BR112017018744B1 - Uso de um extrato de fermento, composição cosmética, e, método para o tratamento e/ou cuidado, não terapêutico cosmético da pele - Google Patents

Abstract

extrato de fermento, uso de um extrato de fermento, composição cosmética, e, método cosmético para o tratamento e/ou cuidado cosmético, não terapêutico da pele. um extrato de fermento de uma cepa bacteriana da espécie eupenicillium crustaceum é útil no tratamento e/ou cuidado cosmético da pele, membranas mucosas, cabelo e/ou unhas e usos cosméticos do mesmo.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO

[01] A tecnologia descrita refere-se a um extrato de fermento de uma cepa da espécie Eupenicillium crustaceum que é útil no tratamento e/ou cuidado cosmético da pele, das membranas mucosas, do cabelo e/ou das unhas. Em particular, o extrato de fermento é ativo no alívio ou prevenção dos sintomas do envelhecimento da pele e no clareamento da cor ou despigmentação ou branqueamento da pele.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

[02] O envelhecimento da pele é um processo complexo induzido por fatores cronológicos e ambientais (principalmente radiação UV). Os sinais ou sintomas do envelhecimento da pele incluem a perda de elasticidade e firmeza da pele, o aparecimento de características como rugas e sulcos, olheiras, olhos inchados, bolsas oculares, lentigos actínicos (manchas senis) e pele mosqueada. Os primeiros sinais de envelhecimento da pele são geralmente evidentes no rosto de uma pessoa, especificamente na região ao redor dos olhos. Esses incluem a presença de olheiras (hiperpigmentação periorbital), olhos inchados (inchaço periorbital), bolsas oculares (bolsas palpebrais infraorbitais) e rugas (por exemplo, rugas periorbitais). A presença dos sinais de envelhecimento na pele de uma pessoa, especialmente em seu rosto, é esteticamente indesejável. É desejada uma pele mais jovem, ou seja, pele com sintomas reduzidos de envelhecimento.

[03] A pele, as membranas mucosas, os cabelos e/ou as unhas proveem uma barreira física entre um organismo e seu ambiente. A pele é composta de duas camadas principais, a epiderme e a derme. A derme é a camada mais espessa (com uma espessura aproximada de 90% da espessura da pele) e contém colágeno, elastina, várias estruturas diferenciadas, como vasos sanguíneos e muitos tipos de células, como fibroblastos (que sintetizam colágeno e elastina). A epiderme é composta de queratinócitos, melanócitos e células de Langerhans, com a principal população celular composta por queratinócitos.

[04] O colágeno é a proteína mais abundante no tecido conjuntivo da pele e desempenha um papel estrutural importante na pele. Ele forma uma estrutura tipo malha no tecido conjuntivo da pele que ajuda a suportar novas células à medida que elas crescem, provendo a flexibilidade necessária. Existe síntese contínua de colágeno e degradação na pele, e o equilíbrio entre elas determina tanto a resistência à tração quanto a elasticidade da pele. A elastina é uma proteína no tecido conjuntivo que é elástica. A elastina ajuda a manter a pele flexível, mas firme, provendo uma reação de retorno se a pele é puxada. O processo de envelhecimento é acompanhado de degeneração e lise das fibras de colágeno e fibras elásticas na pele. O desaparecimento gradual das fibras elásticas na pele resulta na perda progressiva da elasticidade da pele. A degeneração e a lise das fibras de colágeno resultam na perda de resistência da pele (firmeza). Outra consequência da lise das fibras conjuntivas na derme é a redução gradual da espessura da derme como um todo, particularmente através da redução das fibras de colágeno. [Bonta M, Daina L, Mufiu G. The process of ageing reflected by histological changes in the skin. Rom J Morphol Embryol. 2013;54(3 Suppl):797-804]

[05] Outro fator no envelhecimento da pele é o aparecimento de Produtos Finais de Glicosilação Avançada (AGEs). Os AGEs são obtidos a partir de uma reação chamada glicação envolvendo açúcar e proteína. A presença desses produtos na pele altera as propriedades físicas, biomecânicas (a pele enrijece e perde elasticidade) e biológicas (modulação da síntese, degradação da matriz por células). Os AGEs podem modular a expressão de proteínas da matriz extracelular (ECM) como colágeno e também podem modificar a expressão e síntese das enzimas responsáveis pela degradação (elastase e enzimas metaloproteinases) [Pageon H. Reaction of glycation and human skin: the effects on the skin and its components, reconstructed skin as a model. Pathol Biol (Paris). 2010 Jun;58(3):226-31]. O resultado é elasticidade e espessura da pele reduzidas. Na pele, a glicação do colágeno tipo I tem sido associada ao desenvolvimento da opacidade da pele e à diminuição da elasticidade da pele.

[06] Como resultado da elasticidade, firmeza e espessura reduzidas, podem aparecer rugas na pele, como as que aparecem ao redor do olho. Existe a necessidade de prover um agente ativo que possa ajudar a prevenir a degradação do colágeno e/ou estimular a produção de colágeno na pele. Existe a necessidade de prover um agente ativo que possa ajudar a prevenir a degradação da elastina e/ou estimular a produção de elastina na pele. Existe a necessidade de prover um agente ativo que possa inibir a formação de AGEs na pele. Tais agentes ativos podem ser úteis na pele do tratamento para prevenir ou aliviar os sinais de envelhecimento.

[07] O processo de envelhecimento também afeta a vasculatura na pele. As alterações vasculares incluem o afinamento das paredes capilares e a desaceleração da microcirculação. A alteração das paredes dos vasos sanguíneos provoca alterações na permeabilidade vascular e pode resultar no aparecimento de edema interfibrilar [Bonta M, Daina L, Muliu G. The process of ageing reflected by histological changes in the skin. Rom J Morphol Embryol. 2013;54(3 Suppl):797-804]. Assim, um dos sinais do envelhecimento é o acúmulo de fluido intersticial ao redor e sob os olhos, por exemplo, olhos inchados e bolsas oculares (também conhecidos como bolsas sob os olhos). Estes são esteticamente desagradáveis e é desejável que o inchaço da pele/volume das bolsas seja reduzido. Existe a necessidade de agentes ativos capazes de diminuir a permeabilidade vascular implicada no edema formado em olhos inchados e bolsas oculares.

[08] À medida que a pele envelhece, ela fica mais fina. Por exemplo, Bonta et al. observaram que a diminuição da eficiência vascular, especialmente na derme superficial, produz uma série de efeitos importantes na epiderme, adaptando-a à eficiência da vasculatura, nomeadamente reduzindo o número de camadas celulares, isto é, reduzindo a espessura [Bonta M, Daina L, Mufiu G. The process of ageing reflected by histological changes in the skin. Rom J Morphol Embryol. 2013;54(3 Suppl):797-804]. Essa finura pode resultar em vasos sanguíneos subjacentes e cromóforos (como bilirrubina e melanina) tornando-se mais visíveis. Essa é uma das causas das olheiras, um problema cosmético muito comum que afeta a maioria das pessoas [Ranu H, Thng S, Goh BK, Burger A, Goh CL. Periorbital hyperpigmentation in Asians: an epidemiologic study and a proposed classification. Dermatol Surg. 2011 Sep;37(9):1297-303]. Acredita- se que este problema seja exacerbado com os vasos sanguíneos vazando com o envelhecimento e, como resultado, a bilirrubina, um produto de decomposição de sangue, acumulando-se ao redor dos olhos. Especificamente, a bilirrubina é um produto da decomposição do metabolismo do heme. O heme é uma porfirina contendo ferro encontrada em hemoglobina, mioglobina e várias enzimas das quais os citocromos hepáticos são os representantes mais importantes. Aproximadamente 80% da produção diária de bilirrubina deriva de glóbulos vermelhos senescentes. Esses são divididos e o ferro é removido da molécula de heme e o anel de porfirina restante é oxidado e clivado em um único local para formar a estrutura da cadeia de tetrapirrol da biliverdina. Uma redução adicional da biliverdina resulta na formação de bilirrubina responsável pela coloração que aparece nas pálpebras infraorbitais como olheira [Stillman AE. Jaundice. Clinical Methods: The History, Physical, and Laboratory Examinations. 3a edição. Boston: Butterworths; 1990. Capítulo 87]. A olheira é um complexo problema cosmético facial, com múltiplas causas, incluindo a deposição de melanina, estase venosa com deposição de hemossiderina e problemas estruturais orbitais. Os depósitos de melanina na derme podem ser congênitos ou secundários a fatores ambientais, como exposição excessiva ao sol, endógenos ou uso de estrogênios exógenos, gravidez e aleitamento materno. Existe a necessidade de prover um agente ativo que possa degradar a bilirrubina e/ou reduzir a quantidade de melanina na pele, dois dos pigmentos responsáveis pela pigmentação em olheiras.

[09] Os sinais de envelhecimento, como rugas, olheiras, olhos inchados, bolsas oculares podem ser exacerbados pela fadiga, estresse, uso de drogas e álcool, entre outros fatores.

[10] A modificação da cor da pele, incluindo o clareamento da pele, por exemplo, das olheiras, bem como a eliminação ou atenuação das manchas senis, é um efeito cosmético desejado por muitas pessoas. Muitas vezes, o objetivo é alcançar uma cor uniforme da pele. Os produtos cosméticos de despigmentação são usados para reduzir a hipercromia e, tipicamente, agentes de despigmentação atuam inibindo a via de biossíntese de melanina.

[11] Melaninas são pigmentos complexos que proveem cor e fotoproteção contra radiações ionizantes à pele, aos cabelos e olhos de mamíferos. A melanogênese é um processo fisiológico resultante da síntese dos pigmentos de melanina e caracteriza-se, em resumo, pelo processo de produção e distribuição subsequente de melanina por melanócitos. Os melanócitos de mamíferos produzem dois tipos quimicamente distintos de pigmentos de melanina, a eumelanina preta a marrom e a feomelanina amarela a avermelhada, por diferentes enzimas em organelas complexas chamadas melanossomas. Tanto a eumelanina quanto a feomelanina derivam do precursor comum dopaquinona que é formada por tirosinase (TYR). A tirosinase também é chamada de polifenol oxidase e é uma enzima multifuncional contendo cobre. É a enzima chave na primeira etapa da cascata de melanogênese, catalisando a conversão de L-tirosina em L-dopaquinona (Ito S., Wakamatsu K., and Ozeki, H. Chemical analysis of melanins and its application to the study of the regulation of melanogenesis. Pigment Cell Res. 2000: 13 Suppl. 8. 103-9). Além da tirosinase, duas proteínas relacionadas, denominadas proteínas relacionadas à tirosinase (TRPs), demonstraram que regulam a formação de eumelanina. TRP-1 (proteína relacionada à tirosinase 1) ou DHICA (ácido 5,6-di-hidroxi-indol-2-carboxílico oxidase) e TRP-2 (proteína relacionada à tirosinase 2), também conhecida como dopacromo tautomerase (Hearing. V. J. The melanosome: the perfect model for cellular response to the environment Pigment Cell Res. 2000; 13 Suppl. 8, 23-4). A formação de melanina também se origina na oxidação da tirosina, pela enzima tirosinase, à di-hidroxifenilalanina (DOPA) dentro dos melanócitos.

[12] Os melanossomas são organelas relacionados ao lisossoma que têm a capacidade única de produzir pigmento de melanina e que progridem através de quatro etapas morfológicas sequenciais à medida que amadurecem (estágio I, II, III e IV). Os melanossomas do estágio I são vesículas redondas, ligadas à membrana e elétron-lucentes que são geralmente encontradas na área perinuclear. A transição para os melanossomas do estágio II envolve o alongamento da vesícula e o aparecimento dentro de estruturas fibrilares distintas. A produção dessas fibras internas da matriz e a maturação dos melanossomas dos Estágios I a II dependem da presença de uma proteína estrutural denominada Pmel17 (também conhecida como gp100 ou SILV). Pouco depois da sua entrega aos melanossomas do estágio I, a Pmel17 é dividida em vários fragmentos, que formam a matriz fibrilar da organela. Em células pigmentadas, a melanina é depositada sobre essas fibras, resultando em uma matriz interna progressivamente pigmentada, momento em que as organelas são denominadas melanossomas do Estágio III. Em tecidos altamente pigmentados, a síntese e a deposição de melanina continuam até pouco ou nenhuma estrutura interna ser visível, momento em que são denominados melanossomas do estágio IV. Várias proteínas foram identificadas como proteínas específicas do melanossoma (Tyr, Trp1, Trp2, MART-1, Pmel17, GPNMB, etc.). MART-1, antígeno associado ao melanoma reconhecido pela proteína das células T (também conhecido como Melan-A), uma proteína específica de melanossoma, não tem atividade enzimática detectável, é altamente enriquecido nos melanossomas iniciais (melanossomas do estágio I e/ou II) e forma um complexo com Pmel17 e afeta sua expressão, estabilidade, tráfico e o processamento que é necessário para a estrutura e maturação do melanossoma e, portanto, desempenha um papel importante na regulação da pigmentação de mamíferos (Hoashi T, Watabe H, Muller J, Yamaguchi Y, Vieira WD, Hearing VJ. MART-1 is required for the function of the melanosomal matrix protein PMEL17/GP100 and the maturation of melanosomes. J Biol Chem. 2005 Apr 8;280(14):14006-16. Epub 2005 Jan 28.) A GPNMB (proteína de melanoma não-metastática de glicoproteína (transmembranar) b), uma proteína transmembranar de tipo I altamente glicosilada, exibe uma alta similaridade com Pmel17. A GPNMB contém vários domínios relacionados com suas funções nos melanócitos. Foi confirmado que o motivo da arginina-glicina- aspartato (RGD) da GPNMB pode se unir às integrinas para regular a adesão de melanócitos com queratinócitos, indicando que está envolvido na transferência de melanina. Como uma importante proteína estrutural de melanossomas, a GPNMB provou estar presente em todos os estágios (I-IV) dos melanossomas e é especialmente enriquecida em estágios maduros. A deleção de GPNMB em melanócitos atenuou acentuadamente a formação de melanossomas, indicando um papel crítico na síntese de melanossomas (Zhang P, Liu W, Zhu C, Yuan X, Li D, Gu W, Ma H, Xie X, Gao T. Silencing of GPNMB by siRNA inhibits the formation of melanosomes in melanocytes in a MITF-independent fashion. PLoS One. 2012;7(8):e42955.)

[13] Após a produção, a melanina, dentro dos melanossomas, é transferida para os queratinócitos adjacentes através de dendritos presentes nos melanócitos, onde deve ser transportada e degradada. Essa transferência de melanina pode ocorrer através de três mecanismos diferentes: Processo de citofagocitose do final dendrítico do melanócito pelo queratinócito; migração direta de melanossomas do citoplasma para o queratinócito e; liberação dos melanossomas no espaço extracelular e sua incorporação aos queratinócitos. Assim, a pigmentação da pele depende do número, da natureza química da melanina e do conteúdo (a atividade da tirosinase) e da distribuição de melanossomas produzidos e transferidos por cada melanócito para um conjunto de queratinócitos que a circundam.

[14] O aumento da produção de melanina devido à estimulação direta ou indireta é uma reação defensiva da pele, a fim de proteger contra a agressão solar. Após a irradiação UV, os melanossomas se reagrupam em torno do núcleo para proteger o material genético da célula e, assim, além de promover a coloração da pele e do cabelo, a melanina promove a fotoproteção, atuando como filtro solar, difratando ou refletindo a radiação solar. O complexo melanócito-queratinócito responde rapidamente a uma ampla gama de estímulos ambientais, muitas vezes de maneiras parácrinas e/ou autócrinas. Assim, os melanócitos respondem a UV-R, à proteína de sinalização agouti, ao hormônio estimulante de melanócitos (MSH), às endotelinas, aos fatores de crescimento, às citocinas, etc. Após a exposição a UV-R, os melanócitos aumentam a expressão de proopiomelanocortina (POMC, o precursor da MSH) e seu receptor de melanocortina 1 (MC1-R), TYR e TYRP1, proteína quinase C (PKC) e outros fatores de sinalização. Por outro lado, sabe-se que o UV estimula a produção de endotelina-1 (ET-1) e POMC por queratinócitos e que esses fatores podem então atuar de maneira parácrina para estimular a função dos melanócitos. Além dos queratinócitos, os fibroblastos e possivelmente outras células da pele produzem citocinas, fatores de crescimento e mediadores inflamatórios que podem aumentar a produção de melanina e/ou estimular a transferência de melanina para queratinócitos por melanócitos. Os fatores de crescimento de melanócitos afetam não apenas o crescimento e pigmentação dos melanócitos, mas também seu formato, dendricidade, adesão às proteínas da matriz e mobilidade.

[15] α-MSH, ACTH, fator básico de crescimento de fibroblastos (bFGF), fator de crescimento nervoso (NGF), endotelinas, fator estimulante de colônias de granulócitos e macrófagos (GM-CSF), fator de aço, fator inibidor de leucemia (LIF) e fator de crescimento de hepatócitos (HGF) são fatores derivados de queratinócitos que se pensa estar envolvidos na regulação da proliferação e/ou diferenciação de melanócitos, alguns que atuam através de vias de sinalização mediadas pelo receptor. Demonstrou-se que, na epiderme humana, α-MSH e ACTH são produzidos e liberados por queratinócitos e estão envolvidos na regulação da melanogênese e/ou na formação de dendritos de melanócitos. α-MSH e ACTH se ligam a um receptor específico de melanócitos, MC1-R, que ativa a adenilato ciclase através da proteína G, que então eleva cAMP a partir de adenosina trifosfato. O AMP cíclico exerce o seu efeito em parte através da proteína quinase A (PKA), que fosforila e ativa a proteína de ligação ao elemento de resposta de AMPc (CREB) que se liga ao elemento de resposta de AMPc (CRE) presente no promotor M do fator de transcrição associado à microftalmia (MITF). O aumento na expressão de MITF-M induz a regulação ascendente de TYR, TYRP1 e DCT, o que leva à síntese de melanina.

[16] A hiperpigmentação é uma desordem causada pela produção exagerada de melanina. Fatores como exposição solar excessiva, envelhecimento, alterações hormonais, inflamação, alergias, entre outros, podem causar desequilíbrio no processo de produção e distribuição de melanina, resultando em manchas cutâneas. Os lentigos actínicos (também conhecidos como lentigo senil, manchas solares, hepáticas ou da idade) são máculas pigmentadas circunscritas, que geralmente são marrom claro, mas variam em grau de cor para preto. Os lentigos actínicos são normalmente encontrados em áreas expostas aos raios UV do corpo (face, dorso da mão, antebraço extensor, parte superior das costas e colo). Eles podem variar em qualquer lugar em tamanho de 1 mm até alguns centímetros de diâmetro e, em áreas de pele severamente danificadas pelo sol, podem se unir em lesões ainda maiores. Há um desejo de prover ativos cosméticos que podem clarear a cor da pele hiperpigmentada, como lentigos actínicos (manchas senis).

[17] O mecanismo molecular atualmente proposto para o aparecimento de lentigos actínicos envolve a estimulação de duas cascatas epidérmicas, consistindo em ET-1/ETBR (iniciado pela ligação de ET-1 ao seu receptor, ETBR) e SCF/c-kit (iniciado pela ligação do fator de células- tronco ao seu receptor c-Kit) e a conversação entre esses dois após a exposição a UV. A exposição à radiação UV induz um aumento na produção de ET-1 por queratinócitos e sua secreção estimula os melanócitos para produzir melanina. O potencial dos queratinócitos localizados na epiderme lesional SL para produzir ET-1 é significativamente maior do que nos controles normais perilesionais, e também há uma expressão acentuada dos transcritos ETBR. O aumento da produção e localização do ET-1 foi acompanhado de quantidades aumentadas de tirosinase em melanócitos. Separadamente, SCF (também produzido por queratinócitos) se liga ao receptor c-KIT em melanócitos. A epiderme lesional de lentigos actínicos expressa níveis aumentados de transcritos e proteínas de ARNm de SCF em comparação com controles não lesionais. [Costin GE, Hearing VJ. Human skin pigmentation: melanocytes modulate skin color in response to stress. FASEB J. 2007 Apr;21(4):976-94]

[18] No entanto, outras cascatas na pele também podem contribuir para a hiperpigmentação observada em lentigos actínicos. A via de sinalização de Wnt, que desencadeia a diferenciação de células-tronco de melanócitos, em lesões de lentigos actínicos, está implicada na diferenciação acelerada de células-tronco de melanócitos envolvidas na formação de SLs. A via de sinalização Wnt está intimamente relacionada com a biologia dos melanócitos. Essa via de sinalização também é importante para células-tronco de melanócitos para desencadear a diferenciação em melanócitos foliculares e melanócitos epidérmicos. O inibidor da via de sinalização WNT da proteína dickkopf 1 (DKK1), um inibidor da via de sinalização Wnt, impediu a melanogênese e diminuiu a densidade dos melanócitos. DKK1 suprime a função e o crescimento dos melanócitos através da regulação do fator de transcrição associado à microftalmia (MITF) e b-catenina. [Yamaguchi Y, Morita A, Maeda A, Hearing VJ. Regulation of skin pigmentation and thickness by Dickkopf 1 (DKK1). J Investig Dermatol Symp Proc. 2009 Aug;14(1):73-5.] [Yamada T, Hasegawa S, Inoue Y, Date Y, Arima M, Yagami A, Iwata Y, Takahashi M, Yamamoto N, Mizutani H, Nakata S, Matsunaga K, Akamatsu H.Accelerated differentiation of melanocyte stem cells contributes to the formation of hyperpigmented maculae. Exp Dermatol. 2014 Sep;23(9):652-8.]

[19] Assim, um agente ativo que pode inibir uma via de biossíntese de melanina ou agir diretamente sobre ela pode ter um efeito de clareamento ou despigmentação na pele, como um agente ativo que pode inibir a atividade da tirosinase, inibir a produção de melanina em melanócitos ou afetar a expressão dos genes envolvidos no processo melanogênico, pode atuar como agente de despigmentação. Existe a necessidade de um novo agente ativo eficaz em ter um efeito de clareamento, branqueamento ou despigmentação na pele.

[20] A presente invenção pretende resolver alguns ou todos os problemas identificados acima e atender algumas ou todas as necessidades identificadas acima. SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[21] Em um primeiro aspecto, a invenção refere-se a um extrato de fermento de uma cepa da espécie Eupenicillium crustaceum. Verificou-se que um extrato de fermento de uma cepa da espécie Eupenicillium crustaceum é particularmente eficaz no tratamento e/ou cuidado cosmético da pele, das membranas mucosas, do cabelo e/ou das unhas.

[22] No contexto desta invenção, o tratamento e/ou cuidado cosmético inclui: a despigmentação ou o branqueamento ou o clareamento da cor da pele, das membranas mucosas, do cabelo e/ou das unhas; a despigmentação ou o branqueamento ou o clareamento da cor das manchas senis; a despigmentação ou o branqueamento ou o clareamento da cor da pele das olheiras; a manutenção ou melhoria da luminosidade da pele; o alívio ou a prevenção dos sintomas do envelhecimento da pele; tratamento de rugas na pele, como rugas periorbitais; tratamento de olheiras; tratamento de olhos inchados; tratamento de bolsas oculares; a suavização ou a redução das rugas da pele; a redução do volume de um olho inchado ou de bolsas oculares; a manutenção ou melhoria da elasticidade da pele; a manutenção ou melhoria da resistência da pele, firmeza ou resistência à tração.

[23] Surpreendentemente, os inventores verificaram que o extrato de fermento de uma cepa da espécie Eupenicillium crustaceum é eficaz na suavização de rugas da pele e na redução do volume de olhos inchados ou bolsas oculares. Os inventores também verificaram que o extrato de fermento de uma cepa da espécie Eupenicillium crustaceum é capaz de promover a síntese de colágeno e elastina, que formam o colágeno e as fibras elásticas respectivamente, podem inibir as enzimas responsáveis pela degradação do colágeno e da elastina e podem inibir a glicação do colágeno. Além disso, verificaram que o extrato de fermento de uma cepa da espécie Eupenicillium crustaceum é capaz de reduzir a permeabilidade vascular implicada no edema formado em olhos inchados e bolsas oculares. Em uma modalidade, o tratamento e/ou cuidado cosmético inclui o clareamento da cor, branqueamento ou despigmentação da pele, das membranas mucosas, do cabelo e/ou das unhas. Surpreendentemente, os inventores verificaram que o extrato de fermento da invenção é particularmente eficaz no clareamento da cor ou na despigmentação da pele hiperpigmentada, como manchas senis e de olheiras. Os inventores verificaram que o extrato de fermento de uma cepa da espécie Eupenicillium crustaceum é capaz de inibir a atividade da tirosinase, inibir a produção de melanina em melanócitos e afetar a expressão de genes envolvidos no processo melanogênico e, portanto, pode atuar como despigmentação/branqueamento/clareamento da pele do agente de cor. Além disso, eles verificaram que esse efeito é mais pronunciado em pele hiperpigmentada, por exemplo, manchas senis. Eles verificaram que o extrato de fermento de uma cepa da espécie Eupenicillium crustaceum é capaz de reduzir a concentração de bilirrubina e melanina, dois dos pigmentos responsáveis pela pigmentação escura na pele de círculos escuros ao redor dos olhos.

[24] Em um segundo aspecto, a invenção provê o uso de um extrato de fermento de uma cepa da espécie Eupenicillium crustaceum para o tratamento e/ou cuidado cosmético da pele, das membranas mucosas, do cabelo e/ou das unhas.

[25] Em um terceiro aspecto, a invenção provê uma composição cosmética compreendendo uma quantidade cosmeticamente eficaz de um extrato de fermento de uma cepa da espécie Eupenicillium crustaceum.

[26] Em um quarto aspecto, a invenção provê o uso da dita composição no tratamento e/ou cuidado cosmético da pele, das membranas mucosas, do cabelo e/ou das unhas.

[27] Em um quinto aspecto, a invenção provê métodos cosméticos para tratar a pele compreendendo a administração tópica de um extrato de fermento a partir de uma cepa da espécie Eupenicillium crustaceum ou composições compreendendo a mesma. DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

[28] As modalidades preferidas tal como apresentadas abaixo são aplicáveis a todos os aspectos da invenção mencionados acima. Definições

[29] No contexto desta invenção, entende-se por “pele” as camadas que a compreendem, desde a camada mais superior ou estrato córneo até à camada mais inferior ou hipoderme, ambas inclusive. Essas camadas são compostas por diferentes tipos de células tais como queratinócitos, fibroblastos, melanócitos e/ou adipócitos, entre outros. No contexto desta invenção, o termo “pele” inclui o couro cabeludo. O termo “pele” inclui a pele humana.

[30] O termo “tratamento”, tal como usado no contexto deste relatório descritivo quando não é acompanhado pelas qualificações “cosmético” ou “não terapêutico”, significa a administração de um composto de acordo com a invenção para aliviar ou curar uma doença ou distúrbio ou reduzir ou eliminar um ou mais sintomas associados à doença ou ao distúrbio, ou aliviar ou eliminar as consequências fisiológicas da doença ou do distúrbio.

[31] Quando o termo “tratamento” ou “cuidado” é acompanhado pela qualificação “cosmético”, isso significa que o tratamento ou o cuidado é não terapêutico e tem como objetivo melhorar a aparência estética da pele. Isso pode ser através da melhoria das propriedades da pele, tais como, mas não restrito ao nível de hidratação, elasticidade, firmeza, brilho, tom ou textura, propriedades que afetam a aparência estética da pele. O termo “cuidado” no contexto deste relatório descritivo refere-se à manutenção de propriedades da pele. As propriedades da pele estão sujeitas a melhorias e manutenção através de tratamento e/ou cuidado cosmético da pele tanto em indivíduos saudáveis como também nos que apresentam doenças e/ou distúrbios da pele e/ou das membranas mucosas, tais como e não restritas a úlceras e lesões na pele, psoríase, dermatite, acne ou rosácea, entre outros.

[32] O termo “prevenção”, tal como usado nesta invenção, refere-se à capacidade do ativo da invenção de prevenir, retardar ou dificultar o aparecimento ou o desenvolvimento de uma doença ou distúrbio ou propriedade/característica da pele antes do seu aparecimento.

[33] No contexto desta invenção, o termo “envelhecimento” refere- se às mudanças experimentadas pela pele com a idade (cronoenvelhecimento) ou pela exposição ao sol (fotoenvelhecimento) ou a agentes ambientais como o fumo do tabaco, condições climáticas extremas de frio, calor ou vento, contaminantes químicos ou poluentes e inclui todas as mudanças visíveis e/ou perceptíveis externas através do toque, tais como e não restritas ao desenvolvimento de descontinuidades na pele tais como rugas, linhas finas, sulcos, irregularidades ou rugosidade, aumento do tamanho dos poros, perda de elasticidade, perda de firmeza, perda de lisura, perda da capacidade de recuperação da deformação, flacidez da pele, como bochechas flácidas, o aparecimento de bolsas sob os olhos ou o aparecimento de um queixo duplo, entre outros, mudanças da cor da pele, como marcas, vermelhidão, bolsas sob os olhos ou o aparecimento de áreas hiperpigmentadas, tais como manchas senis ou sardas entre outros, diferenciação anômala, hiperqueratinização, elastose, queratose, perda de cabelo, pele com aparência de casca de laranja, perda de estrutura de colágeno e outras alterações histológicas do estrato córneo, da derme, da epiderme, do sistema vascular (por exemplo o aparecimento de aranhas vasculares ou telangiectasias) ou desses tecidos próximos à pele, entre outros. O termo “fotoenvelhecimento” agrupa o conjunto de processos devido à exposição prolongada da pele à radiação ultravioleta que resulta no envelhecimento prematuro da pele e apresenta as mesmas características físicas que o envelhecimento, tais como, e não restritas a moleza, flacidez, mudanças na cor ou irregularidades na pigmentação, queratinização anormal e/ou excessiva. As alterações da pele devido ao envelhecimento (por exemplo, cronoenvelhecimento, fotoenvelhecimento e/ou envelhecimento ambiental) são também chamados aqui de sintomas ou sinais de envelhecimento da pele.

[34] Em um primeiro aspecto, a presente invenção refere-se a um extrato de fermento de uma cepa da espécie Eupenicillium crustaceum que é útil no tratamento e/ou cuidado cosmético da pele, das membranas mucosas, do cabelo e/ou das unhas. Os inventores encontraram um novo ingrediente cosmético; um extrato de fermento derivado de uma cepa da espécie Eupenicillium crustaceum. Vantajosamente, esse novo ativo cosmético é derivado de recursos naturais e é surpreendentemente eficaz no tratamento e/ou cuidado cosmético da pele, das membranas mucosas, do cabelo e/ou das unhas. Em particular, é eficaz no alívio ou na prevenção dos sinais de envelhecimento da pele. Além disso, é eficaz no clareamento, branqueamento ou na despigmentação da pele, das membranas mucosas, do cabelo e/ou das unhas.

[35] O extrato de fermento de uma cepa da espécie Eupenicillium crustaceum usada na invenção é o produto de fermentação de uma cepa da espécie Eupenicillium crustaceum. O extrato de fermento é um extrato de uma cepa da espécie Eupenicillium crustaceum que foi submetida a um processo de fermentação e pode ser um extrato das células da espécie Eupenicillium crustaceum que foram separadas de um caldo de fermentação ou pode ser um extrato do próprio caldo de fermentação, que ainda contém as células da espécie Eupenicillium crustaceum. É aqui chamado de extrato de fermento ou simplesmente de extrato.

[36] O extrato de fermento pode ser obtido através da fermentação de uma cepa da espécie Eupenicillium crustaceum em um meio de cultura aquoso adequado. O caldo de fermentação é convencionalmente agitado e aerado para permitir a síntese e a secreção do produto desejado para o meio de cultura e isto é seguido pelo isolamento e purificação de um extrato de fermento. A fermentação pode ser realizada em um meio agitado e aerado a uma temperatura entre 15°C e 40°C, tipicamente a 25°C, com o meio com um pH entre 5 e 9, tipicamente em torno de 7,5, ajustado se necessário durante a fermentação. A duração da fermentação é entre 2 a 10 dias, em uma modalidade entre 3 a 8 dias, em outra modalidade, entre 4 e 7 dias.

[37] O método de isolamento e purificação do extrato de fermento do caldo de fermentação pode ser realizado pelos métodos conhecidos pelos versados na técnica, tais como centrifugação, ruptura e extração. Por exemplo, em uma primeira etapa, a centrifugação pode ser usada para separar as células da cepa da espécie Eupenicillium crustaceum do caldo de cultura; em uma segunda etapa, a ruptura pode ser usada para liberar os compostos intracelulares; e em uma terceira etapa, uma extração dos compostos intracelulares pode ser realizada para obter o extrato de fermento. O extrato incluirá aqueles compostos intracelulares que são solúveis no solvente de extração. O extrato de fermento pode ser obtido simplesmente por extração do caldo de fermentação, isto é, sem etapas de centrifugação e ruptura. No entanto, é usada preferivelmente uma etapa de ruptura para maximizar o rendimento do produto desejado.

[38] Na fermentação da cepa da espécie Eupenicillium crustaceum um meio de cultura contendo açúcares exógenos, tais como e não restritos a galactose, glicose, manose, manitol, amigdalina, celobiose, maltose, amido, glicogênio, lactose, misturas dos mesmos e/ou extratos contendo misturas desses açúcares podem ser usados como fonte de carbono. Em uma modalidade, pode ser provido um suprimento exógeno de manitol de 2 a 40 g/L, ou de 3 a 10 g/L.

[39] O meio de cultura pode compreender fontes adicionais de nitrogênio ou de carbono, tais como extratos de leveduras, extratos de malte ou peptonas, com concentrações de cada um desses componentes de 0,1 a 20 g/L ou de 0,5 a 10 g/L.

[40] O meio de cultura pode compreender sais marinhos. Os sais marinhos são sais minerais a uma concentração entre 5 e 40 g/L, ou entre 25 e 35 g/L. Em uma modalidade, adicional ou alternativamente aos sais marinhos, sais minerais também são providos para o meio de cultura de fermentação. Esses sais são selecionados entre os sais que proveem os íons Na+, K+, NH4+, 2+ 2+ 3- 2- - - - 2- - Ca , Mg , PO4 , SO4 , Cl , F , I , CO3 , NO3 , citratos, ou elementos vestigiais tais como Cu, Mn, Mo, Fe, Sr, B, Br, Si, Al, Li, e Zn.

[41] A etapa de extração é realizada usando um solvente tal como isopropanol. Podem ser usados outros solventes tais como etanol, acetona e acetato de etila.

[42] O extrato de fermento da cepa da espécie Eupenicillium crustaceum contém tipicamente peptídeos, aminoácidos livres, carboidratos e lipídios. Em uma modalidade, o extrato de fermento compreende porcentagens relativas de espécies de: 31 a 79% de peptídeos, 1 a 8% de aminoácidos livres, 10 a 27% de carboidratos e 15 a 40% de lipídios, com a condição de que a soma das porcentagens não exceda 100%. Em uma outra modalidade, o extrato de fermento mostra porcentagens relativas de espécies de: 35 a 73% de peptídeos, 2 a 7% de aminoácidos livres, 12 a 25% de carboidratos e 17 a 37% de lipídios, com a condição de que a soma das porcentagens não exceda 100%. Em uma outra modalidade, o extrato de fermento mostra porcentagens relativas de espécies de: 39,4 a 65,6% de peptídeos, 2,2 a 6,4% de aminoácidos livres, 13,3 a 22% de carboidratos e 18,8 a 32,8% de lipídios, com a condição de que a soma das porcentagens não exceda 100%. Em uma outra modalidade, o extrato de fermento mostra porcentagens relativas de espécies de: 39 a 46% de peptídeos, 3 a 7% de aminoácidos livres, 21 a 22% de carboidratos e 29 a 33% de lipídios, com a condição de que a soma das porcentagens não exceda 100%. Essas porcentagens são porcentagens em peso.

[43] Tipicamente, o extrato de fermento tem um peso molecular menor que 3.400 Da. Isso é medido por análise cromatográfica (HPLC) com uma coluna de exclusão de tamanho TSK gel G2000SWXL, nas condições detalhadas no Exemplo 2. A coluna de exclusão de tamanho tem um diâmetro interno de 7,8 mm, um comprimento de 30,0 cm, um tamanho de partícula de 5 mm e um tamanho de poro de 125 Â. O eluente foi fosfato tampão 0,1 M pH 6,7 + Na2SO4 0,1 M e a eluição foi mantida isocrática a uma vazão de 1 mL/min. O extrato de fermento da espécie Eupenicillium crustaceum mostra picos entre 11,5 e 13,5 min, picos com distribuição gaussiana com tempo de residência entre 10 e 20 minutos.

[44] Em uma modalidade exemplificativa e preferida, a cepa da espécie Eupenicillium crustaceum é uma cepa da espécie Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT 20901. Essa cepa foi depositada em 20 de março de 2014 na Colección Espanola de Cultivos Tipo (CECT) (Edificio 3 CUE, Parc Científic Universitat de Valencia, Catedrático Agustín Escardino 9, 46980 Paterna, Valencia, Espanha) como instituição legalmente reconhecida para esse fim de acordo com o Tratado de Budapeste sobre o Reconhecimento Internacional do Depósito de Micro-organismos em 28 de abril de 1977.

[45] Em um segundo aspecto, a invenção provê o uso do extrato de fermento para o tratamento e/ou cuidado cosmético da pele, das membranas mucosas, do cabelo e/ou das unhas. Em particular, verificou-se que o extrato de fermento é particularmente eficaz no tratamento e/ou cuidado cosmético da pele, incluindo: a despigmentação ou o branqueamento ou o clareamento na cor da pele, das membranas mucosas, do cabelo e/ou das unhas; a despigmentação ou o branqueamento ou o clareamento na cor das manchas senis; a despigmentação ou o branqueamento ou o clareamento na cor da pele das olheiras; a manutenção ou melhoria da luminosidade da pele; o alívio ou a prevenção dos sintomas do envelhecimento da pele; tratamento de rugas na pele, como rugas periorbitais; tratamento de olheiras; tratamento de olhos inchados; tratamento de bolsas oculares; a suavização ou a redução das rugas da pele; a redução do volume de um olho inchado ou de bolsas oculares; a manutenção ou melhoria da elasticidade da pele; a manutenção ou melhoria da resistência da pele, firmeza ou resistência à tração. Verificou-se que o extrato de fermento pode promover a síntese de colágeno e elastina, inibir a degradação de colágeno devido à ação da colagenase e inibir a degradação da elastina devido à ação da elastase. Acredita-se que o dito extrato de fermento serve para reabastecer e manter os níveis de colágeno e elastina na pele que está envelhecendo, mantendo e melhorando assim a elasticidade da pele, a resistência da pele e/ou a resistência à tração da pele. Isso leva a uma pele mais tonificada e firme que tem menos tendência a cair e/ou a enrugar. Verificou-se também que o dito extrato de fermento pode inibir a formação dos produtos finais de Glicação Avançada (AGEs). Acredita-se que isso acrescente à capacidade do extrato de fermento de ajudar a manter os níveis de colágeno (colágeno tipo I) na pele que está envelhecendo e, como resultado, manter a elasticidade da pele. Além disso, essa capacidade de inibir a formação de AGEs leva a uma diminuição na formação de compostos que, juntamente com uma diminuição na elastina, acredita-se que causam opacidade da pele e, portanto, o uso desse cosmético ativo pode melhorar a luminosidade da pele. Dessa forma, em uma modalidade do segundo aspecto da invenção, é provido o uso cosmético do dito extrato de fermento para a manutenção ou melhoria da elasticidade da pele, resistência da pele, firmeza da pele, resistência à tração da pele e/ou luminosidade da pele. A invenção provê o dito extrato de fermento para o uso cosmético na manutenção ou melhoria da elasticidade da pele, resistência da pele, resistência à tração da pele e/ou luminosidade da pele e o uso cosmético do dito extrato de fermento como um agente firmante e tonificante da pele e/ou um agente abrilhantador da pele.

[46] Além disso, verificou-se que o extrato de fermento da invenção é eficaz na suavização ou na redução do tamanho das rugas da pele, em particular as rugas periorbitais, como os pés-de-galinha. Dessa forma, em uma modalidade do segundo aspecto da invenção, é provido o uso cosmético do dito extrato de fermento para o tratamento de rugas. A invenção provê o dito extrato de fermento para o uso cosmético no tratamento de rugas e o uso cosmético do dito extrato de fermento como um agente antirrugas da pele.

[47] Verificou-se também que o extrato de fermento da invenção é eficaz na diminuição do volume de bolsas oculares. Acredita-se que isso seja pelo menos em parte devido à eficácia do extrato de fermento na diminuição da permeabilidade vascular (aumentando a permeabilidade vascular associada ao envelhecimento da pele) e reduzindo assim a quantidade de fluido retido na pele sob o olho. Dessa forma, em uma modalidade do segundo aspecto da invenção, é provido o uso cosmético do dito extrato de fermento para o tratamento de bolsas oculares e/ou olhos inchados. A invenção provê o dito extrato de fermento para o uso cosmético no tratamento de bolsas oculares e/ou olhos inchados e o uso cosmético do dito extrato de fermento como um agente de tratamento de bolsas oculares e/ou olhos inchados.

[48] Verificou-se também que o extrato de fermento da invenção é eficaz no clareamento da cor ou na despigmentação ou branqueamento da pele. Acredita-se que isso seja em parte devido à eficácia do extrato de fermento na inibição da formação de melanina em melanócitos, inibindo a atividade da tirosinase e/ou afetando a expressão de genes envolvidos no processo melanogênico. Dessa forma, em uma modalidade do segundo aspecto da invenção, é provido o uso cosmético do dito extrato de fermento para o clareamento da cor ou branqueamento ou despigmentação da pele, das membranas mucosas, do cabelo e/ou das unhas. A invenção provê o dito extrato de fermento para o uso cosmético do branqueamento ou clareamento da cor ou despigmentação da pele e o uso cosmético do dito extracto de fermento como um agente de branqueamento da pele ou agente de clareamento da cor da pele ou agente de despigmentação da pele. Em particular, o extrato de fermento é eficaz no clareamento da cor ou na despigmentação ou no branqueamento de pele hiperpigmentada, por exemplo, manchas senis. Acredita-se que essa capacidade de afetar manchas senis é em parte devido à eficácia do extrato de fermento na regulação descendente da expressão do gene EDNRB e ao efeito inibitório na via de sinalização Wnt em melanócitos (regulação ascendente do gene DKK1 e regulação descendente de genes envolvidos nessa via). Dessa forma, em uma modalidade do segundo aspecto da invenção, é provido o uso cosmético do dito extrato de fermento para o tratamento de manchas senis. A invenção provê o dito extrato de fermento para o uso cosmético no tratamento de manchas senis e o uso cosmético do dito extrato de fermento como um agente de tratamento de manchas senis. O extrato de fermento da invenção também é particularmente eficaz para clarear a cor escura da pele nas olheiras. Acredita-se que isso seja em parte devido à eficácia do extrato de fermento na promoção da degradação da bilirrubina, bem como sua capacidade de afetar a formação de melanina. Dessa forma, em uma modalidade do segundo aspecto da invenção, é provido o uso cosmético do dito extrato de fermento para o tratamento de olheiras. A invenção provê o dito extrato de fermento para o uso cosmético no tratamento de olheiras e o uso cosmético do dito extrato de fermento como um agente de tratamento de olheiras. Essa capacidade de clareamento da cor da pele também contribui para a capacidade do extrato de fermento de manter e/ou melhorar a luminosidade da pele.

[49] Em uma modalidade do segundo aspecto da invenção, é provido o uso do extrato de fermento da invenção para o alívio e/ou prevenção dos sintomas ou sinais de envelhecimento da pele. Dessa forma, a invenção provê o dito extrato de fermento para o uso cosmético no alívio e/ou prevenção dos sintomas de envelhecimento da pele e o uso cosmético de dito extrato de fermento como um agente antienvelhecimento da pele. Os sintomas ou sinais de envelhecimento da pele incluem: o aparecimento de rugas na pele, olheiras, manchas senis, olhos inchados e/ou bolsas oculares, a opacidade da pele, perda de elasticidade da pele, resistência da pele, firmeza da pele e/ou resistência à tração da pele. Dessa forma, nessa modalidade, o tratamento e/ou cuidado cosmético inclui: o tratamento de rugas da pele, olheiras, manchas senis, olhos inchados e/ou bolsas oculares; a suavização ou a redução do tamanho das rugas da pele; a redução do volume de olhos inchados e/ou bolsas oculares; o clareamento da cor da pele das olheiras; o clareamento da cor das manchas senis; a manutenção ou melhoria da elasticidade da pele, luminosidade da pele, resistência da pele, firmeza da pele e/ou resistência à tração da pele. Em uma modalidade, o tratamento e/ou cuidado cosmético é o clareamento, branqueamento ou despigmentação da pele e inclui o clareamento da pele das olheiras e/ou manchas senis e/ou a manutenção ou melhoria da luminosidade da pele. Em uma modalidade, o tratamento e/ou cuidado cosmético é o tratamento da pele ao redor da área dos olhos e inclui o tratamento de rugas da pele, olheiras, olhos inchados e/ou bolsas oculares.

[50] Em uma modalidade da invenção, o tratamento e/ou cuidado cosmético da pele, das membranas mucosas, do cabelo e/ou das unhas é para a pele mais exposta ao meio ambiente, como a pele facial, a pele das mãos e antebraços, o colo e as pernas. Em uma modalidade da invenção, onde o tratamento e/ou cuidado cosmético da pele, das membranas mucosas, do cabelo e/ou das unhas são para o clareamento da cor, branqueamento ou despigmentação, o tratamento e/ou cuidado é para a pele para a qual um uma cor mais clara é cosmeticamente desejada por um indivíduo, como a pele hiperpigmentada, tal como manchas senis, ou pele que é naturalmente mais escura devido a um alto teor de melanina, tal como a pele do mamilo.

[51] Em uma modalidade, o tratamento e/ou cuidado cosmético é para um indivíduo que é caucasiano ou asiático. Em uma modalidade, o tratamento e/ou cuidado cosmético é para um indivíduo com mais de 20 anos.

[52] De acordo com o terceiro aspecto da invenção, é provida uma composição cosmética que compreende uma quantidade cosmeticamente eficaz do extrato de fermento de uma cepa da espécie Eupenicillium crustaceum e pelo menos um excipiente, adjuvante e/ou ingrediente cosmeticamente aceitável. O extrato de fermento é conforme descrito no primeiro aspecto da invenção. As ditas composições podem ser preparadas pelos métodos convencionais conhecidos pelos versados na técnica [“Harry’s Cosmeticology”, Seventh edition, (1982), Wilkinson J.B., Moore R.J., ed. Longman House, Essex, GB].

[53] A quantidade cosmeticamente eficaz do extrato de fermento na composição da invenção, bem como a sua dosagem, dependerá de inúmeros fatores, que podem incluir a idade, a condição do paciente, a natureza ou a gravidade dos sinais do envelhecimento da pele, quão escura é a pele a ser tratada e/ou cuidada, a via e a frequência de administração do extrato.

[54] “Quantidade cosmeticamente eficaz” é entendida como uma quantidade não tóxica, mas suficiente do extrato de fermento para prover o efeito desejado. O extrato de fermento da invenção é usado em concentrações para atingir o efeito cosmético desejado e esses incluem, com base no peso seco do extrato em relação ao peso total da composição, de 0,0000000001% em peso a 20% em peso ou de 0,00000001% em peso a 10 % em peso, ou de 0,000001% em peso a 5% em peso, ou de 0,000001% em peso ou 0,00005 a 1% em peso.

[55] O extrato de fermento da invenção pode ser incorporado em sistemas de dispensação cosméticos e/ou sistemas de liberação prolongada.

[56] O termo “sistemas de dispensação” refere-se a um diluente, adjuvante, veículo ou aditivos com os quais é administrado o extrato da invenção. Esses carreadores cosméticos podem ser líquidos, tais como água, óleos ou tensoativos, incluindo os de origem petrolífera, animal, vegetal ou sintética, tais como e não restritos a óleo de amendoim, óleo de soja, óleo mineral, óleo de gergelim, óleo de rícino, polissorbatos, ésteres de sorbitano, sulfatos de éter, sulfatos, betaínas, glicosídeos, maltósidos, álcoois graxos, nonoxinóis, poloxâmeros, polioxietilenos, polietilenoglicóis, dextrose, glicerol, digitonina e similares. Um versado na técnica está ciente dos diluentes, adjuvantes ou aditivos que podem ser usados nos diferentes sistemas de dispensação nos quais o extrato de fermento da invenção pode ser administrado.

[57] O termo “liberação prolongada” é usado em um sentido convencional para descrever um sistema de dispensação que provê a liberação gradual de um composto ao longo de um período de tempo. Em uma modalidade, o sistema de dispensação provê níveis de liberação de compostos relativamente constantes ao longo de um período de tempo.

[58] Exemplos de sistemas de dispensação ou de liberação prolongada incluem lipossomas, lipossomas mistos, oleossomas, niossomas, etossomas, milipartículas, micropartículas, nanopartículas e nanopartículas lipídicas sólidas, carreadores lipídicos nanoestruturados, esponjas, ciclodextrinas, vesículas, micelas, micelas misturadas de tensoativos, micelas misturadas com tensoativo e fosfolipídio, miliesferas, microesferas e nanoesferas, lipoesferas, milicápsulas, microcápsulas e nanocápsulas, bem como microemulsões e nanoemulsões, que podem ser adicionadas para se conseguir uma maior penetração do ingrediente ativo da invenção. Em uma modalidade, os sistemas de liberação prolongada ou de dispensação são escolhidos de lipossomas, micelas misturadas com tensoativo e fosfolipídios e microemulsões, microemulsões água-em-óleo com uma estrutura micelar inversa interna e microemulsões contendo nanocápsulas.

[59] O sistema de liberação prolongada pode ser preparado por métodos conhecidos na técnica anterior e as composições que os contêm podem ser administradas, por exemplo, por administração tópica ou transdérmica, incluindo emplastros adesivos, emplastros não adesivos, emplastros oclusivos e emplastros microelétricos. Em uma modalidade, o sistema de liberação prolongada deve liberar uma quantidade relativamente constante do extrato da invenção. A quantidade de extrato contida no sistema de liberação prolongada dependerá, por exemplo, de onde a composição deve ser administrada, da cinética e da duração da liberação do extrato da invenção, bem como da natureza da condição, distúrbio e/ou doença a ser tratada ou prevenida.

[60] A composição que contém o extrato de fermento desta invenção também pode ser adsorvida em polímeros orgânicos sólidos ou suportes minerais sólidos, tais como, e não restritos a talco, bentonita, sílica, amido ou maltodextrina, entre outros.

[61] As composições que contêm o extrato de fermento podem também ser incorporadas em tecidos, tecidos não tecidos ou dispositivos médicos que estão em contato direto com a pele, liberando assim o extrato da invenção por biodegradação do sistema de ligação ao tecido, tecido não tecido ou dispositivo médico, ou devido ao atrito entre eles e o corpo, devido à umidade do corpo, ao pH da pele ou à temperatura corporal. Além disso, o extrato da presente invenção pode ser incorporado nos tecidos e tecidos não tecidos usados na fabricação de peças de vestuário que ficam em contato direto com o corpo.

[62] Exemplos de tecidos, tecidos não tecidos, peças de vestuário, dispositivos médicos e meios para imobilizar os compostos a eles, entre os quais estão os sistemas de dispensação e/ou os sistemas de liberação prolongada descritos acima, podem ser encontrados na literatura e são conhecidos na técnica anterior [Schaab C.K. (1986) HAPPI May 1986; Nelson G., “Application of microencapsulation in textiles”, (2002), Int. J. Pharm., 242(1-2), 55-62; “Biofunctional Textiles and the Skin” (2006) Curr. Probl. Dermatol. v.33, Hipler U.C. and Elsner P., eds. S. Karger AG, Basel, Switzerland; Malcolm R.K. et al., “Controlled release of a model antibacterial drug from a novel self-lubricating silicone biomaterial”, (2004), J. Cont. Release, 97(2), 313-320]. Os tecidos preferidos, os tecidos não tecidos, as peças de vestuário e os dispositivos médicos são bandagens, gazes, camisetas, meias, calças, cuecas, cintos, luvas, fraldas, absorventes, curativos, colchas, lenços, emplastros adesivos, emplastros não adesivos, emplastros oclusivos, emplastros microelétricos e/ou máscaras faciais.

[63] As composições cosméticas contendo o extrato de fermento desta invenção podem ser usadas em diferentes tipos de composições de aplicação tópica ou transdérmica, incluindo opcionalmente excipientes cosméticos aceitáveis necessários para formular a forma de administração desejada.

[64] As composições cosméticas da invenção podem ser para aplicação tópica ou transdérmica e podem ser produzidas em qualquer formulação sólida, líquida ou semissólida, tal como e não restrita a cremes, emulsões múltiplas tais como e não restritas a emulsões de óleo e/ou silicone em água, emulsões de água em óleo e/ou silicone, emulsões do tipo água/óleo/água ou água/silicone/água e emulsões do tipo óleo/água/óleo ou silicone/água/silicone, composições anidras, dispersões aquosas, óleos, leites, bálsamos, espumas, loções, géis, géis de creme, soluções hidroalcoólicas, soluções hidroglicólicas, hidrogéis, linimentos, soros, sabões, xampus, condicionadores, séruns, películas de polissacarídeos, unguentos, mousses, pomadas, pós, barras, lápis e pulverizadores ou aerossóis, incluindo as formulações com e sem enxágue. Essas formulações de aplicação tópica ou transdérmica podem ser incorporadas usando técnicas conhecidas pelos versados na técnica, em diferentes tipos de acessórios sólidos tais como e não restritos a bandagens, gazes, camisetas, meias, calças, cuecas, cintos, luvas, fraldas, absorventes, curativos, colchas, lenços, emplastros adesivos, emplastros não adesivos, emplastros oclusivos, emplastros microelétricos ou máscaras faciais, ou podem ser incorporadas em diferentes produtos de maquiagem tais como base, como bases fluidas e bases compactas, loções de remoção de maquiagem, leites de remoção de maquiagem, corretivos para a região sob os olhos, sombras, batons, protetores labiais, brilho labial e pós, entre outros.

[65] As composições cosméticas da invenção podem incluir agentes que aumentam a absorção percutânea dos compostos desta invenção, por exemplo e não restritos a dimetilsulfóxido, dimetilacetamida, dimetilformamida, tensoativos, azona (1-dodecilazaciclo-heptano-2-ona), álcool, ureia, etoxidiglicol, acetona, propileno glicol ou polietilenoglicol, entre outros. Além disso, as composições cosméticas ou dermofarmacêuticas desta invenção podem ser aplicadas a áreas locais a serem tratadas por iontoforese, sonoforese, eletroporação, emplastros microelétricos, pressão mecânica, gradiente de pressão osmótica, cura oclusiva, microinjeções ou injeções sem agulha por meio de pressão, tal como injeções por pressão de oxigênio, ou qualquer combinação das mesmas, para conseguir uma maior penetração do extrato da invenção. A área de aplicação será determinada pela natureza da condição, distúrbio e/ou doença a ser tratada e/ou prevenida.

[66] Dentre os excipientes, adjuvantes e/ou ingredientes cosmeticamente aceitáveis contidos nas composições cosméticas descritas nesta invenção estão ingredientes adicionais comumente usados em composições cosméticas, tais como e não restritos a agentes que diminuem a produção de sebo, agentes antisseborreicos, agentes matificantes, agentes antiacne, agentes que estimulam a síntese de macromoléculas dérmicas ou epidérmicas e/ou que são capazes de inibir ou evitar sua degradação, outros agentes de estimulação de síntese de colágeno, outros agentes de estimulação de síntese de elastina, agentes de estimulação de síntese de decorina, agentes de estimulação de síntese de laminina, agentes que estimulam a síntese de defensina, agentes que estimulam a síntese de chaperona, agentes que estimulam a síntese de cAMP, agentes que modulam AQP 3, agentes que modulam síntese de aquaporina, proteínas da família aquaporina, agentes que estimulam a síntese de ácido hialurônico, agentes que estimulam a síntese de glicosaminoglicano, agentes que estimulam a síntese de fibronectina, agentes que estimulam a síntese de sirtuína, proteínas de choque térmico, agentes que estimulam a síntese de proteína de choque térmico, agentes que inibem exocitose neuronal, outros agentes anticolinérgicos, agentes que inibem contração muscular, outros agentes antienvelhecimento, outros agentes antirrugas, agentes antitranspirantes, agentes anti-inflamatórios e/ou analgésicos, agentes anticoceira, agentes calmantes, agentes anestésicos, inibidores de agregação de receptores de acetilcolina, agentes que inibem acetilcolinesterase, agentes relaxantes da pele, outros agentes que inibem a síntese de melanina, agentes clareadores ou despigmentantes, agentes que inibem NO-sintases, agentes que inibem 5α-redutase, agentes que inibem lisila e/ou propila hidroxilase, antioxidantes, removedores de radicais livres e/ou agentes contra poluição atmosférica, removedores de espécie de carbonila reativa, agentes antiglicação, agentes anti-histamínicos, agentes antivirais, agentes antiparasitários, emulsificadores, emolientes, solventes orgânicos, propelentes líquidos, condicionadores de pele, umectantes, substâncias que retêm umectação, ácidos alfa hidróxido, ácidos beta hidróxido, cremes hidratante, enzimas hidrolíticas epidérmicas, vitaminas, aminoácidos, proteínas, pigmentos ou corantes, corantes, biopolímeros, polímeros gelificantes, espessantes, tensoativos, agentes amaciadores, emulsificadores, agentes ligantes, conservantes, agentes capazes de reduzir ou tratar as bolsas sob os olhos, agentes esfoliantes, agentes queratolíticos, agentes descamantes, agentes antimicrobianos, agentes antifúngicos, agentes fungistáticos, agentes bactericidas, agentes bacteriostáticos, agentes que estimulam a síntese de lipídios e componentes do estrato córneo, ceramidas, ácidos graxos, outros agentes que inibem a degradação de colágeno, agentes que inibem metaloproteínases matriz, outros agentes que inibem a degradação de elastina, agentes que inibem as serina proteases tais como calicreínas, elastase leucocitária ou catepsina G, agentes que estimulam a proliferação de fibroblasto, agentes que estimulam a proliferação de queratinócitos, agentes que estimulam a proliferação de adipócitos, agentes que estimulam a proliferação de melanócitos, agentes que estimulam a diferenciação de queratinócitos, agentes que estimulam ou retardam a diferenciação de adipócitos, agentes anti-hiperqueratósicos, agentes comedolíticos, agentes antipsoríase, agentes de reparação de DNA, agentes de proteção de DNA, agentes de proteção de células-tronco, estabilizantes, agentes para o tratamento e/ou cuidados de pele sensível, agentes para firmar, agentes antiestrias, agentes ligantes, agentes lipolíticos ou agentes que estimulam lipólise, agentes adipogênicos, agentes que modulam a expressão PGC-1α, agentes que modulam a atividade de PPARY, agentes que aumentam ou reduzem o teor de triglicerídeos de adipócitos, agentes anticelulite, agentes que inibem a atividade de PAR-2, agentes que estimulam a cicatrização, agentes coadjuvantes de cicatrização, agentes que estimulam a reepitelização, agentes coadjuvantes de reepitelização, fatores de crescimento de citocinas, agentes que atuam sobre a circulação capilar e/ou microcirculação, agentes que estimulam a angiogênese, agentes que inibem a permeabilidade vascular, agentes venotônicos, agentes que atuam no metabolismo celular, agentes que melhoram a junção dérmica-epidérmica, agentes que induzem o crescimento capilar, agentes retardantes ou que inibem o crescimento capilar, agentes retardantes de perda capilar, conservantes, perfumes, absorventes de odor e/ou desodorizantes de mascaramento de odor corporal, agentes quelantes, extratos de plantas, óleos essenciais, extratos marinhos, agentes obtidos a partir de processos biotecnológicos, sais minerais, extratos celulares, protetores solares e agentes fotoprotetores orgânicos ou minerais ativos contra raios ultravioleta A e/ou B e/ou raios infravermelhos A ou misturas dos mesmos, desde que sejam fisicamente e quimicamente compatíveis com o resto dos componentes na composição e particulamente com o extrato de fermento produzido pela cepa da espécie Eupenicillium crustaceum. Do mesmo modo, a natureza desses ingredientes adicionais não deve alterar inaceitavelmente os benefícios do extrato desta invenção. A natureza desses ingredientes adicionais pode ser sintética ou natural, como extratos de plantas, ou vir de um processo biotecnológico, ou de uma combinação de um processo sintético e um processo biotecnológico. Exemplos adicionais podem ser encontrados em CTFA International Cosmetic Ingredient Dictionary & Handbook, 12th Edition (2008). No contexto desta invenção, entende-se por processo biotecnológico qualquer processo para produzir o ingrediente ativo, ou parte dele, em um organismo, ou em parte dele.

[67] Em uma modalidade, a composição cosmética da invenção contém: - entre 0,0000000001% (em peso) e 20% (em peso) do extrato de fermento de uma cepa da espécie Eupenicillium crustaceum ; - entre 0,1% (em peso) e 20% (em peso) de um umectante selecionado do grupo de (Nomes INCI) Glicerina, Propileno Glicol, Butileno Glicol, Pentileno Glicol, Caprilil Glicol, Ácido Lático, Ureia, Hialuronato de Sódio; - entre 0,1% (em peso) e 20% (em peso) de um emoliente ou condicionador da pele selecionado do grupo de (Nomes INCI) Dimeticona, Estearato de Glicerila, Triglicerídeo Caprílico/Cáprico, Álcool Cetearílico, Lecitina, Benzoato de Alquila C12-15, Esqualano, Lanolina, Álcool Beenílico, Acetato de Tocoferila, Pantenol, Manteiga de Butyrospermum Parkii, Palmitato de Retinila, Retinol; - entre 0,1% (em peso) e 20% (em peso) de um tensoativo selecionado do grupo de (Nomes INCI) Goma Xantana, Laureth Sulfato de Sódio, Ácido Esteárico, Polissorbato 20, Polissorbato 80, Álcool Estearílico, Álcool Cetílico, 2, Ceteareth-20, Cocamidopropil Betaína.

[68] A composição pode compreender adicionalmente um agente que diminui a produção de sebo, um agente antisseborreico, um agente matificante e/ou um agente antiacne, por exemplo e não restrito a, um agente selecionado do grupo formado por Mat-XS Clinical [INCI: Sarcosina, Goma xantana], Mat-XS Bright [INCI: Extrato de folha de Orthosiphon Stamineus, Maltodextrina, Goma xantana], Betapur [INCI: Extrato de folha de Reumus Boldus, Goma xantana] ou Neurobiox [INCI: Extrato de Achillea Millefolium, Goma xantana] comercializada pela BASF, Evermat [INCI: Extrato da casca de Enantia Chlorantha, Ácido oleanólico], Ac.net [INCI: Butileno glicol, Glicerídeos de amêndoa Peg-60, Caprilil glicol, Glicerina, Carbômero, Ácido nordi-hidroguaiarético, Ácido oleanólico] ou Sebuless [INCI: Maltodextrina, Extrato de Syringa Vulgaris (Lilás)] comercializado por Sederma/Croda, Phytessence Purple Ginseng [INCI: Glicerina ou Extrato de raiz de Polygonum Bistorta] comercializado por Crodarom, P-Refinyl [INCI: Extrato de semente de Lens Esculenta (Lentilha)], comercializado por Silab, EPS Seamat [INCI: Exopolissacarídeo-5 planctônico, Fenoxietanol] ou Epidermist 4.0 [INCI: Extrato de plâncton], comercializado por Codif, Seborami [INCI: Extrato de Sisymbrium Ofiicinale, Extrato de raiza de Arctium Lappa, Ácido cítrico, Ácido glicólico, Zinco PCA, Goma esclerótica] comercializado por Alban Muller, Poreaway [INCI: Goma de Pistacia Lentiscus/Goma de Pistacia Lentiscus (Mástique), Lecitina] comercializado por Mibelle, Citrustem [INCI: Goma xantana, Benzoato de sódio, Gluconolactona, Gliconato de cálcio] ou Affipore [INCI: Extrato de folha de Barosma Betulina, Ácido cítrico], comercializado por Provital, Sweetone [INCI: Hidrolisado de sacarídeo, Maltodextrina], comercializado por Laboratoires Expanscience, Seboxyl [INCI: Extrato de folha de Ribes Nigrum (Cassis), Extrato de folha de Rubus Idaeus (Framboesa)] ou Saniskin [INCI: Extrato de folha de Polygonum Cuspidatum, Álcool miristílico], comercializado por Solabia, Alpaflor Alp-Sebum [INCI: Extrato de Epilobium Fleischeri, Ácido cítrico, Sorbato de potássio] ou Regu-Seb [INCI: Extrato de caroço de Argania Spinosa, Extrato de fruto de Serenoa Serrulata, Extrato de semente de Sesamum Indicum (Gergelim)], comercializado pela DSM, Bodyfensine® [INCI: Amino-hexanoato de Acetil Dipeptídeo-3], Matmarine™ [INCI: Extrato de fermento de Pseudoalteromonas], comercializado pela Lipotec/Lubrizol, Dermaclarine [INCI: Proteína (e) Protease hidrolisada do ovo] comercializada pela Aqua Bio Technology, Linumine [INCI: Extrato de semente de Linum Usitatissimum (Linhaça)], comercializado pela Lucas Meyer, Granactive Acne [INCI: Extraot de farelo de Oryza Sativa (Arroz), Extrato de Boswellia Serrata, Extrato de mel, Oligopeptídeo-10], comercializado pela Evonik, Sepicontrol A5 [INCI: Capriloil Glicina, Sarcosina, Extrato de casca de Cinnamonium Zeylanicum], comercializado por Seppic, Sympeptide 380 [INCI: Miristoil Hexapeptídeo- 23] comercializado por Symrise, ou Sebaryl [INCI: Niacinamida, Extrato de levedura, Extrato de semente de Aesculus Hippocastanum (Castanha de cavalo), Glicirrizinato de amônio, Pantenol, Propileno Glicol, Gliconato de zinco, Cafeía, Biotina], comercializado por Laboratoires Serobiologiques/Cognis/BASF, entre outros.

[69] A composição pode compreender adicionalmente um agente antirrugas e/ou antienvelhecimento selecionado do, por exemplo e não restrito ao, grupo formado pelos extratos ou extratos hidrolisados de Vitis vinifera, Rosa canina, Curcuma longa, Theobroma cacao, Ginkgo biloba, Leontopodium alpinum ou Dunaliella salina entre outros, Matrixyl® [INCI: Palmitoil pentapeptídeo-4], Matrixyl® 3000® [INCI: Tetrapeptídeo-7 de palmitoíla, Oligopeptídeo de palmitoíla], Matrixyl® Synthe’6™ [INCI: Glicerina, Água, Hidroxipropil ciclodextrina, Palmitoil tripeptídeo-38], Essenskin™ [INCI: hidroximetionina de cálcio], Renovage [INCI: teprenona], Resistem™ [INCI: Fermento de Globularia Cordifolia], Beautifeye [INCI: Extrato de casca de Albizia Julibrissin, Darutoside], Meiritage [INCI: Extrato de raiz de Astragalus Membranaceus, Extrato de raiz de Atractyloides Macrocephala, Extrato de raiz de Bupleurum Falcatum], Senestem [INCI: Extrato de folha de Plantago Lanceolata], Beautifeye™ [INCI: Extrato de casca de Albizia Julibrissin], Venuceane [INCI: Fermento de Thermus Thermophillus] ou Dermaxyl® [INCI: Palmitoil oligopeptídeo] comercializado por Sederma/Croda, Vialox® [INCI: Pentapeptídeo-3], Syn®- Ake® [INCI: Dipeptídeo Diaminobutiroil Benzilamida Diacetato], Syn®-Coll [INCI: Palmitoil tripeptídeo-5], Phytaluronate [INCI: Goma de alfarroba (Ceratonia siliqua)], Regu-Scence [INCI: Extrato de caule de Asparagus Officinalis, Benzoato de sódio, Sorbato de potássio, Gluconolactona, Gliconato de cálcio], Syn-TC [INCI: Trifluoroacetato de ureia tetradecil aminobutiroilvalilaminobutirico, Palmitoil tripeptídeo-5, Palmitoil dipeptídeo- 5 diaminobutiroil hidroxitreonina] ou Preregen® [INCI: Proteína de Glycine soja (Soja), Oxirredutases] comercializado por Pentapharm/DSM, Myoxinol™ [INCI: Extrato hidrolisado de Hibiscus esculentus], Syniorage™ [INCI: Acetil tetrapeptídeo-11], Dermican™ [INCI: Acetil tetrapeptídeo-9], Shadownyl [INCI: Extrato de algas, Hexileno glicol, Caprilil glicol, Goma xantana] ou DN AGE™ LS [INCI: Extrato de folha de Cassia alata] comercializado por Laboratoires Sérobiologiques/Cognis/BASF, Algisum C® [INCI: Manuronato de metilsilanol], Exage [INCI: lmidazoliletil Diaminopropanamida] ou Hydroxyprolisilane CN® [INCI: Aspartato de Metilsilanol Hidroxiprolina] comercializado por Exsymol, Argireline® [INCI: Acetil hexapeptídeo-8], SNAP-7 [INCI: Acetil hexapeptídeo-4], SNAP-8 [INCI: Acetil octapeptídeo-3], Serilesine® [INCI: Hexapeptídeo-10], Leuphasyl® [INCI: Pentapeptídeo-18], Inyline® [INCI: Acetil hexapeptídeo- 30], Aldenine® [INCI: Proteína de trigo hidrolisada, Proteína de soja hidrolisada, Tripeptídeo-1], Preventhelia® [INCI: Diaminopropionoil Tripeptídeo-33], Decorinyl® [INCI: Tripeptídeo-10 Citrulina], Decorinol® [INCI: Tripeptídeo-9 Citrulina], Trylagen® [INCI: Extrato de fermento de Pseudoalteromonas, Proteína de trigo hidrolisada, Proteína de soja hidrolisada, Tripeptídeo-10 Citrulina, Tripeptídeo-1], Eyeseryl® [INCI: Acetil tetrapeptídeo-5], Peptídeo AC29 [INCI: Acetil tripeptídeo-30 Citrulina], Relistase® [INCI: Acetilarginiltriptofil Difenilglicina], Thermostressine® [INCI: Acetil tetrapeptídeo-22], Lipochroman™ [INCI: Dimetilmetoxi Cromanol], Chromabright® [INCI: Dimetilmetoxi Cromanil Palmitato], Antarcticine® [INCI: Extrato de fermento de Pseudoalteromonas], dGlyage™ [INCI: HCl de lisina, Lecitina, Tripeptídeo-9 Citrulina], Vilastene™ [INCI: HCl de lisina, Lecitina, Tripeptídeo-10 Citrulina], Hyadisine™ [INCI: Extrato de fermento de Pseudoalteromonas], Hyanify™ [INCI: Isomerato de sacarídeos], Diffuporine™ [INCI: Acetil hexapeptídeo-37], Silusyne™ [INCI: Óleo de soja (Glycine Soja), Sesquioleato de sorbitano, Iso-hexadecano, Hialuronato de sódio, Hidróxi propil lauril diamônio, Proteína hidrolisada da soja, Acetil hexapeptídeo-39], Adifyline™ [INCI: Acetil hexapeptídeo-38], Uplevity™ [INCI: Acetil tetrapeptídeo-2], Juveleven™ [INCI: Acetil hexapeptídeo-51 Amida] ou Telangyn™ [INCI: Acetil tetrapeptídeo-40] comercializado por Lipotec/Lubrizol, Kollaren® [INCI: Tripeptídeo-1, Dextrano] comercializado pelo Institut Europeen de Biologie Cellulaire, Collaxyl® IS [INCI: Hexapeptídeo-9], Laminixyl IS™ [INCI: Hexapeptídeo], Orsirtine™ GL [INCI: Extrato de Oryza sativa (Arroz)], D’Orientine™ IS [INCI: Extrato de semente de Phoenix dactylifera (Tâmara)], Phytoquintescine™ [INCI: Extrato de trigo selvagem (Triticum monococcum)], Peptídeo Q10 [INCI: Pentapeptídeo-34 Trifluoroacetato], Telosense [INCI: Proteína de levedura hidrolisada, Proteína de soja hidrolisada] ou Quintescine™ IS [INCI: Dipeptídeo-4] comercializado por Vincience/ISP/Ashland, BONT-L-Peptide [INCI: Palmitoil Hexapeptídeo-19] comercializado por Infinitec Activos, Deepaline™ PVB [INCI: Proteína de trigo hidrolisada de palmitoíla] ou Sepilift® DPHP [INCI: Dipalmitoil Hidroxiprolina] comercializado por Seppic, Gatuline® Expression [INCI: Extrato de Acmella oleracea], Gatuline® In-Tense [INCI: Extrato de flor de Spilanthes acmella] ou Gatuline® Age Defense 2 [INCI: Extrato de semente de Juglans regia (Noz)] comercializado pela Gattefossé, Thalassine™ [INCI: Extrato de algas] comercializado pela Biotechmarine, ChroNOline™ [INCI: Caprooil tetrapeptídeo-3] ou Thymulen-4 [INCI: Acetil tetrapeptídeo-2] comercializado pela Atrium/Unipex Innovations, EquiStat [INCI: Extrato de fruto de Pyrus malus, Extrato de semente de Glycine soja] ou Juvenesce [INCI: Etoxidiglicol e Triglicerídeo caprílico, Retinol, Ácido ursólico, Fitonadiona, Ilomastat], Epigenist™ [INCI: Extrato de semente de Voandzeia Subterranea], LOX-AGE™ [INCI: Extrato de folha de Cichorium Intybus (chicória)] comercializado pela Coletica/Engelhard/BASF, Ameliox [INCI: Carnosina, Tocoferol, Extrato de fruto de Silybum marianum], Phytocelltec Symphytum [INCI: Isomalte, Cultura celular de raiz de Symphytum Officinale, Lecitina, Benzoato de sódio], Snow Algae Powder [INCI: Extrato de Chlamydocapsa, Maltodextrina, Lecitina], Dermcom [INCI: Goma de Acacia Senegal, Extrato de bulbo de Crocus Chyrsanthus], Anagain [INCI: Extrato de broto de Pisum Sativum (Ervilha)] ou PhytoCellTec Malus Domestica [INCI: Cultura celular de fruto de Malus domestica] comercializado por Mibelle Biochemistry, Bioxilift [INCI: Extrato de Pimpinella anisum], Vitagenyl [INCI: Extrato de folha de Prunus Persica (Pêssego)] ou SMS Anti-Wrinkle® [INCI: Extrato de semente de Annona squamosa] comercializado pela Silab, Symvital Agerepair [INCI: Extrato de raiz de Zingiber Officinale (Gengibre)] comercializado por Symrise, Citrustem [INCI: Goma xantana, Benzoato de sódio, Gluconolactona, Gliconato de cálcio], Melavoid [INCI: Extrato de raiz de Boerhavia Diffusa], Darkout [INCI: Extrato de rizoma de Hypoxis Rooperi, Goma de Caesalpinia Spinosa] ou Linefill [INCI: Dimetil Isossorbida, Extrato de semente de Sesamum Indicum (Gergelim)] comercializado por Provital, Adipofill’in [INCI: Ornitina, Fosfolipídios, Glicolipídios], Elix-IR [INCI: Extrato de Polygonum Aviculare] ou Progeline [INCI: Trifluoroacetil tripeptídeo-2] comercializado por Lucas Meyer, Amiperfect [INCI: Extrato de folha de Gaultheria Procumbens (Gaultéria)] ou Repulpami ER [INCI: Extrato de polpa de Adansonia Digitata, Extrato de flor de Hibiscus Sabdariffa] comercializado por Alban Muller, Celloxyl [INCI: Extrato de folha de Uapaca Bojeri] ou Resistress [INCI: Extrato de flor de Sophora Japonica] comercializado por Solabia, Actiporine 8G [INCI: Extrato de Jania Rubens] ou EPS Seafill [INCI: Extrato de plâncton], Lakesis [INCI: Goma de Pistacia Lentiscus (mástique)] comercializada por Codif, Novhyal Biotech G [INCI: Fosfato de acetilglucosamina dissódico] ou Rubixyl [INCI: Hexapeptídeo-47] comercializado por Induchem, antagonistas do canal de Ca2+ tais como e não restritos a sais de alverina, manganês ou magnésio, certas aminas secundárias ou terciárias, retinol e seus derivados, idebenona e seus derivados, coenzima Q10 e seus derivados, ácido boswellico e seus derivados, GHK e seus derivados e/ou sais, carnosina e seus derivados, enzimas de reparo do DNA tais como e não restritas a fotoliase ou T4 endonuclease V, ou agonistas do canal de cloreto entre outros, e/ou misturas dos mesmos.

[70] A composição pode compreender adicionalmente um agente anti-inflamatório e/ou analgésico selecionado, por exemplo e não restrito a, do grupo formado pelo extrato de madecassoside, extrato de equinácea, óleo de semente de amaranto, óleo de madeira de sândalo, extrato de folha de pessegueiro, extrato de Aloe vera, Arnica montana, Artemisia vulgaris, Asarum maximum, Calendula officinalis, Capsicum, Centipeda cunninghamii, Chamomilla recutita, Crinum asiaticum, Hamamelis virginiana, Harpagophytum procumbens, Hypericum perforatum, Lilium candidum, Malva sylvestris, Melaleuca alternifolia, Origanum majorana, Origanum vulgare, Prunus laurocerasus, Rosmarinus officialis, Salix alba, Silybum marianum, Tanacetum parthenium, Thymus vulgaris, Uncaria guianensis or Vaccinum myrtillus, ácidos graxos ômega -3 e ômega-6, NeutrazenTM [INCI: Água, Butileno glicol, Dextrano, Palmitoil tripeptídeo-8] comercializado por Atrium Innovations/Unipex Group, DelisensTM [INCI proposto: Acetil hexapeptídeo-46] comercializado pela Lipotec/Lubrizol, Meliprene® [INCI: Dextrano, Acetil hexapeptídeo-1] comercializado pela Institut Européen de Biologie Cellulaire/Unipex Group, SkinasensylTM [INCI: Acetil tetrapeptídeo- 15] ou AnasensylTM [INCI: Manitol, Glicirrizato de amônio, Cafeína, Extrato de Hippocastanum (castanha de cavalo)], Shawdonyl [INCI: Extrato de algas, Hexileno glicol, Caprilil glicol, Goma xantana] comercializado por Laboratoires Serobiologiques/Cognis/BASF, MAXnolia [INCI: Extrato de casca de Magnolia Officinalis, Extrato de semente de Vitis Vinifera/Vitis Vinifera (uva), Tocoferol], CM-Naringenina-Chalcona [INCI: Tetrassódio tetracarboximetil naringeninachalcona] comercializada por Mibelle, Unisooth [INCI: Galato de propila, Glucosídeo de galila, Glucosídeo de epigalocatequina galetila] comercializado por Induchem, CalmosensineTM [INCI: Acetil dipeptídeo-1] comercializado por Sederma/Croda, coenzima Q10 ou alquil gliceril éteres.

[71] A composição pode compreender adicionalmente um agente firmador e/ou redensificante e/ou reestruturante adicional selecionado, por exemplo e não restrito a, do grupo formado por extratos de Malpighia punicitolia, Cynara scolymus, Gossypium herbaceum, Aloe Barbadensis, Panicum miliaceum, Morus nigra, Sesamum indicum, Glycine soja, Triticum vulgare, Pronalen® Refirming HSC [INCI: Triticum Vulgare, Silybum Marianum, Glycine Soy, Equisetum Arvense, Alchemilla Vulgaris, Medicago Sativa, Raphanus Sativus], Lipout [INCI: Extrato de plâncton] ou Polyplant® Refirming [INCI: equinácea, centella asiática, Fucus, feno-grego] comercializado por Provital, Lanablue® [INCI: Sorbitol, Extrato de algas] comercializado por Atrium Biotechnologies/Unipex Innovations, Pepha®-Nutrix [INCI: Fator de nutrição natural] comercializado por Pentapharm/DSM, extratos vegetais contendo isoflavonas, Biopeptide ELTM [INCI: Palmitoil oligopeptídeo], Biopeptide CLTM [INCI: Palmitoil oligopeptídeo], Vexel® [INCI: Água (Aqua), Propileno Glicol, Lecitina, Cafeína, Palmitoil Carnitina], Matrixyl® [INCI: Palmitoil pentapeptídeo-3], Matrixyl® 3000 [INCI: Palmitoil tetrapeptídeo-3, Palmitoil oligopeptídeo] ou Bio-BustylTM [INCI: Polimetacrilato de glicerila, Fermento de proteína de soja de Rahnella, Água (Aqua), Propileno Glicol, Glicerina, PEG-8, Palmitoil oligopeptídeo] comercializado por Sederma/Croda, Dermosaccharides® HC [INCI: Glicerina, Água (Aqua), Glicosaminoglicanos, Glicogênio], Aglycal® [INCI: Manitol, Ciclodextrina, Glicogênio, Extrato de folha de Aratostaphylos Uva Ursi], Cytokinol® LS [INCI: Caseína hidrolisada, Proteína hidrolisada de levedura, HCl de lisina] ou Firmiderm® LS9120 [INCI: Extrato de folha de Terminalia Catappa, Extrato de flor de Sambucus Negra, PVP, Ácido tânico] comercializado por Laboratoires Serobiologiques/Cognis/BASF, Liftline® [INCI: Proteína hidrolisada do trigo], Raffermine® [INCI: Farinha de soja hidrolisada] ou Ridulisse C® [Proteína de soja hidrolisada] comercializado por Silab, Serilesine® [INCI: Hexapeptídeo10], DecorinylTM [INCI: Tripeptídeo10 Citrulina], Trylagen® [INCI: Extrato de fermento de Pseudoalteromonas, Proteína de trigo hidrolisada, Proteína de soja hidrolisada, Tripeptídeo10 Citrulina, Tripeptídeo1], Silusyne™ [INCI: Óleo de soja (Glycine Soja), Sesquioleato de sorbitano, Iso-hexadecano, Hialuronato de sódio, Hidróxi propil lauril diamônio, Proteína hidrolisada da soja, Acetil hexapeptídeo-39] or Adifyline™ [INCI: Acetil hexapeptídeo-38] comercializado por Lipotec/Lubrizol, Ursolisome® [INCI: Lecitina, Ácido ursólico, Atelocolágeno, Goma xantana, Sulfato sódico de condroitina], Eperuline [INCI: Maltodextrina, Extrato de casca de Eperua Falcata] ou Collalift® [INCI: Extrato de malte hidrolisado] comercializado por Coletica/Engelhard/BASF, Syn®-Coll [INCI: Palmitoil tripeptídeo-5] comercializado por Pentapharm/DSM, Hydriame® [INCI: Água (Aqua), Glicosaminoglicanos, Goma esclerótica] comercializado por Atrium Biotechnologies/Unipex Innovations, Sphingokine NP [INCI: Caprooil fitosfingosina] comercializado por Evonik, Body3 Complex [INCI: Bentonita, Extrato de noz de Butyrospermum Parkii (Carité), Extrato de fruto de Persea Gratissima (Abacate)] comercializado por Lucas Meyer, Prosynergen DF [INCI: Filtrado de extrato de fermento de Lactobacillus/Ulkenia Amoeboidea] comercializado por Lonza ou IP2000 [INCI: Dextrano, Trifluoroacetol tripeptídeo-2] comercializado por Institut Europeen de Biologie Cellulaire/Unipex Innovations, entre outros.

[72] A composição pode compreender adicionalmente um agente que reduz o teor de triglicerídeos de adipócitos, um agente que atrasa a diferenciação de adipócitos, um agente anticelulite, um agente lipolítico, um agente venotônico, um agente que inibe a expressão de PGC-1α ou um agente que inibe a atividade de PPARY. Tais agentes podem ser selecionados, por exemplo e não restritos a extratos ou extratos hidrolisados de Alchemilla vulgaris, Angelica sinensis, Armeniacea sp., Arnica montana L, Atractylodis platicodon, bamboo, Betula alba, Bupleurum chinensis, Calendula officinalis, cangzhu, Cecropia obtusifolia, Celosia cristata, Centella asiatica, Chenopodium quinoa, Chrysanthellum indicum, Cimifuga racemosa, Citrus aurantium amara, Cnicus benedictus, Coffea arabica, Cola nipida, Coleus barbatus, Coleus blumei, Coleus esquirolii, Coleus forskohlii, Coleus scutellaroides, Coleus sp., Coleus xanthantus, Commiphora myrrha, Crithmum maritimum, Cuminum cyminum, Dioscorea colettii, Dioscorea villosa, Eugenia caryophyllus, Filipendula ulmaria L, Foeniculum vulgare, Fucus vesiculosus, Gelidium Cartilagineum, Ginkgo biloba, ginkgo biloba, Glycine max, Glycyrrhiza glabra, Hedera helix (ivy extract), Hibiscus sabdariffa, Hordeum vulgare, Humulus lupulus, Hyperycum perforatum, Ilex paraguariensis, Kigelia africana, Laminaria digitata, Lupinus perennis, Nelumbium speciosum, Orthosiphon stamincus benth, Panax ginseng, Paullinia cupana, Peumus boldus, Phyllacantha fibrosa, Piper methysticum, Piper nigrum, Prunella vulgaris, Prunus amygdalus dulcis, Rosmarinus officinalis, Rubus idaeus, Ruscus aculeatus (extrato de gilbardeira), Salvia officinalis L, Sambucus nigra, Serenoa repens, Smilax aristolochiaefolia, Spirulina platensis algae, Taraxacum erythrospermum, Taraxacum officinale, chá verde, Ulmus rubra, Uncaria tomentosa, Verbena officinalis, Vitex agnus- castus, Dysmorphococcus globosus, entre outros, alverina, citrato de alverina, di-hidromiricetina, coenzima A, lipase, cerulenina, rutina, glaucina, esculina, visnadina, cafeína, teofilina, teobromina, aminofilina, xantina, carnitina, forscolina, escina, ruscogenina, hederina, iodeto de trietanolamina, agentes indutores de síntese de AMPc, Lanachrys® [INCI: Extrato de Chrysanthellum] comercializado por Atrium/Unipex, Slim-Excess™ [INCI: Água, Butileno Glicol, Cloreto de sódio, Carragenana hidrolisada, Goma xantana], Sveltine™ [INCI: Água, Butileno glicol, Carnitina, Lecitina, Cafeína, Carbômero, Ácido Salicílico, Atelocolágeno, Extrato de Centella Asiática, Esculina, Sulfato de Condroitina de Sódio], Peru Liana [INCI: Extrato de Uncaria Tomentosa] ou Flavenger™ [INCI: Triglicerídeo caprílico/cáprico, Sililato de sílica dimetila, Oleato de glicerila, Caprilato de quercetina] comercializado pela BASF, Scopariane [INCI: Sphacelaria Scoparia], Phyco R75 [INCI: Laminaria Digitata], Pheoslim [INCI: Extrato de Phyllacantha Fibrosa], Cera de trigo sarraceno [INCI: Polygonum fagopyrum] ou Areaumat Samphira [INCI: Extrato de Crithmum Maritimum], Actiporine 8.G [Glicerina, Água, Extrato de Jania rubens] comercializado por Codif, Slimming Factor Karkade™ [INCI: Hibiscus Sabdariffa] comercializado por Cosmetochem, Liposuctionine [INCI proposto: Acetil Hexapeptídeo] comercializado por Infinitec Activos, Xantalgosil C® [INCI: Acefilina Metilsilanol Manuronato], Theophyllisilane C® [INCI: Metilsilanol Carboximetil Teofilina Alginato], Glutrapeptide® [INCI: Piroglutamilamidoetil Indol] ou Cafeisilano C [INCI: Alginato de Siloxanotriol, Cafeína, Butileno Glicol] comercializado por Exsymol, Timiline® [INCI: ácido poliglicurônico] comercializado por Greentech, Visnadina [INCI: Visnadina] ou Fitossoma de flavonoides diméricos de Ginkgo Biloba [INCI: Fosfolipídios, Extrato de folha de Ginkgo Biloba] comercializado por Indena, Slimfit® LS 9509 [INCI: Extrato de casca de Cecropia Obtusifolia] comercializado por Laboratoires Serobiologiques/Cognis/BASF, Silusyne™ [INCI: Óleo de soja (Glycine Soja), Sesquioleato de sorbitano, Iso-hexadecano, Hialuronato de sódio, Hidróxi propil lauril diamônio, Proteína hidrolisada da soja, Acetil hexapeptídeo-39] ou Liporeductyl® [INCI: Água, Glicerina, Lecitina, Cafeína, Gilbardeira (Ruscus Aculeatus), Extrato de raiz, Maltodextrina, Sílica, Hidroiodeto de chá, Propileno glicol, extrato de hera (Hedera Helix), Carnitina, Escina, Tripeptídeo-1, Goma xantana, Carragenana (Chondrus Crispus), EDTA dissódico] comercializado por Lipotec/Lubrizol, Complexo Iso-Slim [INCI: Isoflavonas de Soja, Cafeína, Carnitina, Extrato de Spirulina Platensis, Polissorbato 80, Álcool, Fenoxietanol, Água], Happybelle-PE [INCI: Lecitina, Extrato de Vitex Agnus Castus, Glicerina, Tetraisopalmitato de Ascorbila, Tocoferol, Triglicerídeo Caprílico/Cáprico, Ciclodextrina, Álcool, Água] ou AmaraShape [INCI: Lecitina, Cafeína, Extrato de Citrus Aurantium Amara, Pentileno Glicol, Álcool, Água] comercializado por Mibelle Biochemistry, Regu®-Slim [INCI: Maltodextrina, Cafeína, Extrato de semente de Paullinia Cupana, Carnitina, Celulose Microcristalina, Ácido Cisteico, Sulfonato de Panteína] ou Regu®-Shape [INCI: Ácido Linoleico Isomerizado, Lecitina, Glicerina, Polissorbato 80] comercializado por Pentapharm/DSM, Provislim™ [INCI: Propanodiol, Água (Aqua), Fisetina, Cetona de framboesa], Myriceline [INCI: Di-hidromiricetina], Drenalip [INCI: Extrato de raiz de Ruscus Aculeatus, Extrato de casca de Citrus Medica Limonum, Extrato de Solidago Virgaurea, Extrato de raiz de Astragalus Membranaceus] ou Lipout™ [INCI: Extrato de plâncton] comercializado por Provital, Actisculpt [INCI: Extrato de Commiphora Myrrha, Extrato de raiz de Coleus Forskohlii] comercializado por Givaudan, Perfeline® [INCI: Água, Carnitina, Cafeína, Extrato de Ruscus Aculeatus] ou CellActive® Shape [INCI: Fermento de proteína Chlorella Vulgaris/Lupinus Albus, Coleus Forskohlii, Cafeína] comercializado por Rahn, ProContour™ [INCI: Água, Álcool, Lecitina, Cafeína, Carnitina, Extrato de Folha de Centella Asiática, Fosfato de Potássio, Extrato de raiz de Coleus Forskohlii] comercializado por Rovi Cosmetics, Unislim™ [INCI: Extrato de Ilex Paraguariensis (folha), Água, Butileno Glicol, Extrato de semente (grão) de Coffea Arabica (café), Glicerídeos de amêndoa PEG-60, Glicerina, Cetil Hidroxietilcelulose], Redulite™ [INCI: Glicerina, Aqua, Etoxidiglicol, Sambucus Nigra, Poliacrilato de sódio], Pleurimincyl™ [INCI: Cafeína, extrato de Bupleurum Chinensis], Phytotal™ SL [INCI: Glicerina, Extrato de Verbena Officinalis, Butileno Glicol, Extrato de flor de Sambucus Nigra, Extrato de flor (cravo) de Eugenia Caryophyllus, Lecitina], Phytosonic™ [INCI: Aqua, Extrato de Euglena Gracilis, Cafeína, Extrato de folha de Glaucium Flavum], Ovaliss™ [INCI: Glicerina, Aqua, Coco-glicosídeo, Caprilil Glicol, Álcool, Glaucina], Lipocare™ [INCI: Cafeína, Coenzima A, extrato de Bupleurum Chinensis], Cyclolipase™ [INCI: Polimetacrilato de glicerila, Água, Cafeína, Lipase, Adenosina fosfato], Coaxel™ [INCI: Cafeína, Coenzima A, Carnitina, Água, Glicerina], Bodyfit™ [INCI: Glicerina, Aqua (Água), Coco-glicosídeo, Caprilil Glicol, Álcool, Glaucina], Intenslim™ [INCI: Extrato de cultura de calo de Globularia Cordifolia, Extrato de Zingiber Zerumbet, Cafeína] ou Vexel [INCI: Aqua, Propileno glicol, Lecitina, Cafeína, Palmitoil carnitina] comercializado por Sederma/Croda, Voluform [INCI: Palmitoil isoleucina], Adipoless [INCI: Butileno Glicol, Extrato de semente de Chenopodium Quinoa] comercializado por Seppic, Slimactive® [INCI: Extrato de folha de Peumus Boldus], Remoduline® [INCI: Extrato de flor de Citrus Aurantium Amara], Pro-Sveltyl [INCI: Extrato de Nelumbium Speciosum], Biosculptine® [INCI: Extrato de flor/semente de Celosia Cristata hidrolisado, Extrato de Prunella Vulgaris hidrolisado], Affiness® [INCI: Extrato de fruto de Coriandrum Sativum hidrolisado, Extrato de fruto de Citrus Aurantium Dulcis (Laranja)] ou Stemsvelt [INCI: Água, Butileno Glicol, extrato de Silybum marinum] comercializado por Silab, Delipidol [INCI: Tyrosyl Punicate], Guaraslim® [INCI: Butileno Glicol, Água, Cafeína, Extrato de semente de Paullinia Cupana, Extrato de casca de Ptychopetalum Olacoides] ou Caobromine® [INCI: Extrato de casca de Theobroma Cocoa] comercializado por Solabia, Abdoliance [INCI: Palmitato de sacarose, Polissorbato 20, Linolenato de glicerila, Extrato de semente de Paullinia Cupana, Maltodextrina, Óleo de Prunus Amygdalus Dulcis (amêndoa doce), Lecitina, Água, Extrato de casca de Citrus Aurantium Amara (laranja amarga), Fenoxietanol, Tocoferol], Betaphroline [INCI: Extrato de semente de Tephrosia Purpurea] ou PRO-DG [INCI: Água, extrato de planctôn] comercializado por Soliance, UCPeptide™ V [INCI: Água, Butileno Glicol, Pentapeptídeo] ou ATPeptide™ IS [INCI: Tripeptídeo-3] comercializado por Vincience/ISP entre outros, ou misturas dos mesmos.

[73] A composição pode compreender pelo menos um extrato adicional com propriedades antiedema e melhorar a permeabilidade vascular/microcirculação, por exemplo, escolhida dentre Legactif [INCI: Extrato de raiz de Ruscus Aculeatus, Extrato de casca de Citrus Limon (limão), Extrato de Solidago Virgaurea (vara-de-ouro) comercializado por Provital, Legance™ [INCI: Extrato de Zingiber Zerumbet] e Eyeliss [INCI: Hesperidina Metil Chalcona, Dipeptídeo-2, Palmitoil Tetrapeptídeo-7] comercializado por Sederma/Croda, Silidine® [INCI: Exsudato de Prophyridium Cruentum] comercializado por Greentech, Biophytex [INCI: Escina, Extrato de raiz de Ruscus Aculeatus, Glicirrizato de amônio, Extrato de Centella Asiatica, Proteína de levedura hidrolisada, Extrato de flor de Calendula Officinalis] comercializado por L. Sérobiologiques/BASF, Cytobiol Lumin-Eye [INCI: Niacinamida, Extrato de casca de Franxius Excelsior, Citrato de potássio de silanotriol] comercializado por Gattefossé, Regu®-Age [INCI: Proteína de Arroz Hidrolisada, Oxidorredutases, Proteína de Glycine Soja (soja)] comercializado por DSM.

[74] A composição pode compreender pelo menos um extrato adicional com atividade de despigmentação tal como, por exemplo, e em um sentido não limitativo, extratos de Achillea millefolium, Aloe vera, Azadirachta indica, Osmunda japonica, Artocarpus incisus, Bidens pilosa, Broussonetia papyrifera, Chlorella vulgaris, Cimicifuga racemosa, Emblica officinalis, Glycyrrhiza glabra, Glycyrrhiza uralensis, Ilex purpurea, Ligusticum lucidum, Ligusticum wallichii, Mitracarpus scaber, Morinda citrifolia, Morus alba, Morus bombycis, Naringi crenulata, Prunus domesticus, Pseudostellariae radix, Rumex crispus, Rumex occidentalis, Sapindus mukurossi, Saxifraga sarmentosa, Scutellaria galericulata, Sedum sarmentosum Bunge, Stellaria medica, Triticum Vulgare, Uva ursi ou Withania somnifera, entre outros, e/ou pelo menos um composto sintético, extrato ou produto derivado de um processo de biofermentação com atividade de despigmentação tal como, por exemplo, e em sentido não limitativo, ActiwhiteTM LS9808 [INCI: Aqua, Glicerina, Dilaurato de sacarose, Polissorbato 20, Extrato de Pisum sativum (ervilha)], Dermawhite® NF LS9410 [INCI: Manitol, HCl de Arginina, Fenilalanina, EDTA dissódico, Citrato de sódio, Ácido kójico, Ácido cítrico, Extrato de levedura] ou Radianskin™ [INCI: Ácido Hidroxifenoxi propiônico] comercializado por Laboratoires Serobiologiques/BASF, LumiskinTM [INCI: Triglicerídeo Caprílico/Cáprico, Diacetil-Boldina], MelaclearTM [INCI: Glicerina, Aqua, Ditiaoctanodiol, Ácido glicônico, Sutilains, Beta-caroteno] ou EtiolineTM [INCI: Glicerina, Butileno Glicol, Extrato de folha de Arctostaphylos uva ursi, Extrato de Mitracarpus scaber], O.D.A. White™ [INCI: Ácido octanodecanodioico], Wonderlight™ [INCI: Estróbilo de Humulus Lupulus (lúpulo)] comercializado por Sederma, SepiwhiteTM MSH [INCI: Undecilenoil fenilalanina] ou Seashine [INCI: Extrato de algas, Extrato de Undaria Pinnatifida] comercializado por Seppic, Achromaxyl [INCI: Aqua, Extrato de Brassica napus] comercializado por Vincience, GigawhiteTM [INCI: Aqua, Glicerina, Extrato de Malva sylvestris (malva), Extrato de folha de Mentha piperita, Extrato de Primula veris, Extrato de Alchemilla vulgaris, Extrato de Veronica officinalis, Extrato de folha de Melissa officinalis, Extrato de Achillea millefolium], Melawhite® [INCI: Extrato de leucócitos, AHA] (extrato de leucócitos, ácidos alfa-hidróxi), Melfade®-J [INCI: Aqua, Extrato de folha de Arctostaphylos uva-ursi, Glicerina, Ascorbil fosfato de magnésio] ou Regu®-Fade [INCI: Resveratrol] comercializado por Pentapharm/DSM, Albatin® [INCI: Ácido amino etil fosfórico, Butileno Glicol, Aqua] comercializado por Exsymol, TyrostatTM-11 [INCI: Aqua, Glicerina, Extrato de Rumex occidentalis] ou Melanostatine®-5 [INCI: Dextrano, Nonapeptídeo-1] comercializado por Atrium/Lucas Meyer, β-White [INCI: Oligopeptídeo-68] comercializado por Unipex, Darkout™ [INCI: Extrato de rizoma de Hypoxis Rooperi, Goma de Caesalpinia Spinosa] comercializado por Provital, Vivillume™ [INCI: Extrato de semente de Strelitzia Nicolai] comercializado por Lonza, Superox-C™ [INCI: Extrato de fruta de Terminalia Ferdinandiana] comercializado por Lucas Meyer, arbutina e seus isômeros, ácido kójico e derivados do mesmo, vitamina C e derivados da mesma, tais como, por exemplo, e em sentido não limitativo, ácido 6-O- palmitoilascórbico, ácido dipalmitoilascórbico, sal de magnésio de ácido ascórbico-2-fosfato (MAP), sal de sódio de ácido ascórbico-2-fosfato (NAP), ascorbil glicosídeo ou ascorbil tetraisopalmitato (VCIP) entre outros, retinol e derivados do mesmo, incluindo tretinoína e isotretinoína, idebenona, ácido hidroxibenzoico e derivados do mesmo, flavonoides, extrato de soja, extrato de limão, extrato de laranja, extrato de ginkgo, extrato de pepino, extrato de gerânio, extrato de uva-de-urso, extrato de alfarroba, extrato de canela, extrato de manjerona, extrato de alecrim, extrato de cravo, extrato de alcaçuz solúvel, extrato de folha de amora, niacinamida, liquiritina, resorcinol e derivados do mesmo, hidroquinona, α-tocoferol, Y—tocoferol, ácido azelaico, resveratrol, sais de mercúrio, ácido linoleico, ácido α-lipoico, ácido di-hidrolipoico, ácidos alfa hidroxi, ácidos beta hidroxi, ácido elágico, ácido ferúlico, ácido cinâmico, ácido oleanólico, aloesina e derivados da mesma e/ou inibidores de serina protease tais como, por exemplo, e em um sentido não limitativo, inibidores de triptase, tripsina ou PAR-2, entre outros.

[75] A composição pode compreender um agente adicional para estimular a síntese de macromoléculas dérmicas ou epidérmicas selecionado, por exemplo e não restrito a, do grupo formado por agentes de estimulação de síntese de colágeno, agentes de estimulação de síntese de elastina, agentes de estimulação de síntese de decorina, agentes de estimulação de síntese de laminina, agentes de estimulação de síntese de chaperona, agentes de estimulação de síntese de sirtuína, agentes de ativação de sirtuína, agentes de modulação de aquaporina, agentes de estimulação de síntese de fibronectina, agentes que inibem a degradação de colágeno, agentes que inibem a degradação de elastina, agentes que inibem serina proteases tais como calicreínas, elastase leucocítica ou catepsina G, agentes de estimulação da proliferação de fibroblastos, agentes de estimulação da proliferação de adipócitos, agentes que aceleram ou retardam a diferenciação de adipócitos, e agentes de reparo de DNA e/ou agentes de proteção de DNA, tais como e não restritos a extratos de Centella asiatica, Saccharomyces cerivisiae, Solanum tuberosum, Rosmarinus officinalis, Vaccinium angustifolium, extract of the algae Macrocystis pyrifera, Padina pavonica, extrato de soja, malte, linho, sálvia, trevo vermelho, kakkon, plantas de tremoço branco, extrato de avelã, extrato de milho, extrato de levedura, extratos de faia, extrato de sementes de leguminosas, extrato de hormônio vegetal, como giberelinas, auxinas ou citocininas, entre outros, ou extrato de zooplâncton salino, o produto de fermentação do leite com Lactobacillus Bulgaricus, asiáticosídeos e seus derivados, vitamina C e seus derivados, ácido cinâmico e seus derivados, Matrixyl® [INCI: Palmitoil pentapeptídeo-3], Matrixyl® 3000 [INCI: Palmitoil tetrapeptídeo-3, Palmitoil oligopeptídeo] ou Biopeptide CLTM [INCI: Polimetacrilato de glicerila, Propileno Glicol, Palmitoil oligopeptídeo] comercializado por Sederma/Croda, Antarcticine® [INCI: Extrato de fermento de Pseudoalteromonas], Decorinyl® [INCI: Tripeptídeo10 Citrulina], Serilesine® [INCI: Hexapeptídeo10], Lipeptide [INCI: Proteína vegetal hidrolisada], Aldenine® [INCI: Proteína de trigo hidrolisada, Proteína de soja hidrolisada, Tripeptídeo1], Relistase™ [INCI: Acetilarginiltriptofil Difenilglicina], ThermostressineTM [INCI: Acetil tetrapeptídeo-22], Peptídeo AC29 [INCI: Acetil tripeptídeo-30 citrulina], DiffuporineTM [INCI: Acetil hexapeptídeo-37], Silusyne™ [INCI: Óleo de soja (Glycine Soja), Sesquioleato de sorbitano, Iso-hexadecano, Hialuronato de sódio, Hidróxi propil lauril diamônio, Proteína hidrolisada da soja, Acetil hexapeptídeo-39] or Adifyline™ [INCI: Acetil hexapeptídeo-38] comercializado por Lipotec/Lubrizol, Drieline® PF [INCI:Betaglucano de levedura] comercializado por Alban Muller, Phytovityl C® [INCI: Água, Extrato de Zea Mays] comercializado por Solabia, Collalift® [INCI: Extrato de malte hidrolisado] comercializado por Coletica/Engelhard/BASF, Phytocohesine PSPTM [INCI: Sulfato de Beta-Sitosterol Sódico] comercializado por Vincience/ISP/Ashland, Neodermyl® [INCI: Complexo Metil Glicosídeo Fosfato Prolina Lisina Cobre], minerais tais como cálcio, entre outros, retinoides e seus derivados, isoflavonoides, carotenoides, em particular licopeno, pseudodipeptídeos, retinoides e seus derivados tais como retinol ou palmitato de retinila, entre outros, ou heparinoides, entre outros.

[76] Em um outro aspecto, a invenção provê o uso do extrato de fermento como descrito aqui na preparação de uma composição cosmética para o tratamento e/ou cuidado cosmético da pele, das membranas mucosas, do cabelo e/ou das unhas. O tratamento e/ou cuidado cosmético é como descrito aqui.

[77] Em um quarto aspecto da invenção, é provido o uso do extrato de fermento da invenção para o tratamento e/ou cuidado cosmético da pele, das membranas mucosas, do cabelo e/ou das unhas, em que o extrato de fermento está presente em uma composição como aqui descrita. Dessa forma, o quarto aspecto da invenção refere-se a uma composição cosmética que compreende uma quantidade cosmeticamente eficaz do extrato de fermento de uma cepa da espécie Eupenicillium crustaceum para o tratamento e/ou cuidado cosmético da pele, das membranas mucosas, do cabelo e/ou das unhas. A composição cosmética pode ser como descrita aqui. O tratamento e/ou cuidado cosmético é como descrito aqui.

[78] Em um quinto aspecto da invenção, é provido um método cosmético de tratamento e/ou cuidado da pele que compreende a administração de uma quantidade cosmeticamente eficaz do extrato de fermento à pele. O tratamento e/ou cuidado cosmético é como descrito aqui. Em uma modalidade, a administração é tópica. Em uma modalidade, a administração é transdérmica. Em uma modalidade, a aplicação tópica ou transdérmica é realizada por iontoforese, sonoforese, eletroporação, pressão mecânica, gradiente de pressão osmótica, cura oclusiva, microinjeções, injeções sem agulha por meio de pressão, por emplastros microelétricos, máscaras faciais ou qualquer combinação dos mesmos. Nesse aspecto da invenção, o extrato de fermento pode estar presente em uma composição cosmética, por exemplo as composições cosméticas descritas aqui. Dessa forma, a invenção provê um método cosmético de tratamento e/ou cuidado da pele que compreende a administração de uma composição cosmética que compreende uma quantidade cosmeticamente eficaz do extrato de fermento à pele.

[79] A frequência da aplicação ou administração da quantidade cosmeticamente eficaz do extrato de fermento pode variar amplamente, dependendo das necessidades de cada indivíduo, sugerindo uma gama de aplicação ou administração de uma vez por mês a 10 vezes por dia, de uma vez por semana a 4 vezes por dia, de três vezes por semana a três vezes por dia, ou uma ou duas vezes por dia.

[80] Em um outro aspecto, esta invenção refere-se a um método de estimulação de síntese de colágeno ou elastina que compreende a administração de uma quantidade cosmeticamente eficaz do extrato de fermento a células de fibroblastos dérmicas humanas (pele). DEPÓSITO DE MATERIAL BIOLÓGICO

[81] A cepa da espécie Eupenicillium crustaceum foi depositada na Colección Espanola de Cultivos Tipo (CECT) (Edificio 3 CUE, Parc Científic Universitat de Valencia, Catedrático Agustín Escardino 9, 46980 Paterna, Valencia, Espanha) sob as condições do Tratado de Budapeste. O depósito foi feito em 20 de março de 2014 e o número de depósito foi CECT-20901.

[82] Cada um dos documentos referidos acima é aqui incorporado por referência, incluindo quaisquer pedidos anteriores, listados acima especificamente ou não, dos quais é reivindicada prioridade. A menção de qualquer documento não é uma admissão de que esse documento é qualificado como técnica anterior ou constitui um conhecimento geral da pessoa versada em qualquer jurisdição. Exceto nos Exemplos, ou quando explicitamente indicado de outro modo, todas as quantidades numéricas nesta descrição que especificam quantidades de materiais, condições de reação, pesos moleculares, número de átomos de carbono e similares devem ser entendidas como aproximadas, isto é, sujeitas a uma variabilidade de ± 5%, ± 3%, ± 1%, ± 0,1% ou ± 0,01% sobre o valor indicado. Deve ser entendido que os limites de quantidade, faixa e razão superior e inferior aqui estabelecidos podem ser combinados independentemente. De modo similar, as faixas e quantidades para cada elemento da tecnologia aqui descrita podem ser usadas em conjunto com faixas ou quantidades para qualquer dos outros elementos.

[83] A invenção será agora ilustrada por meio dos seguintes exemplos não limitativos. EXEMPLOS Exemplo 1: Preparação do extrato de fermento produzido pela cepa de Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT-20901. A) Processo de cultura da cepa de Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT-20901.

[84] A cepa de Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT-20901 é cultivada em um fermentador, a 25°C e a um pH de 7,5, em um meio de cultura contendo água, 5 g/L de manitol como fonte de carbono, 5 g/L de extrato de levedura, 5 g/L de peptona de soja como fontes de carbono e nitrogênio e 30 g/L de sais marinhos. O meio de cultura é inoculado com um volume de 5% de uma pré-cultura em crescimento. A fermentação é realizada durante aproximadamente 1 semana, período durante o qual a cultura é alimentada com um suprimento de ar suficiente e agitada a velocidades de agitação entre 150 e 350 rpm. 8) Isolamento do extrato de fermento produzido pela cepa de Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT-20901.

[85] As células de Eupenicillium crustaceum são separadas do caldo de fermentação produzido pela etapa A), por centrifugação contínua a aproximadamente 10.000 g. O caldo de sobrenadantes é descartado e as células de Eupenicillium crustaceum são ressuspensas com tampão ^ de ringer (cloreto de sódio 2,25 g/L, cloreto de potássio 0,105 g/L, hexahidrato de cloreto de cálcio 0,12 g/L e hidrogenocarbonato de sódio 0,05 g/L). Após isso, as células são rompidas usando uma prensa francesa, com 2 ciclos de operação a 40 KPsi. Em seguida, o caldo rompido é extraído com isopropanol (com uma razão de volume de isopropanol:caldo rompido de 4,7:1,0) em um recipiente agitado ao longo de 3 h. Em seguida, a purificação do extrato é realizada por evaporação rotativa do extrato a uma temperatura de 40 a 50°C. O peso seco de uma amostra do extrato é então obtido por secagem do extrato (líquido) a 110°C até se atingir um peso constante. Especificamente, 2 mL do extrato foram secos a 110°C até o peso constante ser alcançado. O peso constante do extrato seco foi então usado para calcular a concentração em peso seco do extrato (peso seco da amostra dividido pelo peso da amostra). Isso dá um valor de 10% (P/P). Nos exemplos, a menos que especificado de outro modo, o extrato de fermento é usado na forma líquida (isto é, não seca) e, onde se refere ao peso do extrato, este é o peso seco equivalente do extrato. O o extrato líquido é mantido a uma temperatura de -20°C até o uso posterior. Exemplo 2: Caracterização físico-química do extrato de fermento produzido pela cepa de Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT-20901.

[86] Para a caracterização físico-química do extrato de fermento, análise de aminoácidos e peptídeos livres, análise de carboidratos (método fenol-sulfúrico) e análise de conteúdo lipídico são realizadas para três lotes diferentes do extrato da cepa de Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT-20901. O lote 1 é obtido de acordo com o Exemplo 1. Os lotes 2 e 3 são obtidos de acordo com o protocolo descrito no Exemplo 1, sendo a única diferença o uso de centrifugação descontínua equivalente às condições de centrifugação contínua descritas no Exemplo 1. Análise de aminoácidos livres e peptídeos

[87] O mesmo método é usado para a análise de aminoácidos livres e peptídeos, com a diferença de que, para os aminoácidos livres, a hidrólise (parte i) não é realizada, enquanto que para os peptídeos é realizada. i. Hidrólise

[88] Os três lotes do extrato de fermento da cepa de Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT-20901 têm os seguintes pesos secos: O lote 1 tem uma concentração de peso seco de 10% (P/P); O lote 2 tem uma concentração de peso seco de 18,4% (P/P); O lote 3 tem uma concentração de peso seco de 19,9% (P/P).

[89] Para cada lote, 25 mg de extrato são colocados em um tubo de hidrólise limpo de 10 mL. 1 mL de HC1 6N + 0,5% de fenol e a mistura é aquecida a 110°C durante 24 horas. Depois disso, a amostra hidrolisada é liofilizada e resolvida em 3 mL de HCl 20 mM. ii. Derivatização de aminoácidos.

[90] O pacote de química ACCQ-TAG, baseado em reagentes AccQ-Fluor (por WATERS Cromatografia, SA) é usado para analisar aminoácidos. Preaquecer um bloco de aquecimento a 55°C. Bater o frasco 2A levemente antes de abrir para garantir todos os AccQ. O Fluor Reagent Powder está no fundo do frasco. Enxaguar uma micropipeta limpa retirando e descartando 1 mL de AccQ^Fluor Reagent Diluent do Frasco 2B. Transferir 1 mL de AccQ^Fluor Reagent Diluent do Frasco 2B para o AccQ^Fluor Reagent Powder no Frasco 2A. Tampar o frasco 2A levemente e submeter a vórtice por 10 segundos. O AccQ^Fluor Reagent reconstituído pode ser armazenado à temperatura ambiente em um dessecador por até uma semana. Depois disso, os padrões de calibração (contendo entre 2 a 100 pmol/μL de cada aminoácido, exceto a cisteína que é de 1 a 50 pmol/μL) devem ser derivatizados. Adicionar 10 μL de padrão de calibração ao fundo de um tubo de amostra limpo e, em seguida, adicionar 70 μL de AccQ.Fluor Borate Buffer ao tubo de amostra e submeter a vórtice brevemente. Depois disso, adicionar 20 μL de AccQ.Fluor Reagent reconstituído ao tubo de amostra e submeter a vórtice por vários segundos. Incubar a mistura por 1 minuto à temperatura ambiente e depois aquecer o frasco durante 10 minutos a 55°C.

[91] O mesmo método é seguido com a amostra (substituir o padrão de calibração para a amostra hidrolisada). A coluna usada para a análise é uma AccQTluor Column (por WATERS) e os eluentes são A) AccQTluor Eluent A, e B) água/acetonitrila (40:60). O gradiente de eluição começa a 0% de B e em 0,2 minutos aumenta para 2% de B. Então, no minuto 15, a concentração de B aumenta para 7% e, no minuto 19, para 10% de B. A concentração de B continua aumentando e, no minuto 32, a concentração de B é 33%. Então, a concentração permanece estável durante 1 minuto e depois disso a concentração de B aumenta para 100% em um minuto. O B a 100% é mantido constante por três minutos para lavar a coluna e, finalmente, a concentração volta para 0% para começar de novo. O fluxo é constante durante toda a análise (1 mL/min) e a detecção é realizada em um Detector de Fluorescência úe.x = 250 nm; xem = 395 nm). O volume de injeção é de 10 μL e a temperatura do forno é de 37°C.

[92] A concentração de aminoácidos livres (amostra não hidrolisada) e peptídeos (concentração total a partir da qual a concentração de aminoácidos livres pode ser deduzida) é calculada com base nos padrões de calibração. Análise de carboidratos (método fenol-sulfúrico)

[93] Diferentes padrões de glicose são dissolvidos em água em diferentes concentrações (entre 20 e 500 μg/mL). Separadamente, 500 mg de fenol são dissolvidos em 10 mL de água de modo a preparar uma solução de fenol a 5%. Cada lote do extrato de fermento da cepa de Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT-20901 é preparado a 10 mg/mL em água. Então, para 100 μL desta solução (ou um dos padrões), são adicionados 100 μL da solução de fenol a 5%. A solução resultante é misturada e depois são adicionados 500 μL de ácido sulfúrico. Após a mistura, a solução de reação é incubada a 40°C durante 30 minutos. Depois disso, a reação é mantida à temperatura ambiente por 15 a 20 minutos e a absorbância a 490 nm é lida. Com base na calibração realizada com os padrões de glicose, calcula-se a concentração de carboidratos da amostra. Análise de teor de lipídios (teste de extração de hexanos)

[94] 5 g de cada um dos lotes 1, 2 e 3 são dissolvidos em 10 mL de hexano. Essa solução é sonicada durante 10 minutos e misturada em um vórtice durante 5 minutos. Depois disso, a solução é centrifugada a 4000 rpm durante 10 minutos para separar o sólido. A fase líquida é recuperada e depois o sólido é lavado duas vezes com 5 mL de hexano para extrair todos os lipídios e depois descartados. As fases orgânicas são misturadas e evaporadas através do fluxo de nitrogênio. Depois disso, o sólido obtido a partir da extração é seco durante a noite em um liofilizador e pesado. A concentração de lipídios da amostra é calculada como a porcentagem do sólido pesado extraído da amostra total pesada. Análise de teor de lipídios (teste de dicromato)

[95] Este método é uma alternativa ao teste de extração de hexanos acima e é útil quando há pequenas quantidades de amostra. 30 mg de cada um dos lotes 1, 2 e 3 são dissolvidos em 2,5 mL de hexano. Essa solução é sonicada durante 10 minutos e misturada em um vórtice durante 5 minutos. Depois disso, a solução é centrifugada a 4000 rpm durante 10 minutos para separar o sólido. A fase líquida é recuperada e depois o sólido é lavado duas vezes com 5 mL de hexano para extrair todos os lipídios e depois descartados. As fases orgânicas são misturadas e evaporadas através do fluxo de nitrogênio. Após isso, 3 mL de uma solução reativa (2,5 g de K2Cr2O7 são dissolvidos em 1L de H2SO4 36N) são adicionados e aquecidos a 100°C durante 45 minutos, misturando três vezes em momentos diferentes. A amostra é resfriada até a temperatura ambiente e uma alíquota de 0,2 mL é diluída em 2,5 mL de água. Depois disso, a absorbância a 350 nm é lida e subtraída de uma peça em branco (o mesmo tratamento, mas sem amostra). A diferença é proporcional à quantidade de lipídios. É usada uma amostra padrão para calcular os lipídios nas amostras em que o conteúdo de lipídios é desconhecido comparando a diferença de absorbância.

[96] Os resultados da análise de aminoácidos livres e peptídeos, análise de carboidratos e análise de conteúdo lipídico realizadas para os três lotes diferentes da cepa de Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT-20901 são apresentados na Tabela 1. Os resultados da análise lipídica para o Lote 1 foram obtidos usando o teste de extração de hexanos e aqueles para os Lotes 2 e 3 foram obtidos usando o teste de dicromato.

Tabela 1 - Porcentagens relativas em peso de aminoácidos livres, peptídeos, carboidratos e lipídios. Caracterização por HPLC

[97] O extrato de fermento da cepa de Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT-20901 obtido de acordo com o Exemplo 1 é diluído a 1 mg/mL com água/2-propanol (1:4, v/v) e é analisado por HPLC com uma coluna de exclusão de tamanho TSKgel G2000SWXL usando as seguintes condições: a coluna é um TSKgel G2000SWXL (7,8 mm ID x 30,0 cm de comprimento, tamanho de partícula 5 mm, tamanho de poro 125 Â). O eluente é fosfato tampão 0,1 M pH 6,7 + Na2SO4 0,1 M e a eluição é mantida isocrática usando um fluxo de 1 mL/min. O detector é um UV ú=220 nm), a injeção é de 25 μL e a temperatura do forno é de 37°C.

[98] O extrato de fermento mostra picos a 12 e 12,3 min, picos com distribuição gaussiana com tempo de residência entre 10 e 20 minutos. 73,5% da área total está localizada entre 11 e 16 minutos, e 65% da área total está localizada entre 11 e 14 minutos. Usando padrões diferentes com diferentes pesos moleculares (tiroglobulina, 670.000 Da; albumina, 66.000 Da; ribonuclease, 13.700 Da e ácido aminobenzoico, 122 Da), o peso molecular é calculado a partir dos tempos de retenção. Os picos do extrato de fermento (12 e 12,3 minutos) têm um peso molecular entre 325,9 Da e 229,2 Da, com uma distribuição gaussiana com intervalo entre 3.400 Da e 122 Da (esse é o peso mínimo dos padrões) quando calculado usando os padrões. 73,5% da área sob a distribuição gaussiana tem um peso molecular entre 1053,9 e 122 Da quando calculado com os padrões. Exemplo 3: Estudo in vitro da síntese de colágeno tipo I em fibroblastos dérmicos humanos por Ensaio de Imunoabsorção Enzimática (ELISA).

[99] O colágeno tipo I é o principal tipo de colágeno presente na pele e é responsável pela força e resiliência da pele. O colágeno degenera e lisa com a idade. Os fibroblastos são os principais produtores celulares de colágeno. Assim, a quantificação in vitro da indução de síntese de colágeno como resultado do tratamento de fibroblastos dérmicos humanos (HDFa) com um ativo cosmético candidato provê uma indicação de se esse candidato será ou não eficaz como um agente antienvelhecimento da pele. Se o candidato induz síntese de colágeno, este é um indicador de que o candidato será eficaz como um agente antienvelhecimento da pele.

[100] A indução de colágeno por produtos cosméticos é avaliada por um Ensaio de Imunoabsorção Enzimática (ELISA).

[101] Os fibroblastos dérmicos humanos são tratados com tripsina e 5x104 células/poço são semeados em placas de 48 poços. Após 24 h (horas) de incubação a 37°C em ar umidificado com CO2 a 5%, meio fresco é adicionado com diluições escalares do extrato da cepa da espécie Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT20901, obtido de acordo com o Exemplo 1, a 20 a 0,1 μg/mL. Cada concentração é testada em triplicado. As células não tratadas são semeadas como controles em placas de 48 poços em 6 poços. As células são incubadas por mais 48h a 37°C em ar umidificado com CO2 a 5%. Em seguida, o meio do poço é coletado para que possa ser analisado por ELISA. Uma curva padrão é preparada com colágeno tipo I de pele de vitelo (Sigma) a partir de uma solução de carga de 1 mg/ml. As diluições de curva padrão e os sobrenadantes coletados a partir dos tratamentos de cultura de células são transferidos para placas de 96 poços. O colágeno nas amostras e nas diluições de curva padrão reveste as paredes das placas de 96 poços, que são mantidas a 4°C em uma atmosfera umidificada durante a noite. Em seguida, as placas de poço são lavadas três vezes com PBS-Tween-20 a 0,05% (v:v) (Sigma) e bloqueadas por 1 h com albumina sérica bovina a 3% (BSA) (w:v) (Sigma). Após o bloqueio, as placas dos poços são incubadas com anticorpo anti-colágeno tipo I (Sigma) durante 2 h. Após essa incubação, o anticorpo secundário IgG-HRP (Molecular Probes) é adicionado. Nesse momento, as placas dos poços são incubadas com substrato de fosfatase (OPD, Sigma) durante 30 minutos sob agitação. A reação é interrompida pela adição de H2SO4 3M e a absorbância a 490 nm é lida em um leitor de placas de microtitulação TECAN GENios. A concentração de colágeno é determinada usando uma regressão linear da curva padrão de colágeno tipo I. Os resultados do aumento da síntese de colágeno em relação às células não tratadas (controle) são mostrados na Tabela 2.

Tabela 2 - A média da porcentagem de colágeno tipo I em relação ao controle para 3 ensaios.

[102] Os resultados mostram que o extrato da invenção promove a síntese de colágeno tipo I em células de fibroblastos humanos. Exemplo 4: Ensaio in vitro para atividade de colagenase

[103] O colágeno é a proteína mais abundante no tecido conjuntivo da pele. Ele forma uma estrutura tipo malha que ajuda a suportar novas células à medida que elas crescem, ao mesmo tempo em que proveem flexibilidade necessária. Existe síntese contínua de colágeno e degradação de colágeno na pele e o equilíbrio entre esses processos determina tanto a resistência à tração quanto a elasticidade da pele. A degradação do colágeno aumenta com a idade. A colagenase é uma metaloproteinase que divide o colágeno em fragmentos. Segue-se que os ativos cosméticos que podem inibir a atividade da colagenase podem ser eficazes na melhoria da resistência da pele e na atuação como agente antienvelhecimento da pele.

[104] A atividade da colagenase é medida com o Kit de Ensaio de Gelatinase/Colagenase EnzChek (Molecular Probes). O extrato da cepa da espécie Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT20901 é obtido de acordo com o exemplo 1 e é transformado em soluções de concentrações de 10 e 0 (controle) mg/ml de extrato em tampão de reação. Essas soluções são adicionadas a uma microplaca preta de 96 poços. Cada concentração é testada em duplicado. Em seguida, 20 μl de 1mg/ml DQ Gelatin são adicionados a cada poço e 100 μl de colagenase. A placa é incubada à temperatura ambiente, protegida da luz, durante um período de 2 horas e a fluorescência é medida em vários pontos de tempo. A fluorescência é lida a Xexc= 495 nm e Aem= 515 nm em um leitor de placa de microtitulação Tecan GENios.

[105] A Tabela 3 mostra os resultados que são exibidos como a média da porcentagem de fluorescência em relação ao controle para um mínimo de 2 ensaios.

Tabela 3

[106] Os resultados mostram que o extrato da invenção pode inibir a atividade da colagenase. Exemplo 5: Avaliação da indução de elastina em fibroblastos dérmicos humanos

[107] A elastina é uma proteína no tecido conjuntivo que é elástica e ajuda a manter a pele flexível, mas firme, provendo uma reação de retorno se a pele é puxada. Os fibroblastos são os principais produtores celulares de elastina. Por esse motivo, a quantificação in vitro de indução de elastina por ativos cosméticos em fibroblastos dérmicos humanos provê informações sobre potenciais efeitos antienvelhecimento que os ativos cosméticos podem ter sobre a pele. Se o ativo cosmético induz síntese de colágeno, é um indicador de que o ativo cosmético será eficaz como um agente antienvelhecimento da pele.

[108] A indução de elastina por ativos cosméticos é avaliada pelo Ensaio de elastina Fastin (Tebu-Bio).

[109] Os fibroblastos dérmicos humanos são tratados com tripsina e 3 x 105 células/poço são semeados em frascos de cultura. Após incubação a 37°C em ar umidificado com CO2 durante 72 horas, meio fresco é adicionado com o extrato da cepa da espécie Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT20901, obtido de acordo com o Exemplo 1, a concentrações de 1, 0,1 e 0,01 μg/mL. As células não tratadas são semeadas como controles negativos para síntese de elastina. Cada concentração é testada em duplicado. As células são incubadas por mais 48h a 37°C em ar umidificado com CO2 a 5%. Em seguida, a elastina é extraída das células. Para fazer isso, o meio de células é removido e as células são lavadas duas vezes com PBS (Sigma) e depois Solução de Dissociação de Células (Sigma) é adicionada. A suspensão celular é transferida para tubos de microcentrifugação e ácido oxálico 1M é adicionado e incubado durante 1 hora a 100°C. Uma vez que a elastina é solubilizada, os padrões são preparados usando α-elastina provida com o kit de ensaio. A partir desse ponto, amostras e padrões são processados em conjunto com instruções para isolamento de elastina e corante. Finalmente, o corante é extraído com Reagente de Dissociação de Corante provido com o kit e a absorbância é medida a 540 nm em um leitor de placa de microtitulação TECAN GENios.

[110] Na Tabela 4, a média da porcentagem de indução de elastina em relação ao controle negativo é mostrada para um mínimo de 3 ensaios.

Tabela 4

[111] Os resultados mostram que o extrato da invenção promove a síntese de elastina em células de fibroblastos dérmicos humanos. Exemplo 6: Ensaio in vitro para atividade de elastase

[112] A elasticidade da pele é uma propriedade mecânica influenciada pela elastina, uma proteína na derme que, juntamente com o colágeno e os glicosaminglicanos, compõe o tecido conjuntivo. O metabolismo das proteínas do tecido conjuntivo diminui durante o processo de envelhecimento e existe uma presença cada vez maior de enzimas, principalmente elastases e colagenases, responsáveis por decompor a elastina e o colágeno. Assim, uma forma possível de evitar a resultante perda de elasticidade na pele é usar ingredientes ativos capazes de inibir a atividade das enzimas elastase.

[113] A atividade da elastase é medida com o kit de ensaio de elastase EnzChek (Molecular Probes).

[114] O extrato da cepa da espécie Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT20901, é obtido de acordo com o Exemplo 1, e é transformado em soluções de concentrações de 10, 5, 2, 1 e 0 (controle) mg/ml de extrato em tampão de reação. As soluções são adicionadas a uma microplaca preta de 96 poços. Cada concentração é testada em duplicado. 50 μl de solução de trabalho de elastina (1 mg/ml) são adicionados a cada poço juntamente com 100 μl de enzima diluída. A microplaca é incubada à temperatura ambiente, protegida da luz, durante um período de 4 horas e a fluorescência é medida em vários pontos de tempo. A fluorescência é lida a Xexc= 490 nm e Xem= 535 nm em um leitor de placa de microtitulação TECAN GENios.

[115] Na Tabela 5 é mostrada a média da porcentagem de fluorescência em relação ao controle para um mínimo de 2 ensaios..

Tabela 5

[116] Os resultados mostram que o extrato da invenção pode inibir a atividade da elastase. Exemplo 7: Avaliação in vitro da formação de produtos finais de glicação avançada

[117] A glicação é a reação não enzimática entre uma proteína e um açúcar redutor, como a glicose. A reação forma o que são conhecidos como produtos finais de glicação avançada (AGEs). A glicação altera a estrutura e a função da proteína levando à disfunção da proteína. Na pele, acredita-se que a glicação do colágeno tipo I está ligada ao desenvolvimento da opacidade da pele e à diminuição da elasticidade da pele. A glicação aumenta com a idade. Dessa forma, os ativos cosméticos que são capazes de inibir a formação de AGEs podem ter um efeito na melhoria da elasticidade e da luminosidade da pele. Tais ativos cosméticos seriam agentes eficazes contra o envelhecimento da pele.

[118] A glicose a 0,2M e o colágeno a 0,6% (v:v) são incubados na presença do extrato da cepa da espécie Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT20901, obtido de acordo com o Exemplo 1, a concentrações de colágeno de 100, 1 e 0 (controle basal) μg/ml. Cada concentração é testada em duplicado. Todas as soluções são incubadas a 60°C, amostradas a 0 e 3 dias e a formação de AGE é medida.

[119] A formação de AGE entre glicose e colágeno tipo I é avaliada com o Kit ELISA Competitivo de Produto Final de Glicação Avançada OxiSelectTM (Cell Biolabs). As amostras ou os padrões AGE-BSA são então adicionados à placa ELISA pré-absorvida do conjugado AGE. Após uma breve incubação, adiciona-se o anticorpo policlonal anti-AGE, seguido por um anticorpo secundário conjugado HRP (peroxidase de raiz-forte). Após a incubação com o anticorpo secundário, as placas de poço são incubadas com a Solução de Substrato e a reação é interrompida pela adição da Solução de Paragem. A absorbância é medida a 450 nm em um leitor de placas de microtitulação TECAN GENios.

[120] A Tabela 6 mostra a média da porcentagem de AGEs em relação ao controle para 3 ensaios._

Tabela 6

[121] Os resultados mostram que a uma concentração de 1 μg/ml, o extrato da invenção inibe a produção de AGEs (a quantidade de AGEs produzida é 80,6% da quantidade produzida quando não há nenhum extrato presente). Aumentar a quantidade de extrato para 100 μg/ml resulta em inibição aumentada da produção de AGEs, com a quantidade de AGEs produzida caindo para 70,3% da produção quando nenhum extrato está presente. Exemplo 8: Ensaio in vitro para permeabilidade vascular

[122] Embora os olhos inchados e as bolsas sob os olhos sejam causados por vários fatores contribuintes, o excesso de retenção de líquidos ou edema na área sob os olhos é considerado uma das principais causas. O fluido pode se acumular por vários motivos, incluindo má circulação linfática e o aumento da permeabilidade capilar. Portanto, os ativos cosméticos que diminuem a permeabilidade vascular, reduzindo assim a quantidade de fluido que se acumula no compartimento intersticial, podem ser bons candidatos para o tratamento cosmético de olhos inchados e bolsas sob os olhos.

[123] As células endoteliais da veia umbilical humana são tratadas com tripsina e 5 x104 células/poço são semeadas em insertos contendo 1,0 μm poros simétricos em placas de cultura de tecidos de 96 poços. Após incubação a 37°C em ar umidificado com CO2 a 5% durante 72 horas, a monocamada endotelial é formada e oclui os poros da membrana. Nesse ponto, meio fresco é adicionado com o extrato da cepa da espécie Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT20901, obtido de acordo com o Exemplo 1, a concentrações de 5, 1 e 0,2 μg/mL. As células não tratadas são usadas como controles para permeabilidade vascular. Cada concentração é testada em triplicado. Todas as células são incubadas durante 24 horas a 37°C e CO2 a 5%.

[124] Após o tratamento, o FITC-Dextrano é adicionado no topo das células, permitindo que ele penetre através da monocamada celular. A extensão da permeabilidade é determinada medindo a fluorescência da solução do poço da placa em Xexc= 485 nm e Aem= 535 nm em um leitor de placa de microtitulação TECAN GENios após 20 minutos.

[125] A Tabela 7 mostra a média da porcentagem de inibição de permeabilidade vascular em relação ao controle para um mínimo de 3 ensaios.

Tabela 7

[126] Os resultados mostram que no extrato da invenção serviu para inibir a permeabilidade vascular, na medida em que a quantidade de FITC- Dextrano que permeava através da monocamada celular era até 20,8% menor quando o extrato está presente em comparação com quando nenhum extrato está presente. Exemplo 9: Ensaio in vitro para influência na degradação de bilirrubina

[127] Recentemente, a bilirrubina foi considerada como um fator na presença de círculos escuros ao redor do olho. É bem sabido que a microcirculação ao redor dos olhos é um dos fatores mais importantes na formação de círculos escuros. O vazamento de vasos sanguíneos em edemas ao redor dos olhos resulta no acúmulo de bilirrubina e isso produz círculos escuros com cores que podem variar de amarelo para azul. Assim, um ativo cosmético que pode promover a degradação da bilirrubina ao redor dos olhos pode ser um bom agente cosmético para ajudar a reduzir as olheiras.

[128] O teste é realizado em frascos protegidos por luz, a fim de evitar a oxidação da bilirrubina. Adiciona-se 1 ml de solução de bilirrubina a 0,1% em água/2-propanol (1:1, v/v) em um balão volumétrico de 10 mL. Depois disso, 4 mL do extrato da cepa da espécie Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT20901, obtido de acordo com o exemplo 1, em uma solução em água/2-propanol (1:1, v/v) a 25 mg/mL e depois o balão é enchido com água/2-propanol (1:1, v/v) para completar os 10mL. Nessas condições, a concentração final do extrato da cepa Eupenicillium crustaceum é 1%. Ao mesmo tempo, é preparado um controle negativo sem a solução de extrato de 25 mg/mL de Eupenicillium crustaceum, adicionando 1 mL de solução de bilirrubina a 0,1% e o volume de água/2-propanol (1:1, v/v) necessário para completar os 10 mL do balão volumétrico. Uma vez que ambas as soluções são preparadas, elas são transferidas para frascos de vidro protegidos da luz e mantidas sob agitação constante à temperatura ambiente. A concentração de bilirrubina é seguida por HPLC em momentos diferentes.

[129] A área de Bilirrubina Conjugada no tempo zero é normalizada para 100% para comparar as três cópias. Após 24 horas, a solução de extrato de Eupenicillium crustaceum a 1% é capaz de reduzir a concentração de bilirrubina em 19,36%. Na Tabela 8 a área normalizada de bilirrubina em momentos diferentes é mostrada.

Tabela 8

[130] Os resultados mostram que, após 24 horas, na amostra que contém o extrato da invenção, a quantidade de bilirrubina presente é de 80,64% da amostra de controle. Dessa forma, é conseguida uma redução da bilirrubina de 19,36%, em relação à degradação normal. Exemplo 10: Preparação de uma composição cosmética que compreende o extrato de fermento da cepa da espécie Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT20901

[131] É preparada uma composição cosmética, cujos ingredientes são apresentados na tabela 9 abaixo. Em um recipiente apropriado, os ingredientes da Fase A são dissolvidos e o ingrediente da Fase A1 é adicionado pouco a pouco, com agitação até se conseguir uma dispersão total. Em seguida, adiciona-se o ingrediente da Fase A2 e a mistura resultante de ingredientes foi constantemente agitada até dissolverem, e foi aquecida a 70 a 75°C.

[132] Em outro recipiente, os ingredientes da fase B são derretidos a 70 a 75°C, e foram adicionados à mistura de ingredientes das fases A, A1 e A2, pouco a pouco, sob agitação de turbina.

[133] Então, a 40°C, os ingredientes da Fase C são adicionados pouco a pouco e agitando. Subsequentemente, os componentes da Fase D são adicionados pouco a pouco, agitando até a dispersão total, e o componente da Fase E é adicionado pouco a pouco com agitação até a dispersão total. O pH foi ajustado para 6,0 a 6,5 por adição de hidróxido de sódio (q.s quantidade suficiente para se ajustar a esse pH) sob agitação (Fase F), obtendo-se uma composição cosmética com as proporções mostradas na tabela 9. A composição é um creme adequado para administração tó pica.

Tabela 9 Exemplo 11: Estudo in vivo com a composição do Exemplo 10, testando a eficácia do extrato de fermento da cepa da espécie Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT20901 para o tratamento de rugas de pé-de-galinha em voluntárias mulheres.

[134] Esse estudo é realizado ao longo de 14 dias, sendo as medidas feitas inicialmente no tempo = 0 e depois após 14 dias. São incluídos 20 voluntários e são mulheres caucasianas entre 40 e 54 anos. Os indivíduos aplicam o creme do Exemplo 10 contendo extrato de fermento da cepa da espécie Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT20901 em um contorno do olho (esquerdo ou direito) e um creme placebo no outro contorno do olho. Os cremes são aplicados duas vezes por dia (manhã e noite). Os indivíduos servem como referência própria e os resultados obtidos em diferentes momentos são comparados com aqueles obtidos no tempo inicial zero. Além disso, os resultados obtidos com o creme ativo são comparados com os obtidos com creme placebo.

[135] A eficácia do produto é avaliada pela avaliação dos parâmetros de rugosidade (Ra, Rz, Rt) das rugas de pé-de-galinha (periorbitais) por meio de um sistema de projeção de franjas: Ra (rugosidade média): média aritmética de valores de altura absoluta Rz (relevo médio): distância entre o ponto mais alto e o mais baixo (5 picos e 5 vales) Rt (rugosidade total): distância entre o pico mais alto e o vale mais baixo (ncontrado ao longo do comprimento da avaliação)

Tabela 10 - Variações percentuais em relação ao tempo inicial de parâmetros de rugosidade aos 14 dias.

[136] Os resultados mostrados na Tabela 10 demonstram que, durante um período de tratamento de 14 dias de um creme contendo extrato de fermento da cepa da espécie Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT20901 é eficaz na redução da rugosidade da pele devido a rugas periorbitais. Ou seja, o tamanho das rugas é reduzido e a pele enrugada fica mais suave. Exemplo 12: Preparação de uma composição cosmética que compreende o extrato de fermento da cepa da espécie Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT20901

[137] É preparada uma composição cosmética, cujos ingredientes são apresentados na Tabela 11 abaixo. Em um recipiente apropriado, os ingredientes da fase A são dissolvidos e o ingrediente da fase A1 é adicionado pouco a pouco, com agitação até se conseguir uma dispersão total. Em seguida, adiciona-se o ingrediente da fase A2 e essa mistura de ingredientes é constantemente agitada até dissolverem, e foi aquecida a 70 a 75°C.

[138] Em outro recipiente, os ingredientes da fase B são derretidos a 70 a 75°C, e a mistura resultante é adicionada à mistura de ingredientes das fases A, A1 e A2, pouco a pouco, sob agitação de turbina.

[139] Depois, a 40°C, os ingredientes da fase C são adicionados pouco a pouco, e agitando.

[140] Em seguida, os componentes da fase D são adicionados pouco a pouco, agitando até a dispersão total, e o componente da fase E é adicionado pouco a pouco e agitação até a dispersão total. O pH foi ajustado para 6,0 a 6,5 por adição de hidróxido de sódio (q.s quantidade suficiente para se ajustar a esse pH) sob agitação (fase F), obtendo-se uma composição cosmética com as proporções mostradas na Tabela 11. A composição cosmética é um creme adequado para uso tópico.

Tabela 11 Exemplo 13: Estudo in vivo com a composição do Exemplo 12, testando a eficácia do extrato de fermento da cepa da espécie Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT20901 para o tratamento de olheiras em voluntárias mulheres de pele caucasiana.

[141] O estudo é realizado ao longo de 28 dias com medidas feitas no tempo inicial zero e depois após 28 dias. São incluídos 21 voluntários e são mulheres caucasianas entre 22 e 65 anos. Os indivíduos aplicam o creme do Exemplo 12 contendo extrato de fermento da cepa da espécie Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT20901 em um contorno do olho (esquerdo ou direito) e um creme placebo no outro contorno do olho. Os cremes são aplicados duas vezes por dia (manhã e noite). Os indivíduos servem como referência própria e os resultados obtidos em diferentes momentos são comparados com aqueles obtidos no tempo inicial zero. Além disso, os resultados obtidos com o creme ativo são comparados com os obtidos com creme placebo.

[142] A eficácia do produto é avaliada por fotografias digitais sob luz polarizada transversalmente de olheiras usadas para a análise do componente vascular, resultados na Tabela 12.

Tabela 12 Variações percentuais em relação ao tempo inicial de intensidade do componente vascular da olheira aos 28 dias.

[143] Os resultados mostrados na Tabela 12 demonstram que, durante um período de tratamento de 28 dias de um creme contendo extrato de fermento da cepa da espécie Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT20901 é eficaz na redução do tom escuro (isto é, clareamento da cor) da pele nas olheiras. Exemplo 14: Preparação de uma composição cosmética que compreende o extrato de fermento da cepa da espécie Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT20901

[144] É preparada uma composição cosmética, cujos ingredientes são apresentados na tabela xx abaixo. Em um recipiente apropriado, os componentes da fase A são dissolvidos e o componente da fase A1 é adicionado pouco a pouco, com agitação até se conseguir uma dispersão total. Em seguida, adiciona-se o componente da fase A2 e essa mistura de ingredientes é constantemente agitada até dissolverem, e foi aquecida a 70 a 75°C.

[145] Em outro recipiente, os componentes da fase B são derretidos a 70 a 75°C, e a mistura resultante é adicionada à mistura dos componentes das fases A, A1 e A2, pouco a pouco, sob agitação de turbina. Depois, a 40°C, os ingredientes da fase C são adicionados pouco a pouco, e com agitação. Subsequentemente, os componentes da fase D são adicionados pouco a pouco, com agitação até a dispersão total, e o componente da fase E é adicionado pouco a pouco e agitando até a dispersão total. O pH foi ajustado para 6,0 a 6,5 por adição de hidróxido de sódio (q.s quantidade suficiente para se ajustar a esse pH) sob agitação (fase F), obtendo-se uma composição cosmética com as proporções mostradas na Tabela 13. A composição é um creme adequado para aplicação tópica.

Tabela 13 Exemplo 15: Estudo in vivo com a composição do Exemplo 14, testando a eficácia para o tratamento das bolsas oculares em voluntárias mulheres.

[146] O estudo é realizado ao longo de 28 dias com medidas no tempo inicial zero, depois após 14 dias e depois após 28 dias. São incluídos 20 voluntários e são mulheres caucasianas entre 41 e 66 anos. Os indivíduos aplicam o creme do Exemplo 14 contendo extrato de fermento da cepa da espécie Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT20901 em um contorno do olho (esquerdo ou direito) e um creme placebo no outro contorno do olho. O creme é aplicado duas vezes por dia (manhã e noite). Os indivíduos servem como referência própria e os resultados obtidos em diferentes momentos são comparados com aqueles obtidos no tempo inicial. Além disso, os resultados obtidos com o creme ativo são comparados com os obtidos com creme placebo.

[147] A eficácia do produto é avaliada pela avaliação do volume da bolsa ocular por meio de um sistema de projeção de franjas; os resultados são apresentados na Tabela 14.

Tabela 14 - Variações percentuais em relação ao tempo inicial zero de volume de bolsas oculares aos 14 e 28 dias.

[148] Os resultados mostrados na Tabela 14 demonstram que, durante períodos de tratamento de 14 e 28 dias de um creme contendo extrato de fermento da cepa da espécie Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT20901 é eficaz na redução do volume de bolsas oculares. Exemplo 16: Ensaio in vitro para melanogênese em melanócitos epidérmicos humanos

[149] A melanogênese é um processo que ocorre dentro de células de melanócitos na pele e que resulta na síntese de melanina, o pigmento determinante da cor da pele. A quantificação in vitro de melanina induzida por ativos cosméticos provê informações sobre o efeito potencial de branqueamento.

[150] Os melanócitos humanos são tratados com tripsina e são plaqueados a uma densidade de 2x105 células/poço em placas de 6 poços. Após incubação de um dia para outro a 37°C, CO2 a 5%, é realizado um primeiro tratamento com o extrato da cepa da espécie Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT20901, obtido de acordo com o exemplo 1, a 10, 5, 1 e 0,2 μg/mL. As células não tratadas são usadas como controles. Cada concentração é testada em duplicado. O tratamento é repetido nos dias 3, 6, 8 e 10. Finalmente, as células são incubadas a 37°C, CO2 a 5% por mais 72 horas após o último tratamento.

[151] Após a incubação final, as células são separadas para a contagem de células e medição de melanina. As suspensões de células são centrifugadas a 3000 rpm durante 15 min e o glóbulo é dissolvido em 1 ml de NaOH 1 N com 10% de DMSO (v:v). As células são lisadas durante 2 h a 80°C e centrifugadas a 12000 rpm durante 10 min. A concentração de melanina é determinada pela medida da absorbância a 450 nm em um leitor de placas TECAN GENios e os valores são normalizados em relação ao número de células por poço. A concentração de melanina é determinada em picogramas por célula (pg/célula) a partir de uma curva padrão plotada com melanina sintética em concentrações conhecidas.

[152] Na Tabela 15, a média da porcentagem de melanina em relação ao controle é mostrada para 3 ensaios.

Tabela 15

[153] Os resultados mostrados na Tabela 15 demonstram que o extrato da invenção é eficaz na inibição da melanogênese (síntese de melanina) em melanócitos epidérmicos humanos. Exemplo 17: Ensaio in vitro para atividade de tirosinase

[154] A melanogênese é um processo que ocorre dentro de células de melanócitos e que resulta na síntese de melanina, que é o pigmento determinante da cor da pele. A enzima chave na melanogênese é a tirosinase. A tirosinase inicia uma cascata de reações que convertem a tirosina em melanina. Dessa forma, os ativos cosméticos que são capazes de inibir a atividade da tirosinase têm potencial como agente de clareamento da pele.

[155] A atividade da tirosinase é medida com o Kit de Ensaio de Tirosinase HumanLike (Feldan). 200 μl/poço de Reaction Mix é adicionado aos poços de microplacas e amostras de 10 μl do extrato da cepa da espécie Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT20901, obtido de acordo com o exemplo 1, a 100, 10 e 1 μg/ml são adicionadas. Cada concentração é testada em duplicado. Finalmente, 2 μl de enzima são carregados. Os poços sem enzima são usados como espaços em branco. A absorbância é lida a X= 490 nm em um leitor de placas de microtitulação TECAN GENios (Genios, Tecan).

[156] Na Tabela 16 é mostrada a média da porcentagem de absorbância em relação ao controle para 3 ensaios.

Tabela 16

[157] Os resultados mostrados na Tabela 16 demonstram que o extrato da invenção é eficaz na inibição da atividade da tirosinase. Exemplo 18: Estudo do perfil da expressão gênica de melanócitos epidérmicos humanos

[158] Os melanócitos humanos são tratados com tripsina e são plaqueados a uma densidade de 2x105 células/poço em placas de 6 poços. Após incubação de um dia para outro a 37°C, CO2 a 5%, é realizado o primeiro tratamento com o extrato da cepa da espécie Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT20901, obtido de acordo com o exemplo 1, a 10 μg/mL. As células não tratadas são usadas como controles. Cada concentração é testada em 10 poços. O tratamento é repetido nos dias 3, 6, 8 e 10. Finalmente, as células são incubadas a 37°C, CO2 a 5% por mais 72 horas após o último tratamento.

[159] Após a última incubação, as células são lisadas diretamente nos poços e o RNA é extraído e purificado de cada réplica e cada condição por meio do kit RNeasyPlus Mini (Qiagen) seguindo o protocolo do fabricante. Brevemente, as células lisadas são homogeneizadas e as RNases são inativadas. O DNA genômico é removido das amostras usando colunas de rotação gDNA Eliminator. Em seguida, as amostras são passadas através de colunas de ligação de RNA especiais e após várias lavagens por microcentrifugação para eliminar contaminantes e impurezas, o RNA purificado é eluído com 50 μl de água ultrapura.

[160] A pureza, integridade e concentração do RNA obtido são avaliadas por espectrofotometria (Nanodrop) e com um bioanalisador (Agilent Bioanalyzer). Quatro amostras de controle e quatro amostras tratadas são selecionadas de acordo com os resultados de pureza e integridade.

[161] Mais tarde, a marcação é realizada e as amostras são hibridizadas em um microarranjo de expressão genética humana (ASurePrint G3, Agilent).

[162] Os valores normalizados obtidos com o tratamento são comparados com os valores normalizados obtidos com o controle negativo para obtenção de genes com expressão diferencial. Em seguida, realiza-se uma análise paramétrica dos dados por meio do software Bioconductor. Os valores obtidos são então avaliados por meio de análise de enriquecimento de grupos de genes (GSEA, Gene Set Analysis Enrichment) para agrupar os genes com expressão diferencial em termos de Ontologia Genética e Rotas Biológicas.

[163] Os resultados de LogFc obtidos para genes selecionados envolvidos na melanogênese são mostrados na próxima tabela. LogFC é o logaritmo (base 2) de razão de mudança (fold change, FC). FC é usado na análise de dados de expressão gênica em microssérie para medir a mudança no nível de expressão de um gene. O fold change é definido como uma medida que descreve quanto uma quantidade muda entre as duas condições experimentais em comparação, ou como a razão de intensidades entre as duas condições experimentais em comparação. Nesse sentido, os genes com valores negativos de LogFC são regulados descendentemente em relação ao controle, enquanto os genes com valores positivos para LogFC são regulados ascendentemente em relação ao controle.

Tabela 17 - Valores de LogFC dos genes selecionados que codificam enzimas envolvidas em diferentes reações na síntese de melanina.

Tabela 18 - Valores de LogFC dos genes selecionados que codificam receptores, ligantes e outras proteínas implicadas no controle regulatório das enzimas envolvidas na síntese de melanina.

Tabela 19 - Valores de LogFC dos genes selecionados implicados na organização melanossomal ou biogênese.

[164] Os resultados mostrados na Tabela 18 demonstram que o extrato da invenção é capaz de regular ascendentemente ou descendentemente os genes, resultando na inibição da melanogênese. Os resultados mostrados na Tabela 19 e na Tabela 17 demonstram que o extrato da invenção é capaz de regular descendentemente os genes diretamente envolvidos na biogênese melanossomal e genes que codificam as enzimas envolvidas na síntese de melanina. Para todos os efeitos na regulação do gene, o extrato da invenção serviu para inibir o processo de melanogênese, resultando no efeito de branqueamento obtido. Exemplo 19: Preparação de uma composição cosmética do extrato de fermento da cepa da espécie Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT20901

[165] Em um recipiente apropriado, os ingredientes da Fase A são dissolvidos e a Fase A1 é adicionada pouco a pouco, e agitando até se conseguir uma dispersão total. Em seguida, adiciona-se a fase A2 e essa mistura de ingredientes foi constantemente agitada até dissolverem, e é aquecida a 70 a 75°C.

[166] Em outro recipiente, os ingredientes da fase B são derretidos a 70 a 75°C, e são adicionados à mistura de ingredientes das fases A, A1 e A2, pouco a pouco, sob agitação de turbina.

[167] Então, a 40°C, os ingredientes da Fase C são adicionados pouco a pouco e agitando.

[168] Subsequentemente, os componentes da Fase D são adicionados pouco a pouco, agitando até a dispersão total, e o componente da Fase E é adicionado pouco a pouco e agitando até a dispersão total. O pH é ajustado para 6,0 a 6,5 por adição de hidróxido de sódio (q.s quantidade suficiente para se ajustar a esse pH) sob agitação (Fase F), obtendo-se uma composição cosmética com as proporções mostradas na Tabela 20.

Tabela 20 Exemplo 20: Estudo in vivo com a composição do Exemplo 19, testando a eficácia do extrato de fermento da cepa da espécie Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT20901 para o tratamento de manchas senis e efeito de clareamento de pele em voluntárias de pele asiática.

[169] O estudo foi realizado durante 56 dias com medidas no tempo inicial e após 8 semanas de tratamento. Um painel de 22 voluntárias asiáticas entre 38 e 53 anos aplicou o creme do Exemplo 19 em metade do rosto e o creme placebo na outra metade do rosto, duas vezes por dia (manhã e noite). Os indivíduos serviram como referência própria e os resultados obtidos em momentos diferentes foram comparados com os obtidos no tempo inicial. Além disso, os resultados obtidos com o creme ativo foram comparados com os obtidos com creme placebo.

[170] A eficácia do produto foi avaliada por: - Medições da cor da pele por reflexão espectral da luz, parâmetros L*, b* e ITA° (n=22), os resultados são apresentados na Tabela 21 L*: Parâmetro de luminância (de escuro para claro, clareza ou luminosidade da pele) b*: parâmetro de crominância (de azul para amarelo; amarelidão da pele) ITA° (Ângulo de Tipologia Individual): [Arco Tangente ((L*- 50)/b*)] x 180 / 3,14159

Tabela 21 - Variações percentuais versus tempo inicial de regiões hiperpigmentadas e não hiperpigmentadas e contraste entre as duas regiões após 8 semanas de tratamento.

[171] Cada parâmetro (L*, b* e ITA) é medido para cada voluntário em diferentes momentos (linha de base e 8 semanas). Posteriormente, calcula- se a média para cada parâmetro e a % incluída na Tabela 21 é [(média a 8 semanas - média a 0 semanas)/média a 0 semanas] (%). O contraste da pele é o valor de um parâmetro na região não hiperpigmentada menos o valor de um parâmetro na região hiperpigmentada, isto é, o contraste é um parâmetro relacionado com a homogeneidade da cor da pele, se no final do tratamento a cor da pele for mais homogênea ou não. Portanto, um valor negativo de contraste indica uma melhora da homogeneidade da cor da pele. O contraste é calculado para cada voluntário e parâmetro como segue, usando L* como exemplo: L* contraste = L* não hiperpigmentada - L* hiperpigmentada. O valor médio de contraste é calculado e usado para calcular a evolução do contraste durante o tratamento: % de contraste = [(média a 8 semanas - média a 0 semanas)/média a 0 semanas]. Essa % está incluída na Tabela 21 sob o título contraste.

[172] Os resultados mostrados na Tabela 21 demonstram que, durante um período de tratamento de 8 semanas de um creme contendo o extrato de fermento da cepa da espécie Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT20901 é eficaz no aumento da clareza da pele (L* e ITA°) e na redução da amarelidão da pele (b*) em pele de região hiperpigmentada (manchas senis). Além disso, o contraste entre a região hiperpigmentada e não hiperpigmentada diminui mostrando um efeito de branqueamento das manchas senis.

[173] Análise da intensidade da melanina na região hiperpigmentada por Microscopia Confocal de Reflectância (n=2), os resultados são mostrados na Tabela 22.

Tabela 22 - Variações percentuais versus tempo inicial da intensidade de melanina após 8 semanas de tratamento.

[174] Os resultados mostrados na Tabela 22 demonstram que, durante um período de tratamento de 8 semanas de um creme contendo o extrato de fermento da cepa da espécie Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT20901 é eficaz na redução da intensidade de melanina na região hiperpigmentada da pele (manchas senis). Exemplo 21: Preparação de uma microemulsão que compreende o extrato de fermento da cepa da espécie Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT20901.

[175] Em um recipiente apropriado, Docusato de sódio USP [INCI: DIETIL-HEXIL SÓDIO SULFOSSUCCINATO] e ácido isoesteárico [INCI: ÁCIDO ISOESTEÁRICO] foram misturados (fase A).

[176] Em outro recipiente, uma mistura do extrato de fermento da cepa da espécie Eupenicillium crustaceum com número de depósito CECT20901, obtido de acordo com o exemplo 1, junto com água [INCI:ÁGUA (AQUA)] e BUTILENGLICOL 1,3 [INCI: BUTILENO GLICOL], foi dissolvido em etanol [INCI: ÁLCOOL] (fase B). Lentamente, a fase B foi adicionada à fase A sob agitação. Ver Tabela 23

Tabela 23 Exemplo 22: Preparação de uma composição de nanopartículas lipídicas compreendendo a microemulsão do Exemplo 21.

[177] Água [INCI: ÁGUA (AQUA)], Amigel® [INCI: GOMA ESCLERÓTICA], ZemeaTM [INCI: PROPANODIOL], Ácido hialurônico [INCI: HIALURONATO DE SÓDIO] e Fenoxietanol [INCI: FENOXIETANOL] (ingredientes da fase A) foram adicionados nessa ordem a um recipiente apropriado e agitados até a homogeneidade ser alcançada.

[178] A mistura compreendendo a microemulsão do exemplo XX, óleo de soja refinado IP Ph. Eur. [INCI: ÓLEO DE GLYCINE SOJA (SOJA)], Arlacel 83 [INCI: SESQUIOLEATO DE SORBITANO] e Massocare HD [INCI: ISO-HEXADECANO] (ingredientes da fase B) foi adicionada a um outro recipiente.

[179] Em seguida, a mistura dos ingredientes da fase B foi adicionada à mistura dos ingredientes da fase A sob agitação de turbina até formar uma emulsão.

[180] A mistura foi então homogeneizada com um Microfluidizer®, um sistema de homogeneização de alta pressão.

[181] Por fim, SENSOMER CT-400 [INCI: CLORETO DE HIDROXIPROPILTRIMÔNIO DE CÁSSIA] foi lentamente adicionado sob agitação (fase C). Ver tabela 24.

Tabela 24 Exemplo 23: Ensaio in vitro para inibição da melanogênese em epiderme pigmentada humano reconstruída

[182] A hiperpigmentação é uma desordem causada pela produção exagerada de melanina. Fatores como exposição solar excessiva, envelhecimento, alterações hormonais, inflamação, alergias, entre outros, podem causar desequilíbrio no processo de produção e distribuição de melanina, resultando em manchas cutâneas. Os lentigos actínicos (LA) (também conhecidos como lentigo senil, manchas solares, hepáticas ou da idade) são máculas pigmentadas circunscritas, e são tipicamente encontradas em áreas do corpo expostas à UV. O mecanismo molecular atualmente proposto para o aparecimento de lentigos actínicos envolve a estimulação de vias de sinalização epidérmica, incluindo a via Wnt. O WNT-1 é um ativador da via de sinalização Wnt envolvida em lentigos actínicos.

[183] A Epiderme Pigmentada Humana Reconstruída (RHPE), dia de idade 10, o fotótipo IV (laboratórios SkinEthic) são removidos da solução de nutriente de agarose na placa multipoços imediatamente após a chegada e colocados em uma placa de 6 poços em que cada poço já tinha sido preenchido com Meio de Crescimento SkinEthic (laboratórios SkinEthic). Após incubação de um dia para outro a 37°C, CO2 a 5%, é realizado um primeiro tratamento com WNT-1 humano recombinante (Peprotech) a 200 ng/ml ou com extrato obtido de acordo com o Exemplo 1 a 200 ou 100 μg/ml com WNT-1. O meio de cada poço é aspirado e meio fresco (contendo o WNT-1 humano recombinante ou o extrato e o WNT-1 humano recombinante) é adicionado. Cada ensaio tem poços de controle (condições basais) em que a RHPE é tratada com meio de crescimento sozinho. O tratamento é repetido todos os dias até o dia 6, ou seja, durante cinco dias, quando os modelos de tecido estão incorporados em Cryo-M-Bed (Bright).

[184] Após os 5 dias de tratamento, os modelos de tecido são fixados em paraformaldeído a 4% (Sigma) durante 3 horas a 4°C e lavados 4 vezes com solução salina tamponada com fosfato (PBS) (Sigma). Em seguida, as amostras são submetidas a um gradiente de sacarose de 0,6 Molar a 2,3 Molar com incubações de 3 horas à temperatura ambiente. Após a última incubação, os modelos de tecido são incorporados no Cryo-M-Bed. As seções de 10 μm são cortadas com um criostato (Leica) e a melanina nas seções é corada usando um kit de coloração Fontana-Masson (Abcam).

[185] As seções de tecido são incubadas com Solução de Prata Amoníaca preaquecida a 58 a 60°C por 0 a 60 minutos. Uma vez que as seções de tecido se tornam amareladas/marrons, elas são enxaguadas em várias trocas de água destilada. Em seguida, as seções de tecido são incubadas em solução de cloreto de ouro por 30 segundos e enxaguadas novamente. As seções de tecido são incubadas em solução de tiossulfato de sódio durante 1 a 2 minutos e enxaguadas durante 2 minutos na água corrente da torneira, seguidas de duas trocas de água destilada. As seções são incubadas em Nuclear Fast Red Solution por 5 minutos e enxaguadas durante 2 minutos na água corrente da torneira, seguidas de duas trocas de água destilada. Finalmente, as seções são desidratadas em 3 trocas de álcool absoluto, limpas e montadas em Neo-Mount® (Merck).

[186] As seções são observadas usando um microscópio óptico Zeiss e as imagens são capturadas usando o software Zen. De cada imagem, a quantidade de área corada é quantificada.

[187] A Tabela 25 mostra a indução da expressão do teor de melanina, em relação às condições basais, para um mínimo de 3 ensaios.

Tabela 25

[188] Os resultados mostram que o extrato da invenção induz uma diminuição significativa no teor de melanina em modelos de pele humana hiperpigmentados nas concentrações testadas. Exemplo 24: Ensaio in vitro para análise de expressão gênica

[189] O objetivo deste estudo é investigar a eficácia de despigmentação do extrato obtido de acordo com o exemplo 1, avaliando a expressão de genes da via de melanogênese em melanócitos pigmentados escuros usando um sistema de matriz RT-qPCR.

[190] Os melanócitos epidérmicos humanos de um doador neonatal, de pigmentação escura (HEMn-DP) (Life Technologies) são tripsinizados e são plaqueados a uma densidade de 3x105 células/poço em placas de cultura de 6 poços no meio 254 suplementado com o suplemento de crescimento de melanócitos humanos-2 (HMGS-2-(sem PMA)) (Life Technologies). Após incubação de um dia para outro a 37°C, CO2 a 5%, é realizado um primeiro tratamento com o extrato obtido de acordo com o Exemplo 1 a 1 μg/ml ou com meio sozinho (condições basais). O meio de cada poço é aspirado e depois é adicionado meio fresco (contendo extrato ou meio sozinho). O tratamento é repetido nos dias 3, 6, 8 e 10. Finalmente, as células são incubadas a 37°C, CO2a 5% por mais 72 horas após o último tratamento.

[191] Após a incubação final, as células são lisadas diretamente nos poços seguindo o protocolo descrito no Mini kit Aurum Total RNa (BioRad) de acordo com o protocolo do fabricante. As células lisadas são homogeneizadas e as RNases são inativadas. Em seguida, as amostras são passadas através de colunas de ligação de RNA especiais e após várias lavagens por microcentrifugação para eliminar contaminantes e impurezas, o RNA purificado é eluído com 80 μl de solução de eluição. A quantificação e a análise da pureza das amostras de RNA são realizadas após a eluição com RNA com um biofotômetro (Eppendorf).

[192] 0,4 μg de RNA de alta qualidade são retranscritos com iScript avançado (BioRad) em um volume final de 20 μl. A mistura de reação completa é incubada em um termociclador (Eppendorf) a 42°C por 30 minutos, a reação é interrompida a 85°C por 5 minutos. O DNA complementar é amplificado por qPCR em um termociclador de PCR em tempo real (BioRad) usando o supermisturador SsoAdvanced Universal Inhibitor-Tolerant SYBRgreen (BioRad) no painel de 96 poços de melanogênese humana para uso com SYBR® Green (BioRad). SYBR Green liga-se a moléculas de DNA de cadeia dupla e emite fluorescência quantificada e proporcional à quantidade do produto na reação de PCR. As condições de ciclagem no instrumento BioRad CFX96 são 95°C por 3 minutos, seguidas de 40 ciclos de desnaturação a 95°C por 5 segundos, recozimento e alongamento a 60°C por 30 segundos. GAPDH (Gliceraldeído 3-fosfato desidrogenase), TBP (proteína de ligação à caixa TATA) e HRPT1 (hipoxantina fosforibosiltransferase 1) são usados como controles endógenos. O fold change em relação à expressão dos genes da amostra e dos genes de referência é calculado usando o método de expressão normalizada (ΔΔ(Ct)) com valores de limiar padrão usando o software CFX Manager (BioRad).

[193] A Tabela 26 mostra os níveis relativos de expressão dos vários genes indicados em relação às condições basais por um mínimo de 3 ensaios.

Tabela 26

[194] Os resultados mostram que o extrato da invenção induz uma diminuição significativa da expressão de genes de melanogênese em melanócitos humanos na concentração testada e um aumento significativo do gene DKK1. O gene DKK1 codifica para um inibidor de fagocitose que também é um inibidor da proliferação de melanócitos através da via WNT. Exemplo 25: Ensaio in vitro para quantificação de tirosinase por ELISA

[195] A enzima chave na melanogênese é a tirosinase, que inicia uma cascata de reações que convertem a tirosina em biopolímero de melanina. Essa enzima catalisa duas reações diferentes: a hidroxilação de compostos monofenólicos para o-difenóis; e a oxidação dos o-difenóis para o-quinonas. A enzima converte a tirosina em 3,4-di-hidroxifenilalanina (L-dopa) e oxida a L-dopa para formar dopaquinona. L-dopa desempenha um papel proeminente na biossíntese de melanina.

[196] Os melanócitos epidérmicos humanos de um doador neonatal, de pigmentação escura (HEMn-DP) (Life Technologies) são tripsinizados e são plaqueados a uma densidade de 5x103 células/poço em placas de cultura de 96 poços no meio 254 suplementado com o suplemento de crescimento de melanócitos humanos-2 (HMGS-2-(sem PMA)) (Life Technologies). Após incubação de um dia para outro a 37°C, CO2 a 5%, é realizado um primeiro tratamento com o extrato obtido de acordo com o Exemplo 1 a 50 ou 10 μg/ml ou com meio sozinho (condições basais). O meio de cada poço é aspirado e depois é adicionado meio fresco (contendo extrato a 50 ou 10 μg/ml, ou meio sozinho). O tratamento é repetido nos dias 3, 6, 8 e 10. Após 13 dias de cultura, uma quantificação enzimática é feita usando um kit de ELISA de Tirosinase com Base Celular (Abnova) nas células cultivadas. Primeiro, as células são enxaguadas com solução salina tamponada com fosfato (PBS) duas vezes e fixadas com formaldeído a 4% por 20 minutos. Em seguida, as células são lavadas 3 vezes com tampão de lavagem e o tampão de resfriamento brusco é adicionado e incubado durante 20 minutos. As placas são lavadas novamente e bloqueadas por 1h com tampão de bloqueio. Após o bloqueio, as placas de poço são incubadas com anticorpo antitirosinase ou anticorpo anti-GAPDH durante 16 horas. Um total de 6 poços são usados para cada condição, três deles são incubados com o anticorpo antitirosinase e os outros três com o anticorpo anti-GAPDH. Após essa incubação, o anticorpo secundário (IgG anti-coelho conjugado com HRP para os poços incubados com anticorpo antitirosinase ou IgG anti-rato conjugado com HRP para os poços incubados com anticorpo anti-GAPDH) é adicionado aos poços correspondentes e incubado por 1,5 hora. Em seguida, as placas de poço são incubadas com TMB one-Step Solution por 30 minutos no escuro com agitação suave. A reação é interrompida pela adição da Solução de Parada a cada poço. A absorbância a 450 nm é lida em um leitor de placas de microtitulação (Clariostar, BMG Labtech). O sinal GAPDH é usado para normalização de valores de tirosinase.

[197] A Tabela 27 mostra a porcentagem média de inibição da expressão do nível de tirosinase em relação às condições basais por um mínimo de 3 ensaios.

Tabela 27

[198] Os resultados mostram que o extrato da invenção induz uma redução significativa dos níveis de proteína de tirosinase nas culturas de melanócitos nas concentrações testadas. Exemplo 26: Ensaio in vitro para fagocitose com base em microesferas

[199] A pigmentação da pele é determinada pela transferência de pigmentos de melanina de melanócitos para os queratinócitos vizinhos e pelo seu padrão de distribuição em camadas epidérmicas suprabasais, bem como pela quantidade e tipo de melanina sintetizada nos melanócitos. Os pigmentos de melanina são sintetizados e armazenados nas organelas especializadas ligadas à membrana denominadas melanossomas. Os melanossomas são transportados do corpo celular para a periferia em melanócitos e são transferidos dos dendritos de melanócitos para queratinócitos adjacentes. Após a transferência, os melanossomas são transportados para o núcleo para formar uma capa de melanina que atua como um protetor solar interno nos queratinócitos.

[200] Os sobrenadantes de culturas de melanócitos são obtidos de melanócitos epidérmicos humanos de um doador neonatal, de pigmentação escura (HEMn-DP) (Life Technologies) semeados a uma densidade de 3x105 células/poço em placas de cultura de 6 poços no meio 254 (Life Technologies) suplementado com o suplemento de crescimento de melanócitos humanos-2 (HMGS-2-(sem PMA, Life Technologies). Após 24h, o meio é removido e as células são incubadas com o extrato obtido de acordo com o Exemplo 1 a 1 μg/ml ou com meio sozinho (controle do sobrenadante), durante 13 dias a 37°C em um incubador de CO2. O tratamento é repetido nos dias 3, 6, 8 e 10. No dia 13, os sobrenadantes são coletados e são usados para o tratamento de queratinócitos epidérmicos humanos.

[201] Queratinócitos epidérmicos humanos (HEKa) (Life Technologies) são tripsinizados e 3 x105 células/poço são semeadas em placas de cultura de 12 poços com lamínulas pré-revestidas com Matriz de Revestimento em meio Epilife suplementado com o Suplemento de Crescimento Definido Epilife (EDGS) (Life Technologies). Após incubação por 24 horas a 37°C em ar umidificado com CO2 a 5%, é adicionado meio fresco contendo 100 ng/ml de DKK1 (R&D Systems) ou o sobrenadante dos melanócitos tratados. Cada placa tem poços de controle tratados com meio sozinho (condições basais). As placas são incubadas durante 30 minutos a 37°C, CO2 a 5%. Após o tratamento, o meio é removido e as células são incubadas com microesferas fluorescentes vermelhas modificadas com carboxilato FluoSpheres® (0,5 μm de diâmetro, Life Technologies) a 3x108/ml durante 4 horas. As microesferas são revestidas previamente com albumina sérica bovina (BSA) (Sigma) de acordo com as instruções do fabricante. Após a incubação, as células são lavadas extensivamente com solução salina tamponada com fosfato (PBS) (Sigma) para remover microesferas não internalizadas e fixadas em paraformaldeído a 3,7% (V/V) (Sigma) durante 10 minutos. As células são lavadas com PBS e incubadas em acetona fria durante 3 minutos. As amostras são bloqueadas com BSA a 1% (P/V) em PBS por 30 minutos. Para visualizar o contorno da célula, as células são identificadas com faloidina Alexa Fluor® 488 (Life Technologies) por 20 minutos no escuro. Os núcleos das células são corados e lamínulas montadas com reagente ProLong Gold com DAPI (Life Technologies). As células são observadas usando um microscópio de fluorescência Zeiss e as imagens são capturadas usando o software Zen para quantificação.

[202] Para análise quantitativa da absorção de microesferas, o número de microesferas e núcleos presentes em seis campos microscópicos capturados aleatoriamente em três experimentos diferentes é contado para cada condição. O número de microesferas de cada imagem é normalizado com o número de núcleos em cada imagem.

[203] A Tabela 28 mostra a indução da expressão média de fagocitose em relação às condições basais por um mínimo de 3 ensaios.

Tabela 28

[204] Os resultados mostram que o extrato da invenção induz uma inibição significativa na absorção de microesferas ou fagocitose de queratinócitos na concentração testada.

Claims (19)

1. Uso de um extrato de fermento de uma cepa de espécie de Eupenicillium crustaceum, caracterizado pelo fato de que é para o tratamento e/ou cuidado, não terapêutico cosmético da pele, membranas mucosas, cabelo e/ou unhas, em que o extrato de fermento compreende 31 a 79% em peso de peptídeos, 1 a 8% em peso de aminoácidos livres, 10 a 27% em peso de carboidratos e 15 a 40% em peso de lipídios.

2. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o tratamento e/ou cuidado, não terapêutico cosmético é a despigmentação ou o branqueamento ou o clareamento na cor da pele, membranas mucosas, cabelo e/ou unhas; a despigmentação ou o branqueamento ou o clareamento na cor de manchas da idade; a despigmentação ou o branqueamento ou o clareamento na cor da pele de círculos escuros ao redor dos olhos; a manutenção ou melhoria da luminosidade da pele; o alívio ou a prevenção dos sintomas do envelhecimento da pele; tratamento de rugas na pele, como rugas periorbitais; tratamento de olheiras; tratamento de olho inchado; tratamento de bolsas oculares; a suavização ou a redução de rugas da pele; a redução no volume de um olho inchado ou de bolsas oculares; a manutenção ou melhoria da elasticidade da pele; a manutenção ou melhoria da resistência da pele, firmeza ou resistência à tração.

3. Uso de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que o extrato de fermento promove a produção de colágeno, promove a produção de elastina, inibe a atividade da colagenase, inibe a atividade da elastase, inibe a produção de AGEs, inibe a permeabilidade vascular, inibe a formação de melanina, inibe a atividade de tirosinase e/ou promove a fragmentação da bilirrubina na pele.

4. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que dito extrato de fermento é obtenível ao fermentar uma cepa de espécie de Eupenicillium crustaceum em um meio de cultura aquoso e isolar um produto fermentado.

5. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que dito extrato de fermento tem um peso molecular inferior a 3400 Da.

6. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que dita cepa de espécie de Eupenicillium crustaceum é uma cepa com número de depósito CECT 20901.

7. Composição cosmética, caracterizada pelo fato de que compreende uma quantidade cosmeticamente eficaz de um extrato de fermento de uma cepa da espécie Eupenicillium crustaceum, e pelo menos um excipiente, adjuvante e/ou ingrediente cosmeticamente aceitável, em que o extrato de fermento compreende 31 a 79% em peso de peptídeos, 1 a 8% em peso de aminoácidos livres, 10 a 27% em peso de carboidratos e 15 a 40% em peso de lipídios, e em que o extrato de fermento é incorporado em um sistema de dispensação ou sistema de liberação prolongada cosmeticamente aceitável, selecionado a partir do grupo formado por lipossomas, lipossomas mistos, oleossomas, niossomas, etossomas, milipartículas, micropartículas, nanopartículas e nanopartículas de lipídios sólidos, carreadores de lipídios nanoestruturados, esponjas, ciclodextrinas, vesículas, micelas, micelas misturadas de tensoativos, micelas misturadas de tensoativo e fosfolipídios, miliesferas, microesferas e nanoesferas, lipoesferas, milicápsulas, microcápsulas, nanocápsulas, microemulsões e nanoemulsões ou são adsorvidos em um polímero orgânico sólido ou suporte mineral sólido selecionado a partir do grupo formado por talco, bentonita, sílica, amido e maltodextrina.

8. Composição cosmética, caracterizada pelo fato de que compreende uma quantidade cosmeticamente eficaz de um extrato de fermento de uma cepa da espécie Eupenicillium crustaceum, e pelo menos um excipiente, adjuvante e/ou ingrediente cosmeticamente aceitável, em que o extrato de fermento compreende 31 a 79% em peso de peptídeos, 1 a 8% em peso de aminoácidos livres, 10 a 27% em peso de carboidratos e 15 a 40% em peso de lipídios, e em que esta composição é apresentada em uma formulação selecionada a partir do grupo formado por emulsões múltiplas, soluções, cristais líquidos, composições anidras, dispersões aquosas, óleos, hidratantes, bálsamos, espumas, loções aquosas ou oleosas, géis aquosos ou oleosos, cremes, soluções, soluções hidroalcoólicas, soluções hidroglicólicas, hidrogéis, linimentos, soros, sabonetes, xampus, condicionadores, máscaras faciais, sprays para cabelo, séruns, filmes de polissacarídeo, unguentos, mousses, pomadas, pastas, pós, barras, lápis, sprays e aerossóis.

9. Composição de acordo com a reivindicação 7 ou 8, caracterizada pelo fato de que o dito excipiente, adjuvante e/ou ingrediente é selecionado a partir do grupo formado por agentes que diminuem a produção de sebo, agentes antisseborreicos, agentes matificantes, agentes antiacne, agentes estimulantes da síntese de macromoléculas dérmicas ou epidérmicas e/ou capazes de inibir ou prevenir sua degradação, agentes estimulantes da síntese de colágeno, agentes de estimulação de síntese de elastina, agentes de estimulação de síntese de decorina, agentes de estimulação de síntese de laminina, agentes estimulantes de síntese de defensina, agentes estimulantes de síntese de chaperona, agentes estimulantes de síntese de cAMP, agentes que modulam AQP-3, agentes que modulam a síntese de aquaporina, proteínas da família aquaporina, agentes estimulantes de síntese de ácido hialurônico, agentes estimulantes de síntese de glicosaminoglicano, agentes estimulantes de síntese de fibronectina, agentes estimulantes de síntese de sirtuína, proteínas de choque térmico, agentes estimulantes de síntese de proteína de choque térmico, agentes que inibem a exocitose neuronal, outros agentes anticolinérgicos, agentes que inibem a contração muscular, agentes antienvelhecimento, agentes antirrugas, agentes antitranspirantes, agentes anti-inflamatórios e/ou analgésicos, agentes anticoceira, agentes calmantes, agentes anestésicos, inibidores de agregação do receptor da acetilcolina, agentes que inibem acetilcolinesterase, agentes relaxantes da pele, agentes estimulantes ou inibidores de síntese da melanina, agentes de branqueamento ou despigmentação, agentes propigmentação, agentes autobronzeadores, agentes inibidores da NO-sintase, agentes inibidores da 5α- redutase, agentes inibidores de lisil- e/ou agentes inibidores de prolil hidroxilase, antioxidantes, removedores de radicais livres e/ou agentes contra poluição atmosférica, removedores de espécie de carbonila reativa, agentes antiglicantes, agentes anti-histamínicos, agentes antivirais, agentes antiparasitários, emulsificantes, emolientes, solventes orgânicos, propelentes líquidos, condicionadores de pele, umectantes, substâncias que retêm a umidade, alfa hidroxiácidos, beta hidroxiácidos, hidratantes, enzimas hidrolíticas epidérmicas, vitaminas, aminoácidos, proteínas, pigmentos ou corantes, tinturas, biopolímeros, polímeros gelificantes, espessantes, tensoativos, agentes amaciadores, emulsificantes, agentes de ligação, conservantes, agentes capazes de reduzir ou tratar as bolsas sob os olhos, agentes esfoliantes, agentes queratolíticos, agentes descamadores, agentes antimicrobianos, agentes antifúngicos, agentes fungistáticos, agentes bactericidas, agentes bacteriostáticos, agentes estimulantes da síntese de lipídios e componentes do estrato córneo, ceramidas, ácidos graxos, agentes que inibem a degradação do colágeno, agentes que inibem as metaloproteinases da matriz, agentes que inibem a degradação da elastina, agentes que inibem proteases de serina, agentes estimulantes de proliferação de fibroblastos, agentes estimulantes de proliferação de queratinócitos, agentes estimulantes de proliferação de adipócitos, agentes estimulantes de proliferação de melanócitos, agentes estimulantes de diferenciação de queratinócitos, agentes estimulantes ou retardantes de diferenciação de adipócitos, agentes anti-hiperqueratose, agentes comedolíticos, agentes antipsoríase, agentes de reparo do DNA, agentes protetores de DNA, agentes protetores de células-tronco, estabilizantes, agentes para o tratamento e/ou cuidado de pele sensível, agentes firmantes, agentes antiestiramento de marcas, agentes de ligação, agentes lipolíticos ou agentes estimulantes de lipólise, agentes adipogênicos, agentes que modulam a expressão de PGC-1α, agentes que modulam a atividade de PPARY, agentes que aumentam ou reduzem o teor de triglicerídeo de adipócitos, agentes anticelulite, agentes que inibem a atividade de PAR-2, agentes estimulantes de cicatrização, agentes cicatrizantes coadjuvantes, agentes estimulantes de repitelização, agentes de repitelização coadjuvante, fatores de crescimento de citocinas, agentes que atuam sobre a circulação e/ou microcirculação capilar, agentes estimulantes de angiogênese, agentes que inibem a permeabilidade vascular, agentes venotônicos, agentes que atuam no metabolismo celular, agentes que melhoram a junção dérmico-epidérmica, agentes indutores de crescimento de cabelo, agentes inibidores ou retardantes de crescimento de cabelo, agentes retardantes de perda de cabelo, conservantes, perfumes, absorventes de odor e/ou desodorantes de mascaramento de odor corporal, agentes quelantes, extratos vegetais, óleos essenciais, extratos marinhos, agentes obtidos a partir de um processo biotecnológico, sais minerais, extratos celulares, protetores solares e agentes fotoprotetores orgânicos ou minerais ativos contra raios ultravioleta A e/ou B e/ou raios infravermelhos A, e misturas dos mesmos.

10. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 9, caracterizado pelo fato de que dito extrato de fermento é obtenível ao fermentar uma cepa de espécie de Eupenicillium crustaceum em um meio de cultura aquoso e isolar um produto fermentado.

11. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 10, caracterizado pelo fato de que dito extrato de fermento tem um peso molecular inferior a 3400 Da.

12. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 11, caracterizado pelo fato de que dita cepa de espécie de Eupenicillium crustaceum é uma cepa com número de depósito CECT 20901.

13. Método para o tratamento e/ou cuidado, não terapêutico cosmético da pele, caracterizado pelo fato de que compreende a administração tópica a um indivíduo de uma quantidade eficaz de um extrato de fermento a partir de uma cepa da espécie Eupenicillium crustaceum, em que o extrato de fermento compreende 31 a 79% em peso de peptídeos, 1 a 8% em peso de aminoácidos livres, 10 a 27% em peso de carboidratos e 15 a 40% em peso de lipídios.

14. Método de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que o tratamento e/ou cuidado, não terapêutico cosmético da pele é a despigmentação ou o branqueamento ou o clareamento na cor da pele, membranas mucosas, cabelo e/ou unhas; a despigmentação ou o branqueamento ou o clareamento na cor de manchas da idade; a despigmentação ou o branqueamento ou o clareamento na cor da pele de círculos escuros ao redor dos olhos; a manutenção ou melhoria da luminosidade da pele; o alívio ou a prevenção dos sintomas do envelhecimento da pele; tratamento de rugas na pele, como rugas periorbitais; tratamento de olheiras; tratamento de olho inchado; tratamento de bolsas oculares; a suavização ou a redução de rugas da pele; a redução no volume de um olho inchado ou de bolsas oculares; a manutenção ou melhoria da elasticidade da pele; a manutenção ou melhoria da resistência da pele, firmeza ou resistência à tração.

15. Método de acordo com a reivindicação 13 ou 14, caracterizado pelo fato de que compreende a administração tópica a um indivíduo de uma composição como definida em qualquer uma das reivindicações 7 a 12.

16. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 13 a 15, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é Caucasiano ou Asiático e/ou o indivíduo tem acima de 20 anos de idade.

17. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 13 a 16, caracterizado pelo fato de que dito extrato de fermento é obtenível ao fermentar uma cepa de espécie de Eupenicillium crustaceum em um meio de cultura aquoso e isolar um produto fermentado.

18. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 13 a 17, caracterizado pelo fato de que dito extrato de fermento tem um peso molecular inferior a 3400 Da.

19. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 13 a 18, caracterizado pelo fato de que dita cepa de espécie de Eupenicillium crustaceum é uma cepa com número de depósito CECT 20901.