ES2318537T3 - Reactor y procedimiento de fermentacion en estado solido. - Google Patents
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Abstract
Método para cultivar microorganismos en medios de crecimiento sólidos en un reactor de fermentación en estado sólido (FES), caracterizado porque el método comprende las etapas de: a. transferir el medio de crecimiento sólido por medio de vibración externa, y b. realizar la inoculación del medio de crecimiento sólido mediante un cultivo puro uniformemente durante la transferencia.
Description
Reactor y procedimiento de fermentación en
estado sólido.
La presente invención se refiere a un reactor de
fermentación en estado sólido y al método de usar este reactor para
cultivar microorganismos en medio de crecimiento sólido.
Un experto en la técnica conoce bien la
fermentación en estado sólido (FES) como método para cultivar
microbios en medios en los que se impregna agua en un soporte
sólido. La cantidad de agua libre es muy pequeña al contrario de la
fermentación líquida sumergida.
Tradicionalmente se ha usado la FES en
aplicaciones en las que no se ha requerido la asepsia estricta.
Comúnmente se usan medios voluminosos tales como granos de cereal,
compost, arcilla granular o vermiculita. Sin embargo, la producción
de inoculantes microbianos y productos biotecnológicos novedosos
necesita asepsia completa. También se han desarrollado y aplicado
medios de crecimiento definidos y más sofisticados tal como se
describe en el documento WO 9218623.
Hasta ahora, incluso las aplicaciones novedosas
de FES todavía se han basado en tecnología del procedimiento
tradicional: se realiza la fermentación en medio de cultivo
extendido sobre bandejas de crecimiento que se colocan sobre baldas
en una cámara cerrada. También se usa el cultivo en recipientes o
bolsas de plástico. Tales rutinas requieren abundante trabajo
manual y son lentas. Las capacidades de estos tipos de reactores
son pequeñas debido al espacio muerto dentro de los reactores.
Se han desarrollado diversos tipos de reactores
para el crecimiento de microbios en medios de cultivo sólidos para
fermentaciones en estado sólido tal como se muestra en Mitchell
et al., Process Biochemistry 35 (2000)
1211-1225. Estos incluyen reactores de lecho
compacto, reactores de tambor giratorio, reactores de lecho
fluidizado gas-sólido y reactores en los que se han
usado mezcladoras de diferentes clases (véase la publicación de
patente estadounidense 2002031822).
En los cultivos en estado sólido asépticos, es
esencial la distribución uniforme y aséptica del inóculo por todo
el medio. Los reactores de bandeja se inoculan comúnmente tras la
esterilización pulverizando el líquido de inóculo sobre la
superficie del medio en cada balda o sumergiendo todo el contenido
del reactor en suspensión que contiene el microbio deseado y
drenando el líquido en exceso. Los reactores de lecho fijo mixtos
más complejos son caros o difíciles de hacer funcionar de manera
aséptica.
En los cultivos no asépticos, la inoculación es
mucho más fácil de controlar puesto que los microbios contaminantes
ocasionales no crean problemas. Puede introducirse el inóculo en
forma sólida o líquida en el medio de crecimiento sobre bandejas de
crecimiento o continuamente sobre una cinta transportadora (micelios
de hongos). En algunas aplicaciones, la inoculación se realiza
mediante polvo de esporas secas soplado sobre el medio con aire.
La tecnología del procedimiento de fermentación
sólida tradicional es difícil y laboriosa de aplicar a los
procedimientos biotecnológicos modernos en los que se requiere
asepsia estricta. En los reactores de bandeja, el espacio muerto es
aproximadamente la mitad del volumen del biorreactor. El tamaño del
biorreactor necesario para un rendimiento de producto particular es
por tanto notablemente inferior en los biorreactores de lecho fijo
que en los de bandeja, lo que hace que el biorreactor de tipo de
bandeja sea menos eficaz. El funcionamiento de los biorreactores de
bandeja también necesita mucho trabajo manual, porque cada bandeja
tiene que cargarse, vaciarse y limpiarse individualmente. El
documento CN-A-1473924 describe un
aparato de fermentación en estado sólido aséptica en el que se usa
un tamiz vibratorio dentro del aparato para la uniformidad y la
carga controlada de las bandejas de cultivo.
En comparación, el biorreactor de lecho fijo es
fácil de cargar y de vaciar introduciendo y extrayendo el medio de
cultivo y la limpieza también es sencilla. El biorreactor de lecho
fijo es por tanto más eficaz en lo que se refiere al coste, el
trabajo y el espacio que el biorreactor de bandeja. El inconveniente
en los reactores de lecho fijo ha sido la inoculación.
Se han desarrollado reactores con mezcladoras
para aplicaciones de FES modernas, pero el dispositivo de mezclado
aséptico con motores es muy caro. La abrasión mecánica en el
mezclado también puede dañar la estructura suelta, aireada, del
medio de crecimiento cuando se usan ciertos soportes sensibles. Los
reactores de tambor giratorio pueden proporcionar mezclado
suficiente solamente para medios de crecimiento sólidos que tienen
cierta clase de estructura que rueda libremente.
Incluso las fermentaciones sólidas novedosas
todavía se obtienen usando medios voluminosos, complejos, tales
como granos de cereal complementados con diversas harinas. El
control óptimo de las condiciones de crecimiento y de la formación
del producto puede lograrse en medios más definidos que pueden ser
sensibles al mezclado o a la inmersión completamente en
líquido.
El objeto de la presente invención es introducir
un nuevo tipo de dispositivo de fermentación en estado sólido en
lecho compacto para realizar cultivos asépticos de cultivos
puros.
\global\parskip0.900000\baselineskip
Otro objeto de esta invención es inocular de
manera aséptica y uniforme cualquier clase de medio de crecimiento
sólido en grandes volúmenes.
Un objeto adicional de la invención es
proporcionar un reactor y un procedimiento simplificados, fáciles de
usar y económicos y para cultivos asépticos.
Se encontró que usando vibración externa en el
medio de crecimiento sólido estéril dentro de un reactor, el medio
podría moverse o transferirse de manera aséptica y controlable
dentro del reactor hacia el punto de inoculación y más allá, e
inocularse simultáneamente de manera uniforme con un cultivo
puro.
La figura 1 describe un diseño de reactor según
la invención que comprende un vibrador 1, una entrada de
alimentación de inóculo 2, un compartimento inferior del reactor 3,
un compartimento superior del reactor 4 y una
\hbox{criba
5.}
La figura 2 describe un diseño de reactor según
la invención que comprende un vibrador 1, una entrada de
alimentación de inóculo 2, una unidad de esterilización del medio
6, un tubo vertical de bajada 7 y un recipiente de crecimiento
8.
El método de la invención se define tal como se
expone en la reivindicación independiente.
Según el método de la invención, el medio de
crecimiento sólido se transfiere dentro del reactor de fermentación
en estado sólido (FES), que va a usarse para el cultivo de
microorganismos, por medio de vibración externa desde la posición
inicial de reposo hacia el punto de inoculación y más allá. Cuando
un flujo de masa controlado de los medios de crecimiento sólidos
pasa el punto de inoculación, se inoculará de manera uniforme y
continua.
El medio de crecimiento sólido comprende
diversos soportes orgánicos o inorgánicos, que pueden moverse
mediante vibración. Los soportes inorgánicos son preferiblemente
tales como vermiculita, perlita, sílice amorfa o arcilla granular.
Estos tipos de materiales se usan comúnmente porque forman una
estructura granular suelta, aireada, que tiene preferiblemente un
tamaño de partícula de 0,5-50 mm y una gran área
superficial. Los soportes orgánicos son preferiblemente tales como
granos de cereal, salvado, serrín, turba o astillas de madera.
Además, el medio de crecimiento sólido puede
contener nutrientes complementarios para el microorganismo.
Normalmente, éstos incluyen fuentes de carbono tales como hidratos
de carbono (azúcares, almidón), proteínas o grasas, fuentes de
nitrógeno en forma orgánica (proteínas, aminoácidos) o sales de
nitrógeno inorgánicas (sales de amonio y nitrato, urea),
oligoelementos u otros factores de crecimiento (vitaminas,
reguladores de pH). El medio de crecimiento sólido puede contener
adyuvantes para la composición estructural, tales como agentes
superabsorbentes, por ejemplo poliacrilamidas.
Según una realización preferida de la invención,
se esteriliza el medio de crecimiento sólido dentro de la unidad de
esterilización del medio ex situ. Por ejemplo, un recipiente
de alimentación espiral vibratorio (tal como se muestra en la
figura 2) puede desmontarse del cuerpo del reactor, cargarse con
medio de crecimiento sólido y esterilizarse en, por ejemplo, un
autoclave, tras lo cual puede unirse de nuevo al cuerpo del reactor
de manera aséptica antes de empezar el funcionamiento (vibración y
inoculación).
En otra realización preferida, se esteriliza el
medio de crecimiento sólido dentro de la unidad de esterilización
del medio in situ antes de empezar la inoculación, por
ejemplo con la ayuda de vapor.
El microorganismo que va a cultivarse e
inocularse en el medio de crecimiento sólido comprende hongos,
incluyendo levaduras, por ejemplo tales como Phlebiopsis
gigantea, Gliocladium sp., Nectria pityrodes, Chondrostereum
purpureum, Pseudozyma flocculosa, Coniothyrium minitans, Trichoderma
sp., Metarrhizium sp., Verticillium sp. o Beauveria
bassiana. Preferiblemente, los hongos son Phlebiopsis
gigantea, Gliocladium catenulatum, Nectria pityrodes o
Chondrostereum purpureum. Los hongos incluyen adicionalmente
setas comestibles tales como Agaricus bisporus, Lentinus
edodes o Pleurotus ostreatus. El microorganismo según la
invención puede ser una bacteria tal como Streptomyces sp.,
Bacillus thuringiensis, otros Bacillus sp. o
Pseudomonas sp., preferiblemente Streptomyces sp.
Además, podrían usarse nematodos como el microorganismo que va a
hacerse crecer según la invención.
Se alimenta el inóculo al reactor según la
invención en forma líquida o sólida, preferiblemente líquida.
Si se usan medios líquidos como inóculo, pueden
estar por ejemplo en forma de suspensión con un tamaño de partícula
pequeño para permitir el uso de técnicas de pulverización.
Preferiblemente, se pulverizan los medios líquidos en una corriente
continua del medio de crecimiento sólido que pasa el punto de
inoculación.
Si el inóculo está en forma sólida, puede
transportarse al punto de inoculación de manera similar al
transporte del medio de crecimiento sólido, mediante vibración.
Preferiblemente, se transporta el inóculo sólido usando un husillo,
vibrador o cinta transportadora. Esto garantiza que el
microorganismo puede transportarse igualmente de manera aséptica
para cultivo.
Se logra la vibración externa mediante medios de
vibración convencionales uniendo un vibrador al cuerpo externo del
reactor. Preferiblemente, la vibración se genera mediante vibradores
giratorios eléctricos externos, vibradores magnéticos, hidráulicos
o neumáticos. Lo más preferiblemente, se usa un vibrador giratorio
eléctrico.
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El reactor de la invención se define tal como se
expone en la reivindicación independiente.
Puede haber varias construcciones diferentes
para producir la funcionalidad de la invención, la colocación
del/los medio(s) de vibración y las entidades o unidades del
reactor.
En una realización preferida según la invención,
el cuerpo del reactor comprende al menos cuatro entidades tal como
se muestra en la figura 1. Hay dos compartimentos principales, un
compartimento superior 4 y un compartimento inferior 3, separados
entre sí mediante un separador permeable 5, y se une un vibrador
externo 1 a la pared externa del cuerpo del reactor. Se une al
menos una entrada 2 al compartimento inferior para inoculación.
Este cuerpo del reactor puede dar la vuelta opcionalmente y por
tanto, incluye medios para el volteo.
La forma y el tamaño de los compartimentos del
reactor pueden variar dependiendo de la necesidad del cultivo y de
los materiales usados. Ni siquiera es necesario que la forma se
limite a formas bien definidas, sino que podría ser moldeable o de
tipo plástico. Preferiblemente, las formas de los recipientes son
cilíndricas, angulares o cónicas.
Según la invención, el separador permeable
facilita un flujo regulado y homogéneo del medio de crecimiento
sólido hacia el punto de inoculación con la ayuda del vibrador una
vez que se ha cargado y dado la vuelta al compartimento del
reactor. La forma del separador permeable puede variar dependiendo
de la velocidad de flujo requerida para el medio de crecimiento
sólido a través del separador. Preferiblemente, el separador
permeable es una criba o una placa perforada. El tamaño de abertura
del separador depende de la estructura y del tamaño de partícula y
la forma del medio de crecimiento sólido y es preferiblemente de
5-50 mm.
El separador permeable puede ser uno estático,
fijado en una posición predeterminada dividiendo así el
compartimento del reactor en volúmenes fijos del compartimento
superior 4 y el compartimento inferior 3. El funcionamiento del
reactor para esta realización preferida requiere que el cuerpo del
reactor se dé la vuelta tras cargarse el reactor y esterilizarse el
medio de crecimiento sólido en el mismo. El volteo se realiza o bien
manual o bien automáticamente, con la ayuda de un dispositivo de
elevación.
Otra alternativa es un separador móvil, en cuyo
caso puede ajustarse la razón de volumen del compartimento 4 con
respecto al compartimento 3. Puede moverse el separador por ejemplo
uniéndolo a un husillo giratorio, que puede hacerse girar desde el
exterior.
En otra realización preferida según la
invención, el cuerpo del reactor comprende un vibrador externo 1
conectado a una unidad de esterilización del medio de crecimiento
sólido desmontable 6, que está unida a un tubo vertical de bajada
7. A una parte adecuada de este cuerpo del reactor, está conectada
al menos una entrada de alimentación por inoculación 2 con el fin
de lograr una inoculación uniforme y continua del medio de
crecimiento sólido. El tubo vertical de bajada 7 está conectado a
un recipiente de crecimiento 8 en el que tiene lugar el cultivo
tras la inoculación.
Preferiblemente, el tubo vertical de bajada es
uno flexible para adoptar el movimiento de la unidad de
esterilización del medio vibratoria.
La unidad de esterilización del medio de
crecimiento sólido desmontable 6 es ventajosa dado que su volumen
muerto durante la esterilización es mínimo. Si se desmonta para
esterilización, posteriormente se vuelve a montar de manera
aséptica al cuerpo del reactor. Preferiblemente, la unidad de
esterilización del medio 6 es un recipiente de alimentación espiral
vibratorio.
La forma de las unidades del cuerpo del reactor
puede variar, pero preferiblemente es cilíndrica, angular o
cónica.
Hasta ahora no han estado disponibles
biorreactores de lecho compacto asépticos en escala comercial. El
mayor desafío ha sido la inoculación homogénea, especialmente con
medios, que no toleran el mezclado vigoroso. El reactor y el método
para usarlos según la invención pueden superar estos problemas
asociados con el movimiento invasivo del medio de crecimiento
sólido. El dispositivo de mezclado dentro del reactor produce un
riesgo de canalización del aire de aireación en la zona que rodea a
la mezcladora. El mezclado vigoroso puede producir la nueva
conformación mecánica del medio de crecimiento (por ejemplo, pérdida
de holgura).
En la presente invención, el medio de
crecimiento sólido se transfiere de manera aséptica a través de una
criba o desde un recipiente hasta otro haciéndolo vibrar con un
vibrador externo. Al mismo tiempo, se alimenta el inóculo al medio
de crecimiento sólido. Este método es sencillo y aséptico y no
requiere el mezclado del medio de cultivo.
La invención se ilustra en los siguientes
ejemplos sin limitar el alcance definido por las
reivindicaciones.
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Se hizo crecer Phlebiopsis gigantea
(Rotstop, marca comercial de Verdera Oy) usando el reactor en estado
sólido de lecho compacto en un medio de crecimiento sólido basado
en sílice usando un diseño de reactor mostrado en la figura 1.
Se preparó una disolución de nutrientes adecuada
para P. gigantea disolviendo 9 kg de grano de destilador
condensado (Altia Oyj) en 33 kg de agua del grifo. Se impregnó la
disolución en 15 kg de polvo de sílice amorfa (Degussa) mezclando
durante 3 minutos en una amasadora para formar un medio de
crecimiento granular. Se añadieron 700 g de cal antes de mezclar
para controlar el pH.
Se cargó el reactor de fermentación con el medio
de cultivo hasta una criba estática, tamaño de abertura 1 cm,
colocada en el centro del reactor. Se selló el reactor y se
sujetaron filtros estériles a las entradas. Se esterilizó el
reactor en un autoclave durante 1 h a 121ºC. Tras someter en el
autoclave, se dejó enfriar el reactor durante la noche.
Se cultivó el inóculo de P. gigantea en
matraces con agitación en disolución de extracto de malta durante 4
días a 28ºC. Se homogenizó el inóculo antes de transferirlo al
reactor. Se inoculó el medio de crecimiento sólido dando la vuelta
manualmente al reactor y haciéndolo vibrar con un vibrador de
rodillo neumático externo (Netter Vibrationstechnik GmbH). La
vibración hizo que el medio sólido cayera uniformemente a través de
la criba. Se pulverizó de manera aséptica la disolución del inóculo
al medio que caía a través de una boquilla. Se pulverizaron 100 ml
de inóculo en 4 kg de medio sólido a una velocidad de
aproximadamente 5 ml/s usando una boquilla cónica hueca.
Se cultivó el hongo durante 10 días a una
temperatura de 28ºC y velocidad de aireación de 0,3 l/min/kg de
medio de crecimiento. Tras el cultivo, el hongo había crecido y
esporulado por todo el medio. Se extrajo el medio del reactor y se
secó a temperatura ambiente durante 3 días sobre baldas de
secado.
El medio seco contenía 1*10^{7} ufc/g (ufc =
unidades formadoras de colonias) de P. gigantea. La
viabilidad del producto seco era tan alta como la obtenida con los
métodos de FES tradicionales.
Se hizo crecer P. gigantea usando el
reactor de fermentación en estado sólido de lecho compacto mostrado
en la figura 2.
Se preparó el medio de crecimiento sólido para
P. gigantea tal como se describe en el ejemplo 1.
Se cargó una unidad de esterilización del medio
vibratoria que comprende un recipiente de alimentación espiral con
40 kg del medio de cultivo. Se selló el recipiente y se esterilizó
en un autoclave durante 90 min a 121ºC y se dejó enfriar durante la
noche. Se sujetó el recipiente de alimentación a una base vibratoria
(Tärylaite Oy) equipada con vibradores eléctricos giratorios y se
conectó de manera aséptica a un recipiente de crecimiento
cilíndrico estéril usando un tubo vertical de bajada flexible. Se
hizo vibrar el recipiente de alimentación haciendo que el medio de
crecimiento sólido dentro fluyese hacia arriba a un ritmo constante
a lo largo de la espiral de alimentación. Se cultivó el inóculo tal
como se describe en el ejemplo 1. Se inoculó el medio de
crecimiento sólido pulverizando aproximadamente 2 litros de inóculo
homogenizado a una velocidad de 300 ml/min con una boquilla cónica
hueca al medio que cae a través del tubo vertical de bajada en el
recipiente de crecimiento. El inóculo se pulverizó en el extremo
superior del tubo vertical de bajada. De esta forma, todo el medio
se inoculó uniformemente.
El cultivo, la recogida y el secado del producto
final se realizaron tal como se describe en el ejemplo 1. El medio
seco contenía 1*10^{7} ufc/g de P. gigantea.
Se hizo crecer Streptomyces sp.
(Mycostop, marca comercial de Verdera Oy) tal como se describe en
los ejemplos 1 y 2 usando como medio de crecimiento sólido 0,62 kg
de sólidos macerados de maíz (smm), 0,62 kg de lactosa,
0,62 kg de cal, 12 kg de sílice amorfa y 28,8 kg de agua del grifo. Se cultivó la bacteria durante 7 días a 28ºC.
0,62 kg de cal, 12 kg de sílice amorfa y 28,8 kg de agua del grifo. Se cultivó la bacteria durante 7 días a 28ºC.
El medio seco contenía 6*10^{8} ufc/g y
1*10^{9} ufc/g de Streptomyces preparado según los ejemplos
1 y 2, respectivamente.
Se hizo crecer Gliocladium catenulatum
(GlioMix, marca comercial de Verdera Oy) tal como se describe en el
ejemplo 1 usando como medio de crecimiento sólido 0,53 kg de grano
de destilador condensado, 60 g de cal, 1,5 kg de sílice amorfa, 3,4
kg de agua del grifo. Se cultivó el hongo durante 18 días a
22ºC.
El medio seco contenía 3*10^{8} ufc/g de G.
catenulatum.
Se hizo crecer P. gigantea usando el
reactor de fermentación en estado sólido de lecho compacto mostrado
en la figura 2 equipado con dos clases diferentes de recipientes de
crecimiento y entradas de alimentación del inóculo.
Se preparó el medio de crecimiento sólido para
P. gigantea tal como se describe en el ejemplo 1.
Se cargó una unidad de esterilización del medio
vibratoria que comprende un recipiente de alimentación espiral con
70 kg del medio de cultivo. Se esterilizó el recipiente y se sujetó
a una base vibratoria tal como se describe en el ejemplo 2. Se
conectaron dos clases diferentes de recipientes de crecimiento de
manera aséptica a la unidad de esterilización usando un tubo
vertical de bajada flexible: recipientes en forma de caja angular
que tenían proporciones de altura:anchura:profundidad de 1) 1:1:1 y
2) 10:6:3. Se inocularon los recipientes de crecimiento 1) tal como
se describe en el ejemplo 2 y 2) usando una boquilla de
pulverización plana de ángulo ancho colocada en el extremo inferior
del tubo vertical de bajada dentro del recipiente de
crecimiento.
Se obtuvo una inoculación del medio de
crecimiento sólido muy uniforme con todas las configuraciones
descritas. El cultivo, la recogida y el secado del producto final
se realizó tal como se describe en el ejemplo 1. El medio seco
contenía aproximadamente 1*10^{7} ufc/g de P. gigantea en
todos los lotes de cultivo.
Ejemplo de
referencia
Se hizo crecer Phlebiopsis gigantea
(Rotstop, marca comercial de Verdera Oy) en un medio de crecimiento
sólido basado en sílice del modo descrito en el ejemplo 1, en un
fermentador en estado sólido de lecho compacto cilíndrico equipado
con una mezcladora de cinta helicoidal con una entrada en el espacio
del reactor desde el fondo. El reactor era un recipiente de presión
y se esterilizó in situ con vapor a 121ºC. Tras la
esterilización y el enfriamiento, se inoculó el reactor vertiendo
el inóculo dentro del medio de crecimiento a través de una entrada
en el reactor en la parte superior del reactor y conectando la
mezcladora simultáneamente. Se observó que el medio de crecimiento
usado era muy vulnerable al mezclado. Tras 5 min, su estructura
suelta, aireada, se perdió durante la inoculación y el producto
obtenido se volvió similar a una masa.
No fue posible procesar adicionalmente el
material así obtenido.
Claims (19)
1. Método para cultivar microorganismos en
medios de crecimiento sólidos en un reactor de fermentación en
estado sólido (FES), caracterizado porque el método
comprende las etapas de:
- a.
- transferir el medio de crecimiento sólido por medio de vibración externa, y
- b.
- realizar la inoculación del medio de crecimiento sólido mediante un cultivo puro uniformemente durante la transferencia.
2. Método según la reivindicación 1,
caracterizado porque la inoculación se realiza de manera
aséptica.
3. Método según la reivindicación 1,
caracterizado porque el medio de crecimiento sólido comprende
soportes orgánicos y/o soportes inorgánicos.
4. Método según la reivindicación 3,
caracterizado porque los soportes orgánicos se seleccionan
del grupo de granos de cereal, salvado, serrín, turba o astillas de
madera.
5. Método según la reivindicación 3,
caracterizado porque los soportes inorgánicos se seleccionan
del grupo de vermiculita, perlita, sílice amorfa o arcilla
granular.
6. Método según la reivindicación 1,
caracterizado porque los microorganismos que van a cultivarse
son hongos, incluyendo levaduras, bacterias o nematodos.
7. Método según la reivindicación 1,
caracterizado porque se genera la vibración con vibradores
giratorios eléctricos externos, vibradores magnéticos, hidráulicos
o neumáticos.
8. Método según la reivindicación 1,
caracterizado porque el microorganismo que va a usarse en la
inoculación es alimentado al medio de crecimiento sólido en forma
líquida o sólida.
9. Método según la reivindicación 8,
caracterizado porque el inóculo líquido del microorganismo se
pulveriza como una suspensión usando una boquilla.
10. Método según la reivindicación 8,
caracterizado porque el inóculo sólido del microorganismo es
alimentado al medio de crecimiento sólido usando husillo, vibración
o una cinta transportadora.
11. Reactor adecuado para fermentación en estado
sólido (FES), caracterizado porque el reactor comprende
- a.
- un vibrador externo (1) sujeto al cuerpo externo del reactor para una vibración eficaz de dicho cuerpo y el contenido en el mismo durante la transferencia del contenido tal como se requiere por la reivindicación 1, y
- b.
- al menos una entrada de alimentación por inoculación (2) unida a dicho cuerpo del reactor.
12. Reactor según la reivindicación 11,
caracterizado porque la fermentación se realiza de manera
aséptica.
13. Reactor según las reivindicaciones 11 ó 12,
caracterizado porque el cuerpo del reactor comprende
- a.
- dos compartimentos, un compartimento superior (4) y un compartimento inferior (3),
- b.
- un separador permeable (5) que separa los dos compartimentos, y
- c.
- un vibrador externo (1) sujeto al cuerpo externo del reactor, y
- d.
- al menos una entrada de alimentación por inoculación (2) unida al compartimento inferior,
- e.
- medios de volteo opcionales para dar la vuelta al cuerpo del reactor.
14. Reactor según la reivindicación 13,
caracterizado porque el separador permeable es una criba o
una placa perforada.
15. Reactor según las reivindicaciones 11 ó 12,
caracterizado porque el cuerpo del reactor comprende
- a.
- un vibrador externo (1),
- b.
- una unidad de esterilización del medio de crecimiento sólido desmontable ('6),
- b.
- un tubo vertical de bajada (7),
- c.
- un recipiente de crecimiento (8), y
- d.
- al menos una entrada de alimentación por inoculación (2).
16. Reactor según la reivindicación 15,
caracterizado porque la al menos una entrada de alimentación
por inoculación está entre la unidad de esterilización (6) y el
recipiente de crecimiento (8) para alimentar el inóculo durante la
transferencia del medio de crecimiento sólido.
17. Reactor según la reivindicación 15,
caracterizado porque la unidad de esterilización del medio de
crecimiento sólido desmontable (6) es un recipiente de alimentación
espiral vibratorio.
18. Reactor según la reivindicación 15,
caracterizado porque el tubo vertical de bajada (7) es
flexible con el fin de permitir la vibración libre.
19. Uso de vibración externa para transferencia
aséptica e inoculación uniforme de medio de crecimiento sólido
dentro de un reactor de FES para el crecimiento de un cultivo
puro.
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