CN110407770B - 3-取代-1,5-苯并氮杂䓬类化合物及其药物用途 - Google Patents
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Abstract
本发明属于医药技术领域，涉及式Ⅰ结构通式的3‑取代‑1,5‑苯并氮杂
酮类化合物及其在医药上的应用。该类3‑取代‑1,5‑苯并氮杂
类化合物能选择性地抑制糖原合成激酶‑3β(GSK 3β)的活性，可用于制备预防和/或治疗具有GSK 3β异常病理特征的疾病的药物，所述疾病包括癌症、神经类疾病、代谢综合症等。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，涉及一类新的式I结构的3-取代-1，5-苯并氮杂
酮类化合物及其在医药上的应用。该类3-取代苯并氮杂
类化合物能选择性地抑制糖原合成激酶-3β(GSK 3β)的活性，可用于制备预防和/或治疗具有GSK 3β异常病理特征的疾病的药物，所述疾病包括癌症、神经类疾病、代谢综合症等。
背景技术
现有技术公开了糖原合成激酶-3β(Glycogen synthase kinase-3β，GSK-3β) 是一种多功能的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，能够磷酸化糖原合成酶并使其失活。研究表明，GSK-3β能够磷酸化多种底物蛋白，参与体内多个重要信号传导通路，包括胰岛素信号通路、Wnt信号通路和NF-κB信号通路等，在调控细胞的分化、代谢、凋亡以及基因表达等方面都起着重要作用，与II型糖尿病、阿尔茨海默病、肿瘤、中风、双向情感障碍和炎症等疾病的发生发展密切相关；因此，GSK 3β是一个重要的药物新靶标。
研究表明，在胰岛素信号通路中，胰岛素通过抑制GSK 3的活性从而促进糖原合成酶的去磷酸化和糖原的合成，因此作用于GSK 3的小分子抑制剂可以模拟胰岛素作用，促进葡萄糖向糖原的转化，并且可以克服因胰岛素信号通路受阻引起的胰岛素耐受。另有研究发现，II型糖尿病患者的GSK 3的蛋白表达和活性高于正常水平，且活性异常的GSK 3引起胰岛素受体IRS1磷酸化和活性抑制，导致胰岛素信号通路异常(Eldar-Finkelman H，etal.，Diabetes 48(1999) 1662-1666.Nikoulina SE，et al.，Diabetes 49(2000)263-271.Eldar-Finkelman H，et al.，Proc Natl Acad Sci U.S.A.94(1997)9660-9664)，因此，GSK 3β已成为潜在的糖尿病治疗靶标。
研究显示GSK 3β在阿尔兹海默病的发生发展进程中起关键的调控作用，其抑制剂也可应用于治疗阿尔兹海默病。尽管自阿尔兹海默病的发现已过去一个世纪，但其具体成因尚不明确；目前最为流行的病因假说为，不溶性β-淀粉样肽 (Aβ)的聚集形成的老年斑块干扰了神经元突触间的联系，导致神经元死亡；AD的另一典型病理特征为Tau蛋白过度磷酸化后形成的神经元纤维缠结 (NFT)；GSK 3β几乎存在于所有组织中，在脑组织中尤为丰富，GSK 3β能够磷酸化tau蛋白，很可能在Aβ引起的神经元损伤和NFT形成中扮演重要角色(Yan MH，et al.，J.Alzheimers Dis.9(2006)309-317)；在PI3K/Akt信号通路中， Aβ抑制PI3K/Akt的活性，导致GSK 3β被激活，活性异常的GSK 3β继而引起 tau蛋白的过度磷酸化，最终导致神经元受损和神经纤维结的形成，与此同时GSK 3β的激活导致驱动蛋白磷酸化而失活，轴突转运蛋白能力受阻，导致神经元细胞损伤。
研究显示GSK 3β在细胞周期、细胞凋亡、细胞增殖和胚胎发育等过程中扮演重要角色，GSK 3β通过磷酸化信号转录因子如c-Myc、c-Jun、p53，参与NF-κB 信号通路，并影响凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax以及周期相关蛋白cyclinD1等表达，影响细胞的生存和增殖，这种情况下GSK 3发挥肿瘤促进剂的作用(Beurel E，et al.，Prog.Neurobiol.79(2006)173-189，McCubrey JA，et al.，Adv.Biol.Regul.54 (2014)176-196)。研究发现，GSK 3在一些实体瘤，如结肠癌，肝癌，卵巢癌和胰腺癌中过度表达，抑制GSK 3的活性将会减缓这几类肿瘤的发展进程 (Sharkoori A，et al.，Biochem Biophys Res Commun.334(2005)1365-1373，Wang Z，et al.，Nature 455(2008)1205-1210，Ougolkov AV，et al.，Cancer Res.65(2005) 2076-2081，Cao Q，et al.，Cell Res.16(2006)671-677)。
目前报道的大多数GSK 3β抑制剂为ATP竞争性抑制剂，由于ATP结合区域在500多种激酶中高度保守，因此作用于该活性区域所带来的选择性及特异性问题不容忽视。相较于ATP竞争型抑制剂，非ATP竞争型抑制剂不仅具有较好的激酶选择性，而且在细胞水平和动物水平的测试中也显示出很好的活性。目前处于临床IIb期用于治疗阿尔兹海默病和进行性核上性麻痹症(PSP)的NP12 就属于非ATP竞争型抑制剂，也表明非ATP竞争作用模式的优势。
此外，GSK 3β参与调控多条信号转导通路，正常水平的GSK 3β对于维持机体的生理活动至关重要。研究发现引起机体生物功能失调的GSK 3β水平只是正常水平的2-3倍，而过度抑制其活性很可能会导致严重的毒副作用。
基于现有技术的基础，本申请的发明人拟提供具有更精细更温和的调节作用的GSK 3β抑制剂，具体涉及一类新结构的3-取代-1，5-苯并氮杂
酮类化合物及其在医药上的应用。
发明内容
本发明的目的之一在于提供新的GSK 3β抑制剂，具体涉及新的3-取代-1，5- 苯并氮杂
酮类化合物，其结构通式如式I所示：
其中，X选自氧、硫或氮原子；R1选自C1-5的烷基、C2-5的烯基、五元芳香杂环基、苯基、取代苯基、苯基烷基、苯基烯基；R2选自丙烯酰基、硝基苄基；A选自羰基或磺酰基。
优选地，所述取代苯基的取代基取自卤素基、苯基、C1-5的烷氧基、三氟甲基、C1-3的羧酸酯基；所述的五元芳香杂环基取自噻吩基、呋喃基、吡咯基；所述的苯基烷基的烷基为C1-4的烷基；所述的苯基烯基的烯基为C2-4的烯基。
优选地，所述的卤素基包括氟、氯或溴。
本发明所示的式I结构的3-取代-1，5-苯并氮杂
酮类化合物，包括其手性异构体化合物，结构如式Ia所示：
其中，X选自氧、硫或氮原子；R1选自C1-5的烷基、C2-5的烯基、五元芳香杂环基、苯基、取代苯基、苯基烷基、苯基烯基；R2选自丙烯酰基、硝基苄基；A选自羰基或磺酰基。
优选地，所述取代苯基的取代基取自卤素基、苯基、C1-5的烷氧基、三氟甲基、C1-3的羧酸酯基；所述的五元芳香杂环基取自噻吩基、呋喃基、吡咯基；所述的苯基烷基的烷基为C1-4的烷基；所述的苯基烯基的烯基为C2-4的烯基。
优选地，所述的卤素基包括氟、氯或溴。
优选地，当R2为丙烯酰基时，R1为氟代苯基，A为羰基。
本发明所示的式I结构的3-取代-1，5-苯并氮杂
酮类化合物，包含式Ib所示的手性化合物：
其中，X选自氧、硫或氮原子；R1选自C1-5的烷基、C2-5的烯基、五元芳香杂环基、苯基、取代苯基、苯基烷基、苯基烯基；R2选自丙烯酰基、硝基苄基；A选自羰基或磺酰基。
优选地，所述取代苯基的取代基取自卤素基、苯基、C1-5的烷氧基、三氟甲基、C1-3的羧酸酯基；所述的五元芳香杂环基取自噻吩基、呋喃基、吡咯基；所述的苯基烷基的烷基为C1-4的烷基；所述的苯基烯基的烯基为C2-4的烯基。
优选地，所述的卤素基包括氟、氯或溴。
优选地，R1选自甲氧基苯基、丙氧基苯基、苄基，R2选自硝基苄基，A为羰基。
本发明所述的式I结构的3-取代-1，5-苯并氮杂
酮类化合物经酶动力学测试表明对GSK-3β的作用模式为非ATP竞争。
本发明的另一目的是提供式I所示的化合物在制备预防或治疗具有GSK 3β异常病理特征的疾病的药物中的用途。
本发明所述的式I结构的化合物可用于制备预防或治疗具有GSK 3β异常病理特征的疾病的药物。
优选地，所述具有GSK 3β异常病理特征的疾病包括癌症、神经类疾病、炎症、代谢综合症。
优选地，所述癌症包含肝细胞肝癌、胆管癌、鼻咽癌、乳腺癌、宫颈癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、胃癌、食道癌、结直肠癌、胰腺癌、黑色素瘤、口腔癌、肾癌、膀胱癌、前列腺癌、骨肉瘤、卵巢癌、输卵管癌症、胃肠间质瘤、神经胶质瘤、头颈部癌症、白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合症。
优选地，所述神经类疾病包括阿尔茨海默病、帕金森病、双向情感障碍、强直性肌营养不良、进行性核上麻痹、自闭症谱系障碍等。
优选地，所述代谢综合症包括糖尿病。
本发明提供了一类新结构的3-取代-1，5-苯并氮杂
酮类化合物及其在医药上的应用。该类3-取代苯并氮杂
类化合物能选择性地抑制糖原合成激酶-3β (GSK 3β)的活性，可用于制备预防和/或治疗具有GSK 3β异常病理特征的疾病的药物，所述疾病包括癌症、神经类疾病、代谢综合症等。
附图说明
图1是本发明所述的式I结构化合物12对GSK-3β活性测试的动力学数据双倒数图，其中，GS-2浓度不变时，10μM和20μM浓度的化合物12的直线与对照组直线相交于X轴，表明化合物12为非ATP竞争型抑制剂(A)，ATP浓度不变时，10μM和20μM浓度的化合物12的直线与对照组直线相交于X和Y 轴以外，表化合物明12为非底物竞争型抑制剂(B)。
本发明所述的3-取代-1，5-苯并氮杂
酮类化合物的制备参见以下实施例。
具体实施方式
实施例1：制备(R)-N-(5-(2-硝基苄基)-4-氧-2，3，4，5-四氢-苯并[b][1，4]硫氮杂
-3-基)苯甲酰胺(7)，其结构式如下所示：
第一步：制备N-Boc-L-半胱氨酸(1)
向反应瓶中加入L-半胱氨酸(6.0g，50mmol)、NaOH(1.2g，50mmol)、二氧六环(30mL)和水(50mL)，冰浴下加入(Boc)2O(17.0g，70mmol)，继续室温搅拌过夜。减压浓缩除去二氧六环，水层用乙酸乙酯萃取除去未反应的Boc 酸酐。水层用1mol/L的盐酸调pH至1-2，乙酸乙酯萃取两次，合并有机相并用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得无色糖浆状物2.15g(1)，收率 97％。直接用于下步反应；
第二步：制备(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(2-硝基苯基)硫)丙酸(2)
向反应瓶中加入N-Boc-L-半胱氨酸(1)(12.5g，56mmol)、乙醇(80mL)、 NaHCO3(14.2g，169mmol)、水(40mL)，滴加乙醇(20mL)稀释的邻氟硝基苯(7.9g，61mmol)，滴加完毕回流4h。减压浓缩除去乙醇，剩余物用水稀释，乙醚洗涤两次除去脂溶性杂质。水层用1NHCl调pH至4，乙酸乙酯萃取两次，合并有机相并用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得淡黄色油状固体 14.7g(2)，收率76％。直接用于下步反应；
第三步：制备(S)-3-(2-氨基苯基)硫)-2-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸(3)
向反应瓶中加入2(14.7g，43mmol)、锌粉(27.9g，430mmol)、氯化铵固体(4.6g，86mmol)、MeOH(300mL)，回流5h。冷至室温，硅藻土过滤，滤液减压浓缩除去甲醇。剩余物用二氯甲烷稀释，经硅藻土过滤，滤液经水洗、饱和食盐水洗、无水硫酸钠干燥，减压浓缩得类白色固体12.0g(3)，收率89％；
第四步：制备叔丁基-(R)-(4-氧-2，3，4，5-四氢-苯并[b][1，4]硫氮杂
-3-基)氨基甲酸酯(4)
向反应瓶中加入3(2.0g，6mmol)、HATU(2.4g，6mmol)、DIPEA(1.1mL， 7mmol)DCM(30mL)，室温搅拌4h。二氯甲烷稀释，依次用水洗、饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。减压浓缩得粗品，经硅胶柱层析(PE∶EA＝80∶20)得类白色固体1.3g(4)，收率72％；
第五步：制备叔丁基-(R)-(5-(2-硝基苄基)-4-氧-2，3，4，5-四氢-苯并[b][1，4]硫氮杂
-3-基)氨基甲酸酯(5)
向反应瓶中加入4(3.3g，11mmol)、2-硝基溴苄(2.6g，12mmol)、K2CO3 (3.0g，22mmol)、DMF(50mL)，室温搅拌4h。乙酸乙酯稀释，依次用水洗、饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。减压浓缩得粗品，经硅胶柱层析(PE∶EA＝80∶20) 得淡黄色固体3.3g(5)，收率68％；
第六步：制备(R)-3-氨基-5-(2-硝基苄基)-2，3-二氢-苯并[b][1，4]硫氮杂
-4(5H)-酮(6)
向反应瓶中加入5(3.3g，7mmol)、TFA(5mL)、DCM(20mL)，室温搅拌2h。减压浓缩除去溶剂，剩余物经正己烷萃取洗去脂溶性杂质。水层用饱和碳酸钠水溶液调pH至8，二氯甲烷萃取，有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得淡黄色固体2.5g(6)，收率98％；
第七步：制备(R)-N-(5-(2-硝基苄基)-4-氧-2，3，4，5-四氢-苯并[b][1，4]硫氮杂
-3-基)苯甲酰胺(7)
向反应瓶中加入6(0.13g，0.4mmol)、苯甲酸(0.05g，0.4mmol)、HATU (0.15g，0.4mmol)、DIPEA(0.22mL，1.2mmol)、DCM(30mL)，室温搅拌5 h。二氯甲烷稀释，依次用1NHCl、饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。减压浓缩得粗品，经硅胶柱层析(PE∶EA＝75∶25)得白色固体0.1g(7)，收率59％。
实施例2：制备甲基-(R)-4-((5-(2-硝基苄基)-4-氧-2，3，4，5-四氢-苯并[b][1，4] 硫氮杂
-3-基)氨基甲酰)苯甲酸酯(8)，其结构式如下所示：
制备方法同实施例1中化合物7的制备，用对苯二甲酸单甲酯代替苯甲酸，得白色固体，收率70％。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.25-9.17(m，1H)， 8.07-8.00(m，3H)，8.00-7.94(m，2H)，7.79(d，J＝8.2Hz，1H)，7.68(d，J＝7.8Hz， 2H)，7.51(dd，J＝13.7，8.0Hz，3H)，7.33(d，J＝9.1Hz，1H)，5.45(d，J＝17.3Hz，1H)，5.31(d，J＝17.3Hz，1H)，4.67(d，J＝9.7Hz，1H)，3.86(s，3H)，3.62(t，J＝9.3 Hz，1H)。
实施例3：制备(R)-4-甲氧基-N-(5-(2-硝基苄基)-4-氧-2，3，4，5-四氢-苯并[b][1，4] 硫氮杂
-3-基)苯甲酰胺(9)，其结构式如下所示：
制备方法同实施例1中化合物7的制备，用对甲氧基苯甲酸代替苯甲酸，得白色固体，收率50％。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.78(d，J＝7.6Hz，1H)， 7.98-7.91(m，1H)，7.85-7.70(m，3H)，7.60(d，J＝8.1Hz，2H)，7.47-7.35(m，3H)， 7.22(dt，J＝9.1，4.7Hz，1H)，6.97-6.86(m，2H)，5.39(d，J＝17.3Hz，1H)，5.23(d，J ＝17.2Hz，1H)，4.68-4.55(m，1H)，3.71(s，3H)，3.58-3.47(m，1H)，3.30(d，J＝11.4 Hz，1H)。
实施例4：制备(R)-4-氟-N-(5-(2-硝基苄基)-4-氧-2，3，4，5-四氢-苯并[b][1，4]硫氮杂
-3-基)苯甲酰胺(10)，其结构式如下所示：
制备方法同实施例1中化合物7的制备，用对氟苯甲酸代替苯甲酸，得白色固体，收率43％。ESI-MS m/z：452.1[M+H]+，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ ppm 9.06(d，J＝7.6Hz，1H)，8.04(d，J＝8.0Hz，1H)，7.94(dd，J＝8.4，5.6Hz，2H)， 7.78(d，J＝7.6Hz，1H)，7.70(t，J＝7.6Hz，2H)，7.54-7.47(m，3H)，7.34-7.30(m， 3H)，5.45(d，J＝17.2Hz，1H)，5.31(d，J＝17.2Hz，1H)，4.70-4.63(m，1H)，3.61(dd， J＝11.6，7.2Hz，1H)，3.13(t，J＝11.6Hz，1H)。
实施例5：制备(R)-2-乙氧基-N-(5-(2-硝基苄基)-4-氧-2，3，4，5-四氢-苯并[b][1，4] 硫氮杂
-3-基)苯甲酰胺(11)，其结构式如下所示：
制备方法同实施例1中化合物7的制备，用2-乙氧基苯甲酸代替苯甲酸，得白色固体，收率35％。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.96(d，J＝7.0Hz，1H)，8.00 (d，J＝8.1Hz，1H)，7.85(d，J＝7.8Hz，1H)，7.80(d，J＝7.9Hz，1H)，7.67(q，J＝8.4， 7.7Hz，2H)，7.47(dd，J＝18.4，8.6Hz，5H)，7.31(d，J＝7.4Hz，1H)，7.12(d，J＝8.3 Hz，1H)，7.05-6.95(m，1H)，5.50(d，J＝17.2Hz，1H)，5.40(d，J＝17.2Hz，1H)， 4.82-4.71(m，1H)，4.16(p，J＝6.9Hz，2H)，3.74(dd，J＝11.6，6.8Hz，1H)，3.15(t，J ＝11.6Hz，1H)，1.46(t，J＝7.0Hz，3H)。
实施例6：制备(R)-N-(5-(2-硝基苄基)-4-氧-2，3，4，5-四氢-苯并[b][1，4]硫氮杂
-3-基)-2-丙氧苯甲酰胺(12)，其结构式如下所示：
制备方法同实施例1中化合物7的制备，用2-丙氧基苯甲酸代替苯甲酸，得白色固体，收率54％。ESI-MS m/z：492.2[M+H]+，1H NMR(400MHz，DMSO-d6) δppm 8.88(d，J＝7.2Hz，1H)，8.00(d，J＝8.1Hz，1H)，7.82(d，J＝7.8Hz，1H)， 7.76(d，J＝7.9Hz，1H)，7.65(dt，J＝19.6，9.8Hz，2H)，7.53-7.41(m，4H)，7.30(dt，J ＝8.7，4.2Hz，1H)，7.12(d，J＝8.4Hz，1H)，7.00(t，J＝7.6Hz，1H)，5.50-5.34(m， 2H)，4.75(dt，J＝13.1，7.0Hz，1H)，4.06(t，J＝6.6Hz，2H)，3.72(dd，J＝11.2，6.7 Hz，1H)，3.10(t，J＝11.6Hz，1H)，1.80-1.90(m，2H)，0.97(t，J＝7.3Hz，3H)。
实施例7：制备(R)-N-(5-(2-硝基苄基)-4-氧-2，3，4，5-四氢-苯并[b][1，4]硫氮杂
-3-基)肉桂酰胺(13)，其结构式如下所示：
制备方法同实施例1中化合物7的制备，用肉桂酸代替苯甲酸，得白色固体，收率48％。ESI-MS m/z：460.2[M+H]+，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.77 (d，J＝8.0Hz，1H)，8.03(d，J＝8.4Hz，1H)，7.74(d，J＝8.0Hz，1H)，7.69(t，J＝6.8 Hz，2H)，7.56-7.47(m，5H)，7.41-7.38(m，4H)，7.32(t，J＝7.2Hz，1H)，6.72(d，J＝ 16Hz，1H)，5.42(d，J＝17.2Hz，1H)，5.36(d，J＝17.2Hz，1H)，4.66-4.59(m，1H)， 3.59(dd，J＝11.2，6.8Hz，1H)，3.13(t，J＝11.2Hz，1H)。
实施例8：制备(R)-N-(5-(2-硝基苄基)-4-氧-2，3，4，5-四氢-苯并[b][1，4]硫氮杂
-3-基)-2-苯乙酰胺(14)，其结构式如下所示：
制备方法同实施例1中化合物7的制备，用苯乙酸代替苯甲酸，得白色固体，收率59％。ESI-MS m/z：448.2[M+H]+，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.81 (d，J＝7.6Hz，1H)，8.02(d，J＝8.4Hz，1H)，7.70(d，J＝7.6Hz，1H)，7.66-7.60(m， 2H)，7.53-7.42(m，3H)，7.30-7.19(m，6H)，5.36(s，2H)，4.50-4.44(m，1H)，3.52(dd， J＝11.6，6.8Hz，1H)，3.44(s，2H)，3.10(t，J＝11.6Hz，1H)。
实施例9：制备(R)-2-甲氧基-N-(5-(2-硝基苄基)-4-氧-2，3，4，5-四氢-苯并[b][1，4] 硫氮杂
-3-基)苯甲酰胺(15)，其结构式如下所示：
制备方法同实施例1中化合物7的制备，用2-甲氧基苯甲酸代替苯甲酸，得白色固体，收率71％。ESI-MS m/z：464.2[M+H]+，1H NMR(400MHz，DMSO-d6) δppm 8.82(d，J＝7.2Hz，1H)，8.00(d，J＝8.2Hz，1H)，7.80(t，J＝8.9Hz，2H)，7.67 (d，J＝7.9Hz，2H)，7.58-7.40(m，4H)，7.36-7.24(m，1H)，7.14(d，J＝8.4Hz，1H)， 7.01(t，J＝7.7Hz，1H)，5.48(d，J＝17.2Hz，1H)，5.38(d，J＝17.1Hz，1H)，4.71(dt， J＝13.5，7.1Hz，1H)，3.73-3.61(m，1H)，3.24(t，J＝11.6Hz，1H)。
实施例10：制备(R)-N-(5-(2-硝基苄基)-4-氧-2，3，4，5-四氢-苯并[b][1，4]硫氮杂
-3-基)-3-苯丙酰胺(16)，其结构式如下所示：
制备方法同实施例1中化合物7的制备，用苯丙酸代替苯甲酸，得淡黄色固体，收率86％。ESI-MS m/z：462.2[M+H]+，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.52(d，J＝7.8Hz，1H)，8.00(d，J＝8.1Hz，1H)，7.70(d，J＝7.9Hz，1H)，7.63(d，J ＝7.4Hz，2H)，7.52-7.40(m，3H)，7.27(t，J＝7.6Hz，1H)，7.20(t，J＝7.5Hz，2H)， 7.14(d，J＝7.7Hz，3H)，5.39(d，J＝17.2Hz，1H)，5.31(d，J＝17.1Hz，1H)， 4.53-4.43(m，1H)，3.45(dd，J＝11.3，6.9Hz，1H)，3.02(t，J＝11.8Hz，1H)，2.73(t，J ＝7.9Hz，2H)，2.39(t，J＝7.8Hz，2H)。
实施例11：制备(R)-N-(5-(2-硝基苄基)-4-氧-2，3，4，5-四氢-苯并[b][1，4]硫氮杂
-3-基)-丙烯酰胺(17)，其结构式如下所示：
向反应瓶中加入6(150mg，0.45mmol)，DIPEA(238μL，1.36mmol)，DCM (20mL)，冰浴下加入丙烯酰氯(275μL，2.27mmol)，室温搅拌48h。二氯甲烷稀释，饱和食盐水洗涤两次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得粗品。粗品经硅胶柱层析(PE：EA＝60：40)得类白色固体130mg，收率74％。ESI-MS m/z：384.1[M +H]+，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.75(d，J＝7.7Hz，1H)，7.99(d，J＝ 8.2Hz，1H)，7.71(d，J＝8.0Hz，1H)，7.64(d，J＝7.1Hz，2H)，7.54-7.38(m，3H)， 7.29(d，J＝7.7Hz，1H)，6.27(dd，J＝17.1，10.3Hz，1H)，6.06(d，J＝17.1Hz，1H)，5.60(d，J＝10.2Hz，1H)，5.34(t，J＝12.9Hz，2H)，4.62-4.47(m，1H)，3.54(dd，J＝ 11.3，7.2Hz，1H)，3.08(t，J＝11.8Hz，1H)。
实施例12：制备(R，E)-N-(5-(2-硝基苄基)-4-氧-2，3，4，5-四氢-苯并[b][1，4]硫氮杂
-3-基)丁-2-烯胺(18)，其结构式如下所示：
制备方法同实施例1中化合物7的制备，用2-丁烯酸代替苯甲酸，得白色固体，收率40％。ESI-MS m/z：398.1[M+H]+，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.52(d，J＝7.8Hz，1H)，8.00(d，J＝8.2Hz，1H)，7.72(d，J＝7.9Hz，1H)，7.64(t，J＝ 7.2Hz，2H)，7.40-7.50(m，3H)，7.32-7.23(m，1H)，6.55-6.65(m，1H)，5.95(dd，J＝15.3，2.3Hz，1H)，5.40(d，J＝17.3Hz，1H)，5.30(d，J＝17.1Hz，1H)，4.50-4.60(m， 1H)，3.51(dd，J＝11.3，6.9Hz，1H)，3.08(t，J＝11.7Hz，1H)，1.77-1.71(m，3H)。
实施例13：制备(R)-N-(5-(2-硝基苄基)-4-氧-2，3，4，5-四氢-苯并[b][1，4]硫氮杂
-3-基)-乙酰胺(19)，其结构式如下所示：
制备方法同实施例1中化合物7的制备，用乙酸代替苯甲酸，得类白色固体，收率89％。ESI-MS m/z：372.1[M+H]+，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.50 (d，J＝7.7Hz，1H)，8.00(d，J＝8.1Hz，1H)，7.74-7.58(m，3H)，7.52-7.38(m，3H)， 7.26(t，J＝7.5Hz，1H)，5.39(d，J＝17.2Hz，1H)，5.28(d，J＝17.1Hz，1H)， 4.50-4.41(m，1H)，3.48(dd，J＝11.3，6.9Hz，1H)，3.03(t，J＝11.7Hz，1H)，1.79(s， 3H)。
实施例14：制备(R)-N-(5-(2-硝基苄基)-4-氧-2，3，4，5-四氢-苯并[b][1，4]硫氮杂
-3-基)-丙酰胺(20)，其结构式如下所示：
制备方法同实施例1中化合物7的制备，用丙酸代替苯甲酸，得类白色固体，收率89％。ESI-MS m/z：386.1[M+H]+，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.46-8.35(m，1H)，7.99(d，J＝8.0Hz，1H)，7.74-7.58(m，3H)，7.54-7.38(m，3H)， 7.27(s，1H)，5.42-5.26(m，2H)，4.51-4.42(m，1H)，3.47(dd，J＝10.8，5.4Hz，1H)， 3.05(t，J＝12.1Hz，1H)，2.14-2.00(m，2H)，0.96-0.87(m，3H)。
实施例15：制备(R)-N-(5-(2-硝基苄基)-4-氧-2，3，4，5-四氢-苯并[b][1，4]硫氮杂
-3-基)-4-(三氟甲基)苯磺酰胺(21)，其结构式如下所示：
向反应瓶中加入6(150mg，0.45mmol)，4-三氟甲基苯磺酰氯(70mg，0.5 mmol)，吡啶(15mL)，室温搅拌9h。反应完毕后加入乙酸乙酯，加压浓缩除去吡啶。残余物加入乙酸乙酯稀释，依次用水洗，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。减压浓缩得粗品，粗品经硅胶柱层析(PE：EA＝65：35)得白色固体120mg，收率49％。ESI-MS m/z：538.1[M+H]+，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.95 (d，J＝9.2Hz，1H)，8.06(d，J＝8.4Hz，2H)，7.94(d，J＝8.0Hz，1H)，7.83(d，J＝8.4 Hz，2H)，7.65(t，J＝6.8Hz，2H)，7.56(t，J＝6.8Hz，2H)，7.49-7.43(m，2H)，7.32(t， J＝7.6Hz，1H)，5.06(d，J＝17.2Hz，1H)，4.94(d，J＝17.2Hz，1H)，4.03-3.98(m，1H)，3.52(dd，J＝11.6，7.2Hz，1H)，3.06(t，J＝11.6Hz，1H)。
实施例16：制备(R)-N-(5-(2-硝基苄基)-4-氧-2，3，4，5-四氢-苯并[b][1，4]硫氮杂
-3-基)-甲基磺酰胺(22)，其结构式如下所示：
制备方法上述化合物21，用甲磺酰氯代替4-三氟甲基苯磺酰氯，得白色固体，收率49％。ESI-MS m/z：408.1[M+H]+，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 7.98(dd，J＝19.1，8.6Hz，2H)，7.65(d，J＝8.7Hz，3H)，7.48(d，J＝10.8Hz，3H)，7.30(d，J＝7.4Hz，1H)，5.45-5.27(m，2H)，4.06(dd，J＝15.7，7.4Hz，1H)，3.59(t，J ＝9.2Hz，1H)，3.03(t，J＝11.8Hz，1H)，2.81(s，3H)。
实施例17：制备(R)-N-(5-(2-硝基苄基)-4-氧-2，3，4，5-四氢-苯并[b][1，4]硫氮杂
-3-基)-噻吩-2-磺酰胺(23)，其结构式如下所示：
制备方法同上述化合物21，用2-噻吩磺酰氯代替4-三氟甲基苯磺酰氯，得白色固体，收率46％。ESI-MS m/z：476.1[M+H]+，1H NMR(400MHz，DMSO-d6) δppm 8.82(d，J＝7.6Hz，1H)，8.00-7.95(m，2H)，7.65(d，J＝7.6Hz，1H)，7.60(d，J ＝7.6Hz，1H)，7.56-7.54(m，2H)，7.51-7.45(m，2H)，7.40(d，J＝3.6Hz，1H)，7.32(t， J＝7.2Hz，1H)，7.23(t，J＝3.6Hz，1H)，5.14(s，2H)，3.98-3.92(m，1H)，3.44(dd，J ＝11.2，7.2Hz，1H)，3.13(t，J＝11.6Hz，1H)。
实施例18：制备(R)-N-(5-(2-硝基苄基)-4-氧-2，3，4，5-四氢-苯并[b][1，4]硫氮杂
-3-基)-1-苯甲基磺酰胺(24)，其结构式如下所示：
制备方法同上述化合物21，用苄基磺酰氯代替4-三氟甲基苯磺酰氯，得白色固体，收率46％。ESI-MS m/z：484.1[M+H]+，1H NMR(400MHz，DMSO-d6) δppm 8.00(d，J＝8.1Hz，1H)，7.93(d，J＝8.8Hz，1H)，7.71-7.60(m，2H)，7.56(d，J ＝7.7Hz，1H)，7.51-7.40(m，2H)，7.32(d，J＝8.0Hz，1H)，7.26(dd，J＝10.1，6.7Hz， 6H)，5.35(d，J＝17.2Hz，1H)，5.25(d，J＝17.2Hz，1H)，4.24(q，J＝13.6Hz，2H)， 3.65-3.57(m，1H)，3.36(d，J＝6.9Hz，1H)，2.97(t，J＝11.6Hz，1H)。
实施例19：制备(R)-4-氯-N-(5-(2-硝基苄基)-4-氧-2，3，4，5-四氢-苯并[b][1，4]硫氮杂
-3-基)苯磺酰胺(25)，其结构式如下所示：
制备方法同上述化合物21，用对氯苯磺酰氯代替4-三氟甲基苯磺酰氯，得白色固体，收率31％。ESI-MS m/z：504.1[M+H]+，1H NMR(400MHz，DMSO-d6) δppm 8.72(d，J＝8.1Hz，1H)，7.94(d，J＝8.2Hz，1H)，7.71(d，J＝8.6Hz，2H)， 7.66-7.49(m，6H)，7.47-7.41(m，2H)，7.30(t，J＝7.5Hz，1H)，5.08(d，J＝17.1Hz， 1H)，4.98(d，J＝17.1Hz，1H)，3.93(q，J＝9.1，8.6Hz，1H)，3.46(dd，J＝11.4，6.9 Hz，1H)，3.02(t，J＝11.7Hz，1H)。
实施例20：制备(R)-N-(5-(2-硝基苄基)-4-氧-2，3，4，5-四氢-苯并[b][1，4]硫氮杂
-3-基)-[1，1′-联苯]-4-磺酰胺(26)，其结构式如下所示：
制备方法同上述化合物21，用对联苯磺酰氯代替4-三氟甲基苯磺酰氯，得白色固体，收率32％。ESI-MS m/z：546.1[M+H]+，1H NMR(400MHz，DMSO-d6) δppm 8.62(d，J＝9.1Hz，1H)，7.91(dd，J＝13.6，8.2Hz，3H)，7.83-7.76(m，2H)，7.70-7.58(m，4H)，7.57-7.48(m，5H)，7.47-7.35(m，2H)，7.34-7.25(m，1H)，5.08(d， J＝17.1Hz，1H)，5.00(d，J＝17.0Hz，1H)，3.98(q，J＝9.8Hz，1H)，3.46(dd，J＝ 11.4，6.9Hz，1H)，3.06(t，J＝11.7Hz，1H)。
实施例21：制备(S)-N-(5-(2-硝基苄基)-4-氧-2，3，4，5-四氢-苯并[b][1，4]氧氮杂
-3-基)-苯甲酰胺(33)，其结构式如下所示：
第一步：制备N-Boc-L-丝氨酸(27)
向反应瓶中加入L-丝氨酸(5.3g，50mmol)，TEA(6.9mL，50mmol)，二氧六环(30mL)和水(50mL)，冰浴下加入(Boc)2O(13.1g，60mmol)，继续室温搅拌过夜。减压浓缩除去二氧六环，水层用乙酸乙酯萃取除去未反应的Boc 酸酐。水层用1mol/L的盐酸调pH至1-2，乙酸乙酯萃取两次，合并有机相并用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得无色糖浆状物9.5g，收率92％。直接用于下步反应；
第二步：制备(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(2-硝基苯氧基)丙酸(28)
向反应瓶中加入NaH(0.8g，2mmol)，DMF(15mL)，冰浴下依次滴加27 (2.0g，1mmol)的DMF溶液(10mL)，邻氟硝基苯(1.4g，1mmol)，滴加完毕后室温搅拌过夜。饱和氯化铵溶液淬灭反应，乙酸乙酯萃取两次，合并有机相并用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得粗品。粗品经硅胶柱层析 (PE∶EA＝50∶50)得淡褐色油状固体2.3g，收率70％。直接用于下步反应；
第三步：制备(S)-3-(2-氨基苯氧基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸(29)
向反应瓶中加入28(9.5g，29mmol)，Pd/C(1.3g，10％)，MeOH(200mL)，氢气常压反应5h。活性炭吸附过滤，滤液减压浓缩得玫红色固体8.4g，收率98％。直接用于下步反应；
第四步：制备(S)-叔丁基-(4-氧-2，3，4，5-四氢-苯并[b][1，4]氧氮杂
-3-基)氨基甲酸酯(30)
向反应瓶中加入29(8.6g，29mmol)，HATU(10.9g，29mmol)，DIPEA(5.6 mL，32mmol)，DCM(200mL)，室温搅拌过夜。二氯甲烷稀释，依次用水洗、饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。减压浓缩得粗品，经正己烷∶乙酸乙酯(5∶1) 超声洗涤得褐色固体6.7g，收率83％。直接用于下步反应；
第五步：制备(S)-叔丁基-(5-(2-硝基苄基)-4-氧-2，3，4，5-四氢-苯并[b][1，4]氧氮杂
-3-基)-氨基甲酸酯(31)
向反应瓶中加入30(2.6g，9mmol)，2-硝基溴苄(2.4g，11mmol)，K2CO3 (2.6g，18mmol)，CH3CN(100mL)，回流过夜。乙酸乙酯稀释，依次用水洗、饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。减压浓缩得粗品，经硅胶柱层析(PE∶EA＝80∶20) 得淡黄色固体2.2g，收率57％；
第六步；制备(S)-3-氨基-5-(2-硝基苄基)-2，3-二氢-苯并[b][1，4]氧氮杂
-4(5H)-酮(32)
向反应瓶中加入31(2.2g，5mmol)，TFA(4mL)，DCM(15mL)，室温搅拌2h。减压浓缩除去溶剂，剩余物经正己烷萃取洗去脂溶性杂质。水层用饱和碳酸钠水溶液调pH至8，二氯甲烷萃取，有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得粗品，经正己烷超声洗涤得淡黄色固体1.3g，收率80％；
第七步：制备(S)-N-(5-(2-硝基苄基)-4-氧-2，3，4，5-四氢-苯并[b][1，4]氧氮杂
-3-基)-苯甲酰胺(33)
向反应瓶中加入32(100mg，0.3mmol)，苯甲酸(40mg，0.3mmol)，HATU (130mg，0.3mmol)，DIPEA(170μL，0.9mmol)，DCM(10mL)，室温搅拌3 h。二氯甲烷稀释，依次用1mol/L的盐酸水溶液，饱和碳酸氢钠，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。减压浓缩得粗品，经硅胶柱层析(PE∶EA＝75∶25)得白色固体90mg，收率67％。ESI-MS m/z：418.2[M+H]+，1H NMR(400MHz，DMSO-d6) δppm 8.78(d，J＝8.3Hz，1H)，8.04(d，J＝8.2Hz，1H)，7.85(d，J＝7.6Hz，2H)， 7.68(t，J＝7.7Hz，1H)，7.56-7.45(m，6H)，7.27(s，3H)，5.53(d，J＝17.6Hz，1H)， 5.32(d，J＝17.6Hz，1H)，5.06(q，J＝9.2Hz，1H)，4.71(t，J＝10.9Hz，1H)，4.50(t，J＝8.9Hz，1H)。
实施例22制备甲基-(S)-4-((5-(2-硝基苄基)-4-氧-2，3，4，5-四氢-苯并[b][1，4]氧氮杂
-3-基)氨基甲酰)苯甲酸酯(34)，其结构式如下所示：
制备方法同上述化合物33，对苯二甲酸单甲酯代替苯甲酸，得类白色固体，收率95％。ESI-MS m/z：476.1[M+H]+，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 9.01 (d，J＝8.0Hz，1H)，8.06(d，J＝8.0Hz，3H)，7.98(d，J＝8.2Hz，2H)，7.69(t，J＝7.5 Hz，1H)，7.51(t，J＝6.8Hz，3H)，7.28(s，3H)，5.53(d，J＝17.6Hz，1H)，5.34(d，J＝ 17.5Hz，1H)，5.15-4.98(m，1H)，4.72(t，J＝10.8Hz，1H)，4.53(t，J＝8.9Hz，1H)， 3.88(s，3H)。
实施例23：制备(S)-2-乙氧-N-(5-(2-硝基苄基)-4-氧-2，3，4，5-四氢-苯并[b][1，4] 氧氮杂
-3-基)苯甲酰胺(35)，其结构式如下所示：
制备方法同上述化合物33，对氟苯甲酸代替苯甲酸，得类白色固体，收率 55％。ESI-MS m/z：462.2[M+H]+，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.93(d，J ＝6.7Hz，1H)，8.06(d，J＝8.2Hz，1H)，7.89(d，J＝7.8Hz，1H)，7.66(q，J＝9.5，8.6 Hz，1H)，7.57(d，J＝7.9Hz，1H)，7.50(d，J＝8.4Hz，3H)，7.27(dd，J＝17.3，6.4Hz， 3H)，7.14(d，J＝8.4Hz，1H)，7.03(t，J＝7.6Hz，1H)，5.62(d，J＝17.7Hz，1H)，5.38 (d，J＝17.7Hz，1H)，5.19-5.05(m，1H)，4.71(t，J＝8.8Hz，1H)，4.45(t，J＝10.6Hz， 1H)，4.25-4.11(m，2H)，1.47(t，J＝7.0Hz，3H)。
实施例24：制备(S)-N-(5-(2-硝基苄基)-4-氧-2，3，4，5-四氢-苯并[b][1，4]氧氮杂
-3-基)-2-丙氧基苯甲酰胺(36)，其结构式如下所示：
制备方法同上述化合物33，2-丙氧基苯甲酸代替苯甲酸，得淡黄色固体，收率75％。ESI-MS m/z：476.2[M+H]+，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.78(d， J＝7.1Hz，1H)，8.04(d，J＝8.2Hz，1H)，7.82(d，J＝7.5Hz，1H)，7.66(t，J＝7.8Hz， 1H)，7.55(d，J＝7.9Hz，1H)，7.49(d，J＝7.5Hz，3H)，7.32-7.19(m，3H)，7.15(d，J＝ 8.4Hz，1H)，7.02(t，J＝7.6Hz，1H)，5.59(d，J＝17.6Hz，1H)，5.33(d，J＝17.6Hz， 1H)，5.07(dt，J＝12.0，7.4Hz，1H)，4.64(t，J＝8.8Hz，1H)，4.51(t，J＝10.5Hz，1H)， 3.91(s，3H)。
实施例25：制备(S)-2-甲氧基-N-(5-(2-硝基苄基)-4-氧-2，3，4，5-四氢-苯并[b][1，4]氧氮杂
-3-基)苯甲酰胺(37)，其结构式如下所示：
制备方法同上述化合物33，2-甲氧基苯甲酸代替苯甲酸，得淡黄色固体，收率95％。ESI-MS m/z：448.2[M+H]+，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.84(d， J＝6.7Hz，1H)，8.03(d，J＝8.2Hz，1H)，7.86(d，J＝7.8Hz，1H)，7.63(d，J＝7.8Hz，1H)，7.53(d，J＝7.6Hz，1H)，7.46(d，J＝7.7Hz，3H)，7.24(d，J＝20.2Hz，3H)，7.12 (d，J＝8.3Hz，1H)，7.01(d，J＝7.8Hz，1H)，5.57(d，J＝17.7Hz，1H)，5.35(d，J＝ 17.7Hz，1H)，5.11(q，J＝8.5Hz，1H)，4.68(t，J＝8.9Hz，1H)，4.39(t，J＝10.8Hz， 1H)，4.05(d，J＝7.1Hz，2H)，1.87(p，J＝7.2Hz，2H)，0.97(d，J＝7.5Hz，3H)。
实施例26：制备(S)-N-(5-(2-硝基苄基)-4-氧-2，3，4，5-四氢-苯并[b][1，4]硫氮杂
-3-基)-2-丙氧基苯甲酰胺(38)，其结构式如下所示：
制备方法同上述化合物12，D-半胱氨酸代替L-半胱氨酸，得类白色固体，收率70％。ESI-MS m/z：492.2[M+H]+，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.89 (d，J＝6.4Hz，1H)，8.03(d，J＝7.6Hz，1H)，7.83(d，J＝7.2Hz，1H)，7.77(d，J＝7.2 Hz，1H)，7.72-7.67(m，2H)，7.52-7.47(m，4H)，7.35-7.32(m，1H)，7.16(d，J＝8.0Hz， 1H)，7.05-7.01(m，1H)，5.47(d，J＝17.2Hz，1H)，5.40(d，J＝17.2Hz，1H)， 4.78-4.74(m，1H)，4.10-4.08(m，2H)，3.75-3.71(m，1H)，3.10(t，J＝12.0Hz，1H)， 1.87-1.86(m，2H)，0.98(t，J＝6.4Hz，3H)。
实施例27：制备(S)-2-甲氧基-N-(5-(2-硝基苄基)-4-氧-2，3，4，5-四氢-苯并[b][1，4]硫氮杂
-3-基)苯甲酰胺(39)，其结构式如下所示：
制备方法同上述化合物38，2-甲氧基苯甲酸代替2-丙氧基苯甲酸得淡黄色固体，收率75％。ESI-MS m/z：464.2[M+H]+，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ ppm 8.83(d，J＝7.2Hz，1H)，8.02(d，J＝8.4Hz，2H)，7.83-7.78(m，2H)，7.69(d，J＝ 7.6Hz，2H)，7.52(m，4H)，7.35-7.31(m，1H)，7.17(d，J＝8.8Hz，1H)，7.04(t，J＝7.6 Hz，1H)，5.49(d，J＝17.2Hz，1H)，5.38(d，J＝17.2Hz，1H)，4.74-4.68(m，1H)，3.92 (s，3H)，3.68(dd，J＝11.2，7.2Hz，1H)，3.25(t，J＝11.2Hz，1H)。
实施28：制备(S)-N-(5-(2-硝基苄基)-4-氧-2，3，4，5-四氢-苯并[b][1，4]硫氮杂
-3-基)-2-苯乙酰胺(40)，其结构式如下所示：
制备方法同上述化合物38，苯乙酸代替2-丙氧基苯甲酸得白色固体，收率 74％。ESI-MS m/z：448.2[M+H]+，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.81(d，J ＝7.2Hz，1H)，8.02(d，J＝8.0Hz，1H)，7.71-7.60(m，3H)，7.53-7.42(m，3H)， 7.30-7.19(m，6H)，5.37(s，2H)，4.51-4.44(m，1H)，3.52(dd，J＝11.2，6.8Hz，1H)， 3.44(s，3H)，3.10(t，J＝11.2Hz，1H)。
实施例29：本发明所述的化合物对GSK-3β的体外酶抑制活性测试
采用化学发光法进行测试，荧光信号强度与剩余ATP的量成正比，通过检测体系内剩余ATP的量进而推算出GSK-3β磷酸化底物GS-2时消耗的ATP量，从而反映酶的活性水平。计算不同浓度下化合物的抑制率，通过GraphPad软件拟合出半数抑制浓度(IC50值)；
所用的主要试剂：
GSK-3β(Millipore，Lot#：14-306)；GS-2(吉尔生化上海有限公司)；ATP·2Na(Sigma-Aldrich)；Kinase-Glo Luminescent Kinase Assay(Promega corporation)；TDZD-8(MedChem Express Technologies，Lot#：HY-11012).
实验方法：
在96孔板上，将4μL含不同浓度化合物的DMSO溶液用14μL缓冲液稀释，依次加入2μL(10-20ng)的GSK-3β，20μL的GS-2(12.5μM)和ATP(4μM) 的缓冲液，于30℃下孵育30分钟，孵育完毕后加入40μL Kinase-Glo试剂，于 30℃下孵育10分钟，化学发光仪计数，GraphPad软件计算半数抑制浓度(IC50值)；
结果显示，本发明的3-取代-1，5-苯并氮杂
酮类化合物对GSK 3β具有微摩尔浓度级的抑制作用。表1为部分化合物的结构及活性数据。
表1.部分实施例制备的化合物对GSK 3β酶的抑制活性(IC50)
实施例30：动力学测试确定本发明化合物对GSK-3β的作用模式
测试一定浓度下化合物在一系列不同ATP浓度时的GSK-3β活性，计算出反应速率。通过反应速率的倒数(1/v)对ATP浓度的倒数(1/[ATP])作图得到Lineweaver-Burk。直线的相交点反映出化合物的作用类型。若化合物的直线空白对照组的直线相交于Y轴，则表明化合物与ATP存在竞争关系，如果相交于X 轴，则表明化合物与ATP不存在竞争关系；
测试一定浓度下化合物在一系列不同GS-2浓度时的GSK-3β活性，计算出反应速率。通过反应速率的倒数(1/v)对GS-2浓度的倒数(1/[GS-2])作图得到Lineweaver-Burk。直线的相交点反映出化合物的作用类型。若化合物的直线空白对照组的直线相交于Y轴，则表明化合物与GS-2存在竞争关系，如果相交于X轴，则表明化合物与GS-2不存在竞争关系；
测试与ATP作用模式时，保持GS-2浓度为6.25μM，ATP的终浓度为8.0μM， 4.0μM，2.0μM，1.0μM，0.5μM。运用上述体外激酶活性测试方法测试不同ATP 浓度下酶的活性；计算反应速率并对ATP浓度进行双倒数作图；测试与GS-2作用模式时，保持ATP浓度为2μM不变，GS-2的终浓度为12.5μM，6.25μM， 3.13μM，1.56μM，0.78μM；运用上述体外激酶活性测试方法测试不同GS-2浓度下酶的活性。计算反应速率并对GS-2浓度进行双倒数作图；根据双倒数图判断化合物的作用模式。
综上所述，本发明提供的具有通式I结构的化合物对于GSK 3β激酶活性具有明显的抑制作用，能用于制备治疗或预防具有GSK 3β异常病理特征的疾病的药物组合物。
尽管本发明的内容已经通过上述优选实施例作了详细介绍，但应当认识到上述的描述不应被认为是对本发明的限制。在本领域技术人员阅读了上述内容后，对于本发明的多种修改和替代都将是显而易见的。因此，本发明的保护范围应由所附的权利要求来限定。
Claims (8)
1.式I结构的3-取代-1,5-苯并氮杂
类化合物，
其中，X选自氧、硫或氮原子；
R1选自C1-5的烷基、C2-5的烯基、噻吩基、呋喃基、吡咯基、苯基、取代苯基、苯基烷基、苯基烯基，所述的取代苯基的取代基选自卤素基、苯基、三氟甲基、C1-5的烷氧基、C1-3的羧酸酯基，所述的苯基烷基的烷基为C1-4的烷基，所述的苯基烯基的烯基为C2-4的烯基；
R2选自硝基苄基；
A选自羰基或磺酰基。
2.按权利要求1所述的式I结构的3-取代-1,5-苯并氮杂
类化合物，其特征在于，所述的卤素基为氟、氯或溴。
3.根据权利要求1或2所述的式I结构的3-取代-1,5-苯并氮杂
类化合物在用于制备预防和/或治疗具有GSK 3β异常病理特征的疾病的药物组合物中的用途。
4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述的药物组合物含有治疗有效量的根据权利要求
中任意一项所述的化合物或其可药用盐，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
5.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述具有GSK 3β异常病理特征的疾病为癌症、神经类疾病、炎症或代谢综合症。
6.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述癌症为肝细胞肝癌、胆管癌、鼻咽癌、乳腺癌、宫颈癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、胃癌、食道癌、结直肠癌、胰腺癌、黑色素瘤、口腔癌、肾癌、膀胱癌、前列腺癌、骨肉瘤、卵巢癌、输卵管癌症、胃肠间质瘤、神经胶质瘤、头颈部癌症、白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤或骨髓增生异常综合症。
7.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述神经类疾病为阿尔茨海默病、帕金森病、双向情感障碍、强直性肌营养不良、进行性核上麻痹或自闭症谱系障碍。
8.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述代谢综合症为糖尿病。
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