ES2318507T3 - Uso de un hidrolizado de proteinas de plantas pertenecientes a la familia de las cruciferas como principio activo despigmentante para la preparacion de una composicion cosmetica y/o farmaceutica. - Google Patents
Uso de un hidrolizado de proteinas de plantas pertenecientes a la familia de las cruciferas como principio activo despigmentante para la preparacion de una composicion cosmetica y/o farmaceutica. Download PDFInfo
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Abstract
Uso de una cantidad eficaz de un hidrolizado de proteínas de plantas, pertenecientes a la familia de las crucíferas, como principio activo blanqueador y/o despigmentante, para la preparación de una composición terapéutica para blanquear y/o despigmentar.
Description
Uso de un hidrolizado de proteínas de plantas
pertenecientes a la familia de las crucíferas como principio activo
despigmentante para la preparación de una composición cosmética y/o
farmacéutica.
La invención se refiere al ámbito de la
cosmética y de la farmacéutica, en particular al ámbito de la
dermatología. La presente invención tiene por objeto el uso de una
cantidad eficaz de un hidrolizado de proteínas de plantas
pertenecientes a la familia de las crucíferas, como agente
blanqueador y/o despigmentante de la piel, para la preparación de
una composición terapéutica para blanquear y/o despigmentar, así
como el uso no terapéutico de dicho hidrolizado para blanquear y/o
despigmentar.
El color de la piel y del cabello de los
mamíferos se debe a la influencia de diferentes factores, factores
genéticos, por supuesto, y también medioambientales tales como la
exposición al sol por ejemplo. Este color depende esencialmente de
la presencia de un pigmento específico, la melanina. En efecto, la
melanina desempeña una función fundamental en la determinación del
color de la piel. La sintetizan amplias células dendríticas: los
melanocitos, células localizadas en la unión dermoepidérmica. La
melanina existe en dos diferentes formas: la feomelanina, pigmento
de color amarillo, y la eumelanina de color negro. Son las
diferentes proporciones y el tamaño de estos pigmentos, sin olvidar
los carotenoides y la microcirculación sanguínea, los que dan a la
piel su gran diversidad de colores.
Ambas clases de melaninas se sintetizan a partir
de un mismo aminoácido, la tirosina. Esta síntesis depende de una
enzima clave, la tirosinasa, que transforma la tirosina en DOPA y
después en DOPAquinona. De dicha DOPAquinona nacen la feomelanina o
la eumelanina. En presencia de cisteína, un aminoácido rico en
azufre, la DOPAquinona se transformará en CisteinilDOPA, intermedio
de la síntesis de feomelanina. Mientras que en ausencia de
cisteína, se formará indol 5-6 quinona y se
sintetizará eumelanina. Los melanocitos transfieren después la
melanina a las células adyacentes, es decir los queratinocitos.
La producción de melanina, así como su
transporte, se regulan gracias a diferentes factores tales como,
por ejemplo, las radiaciones UV, las hormonas o los productos
químicos. Así, un aumento de la exposición a las radiaciones UV,
provoca la síntesis de pigmentos y en consecuencia un
oscurecimiento de la piel. Pueden aparecer perturbaciones más o
menos importantes de esta pigmentación. Éstas se manifiestan, por
ejemplo, en pecas, lunares, manchas difusas tales como las manchas
del embarazo, el cloasma así como en otros trastornos
hiperpigmentarios como el lentigo, por ejemplo. Además, el
envejecimiento puede modular la pigmentación cutánea. Así ciertas
personas pueden ver aparecer manchas en la piel, más o menos
oscuras o coloradas, que se traducen en zonas de coloraciones
heterogéneas que forman manchas de senescencia.
El uso de un inhibidor o regulador de la
síntesis de melanina, así como de cualquier otro producto
despigmentante y/o blanqueador, es particularmente interesante pues
en cosmetología y/o dermatología. Este uso es interesante para
obtener una verdadera despigmentación de la piel, como en el caso
del blanqueamiento de la piel muy pigmentada o también de
inhibición de zonas cutáneas hiperpigmentadas que provocan un
aspecto anti estético de la piel; también es interesante, en
determinadas aplicaciones que tienden a aclarar la tez, dar
luminosidad a la piel o resplandor a los tejidos superficiales.
Hasta hoy se propusieron numerosas moléculas,
pero muy pocas se usan verdaderamente porque muchas de ellas
presentan problemas de irritación, incluso de toxicidad. Entre
dichas moléculas se pueden mencionar derivados del fenol tales como
la hidroquinona y el resorcinol que inhiben una serie de reacciones
de la conversión de la L-tirosina en melanina por
inhibición de la actividad de la tirosinasa (Takano, 1984). También
se pueden mencionar el ácido L-ascórbico y sus
derivados, el ascorbil acetato de magnesio, el ácido kójico o
también el ácido láctico. Para resolver este problema se pusieron a
punto nuevos productos y moléculas. Así el documento GB 1349955
describe una composición blanqueadora que contiene hidroquinona, un
agente descamante y un corticoesteroide antiinflamatorio. El
documento EP98401360 describe el uso de sulfitos o metalsulfitos en
una composición cosmética con actividad despigmentante.
Así, apareció un cierto número de sustancias
introducidas en productos cosméticos o farmacéuticos. Sin embargo,
se necesitan más progresos para poder disponer de productos aptos
para resolver estos problemas de manera satisfactoria. En
particular subsiste la necesidad de una composición despigmentante
y/o blanqueadora que, aunque convenientemente tolerada por la piel,
sea más eficaz que las composiciones arriba mencionadas.
Así, el problema técnico que los inventores
tuvieron que resolver fue encontrar una nueva sustancia, aceptable
del punto de vista cosmético o farmacéutico, capaz de tener una
verdadera actividad blanqueadora y/o despigmentante en la piel, y
que no tenga efectos secundarios indeseables, tales como reacciones
de toxicidad o irritación cutánea, por ejemplo.
Los inventores consiguieron elegir sustancias
específicas que presentan propiedades notables al aplicarlas en la
piel. En particular descubrieron que un hidrolizado de proteínas de
plantas pertenecientes a la familia de las crucíferas tiene
propiedades notables en la piel y, más particularmente, propiedades
blanqueadoras. En efecto, este compuesto permite inhibir
significativamente la síntesis de melanina de las células de la
piel.
Los vegetales de la familia de las crucíferas
(latinizada en Cruciferae) se reúnen en una amplia familia que
cuenta con unas 3200 especies divididas en 375 géneros en el mundo.
Las crucíferas también se llaman Brassicaceae. Estas plantas se
encuentran principalmente en las zonas templadas del hemisferio
norte y más particularmente en la cuenca mediterránea. Las
crucíferas toman su nombre de la disposición en cruz de sus sépalos
y pétalos. Son plantas herbáceas, vivaces, anuales y a menudo
bienales. Sus raíces son pivotantes y tuberosas. El follaje es
alterno, con estípulas reducidas y caducas, incluso ausentes. La
fruta es una silicua, su forma, su longitud o también su espesor
sirven para el reconocimiento de las especies. Las semillas se
desprenden progresivamente; están desprovistas de albumen, siendo
las reservas esencialmente de origen lipídico. Como plantas
pertenecientes a esta familia, se pueden mencionar plantas de
grandes cultivos, oleaginosas, tal como la colza (Brassica
napus, var. Oleifera); plantas alimenticias como todas las
variedades de "col" (del género Brassica); condimentos tal
como la mostaza (del género Sinapis); o también plantas de interés
ornamental tales como el alhelí o el canastillo (del género
Alyssum).
En documentos anteriores ya se propusieron
composiciones cosméticas que contienen extractos de Brassicaceae.
Así por ejemplo la patente FR 2802417 describe una preparación
cosmética y/o farmacéutica que contiene una cantidad eficaz de un
extracto de Brassicaceae y un cuerpo graso y/o emulsionantes. Sin
embargo, que la solicitante sepa, nunca ha sido descrito en el arte
anterior el uso de un hidrolizado de proteínas de plantas
pertenecientes a la familia de las crucíferas, como agente
blanqueador y/o despigmentante en cosmética y/o dermatología y/o
farmacéutica.
Así, según un primer aspecto, la presente
invención tiene por objeto el uso de una cantidad eficaz de un
hidrolizado de proteínas de plantas pertenecientes a la familia de
las crucíferas como principio activo blanqueador para la
preparación de una composición terapéutica para blanquear y/o
despigmentar, así como su uso no terapéutico para blanquear y/o
despigmentar. Según un modo de realización de la invención
particularmente preferente, el hidrolizado es un hidrolizado de
proteínas fermentadas de plantas pertenecientes a la familia de las
crucíferas.
El término "hidrolizado" representa
cualquier sustancia que haya sido sometida a una hidrólisis. La
hidrólisis se define como la división de una molécula por una
molécula de agua. La hidrólisis puede ser enzimática o química,
preferentemente según la invención, la hidrólisis es enzimática. Un
hidrolizado de proteínas representa, pues, el producto obtenido
tras hidrólisis de las proteínas de las plantas. La hidrólisis de
las proteínas, más o menos fuerte, permite obtener un hidrolizado
que contiene, sea péptidos con pesos moleculares variables, sea
aminoácidos. Las proteínas así hidrolizadas se examinaron por sus
propiedades en el ámbito de la cosmética y dermatología.
Preferentemente según la invención, el
hidrolizado de proteínas se prepara a partir de proteínas
fermentadas, es decir, a partir de proteínas que se sometieron a
una etapa de fermentación. Cuando se hable de fermentación, se hace
referencia a una transformación de las sustancias orgánicas
mediante la acción de microorganismos. Preferentemente según la
invención, los microorganismos utilizados son levaduras y más
particularmente levaduras del género Rhizopus, Aspergillus o
Penicillium.
El hidrolizado de proteínas de plantas
pertenecientes a la familia de las crucíferas tiene que entenderse
como un hidrolizado de por lo menos un vegetal perteneciente a la
familia de las crucíferas. Claro está que dicho hidrolizado puede
prepararse a partir de por lo menos uno cualquiera de los numerosos
géneros y especies pertenecientes a la familia de las crucíferas.
Según un modo de realización ventajoso de la invención, la planta
utilizada para obtener el hidrolizado de proteínas fermentadas,
perteneciente a la familia de las crucíferas, es la colza
(Brassica napus). Preferentemente el hidrolizado de
proteínas de plantas pertenecientes a la familia de las crucíferas
se obtiene a partir de la semilla de dichos vegetales. Así, según
un método de realización preferente de la invención, el
hidrolizado de proteínas se obtiene a partir de las semillas de
colza.
Se puede usar cualquier método de extracción o
purificación conocido por un experto en la materia para preparar el
hidrolizado según la invención. En una primera etapa, por ejemplo,
se pueden deslipidizar semillas de crucíferas, tales como semillas
de colza, por medio de un simple prensado y/o la acción de un
disolvente orgánico clásico (como un alcohol, un hexano o acetona
por ejemplo). Después del secado del producto así obtenido, se
obtiene un residuo enriquecido con proteínas comúnmente llamado
"torta". Después se realiza ventajosamente una etapa de
fermentación a partir de dicha torta.
Según otra técnica se puede contemplar la
realización de la extracción de una fracción protéica obtenida a
partir de dicha torta, dicha fracción protéica servirá después de
sustrato para la fermentación. La etapa de extracción de las
proteínas propiamente dichas se realiza en medio acuoso, neutro o
básico. Preferentemente, según la invención, la extracción de las
proteínas se realizará en medio acuoso, ligeramente básico, y en
caliente. Las proteínas se recuperarán por precipitación o
concentración.
La etapa de fermentación se realiza
preferentemente con levaduras, y preferentemente con levaduras de
los géneros Rhizopus, Aspergillus o Penicillium. En el medio de
fermentación, el extracto de colza, fuente de materias
nitrogenadas, se suplementa con azúcares (glucosas), así como con
diversos elementos necesarios para el crecimiento de las levaduras,
tales como aminoácidos y sales minerales, por ejemplo. Se puede
añadir una pequeña concentración de alcohol o glicerol. El cultivo
se efectúa en un fermentador con agitación lenta (10 a 60
revoluciones por minuto), a una temperatura comprendida entre 20 y
40ºC y con un pH que varía de 5 a 7,5, siendo constante el flujo
de aire. La duración de esta etapa es muy variable. En efecto,
puede variar de doce horas a veinte días. Después, el medio de
cultivo se somete a un tratamiento térmico, es decir a una
temperatura comprendida entre 80ºC y 135ºC.
La etapa final de hidrólisis de las proteínas se
realiza con proteasas de origen vegetal tal como, por ejemplo, la
papaína o bromelaína; o también con enzimas llamadas
"industriales" tales como las alcalasas, la Flavourzyme... El
medio de cultivo así hidrolizado se centrifuga, se filtra hasta la
obtención de un hidrolizado de proteínas fermentadas de
crucíferas.
Este hidrolizado se disuelve en uno o distintos
disolventes. En particular, se pueden mencionar disolventes
acuosos. Cuando se hable de disolventes acuosos, se hace referencia
a cualquier disolvente constituido total o parcialmente por agua.
Se puede mencionar el propio agua, los disolventes hidroalcohólicos
en cualquier proporción o también los disolventes constituidos por
agua y un compuesto tal como el propilenglicol o el butilenglicol
en cualquier proporción.
Los hidrolizados de proteínas fermentadas de
plantas pertenecientes a la familia de las crucíferas se analizan
por su proporción de compuestos de naturaleza protéica. Cuando se
hable de compuestos de naturaleza protéica, se hace referencia a
los fragmentos de proteínas, los péptidos y los aminoácidos libres
presentes en la mezcla. Los péptidos, aminoácidos y fragmentos de
proteínas se dosifican según las técnicas clásicas bien conocidas
por el especialista. Así, según un modo de realización ventajoso
de la invención, el hidrolizado contiene una cantidad de compuestos
de naturaleza protéica que representan entre un 30 y un 90% del
peso total de la materia seca, más particularmente esta cantidad
está comprendida entre un 50 y un 80% del peso total de la materia
seca.
Preferentemente según la invención, el
hidrolizado de proteínas de plantas pertenecientes a la familia de
las crucíferas es un hidrolizado de proteínas fermentadas, es
decir, que éstas se sometieron a una etapa de fermentación.
El agente activo según la invención, o la
composición que lo contiene permitirá aclarar, incluso blanquear,
la piel. Inicialmente la piel puede tener más o menos color o ser
más o menos oscura; este color tiene un origen natural o se debe a
la influencia de factores exteriores, tales como las radiaciones UV
o la edad por ejemplo. Además, el agente activo según la invención,
o la composición que lo contiene, permitirá borrar de manera más o
menos directa las manchas pigmentarias de la piel y/o permitirá
despigmentar los pelos y/o el cabello. Permitirá así aclarar las
zonas hiperpigmentadas, es decir las zonas cutáneas que contienen
una gran cantidad de melanina. Cuando se hable de manchas
pigmentarias de la piel, se hace referencia a todas las
modificaciones de la pigmentación de la piel que se traducen en un
oscurecimiento general o un oscurecimiento localizado, formando así
manchas más o menos oscuras. Estas modificaciones pueden ser de
origen natural o inducidas por diferentes agentes como, por
ejemplo, las radiaciones UV o también los productos químicos. Estos
trastornos de orden pigmentario pueden manifestarse en pecas,
lunares o manchas difusas tales como manchas del embarazo, el
cloasma, así como en otros trastornos hiperpigmentarios como el
lentigo, por ejemplo. Perturbaciones de esta pigmentación, más o
menos importantes, también pueden aparecer naturalmente con el
envejecimiento. Así algunas personas pueden ver aparecer manchas
más o menos oscuras y/o coloradas en la piel, que confieren a la
piel zonas de coloraciones heterogéneas que forman manchas de
senescencia. Más generalmente el hidrolizado según la invención
permite regular la pigmentación cutánea.
El activo según la invención es un agente activo
blanqueador o despigmentante eficaz que actúa, entre otras cosas,
inhibiendo la formación de melanina en los melanocitos. Así, según
otro aspecto, la invención se refiere al uso de un hidrolizado de
proteínas fermentadas de plantas pertenecientes a la familia de las
crucíferas, tal como se define más arriba, con el fin de inhibir
y/o disminuir la actividad de la tirosinasa, y/o inhibir y/o
disminuir la síntesis de melanina.
La invención se refiere al uso de una
composición cosmética y/o a la preparación de una composición
dermatológica que contiene un activo despigmentante con el fin de
obtener una aclaración de la piel o con el fin de tratar las
manchas pigmentarias. La composición según la invención puede ser
una composición cosmética y/o dermatológica y/o farmacéutica.
Preferentemente según la invención, la composición es una
composición cosmética ya que se destina a mejorar el aspecto y las
cualidades cutáneas generales del individuo que la usa.
Más particularmente, esta composición está
adaptada a un uso destinado a blanquear y/o decolorar la piel,
despigmentar los pelos y/o el cabello, o tratar las manchas
pigmentarias de la piel. Preferentemente, la composición según la
invención es una composición cosmética y/o dermatológica adaptada a
la administración por vía tópica cutánea, que comprende un medio
aceptable desde el punto de vista cosmético o dermatológico. Claro
está que la invención se destina a los mamíferos en general y, más
particularmente, a los seres humanos.
La cantidad eficaz de principio activo
corresponde a la cantidad necesaria para obtener el resultado
deseado. Según un modo de realización ventajoso de la invención, el
susodicho hidrolizado de proteínas está presente, en las
composiciones de la invención, en una concentración comprendida
entre unos 0,0001% y 20% y preferentemente en una concentración
comprendida entre unos 0,01 y 10% en peso con respecto al peso
total de la composición final.
Según un modo de realización ventajoso de la
invención, el susodicho hidrolizado se disuelve previamente en uno
o distintos disolventes aceptables desde el punto de vista cosmético
o farmacéutico como el agua, el etanol, el propanol o el
isopropanol, el propilenglicol, el butilenglicol, el
dipropilenglicol, los diglicoles etoxilados o propoxilados o
cualquier mezcla de estos disolventes. Según otro modo de
realización ventajoso de la invención, el susodicho hidrolizado se
disuelve previamente en un vector cosmético o farmacéutico como los
liposomas o se absorbe en polímeros orgánicos en polvo, soportes
minerales como los talcos y bentonitas, y más generalmente se
disuelve en, o se fija a, cualquier vector aceptable del punto de
vista cosmético o farmacéutico.
Cualquiera que sea la forma de la invención, la
composición según la invención puede ingerirse, inyectarse o
aplicarse en la piel (en cualquier zona cutánea del cuerpo), el
cabello, las uñas o las mucosas. Según el modo de administración,
la composición según la invención puede presentarse en cualquier
forma galénica normalmente utilizada. Preferentemente las
composiciones según la presente invención se presentarán en una
forma galénica adaptada a la administración por vía tópica cutánea.
Esto abarca todas las formas cosméticas o dermatológicas. Por lo
tanto dichas composiciones han de contener un medio aceptable desde
el punto de vista cosmético, es decir compatible con la piel, los
pelos o el cabello.
En particular dichas composiciones pueden
presentarse en forma de solución acuosa, hidroalcohólica o
aceitosa; de emulsión aceite en agua, agua en aceite o emulsiones
múltiples; también pueden presentarse en forma de cremas,
suspensiones o también polvos, adaptados a una aplicación en la
piel, las mucosas, los labios y/o el cabello. Estas composiciones
pueden ser más o menos fluidas y tener el aspecto de una crema,
loción, leche, suero, pomada, champú, gel, pasta o espuma. También
pueden presentarse en forma sólida, tal como un stick, o aplicarse
en la piel en forma de aerosol. Pueden utilizarse como producto de
tratamiento y/o producto de maquillaje de la piel.
Estas composiciones comprenden, además,
cualquier aditivo que suela usarse en el campo de aplicación
considerado así como los aditivos necesarios para su formulación,
tales como disolventes, espesantes, diluyentes, antioxidantes,
colorantes, filtros solares, agentes autobronceadores, pigmentos,
cargas, conservantes, perfumes, absorbedores de olor, activos
cosméticos o farmacéuticos, aceites esenciales, vitaminas, ácidos
grasos esenciales, tensioactivos, polímeros filmógenos, etc. En
todo caso el especialista se asegurará de que estos aditivos así
como sus proporciones se elijan como para no perjudicar las
propiedades ventajosas deseadas de la composición según la
invención. Estos aditivos pueden por ejemplo corresponder a entre
un 0,01 y un 20% del peso total de la composición. Cuando la
composición de la invención es una emulsión, la fase grasa puede
representar entre un 5 y un 80% en peso y preferentemente entre un
5 y un 50% en peso con respecto al peso total de la composición.
Los emulsionantes y coemulsionantes utilizados en la composición se
eligen entre los que suelen usarse en el ámbito considerado. Por
ejemplo pueden usarse en una proporción que va de un 0,3 a un 30%
en peso, con respecto al peso total de la composición. Claro está
que el experto en la materia elegirá los eventuales compuestos
adicionales, activos o no activos, y/o su cantidad, de modo que la
correspondiente adición no altere, o no altere sensiblemente, las
propiedades ventajosas de la mezcla.
Las composiciones según la invención encuentran
su aplicación, en particular, como composición cosmética o
farmacéutica para la piel, y también como composición cosmética para
el cabello y/o los pelos. Encuentran una aplicación peculiar a modo
de producto de despigmentación y/o decoloración de la piel y/o los
pelos. La composición elaborada según la invención también puede
ser una composición que permite luchar contra las manchas
pigmentarias de la piel.
Según la invención, a la composición se pueden
añadir, entre otras cosas, distintos agentes activos destinados en
particular a la prevención y/o el tratamiento de los trastornos de
orden pigmentario. Además, la composición según la invención, puede
asociar al hidrolizado de proteínas. tal como se define más arriba,
otros agentes activos que favorezcan su acción. Así, se pueden
añadir agentes activos que tienen una acción queratolítica, es
decir, agentes descamantes que tienen una acción exfoliante tales
como por ejemplo los alfahidroxiácidos y los betahidroxiácidos.
Estos agentes actúan de manera eficaz en los mecanismos de la
pigmentación.
Según otro aspecto, la composición según la
invención puede ser una composición contra el sol, es decir, una
composición que ayuda a la protección contra la radiación del sol.
Así, puede ser ventajoso añadir a la composición según la invención
activos que ayudan a la protección contra el sol, tales como
filtros solares por ejemplo.
Las composiciones objeto de la invención
encuentran su aplicación en un gran número de tratamientos en
particular cosméticos o dermatológicos. Pueden constituir una
composición cosmética, en particular para el tratamiento, la
protección, el desmaquillaje y/o la limpieza de la piel y/o del
cabello, y/o para el maquillaje de la piel, de los labios, de las
pestañas y/o del cuerpo. La composición según la invención también
puede consistir en preparaciones sólidas, que comprenden también
jabones o pastillas de limpieza. La composición también puede
envasarse en forma de composición para aerosol incluyendo también
un agente propulsor a presión.
Según otro aspecto, la presente invención se
refiere a un procedimiento de tratamiento cosmético destinado a
aclarar la piel y/o los pelos. La invención se refiere también a un
procedimiento de tratamiento cosmético destinado a tratar los
trastornos de la pigmentación de la piel. Dichos procedimientos de
tratamiento cosmético de la piel y/o del cabello consisten en
aplicar en la superficie de la piel, los pelos o el cabello, una
cantidad eficaz de un hidrolizado de proteínas de plantas de la
familia de las crucíferas tal como se define más arriba, con el fin
de obtener la acción deseada. Preferentemente, el procedimiento
consiste en aplicar en la superficie de la piel, los pelos y el
cabello, una cantidad eficaz de un hidrolizado de proteínas
fermentadas de plantas de la familia de las crucíferas, tal como se
define más arriba.
Modos de realización específicos de este
procedimiento de tratamiento cosmético resultan también de la
descripción anterior. El procedimiento de tratamiento cosmético de
la invención puede ponerse en práctica, en particular, al aplicar
las composiciones cosméticas tales como se definen más arriba,
según la técnica de uso habitual de dichas composiciones, por
ejemplo: aplicación de cremas, geles, sueros, lociones, leches,
champús o de composiciones contra el sol, en la piel o el cabello,
o también aplicación de pasta dental en las encías.
Aparecerán más claramente otras características
y ventajas de la invención en los ejemplos dados a modo
ilustrativo y no limitativo.
Ejemplo
1
En una primera etapa, se deslipidiza 1 kg de las
semillas de colza por acción de un disolvente orgánico: el hexano.
Tras secado del producto, se obtiene un residuo enriquecido con
proteínas (la torta). A continuación se realiza una etapa de
fermentación.
El medio de cultivo de la fermentación está
constituido:
- -
- por una torta de colza en una concentración de 18 g/l,
- -
- por glucosa en una concentración de 20 g/l,
- -
- por cloruro de sodio en una concentración de 4 g/l,
- -
- por K_{2}HPO_{4} en una concentración de 2 g/l.
Este medio tiene un pH de 6,5. En él se siembran
levaduras del género Rhysopus. El cultivo se efectúa en un
fermentador, con agitación lenta (30 revoluciones por minuto) a
30ºC durante 24 horas. La mezcla se pone después en autoclave
durante veinte minutos a 120ºC y se hidroliza después, por adición
de una enzima: la papaína, a 60ºC durante 4 horas con agitación.
Esta mezcla se calienta después a 80ºC, se centrifuga y se filtra
hasta la obtención de una solución límpida. Después se concentra al
vacío y se filtra de nuevo en filtros de placas y después en un
cartucho esterilizante.
Entonces se obtiene un hidrolizado de color
pardo con una titulación de 30 g/l de compuestos de naturaleza
protéica. Es decir que se obtiene un hidrolizado que contiene una
cantidad de compuestos de naturaleza protéica que representa unos
65% del peso total de la materia seca. Dicho hidrolizado se vuelve a
disolver en dipropilenglicol.
Sin embargo, se puede efectuar una etapa de
extracción de una fracción protéica a partir de la torta,
previamente a la fermentación; esta fracción protéica servirá
después de sustrato para la fermentación. Dicha extracción se
realiza con ayuda de una solución acuosa, básica (con un pH 11) y
en caliente (50ºC), con agitación constante durante una hora. El
medio de extracción se lleva después a un pH de unos 3 o 4, gracias
a una solución ácida, preferentemente gracias a un ácido mineral
(ácido clorhídrico o sulfúrico). Se forma un precipitado de
naturaleza protéica que se recoge por centrifugación y filtración.
Esta mezcla se pone de nuevo en suspensión para servir de sustrato
para la fermentación.
Ejemplo
2
La actividad despigmentante del hidrolizado
según el ejemplo 1 se evidenció en una muestra de piel.
Se toman biopsias de 6 mm de diámetro en
muestras de piel humana. Estas biopsias se mantienen vivas ex
vivo por cultivo en presencia de un medio específico (DMEM 1
g/L, HAMF12, SVF y antibióticos) en insertos colocados en placas
de 6 pozos. Entonces se tratan las biopsias con el activo a una
concentración de 1%, según diferentes condiciones. Para cada una de
las condiciones también se realizan controles, es decir sin la
aplicación de activo.
- -
- Condición A: el activo se aplicó durante 5 días a razón de 2 aplicaciones por día.
- -
- Condición B: se realiza una irradiación de la piel de 100 mJ/cm^{2}, el activo se aplica después, 2 veces en 24 horas.
- -
- Condición C: se realiza un pretratamiento con el activo durante 24 horas (2 aplicaciones), seguido de 4 días de cultivo sin aplicación, se realiza una irradiación de 100 mJ/cm^{2} y el activo se aplica después, 2 veces en 24 horas.
- -
- Condición D: se realiza un pretratamiento con el activo durante 24 horas (2 aplicaciones), seguido de una irradiación de 100 mJ/cm^{2}, el activo se aplica después durante 2 días (2 aplicaciones).
- -
- Condición E: se realiza un pretratamiento con el activo durante 24 horas (2 aplicaciones), seguido de una irradiación de 100 mJ/cm^{2}, el activo se aplica después durante 5 días (2 aplicaciones).
Se realiza histológicamente una evaluación
cuantitativa de la cantidad de melanina presente en la epidermis de
las muestras de piel, con un microscopio óptico, después de una
coloración según el método de Fontana-Masson.
Se colocan las biopsias de piel en la parafina y
se efectúan secciones histológicas de 4 \mum de espesor.
Entonces se coloran estas secciones con la técnica de
Fontana-Masson: las láminas se desparafinan, se
hidratan y se tratan con una solución de amoníaco de plata. Tras
pasar dos minutos por el microondas las láminas se aclaran, se
tratan con sodio tiosulfato, se aclaran de nuevo y se contracoloran
con hematoxilina, antes de deshidratarse y montarse en láminas, lo
que permite la visualización con microscopio óptico de la melanina
presente en la epidermis.
La visualización con microscopio óptico de la
cantidad de melanina permitió distinguir tres clases de
pigmentación de la piel:
(+): Piel muy pigmentada, es decir que presenta
una importante carga de melanina (depósito homogéneo).
(-): Piel bastante pigmentada, es decir que
presenta una moderada carga de melanina (granos difusos de melanina,
depósito no homogéneo).
(- -): Piel poco pigmentada o no
pigmentada.
Los resultados se recopilan en el cuadro a
continuación:
Estos resultados permiten concluir que, en
ausencia de irradiación de los UVB (condición A), el activo
disminuye el índice de melanina en comparación con la muestra de
piel no tratada. Además, la síntesis de melanina, inducida por las
irradiaciones de UVB, se atenúa al aplicar el activo durante 2 a 5
días tras irradiación. Tal efecto es aún más marcado al tratar
previamente las muestras con el activo, antes de la irradiación.
Así, el activo según la invención permite disminuir
significativamente la pigmentación de la piel y permite obtener
aparentemente una inhibición de la síntesis de melanina.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
3
Se efectuó un ensayo in vivo en
voluntarios, con el fin de evidenciar el efecto despigmentante del
hidrolizado según el ejemplo 1. Este ensayo se realizó mediante el
estudio del índice melánico de la superficie cutánea así como
mediante un análisis de las zonas de piel tratadas con el
activo.
Se efectuó un estudio clínico en un grupo de 15
voluntarios de 45 a 76 años de edad. Este estudio se realizó a
doble ciego controlado con placebo, los voluntarios presentaban una
pigmentación no homogénea de la piel (es decir manchas
pigmentarias) debida a la edad y/o a una exposición a los UV. Los
voluntarios aplicaron el activo, formulado a 3% en una composición,
en una zona delimitada de los antebrazos, dosificado a 2
mg/cm^{2}, y el placebo en otra zona. Esta aplicación se realizó
dos veces por día durante 4 semanas.
El efecto despigmentante se midió con una
cuantificación del índice melánico realizado con ayuda de un
instrumento específico: el Mexameter MX18 (Courage & Khazaka).
El estudio comprendió varias visitas de control: una visita antes
del principio del tratamiento (T0) y una visita cada semana durante
4 semanas. Se tomaron fotos en T0 y T4 con una cámara digital
(Minolta dimage 7i). La evolución de la pigmentación cutánea se
evaluó tras la observación clínica y la cuantificación del índice
melánico.
La evolución de la pigmentación se midió por
cuantificación del índice melánico de la piel así como por
procesamiento estadístico de los datos. Los resultados se presentan
en el cuadro a continuación.
El análisis estadístico se realizó gracias al
ensayo no paramétrico de Wilcoxon, para las series emparejadas,
para cada sujeto. El resultado se obtiene según el siguiente
cálculo:
Resultado =
Dif._{A/Un \ o \ Pl} = T8_{A/Un \ o \
Pl}-T0_{A/Un \ o \
Pl}
A = Activo; Un
= No tratado; Pl =
Placebo
Zona de rechazo: en la medida en que el sentido
de la diferencia es previsible, la zona de rechazo será
unilateral. El grado de significatividad es \alpha \leq 5%.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Estos resultados demuestran que la aplicación
del activo según la invención reduce considerablemente el índice
de melanina presente en la piel. Esta disminución se observa en
particular en las zonas hiperpigmentadas y después de 4 semanas de
aplicación del activo, siendo estadísticamente significativa esta
disminución. Se confirmaron estos resultados con un examen clínico:
el 67% de los voluntarios presentó una disminución de la
pigmentación de la zona tratada con el activo, con respecto a la
zona tratada con el placebo. Por otra parte, se notó en el 86% de
los voluntarios una disminución aparente de las manchas
pigmentarias.
En conclusión, se observó que el hidrolizado
según la invención, formulado a 3% en un gel, posee un efecto
despigmentante, es decir, un efecto aclarador de la piel, así como
una verdadera acción en la lucha contra las manchas
pigmentarias.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
4
El principio de este ensayo radica en una
dosificación de la melanina mediante un método espectrométrico.
Se siembran 1.10^{5} células en cajas de
"diámetro 60" que se ponen en cultivo durante 24 horas. Estas
células se tratan después con el extracto según la invención, en
solución de diferentes porcentajes: 1%, 3% y 7% y durante 24
horas.
Las células se recuperan después por
tripsinación. La mitad de dichas células se utiliza pues para la
dosificación de la melanina y la otra mitad para la determinación
del contenido protéico (mediante la técnica de Pierce). Para
realizar la dosificación de la melanina, las células se disuelven
en 1 mL de NaOH-1N/10%-DMSO durante 2 horas a los
80ºC y se centrifugan después durante 10 minutos a 10000 g. La
absorbencia del sobrenadante se lee entonces a 470 nm y se compara
después con la curva de referencia de la melanina. Esta curva de
referencia se prepara con ayuda de la melanina sintética SIGMA, que
tiene concentraciones comprendidas entre 0,05 y 100 \mug/mL, y
con una concentración final de NaOH a 0,2M.
Los resultados se presentan en el cuadro a
continuación. Representan la cantidad de melanina sintetizada,
expresada en pg/\mug de proteínas, de acuerdo con las diferentes
condiciones de estudios.
\vskip1.000000\baselineskip
Estos resultados demuestran que el extracto
según la invención permite disminuir significativamente la cantidad
de melanina presente en los melanocitos, actuando dicho extracto
de manera dosis-dependiente.
La tirosinasa es una enzima clave en el
mecanismo de formación de la melanina. La medida de su actividad
permite determinar la aptitud del activo según la invención para
inhibir el mecanismo de formación de ésta. El principio de este
ensayo radica en una medida del índice de oxidación de un sustrato:
la L-DOPA.
Las células se ponen en cultivo en placas de 6
pozos (con 1.10^{5} células) durante 24 horas. Después éstas se
tratan con el extracto según la invención disuelto a 3% durante 24
horas, 48 horas o 72 horas.
Las células se recuperan por tripsinación, se
lavan 3 veces con PBS frío y se centrifugan durante 5 minutos a
10000 g. Las células se lisan con 300 \muL de tampón sodio
fosfato (0,1 M, pH 7) que contiene 1% de núcleo de tritio
X-100 + 0,1 mM PMSF. Después de una incubación de
30 minutos, el extracto celular se centrifuga a 10000 g durante 10
minutos a 4ºC, entonces se recupera el sobrenadante. El contenido
protéico de cada extracto se determina con la técnica de Pierce. La
L-DOPA se prepara a 2 mg/mL (10 mM) en un tampón
fosfato (0,1 M; pH 7); un volumen de 10 \muL de cada extracto se
coloca en una placa de 96 pozos y se empieza la medida de la
actividad enzimática añadiendo 100 \muL de la solución
L-DOPA a 37ºC, se realizan los pozos
"controlados", que contienen 100 \muL de tampón de lisis. A
la formación del dopacromo le sigue una medida de la absorbencia a
405 nm cada 10 minutos durante 1 hora a 37ºC. Entonces se establece
una curva de absorbencia para cada condición.
La actividad final de la tirosinasa se presenta
en DO/min/g de proteínas de acuerdo con las diferentes condiciones
de estudio realizadas. Los resultados se presentan en el cuadro a
continuación.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Estos resultados permiten deducir que el
extracto según la invención inhibe de manera particularmente eficaz
la actividad de la tirosinasa, enzima clave en el mecanismo de
formación de la melanina.
\newpage
Ejemplo
5
Las cantidades indicadas se dan en porcentaje de
peso.
Los componentes de la fase A y de la fase B se
calientan a una temperatura de 70ºC, luego se emulsiona la fase A
en la fase B. Después de la emulsión se añade el Sepigel y después
el zumo de limón. Después, al situarse la temperatura por debajo de
los 40ºC, se añade la fase D.
La fase A se prepara por mezcla de las
diferentes materias primas que la constituyen, a 30ºC, con
agitación. La fase B se añade a la fase A mezclándola con agitación
por hélice. En el remolino se espolvorea la fase C.
La fase A se prepara a una temperatura de unos
30ºC, el gel así obtenido se deja inflar durante ½ hora. Se añade
después la fase B en frío. La fase C se prepara con agitación en
frío y se añade al gel. La fase D se añade después con
agitación.
Claims (17)
1. Uso de una cantidad eficaz de un hidrolizado
de proteínas de plantas, pertenecientes a la familia de las
crucíferas, como principio activo blanqueador y/o despigmentante,
para la preparación de una composición terapéutica para blanquear
y/o despigmentar.
2. Uso no terapéutico de una cantidad eficaz de
un hidrolizado de proteínas de plantas, pertenecientes a la
familia de las crucíferas, como principio activo blanqueador y/o
despigmentante para blanquear y/despigmentar.
3. Uso según una de las reivindicaciones 1 o 2,
caracterizado porque las proteínas son proteínas fermentadas
de plantas pertenecientes a la familia de las crucíferas.
4. Uso según una de las anteriores
reivindicaciones, caracterizado porque la planta utilizada
de la familia de las crucíferas es la colza (Brassica
napus).
5. Uso según una de las anteriores
reivindicaciones, caracterizado porque el hidrolizado se
obtiene a partir de semillas de colza.
6. Uso según una de las anteriores
reivindicaciones, caracterizado porque, en la etapa de
fermentación, el medio de cultivo se suplementa con azúcares,
aminoácidos y sales minerales.
7. Uso según una cualquiera de las anteriores
reivindicaciones, caracterizado porque el hidrolizado
contiene una cantidad de compuestos de naturaleza protéica que
representa entre un 30 y un 90% del peso total de la materia
seca.
8. Uso según una cualquiera de las anteriores
reivindicaciones, caracterizado porque el hidrolizado
contiene una cantidad de compuestos de naturaleza protéica que
representa entre un 50 y un 80% del peso total de la materia
seca.
9. Uso según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 8, destinándose el hidrolizado o la
composición a despigmentar y/o blanquear y/o aclarar la piel, los
pelos y/o el cabello.
10. Uso según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 8, destinándose el hidrolizado o la
composición a quitar o disminuir las manchas pigmentarias de la
piel.
11. Uso según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 8, destinándose el hidrolizado o la
composición a inhibir y/o disminuir la actividad de la tirosinasa,
y/o a inhibir y/o disminuir la síntesis de melanina de las células
de la piel.
12. Uso según una cualquiera de las anteriores
reivindicaciones, caracterizado porque la composición se
presenta en forma de composición adaptada a la administración por
vía tópica cutánea que comprende un medio aceptable desde el punto
de vista cosmético o farmacéutico.
13. Uso según una cualquiera de las anteriores
reivindicaciones, caracterizado porque el hidrolizado de
proteínas está presente en una cantidad que representa entre un
0,0001% y un 20% del peso total de la composición y preferentemente
en una cantidad que representa entre un 0,01% y un 10% del peso
total de la composición.
14. Uso según una cualquiera de las anteriores
reivindicaciones, caracterizado porque el hidrolizado se
disuelve previamente en uno o distintos disolventes aceptables del
punto de vista cosmético o farmacéutico como el agua, el etanol, el
propanol o el isopropanol, el propilenglicol, el butilenglicol, el
dipropilenglicol, los diglicoles etoxilados o propoxilados o
cualquier mezcla de estos disolventes.
15. Uso según una cualquiera de las anteriores
reivindicaciones, caracterizado porque el hidrolizado se
disuelve previamente en un vector cosmético o farmacéutico como los
liposomas o se adsorbe en polímeros orgánicos en polvo, soportes
minerales como los talcos y bentonitas, y más generalmente se
disuelve en, o se fija a, cualquier vector aceptable del punto de
vista cosmético o farmacéutico.
16. Uso según una cualquiera de las anteriores
reivindicaciones, caracterizado porque la composición se
presenta en forma de solución acuosa, hidroalcohólica o aceitosa o
en forma de emulsión aceite en agua, agua en aceite o emulsiones
múltiples o en forma de cremas, suspensiones o también polvos;
dichas composiciones pueden ser más o menos fluidas o sólidas y
tener el aspecto de una crema, loción, leche suero, pomada, gel,
pasta, espuma o stick.
17. Procedimiento de tratamiento cosmético de la
piel destinado a aclarar la piel y/o los pelos; y/o a tratar los
trastornos de la pigmentación de la piel, caracterizado
porque se aplica en la piel, los pelos o el cabello una composición
cosmética que contiene, en un medio aceptable del punto de vista
cosmético, por lo menos un hidrolizado de proteínas de plantas
pertenecientes a la familia de las crucíferas.
Applications Claiming Priority (2)
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