ES2320919T3 - Proceso para separar el inhibidor de alfa-1-proteinasa de una pasta de fraccion cohn iv-1+iv-4. - Google Patents
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Abstract
Proceso para aumentar el rendimiento en unidades de alfa-1-PI en una solución que contiene alfa-1-PI que se somete a una inactivación viral mediante tratamiento con disolvente-detergente que comprende la adición a la solución de alfa-1-PI, antes del tratamiento con disolvente-detergente, de un azúcar en una cantidad del 10% al 20% en peso/peso, para aumentar el rendimiento de alfa-1-PI después de dicho tratamiento con disolvente-detergente.
Description
Proceso para separar el inhibidor de
alfa-1-proteinasa de una pasta de
Fracción Cohn IV_{1} + IV_{4}.
La presente invención se refiere a un proceso
para aumentar el rendimiento en unidades del inhibidor de la
alfa-1-proteinasa
(alfa-1-antitripsina) en una
solución que contiene alfa-1-PI, el
cual se somete a una inactivación viral mediante un tratamiento con
disolvente-detergente, así como a un proceso para
eliminar la apolipo-proteína A y la
apolipo-proteína B de una solución proteica que
contiene alfa-1-PI.
El inhibidor de
alfa-1-proteinasa (aquí
"\alpha-1-PI" o
"alfa-1-PI"), también conocido
como \alpha-antitripsina, es una
seroglicoproteína con un peso molecular de 52.000. La
alfa-1-PI es sintetizada en el
hígado y está presente en el suero a niveles que oscilan entre 150
y 350 mg/dl (equivalente a 30-80 \muM) cuando se
ensaya con estándares de plasma.
La alfa-1-PI
trabaja en los pulmones inhibiendo la elastasa neutrófila, una
serina-proteasa que, en grandes cantidades, puede
llevar a la destrucción de las paredes alveolares. En el pulmón
normal, la alfa-1-PI proporciona
más del 90% de la protección contra la elastasa neutrófila en el
tracto respiratorio inferior.
La carencia de
alfa-1-PI es un trastorno
hereditario autosomal recesivo desarrollado por una gran cantidad
de variantes alélicas y se ha caracterizado en una disposición
alélica denominada "sistema inhibidor de proteasa (Pi)". Estos
alelos se han agrupado en base a los niveles de
alfa-1-PI que se encuentran en el
suero de distintos individuos. Los individuos normales poseen
niveles de alfa-1-PI normales en el
suero (se determina que los individuos normales tienen un fenotipo
PiMM). Los individuos carentes tienen niveles de
alfa-1-PI en suero inferiores al
35% del nivel normal medio (se determina que estos individuos tienen
un fenotipo PiZZ). En los individuos cero la proteína
alfa-1-PI es indetectable en suero
(se determina que estos individuos tienen un fenotipo
Pi(nulo)(nulo)).
La deficiencia de
alfa-1-PI se caracteriza por niveles
bajos en suero (menos del 35% de los niveles normales medios) y en
los pulmones de alfa-1-PI. Estos
individuos deficientes corren el gran riesgo de desarrollar
enfisema panacinar. Este enfisema predomina en aquellos individuos
que presentan fenotipos PiZZ, PiZ(nulo) y
Pi(nulo)(nulo). Normalmente, en los individuos afectados, los
síntomas de esta condición se manifiestan en la tercera a cuarta
década de su vida.
El enfisema asociado a una deficiencia de
alfa-1-PI se desarrolla como
resultado de una concentración insuficiente de
alfa-1-PI para inhibir la elastasa
neutrófila en el tracto respiratorio inferior, lo que conduce a la
destrucción de la estructura del tejido conectivo del parénquima
pulmonar. Los individuos con carencia de
alfa-1-PI poseen poca protección
contra la elastasa neutrófila liberada por los neutrófilos en el
tracto respiratorio inferior. Este desequilibrio entre
proteasa:inhibidor de proteasa en los individuos deficientes en
alfa-1-PI resulta en un daño
crónico del parénquima pulmonar y de las paredes alveolares y,
finalmente, en su destrucción.
Los individuos con deficiencia severa de
alfa-1-PI muestran típicamente
niveles endógenos de alfa-1-PI en
suero inferiores a 50 mg/dl, según se determina por los estándares
comerciales. Los individuos con estos bajos niveles de
alfa-1-PI en suero corren un riesgo
de más de un 80% de desarrollar enfisema durante su vida. Se estima
que al menos 40.000 pacientes en Estados Unidos, o el 2% de todos
los que padecen enfisema, padecen esta enfermedad como resultado de
un defecto en el gen codificador para la
alfa-1-PI. Una carencia en
alfa-1-PI representa uno de los
trastornos hereditarios letales más comunes de los caucásicos en
Estados Unidos y Europa.
La terapia para los pacientes con deficiencia en
alfa-1-PI se dirige hacia la
sustitución o el aumento de los niveles de
alfa-1-PI en suero. Si se
incrementan los niveles en suero de
alfa-1-PI, se espera que se consigan
mayores concentraciones en los pulmones y, por tanto, se corrija el
desequilibrio elastasa
neutrófila:alfa-1-PI en los
pulmones, impidiendo la lenta destrucción del tejido pulmonar.
Estudios en poblaciones normales y deficientes en
alfa-1-PI han sugerido que los
niveles protectores mínimos de
alfa-1-PI en suero son de 80 mg/dl u
11 \muM (aproximadamente 57 mg/dl; utilizando los estándares
puros). En consecuencia, la mayoría de las terapias de aumento en
los pacientes deficientes en
alfa-1-PI apuntan a proporcionar el
nivel protector mínimo en suero de
alfa-1-PI, ya que la
alfa-1-PI en el suero es la fuente
de la alfa-1-PI alveolar.
Se dispone de preparaciones de
alfa-1-PI para su uso terapéutico
desde mediados de los años 80. Su principal uso ha sido en la
terapia de aumento (sustitución) para la carencia congénita de
alfa-1-PI. La vida media de la
alfa-1-PI humana in vivo es
de 4,38 días, con una desviación estándar de 1,27 días. La
dosificación actualmente recomendada, de 60 mg de
alfa-1-PI por kg de peso corporal
por semana, restaurará los bajos niveles en suero de
alfa-1-PI a niveles por encima del
nivel protector umbral de 11 \muM u 80 mg/dl.
Anteriormente ya se había purificado la
alfa-1-PI mediante varias técnicas.
Uno de estos procesos combinaba la cromatografía en un medio
cromatográfico de intercambio aniónico seguida de precipitación con
PEG. Otros procedimientos de purificación utilizan la precipitación
con PEG seguida de cromatografía de intercambio aniónico, o
múltiples etapas de precipitación con PEG seguidas de una
cromatografía de intercambio aniónico. Otros han empleado
combinaciones de precipitación con PEG, una o más etapas de
cromatografía de intercambio aniónico y etapas de cromatografía en
quelatos metálicos. Todavía otros métodos han utilizado técnicas de
separación de fases para purificar la
alfa-1-PI. Se han comunicado
actividades específicas de 1,26 unidades/mg para la
alfa-1-PI purificada.
La EP-A-0 698
615 describe la purificación del inhibidor de
alfa-1-proteinasa utilizando nuevas
condiciones de separación en la cromatografía catiónica, la JP 63
017899 A revela un método para la eliminación de materias extrañas
de una solución acuosa que contiene haptoglobina por medio de sílice
coloidal y la US-A-4 056 614
describe un medicamento depresor de la inmunidad que incluye
gamma-globulinas obtenidas a partir de tejido
placentario humano y un método para la preparación de este
medicamento.
La presente invención se dirige a un proceso
para el incremento del rendimiento en unidades de
alfa-1-PI en una solución que
contiene alfa-1-PI que se somete a
una inactivación viral por medio de un tratamiento con
disolvente-detergente, así como a un proceso para
eliminar la apolipo-proteína A y la
apolipo-protéina B de una solución proteica que
contiene alfa-1-PI. Esto mediante la
disposición de una fracción impura de proteína, preferentemente una
pasta de Fracción Cohn IV_{1} + IV_{4} que comprende la
alfa-1-PI. La fracción impura de
proteína se suspende en agua fría o en una solución salina a un pH
de aproximadamente 6 para disolver las proteínas solubles,
incluyendo albúmina,
alfa-2-globulina
(alfa-2-macroglobulina y
hatoglobulina) y beta-globulina (transferrina).
Luego se filtra la suspensión para recuperar las proteínas
insolubles, incluida la alfa-1-PI
que se lava con agua (o con una solución salina). A continuación, la
fracción proteica insoluble lavada se resuspende en agua (o en una
solución salina) y se ajusta el pH a aproximadamente 8,5. Se añade
PEG para precipitar la
alfa-2-globulina. Se recupera el
sobrenadante y se añade ZnCl_{2} para precipitar la
alfa-1-PI bruta. La
alfa-1-PI bruta entonces se
resolubiliza en un tampón NaEDTA y se trata con Tween 80 y con
fosfato de tri-n-butilo (TNBP) para
inactivar los virus. Preferentemente, se añade un azúcar, tal como
sacarosa, maltosa, glucosa o similar, para estabilizar la
alfa-1-PI durante la inactivación
viral para aumentar el rendimiento.
Posteriormente se aplica la solución tratada a
un medio de intercambio aniónico para separar la
alfa-1-PI de otras proteínas
remanentes. La fracción que comprende la
alfa-1-PI se recupera entonces y se
trata preferentemente con bentonita para eliminar la
apolipo-proteína todavía presente. La solución
purificada resultante de alfa-1-PI
es entonces recuperada y concentrada.
La alfa-1-PI
purificada por el presente proceso tiene una actividad específica
superior a 1,0 unidades/OD_{280}. El presente proceso proporciona
un rendimiento de al menos 1,0 unidad/gramo de pasta y
preferentemente superior a 1,3 unidades/gramo de pasta.
Con la utilización de la presente invención, se
mejora la calidad y el rendimiento de la
alfa-1-PI. Además, el presente
proceso de purificación acorta el procesamiento en comparación con
otros procesos.
El proceso comprende una combinación única de
etapas de purificación para producir un alto rendimiento y una gran
actividad específica de la preparación de
alfa-1-PI.
La alfa-1-PI se
purifica a partir de una fracción impura de proteína. La fracción
impura de proteína puede ser plasma,
alfa-1-PI producida por métodos
recombinantes o cualquier otra fuente que comprenda la proteína
alfa-1-PI. En una realización
preferente, la fracción impura de proteína es una pasta de Fracción
Cohn IV_{1} + IV_{4}, cuya preparación es bien conocida en la
técnica.
La pasta de Fracción IV_{1} + IV_{4} (u otra
fracción impura de proteína) se suspende en 5 \pm 2 partes de
agua o de solución salina, es decir NACl aproximadamente 0,05 a
aproximadamente 0,15 M, por cada parte de pasta de Fracción
IV_{1} + IV_{4}, a menos de 15ºC y a un pH de aproximadamente
6,0 \pm 0,2, durante al menos una hora. Las proteínas solubles,
incluidas la albúmina,
alfa-2-globulina y
beta-globulina, se separan entonces de las
proteínas insolubles, incluido el inhibidor de
alfa-1-proteinasa, mediante un
filtro de prensa, por centrifugación o similar. Se lava el residuo
a menos de 15ºC con aproximadamente 5 volúmenes de agua o de
solución salina de la pasta original a un pH de 6 \pm 0,2 para
eliminar la proteína soluble adicional físicamente retenida en la
pasta insoluble.
Se ha descubierto que al suspender la pasta de
Fracción IV_{1} + IV_{4} en agua o en una solución salina a un
pH de 6,0 \pm 0,2, y con los lavados posteriores, se elimina casi
la totalidad de la albúmina y la mayoría de las proteínas
alfa-2- y beta del precipitado de la Fracción
IV_{1} + IV_{4}.
El residuo de proteína insoluble se resuspende
en aproximadamente 5 \pm 2 volúmenes de agua a un pH de 8,5 \pm
0,5 por volumen de residuo, a una temperatura de aproximadamente
15ºC \pm 5ºC, durante preferentemente 6 horas aproximadamente,
aunque se puedan utilizar tiempos más cortos o más largos. No son
preferentes tiempos más cortos, ya que el rendimiento mejora a
medida que el tiempo aumenta. Actualmente es preferente una duración
de seis horas como combinación óptima para el tiempo de proceso y
el rendimiento. A continuación, se añade Tris sólido hasta una
concentración final de 10 \pm 5 mM y se añade NaCl sólido hasta
una concentración final de 150 \pm 20 mM y se ajusta el pH a 8,0.
Entonces se añade polietilenglicol 3350 (PEG) hasta una
concentración final del 15 \pm 5% en peso/peso y se mezcla
aproximadamente a 15 \pm 5ºC durante aproximadamente una hora. Se
añade PEG para precipitar la
alfa-2-globulina.
\newpage
El precipitado de PEG que se forma se elimina en
un filtro de prensa. Se lava el filtro de prensa antes y después de
la filtración con una solución que contiene 150 \pm 25 mM NaCl y
un 15 \pm 5% en peso/peso PEG a un pH de 8,0 \pm 0,5.
Alternativamente, se puede eliminar el precipitado por
centrifugación.
Se añade ZnCl_{2} (100 \pm 10 mM) al
sobrenadante de PEG hasta una concentración final de 6 \pm 5 mM y
se ajusta el pH de la solución a 7,5 \pm 0,5. Se enfría la
solución aproximadamente a 5 \pm 5ºC y se mezcla durante al menos
una hora aproximadamente. El ZnCl_{2} hace precipitar la
alfa-1-PI bruta. La
alfa-1-PI bruta se concentra por
filtración, preferentemente por filtración Prostak^{TM}, por
ejemplo tal como se describe en "Prostak
Open-Channel Modules", Millipore Corporation, o
por centrifugación, y se retira el filtrado. La suspensión
concentrada o el precipitado puede congelarse para su procesamiento
posterior.
Se resolubiliza la
alfa-1-PI bruta en aproximadamente
50 mM NaEDTA a través de Prostak por recirculación. Se añade un
azúcar, preferentemente sacarosa, en una cantidad de aproximadamente
un 15 \pm 5% en peso/peso (o aproximadamente 0,25 \pm 0,05 M de
Na_{3}citrato) como estabilizador durante la inactivación viral.
Se mezcla la solución a 15 \pm 5ºC hasta que se disuelve la
sacarosa.
La solución que contiene la
alfa-1-PI se inactiva de todo virus
mediante tratamiento con disolvente-detergente. Se
añade una solución al 10 \pm 1% en peso/volumen de
polisorbital-80 y al 3 \pm 0,3% en peso/peso de
fosfato de tri-n-butilo a la
solución de alfa-1-PI hasta una
concentración final del 1,0 \pm 0,5% en peso/volumen de
polisorbato-80 y de 0,3 \pm 0,15% en peso/peso de
fosfato de tri-n-butilo. Se incuba
entonces la solución a 27 \pm 3ºC, pH 8 \pm 0,5, durante 6
horas mínimo para inactivar cualquier virus que pueda estar presente
en la alfa-1-PI.
Se ha descubierto que la presencia de un azúcar,
por ejemplo sacarosa, como estabilizante, durante la inactivación
viral por tratamiento con disolvente-detergente
aumenta el rendimiento en unidades de
alfa-1-PI en comparación con un
control, es decir la solución de
alfa-1-PI inactivada de todo virus
con detergente-disolvente sin azúcar como
estabilizante. El aumento del rendimiento preferentemente es de al
menos el 10%, en especial de al menos el 20% y en particular de al
menos el 30%.
Después de la incubación, se enfría la solución
de alfa-1-PI tratada a
0-10ºC y se ajusta el pH a 8,0 \pm 0,1.
La solución tratada con
disolvente-detergente se diluye entonces con
aproximadamente 1 volumen de agua por volumen de solución tratada
con disolvente-detergente. Se aplica entonces la
solución diluida a un medio cromatográfico
pre-equilibrado de QAE (columna de cromatografía) u
otro medio similar de intercambio aniónico, que se una a la
alfa-1-PI, dejando que otras
proteínas se separen de la
alfa-1-PI. Se puede utilizar una
cromatografía por lotes o de columna. Después de que la
alfa-1-PI haya sido absorbida en el
medio, se lava con un tampón que contiene 20 \pm 10 mM NaCl y 20
\pm 10 mM fosfato de sodio (NaH_{2}PO_{4}), a un pH de 8 \pm
1 para eliminar el material suelto, incluidas las
beta-proteínas. Se eluye entonces la
alfa-1-PI del medio de
cromatografía de intercambio aniónico con un lavado de elución que
contiene 100 \pm 50 mM NaCl y 20 \pm 10 mM de fosfato de sodio,
a un pH de 8 \pm 1. Se recoge el eluato que incluye la
alfa-1-PI para otro
procesamiento.
Después de retirar la
alfa-1-PI, el medio de intercambio
aniónico se limpia por lavado con, consecutivamente, una solución
acuosa que contiene 2 \pm 0,2 M NaCl, 20 \pm 10 mM fosfato de
sodio, pH de 8 \pm 1; luego con agua para inyección (WFI);
después, con una solución acuosa que contiene 500 mM NaOH; y
finalmente con WFI. Se almacena entonces el medio cromatográfico en
2 \pm 0,2 M NaCl, 20 \pm 10 mM fosfato de sodio, pH 8 \pm
1.
El eluato que contiene la
alfa-1-PI se combina y se trata con
un 0,1 a 1,0% (peso/peso) de bentonita durante aproximadamente una
hora o más para reducir la cantidad de
apolipo-proteína preferentemente a menos de
aproximadamente 0,01 mg/ml de apolipo-proteína A y
menos de aproximadamente 0,01 mg/ml de
apolipo-proteína B. Se elimina por filtración la
bentonita, preferentemente por filtración Cuno®, por ejemplo tal
como se describe en "Zeta Plus®C Series Filter Medium", Cuno
Inc. La solución resultante se concentra en una membrana de
ultrafiltración hasta que la actividad de
alfa-1-PI sea de al menos 10
unidades/ml. Se filtra entonces el producto concentrado a través de
un filtro de 0,45 micras para eliminar cualquier material
particulado. La alfa-1-PI se filtra
entonces con PIanova para eliminar virus, se filtra de forma
estéril a través de un filtro de 0,22 micras para ser distribuida
en frascos y se liofiliza para su almacenamiento. Se almacena la
alfa-1-PI a
2-8ºC.
La alfa-1-PI
liofilizada puede redisolverse en agua estéril para su
administración a los pacientes.
\newpage
Se puede utilizar un ensayo cromogénico para
detectar la actividad alfa-1-PI de
la alfa-1-PI reconstituida. El
ensayo utiliza un sustrato cromogénico sensible a la tripsina que
libera p-nitroanilina en presencia de tripsina (suministrada
por Sigma Chemical Co., St Louis, Missouri). La
p-nitroanilina liberada es detectada a 405 nm. La
alfa-1-PI inhibe la liberación de
p-nitroanilina desde el sustrato. La actividad de
alfa-1-PI en el producto se
determina con referencia a una curva estándar de actividad de
alfa-1-PI. El ensayo cromogénico de
la alfa-1-PI liofilizada
reconstituida preparada de acuerdo con el proceso anterior muestra
una actividad específica de al menos 1,0 unidad/OD_{280}
aproximadamente.
La alfa-1-PI
puede ser infundida en un paciente a una velocidad de 0,08 ml/kg de
peso corporal por minuto durante los primeros 10 minutos. Si el
paciente no experimenta molestias, se puede aumentar la velocidad
según se tolere. Si se tolera, las infusiones posteriores al mismo
paciente pueden realizarse a una velocidad más alta. Si ocurrieran
efectos adversos, se debería reducir la velocidad o interrumpir la
infusión hasta que se calmen los síntomas. Entonces se puede seguir
con la infusión a una velocidad que sea tolerada por el
paciente.
Si se deben administrar grandes dosis, se pueden
agrupar varios frascos de alfa-1-PI
reconstituida en un recipiente de infusión I.V. vacío estéril
mediante técnicas asépticas.
Una pasta de Fracción IV_{1} + IV_{4} (600
g) procedente del esquema de fraccionamiento de Cohn se suspendió
en 1.800 ml de agua a 5ºC a un pH de 6,0 sin ninguna valoración
durante una hora. Al completarse la suspensión, se filtró ésta a
través de un filtro 10 CP (Cuno) mediante un filtro de prensa. Se
recogió el filtrado, se analizó y se midió la actividad específica
(A.E.) de la alfa-1-PI (A1PI), así
como la densidad óptica a 280 nm (OD_{280 \ nm}). La pasta del
filtro de prensa se lavó con 600 ml de agua a 5ºC y se recogió el
filtrado. Se repitió este procedimiento cuatro veces más y se
recogieron todos los filtrados, se analizaron y se midió la
actividad específica (A.E.) de A1PI y OD_{280 \ nm}. Se obtuvieron
350 g de la pasta resultante. En la Tabla 1 siguiente se describe
la actividad de A1PI y OD_{280 \ nm} de todas las muestras del
proceso.
Los 350 g de pasta resultante del Ejemplo 1
fueron resuspendidos en 1.050 ml de agua a un pH 8,5 y a una
temperatura de 18ºC durante 6 horas. Se añadió Tris sólido hasta
una concentración final de 10 mM y se añadió NaCl sólido hasta una
concentración final de 150 mM y se ajustó el pH a 8,0. Se añadió
polietilenglicol (PEG-3350) hasta una concentración
final del 15% (peso/peso) y se mezcló a 18ºC durante una hora. El
precipitado resultante se retiró en un filtro de prensa con un
filtro 10 CP para recuperar el sobrenadante. La pasta del filtro de
prensa se lavó posteriormente con la solución que contenía un 15% en
peso/peso de PEG-3350, 10 mM Tris y 150 mM NaCl. Se
combinaron el filtrado y el filtrado post-lavado. Se
resume el resultado en la siguiente Tabla 2.
Al filtrado de PEG-3350
recuperado del Ejemplo 2 se añadió ZnCl_{2} hasta una
concentración final de 2 mM, se ajustó el pH a 7,5 y se bajó la
temperatura a 5ºC para precipitar la A1PI bruta. Después de mezclar
durante una hora, se filtró la A1PI bruta mediante filtración
Prostak para su concentración y la suspensión resultante se
resolubilizó con una solución de NaEDTA. Se resume el resultado en
la siguiente Tabla 3.
Se añadió sacarosa en una cantidad del 16,7%
(peso/peso) a la solución de NaEDTA resolubilizada en el Ejemplo 3
y se mezcló a 18ºC hasta que la sacarosa estuviera completamente
disuelta. A esta solución se añadió polisorbato-80
en una concentración final del 1,0% y fosfato de
tri-n-butilo en una concentración
final del 0,3%. Se incubó esta solución a 27,5ºC durante no menos
de 6 horas para inactivar cualquier posible virus envuelto en
lípidos contaminante. Después de la incubación, se enfrió la
solución a 5ºC y se ajustó el pH a 8,0. Como control, se repitió el
procedimiento anterior excepto que no se añadió sacarosa. La
estabilidad de A1PI durante el tratamiento con
disolvente-detergente (SD) en presencia del 16,7% de
sacarosa (SD AIPI) y sin sacarosa (control) se presenta en la
siguiente Tabla 4.
A la solución de SD AIPI resultante del Ejemplo
4 se añadieron 4,311 g de agua destilada para bajar la fuerza
iónica antes de su carga en una columna QAE. Esta solución se cargó
en 300 ml de la columna preequilibrada de intercambio iónico QAE
con un caudal de 12 ml/minuto. Se lavó la columna con 6 l de tampón
fosfato salino (20 mM NaCl, 20 mM NaH_{2}PO_{4}, pH 8,0). La
A1PI se eluyó con 1,8 l de tampón fosfato salino (100 mM NaCl, 20
mM NaH_{2}PO_{4}, pH 8,0).
\newpage
El medio de intercambio iónico se limpió por
lavado secuencial con 2 M NaCl, 20 mM NaH_{2}PO_{4}, pH 8,0,
500 mM NaOH y agua destilada. Se almacenó el medio de cromatografía
en 2 M NaCl, 20 mM NaH_{2}PO_{4}, pH 8,0. Se analizaron las
fracciones agrupadas que contenían la A1PI y se presenta el
resultado en la siguiente Tabla 5.
Al eluato agrupado resultante del Ejemplo 5 se
añadieron 3,0 g de bentonita despirogenada y se mezcló a 20ºC
durante una hora. Se eliminó la bentonita por filtración Cuno. Se
concentró el filtrado por ultrafiltración. El concentrado se filtró
con PIanova y se filtró de forma estéril en serie. Se distribuyó el
filtrado en frascos y se liofilizó para su almacenamiento. Se
analizaron todas las muestras del proceso y se presenta el resultado
en la siguiente Tabla 6.
Claims (5)
1. Proceso para aumentar el rendimiento en
unidades de alfa-1-PI en una
solución que contiene alfa-1-PI que
se somete a una inactivación viral mediante tratamiento con
disolvente-detergente que comprende la adición a la
solución de alfa-1-PI, antes del
tratamiento con disolvente-detergente, de un azúcar
en una cantidad del 10% al 20% en peso/peso, para aumentar el
rendimiento de alfa-1-PI después de
dicho tratamiento con disolvente-detergente.
2. Proceso según la reivindicación 1,
caracterizado porque el azúcar es sacarosa.
3. Proceso para eliminar la
apolipo-proteína A y la
apolipo-proteína B de una solución proteica que
contiene el inhibidor de
alfa-1-proteinasa, la
apolipo-proteína A y la
apolipo-proteína B, comprendiendo el proceso las
etapas de:
añadir bentonita a la solución proteica;
poner en contacto la bentonita con la solución
proteica durante un tiempo suficiente para que la betonita absorba
la apolipo-proteína A y la
apolipo-proteína B; y
retirar la bentonita de la solución
proteica,
caracterizado porque la bentonita se pone
en contacto con la solución proteica durante al menos una hora.
4. Proceso según la reivindicación 3,
caracterizado porque la cantidad de bentonita añadida a la
solución proteica es del 0,1% al 1,0% peso/peso.
5. Proceso según la reivindicación 3,
caracterizado porque la cantidad de cada una de la
apolipo-proteína A y la
apolipo-proteína remanentes en la solución proteica
después de la eliminación de la betonita es inferior a 0,01
mg/ml.
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