KR102279657B1

KR102279657B1 - 피부의 치료 및/또는 관리를 위한 엑소폴리사카라이드, 이의 배양 배지 및 조성물

Info

Publication number: KR102279657B1
Application number: KR1020167014228A
Authority: KR
Inventors: 엠 누리아 가르시아 샌츠; 안토니오 빈센테 페레르 몬티엘; 알베르트 솔리 아스탈스; 누리아 알미나나 도메네치
Original assignee: 리포텍 에스.에이.
Priority date: 2013-10-30
Filing date: 2014-10-30
Publication date: 2021-07-20
Also published as: BR112016009474B1; AU2014343701B2; CN105934231B; MX2016005585A; US20160263014A1; CN105934231A; ES2747124T3; WO2015063240A1; EP3062759A1; US10500153B2; KR20160078458A; EP3062759B1; JP2016535035A; EP2868308A1; JP6608817B2

Abstract

본 발명은 피부의 치료 및/또는 관리에서 사용하기 위한 박테리아 균주의 엑소폴리사카라이드 및 이의 미용적 및/또는 피부약학적 조성물에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 염증, 지질분해, 지질 축적 및 피부 견고함에 대한 이의 용도에 관한 것이다.

Description

피부의 치료 및/또는 관리를 위한 엑소폴리사카라이드, 이의 배양 배지 및 조성물{EXOPOLYSACCHARIDE FOR THE TREATMENT AND/OR CARE OF THE SKIN, CULTURE MEDIA AND COMPOSITIONS THEREOF}

발명의 분야

본 발명에 개시된 기술은 지질 축적을 감소시키는 박테리아 기원의 엑소폴리사카라이드(exopolysaccharide)에 관한 것이다. 상기 생성물은 할로모나스 안티카리엔시스(Halomonas anticariensis) 종의 균주에 의해 분비된다. 본 발명은 또한 피부, 점막 및/또는 모발의 치료 및/또는 관리를 위한 미용적 또는 피부약학적 조성물에서의 박테리아 기원의 상기 엑소폴리사카라이드의 용도에 관한 것이다.

발명의 배경

피부, 점막, 모발 및/또는 손발톱은 유기체와 이의 환경 사이의 물리적 장벽을 구성한다. 피부는 표피 및 진피의 2개의 조직으로 이루어져 있다. 진피는 피부 두께의 약 90%를 구성하며, 콜라겐, 탄력소, 여러 분화된 구조, 예를 들어, 혈관, 땀샘, 및 주로 세포-유형, 예를 들어, 섬유모세포, 대식세포 및 지방세포를 함유한다.

피부에서, 지방세포는 진피의 가장 깊은 층인 피하조직에 위치한다. 지방세포는 혈관, 신경 및 림프절을 함유하는 결합조직의 중격에 의해 분리된 소엽 내에 조직되어 있다. 지방세포의 주요 기능은 공포 내의 트리글리세라이드 형태의 지방의 저장이다. 이러한 에너지-관련 기능에 더하여, 이들 세포는 또한 일부 호르몬(에스트로겐)의 생성뿐만 아니라 염증 반응과 관련된 분자의 합성과 관련이 있다.

미용 산업에 의해 고도로 집중된 피하조직의 지방 세포와 관련된 장애 중 하나는 셀룰라이트이다. 셀룰라이트는 주위 상피 조직에 상당한 양의 압력을 가해 오목(dimple)의 존재와 함께 피부의 불규칙한 외형을 발생시키는 지방 조직 내의 지질의 과도한 축적의 결과이다. 미적 관점에서, 이러한 외형은 귤껍질로 언급되어 왔다.

이러한 문제의 처리를 위해, 축적된 지질의 부피를 감소시켜, 이에 따라 조직 사이에 저장된 보유 수분을 제거함으로써 부피를 감소시키는 배출 효과를 나타내는 지질분해를 자극하는 다수의 작용제가 존재한다. 또한, 피부의 불규칙한 외형을 교정하는 셀룰라이트의 치료에서 견고화 효과를 갖는 다른 작용제가 또한 이용될 수 있다.

가장 널리 사용되는 항-셀룰라이트 작용제는 카페인인데, 이는 이의 배출 효과에 더하여 지방세포에서의 이의 지질분해 효과[Vogelgesang B. et al., "In vitro and in vivo efficacy of sulfo - carrabiose a sugar-based cosmetic INGREDIENTS with anti-cellulite properties", Int . J. Cosmet . Sci ., 2011, 33(2), 120-5; Nakabayashi H. et al., "Inhibitory effects of caffeine and its metabolites on intracellular lipid accumulation in murine 3T3-L1 adipocytes ", Biofactors, 2008, 34(4), 293- 302]로 인한 것이다. 또한, 유사한 메커니즘을 갖는 많은 수의 대안적 작용제가 또한 존재한다. 새로운 항-셀룰라이트 작용제에 대한 연구에서의 최근의 전략은 다른 조직과 유사하게 낮과 밤 사이의 변화로 인해 기능적 변화를 겪는 피부에서의 하루 주기 리듬과 관련된 작용에 대한 영향을 기초로 한다[Dupressoir A. et al., "Characterization of a mammalian gene related to the yeast CCR4 general transcription factor and revealed by transposon insertion", J. Biol . Chem . 1999, 274(43), 31068-75; Dupressoir A. et al., "Identification of four families of yCCR4 - and Mg ² ⁺ -dependent endonuclease -related proteins in higher eukaryotes , and characterization of orthologs of yCCR4 with a conserved leucine -rich repeat essential for hCAF1 / hPOP2 binding", BMC Genomics , 2001, 2:9; Green C.B . et al., "Loss of Nocturnin , a circadian deadenylase , confers resistance to hepatic steatosis and diet-induced obesity", Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 2007, 104(23), 9888-93].

인간뿐만 아니라 다른 동물 종에서, 이들의 사회적 거동 및 이들의 생리학적 기능의 많은 부분은 주기적 반복 방식으로 밤과 낮에 따라 변한다. 생체 시계를 규정하는 시스템은 중추 및 말초 성분을 포함한다. 포유동물에서, 상기 진동 시스템의 중추 성분은 전방 시상하부의 시각교차상핵(SCN)에 존재한다[Boivin D.B . et al., "Circadian clock genes oscillate in human peripheral blood mononuclear cells", Blood 2003, December, 102(12), 4143- 4145]. 이러한 핵은 주로 특화된 망막 세포인 망막 신경절 세포로부터의 광 신호의 수용 및 24시간 주기성으로 유전자 발현의 캐스케이드를 발생시키는 CLOCK, BMAL1, PER 및 CRY와 같은 여러 유전자를 수반하는 일련의 전사, 번역 및 번역 후 메커니즘 활성화에 의해 기능한다[Green C.B . et al., "The Meter of Metabolism", Cell, 2008, 134(5), 728-742]. 말초 조직 및 기관은 또한 중추 시계(central clock)와 독립적이나, 유전자의 동일 기구를 이용하는 자율 조절 시스템을 가지며, 조직이 적용될 수 있는 외부 자극에 대한 동조화(entrainment)를 나타낸다[Kaway M. and Rosen C.J ., " PPARγ : a circadian transcription factor in adipogenesis and osteogenesis ", Nat. Rev. Endocrinol., 2010, 6, 629-636].

하루 주기 리듬의 조절에 개재하거나 이들에 종속되는 일부 기능은 특히 호르몬의 생성, 사이토카인 수준, 온도 조절 또는 글루코스 수준이다[Mehling A. and Fluhr J.W ., " Chronobiology : biological clocks and rhythms of the skin", Skin Pharmacol. Physiol, 2006, 19(4), 182-9].

피부의 기능 중 여러 기능은 또한 다른 기관에서 발생하는 것과 유사하게 하루 주기 리듬에 종속된다. 따라서, 여성에서 연구된 다양한 파라미터, 예를 들어, 혈액 순환, 아미노산 함량 및 경피 수분 손실(TEWL)이 밤 동안 증가하는 것이 관찰되었다. 다른 한편으로, 피지측정기를 이용하여 이마에서 측정된 피지의 생성은 한낮에 이의 가장 높은 값을 제공한다. 피부의 pH는 밤 전체에 걸쳐 감소한 후, 낮 전체에 걸쳐 증가하는 경향이 있다. 피부의 혈액 순환은 이른 아침의 낮은 순환으로부터 이후에 증가하여 저녁이 시작되는 오후의 마지막 몇시간에서 이의 최대 값에 도달하는 하루 동안의 하루 주기 리듬 및 범위를 나타낸다. 흥미롭게도, 하루 주기 리듬은 또한 피부에서 세포 수준으로 발견될 수 있는데, 표피 세포의 증식이 약 11pm에서 이의 가장 높은 값을 나타내는 것이 관찰되었기 때문이다[Mehling A. and Fluhr J.W ., " Chronobiology : biological clocks and rhythms of the skin", Skin Pharmacol. Physiol, 2006, 19(4), 182-9].

효과가 관찰된 야간 기능 중 하나는 지방형성의 효과인데, 이는 상기 효과를 갖는 것으로 연구된 유전자 중 하나가 녹터닌(nocturnin)이기 때문이다. 따라서, 하루 주기 리듬에 의해 영향을 받은 유전자를 분리시키는 것을 목표로 하는 제노푸스 라에비스(Xenopus laevis) 망막으로 수행된 첫번째 연구 중 일부에서, 녹터닌 mRNA 발현이 이른 밤에 높은 수준으로 제공된 것으로 관찰되었다[Green C.B . and Besharse J.C., "Identification of a novel vertebrate circadian clock-regulated gene encoding the protein Nocturnin ", Proc . Nat. Acad. Sci. USA, 1996, 93(25), 14884-8]. 다른 한편으로, 래트의 망막에서 발현되는 것에 더하여, 녹터닌 mRNA가 다수의 조직, 예를 들어, 간, 뇌, 폐, 심장, 난소, 골격근, 고환 및 골수에서 발현된 것이 이후에 발견되었다. 유사하게, 녹터닌 mRNA의 발현에서 큰 하루 주기 변화가 존재하였고, 이의 최대 수준이 밤 시작 시에 발생한 것이 관찰되었다[Dupressoir A. et al., "Characterization of a mammalian gene related to the yeast CCR4 general transcription factor and revealed by transposon insertion", J. Biol . Chem . 1999, 274(43), 31068-75; Dupressoir A. et al., "Identification of four families of yCCR4 - and Mg ² ⁺ -dependent endonuclease -related proteins in higher eukaryotes , and characterization of orthologs of yCCR4 with a conserved leucine -rich repeat essential for hCAF1 / hPOP2 binding", BMC Genomics, 2001, 2:9].

녹터닌의 기능에 관하여, 녹터닌을 발현할 수 없었던 넉아웃 마우스로 수행된 연구는 이들 개체가 정상적인 일반 하루 주기 거동을 나타내긴 하였지만, 이들이 식이-유도 비만에 대한 내성을 나타내고, 이들이 또한 간에서의 지질의 낮은 축적과 같은 다른 대사 변화를 나타낸 것을 입증하였다. 따라서, 이러한 대사 표현형은 녹터닌이 지질의 축적 및 사용과 관련된 특정 이차 하루 주기 채널을 조절하는 것을 암시한다[Green C.B . et al., "Loss of Nocturnin , a circadian deadenylase , confers resistance to hepatic steatosis and diet-induced obesity", Proc . Nat. Acad. Sci . USA, 2007, 104(23), 9888- 93]. 녹터닌의 관련성이 관찰된 기능 중 또 다른 하나는 염증이다. 녹터닌은 향염증성 전사물 iNOS를 안정화시키며, 녹터닌의 감소는 염증의 감소를 의미한다[Niu S. et al., "The circadian deadenylase Nocturnin is necessary for stabilization of the iNOS mRNA in mice" PloS one 2011, 6(11), e26954].

녹터닌은 지질의 축적 및 사용과 관련된 마커임에 따라, 진피의 지방세포에서 지질의 축적에 대한 자극 또는 감소 활성을 확인하기 위한 추가 연구를 위한 기초로서 그리고 염증의 치료에서 이용될 수 있다.

놀랍게도, 본 발명의 출원인은 특히 지질의 축적, 셀룰라이트, 염증 또는 지질분해와 관련하여 이전에 언급된 해당 분야의 문제에 대한 대안인 박테리아 기원의 엑소폴리사카라이드를 발견하였다.

발명의 개요

본 발명에 개시된 기술은 할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주에 의해 배출된 엑소폴리사카라이드의 사용에 의한 지질 축적 및 셀룰라이트의 문제에 대한 해법을 제공한다.

발명의 설명

본 발명은 할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주에 의해 배출된 엑소폴리사카라이드, 피부의 치료적 치료에서 사용하기 위한 엑소폴리사카라이드, 피부의 미용적, 비-치료적 치료 및/또는 관리를 위한 엑소폴리사카라이드의 용도 및 엑소폴리사카라이드를 포함하는 약학적, 미용적 또는 피부약학적 조성물에 관한 것이다. 놀랍게도, 본 발명의 발명자는 상기 언급된 엑소폴리사카라이드가 지질 축적을 감소시키는 것을 발견하였다. 특히, 녹터닌 단백질의 수준에서의 감소는 피부에서의 지질 축적을 감소시킨다.

정의

본 발명의 이해를 돕기 위해, 본 발명의 문맥에서 사용되는 바와 같은 일부 용어 및 표현의 의미가 포함된다.

"포함하는", "함유하는" 또는 "~을 특징으로 하는"과 유의어인 본원에서 사용되는 과도적 용어 "포함하는"은 총괄적이거나 한도가 없으며, 추가의 언급되지 않은 요소 또는 방법 단계를 배제하지 않는다. 그러나, 본원에서 "포함하는"의 각각의 언급에서, 상기 용어는 또한 대안적 구체예로서 구 "~로 본질적으로 구성되는" 및 "~으로 구성되는"을 포함하는 것으로 의도되며, 여기서 "~으로 구성되는"은 언급되지 않은 임의의 요소 또는 단계를 배제하고, "~로 본질적으로 구성되는"은 고려 중인 조성물 또는 방법의 필수적이거나 기본적인 신규한 특징에 크게 영향을 미치지 않는 추가의 언급되지 않은 요소 또는 단계의 포함을 허용한다.

본 발명의 문맥에서, 용어 "생성된" 및 "분비된"은 다르지 않게 사용된다.

본 발명의 문맥에서, "피부"는 가장 위의 층 또는 각질층으로부터 가장 아래 층 또는 피하조직까지 둘 모두를 포함하여 이를 포함하는 층인 것으로 이해된다. 이들 층은 다양한 유형의 세포, 예를 들어, 특히 각질세포, 섬유모세포, 멜라닌세포 및/또는 지방세포로 구성된다. 본 발명의 문맥에서, 용어 "피부"는 두피를 포함한다.

조건 "미용적, 비-치료적"이 수반되지 않는 경우 본 명세서의 문맥에서 이용되는 용어 "치료"는 질병 또는 장애를 경감시키거나 제거하거나, 상기 질병 또는 장애와 관련된 하나 이상의 증상을 감소시키거나 제거하기 위한 본 발명에 따른 화합물의 투여를 의미한다. 용어 "치료"는 또한 질병 또는 장애의 생리학적 결과를 경감시키거나 제거하는 능력을 포함한다.

용어 "치료"가 조건 "미용적, 비-치료적"을 수반하는 경우, 이들은 특히 피부의 미용적 특성, 예를 들어, 비제한적인 예로, 특히 피부의 수화, 탄성, 견고함, 윤기, 색조 또는 질감의 수준을 개선시키는 것을 목표로 하는 피부에 대한 화합물의 적용을 나타낸다. 본 발명에서의 용어 "관리"는 피부의 특성의 유지를 나타내고, 이는 신체 및/또는 모발 위생 상태를 포함한다. 이들 특성은 건강한 대상체뿐만 아니라 피부의 질병 및/또는 장애, 예를 들어, 비제한적인 예로, 특히 피부 상의 궤양 및 병소, 건선, 피부염, 여드름 또는 주사가 존재하는 대상체 둘 모두에서 피부의 미용적 치료 및/또는 관리를 통해 개선되고 유지된다.

본 발명에서 사용되는 용어 "예방"은 질병 또는 장애의 출현 전에 질병 또는 장애의 출현 또는 발달을 방지하거나, 지연시키거나, 방해하는 본 발명의 화합물의 능력을 나타낸다.

본 발명의 상황에서, 용어 "노화"는 나이가 듦에 따라(세월에 따른 노화(chronoaging)), 또는 태양에의 노출을 통해(광노화) 또는 담배 연기, 춥거나 덥거나 바람 부는 극한 기후 조건, 화학적 오염 물질 또는 오염원과 같은 환경 요인에의 노출을 통해 피부가 경험하는 변화를 말하며, 촉감을 통한 외적인 가시적 및/또는 인식가능한 모든 변화, 예를 들어, 비제한적인 예로, 피부 상의 불연속성의 발생, 예를 들어, 주름, 잔주름, 깊은 주름, 울퉁불퉁함 또는 거침, 모공 크기의 증가, 탄력의 손실, 견고함의 손실, 매끄러움의 손실, 변형으로부터 회복하는 능력의 손실, 피부의 처짐, 예를 들어, 특히 처진 볼, 눈밑 처진 살의 출현 또는 이중턱의 출현, 피부색의 변화, 예를 들어, 점, 발적, 눈밑 처진 살 또는 과다색소침착된 부위의 출현, 예를 들어, 특히 검버섯 또는 주근깨, 비정상적인 분화, 과다각질화, 탄성섬유증, 각화증, 탈모, 귤껍질 피부, 특히 각질층, 피하조직, 진피, 표피, 혈관계(예를 들어, 거미양 정맥 또는 모세혈관확장증의 출현) 또는 피부에 가까운 조직의 콜라겐 구조의 손실 및 기타 다른 조직학적 변화를 포함한다. 용어 "광노화"는 자외선 방사선에의 피부의 장기간 노출로 인해, 피부의 조기 노화를 가져오는 과정의 세트의 그룹을 함께 형성하며, 이는 노화와 동일한 신체적 특징, 예를 들어, 비제한적인 예로, 피부늘어짐, 처짐, 색의 변화 또는 색소침착의 얼룩, 비정상적 및/또는 과도한 각질화를 제공한다.

따라서, 본 발명의 첫번째 양태는 피부의 치료에서의 사용을 위한 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주에 의해 배출된 엑소폴리사카라이드에 관한 것이다. 특히, 치료는 피부 내의 염증의 치료 및/또는 피부의 재상피화 및/또는 상처 치유에 관한 것이다. 특히, 염증은, 예를 들어, 비제한적인 예로, 특히 수술 후, 강한 펄스화 광 요법(intense pulsed light therapy)(IPL)을 이용한 치료 후, 단색 펄스화 광 요법(monochromatic pulsed light therapy)(레이저)을 이용한 치료 후, 화학 박피제를 이용한 치료 후 또는 공격적 외부 작용제에 대한 과노출 후의 건선, 민감한 피부, 피부염, 아토피 피부염, 접촉 피부염, 기저귀 피부염, 지루성 피부염, 습진, 주사, 여드름, 과증식성 피부병, 화상, 일광화상, 손발톱주위염, 피부 염증에 의해 형성된 군으로부터 선택된다.

또 다른 양태에서, 본 발명은 피부의 미용적, 비-치료적 치료 및/또는 관리, 특히 셀룰라이트의 치료 및/또는 예방, 피부 내의 지질 축적의 감소 치료, 피부에서의 지질분해 자극, 콜라겐 합성의 자극, 피부 노화의 치료 및/또는 예방, 피부 주름의 치료 및/또는 예방, 피부 견고함을 개선시키기 위한 치료, 피부 견고함의 손실 예방 및/또는 피부 탄성을 개선시키기 위한 치료를 위한 할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주에 의해 배출된 엑소폴리사카라이드의 용도에 관한 것이다.

바람직하게는, 피부의 치료, 미용적, 비-치료적 치료 및/또는 관리는 세포 내의 녹터닌의 양을 감소시킨다.

또 다른 특정 구체예에서, 피부의 치료 및/또는 관리는 국소 또는 경피 적용에 의해 수행된다.

또 다른 특정 구체예에서, 할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주는 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주이다. 상기 균주는 1977년 4월 28일의 미생물 기탁의 국제 승인에 대한 부다페스트 협약에 따른 상기 목적을 위한 법적으로 승인된 기관으로서 벨기에 미생물 수집 총괄 기구(Belgian Coordinated Collection of Microorganisms)(BCCM)/라보라토리움 부어 마이크로바이올로지-박테리에베르자멜링(Laboratorium voor Microbiologie-Bacterieverzameling)(LMG)(BCCM/LMG)(University Ghent, K.L. Ledeganckstraat 35, B-9000 Ghent, Belgium)에 2013년 9월 18일에 수탁되었다.

바람직한 구체예에서, 할로모나스 안티카리엔시스 종의 박테리아 균주에 의해 배출된 엑소폴리사카라이드는 단당류 글루코스, 만노스 및 람노스를 함유한다. 특히, 할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주는 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주이다. 더욱 바람직하게는, 본 발명의 엑소폴리사카라이드는 1 중량% 내지 22 중량%의 글루코스, 50 중량% 내지 85 중량%의 만노스, 15 중량% 내지 30 중량%의 람노스의 조성을 나타내며, 단, 상기 백분율의 합계는 100%를 초과하지 않는다. 더욱 더 바람직하게는, 엑소폴리사카라이드는 1.5 중량% 내지 20 중량%의 글루코스, 55 중량% 내지 80 중량%의 만노스, 18 중량% 내지 26 중량%의 람노스의 조성을 나타낸다. 더욱 더 바람직하게는, 엑소폴리사카라이드는 1.5 중량% 내지 18 중량%의 글루코스, 58 중량% 내지 78 중량%의 만노스, 20 중량% 내지 25 중량%의 람노스의 조성을 나타낸다. 임의로, 엑소폴리사카라이드는 또한 3% 이하의 갈락투론산 및/또는 4% 이하의 자일로스, 바람직하게는 2% 미만의 갈락투론산 및 2% 미만의 자일로스, 더욱 바람직하게는 1% 미만의 갈락투론산 및 1% 미만의 자일로스를 함유한다.

또 다른 특정 구체예에서, 할로모나스 안티카리엔시스 종의 박테리아 균주에 의해 배출된 엑소폴리사카라이드는 크로마토그래피 컬럼 PL AQUAGEL-OH 8 ㎛ AQUEOUS SEC COLUMNS 및 용리액으로서 소듐 아세테이트 0.1 M을 갖는 물 및 0.8 ml/분의 유량을 갖는 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)의 크로마토그래피 분석시 4 내지 10분, 더욱 바람직하게는 5 내지 9분의 체류 시간을 갖는다. PL AQUAGEL-OH 8 ㎛ AQUEOUS SEC COLUMNS은 중성, 음이온성 및 양이온성 수용성 중합체에 적용되는 화합물을 이의 MW에 따라 분리시키는 능력을 갖는 패키징을 갖고, 8 ㎛의 입자 크기, 50 Å의 포어 크기 및 300 mm x 7.5 mm의 길이/내부 직경을 갖는 수성 크기 배제 크로마토그래피를 위한 컬럼이다.

또 다른 특정 구체예에서, 엑소폴리사카라이드는 이러한 생성물의 합성 및 배양 배지로의 분비를 위해 통상적으로 교반되고 통기되는 적합한 배양 배지에서의 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주의 발효 후 분리 및 정제를 통해 획득될 수 있다. 본 발명의 엑소폴리사카라이드를 생산하기 위한 발효는 15℃ 내지 40℃, 바람직하게는 32℃의 온도에서 교반되고 통기된 배지에서 수행될 수 있고, 배지는 5.5 내지 9, 바람직하게는 약 7.0의 pH를 지니며, pH는 발효 동안 필요한 경우 조정된다. 발효 기간은 12 내지 120시간, 바람직하게는 24 내지 72시간이다.

또 다른 특정 구체예에서, 할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주의 발효에서, 외인성 당, 예를 들어, 비제한적인 예로, 갈락토스, 글루코스, 만노스, 아미그달린, 셀로비오스, 말토스, 전분, 글리코겐, 락토스, 이들의 혼합물 및/또는 이들 당의 혼합물을 함유하는 추출물을 함유하는 배양 배지가 탄소원으로서 이용될 수 있다. 특히, 2 내지 40 g/L, 바람직하게는 5 내지 25 g/L의 글루코스의 외인성 공급이 제공된다.

또 다른 특정 구체예에서, 배양 배지는 추가 질소원 또는 탄소원, 예를 들어, 효모 추출물, 맥아 추출물 또는 펩톤을 포함할 수 있으며, 이들 성분의 각각의 하나의 농도는 0.1 내지 20 g/L, 바람직하게는 0.5 내지 10 g/L이다.

또 다른 특정 구체예에서, 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주의 발효 배양을 위해 무기염이 또한 제공되며, 이들은 이온 Na⁺, K⁺, NH₄ ⁺, Ca² ⁺, Mg² ⁺, PO₄ ^3-, SO₄ ^2-, Cl^-, CO₃ ^2-, 또는 미량 원소, 예를 들어, Cu, Mn, Fe 및 Zn을 제공하는 염 중에서 선택된다.

또 다른 특정 구체예에서, 엑소폴리사카라이드의 분리 및 정제 방법은 당업자에게 공지된 방법, 예를 들어, 원심분리, 여과, 초여과 및 투석에 의해 수행된다. 바람직하게는, 초여과 및 투석은 10,000 Da을 초과하는 분자량의 분자를 유지시키는 폴리에테르설폰 막을 이용하여 수행된다. 바람직하게는, 원심분리 및 여과 단계는 엑소폴리사카라이드가 발견되는 상층액으로부터 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주를 분리시키기 위해 적용된다. 다른 바람직한 구체예에서, 엑소폴리사카라이드는 에탄올, 아세톤 또는 이소프로판올의 첨가를 통한 침전에 의해 정제된다. 특히, 할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주는 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주이다.

또 다른 특정 구체예에서, 할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주에 의해 생성된 엑소폴리사카라이드는 미용적 또는 피부약학적 조성물에 함유되며, 이는 미용적 또는 피부약학적 유효량의 엑소폴리사카라이드 및 적어도 하나의 미용적 및/또는 약학적으로 허용되는 부형제 및/또는 성분을 포함함을 특징으로 한다. 특히, 할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주는 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주이다.

본 발명의 또 다른 양태는 미용적 또는 피부약학적 조성물에 관한 것으로, 이는 미용적 또는 피부약학적 유효량의 할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주에 의해 생성된 엑소폴리사카라이드 및 적어도 하나의 미용적 및/또는 피부약학적으로 허용되는 부형제 및/또는 성분을 포함함을 특징으로 한다. 특히, 할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주는 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주이다. 상기 조성물은 당업자에게 공지된 통상적인 방법에 의해 제조될 수 있다[" Harry's Cosmeticology ", Seventh edition, (1982), Wilkinson J.B ., Moore R.J., ed. Longman House, Essex, GB].

투여되는 본 발명의 조성물 내의 할로모나스 안티카리엔시스(Halomonas anticariensis) 종의 균주에 의해 생산된 엑소폴리사카라이드의 미용적 또는 피부약학적으로 효과적인 양뿐 아니라 이의 투여량은 연령, 환자의 상태, 치료하고/거나 관리하려는 질환, 장애 또는 질병의 특성 또는 중증도, 투여 경로 및 빈도, 및 특히 사용되는 엑소폴리사카라이드의 특성을 포함하는 다수의 요인에 좌우될 것이다.

"미용적 또는 피부약학적으로 효과적인 양"은 비독성이나, 요망되는 효과를 제공하기에 충분한 성분의 양인 것이 이해된다. 특히, 할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주에 의해 생성된 엑소폴리사카라이드는 요망되는 효과를 달성하기 위해, 바람직한 형태로 조성물의 전체 중량과 관련하여 0.0000000001%(중량 기준) 내지 20%(중량 기준); 바람직하게는 0.00000001%(중량 기준) 내지 10%(중량 기준), 더욱 바람직하게는 0.000001%(중량 기준) 내지 5%(중량 기준), 더욱 더 바람직하게는 0.0001%(중량 기준) 내지 5%(중량 기준)로 미용적 또는 피부약학적 농도로 사용된다.

특정 구체예에서, 본 발명의 엑소폴리사카라이드는 또한 미용적 또는 피부약학적 전달 시스템 및/또는 지속 방출 시스템으로 혼입될 수 있다.

용어 "전달 시스템"은 본 발명의 엑소폴리사카라이드와 함께 투여되는 희석제, 애쥬번트, 부형제, 비히클 또는 첨가제에 관한 것이다. 이들 미용적 또는 약학적 담체는 액체, 예를 들어, 물, 오일 또는 계면활성제, 예를 들어, 석유, 동물, 식물 또는 합성 기원의 것, 예를 들어, 비제한적인 예로, 땅콩유, 대두유, 광유, 참기름, 피마자유, 폴리소르베이트, 소르비탄 에스테르, 에테르 설페이트, 설페이트, 베타인, 글리코시드, 말토시드, 지방 알코올, 노녹시놀, 폴록사머, 폴리옥시에틸렌, 폴리에틸렌 글리콜, 덱스트로스, 글리세롤, 디지토닌 및 유사한 것일 수 있다. 당업자는 본 발명의 화합물이 투여되는 다양한 전달 시스템에서 사용될 수 있는 희석제, 애쥬번트 또는 부형제를 인지한다.

용어 "지속 방출"은 일정 기간 동안 상기 화합물의 점진적 방출을 제공하고, 바람직하게는, 반드시 그러한 것은 아니지만, 일정 기간에 걸쳐 비교적 일정한 화합물 방출 수준을 갖는 화합물의 전달 시스템과 관련된 통상적 의미로 사용된다.

전달 또는 지속 방출 시스템의 예는, 비제한적인 예로, 활성 성분의 더 큰 침투를 달성하고/하거나, 활성 성분의 약동학 및 약역학 특성을 개선시키기 위해 첨가될 수 있는 리포솜, 혼합된 리포솜, 올레오솜(oleosome), 니오솜(niosome), 에토솜(ethosome), 밀리입자, 마이크로입자, 나노입자 및 고체 지질 나노입자, 나노구조화된 지질 담체, 스폰지, 사이클로덱스트린, 소포, 마이셀, 계면활성제의 혼합된 마이셀, 계면활성제-인지질 혼합 마이셀, 밀리스피어(millisphere), 마이크로스피어(microsphere) 및 나노스피어(nanosphere), 리포스피어(liposphere), 밀리캡슐(millicapsule), 마이크로캡슐 및 나노캡슐, 뿐만 아니라 마이크로에멀젼 및 나노에멀젼을 포함한다. 바람직한 전달 또는 지속 방출 시스템은 리포솜, 계면활성제-인지질 혼합 마이셀 및 마이크로에멀젼, 더욱 바람직하게는 내부 역 마이셀의 구조를 갖는 유중수 마이크로에멀젼 및 마이크로에멀젼을 함유하는 나노캡슐이다.

지속 방출 시스템은 종래 분야에 공지된 방법에 의해 제조될 수 있고, 이들을 함유하는 조성물은, 예를 들어, 접착 패치, 비-접착 패치, 밀폐 패치 및 미세전자 패치를 포함하는 국소 또는 경피 투여, 또는 전신 투여, 예를 들어, 비제한적인 예로, 경구 또는 비경구 경로, 예를 들어, 비내, 직장 또는 피하 이식 또는 주사, 또는 특정 신체 부분으로의 직접 이식 또는 주사에 의해 투여될 수 있고, 이는 바람직하게는 본 발명의 화합물의 비교적 일정한 양을 방출해야 한다. 지속 방출 시스템에 함유된 엑소폴리사카라이드의 양은, 예를 들어, 조성물이 투여되어야 하는 부위, 본 발명의 엑소폴리사카라이드의 동역학 및 방출 지속기간, 뿐만 아니라 치료되고/되거나 관리되는 질환, 장애 및/또는 질병의 특성에 좌우될 것이다.

본 발명의 엑소폴리사카라이드를 함유하는 조성물은 또한 고체 유기 중합체 또는 고체 무기 지지체, 예를 들어, 비제한적인 예로, 특히 탤크(talc), 벤토나이트, 실리카, 전분 또는 말토덱스트린에 흡착될 수 있다.

할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주에 의해 생성된 엑소폴리사카라이드를 함유하는 조성물은 또한 피부와 직접 접촉되는 직물, 부직포 직물 및 의료 장치로 혼입될 수 있고, 이에 따라 직물, 부직포 직물 또는 의료 장치에 대한 결합 시스템의 생체내분해에 의하거나, 체내 수분, 피부의 pH 또는 체온으로 인한 신체와 이들 사이의 마찰로 인한 것이든지 간에 본 발명의 엑소폴리사카라이드가 방출될 수 있다. 또한, 본 발명의 엑소폴리사카라이드는 신체와 직접 접촉하는 의복을 제작하기 위해 사용되는 직물 및 부직포 직물로 혼입될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 화합물을 함유하는 직물, 부직포 직물 및 의료 장치는 녹터닌(nocturnin) 양의 감소 또는 콜라겐 합성의 자극에 의해 개선되거나 예방되는 질환, 장애 및/또는 질병의 치료 및/또는 관리에 사용된다.

상기 기재된 전달 시스템 및/또는 지속 방출 시스템인 직물, 부직포 직물, 의복, 의료 장치 및 이들에 화합물을 고정시키기 위한 수단의 예는 문헌에서 발견될 수 있고, 이는 종래 분야에서 공지되어 있다[Schaab C.K . (1986) HAPPI May 1986; Nelson G., "Application of microencapsulation in textiles", (2002), Int. J. Pharm., 242(1-2), 55-62; "Biofunctional Textiles and the Skin" (2006) Curr . Probl . Dermatol . v.33, Hipler 　 U.C . and Elsner 　P., eds. S. Karger AG, Basel , Switzerland; Malcolm R.K . et al., "Controlled release of a model antibacterial drug from a novel self-lubricating silicone biomaterial ", (2004), J. Cont . Release, 97(2), 313- 320]. 바람직한 직물, 부직포 직물, 의복 및 의료 장치는 붕대, 거즈, t-셔츠, 양말, 타이츠, 속옷, 거들, 장갑, 기저귀, 생리대, 드레싱, 침대보, 손수건, 접착 패치, 비-접착 패치, 밀폐 패치, 미세전자 패치 및/또는 안면 마스크이다.

본 발명의 엑소폴리사카라이드를 함유하는 미용적 또는 피부약학적 조성물은 요망되는 투여 형태를 제형화시키는데 필요한 미용 및/또는 피부약학적으로 허용되는 부형제를 임의로 포함하는 국소 또는 경피 적용의 다양한 유형의 조성물에서 사용될 수 있다.

국소 또는 경피 적용의 조성물은, 예를 들어, 비제한적인 예로, 크림, 다중 에멀젼, 예를 들어, 비제한적인 예로, 물 에멀젼 중 오일 및/또는 실리콘, 유중수 및/또는 실리콘 에멀젼, 물/오일/물 또는 물/실리콘/물 유형 에멀젼, 및 오일/물/오일 또는 실리콘/물/실리콘 유형 에멀젼, 액체 결정, 무수 조성물, 수성 분산액, 오일, 밀크, 발삼, 포움, 로션, 젤, 크림 젤, 하이드로알코올 용액, 하이드로글리콜 용액, 하이드로젤, 리니멘트(liniment), 혈청(sera), 비누, 샴푸, 컨디셔너(conditioner), 세럼(serum), 다당류 필름, 연고, 무스(mousse), 포마드(pomade), 페이스트, 파우더, 막대, 연필 및 스프레이 또는 에어로졸(스프레이), 예를 들어, 리브-온(leave-on) 및 린스-오프(rinse-off) 제형의 임의의 고체, 액체 또는 반고체 제형으로 생성될 수 있다. 이들 국소 또는 경피 적용 제형은 당업자에게 공지된 기술을 이용하여 다양한 유형의 고체 부속물, 예를 들어, 비제한적인 예로, 붕대, 거즈, t-셔츠, 양말, 타이츠, 속옷, 거들, 장갑, 기저귀, 생리대, 드레싱, 침대보, 손수건, 접착 패치, 비-접착 패치, 밀폐 패치, 미세전자 패치 또는 안면 마스크로 혼입될 수 있거나, 이들은 특히 다양한 메이크-업 제품, 예를 들어, 메이크-업 파운데이션, 예를 들어, 액체 파운데이션 및 컴팩트 파운데이션, 메이크-업 제거 로션, 메이크-업 제거 밀크, 눈밑 컨실러(under-eye concealer), 아이 섀도우, 립스틱, 립 프로텍터(lip protector), 립 글로스 및 파우더로 혼입될 수 있다.

본 발명의 미용적 또는 피부약학적 조성물은 본 발명의 화합물의 경피 흡수를 증가시키는 작용제, 예를 들어, 비제한적인 예로, 특히 디메틸설폭시드, 디메틸아세트아미드, 디메틸포름아미드, 계면활성제, 아존(1-도데실아자사이클로헵탄-2-온), 알코올, 우레아, 에톡시디글리콜, 아세톤, 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜을 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 미용적 또는 피부약학적 조성물은 본 발명의 엑소폴리사카라이드의 더 큰 침투를 달성하기 위해 이온삼투요법, 소노포레시스, 전기천공, 미세전자 패치, 기계적 압력, 삼투압 구배, 폐쇄 치료, 미세주사 또는 압력에 의한 바늘이 없는 주사, 예를 들어, 산소 압력에 의한 주사, 또는 이들의 임의의 조합에 의해 치료되는 국소 부위에 적용될 수 있다. 적용 부위는 치료되고/되거나 관리되는 질환, 장애 및/또는 질병의 특성에 의해 결정될 것이다.

본 발명에 기재된 미용적 또는 피부약학적 조성물 내에 함유된 미용적 또는 피부약학적으로 허용되는 부형제 및/또는 성분은 미용적 또는 피부약학적 조성물에서 일반적으로 사용되는 추가 성분, 예를 들어, 비제한적인 예로, 녹터닌의 양을 감소시키는 다른 작용제, 녹터닌 발현을 억제하는 다른 작용제, 지질분해 작용제 또는 지질분해를 자극하는 작용제, 정맥강화 작용제(venotonic agent), PGC-1α 발현을 조정하는 작용제, PPARγ의 활성을 억제하는 작용제, 지방세포의 트리글리세라이드 함량을 감소시키는 작용제, 항-셀룰라이트 작용제, 지방세포 분화를 지연시키는 작용제, 피지 생성을 감소시키는 작용제, 피부 또는 표피 거대분자의 합성을 자극하고/하거나 이들의 분해를 억제하거나 예방할 수 있는 작용제, 콜라겐 합성-자극제, 탄력소 합성-자극제, 데코린 합성-자극제, 라미닌 합성-자극제, 디펜신 합성-자극제, 샤페론 합성-자극제, cAMP 합성-자극제, AQP-3을 조정하는 작용제, 아쿠아포린 합성을 조정하는 작용제, 아쿠아포린 패밀리로부터의 단백질, 히알루론산 합성-자극제, 글리코사미노글리칸 합성-자극제, 섬유결합소 합성-자극제, 시르투인 합성-자극제, 열쇼크 단백질, 열쇼크 단백질 합성-자극제, 신경세포 세포외배출을 억제하는 작용제, 항콜린제, 근수축을 억제하는 작용제, 안티에이징 작용제, 항-주름 작용제, 땀억제제, 항염증제 및/또는 진통제, 항-소양증 작용제, 진정제, 마취제, 아세틸콜린-수용체 집락화 억제제, 아세틸콜린에스테라제를 억제하는 작용제, 피부이완제, 멜라닌 합성 자극제 또는 억제제, 화이트닝 또는 탈색 작용제, 전색소침착제, 자가-태닝 작용제, NO-신타제 억제제, 5α-환원효소 억제제, 리실- 및/또는 프롤릴 하이드록실라제 억제제, 항산화제, 자유 라디칼 제거제 및/또는 대기오염에 대한 작용제, 반응성 카르보닐 종 제거제, 항-당화작용 작용제, 항히스타민제, 항바이러스제, 항기생충제, 유화제, 연화제, 유기 용매, 액체 분사제, 피부 컨디셔너, 습윤제, 수분을 보유하는 물질, 알파 하이드록시산, 베타 하이드록시산, 보습제, 표피 가수분해 효소, 비타민, 아미노산, 단백질, 색소 또는 착색제, 염료, 생체중합체, 젤화 중합체, 증점제, 계면활성제, 연화 작용제, 유화제, 결합제, 보존제, 눈밑 지방을 감소시키거나 치료할 수 있는 작용제, 엑스폴리에이팅 작용제(exfoliating agent), 각질용해제, 박리제(desquamating agent), 항미생물제, 항진균제, 정진균제, 살균제, 정균제, 각질층 성분의 합성을 자극하는 작용제, 세라미드, 지방산, 콜라겐 분해를 억제하는 작용제, 기질 금속단백분해효소를 억제하는 작용제, 탄력소 분해를 억제하는 작용제, 세린 프로테아제, 예를 들어, 칼리크레인, 백혈구 엘라스타제 또는 카텝신 G를 억제하는 작용제, 섬유모세포 증식을 자극하는 작용제, 각질세포 증식을 자극하는 작용제, 멜라닌세포 증식을 자극하는 작용제, 각질세포 분화를 자극하는 작용제, 항과다각화증 작용제, 면포용해제, 항-건선 작용제, DNA 복구제, DNA 보호제, 줄기세포 보호제, 안정제, 민감한 피부의 치료 및/또는 관리를 위한 작용제, 응고제, 항-스트레치 마크 작용제, 수렴제, PAR-2 활성을 억제하는 작용제, 치유를 자극하는 작용제, 공동애쥬번트 치유 작용제, 재상피화를 자극하는 작용제, 공동애쥬번트 재상피화 작용제, 사이토카인, 성장인자, 모세관 순환 및/또는 미세순환에 대해 작용하는 작용제, 혈관신생을 자극하는 작용제, 혈관 침투성을 억제하는 작용제, 세포 대사에 대해 작용하는 작용제, 진피-표피 접합부를 개선시키는 작용제, 모발 성장을 유도하는 작용제, 모발 성장 억제제 또는 지연제, 모발 상실 지연제, 보존제, 향수, 미용 탈취제 및/또는 체취 흡수제 및/또는 체취 차폐제, 킬레이트제, 식물 추출물, 정유, 해양 추출물, 생명공학 공정으로부터 획득된 작용제, 무기염, 세포 추출물, 일광차단제 및 자외선 A 및/또는 B 선 및/또는 적외선 A 선에 대해 활성인 유기 또는 무기 광보호제, 또는 이들의 혼합물이며, 단, 이들은 조성물의 나머지 성분, 특히 할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주에 의해 생성된 엑소폴리사카라이드와 물리적 및 화학적으로 양립된다. 마찬가지로, 이들 추가 성분의 특성은 본 발명의 엑소폴리사카라이드의 이점을 허용되지 않게 변경시키지 않아야 한다. 이들 추가 성분의 특성은 합성 또는 천연 성분, 예를 들어, 식물 추출물일 수 있거나, 생명공학적 절차, 또는 합성 절차와 생명공학적 절차의 조합으로부터 유래될 수 있다. 추가 예는 문헌[CTFA International Cosmetic Ingredient Dictionary & Handbook, 12th Edition (2008)]에서 발견될 수 있다. 본 발명의 문맥에서, 생명공학적 절차는 유기체 또는 이의 일부 내에서 활성 성분 또는 이의 일부를 생성시키는 임의의 절차인 것으로 이해된다.

한 구체예에서, 본 발명의 미용적 및/또는 피부약학적 조성물은 하기를 함유한다:

- 0.0000000001%(중량 기준) 내지 20%(중량 기준)의 할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주에 의해 배출되는 발효 추출물 또는 엑소폴리사카라이드;

- 0.1%(중량 기준) 내지 20%(중량 기준)의 (INCI 명칭) 글리세린, 프로필렌 글리콜, 부틸렌 글리콜, 펜틸렌 글리콜, 카프릴릴 글리콜, 락트산, 우레아, 소듐 히알루로네이트의 군으로부터 선택된 보습제;

- 0.1%(중량 기준) 내지 20%(중량 기준)의 (INCI 명칭) 디메티콘, 글리세릴 스테아레이트, 카프릴산/카프르산 트리글리세라이드, 세테아릴 알코올, 레시틴, C12-15 알킬 벤조에이트, 스쿠알란, 라놀린, 베헤닐 알코올, 토코페릴 아세테이트, 판테놀, 부티로스페루뭄 파르키이(Butyrospermum Parkii) 버터, 레티닐 팔미테이트, 레티놀의 군으로부터 선택된 피부연화제 또는 피부 컨디셔닝;

- 0.1%(중량 기준) 내지 20%(중량 기준)의 (INCI 명칭) 잔탄 검, 소듐 라우레쓰 설페이트, 스테아르산, 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 스테아릴 알코올, 세틸 알코올, 스테아레쓰-2, 세테아레쓰-20, 코카미도프로필 베타인의 군으로부터 선택된 계면활성제.

특정 구체예에서, 지방세포의 트리글리세라이드 함량을 감소시키는 작용제, 지방세포 분화를 지연시키는 작용제, 항-셀룰라이트 작용제, 지질분해 작용제, 정맥강화 작용제, PGC-1α 발현을 억제하는 작용제 또는 PPARγ의 활성을 억제하는 작용제는, 예를 들어, 비제한적인 예로, 특히 알케밀라 불가리스(Alchemilla vulgaris), 안젤리카 시넨시스(Angelica sinensis), 아르메니아세아 종(Armeniacea sp .), 아르니카 몬타나 L(Arnica montana L), 아트락틸로디스 플라티코돈(Atractylodis platicodon), 대나무, 베툴라 알바(Betula alba), 부플레우룸 키넨시스(Bupleurum chinensis), 칼렌둘라 오피시날리스(Calendula officinalis), 캉주(cangzhu), 세크로피아 옵투시폴리아(Cecropia obtusifolia), 셀로시아 크리스타타(Celosia cristata), 센텔라 아시아티카(Centella asiatica), 케노포디움 퀴노아(Chenopodium quinoa), 크리산텔룸 인디쿰(Chrysanthellum indicum), 시미푸가 라세모사(Cimifuga racemosa), 시트루스 아우란티움 아마라(Citrus aurantium amara), 크니쿠스 베네딕투스(Cnicus benedictus), 코페아 아라비카(Coffea arabica), 콜라 니피다(Cola nipida), 콜레우스 바르바투스(Coleus barbatus), 콜레우스 블루메이(Coleus blumei), 콜레우스 에스퀴롤리이(Coleus esquirolii), 콜레우스 포르스콜리이(Coleus forskohlii), 콜레우스 스쿠텔라로이데스(Coleus scutellaroides), 콜레우스 종(Coleus sp .), 콜레우스 잔탄투스(Coleus xanthantus), 콤미포라 미라(Commiphora myrrha), 크리쓰뭄 마리티뭄(Crithmum maritimum), 쿠미눔 시미눔(Cuminum cyminum), 디오스코레아 콜레티이(Dioscorea colettii), 디오스코레아 빌로사(Dioscorea villosa), 유게니아 카리오필루스(Eugenia caryophyllus), 필리펜둘라 울마리아 L(Filipendula ulmaria L), 포에니쿨룸 불가레(Foeniculum vulgare), 푸쿠스 베시쿨로수스(Fucus vesiculosus), 젤리듐 카르틸라기네움(Gelidium Cartilagineum), 징코 빌로바(Ginkgo biloba), 징코 빌로바(ginkgo biloba), 글리신 맥스(Glycine max), 글리시리자 글라브라(Glycyrrhiza glabra), 헤데라 헬릭스(Hedera helix)(담쟁이덩굴 추출물), 히비스쿠스 사브다리파(Hibiscus sabdariffa), 호르데움 불가레(Hordeum vulgare), 휴물루스 루풀루스(Humulus lupulus), 하이페리쿰 퍼포라툼(Hyperycum perforatum), 일렉스 파라구아리엔시스(Ilex paraguariensis), 키젤리아 아프리카나(Kigelia africana), 라미나리아 디지타타(Laminaria digitata), 루피누스 페렌니스(Lupinus perennis), 넬룸비움 스페시오숨(Nelumbium speciosum), 오르토시폰 스타민쿠스 벤쓰(Orthosiphon stamincus benth), 파낙스 진셍(Panax ginseng), 파울리니아 쿠파나(Paullinia cupana), 페우무스 볼두스(Peumus boldus), 필라칸타 피브로사(Phyllacantha fibrosa), 파이퍼 메티스티쿰(Piper methysticum), 파이퍼 니그룸(Piper nigrum), 프루넬라 불가리스(Prunella vulgaris), 프루누스 아미그달루스 둘시스(Prunus amygdalus dulcis), 로스마리누스 오피시날리스(Rosmarinus officinalis), 루부스 이다에우스(Rubus idaeus), 루스쿠스 아쿨레아투스(Ruscus aculeatus)(양골담초의 추출물), 살비아 오피시날리스 L(Salvia officinalis L), 삼부쿠스 니그라(Sambucus nigra), 세레노아 레펜스(Serenoa repens), 스밀락스 아리스톨로키아에폴리아(Smilax aristolochiaefolia), 스피룰리나 플라텐시스 알가에(Spirulina platensis algae), 타락사쿰 에리트로스퍼뭄(Taraxacum erythrospermum), 타락사쿰 오피시날레(Taraxacum officinale), 녹차, 울무스 루브라(Ulmus rubra), 운카리아 토멘토사(Uncaria tomentosa), 베르베나 오피시날리스(Verbena officinalis), 비텍스 아그누스-카스투스(Vitex agnus- castus), 디스모르포코커스 글로보수스(Dysmorphococcus globosus)의 추출물 또는 가수분해된 추출물, 특히 알베린, 알베린 시트레이트, 디하이드로미리세틴, 보조효소 A, 지질분해효소, 세룰레닌, 루틴, 글라우신, 에스쿨린, 비스나딘, 카페인, 테오필린, 테오브로민, 아미노필린, 잔틴, 카르니틴, 포르스콜린, 에스신, 루스코게닌, 헤데린, 트리에탄올아민 아이오다이드, AMPc 합성 유도체, Atrium/Unipex에 의해 시판되는 Lanachrys® [INCI: 크리스산텔룸 인디쿰(Chrysanthellum Indicum) 추출물], BASF에 의해 시판되는 Slim-Excess™ [INCI: 물, 부틸렌 글리콜, 소듐 클로라이드, 가수분해된 카라기난, 잔탄 검], Sveltine™ [INCI: 물, 부틸렌 글리콜, 카르니틴, 레시틴, 카페인, 카르보머, 살리실산, 아텔로콜라겐, 센텔라 사이아티카(Centella Asiatica) 추출물, 에스쿨린, 소듐 콘드로이틴 설페이트], 페루 리아나(Peru Liana) [INCI: 운카리아 토멘토사(Uncaria Tomentosa) 추출물] 또는 Flavenger™ [INCI: 카프릴산/카프르산 트리글리세라이드, 실리카 디메틸 실릴레이트, 글리세릴 올레에이트, 퀘르세틴 카프릴레이트], Codif에 의해 시판되는 스코파리아네(Scopariane) [INCI: 스파셀라리아 스코파리아(Sphacelaria Scoparia)], Phyco R75 [INCI: 라미나리아 디지타타(Laminaria Digitata)], 페오슬림(Pheoslim) [INCI: 필라칸타 피브로사(Phyllacantha Fibrosa) 추출물], 메밀 왁스(Buckwheat Wax) [INCI: 폴리고눔 파고피룸(Polygonum fagopyrum)] 또는 아레아우마트 삼피라(Areaumat Samphira) [INCI: 크리쓰뭄 마리티뭄(Crithmum Maritimum) 추출물], Actiporine 8.G [글리세린, 아쿠아, 자니카 루벤스(Jania rubens) 추출물], Cosmetochem에 의해 시판되는 Slimming Factor Karkade™ [INCI: 히비스쿠스 사브다리파(Hibiscus Sabdariffa)], Infinitec Activos에 의해 시판되는 리포석티오닌(Liposuctionine) [제안된 INCI: 아세틸 헥사펩티드], Exsymol에 의해 시판되는 Xantalgosil C® [INCI: 아세필린 메틸실라놀 만누로네이트], Theophyllisilane C® [INCI: 메틸실라놀 카르복시메틸 테오필린 알기네이트], Glutrapeptide® [INCI: 피로글루타밀아미도에틸 인돌] 또는 Cafeisilane C [INCI: 실록산트리올 알기네이트, 카페인, 부틸렌 글리콜], Greentech에 의해 시판되는 Timiline® [INCI: 폴리글루쿠론산], Indena에 의해 시판되는 비스나딘(Visnadine) [INCI: 비스나딘] 또는 징코 빌로바(Ginkgo Biloba) 이합체 플라보노이드 파이토솜(Phytosome) [INCI: 인지질, 징코 빌로바 잎 추출물], Laboratoires Serobiologiques/Cognis/BASF에 의해 시판되는 Slimfit® LS 9509 [INCI: 세크로피아 옵투시폴리아(Cecropia Obtusifolia) 나무껍질 추출물], Lipotec/Lubrizol에 의해 시판되는 Silusyne™ [INCI: 대두(글리신 소야(Glycine Soja)) 오일, 소르비탄 세스퀴올레에이트, 이소헥사데칸, 소듐 히알루로네이트, 라우릴디모늄 하이드록시프로필 가수분해 대두 단백질, 아세틸 헥사펩티드-39] 또는 Liporeductyl® [INCI: 물, 글리세린, 레시틴, 카페인, 부처브룸(Butcherbroom)(루스쿠스 아쿨레아투스(Ruscus Aculeatus)) 뿌리 추출물, 말토덱스트린, 실리카, 차-하이드로아이오다이드, 프로필렌 글리콜, 담쟁이덩굴(헤데라 헬릭스(Hedera Helix)) 추출물, 카르니틴, 에스신, 트리펩티드-1, 잔탄 검, 카라기난(콘드루스 크리스푸스(Chondrus Crispus)), 디소듐 EDTA], Mibelle Biochemistry에 의해 시판되는 이소-슬림 복합체(Iso-Slim Complex) [INCI: 대두 이소플라본, 카페인, 카르니틴, 스피룰리나 플라텐시스(Spirulina Platensis) 추출물, 폴리소르베이트 80, 알코올, 페녹시에탄올, 아쿠아], 해피벨-PE(Happybelle-PE) [INCI: 레시틴, 비텍스 아그누스 카스투스(Vitex Agnus Castus) 추출물, 글리세린, 아스코르빌 테트라이소팔미테이트, 토코페롤, 카프릴산/카프르산 트리글리세라이드, 사이클로덱스트린, 알코올, 물] 또는 아마라셰이프(AmaraShape) [INCI: 레시틴, 카페인, 시트루스 아우란티움 아마라(Citrus Aurantium Amara) 추출물, 펜틸렌 글리콜, 알코올, 물], Pentapharm/DSM에 의해 시판되는 Regu®-Slim [INCI: 말토덱스트린, 카페인, 파울리니아 쿠파나(Paullinia Cupana) 종자 추출물, 카르니틴, 미정질 셀룰로스, 시스테인산, 판테인 설포네이트] 또는 Regu®-Shape [INCI: 이성화 리놀레산, 레시틴, 글리세린, 폴리소르베이트 80], Provital에 의해 시판되는 Provislim™ [INCI: 프로판디올, 물(아쿠아), 피세틴(Fisetin), 라즈베리 케톤], 미리셀린(Myriceline) [INCI: 디하이드로미리세틴] 또는 드레날리프(Drenalip) [INCI: 루스쿠스 아쿨레아투스(Ruscus Aculeatus) 뿌리 추출물, 시트루스 메디카 리모눔(Citrus Medica Limonum) 껍질 추출물, 솔리다고 비르가우레아(Solidago Virgaurea) 추출물, 아스트라갈루스 멤브라나세우스(Astragalus Membranaceus) 뿌리 추출물], 악티스컬프트(Actisculpt) [INCI: 콤미포라 미라(Commiphora Myrrha) 추출물, 콜레우스 포르스콜리이(Coleus Forskohlii) 뿌리 추출물], Rahn에 의해 시판되는 Perfeline® [INCI: 물, 카르니틴, 카페인, 루스쿠스 아쿨레아투스(Ruscus Aculeatus) 추출물] 또는 CellActive® Shape [INCI: 클로렐라 불가리스(Chlorella Vulgaris)/루피누스 알부스(Lupinus Albus) 단백질 발효물, 콜레우스 포르스콜리이(Coleus Forskohlii), 카페인], Rovi Cosmetics에 의해 시판되는 ProContour™ [INCI: 물, 알코올, 레시틴, 카페인, 카르니틴, 센텔라 아시아티카(Centella Asiatica) 잎 추출물, 포타슘 포스페이트, 콜레우스 포르스콜리이(Coleus Forskohlii) 뿌리 추출물, Sederma/Croda에 의해 시판되는 Unislim™ [INCI: 일렉스 파라구아리엔시스(Ilex Paraguariensis)(잎) 추출물, 물, 부틸렌 글리콜, 코페아 아라비카(Coffea Arabica)(커피) 종자 추출물(Bean), PEG-60 아몬드 글리세라이드, 글리세린, 세틸 하이드록시에틸셀룰로스], Redulite™ [INCI: 글리세린, 아쿠아, 에톡시디글리콜, 삼부쿠스 니그라(Sambucus Nigra), 소듐 폴리아크릴레이트], Pleurimincyl™ [INCI: 카페인, 부플레우룸 키넨시스(Bupleurum Chinensis) 추출물], Phytotal™ SL [INCI: 글리세린, 베르베나 오피시날리스(Verbena Officinalis) 추출물, 부틸렌 글리콜, 삼부쿠스 니그라(Sambucus Nigra) 꽃 추출물, 유게니아 카리오필루스(Eugenia Caryophyllus)(정향) 꽃 추출물, 레시틴], Phytosonic™ [INCI: 아쿠아, 유글레나 그라실리스(Euglena Gracilis) 추출물, 카페인, 글라우시움 플라붐(Glaucium Flavum) 잎 추출물], Ovaliss™ [INCI: 글리세린, 아쿠아, 코코-글루코시드, 카프릴릴 글리콜, 알코올, 글라우신], Lipocare™ [INCI: 카페인, 보조효소 A, 부플레우룸 키넨시스(Bupleurum Chinensis) 추출물], Cyclolipase™ [INCI: 글리세릴 폴리메타크릴레이트, 물, 카페인, 지질분해효소, 아데노신 포스페이트], Coaxel™ [INCI: 카페인, 보조효소 A, 카르니틴, 물, 글리세린], Bodyfit™ [INCI: 글리세린, 아쿠아(물), 코코-글루코시드, 카프릴릴 글리콜, 알코올, 글라우신] 또는 벡셀[INCI: 아쿠아, 프로필렌 글리콜, 레시틴, 카페인, 팔미토일 카르니틴], Seppic에 의해 시판되는 볼루포름(Voluform) [INCI: 팔미토일 이소류신], 아디폴레스(Adipoless) [INCI: 부틸렌 글리콜, 케노포듐 퀴노아(Chenopodium Quinoa) 종자 추출물], Silab에 의해 시판되는 Slimactive^® [INCI: 페우무스 볼두스(Peumus Boldus) 잎 추출물], Remoduline^® [INCI: 시트루스 아우란티움 아마라(Citrus Aurantium Amara) 꽃 추출물], 프로-스벨틸(Pro-Sveltyl) [INCI: 넬룸비움 스페시오숨(Nelumbium Speciosum) 추출물], Biosculptine^® [INCI: 가수분해된 셀로시아 크리스타타(Celosia Cristata) 꽃/종자 추출물, 가수분해된 프루넬라 불가리스(Prunella Vulgaris) 추출물], Affiness® [INCI: 가수분해된 코리안드룸 사티붐(Coriandrum Sativum) 과일 추출물, 시트루스 아우란티움 둘시스(Citrus Aurantium Dulcis)(오렌지) 과일 추출물] 또는 스템스벨트(Stemsvelt) [INCI: 물, 부틸렌 글리콜, 실리붐 마리눔(Silybum marinum) 추출물], Solabia에 의해 시판되는 델리피돌(Delipidol) [INCI: 티로실 푸니케이트], Guaraslim^® [INCI: 부틸렌 글리콜, 물, 카페인, 파울리니아 쿠파나(Paullinia Cupana) 종자 추출물, 프티코페탈룸 올라코이데스(Ptychopetalum Olacoides) 나무껍질 추출물] 또는 Caobromine^® [INCI: 테오브로마 코코아(Theobroma Cocoa) 껍질 추출물], Soliance에 의해 시판되는 압돌리안스(Abdoliance) [INCI: 수크로스 팔미테이트, 폴리소르베이트 20, 글리세릴 리놀레네이트, 파울리니아 쿠파나(Paullinia Cupana) 종자 추출물, 말토덱스트린, 프루누스 아미그달루스 둘시스(Prunus Amygdalus Dulcis)(스윗 아몬드) 오일, 레시틴, 물, 시트루스 아우란티움 아마라(Citrus Aurantium Amara)(비터 오렌지) 껍질 추출물, 페녹시에탄올, 토코페롤], 베타프롤린(Betaphroline) [INCI: 테프로시아 푸르푸레아(Tephrosia Purpurea) 종자 추출물] 또는 PRO-DG [INCI: 물, 플랑크톤 추출물], Vincience/ISP에 의해 시판되는 UCPeptide™ V [INCI: 물, 부틸렌 글리콜, 펜타펩티드] 또는 ATPeptide™ IS [INCI: 트리펩티드-3] 또는 이들의 혼합물이다.

특정 구체예에서, 견고화 및/또는 리덴시파잉(redensifying) 및/또는 리스트럭처링(restructuring) 작용제는, 예를 들어, 비제한적인 예로, 특히 말피기아 푸니시톨리아(Malpighia punicitolia), 시나라 스콜리무스(Cynara scolymus), 고시피움 헤르바세움(Gossypium herbaceum), 알로에 바르바덴시스(Aloe Barbadensis), 파니쿰 밀리아세움(Panicum miliaceum), 모루스 니그라(Morus nigra), 세사뭄 인디쿰(Sesamum indicum), 글리신 소야(Glycine soja), 트리티쿰 불가레(Triticum vulgare)의 추출물, Provital에 의해 시판되는 Pronalen^®　Refirming HSC [INCI: 트리티쿰 불가레(Triticum Vulgare), 실리붐 마리아눔(Silybum Marianum), 글리신 소이(Glycine Soy), 에퀴세툼 아르벤세(Equisetum Arvense), 알케밀라 불가리스(Alchemilla Vulgaris), 메디카고 사티바(Medicago Sativa), 라파누스 사티부스(Raphanus Sativus)] 또는 Polyplant^®　Refirming [INCI: 콘플라워(Coneflower), 아시아틱 센텔라(Asiatic Centella), 푸쿠스(Fucus), 페누그리크(Fenugreek)], Atrium Biotechnologies/Unipex Innovations에 의해 시판되는 Lanablue^® [INCI: 소르비톨, 조류 추출물], Pentapharm/DSM에 의해 시판되는 Pepha^®-Nutrix [INCI: 천연 영양 인자], 이소플라본을 함유하는 식물 추출물, Sederma/Croda에 의해 시판되는 Biopeptide　EL^TM [INCI: 팔미토일 올리고펩티드], Biopeptide　CL^TM [INCI: 팔미토일 올리고펩티드], Vexel^® [INCI: 물(아쿠아), 프로필렌 글리콜, 레시틴, 카페인, 팔미토일 카르니틴], Matrixyl^® [INCI: 팔미토일 펜타펩티드-3], Matrixyl^® 3000 [INCI: 팔미토일 테트라펩티드-3, 팔미토일 올리고펩티드] 또는 Bio-Bustyl^TM [INCI: 글리세릴 폴리메타크릴레이트, 라넬라(Rahnella) 콩 단백질 발효물, 물(아쿠아), 프로필렌 글리콜, 글리세린, PEG-8, 팔미토일 올리고펩티드], Laboratoires Serobiologiques/Cognis/BASF에 의해 시판되는 Dermosaccharides^®　HC [INCI: 글리세린, 물(아쿠아), 글리코사미노글리칸, 글리코겐], Aglycal^® [INCI: 만니톨, 사이클로덱스트린, 글리코겐, 아라토스타필로스 우바 우르시(Aratostaphylos Uva Ursi) 잎 추출물], Cytokinol^®　LS [INCI: 가수분해된 카세인, 가수분해된 효모 단백질, 리신 HCl] 또는 Firmiderm^®　LS9120 [INCI: 테르미날리아 카타파(Terminalia Catappa) 잎 추출물, 삼부쿠스 네그라(Sambucus Negra) 꽃 추출물, PVP, 탄닌산], Silab에 의해 시판되는 Liftline^® [INCI: 가수분해된 밀 단백질], Raffermine^® [INCI: 가수분해된 대두 분말] 또는 Ridulisse C^® [가수분해된 대두 단백질], Lipotec/Lubrizol에 의해 시판되는 Serilesine^® [INCI: 헥사펩티드-10], Decorinyl^TM [INCI: 트리펩티드-10 시트룰린], Trylagen^® [INCI: 슈도알테로모나스 발효 추출물, 가수분해된 밀 단백질, 가수분해된 대두 단백질, 트리펩티드-10 시트룰린, 트리펩티드-1], Silusyne™ [INCI: 대두(글리신 소야(Glycine Soja)) 오일, 소르비탄 세스퀴올레에이트, 이소헥사데칸, 소듐 히알루로네이트, 라우릴디모늄 하이드록시프로필 가수분해된 대두 단백질, 아세틸 헥사펩티드-39] 또는 Adifyline™[INCI: 아세틸 헥사펩티드-38], Coletica/Engelhard/BASF에 의해 시판되는 Ursolisome^® [INCI: 레시틴, 우르솔산, 아텔로콜라겐, 잔탄 검, 소듐 콘드로이틴 설페이트] 또는 Collalift^® [INCI: 가수분해된 맥아 추출물], Pentapharm/DSM에 의해 시판되는 Syn^®-Coll [INCI: 팔미토일 트리펩티드-5], Atrium Biotechnologies/Unipex Innovations에 의해 시판되는 Hydriame^® [INCI: 물(아쿠아), 글리코사미노글리칸, 스클레로티움 검(Sclerotium Gum)] 또는 Institut Europeen de Biologie Cellulaire/Unipex Innovations에 의해 시판되는 IP2000 [INCI: 덱스트란, 트리플루오로아세틸 트리펩티드-2]에 의해 형성된 군으로부터 선택된다.

특정 구체예에서, 피부 또는 표피 거대분자의 합성을 자극하는 작용제는, 예를 들어, 비제한적인 예로, 콜라겐 합성-자극제, 탄력소 합성-자극제, 데코린 합성-자극제, 라미닌 합성-자극제, 샤페론 합성-자극제, 시르투인 합성-자극제, 시르투인 활성화제, 아쿠아포린 합성-조절제, 섬유결합소 합성-자극제, 콜라겐 분해를 억제하는 작용제, 탄력소 분해를 억제하는 작용제, 칼리크레인, 백혈구 엘라스타제 또는 카텝신 G와 같은 세린 프로테아제를 억제하는 작용제, 섬유모세포 증식을 자극하는 작용제, 및 DNA 복구 작용제 및/또는 DNA 보호제, 예를 들어, 비제한적인 예로, 센텔라 아시아티카(Centella asiatica), 사카로마이세스 세리비지에(Saccharomyces cerivisiae), 솔라눔 투베로숨(Solanum tuberosum), 로스마리누스 오피시날리스(Rosmarinus officinalis), 백시니움 안구스티폴리움(Vaccinium angustifolium)의 추출물, 조류 마크로시스티스 피리페라(Macrocystis pyrifera), 파디나 파보니카(Padina pavonica)의 추출물, 콩, 맥아, 아마, 세이지, 붉은토끼풀, 칵콘(kakkon), 백색 루우핀 식물의 추출물, 헤이즐넛 추출물, 옥수수 추출물, 효모 추출물, 비치 슈트(beech shoot) 추출물, 콩과 씨앗(leguminous seed) 추출물, 식물 호르몬 추출물, 예를 들어, 특히 지베렐린(gibberellin), 옥신 또는 사이토키닌, 또는 동물플랑크톤 살리나(zooplankton Salina)의 추출물, 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus Bulgaricus)를 이용한 유제의 발효 생성물, 아시아티코사이드 및 이들의 유도체, 비타민 C 및 이의 유도체, 신남산 및 이의 유도체, Sederma/Croda에 의해 시판되는 Matrixyl^® [INCI: 팔미토일 펜타펩티드-3], Matrixyl^® 3000 [INCI: 팔미토일 테트라펩티드-3, 팔미토일 올리고펩티드] 또는 바이오펩티드 CL^TM [INCI: 글리세릴 폴리메타크릴레이트, 프로필렌 글리콜, 팔미토일 올리고펩티드], Antarcticine^® [INCI: 슈도알테로모나스 발효 추출물], Decorinyl^® [INCI: 트리펩티드-10 시트룰린], Serilesine^® [INCI: 헥사펩티드-10], Lipeptide [INCI: 가수분해된(Hydrolized) 식물성 단백질], Aldenine^® [INCI: 가수분해된 밀 단백질, 가수분해된 대두 단백질, 트리펩티드-1], Relistase™ [INCI: 아세틸아르기닐트립토필 디페닐글리신], Thermostressine™ [INCI: 아세틸 테트라펩티드-22], Peptide AC29 [INCI: 아세틸 트리펩티드-30 시트룰린], Diffuporine™ [INCI: 아세틸 헥사펩티드-37], Silusyne™ [INCI: 대두 (글리신 소야) 오일, 소르비탄 세스퀴올레에이트, 이소헥사데칸, 소듐 히알루로네이트, 라우릴디모늄 하이드록시프로필 가수분해된 대두 단백질, 아세틸 헥사펩티드-39] 또는 Adifyline™[INCI: 아세틸 헥사펩티드-38] (Lipotec/Lubrizol에 의해 판매됨), Alban Muller에 의해 시판되는 Drieline^® PF [INCI: 효모 베타글루칸], Solabia에 의해 시판되는 Phytovityl C^® [INCI: Aqua, 옥수수(Zea Mays) 추출물], Coletica/Engelhard/BASF에 의해 시판되는 Collalift^® [INCI: 가수분해된 맥아 추출물], Vincience/ISP/Ashland에 의해 시판되는 Phytocohesine PSP™ [INCI: 소듐 베타-시토스테롤 설페이트], 광물, 예를 들어, 특히 칼슘, 레티노이드 및 이들의 유도체, 이소플라보노이드, 카로테노이드, 특히 리코펜, 슈도디펩티드, 레티노이드 및 이들의 유도체, 예를 들어, 특히 레티놀 또는 레티닐 팔미테이트, 또는 특히 헤파리노이드에 의해 형성된 군으로부터 선택된다.

특정 구체예에서, 항-주름 및/또는 노화방지제는, 예를 들어, 비제한적인 예로, 특히 비티스 비니페라(Vitis vinifera), 로사 카니나(Rosa canina), 쿠르쿠마 롱가(Curcuma longa), 테오브로마 카카오(Theobroma cacao), 징코 빌로바(Ginkgo biloba), 레온토포듐 알피눔(Leontopodium alpinum) 또는 두날리엘라 살리나(Dunaliella salina)의 추출물 또는 가수분해된 추출물, Sederma/Croda에 의해 시판되는 Matrixyl^®[INCI:팔미토일 펜타펩티드-4], Matrixyl^® 3000^®[INCI:팔미토일 테트라펩티드-7, 팔미토일 올리고펩티드], Matrixyl^® Synthe'6™ [INCI: 글리세린, 물, 하이드록시프로필 사이클로덱스트린, 팔미토일 트리펩티드-38], Essenskin™[INCI:칼슘 하이드록시메티오닌], Renovage[INCI:테프레논], Resistem™ [INCI: 글로불라리아 코르디폴리아(Globularia Cordifolia) 발효소] 또는 Dermaxyl^®[INCI:팔미토일 올리고펩티드], Vialox^®[INCI:펜타펩티드-3], Syn^® Ake^®[INCI:디펩티드 디아미노부티로일 벤질아미드 디아세테이트], Syn^®-Coll[INCI:팔미토일 트리펩티드-5], Pentapharm/DSM에 의해 시판되는 Phytaluronate[INCI:로커스트 빈(Locust Bean)(세라토니아 실리쿠아(Ceratonia siliqua)) 검] 또는 Preregen^®[INCI:글리신 소야(대두) 단백질, 산화환원효소], Myoxinol™[INCI:가수분해된 히비스쿠스 에스쿨렌투스(Hibiscus Esculentus) 추출물], Syniorage™[INCI:아세틸 테트라펩티드-11], Laboratoires Serobiologiques/Cognis/BASF에 의해 시판되는 Dermican™[INCI:아세틸 테트라펩티드-9] 또는 DN AGE™ LS[INCI:카시아 알라타(Cassia Alata) 잎 추출물], Exsymol에 의해 시판되는 Algisum C^®[INCI:메틸실라놀 만누로네이트] 또는 Hydroxyprolisilane CN^®[INCI:메틸실라놀 하이드록시프롤린 아스파테이트], Argireline^®[INCI:아세틸 헥사펩티드-8], SNAP-7[INCI:아세틸 헵타펩티드-4], SNAP-8[INCI:아세틸 옥타펩티드-3], Leuphasyl^®[INCI:펜타펩티드-18], Inyline™[INCI:아세틸 헥사펩티드-30], Aldenine^®[INCI:가수분해된 밀 단백질, 가수분해된 대두 단백질, 트리펩티드-1], Preventhelia™[INCI:디아미노프로피오노일 트리펩티드-33], Decorinyl^®[INCI:트리펩티드-10 시트룰린], Decorinol^® [INCI: 트리펩티드-9 시트룰린], Trylagen^®[INCI:슈도알테로모나스 발효 추출물, 가수분해된 밀 단백질, 가수분해된 대두 단백질, 트리펩티드-10 시트룰린, 트리펩티드-1], Eyeseryl^®[INCI:아세틸 테트라펩티드-5], Peptide AC29[INCI:아세틸 트리펩티드-30 시트룰린], Relistase™[INCI:아세틸아르기닐트립토필 디페닐글리신], Thermostressine^®[INCI:아세틸 테트라펩티드-22], Lipochroman™ [INCI:디메틸메톡시 크로마놀], Chromabright™[INCI:디메틸메톡시 크로마닐 팔미테이트], Antarcticine^®[INCI:슈도알테로모나스 발효 추출물], dGlyage™[INCI:리신 HCl, 레시틴, 트리펩티드-9 시트룰린], Vilastene™[INCI:리신 HCl, 레시틴, 트리펩티드-10 시트룰린], Hyadisine™ [INCI: 슈도알테로모나스 발효 추출물], Hyanify™ [INCI: 사카라이드 이소머레이트], Diffuporine™[INCI:아세틸 헥사펩티드-37], Silusyne™[INCI:대두(글리신 소야) 오일, 소르비탄 세스퀴올레에이트, 이소헥사데칸, 소듐 히알루로네이트, 라우릴디모늄 하이드록시프로필 가수분해된 대두 단백질, 아세틸 헥사펩티드-39] 또는 Adifyline™[INCI:아세틸 헥사펩티드-38], Lipotec/Lubrizol에 의해 시판되는 Uplevity^TM [INCI: 아세틸 테트라펩티드-2] 또는 Juvefoxo^TM [INCI: 아세틸 헥사펩티드-51 아미드], Institut Europeen de Biologie Cellulaire에 의해 시판되는 Kollaren^®[INCI:트리펩티드-1, 덱스트란], Collaxyl^® IS[INCI:헥사펩티드-9], Laminixyl IS™[INCI:헵타펩티드], Orsirtine™ GL[INCI:오리자 사티바(Oryza Sativa)(벼) 추출물], D'Orientine™ IS[INCI:피닉스 닥틸리페라(Phoenix Dactylifera)(대추야자) 종자 추출물], Vincience/ISP/Ashland에 의해 시판되는 Phytoquintescine™[INCI:아인코른(Einkorn)(트리티쿰 모노코쿰(Triticum Monococcum)) 추출물] 또는 Quintescine™ IS[INCI:디펩티드-4], Infinitec Activos에 의해 시판되는 BONT-L-펩티드[INCI:팔미토일 헥사펩티드-19], Seppic에 의해 시판되는 Deepaline™ PVB[INCI:팔미토일 가수분해된 밀 단백질] 또는 Sepilift^® DPHP[INCI:디팔미토일 하이드록시프롤린], Gatuline^® Expression[INCI:아크멜라 올레라세아(Acmella Oleracea) 추출물], Gattefosse에 의해 시판되는 Gatuline^® In-Tense[INCI:스필란테스 아크멜라(Spilanthes Acmella) 꽃 추출물] 또는 Gatuline^® Age Defense 2[INCI:저글란스 레지아(Juglans Regia)(호두) 종자 추출물], Biotechmarine에 의해 시판되는 Thalassine™[INCI:조류 추출물], Atrium/Unipex Innovations에 의해 시판되는 ChroNOline™[INCI:카프로오일 테트라펩티드-3] 또는 Thymulen-4[INCI:아세틸 테트라펩티드-2], Coletica/Engelhard/BASF에 의해 시판되는 EquiStat[INCI:피루스 말루스(Pyrus Malus) 과일 추출물, 글리신 소야 종자 추출물] 또는 Juvenesce[INCI:에톡시디글리콜 및 카프릴산 트리글리세리드, 레티놀, 우르솔산, 피토나디온, 일로마스타트(Ilomastat)], Mibelle Biochemistry에 의해 시판되는 Ameliox[INCI:카르노신, 토코페롤, 실리붐 마리아눔(Silybum Marianum) 과일 추출물] 또는 PhytoCellTec Malus Domestica[INCI:말루스 도메스티카(Malus Domestica) 과일 세포 배양물], Silab에 의해 시판되는 Bioxilift[INCI:핌피넬라 아니숨(Pimpinella Anisum) 추출물] 또는 SMS Anti-Wrinkle^®[INCI:아노나 스쿠아모사(Annona Squamosa) 종자 추출물], Ca² ⁺ 채널의 길항제, 예를 들어, 비제한적인 예로, 알베린(alverine), 망간 또는 마그네슘 염, 특정 이차 또는 삼차 아민, 레티놀 및 이의 유도체, 이데베논(idebenone) 및 이의 유도체, 보조효소 Q10 및 이의 유도체, 보스웰산(boswellic acid) 및 이의 유도체, GHK 및 이의 유도체 및/또는 염, 카르노신 및 이의 유도체, DNA 복구 효소, 예를 들어, 비제한적인 예로, 특히 포톨리아제(photolyase) 또는 T4 엔도누클레아제 V, 또는 클로라이드 채널 효능제, 및/또는 이들의 혼합물에 의해 형성된 군으로부터 선택된다.

또 다른 특정 구체예에서, 이후 항염증제 및/또는 진통제는, 예를 들어, 비제한적인 예로, 특히 마데카소사이드(madecassoside)의 추출물, 에키나세아(echinacea)의 추출물, 아마란쓰 종자 오일, 백단향 오일, 복숭아 나무 잎의 추출물, 알로에 베라(Aloe vera), 아르니카 몬타나(Arnica montana), 아르테미시아 불가리스(Artemisia vulgaris), 아사룸 막시뭄(Asarum maximum), 칼렌둘라 오피시날리스(Calendula officinalis), 캡시쿰(Capsicum), 센티페다 쿤닌가미이(Centipeda cunninghamii), 카모밀라 레쿠티타(Chamomilla recutita), 크리눔 아시아티쿰(Crinum asiaticum), 하마멜리스 비르기니아나(Hamamelis virginiana), 하르파고파이툼 프로쿰벤스(Harpagophytum procumbens), 하이페리쿰 퍼포라툼(Hypericum perforatum), 릴리움 칸디둠(Lilium candidum), 말바 실베스트리스(Malva sylvestris), 멜라레우카 알테르니폴리아(Melaleuca alternifolia), 오리가눔 마조라나(Origanum majorana), 오리가눔 불가레(Origanum vulgare), 프루누스 라우로세라수스(Prunus laurocerasus), 로스마리누스 오피시알리스(Rosmarinus officialis), 살릭스 알바(Salix alba), 실리붐 마리아눔(Silybum marianum), 타나세툼 파르테니움(Tanacetum parthenium), 타이무스 불가리스(Thymus vulgaris), 운카리아 귀아넨시스(Uncaria guianensis) 또는 박시눔 미르틸루스(Vaccinum myrtillus)의 추출물, 오메가-3 및 오메가-6 지방산, Atrium Innovations/Unipex Group에 의해 시판되는 Neutrazen^TM [INCI: 물, 부틸렌 글리콜, 덱스트란, 팔미토일 트리펩티드-8], Lipotec/Lubrizol에 의해 시판되는 Delisens^TM [제안된 INCI: 아세틸 헥사펩티드-46], Institut Europeen de Biologie Cellulaire/Unipex Group에 의해 시판되는 Meliprene^® [INCI: 덱스트란, 아세틸 헵타펩티드-1], Laboratoires Serobiologiques/Cognis/BASF에 의해 시판되는 Skinasensyl^TM [INCI: 아세틸 테트라펩티드-15] 또는 Anasensyl^TM [INCI: 만니톨, 암모늄 글리시리제이트, 카페인, 힙포카스타눔(Hippocastanum)(마로니에) 추출물], Sederma/Croda에 의해 시판되는 Calmosensine^TM [INCI: 아세틸 디펩티드-1], 보조효소 Q10 또는 알킬 글리세릴 에테르, 또는 이들의 혼합물에 의해 형성된 군으로부터 선택된다.

적용

또 다른 양태에서, 본 발명은 피부의 치료 및/또는 관리를 위한 미용적 또는 피부약학적 조성물의 제조에서의 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주에 의해 생성된 엑소폴리사카라이드의 용도에 관한 것이다. 특히, 치료 및/또는 관리는 피부에서의 염증의 치료, 피부의 재상피화 및/또는 상처 치유의 치료, 셀룰라이트의 치료 및/또는 예방, 피부에서의 지질 축적 감소의 치료, 피부에서의 지질분해 자극의 치료, 콜라겐 합성 자극의 치료, 피부 노화의 치료 및/또는 예방, 피부 주름의 치료 및/또는 예방, 피부 견고함을 위한 치료, 피부 견고함 손실의 예방 및/또는 피부 탄성을 개선시키기 위한 치료를 나타낼 수 있다. 특히, 염증은, 예를 들어, 비제한적인 예로, 특히 수술 후, 강한 펄스화 광 요법(IPL)을 이용한 치료 후, 단색 펄스화 광 요법(레이저)을 이용한 치료 후, 화학 박피제를 이용한 치료 후 또는 공격적 외부 작용제에 대한 과노출 후의 건선, 민감한 피부, 피부염, 아토피 피부염, 접촉 피부염, 기저귀 피부염, 지루성 피부염, 습진, 주사, 여드름, 과증식성 피부병, 화상, 일광화상, 손발톱주위염, 피부 염증에 의해 형성된 군으로부터 선택된다. 특히, 할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주는 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주이다.

또 다른 특정 구체예에서, 본 발명은 세포에서의 녹터닌의 양의 감소를 위한 미용적 또는 피부약학적 조성물의 제조에서의 할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주에 의해 생성된 엑소폴리사카라이드의 용도에 관한 것이다. 특히, 할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주는 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주이다.

본 발명의 추가 양태는 미용적 또는 피부약학적 유효량의 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주에 의해 생성된 엑소폴리사카라이드의 투여를 포함하는 피부의 치료 및/또는 관리 방법에 관한 것이다. 특히, 치료 및/또는 관리는 피부에서의 염증의 치료, 피부의 재상피화 및/또는 상처 치유의 치료, 셀룰라이트의 치료 및/또는 예방, 피부에서의 지질 축적 감소의 치료, 피부에서의 지질분해 자극의 치료, 피부 노화의 치료 및/또는 예방, 피부 주름의 치료 및/또는 예방, 피부 견고함 개선을 위한 치료, 피부 견고함 손실의 예방 및/또는 피부 탄성을 개선시키기 위한 치료를 나타낼 수 있다. 특히, 염증은, 예를 들어, 비제한적인 예로, 특히 수술 후, 강한 펄스화 광 요법(IPL)을 이용한 치료 후, 단색 펄스화 광 요법(레이저)을 이용한 치료 후, 화학 박피제를 이용한 치료 후 또는 공격적 외부 작용제에 대한 과노출 후의 건선, 민감한 피부, 피부염, 아토피 피부염, 접촉 피부염, 기저귀 피부염, 지루성 피부염, 습진, 주사, 여드름, 과증식성 피부병, 화상, 일광화상, 손발톱주위염, 피부 염증에 의해 형성된 군으로부터 선택된다. 특히, 할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주는 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주이다.

또 다른 특정 구체예에서, 본 발명은 미용적 또는 피부약학적 유효량의 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주에 의해 생성된 엑소폴리사카라이드의 투여를 포함하는 세포에서의 녹터닌 양의 감소 방법에 관한 것이다. 특히, 할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주는 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주이다.

또 다른 양태에서, 할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주에 의해 생성된 엑소폴리사카라이드는 포유동물 신체, 바람직하게는 인간의 신체 내의 작용 부위와 이의 접촉을 야기시키는 임의의 수단에 의해, 더욱 바람직하게는 이를 함유하는 조성물의 형태로 투여될 수 있다. 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주에 의해 생성된 엑소폴리사카라이드의 투여는 국소적 또는 경피적으로 수행된다. 더욱 특정한 양태에서, 국소적 또는 경피적 적용은 이온삼투요법, 소노포레시스, 전기천공, 기계적 압력, 삼투압 구배, 폐쇄 치료, 미세주사, 압력에 의한 바늘이 없는 주사, 미세전자 패치, 안면 마스크 또는 이들의 임의의 조합에 의해 수행된다.

적용 또는 투여의 빈도는 각각의 대상체의 요구에 따라 매우 다양할 수 있고, 1개월에 1회 내지 하루에 10회, 바람직하게는 1주일에 1회 내지 하루에 4회, 더욱 바람직하게는 1주일에 3회 내지 하루에 3회, 더욱 더 바람직하게는 하루에 1회의 적용 또는 투여 범위가 권장된다.

생물학적 물질의 기탁

할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주는 부다페스트 협약의 조건하에서 벨기에 미생물 수집 총괄 기구(BCCM)/라보라토리움 부어 마이크로바이올로지-박테리에베르자멜링(LMG)(BCCM/LMG)(University Ghent, K.L. Ledeganckstraat 35, 9000 Ghent, Belgium)에 기탁되었다. 기탁은 2013년 9월 18일에 이루어졌고, 수탁 번호는 LMG P-27891이었다.

실시예

상기에 특별히 나열되었거나 아니건 간에 우선권이 주장되는 임의의 종래 출원을 포함하는 상기 언급된 문헌 각각은 참조로서 본원에 포함된다. 임의의 문헌의 언급은 상기 문헌이 종래 기술로서 자격이 있거나, 임의의 권한으로 당업자의 일반 지식을 구성하는 것을 인정하는 것이 아니다. 실시예, 또는 달리 명백히 표시된 것을 제외하고는, 물질의 양, 반응 조건, 분자량, 탄소 원자의 수 등을 명기하는 본 발명의 설명에서의 모든 수치적 양은 근사치인 것으로 이해되어야 하며, 즉, 표시된 값에 비해 ± 5%, 더욱 바람직하게는 ± 3%, 더욱 바람직하게는 ± 1%, 더욱 바람직하게는 ± 0.1%, 더욱 더 바람직하게는 ± 0.01%의 변동성에 적용된다.

실시예 1: 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주에 의해 배출되는 엑소폴리사카라이드 획득.

A) 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주의 배양 방법.

수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주를 물, 탄소원으로서 10 g/L의 글루코스, 탄소원 및 질소원으로서 3 g/L의 효모 추출물 및 3 g/L의 맥아 추출물, 및 NaCl, 마그네슘, 칼슘, 포타슘 및 바이카르보네이트 염을 함유하는 염 용액을 함유하는 배양 배지 중에서 32℃ 및 7.0의 pH에서 발효통 내에서 배양하였다. 이를 지수 성장 상태의 예비-배양물로부터 0.2 UA(흡광 단위)의 520 nm 흡광도로 접종시키고, 발효 기간을 44시간의 배양까지 연장시켰다. 용해된 산소 농도를 30% 포화 공기로 조절하였고, 교반을 300 내지 650 rpm의 값에서 유지시켰다.

B) 수탁 번호 LMG P-27891로 수탁된 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주의 엑소폴리사카라이드의 정제.

박테리아를 1시간 동안 6,000 g에서의 원심분리에 의해 엑소폴리사카라이드를 함유하는 실시예 1a)에 기재된 발생된 발효 브로쓰로부터 분리시켰다. 박테리아의 제거를 0.65 ㎛의 최종 포어 크기에서의 여과 및 결과로서 발생한 엑소폴리사카라이드를 함유하는 상층액의 이후의 동결-건조에 의해 완료하였다.

실시예 2: 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주에 의해 배출된 엑소폴리사카라이드의 물리화학적 특성규명.

수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주에 의해 생성된 엑소폴리사카라이드의 물리화학적 특성규명을 위해, 그리고 실시예 1에 따라 획득된 엑소폴리사카라이드의 단당류 함량에 대해 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 및 적외선 분광법(IR) 분석(굴절 지수 검출기)을 수행하였다.

고성능 액체 크로마토그래피( HPLC ) 및 적외선 분광법(IR) 분석

HPLC-IR 크로마토그램을 수행하기 위해, 실시예 1b)에 따라 획득된 엑소폴리사카라이드를 3 mg/mL로 물에 희석시키고, 이를 0.22 ㎛ 폴리에테르설폰 필터로 여과시켜 이로부터 샘플을 제조하였다. LC20A SHIMADZU 크로마토그래피 장치 상으로의 샘플의 100 μL 주입을 이용하여 HPLC 분석을 수행하였다. 사용된 크로마토그래피 컬럼은 PL AQUAGEL-OH 8 ㎛ AQUEOUS SEC COLUMNS이었고, 검출기는 RID-10A Refractive Index Detector(Shimadzu)였다. 사용된 용매는 물 중 0.1 M 소듐 아세테이트였고, 유량은 0.8 ml/분이었다. PL AQUAGEL-OH 8 ㎛ AQUEOUS SEC COLUMNS은 중성, 음이온성 및 양이온성 수용성 중합체에 적용되는 화합물을 이의 MW에 따라 분리시키는 능력을 갖는 패키징을 갖고, 8 ㎛의 입자 크기, 50 Å의 포어 크기 및 300 mm x 7.5 mm의 길이/내부 직경을 갖는 수성 크기 배제 크로마토그래피를 위한 컬럼이다.

분석 결과는 엑소폴리사카라이드에 대해 5.9분에서 중심을 갖는 피크를 나타내었고, 5 내지 8분의 체류 시간을 갖는 분획이 수집되었다.

단당류의 분석

실시예 1에 따라 획득된 엑소폴리사카라이드를 증류수에 대해 300 KDa 폴리에테르설폰 막을 이용하여 투석시켰다. 막에 의해 보유된 엑소폴리사카라이드를 이후 동결-건조시켰다. 고체로부터 단당류 분석을 수행하기 위해, 문헌[Montreuil et al. in, Glycoproteins . In Carbohydrate analysis: a practical approach, 1986, Eds Chaplin et Kennedy, I.R.L Press, Oxford, Washington D.C ., 143- 204]에 의해 이후에 변형된 문헌[Kamerling et al., Biochem. J., 1975 151, 491-495]에 기재된 방법을 후속시켰다. 가수분해된 단당류의 유도체화를 문헌[Rojas Escudero et al., J. Chromatogr . A., 2004, 1027:117- 120]의 방법에 따라 수행하였다. 크로마토그래피 분석을 위해 ZEBRON ZB-1701(Phenomenex) 컬럼, 250℃의 주입기 온도, 280℃의 검출기 온도, 및 160℃ 내지 250℃의 오븐 온도 램프 프로그래밍을 이용하였다.

이러한 분석의 결과로서, 획득된 단당류의 백분율은 15.21%의 글루코스, 59.95%의 만노스, 24.07%의 람노스, 0.30%의 자일로스 및 0.47%의 갈락투론산이었다.

실시예 3: 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주의 엑소폴리사카라이드를 포함하는 미용 크림 조성물의 제조.

적절한 용기 내에서, 물[INCI: 물(아쿠아)], 하이드롤라이트-5(Hydrolite-5) 2/016020[INCI: 펜틸렌 글리콜], 마이크로케어(Microcare) BNA [INCI: 벤질 알코올], 카르보폴 울트레즈(Carbopol Ultrez) 10 [INCI: 카르보머], 및 아르라톤(Arlatone) MAP 160K [INCI: 포타슘 세틸 포스페이트]를 혼합하였다. 상기 성분의 혼합물을 일정하게 교반하고, 70-75℃로 가열하였다. 상기 성분의 혼합물이 상 A를 구성하였다.

또 다른 용기 내에서, 상 B 성분인 에틸헥실 코코에이트[INCI: 에틸헥실 코코에이트], 파이토크림(Phytocream) 2000[INCI: 글리세릴 스테아레이트, 세테아릴 알코올, 포타슘 팔미토일 가수분해 밀 단백질], 핀솔브-TB(Finsolv-TN)[INCI: C12-15 알킬 벤조에이트], DC200 실리콘[INCI: 디메티콘] 및 페녹시에탄올[INCI: 페녹시에탄올]을 또한 70-75℃에서 용해시켰다. 용해된 후, 이들을 터빈 교반하에서 상 A에 천천히 첨가하였다.

상 C는 실시예 1의 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주의 엑소폴리사카라이드와 함께 물[INCI: 물(아쿠아)], 디소듐 하이드로겐포스페이트 12-하이드레이트[INCI: 디소듐 포스페이트], 소듐 디하이드로겐포스페이트 2-하이드레이트[INCI: 소듐 포스페이트], ZEMEA 프로판디올[INCI: 프로판디올], 더모소프트(Dermosoft) GMCY[INCI: 글리세릴 카프릴레이트] 및 잔탄 검[INCI: 잔탄 검]을 포함하였으며, 이를 교반하에서 40℃에서 상 A 및 B의 성분의 혼합물에 첨가하였다.

이후, 로터 교반하에서, 세피겔(Sepigel) 305[INCI: 물(아쿠아), 폴리아크릴아미드, C13-14 이소파라핀, 라우레쓰-7](상 D)를 다양한 상의 혼합물의 발생된 에멀젼에 첨가하였다.

즉시, 방향제 토누스(Tonus) E20040401[INCI: 방향제(파르퓸(PARFUM))](상 E)을 다시 로터 교반하에서 혼합물에 첨가하였다.

교반하에서 소듐 하이드록시드[INCI: 소듐 하이드록시드](6.0-6.5의 pH로 조정하기에 충분한 양 q.s)(상 F)의 첨가에 의해 pH를 6.0-6.5로 조정하여, 표 1에 제시된 비율을 갖는 미용 조성물을 획득하였다.

표 1

실시예 4: 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주의 엑소폴리사카라이드를 포함하는 미용 라이트 크림 조성물의 제조.

적절한 용기 내에서, 물[INCI: 물(아쿠아)], 하이드롤라이트-5 2/016020[INCI: 펜틸렌 글리콜], 프로필렌 글리콜[INCI: 프로필렌 글리콜], 마이크로케어 BNA[INCI: 벤질 알코올], 및 카르보폴 ETD 2020[INCI: 아크릴레이트/C10-30 알킬 아크릴레이트 크로스폴리머]를 혼합하였다. 상기 성분의 혼합물을 이들이 용해될 때까지 일정하게 교반하고, 70-75℃로 가열하였다. 상기 성분의 혼합물이 상 A를 구성하였다.

또 다른 용기 내에서, 상 B 성분인 카프릴산/카프르산 트리글리세라이드[INCI: 카프릴산 카프르산 트리글리세라이드], 페녹시에탄올[페녹시에탄올], 스테아르산[INCI: 스테아르산], 팔미트산[INCI: 팔미트산], 세틸 알코올[INCI: 세틸 알코올], 마소케어(Massocare) HD[INCI: 이소헥사데칸], 아를라셀(Arlacel) 165(리포뮬스(Lipomulse))[INCI: 글리세릴 스테아레이트, PEG-100 스테아레이트]를 또한 70-75℃에서 용해시켰다.

상 C는 실시예 1의 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주의 엑소폴리사카라이드와 함께 물[INCI: 물(아쿠아)], 디소듐 하이드로겐포스페이트 12-하이드레이트[INCI: 디소듐 포스페이트], 소듐 디하이드로겐포스페이트 2-하이드레이트[INCI: 소듐 포스페이트], ZEMEA 프로판디올[INCI: 프로판디올], 더모소프트 GMCY [INCI: 글리세릴 카프릴레이트] 및 잔탄 검[INCI: 잔탄 검]을 포함하였으며, 이를 교반하에서 40℃에서 상 A 및 B의 성분의 혼합물에 첨가하였다.

이후, 로터 교반하에서, 상 D 성분인 세피겔 305[INCI: 폴리아크릴아미드, 물(아쿠아), C13-14 이소파라핀, 라우레쓰-7] 및 방향제 토누스 E20040401[INCI: 방향제(파르퓸)]를 혼합물에 첨가하였다.

교반하에서 소듐 하이드록시드[INCI: 소듐 하이드록시드](6.0-6.5의 pH로 조정하기에 충분한 양 q.s)(상 E)의 첨가에 의해 pH를 6.0-6.5로 조정하여, 표 2에 제시된 비율을 갖는 미용 조성물을 획득하였다.

표 2

실시예 5: 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주의 엑소폴리사카라이드를 포함하는 미용 젤 크림 조성물의 제조.

적절한 용기 내에서, 물[INCI: 물(아쿠아)], 하이드롤라이트-5 2/016020[INCI: 펜틸렌 글리콜], 글리세린[INCI: 글리세린], 베타핀(Betafin) BP[INCI: 베타인], 및 카르보폴 울트레즈 10[INCI: 카르보머]을 교반 하에 혼합하였다. 이후, 아르라톤 Map 160 K[INCI: 포타슘 세틸 포스페이트]를 분산될 때까지 첨가하고, 전체 혼합물을 70-50℃에서 가열하였다. 상기 성분의 혼합물이 상 A를 구성하였다.

또 다른 용기 내에서, 상 B 성분인 마소케어 HD[INCI: 이소헥사데칸], 핀솔브 TN[INCI: C12-C15 알킬 벤조에이트], 세틸 알코올[INCI: 세틸 알코올], 페녹시에탄올[페녹시에탄올], 폴리소르베이트 20[INCI: 폴리소르베이트 20], 스테아르산[INCI: 스테아르산], 팔미트산[INCI: 팔미트산] 및 비타민 E 아세테이트[INCI: 토코페릴 아세테이트]를 또한 70-75℃에서 용해시키고, 터빈 교반 하에서 상 A에 천천히 첨가하였다.

상 C는 실시예 1의 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주의 엑소폴리사카라이드와 함께 물[INCI: 물(아쿠아)], 디소듐 하이드로겐포스페이트 12-하이드레이트[INCI: 디소듐 포스페이트], 소듐 디하이드로겐포스페이트 2-하이드레이트[INCI: 소듐 포스페이트], ZEMEA 프로판디올[INCI: 프로판디올], 더모소프트 GMCY[INCI: 글리세릴 카프릴레이트] 및 잔탄 검[INCI: 잔탄 검]을 포함하였으며, 이를 교반하에서 40℃에서 상 A 및 B의 성분의 혼합물에 첨가하였다.

이후, 유일한 상 D 성분인 방향제 토누스 E20040401[INCI: 방향제(파르퓸)]을 로터 교반하에서 균질화 될때까지 이전 혼합물에 첨가하였다.

교반하에서 소듐 하이드록시드[INCI: 소듐 하이드록시드](6.0-6.5의 pH로 조정하기에 충분한 양 q.s)(상 E)의 첨가에 의해 pH를 6.0-6.5로 조정하여, 표 3에 제시된 비율을 갖는 미용 조성물을 획득하였다.

표 3

실시예 6: 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주의 엑소폴리사카라이드를 포함하는 마이크로에멀젼의 제조.

적절한 용기 내에서, 도쿠세이트 소듐(Docusate Sodium) USP[INCI: 디에틸헥실 소듐 설포숙시네이트] 및 이소스테아르산[INCI: 이소스테아르산]을 혼합하였다(상 A).

또 다른 용기 내에서, 실시예 1의 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주의 엑소폴리사카라이드와 함께 물[INCI: 물(아쿠아)], 디소듐 하이드로겐포스페이트 12-하이드레이트[INCI: 디소듐 포스페이트], 소듐 디하이드로겐포스페이트 2-하이드레이트[INCI: 소듐 포스페이트], ZEMEA 프로판디올[INCI: 프로판디올], 더모소프트 GMCY[INCI: 글리세릴 카프릴레이트] 및 잔탄 검[INCI: 잔탄 검]의 혼합물을 에탄올[INCI: 알코올]에 용해시켰다(상 B). 천천히, 상 B를 교반하에서 상 A에 첨가하였다. 표 4 참조.

표 4

실시예 7: 실시예 6의 마이크로에멀젼을 포함하는 지질 나노입자 조성물의 제조.

물[INCI: 물(아쿠아)], Amigel^®[INCI: 스클레로티움 검], Zemea^TM[INCI: 프로판디올] 및 페녹시에탄올[INCI: 페녹시에탄올](상 A 성분)을 적절한 용기 내에 상기 순서대로 첨가하고, 균질성이 달성될 때까지 교반하였다.

실시예 6의 마이크로에멀젼, 정제 대두유 IP Ph. Eur. [INCI: 글리신 소야(대두) 오일], 아를라셀 83V[INCI: 소르비탄 세스퀴올레에이트], 및 아르라몰(Arlamol) HD[INCI: 이소헥사데칸]을 포함하는 혼합물(상 B 성분)을 또 다른 용기에 첨가하였다.

이후, 상 B 성분의 혼합물을 에멀젼이 형성될 때까지 터빈 교반하에서 상 A 성분의 혼합물에 첨가하였다.

최종적으로, 혼합물을 1분 동안 티타늄 프로브로 균질화시켰다.

이후, 교반하에서, SENSOMER CT-400[INCI: 카시아 하이드록시프로필트리모늄 클로라이드]의 물[INCI: 물(아쿠아)] 현탁액(상 C 성분)을 적가하였다. 표 5 참조.

표 5

실시예 8: 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주의 엑소폴리사카라이드를 포함하는 리포좀 획득.

실시예 1의 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주의 엑소폴리사카라이드의 혼합물과 함께 물[INCI: 물(아쿠아)], 디소듐 하이드로겐포스페이트 12-하이드레이트[INCI: 디소듐 포스페이트], 소듐 디하이드로겐포스페이트 2-하이드레이트[INCI: 소듐 포스페이트], ZEMEA 프로판디올[INCI: 프로판디올], 더모소프트 GMCY[INCI: 글리세릴 카프릴레이트] 및 잔탄 검[INCI: 잔탄 검]의 혼합물(상 A)을 적절한 용기로 배치하였다. 물, Zemea^TM[INCI: 프로판디올] 및 페녹시에탄올[INCI: 페녹시에탄올](상 B 내지 D)을 상기 상에 첨가하였다. 상기 모든 성분이 용해된 경우, 레시플로르(Leciflor) 100 IP[INCI: 레시틴](상 E)를 완전히 용해될 때까지 강한 교반하에서 조금씩 첨가하였다. 이후, 라브라솔(Labrasol)[INCI: PEG-8 카프릴산/카프르산 글리세라이드](상 F)을 첨가하고, 15분 동안 교반하여 에멀젼을 형성시켰다. 최종 획득된 조성물이 표 6에 제시된다.

표 6

샘플을 30초 동안 티타늄 프로브로 균질화시켰다.

실시예 9: 양이온성 중합체에 결합된 실시예 8의 리포좀 획득.

실시예 8에서 획득된 리포좀을 느린 교반하에서 95:5의 리포좀/양이온성 중합체 비로 SENSOMER^® CT-50[INCI: 물(아쿠아), 전분 하이드록시프로필트리모늄 클로라이드, 우레아, 소듐 락테이트, 소듐 클로라이드, 소듐 벤조에이트]에 첨가하였다.

실시예 10: 실시예 7의 지질 나노입자를 포함하는 미용 조성물의 제조.

적절한 용기 내에서, 물[INCI: 물(아쿠아)], 하이드롤라이트-5 2/016020[INCI: 펜틸렌 글리콜], 마이크로케어 BNA[INCI: 벤질 알코올], 및 카르보폴 울트레즈 10[INCI: 카르보머]를 교반하에서 혼합하였다. 다음으로, 아르라톤 Map 160 K[INCI: 포타슘 세틸 포스페이트]를 분산될 때까지 첨가하고, 전체 혼합물을 70-50℃에서 가열하였다. 상기 성분의 혼합물이 상 A를 구성하였다.

또 다른 용기 내에서, 상 B 성분인 에틸헥실 코코에이트[INCI: 에틸헥실 코코에이트], 파이토크림 2000[INCI: 글리세릴 스테아레이트, 세테아릴 알코올, 포타슘 팔미토일 가수분해 밀 단백질], 핀솔브-TN [INCI: C12-15 알킬 벤조에이트], DC200 실리콘[INCI: 디메티콘] 및 페녹시에탄올[INCI: 페녹시에탄올]을 또한 70-75℃에서 용해시켰다. 용해된 후, 이들을 터빈 교반하에서 상 A에 천천히 첨가하였다.

상 C인 실시예 7의 조성물을 교반하에서 40℃에서 상 A 및 B 성분의 혼합물에 첨가하였다.

이후, 상 D 성분인 세피겔 305[INCI: 폴리아크릴아미드, 물(아쿠아), C13-C14 이소파라핀, 라우레쓰-7], 및 상 E인 방향제 토누스 E20040401[INCI: 방향제(파르퓸)]을 로터 교반하에서 혼합물에 첨가하였다.

소듐 하이드록시드[INCI: 소듐 하이드록시드](상 F)의 첨가에 의해 pH를 6.0-6.5로 조정하여, 표 7에 제시된 비율을 갖는 미용 조성물을 획득하였다.

표 7

실시예 11: 일차 인간 피하 지방전구세포 세포주를 이용한 ELISA(효소 결합 면역흡착 측정) 비색 시험에 의한 녹터닌의 상대 수준에서의 감소 연구.

실시예 1에 따라 획득된 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주의 엑소폴리사카라이드를 처리하는 경우에 완전 분화 배지(기본 대조군)에서의 인간 지방전구세포에서의 녹터닌의 상대 수준에서의 감소를 연구하였다.

인간 지방전구세포를 96-웰 플레이트 상에 시딩(10,000 세포/웰, 조건 당 4웰)하고, 5%의 CO₂ 수준을 갖는 대기에서 37℃에서 24시간 동안 완전 성장 배지(PGM2, LONZA)에서 인큐베이션하였다.

인큐베이션 후, 세포를 10, 50, 100 및 1000 ㎍/ml의 엑소폴리사카라이드, 및 완전 분화 배지(PDM2, LONZA)에서 제조된 이의 각각의 비히클로 처리하였다. 37℃ 및 5% CO₂ 수준을 갖는 대기에서의 6일 처리 후, ELISA 시험을 이용하여 녹터닌 수준을 측정하고, 전체 단백질 농도를 BCA(바이신코닌산(Bicinchoninic Acid)) 검정을 이용하여 측정하였다. 각각의 농도에 대해, ELISA 결과를 BCA 결과로 표준화시켰다. 기본 대조군(완전 분화 배지로 처리된 세포)과 관련하여 상기 결과로부터 상대 녹터닌 수준을 계산하였다.

ELISA (효소 결합 면역흡착 측정) 시험에 의한 녹터닌 수준( CCRN4L )의 측정

탄소 이화대사산물 억제 4 유사 단백질( CCRN4L )( Uscn Life Science Inc)에 대한 ELISA 키트의 제조업체의 프로토콜을 후속하였다. 요컨대, 세포를 용해시키고, 세포 추출물을 CCRN4L에 특이적인 항체로 코팅된 96-웰 플레이트 상에서 인큐베이션하였다. 이후, 웰을 비오틴에 컨쥬게이션된 CCRN4L에 특이적인 항체로 코팅하였다. 다음으로, 효소 호스라디쉬 퍼옥시다제(Horseradish Peroxidase)(HRP)와 컨쥬게이션된 아비딘을 플레이트에 첨가하였다. 최종적으로, 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘 기질을 플레이트에 첨가하였고, 색에서의 변화가 각각의 농도에서 녹터닌의 양에 비례하여 관찰되었다. 마지막으로, 황산 용액을 첨가하여 효소-기질 반응을 중지시키고, 450 및 570 nm에서 흡광도 판독기(Multiskan-Thermo Electro Corporation)로 색 변화를 정량하였다.

BCA 검정( 바이신코닌산 )에 의한 전체 단백질의 결정

BCA 단백질 검정 키트(Pierce)의 제조업체의 프로토콜을 후속하였다. 용해된 세포의 전체 단백질 농도를 단백질 표준을 이용한 비색 반응을 통해 측정하였다. 요컨대, 표준 및 샘플을 96-웰 플레이트에 분배하였다. 이후, 플레이트를 키트의 시약과 함께 인큐베이션하고, 최종적으로 색에서의 변화를 570 nm에서 흡광도 판독기(Multiskan-Thermo Electro Corporation)로 측정하였다.

획득된 결과는 하기 표 8에 제시된다:

표 8

결과는 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주의 엑소폴리사카라이드가 연구된 모든 농도에서 녹터닌의 상대 수준을 감소시키고, 용량-반응 관계를 나타내는 것을 나타내었다.

실시예 12: 일차 인간 피하 지방전구세포 세포주를 이용한 지질 함량을 결정하기 위한 형광 검정에 의한 지질 축적(지방형성)의 백분율 감소에 대한 연구 .

완전 분화 배지(기본 대조군)에서의 인간 지방전구세포 세포에서의 지질 축적 백분율의 감소를 실시예 1에 따라 획득된 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주의 엑소폴리사카라이드에 의한 세포의 처리에 의해 연구하였다.

인간 지방전구세포 세포(LONZA)를 96-웰 플레이트 상에 4중으로(10,000세포/웰) 시딩하고, 이들을 5% CO₂를 갖는 대기에서 37℃에서 24시간 동안 완전 성장 배지에서 인큐베이션하였다.

완전 성장 배지(PGM2, LONZA)를 완전 분화 배지(PDM2, LONZA)로 교환하여 지방전구세포로부터 지방세포로의 분화를 유도하였다. 세포를 완전 분화 배지 중에서 제조된 10, 50, 100 또는 1000 ㎍/mL의 엑소폴리사카라이드로 처리하였다. 5% CO₂를 갖는 대기에서 37℃에서의 8일 처리 후, AdipoRed 검정(LONZA)을 이용하여 형광에 의한 각각의 농도에 대해 지질 축적을 측정하였다. 완전 성장 배지(분화 음성 대조군, 0%) 및 완전 분화 배지(기본 대조군, 100%)와 관련하여 이들 결과로부터 지질 축적 백분율을 계산하였다.

지질 축적의 결정

AdipoRed ^TM 검정 시약( LONZA )의 사용에 대해 제조업체의 프로토콜을 후속하였다. 요컨대, 세포를 세척하고, 시약 AdipoRed를 첨가하여 희석시켰다. 어두운 곳에서 실온에서 15분 동안 인큐베이션시킨 후, 485 nm에서의 여기 필터 및 530 nm에서의 방출 필터를 갖는 형광 플레이트 판독기(Fluostar-BMG)를 이용하여 상대 형광 단위(RFU)를 측정하였다.

획득된 결과가 표 9에 제시된다:

표 9

결과는 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주의 엑소폴리사카라이드가 10, 50 및 100 ㎍/mL에서 지질 축적의 백분율을 감소시킨 것을 나타내었으며, 이는 용량-반응 관계를 입증한다.

실시예 13: 밤 모드에 동기화된 일차 인간 피하 지방전구세포 세포주를 이용한 형광측정 검정에 의한 방출된 글리세롤의 상대 수준에서의 증가에 의한 지질분 해 활성에 대한 연구.

실시예 1에 따라 획득된 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주의 엑소폴리사카라이드로 처리된 완충액 HBSS(행크 평형 염 용액)(기본 대조군) 중 밤 모드에 동기화된 인간 지방전구세포에서 방출된 글리세롤의 상대 수준에서의 증가를 연구하였다.

인간 지방전구세포를 96-웰 플레이트 상에 시딩하고(LONZA)(10,000세포/웰), 5% CO₂를 갖는 대기에서 37℃에서 24시간 동안 완전 성장 배지(PGM2, LONZA)에서 인큐베이션하였다. 각각의 농축물을 삼중으로 검정하였다.

이후, 세포를 5% CO₂를 갖는 대기에서 37℃에서 6일 동안 완전 분화 배지(PDM2, LONZA)로 처리하였다.

분화 기간 후, 지방세포의 동기화 검정을 시작하여 매일의 밤/낮 주기를 유도하였다. 이를 수행하기 위해, 세포를 4일 동안 PMD2 중 멜라토닌이 있는 약 12시간(밤을 모방하는 조건) 및 멜라토닌이 없는 12시간(낮을 모방하는 조건)의 교대 주기(+/-; +/-; +/-; +/-)에 적용시켰다.

최종적으로, 5% CO₂를 갖는 대기에서 37℃에서 동기화된 지방세포를 밤 모드(멜라토닌의 존재)로 100 및 1000 ㎍/ml의 엑소폴리사카라이드, 및 HBSS 염 용액에서 제조된 이의 각각의 비히클로 6시간 동안 처리하였다.

밤 모드에서의 처리 후, 형광에 의해 각각의 농도에 대해 세포 상층액으로부터 자유 글리세롤의 수준을 결정하였다. 전체 단백질 농도를 세포 추출물로부터 BCA 검정에 의해 측정하였다. 자유 글리세롤의 결과를 각각의 조건에 대해 BCA 결과로 표준화시켰다. 이후, 방출된 글리세롤의 상대 수준을 상기 결과를 이용하여 기본 대조군(HBSS 염 용액으로 처리된 세포)과 관련하여 계산하였다.

형광측정 검정에 의한 방출된 글리세롤 수준의 측정

자유 글리세롤 검정 키트(Abcam)의 검출을 위한 제조업체 프로토콜을 후속하였다. 요컨대, 세포 상층액을 키트의 시약의 혼합물과 함께 96-웰 플레이트 상에서 37℃에서 인큐베이션시켰고, 자유 글리세롤이 효소적으로 산화되어 키트에 포함된 프로브와 반응한 경우 형광을 방출하는 생성물을 발생시켰다. 형광을 FLUOstar Galaxy(BMG) 판독기(530nm에서의 여기 및 590nm에서의 방출)로 정량하였다. 형광의 측정은 각각의 조건에서의 자유 글리세롤의 양과 비례하였다.

BCA ( 바이신코닌산 ) 검정을 이용한 전체 단백질 농도의 측정

BCA 단백질 검정 키트(Pierce)의 제조업체 프로토콜을 후속하였다. 용해된 세포 내의 전체 단백질 농도를 단백질 표준을 이용한 비색 반응을 이용하여 결정하였다. 요컨대, 표준 및 샘플을 96-웰 플레이트 상에 시딩하였다. 이후, 플레이트를 키트의 시약과 함께 인큐베이션하고, 마지막으로 흡광도 플레이트 판독기(Multiskan-Thermo Electro Corporation)에 의해 570 nm에서 색 변화를 측정하였다.

표 10

결과(표 10)는 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주의 엑소폴리사카라이드가 모든 연구된 농도에서 밤 모드에 동기화된 지방세포에 의해 방출된 글리세롤의 상대 수준을 증가시킨 것을 나타내었다.

실시예 14: 인간 피부 섬유모세포에서의 타입 I 콜라겐의 결정을 위한 시험관 내 검정.

미용 작용제에 의해 유도된 타입 I 콜라겐 합성의 자극을 일차 섬유모세포 배양물을 이용하여 ELISA 키트(효소 결합 면역흡착 측정)에 의해 검정하였는데, 이는 이들이 피부의 주요 콜라겐 생산자이기 때문이다.

인간 피부 섬유모세포를 트립신으로 처리하고, 48-웰 플레이트에 5 x 10⁴ 세포/웰의 밀도로 시딩하였다. 가습화된 대기에서 37℃, 5% CO₂에서의 24시간의 인큐베이션 후, 새로운 배지를 각각의 웰에서 시험되는 생성물의 농도(엑소폴리사카라이드는 10, 5 및 1 ㎍/mL로 시험되었음)로 첨가하였다. 시험되는 생성물로 처리되지 않은 세포를 대조군으로 이용하였다. 세포를 가습화된 대기에서 37℃, 5% CO₂에서 추가 48시간 동안 인큐베이션하였다. 이후, ELISA 시험으로 분석되는 배지를 각각의 웰로부터 수거하였다. 표준 곡선을 타입 I 콜라겐(Sigma)으로 생성시키고, 상기 표준 곡선의 희석액을 세포로부터 수거된 배지와 함께 96-웰 플레이트로 옮겼다. 플레이트를 밤새 가습화된 대기에서 4℃에 방치하였다. 이후, 웰을 0.05% Tween-20(Sigma)을 갖는 인산염 완충 염수(PBS)의 세척 용액으로 3회 세척한 후, 일차 항체의 가능한 비특이적 결합을 방지하기 위해 3% BSA(Sigma)를 갖는 PBS 용액을 이용하였다. 블로킹 후, 웰을 세척 용액으로 3회 세척하고, 웰을 항-타입 I 콜라겐 항체(Sigma)와 함께 2시간 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 웰을 다시 세척하고, 이차 항체 IgG-HRP(Molecular Probes)를 1시간 동안 첨가하였다. 인큐베이션이 완료된 후, 웰을 세척하고, 기질 OPD(Sigma)을 첨가하고, 이를 교반하에서 30분 동안 반응시켰다. H₂SO₄ 용액 3M의 첨가로 반응을 켄칭시키고, TECAN GENios 분광광도계 플레이트 판독기에서 490 nm의 파장에서 흡광도를 판독하였다.

표 11은 음성 대조군에서 관찰된 것과 관련한 타입 I 콜라겐의 백분율을 제시한다.

표 11

결과는 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주의 엑소폴리사카라이드가 1, 5 및 10 ㎍/mL에서 타입 I 콜라겐 합성의 백분율을 증가시킨 것을 나타냈다.

실시예 15: 엘라스타제 활성에 대한 시험관 내 검정

피부 탄성은 진피의 결합 조직 내의 단백질인 탄력소에 의해 영향을 받는 기계적 특성이다. 탄력소의 대사는 연령 및 탄력소 단백질 분해를 담당하는 효소인 엘라스타제 효소의 존재에 따라 감소한다. 엘라스타제의 억제는 피부 탄성의 손실을 치료하고/하거나 예방한다.

엘라스타제 활성은 EnzChek 엘라스타제 검정 키트(Molecular Probes)로 측정된다. 키트에 의해 제공된 탄력소는 컨쥬게이트의 형광이 켄칭되도록 BODIPY^®FL 염료로 표지된다. 비-형광 기질은 엘라스타제에 의해 분해되어 매우 형광인 단편이 생성될 수 있다. 즉, 형광 값이 높을수록, 엘라스타제 활성이 높고, 따라서 엘라스타제 효소의 억제가 낮아진다.

10, 5, 2 및 1 mg/ml의 실시예 1에 따라 획득된 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주의 엑소폴리사카라이드 또는 반응 완충액 단독(대조군)의 50 ㎕/웰이 블랙 96-웰 마이크로플레이트에 첨가된다. 이후, 50 ㎕의 BODIPY^®FL 염료로 표지된 탄력소 용액 뿐만 아니라 100 ㎕의 1 효소 단위/ml로 희석된 엘라스타제 효소 용액이 각각의 웰에 첨가된다. 플레이트는 실온에서 인큐베이션되고, 광으로부터 보호되고, 4시간 동안 다수의 시점에서 형광이 측정된다. 형광은 미세역가 플레이트 판독기 TECAN GENios에서 λ_exc= 490 nm 및 λ_em= 535 nm에서 판독된다.

표 12는 대조군과 관련한 형광의 백분율을 제시한다.

표 12

결과는 형광이 엑소폴리사카라이드의 농축에 따라 감소하고, 따라서 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주의 엑소폴리사카라이드가 엘라스타제 활성을 억제하는 것을 나타낸다.

실시예 16: 인간 각질세포에 대한 시험관 내 상처 치유 검정

인간 각질세포가 컨플루언스(confluence)로 성장된 후, 트립신으로 처리되고, 48-웰 플레이트에 5 x10⁴ 세포/웰의 밀도로 시딩된다. 5% CO₂ 가습화된 공기에서 37℃에서 48시간의 인큐베이션 후, 피펫 말단으로 단층을 스크래핑함으로써 세포가 없는 영역이 도입된다. 웰 당 10 ㎍/ml 농도의 실시예 1에 따라 획득된 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주의 엑소폴리사카라이드가 새로운 배지에 첨가된다. 엑소폴리사카라이드로 처리되지 않은 세포는 대조군으로 사용된다. 이 때, Zeiss Axiovert 40 CFL 현미경검사 및 AxioCam MRc5 카메라를 이용하여 스크레이프 상처의 사진을 찍는다(시간=0시간). 세포는 표준 배양 조건하에서 48시간 동안 상처 공간으로 이동되도록 한다. 이후, 세포의 새로운 사진을 찍는다(시간=48시간). 시간 0과 관련한 상처 치유의 백분율이 각 시간에서의 세포가 없는 영역을 측정함으로써 계산된다.

표 13은 대조군과 관련한 상처 치유의 백분율을 제시한다.

표 13

결과는 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주의 엑소폴리사카라이드가 상처 치유를 증가시키는 것을 나타내었다.

실시예 17: 밤 모드에 동기화된 일차 인간 피하 지방전구세포 세포주를 이용한 ELISA(효소 결합 면역흡착 측정) 비색 시험에 의한 녹터닌의 상대 수준에서의 감소 연구

실시예 11과 유사하게, 밤 모드에 동기화된 인간 지방전구세포에서의 녹터닌의 상대 수준에서의 감소가 연구된다.

인간 지방전구세포(LONZA)를 96-웰 플레이트 상에 시딩(10,000 세포/웰, 조건 당 4웰)하고, 5%의 CO₂ 수준을 갖는 대기에서 37℃에서 3일 동안 완전 성장 배지(PGM2, LONZA)에서 인큐베이션하였다.

4일 동안 CO₂ 인큐베이터(5% CO₂)에서 37℃에서 멜라토닌 1nM이 있는 완전 분화 배지(PDM2, LONZA)에서의 약 12시간(밤을 모방하는 조건) 및 멜라토닌이 없는 PDM2 중 12시간(낮을 모방하는 조건)의 교대 인큐베이션에 의해 매일의 밤/낮 주기를 유도하기 위한 지방전구세포의 동기화가 획득된다. 밤을 모방(+/-;+/-;+/-;+/-)하고, 낮을 모방(-/+;-/+;-/+;-/+)하는 동기화된 배양을 획득하기 위해 멜라토닌을 이용한 2개의 인큐베이션 프로토콜을 후속하였다.

4회의 매일 주기 후, 동기화된 세포는 CO₂ 인큐베이터(37℃ 및 5% CO₂)에서 유도된 밤(멜라토닌을 가짐) 조건에서 6시간 동안 100 ㎍/ml의 엑소폴리사카라이드 또는 기본 대조군으로 처리된다. 이후, ELISA 시험을 이용하여 녹터닌 수준이 측정되고, BCA(바이신코닌산) 검정을 이용하여 전체 단백질 농도가 측정된다. 각각의 농도에 대해, ELISA 결과가 BCA 결과로 표준화된다. 상대 녹터닌 수준이 기본 대조군(완전 분화 배지로 처리된 세포)과 관련한 상기 결과로부터 계산된다.

ELISA(효소 결합 면역흡착 측정) 시험에 의한 녹터닌 수준( CCRN4L )의 측정

탄소 이화대사산물 억제 4 유사 단백질( CCRN4L )(Uscn Life Science Inc)에 대한 ELISA 키트의 제조업체의 프로토콜이 실시예 11에서와 같이 후속된다.

BCA 검정( 바이신코닌산 )에 의한 전체 단백질의 결정

BCA 단백질 검정 키트(Pierce)의 제조업체 프로토콜이 실시예 11에서와 같이 후속된다. 획득된 결과는 표 14에 제시된다:

표 14

결과는 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주의 엑소폴리사카라이드가 유도된 밤에서 동기화된 인간 지방세포에서 상대 녹터닌 단백질 수준을 감소시킨 것을 나타낸다.

실시예 18a: 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주의 엑소폴리사카라이드를 포함하는 미용 젤 크림 조성물의 제조.

적절한 용기 내에서, 물[INCI: 물(아쿠아)], 하이드롤라이트-5 2/016020[INCI: 펜틸렌 글리콜], 글리세린[INCI: 글리세린], 베타핀 BP[INCI: 베타인], 마이크로케어 BNA[INCI: 벤질 알코올] 및 카르보폴 울트레즈 10[INCI: 카르보머]이 교반하에서 혼합된다. 이후, 아르라톤 Map 160 K[INCI: 포타슘 세틸 포스페이트]가 분산될 때까지 첨가되고, 전체 혼합물이 70-50℃에서 가열된다. 상기 성분의 혼합물이 상 A를 구성한다.

또 다른 용기 내에서, 상 B 성분인 마소케어 HD[INCI: 이소헥사데칸], 핀솔브 TN[INCI: C12-C15 알킬 벤조에이트], 세틸 알코올[INCI: 세틸 알코올], 페녹시에탄올[페녹시에탄올], 폴리소르베이트 20[INCI: 폴리소르베이트 20], 스테아르산[INCI: 스테아르산] 및 팔미트산[INCI: 팔미트산]이 또한 70-75℃에서 용해되고, 터빈 교반하에서 상 A에 천천히 첨가된다.

이후, 상 A 및 B의 혼합물이 50℃로 냉각되고, 상 C가 첨가된다.

이후, 유일한 상 D 성분인 방향제[INCI: 방향제(파르퓸)]가 균질화 될때까지 로터 교반하에서 이전 혼합물에 첨가된다.

상 F는 실시예 1의 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주의 엑소폴리사카라이드와 함께 물[INCI: 물(아쿠아)], 디소듐 하이드로겐포스페이트 12-하이드레이트[INCI: 디소듐 포스페이트], 소듐 디하이드로겐포스페이트 2-하이드레이트[INCI: 소듐 포스페이트], ZEMEA 프로판디올[INCI: 프로판디올], 더모소프트 GMCY[INCI: 글리세릴 카프릴레이트] 및 잔탄 검[INCI: 잔탄 검]을 포함하며, 이는 교반하에서 이전 상의 혼합물에 첨가된다.

표 15

실시예 18b: 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주의 엑소폴리사카라이드를 포함하는 미용 젤 크림 조성물의 제조

조성물은 실시예 18a의 설명에 따라 제조되나, 하기 농도를 갖는다:

표 16

실시예 19: 위약 조성물의 제조

조성물은 실시예 18a의 설명에 따라 제조되나, 상 F의 물과 하기 농도를 갖는다:

표 17

실시예 20: 위약 조성물의 제조

표 18

실시예 21: 여성 지원자에서의 셀룰라이트의 치료를 위한 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주의 엑소폴리사카라이드를 함유하 는 미용 조성물의 생체 내 연구.

연구가 최초 시간, 치료 15일 후 및 30일 후의 측정으로 30일 동안 수행된다. 27 내지 45세 연령의 21명의 여성 대상체의 패널이 엉덩이 및 대퇴부 부위(좌측 또는 우측)에서 실시예 18a의 조성물에 적용되고, 다른 면에 실시예 19의 위약 조성물이 적용된다. 25 내지 47세 연령의 20명의 여성 대상체의 두번째 패널이 엉덩이 및 대퇴부 부위(좌측 또는 우측)에서 실시예 18b의 조성물에 적용되고, 다른 면에 실시예 20의 위약 조성물이 적용된다. 크림은 하루에 한 번 밤에 적용된다. 대상체는 그들 자체의 기준을 제공하며, 다양한 시간에서 획득된 결과가 최초 시간에서 획득된 결과와 비교된다. 실시예 18a 및 18b의 조성물로 획득된 결과는 실시예 19 및 20의 위약 조성물로 획득된 결과와 각각 비교된다.

생성물의 효능이 하기에 의해 평가된다:

- 대퇴부 윤곽의 감소: 대퇴부의 디지털 사진의 이미지 분석에 의해 획득됨, 표 19 상의 결과.

- 피부 고저(relief)의 평탄화: 디지털 사진의 이미지 분석에 의해 획득됨, 표 20 상의 결과.

- 지방 균등성의 열조영술: 열화상 카메라를 이용한 엉덩이 및 대퇴부 뒤쪽의 이미지 및 피부 표면 온도의 균일성을 획득하기 위한 분석, 표 21 상의 결과.

- 피부 견고함: 대퇴부의 큐토메트리(cutometry)에 의해 측정, 표 22 상의 결과.

- 임상 효능에 의한 감각 분석: 셀룰라이트의 강도에 대한 스코어를 제공함으로써 연구자에 의해 수행됨. 피부 양상의 개선이 계산된다, 표 23 상의 결과.

표 19

표 20

표 21

표 22

표 23

결과는 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종 균주의 엑소폴리사카라이드가 다양한 농도에서 대퇴부 윤곽을 감소시키고, 피부 고저를 평탄화시키고, 피부 견고함 및 피부 양상을 개선시키는 것을 나타낸다.

본 발명을 예시하기 위한 목적상 특정한 대표적인 구체예 및 세부사항이 제시되었으나, 다양한 변화 및 변형이 본 발명의 범위를 벗어남이 없이 본원에서 이루어질 수 있음이 당업자에게 명백할 것이다. 이와 관련하여, 본 발명의 범위는 하기 청구항에 의해서만 제한되어야 한다.

벨기에 미생물 수집 총괄 기구(BCCM) & 라보라토리움 부어 마이크로바이올로지-박테리에베르자멜링(LMG)

LMGP-27891

20130918

Claims

피부의 미용적, 비-치료적 처치 또는 미용적, 비-치료적 관리를 위한 할로모나스 안티카리엔시스(Halomonas anticariensis) 종 균주에 의해 생성된 엑소폴리사카라이드(exopolysaccharide)를 포함하는 미용 조성물로서, 엑소폴리사카라이드가 1 중량% 내지 22 중량%의 글루코스, 50 중량% 내지 84 중량%의 만노스, 15 중량% 내지 30 중량%의 람노스, 3 중량% 이하의 갈락투론산 및 4 중량% 이하의 자일로스의 조성을 가지며, 단, 상기 백분율의 합계가 100%를 초과하지 않는, 미용 조성물.
제 1항에 있어서, 미용적, 비-치료적 처치 또는 관리가 셀룰라이트의 처치, 피부에서의 지질 축적 감소의 처치, 피부에서의 지질분해의 자극, 콜라겐 합성의 자극, 피부 노화의 처치 또는 예방, 피부 주름의 처치 또는 예방, 피부 견고함을 개선시키기 위한 처치, 피부 견고함 손실의 예방, 또는 피부 탄성을 개선시키기 위한 처치인 미용 조성물.
제 1항에 있어서, 미용적, 비-치료적 처치 또는 관리가 세포 내의 녹터닌(nocturnin)의 양을 감소시키는 미용 조성물.
제 1항에 있어서, 할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주가 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주인 미용 조성물.
제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항에 있어서, 8 ㎛의 입자 크기, 50 Å의 포어 크기 및 300 mm x 7.5 mm의 길이/내부 직경, 용리액으로서 소듐 아세테이트 0.1 M을 갖는 물 및 0.8 ml/분의 유량을 갖는 수성 크기 배제 크로마토그래피를 위한 크로마토그래피 컬럼을 이용한 HPLC 분석시 할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주에 의해 배출된 엑소폴리사카라이드가 4 내지 10분의 체류 시간을 갖는 미용 조성물.
미용적 유효량의 할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주에 의해 생성된 엑소폴리사카라이드 및 적어도 하나의 미용적으로 허용되는 부형제 또는 성분을 포함하는 미용 조성물로서, 엑소폴리사카라이드가 1 중량% 내지 22 중량%의 글루코스, 50 중량% 내지 84 중량%의 만노스, 15 중량% 내지 30 중량%의 람노스, 3 중량% 이하의 갈락투론산 및 4 중량% 이하의 자일로스의 조성을 가지며, 단, 상기 백분율의 합계가 100%를 초과하지 않는, 미용 조성물.
제 6항에 있어서, 할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주가 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주인 미용 조성물.
제 6항에 있어서, 엑소폴리사카라이드가 미용 전달 시스템 또는 지속 방출 시스템으로 혼입되거나, 고체 유기 중합체 또는 고체 무기 지지체 상에 흡착되는 미용 조성물.
제 6항에 있어서, 조성물이 크림, 다중 에멀젼, 용액, 액정, 무수 조성물, 수성 분산액, 오일, 밀크, 발삼, 포말, 로션, 젤, 크림 젤, 하이드로알콜 용액, 하이드로글리콜 용액, 하이드로젤, 리니멘트, 세라, 비누, 샴푸, 컨디셔너, 세럼, 다당류 필름, 연고, 무스, 포마드, 분말, 막대, 연필, 스프레이 또는 에어로졸에 의해 형성된 군으로부터 선택된 포뮬레이션 내에 제공되는 미용 조성물.
제 6항 내지 제 9항 중 어느 한 항에 있어서, 직물, 부직포 직물 또는 의료 장치에 혼입되는 미용 조성물.
제 6항 내지 제 9항 중 어느 한 항에 있어서, 미용적으로 허용되는 부형제 또는 성분이 녹터닌의 양을 감소시키는 작용제, 녹터닌 발현을 억제하는 작용제, 지질분해 작용제 또는 지질분해를 자극하는 작용제, 정맥강화 작용제(venotonic agent), PGC-1α 발현을 조정하는 작용제, PPARγ의 활성을 억제하는 작용제, 지방세포의 트리글리세라이드 함량을 감소시키는 작용제, 항-셀룰라이트 작용제, 지방세포 분화를 지연시키는 작용제, 피지 생성을 감소시키는 작용제, 피부 또는 표피 거대분자의 합성을 자극하거나 이들의 분해를 억제하거나 예방할 수 있는 작용제, 콜라겐 합성-자극제, 탄력소 합성-자극제, 데코린 합성-자극제, 라미닌 합성-자극제, 디펜신 합성-자극제, 샤페론 합성-자극제, cAMP 합성-자극제, AQP-3을 조정하는 작용제, 아쿠아포린 합성을 조정하는 작용제, 아쿠아포린 패밀리로부터의 단백질, 히알루론산 합성-자극제, 글리코사미노글리칸 합성-자극제, 섬유결합소 합성-자극제, 시르투인 합성-자극제, 열쇼크 단백질, 열쇼크 단백질 합성-자극제, 신경세포 세포외배출을 억제하는 작용제, 항콜린제, 근수축을 억제하는 작용제, 안티에이징 작용제, 항-주름 작용제, 땀억제제, 항염증제 또는 진통제, 항-소양증 작용제, 진정제, 마취제, 아세틸콜린-수용체 집락화 억제제, 아세틸콜린에스테라제를 억제하는 작용제, 피부이완제, 멜라닌 합성 자극제 또는 억제제, 화이트닝 또는 탈색 작용제, 전색소침착제, 자가-태닝 작용제, NO-신타제 억제제, 5α-환원효소 억제제, 리실- 또는 프롤릴 하이드록실라제 억제제, 항산화제, 자유 라디칼 제거제 또는 대기오염에 대한 작용제, 반응성 카르보닐 종 제거제, 항-당화작용 작용제, 항히스타민제, 항바이러스제, 항기생충제, 유화제, 연화제, 유기 용매, 액체 분사제, 피부 컨디셔너, 습윤제, 수분을 보유하는 물질, 알파 하이드록시산, 베타 하이드록시산, 보습제, 표피 가수분해 효소, 비타민, 아미노산, 단백질, 색소 또는 착색제, 염료, 생체중합체, 젤화 중합체, 증점제, 계면활성제, 연화 작용제, 유화제, 결합제, 보존제, 눈밑 지방을 감소시키거나 처치할 수 있는 작용제, 엑스폴리에이팅 작용제(exfoliating agent), 각질용해제, 박리제(desquamating agent), 항미생물제, 항진균제, 정진균제, 살균제, 정균제, 각질층 성분의 합성을 자극하는 작용제, 세라미드, 지방산, 콜라겐 분해를 억제하는 작용제, 기질 금속단백분해효소를 억제하는 작용제, 탄력소 분해를 억제하는 작용제, 세린 프로테아제를 억제하는 작용제, 섬유모세포 증식을 자극하는 작용제, 각질세포 증식을 자극하는 작용제, 멜라닌세포 증식을 자극하는 작용제, 각질세포 분화를 자극하는 작용제, 항과다각화증 작용제, 면포용해제, 항-건선 작용제, DNA 복구제, DNA 보호제, 줄기세포 보호제, 안정제, 민감한 피부의 처치 또는 관리를 위한 작용제, 응고제, 항-스트레치 마크 작용제, 수렴제, PAR-2 활성을 억제하는 작용제, 치유를 자극하는 작용제, 공동애쥬번트 치유 작용제, 재상피화를 자극하는 작용제, 공동애쥬번트 재상피화 작용제, 사이토카인, 성장인자, 모세관 순환 또는 미세순환에 대해 작용하는 작용제, 혈관신생을 자극하는 작용제, 혈관 침투성을 억제하는 작용제, 세포 대사에 대해 작용하는 작용제, 진피-표피 접합부를 개선시키는 작용제, 모발 성장을 유도하는 작용제, 모발 성장 억제제 또는 지연제, 모발 상실 지연제, 보존제, 향수, 미용 탈취제 또는 체취 흡수제 또는 체취 차폐제, 킬레이트제, 식물 추출물, 정유, 해양 추출물, 생명공학 공정으로부터 획득된 작용제, 무기염, 세포 추출물, 일광차단제 및 자외선 A 또는 B 선 또는 적외선 A 선에 대해 활성인 유기 또는 무기 광보호제, 또는 이들의 혼합물에 의해 형성된 군으로부터 선택되는 미용 조성물.
미용적 유효량의 할로모나스 안티카리엔시스(Halomonas anticariensis) 종 균주에 의해 생성된 엑소폴리사카라이드(exopolysaccharide)의 투여를 포함하는 피부의 미용적, 비-치료적 처치 또는 미용적, 비-치료적 관리 방법으로서, 엑소폴리사카라이드가 1 중량% 내지 22 중량%의 글루코스, 50 중량% 내지 84 중량%의 만노스, 15 중량% 내지 30 중량%의 람노스, 3 중량% 이하의 갈락투론산 및 4 중량% 이하의 자일로스의 조성을 가지며, 단, 상기 백분율의 합계가 100%를 초과하지 않는, 방법.
제 12항에 있어서, 미용적, 비-치료적 처치 또는 관리가 셀룰라이트의 처치, 피부에서의 지질 축적 감소의 처치, 피부에서의 지질분해의 자극, 콜라겐 합성의 자극, 피부 노화의 처치 또는 예방, 피부 주름의 처치 또는 예방, 피부 견고함을 개선시키기 위한 처치, 피부 견고함 손실의 예방, 또는 피부 탄성을 개선시키기 위한 처치인 방법.
제 12항에 있어서, 방법이 세포 내의 녹터닌(nocturnin)의 양을 감소시키는 방법.
제 12 내지 제 14항 중 어느 한 항에 있어서, 할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주가 수탁 번호 LMG P-27891을 갖는 할로모나스 안티카리엔시스 종의 균주인 방법.