ES2325247T3 - Composiciones de oligonucleotidos y su uso para inducir apoptosis. - Google Patents
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Abstract
Uso de una composición que comprende una secuencia oligonucleotídica sintética de 3 a 9 bases de longitud que comprende al menos una base nebularina, al menos una base hipoxantina, o al menos una base uracilo, o una combinación de las mismas que induce inhibición de la proliferación celular, inducción de la detención del ciclo celular o inducción de apoptosis en la preparación de un medicamento para inhibición de la proliferación celular, inducción de la detención del ciclo celular o inducción de apoptosis.
Description
Composiciones de oligonucleótidos y su uso para
inducir apoptosis.
La presente invención se refiere a nuevas
composiciones de oligonucleótidos y métodos de utilización de las
mismas para alteración de la función celular con inclusión de la
inhibición de la proliferación celular, inducción de la detención
del ciclo celular e inducción de apoptosis.
La proliferación es la culminación de una
progresión de la célula a través del ciclo celular dando como
resultado la división de una célula en dos células. Las cinco fases
principales del ciclo celular son G_{0}, G_{1}, S, G_{2}, y
M. Durante la fase G_{0}, las células están en reposo. La mayoría
de las células del cuerpo se encuentran en esta etapa en un momento
dado. Durante la fase G_{1}, las células, respondiendo a señales
para dividirse, producen el RNA y las proteínas necesarias para la
síntesis del DNA. Durante la fase S (SE, fase S inicial; SM, fase S
intermedia; y SL, fase S tardía) las células replican su DNA.
Durante la fase G_{2}, las proteínas se elaboran en preparación
para división celular. Durante la fase mitótica (M), la célula se
divide en dos células hijas. Alteraciones en la progresión del ciclo
celular ocurren en todos los cánceres y pueden ser resultado de la
sobre-expresión de genes, mutación de genes
reguladores, o anulación de los puntos de comprobación del
deterioro del DNA (Hochhauser D., Anti-Cancer
Chemotherapeutic Agents, 8:903, 1997).
La apoptosis o muerte celular programada es el
proceso fisiológico para la destrucción y eliminación de células
indeseables y el mecanismo por el cual los agentes
quimioterapéuticos destruyen las células del cáncer. La apoptosis
se caracteriza por cambios morfológicos distintivos en el interior
de las células que incluyen condensación de la cromatina nuclear,
contracción celular, desintegración nuclear, formación de ampollas
en la membrana plasmática, y la formación de cuerpos apoptóticos
unidos a la membrana (Wyllie et al., Int. Rev. Citol.,
68:251, 1980). La translocación de fosfatidilserina desde la cara
interna de la membrana plasmática a la cara externa coincide con la
condensación de la cromatina y está considerada como un
identificador de la apoptosis (Koopman, G. et al., Blood,
84:1415, 1994). Se sabe que el mecanismo real de la apoptosis está
mediado por la activación de una familia de
cisteína-proteinasas, conocidas como caspasas. Sin
embargo, la mayoría de las terapias anti-cáncer de
la técnica anterior, aun cuando dirigidas a la inducción de
apoptosis, han resultado insuficientemente adecuadas para
aplicaciones clínicas. Muchas de estas terapias son ineficientes o
tóxicas, tienen efectos secundarios adversos, dan como resultado el
desarrollo de resistencia a los fármacos o inmunosensibilización, y
son debilitantes para el receptor. Muchas enfermedades o afecciones
se caracterizan por proliferación celular indeseable y son
conocidas por una persona con experiencia ordinaria en las técnicas
médicas o veterinarias. Se necesitan nuevas composiciones y nuevos
métodos para tratar estas enfermedades y afecciones.
Hughes et al. (Biochemistry 22 (1983),
2127-2135) describen composiciones que comprenden
trímeros de inosina o uridina.
Los oligonucleótidos sintéticos son secuencias
poli-aniónicas que se internalizan en las células
(Vlassov et al., Biochim. Biophys. Acta, 11197:95, 1994). Se
han dado a conocer oligonucleótidos sintéticos que se fijan
selectivamente a ácidos nucleicos (Wagner, R., Nature,
372-333, 1994), a proteínas celulares específicas
(Bates et al., J. Biol. Chem., 274:26369, 1999) y a proteínas
nucleares específicas (Scaggiante et al., Eur. J. Biochem.,
252:207, 1998) con objeto de inhibir la proliferación de las células
del cáncer.
Se ha informado que secuencias sintéticas de 27
bases que contienen guanina (G) y cantidades variables de timina
(T) (oligonucleótidos GTn) en donde n es \geq 1 o \leq 7 y en
donde el número de bases es \geq 20 (Scaggiante et al.,
Eur. J. Biochem., 252:207, 1998), inhiben el crecimiento de líneas
de células de cáncer por fijación específica de la secuencia a una
proteína nuclear de 45 kDa, habiéndose informado en cambio que los
GTn, en los cuales el número de bases es \leq 20, son inactivos
frente a las líneas de células de cáncer (Morassutti et al.,
Nucleosides and Nucleotides, 18:1711, 1999). Se han dado a conocer
dos oligonucleótidos sintéticos ricos en GT de 15 y 29 bases con
modificaciones 3'-aminoalquilo que forman cuartetes
G que se unen a nucleolina e inhiben la proliferación de líneas de
células de cáncer (Bates, et al., J. Biol. Chem., 274:26369,
1999). Se ha publicado que el fosforotioato sintético de 6 bases
TTAGGG, que tiene una secuencia idéntica a la de la secuencia de
repetición telomérica de los mamíferos, inhibe la proliferación de
las células del linfoma de Burkitt in vitro e in vivo
(Mata et al., Toxicol. Applied Pharmacol., 144:189, 1997).
Sin embargo, se ha comunicado que el
fosfodiéster-nucleótido sintético de 6 bases TTAGGG
no tiene actividad anti-telomerasa alguna (patente
U.S. No: 5.643.890).
Los desoxirribonucleótidos con actividad
biológica tales como DNA antisentido (DNA de unión a mRNA o formador
de tríplex) o motivos CpG inmunoestimulantes se caracterizan por
motivos lineales específicos de secuencia, estabilizados a menudo
por unión intramolecular de pares de bases. La modificación de la
cadena principal, tal como sustitución de fosforotioato, no afecta
desfavorablemente y a menudo intensifica la actividad de estas
moléculas.
Los autores de la presente invención han
descrito previamente una composición y un método que comprenden
oligonucleótidos sintéticos de 2 a 20 bases 3'-OH,
5'-OH seleccionados del grupo constituido por
(G_{x}T_{y})_{n}, (T_{y}G_{x})_{n,}
a(G_{x}T_{y})_{n},
a(T_{y}G_{x})_{n,}
(G_{x}T_{y})_{n}b, (T_{y}G_{x})_{n}b,
a(G_{x}T_{y})_{n}b,
a(T_{y}G_{x})_{n}b, en donde x e y son números
enteros entre 1 y 7, n es un número entero entre 1 y 12, a y b son
uno o más de As, Cs, Gs o Ts, en donde la secuencia tiene entre 2 y
20 bases y en donde la secuencia induce una respuesta seleccionada
del grupo constituido por inducción de la detención del ciclo
celular, inhibición de la proliferación, inducción de la activación
de las caspasas e inducción de apoptosis en cierto número de
células de cáncer (PCT CA00/01467, WO 01/44465). Estos
oligonucleótidos no están diseñados para tener actividad
antisentido, para bloquear la actividad de la telomerasa o para
formar una triple hélice con el DNA. No se ha comunicado que los
oligonucleótidos que tengan bases distintas de DNA tales como
nebularina, hipoxantina o uracilo induzcan apoptosis.
La mayoría de las terapias
anti-cáncer de la técnica anterior, sea dirigidas a
la inhibición de la proliferación, inducción de la detención del
ciclo celular o inducción de apoptosis han demostrado ser
insuficientemente adecuadas para aplicaciones clínicas. Muchas de
estas terapias son ineficientes o tóxicas, tienen efectos adversos
importantes, dan como resultado el desarrollo de resistencia a los
fármacos o inmunosensibilización, y son debilitantes para el
receptor.
Por consiguiente, existe una necesidad
continuada de nuevas composiciones y nuevos métodos eficaces para el
tratamiento de enfermedades y afecciones caracterizadas por
proliferación celular indeseable, tales como enfermedad autoinmune,
enfermedad linfoproliferativa, inflamación y cáncer. Tales
composiciones y métodos son necesarios para inhibir la
proliferación celular, inducir la detención del ciclo celular, e
inducir apoptosis en las células, particularmente en las células de
cáncer.
\vskip1.000000\baselineskip
La presente invención proporciona el uso de una
composición que comprende una secuencia oligonucleotídica sintética
de 3 a 9 bases de longitud que comprende al menos una base
nebularina, al menos una base hipoxantina, o al menos una base
uracilo, o una combinación de las mismas que induce inhibición de la
proliferación celular, inducción de la detención del ciclo celular
o inducción de apoptosis en la preparación de un medicamento para
inhibición de la proliferación celular, inducción de la detención
del ciclo celular o inducción de apoptosis. Estas secuencias
comprenden opcionalmente además una o más bases guanina o una o más
bases timina, o combinaciones de las mismas.
La presente invención proporciona también
métodos para utilizar estas secuencias sintéticas de
oligonucleótidos por combinación de las mismas con un vehículo
aceptable para producir una composición, y administrar la
composición in vitro o in vivo a fin de inducir la
inhibición de la proliferación celular, inducción de la detención
del ciclo celular o inducción de apoptosis. Células preferidas para
inhibición de la proliferación celular, inducción de la detención
del ciclo celular o inducción de apoptosis son células de
cáncer.
La presente invención proporciona un método para
el tratamiento de una enfermedad o afección caracterizada por
proliferación celular indeseable que comprende administración de una
composición que comprende una secuencia de la presente invención y
un vehículo farmacéuticamente aceptable a un animal o humano que
sufre la enfermedad o afección caracterizada por proliferación
celular indeseable, en una cantidad eficaz para tratar la
enfermedad. Cualquier enfermedad o afección caracterizada por
proliferación celular indeseable puede ser tratada con las
composiciones de la presente invención. Tales enfermedades o
afecciones caracterizadas por proliferación celular indeseable
incluyen, pero sin carácter limitante, enfermedad autoinmune,
inflamación, enfermedad linfoproliferativa, y
cáncer.
cáncer.
La presente invención proporciona el uso de
estas secuencias sintéticas de oligonucleótidos en la preparación
de un medicamento. Tales medicamentos son útiles para el tratamiento
de una enfermedad o afección caracterizada por proliferación
celular indeseable.
Una o más secuencias pueden administrarse con un
vehículo aceptable como una composición in vitro o in
vivo, adicionalmente, las composiciones pueden administrarse
junto con uno o más agentes terapéuticos. Tal administración de las
composiciones puede tener lugar antes, durante o después de la
administración de uno o más agentes terapéuticos conocidos por
quienes poseen una experiencia ordinaria en las técnicas médicas o
veterinarias. Cualquier agente terapéutico conocido por una persona
con experiencia ordinaria en las técnicas médicas o veterinarias, y
empleado para tratar enfermedades, puede utilizarse en combinación
con estas secuencias. Tales combinaciones pueden permitir el uso de
dosis menores de agentes terapéuticos, reduciendo con ello los
efectos secundarios deseables.
La administración de una composición que
comprende una cantidad eficaz de una o más de las secuencias a un
animal o humano es un tratamiento terapéutico que previene, trata o
elimina una enfermedad o afección caracterizada por proliferación
celular indeseable. Tales enfermedades y afecciones son conocidas
por una persona con experiencia ordinaria en la técnicas médicas o
veterinarias e incluyen, pero sin carácter limitante, cáncer,
inflamación, artritis, trastornos linfoproliferativos, asma y
restenosis de arterias subsiguiente a angioplastia.
Los cánceres incluyen, pero sin carácter
limitante, carcinoma de células escamosas, fibrosarcoma, carcinoma
sarcoideo, melanoma, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer
colorrectal, cáncer renal, osteosarcoma, melanoma cutáneo,
carcinoma de células basales, cáncer de páncreas, cáncer de vejiga,
cáncer de cerebro, cáncer de ovario, cáncer de próstata, leucemia,
linfoma y metástasis derivadas de los mismos.
Los métodos y rutas de administración de agentes
terapéuticos para animales y humanos conocidos por una persona con
experiencia ordinaria en la técnica pueden emplearse para
administrar composiciones que comprenden las secuencias y un
vehículo farmacéuticamente aceptable.
La aptitud inesperada y sorprendente de las
secuencias de oligonucleótidos utilizadas en la presente invención
para inhibir la proliferación celular, detener la progresión del
ciclo celular y/o inducir apoptosis en las células aborda una
necesidad largamente insatisfecha en las técnicas médicas y
proporciona un beneficio importante para animales y humanos. Estas
composiciones pueden utilizarse para tratar afecciones de
proliferación celular indeseable en animales y humanos, que
incluyen, pero sin carácter limitante, enfermedad autoinmune,
artritis, asma, restenosis de vasos sanguíneos subsiguiente a
angioplastia, enfermedad linfoproliferativa, inflamación y
cáncer.
De acuerdo con ello, es un objeto de la
invención proporcionar el uso de una composición que comprende una
secuencia oligonucleotídica sintética (en lo sucesivo secuencia) de
3 a 9 bases de longitud, que comprende una o más bases nebularina,
una o más bases hipoxantina, o una o más bases uracilo, o
combinaciones de bases nebularina, hipoxantina y uracilo, que
induce la inhibición de la proliferación celular, inducción de la
detención del ciclo celular o inducción de apoptosis en la
preparación de un medicamento para inhibición de la proliferación
celular, inducción de la detención del ciclo celular o inducción de
apoptosis. Estas secuencias comprenden opcionalmente además una o
más bases guanina o una o más bases timina, o combinaciones de las
mismas. Preferiblemente, las bases guanina y timina son bases
fosfodiéster.
La invención se refiere adicionalmente a una
composición que comprende una secuencia oligonucleotídica sintética,
en la cual la secuencia es NebTNeb, GNebG, NebNebGNebNebNeb,
GGGNebGG, GGGTNebG, GGNebNebGG, GGNebTGG, NebGGTGG, NebGGTGNeb,
GGGTGGNeb o NebGGGTGG para inducción de la inhibición de la
proliferación celular, inducción de la detención del ciclo celular
o inducción de apoptosis, o una composición que comprende una
secuencia oligonucleotídica sintética, en donde la secuencia es
GGITGG, GGGIGG, IIGTII, IGGGTGG, GGGTGGI, IGGGTGGI, GGGTGGIII o GIG
para inducción de la inhibición de la proliferación celular,
inducción de la detención del ciclo celular o inducción de
apoptosis, o una composición que comprende una secuencia
oligonucleotídica sintética, en la cual la secuencia es GGUTGG,
GGGUGG, UUGTUU, UGGGTGG, GGGTGGU, UGGGTGGU, GGGTGGUUU o GUG para
inducción de la inhibición de la proliferación celular, inducción
de la detención del ciclo celular o inducción de apoptosis.
De acuerdo con ello, es un objeto de la presente
invención proporcionar nuevas composiciones que inducen inhibición
de la proliferación celular, inducción de la detención del ciclo
celular o inducción de apoptosis.
Es un objeto de la presente invención
proporcionar métodos de utilización de composiciones que inducen la
inhibición de la proliferación celular, detención de la progresión
del ciclo celular, o inducción de apoptosis.
Un objeto adicional de la presente invención es
proporcionar métodos de utilización de composiciones que inducen la
inhibición de la proliferación celular, detención de la progresión
del ciclo celular, o inducción de apoptosis en células de
cáncer.
Es otro objeto de la presente invención
proporcionar métodos de utilización de las composiciones para tratar
enfermedades en un animal o humano.
Otro objeto de la presente invención es
proporcionar composiciones para uso en la preparación de un
medicamento para el tratamiento de enfermedades en un animal o
humano.
Otro objeto adicional de la presente invención
es proporcionar un método que comprende la administración de una o
más de las composiciones de la presente invención en una cantidad
eficaz para tratar una enfermedad o afección caracterizada por
proliferación celular indeseable en un animal o humano.
Otro objeto adicional de la presente invención
es proporcionar un método que comprende la administración de una o
más de las composiciones de la presente invención en una cantidad
eficaz para tratar una enfermedad o afección en un animal o humano,
en donde la enfermedad o afección se caracteriza por proliferación
celular indeseable y es una enfermedad autoinmune, inflamación,
asma, una enfermedad linfoproliferativa, restenosis de vasos
sanguíneos subsiguiente a angioplastia, o cáncer.
Otro objeto adicional de la presente invención
es proporcionar un método que comprende administración de una o más
de las composiciones utilizadas en la presente invención antes,
durante o después de la administración de otra sustancia
terapéutica para inducir una respuesta celular.
Otro objeto adicional de la presente invención
es proporcionar un método que comprende administración de una o más
de las composiciones utilizadas en la presente invención antes,
durante o después de la administración de otra sustancia
terapéutica para inducir la inhibición de la proliferación celular,
detención de la progresión del ciclo celular, o inducción de
apoptosis en células de cáncer.
Otro objeto adicional de la presente invención
es proporcionar un método que comprende la administración de una o
más de una de las composiciones utilizadas en la presente invención
antes, durante o después de la administración de otra sustancia
terapéutica para tratar una enfermedad en un animal o humano, en
donde la enfermedad se caracteriza por proliferación celular
indeseable.
Otro objeto adicional de la presente invención
es proporcionar un método que comprende la administración de una o
más de una de las composiciones utilizadas en la presente invención
antes, durante o después de la administración de otra sustancia
terapéutica para tratar una enfermedad o afección caracteriza por
proliferación celular indeseable en un animal o humano, en donde la
enfermedad o afección es una enfermedad autoinmune, inflamación,
una enfermedad linfoproliferativa, artritis, asma, restenosis de
vasos sanguíneos tales como arterias subsiguiente a angioplastia, o
cáncer.
Otro objeto de la presente invención es
proporcionar una composición y método eficaces para tratar el
cáncer.
Otro objeto adicional de la presente invención
es proporcionar el uso de estas secuencias sintéticas de
oligonucleótidos en la preparación de un medicamento, siendo el
medicamento útil para tratar una enfermedad o afección caracterizada
por proliferación celular indeseable.
Otro objeto de la presente invención es
proporcionar una composición que es simple de preparar.
Otro objeto de la presente invención es
proporcionar una composición que es mínimamente tóxica para el
receptor.
Estos y otros objetos, características y
ventajas de la presente invención resultarán evidentes después de
una revisión de la descripción detallada que sigue de la realización
descrita y las reivindicaciones del apéndice.
La presente invención proporciona el uso de una
composición que comprende una secuencia oligonucleotídica sintética
de 3 a 9 bases de longitud que comprende al menos una base
nebularina, al menos una base hipoxantina, o al menos una base
uracilo, o una combinación de las mismas, que induce inhibición de
la proliferación celular, inducción de la detención del ciclo
celular o inducción de apoptosis en la preparación de un medicamento
para inhibición de la proliferación celular, inducción de la
detención del ciclo celular o inducción de apoptosis.
Estas secuencias sintéticas de oligonucleótidos
(en lo sucesivo secuencia) de 3 a 9 bases de longitud comprenden
una o más bases distintas de DNA que comprenden una o más bases
nebularina, una o más bases hipoxantina, o una o más bases uracilo,
o combinaciones de bases de nebularina, hipoxantina y uracilo. Estas
secuencias pueden comprender opcionalmente además una o más bases
guanina o una o más bases timina, o combinaciones de las mismas.
Preferiblemente, las bases guanina y timina son bases fosfodiéster.
Una o más de estas secuencias pueden combinarse con un vehículo
aceptable, tal como un vehículo farmacéuticamente aceptable, para
formar una composición. Adicionalmente, estas composiciones pueden
combinarse con uno o más agentes terapéuticos conocidos.
Estas composiciones son útiles en la inducción
de la inhibición de la proliferación celular, inducción de la
detención del ciclo celular o inducción de apoptosis. En una
realización, una composición que comprende una secuencia y un
vehículo farmacéuticamente aceptable se administra a un animal o
humano, en una cantidad eficaz para inducir la inhibición de la
proliferación celular, inducir la detención del ciclo celular o
inducir apoptosis en el animal o humano. En una realización
preferida, las células son células de cáncer.
Las composiciones pueden ser utilizadas para
tratar enfermedades o afecciones caracterizadas por proliferación
celular indeseable.
En una realización preferida, una composición
que comprende una secuencia y un portador farmacéuticamente
aceptable, se administra a un animal o humano que padece cáncer en
una cantidad eficaz para tratar el cáncer en el animal o humano. La
aptitud inesperada de estas secuencias para inducción de la
inhibición de la proliferación celular, inducción de la detención
del ciclo celular o inducción de apoptosis, aborda una necesidad
insatisfecha desde hace mucho tiempo en las técnicas médicas y
proporciona un beneficio importante para animales y humanos.
La presente invención proporciona adicionalmente
una composición que comprende una secuencia oligonucleotídica
sintética, en donde la secuencia es NebTNeb, GNebG,
NebNebGNebNebNeb, GGGNebGG, GGGTNebG, GGNebNebGG, GGNebTGG,
NebGGTGG, NebGGTGNeb, GGGTGGNeb o NebGGGTGG para inducir la
inhibición de la proliferación celular, inducción de la detención
del ciclo celular o inducción de apoptosis, o una composición que
comprende una secuencia oligonucleotídica sintética, en donde la
secuencia es GGITGG, GGGIGG, IIGTII, IGGGTGG, GGGTGGI, IGGGTGGI,
GGGTGGIII o GIG, o inducir la inhibición de la proliferación
celular, inducción de la detención del ciclo celular o inducción de
apoptosis, o una composición que comprende una secuencia
oligonucleotídica sintética, en donde la secuencia es GGUTGG,
GGGUGG, UUGTUU, UGGGTGG, GGGTGGU, UGGGTGGU, GGGTGGUUU o GUG para
inducir la inhibición de la proliferación celular, inducción de la
detención del ciclo celular o inducción de apoptosis.
La notación que sigue se utiliza para describir
las secuencias de bases en las secuencias de oligonucleótidos
utilizadas en la presente invención: G = Guanina, I = Hipoxantina;
Neb = Nebularina; T = Timina; y U = uracilo. Como se utiliza en
esta memoria, secuencia se refiere a un oligonucleótido sintético
que comprende al menos una de las bases I, N o U, o combinaciones
de las mismas, que contiene opcionalmente además al menos una de
las bases G o T, o combinaciones de las mismas. La secuencia tiene
preferiblemente una longitud de 3 a 9 bases.
Como se utiliza en esta memoria, el término
"respuesta" se refiere a inhibición de la proliferación,
inducción de la detención del ciclo celular, o inducción de
apoptosis, en las células. Puede seleccionarse cualquier célula,
incluyendo sin limitación células de cáncer, células inmunitarias,
células sinoviales y células endoteliales. Una célula preferida
para inducción de la inhibición de la proliferación celular,
inducción de la detención del ciclo celular o inducción de
apoptosis es una célula de cáncer.
Como se utiliza en esta memoria, las expresiones
"tratamiento terapéutico" y "cantidad eficaz para" hacen
referencia a una cantidad de una secuencia eficaz para inducir la
inhibición de la proliferación celular, detención de la progresión
del ciclo celular, o inducción de apoptosis.
Como se utiliza en esta memoria, la expresión
"eficaz en células sensibles" hace referencia a la aptitud de
la secuencia para causar una respuesta en una célula, seleccionada
de inhibición de la proliferación, inducción de la detención del
ciclo celular, o inducción de apoptosis.
Como se utiliza en esta memoria, las expresiones
"tratamiento terapéutico", "cantidad eficaz" y "cantidad
eficaz para" se refieren a una cantidad de una secuencia eficaz
para causar una respuesta en una célula o para tratar una
enfermedad o afección caracterizada por proliferación celular
indeseable.
Como se utiliza en esta memoria, el término
"quimioterapéutico" es cualquier agente aprobado por una
agencia reguladora de un gobierno de país o estado o incluido en la
Farmacopea de los EE.UU. u otra farmacopea reconocida generalmente
para tratar enfermedades en un animal o humano, particularmente
cáncer.
Como se utiliza en esta memoria, el término
"enfermedad" hace referencia a una condición en la cual la
salud corporal está deteriorada. Enfermedad y afección se utilizan
intercambiablemente a lo largo de esta memoria descriptiva.
Como se utiliza en esta memoria, el término
"antineoplástico" hace referencia a la prevención del
desarrollo, maduración, proliferación o propagación de células de
cáncer.
La administración de una composición que
comprende una cantidad eficaz de una secuencia utilizada en la
presente invención y un portador aceptable a un animal o humano, es
un tratamiento terapéutico que previene, trata o elimina una
enfermedad o afección que incluye, pero sin carácter limitante,
cáncer, artritis, trastornos linfoproliferativos, inflamación,
asma, restenosis de vasos sanguíneos tales como arterias
subsiguiente a angioplastia. Los cánceres incluyen, pero sin
carácter limitante, carcinoma de células escamosas, fibrosarcoma,
carcinoma sarcoideo, melanoma, cáncer de mama, cáncer de pulmón,
cáncer colorrectal, cáncer renal, osteosarcoma, melanoma cutáneo,
carcinoma de células basales, cáncer de páncreas, cáncer de vejiga,
cáncer de cerebro, cáncer de ovario, cáncer de próstata, leucemia,
linfoma y metástasis derivadas de los mismos. Formas de artritis
incluyen, pero sin carácter limitante, artritis juvenil,
osteoartritis y artritis reumatoide.
La eficacia terapéutica de estas secuencias
puede incrementarse por métodos que incluyen, pero sin carácter
limitante, modificación química de bases, azúcares o cadena
principal de fosfato, suplementación química, amplificación
biotecnológica de secuencias utilizando plásmidos bacterianos que
contienen las secuencias apropiadas, complejación a portadores
biológicos o químicos, o acoplamiento de las secuencias a ligandos o
anticuerpos dirigidos a tipos de tejidos o tipos de células.
Composiciones que comprenden una o más
secuencias y un portador farmacéuticamente aceptable se preparan
poniendo en asociación uniforme e íntimamente la secuencia y el
portador farmacéuticamente aceptable. Los términos "portador
farmacéuticamente aceptable" o "vehículo farmacéuticamente
aceptable" se utilizan en esta memoria para significar, sin
limitación, cualquier líquido, sólido o semisólido, incluyendo, pero
sin carácter limitante, agua o solución salina, un gel, crema,
pomada, disolvente, diluyente, base fluida de ungüento, ungüento,
pasta, implante, liposoma, micela, micela gigante, y análogos, que
es adecuado para uso en contacto con los tejidos vivos animales o
humanos sin causar respuestas fisiológicas adversas, y que no
interacciona con los otros componentes de la composición de manera
deletérea. Otros portadores o vehículos farmacéuticamente aceptables
conocidos por una persona con experiencia en la técnica pueden
emplearse para producir composiciones para suministro de las
secuencias de oligonucleótidos de la presente invención. Portadores
líquidos son portadores acuosos, portadores no acuosos o de ambos
tipos e incluyen, pero sin carácter limitante, suspensiones acuosas,
dimetil-sulfóxido, etanol, emulsiones de aceite,
emulsiones de agua en aceite, emulsiones de agua en aceite en agua,
emulsiones específicas del sitio, emulsiones de residencia
prolongada, emulsiones pegajosas, microemulsiones y nanoemulsiones.
Los portadores sólidos son portadores biológicos, portadores
químicos o de ambos tipos e incluyen, pero sin carácter limitante,
sistemas de vectores virales, partículas, micropartículas,
nanopartículas, microesferas, nanoesferas, minibombas, extractos de
pared de células bacterianas y polímeros biodegradables o no
biodegradables naturales o sintéticos que permiten una liberación
sostenida de las secuencias. Las emulsiones, minibombas y polímeros
pueden implantarse en la proximidad del punto en el que se requiere
el suministro. Métodos utilizados para complejar una o más
secuencias a un portador sólido incluyen, pero sin carácter
limitante, adsorción directa a la superficie del portador sólido,
acoplamiento covalente a la superficie del portador sólido, sea
directamente o a través de un resto enlazador, y acoplamiento
covalente o acoplamiento electrostático al polímero utilizado para
fabricar el portador sólido. Opcionalmente, una o más secuencias
pueden estabilizarse por la adición de polímeros no iónicos o
iónicos tales como monooleatos de polioxietilensorbitán (Tweens),
ácido hialurónico o hidróxido de aluminio. Pueden emplearse otros
portadores conocidos por una persona con experiencia ordinaria en
la técnica.
Portadores acuosos preferidos incluyen, pero sin
carácter limitante, agua, solución salina y tampones
farmacéuticamente aceptables. Portadores no acuosos preferidos
incluyen, pero sin carácter limitante, un aceite mineral o un
aceite neutro que incluye, pero sin carácter limitante, un
diglicérido, un triglicérido, un fosfolípido, un lípido, un aceite
y mezclas de los mismos, en donde el aceite contiene una mezcla
apropiada de ácidos grasos poliinsaturados y saturados. Ejemplos
incluyen, pero sin carácter limitante, aceite de soja, aceite de
canola, aceite de palma, aceite de oliva y migliol, en donde los
ácidos grasos pueden ser saturados o insaturados. Opcionalmente,
pueden incluirse excipientes, con indiferencia del portador
farmacéuticamente aceptable utilizado para presentar la secuencia a
las células sensibles. Estos excipientes incluyen, pero sin carácter
limitante, antioxidantes, tampones, y bacteriostáticos, y pueden
incluir agentes de suspensión y agentes espesantes.
Las secuencias utilizadas en la presente
invención pueden combinarse con portadores farmacéuticamente
aceptables y administrarse como composiciones in vitro o
in vivo. Formas de administración incluyen, pero sin
carácter limitante, inyecciones, soluciones, cremas, geles,
implantes, bombas, ungüentos, emulsiones, suspensiones,
microesferas, partículas, micropartículas, nanopartículas,
liposomas, pastas, parches, tabletas, dispositivos de suministro
transdérmico, pulverizaciones, aerosoles, u otros medios familiares
para una persona con experiencia ordinaria en la técnica. Tales
portadores farmacéuticamente aceptables son comúnmente conocidos por
una persona con experiencia ordinaria en la técnica. Pueden
prepararse formulaciones farmacéuticas por procedimientos conocidos
en la técnica utilizando ingredientes bien conocidos y fácilmente
disponibles. Por ejemplo, los compuestos pueden formularse con
excipientes, diluyentes, o portadores comunes, y conformarse en
tabletas, cápsulas, suspensiones, polvos, y análogos. Ejemplos de
excipientes, diluyentes, y portadores que son adecuados para tales
formulaciones incluyen los siguientes: cargas y extendedores (v.g.,
almidón, azúcares, manitol, y derivados de sílice); agentes
aglomerantes (v.g., carboximetil-celulosa y otros
derivados de celulosa, alginatos, gelatina, y
polivinilpirrolidona); agentes humectantes (v.g., glicerol); agentes
desintegrantes (v.g., carbonato de calcio y bicarbonato de sodio);
agentes para retardar la disolución (v.g., parafina), aceleradores
de la resorción (v.g., compuestos de amonio cuaternario); agentes
tensioactivos (v.g., alcohol cetílico, monoestearato de glicerol);
portadores adsorbentes (v.g., caolín y bentonita); emulsionantes;
conservantes; edulcorantes; estabilizadores; agentes colorantes;
agentes perfumantes; agentes saborizantes; lubricantes (v.g., talco,
estearato de calcio y magnesio); polietil-glicoles
sólidos, y mezclas de los mismos.
Las formulaciones pueden estar constituidas de
tal modo que liberen el ingrediente activo solo o preferiblemente
en una localización particular, a ser posible a lo largo de un
periodo de tiempo. Tales combinaciones proporcionan aún un
mecanismo adicional para controlar la cinética de liberación. Los
revestimientos, envolturas, y matrices protectoras pueden estar
hechos, por ejemplo, de sustancias polímeras o ceras.
Una o más secuencias pueden administrarse solas,
o en combinación con otras modalidades terapéuticas que incluyen,
pero sin carácter limitante, agentes quimioterapéuticos, agentes
inmunoterapéuticos, agentes antimicrobianos, agentes antivirales o
en combinación con terapia de radiación. Los agentes
quimioterapéuticos incluyen, pero sin carácter limitante,
anti-metabolitos, y agentes dañinos para el DNA,
desestabilizadores de los microtúbulos, estabilizadores de los
microtúbulos, despolimerizantes de la actina, inhibidores del
crecimiento, inhibidores de las topoisomerasas, inhibidores de
HMG-CoA, inhibidores de las purinas, inhibidores de
las pirimidinas, inhibidores de las metaloproteinasas, inhibidores
de CDK, inhibidores de la angiogénesis, intensificadores de la
diferenciación e inmunoterapéuticos. Los agentes
anti-artríticos incluyen, pero sin carácter
limitante, agentes anti-inflamatorios,
anti-metabolitos, pro-apoptóticos,
deteriorantes del DNA, desestabilizadores de los microtúbulos,
estabilizadores de los microtúbulos, despolimerizantes de la actina,
inhibidores del crecimiento, inhibidores de las topoisomerasas,
inhibidores de las purinas, inhibidores de las pirimidinas,
inhibidores de las metaloproteinasas, inhibidores de CDK, e
inhibidores de la angiogénesis.
Las rutas de administración son conocidas por
quienes poseen una experiencia ordinaria en la técnica e incluyen,
pero sin carácter limitante, oral (v.g. bucal o sublingual), rectal,
como supositorio, tópica, parenteral, subcutánea, transdérmica,
sub-dérmica, intramuscular, intraperitoneal,
intravesicular, intraarticular, intravenosa, intradérmica,
intracraneal, intralesional, intratecal, intratumoral, intraocular,
aerosol, intrapulmonar, intraespinal, intraprostática, sublingual,
colocación en el interior de cavidades del cuerpo, inhalación nasal,
inhalación pulmonar, impresión en la piel y electroporación,
intrauterina, vaginal, en una cavidad del cuerpo, administración
quirúrgica, en la localización de un tumor o lesión interna,
directamente en los tumores, en el lumen o parénquima de un órgano,
y en la médula ósea. Técnicas útiles en las diversas formas de
administración arriba mencionadas incluyen, pero sin carácter
limitante, aplicación tópica, ingestión, administración quirúrgica,
inyecciones, pulverizaciones, dispositivos de suministro
transdérmico, bombas osmóticas, electrodeposición directa en un
sitio deseado, u otros medios familiares para una persona con
experiencia ordinaria en la técnica. Los sitios de aplicación
pueden ser externos, tales como en la epidermis, o internos, por
ejemplo una úlcera gástrica, un campo quirúrgico, o cualquier otro
lugar.
Las composiciones utilizadas en la presente
invención pueden aplicarse en la forma de cremas, geles, soluciones,
suspensiones, liposomas, partículas u otros medios conocidos para
una persona con experiencia en la técnica de la formulación y
suministro de las composiciones. Pueden utilizarse tamaños de
partícula ultrafinos para suministro de agentes terapéuticos por
inhalación. Algunos ejemplos de formulaciones apropiadas para
administración subcutánea incluyen, pero sin carácter limitante,
implantes, depósitos, agujas, cápsulas, y bombas osmóticas. Algunos
ejemplos de formulaciones apropiadas para administración vaginal
incluyen, pero sin carácter limitante, cremas y anillos. Algunos
ejemplos de formulaciones apropiadas para administración oral
incluyen pero sin carácter limitante: píldoras, líquidos, jarabes,
y suspensiones. Algunos ejemplos de formulaciones apropiadas para
administración transdérmica incluyen, pero sin carácter limitante,
geles, cremas, pastas, parches, pulverizaciones, y geles. Algunos
ejemplos de mecanismos de suministro apropiados para administración
subcutánea incluyen, pero sin carácter limitante, implantes,
depósitos, agujas, cápsulas, y bombas osmóticas. Formulaciones
adecuadas para administración parenteral incluyen, pero sin
carácter limitante, soluciones de inyección estériles acuosas y no
acuosas que pueden contener antioxidantes, tampones,
bacteriostáticos y solutos que hacen la formulación isotónica con
la sangre del receptor propuesto, y suspensiones estériles acuosas y
no acuosas que pueden incluir agentes de suspensión y agentes
espesantes. Soluciones y suspensiones de inyección extemporánea
pueden prepararse a partir de polvos, gránulos y tabletas estériles
utilizados comúnmente por una persona con experiencia ordinaria en
la técnica.
Realizaciones en las cuales las composiciones
utilizadas en la invención se combinan con, por ejemplo, uno o más
portadores o excipientes farmacéuticamente aceptables pueden
presentarse convenientemente en forma de dosis unitaria y se pueden
preparar por técnicas farmacéuticas convencionales. Dichas técnicas
incluyen el paso de puesta en asociación de las composiciones que
contienen el ingrediente activo y el o los portadores o excipientes
farmacéuticos. En general, las formulaciones se preparan poniendo en
asociación uniforme e íntimamente el ingrediente activo con
portadores líquidos. Formulaciones de dosificación unitaria
preferidas son aquéllas que contienen una dosis o unidad, o una
fracción apropiada de la misma, del ingrediente administrado. Debe
entenderse que, además de los ingredientes mencionados
particularmente arriba, las formulaciones que comprenden las
composiciones de la presente invención pueden incluir otros agentes
utilizados comúnmente por una persona con experiencia ordinaria en
la técnica.
El volumen de administración variará dependiendo
de la ruta de administración. Tales volúmenes son conocidos por una
persona con experiencia ordinaria en la técnica de la administración
de composiciones a animales o humanos. Dependiendo de la ruta de
administración, el volumen por dosis es con preferencia
aproximadamente 0,001 a 100 ml de dosis, de modo más preferible
aproximadamente 0,01 a 50 ml de dosis, y de modo muy preferible
aproximadamente 0,1 a 30 ml de dosis. Preferiblemente, la cantidad
de secuencia administrada por dosis es de aproximadamente 0,001 a
100 mg/kg, de modo más preferible desde aproximadamente 0,01 a 10
mg/kg y de modo muy preferible desde aproximadamente 0,1 a 5 mg/kg.
La secuencia, combinación de secuencias, y/o agentes terapéuticos
adicionales pueden administrarse en tratamiento de una sola dosis,
en tratamientos de dosis múltiples o por infusión continua de
acuerdo con un protocolo y lo largo de un periodo de tiempo
apropiados para la enfermedad que se esté tratando, el estado del
receptor y la ruta de administración. Además, la secuencia puede
administrarse antes, al mismo tiempo que o después de la
administración del agente terapéutico. La secuencia particular y el
agente terapéutico particular administrado, la cantidad por dosis, y
la ruta de administración deben ser decididas por el profesional
utilizando métodos conocidos por los expertos en la técnica y
dependerán de la enfermedad o afección que se esté tratando, por
ejemplo el tipo de cáncer, la gravedad del cáncer, la localización
del cáncer y otros factores clínicos tales como tamaño, peso y
estado físico del receptor.
Una secuencia en combinación con agente
terapéutico, por ejemplo un agente quimioterapéutico, se administra
a un animal que padece cáncer o artritis en una cantidad eficaz para
mejorar el efecto antineoplástico de un agente quimioterapéutico o
efecto anti-artrítico de un agente
anti-artrítico. Preferiblemente, la cantidad de
agente terapéutico administrada por dosis es de aproximadamente
0,001 a 1000 mg/m^{2} o desde aproximadamente 0,01 a 1000 mg/kg,
de modo más preferible desde aproximadamente 0,01 a 500 mg/m^{2} o
aproximadamente 0,01 a 500 mg/kg y de modo muy preferible desde
aproximadamente 0,1 a 100 mg/m^{2} o aproximadamente 0,1 a 100
mg/kg. La secuencia particular y el agente terapéutico particular
administrado, la cantidad por dosis, el protocolo de dosificación y
la ruta de administración deberían ser decididos por el profesional
utilizando métodos conocidos por los expertos de la técnica y
dependerán del tipo de enfermedad, la gravedad de la enfermedad, la
localización de la enfermedad y otros factores clínicos tales como
el tamaño peso y estado físico del receptor. Adicionalmente, pueden
emplearse de modo opcional ensayos in vitro para ayudar a
identificar los intervalos óptimos para administración de la
secuencia y de la secuencia más el agente terapéutico. Diversos
ensayos útiles para este propósito se describen en PCT CA00/01467
(WO 01/44465).
Ensayos adicionales para evaluación de la
eficacia de las secuencias de la presente invención, y para
evaluación de la eficacia de estas secuencias en combinación con
otros agentes terapéuticos se describen por Oncogene Research
Products, P.O. Box 12087, La Jolla, California, 92039 (Apoptosis
Catalog and Technical Guide 2002-2003,
especialmente las páginas 5-295). Tales ensayos
incluyen ensayos designados para analizar la fragmentación del DNA,
apoptosis, marcadores mitocondriales, marcadores del retículo
endoplásmico, nucleosomas libres, proteínas de la matriz nuclear,
detección y actividad de numerosas caspasas y proteínas afines, con
inclusión, pero sin carácter limitante, de las caspasas 1 a 14,
glutatión, superóxido-dismutasa, miembros de la
familia bcl-2, análisis de la superfamilia
Fas/TNR-R, productos afines a PARP, análisis de
transductores de señales apoptóticas, análisis de diversos
receptores de señalización con inclusión de receptores de muerte,
Apo2, receptores de reclamo, análisis de proteínas apoptóticas de
membrana, marcadores apoptóticos del sistema nervioso, numerosos
marcadores para el ciclo celular y la proliferación celular,
quinasas mitóticas, ensayos de bromodesoxiuridina, y ensayos de
p53. La evaluación de la eficacia de las secuencias de la presente
invención puede evaluarse también en términos de otros agentes, y
agentes terapéuticos, tales como inductores de apoptosis y reactivos
de sincronización celular como se describen por Oncogene Research
Products, P.O. Box 12087, La Jolla, California, 92039 (Apoptosis
Catalog and Technical Guide 2002-2003, especialmente
las páginas 99-104 y las páginas
214-255).
Tales agentes incluyen, pero sin carácter
limitante, actinomicina D, amphidocolina, A23187, cafeína,
camptotecina, cicloheximida, dexametasona, doxorrubicina,
5-fluorouracilo, hidroxiurea, paclitaxel,
estaurosporina, timidina, vinblastina, ácido retinoico, etoposido,
ácido okadaico, vincristina y metotrexato.
Los ejemplos que siguen servirán para ilustrar
adicionalmente la presente invención sin constituir al mismo
tiempo, no obstante, limitación alguna de la misma.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
1
Las secuencias fueron preparadas por
Sigma-Genosys (Woodlands, TX, EE.UU.). Nebularina
(2'-desoxinebulari-na), inosina y
uracil-fosforamiditos se adquirieron de Glen
Research, Sterling, VA, EE.UU. Las secuencias se dispersaron en
agua desionizada en autoclave o en un tampón farmacéuticamente
aceptable tal como, pero sin carácter limitante, solución salina
inmediatamente antes de su utilización.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
2
Se obtuvieron células de leucemia humana de las
células T Jurkat de la American Type Culture Collection (Rokville,
MD). Las células T Jurkat se mantuvieron en medio RPMI 1640,
suplementado con suero bovino fetal al 10% desactivado por
calentamiento (56ºC, 30 min) (todo ello de Sigma Aldrich, Canadá) en
una atmósfera con 5% de CO_{2} a 37ºC. Las células se sembraron a
2 x 10^{5} células/ml de medio en placas de cultivo de tejidos de
6 pocillos con fondo plano y se incubaron con las secuencias de la
presente invención.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
3
La redistribución de la fosfatidilserina en la
membrana plasmática es una característica de las células que sufren
apoptosis (Martin et al., J. Exp. Med., 182:1545, 1995). La
redistribución de la fosfatidilserina en la membrana plasmática
durante la apoptosis se midió por citometría de flujo utilizando
annexina V conjugada con FITC (BD Pharmingen, San Diego, CA). Las
células de leucemia de las células T Jurkat se incubaron a 2,5 x
10^{5} células/ml durante 48 horas con 53,0 \muM de las
secuencias de la presente invención. El porcentaje de células en
apoptosis después de exposición a las secuencias se consignó en la
Tabla 1. El porcentaje de apoptosis en las células de leucemia de
las células T Jurkat sin tratar era 5%.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
Como se muestra en la Tabla 1, todas las
secuencias excepto NebNebNebNebNebNeb y NebNebTNebNeb inducían
apoptosis de las células de la leucemia de las células T
Jurkat.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
4
Se incubaron células de leucemia de las células
T Jurkat a 2,5 x 10^{5} células/ml durante 48 horas con varias
secuencias de la presente invención. Se midió la proliferación
celular utilizando reducción con
dimetiltiazol-difenil-tetrazolio
(MTT) (Mosman et al. J. Immunol. Methods 65:55, 1983). La
reducción con MTT se midió a una longitud de onda de 570 mm
utilizando un lector espectrofotométrico múltiple. La etapa del
ciclo celular se determinó utilizando un kit comercial
(CycleTest^{TM} Plus DNA; Becton Dickinson). La acumulación de
células en las fases G0/G1, inicial (SE), intermedia (SM), tardía
(SL) o G2/M se analizó por citometría de flujo utilizando el
software MODFIT LT (Verity Software House Inc., Topsham, MA,
EE.UU.). El porcentaje de células en apoptosis se determinó por
annexina-V FITC como se describe en el Ejemplo 3. La
inhibición de la proliferación celular, la detención del ciclo
celular y la inducción de apoptosis después del tratamiento con las
secuencias se consigna en la Tabla 2.
Como se muestra en la Tabla 2, todas estas
secuencias o bien inhibían la proliferación celular, detenían el
ciclo celular o inducían apoptosis de las células de leucemia de las
células T Jurkat.
Ejemplo
5
Se incubaron células de leucemia de las células
T Jurkat a 2,5 x 10^{5} células/ml durante 48 horas con las
secuencias. La inhibición de la proliferación se midió por reducción
con MTT, la detención del ciclo celular por medio del kit
CycleTest^{TM} Plus DNA, y la apoptosis se determinó por
annexina-V FITC como se describe en el Ejemplo 3.
La inhibición de la proliferación celular, la detención del ciclo
celular y la inducción de apoptosis después del tratamiento con las
secuencias se consignaron en la Tabla 3.
Como se muestra en la Tabla 3, todas estas
secuencias inhibían la proliferación celular, detenían el ciclo
celular o inducían apoptosis de las células de la leucemia de las
células T Jurkat.
Claims (10)
1. Uso de una composición que comprende una
secuencia oligonucleotídica sintética de 3 a 9 bases de longitud
que comprende al menos una base nebularina, al menos una base
hipoxantina, o al menos una base uracilo, o una combinación de las
mismas que induce inhibición de la proliferación celular, inducción
de la detención del ciclo celular o inducción de apoptosis en la
preparación de un medicamento para inhibición de la proliferación
celular, inducción de la detención del ciclo celular o inducción de
apoptosis.
2. El uso de la reivindicación 1, en donde la
secuencia comprende adicionalmente al menos una base guanina o al
menos una base timina, o una combinación de las mismas.
3. El uso de la reivindicación 1 ó 2, en donde
la célula es una célula de cáncer, una célula endotelial, una
célula sinovial, o una célula del sistema inmunitario.
4. Uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a
3, en donde la composición comprende adicionalmente un portador
aceptable.
5. Uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a
4 en la preparación de un medicamento para el tratamiento de una
enfermedad o afección caracterizada por proliferación celular
indeseable.
6. El uso de la reivindicación 5, en donde la
enfermedad o afección es cáncer, artritis, una enfermedad
linfoproliferativa, inflamación, asma, o restenosis de vasos
sanguíneos subsiguiente a angioplastia.
7. Uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a
6, en donde la composición comprende un agente terapéutico
adicional.
8. Una composición que comprende una secuencia
oligonucleotídica sintética, en donde la secuencia es
NebTNeb,
GNebG, NebNebGNebNebNeb, GGGNebGG, GGGTNebG, GGNebNebGG, GGNebTGG, NebGGTGG,
NebGGTGNeb, GGGTGGNeb o NebGGGTGG para inducir la inhibición de la proliferación celular, inducción de la detención del ciclo celular o inducción de apoptosis.
GNebG, NebNebGNebNebNeb, GGGNebGG, GGGTNebG, GGNebNebGG, GGNebTGG, NebGGTGG,
NebGGTGNeb, GGGTGGNeb o NebGGGTGG para inducir la inhibición de la proliferación celular, inducción de la detención del ciclo celular o inducción de apoptosis.
9. Una composición que comprende una secuencia
oligonucleotídica sintética, en donde la secuencia es GGITGG,
GGGIGG, IIGTII, IGGGTGG, GGGTGGI, IGGGTGGI, GGGTGGIII o GIG para
inducir la inhibición de la proliferación celular, inducción de la
detención del ciclo celular o inducción de apoptosis.
10. Una composición que comprende una secuencia
oligonucleotídica sintética, en donde la secuencia es GGUTGG,
GGGUGG, UUGTUU, UGGGTGG, GGGTGGU, UGGGTGGU, GGGTGGUUU o GUG para
inducir la inhibición de la proliferación celular, inducción de la
detención del ciclo celular o inducción de apoptosis.
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