ES2321249T3

ES2321249T3 - Inhibidores de proteasa multicalitica a base de alfa-acetoamidas.

Info

Publication number: ES2321249T3
Application number: ES98953274T
Authority: ES
Inventors: Sankar Chatterjee; John P. Mallamo
Original assignee: Cephalon LLC
Current assignee: Cephalon LLC
Priority date: 1997-10-07
Filing date: 1998-10-07
Publication date: 2009-06-03
Anticipated expiration: 2018-10-07
Also published as: EP1027056A4; EP1027056B1; JP2002516817A; KR100648578B1; AU1068599A; US6096778A; HK1028568A1; WO1999017778A1; ATE423562T1; DE69840603D1; KR20010030944A; CN1274285A; CA2303428C; CA2303428A1; NZ503308A; CN1172672C; AU751963B2; US6310057B1; JP4317920B2; EP1027056A1

Abstract

Un compuesto que tiene la fórmula 1: ** ver fórmula** en la que R1 se selecciona entre el grupo constituido por -C*N, -C(=O)OR8, ftalimido, -NHSO2R8 y -NH-J; R 2 se selecciona entre el grupo constituido por H, hidroxilo, alquilo que tiene de 1 a 10 átomos de carbono y cicloalquilo que tiene de 3 a 7 átomos de carbono; R3 se selecciona entre el grupo constituido por -(CH2)m-NHC(-N-R5)-NH2, -R6-H, -R6-J, -R12-(J)2, -R6-NO2, -R6- CN, -(CH 2) m-NH 2 y -(CH 2) m-NH-J; R4 es -CH(CH2R7)-Q; R5 se selecciona entre el grupo constituido por -NO2, -CN y -J; R6 es -(CH2)m-NH-C(=NH)-NH-; R12 es -(CH2)m-NH-C(=NH)-N-; Q es -C(=O)C(=O)NH-X-A-Y; R7 se selecciona entre el grupo constituido por fenilo y alquilo que tiene de 1 a 8 carbonos, estando el mencionado grupo alquilo opcionalmente sustituido con uno o varios átomos de halógeno, grupos arilo seleccionados entre fenilo, tolilo, naftilo, antracilo, fenantrilo, pirenilo y bifenilo, o grupos heteroarilo seleccionados entre piridilo, pirimidilo, pirrolilo, furilo, tienilo, imidazolilo, triazolilo, tetrazolilo, quinolilo, isoquinolilo, benzoimidazolilo, tiazolilo, bipiridilo, piridiltiofenilo, pirimidiltiofenilo, isoxazoliltiofenilo, pirazoliltiofenilo, ftalimido y benzotiazolilo; R 8 se selecciona entre el grupo constituido por hidrógeno y alquilo que tiene de 1 a 6 carbonos, estando el mencionado grupo alquilo opcionalmente sustituido con uno o varios átomos de halógeno, grupos arilo seleccionados entre fenilo, tolilo, naftilo, antracilo, fenantrilo, pirenilo y bifenilo, o grupos heteroarilo seleccionados entre piridilo, pirimidilo, pirrolilo, furilo, tienilo, imidazolilo, triazolilo, tetrazolilo, quinolilo, isoquinolilo, benzoimidazolilo, tiazolilo, bipiridilo, piridiltiofenilo, pirimidiltiofenilo, isoxazoliltiofenilo, pirazoliltiofenilo, ftalimido y benzotiazolilo; X es un enlace o -O-; A es un grupo alquileno de 1 a 8 carbonos, estando el mencionado grupo alquileno opcionalmente sustituido con uno o varios átomos de halógeno, grupos arilo seleccionados entre fenilo, tolilo, naftilo, antracilo, fenantrilo, pirenilo y bifenilo, o grupos heteroarilo seleccionados entre piridilo, pirimidilo, pirrolilo, furilo, tienilo, imidazolilo, triazolilo, tetrazolilo, quinolilo, isoquinolilo, benzoimidazolilo, tiazolilo, bipiridilo, piridiltiofenilo, pirimidiltiofenilo, isoxazoliltiofenilo, pirazoliltiofenilo, ftalimido y benzotiazolilo; Y es N(R 13)-G; G se selecciona entre el grupo constituido por H, un grupo de bloqueo seleccionado entre benciloxicarbonilo, toluenosulfonilo, t-butoxicarbonilo, metilsulfonilo y pirazinoílo, SO2R9, -C(=O)NHR10, -C(=S)NHR10 y -CO2R9; o el resto-A-Y forma un anillo de lactama de 5, 6 o 7 miembros; R9 se selecciona entre el grupo constituido por alquilo que tiene de 1 a 6 carbonos, arilo seleccionado entre fenilo, tolilo, naftilo, antracilo, fenantrilo, pirenilo y bifenilo, o heteroarilo seleccionado entre piridilo, pirimidilo, pirrolilo, furilo, tienilo, imidazolilo, triazolilo, tetrazolilo, quinolilo, isoquinolilo, benzoimidazolilo, tiazolilo, bipiridilo, piridiltiofenilo, pirimidiltiofenilo, isoxazoliltiofenilo, pirazoliltiofenilo, ftalimido y benzotiazolilo; estando los mencionados grupos alquilo, arilo o heteroarilo opcionalmente sustituidos con K; R10 se selecciona entre el grupo constituido por H, alquilo que tiene de 1 a 6 carbonos, arilo seleccionado entre fenilo, tolilo, naftilo, antracilo, fenantrilo, pirenilo y bifenilo, o heteroarilo seleccionado entre piridilo, pirimidilo, pirrolilo, furilo, tienilo, imidazolilo, triazolilo, tetrazolilo, quinolilo, isoquinolilo, benzoimidazolilo, tiazolilo, bipiridilo, piridiltiofenilo, pirimidiltiofenilo, isoxazoliltiofenilo, pirazoliltiofenilo, ftalimido y benzotiazolilo; estando los mencionados grupos alquilo, arilo o heteroarilo opcionalmente sustituidos con K; R13 se selecciona entre el grupo constituido por H y alquilo que tiene de 1 a 6 carbonos; J es un grupo de bloqueo seleccionado entre benciloxicarbonilo, toluenosulfonilo, t-butoxicarbonilo, metilsulfonilo y pirazinoílo; K se selecciona entre el grupo constituido por halógeno, CO2R10, R10OC(=O), R10OC(=O)NH, OH, CN, NO2, NR 10R 11, N=C(NR 10R 11) 2, SR 10, OR 10, fenilo, naftilo, heteroarilo seleccionado entre piridilo, pirimidilo, pirrolilo, furilo, tienilo, imidazolilo, triazolilo, tetrazolilo, quinolilo, isoquinolilo, benzoimidazolilo, tiazolilo, bipiridilo, piridiltiofenilo, pirimidiltiofenilo, isoxazoliltiofenilo, pirazoliltiofenilo, ftalimido y benzotiazolilo, y un grupo cicloalquilo que tiene de 3 a 8 átomos de carbono; R 11 es lo mismo que R 10; n es un número entero de 5 a 10; m es un número entero de 2 a 5; o una de sus sales farmacéuticamente aceptable; con la condición de que, cuando X es un enlace y R 3 es -R 6H o -(CH 2) m-NH 2, G sea SO 2R 9.

Description

Inhibidores de Proteasa Multicatalítica a base de \alpha-cetoamidas.

Remisión a solicitudes afines

Esta solicitud reivindica el beneficio de la Solicitud Provisional U.S. nº serial 60/061.382 presentada el 7 de octubre de 1997, y la Solicitud U.S. titulada "Inhibidores de Proteasa Multicatalítica a base de \alpha-cetoamidas" presentada el 6 de octubre de 1998.

Campo de la invención

Esta invención se refiere a inhibidores de proteasa multicatalítica (MCP) a base de \alpha-cetoamidas, a composiciones que incluyen tales inhibidores y a procedimientos para el uso de inhibidores de MCP. Los inhibidores de MCP de la presente invención son útiles, por ejemplo, para retardar la pérdida de masa muscular incidente en diversos estados fisiológicos.

Antecedentes de la invención

Las células eucarióticas degradan y reemplazan constantemente proteína celular. Esto permite a las células eliminar selectiva y rápidamente proteínas y péptidos que tienen conformaciones anormales, ejercer el control de rutas de paso metabólicas ajustando los niveles de péptidos reguladores y proporcionar aminoácidos fuente de energía cuando sea necesario, por ejemplo, en caso de inanición. Véase Goldberg, A.L y St. John, A.C. Annu. Rev. Biochem. 45:747-803 (1976). Los mecanismos celulares de los mamíferos permiten múltiples rutas de paso para la descomposición de proteínas. Algunas de estas rutas de paso parece que requieren una aportación de energía en forma de trifosfato de adenosina ("ATP"). Véase Goldberg.A.L. y St. John, supra.

La proteasa multicatalítica (MCP, también denominada "proteinasa multicatalítica", "proteasoma", "complejo de proteinasa multicatalítica", "complejo de endopeptidasa multicatalítica", "proteasoma 20S" e "ingensina") es un complejo de proteinasa citoplasmática eucariótica de gran peso molecular (700 kD) que juega un papel importante en al menos dos rutas de paso celulares para la descomposición de proteína en péptidos y aminoácidos. Véase Orlowski, M. Biochemistry 29(45) 10289-10297 (1990). El complejo tiene al menos tres tipos diferentes de actividades hidrolíticas: (1) una actividad del tipo de la lisina en la que se escinden los enlaces peptídicos en el lado de carboxilo de aminoácidos básicos; (2) una actividad del tipo de la quimiotripsina en la que se escinden los enlaces peptídicos en el lado de carboxilo de aminoácidos hidrófobos, y (3) una actividad en la que se escinden los enlaces peptídicos en el lado de carboxilo del ácido glutámico. Véase Rivett, A.J., J. Biol. Chem. 264:21 12215:-12219 (1989) y Orlowski,
supra.

Una ruta de hidrólisis de proteínas que implica la MPC implica también el polipéptido "ubiquitina". Hershko, A y Ciechanover A. Annu. Rev. Biochem. 51:335-364 (1982). Esta ruta, que requiere MCP, ATP y ubiquitina, parece responsable de la degradación de proteínas muy anormales, ciertas proteínas normales de vida corta y el grueso de proteínas en fibroblastos que crecen y reticulocitos que maduran. Véase Driscoll J. Y Goldberg, A.L., PNAS 86:787-791 (1989). Las proteínas que serán degradadas por esta ruta están unidas a través de sus grupos amino de manera dependiente de ATP. Las proteínas conjugadas a ubiquitina se degradan luego a péptidos pequeños por un complejo de proteasa dependiente de ATP por el proteasoma 26S, que contiene MCP como su núcleo proteolítico. Goldberg, A.L. y Rock, K.L., Nature 357:375-379 (1992).

También se ha descrito una segunda vía de degradación de proteínas que requiere MCP y ATP pero que no requiera ubiquitina. Véase Driscoll, J. y Goldberg, A.L,, supra. En este proceso, la MCP hidroliza proteínas de manera dependiente de ATP. Véase Goldberg, A.L. y Rock, K.L., supra. Este proceso se ha observado en músculo esquelético. Sin embargo, se ha sugerido que, en el músculo, la MCP funciona sinérgicamente con otra proteasa, la multipaína, lo que da por resultado una degradación acelerada de proteína muscular. Véase Goldberg, A.L. y Rock, K.L., supra.

Las actividades relativas de proteína celular sintetica y las rutas degradantes determinan si la proteína se acumula o se pierde. La pérdida anormal de masa proteínica se asocia con varios estados de enfermedad tales como distrofia muscular, caquexia cardíaca, enfisema, lepra, desnutrición, osteomalacia, leucemia aguda de niños, y caquexia cancerosa. La pérdida de masa muscular se observa también en el envejecimiento, la hospitalización prolongada o una prolongada estancia en la cama y lumbago crónico.

Con la denervación o la inacción, los músculos esqueléticos experimentan una rápida atrofia que conduce a una disminución profunda del tamaño, el contenido de proteína y la resistencia contráctil. Esta atrofia es un componente importante de muchas enfermedades neuromusculares en seres humanos. La intensificación de la descomposición de proteínas se ha implicado como causa principal de la pérdida de músculo en la atrofia nerviosa. Véase Furono, K. y otros, J. Biochem. 265/15:8550-8557 (1990). Si bien no se ha identificado el proceso o los procesos específicos implicados en la hidrólisis de proteínas musculares, hay evidencia que liga la implicación de la MCP en la degradación acelerada de las proteínas musculares. Véase, por ejemplo, Furono, supra, y la solicitud publicada de PCT WO 92/20804 (fecha de publicación, 26 de nov. 1992),

Los niveles de varias proteínas responsables de la regulación del ciclo celular están controlados por la degradación dependiente de la ubiquitina por el proteosoma. Entre estos sustratos de proteosoma están la proteína supresora de tumores p35 (Schneffer, M. y otros, Cell 75:495-505 (1993), el inhibidor de quinasa dependiente de ciclina p27 (Pagano, M. y otros, Science 269:682-685 (1995) y la ciclina B (Glotzer, M. y otros, Nature 349:132-138 (1991)). La degradación inapropiada de estas proteínas reguladoras clave por proteolisis dependiente de ubiquitina se ha correlacionado con el desarrollo de tumores en el caso de p53 y carcinomas cervicales humanos que contienen papilomavirus. (Schneffer, M. y otros, PNAS 88:5523-5527 (1991); Gubert, N. y otros, J. Virol. 66:6237-6241 (1992) y en el ejemplo de p27 en carcinomas colorrectales (Loda, M. y otros, Nature Med. 3:231-234 (1997)). Además, niveles altos de p27 están asociados con un resultado clínico positivo en carcinomas de colon (Loda, M. supra; Fredersdorf, S. y otros, PNAS 94:6380-6385), carcinomas de mama (Catzavalos, C. y otros, Nature Med. 3:227-230 (1997); Porter, P. y otros, Nature Med. 3:222-225 (1997); Fredersdorf, supra) y carcinoma gástrico (Mori, M. y otros, Nature Med. 3:593 (1997)). Se ha dado cuenta de que el tratamiento de células transformadas con inhibidores de proteosoma da por resultado la acumulación de p27 (Drexler, H.C.A. PNAS 94:855-860 (1997)) y p53 (Shinohara, K. y otros, Biochem J. 317:385-388 (1996); Lopes, U. y otros J. Biol.. Chem. 272:12893-12896 (1997)) y el desencadenamiento de la muerte apoptótica de las células. Por tanto, los compuestos que inhiben la degradación de estos factores inhibidores del crecimiento sería de esperar que causaran la detención del ciclo celular y que fueran útiles en el tratamiento del cáncer y otras enfermedades proliferativas, incluidas psoriasis y reestenosis.

El factor de transcripción NF-\kappaB estimula la expresión de una amplia variedad de genes importantes en respuestas inmunes e inflamatorias. (Bauerle, P. y Henkel, T. Annu. Rev. Immunol. 12:141-179 (1994)). En células no estimuladas, el NF-\kappaB existe como un complejo citoplásmico inactivo con una proteína inhibidora, l\kappaB. Después de la estimulación de las células, la proteína l\kappaB es ubiquinitada y degradada por el proteosoma, activando el NF-\kappaB. (Palombella, V. y otros Cell 78:773-785 (1994)). El NF-\kappaB libre resultante entra en el núcleo de la célula donde inicia la transcripción.

La activación de NF-\kappaB da por resultado la producción de citocinas inflamatorias tales como el factor \alpha de necrosis tumoral, interleucina-2 e interleucina-6 y moléculas de adherencia de células incluida la molécula 1 intracelular de adherencia de células (ICAM-1), la molécula 1 de adherencia de células vasculares (VCAM-2) y selectina-E (Baeuerle y Henkel, supra). La supresión de la activación de NF-\kappaB por inhibición del proteosoma proporcionaría, por ello, un procedimiento para tratar afecciones inflamatorias, incluidas artritis, sepsis y enfermedad inflamatoria del
intestino.

La activación del programa apoptótico celular es una estrategia corriente para el tratamiento de cánceres humanos. Se ha demostrado que la irradiación de rayos X y los fármacos quimioterapéuticos estándar matan algunas células tumorales por inducción de la apoptosis (Fisher, D.E. Cell 78, 539-542 (1994)). Desafortunadamente, las mayoría de los cánceres humanos son actualmente resistentes a estas terapias (Harrison, D.J. J. Patho. 175, 7-12 (1995)). La activación de NF-\kappaB ha demostrado hacer que algunas células tumorales sean resistentes a los efectos proapotóticos de TNF-\alpha, agentes quimioterapéuticos del cáncer y radiaciones (Beg, A. y Baltimore, D., Science 274, 782-784 (1996); Wang, C.Y. y otros Science 274, 784-787 (1996); Van Antwerp D. y otros, Science 274, 787-789 (1996)). La administración de inhibidores de proteosoma a pacientes con cáncer en combinación con radiación ionizante y otros fármacos quimioterapéuticos puede intensificar la eficacia del agente proapoptótico.

Se requiere también NF-\kappaB activado para replicación del virus de inmunodeficiencia humana (VIH) (Nabel, G y Baltimore, D. Nature 326:711-713 (1987)). Por tanto, un procedimiento que inhiba la activación de FN-\kappaB podría ser terapéuticamente beneficioso para pacientes infectados con VIH.

Los antígenos citosólicos se procesan mediante ubiquitinación y escisión catalizada por proteosoma en péptidos que se transportan al retículo endoplasmático y se unen al complejo MHC-1. Los inhibidores del proteosoma previenen la presencia del antígeno de MHC-1 sin efecto alguno sobre el procesamiento del antígeno MHC-II (Rock, K. y otros Cell 78:761-771 (1994); Harding, C. y otros J. Immunol. 155: 1767-1775 (1995)). Tales inhibidores serían útiles, por ello, en el tratamiento de enfermedades resultantes de una presencia inapropiada del antígeno, incluidas enfermedades autoinmunes y rechazo de trasplantes.

Se requiere también actividad de proteosoma en el ciclo de vida de muchos organismos parásitos. Por ejemplo, las formas de corriente sanguínea y de insecto del parásito protozoario Tripanosoma brucei codifican un proteosoma 20S que se cree que puede ser necesario para la supervivencia del organismo (Hua y otros, Mol Biochem. Parasitol. 78, 33-46 (1996); Lomo y otros, Immunopharmacology 36, 285-293 (1997); To y Wang, FEBS Lett. 404, 253-262 (1997)). Los inhibidores de proteosoma han demostrado evitar la transformación de tripomastigotes de Trypanosoma cruzi en amastigotes y el desarrollo intracelular de amastigotes en tripomastigotes (González y otros, J. Exp. Med. 184, 1909-1918 (1996)). Los inhibidores de proteosomas tendrían por ello utilidad en el tratamiento de enfermedades que resultan de infecciones parasítarias, incluidas, no únicamente, la enfermedad del sueño africana y la
malaria.

La actividad de la MCP ha sido implicada en varios estados de enfermedad. Por ejemplo, se ha dado cuenta de una expresión anormalmente alta de MCP en líneas de células leucémicas humanas. Kumatori, A. y otros, PNAS 87:7071-7075 (1960). También se ha dado cuenta de anticuerpos contra MCP en pacientes con lupus eritematoso sistémico ("SLE"). Arribas J. y otros, J. Exp. Med. 173:423-427 (1990).

El documento WO 96/14857 describe inhibidores de multiproteasa multicatalítica de la fórmula (I)

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1

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Se necesitan agentes que sean capaces de inhibir el complejo de MCP; tales agentes proporcionarían una herramienta valiosa para investigar en el campo de, por ejemplo, la actividad de MCP así como en el campo médico con el fin de, por ejemplo, controlar los efectos perjudiciales de una actividad anormal o aberrante de la MCP. La presente investigación está dirigida a estos importantes extremos.

Sumario de la invención

La presente invención está dirigida a nuevos inhibidores de proteasa multicatalítica a base de \alpha-cetamidas ("MCP"). La presente invención se refiere a procedimientos para la inhibición de MCP asociada con cierto trastornos, incluido el tratamiento de trastornos de debilitamiento muscular.

En un aspecto se proporcionan compuestos que tienen la fórmula

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2

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en la que

R_{1} se selecciona entre el grupo constituido por -C\equivN, -C(=O)OR_{8}, ftalimido, -NHSO_{2}R_{8} y NH-J;

R_{2} se selecciona entre el grupo constituido por H, hidroxilo, alquilo que tiene de 1 a 10 átomos de carbono y cicloalquilo que tiene de 3 a 7 átomos de carbono;

R_{3} se selecciona entre el grupo constituido por -(CH_{2})_{m}-NHC(-N-R_{5})-NH_{2}, -R_{6}-H, -R_{6}-J, -R_{12}-(J)_{2}, -R_{6}-NO_{2}, -R_{6}-CN, -(CH_{2})_{m}-NH_{2} y -(CH_{2})_{m}-NH-J;

R_{4} es -CH(CH_{2}R_{7})-Q;

R_{5} se selecciona entre el grupo constituido por -NO_{2}, -CN y -J;

R_{6} es -(CH_{2})_{m}-NH-C(=NH)-NH-;

R_{12} es -(CH_{2})_{m}-NH-C(=NH)-N-;

Q es -C(=O)C(=O)NH-X-A-Y;

R_{7} se selecciona entre el grupo constituido por fenilo y alquilo que tiene de 1 a 8 carbonos, estando el mencionado grupo alquilo opcionalmente sustituido con uno o varios átomos de halógeno, grupos arilo seleccionados entre fenilo, tolilo, naftilo, antracilo, fenantrilo, pirenilo y bifenilo, o grupos heteroarilo seleccionados entre piridilo, pirimidilo, pirrolilo, furilo, tienilo, imidazolilo, triazolilo, tetrazolilo, quinolilo, isoquinolilo, benzoimidazolilo, tiazolilo, bipiridilo, piridiltiofenilo, pirimidiltiofenilo, isoxazoliltiofenilo, pirazoliltiofenilo, ftalimido y benzotiazolilo;

R_{8} se selecciona entre el grupo constituido por hidrógeno y alquilo que tiene de 1 a 6 carbonos, estando el mencionado grupo alquilo opcionalmente sustituido con uno o varios átomos de halógeno, grupos arilo seleccionados entre fenilo, tolilo, naftilo, antracilo, fenantrilo, pirenilo y bifenilo, o grupos heteroarilo seleccionados entre piridilo, pirimidilo, pirrolilo, furilo, tienilo, imidazolilo, triazolilo, tetrazolilo, quinolilo, isoquinolilo, benzoimidazolilo, tiazolilo, bipiridilo, piridiltiofenilo, pirimidiltiofenilo, isoxazoliltiofenilo, pirazoliltiofenilo, ftalimido y benzotiazolilo;

X es un enlace o -O-;

A es un grupo alquileno de 1 a 8 carbonos, estando el mencionado grupo alquileno opcionalmente sustituido con uno o varios átomos de halógeno, grupos arilo seleccionados entre fenilo, tolilo, naftilo, antracilo, fenantrilo, pirenilo y bifenilo, o grupos heteroarilo seleccionados entre piridilo, pirimidilo, pirrolilo, furilo, tienilo, imidazolilo, triazolilo, tetrazolilo, quinolilo, isoquinolilo, benzoimidazolilo, tiazolilo, bipiridilo, piridiltiofenilo, pirimidiltiofenilo, isoxazoliltiofenilo, pirazoliltiofenilo, ftalimido y benzotiazolilo;

Y es N(R_{13})-G;

G se selecciona entre el grupo constituido por H, un grupo de bloqueo seleccionado entre benciloxicarbonilo, toluenosulfonilo, t-butoxicarbonilo, metilsulfonilo y pirazinoílo, SO_{2}R_{9}, -C(=O)NHR_{10}, -C(=S)NHR_{10} y -CO_{2}R_{9};

o el resto-A-Y forma un anillo de lactama de 5, 6 o 7 miembros;

R_{9} se selecciona entre el grupo constituido por alquilo que tiene de 1 a 6 carbonos, arilo seleccionado entre fenilo, tolilo, naftilo, antracilo, fenantrilo, pirenilo y bifenilo, o heteroarilo seleccionado entre piridilo, pirimidilo, pirrolilo, furilo, tienilo, imidazolilo, triazolilo, tetrazolilo, quinolilo, isoquinolilo, benzoimidazolilo, tiazolilo, bipiridilo, piridiltiofenilo, pirimidiltiofenilo, isoxazoliltiofenilo, pirazoliltiofenilo, ftalimido y benzotiazolilo; estando los mencionados grupos alquilo, arilo o heteroarilo opcionalmente sustituidos con K;

R_{10} se selecciona entre el grupo constituido por H, alquilo que tiene de 1 a 6 carbonos, arilo seleccionado entre fenilo, tolilo, naftilo, antracilo, fenantrilo, pirenilo y bifenilo, o heteroarilo seleccionado entre piridilo, pirimidilo, pirrolilo, furilo, tienilo, imidazolilo, triazolilo, tetrazolilo, quinolilo, isoquinolilo, benzoimidazolilo, tiazolilo, bipiridilo, piridiltiofenilo, pirimidiltiofenilo, isoxazoliltiofenilo, pirazoliltiofenilo, ftalimido y benzotiazolilo; estando los mencionados grupos alquilo, arilo o heteroarilo opcionalmente sustituidos con K;

R_{13} se selecciona entre el grupo constituido por H y alquilo que tiene de 1 a 6 carbonos;

J es un grupo de bloqueo seleccionado entre benciloxicarbonilo, toluenosulfonilo, t-butoxicarbonilo, metilsulfonilo y pirazinoílo;

K se selecciona entre el grupo constituido por halógeno, CO_{2}R_{10}, R_{10}OC(=O), R_{10}OC(=O)NH, OH, CN, NO_{2}, NR_{10}R_{11}, N=C(NR_{10}R_{11})_{2}, SR_{10}, OR_{10}, fenilo, naftilo, heteroarilo seleccionado entre piridilo, pirimidilo, pirrolilo, furilo, tienilo, imidazolilo, triazolilo, tetrazolilo, quinolilo, isoquinolilo, benzoimidazolilo, tiazolilo, bipiridilo, piridiltiofenilo, pirimidiltiofenilo, isoxazoliltiofenilo, pirazoliltiofenilo, ftalimido y benzotiazolilo, y un grupo cicloalquilo que tiene de 3 a 8 átomos de carbono;

R_{11} es lo mismo que R_{10};

n es un número entero de 5 a 10;

m es un número entero de 2 a 5;

o una de sus sales farmacéuticamente aceptable;

con la condición de que, cuando X es un enlace y R_{3} es -R_{6}H o -(CH_{2})_{m}-NH_{2}, G sea SO_{2}R_{9}.

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En algunas realizaciones preferentes de los compuestos de fórmula I, R_{1} es ftalimido, -C\equivN, -C(=O)OCH_{3} o
-NHSO_{2}CF_{3}-. En otras realizaciones preferentes de los compuestos de fórmula I, R_{2} es H o ciclopentilo.

En algunas realizaciones preferentes de los compuestos de fórmula I, R_{3} es -R_{6}J, -R_{6}-NO_{2}, -R_{6}-H, -R_{12}-(J)_{2},
(CH_{2})_{m}-NH-J o -(CH)_{m}-NH_{2}, siendo J, preferiblemente, Boc, metilsulfonilo o pirazonoílo.

En algunas realizaciones preferentes de los compuestos de fórmula I, R_{7} es fenilo o alquilo inferior, siendo preferido el isopropilo.

En algunas realizaciones preferentes de los compuestos de fórmula I, X es un enlace. En otras realizaciones preferentes de los compuestos de fórmula I, A es -CH_{2}CH_{2}-.

G preferiblemente es SO_{2}-arilo, prefiriéndose SO_{2}-fenilo. En realizaciones más preferentes, los grupos arilo o fenilo opcionalmente están sustituidos, preferiblemente con uno o varios átomos de halógeno.

En otras realizaciones preferentes de los compuestos de fórmula I, G es H o un grupo de bloqueo, siendo preferido t-Boc.

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En algunas realizaciones preferentes, el resto -A-Y forma un anillo de lactama de 5, 6 o 7 miembros que preferiblemente tiene la estructura

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3

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Son más preferidos los sustituyentes indicados en los compuestos descritos en los Ejemplos que se consideran más adelante, siendo particularmente preferidos los sustituyentes presentados en los Ejemplos 1-8.

En realizaciones particularmente preferidas de los compuestos de fórmula I, X es un enlace; A es -CH_{2}CH_{2}-; n es 8; R_{1} es ftalimido; R_{2} es cicloalquilo, siendo particularmente preferido ciclopentilo; G es H, t-Boc o SO_{2}R_{9}, en el que R_{9} es fenilo, opcionalmente sustituido con halógeno; R_{7} es fenilo o alquilo, siendo preferido isopropilo; y R_{3} es
-(CH_{2})_{m}-NHC(=NH)-NO_{2}, -(CH_{2})_{m}-NHC(=NH)-N(Boc)_{2}, -(CH_{2})_{m}-NHC(=NH)-NH_{3}Cl, o -(CH_{2})_{m}-NH_{3}Cl o -(CH_{2})_{m}-
NH-J, siendo J Boc, metilsulfonilo o pirazinoílo.

Algunos sustituyentes de R_{1}-R_{4} especialmente preferidos en los compuestos de fórmula I son los que se indican para los compuestos 1, 14, 17, 19, 20, 28, 34, 35, 36 y 37-9, más adelante.

Los compuestos de la invención son útiles en una variedad de aplicaciones. Por ejemplo, los compuestos se pueden emplear en aplicaciones de investigación para afinar y desarrollar in vitro e in vivo modelos de mecanismos en cuanto a la ruta de paso de MCP y la presencia de antígenos peptídicos por la ruta de la clase I del complejo principal de histocompatibilidad (MHC I).

En un escenario terapéutico, los compuestos de la invención se pueden utilizar para aliviar, mediar, reducir y/o prevenir trastornos que están asociados con una actividad normal, anormal y/o aberrante de la MCP. Por ejemplo, las composiciones que comprenden los compuestos reivindicados se pueden usar para inhibir la actividad de la MCP, para el tratamiento de afecciones inflamatorias, incluidas artritis, sepsis y enfermedad inflamatoria del intestino, como potentes inductores de apoptosis en una variedad de células tumorales proporcionando de este modo utilidad como agentes antitumorales; para disminuir la pérdida de masa muscular, tratar trastornos de debilitamiento muscular, reducir la degradación de superóxido dismutasa y tratar trastornos caracterizados por una reducción de la actividad de la superoxidodismutasa.

En realizaciones preferentes, las composiciones que comprenden un compuesto de la invención se proporcionan para inhibir la MCP. La invención se refiere también a procedimientos para inhibir MCP, lo que comprende poner en contacto la MCP con una cantidad inhibidora de un compuesto de la invención.

También se describen metodologías para preparar los presentes inhibidores \alpha-cetoamidas. Para los expertos en la técnica serán evidentes otras metodologías útiles una vez conocida la presente invención. Éstos y otros rasgos de los compuestos de la presente invención se presentan seguidamente de forma más detallada.

Descripción de los dibujos

La Figura 1 muestra los resultados de un estudio in vivo en el que ratones C57BL hembra que tiene tumores de melanoma murino B16-F0 se trataron con vehículo solo o con el compuesto 1 a 10 mg/kd/día durante 9 días.

Descripción detallada

Esta invención proporciona inhibidores de MCP, composiciones que contienen estos inhibidores y los usos de estos inhibidores para fabricar medicamentos.

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En un aspecto de la presente invención se proporcionan inhibidores de MCP que tienen la fórmula 1:

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4

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en la que

R_{1} se selecciona entre el grupo constituido por -C\equivN, -C(=O)OR_{8}, ftalimido, -NHSO_{2}R_{8} y -NH-J;

R_{4} es -CH(CH_{2}R_{7})-Q;

R_{5} se selecciona entre el grupo constituido por -NO_{2}, -CN y -J;

R_{6} es -(CH_{2})_{m}-NH-C(=NH)-NH-;

R_{12} es -(CH_{2})_{m}-NH-C(=NH)-N-;

Q es -C(=O)C(=O)NH-X-A-Y;

R_{7} se selecciona entre el grupo constituido por fenilo y alquilo que tiene de 1 a 8 carbonos, estando el mencionado grupo alquilo opcionalmente sustituido con uno o varios átomos de halógeno, grupos arilo seleccionados entre fenilo, tolilo, naftilo, antracilo, fenantrilo, pirenilo y bifenilo, o grupos heteroarilo seleccionados entre piridilo, pirimidilo, pirrolilo, furilo, tienilo, imidazolilo, triazolilo, tetrazolilo, quinolilo, isoquinolilo, benzoimidazolilo, tiazolilo, bipiridilo, piridiltiofenilo, pirimidiltiofenilo, isoxazoliltiofenilo, pirazoliltiofenilo, ftalimido y benzotia-
zolilo;

R_{8} se selecciona entre el grupo constituido por hidrógeno y alquilo que tiene de 1 a 6 carbonos, estando el mencionado grupo alquilo opcionalmente sustituido con uno o varios átomos de halógeno, grupos arilo seleccionados entre fenilo, tolilo, naftilo, antracilo, fenantrilo, pirenilo y bifenilo, o grupos heteroarilo seleccionados entre piridilo, pirimidilo, pirrolilo, furilo, tienilo, imidazolilo, triazolilo, tetrazolilo, quinolilo, isoquinolilo, benzoimidazolilo, tiazolilo, bipiridilo, piridiltiofenilo, pirimidiltiofenilo, isoxazoliltiofenilo, pirazoliltiofenilo, ftalimido y benzotia-
zolilo;

X es un enlace o -O-;

Y es N(R_{13})-G;

o el resto-A-Y forma un anillo de lactama de 5, 6 o 7 miembros;

R_{11} es lo mismo que R_{10};

n es un número entero de 5 a 10;

m es un número entero de 2 a 5;

o una de sus sales farmacéuticamente aceptable;

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Se sabe que pueden existir varias formas estereoisómeras de los compuestos de fórmula I. Los compuestos preferidos de la invención tienen la configuración L en el carbono al que está unido el sustituyente R_{3}. Sin embargo, los racematos y los enantiómeros individuales y sus mezclas forman parte de la presente invención.

Tal como se usa aquí, el término "alquilo" incluye grupos de cadena lineal y ramificada tales como, por ejemplo, grupos metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, s-butilo, t-butilo, pentilo, 1-etilpentilo, hexilo y octilo. Los grupos alquilo preferidos tienen de 1 a aproximadamente 10 átomos de carbono. Son más preferidos grupos "alquilo inferior" que preferiblemente tienen de 1 a aproximadamente 6 átomos de carbono. Tal como se usa aquí, el término "alquileno" denota grupos hidrocarburo ramificados o no ramificados que tienen de 1 a aproximadamente 8 átomos de carbono tales como, por ejemplo, etileno (-CH_{2}CH_{2}-), propileno, butileno, hexileno, 1-metilhexileno, 2-metiletileno y 2-metilpropileno. Son grupos "acilo" grupos alquilcarbonilo. Son grupos "arilo" los compuestos aromáticos cíclicos, incluidos, no limitativamente, fenilo, tolilo, naftilo, antracilo, fenantrilo y pirenilo. También están incluidos dentro de la definición de "arilo" los sistemas de anillo que tienen dos anillos aromáticos conectados por un enlace, tales como bifenilo. Entre los grupos arilo preferidos están incluidos fenilo y naftilo.

El término "carbocíclico", tal como se usa aquí, se refiere a grupos cíclicos cuya porción anular está compuesta solamente por átomos de carbono. El término "halógeno" se refiere a átomos de F, Cl, Br e I. El término "arilalquilo" denota grupos alquilo que presentan grupos arilo, por ejemplo, grupos bencilo. Tal como se usa aquí, los grupos "alcoxi" son grupos alquilo unidos a través de un átomo de oxígeno. Entre los ejemplos de grupos alcoxi están incluidos metoxi (-OCH_{3}) y etoxi (-OCH_{2}CH_{2}). En general, el término "oxi", cuando se usa como sufijo, denota una unión a través de un átomo de oxígeno. Así, son grupos alcoxicarbonilo los grupos carbonilo que contienen un sustituyente alcoxi, esto es, grupos de la fórmula general -C(=O)-O-R, siendo R, alquilo. El término "alcoxialquilo", tal como se usa aquí, denota un grupo alcoxi unido a un grupo alquilo. El término "ariloxi" denota un grupo arilo unido a través de un átomo de oxígeno, y el término "arilalquiloxi" denota un grupo arilalquilo unido a través de un átomo de
oxígeno.

Los términos "heterociclo", "heterociclilo", y "heterocíclico" se refieren a grupos cíclicos en los que una porción de anillo incluye como mínimo un heteroátomo tal como O, N o S. El término grupos heterocíclicos incluye grupos "heteroarilo" así como "heteroalquilo". El término "heteroarilo" denota grupos arilo que tienen contenidos en un anillo aromático uno o varios heteroátomos (por ejemplo, O, N o S). La definición del término "heteroarilo" incluye también sistemas de anillo que tienen dos anillos aromáticos conectados por un enlace, en los que al menos uno de los anillos contiene un heteroátomo. Entre los grupos "heteroarilo" preferidos están incluidos piridilo, pirimidilo, pirrolilo, furilo, tienilo, imidazolilo, triazolilo, tetrazolilo, quinolilo, isoquinolilo, benzoimidazolilo, tiazolilo, bipiridilo, piridiltiofenilo, pirimidiltiofenilo, isoxazoliltiofenilo, pirazoltiofenilo, ftalimido y benzotiazolilo. El término "heterocicloalquilo" denota un heterociclo unido a través de un grupo alquilo inferior. El término "heteroarilalquilo" denota un grupo heteroarilo unido a través de un grupo alquilo. Tal como se usa aquí, el término "heteroalquilo" denota un grupo heterocíclico que contiene al menos un átomo de carbono saturado en el anillo heterocíclico. Entre los ejemplos de grupos heteroalquilo están incluidos grupos piperidina, dihidropiridina y tetrahidroisoquinilo.

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Los grupos funcionales presentes en los compuestos de fórmula I pueden contener grupos de bloqueo. Los grupos de bloqueo son conocidos en sí como grupos funcionales químicos que pueden unirse selectivamente a funcionalidades, tales como grupos hidroxilo, grupos amino, grupos tio y grupos carboxilo. Los grupos protectores son grupos de bloqueo que se pueden eliminar fácilmente de las funcionalidades. Estos grupos están presentes en un compuesto químico para hacer inertes tales funcionalidades en las condiciones de reacción a las que se expone el compuesto. En la presente invención se puede emplear cualquier grupo de una variedad de grupos protectores. Son ejemplos de tales grupos protectores, los grupos benciloxicarbonilo (Cbz; Z), toluenosulfonilo, t-butoxicarbonilo, metil éster y bencil éter. Se pueden encontrar otros grupos protectores preferidos de acuerdo con la invención en Protecting Groups in Organic Synthesis, Greene, T.W. y Wuts, P.G.M., 2ª edic., Wiley & Sons, 1991.

Entre otros grupos de bloqueo útiles en los compuestos de la presente invención están incluidos los que tienen sustituyentes acilo, aroílo, heteroaroílo, alquilo, alcanosulfonilo, arilalcanosulfonilo o arilsulfonilo en sus grupos amino. Otros grupos de bloqueo útiles incluyen alquil éteres, por ejemplo, el metil éter de serina.

Como se ha indicado previamente, la actividad de MCP ha sido relacionada con una variedad de trastornos y enfermedades. A causa de que los compuestos descritos en esta memoria son útiles para inhibir la actividad de la MCP y a causa de la utilidad de tales compuestos, éstos se pueden aplicar para tareas de investigación y terapéuticas, metodologías para inhibir la actividad de MCP poniendo en contacto la MCP con un compuesto de la invención, incluido el suministro del compuesto a un mamífero, incluido un ser humano, como medicamento o agente farmacéutico.

Tal como se usa aquí, el término "poner en contacto" significa colocar directa o indirectamente juntas las partes a poner en contacto de manera que las partes estén en contacto físico mutuamente. Poner en contacto incluye así acciones tales como poner juntas las partes en un recipiente o administrar partes a un paciente. Así por ejemplo, la administración de un compuesto de la invención a un paciente humano que evidencia una enfermedad o trastorno asociado con actividades anormales y/o aberrantes de la MCP que están asociados con tal enfermedad o trastorno, cae dentro del ámbito de la definición del término "poner en contracto".

En realizaciones preferentes, se administran composiciones farmacéuticas de acuerdo con la invención a pacientes que sufren un trastorno, esto es, un estado físico anormal, una enfermedad o una afección patofisiológica asociada con actividades anormales y/o aberrantes de la MCP. Preferiblemente, los trastornos para los que se administran las composiciones de la invención son aquellos que directa o indirectamente producen una disminución (esto es, pérdida) de masa muscular, esto es, un trastorno de debilitamiento muscular. Estos incluyen distrofias musculares, caquexia cardíaca, enfisema, lepra, desnutrición, osteomalacia, leucemia aguda infantil, caquexia por SIDA y caquexia cancerosa.

En el contexto de la invención, "administrar" significa la introducción de la composición farmacéutica en un paciente. Los procedimientos de administración preferidos incluyen la administración intravenosa, subcutánea e intramuscular. Preferiblemente, el compuesto se administrará como una composición farmacéutica que comprende el compuesto en combinación con un vehículo farmacéuticamente aceptable tal como una solución salina fisiológica. Se pueden encontrar otros vehículos adecuados en Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Pub. Co., Easton, PA, 1980).

Las concentraciones de los compuestos descritos en esta memoria en una composición farmacéutica variarán dependiendo de varios factores, incluidas la dosificación del fármaco a administrar, las características químicas (por ejemplo, la hidrofobia) de los compuestos empleados y la vía de administración. En términos generales, los compuestos de esta invención se pueden proporcionar en una solución fisiológica acuosa tamponada que contiene de aproximadamente 0,1 a 10% p/v del compuesto para administración parenteral. Los intervalos de dosis típicos son de aproximadamente 1 \mug/kg a aproximadamente 1 g/kg de peso corporal por día; un intervalo de dosis preferido es de aproximadamente 0,01 mg/kg a 100 mg/kg de peso corporal por día. La dosificación preferida de fármaco a administrar apropiadamente depende de variables tales como el tipo y el grado de progreso de la enfermedad o trastorno, el estado general del paciente particular, la eficacia relativa del compuesto seleccionado y la formulación del excipiente del compuesto y la vía de su administración. Tal como se usa aquí, el término "paciente" denota cualquier tipo de vertebrado. Preferiblemente, el paciente es un ser humano.

Las distrofias musculares son enfermedades genéticas que se caracterizan por un debilitamiento y una degeneración progresivas de las fibras musculares sin evidencia de degeneración neural. En la distrofia muscular de Duchenne (DMD) los pacientes presentan una reducción media del 67% de la masa muscular y en la distrofia miotónica se ha visto que la síntesis de proteína muscular fraccionaria disminuye una media de 28%, sin que haya una disminución correspondiente en la síntesis de proteína no muscular (posiblemente debido a una respuesta de órganos últimos perjudicados a hormonas o sustratos anabólicos). Se ha demostrado que hay una degradación acelerada de proteínas en los músculos de pacientes de DMD.

El fallo cardíaco congestivo severo (CHF) se caracteriza por una "caquexia cardíaca", esto es, una degradación de proteína muscular tanto en músculos cardíacos como del esqueleto, con una disminución media del 19% del peso corporal. La caquexia cardíaca está causada por una velocidad aumentada de la descomposición de proteína
miofibrilar.

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El enfisema es una enfermedad pulmonar obstructiva crónica definida por el agrandamiento de los espacios aéreos en los bronquíolos no respiratorios distales a los terminales, acompañado de cambios destructivos de las paredes alveolares. Entre las manifestaciones clínicas de un funcionamiento pulmonar reducido están incluidos toser, respirar con dificultad, infecciones respiratorias recurrentes, edema y empeoramiento funcional y esperanza de vida acortada. El eflujo de tirosina aumenta en un 47% en pacientes enfitematosos. También, el flujo de leucina de la totalidad del cuerpo permanece normal, aumenta la oxidación de leucina de la totalidad del cuerpo y disminuye la síntesis de proteína de la totalidad del cuerpo. El resultado es una disminución de la síntesis de proteína muscular, acompañada de una disminución de la cuantía de proteína en el cuerpo entero y de masa muscular del esqueleto. Esta disminución se hace crecientemente evidente con el progreso de la enfermedad y el deterioro a largo plazo.

En la diabetes mellitus hay una pérdida generalizada de los músculos pequeños de las manos, lo que es debido a una denervación parcial crónica (neuropatía). Ésta es muy evidente y empeora a largo plazo con el progreso y gravedad de la enfermedad.

La lepra está asociada con una degeneración muscular que se presenta entre los metacarpianos del dedo pulgar y el índice. Entre otros rasgos, una desnutrición grave se caracteriza por una degeneración muscular severa.

La osteomalacia es un trastorno nutricional causado por una deficiencia de vitamina D y calcio. En niños se llama raquitismo y osteomalacia en adultos. Se caracteriza por un ablandamiento de los huesos (debido a una mineralización empeorada, con un exceso de acumulación de osteoide), dolor, sensibilidad del cuerpo, pérdida y debilitamiento muscular, anorexia y pérdida general de peso. Puede ser resultado de desnutrición, embarazos repetidos y lactancia (que agotan o empobrecem las reservas de vitamina D y calcio) y resistencia a la vitamina D.

En la leucemia infantil aguda, hay una desnutrición en energía proteínica que da por resultado una pérdida de músculo esquelético. Los estudios han revelado que algunos niños presentan debilitamiento muscular incluso antes de diagnosticar leucemia, con una disminución media de masa muscular del 27%. Hay también un aumento simultáneo de 33-37% de tejido adiposo, resultando que no hay un cambio neto de la relación de peso corporal y circunferencia de una extremidad.

La caquexia cancerosa es un síndrome complejo que se presenta con una incidencia variable en pacientes con tumores sólidos y elementos hematológicos malignos. Clínicamente, la caquexia cancerosa se manifiesta como pérdida de peso con un empobrecimiento masivo de tejido adiposo y masa muscular magra, y es una causa de muerte resultante del cáncer. Los pacientes de caquexia cancerosa tienen tiempos de supervivencia cortos y una disminuida respuesta a la quimioterapia, Además de los trastornos que producen debilitamiento muscular, parece que de alguna manera están asociadas otras circunstancias y afecciones con una disminución de masa muscular. Entre tales dolencias están incluidos debilitamiento muscular debido a dolor de espalda crónico, edad avanzada, hospitalización prolongada debida a enfermedad o lesiones, alcoholismo y terapia con corticoresteroides.

Algunos estudios han demostrado que en casos graves de dolor lumbar crónico hay pérdida de músculo paraespinal. La disminución de pérdida de músculo paraespinal alivia el dolor y mejora la función.

También se cree que una debilidad general en la vejez es debida a debilitamiento muscular. A medida que envejece el cuerpo, una parte creciente del músculo esquelético es reemplazado por tejido fibroso. El resultado es una reducción significativa de potencia muscular pero sólo un rechazo marginal de la masa exenta de grasa.

Algunos estudios han revelado que, en pacientes que sufren lesiones o enfermedades crónicas y están hospitalizados durante períodos largos, hay un debilitamiento muscular unilateral de larga duración, con una disminución media de masa muscular del 31%. Los estudios han revelado también que esto se puede corregir con fisioterapia intensiva. Sin embargo, para muchos pacientes puede ser más eficaz realizar mejoras con terapia con fármacos.

En los alcohólicos, hay pérdida del músculo tibial anterior. Esta lesión de músculo proximal está causada por una lesión neurogénica, a saber, actividad glicolítica y de la enzima fosforilasa empeoradas. La lesión se manifiesta y empeora cuanto más largo es el abuso de alcohol. Los pacientes tratados con corticoesteroides experimentan pérdida de masa muscular.

Se ha visto que la MCP activa el mediador intracelular de la inflamación, denominado NF_{kappa}B. (Véase Baeuerle, P.A. y Henkel, T. (1994), Annu. Rev. Immunol. 12, 141-179). Por tanto, los inhibidores de MCP potencialmente tienen uso en el tratamiento de enfermedades autoinmunes e inflamatorias.

Los compuestos de la invención se pueden usar para aliviar la pérdida de masa muscular resultante de las afecciones anteriores así como de otras. Además, los inhibidores de MCP de la invención son útiles en aplicaciones veterinarias y de cría de animales, por ejemplo, para contrarrestar la pérdida de peso en animales o para promover el
crecimiento.

La MCP ha sido implicada en la presencia de antígenos peptídicos por vía de la ruta de la clase I del complejo principal de histocompatibilidad (MHC 1). Véase Goldberg y Rocka, supra; véase también Rock y otros, Cell: 78-761-771 (1984), en lo que sigue "Rock y otros". Por tanto, los inhibidores de MCP tienen utilidad como reactantes de investigación en estudios en los que se desea la inhibición de la ruta de paso MHC1 así como el alivio de enfermedades y trastornos que están asociados con un procesamiento de MHC-1 aberrante y/o anormal de antigenos. A causa de que todavía no se conoce el origen exacto de la mayoría de los péptidos presentados en las moléculas de MHC-1 y de que recientemente se ha acumulado evidencia de que la MCP puede desempeñar un papel en la presencia de MHC-1 (véase Rock y otros, supra), los reactantes tales como los inhibidores de MCP descritos que bloquean el procesamiento proteolítico de antígenos para la presencia de MHC-1 serían útiles para resolver la importancia de esta ruta de
paso.

Los inhibidores de MCP de la invención son también útiles para intensificar la acción de la enzima Cu/Zn-superóxido dismutasa-1 ("SOD-1"). Consecuentemente, estos compuestos son útiles tanto en programas de investigación para la investigación de sistemas deficientes en SOD-1 como en el tratamiento de trastornos neurovegetativos u otros trastornos caracterizados por una reducción de la actividad de la enzima SOD-1 (esto es, cuando tal reducción ha sido implicada en la patogénesis del trastorno). Tales afecciones incluyen enfermedades que implican una tensión oxidante tal como enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Hungtinton, accidente cardiovascular, trauma, esclerosis lateral amiotrófica (ALS) e isquemia.

SOD-1 es una metaloenzima homodímera que cataliza la dismutación del anión superóxido tóxico O_{2}^{-} a O_{2} y H_{2}O_{2}. La SOD-1 es un secuestrador de radicales libres y por tanto actúa como una primera defensa en la desintoxicación de radicales superóxido, que normalmente son subproductos del metabolismo aeróbico. SOD-1 se presenta principalmente en eucariotes y se encuentra en el citoplasma de virtualmente la totalidad de tipos de células. SOD-1 es una enzima esencial en la respuesta fisiológica a la toxicidad del oxígeno y ha sido investigada activamente como agente terapéutico en afecciones patológicas relacionadas con una tensión oxidante. Véase Bannister y otros, CRC Crit. Rev. Biochem. 22: 111-180 (1987); Halliwet y otros, Methods in Enzymol., 186:1-75 (1990); Greenwald, Free Rad. Biol. Med. 8:201-109 (1990).

Los rasgos que han impedido el uso de SOD-1 como agente terapéutico son su mal acceso intracelular cuando se suministran exógenamente y su extremadamente corta vida en suero. Por tanto, los compuestos que intensificaran la actividad intracelular de la SOD-1 proporcionarían un avance significativo en la terapia de SOD-1.

La ALS es un trastorno paralítico progresivo causado por la degeneración de neuronas motoras grandes del cordón espinal y el cerebro. Aproximadamente 5-10% de todos los casos de ALS son familiares (FALS) y son heredados como una característica dominante autosómica. Recientemente se han identificado diferentes mutaciones de falso sentido en un subconjunto de familias con FALS y que se presentan dentro del gen que codifica SOD-1. Véase Rosen, D.R, y otros, Science 261:1047-1051 (1993); Deng, H. y otros, Nature 362:59-62 (1993). Estas mutaciones conducen a una disminución de la actividad de SOD-1 en glóbulos rojos y tejido celular y han revelado que desestabilizan la proteína de SOD-1, lo que da por resultado un uso incrementado de la enzima. Véase Bowling, A.C. y otros, J. Nerochem. 61:2322-2325 (1993); Borchelt, D.R. y otros, Proc. Natl. Acad. Sci. 91:8292-8296 (1994). Además, se ha descrito (Brown, R.H. 331/16 NEJM 1091 (1994)) un modelo transgénico de ALS basado en la implicación de la conexión entre SOD-1 y ALS.

La invención se explica más mediante los ejemplos siguientes. El objetivo de estos ejemplos es dilucidar la invención. Los ejemplos no limitan el alcance de las reivindicaciones.

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Ejemplos

Procedimientos generales. La cromatografía en capa fina se realizó sobre placas de gel de sílice (MK6F 60A, tamaño 2,54 x 7,62 cm, espesor de la capa 250 \mum, Whatman Inc.). La cromatografía preparativa en capa fina se realizó sobre placas de gel de sílice (tamaño 50,8 x 50,8 cm, espesor de la capa 1000 \mum, Analtech). La cromatografía preparativa en columna se realizó usando gel de sílice Merck, 40-62 \mum, tamiz 230-400. Los espectros de RMN ^{1}H se registraron en un instrumento GE QE Plus (300 MHz) usando tetrametilsilano como patrón interno. Los espectros de masa de electropulverización se registraron en un instrumento VG platform II (Fisons Instruments).

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Ejemplo 1 Preparación del compuesto 1

El compuesto 1 se ensambló a partir de los bloques constructivos 2, 3, 4 y 5 como se muestra en el Esquema 1 siguiente.

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Esquema 1

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5

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Preparación del Compuesto 2

La preparación del Compuesto 2, como racemato, se describe en la patente U. S. nº. 5.550.262 que se incorpora por referencia a esta memoria en su totalidad.

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Preparación del Compuesto 3

El compuesto 3 se compró a NovaBiochem, San Diego, CA.

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Preparación del Compuesto 4

El Compuesto 4 y los \alpha-hidroxiácidos afines se prepararon siguiendo un procedimiento general de Harbesco y otros, J. Med. Chem. 1994, 37, 2918-2929, que se incorpora por referencia a esta memoria en su totalidad.

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Preparación del Compuesto 5

La preparación del Compuesto 5 se muestra en el siguiente Esquema 2:

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Esquema 2

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6

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Preparación del Compuesto 7

A una solución de 1,2-etilendiamina (6, 10,80 g, 12,00 ml, 0,18 mol) en THF (30 ml) se añadió lentamente BOC-ON (22,10 g, 0,09 mol) en THF (70 ml) en un período de 4 horas. La mezcla de reacción se agitó durante la noche, se concentró en un rotoevaporador y se recogió en agua (150 ml). La capa acuosa se acidificó (pH aprox. 5-6) con ácido cítrico monohidratado sólido, se lavó con éter (3 x 50 ml y luego se trató (a 0ºC) con solución 6 N de NaOH para basificarla (pH aprox. 12-13). La solución básica se sometió a extracción con acetato de etilo (3 x 100 ml) y la capa combinada de acetato de etilo se secó (MgSO_{4}) y se concentró, obteniéndose 7,23 g de la diamina monoprotegida 7.

Compuesto 7: semisólido. RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 5,00 (a, 1H), 3,20 (q a, 2H), 2,80 (t, 2H), 1,45 (s, 9H), 1,25 (a, 2H).

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Preparación del Compuesto 8

Una solución fría (0-5ºC) de la amina 7 (0,321 g, 0,002 mol) en cloruro de metileno (5 ml) se trató secuencialmente con trietilamina (0,243 g, 0,33 ml, 0,0024 mol) y cloruro de bencenosulfonilo (0,423 g, 0,30 ml, 0,0024 mol). Se quitó el baño de hielo y la solución se agitó durante 0,5 horas más y luego se lavó sucesivamente con agua (2 x 5 ml), HCl 0,5 N frío (1 x 5 ml), solución de NaHCO_{3} al 2% (1 x 5 ml) y salmuera (1 x 5 ml). La solución se secó sobre MgSO_{4} y se eliminó el disolvente, obteniéndose un residuo que se lavó varias veces con n-pentano, resultando 0,60 g del derivado sulfonamida 8.

Compuesto 8: sólido blanco, p.f. 92-95ºC; R_{f} (TLC, metanol al 5% en cloruro de metileno) 0,55; RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 7,85 (d, 2H), 7,55 (m, 3H), 5,30 (d a, 1H), 4,85 (a, 1H), 3,25 (q a, 2H), 1,40 (s, 9H).

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Preparación del Compuesto 5

Una solución del Compuesto 8 (0,560 g, 0,0019 mol) en 1,4-dioxano (4 ml) se trató con HCl 4 N en dioxano (4 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y se concentró en el rotoevaporador. El residuo se lavó varias veces con acetato de etilo y se secó en vacío, obteniéndose 0,40 g de la sal de amina 5.

Compuesto 5: sólido blanco, p.f. 178-180ºC. RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 8,20-8,00 (t a, 4H), 7,80 (d, 2H), 7,60 (m, 3H), 2,95 (q a, 2H), 2,80 (a, 2H).

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El acoplamiento de los bloques constructivos 4, 5, 3 y 2 es muestra en el siguiente Esquema 3

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Esquema 3

7

Preparación del Compuesto 9

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A una solución fría (0ºC) del compuesto 4 (1,00 g, 0,0034 mol) en N,N-dimetilformamida anhidra (20 ml) se añadió N-metilmorfolina (1,40 g, 0,014 mmol) y seguidamente 1-HOBt (0,54 g, 0,0040 mmol) y BOP (1,80 g, 0,0040 mmol). La mezcla se agitó durante 15 minutos y se añadió a ella el compuesto 5 (0,75 g, 0,0032 mmol). Se quitó el baño de enfriamiento y la mezcla se agitó durante 4 horas, se vertió en agua-hielo (200 ml) y se sometió a extracción con acetato de etilo (3 x 100 ml). La capa orgánica se lavó con solución de ácido cítrico al 2% (2 x 50 ml), solución de bicarbonato sódico al 2% (2 x 50 ml) y salmuera (1 x 50 ml) y se secó sobre sulfato sódico anhidro. Después de evaporar el disolvente a presión reducida se obtuvo un material en bruto que se lavó varias veces con n-pentano, produciéndose 1,30 g del producto 9.

Compuesto 9: sólido blanco (mezcla diastereómera); RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 7,90 y 7,65 (2 conjuntos de t, 1H), 7,75 (d, 2H), 7,55 (q, 2H), 7,15 (m, 6H), 6,55 y 5,80 (2 conjuntos de d, 1H), 3,90 (m, 2H), 3,30 (m, 1H), 3,10 (m, 2H), 2,75 (m, 2H), 2,50 (m, 3H), 1,20 (s, 9H), EM m/e 478 (M+H), 500 (M+Na).

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Preparación del Compuesto 10

A una solución del Compuesto 9 (0,40 g, 0,84 mmol) en 1,4-dioxano (15 ml) se añadió HCl 4 N en dioxano (15 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas y se concentró a presión reducida, resultando un residuo que se lavó varias veces con acetato de etilo y se secó en vacío, obteniéndose 0,30 g del compuesto 10. La RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}) reveló la ausencia total del pico de t-Boc a \delta 1,20 ppm. EM m/e 378 (M+H).

Este material se usó directamente en la etapa siguiente.

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Preparación del Compuesto 11

Este compuesto se preparó siguiendo el mismo procedimiento descrito antes para la síntesis del Compuesto 9. Así, acoplando los compuestos 3 (0,074 g, 0,2305 mmol) y 10 (0,100 g, 0,2421 mmol) en presencia de NMM/HOBt/BOP se obtuvieron 0,117 g del Compuesto 11 (mezcla diastereómera), que se usó directamente en la etapa siguiente.

Compuesto 11: sólido blanco (mezcla diastereómera): RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 7,85 (d, 2H), 7,50 (m, 3H), 7,20 (m, 5H), 7,40-7,00 (a, 7H), 6,80 (a, 1H), 5,50 y 5,10 (2 conjuntos de a, 1H), 4,50 (a, 1H), 4,20 (a, 1H), 3,70-2,80 (una serie de m, 8H), 1,65 (s, 9H), 1,60-1,30 (m, 5H), EM m/e 679 (M+H), 701 (M+Na).

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Preparación del Compuesto 12

Este compuesto se preparó siguiendo el mismo procedimiento descrito antes para la síntesis del Compuesto 10. Así, al eliminar con HCl 4N en dioxano la protección con boc de 0,100 g del compuesto 11, se obtuvieron 0,088 g del Compuesto 12. La RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}) reveló ausencia total del pico de t-Boc. Este material se usó directamente en la etapa siguiente.

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Preparación del Compuesto 13

Este compuesto se preparó siguiendo el mismo procedimiento descrito antes para la síntesis del Compuesto 9. Así, acoplando los compuestos 12 (0,085 g, 0,1383 mmol) y 2 (0,050 g, 0,1297 mmol) en presencia de NMM/HOBt/BOP se obtuvo un producto en bruto que se purificó por cromatografía preparativa en capa delgada (eluyente: 4% de MeOH en CH_{2}Cl_{2}), obteniéndose 0,050 g de 13 como mezcla diastereómera.

Compuesto 13: sólido blanco (mezcla diastereómera); RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 8,40 (a, 1H), 8,00-6,80 (una serie de m, 20H), 5,40 (a, 1H), 4,30 y 4,10 (a, 1H), 3,60 (q a, 2H), 3,50-2,90 (una serie de m, 9H), 2,00-1,00 (una serie de m, 29H). EM m/e 946 (M+H), 968 (M+Na).

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Preparación del Compuesto 1

A una solución fría (0ºC) del Compuesto 13 (0,045 g, 0,0476 mmol) en cloruro de metileno anhidro (4 ml) se añadió el reactante peryodinano de Dess-Martin (0,040 g, 0,0952 mmol). Se quitó el baño de enfriamiento y la mezcla se agitó durante 1 hora más. Luego se diluyó con cloruro de metileno (10 ml) y la solución se lavó con solución de tiosulfato sódico al 10% (5 x 5 ml), solución saturada de bicarbonato sódico (2 x 5 ml) y salmuera (1 x 5 ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato sódico anhidro. La eliminación de disolvente a presión reducida dio un residuo que se lavó con n-pentano (8 ml) y se secó en vacío, obteniéndose 0,017 g del Compuesto 1.

Compuesto 1: sólido blanco (mezcla diastereómera); RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 8,40 (a, 1H), 8,00-6,80 (una serie de m, 20H), 5,50 (a, 1H), 4,70 (a, 1H), 3,60 (q a, 2H), 3,50-2,90 (una serie de m, 8H), 2,00-1,00 (una serie de m, 28H), EM m/e 944 (M+H), 966 (M+Na).

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Ejemplo 2 Preparación del Compuesto 14

Los bloques constructivos usados en la síntesis se muestran en el siguiente Esquema 4:

Esquema 4

8

El Compuesto 14 se ensambló a partir de los bloques constructivos 2, 3, 15 y 16 siguiendo los mismos procedimientos descritos antes (en el Esquema 3) para la síntesis del Compuesto 1. El Compuesto 16 se preparó siguiendo el mismo procedimiento descrito antes (Esquema 2) para la síntesis del Compuesto 5, excepto que, como etapa intermedia, se usó 3,4-diclorobencenosulfonilo en vez de cloruro de bencenosulfonilo.

Compuesto 14: sólido blanco (mezcla diastereómera); MRN ^{1}H CDCl_{3}) \delta 8,30 (a, 1H), 7,90 (d, 1H), 7,75 (m, 1H), 7,60 (m, 2H), 7,50 (d, 2H), 7,70-7,20 (una serie de a, 6H), 6,80 (a, 1H), 5,30 (a, 1H), 4,70 (a, 1H), 3,60 (t a, 2H), 3,35 (a, 4H), 3,10 (a, 2H), 2,00-1,00 (una serie de m, 31H), 0,90 (q, 6H), EM m/e 978 y 982 (M+H) con diferentes isótopos de cloro).

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Ejemplo 3 Preparación del Compuesto 17

El compuesto se ensambló a partir de los Compuestos 10 y 18 (Bachem., King of Prusia, PA) (véase Esquema 5, seguidamente) usando los mismos procedimientos descritos previamente (en el Esquema 3) para la preparación del Compuesto 1, excepto que el grupo Fmoc de un intermedio se desprotegió con dietilamina al 30% en acetato de etilo.

Esquema 5

9

Compuesto 17: sólido blanco (mezcla diastereómera); RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 8,35 (t a, 1H), 7,85 (t, 2H), 7,70 (m, 1H), 7,50 (m, 2H), 7,35-7,05 (m, 11H), 6,90 (t, 1H), 6,50 (d, 1H), 6,00 (t, 1H), 5,20 (t, 1H), 4,50 (m a, 1H), 3,70 (t, 2H), 3,60-3,00 (m, 8H), 2,00-1,00 (m, 28H), 1,45 (s, 18H), EM m/e 1099 (M+H).

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Preparación de los Compuestos 19 y 20

La preparación de los Compuestos 19 y 20 se representa en el siguiente Esquema 6:

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Esquema 6

10

Preparación del Compuesto 23

Este compuesto se preparó siguiendo el mismo procedimiento descrito antes para la síntesis del Compuesto 9. Así, el acoplamiento de los Compuestos 21 (0,532 g, 1,2052 mmol) y 22 (Oxford Asymmetry, Abingdon, RU, 0,334 g, 1,3289 mmol) en presencia de NMM/HOBt/BOP dio 0,810 g del Compuesto 23.

Compuesto 23: sólido blanco; R_{f} (TLC, metanol al 5% en cloruro de metileno), 0,43; RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 8,40 (a, 1), 7,75 (d, 2H), 7,55 (d, 2H), 7,40-7,00 (m, 13H), 5,60 (d a, 1H), 4,60 (q a, 1H), 4,30 (m, 2H), 4,10 (m, 3H), 3,25 (a, 2H), 2,90 (t a, 2H), 2,00-1,20 (m, 5H), 1,30 (s, 9H), EM m/e 675 (M+H), 697 (M+Na).

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Preparación del Compuesto 24

Una mezcla del compuesto 23 (0,437 g, 0,6476 mmol), TFA (6 ml) y cloruro de metileno (6 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La solución se concentró en vacío obteniéndose 0,401 g del compuesto 24, que se usó directamente en la etapa siguiente. El espectro de RMN ^{1}H de una parte alícuota reveló la ausencia del pico de t-Bu a \delta 1,30 ppm; EM m/e 619 (M+H).

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Preparación del Compuesto 25

Este compuesto se sintetizó siguiendo el mismo procedimiento descrito antes para la síntesis del Compuesto 9. Así, el acoplamiento de los Compuestos 24 (0,397 g, 0,6417 mmol) y 7 (0,113 g, 0,7053 mmol) en presencia de NMM/HOBt/BOP produjo 0,340 g del Compuesto 25. EM m/e 660 (M-tBoc), 761 (M+H), 783 (M+Na). Este material se usó directamente en la etapa siguiente.

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Preparación del Compuesto 26

Una mezcla del compuesto 25 (0,320 g, 0,4206 mmol) y dietilamina al 30% en acetato de etilo (6 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La TLC reveló la desaparición completa del material de partida. La mezcla de reacción se concentró en vacío obteniéndose un residuo que se lavó varias veces con éter de petróleo, obteniéndose 0,226 g del compuesto 26 que se usó directamente en la etapa siguiente.

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Preparación del Compuesto 27

Este compuesto se sintetizó siguiendo el mismo procedimiento descrito antes para la síntesis del Compuesto 9. De esta manera, el acoplamiento de los Compuestos 2 (0,162 g, 0,042 mmol) y 26 (0,226 g, 0,042 mmol) en presencia de NMM/HOBt/BOP produjo un producto en bruto que se purificó por cromatografía preparativa en capa delgada (eluyente: MeOH al 8% en CH_{2}Cl_{2}), resultando 0,040 g del Compuesto 27.

Compuesto 27: sólido blanco (mezcla diastereómera); RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 8,40 (a, 1H), 7,80 (m, 2H), 7,70 (m, 2H), 7,60-7,00 (m, 10H), 6,70 (a, 1H), 4,50 (a, 2H), 4,10 (a, 1H), 3,70 (t, 2H), 3,50-3,00 (una serie de m, 8H), 2,00-1,00 (una serie de m, 29H), 1,40 (s, 9H); EM m/e 806 (M+H-tBoc), 906 (M+H), 928 (M+Na).

Compuesto 19

Este compuesto se preparó siguiendo el mismo procedimiento descrito antes (Esquema 3) para la síntesis del Compuesto 1. De esta manera, la oxidación de Dess-Martin de 0,035 g del Compuesto 27 produjo 0,023 g del Compuesto 19.

Compuesto 19: sólido blanco (mezcla diastereómera). RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 8,40 (a, 1H), 8,00-7,00 (una serie de m, 14H), 6,80 (a, 1H), 5,50 y 5,30 (2 conjuntos de a, 1H), 4,60 (a, 1H), 3,70 (t, 2H), 3,50-3,10 (una serie de m, 7H), 3,00 (m, 1H), 2,00-1,00 (una serie de m, 28H), 1,40 (s, 9H); EM m/e 926 (M+Na), 942 (M+K).

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Preparación del Compuesto 20

El Compuesto 19 (0,018 g), después de eliminar la protección con tBoc (HCl 4 N en dioxano a temperatura ambiente), dio el Compuesto 20 (0,015 g).

Compuesto 20: sólido blanco (mezcla diastereómera); RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 8,60 (a, 1H), 8,40 (a, 1H), 8,20 (a, 1H), 8,00-7,00 (una serie de m, 15H), 5,20 (a, 1H), 4,20 (a, 2H), 3,70-2,70 (una serie de m, 9H), 2,00-0,90 (una serie de m, 28H). EM m/e 804 (M+H).

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Preparación del Compuesto 28

La preparación del Compuesto 28 se muestra en el siguiente Esquema 7:

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Esquema 7

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11

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El Compuesto 28 se preparó a partir del Compuesto intermedio 30 que, a su vez, se preparó a partir de los Compuestos 10 y 29 (STAR Biochemicals, Torrance, CA) siguiendo los mismos procedimientos generales descritos antes (Esquema 3), excepto que el grupo Fmoc de uno de los intermedios se desprotegió con dietilamina al 30% en acetato de etilo.

Compuesto 28: sólido blanco (mezcla diastereómera); RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 7,80 (d, 2H), 7,70 (m, 1H), 7,50 (m, 2H), 7,40-7,00 (m, 10H), 6,40 (d a, 1H), 5,40 (da, 1H), 5,20 (d a, 1H), 4,80 (d a, 1H), 4,50 (a, 1H), 3,65 (t, 2H), 3,40 (a, 2H), 3,30-2,90 (m a, 6H), 2,00-1,00 (m, 30H), 1,60 (s, 9H). EM m/e 871 (M+H-tBoc), 971 (M+H), 993 (M+Na).

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Ejemplo 6 Preparación de los Compuestos 34 y 35

La preparación de los Compuestos 34 y 35 se muestra en el Esquema 8:

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Esquema 8

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12

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Preparación del Compuesto 34

El compuesto 30 se desprotegió (HCl 4 N en dioxano, temperatura ambiente, 1 hora) como se ha descrito antes (en el Esquema 3) para generar la sal de amina 31, que se sulfoniló (Et_{3}N, CH_{3}SO_{2}Cl, CH_{2}Cl_{2}, de 0ºC a temperatura ambiente, 0,5 horas) como se ha descrito antes (Esquema 2) para producir el Compuesto 32. La oxidación de Dess-Martin del Compuesto 32 dio el Compuesto 34.

Compuesto 34: sólido blanco (mezcla diastereóera). RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 7,80 (d, 2H), 7,70 (m, 1H), 7,55 (m, 2H), 7,40-7,00 (m, 10H), 6,80 (m, 1H), 6,40 (d, 1H), 6,00 (d a, 1H), 5,40 (a, 1H), 5,20 (2 conjuntos de t a, 1H), 4,50 (d a, 1H), 3,65 (t, 2H), 3,40 (a, 2H), 3,30-3,00 (m a, 6H), 2,90 (d, 3H), 2,00-1,00 (m, 30H). EM m/e 949 (M+H), 971 (M+Na), 987 (M+K).

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Preparación del Compuesto 35

La sal de amina, Compuesto 31, se carboniló (ácido pirazin-2-carboxílico, NNM, HOBt, BOP, DMF, de 0ºC a temperatura ambiente, 1 hora) como se ha descrito antes en el Esquema 3 para producir el Compuesto 33. La oxidación de Dess-Martin del Compuesto 33 dio el Compuesto 35.

Compuesto 35: sólido blanco (mezcla diastereómera). RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 9,35 (s, 1H), 8,70 (s, 1H), 8,50 (s, 1H), 8,00 (2 conjuntos de t a, 1H), 7,80-7,70 (m, 16H), 6,70 (t, 1H), 6,50 (d a, 1H), 5,40 (a, 1H), 4,60 (a, 1H), t, 1H), 3,65 (m, 2H), 3,40 (a, 2H), 3,30-2,80 (m, 6H), 2,00-1,00 (m, 30H). EM m/e 977 (M+H), 999 (M+Na), 1015 (M+K).

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Ejemplo 7 Preparación de los Compuestos 36 y 37

La preparación de los Compuestos 36 y 37 se muestra en el siguiente Esquema 9.

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Esquema 9

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13

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Preparación del Compuesto 36

El Compuesto 28 (0,052 g), al desprotegerlo (protegido con tBoc; con HCl 4 N en dioxano, a temperatura ambiente), dio el Compuesto 36 (0,041 g).

Compuesto 36: sólido blanco (mezcla diastereómera). RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 8,65 (a, 1H), 8,20 (a, 1H), 7,80 (a, 10H), 7,60 (a, 3H), 7,15 (a, 5H), 5,20 (a, 1H), 4,25 (a, 1H), 3,60-2,60 (una serie de m a, 11H), 2,00-0,80 (m, 30H). EM m/e 871 (M+H).

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Preparación del Compuesto 37

El Compuesto 17 (0,034 g), al desprotegerlo (protegido con tBoc; con HCl 4 N en dioxano, a temperatura ambiente), dio el Compuesto 36 (0,020 g).

Compuesto 37: sólido blanco (mezcla diastereómera). La RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}) reveló la ausencia de grupos tBoc. EM m/e 899 (M+H).

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Ejemplo 8 Preparación de los Compuestos 38 y 39

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14

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Los Compuestos 38 y 39 se sintetizaron a partir de materiales de partida adecuados siguiendo los procedimientos descritos antes.

Compuesto 38: sólido blanco (mezcla diastereómera). RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 8,00-6,80 (una serie de m, 20H), 5,60 (a, 1H), 4,60 (a, 1H), 3,60 (t, 2H), 3,50-2,90 (una serie de m, 8H), 2,80 (s, 3H), 2,00-1,00 (una serie de m, 28H). EM m/e 958 (M+H), 980 (M+Na).

Compuesto 39: sólido blanco (mezcla diastereómera). El espectro de RMN ^{1}H es uno complejo debido a la presencia de dos isómeros. EM m/e 872 (M+H).

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Ejemplo 9 Ensayo de la actividad de MCP similar a la quimiotripsina

La actividad catalítica similar a la quimiotripsina de la forma 20S de MCP se midió usando enzima que se aisló en estado latente de hígado humano, como se describe en la patente U.S. nº. 5.614.649.

Se dispensaron por triplicado en una placa de 96 pocillos partes alícuotas (5 ul) de inhibidores disueltos en DMSO. La MCP se diluyó con tampón de activación (Tris 20 mM (pH 7,5), 0,04% de SDS), se añadieron partes alícuotas de 85 ul de enzima diluida a los pocillos que contenían inhibidor y las mezclas se incubaron durante 15 minutos a 27ºC. Las reacciones se iniciaron añadiendo 10 ul de Suc-LLVY-AMC (concentración final de 100 uM) y la formación de producto se controló a lo largo de 20 minutos a intervalos de 1,5 minutos usando un fluorimetro de lectura de placas Cytofluor Serie 4000 ( \lambda_{ex}=360 nm; \lambda_{em}=460 nm). La hidrólisis del sustrato en ausencia de inhibidor era lineal durante todo el ensayo.

La inhibición de la actividad similar a la quimiotripsina de la MCP se calculó como disminución porcentual de la velocidad de hidrólisis del sustrato en presencia de inhibidor en relación a la velocidad de hidrólisis en ausencia de inhibidor. Los valores de CI_{50} de los inhibidores (que corresponden a la concentración de inhibidor que da una inhibición de 50%) se determinaron a partir de la disminución porcentual de las velocidades de hidrólisis de los sustratos en presencia de 7 concentraciones del compuesto de ensayo. Los resultados se representaron como inhibición porcentual frente a log de la concentración de inhibidor y la CI_{50} es calculó ajustando los datos a la ecuación logística de 4 parámetros siguiente usando el programa GraphPad Prism (GraphPad Software, San Diego, CA).

y = d + [(a-d)/(1+x/c)^{b})]

Los parámetros a, b, c y d se definen como sigue: a es inhibición porcentual en ausencia de inhibidor; b es la pendiente; c es la CI_{50} y d es la inhibición porcentual a una concentración infinita de inhibidor.

Los resultados se resumen en la Tabla 1 que enumera ejemplos de la invención.

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TABLA 1 Inhibición de MCP por compuestos de la invención

15

Ejemplo 10 Ensayo in vivo de la actividad antitumoral del Compuesto 1

a. Materiales. El Compuesto 1 usado para estudios in vivo se formuló al 25% en Solutol.

b. Línea de células. La línea de células de mieloma murino B16-F0 se hizo crecer a 37ºC en una incubadora humidificada, con una atmósfera de aire/5% de CO_{2}, en medio de Eagle modificado de Dulbecco con 4,5 g/l de glucosa (Cellgro/Mediatech, Washington, D.C.) que contenía 10% de suero fetal bovino (Hyclone Labs., Logan, UT), glutamina 2 mM (GibcoBRL, Long Island, NY). Se determinó que las células estuvieran exentas de micoplasma y virus de roedores (ensayo MAP). Se cosecharon células que habían crecido exponencialmente usando 5 ml de tripsina caliente/EDTA (0,05%, 0,5 mM (GibcoBRL). Se llevó a un volumen total de 10 ml con Medio Completo para neutralizar la tripsina y se contaron las células con un hemocitómetro. Luego se recogieron las células mediante una breve centrifugación y el sedimento de células volvió a ponerse en suspensión en solución salina tamponada con fosfato (GibcoBRL) para tener una concentración final de 1 x 10^{7} células vivas/ml.

c. Animales. Ratones C57BL hembra (20-25 g) obtenidas de Harlan Sprague Dawley, Indianopolis, IN, se mantuvieron en jaulas de 5 ratones/jaula y se alimentaron con una dieta comercial y agua ad libitum. Los animales se alojaron en condiciones controladas de humedad y temperatura y el ciclo de luz/oscuridad se fijó a intervalos de 12 horas. Los ratones se tuvieron en cuarentena durante una semana antes de la manipulación experimental.

d. Implantación y crecimiento de células tumorales. Se cosecharon células B16-F0 crecidas exponencialmente, cultivadas como se ha descrito antes, y se inyectaron (1 x 10^{6} células/ratón) en el costado derecho de los ratones. Se dividieron en 5 grupos de 10 animales cada uno cincuenta (50) animales que presentaban tumores de un tamaño de 0,01-0,3 cm^{3}. Se administró i. p. el Compuesto 1 a una dosis de 10 mg/kg/día; el vehículo (Solutol al 25%) se administró i.p. a 1 ml/kg/día.

e. Medición de los tumores. Los tumores se midieron cada 2 a 3 días usando un calibre vernier. El volumen del tumor se calculó usando la fórmula:

V(cm)^{3} = 0,5236 x longitud(cm) x anchura(cm)[(longitud(cm)+anchura(cm))/2]

Los resultados de los estudios in vivo se presentan en la Figura 1, en la que "x" representa p<0,05; "xx" representa p<0,01, y "xxx" representa p<0,001, todos ellos en relación al vehículo de control según el ensayo de Newman-Keols.

Los resultados demuestran la eficacia del compuesto 1 en la reducción del volumen del tumor.

Claims

1,. Un compuesto que tiene la fórmula 1:

16

en la que

R_{4} es -CH(CH_{2}R_{7})-Q;

R_{5} se selecciona entre el grupo constituido por -NO_{2}, -CN y -J;

R_{6} es -(CH_{2})_{m}-NH-C(=NH)-NH-;

R_{12} es -(CH_{2})_{m}-NH-C(=NH)-N-;

Q es -C(=O)C(=O)NH-X-A-Y;

X es un enlace o -O-;

Y es N(R_{13})-G;

o el resto-A-Y forma un anillo de lactama de 5, 6 o 7 miembros;

R_{11} es lo mismo que R_{10};

n es un número entero de 5 a 10;

m es un número entero de 2 a 5;

o una de sus sales farmacéuticamente aceptable;

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2. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R_{1} es ftalimido, -C\equivN, -C(=O)OCH_{3} o -NHSO_{2}CF_{3}.

3. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R_{2} es H o ciclopentilo.

4. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R_{3} es -R_{6}J, -R_{6}-NO_{2}, -R_{6}-H, -R_{12}-(J)_{2}, -(CH_{2})_{m}-NH-J o -(CH_{2})_{m}-NH_{2}.

5. El compuesto de la reivindicación 1, en el que J es Boc, metilsulfonilo o pirazinoílo.

6. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R_{7} es fenilo o alquilo que tiene de uno a seis carbonos.

7. El compuesto de la reivindicación 6, en el que R_{7} es isopropilo.

8. El compuesto de la reivindicación 1, en el que X es un enlace.

9. El compuesto de la reivindicación 1, en el que A es -CH_{2}CH_{2}-.

10. El compuesto de la reivindicación 1, en el que G es SO_{2}-arilo, seleccionándose el mencionado arilo entre fenilo, tolilo, naftilo, antracilo, fenantrilo, pirenilo y bifenilo.

11. El compuesto de la reivindicación 1, en el que G es SO_{2}-arilo, seleccionándose el mencionado arilo entre fenilo, tolilo, naftilo, antracilo, fenantrilo, pirenilo y bifenilo y estando sustituido con uno o varios átomos de halógeno.

12. El compuesto de la reivindicación 10, en el que G es SO_{2}-fenilo.

13. El compuesto de la reivindicación 11, en el que G es SO_{2}-fenilo, estando sustituido el mencionado grupo fenilo con uno o varios átomos de halógeno.

14. El compuesto de la reivindicación 1, en el que G es H o un grupo de bloqueo seleccionado entre benciloxicarbonilo, toluenosulfonilo, t-butoxicarbonilo, metilsulfonilo y pirazinoílo.

15. El compuesto de la reivindicación 14, en el que el mencionado grupo de bloqueo es t-Boc.

16. El compuesto de la reivindicación 1, en el que X es un enlace; A es -CH_{2}CH_{2}-; n es 8; R_{1} es ftalimido; R_{2} es cicloalquilo, G es H, t-Boc o SO_{2}R_{9}, en el que R_{9} es fenilo opcionalmente sustituido con halógeno; R_{7} es fenilo o alquilo, y R_{3} es -(CH_{2})_{m}-NHC(=NH)-NO_{2}, -(CH_{2})_{m}-NHC(=NH)-N(Boc)_{2}, -(CH_{2})_{m}-NHC(=NH)-NH_{3}Cl, -(CH_{2})_{m}-NH_{3}Cl o -(CH_{2})_{m}-NH-J, siendo J Boc, metilsulfonilo o pirazinoílo.

17. El compuesto de la reivindicación 16, en el que R_{2} es ciclopentilo y R_{7} es isopropilo.

18. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R_{1} es N-ftalimido, R_{2} es ciclopentilo, R_{7} es fenilo o isopropilo, X es un enlace, A es -CH_{2-}-CH_{2}- e Y es -NH-SO_{2}Ph, -NH-SO_{2}-(3,4-dicloro)Ph, -NH-tBoc, NH_{2}, HCl, N(Me)SO_{2}Ph o el resto A-Y forma la estructura

17

y

R_{3} es -(CH_{2})_{3}-NH-C(=NH)-NHNO_{2}, -(CH_{2})_{3}-NH-C(=NH)-NBoc_{2}, -(CH_{2})_{4}-NH-Boc, -(CH_{2})_{4}-NH-SO_{2}CH_{3},
-(CH_{2})_{3}-NH-pirazinoílo, -(CH_{2})_{4}NH_{2}\cdotHCl, -(CH_{2})_{3}-NH-C(=NH)-NH_{2}\cdotHCl, o -(CH_{2})_{3}-NH-C(=NNO_{2})-NH_{2}.

19. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R_{1} es N-ftalimido, R_{2} es ciclopentilo y R_{3} y R_{4} se seleccionan de acuerdo con la tabla siguiente:

18

20. Una composición para inhibir proteasa multicatalítica, que comprende un compuesto de la reivindicación 1 y un vehículo farmacéticamente aceptable.

21. Una composición para disminuir la pérdida de masa muscular, que comprende un compuesto de la reivindicación 1 y un vehículo farmacéticamente aceptable.

22. Una composición para el tratamiento de trastornos de debilitamiento muscular, que comprende un compuesto de la reivindicación 1 y un vehículo farmacéticamente aceptable.

23. Una composición de la reivindicación 22, en la que el trastorno es distrofia muscular, caquexia cardíaca, enfisemas, diabetes, lepra, desnutrición, osteomalacia o caquexia cancerosa.

24. Una composición para el tratamiento de un trastorno caracterizado por una reducción de la actividad de la enzima Cu/Zn superóxido dismutasa-1, que comprende un compuesto de la reivindicación 1 y un vehículo farmacéticamente aceptable.

25. La composición de la reivindicación 24, en la que el trastorno es esclerosis lateral amiotrófica, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Huntington, apoplejía, trauma o isquemia.

26. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19 para uso en terapia.

27. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19 para inhibir una proteasa multicatalítica.

28. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19 para disminuir la pérdida de masa muscular.

29. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19 para el tratamiento de trastornos de debilitamiento muscular.

30. El compuesto de la reivindicación 29, en el que el mencionado trastorno es distrofia muscular, caquexia cardíaca, enfisema, diabetes, lepra, desnutrición, osteomalacia o caquexia cancerosa.

31. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19 para reducir la degradación de la enzima Cu/Zn superóxido dismutasa-1 en un mamífero, estando la mencionada degradación asociada con una enfermedad o trastorno causado por la mencionada degradación.

32. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19 para el tratamiento de trastornos caracterizados por una reducción de la actividad de la enzima Cu/Zn superóxido dismutasa-1.

33. El uso del compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19 para la fabricación de un medicamento para disminuir la pérdida de masa muscular.

34. El uso del compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de trastornos de debilitamiento muscular.

35. El uso de la reivindicación 36, siendo el mencionado trastorno distrofia muscular, caquexia cardíaca, enfisema, diabetes, lepra, desnutrición, osteomalacia o caquexia cancerosa.

36. El uso del compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19 en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la enfermedad de Parkinson, la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Huntington, la apoplejía, el trauma, la esclerosis lateral amiotrópica o la isquemia.