JP4429732B2 - 癌の処置におけるグリベック（ｓｔｉ５７１）とサイクリン依存性キナーゼインヒビター、とりわけフラボピリドールとの組合せ剤 - Google Patents

Description

発明の詳細な説明

本発明は、同時的、個別的または逐次的使用のための、特に増殖性疾患、とりわけ腫瘍疾患の処置のための（ａ）サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）インヒビターおよび（ｂ）４−（４−メチルピペラジン−１−イルメチル）−Ｎ−［４−メチル−３−（４−ピリジン−３−イル）ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］−ベンズアミド（以後、「化合物Ｉ」）および所望により少なくとも１種の医薬上許容される担体を含んでなる医薬組合せ剤；かかる組合せ剤を含んでなる医薬組成物；増殖性疾患の処置用医薬の製造のための、かかる組合せ剤の使用；同時的、個別的または逐次的使用のための組合せ調製物としてかかる組合せ剤を含んでなる市販用パッケージまたは製品；ならびに温血動物、とりわけヒトの処置方法に関する。

Ｂｃｒ／Ａｂｌオンコジーンは、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）を有する患者の９５％の細胞において見いだされる融合タンパク質をコードしている。Ｂｃｒ／Ａｂｌチロシンキナーゼの構成的活性化（constitutive activation）は、造血細胞に延命効果を与え、このことは白血病転換（leukemic transformation）に寄与する。さらに詳しくは、Ｂｃｒ／Ａｂｌキナーゼの発現は、細胞を、成長因子欠乏および細胞毒性薬物を含む多様な刺激により誘導されたアポトーシスに対して比較的非感受性にする。近年、「化合物Ｉ」、すなわちＢｃｒ／Ａｂｌ、ｃ−Ｋｉｔを阻害し、そして他のキナーゼをより少ない程度で阻害するチロシンキナーゼインヒビターがかなり注目されている。「塩Ｉ」（「化合物Ｉ」のモノメシル酸塩）は、Ｂｃｒ／Ａｂｌ−陽性白血病細胞の増殖を阻害し、そしてインビトロでそのアポトーシスを誘導することが示された。注目に値すべきことに、ＣＭＬを有する患者への「塩Ｉ」の経口投与は、大部分の患者において臨床応答をもたらす。しかしながら、最初は「塩Ｉ」に応答していたＣＭＬ患者におけるこの薬剤に対する耐性の発現は、この疾患の処置に対する代替的アプローチの研究を刺激した。

本発明は、治療上有効量のＣＤＫインヒビター、特にフラボピリドール（ＦＰ）および治療上有効量の「塩Ｉ」を含んでなる、Ｂｃｒ／Ａｂｌの過剰発現により特徴づけられる「塩Ｉ」に耐性のＢｃｒ／Ａｂｌ^＋ 白血病の組合せ治療が、ＣＤＫインヒビター単独または「塩Ｉ」単独のいずれかの治療上有効量の単剤投与により得られるよりも大きい治療効果をもたらし得ることを報告する。

本発明は、（ａ）サイクリン依存性キナーゼインヒビターおよび（ｂ）「化合物Ｉ」〔ここで、活性成分（ａ）および（ｂ）は、それぞれの場合において遊離の形態または医薬上許容される塩の形態で存在する。〕および所望により少なくとも１種の医薬上許容される担体を含んでなる、同時的、個別的または逐次的使用のための組合せ剤、たとえば組合せ調製物（combined preparation）または固定された医薬組合せ剤（pharmaceutical fixed combination）に関する。

本発明は、相乗的に有効量の（ａ）サイクリン依存性キナーゼインヒビターおよび（ｂ）「化合物Ｉ」〔ここで、活性成分（ａ）および（ｂ）は、それぞれの場合において、遊離の形態または医薬上許容される塩の形態で存在する。〕、および少なくとも１種の医薬上許容される担体を含んでなる、同時的、個別的または逐次的使用のための組合せ剤、たとえば組合せ調製物または固定された医薬組合せ剤に関する。

すべてのＷＯ（番号）の参考文献は、対応する参考文献のＰＣＴ特許出願のＷＩＰＯ公開公報に言及することを意味する。

「化合物Ｉ」のモノメタンスルホン酸付加塩（以後、「塩Ｉ」）およびその好適な結晶形は、１９９９年１月２８日に公開されたＷＯ ９９／０３８５４に記載されている。

たいていのＣＤＫインヒビターは、ＣＤＫ １、２、４、６または７に作用するか、あるいはそれらのキナーゼのいくつかを阻害することができる。本発明のＣＤＫインヒビターは、ＣＤＫのインヒビターをコードする核酸、ペプチドおよびペプチド模倣性（peptidomimetic）インヒビター、ペプチドアプタマー、フラボノイド、プリン誘導体、ピリミジン誘導体、ブチロラクトン１、インジゴイドビスインドール誘導体、ベンゼンスルホンアミド、チアゾール誘導体、ポーロン誘導体（paullones derivatives）、スタウロスポリン誘導体、ピラゾロピリジン化合物、インドール誘導体、アミノ−ピラゾール化合物のような小分子化合物である。

ＣＤＫインヒビターをコードする核酸は、ＵＳ ５,６２１,０８２およびＷＯ ９９／０６５４０において開示されている。ペプチドおよびペプチド模倣性インヒビターは、ＥＰ ０ ６６６ ２７０ Ａ２、バンダラら（Bandara et al.）, Nature Biotechnology 1997, 15, 896-901 およびチェンら（Chen et al.）, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1999, 96, 4325-29において記載されている。ペプチドアプタマーは、コーエンら（Cohen et al.）, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1998, 95, 14272-77において記載されている。小分子化合物は、Exp. Opin. Invest. Drugs 1998, 7, 865-87 および Curr. Opin. in Drug Discov. & Devel.1999, 2, 274-85において概説されている。

本発明のフラボノイドは、カテキン、ゲニステインおよび抗体−ゲニステインコンジュゲート、たとえばＢ４３−ゲニスタインおよび（表皮成長因子）ＥＧＦ−ゲニスタイン、ケルセチン、フラボピリドールおよびフラボピリドール誘導体である。

フラボピリドール（Ｌ８６−８２７５、ＨＭＲ １２７５）は、フラボノイドロヒツキン（flavonoid rohitukine）に由来する半合成フラボンであり、そしてＵＳ４９００７２７、ＥＰ２４１００３およびInt. J. Oncology 1996, 9, 1143-1168に記載されている。フラボピリドールは、４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン、２−（２−クロロフェニル）−５,７−ジヒドロキシ−８−（３−ヒドロキシ−１−メチル−４−ピペリジニル）−、塩酸塩、（−）−シス−である。フラボピリドールは、ＣＤＫ１、２、４／６、および７を含む複合的サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）の強力なインヒビターとして作用する。
チオ−およびオキソフラボピリドールのようなフラボピリドール誘導体は、J. Med. Chem. 2000, 43, 4126-4134において開示され、フラボピリドールアナログは、ＵＳ ５,７３３,９２０、ＷＯ ９７／４２９４９およびＷＯ ９８／１７６６２に記載されている。

本発明のプリン誘導体は、Bioorg. Med. Chem. Lett. 1997, 7, 2697-2702; Proc. Amer. Assoc. Cancer Res. 1998, 39, 1207; Bioorg. Med. Chem. Lett. 1998, 8, 793-98; Science 1998, 281, 533- 38; Chemistry & Biology 1999, 6, 361-75に記載されている。

２,６,９−三置換プリンは、ＵＳ ６，３１６，４５６ Ｂ１、J. Med. chem. 1997, 40: 408-12に記載され、とりわけオロモウシン（olomoucine）、ボヘミン（bohemine）は、Drug. Metab. Dispos. 2001, 3, 326-34に記載され、ＣＶＴ ３１３は、J. Biol. Chem. 1997, 272: 29207-211に記載され、ＣＶＴ ２５８４およびＣＶＴ ２４５４は、MEDI, 2000, 136: 26に記載され、プルバラノール（purvalanol）Ｂ、Ｒ−ロスコビチン（roscovitine）（ＣＹＣ ２０２、２−（Ｒ）−１−エチル−２−ヒドロキシエチルアミノ）−６−ベンジルアミノ−９−イソプロピルプリン）、２,６−二置換プリン、たとえばＮＵ ２０５８は、ＷＯ ９９／０２１６２に記載され、６,９−二置換プリンは、ＷＯ ９９／４３６７５およびＷＯ ９９／４３６７６において記載されている。

「ピリミジンに基づく誘導体」なる用語は、J. Med. Chem. 2000, 43, 2797-2804 において記載されたような化合物、たとえばＮＵ ６０２７およびＮＵ ６０３４ならびに米国癌学会（American Association for Cancer Research）の第９１回年会（91st Annual Meeting）２０００、４１：３１４ （ＰＤ ０１８３８１２）において、ならびにＷＯ ９８／３３７９８、Proc. Amer. Assoc. Cancer Res. 1998, 39, Abst. 3796 および Proc. Amer. Assoc. Cancer Res. 1998, 39, Abst. 3794 において記載された化合物を含むが、これらに限定されるわけではない。

「ポーロン誘導体」なる用語は、Int. J. Chem. 1999, 42, 2909-2919およびCancer Research 1999, 59: 2566-2569において記載されたような化合物、たとえばアルスターポーロン（ＮＳＣ ７０５７０１、９−ニトロポーロン）およびケンポーロン（ＮＳＣ ６６４７０４、９−ブロモポーロン）を意味する。

「ベンゼンスルホンアミド」は、Owa et al., J. Med. Chem., 1999, 42, 3789-99において記載されたような化合物、とりわけＥ ７０７０（ＥＲ−３５７４４）を含むが、これらに限定されるわけではない。

チアゾール誘導体は、ＵＳ ６,０４０,３２１、ＵＳ ６,２６２,０９６、ＷＯ ９９／２４４１６、ＷＯ ９９／２１８４５およびＷＯ ９９／６２８９０において記載されたようなアミノ−およびイソチアゾール、とりわけＡＧ １２２８６およびＡＧ １２２７５（MEDI 1999, 214）である。

スタウロスポリン誘導体は、特にスタウロスポリン、ＬＹ ３３３５３１、ＭＬＲ５２、ＵＣＮ−０１（７−ヒドロキシ−スタウロスポリン）、ＵＣＮ−０２、ミドスタウリン（ＥＰ０２９６１１０）、ＮＡ ３８２、２−メチル Ｋ２５２ａ、Ｋ−２５２ａ（J. Cell. biol 1991, 115: 1275）、ＫＴ−５７２０、Ｒｏ−３１−８４２５、Ｒｏ−３１−７５４９およびＲｏ−３１−８２２０である。

インジゴイド ビスインドール誘導体は、ＷＯ ９９／６２５０３およびＷＯ ００／６１５５５に記載されている。

ピラゾロピリジンインヒビターは、MEDI 2000, 38において開示され、とりわけＢＭＳ ２６５２４６である。

本発明のインドール誘導体は、ＳＵ９５１６ （（Ｚ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチレン）−５−メトキシ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−２−オン）であり、オキシインドールインヒビターは、米国癌学会第９０および第９１回年会（90th and 91st Annual Meeting Amer. Assoc. Cancer Res.）１９９９、７２４；２０００、４１：３１において、Luzzio et al., 1999 Abst. 4102において、Investigational Drugs 8: 903-9のExpert OpinionにおけるInpharma. 2000, 1237: 7-8において、そしてＷＯ ９９／１５５００において記載されており、とりわけＧＷ ２０５９、ＧＷ ８５１０、ＧＷ ５１８１およびＧＷ ９４９９である。

アミノ−ピラゾール化合物は、ＵＳ ０９／８３５５６６において開示されている。

ＮＳＣ ３７３８５３、ＮＳＣ ３７３８５４、ＮＳＣ ６２５９８７およびＮＳＣ ６４５７８７は、Amer. Soc. Clinic. Oncology, 1997, 212の年会において報告されている。

驚くべきことに、ＦＰは、高い相乗的様式で「化合物Ｉ」、たとえば「塩Ｉ」と相互作用し、細胞（「化合物Ｉ」に耐性のもの、およびＢｃｒ／Ａｂｌ増幅を示すものを含む。）においてミトコンドリア損傷（mitochondrial injury）およびアポトーシスを引き起こす。予期せぬことに、ＦＰおよび「化合物Ｉ」を含んでなる組合せ剤の腫瘍に対する抗増殖効果は、いずれのタイプの単独成分で達成され得る最大効果よりも大きいことが見いだされた。

この結果は、ＣＤＫインヒビターであるフラボピリドールは、「塩Ｉ」耐性Ｋ５６２細胞、とりわけ増加したレベルのＢｃｒ／Ａｂｌタンパク質を発現するＫ５６２Ｒ細胞を含むＢｃｒ／Ａｂｌ^＋ 白血病細胞において「塩Ｉ」−介在性ミトコンドリア性障害およびアポトーシスを顕著に増大させることを示唆している。

本発明は、サイクリン依存性キナーゼインヒビターがＦＰ、ＣＹＣ ２０２およびＥ ７０７０からなる群から選択される組合せ剤に関する。

本明細書において使用される「組合せ調製物」なる用語は、とりわけ、上記の組合せパートナー（ａ）および（ｂ）が互いに独立して投与され得るか、または特定量の組合せパートナー（ａ）および（ｂ）を異なる所定の組合せで使用すること、すなわち、同時的にまたは異なる時点で使用することにより投与され得るという意味での「パーツのキット（kit of parts）」を意味する。したがって、「パーツのキット」のパーツは、たとえば、同時的にまたは時間をずらして、すなわち、異なる時点で、そして「パーツのキット」のいずれのパーツについても、等しいまたは異なる間隔で投与され得る。非常に好ましくは、時間間隔は、パーツの組合せ使用において処置される疾患に対する作用が、組合せパートナー（ａ）および（ｂ）のいずれか一方のみの使用により得られる作用よりも大きくなるように、選択される。組合せ調製物で投与される組合せパートナー（ａ）と組合せパートナー（ｂ）の総量比は、たとえば、処置される患者亜集団の必要度または一人の患者の必要度に応じて、変動し得る。その異なる必要度とは、患者の年齢、性別、体重などであり得る。好ましくは、少なくとも１つの有益な作用、たとえば組合せパートナー（ａ）および（ｂ）の作用を互いに増強し合う作用、特に相乗作用、たとえば相加作用を超える作用、さらに有利な作用としてのより少ない副作用、組合せパートナー（ａ）および（ｂ）の一方または両方の非有効用量での組合せ治療効果、ならびに非常に好ましいこととして組合せパートナー（ａ）および（ｂ）の強力な相乗作用が存在する。

「処置」なる用語は、腫瘍を治療するか、または腫瘍緩解に対してもしくは疾患の進行遅延に対して効果を得ることを目的とした、処置を必要とする温血動物への組合せパートナーの投与を含む。

本明細書において使用される「進行遅延」なる用語は、腫瘍増殖または一般的に疾患進行が、処置により少なくとも遅くなるかまたは阻害され、そして患者が、処置されなかった患者または単剤療法で処置された患者よりも高い生存率を示すことを意味する。

「増殖性疾患」なる用語は、腫瘍、乾癬、再狭窄、強皮症および線維症を含むが、これらに限定されるわけではない。

「腫瘍疾患」なる用語は、任意の新生物性増殖障害、たとえば固形腫瘍疾患または液性腫瘍（liquid tumor）疾患を意味する。

本明細書において使用される「液性腫瘍疾患」なる用語は、慢性骨髄性白血病および急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、とりわけフィラデルフィア染色体陽性急性リンパ性白血病（Ｐｈ^＋ＡＬＬ）ならびに「塩Ｉ」に耐性の白血病を含むが、これらに限定されるわけではない。

本明細書において使用される「「塩Ｉ」に耐性の白血病」なる用語は、とりわけ「塩Ｉ」が治療上有効性の減少を示す白血病を定義し、Ｂｃｒ／Ａｂｌ遺伝子増幅、Ｂｃｒ／Ａｂｌタンパク質の発現の増加およびＡｂｌキナーゼドメイン変異により「塩Ｉ」処置に耐性を示す白血病を含むが、これらに限定されるわけではない。

「固形腫瘍」なる用語は、とりわけ卵巣癌、乳癌、結腸癌、および一般的な胃腸管の癌、子宮頸癌、肺癌、たとえば小細胞肺癌および非小細胞肺癌、頭部および頚部癌、膀胱癌、前立腺癌またはカポジ肉腫を意味する。

組合せパートナー（ｂ）「化合物Ｉ」は、式Ｉ

を有する４−（４−メチルピペラジン−１−イルメチル）−Ｎ−［４−メチル−３−（４−ピリジン−３−イル）ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］−ベンズアミドである。

これは、ＷＯ ９９／０３８５４において記載されたように製造および投与され得る。

特記された活性剤の構造は標準要約書である「メルク・インデックス（Merck Index）」の最新版から、またはデータベース、たとえばパテンツ・インターナショナル（Patents International）（たとえば、IMS World Publications）から取得できる。対応するその内容を、出典明示により本明細書の一部とする。当業者であれば、これらの参考文献に基づいて、完全に製造することが可能であり、そして標準的な試験モデルにおいて、医薬的適用および特性についてのインビトロおよびインビボの両方の試験を完全に行うことが可能である。

組合せパートナーの（ａ）および（ｂ）についての言及が、それらのそれぞれの医薬上許容される塩を含むことを意味することも理解できるだろう。これらの組合せパートナー（ａ）および（ｂ）が、たとえば少なくとも１つの塩基性基を有する場合、これらは酸付加塩を形成することが可能である。酸性基（たとえばＣＯＯＨ）を有する組合せパートナーは、塩基と塩を形成することも可能である。組合せパートナーの（ａ）もしくは（ｂ）またはその医薬上許容される塩は、水和物の形態か、または結晶化に使用された他の溶媒を含む形態で、使用され得る。４−（４−メチルピペラジン−１−イルメチル）−Ｎ−［４−メチル−３−（４−ピリジン−３−イル）ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］−ベンズアミド、すなわち組合せパートナー（ａ）は、本発明において、好ましくはモノメシル酸塩の形態で使用される。

（ａ）ＣＤＫインヒビターおよび（ｂ）「化合物Ｉ」〔ここで、活性成分は、それぞれの場合において遊離の形態または医薬上許容される塩の形態で存在する。〕および所望により少なくとも１種の医薬上許容される担体を含んでなる組合せ剤を、以後、本明細書において「本発明の組合せ剤」と称する。

「本発明の組合せ剤」は、固形腫瘍の増殖を阻害するが、液性腫瘍の増殖も阻害する。さらに、「本発明の組合せ剤」は、血管形成の脱調節に伴う疾患の処置において有利な効果を示す。本発明の１つの好適な実施態様において、「本発明の組合せ剤」で処置されるべき増殖性疾患は、白血病、とりわけＢｃｒ／Ａｂｌ^＋ 白血病および好ましくは「塩Ｉ」−耐性の白血病である。

さらに驚くべきことは、「本発明の組合せ剤」をインビボで投与した結果、「本発明の組合せ剤」で用いる医薬有効成分の一種のみを適用する単剤療法と比較して、たとえば増殖性疾患の進行の遅延に関して、または腫瘍の体積の変化に関して、より有益な、とりわけ相乗作用的な、たとえば抗増殖効果がもたらされるだけではなく、さらに驚くべき有益な効果、たとえば副作用の減少、死亡率および疾病率の低下ももたらされるという実験的知見である。「本発明の組合せ剤」は、特に、抗癌剤として知られる化学療法に不応性の増殖性疾患ならびに「塩Ｉ」処置に不応性の増殖性疾患の処置に適している。「本発明の組合せ剤」は、腫瘍の転移性拡散、および微小転移の増殖または進行の予防にも適している。

さらなる利点は、より少ない用量の「本発明の組合せ剤」の活性成分が使用され得ること、たとえば、必要な投与量が多くの場合さらに少なくなるだけでなく、適用される頻度も少なくなるか、または副作用、たとえば組合せパートナーの一方のみで観察される下痢または吐き気の発生率を低下させるために、使用され得ることである。このことは、処置を受ける患者の要望（desire）および要求（requirement）に合致する。

確立された試験モデルによって、「本発明の組合せ剤」が本明細書において前記した有益な効果をもたらすことを示され得る。当業者であれば、このような有益な効果を証明する適切な試験モデルを十分に選択することが可能である。「本発明の組合せ剤」の薬理学的活性は、たとえば臨床研究にてまたは本質的に後記したような試験手順にて証明され得る。

適当な臨床試験は、特に、末期の癌患者における無作為、二重盲検、プラセボコントロール、平行試験である。このような試験は、特に、活性成分を使用する単剤療法の効果と「本発明の組合せ剤」を使用する治療を比較し、そして特に「本発明の組合せ剤」の活性成分の相乗効果を証明するのに適している。このような試験の一次エンドポイント（primary endpoint）は、疼痛のスコアー（pain scores）、鎮痛剤の使用（analgesic use）、全身状態（performance status）、クオリティー・オブ・ライフのスコアー（Quality of Life scores）または疾患進行までの時間（time to progression of the disease）に対する効果であり得る。定まった周期、たとえば４、６または８週間ごとの腫瘍評価が、「本発明の組合せ剤」の効果を決定するために適したアプローチである。適当な試験計画においては、患者は、たとえば２週間の処置サイクルごとに、１日に約５０〜８００ｍｇの活性物質の範囲の用量の「塩Ｉ」および５〜７５ｍｇ／ｍ^２／日の範囲の用量のＦＰを３日間投与されている。このような試験の最小の継続期間は、たとえば約４週間であるべきである。

増殖性疾患に対して共同で治療上有効な量で「本発明の組合せ剤」を含んでなる医薬組成物を提供することが本発明の１つの目的である。この組成物において、組合せパートナー（ａ）および（ｂ）は、一緒に投与するか（together）、一方の後に他方を投与するか、または個別的に１つの組合せ単位用量形態もしくは２つの個別的単位用量形態で投与することが可能である。単位投与形態は、また、固定された組合せ剤であってもよい。

本発明の医薬組成物は、自体公知の方法で製造され、そしてヒトを含む哺乳動物（温血動物）への経腸、たとえば経口または経直腸、および非経腸投与に適したものである。これは、治療上有効量の少なくとも１種の活性組合せパートナーを、単独で、あるいは１種またはそれ以上の医薬上許容される担体、とりわけ経腸または非経腸投与に適したものと組み合わせて含んでなる。本発明の１つの実施態様において、１種またはそれ以上の活性成分は、経静脈的に投与される。

新規医薬組成物は、たとえば、約１０％〜約１００％、好ましくは約２０％〜約６０％の活性成分を含有する。経腸または非経腸投与用組合せ治療のための医薬調製物は、たとえば単位用量形態のもの、たとえば糖衣錠、錠剤、カプセル剤または坐剤、およびさらにアンプル剤である。特記しない限り、これらは自体公知の方法、たとえば慣用的混合、造粒、シュガーコーティング、溶解または凍結乾燥プロセスにより製造される。個々の投与の個々の用量に含まれる組合せパートナーの単位含有量は、それ自体で有効な用量を形成する必要はないことが分かる。というのは、必要な有効量は、複数の投与単位の投与により達成され得るからである。

特に、「本発明の組合せ剤」の個々の組合せパートナーの治療上有効量は、同時的に、または逐次的にそして任意の順番で投与され得、そしてこれらの成分は、個別的にまたは固定された組合せとして投与され得る。たとえば、本発明の増殖性疾患の進行遅延または処置方法は、同時的または任意の順序で逐次的に、共同で治療上有効な量で、好ましくは相乗効果的な量で、たとえば本明細書に記載した量に対応する１日用量で、（ｉ）遊離または医薬上許容される形態の第１の組合せパートナーの投与および（ｉｉ）遊離または医薬上許容される塩の形態の第２の組合せパートナーの投与を含んでなる。「本発明の組合せ剤」の個々の組合せパートナーは、治療過程の異なる時点で個別的に、または分割または単一の組合せ形態で同時一体的（concurrently）に投与され得る。さらに、「投与」なる用語は、インビボで組合せパートナー自体に変換される組合せパートナーのプロドラッグの使用を包含する。したがって、本発明は、同時的または交互的処置のようなすべての治療プログラムを包含するものとして理解されるべきであり、そして「投与」なる用語は、それに応じて解釈されるべきである。

「本発明の組合せ剤」において使用される組合せパートナーのそれぞれの有効量は、使用される特定の化合物または医薬組成物、投与様式、処置される病状、処置される病状の重度に依存して変動し得る。したがって、「本発明の組合せ剤」の投与プログラムは、投与経路ならびに患者の腎および肝機能を含むさまざまな要因にしたがって選択される。通常の技量を有する医師、臨床医または獣医であれば、病状の進行の予防、対抗または阻止に必要な、単回の活性成分の有効量を容易に決定し処方することができる。有効性をもたらし毒性を示さない範囲内での、活性成分の濃度の最適値を正確に求めるためには、標的部位に対する活性成分の利用能の動力学に基づく治療プログラムが必要である。これには、活性成分の分布、平衡および排泄の考察が含まれる。

フラボピリドールは、１０〜１００ｍｇ／ｍ^２／日の範囲の用量で、好ましくは１０〜５０ｍｇ／ｍ^２／日の範囲の用量で、たとえばClin. Cancer Res. 2001, 7, 1590-9に記載されたように、たとえば０.１〜０.２ｍｇ／ｍｌの濃度の５０ｍｇ／ｍ^２／日での１４日ごとの７２時間連続注入で投与され得る。あるいは、ＦＰは、７８ｍｇ／ｍ^２／日の好適な用量で、抗下痢予防剤とともに２週間につき３日投与され得る。

１１９.５ｍｇの「塩Ｉ」は、活性物質として１００ｍｇの「化合物Ｉ」（遊離塩基）に相当する。種、年齢、個々の状態、投与様式および問題の臨床像に依存して、「塩Ｉ」の有効用量、たとえば約５０〜１０００ｍｇ、たとえば５０〜８００ｍｇ、好ましくは５０〜６００ｍｇ、たとえば５０〜４００ｍｇの活性物質に相当する１日用量が、体重約７０ｋｇの温血動物に投与される。白血病を有する成人患者に関して、１日あたり４００ｍｇの開始用量が推奨され得る。１日４００ｍｇでの処置に応答する評価後に不適当な応答を有する患者に関して、用量漸増を安全に考慮することができ、そして患者は、患者が処置から利益を受け、そして制限的な毒性が不存在である限り、処置され得る。

たとえば、ＦＰおよび「塩Ｉ」は、１：１から１：２０の範囲、好ましくは１：１０、たとえば１：１.３３のモル比（ＦＰ：「塩Ｉ」）で相乗的に有効である。

本発明は、また、腫瘍疾患、とりわけ白血病を患うヒト対象に、「化合物Ｉ」または医薬上許容されるその塩を投与する方法であって、１日医薬有効量の「化合物Ｉ」または医薬上許容されるその塩を当該ヒト対象に３ヶ月を超える期間投与することを含んでなる方法に関する。本発明は、とりわけ、５０〜８００ｍｇ、とりわけ５０〜６００ｍｇ、たとえば５０〜４００ｍｇの活性物質の１日用量が投与される方法に関する。

「本発明の組合せ剤」において使用される組合せパートナーが単独の薬物として市販されているような形態で適用される場合、投与の用量および様式は、特記しない限り、本明細書に記載した有利な効果をもたらすために、それぞれの市販薬のパケットリーフレット（packet leaflet）に提供された情報にしたがって行われ得る。

「本発明の組合せ剤」は、組合せ調製物または医薬組成物であり得る。

さらに、本発明は、増殖性疾患を有する温血動物を処置する方法であって、当該動物に、増殖性疾患に対して共同で治療上有効量の「本発明の組合せ剤」〔ここで、組合せパートナーは、医薬上許容される塩の形態でも存在し得る。〕を投与することを含む方法に関する。本発明の１つの実施態様において、かかる方法の「本発明の組合せ剤」は、抗下痢剤と共投与される。さらに、処置は、外科的治療、放射線療法、寒冷療法（cryotherapy）および免疫療法を含み得る。

本発明は、また、腫瘍疾患を有する温血動物における転移の形成を阻害する方法であって、当該患者に、当該腫瘍疾患に対して共同で治療上有効量の医薬上有効量の「本発明の組合せ剤」〔ここで、化合物は、それらの医薬上許容される塩の形態でも存在し得る。〕を投与することを含んでなる方法に関する。

さらに、本発明は、増殖性疾患の処置のための、そして増殖性疾患の処置用医薬の製造のための「本発明の組合せ剤」の使用に関する。

さらに、本発明は、増殖性疾患の処置用医薬の製造のために「塩Ｉ」と組み合わせたＦＰの使用に関する。

さらに、本発明は、増殖性疾患の処置における同時的、個別的または逐次的使用のための指示書とともに、活性成分として「本発明の組合せ剤」を含んでなる市販用パッケージを提供する。

実施例１：
細胞：Ｋ５６２ヒト白血病細胞を、ＡＴＣＣ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤから購入し、そしてピルビン酸ナトリウム、ＭＥＭ必須ビタミン、Ｌ−グルタミン、ペニシリン、ストレプトマイシン、および１０％熱不活性化ウシ胎児血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ、Ｌｏｇａｎ、ＵＴ）を補ったＲＰＭＩ １６４０培地中で培養する。薬物耐性Ｋ５６２細胞（Ｋ５６２Ｒ）を、ヤノビッチら（Yanovich et al）において過去に記載されたように濃度漸増ドキソルビシン中で継代培養することにより親株から得る。Ｋ５６２ヒト白血病細胞株のドキソルビシン−耐性変異種（Ｋ５６２Ｒ）は、他のアントラサイクリン系抗生物質およびビンカアルカロイドとの交差耐性を示す。Ｋ５６２Ｒ細胞は、他の多剤耐性細胞株とよく似た表現型を有する（Yanovich et al., 1989, Cancer Res. 49, 4499-4503）。それらは、すべての実験手順の前に薬物の入っていない培地中で培養される。
Ｓ−１００フラクションの製造：細胞を、薬物処置の後に回収し、そして細胞質内Ｓ−１００フラクションを、Yu et al., Mol. Pharmacol. 2001, 60, 143-53において記載されたような超遠心分離により単離する。

アポトーシスの評価：薬物曝露の後、細胞遠心調製物をライト−ギムザ（Wright-Giemsa）で染色し、そして光学顕微鏡で観察し、Wang Z. et al., 1999 Cancer Res. 59, 1259-67において記載されたようにアポトーシスの程度を評価する。

ミトコンドリア膜ポテンシャルの測定（ΔΨ_ｍ）：ミトコンドリア膜ポテンシャルを、ＦＡＣＳｃａｎフロー・サイトメーターおよびＣｅｌｌＱｕｅｓｔソフトウェア（Becton Dickinson, Immunocytometry Systems, San Jose, CA）を用いて、Wang Z. et al., 1999 Cancer Res. 59, 1259-67において過去に記載されたように３,３−ジヘキシルオキサカルボシアニン ヨーダイド（ＤｉＯＣ_６）の取り込みを測定することによりモニターする。

１. 「塩Ｉ」およびＦＰに対するＫ５６２細胞の共曝露は、アポトーシスの著しい増強をもたらす
（Ａ）Ｋ５６２細胞を、１５０ｎＭ ＦＰおよび示された濃度の「塩Ｉ」に４８時間曝露し、その後、アポトーシスを起こした細胞の割合を、上記のようなライト ギムザ（Wright Giemsa）染色スライドの形態学的評価により測定した。数値は、トリプリケートで行われた３つの別個の実験の平均±ＳＤ（標準偏差）を表す。

３００ｎＭ未満の「塩Ｉ」濃度へのＫ５６２細胞の４８時間の曝露は、アポトーシスを弱く誘導するが、３００〜５００ｎＭの濃度は、２０〜５０％の細胞に致死性を誘導する。しかしながら、１５０ｎＭ ＦＰ〔これ自体は、本質的に非毒性である（すなわち、５％未満の細胞死を誘導する）。〕の共投与は、１５０ｎＭの濃度の「塩Ｉ」に曝露された細胞においてアポトーシスを劇的に増加させる。１００ｎＭの濃度でのＦＰの共投与は、２００ｎＭ 「塩Ｉ」の致死効果を顕著に増加させ、そしてこれらの効果は、特に３００ｎＭ ＦＰの場合において著しい。

（Ｂ）Ｋ５６２細胞を、１５０ｎＭ ＦＰ ＋ ２００ｎＭ 「塩Ｉ」に２４または４８時間曝露し、その後、アポトーシスを起こした細胞の割合を過去に記載されたように測定する。数値は、トリプリケートで行われた３つの別個の実験の平均±Ｓ.Ｄ（標準偏差）を表す。

アポトーシスを起こした細胞の出現により反映される２００ｎＭ 「塩Ｉ」 ＋ １５０ｎＭ ＦＰの致死効果は、２４時間後、中程度であるが、４８時間後は非常に大きい。このことは、この薬物の組合せの遅延型の作用様式を示唆している。

２. 「塩Ｉ」／ＦＰによるアポトーシスの相乗的誘導
Ｋ５６２細胞を、固定された比率（１：１.３３）でさまざまな濃度のＦＰおよび「塩Ｉ」に４８時間曝露し、その後、アポトーシス細胞またはΔΨ_ｍの低下を示す細胞の割合を、上で記載したようにモニターする。組合せインデックス（ＣＩ）を、影響を受けた細胞のフラクションに関してメジアン用量効果（Median Dose Effect）解析を用いて測定する。結果は、３つの別個の実験の代表である。

メジアン用量効果解析を用いて、４８時間におけるアポトーシスの誘導およびΔΨ_ｍの低下の両方に関して「塩Ｉ」とＦＰとの間の相互作用を特徴づける。１.０未満の組合せインデックス（ＣＩ）値が一貫して、特にΔΨ_ｍの低下の場合において得られる。このことは、「塩Ｉ」とフラボピリドールとの間の高い相乗的相互作用を示している。

３. 「塩Ｉ」およびＦＰへの高レベルのＢｃｒ／Ａｂｌタンパク質を発現する薬物耐性Ｋ５６２（Ｋ５６２Ｒ）細胞の共曝露は、アポトーシスの著しい増加をもたらす。
Ｋ５６２Ｒ細胞を、１.５μＭ 「塩Ｉ」±２００ｎＭ ＦＰに４８時間曝露し、その後、アポトーシスを起こした細胞を、上で記載したように測定する。数値は、トリプリケートで行われた３つの別個の実験の平均±Ｓ.Ｄを表す。

親株と比較して約３００％のＢｃｒ／Ａｂｌタンパク質の発現の増加を示す多剤耐性Ｋ５６２細胞株（Ｋ５６２Ｒ）を使用する。Ｋ５６２Ｒ細胞は、「塩Ｉ」感受性の顕著な増加を示し、親細胞よりも１０倍高いＩＣ_５０を有し、たとえば、親のＫ５６２Ｓ細胞が０.４μＭであるのに対し、約３.０μＭである。Ｋ５６２Ｒ細胞において、１５０ｎＭ ＦＰへの４８時間の曝露は非毒性であるが、１.５μＭ 「塩Ｉ」は約１０％の細胞においてのみアポトーシスを誘導する。対照的に、１.５μＭ 「塩Ｉ」への親Ｋ５６２Ｓ細胞の４８時間の曝露は９５％を超えるアポトーシスをもたらした。有意に、「塩Ｉ」およびＦＰでのＫ５６２Ｒ細胞の組合せ処置は、「塩Ｉ」単独と比べて約５倍程度（すなわち、約５０％まで）増大させる。これらの知見は、ＦＰの非毒性濃度の共投与が、Ｂｃｒ／Ａｂｌタンパク質のレベルの増加を示す耐性細胞において「塩Ｉ」関連致死をかなり増加させることを示唆する。

実施例２：４−［（４−メチル−１−ピペラジン−１−イルメチル）−Ｎ−［４−メチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］アミノ］フェニル］ベンズアミド メタンスルホン酸塩、β−結晶形を有するカプセル
活性物質として１００ｍｇの「化合物Ｉ」（遊離塩基）に相当する１１９.５ｍｇの標題において命名された化合物（＝「塩Ｉ」）を含有するカプセルを、以下の組成において製造する：

当該カプセルは、成分を混合し、混合物を硬ゼラチンカプセル、サイズ１に充填することにより製造される。

実施例３：４−［（４−メチル−１−ピペラジン−１−イルメチル）−Ｎ−［４−メチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］アミノ］フェニル］ベンズアミド メタンスルホン酸塩、β−結晶形を有するカプセル
活性物質として１００ｍｇの「化合物Ｉ」（遊離塩基）に相当する１１９.５ｍｇの標題において命名された化合物（＝「塩Ｉ」）を含有するカプセルを、以下の組成において製造する：

当該カプセルは、成分を混合し、混合物を硬ゼラチンカプセル、サイズ１に充填することにより製造される。

Claims (4)

1. （ａ）フラボピリドールおよび（ｂ）式Ｉ
   

   

   を有する４−（４−メチルピペラジン−１−イルメチル）−Ｎ−［４−メチル−３−（４−ピリジン−３−イル）ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］−ベンズアミド〔ここで、活性成分（ａ）および（ｂ）は、それぞれの場合において遊離の形態または医薬上許容される塩の形態で存在する。〕および所望により少なくとも１種の医薬上許容される担体を含んでなる、同時的、個別的または逐次的投与のための組合せ剤であって、上記式Ｉの化合物に耐性であるＢｃｒ／Ａｂｌ−陽性白血病の処置用組合せ剤。
2. フラボピリドールおよび４−（４−メチルピペラジン−１−イルメチル）−Ｎ−［４−メチル−３−（４−ピリジン−３−イル）ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］−ベンズアミドが１：１から１：１０の範囲のモル比（フラボピリドール：「式Ｉの化合物」）で存在する、請求項１に記載の組合せ剤。
3. 式Ｉの化合物に耐性のＢｃｒ／Ａｂｌ−陽性白血病がＢｃｒ／Ａｂｌを過剰発現する、請求項１または２に記載の組合せ剤。
4. 式Ｉの化合物に耐性であるＢｃｒ／Ａｂｌ−陽性白血病の処置における同時的、個別的または逐次的使用のための指示書とともに請求項１〜３のいずれか１項に記載の組合せ剤を含んでなる市販用パッケージ。