antes ou de 24 a 48 horas antes que o inibidor de CDK9 seja administrado, em um ciclo de dosagem de 14 dias.
[0061] Em algumas modalidades, o inibidor de BTK pode ser administrado todos os dias, e o inibidor de CDK9 pode ser administrado em apenas dois dias, e não administrado nos dias restantes, e o inibidor de BTK pode ser administrado de 2 a 4 horas antes; de 4 a 6 horas antes; de 6 a 8 horas antes; de 8 a 12 horas antes; de 12 a 16 horas antes; de 16 a 24 horas antes; de 20 a 28 horas antes ou de 24 a 48 horas antes que o inibidor de CDK9 seja administrado, em um ciclo de dosagem.
[0062] Em algumas modalidades, o inibidor de BTK pode ser administrado todos os dias, e o inibidor de CDK9 pode ser administrado em apenas dois dias consecutivos, e não administrado nos dias restantes, e o inibidor de BTK pode ser administrado de 2 a 4 horas antes; de 4 a 6 horas antes; de 6 a 8 horas antes; de 8 a 12 horas antes; de 12 a 16 horas antes; de 16 a 24 horas antes; de 20 a 28 horas antes ou de 24 a 48 horas antes que o inibidor de CDK9 seja administrado, em um ciclo de dosagem.
[0063] Em algumas modalidades, o acalabrutinibe pode ser dosado continuamente e o AZD4573 pode ser dosado intermitentemente, e o acalabrutinibe pode ser administrado de 2 a 4 horas antes; de 4 a 6 horas antes; de 6 a 8 horas antes; de 8 a 12 horas antes; de 12 a 16 horas antes; de 16 a 24 horas antes; de 20 a 28 horas antes ou de 24 a 48 horas antes que o inibidor de AZD4573 seja administrado, em um ciclo de dosagem.
[0064] Em algumas modalidades, 100 mg de acalabrutinibe podem ser administrados duas vezes a cada dia, e o AZD4573 pode ser dosado intermitentemente, e o acalabrutinibe pode ser administrado de 2 a 4 horas antes; de 4 a 6 horas antes; de 6 a 8 horas antes; de 8 a 12 horas antes; de 12 a 16 horas antes; de 16 a 24 horas antes; de 20 a 28 horas antes ou de 24 a 48 horas antes que o AZD4573 seja administrado, em um ciclo de dosagem.
[0065] Em algumas modalidades, o acalabrutinibe pode ser administrado todos os dias, e o AZD4573 pode ser administrado em apenas dois dias, e não administrado nos dias restantes, e o acalabrutinibe pode ser administrado de 2 a 4 horas antes; de 4 a 6 horas antes; de 6 a 8 horas antes; de 8 a 12 horas antes; de 12 a 16 horas antes; de 16 a 24 horas antes; de 20 a 28 horas antes ou de 24 a 48 horas antes que o inibidor de AZD4573 seja administrado, em um ciclo de dosagem.
[0066] Em algumas modalidades, o acalabrutinibe pode ser administrado todos os dias, e o AZD4573 pode ser administrado em apenas dois dias consecutivos, e não administrado nos dias restantes, e o acalabrutinibe pode ser administrado de 2 a 4 horas antes; de 4 a 6 horas antes; de 6 a 8 horas antes; de 8 a 12 horas antes; de 12 a 16 horas antes; de 16 a 24 horas antes; de 20 a 28 horas antes ou de 24 a 48 horas antes que o AZD4573 seja administrado, em um ciclo de dosagem de 14 dias.
[0067] Em algumas modalidades, 100 mg de acalabrutinibe podem ser administrados duas vezes a cada dia, e o AZD4573 pode ser administrado em apenas dois dias consecutivos, e não administrado nos dias restantes, e o acalabrutinibe pode ser administrado de 2 a 4 horas antes; de 4 a 6 horas antes; de 6 a 8 horas antes; de 8 a 12 horas antes; de 12 a 16 horas antes; de 16 a 24 horas antes; de 20 a 28 horas antes ou de 24 a 48 horas antes que o AZD4573 seja administrado, em um ciclo de dosagem de 14 dias.
[0068] Em algumas modalidades, um inibidor de BTK pode ser usado no tratamento de câncer em um sujeito, em que o tratamento pode incluir a administração separada, sequencial ou simultânea do inibidor de BTK e um inibidor de CDK9 ao sujeito.
[0069] Em algumas modalidades, o tratamento pode incluir a administração do inibidor de BTK ao sujeito antes da administração do inibidor de CDK9 ao sujeito.
[0070] Em algumas modalidades, o inibidor de BTK pode ser acalabrutinibe, ibrutinibe ou ONO/GS-4059. Em algumas modalidades, o inibidor de BTK pode ser acalabrutinibe.
[0071] Em algumas modalidades, o inibidor de CDK9 pode ser AZD4573, BAY-1251152, BAY-1143572, CYC065, alvocidibe, AT7519, voruciclibe, roniciclibe e dinaciclibe. Em algumas modalidades, o inibidor de CDK9 pode ser AZD4573.
[0072] Em algumas modalidades, o câncer pode ser selecionado a partir de linfoma difuso de grandes células B, linfoma de células do manto, leucemia linfocítica crônica, leucemia linfocítica crônica de pequenas células, macroglobulinemia de Waldentröm, linfoma da zona marginal, doença crônica do enxerto contra hospedeiro, linfoma folicular e leucemia linfoblástica aguda.
[0073] Em algumas modalidades, um inibidor de BTK para uso no tratamento de câncer em um sujeito, em que o tratamento pode incluir a administração separada, sequencial ou simultânea do inibidor de BTK e um inibidor de CDK9 ao sujeito; em que o inibidor de BTK é acalabrutinibe; o inibidor de CDK9 é AZD4573; e o câncer pode ser selecionado a partir de linfoma difuso de grandes células B, linfoma de células do manto, leucemia linfocítica crônica, leucemia linfocítica crônica de pequenas células, macroglobulinemia de Waldentröm, linfoma da zona marginal, doença crônica do enxerto contra hospedeiro, linfoma folicular e leucemia linfoblástica aguda.
[0074] Em algumas modalidades, um inibidor de CDK9 pode ser usado para uso no tratamento de câncer em um sujeito, em que o tratamento pode incluir a administração separada, sequencial ou simultânea do inibidor de CDK9 e um inibidor de BTK ao sujeito.
[0075] Em algumas modalidades, o tratamento pode incluir a administração do inibidor de BTK ao sujeito antes da administração do inibidor de CDK9 ao sujeito.
[0076] Em algumas modalidades, o inibidor de BTK pode ser acalabrutinibe, ibrutinibe ou ONO/GS-4059. Em algumas modalidades, o inibidor de BTK pode ser acalabrutinibe.
[0077] Em algumas modalidades, o inibidor de CDK9 pode ser AZD4573, BAY-1251152, BAY-1143572, CYC065, alvocidibe, AT7519, voruciclibe, roniciclibe e dinaciclibe. Em algumas modalidades, o inibidor de CDK9 pode ser AZD4573.
[0078] Em algumas modalidades, o câncer pode ser selecionado a partir de linfoma difuso de grandes células B, linfoma de células do manto, leucemia linfocítica crônica, leucemia linfocítica crônica de pequenas células, macroglobulinemia de Waldentröm, linfoma da zona marginal, doença crônica do enxerto contra hospedeiro, linfoma folicular e leucemia linfoblástica aguda.
[0079] Em algumas modalidades, um inibidor de CDK9 pode ser usado no tratamento de câncer em um sujeito, em que o tratamento pode incluir a administração separada, sequencial ou simultânea do inibidor de CDK9 e um inibidor de BTK ao sujeito; em que o inibidor de BTK é acalabrutinibe; o inibidor de CDK9 é AZD4573; e o câncer pode ser selecionado a partir de linfoma difuso de grandes células B, linfoma de células do manto, leucemia linfocítica crônica, leucemia linfocítica crônica de pequenas células, macroglobulinemia de Waldentröm, linfoma da zona marginal, doença crônica do enxerto contra hospedeiro, linfoma folicular e leucemia linfoblástica aguda.
EXEMPLOS Exemplo 1: O acalabrutinibe promove pré-condicionamento ("priming") de linhagens de células cancerosas sensíveis a inibidor de BTK para morte através de níveis proteicos aumentados de proteínas pró-apoptóticas BH3 apenas Método
[0080] Duas linhagens celulares de LDGCB de CBA (OCILy10 e TMD8) e uma linhagem celular de LDGCB de CBCG (Karpas422) foram tratadas com veículo (DMSO) ou uma diluição em série de 10 pontos e ½ log de acalabrutinibe por 72 horas com uma leitura de viabilidade CellTiter-Glo. A concentração na qual 50% do crescimento é inibido (IC50) foi calculada usando o GraphPad Prism ou o GeneData.
[0081] OCILy10, TMD8 e Karpas422 foram tratadas com veículo ou acalabrutinibe 100 nM por 2 a 72 horas. Os lisados proteicos foram colhidos em vários momentos nesse intervalo, a concentração proteica foi determinada usando o BCA Protein Assay Kit, e Western blots foram realizadas de acordo com o protocolo padrão para avaliar os efeitos nos níveis de proteínas da família Bcl2. Cada amostra foi normalizada com vinculina como controle de carregamento e, em seguida, os níveis proteicos das amostras tratadas com acalabrutinibe foram calculados em relação aos das amostras tratadas com veículo. Discussão
[0082] As linhagens celulares de LDGCB exibem uma sensibilidade diferencial ao inibidor de BTK acalabrutinibe. Uma resposta à dose de acalabrutinibe em três linhagens celulares de LDGCB mostrou que duas linhagens celulares de LDGCB de CBA, OCILy10 e TMD8, eram sensíveis à inibição de BTK, enquanto a linhagem celular de LDGCB de CBCG, Karpas422, não era. Cada uma das três linhagens celulares foi então tratada com acalabrutinibe 100 nM por 24 horas, e os níveis de proteína BH3 apenas foram avaliados. As proteínas pró-apoptóticas BH3 apenas se ligam para inibir a função anti-apoptótica das principais proteínas da família Bcl-2. Os resultados são ilustrados na Figura 1. Os níveis de proteínas pró-apoptóticas BH3 apenas Bim e Bmf foram aumentados nas duas linhagens celulares de LDGCB sensíveis ao acalabrutinibe em relação à linhagem celular insensível, pré- condicionando ("priming") as células para apoptose. Exemplo 2: A combinação de acalabrutinibe e AZD4573 leva à indução rápida e aumentada de morte celular Método
[0083] Duas linhagens celulares de LDGCB de CBA sensíveis a inibidor de BTK (OCILy10 e TMD8) e uma linhagem celular de LDGCB de CBCG insensível (Karpas422) foram tratadas por um período de 8 horas com AZD4573 100 nM sozinho ou após um pré-tratamento de 24 horas com acalabrutinibe 100 nM (uma vez que a exposição ao acalabrutinibe por 24 horas foi suficiente para induzir os níveis máximos de proteína BH3 apenas). As células foram colhidas para lisados proteicos em momentos variados (0, 0,5, 1, 2, 4 e 8 horas) após o tratamento com AZD4573, normalizadas para a concentração proteica usando o BCA Protein Assay Kit e corridas para Western blots de acordo com protocolos padrão. Para garantir que o engajamento alvo esperado fosse alcançado, os blots foram sondados para os biomarcadores proximal e distal para CDK9 (pSer2-RNAPolII e Mcl-1, respectivamente) e o biomarcador para BTK ativada (pBTK). Para estimar o tempo até à indução da apoptose, a caspase-3 clivada também foi avaliada. Um controle de carregamento (vinculina) também foi utilizado para normalização. Discussão
[0084] Como o acalabrutinibe aumenta os níveis proteicos de Bim e Bmf em linhagens celulares sensíveis a inibidor de BTK, pré- condicionando ("priming") as células para apoptose, foi previsto que sua combinação com AZD4573, que rapidamente leva a depleção dos níveis de Mcl1, incline o equilíbrio de proteínas da família Bcl2 pró e anti- apoptóticas para morte celular. Portanto, duas linhagens celulares sensíveis a inibidor de BTK e uma linhagem celular insensível foram tratadas com AZD4573 sozinho ou após pré-tratamento com acalabrutinibe.
[0085] Nas duas linhagens celulares sensíveis a inibidor de BTK (OCILy10 e TMD8), a combinação resultou na indução robusta de caspase clivada em até 4 horas, enquanto o AZD4573 sozinho resultou em ativação leve da caspase em até 8 horas. Na linhagem celular insensível a inibidor de BTK (Karpas422), onde o acalabrutinibe não aumentou os níveis de proteína BH3 apenas, não houve diferença na ativação de caspase entre as amostras de agente único ou da combinação. Ver a Figura 2. Exemplo 3: O pré-tratamento com acalabrutinibe aumenta o benefício da combinação com AZD4573 Método
[0086] Duas linhagens celulares de LDGCB de CBA sensíveis a inibidor de BTK (OCILy10 e TMD8) e uma linhagem celular de LDGCB de CBCG insensível (Karpas422) foram tratadas com veículo (DMSO), acalabrutinibe 100 nM ou AZD4573 100 nM por períodos de tempo variados, como agente único ou em combinação. Como a exposição de linhagens celulares sensíveis a BTKi ao acalabrutinibe por 24 horas foi suficiente para induzir níveis máximos de proteína BH3 apenas em relação às células tratadas com veículo (Figura 1), o pré-tratamento de 24 horas do acalabrutinibe foi escolhido para uma das sequências de combinação. Portanto, as células foram tratadas com: 32 horas de acalabrutinibe sozinho; 8 horas de AZD4573 sozinho; 8 horas de AZD4573 e acalabrutinibe dosados simultaneamente; ou 32 horas de acalabrutinibe com AZD4573 adicionado sequencialmente nas últimas 8 dessas 32 horas (em outras palavras, 24 horas de pré-tratamento com acalabrutinibe).
[0087] A porcentagem de células apoptóticas ou mortas foi determinada por coloração das amostras tanto com éster etílico de tetrametilrodamina (TMRE) como com 4',6-diamidino-2-fenilindol (DAPI) e, em seguida, submetendo-as a citometria de fluxo usando um BD LSR Fortessa. O TMRE é um corante com carga positiva que se acumula nas mitocôndrias ativas, e as células que estão sofrendo apoptose apresentam permeabilização da membrana externa mitocondrial (MOMP, do inglês "mitochondrial outer membrane permeabilization"), que depois falha em reter o TMRE. Assim, uma diminuição da coloração de TMRE é indicativa de apoptose. DAPI é um corante fluorescente de ligação ao DNA que é impermeável à membrana em células viáveis, de modo que as células que estão morrendo exibirão maior coloração de DAPI. Após tratamentos apropriados, as células foram coradas diretamente com TMRE 200 nM, incubadas por 30 minutos a 37 °C, ressuspensas em tampão de fluxo contendo DAPI e submetidas a citometria de fluxo. Flowjo foi usado para estabelecer portas apropriadas de acordo com a viabilidade (DAPI) e MOMP (TMRE), e células viáveis foram definidas como aquelas com baixa coloração de DAPI e alta coloração de TMRE. Discussão
[0088] O tratamento com acalabrutinibe de células sensíveis a inibidor de BTK aumentou os níveis de proteínas BH3 apenas ao longo do tempo, com os níveis máximos atingidos em até 24 horas após a dosagem (Figura 1). No entanto, não ficou claro qual duração, se houver, do pré-tratamento com acalabrutinibe aumentaria o benefício da combinação com AZD4573. Neste exemplo, o acalabrutinibe foi dosado simultaneamente ou sequencialmente com AZD4573 e avaliado quanto a células apoptóticas/mortas após as últimas 8 horas do tratamento com AZD4573.
[0089] O tratamento das células OCI-LY-10 com 32 horas de acalabrutinibe sozinho ou 8 horas de AZD4573 sozinho resultou em ~ 20% e ~ 40% de morte celular, respectivamente (Figura 3). Quando os inibidores foram dosados simultaneamente (marcada codosagem na Figura 3) por 8 horas, houve um aumento mínimo das células apoptóticas (~ 50%). Em contraste, quando tratadas sequencialmente com 32 horas de acalabrutinibe e AZD4573 durante as últimas 8 horas, quase 90% das células eram apoptóticas. Portanto, o pré-tratamento com acalabrutinibe aumentou significativamente o benefício da combinação com AZD4573 em relação ao tratamento simultâneo. Resultados similares para células TMD8 foram observados. Nas células Karpas-422, o acalabrutinibe sozinho ou em combinação teve um efeito mínimo, como esperado para uma linhagem celular insensível a BTK. Exemplo 4: Combinação de AZD4573 com acalabrutinibe em modelos sensíveis a inibidor de BTK in vivo resulta em maior atividade antitumoral Método
[0090] O AZD4573 foi formulado em dimetilacetamida (DMA)/polietilenoglicol 400 (PEG 400)/solução a 1% p/v de Tween 80 2/30/68 e dosado a 5 mL/kg, por via intraperitoneal (ip), BID com uma divisão de 2 horas nos dias 1 e 2 seguidos por uma interrupção temporária da dose de 5 dias; ou seja, um esquema 2 com/5 sem.
[0091] O acalabrutinibe foi formulado em hidroxipropilmetilcelulose a 0,5%/Tween 80 a 0,2% e dosado duas vezes por dia (bid) como uma administração oral (po) a um volume de 10 mL/kg a uma dose de 12,5 mg/kg. No caso do modelo OCILy10, o acalabrutinibe foi dosado usando um esquema de dosagem BID dividida em 8/16 horas. No caso dos estudos de TMD8 e Karpas-422, o acalabrutinibe foi dosado usando um esquema de dosagem dividida BID de 12 horas. Nas três linhagens celulares, a primeira dose de AZD4573 foi administrada 24 horas após a primeira administração de acalabrutinibe.
[0092] 5 x 106 células tumorais OCILy10 ou 10 x 106 células tumorais TMD8 foram injetadas subcutaneamente no flanco direito de camundongos fêmeas C.B.-17 SCID em um volume de 0,1 mL contendo 50% de matrigel. 10 x 106 células tumorais Karpas-422 foram injetadas subcutaneamente no flanco direito de camundongos fêmeas beges SCID em um volume de 0,1 mL contendo 50% de matrigel. Os volumes tumorais (medidos com paquímetro), peso corporal dos animais e estado tumoral foram registrados duas vezes por semana durante o período dos estudos. O volume tumoral foi calculado usando a fórmula: comprimento (mm) x largura (mm)2 x 0,52. No caso dos estudos de eficácia, a inibição do crescimento desde o início do tratamento foi avaliada por comparação das diferenças do volume tumoral entre grupos de controle e tratados. A dosagem começou quando o tamanho tumoral médio alcançou aproximadamente 150 a 180 mm3. RC = resposta completa. Discussão
[0093] A combinação de AZD4573 com acalabrutinibe nos modelos de LDGCB de CBA melhorou a duração da resposta (OCILy10, Figura 4a) e levou a regressões completas (TMD8, Figura 4b). No entanto, nenhum benefício de combinação foi observado no modelo de LDGCB de CBCG Karpas-422 (Figura 4c). Surpreendentemente, a administração duas vezes por semana de AZD4573 em combinação com acalabrutinibe produziu um atraso de 60 dias no recrescimento do tumor em OCILy10 em comparação com o tratamento com AZD4573 como agente único (Figura 4a, painel inferior). Em TMD8, a administração duas vezes por semana de AZD4573 combinado com acalabrutinibe produziu respostas completas em 100% dos animais tratados (Figura 4b, marcação 19/19 RC), que foram mantidas por 53 dias após a remoção do tratamento. 18/19 animais permaneceram livres de tumor até 61 dias após o final do período de dosagem (dados não mostrados). Em contraste, nenhum benefício de combinação foi observado no modelo de LDGCB de CBCG Karpas-422 após 3 ciclos de tratamento, como esperado para uma linhagem celular insensível a BTK. Todas as terapias foram bem toleradas, dosadas isoladamente ou em combinação.
[0094] Nota-se que nas Figuras 4a, 4b e 4c, o acalabrutinibe é designado como ACP-196. Exemplo 5: O inibidor alternativo de BTK ibrutinibe exibe benefício de combinação com AZD4573 in vitro e in vivo Métodos
[0095] A linhagem celular de LDGCB de CBA sensível a inibidor de BTK OCILy10 foi tratada in vitro por um período de 8 horas com AZD4573 100 nM sozinho ou após um pré-tratamento de 24 horas com ibrutinibe 30 nM, uma vez que, similarmente ao acalabrutinibe, a exposição por 24 horas foi suficiente para induzir os níveis máximos de proteína BH3 apenas (dados não mostrados). As células foram colhidas para lisados proteicos em momentos variados (0, 0,5, 1, 2, 4 e 8 horas) após o tratamento com AZD4573, normalizadas para a concentração proteica usando o BCA Protein Assay Kit e corridas para Western blots de acordo com protocolos padrão. Para garantir que o engajamento alvo esperado fosse alcançado, os blots foram sondados para os biomarcadores proximal e distal para CDK9 (pSer2-RNAPolII e Mcl-1, respectivamente) e o biomarcador para BTK ativada (pBTK). As proteínas BH3 apenas Bim e Bmf também foram sondadas para confirmar níveis aumentados. Para estimar o tempo até à indução da apoptose, a caspase-3 clivada também foi avaliada. Um controle de carregamento (vinculina) também foi utilizado para normalização.
[0096] O AZD4573 foi formulado em dimetilacetamida (DMA)/polietilenoglicol 400 (PEG 400)/solução a 1% p/v de Tween 80 2/30/68 e dosado a 5 mL/kg, por via intraperitoneal (ip), duas vezes por dia (BID) com uma divisão de 2 horas nos dias 1 e 2 com uma interrupção temporária da dose de 5 dias. O ibrutinibe foi formulado em hidroxipropilmetilcelulose a 0,5% e dosado uma vez por dia (QD) como uma administração oral (po) a um volume de 10 mL/kg a uma dose de 12 mg/kg. 5 x 106 células tumorais Ly10 foram injetadas subcutaneamente no flanco direito de camundongos fêmeas C.B-17 SCID em um volume de 0,1 mL contendo 50% de matrigel. Os volumes tumorais (medidos com paquímetro), peso corporal dos animais e estado tumoral foram registrados duas vezes por semana durante o período dos estudos. O volume tumoral foi calculado usando a fórmula: comprimento (mm) x largura (mm)2 x 0,52. Para estudos de eficácia, a inibição do crescimento desde o início do tratamento foi avaliada por comparação das diferenças do volume tumoral entre grupos de controle e tratados. A dosagem começou quando o tamanho tumoral médio alcançou aproximadamente 150 a 180 mm3. RC = resposta completa. Discussão
[0097] Similarmente ao acalabrutinibe, o ibrutinibe aumentou os níveis das proteínas BH3 apenas Bim e Bmf no modelo sensível a inibidor de BTK OCILy10, consistente com a inibição de BTK (Figura 5a). A adição de AZD4573 após um pré-tratamento de 24 horas com ibrutinibe resultou em indução rápida e aumentada de caspase (Figura
5a), que se traduziu em maior duração da resposta in vivo (Figura 5b). A administração duas vezes por semana de AZD4573 produziu resposta completa em 100% dos animais tratados após 3 ciclos de dosagem, em comparação com ibrutinibe como agente único, que não foi altamente eficaz. A combinação de AZD4573 com ibrutinibe também produziu respostas completas em 100% dos animais tratados após 3 ciclos de tratamento. O AZD4573 em combinação com ibrutinibe produziu um atraso de duas semanas no recrescimento tumoral em OCILy10, em comparação com o tratamento com AZD4573 como agente único, demonstrando um aumento da duração da resposta para a combinação. Todas as terapias foram bem toleradas, dosadas isoladamente ou em combinação.
[0098] Outras modalidades estão dentro do âmbito das seguintes reivindicações .

Claims (15)

REIVINDICAÇÕES
1. Combinação de um inibidor de BTK e um inibidor de CDK9 caracterizada pelo fato de que é para uso no tratamento de câncer em um sujeito.
2. Combinação, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o inibidor de BTK deve ser administrado ao sujeito antes que o inibidor de CDK9 seja administrado ao sujeito.
3. Combinação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que o inibidor de BTK é acalabrutinibe, ibrutinibe ou ONO/GS-4059.
4. Combinação, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que o inibidor de BTK é acalabrutinibe.
5. Combinação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3 ou 4, caracterizada pelo fato de que o inibidor de CDK9 é AZD4573, BAY-1251152, BAY-1143572, CYC065, alvocidibe, AT7519, voruciclibe, roniciclibe ou dinaciclibe.
6. Combinação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4 ou 5, caracterizada pelo fato de que o inibidor de CDK9 é AZD4573.
7. Combinação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5 ou 6, caracterizada pelo fato de que o câncer é selecionado a partir de linfoma difuso de grandes células B, linfoma de células do manto, leucemia linfocítica crônica, leucemia linfocítica crônica de pequenas células, macroglobulinemia de Waldentröm, linfoma da zona marginal, doença crônica do enxerto contra hospedeiro, linfoma folicular e leucemia linfoblástica aguda.
8. Método de tratamento de câncer em um sujeito, caracterizado pelo fato de que compreende: administrar uma quantidade eficaz de um inibidor de BTK ao sujeito; e administrar uma quantidade eficaz de um inibidor de CDK9 ao sujeito.
9. Método, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que o inibidor de BTK é administrado ao sujeito antes que o inibidor de CDK9 seja administrado ao sujeito.
10. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 8 ou 9, caracterizado pelo fato de que o inibidor de BTK é acalabrutinibe, ibrutinibe ou ONO/GS-4059.
11. Método, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o inibidor de BTK é acalabrutinibe.
12. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 8, 9, 10 ou 11, caracterizado pelo fato de que o inibidor de CDK9 é AZD4573, BAY-1251152, BAY-1143572, CYC065, alvocidibe, AT7519, voruciclibe, roniciclibe ou dinaciclibe.
13. Método, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o inibidor de CDK9 é AZD4573.
14. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 8, 9, 10, 11, 12 ou 13, caracterizado pelo fato de que o câncer é selecionado a partir de linfoma difuso de grandes células B, linfoma de células do manto, leucemia linfocítica crônica, leucemia linfocítica crônica de pequenas células, macroglobulinemia de Waldentröm, linfoma da zona marginal, doença crônica do enxerto contra hospedeiro, linfoma folicular e leucemia linfoblástica aguda.
15. Estojo caracterizado pelo fato de que compreende: uma primeira composição farmacêutica compreendendo um inibidor de BTK e um veículo farmaceuticamente aceitável; e uma segunda composição farmacêutica compreendendo um inibidor de CDK9 e um veículo farmaceuticamente aceitável.
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