TWI811116B - 含硒元素的查爾酮化合物及其製備方法、包含其的醫藥組合物、以及用於製備預防或治療大腸癌之醫藥組合物的用途 - Google Patents

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一種含硒元素的查爾酮化合物及其製備方法、包含其的醫藥組合物、以及用於製備預防或治療大腸癌之醫藥組合物的用途，其中含硒元素的查爾酮化合物由式(I)或其醫藥上可接受的鹽所表示；本發明利用簡單的合成方法合成四種含硒元素的查爾酮化合物，相較於習知的化療藥5-FU對於大腸癌的治療效果更佳。

Description

含硒元素的查爾酮化合物及其製備方法、包含其的醫藥組合物、以及用於製備預防或治療大腸癌之醫藥組合物的用途
本發明是有關於一種含硒元素的查爾酮化合物，特別係將含硒元素的查爾酮化合物用於製備預防或治療大腸癌之醫藥組合物的用途。
世界衛生組織(WHO)統計，全球每年新診斷為大腸癌人數高達100萬，有70萬人因大腸癌死亡，為第三常見的癌症；大部份的大腸癌起因為生活習慣及老化，少部分則因為遺傳疾病；風險因子包括飲食、肥胖、抽菸、運動量不足等，大腸癌在早期並無明顯症狀，直到發病中晚期發現為止，治療方式包括手術、放射線治療、化學治療、標靶治療或是合併使用以上療法；然而，現有的藥物中，仍難以完全治療大腸癌。
硒(Selenium)是人體必需的微量營養素，對人體健康有益，硒缺乏與心血管疾病、糖尿病、甲狀腺功能障礙等息息相關；硒代半胱胺酸(Selenocystein, SeCys)是取代半胱胺酸中的硫醇基的硒醇基團，即為結合到硒蛋白中的胺基酸，硒蛋白可能在預防癌症方面發揮重要作用；在哺乳動物中發現的已鑑定的25種硒蛋白中，麩胱甘肽過氧化物酶(Glutathione peroxidases, GPx)、碘甲狀腺原胺酸脫碘酶 (Iodothyronine deiodinase, ID)、和硫氧還蛋白還原酶 (Thioredoxin reductase, TrxR)與癌症有關；含硒的酶調節哺乳動物的許多功能，包括轉移、細胞凋亡、腫瘤生長、血糖、抗氧化劑和耐藥性等。
含硒的藥物可以使用在抗發炎、抗氧化、抗病毒和抗癌，因此通常用作為抗氧化劑、抗炎劑和抗癌劑，然而，含硒的藥物對於大腸癌的研究非常少，特別是含硒元素的查爾酮化合物沒有得到充分研究。
有鑑於此，本發明人深刻瞭解前案之不足與缺陷，乃亟思加以改良創新，並經多年研究後，終於成功研發出具有一種含硒元素的查爾酮化合物，此化合物證實其具有抗大腸癌之功效，也為大腸癌治療提供一個新穎且安全的治療策略。
為達成上述目的，本發明提供一種含硒元素的查爾酮化合物，由下式(I)所表示或其醫藥上可接受的鹽： 式(I)中，n為0至4的整數，R各自獨立地為-OH、-NH 2、-SH、-OR’、-NR’ 2或-SR’，其中R’各自獨立地為經取代或未經取代的烷基。
在本發明的一實施例中，n為0至2的整數，且R為-OH。
在本發明的一實施例中，式(I)由以下化合物中的任一者表示： 、 、 、 。
本發明另外提供一種醫藥組合物，其包含上述任一的含硒元素的查爾酮化合物、以及醫藥上可接受之載劑。
在本發明的一實施例中，醫藥組合物為溶液、懸浮液、乳劑、粉末、錠劑、丸劑、糖漿、口含錠、片劑、口嚼膠、濃漿或膠囊。
本發明另外提供一種含硒元素的查爾酮化合物用於製備預防或治療大腸癌之醫藥組合物的用途，其中含硒元素的查爾酮化合物包含上述任一的含硒元素的查爾酮化合物。
在本發明的一實施例中，含硒元素的查爾酮化合物的有效劑量為10 μM至200 μM。
本發明另外提供一種含硒元素的查爾酮化合物的製備方法，包含由下式(II)所表示的化學反應之步驟： 式(II)中，n為1至5的整數，R 1各自獨立地為-OH、-NH 2、-SH、-OR’、-NR’ 2、-SR’或甲氧基甲基醚(methoxy methyl, MOM)；R 2各自獨立地為-OH、-NH 2、-SH、-OR’、-NR’ 2或-SR’；其中R’各自獨立地為經取代或未經取代的烷基。
在本發明的一實施例中，當任一個R 1為甲氧基甲基醚時，其更包含將該式(II)反應的生成物在100 oC的環境下與鹽酸進行反應，以將該甲氧基甲基醚反應成為-OH的步驟。
本發明提供了一種含硒元素的查爾酮化合物及其製備方法，該技術非常容易操作，且原料的化學藥品非常便宜、產率適中，僅需以層析純化或抽氣過濾即可獲得純的產品，相較於習知的化療藥5-FU對於大腸癌的治療效果更佳。
[術語定義] 本說明書中廣泛地使用生物技術領域內習用之許多技術性及科學術語，在以下描述中，為了對本說明書及申請專利範圍以及賦予該等術語之範疇有清楚又一致的瞭解，提供以下定義。沒有在下述所特別定義的其他術語，則為該所屬專業人士領域可共同瞭解的意義。
本發明中所載「或」、「以及」、「和」，除非另有說明，皆指涉「或/和」。此外，用語「包含」、「包括」皆非有所限制之開放式連接詞。前述段落僅為系統性之指涉而不應解釋為對發明主體之限制。
本發明中所載的所有數值可具有 ± 10% 的標準技術測量誤差 (標準差)。詞彙 “約” 的目的是表示相對某給定值的 ±10%、±5%、±2.5%、或 ±1%，也就是說，“約”20% 代表 20±2%、20±1%、20±0.5%、或 20±0.25%。
本發明中所載「經取代」意謂鍵結至化合物的碳原子的氫原子變為另一取代基，且取代位置不受限制，只要其為氫原子經取代的位置，亦即取代基可取代的位置，且當兩個或大於兩個取代基取代時，所述兩個或大於兩個取代基可彼此相同或不同；
本發明中所載烷基包括具有1至60個碳原子的直鏈或支鏈，且可進一步經其他取代基取代。烷基的碳原子數可為1至60，特定言之1至40，且更特定言之1至20。其特定實例可包括甲基、乙基、丙基、正丙基、異丙基、丁基、正丁基、異丁基、三級丁基、二級丁基、1-甲基-丁基、1-乙基-丁基、戊基、正戊基、異戊基、新戊基、三級戊基、己基、正己基、1-甲基戊基、2-甲基戊基、4-甲基-2-戊基、3,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、庚基、正庚基、1-甲基己基、環戊基甲基、環己基甲基、辛基、正辛基、三級辛基、1-甲基庚基、2-乙基己基、2-丙基戊基、正壬基、2,2-二甲基庚基、1-乙基-丙基、1,1-二甲基-丙基、異己基、2-甲基戊基、4-甲基己基、5-甲基己基以及類似基團，但不限於此。
本發明中所載「醫藥上可接受」係指稱物質或組合物必須與其醫藥上調配物之其他成分相容，且不加劇患者之症狀。
本發明中所載「醫藥上可接受之鹽」係指自包括無機鹼或有機鹼及無機酸或有機酸在內的醫藥上可揭示之無毒鹼或酸製得的鹽。涵蓋於術語「醫藥上可接受之鹽」中的鹼性化合物之鹽係指通常藉由使游離鹼與適宜有機酸或無機酸反應來製備的本發明化合物之無毒鹽。本發明鹼性化合物之代表性鹽包括(但不限於)以下鹽：乙酸鹽、抗壞血酸鹽、己二酸鹽、海藻酸鹽、天冬胺酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、硫酸氫鹽、酒石酸氫鹽、硼酸鹽、溴化物、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、右旋樟腦磺酸鹽、碳酸鹽、氯化物、棒地酸鹽(clavulanate)、檸檬酸鹽、環戊烷丙酸鹽、二乙基乙酸、二葡萄糖酸鹽、二鹽酸鹽、十二烷基硫酸鹽、依地酸鹽、乙二磺酸鹽、依託酸鹽(estolate)、乙磺酸鹽、乙烷磺酸鹽、甲酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽(gluceptate，glucoheptanoate)、葡萄糖酸鹽、麩胺酸鹽、甘油磷酸鹽、對α-羥乙醯胺基苯砷酸鹽(glycollylarsanilate)、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、己基間苯二酚鹽、哈胺酸鹽(hydrabamate)、溴化物、氯化物、2-羥基乙烷磺酸鹽、羥基萘甲酸鹽、碘化物、異菸酸鹽、異硫代硫酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、月桂酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、甲基硝酸鹽、甲基硫酸鹽、甲烷磺酸鹽、黏酸鹽、2-萘磺酸鹽、萘磺酸鹽、菸酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、恩波環氯胍(pamoate)(雙羥萘酸鹽)、棕櫚酸鹽、泛酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、磷酸鹽/磷酸氫鹽、庚二酸鹽、苯基丙酸鹽、聚半乳糖醛酸鹽 、丙酸鹽、柳酸鹽、硬脂酸鹽、硫酸鹽、次乙酸鹽、琥珀酸鹽、鞣酸鹽、酒石酸鹽、茶氯酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽、三乙基碘、三氟乙酸鹽、十一烷酸鹽、戊酸鹽及諸如此類。此外，若本發明化合物帶有酸性部分，則其適宜醫藥上可接受之鹽包括(但不限於)衍生自無機鹼之鹽，包括鋁鹽、銨鹽、鈣鹽、銅鹽、鐵鹽、亞鐵鹽、鋰鹽、鎂鹽、錳鹽、亞錳鹽、鉀鹽、鈉鹽、鋅鹽及諸如此類。衍生自醫藥上可接受之有機無毒鹼之鹽包括以下之鹽：一級胺、二級胺及三級胺、環胺、二環己胺以及鹼性離子交換樹脂，例如，精胺酸、甜菜鹼、咖啡因、膽鹼、N,N-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙胺基乙醇、2-二甲胺基乙醇、乙醇胺、乙胺、乙二胺、N-乙基嗎啉、N-乙基六氫吡啶、還原葡糖胺、葡萄糖胺、組胺酸、哈胺、異丙胺、離胺酸、甲基還原葡糖胺、嗎啉、六氫吡嗪、六氫吡啶、聚胺樹脂、普魯卡因(procaine)、嘌呤、可可鹼、三乙胺、三甲胺、三丙胺、胺丁三醇及諸如此類。亦包括可用諸如以下等試劑四級銨化之鹼性含氮基團：低碳烷基鹵化物，例如甲基、乙基、丙基及丁基之氯化物、溴化物及碘化物；硫酸二烷基酯，例如硫酸二甲基酯、硫酸二乙基酯、硫酸二丁基酯及硫酸二戊基酯；長鏈鹵化物，例如癸基、月桂基、肉豆蔻基及硬脂醯基之氯化物、溴化物及碘化物；芳烷基鹵化物，如苄基及苯乙基之溴化物及其他。
本發明提供之組合物係可利用本發明所屬技術領域具有通常知識者所詳知的技術，將本案所提供之有效成分或組合物，與至少一醫藥上可接受之載劑(vehicle)，製備一適用本發明組合物之劑型。其中該劑型包含但不限於溶液、乳劑、懸浮液、粉末、錠劑、口含錠、藥片、口嚼膠、膠囊以及其他類似或適用本發明之劑型。
本發明中所載「醫藥上可接受之載劑」包含一種或多種選自於下列的成分類型：溶劑、乳化劑、懸浮劑、分解劑、黏結劑、賦形劑、安定劑、螯合劑、稀釋劑、膠凝劑、防腐劑、潤滑劑、表面活性劑、及其他類似或適用於本發明之載劑。
前述組合物中，亦可依需適宜地添加一種或多種以上製劑領域內通常使用之溶解輔助劑、緩衝劑、著色劑、調味劑等。
本發明中所載「醫藥上可接受之賦形劑」包括但不限於：聚合物、樹脂、增塑劑、填料、潤滑劑、稀釋劑、黏合劑、崩解劑、溶劑、共一溶劑、界面活性劑、防腐劑、甜味劑、調味劑、藥學級的染料或顏料、黏度劑中的至少一者。
本發明中所載「醫藥組合物」係指稱一固體或液體組成物，其形式、濃度和純度程度適合投與給患者，在投與之後，其可誘發所欲生理變化；醫藥組成物為無菌及/或非發熱性者(non-pyrogenic)。
本發明中所載「個體」包括活的生物體，例如人類、猴、母牛、綿羊、馬、豬、牛、山羊、狗、貓、小鼠、大鼠、培養細胞及其轉基因物種。在較佳實施例中，個體係人類。
本發明中所載「投與」包括容許本發明活性成分實施其預期功能之投與途徑。
本發明中所載「抗」、「抑制」以及其類用語係指預防、延緩、改善、減少或逆轉症狀之發生。
本發明中所載「大腸癌」係指源自結腸或直腸癌的總稱，其係包含但不限於直腸癌、結腸直腸癌、結直腸癌、腸癌、遺傳性非瘜肉症結直腸癌等。在本發明中，在偵測、分析、分類或治療中，大腸癌相關細胞包括癌前(例如良性)、惡性、轉移前、轉移性及非轉移性細胞。
本發明中所載「治療」、「用於治療」及其類似用語在本文中用於為了獲得某種效果而投與某種藥劑。該效果為治療性的部分或完全有效治癒某一疾病及/或該疾病之症狀。如本文中所使用，「治療」涵蓋哺乳動物(尤其人類)之大腸癌的任何治療，且包括：(a)抑制疾病，亦即阻止其發展；及(b)緩解疾病，亦即使疾病消退。在腫瘤(例如大腸癌)治療中，治療劑可直接減少腫瘤細胞之生長與轉移。
本發明中所載「預防」意指抑制或防止與目標疾病相關之症狀。
本發明中所載「有效量」係指稱產生、造成預期之生物體反應所必須之劑量，且非以治療痊癒所需為定量。本發明所屬技術領域具通常知識者可理解，醫藥組合物之有效量可視諸如下列等因素而變化：期望生物終點、擬遞送生物活性劑、囊封基質(encapsulating matrix)之組成、目標組織等。
本發明中所載「與...有關聯」或「與...相關」及其類似用語在本文中用於指兩個事件情況之間的統計相關性，該等事件包括數字、資料組及其類似者。舉例而言，當事件涉及數字時，正相關意謂隨著一者增加，另一者亦增加。負相關意謂隨著一者增加，另一者將減少。
[含硒元素的查爾酮化合物]
本發明的含硒元素的查爾酮化合物，由下式(I)所表示或其醫藥上可接受的鹽：
式(I)中，n為0至4的整數，R各自獨立地為-OH、-NH 2、-SH、-OR’、-NR’ 2或-SR’，其中R’為經取代或未經取代的烷基；在R為-NR’ 2的實施例中，多個R’彼此相同或不同，且可各自獨立地為經取代或未經取代的烷基。
在n為2、3或4的實施例中，多個R彼此相同或不同，且可各自獨立地為-OH、-NH 2、-SH、-OR’、-NR’ 2或-SR’；其中R’的含意同上。
在一實施例中，n較佳為0至4的整數，R較佳為-OH；在另一實施例中，n更佳為0，R較佳為-OH，藉由上述結構之含硒元素的查爾酮化合物，可以更加提高抑制大腸癌的能力。
在一實施例中，本發明的含硒元素的查爾酮化合物由以下化合物中的任一者表示： 、 、 、 ， 藉由上述結構之含硒元素的查爾酮化合物，可以更加提高抑制大腸癌的能力。
本發明的含硒元素的查爾酮化合物，包括所有可能的鏡像異構物、區域異構物及非鏡像異構物及兩種或更多種立體異構物之混合物，例如鏡像異構物及/或非鏡像異構物之所有比率之混合物。因此，鏡像異構物係本發明之標的，呈鏡像異構純形式(左旋鏡像體及右旋鏡像體二者)、呈外消旋物形式，及呈該兩種鏡像異構物之所有比率之混合物形式。在順式/反式異構現象之情形下，本發明包括順式形式及反式形式以及該等形式之所有比率之混合物。若期望，可藉由常用方法(例如藉由層析或結晶)分離混合物、藉由使用立體化學均勻起始材料進行合成或藉由立體選擇性合成實施個別立體異構物之製備。可視情況在分離立體異構物之前實施衍生化。立體異構物之混合物之分離可在式(I)化合物合成期間之中間步驟實施或其可對最終外消旋產物進行。絕對立體化學可藉由結晶產物或結晶中間體(若需要，用含有已知構形之立體中心之試劑衍生)之X射線結晶學確定。若本發明化合物能互變異構，則所有個別互變異構物以及其混合物皆包括於本發明範疇內。本發明包括所有該等異構物，以及該等外消旋物、鏡像異構物、非鏡像異構物及互變異構物及其混合物之鹽、溶劑合物(包括水合物)及溶劑化鹽。
如本文所用，不管是否具體定義特定縮寫，該等製程、方案及實例中所用之符號及慣例應與用於當前科學文獻中彼等保持一致，例如，the Journal of the American Chemical Society或the Journal of Biological Chemistry。特定而言但不限於，實例及整個說明書中可使用以下縮寫：g (克)；mg (毫克)；mL (毫升)；μL (微升)；mM (毫莫耳濃度)；M (微莫耳濃度)；Hz (赫茲)；MHz (兆赫茲)；mmol (毫莫耳)；hr或hrs (小時)；min (分鐘)；MS (質譜)；ESI (電噴霧離子化)；及TLC (薄層層析)。對於所有以下實例，可利用熟習此項技術者所習知之標準處理及純化方法。除非另外指示，否則所有溫度皆以℃ (攝氏度)表示。除非另有說明，否則所有反應皆係在室溫下執行。本文闡釋之合成方法意欲經由使用具體實例來例示可應用之化學方法，且不指示本揭示內容之範疇。
[醫藥組合物] 本發明的含硒元素的查爾酮化合物可以與醫藥上可接受之載劑組合成醫藥組合物，其具體的劑型並不受到限制，例如載劑所製備出的劑型可以為溶液、懸浮液、乳劑、粉末、錠劑、丸劑、糖漿、口含錠、片劑、口嚼膠、濃漿或膠囊；醫藥組合物可以包裝在容器中，和記載有含硒元素的查爾酮化合物和使用方法等相關的資訊的包裝插頁一起製備成試劑盒或製品。
為製備本發明之醫藥組合物，根據習用醫藥混合技術將作為活性成分之一或多種本發明化合物與醫藥載劑充分混合，該載劑端視投與(例如，經口或非經腸(例如肌內))所期望之製劑形式而採用眾多種形式。在製備呈口服劑型之組合物中，可採用任一常用醫藥介質。因此，對於液體口服製劑(例如，懸浮液、酏劑及溶液)，適宜載劑及添加劑包括水、二醇、油、醇、矯味劑、防腐劑、著色劑及諸如此類；對於固體口服製劑(例如，粉末、膠囊、膜衣錠、明膠膠囊及錠劑)，適宜載劑及添加劑包括澱粉、糖、稀釋劑、造粒劑、潤滑劑、黏合劑、崩解劑及諸如此類。因錠劑及膠囊易於投與，故其代表最有利的口服劑量單位形式，在該情形下，顯然採用固體醫藥載劑。若期望，可藉由標準技術對錠劑進行糖包覆或腸溶包覆。對於非經腸，載劑通常包含無菌水，但例如出於諸如輔助溶解或用於防腐等目的，可包括其他成分。亦可製備可注射懸浮液，在該情形下可採用適當的液體載劑、懸浮劑及諸如此類。本文之醫藥組合物將每劑量單位(例如，錠劑、膠囊、粉末、注射劑、茶匙及諸如此類)含有遞送如上所述之有效劑量所必需之量的活性成分。
[治療大腸癌的方法、製備預防或治療大腸癌之醫藥組合物的用途] 本發明另揭示一種含硒元素的查爾酮化合物用於治療大腸癌的方法與製備預防或治療大腸癌之醫藥組合物的用途，該方法是關於向有需要之患者投與治療有效量之含硒元素的查爾酮化合物作為有效成分來預防或治療大腸癌。
本發明的治療方法可用於哺乳動物個體(尤其人類)之大腸癌治療方法中，患有或處於發展成腫瘤風險的個體皆為本文所述之治療方法所涵蓋。
本發明之治療方法是關於向個體(例如人類患者)投與含硒元素的查爾酮化合物以抑制大腸癌細胞之生長。根據本發明之治療方法亦可適用於在患者中減小腫瘤尺寸、降低腫瘤負荷及/或改善臨床結果。
[含硒元素的查爾酮化合物之投藥] 以大腸癌為目標投與含硒元素的查爾酮化合物可經由各種方法達成，包括腫瘤內、靜脈內、皮內、皮下、經口(例如吸入)、經皮(亦即局部)、經黏膜、腹膜內、動脈內及經直腸投藥。其他適合之途徑包括如下方式投與組合物：經口、經頰、經鼻、經鼻咽、非經腸、經腸、經胃、局部、經皮、皮下、肌肉內、以錠劑、固體、散劑、液體、氣溶膠形式、病灶內注入腫瘤中、病灶內注入腫瘤附近、靜脈內輸注及動脈內輸注。可在添加或不添加賦形劑之情況下進行局部或全身投藥。亦可經由緩慢釋放模式在個體之腫瘤部位或腫瘤部位周圍進行投藥。其中，投藥方式較佳為選自以口服、注射、塗抹、噴劑或貼片中任一方式投與至病患體內。
可納入本發明之新穎組合物用於經口或藉由注射投與之液體形式包括水溶液、適當矯味之糖漿、水性或油性懸浮液及利用可食用油(例如棉籽油、芝麻油、椰子油或花生油)矯味之乳液以及酏劑及類似醫藥媒劑。適於水性懸浮液之分散劑或懸浮劑包括合成及天然樹膠，例如黃蓍膠、阿拉伯膠、海藻酸鹽、葡聚糖、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、聚乙烯基吡咯啶酮或明膠。
經口投與之錠劑及膠囊通常以單位劑型提供且含有習用賦形劑，例如黏合劑、填充劑(包括纖維素、甘露醇、乳糖)、稀釋劑、製錠劑、潤滑劑(包括硬脂酸鎂)、清潔劑、崩解劑(例如聚乙烯基吡咯啶酮及澱粉衍生物，例如羥乙酸鈉澱粉)、著色劑、矯味劑及潤濕劑(例如月桂基硫酸鈉)。
口服固體組合物可藉由習用摻和、填充或製錠方法來製備。可重複摻和操作以使活性成分分佈遍及含有大量填充劑之組合物。該等操作係習用的。
對於非經腸投與，可製備含有化合物及無菌媒劑之流體單位劑量。端視媒劑及濃度而定，可懸浮或溶解化合物。非經腸溶液通常係藉由將化合物溶解於媒劑中、藉由過濾滅菌、填充適宜小瓶並密封來製備。有利地，諸如局部麻醉劑、防腐劑及緩衝劑等佐劑亦可溶解於媒劑中。為了增加穩定性，可在填充小瓶後冷凍組合物並在真空下移除水。非經腸懸浮液係以實質上相同之方式製備，只是可將化合物懸浮於媒劑中而非溶解，並在懸浮於無菌媒劑中之前藉由暴露於環氧乙烷來滅菌。有利地，組合物中可包括表面活性劑或潤濕劑以有利於本申請案之化合物之均勻分佈。
藉由吸入投與之醫藥製劑可自吹入器或霧化器加壓包遞送。
[劑量] 在本發明的治療方法中，向有需要之個體投與有效量之含硒元素的查爾酮化合物。詳言之，視投藥目的、待治療個體之健康及身體狀況、年齡、待治療個體之分類組(例如人類、非人類靈長類、靈長類等)、含硒元素的查爾酮化合物之劑型、治療臨床醫師對醫學情形之評估及其他相關因素而變化。預期該量將在相對寬的範圍內，此可經由常規試驗來測定。舉例而言，為了能夠充分促使大腸癌細胞死亡，含硒元素的查爾酮化合物的有效劑量較佳為10 μM至200 μM，再較佳為10 μM至100 μM，更佳為10 μM至46.95 μM，再更佳為10 μM至38.23 μM，最佳為10 μM至19.98 μM。
根據多種因素選擇利用化合物之劑量方案，該等因素包括患者之類型、物種、年齡、體重、性別及醫學病況；欲治療病況之嚴重程度；投與途徑；患者之腎及肝功能；及所採用之特定化合物或其鹽。一般熟練醫師或獸醫可輕易地確定及開立用以預防、抵制或阻止病況進展所需藥物之有效量。
[含硒元素的查爾酮化合物的製備方法] 本發明之含硒元素的查爾酮化合物的製備方法是使苯乙酮衍生物(acetophenone derivatives)與硒吩-2-甲醛(selenophene-2-carbaldehyde)藉由Claisen-Schmidt反應而生成含硒元素的查爾酮化合物；其中硒吩-2-甲醛是使硒吩(selenophene)添加DMF/POCl 3而獲得，其產率為40~80%，較佳為51%。
在一實施例中，本發明之含硒元素的查爾酮化合物的製備方法包含由下式(II)所表示的化學反應：
式(II)中，n為1至5的整數，R 1各自獨立地為-OH、-NH 2、-SH、-OR’、-NR’ 2、-SR’或甲氧基甲基醚(methoxy methyl, MOM)；R 2對應於R 1，各自獨立地為-OH、-NH 2、-SH、-OR’、-NR’ 2或-SR’，其中R’為經取代或未經取代的烷基；在R 1、R 2為-NR’ 2的實施例中，多個R’彼此相同或不同，且可各自獨立地為經取代或未經取代的烷基。
在n為2、3、4或5的實施例中，多個R 1彼此相同或不同，且可各自獨立地為-OH、-NH 2、-SH、-OR’、-NR’ 2、-SR’或甲氧基甲基醚，R 2對應於R 1，各自獨立地為-OH、-NH2、-SH、-OR’、-NR’ 2或-SR’；其中R’的含意同上。
在一實施例中，n為1至3的整數，R 1各自獨立地為-OH或甲氧基甲基醚，R 2為-OH；在另一實施例中，n為1，R 1、R 2為-OH，藉由上述結構之含硒元素的查爾酮化合物，可以更加提高抑制大腸癌的能力。
在任一個R 1為甲氧基甲基醚的實施例中，本發明的製備方法更包含將該式(II)反應的生成物在100 oC的環境下與3N HCl進行酸反應，以將該甲氧基甲基醚反應成為-OH的步驟；並且，在本實施例中，其反應之縮合產率會更加提高。
為了更加明確說明本發明之製備方法，將以下圖的方式對苯乙酮衍生物之苯環上的碳進行編號：
在一實施例中，苯乙酮衍生物A0(以下簡稱為化合物A0)的結構是n為1，R 1、R 2為-OH並鍵結在2號碳上，並將苯乙酮衍生物A0與硒吩-2-甲醛進行式(II)的反應；在此實施例中，不需要進一步進行酸反應即可獲得本發明之含硒元素的查爾酮化合物A(以下簡稱化合物A)。 化合物A：
在一實施例中，苯乙酮衍生物B0(以下簡稱化合物B0)的結構是n為2，其中第一個R 1為-OH並鍵結在2號碳上，第二個R 1為甲氧基甲基醚並鍵結在4號碳上，並將苯乙酮衍生物B0與硒吩-2-甲醛進行式(II)的反應；在此實施例中，需要將該式(II)反應的生成物之化合物B’，在100 oC的環境下與3N HCl進行酸反應，使4號碳上的甲氧基甲基醚反應成為-OH，即兩個R 2都為-OH並分別鍵結在2號、4號碳上而獲得本發明之含硒元素的查爾酮化合物B(以下簡稱化合物B)。 化合物B：
在一實施例中，苯乙酮衍生物C0(以下簡稱化合物C0)的結構是n為2，其中第一個R 1為-OH並鍵結在2號碳上，第二個R 1為甲氧基甲基醚並鍵結在5號碳上，並將苯乙酮衍生物C0與硒吩-2-甲醛進行式(II)的反應；在此實施例中，需要將該式(II)反應的生成物之化合物C’，在100 oC的環境下與3N HCl進行酸反應，使5號碳上的甲氧基甲基醚反應成為-OH，即兩個R 2都為-OH並分別鍵結在2號、5號碳上而獲得本發明之含硒元素的查爾酮化合物C(以下簡稱化合物C)。 化合物C：
在一實施例中，苯乙酮衍生物D0(以下簡稱化合物D0)的結構是n為3，其中第一個R 1為-OH並鍵結在2號碳上，第二個R 1為甲氧基甲基醚並鍵結在4號碳上，第三個R 1為甲氧基甲基醚並鍵結在6號碳上，並將苯乙酮衍生物D0與硒吩-2-甲醛進行式(II)的反應；在此實施例中，需要將該式(II)反應的生成物之化合物D’，在100 oC的環境下與3N HCl進行酸反應，使4號、6號碳上的甲氧基甲基醚反應成為-OH，即三個R 2都為-OH並分別鍵結在2號、4號、6號碳上而獲得本發明之含硒元素的查爾酮化合物D(以下簡稱化合物D)。 化合物D：
本發明的合成方法非常容易操作，且反應物可以輕易獲得，產率適中，於合成之前將反應物進行適當保護，合成之後只需加酸去除保護基(MOM)後經過管柱層析或抽氣過濾，就可以獲得純的含硒元素的查爾酮化合物。
[製備實例與分析方法]
本發明所有關鍵原料皆係購自各種商業來源(例如Uni‐Onward Corporation的Aldrich及Alfa)且不經進一步純化即可使用。在230-400目之SiO 2(SiliaFlash® P60, 40-63 μm 60 Å, SiliCycle® Inc.)上進行驟沸塔(flash column)層析純化。每個分子的純度藉由Bruker 600 MHz Ultrashield儀器上的1H(600 MHz) 和 13C (150 MHz) 核磁共振(NMR)光譜確認。在 Bruker UltraFlex II 儀器上藉由電噴霧離子化(ESI) 通過高解析度質譜 (HRMS)測量分子量。化學位移(chemical shifts)以百萬分率 (ppm) 為單位紀錄，以氘化溶劑的殘留物作為內標：1H NMR(CDCl3為7.26 ppm；DMSO-d6為2.49 ppm)；13C NMR(CDCl 3為77.0 ppm；DMSO-d6為39.7 ppm)。合成化合物的熔點由MP-2D儀器上的開口毛細管測定，未經校正。藉由Analtech Silica gel HLF UV254上的薄層層析法(TLC) 監測反應進程，並藉由紫外線觀察並用KMnO 4或對茴香醛(p-anisaldehyde)溶液染色。
製備硒吩-2-甲醛的一般程序：
在圓底閃蒸器(round bottom flash)中加入DMF(1.5618 g, 21.3691 mmol)，並在4 oC 氮氣環境下緩慢加入POCl 3(1.6382 g, 10.6845 mmol)。將該混合物劇烈攪拌45分鐘，然後加入硒吩(0.7000 g, 5.3422 mmol)。將該溶液逐漸升溫至 26 oC並攪拌18小時。反應結束時，混合物用NaHCO 3(飽和)進行淬滅(quench)，並以超音波處理數分鐘，然後用Et 2O進行萃取。將有機層分離、乾燥(MgSO4)、濃縮並通過驟沸塔層析純化(己烷:EtOAc=7:1-6:1-3:1;己烷:EtOAc=4:1,R f =0.40)至以51%的產率得到黃綠色油狀物 (0.4327 g, 2.7205 mmol)。
製備化合物A、化合物B’、化合物C’、化合物D’的一般程序：
分別將1當量的化合物A0、化合物B0、化合物C0、化合物D0與硒吩-2-甲醛(1.2當量)溶解在乙醇(0.20 M)中，然後在26 oC下加入40%NaOH水溶液(10當量)並攪拌17小時。在反應結束時，使用2N HCl中和反應。將所得混合物加入蒸餾水並冷藏8小時。將沉澱物進行抽濾，以及依序使用蒸餾水、己烷清洗並乾燥。
製備化合物B、化合物C、化合物D的一般程序：
分別將化合物B’、化合物C’、化合物D’溶解在THF:MeOH (1:1/v:v; 0.15 M)中，然後分別加入3N HCl，並將混合物加熱至100 oC。在反應時間結束時，將蒸餾水和Et 2O添加到混合物中。將有機層分離、乾燥(MgSO 4)並通過驟沸塔層析純化或抽濾純化以分別得到目標分子化合物B、化合物C、化合物D。
本發明係以下面的實施例予以示範闡明，然而，以下實施例純係本發明之例示，故不應以任何方式被視為本發明範圍的限制。
[細胞培養]
人結直腸腺癌細胞(HT-29)源自陽明交通大學。細胞株在添加10%胎牛血清(FBS)、100 U/mL青黴素、100 μg/mL 鏈黴素、2 μM L-麩醯胺酸和1 mM丙酮酸鈉的Dulbecco’s modified Eagle’s培養基中培養。將細胞在37°C和5% CO 2的環境中培養，每周傳代兩次。將細胞儲存在-155°C的液態氮中。細胞解凍後，30代前完成實驗以減少實驗誤差。將培養相關的化合物儲備溶液以10 mM的濃度在-20°C下儲存在DMSO中，並在使用前立即解凍。
[細胞存活率檢定法(methylthiazol tetrazolium assay, MTT)] 將人結直腸腺癌細胞(HT-29)種於96孔盤(每孔200 μl中包含5x10 3個細胞)並培養24小時後，並加入不同濃度(6.25、12.5、25、50、100 μM)的化合物A~化合物D，並以5-氟尿嘧啶(5-FU)用作陽性控制組，於培養72小時後加入0.5 mg/ml的甲基噻唑四氮唑(MTT)(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, Sigma-Aldrich)並於37 oC培養3小時，除去MTT試劑後加入DMSO，並使用ELISA plate reader, TECAN Spark (Tecan Group Ltd.) (μ Quant)測其在單波長570 nm下的OD值，並比較細胞存活情形，以分析各個含硒元素的查爾酮化合物A~D對大腸癌細胞生長的影響。其結果如下表1：
[表1]
含硒元素的查爾酮化合物 IC 50(μM)
化合物A 19.98±3.38**
化合物B 38.23±3.30*
化合物C 46.95±5.68*
化合物D ＞100
5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil, 5-FU) 41.43±7.90*
表1中，數值以平均值±標準差(n=3)的方式呈現；IC 50表示抑制50%細胞所需的藥物濃度；*表示p＜0.05；**表示p＜0.01；5-氟尿嘧啶為習知的化療藥物，作為陽性控制組。
從表1中可知，化合物A表現出最佳的對人結腸直腸腺癌細胞的抑制活性，而且比習知用於化療藥物的5-FU還要好；化合物B、化合物C表現出與5-FU相當的抑制活性。
[群落分析法(Clonogenic assay)]
將人結直腸腺癌細胞(HT-29)以3500 cells/well的細胞量種於6孔細胞培養盤中並培養24小時，接著分別加入不同濃度(5、10、20、40 μM)的化合物A，並以40 μM的5-氟尿嘧啶(5-FU)用作陽性控制組，以DMSO作為陰性控制組，培養14天後，以PBS清洗3次，並加入99%甲醇固定細胞30分鐘，以蒸餾水清洗3次後，再用0.2%結晶紫溶液(crystal violet)染色並拍照記錄，並以ImageJ(BioTechniques)計算細胞覆蓋面積以進行定量，以分析不同濃度的化合物A對大腸癌細胞生長的影響。
其結果請參考圖1，圖1顯示出本發明之一實施例的以群落分析法分析含硒元素的查爾酮化合物對人結腸直腸腺癌細胞(HT-29)增生的影響，數值以平均值±標準差(n=3)的方式呈現；*表示與對照組相比p＜0.05；***表示與對照組相比p＜0.001，從圖中可知，化合物A在HT-29細胞中以劑量依存性(dose-dependent)的方式來減少群落的形成，換句話說，化合物A在10 μM即可顯著地減少HT-29群落的形成，而隨著劑量的增加，分別在20 μM、40 μM可逐漸提高HT-29群落的降低量。
[西方墨點法(Western blot)] 將人結直腸腺癌細胞(HT-29)(6x10 5個細胞)接種到6-cm培養皿中，使其達到85%~90%貼合後，加入不同濃度(5、10、20、40 μM)的化合物A，並以40 μM的5-氟尿嘧啶(5-FU)用作陽性控制組，收取人結直腸腺癌細胞(HT-29)並加入放射免疫沉澱測定(radioimmunoprecipitation assay, RIPA)緩衝液進行裂解，以得到總蛋白裂解液，並通過12.5%的十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠進行SDS-PAGE電泳分離，並轉漬於PVDF膜上，進行blocking後，再以特異性一級抗體(抗bax、抗Bcl-2(Cell Signaling Inc.，Danvers，MA，USA)、抗caspase-3、抗β-actin (GeneTex Inc., Irvine, CA, USA))於4℃培養過夜，隔日以0.1%的Tween 20(TBST)的Tris緩衝鹽水清洗膜後，在室溫下以含辣根過氧化酶(horseradish peroxidase, HRP)之特異性二級抗體於室溫、搖晃培養1小時，經過適當清洗後，使用增強化學發光(enhanced chemiluminescence, ECL)檢測試劑盒對每個膜進行顯影，並藉由ImageQuant LAS 4000 Mini 生物分子成像儀 (GE Healthcare, MA, USA) 對圖像進行可視化。以及使用 ImageJ(BioTechniques, NY, USA) 對條帶密度進行量化。
西方墨點法用於分析化合物A是否影響人結腸直腸腺癌細胞 (HT-29)中與細胞凋亡相關的蛋白質表現，例如Caspase 3的活化(前體(Pro-casp3)狀態活化成裂解(Clv-casp3)狀態)為細胞凋亡的生物標誌、Bax為促進細胞凋亡的蛋白質、Bcl-2為抑制細胞凋亡的蛋白質；請參考圖2~5，圖2~5分別顯示出本發明之一實施例的以免疫墨點分析各組別之人結腸直腸腺癌細胞(HT-29)的pro-caspase 3(Pro-casp3)、cleaved-caspase 3(Clv-casp3)、Bax及Bcl-2的表現量，*表示與對照組相比p＜0.05；**表示與對照組相比p＜0.01，從圖中可知，化合物A抑制Pro-casp3(Caspase 3無活性狀態)的表現量、增加Clv-casp3(Caspase 3活性狀態)的表現量、促進Bax的表現量、抑制Bcl-2的表現量；從上述結果可知，化合物A是經由誘導HT-29的細胞凋亡來抑制癌細胞的生長，且其途徑是依賴粒線體與caspase-3的機制(請參考圖6)。
[光譜數據]
硒吩-2-甲醛(selenophene-2-carbaldehyde)：
產率：51%，藉由驟沸塔層析純化(己烷:EtOAc=7:1-6:1-3:1;己烷:EtOAc=4:1,R f=0.40)得到黃綠色液體。 1H NMR (600 MHz, CDCl 3) δ9.80 (s, 1H), 8.48 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 8.01 (t, J= 3.2 Hz, 1H), 7.46 (dd, J= 5.4, 3.9 Hz, 1H). 13C NMR (150 MHz, CDCl 3) δ184.2, 150.2, 140.9, 139.4, 130.7。
化合物A：( E)-1-(2-羥基苯基)-3-(硒酚-2-基)丙-2-烯-1-酮 (( E)-1-(2-Hydroxyphenyl)-3-(selenophen-2-yl)prop-2-en-1-one)
產率：42%. Mp 104.0-104.7 oC. 黃色粉末(己烷:EtOAc=6:1, R f =0.63). 1H NMR (600 MHz, CDCl 3) δ12.44 (s, 1H), 8.44 (d, J= 5.3 Hz, 1H), 8.14 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 8.03 (d, J= 14.9 Hz, 1H), 7.87 (d, J= 3.4 Hz, 1H), 7.60 (d, J= 14.9 Hz, 1H), 7.54 (t, J= 7.1 Hz, 1H), 7.39 (dd, J= 5.3, 3.8 Hz, 1H), 6.98 (td, J= 7.0, 3.4 Hz, 1H). 13C NMR (150 MHz, CDCl 3) δ192.8, 161.5, 145.6, 139.9, 137.4, 137.0, 136.1, 131.0, 130.7, 121.3, 121.0, 119.2, 117.7. HRMS (ESI) calculated for C 13H 9O 2Se [M-H] +276.9768. Found: 276.9776。
化合物B’：( E)-1-(2-羥基-4-(甲氧基甲氧基) 苯基)-3-(硒酚-2-基)丙-2-烯-1-酮 (( E)-1-(2-Hydroxy-4-(methoxymethoxy)phenyl)-3-(selenophen-2-yl)prop-2-en-1-one)
產率：35%. Mp 79.2-79.9 oC. 橙色粉末(己烷:EtOAc=4:1, R f =0.4). 1H NMR (600 MHz, CDCl 3) δ8.41 (d, J= 5.5 Hz, 1H), 8.15 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 8.01 (d, J= 14.9 Hz, 1H), 7.83 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 7.55 (d, J= 14.9 Hz, 1H), 7.38 (dd, J= 5.5, 3.8 Hz, 1H), 6.61 (dd, J= 9.0, 2.4 Hz, 1H), 6.55 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 5.27 (s, 2H), 3.38 (s, 3H). 13C NMR (150 MHz, CDCl 3) δ191.4, 164.8, 163.2, 145.6, 139.5, 137.2, 136.7, 132.6, 130.9, 120.6, 114.7, 108.3, 103.1, 93.7.HRMS (ESI) calculated for C 15H 13O 4Se [M-H] +336.9979. Found: 336.9989。
化合物B：( E)-1-(2,4-二羥基苯基)-3-(硒酚-2-基)丙-2-烯-1-酮 (( E)-1-(2,4-Dihydroxyphenyl)-3-(selenophen-2-yl)prop-2-en-1-one)
產率：65%. Mp 143.9-145.1 oC.，藉由驟沸塔層析純化(己烷:EtOAc=9:1-6:1-1:1; 己烷:EtOAc=4:1, R f =0.40) 得到橙黃色粉末。 1H NMR (600 MHz, CDCl 3) δ13.37 (s, 1H), 10.71 (s, 1H), 8.41 (d, J= 5.5 Hz, 1H), 8.10 (d, J= 8.9 Hz, 1H), 7.99 (d, J= 14.9 Hz, 1H), 7.83 (d, J= 3.4 Hz, 1H), 7.54 (d, J= 14.9, 1H), 7.38 (dd, J= 5.4, 3.4 Hz, 1H), 6.41 (dd, J= 8.8, 2.2 Hz, 1H), 6.28 (d, J= 2.2 Hz, 1H). 13C NMR (150 MHz, CDCl 3) δ190.9, 165.6, 165.2, 145.8, 138.9, 136.9, 136.4, 133.0, 130.8, 120.6, 113.0, 102.6. HRMS (ESI) calculated for C 13H 9O 3Se [M-H] +292.9717. Found: 292.9724。
化合物C’： ( E)-1-(2-羥基-5-(甲氧基甲氧基)苯基)-3-(硒酚-2-基)丙-2-烯-1-酮 (( E)-1-(2-Hydroxy-5-(methoxymethoxy)phenyl)-3-(selenophen-2-yl)prop-2-en-1-one)
產率：44%. Mp 62.2-63.5 oC. 進行抽濾並依序用水和己烷清洗以獲得橙色固體(己烷:EtOAc=4:1, R f =0.45). 1H NMR (600 MHz, CDCl 3) δ11.86 (s, 1H), 8.43 (d, J= 5.5 Hz, 1H), 7.99 (d, J= 15.0 Hz, 1H), 7.86 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 7.67 (d, J= 2.9 Hz, 1H), 7.55 (d, J= 15.0 Hz, 1H), 7.39 (dd, J= 5.3, 5.3 Hz, 1H), 7.26 (dd, J= 8.9, 2.9 Hz, 1H), 6.94 (d, J= 8.9 Hz, 1H). 13C NMR (150 MHz, CDCl 3) δ192.1, 156.1, 149.0, 145.6, 139.7, 137.3, 136.9, 130.9, 125.4, 121.9, 121.4, 118.5, 117.3, 94.9, 55.6. HRMS (ESI) calculated for C 15H 13O 4Se [M-H] +336.9979. Found: 336.9990。
化合物C：( E)-1-(2,5-二羥基苯基)- 3-(硒酚-2-基)丙-2-烯-1-酮 (( E)-1-(2,5-Dihydroxyphenyl)-3-(selenophen-2-yl)prop-2-en-1-one)
產率：86%. Mp177.1-178.2 oC. 磚紅色固體(己烷:EtOAc=4:1, R f =0.25). 1H NMR (600 MHz, CDCl 3) δ11.67 (s, 1H), 9.17 (s, 1H), 8.41 (d, J= 5.5 Hz, 1H), 7.98 (d, J= 15.0 Hz, 1H), 7.84 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 7.47 (d, J= 15.0 Hz, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.38 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 7.00 (dd, J= 8.8, 2.9 Hz, 1H), 6.83 (d, J= 8.8 Hz, 1H). 13C NMR (150 MHz, CDCl 3) δ192.3, 154.3, 149.5, 145.7, 139.5, 136.9, 136.8, 131.0, 124.2, 121.7, 121.0, 118.4, 114.7. HRMS (ESI) calculated for C 13H 9O 3Se [M-H] +292.9717. Found: 292.9726。
化合物D’：( E)-1-(2-羥基-4,6-雙(甲氧基甲氧基)苯基)-3-(硒酚-基)丙-2-烯-1-酮 (( E)-1-(2-Hydroxy-4,6-bis(methoxymethoxy)phenyl)-3-(selenophen-2-yl)prop-2-en-1-one)
產率：50%. Mp 80.2-80.6 oC. 黃色粉末(己烷:EtOAc=4:1, R f =0.45). 1H NMR (600 MHz, CDCl 3) δ8.35 (d, J= 5.3 Hz, 1H), 7.80 (d, J= 15.2 Hz, 1H), 7.72 (d, J= 3.1 Hz, 1H), 7.36 (t, J= 4.9 Hz, 1H), 7.31 (d, J= 15.2 Hz, 1H), 6.26 (s, 1H), 6.24 (s, 1H), 5.28 (s, 2H), 5.22 (s, 2H). 13C NMR (150 MHz, CDCl 3) δ191.9, 163.3, 161.9, 158.2, 146.0, 138.4, 136.0, 131.0, 127.4, 108.3, 96.7, 94.8, 94.6, 93.8, 56.5, 56.0. HRMS (ESI) calculated for C 17H 17O 6Se [M-H] +397.0190. Found: 397.0203。
化合物D：( E)-3-(硒酚-2-基)-1-(2,4,6-三羥基苯基) 丙-2-烯-1-酮(( E)-3-(Selenophen-2-yl)-1-(2,4,6-trihydroxyphenyl)prop-2-en-1-one)
產率：88%. Mp 134.8-136.1 oC.在乙醚和己烷中使固體再結晶，得到棕色粉末(己烷:EtOAc=1:1, R f =0.3). 1H NMR (600 MHz, CDCl 3) δ12.56 (s, 1H), 8.31 (d, J= 5.5 Hz, 1H), 7.89 (d, J= 15.1 Hz, 1H), 7.84 (d, J= 15.1 Hz, 1H), 7.69 (d, J= 3.7 Hz, 1H), 7.35 (dd, J= 5.5, 3.8 Hz, 1H), 5.84 (s, 2H). 13C NMR (150 MHz, CDCl 3) δ190.9, 165.1, 164.5, 146.6, 137.2, 135.6, 135.2, 131.0, 127.3, 104.1, 95.0. HRMS (ESI) calculated for C 13H 9O 4Se [M-H] +308.9666. Found: 308.9676。
綜上所述，本發明利用簡單的合成方法將不同位置取代的羥基苯乙酮衍生物(化合物A0、化合物B0、化合物C0、化合物D0)與自行合成的硒吩-2-甲醛進行縮合，合成四種含硒元素的查爾酮化合物(化合物A、化合物B、化合物C、化合物D)，並對人結腸直腸腺癌細胞(HT-29)篩選，發現相較於習知的化療藥5-FU，其對於大腸癌的治療效果更佳，其中化合物A對大腸癌的抑制效果最為明顯。
以上所述之實施例僅係為說明本發明之技術思想及特點，其目的使熟習此項技藝人士能夠瞭解本發明之內容並據以實施，當不能以之限定本發明之專利範圍，即凡大依本發明所揭示之精神所作之均等變化或修飾，仍應涵蓋在本發明之專利範圍內。
無。
圖1顯示出本發明之一實施例的以群落分析法(clonogenic assay)分析含硒元素的查爾酮化合物對人結腸直腸腺癌細胞(HT-29)增生的影響；圖1的上方為人結腸直腸腺癌細胞於培養盤生長的外觀，圖1的下方為對其進行定量的結果。
圖2顯示出本發明之一實施例的以免疫墨點分析(Immunoblot analysis)各組別之人結腸直腸腺癌細胞(HT-29)的pro-caspase 3(Pro-casp3)的表現量。
圖3顯示出本發明之一實施例的以免疫墨點分析各組別之人結腸直腸腺癌細胞(HT-29)的cleaved-caspase 3(Clv-casp3)的表現量。
圖4顯示出本發明之一實施例的以免疫墨點分析各組別之人結腸直腸腺癌細胞(HT-29)的Bax的表現量。
圖5顯示出本發明之一實施例的以免疫墨點分析各組別之人結腸直腸腺癌細胞(HT-29)的Bcl-2的表現量。
圖6顯示出本發明之一實施例的含硒元素的查爾酮化合物促使人結腸直腸腺癌細胞(HT-29)進行細胞凋亡(apoptosis)的可能機制。
無。

Claims (9)

  1. 一種含硒元素的查爾酮化合物，由下式(I)所表示或其醫藥上可接受的鹽： 式(I)中，n為0至4的整數，R各自獨立地為-OH、-NH 2、-SH、-OR’、-NR’ 2或-SR’，其中R’各自獨立地為經取代或未經取代的烷基。
  2. 如請求項1所述的含硒元素的查爾酮化合物，其中n為0至2的整數，且R各自獨立地為-OH。
  3. 如請求項1所述的含硒元素的查爾酮化合物，其中所述式(I)由以下化合物中的任一者表示： 、 、 、 。
  4. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至3中任一項所述的含硒元素的查爾酮化合物、以及醫藥上可接受之載劑。
  5. 如請求項4所述的醫藥組合物，其為溶液、懸浮液、乳劑、粉末、錠劑、丸劑、糖漿、口含錠、片劑、口嚼膠、濃漿或膠囊。
  6. 一種含硒元素的查爾酮化合物用於製備預防或治療大腸癌之醫藥組合物的用途，其中所述含硒元素的查爾酮化合物包含如請求項1至3中任一項所述的含硒元素的查爾酮化合物。
  7. 如請求項6所述的用途，其中所述含硒元素的查爾酮化合物的有效劑量為10 μM至200 μM。
  8. 一種含硒元素的查爾酮化合物的製備方法，包含由下式(II)所表示的化學反應之步驟： 式(II)中，n為1至5的整數，R 1各自獨立地為-OH、-NH 2、-SH、-OR’、-NR’ 2、-SR’或甲氧基甲基醚；R 2各自獨立地為-OH、-NH 2、-SH、-OR’、-NR’ 2或-SR’；其中R’各自獨立地為經取代或未經取代的烷基。
  9. 如請求項8所述的含硒元素的查爾酮化合物的製備方法，當任一個R 1為甲氧基甲基醚時，其更包含將該式(II)反應的生成物在100 oC的環境下與鹽酸進行反應，以將該甲氧基甲基醚反應成為-OH的步驟。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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期刊 Tsukerman, S.V., Orlov, V.D., Izvekov, V.P. et al. Synthesis of heterocyclic analogs of chalcone containing the selenophene ring. Chem Heterocycl Compd 1966/01/30 25-28

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