ES2316632T3

ES2316632T3 - Metodos y sistemas inmunoterapeuticos.

Info

Publication number: ES2316632T3
Application number: ES02783303T
Authority: ES
Inventors: Mark Larche; Philip William Ledger
Original assignee: Circassia Ltd
Current assignee: Niox Healthcare Ltd
Priority date: 2001-12-05
Filing date: 2002-12-05
Publication date: 2009-04-16
Anticipated expiration: 2022-12-05
Also published as: DE60229979D1; JP2005518367A; WO2003047618A3; CA2469078A1; AU2002347369A8; JP4874522B2; EP1453539A2; WO2003047618A2; EP1453539B1; ATE414534T1; US20060024334A1; US20110142867A1; AU2002347369A1; JP2009292838A

Abstract

Uso de (i) un polipéptido que comprende una primera secuencia de antígeno polipeptídico completa que comprende un epítopo de célula T o un polipéptido que comprende una parte de la primera secuencia de antígeno polipeptídico, parte que comprende un epítopo de célula T o (ii) un polipéptido que comprende una segunda secuencia de antígeno polipeptídico completa o un polipéptido que comprende una parte de la segunda secuencia de antígeno polipeptídico, parte que contiene un epítopo de célula T, para la fabricación de un medicamento para desensibilizar un individuo frente al segundo antígeno polipeptídico mediante un método que comprende: (a) administrar una composición primaria que comprende el polipéptido que comprende la primera secuencia de antígeno polipeptídico completa o el polipéptido que comprende la parte de la primera secuencia de antígeno polipeptídico al individuo de un modo suficiente para generar un estado hiporreactivo contra la primera secuencia de antígeno polipeptídico; (b) administrar una composición secundaria al individuo, en la que dicha composición secundaria comprende el polipéptido que comprende la segunda secuencia de antígeno completa o el polipéptido que comprende la parte de la segunda secuencia polipeptídica por lo que el estado hiporreactivo generado en la etapa (a) y la administración de la composición secundaria son suficientes para desensibilizar el individuo frente al segundo antígeno polipeptídico y en el que el primer antígeno polipeptídico es diferente del segundo antígeno polipeptídico y en el que el individuo se ha expuesto previamente al primer o al segundo antígeno polipeptídico.

Description

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Métodos y sistemas inmunoterapéuticos.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a métodos y sistemas inmunoterapéuticos y, en particular, se refiere a métodos para desensibilizar un individuo frente a antígenos polipeptídicos, particularmente frente a alérgenos polipeptídicos.

Antecedentes de la invención

La capacidad del sistema inmune de suscitar una respuesta frente a una molécula particular depende críticamente de su capacidad de reconocer la presencia de un antígeno. Clásicamente, el término antígeno se ha asociado a la capacidad de una molécula para ser un generador de anticuerpos mediante la inducción de células B. Sin embargo, ahora se conoce que las células T también poseen la capacidad de reconocer antígenos. El reconocimiento de antígeno de células T requiere que células presentadoras de antígenos (APC) presenten fragmentos antigénicos (péptidos) sobre su superficie celular en asociación con moléculas del complejo principal de histocompatibilidad (MHC). Las células T usan sus receptores de células T específicos de antígeno (TCR) para reconocer los fragmentos antigénicos presentados por las APC. Tal reconocimiento actúa como un desencadenante para el sistema inmune para generar una diversidad de respuestas para erradicar el antígeno que se ha reconocido.

Los linfocitos T se han implicado en la patogénesis de una amplia diversidad de enfermedades que implican reconocimiento inmune de antígenos obtenidos tanto de los entornos internos (hospedador) como externos. Las enfermedades autoinmunes tales como tiroiditis autoinmune, artritis reumatoide y lupus eritematoso surgen del reconocimiento por el sistema inmune de antígenos del hospedador o propios.

El reconocimiento de antígenos externos por el sistema inmune de un organismo, tal como el ser humano, puede dar como resultado en algunos casos enfermedades, conocidas como afecciones atópicas. Un ejemplo de las últimas son las enfermedades alérgicas que incluyen asma, dermatitis atópica y rinitis alérgica. En este grupo de enfermedades, los linfocitos B generan anticuerpos de la clase IgE (en seres humanos), que se unen a antígenos obtenidos de forma externa, que se denominan en este contexto alérgenos, ya que estas moléculas suscitan una respuesta alérgica. La producción de IgE específica de alérgeno depende de los linfocitos T que también se activan por (son específicas para) el alérgeno. Los anticuerpos IgE específicos de alérgeno se unen a la superficie de células, tales como basófilos y mastocitos, mediante la expresión por estas células de receptores de superficie celular para IgE. El entrecruzamiento de moléculas de IgE unidas a superficie mediante alérgeno da cómo resultado la desgranulación de estas células efectoras provocando la liberación de mediadores inflamatorios tales como histamina, 5-hidroxitriptamina y mediadores lipídicos tales como los sulfuroleucotrienos. Además de acontecimientos dependientes de IgE, determinadas enfermedades alérgicas tales como asma se caracterizan por acontecimientos independientes de IgE. Se ha demostrado que la inducción de la reacción de fase tardía es al menos en parte un acontecimiento independiente de IgE que depende de la activación de linfocitos T específicos de alérgeno.

Las enfermedades alérgicas mediadas por IgE se tratan normalmente hoy en día con agentes que proporcionan alivio sintomático o mediante prevención. Los ejemplos de tales agentes son antihistamínicos, agonistas \beta_{2} y glucocorticosteroides. Además, algunas enfermedades mediadas por IgE se tratan mediante procedimientos de desensibilización que implican la inyección periódica de componentes o extractos de alérgenos. Los tratamientos de desensibilización pueden inducir una respuesta de IgG que compite con IgE por alérgeno, o pueden inducir células T supresoras específicas que bloquean la síntesis de IgE dirigida contra alérgeno. Esta forma de tratamiento no siempre es eficaz y plantea el riesgo de provocar efectos secundarios graves, particularmente choque anafiláctico general. Esto puede ser mortal a menos que se reconozca inmediatamente y se trate con adrenalina.

El documento WO 99/34826 describe un método para desensibilizar un paciente frente a un alérgeno polipeptídico que comprende administrar un péptido obtenido del alérgeno en el que la restricción en una molécula de MHC de Clase II que posee el paciente se puede demostrar por el péptido y el péptido es capaz de inducir una respuesta de fase tardía en un individuo que posee dicha molécula de MHC de Clase II.

El documento WO 94/24281 describe epítopos de célula T de los alérgenos principales de Dermatophagoides (ácaro del polvo doméstico).

Sumario de la invención

La invención proporciona el uso de

(i): un polipéptido que comprende una primera secuencia de antígeno polipeptídico completa que comprende un epítopo de célula T o un polipéptido que comprende una parte de la primera secuencia de antígeno polipeptídico, parte que comprende un epítopo de célula T o

(ii): un polipéptido que comprende una segunda secuencia de antígeno polipeptídico completa o un polipéptido que comprende una parte de la segunda secuencia de antígeno polipeptídico, parte que contiene un epítopo de célula T, para la fabricación de un medicamento para desensibilizar un individuo frente al segundo antígeno polipeptídico mediante un método que comprende:

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(a): administrar una composición primaria que comprende el polipéptido que comprende la primera secuencia de antígeno polipeptídico completa o el polipéptido que comprende la parte de la primera secuencia de antígeno polipeptídico al individuo de un modo suficiente para generar un estado hiporreactivo contra la primera secuencia de antígeno polipeptídico;

(b): administrar una composición secundaria al individuo, en la que dicha composición secundaria comprende el polipéptido que comprende la segunda secuencia de antígeno completa o el polipéptido que comprende la parte de la segunda secuencia polipeptídica por lo que el estado hiporreactivo generado en la etapa (a) y la administración de la composición secundaria son suficientes para desensibilizar el individuo frente al segundo antígeno polipeptídico y en el que el primer antígeno polipeptídico es diferente del segundo antígeno polipeptídico y en el que el individuo se ha expuesto previamente al primer o al segundo antígeno polipeptídico.

La invención también proporciona productos que contienen

(i): un polipéptido que comprende una primera secuencia de antígeno completa que comprende un epítopo de célula T o un polipéptido que comprende una parte de la primera secuencia de antígeno polipeptídico, parte que comprende un epítopo de célula T y

(ii): un polipéptido que comprende una segunda secuencia de antígeno completa o un polipéptido que comprende una parte de la segunda secuencia de antígeno polipeptídico, parte que contiene un epítopo de célula T, como una preparación combinada para uso simultáneo, separado o secuencial en un método para desensibilizar el individuo frente al segundo antígeno polipeptídico que comprende las etapas (a) y (b) como se ha definido anteriormente y en el que el primer antígeno polipeptídico es diferente del segundo antígeno polipeptídico y en el que el {}\hbox{individuo se ha expuesto previamente al primer o el segundo antígeno polipeptídico.}

En determinados aspectos, el individuo es alérgico al primer antígeno polipeptídico. En otros aspectos, el primer antígeno polipeptídico también es un alérgeno aéreo. En una realización particularmente preferida, la composición primaria comprende uno o más péptidos Fel d 1 seleccionados del grupo que consiste en EICPAVKRDVDLFLTGT (SEC ID Nº 1), LFLTGTPDEYVEQVAQY (SEC ID Nº 2), EQVAQYKALPVVLENA (SEC ID Nº 3), KALPVVLE
NARILKNCV (SEC ID Nº 4), RILKNCVDAKMTEEDKE (SEC ID Nº 5), KMTEEDKENALSLLDK (SEC ID Nº 6), KENALSLLDKIYTSPL (SEC ID Nº 7), LTKVNATEPERTAMKK (SEC ID Nº 8), TAMKKIQDCYVENGLI (SEC ID Nº 9), SRVLDGLVMTTISSSK (SEC ID Nº 10), ISSSKDCMGEAVQNTV (SEC ID Nº 11), AVQNTVEDLKLN
TLGR (SEC ID Nº 12) y péptidos sustancialmente homólogos a una cualquiera o más de las SEC ID Nº 1-12.

El segundo antígeno polipeptídico puede ser un alérgeno obtenido o producido a partir de una cualquiera uno o más de las siguientes fuentes: látex; plantas tales como césped, árboles y ambrosía; pólenes; hongos y mohos; alimentos; insectos picadores incluyendo avispas; los chironomidae (mosquitos no mordedores); arañas y ácaros; moscas tales como mosca doméstica, mosca de la fruta, mosca azul de la oveja y mosca del gusano barrenador; gorgojo de los cereales; gusano de seda; abejas; larvas de mosquitos no mordedores; larvas de polilla de la colmena; gusano de la harina; cucaracha; larvas de escarabajo de Tenibrio molitor; y mamíferos tales como gato, perro, caballo, vaca, cerdo, oveja, conejo, rata, cobaya, ratón y gerbo.

En algunas realizaciones, el segundo antígeno polipeptídico es un alérgeno y se selecciona del grupo que consisten en Der p1; Der p 2; Der p 3; Der p 4; Der p 5; Der p 6; Der p 7; Der p 9; Der f 1; Der f 2; Der f 3; Der f 4; Der f 7; cadena 1 ó 2 de Fel d 1; Hev b 1; Hev b 3; Lol p 1; Lol p 2a; Lol p 3; Lol p 5a; Lol p 5b; isoforma 9 de Lol p; Lol p 11; Ole e 1; Par j P2; Par j P5; Par j P8; Par j P9; Par j 1; Phl p 1, Phl p 2, Phl p 5, Phl p 5b; Phl p 5a; VES V 5; VES M 1; VES V 1; VES V 2; VES VI; Bet v 1; Bet v 2; Bet v 3; Bet v 4; Que a I; Car b l; Aln g l; Rubisco; Ara h 1; Amb a 1; Amb a 2; Amb a 1.3; Amb a 1.2; Amb a 1.1; precursor de Cry j IB; precursor de Cry j IA; precursor de Cry j II; proteína Cry j II; precursor de Cry j I; Can f 1; Can f 2; fragmento de albúmina sérica; Equ c1; Equ c 2; Eur m 1; POA P 9; Cr p1; Cr p2; Bla g 2; Bla g 4; y Bla g 5.

En otras realizaciones, el segundo antígeno polipeptídico se obtiene o produce por un autoantígeno. En determinadas realizaciones, el autoantígeno se asocia a uno cualquiera de los siguientes trastornos autoinmunes: Esclerosis Múltiple; Diabetes; Artritis Reumatoide; Tiroiditis; Lupus Eritematoso Sistémico; Enfermedad De Behcet; Enfermedad Celíaca; o Miastenia grave. En realizaciones particularmente preferidas; el autoantígeno se selecciona del grupo que consiste en: proteína básica de mielina (MBP); proteína de proteolípido (PLP); glicoproteína de mielina de oligodendrocito (MOG); ácido glutámico descarboxilasa (GAD); insulina; IA-2 (una molécula similar a proteína fosfatasa); colágeno; proteínas de choque térmico (HSP); tiroglobulina; proteínas histona; cadena pesada de inmunoglobulina; antígeno S del ojo (Sag); HLA-B44; HLA B51; HSP65; gliadina; y receptor de acetilcolina. En otras realizaciones más, el segundo antígeno polipeptídico se obtiene o produce de un antígeno de trasplante.

Las composiciones administradas en la práctica de la invención se pueden administrar en una formulación de liberación lenta o en una emulsión de aceite y agua. Además, las composiciones se pueden administrar usando inyección intradérmica, inyección subcutánea, inyección intramuscular, inyección intravenosa, técnicas de administración transdérmica, intranasal, oral, intraocular o intratecal. En una realización preferida, una o más de las composiciones se proporcionan en una forma seca, en polvo y se administra usando una técnica de inyección de partículas transdérmica.

Es una ventaja de la presente invención que individuos que son alérgicos de forma múltiple a diferentes alérgenos se pueden tratar en un método único, con ahorro de tiempo. También es una ventaja de la presente invención que se puede usar un antígeno débil (por ejemplo, un alérgeno aéreo) para establecer un entorno que genera tolerancia que permite después que se administre un antígeno más fuerte (por ejemplo, un alérgeno de nuez) y aprovechar el entorno en una desensibilización frente a ese antígeno más fuerte.

Breve descripción de las Figuras

Figura 1. Administración de péptidos seguido de proteína completa disminuye la reacción de fase temprana cutánea a Fel d 1. En un experimento clínico controlado con placebo, doble ciego, a los sujetos se inyectó por vía transdérmica proteína Fel d 1 completa y la magnitud de la reacción se midió a los 15 minutos (nivel basal). Se administró una serie de inyecciones a sujetos de ensayo, donde las inyecciones se realizaron usando composiciones de péptidos obtenidos de la secuencia de aminoácidos de Fel d 1. La dosis de péptidos comenzó en 5 \mug para cada péptido y aumentó hasta que se hubo administrado una dosis acumulativa de 90 \mug. Aproximadamente 2-4 semanas después se inyectó la proteína Fel d 1 completa (proteína completa). 3-6 meses más tarde se realizó la exposición a proteína completa y se definió la magnitud de la reacción cutánea a los 15 minutos (resultado).

Figura 2. Administración de péptidos seguido de proteína completa disminuye la reacción de fase tardía cutánea a Fel d 1. En un experimento clínico controlado con placebo, doble ciego, a los sujetos se inyectó por vía transdérmica proteína Fel d 1 completa y se midió la magnitud de la reacción a las 6 horas (nivel basal). Se administró una serie de inyecciones a los sujetos de ensayo, donde las inyecciones se realizaron usando composiciones de péptidos obtenidos de la secuencia de aminoácidos de Fel d 1. La dosis de péptidos comenzó en 5 \mug de cada péptido y aumentó hasta que se hubo administrado una dosis acumulativa de 90 \mug. Aproximadamente 2-4 semanas más tarde se inyectó la proteína Fel d 1 completa (proteína completa). 3-6 meses más tarde se realizó la exposición a proteína completa y se definió la magnitud de la reacción cutánea a las 6 horas (resultado).

Figura 3. Se administraron péptidos del alérgeno de gato Fel d 1 por vía intradérmica a intervalos de 2 veces por semana con el siguiente programa de dosis: 0,1 \mug, 1,0 \mug, 5,0 \mug, 10,0 \mug, 25,0 \mug. No se observó ninguna reacción asmática tardía aislada (n=8 sujetos; datos agrupados). Los péptidos Fel d 1 que se administraron fueron: EICPAVKRDVDLFLTGT (SEC ID Nº 1); LFLTGTPDEYVEQVAQY (SEC ID Nº 2); EQVAQYKALPVVLENA (SEC ID Nº 3); KALPVVLENARILKNCV (SEC ID Nº 4); RILKNCVDAKMTEEDKE (SEC ID Nº 5); KMTEED
KENALSLLDK (SEC ID Nº 6); KENALSLLDKIYTSPL (SEC ID Nº 7); LTKVNATEPERTAMKK (SEC ID Nº 8); TAMKKIQDCYVENGLI (SEC ID Nº 9); SRVLDGLVMTTISSSK (SEC ID Nº 10); ISSSKDCMGEAVQNTV (SEC ID Nº 11); y AVQNTVEDLKLNTLGR (SEC ID Nº 12).

Descripción detallada de la invención

Antes de describir la presente invención de forma detallada, se tiene que comprender que esta invención no se limita a moléculas, métodos o parámetros de proceso ilustrados de forma particular, ya que tales, por supuesto, pueden variar. También se tiene que comprender que la terminología usada en este documento es solamente para el propósito de describir realizaciones particulares de la invención y no tiene por objeto ser limitante. Además, la práctica de la presente invención empleará, a menos que se indique de otro modo, métodos convencionales de virología, microbiología, biología molecular, técnicas de ADN recombinante e inmunología, que están todas dentro de la especialidad de la técnica. Tales técnicas se explican completamente en la bibliografía. Véase, por ejemplo, Sambrook, et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2a Edición, 1989); DNA Cloning: A Practical Approach, vol. I & II (D. Glover, ed); Oligonucleotide Synthesis (N. Gait, ed., 1984); A Practical Guide to Molecular Cloning (1984); y Fundamental Virology, 2a Edición, vol. I & II (B. N. Fields y D. M. Knipe, eds).

Se tiene que señalar que, como se usa en esta memoria descriptiva y las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares "un", "una", "el", "la" incluyen referencias plurales a menos que el contenido lo indique claramente de otro modo.

A. Definiciones

A menos que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos usados en este documento tienen el mismo significado como se comprende de forma común por un especialista en la técnica a la que se refiere la invención. Aunque varios métodos y materiales similares o equivalentes a los descritos en este documento se pueden usar en la práctica de la presente invención, los materiales y métodos preferidos se describen en este docu-
mento.

Al describir la presente invención se emplearán los siguientes términos y tienen por objeto definirse como se indica más adelante.

Con "jeringa sin aguja" se quiere decir un instrumento que suministra una composición particulada (por ejemplo, en forma de polvo) por vía transdérmica sin ayuda de una aguja convencional que perfore la piel. Las jeringas sin aguja para el uso con la presente invención se discuten a lo largo de este documento y se usan para realizar técnicas de inyección de partículas transdérmicas.

La expresión suministro "transdérmico" quiere decir administración intradérmica (por ejemplo, al interior de la dermis o epidermis), transdérmica (por ejemplo, "percutánea") y transmucosal, es decir, suministro por el paso de un agente al interior o a través de tejido cutáneo o de mucosa. Véase, por ejemplo, Transdermal Drug Delivery: Developmental Issues and Research Initiatives, Hadgraft y Guy (eds.), Marcel Dekker, Inc., (1989); Controlled Drug Delivery: Fundamentals and Applications, Robinson and Lee (eds.), Marcel Dekker Inc., (1987); y Transdermal Delivery of Drugs, Vols. 1-3, Kydonieus y Berner (eds), CRC Press, (1987). Por tanto, la expresión incluye el suministro de un suministro con jeringa sin aguja como se describe en la Patente de Estados Unidos Nº 5.630.796 así como el suministro mediado por partículas como se describe en la Patente de Estados Unidos Nº 5.865.796.

Un "péptido", que se usa de forma intercambiable en este documento con el término "polipéptido", se usa en su sentido más amplio para referirse a una composición de dos o más subunidades de aminoácidos, análogos de aminoácidos u otros peptidomiméticos. Las subunidades se pueden unir por enlaces peptídicos o mediante otros enlaces, por ejemplo, éster, éter, etc. Como se usa en este documento, el término "aminoácido" se refiere a aminoácidos naturales y/o no naturales o sintéticos, incluyendo glicina y los isómeros ópticos tanto D como L y análogos de aminoácidos y peptidomiméticos. Un péptido de tres o más aminoácidos se denomina de forma común un oligopéptido si la cadena peptídica es corta. Si la cadena peptídica es larga, el péptido se denomina típicamente un polipéptido o una proteína.

Un "antígeno" se refiere a cualquier agente, generalmente una macromolécula, que puede suscitar una respuesta inmunológica en un individuo. El término se puede usar para referirse a una macromolécula individual o a una población homogénea o heterogénea de macromoléculas antigénicas. Los antígenos incluyen alérgenos y autoantígenos. Como se usa en este documento, "antígeno" se usa generalmente para referirse a una molécula polipeptídica o una parte de la misma que contiene uno o más epítopos. Para los propósitos de la presente invención se pueden obtener o producir antígenos a partir de cualquier fuente apropiada. Además, para los propósitos de la presente invención, un "antígeno" incluye un polipéptido que tiene modificaciones, tales como deleciones, adiciones y sustituciones (generalmente de naturaleza conservativa) en la secuencia nativa, si el polipéptido mantiene una inmunogenicidad suficiente. Estas modificaciones pueden ser deliberadas, por ejemplo, por mutagénesis dirigida, o pueden ser accidentales, tal como mutaciones de hospedadores que producen los antígenos.

En diversos aspectos de la invención, un antígeno se describe como una molécula que contiene uno o más epítopos de célula T. Un "epítopo de célula T" se refiere generalmente a las características de una estructura peptídica que son capaces de inducir una respuesta de células T. En este sentido se acepta en la técnica que los epítopos de célula T comprenden determinantes peptídicos lineales que adoptan conformaciones extendidas dentro de la hendidura de unión a péptido de moléculas de MHC (Unanue et al. (1987) Science 236: 551-557). Como se usa en este documento, un epítopo de célula T generalmente es un péptido que tiene al menos aproximadamente 3-5 restos aminoacídicos y preferiblemente al menos 5-10 o más restos aminoacídicos. La capacidad de un antígeno particular de estimular una respuesta inmunológica mediada por células se puede determinar mediante varios ensayos bien conocidos, tal como por ensayos de linfoproliferación (activación de linfocitos), ensayos de células citotóxicas CTL o ensayando para linfocitos T específicos para el antígeno en un sujeto sensibilizado. Véase, por ejemplo, Erickson et al. (1993) J. Immunol. 151: 4189-4199; y Doe et al. (1994) Eur. J. Immunol 24: 2369-2376.

Un "alérgeno" es un antígeno que puede iniciar un estado de hipersensibilidad o que puede provocar una reacción de hipersensibilidad inmediata en un individuo ya sensibilizado con el alérgeno. Los alérgenos son comúnmente proteínas o agentes químicos unidos a proteínas que tienen la propiedad de ser alergénicos; sin embargo, los alérgenos también pueden incluir materiales orgánicos o inorgánicos obtenidos de una diversidad de fuentes sintéticas o naturales, tales como materiales vegetales, metales, ingredientes en cosméticos o detergentes, látex o similares. Los alérgenos pueden suscitar cualquier tipo de reacción de hipersensibilidad en un individuo sensibilizado. Por ejemplo, las alergias a penicilina se pueden manifestar como los cuatro tipos (Tipo I-IV) de reacciones de hipersensibilidad, la dermatitis de contacto se puede manifestar como una reacción de Tipo IV y la alergia al gluten se puede manifestar como una reacción de Tipo III. Sin embargo, los alérgenos típicamente están asociados a reacciones de hipersensibilidad inmediata de Tipo I en individuos sensibilizados.

Los alérgenos proteicos o peptídicos típicamente son moléculas que comprenden una región producida u obtenida a partir de fuentes conocidas, incluyendo, pero sin limitación, alérgenos proteicos específicos para el género Dermatophagoides; el género Euroglyphus; el género Felis; el género Ambrosia; el género Lolium; el género Phleum; el género Cryptomeria; el género Alternaria; el género Alnus; el género Betula; el género Carpinus; el género Quercus: el género Olea; el género Artemisia; el género Plantago; el género Parietaria; el género Canis; el género Blattella; el género Apis; el género Rubisco; el género Vespula; y el género Periplaneta.

También se conocen en la técnica técnicas para determinar la "identidad de secuencia" u "homología de secuencia" de ácidos nucleicos y aminoácidos. Típicamente, tales técnicas incluyen determinar la secuencia de nucleótidos del ARNm para un gen y/o determinar la secuencia de aminoácidos codificada por el mismo y comparar estas secuencias con una segunda secuencia de nucleótidos o aminoácidos. En general, "identidad" se refiere a una correspondencia exacta de nucleótido a nucleótido o aminoácido a aminoácido de dos secuencias polinucleotídicas o polipeptídicas, respectivamente. Dos o más secuencias (polinucleótido o aminoácido) se pueden comparar determinando su "porcentaje de identidad". El porcentaje de identidad de dos secuencias, secuencias de ácido nucleico o aminoácidos, es el número de coincidencias exactas entre dos secuencias alineadas divididas por la longitud de las secuencias más cortas y multiplicado por 100. Se proporciona un alineamiento aproximado para secuencias de ácido nucleico por el algoritmo de homología local de Smith y Waterman (1981) Advances in Applied Mathematics 2: 482-489. Este algoritmo se puede aplicar a secuencias de aminoácidos usando la matriz de puntuación desarrollada por Dayhoff, Atlas of Protein Sequences and Structure, M. O. Dayhoff ed., 5 supl. 3: 353-358, National Biomedical Research Foundation, Washington, DC, USA y normalizado por Gribskov (1986) Nucl. Acids Res. 14(6): 6745-6763. Una implementación ilustrativa de este algoritmo para determinar el porcentaje de identidad se proporciona por el Genetics Computer Group (Madison, WI) en la aplicación de utilidad "BestFit". Los parámetros por defecto para este método se describen en el Manual de Programa de Paquete de Análisis de Secuencia de Wisconsin, Versión 8 (1995) (disponible en Genetics Computer Group, Madison, WI). Un método preferido para establecer el porcentaje de identidad en el contexto de la presente invención es el uso del paquete de programas MPSRCH registrado por la Universidad de Edimburgo, desarrollado por John F. Collins y Shane S. Sturrok y distribuido por IntelliGenetics, Inc (Mountain View, CA). De esta serie de paquetes se puede emplear el algoritmo de Smith-Waterman, en el que se usan parámetros por defecto para la tabla de puntuación (por ejemplo, penalización de hueco abierto de 12, penalización de prolongación de hueco de uno y un hueco de seis). A partir de los datos generados, el valor "Coincidencia" refleja la "identidad de secuencia". Otros programas adecuados para calcular el porcentaje de identidad o similitud entre secuencias se conoce generalmente en la técnica, por ejemplo, otro programa de alineamiento es BLAST, usado con parámetros por defecto. Por ejemplo, se pueden usar BLASTN y BLASTP usando los siguientes parámetros por defecto: código genético = patrón; filtro = ninguno; hebra = ambas; límite = 60; expectativa = 10; Matriz = BLOSUM62; Descripciones = 50 secuencias; clasificación por = PUNTUACIÓN ALTA; Bases de datos = no redundante, GenBank + EMBL + DDBJ + PDB + traducciones CDS de GenBank + proteína Swiss + Spupdate + PIR. Se pueden encontrar detalles de estos programas en la siguiente dirección de internet: http://www.ncbi.nlm.gov/cgi-bin/BLAST.

Alternativamente se puede determinar la homología mediante hibridación de polinucleótidos en condiciones que forman dúplex estables entre regiones homólogas, seguido de digestión con nucleasa o nucleasas específicas de cadena sencilla y determinación de tamaño de los fragmentos digeridos. Dos ADN o dos secuencias polipeptídicas son "sustancialmente homólogas" entre sí cuando las secuencias muestran al menos aproximadamente el 80% - 85%, preferiblemente al menos aproximadamente el 90% y mucho mas preferiblemente al menos aproximadamente el 95% - 98% de identidad de secuencia a lo largo de una longitud definida de las moléculas, como se determina usando los anteriores métodos. Como se usa en este documento, sustancialmente homólogo también se refiere a secuencias que muestran identidad completa con el ADN o la secuencia polipeptídica especificada. Las secuencias de ADN que son sustancialmente homólogas se pueden identificar en un experimento de hibridación de Southern en, por ejemplo, condiciones rigurosas, como se ha definido para ese sistema particular. Por ejemplo, las condiciones de hibridación rigurosas pueden incluir formamida al 50%, solución de Denhardt 5x, SSC 5x, SDS al 0,1% y 100 \mug/ml de ADN de esperma de salmón desnaturalizado y las condiciones de lavado pueden incluir SSC 2x, SDS al 0,1% a 37ºC seguido de SSC 1x, SDS al 0,1% a 68ºC. La definición de condiciones de hibridación apropiadas está dentro de la especialidad de la técnica. Véase, por ejemplo, Sambrook et al., citado anteriormente; DNA Cloning, citado anteriormente; Nucleic Acid Hybridization, citado anteriormente.

Como se usa en este documento, la expresión "enfermedad autoinmune" significa un conjunto de síntomas y signos clínicos específicos de órgano o sistémicos sostenidos asociados a homeostasis inmune alterada que se manifiesta por defectos cualitativos y/o cuantitativos de repertorios autoinmunes expresados (Autoimmunity Physiology and Disease, Coutinho y Kazatchkine, eds, Wiley-Liss, 1993, capítulo 27, página 433). Las enfermedades autoinmunes se caracterizan por respuestas inmunes citotóxicas frente a epítopos en antígenos propios encontrados de forma nativa en el individuo enfermo. El sistema inmune del individuo activa después una cascada inflamatoria dirigida en células y tejidos que presentan esos antígenos propios específicos. La destrucción del antígeno, tejido, tipo celular u órgano atacado por el sistema inmune propio del individuo da lugar a los síntomas de la enfermedad. Las enfermedades autoinmunes clínicamente significativas incluyen, por ejemplo, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, diabetes de aparición en la infancia, lupus eritematoso sistémico, uveorretinitis autoinmune, vasculitis autoinmune, pénfigo ampollar, miastenia grave, tiroiditis autoinmune o enfermedad de Hashimoto, síndrome de Sjogren, orquitis granulomatosa, ovaritis autoinmune, enfermedad de Crohn, sarcoidosis, carditis reumática, espondilitis anquilosante, enfermedad de Graves y púrpura trombocitopénica autoinmune. Véase, por ejemplo, Paul, W. E. (1993) Fundamental Immunology, Tercera Edición, Raven Press, New York, capítulo 30, págs. 1033-1097 y Cohen et al. (1994) Autoimmune Disease Models, A Guidebook, Academic Press, 1994.

La expresión "antígeno propio", que se usa de forma intercambiable en este documento con el término "autoantígeno", significa un antígeno o una molécula capaz de ser reconocida durante una respuesta inmune, que normalmente es parte del individuo. Esto es en comparación con antígenos que son extraños o exógenos que normalmente no son parte del medio del individuo. Cada enfermedad autoinmune se caracteriza por una respuesta inmune dirigida contra un antígeno propio. Normalmente no hay respuestas inmunes activas contra antígenos propios y no aparecen síntomas. Con el desarrollo de una respuesta inmune contra un antígeno propio pueden aparecer enfermedades autoinmunes. Las enfermedades autoinmunes se presentan clínicamente con diferentes síntomas dependiendo del antígeno propio específico contra el que surge una respuesta inmune. Esta respuesta inmune da como resultado la destrucción de la estructura que contiene el antígeno propio y es la pérdida de esa estructura con pérdida concurrente de la función normal de esa estructura lo que da como resultado los síntomas de enfermedad autoinmune.

Las composiciones que comprenden un antígeno o alérgeno se preparan típicamente como composiciones farmacéuticas que pueden contener uno o más materiales añadidos, tales como soportes, vehículos y/o excipientes. "Soportes", "vehículos" y "excipientes" se refieren generalmente a materiales sustancialmente inertes que no son tóxicos, no farmacológicamente activos y no interaccionan con otros componentes de la composición de un modo perjudicial. Estos materiales se pueden usar para aumentar la cantidad de sólidos en composiciones particuladas. Los ejemplos de soportes o vehículos adecuados incluyen agua, silicona, gelatina, ceras y materiales similares. Los ejemplos de excipientes empleados normalmente incluyen calidades farmaceúticas de dextrosa, sacarosa, lactosa, trehalosa, manitol, sorbitol, inositol, dextrano, almidón, celulosa, fosfatos sódicos o cálcicos, carbonato cálcico, sulfato cálcico, citrato sódico, ácido cítrico, ácido tartárico, glicina,

\hbox{polietilenglicoles de
alto peso  molecular (PEG) y combinaciones de los mismos.}

Los términos "individuo" y "sujeto" se usan de forma intercambiable en este documento para referirse a cualquier miembro del subfilo cordata, incluyendo, pero sin limitación, seres humanos y otros primates, incluyendo primates no humanos tales como los chimpancés y otros simios y especies de monos; mamíferos incluyendo, por ejemplo, animales de granja tales como vacas, ovejas, cerdos, cabras y caballos, mamíferos domésticos tales como perros y gatos y animales de laboratorio incluyendo roedores tales como ratones, ratas y cobayas; aves, incluyendo aves domésticas, salvajes y de caza, tales como pollos, pavos y otras aves gallináceas, patos, gansos y similares. Los términos no indican ninguna edad particular. Por tanto, se pretende abarcar individuos tanto adultos como recién nacidos. Los métodos descritos en este documento tienen por objeto el uso en cualquiera de las anteriores especies de vertebrados, ya que los sistemas inmunes de todos estos vertebrados funcionan de forma similar.

B. Revisión general

Existe una necesidad de estrategias terapéuticas alternativas para desensibilizar sujetos frente a antígenos polipeptídicos, particularmente alérgenos. En particular, ya que muchos individuos son alérgicos o pueden requerir desensibilización frente a varios antígenos polipeptídicos, sería beneficioso proporcionar sistemas que permitieran la desensibilización a múltiples antígenos polipeptídicos y, en particular, múltiples alérgenos.

Más particularmente, se ha observado, sorprendentemente, que "la tolerancia" inducida en un individuo frente a un primer antígeno polipeptídico o alérgeno puede crear en el individuo un "entorno que genera tolerancia" en el que las respuestas inmunes inapropiadas frente a otros antígenos se pueden regular negativamente para proporcionar tolerancia frente a otros antígenos. Esta observación sorprendente significa que individuos alérgicos a múltiples alérgenos se pueden tratar en un periodo de tiempo muy reducido y que individuos gravemente alérgicos a algunos alérgenos (por ejemplo, cacahuetes) pero menos alérgicos a otros alérgenos (por ejemplo, desescamaciones de gato) se pueden beneficiar de una terapia en la que se establece tolerancia al alérgeno más débil y después se usa este entorno que genera tolerancia para proporcionar tolerancia frente al otro alérgeno más fuerte. Además, los individuos que padecen un trastorno autoinmune que se sensibilizan adicionalmente (o son de otro modo inmunes) frente a un antígeno o alérgeno no relacionado, se pueden beneficiar de un protocolo de tratamiento en el que se establece en primer lugar tolerancia al antígeno o alérgeno no relacionado y después se usa este entorno que genera tolerancia para proporcionar tolerancia frente al autoantígeno asociado al trastorno autoinmune.

En consecuencia, en un primer aspecto de la descripción se proporciona un método para desensibilizar un individuo frente a uno o más antígenos polipeptídicos, que contienen cada uno un epítopo de célula T, comprendiendo el método: etapa (1) administrar al individuo un péptido que contiene un epítopo de célula T o un ciclo de péptidos que contienen un epítopo de célula T, de un primer antígeno al que el individuo se ha expuesto previamente, para generar un estado de hiporreactividad frente al primer antígeno; después etapa (2) administrar al individuo un compuesto, es decir, una composición que comprende el epítopo de célula T de un péptido administrado en la etapa (1) y que comprende adicionalmente opcionalmente un epítopo de célula T de uno o más antígenos polipeptídicos frente al que el individuo se tiene que desensibilizar; y, si la composición administrada en la etapa (2) no contiene un epítopo de célula T de dichos uno o más antígenos polipeptídicos, el método comprende adicionalmente la etapa de (3) administrar al individuo una composición que contiene un epítopo de célula T del uno o más antígenos polipeptídicos frente a los que se tiene que desensibilizar el individuo, en el que las etapas (2) y (3), la composición se localiza sustancialmente en el sitio de administración y si se realizan las etapas

\hbox{(2) y (3), las composiciones se administran
sustancialmente al mismo sitio.}

Preferiblemente, el primer antígeno es un alérgeno. Además, el individuo que se tiene que tratar se sensibiliza típicamente frente al antígeno en el sentido de

\hbox{que el individuo muestra un reconocimiento patógeno del
primer  antígeno.}

De otro modo, en un primer aspecto de la descripción, se proporciona un método para desensibilizar un individuo frente a uno o más antígenos polipeptídicos. El método incluye, en una primera etapa, administrar al individuo una composición primaria que comprende un primer antígeno polipeptídico que contiene un epítopo de célula T, en el que el individuo se ha expuesto previamente al antígeno y la administración se realiza de un modo suficiente para generar un estado hiporreactivo contra el primer antígeno polipeptídico. Una vez que se ha establecido un estado hiporreactivo frente al primer antígeno polipeptídico, o al menos se ha producido un cambio hacia desensibilización, el método incluye la administración de una composición secundaria que comprende un segundo antígeno polipeptídico diferente frente al que se tiene que sensibilizar el individuo. La administración de la composición secundaria se realiza de tal forma que se aprovecha el entorno que genera tolerancia establecido mediante el uso de la composición primaria, donde ahora es posible establecer tolerancia frente al segundo antígeno polipeptídico diferente. La composición secundaria se coadministra con el primer antígeno polipeptídico o una molécula mayor que contiene el primer antígeno polipeptídico. Con "coadministrado" se quiere decir la administración simultánea o concurrente de antígenos polipeptídicos, por ejemplo, cuando ambos están presentes en la misma composición o se administran en composiciones separadas aproximadamente al mismo tiempo pero en sitios diferentes, así como el suministro de antígenos polipeptídicos en composiciones separadas en momentos diferentes. Por ejemplo, la composición secundaria se puede suministrar antes o después del suministro del primer antígeno polipeptídico (o una molécula mayor que comprende el primer antígeno polipeptídico) en el mismo sitio o uno diferente. El tiempo entre suministros puede variar de aproximadamente varios segundos hasta aproximadamente varios minutos, varias horas o incluso varios días. Además se pueden emplear diferentes métodos de suministro.

El primer antígeno polipeptídico es preferiblemente un alérgeno frente al que se sensibiliza el individuo. Además, en algunos ejemplos, el segundo antígeno polipeptídico es también un alérgeno, aunque un segundo alérgeno diferente. Los alérgenos adecuados para el uso de los métodos de la invención, por supuesto, se pueden obtener y/o producir usando métodos conocidos. La clases de alérgenos adecuados incluyen, pero sin limitación, pólenes, desescamaciones de animal, céspedes, mohos, polvos, antibióticos, venenos de insectos picadores y una diversidad de alérgenos ambientales (incluyendo agentes químicos y metales), farmacológicos y alimentarios. Los alérgenos de árboles comunes incluyen pólenes de chopo, álamo, fresno, abedul, arce, roble, olmo, nogal y árboles de pacana; los alérgenos vegetales incluyen los de centeno, ambrosía, plátano inglés, acedera y quinoa; los alérgenos de contacto vegetales incluyen los de zumaque venenoso, hiedra venenosa y ortigas; los alérgenos de césped comunes incluyen Timothy, Johnson, Bermuda, festuca y alérgenos de grama de prado; también se pueden obtener alérgenos comunes a partir de mohos u hongos tales como Alternaria, Fusarium, Hormodendrum, Aspergillus, Micropolispora, Mucor y actinomicetos termófilos; la penicilina y tetraciclina son alérgenos antibióticos comunes; se pueden obtener alérgenos epidérmicos a partir de polvos domésticos u orgánicos (de origen típicamente fúngico), a partir de insectos tales como ácaros domésticos (Dermatphagoides pterosinyssis) o a partir de fuentes animales tales como plumas y desescamaciones de gato y perro; los alérgenos alimentarios comunes incluyen leche y queso (lácteos), huevo, cereales, nueces (por ejemplo, cacahuetes), marisco (por ejemplo, crustáceos), alérgenos de guisante, semillas y gluten; los alérgenos ambientales comunes incluyen metales (níquel y oro), agentes químicos (formaldehído, trinitrofenol y turpentina), látex, goma, fibra (algodón o lana), arpillera, tinte de pelo, alérgenos cosméticos, detergentes y de perfume; los alérgenos farmacológicos comunes incluyen alérgenos de anestésicos locales y salicilatos; los alérgenos antibióticos incluyen alérgenos de penicilina y sulfonamida y los alérgenos de insecto comunes incluyen veneno de abeja, avispa y hormiga y alérgenos de cáliz de cucaracha. Los alérgenos particularmente bien caracterizados incluyen, pero sin limitación, los epítopos principal y críptico del alérgeno Der p I (Hoyne et al. (1994) Immunology 83190-195), fosfolipasa A2 de veneno de abeja (PLA) (Akdis et al. (1996) J. Clin. Invest. 98: 1676-1683), alérgeno de polen de abedul Bet v 1 (Bauer et al. (1997) Clin. Exp. Immunol. 107: 536-541) y el alérgeno de césped recombinante multi-epitópico rKBG8:3 (Cao et al. (1997) Inmunology 90: 46-51). Estos y otros alérgenos adecuados están disponibles en el mercado y/o se pueden preparar fácilmente como extractos siguiendo técnicas conocidas.

En la descripción preferida, el alérgeno usado en la composición primaria es un Fel d 1 (el alérgeno de piel felina y glándula salival del gato doméstico Felis domesticus, cuya secuencia de aminoácidos se describe en la Publicación Internacional WO 91/06571); Der p I, Der p II, Der fI o Der fII (los alérgenos proteicos principales del ácaro del polvo doméstico Dermatophagoides, secuencias de aminoácidos descritas en la Publicación Internacional WO 94/24281); o alérgenos presentes en cualquiera de los siguientes: pólenes de césped, árbol y hierba (incluyendo ambrosía); hongos y mohos; alimentos (por ejemplo, pescado, crustáceos, cangrejos, bogavante, cacahuetes, nueces, gluten de trigo, huevos y leche); insectos picadores, por ejemplo, abeja, avispa y avispón y los chirnomidae (mosquitos no mordedores); arañas y ácaros, incluyendo el ácaro del polvo doméstico; alérgenos encontrados en las desescamaciones, orina, saliva, sangre u otros fluidos corporales de mamíferos, tales como gato, perro, vacas, cerdos, oveja, caballo, conejo, rata, cobaya, ratón y gerbo; partículas transmitidas por el aire en general; látex; y aditivos de detergente proteico.

Cuando el alérgeno es una proteína de insecto, los péptidos se pueden seleccionar de cualquiera de mosca doméstica, mosca de la fruta, mosca azul de la oveja, mosca del gusano barrenador, gorgojo de los cereales, gusano de seda, abeja, larvas de mosquito no mordedor, larvas de polilla de la colmena, gusano de harina, cucarachas y larvas de escarabajo Tenibrio molitor. Todos estos son alérgenos de insecto, son de importancia particular para problemas alérgicos que surgen en el lugar de trabajo.

Se prefiere que el alérgeno presente en la composición primaria sea un alérgeno aéreo (es decir, un alérgeno transmitido por el aire), ya que es probable que el individuo se haya expuesto previamente a un alérgeno de este tipo, incluso si él o ella no es alérgico al alérgeno. Por tanto, son alérgenos particularmente preferidos los de desescamaciones de gato o perro, los de polen, los de hongos y mohos, los de ácaros del polvo doméstico u otros ácaros y los de determinados alimentos tales como nueces, particularmente cacahuetes. El látex también puede ser un alérgeno aéreo como lo puede ser al alérgeno de cacahuete cuando se crea un aerosol, por ejemplo, cuando se fríe en aceite de cacahuete.

Un alérgeno particularmente preferido para el uso en los métodos descritos en este documento, particularmente el alérgeno presente en la composición primaria, es Fel d 1. Por tanto, en la etapa (1) se prefiere que uno o más péptidos que contienen epítopo de célula T de Fel d 1 se administren al individuo. Se prefiere particularmente que se administren uno o más de los siguientes péptidos de Fel d 1: EQVAQYKALPVVLENA (SEC ID Nº 2) o KALPVV
LENARILKNCV (SEC ID Nº 3), que se sabe que ambas están restringidas en cuanto a MHC. Estos péptidos se describen con más detalle en la Publicación Internacional del mismo solicitante WO 99/34826 (PCT/GB99/00080). Se pueden producir fácilmente otros alérgenos útiles en los presentes métodos usando información de secuencia disponible públicamente para los alérgenos. La siguiente es una lista de secuencias de alérgenos conocidas y números de acceso a base de datos (números de acceso de Entrez del NCBI). El NCBI es el Centro Nacional para Información Biotecnológica y es una división del Instituto Nacional de Salud de Estados Unidos. La página web del NCBI, a partir de la que se puede encontrar acceso a la base de datos, es www.ncbi.nlm.nih.gov/. Los alérgenos se pueden usar como se ha descrito anteriormente para identificar péptidos restringidos por MHC capaces de inducir LPR en individuos que poseen una molécula de MHC particular.

Secuencias de alérgenos y números de acceso a base de datos (número de acceso de Entrez del NCBI):

1

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En otras realizaciones preferidas, el antígeno polipeptídico es un autoantígeno, típicamente en el que el autoantígeno se administra con la composición secundaria, es decir, es la etapa (2) o (3). Los autoantígenos peptídicos útiles en los presentes métodos incluyen, pero sin limitación, insulina, ácido glutámico descarboxilasa (64K), PM-1 y carboxipeptidasa en diabetes; proteína básica de mielina en esclerosis múltiple; factor rh en eritroblastosis fetal; receptores de acetilcolina en miastenia grave; receptores de tiroides en la Enfermedad de Graves; proteínas de membrana basal en el síndrome de Good Pasture; y proteínas tiroideas en tiroiditis.

En cualquier aspecto, una vez seleccionados, los alérgenos peptídicos usados en este documento se pueden obtener y/o producir usando una diversidad de métodos conocidos por los especialistas en la técnica. En particular, los alérgenos se pueden aislar directamente a partir de fuentes nativas, usando técnicas de purificación convencionales. Alternativamente, los alérgenos se pueden producir de forma recombinante usando sistemas de expresión bien conocidos en la técnica y purificar usando técnicas conocidas. Los alérgenos peptídicos también se pueden sintetizar, basándose en secuencias de aminoácidos descritas o secuencias de aminoácidos obtenidas a partir de la secuencia de ADN de una molécula de ácido nucleico de interés, mediante síntesis de polímero químicas tales como síntesis peptídica en fase sólida. Tales métodos se conocen por los especialistas en la técnica. Véase, por ejemplo, J. M. Stewart y J. D. Young, Solid Phase Peptide Synthesis, 2a Ed., Pierce Chemical Co, Rockford, IL (1984) y G. Barany y R. B. Merrifield, The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, editores E. Gross y J. Meienhofer, Vol. 2, Academic Press, New York, (1980), págs. 3-254, para técnicas de síntesis peptídica en fase sólida; y M. Bodansky, Principles of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, Berlín (1984) y E. Gross y J. Meienhofer, Eds., The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, citado anteriormente, Vol. 1, para síntesis en solución clásica.

Con "péptido que contiene un epítopo de célula T de un antígeno" se quiere decir cualquier péptido adecuado de un antígeno que contiene un epítopo de célula T. Típicamente, el péptido del antígeno es un péptido que contiene un único epítopo de célula T, pero puede contener dos o más epítopos de célula T. Sin embargo, como se describe con más detalle a continuación, se puede dar una mezcla de péptidos. No es necesario que cada uno de los péptidos en la mezcla sea biológicamente activo dentro del individuo, ya que uno o más de los mismos se reconocen por células T dentro del individuo. Para que esto tenga lugar, el péptido o los péptidos necesitaran presentarse (restringido) mediante una molécula de MHC expresada por el individuo. Típicamente, dependiendo del antígeno (alérgeno) la mezcla de péptidos puede contener 3 ó 4 péptidos, pero puede contener 5 ó 6 ó 7 u 8 ó 9 ó 10 u 11 ó 12 o más péptidos diferentes.

Se puede determinar de forma sencilla si un péptido contiene un epítopo de célula T de un antígeno usando ensayos de proliferación in vitro o ensayos de citoquinas, que se conocen en la técnica, tales como los descritos en el documento del mismo solicitante WO 99/34826 (PCT/GB99/00080). Preferiblemente, el péptido del antígeno (alérgeno) administrado en la etapa (1), es decir, en la composición primaria, es uno que no estimula las células B. Típicamente, el péptido del antígeno (alérgeno) es un péptido que tiene entre 6 y 30 aminoácidos, preferiblemente entre 6 y 20 aminoácidos, más preferiblemente entre 7 y 18 aminoácidos y mucho más preferiblemente entre 10 y 14 aminoácidos. Preferiblemente, el péptido del antígeno (alérgeno) tiene la misma secuencia de aminoácidos contigua como se encuentra en la parte pertinente del antígeno nativo (alérgeno).

En "péptido de un antígeno" se incluye el significado de que el péptido se obtiene químicamente a partir del antígeno polipeptídico, por ejemplo, mediante escisión proteolítica y también se incluye el significado de que el péptido se obtiene en un sentido intelectual a partir del antígeno polipeptídico, por ejemplo, haciendo uso de la secuencia de aminoácidos del antígeno polipeptídico y sintetizando péptidos basándose en la secuencia.

Con "antígeno polipeptídico a partir del que se obtienen los péptidos en la etapa (1)" se quiere decir un antígeno polipeptídico que contiene el mismo epítopo de célula T presente en el péptido o los péptidos administrados en la etapa (1), es decir, en la composición primaria. En "péptido" no solamente se incluyen moléculas en las que los restos aminoacídicos se unen mediante enlaces peptídicos (-CO-NH-), sino también moléculas en las que se invierte el enlace peptídico. Tales peptidomiméticos retro-inversos se pueden preparar usando métodos conocidos en la técnica, por ejemplo, tales como los descritos en Mezière et al (1997) J. Immunol. 159: 3230-3237. Esta estrategia implica preparar pseudopéptidos que contienen cambios que implican a la cadena principal y no la orientación de las cadenas laterales. Se ha demostrado que, al menos para respuestas de células auxiliares T y MHC de clase II, estos pseudopéptidos son útiles. Los péptidos retro-inversos, que contienen enlaces NH-CO en vez de enlaces peptídicos CO-NH, son mucho más resistentes a proteolisis.

De forma similar, se puede prescindir totalmente del enlace péptido suponiendo que se usa un resto enlazador apropiado que conserva la separación entre los átomos C\alpha de los restos aminoácidos; se prefiere particularmente que el resto enlazador tenga sustancialmente la misma distribución de carga y sustancialmente el mismo plano que un enlace peptídico. Se entenderá que el péptido se puede bloquear de forma práctica en su extremo N o C para ayudar a disminuir la susceptibilidad a digestión exoproteolítica. También es posible modificar la estructura de péptidos para tales propósitos como aumentar la solubilidad, mejorar la eficacia terapéutica o preventiva o la estabilidad (por ejemplo, vida media ex vivo y resistencia a degradación proteolítica in vivo). Se puede producir un péptido modificado en el que se ha alterado la secuencia de aminoácidos, tal como por sustitución, deleción o adición de aminoácidos para modificar la inmunogenicidad y/o disminuir la alergenicidad o al que se ha añadido un componente con el mismo propósito. Por ejemplo, los restos aminoacídicos esenciales para la función del epítopo de célula T se pueden determinar usando técnicas conocidas (por ejemplo, sustitución de cada resto y determinación de presencia o ausencia de reactividad de células T). Los restos que se ha demostrado que son esenciales se pueden modificar (por ejemplo, sustituir por otro aminoácido cuya presencia se ha demostrado que aumenta la reactividad de células T), como se pueden modificar los que no se requieren para la reactividad de células T (por ejemplo, sustituyendo por otro aminoácido cuya incorporación mejora la reactividad de células T, pero no disminuye la unión a MHC pertinente). Otro ejemplo de una modificación de péptidos es sustitución de restos cisteína preferiblemente por alanina, o ácido glutámico o, alternativamente, por serina o treonina para minimizar la dimerización mediante enlaces disulfuro. Para aumentar la estabilidad y/o reactividad, los péptidos también se pueden modificar para incorporar uno o más polimorfismos en la secuencia de aminoácidos de un alérgeno proteico resultante a partir de una variación alélica natural. Adicionalmente se pueden sustituir o añadir D-aminoácidos, aminoácidos no naturales o análogos de no aminoácidos para producir un péptido modificado dentro del alcance de esta invención. Además se pueden modificar péptidos usando métodos con polietilenglicol (PEG) bien conocidos para producir un péptido conjugado con PEG. Las modificaciones de péptidos también pueden incluir reducción/alquilación (Tarr en: Methods of Protein Microcharacterization, J. E. Silver ed. Humana Press, Clifton, N. J., págs. 155-194 (1986)); acilación (Tarr, citado anteriormente); esterificación (Tarr, citado anteriormente); acoplamiento químico a un soporte apropiado (Mishell y Shiigi, eds, Selected Methods in Cellular Inmunology, W H Freeman, San Francisco, Calif. (1980); Patente de Estados Unidos Nº 4.939.239); o tratamiento con formalina débil (Marsh International Archives of Allergy and Applied Inmunology 41: 199-215 (1971)).

Se pueden sintetizar péptidos mediante el modo Fmoc-poliamida de síntesis peptídica en fase sólida como se describe por Lu et al (1981) J. Org. Chem. 46: 3433 y referencias en ese documento. Se consigue la protección del grupo N-amino temporal mediante el grupo N-fluorenilmetiloxicarbonilo (Fmoc). La escisión repetitiva de este grupo protector altamente inestable a base se realiza usando piperidina al 20% en N,N-dimetilformamida. Las funcionalidades de cadena lateral se pueden proteger como sus butiléteres (en el caso de serina, treonina y tirosina), butilésteres (en el caso de ácido glutámico y ácido aspártico), derivado de butiloxicarbonilo (en el caso de lisina e histidina), derivado de tritilo (en el caso de cisteína) y derivado de 4-metoxi-2,3,6-trimetilbencenosulfonilo (en el caso de arginina). Cuando la glutamina o asparagina son restos C-terminales se usa el grupo 4,4'-dimetoxibenzhidrilo para la protección de las funcionalidades amido de cadena lateral. El soporte en fase sólida se basa en un polímero de polidimetil-acrilamida constituido por los tres monómeros dimetilacrilamida (monómero de cadena principal), bisacriloiletileno diamina (reticulante) y acriloilsarcosina metil éster (agente de funcionalización). El agente unido escindible de péptido a resina usado es el derivado de ácido 4-hidroximetil-fenoxiacético inestable a ácidos. Todos los derivados de aminoácido se añaden con sus derivados de anhídrido simétricos preformados con la excepción de asparagina y glutamina, que se añaden usando un procedimiento de acoplamiento mediado por N,N-diciclohexil-carbodiimida/1-hidroxibenzotriazol invertido. Todas las reacciones de acoplamiento y desprotección se controlan usando ninhidrina, ácido trinitrobenceno sulfónico o procedimientos de ensayo con isoestaño. Después de la finalización de la síntesis, los péptidos se escinden del soporte de resina con retirada concomitante de grupos protectores de cadena lateral mediante el tratamiento con ácido trifluoroacético al 95% que contiene una mezcla de aceptor al 50%. Los aceptores usados comúnmente son etanoditiol; fenol, anisol y agua, dependiendo la selección exacta de los aminoácidos constituyentes del péptido que se está sintetizando. Se retira ácido trifluoroacético mediante evaporación in vacuo, con titulación posterior con dietil éter que produce el péptido sin procesar. Cualquier aceptor presente se elimina por un procedimiento de extracción simple que, con la liofilización de la fase acuosa, proporciona el péptido sin procesar sin aceptores. Los reactivos para síntesis peptídica están generalmente disponibles en Calbiochem-Novabiochem (RU) Ltd, Nottingham NG7 2QJ, RU. La purificación se puede realizar por una cualquiera o una combinación de técnicas tales como cromatografía de exclusión por tamaño, cromatografía de intercambio iónico y cromatografía líquida de alto rendimiento de fase inversa (principalmente). El análisis de los péptidos se puede realizar usando cromatografía en capa fina, cromatografía líquida de alto rendimiento de fase inversa, análisis de aminoácidos después de hidrólisis con ácido y por análisis espectrométrico de masa por bombardeo con átomos rápidos (FAB).

Preferiblemente, los antígenos polipeptídicos usados en este documento son aquellos en los que la restricción a una molécula de MHC de Clase II que posee el individuo se puede demostrar para el péptido y el péptido es capaz de inducir una respuesta de fase tardía en un individuo que posee dicha molécula de MHC de Clase II. Tales péptidos, composiciones de tales péptidos y métodos para identificar tales péptidos se describen en la Publicación Internacional del mismo solicitante WO 99/34826.

Aunque el péptido administrado en la etapa (1) puede ser un péptido único, la composición primaria puede comprender de forma práctica una pluralidad de antígenos que contienen epítopos de célula T, por ejemplo, una pluralidad de péptidos. Los péptidos en la composición pueden ser o no péptidos de solapamiento múltiple (MOP) obtenidos a partir del mismo antígeno polipeptídico. La pluralidad de péptidos se puede obtener de la totalidad del antígeno polipeptídico y, por lo tanto, los péptidos pueden abarcar la totalidad de la cadena o cadenas polipeptídicas del antígeno. Sin embargo, se pueden obtener solamente a partir de partes del antígeno polipeptídico de tal forma que algunas partes del antígeno polipeptídico no estén representadas en la pluralidad de péptidos (por ejemplo, algunos péptidos obtenidos a partir de un antígeno pueden no ser muy solubles en solución acuosa y, por tanto, pueden no ser útiles y otros péptidos pueden no mostrar restricción a moléculas de MHC de Clase II). Los MOP o cualquier péptido obtenido del antígeno y presente en la composición se pueden denominar mediante referencia a la secuencia de aminoácidos del antígeno polipeptídico. Típicamente, los MOP tienen al menos siete restos aminoacídicos y más típicamente entre aproximadamente 10 y 14 restos aminoacídicos de longitud. Se prefiere que los péptidos de MOP tengan una capacidad disminuida de unirse a IgE en comparación con péptidos más largos que contienen la misma secuencia. Se prefiere particularmente que los péptidos o los MOP sean sustancialmente incapaces de entrecruzar IgE sobre la superficie de un mastocito. Típicamente, cuando los MOP se solapan, el solapamiento tiene aproximadamente uno o dos o tres o cuatro restos aminoacídicos.

El método se puede usar para desensibilizar un individuo frente a un alérgeno polipeptídico. Mediante "desensibilizar un individuo frente a un alérgeno polipeptídico" se quiere decir inhibición o amortiguación de reacciones tisulares alérgicas inducidas por alérgenos en individuos sensibilizados de forma apropiada. Se entenderá que si un individuo es sensible o no a un alérgeno polipeptídico particular se puede evaluar usando procedimientos bien conocidos tales como el ensayo de punción de la piel con soluciones de extractos de alérgenos, inducción de respuestas de fase tardía (LPR) cutáneas, historial clínico, exposición a alérgenos y ensayo de sorbente de radio-alergoabsorbencia (RAST) para la medición de IgE específica de alérgeno y si un individuo particular es uno que se espera que se beneficie del tratamiento o no se puede determinar por el médico basándose, por ejemplo, en tales ensayos.

Se puede usar el método para desensibilizar un individuo frente a un autoantígeno polipeptídico. Con "desensibilizar un individuo frente a un autoantígeno polipeptídico" se quiere decir inhibición o amortiguación de reacciones tisulares autólogas o alogénicas inducidas por dichos antígenos en individuos sensibilizados de forma apropiada. Se entenderá que si un individuo es o no sensible a un autoantígeno particular se puede evaluar usando procedimientos bien conocidos tales como historial clínico, exposición a autoantígeno in vitro o células mononucleares de sangre periférica con el antígeno en cuestión, medición de inmunoglobulinas (Ig) específicas de antígeno, por ejemplo, la presencia en el suero de autoanticuerpos clínicamente significativos o anticuerpos contra un antígeno de injerto o antígenos de hospedador después de aloinjerto; o presencia de inflamación visible o medible dentro del tejido. Por ejemplo, el tejido que forma parte de un aloinjerto, o los tejidos de un hospedador que ha recibido un aloinjerto, o el sistema nervioso central de un individuo con esclerosis múltiple, o insulitis en un individuo con diabetes de tipo 1, articulaciones hinchadas en un individuo con artritis reumatoide y cualquier otro ensayo clínico que se puede usar para determinar enfermedad autoinmune o enfermedad de injerto contra hospedador o enfermedad de hospedador contra injerto. Se puede determinar si un individuo particular es uno que se espera que se beneficie del tratamiento o no por el médico basándose, por ejemplo, en tales ensayos.

La composición administrada en la etapa (2) puede comprender un epítopo de célula T de un péptido administrado en la etapa (1) y al menos un epítopo de célula T de un antígeno polipeptídico diferente frente al que se tiene que desensibilizar el individuo. En una realización preferida, la composición es una fusión de un péptido que contiene un epítopo de célula T como se define en la etapa (1) y un antígeno completo sustancialmente diferente frente al que se tiene que desensibilizar el individuo. Puede ser beneficioso usar una versión "no anafiláctica" del antígeno cuando es un alérgeno. La IgE reconoce determinantes (epítopos) sobre la superficie externa de una proteína completa. Por tanto, si los péptidos o las secuencias del polipéptido frente al que se desea desensibilizar están ocultos dentro de la proteína quimérica, por ejemplo, se puede secuestrar los mismos de forma eficaz de IgE, disminuyendo de este modo la probabilidad de acontecimientos mediados por IgE como anafilaxis, cuyo riesgo se correría si se administrara simplemente la proteína completa.

Con "sustancialmente localizado" se incluye el significado de que después de la administración o el suministro a un sitio en el individuo que tiene acceso al sistema inmune, al menos algo de la composición permanece en el sitio durante un periodo de tiempo apreciable, por ejemplo, de 24 a 48 horas y no se difunde o dispersa en alcance significativo. Se entenderá que algo de la composición se puede difundir o dispersar del sitio de administración o suministro, pero permanece sustancialmente localizada en el contexto de la invención si permanece lo suficientemente presente en el sitio particular que se tienen que captar por células presentadoras de antígenos (APC) y para células T reclutadas para reconocer ambos conjuntos de epítopos en la misma APC. Por tanto, preferiblemente hay un "depósito" producido de la composición o la fijación local tiene lugar en el sitio de administración. La composición se puede localizar sustancialmente mediante medios físicos o químicos. Por tanto, típicamente, la composición se puede localizar sustancialmente mediante su peso molecular o mediante su presencia en una formulación de liberación lenta o mediante su conjugación a una molécula adicional que conduce a localización en el sitio de administración. Se entenderá que para muchos antígenos, el polipéptido antígeno nativo (tal como un antígeno producido de forma recombinante) solo es suficiente para localizarse sustancialmente cuando se administra. Sin embargo, puede ser beneficioso si el antígeno se combina con algún otro agente. Típicamente, la composición puede ser un polímero de un péptido o un agregado o una emulsión del mismo. Sin embargo, en cualquier caso, en la composición administrada en la etapa (2), el epítopo de célula T de un péptido administrado en la etapa (1) tiene que ser accesible para una célula T y la parte que contiene el epítopo de célula T se mantiene en el sitio de administración, al menos en una cantidad suficiente y durante un tiempo suficiente para tener los efectos deseados como se ha descrito anteriormente.

Los agentes de formulación de liberación prolongada incluyen emulsiones de agua y aceite mineral en las que la composición, tal como un polipéptido, se solubiliza en la fase acuosa antes de la emulsión. Los conjugados pueden incluir conjugados de la composición con un producto bacteriano que puede estimular la captación por una APC.

El método se puede usar para desensibilizar el individuo frente al antígeno polipeptídico del que se obtienen los péptidos en la etapa (1), en cuyo caso en la etapa (2) al individuo se puede administrar una composición que contiene el epítopo de célula T de un péptido administrado en la etapa (1) y epítopos de célula T adicionales de dicho antígeno. Por tanto, en una realización se administra una composición única en la etapa (2), composición que es el antígeno sustancialmente completo correspondiente al péptido o los péptidos en la etapa (1).

En una descripción preferida, adicionalmente o alternativamente, el método se puede usar para desensibilizar el individuo frente a uno o más polipéptidos diferentes al antígeno polipeptídico del que se obtienen los péptidos en la etapa (1). Por tanto, en esta realización, la composición puede ser una que contiene un epítopo de célula T de un péptido administrado en la etapa (1) y que contiene un epítopo de célula T de uno o más antígenos polipeptídicos frente a los que se tiene que desensibilizar el individuo. Alternativamente, en esta realización, si la composición administrada en la etapa (2) no contiene un epítopo de célula T de los dichos uno o más antígenos polipeptídicos, el método comprende la etapa de (3) administrar adicionalmente al individuo una composición que contiene un epítopo de célula T de uno o más antígenos polipeptídicos frente a los que se tiene que desensibilizar el individuo.

La composición administrada en la etapa (2) puede comprender antígeno sustancialmente completo del que se obtienen los péptidos en la etapa (1). Además, la composición en la etapa (3) puede comprender antígeno sustancialmente completo frente al que se tiene que desensibilizar el individuo.

Sin quedar limitado por ninguna teoría, se piensa que los péptidos administrados en la etapa (1) son capaces de generar un estado de hiporreactividad general que no solamente se extiende al antígeno a partir del cual se obtiene o produce el antígeno, sino también a otros antígenos polipeptídicos. Por tanto, un tipo de tolerancia se induce por el péptido o los péptidos administrados en la etapa (1). Aunque, de nuevo sin quedar ligado por ninguna teoría, se piensa que la presencia en la composición administrada en la etapa (2) de un epítopo de célula T de un péptido administrado en la etapa (1) quiere decir que células T apropiadas (es decir, células que generan tolerancia inducidas de forma reciente que son específicas para el mismo) se extraen al entorno donde la composición se localiza sustancialmente. Cuando la composición adicional (por ejemplo, antígeno completo frente al que se tiene que desensibilizar el individuo en la etapa (3)) se administra, se piensa que se reclutan células T patógenas específicas para el antígeno adicional y, en el mismo sitio local, las células específicas de antígeno adicional entran en la influencia de las células que generan tolerancia y se convierten en tolerantes. Las composiciones administradas en las etapas (2) y (3) también pueden contener epítopos de célula B (anticuerpos), particularmente cuando las composiciones no contienen alérgenos. Se conoce en la técnica que algunos epítopos de célula T también son epítopos de célula B y que algunos epítopos de célula B son epítopos de célula T. Sin embargo, aunque los epítopos de célula T siempre son determinantes lineales de un polipéptido, los epítopos de células B pueden ser no lineales, por ejemplo, estar constituidos por partes diferentes del polipéptido. De nuevo sin quedar limitado por ninguna teoría, se piensa que las células B específicas de antígeno se extraen al entorno mediante la presencia en la composición administrada en la etapa (2) y (etapa (3), si se realiza) de epítopos de célula B (anticuerpos) del antígeno polipeptídico y que esto es ventajoso en el caso de desensibilización frente a proteínas autoinmunes o alérgenos de trasplante (tales como autoinmunidad y enfermedad de injerto contra hospedador o de hospedador contra injerto). Se prefiere que los epítopos de célula B no estén presentes, o estén ocultos, en las composiciones administradas en las etapas (2) o (3) para intentar disminuir las respuestas de IgE y la posibilidad de anafilaxis.

En un segundo aspecto se proporciona un método para desensibilizar un individuo frente a uno o más antígenos polipeptídicos, comprendiendo el método: etapa (1) administrar al individuo una composición que comprende un péptido que contiene un epítopo de célula T o un ciclo de péptidos que contienen un epítopo de célula T, de un primer antígeno frente al que se ha expuesto el individuo previamente, para generar en el individuo un estado de hiporreactividad frente al primer antígeno; después en la etapa (2) administrar al individuo antígeno sustancialmente completo correspondiente al péptido o los péptidos en la etapa (1); y, si el antígeno polipeptídico frente al que se tiene que desensibilizar el individuo no es el primer antígeno sustancialmente completo administrado en la etapa (2), el método comprende la etapa de (3) administrar adicionalmente al individuo antígeno o antígenos polipeptídicos sustancialmente completos frente a los que se tiene que desensibilizar el individuo. Preferiblemente, el primer antígeno es un alérgeno.

Dicho de otro modo, en un segundo aspecto se proporciona un método para desensibilizar un individuo frente a uno o más antígenos polipeptídicos. El método incluye, en una primera etapa, administrar al individuo una composición primaria que comprende un antígeno peptídico que contiene un epítopo de célula T, en el que el individuo se ha expuesto previamente al antígeno y la administración se realiza de un modo suficiente para generar un estado hiporreactivo contra el antígeno peptídico. Una vez que se ha establecido un estado hiporreactivo frente al antígeno peptídico, o ha tenido lugar al menos un cambio hacia desensibilización, el método incluye administración de una composición secundaria que comprende sustancialmente un antígeno completo a partir del cual se obtuvo o produjo el antígeno peptídico. La administración de la composición secundaria se realiza de un modo tal que se aprovecha el entorno que genera tolerancia establecido mediante el uso de la composición primaria, donde ahora es posible establecer tolerancia frente al antígeno completo. La composición secundaria se puede coadministrar con otro antígeno diferente (es decir, diferente tanto del primer antígeno polipeptídico como del antígeno completo a partir del cual se obtuvo o produjo), donde se desea también desensibilizar el individuo frente al segundo antígeno.

De nuevo en este caso, el antígeno empleado en la etapa (1), es decir, en la composición primaria, puede ser cualquier antígeno adecuado. Típicamente es un alérgeno. No es necesario que el individuo sea alérgico al antígeno especificado en la etapa (1), pero puede preferirse. En este aspecto, el individuo no tiene que ser atópico y no tiene que haber generado una respuesta de IgE frente al antígeno completo. Sin embargo, es necesario que el individuo se haya expuesto previamente a al menos el primer antígeno. Típicamente, el individuo ha establecido una respuesta de células T (Th1 o Th2) frente al primer antígeno del que se han obtenido los péptidos y tiene células T específicas (de cualquier tipo) presentes que se pueden convertir entonces en "productoras de tolerancia" mediante tratamiento peptídico. Por tanto, en una realización, se determina si el individuo ha estado expuesto previamente a un antígeno antes de comenzar el tratamiento. Esto se puede determinar midiendo anticuerpos séricos frente al antígeno y/o realizando un ensayo de proliferación de células T y/o ensayo de citoquinas. Se entenderá que se prefiere que los péptidos administrados en la primera etapa sean los obtenidos a partir de un alérgeno ubicuo tales como alérgeno de ácaro de polvo doméstico o alérgeno de desescamaciones de gato o alérgeno de polen de árbol o césped, en cuyo caso puede no ser necesario ensayar el individuo.

En "antígeno sustancialmente completo" o "alérgeno sustancialmente completo" se incluye el significado de que al menos el 50% de la molécula de antígeno o alérgeno está presente, preferiblemente al menos el 70% o el 80% o el 90% y, mucho más preferiblemente, todo el antígeno o alérgeno. El porcentaje del antígeno o alérgeno se puede determinar mediante referencia al número de aminoácidos en el antígeno o alérgeno sustancialmente completo y el número en el antígeno o alérgeno nativo.

Típicamente, el antígeno o alérgeno sustancialmente completo tiene al menos el 50% de los epítopos de célula T del antígeno completo o alérgeno, preferiblemente al menos el 70% o el 80% o el 90% y, mucho más preferiblemente, todos los epítopos de célula T del antígeno o alérgeno nativo.

Tanto en el primer como el segundo aspecto (método) de la invención, el péptido que contiene un epítopo de célula T, o composición de péptidos que contienen epítopos de célula T, se pueden administrar en la etapa (1) como una dosis única. Sin embargo, se prefiere que el péptido o la pluralidad de péptidos se administren como un ciclo de tal forma que se consiga un estado óptimo de hiporreactividad antes de la administración de la composición o alérgeno sustancialmente completo en la etapa (2).

En realizaciones preferidas, la administración de la composición primaria se realiza con un protocolo de dosis creciente, es decir, dosis crecientes de la composición primaria que comprende el péptido o los péptidos se pueden administrar a lo largo de un periodo de tiempo adecuado. Las dosis crecientes adecuadas del péptido o los péptidos se pueden determinar por el especialista en la técnica, por ejemplo, realizando un aumento de dosificación sin síntomas que da como resultado tolerancia (es decir, reactividad disminuida frente a antígeno completo inyectado en la piel). El síntoma ensayado puede ser de forma práctica una reacción asmática tardía aislada. Los ensayos cutáneos frente a antígeno completo generalmente son un buen modo de evaluar la inducción de tolerancia, con o sin la proliferación de células T in vitro y/o ensayos de citoquinas.

Para protocolos de dosificación creciente, típicamente se administran inicialmente 5 \mug de cada péptido y después se suministran dosis crecientes de la composición primaria hasta que se haya administrado una dosis acumulativa de 90 \mug. Las dosis crecientes de péptido se administran típicamente con intervalos de varios días (por ejemplo, de 10 a 60 días, pero típicamente de 10 a 20 días) entre cada administración. La dosis acumulativa total se puede dar, por tanto, a lo largo de un periodo de 8 a 16 semanas.

En consecuencia, en una realización preferida, el ciclo adecuado de administración pueden ser dosis de 5 \mug, 10 \mug, 25 \mug y después 50 \mug de cada péptido con intervalos entre 3 días y 8 semanas, preferiblemente entre 10 días y 4 semanas y mucho más preferiblemente aproximadamente de 10 a 14 días, entre las dosis suministradas. La dosis puede iniciarse más bajas, tal como 0,1 \mug o 1,0 \mug. De forma práctica se puede administrar posteriormente una dosis de "mantenimiento", tal como una o dos o tres dosis de 100 \mug con un intervalo de dosis dos semanas.

Típicamente, la menor dosis inicial tendrá entre aproximadamente 0,01 y 0,1 \mug, más particularmente, entre aproximadamente 0,05 y 0,1 \mug. La mayor dosis inicial puede ser mayor para individuos no alérgicos (por ejemplo, al tratar autoinmunidad donde no existe riesgo de anafilaxis) y puede estar en el intervalo de mg, pero preferiblemente será de 100 a 500 \mug.

El ciclo de administración que da lugar el estado de hiporreactividad puede ser cualquier ciclo adecuado. Por ejemplo, en la Publicación Internacional del mismo solicitante WO 99/34826 (PCT/GB99/00080) se describe un método para definir la dosis para terapia que implica inyectar péptidos en grupos (cohortes) de sujetos asmáticos hasta que el 50% de los mismos desarrollan una reacción asmática tardía (definida como un caída superior al 20% en el volumen espiratorio forzado en un segundo (FEV1)). A partir de esta "dosis superior" es posible volver hacia atrás para establecer la dosis de partida. Típicamente, si la dosis de LAR del 50% son 5 \mug de péptido, la dosis de terapia inicial debe ser un 50º de la misma, es decir, 0,1 \mug.

Con "estado de hiporreactividad frente al antígeno en el individuo" se quiere decir que el individuo se convierte en hiporreactivo frente al antígeno, por ejemplo, como se mide por una disminución de tamaño de reacciones cutáneas frente al antígeno. La hiporreactividad se puede determinar de forma sencilla usando parámetros clínicos bien conocidos. El individuo hiporreactivo contendrá células T específicas de antígeno ya que su capacidad de proliferar en respuesta a antígeno disminuye como lo está su capacidad para secretar citoquinas asociadas a enfermedad, tales como, en el caso de reacciones alérgicas, IL-4 e IL-5 y, posiblemente, IFN-\gamma. Se entenderá que el estado de hiporreactividad incluye falta de reactividad específica de antígeno, es decir, tolerancia.

Se puede usar el ensayo de exposición, tal como inyección intradérmica o exposición inhalada (en un asmático) o administración intraocular (para conjuntivitis alérgica). El ensayo intradérmico puede ser el más simple y trabaja en individuos con alergia mediada por IgE. Para individuos que han estado expuestos, pero que no son alérgicos, se prefiere usar proliferación in vitro y/o ensayos de citoquinas para mostrar la regulación negativa de respuestas de células T.

Puede ser ventajoso administrar, en o aproximadamente en el momento de la administración de la composición secundaria o antígeno sustancialmente completo en las etapas (2) y/o (3) y a una dosis adecuada (por ejemplo, de 1 ng/kg a 10 \mug/kg), composiciones inmunomoduladoras, tales como interleucina 10 (IL-10) o factor de crecimiento transformante \beta (TGF-\beta) o interferón \alpha (IFN-\alpha) o combinaciones de los mismos pueden ser deseables para ayudar a la producción de un estado hiporreactivo o que genera tolerancia. Se puede administrar una dosis relativamente alta de IL-10 o TGF-\beta o IFN-\alpha.

En relación con cualquiera de los métodos que se han descrito previamente de la invención, el antígeno polipeptídico frente al que se desensibiliza el individuo es uno cualquiera de un alérgeno, un autoantígeno o un antígeno de trasplante. El alérgeno puede ser cualquier alérgeno que se ha descrito anteriormente en este documento. Además, el autoantígeno puede ser cualquier autoantígeno que se ha descrito anteriormente en este documento.

Por tanto, en una realización preferida de la invención, al individuo se administra un ciclo de péptidos obtenidos o producidos a partir del alérgeno frente al que se tiene que desensibilizar, que conduce a un estado de hiporreactividad o tolerancia en el individuo frente al alérgeno. Hay una ventana dentro del estado de hiporreactividad o tolerancia que, después de la primera administración, necesita aproximadamente dos semanas para desarrollarse, por ejemplo, entre 10 y 14 días y que se convierte en óptima, después de lo que se pierde gradualmente a menos que se administren dosis adicionales de péptido o proteína completa. Dosis adicionales pueden mejorar el grado de tolerancia inducida como se manifiesta por una disminución más marcada en la reactividad de alérgeno después del ensayo de exposición, después de un ciclo de varias administraciones de péptido frente a solamente una (véase, por ejemplo, la Figura 3). El estado de hiporreactividad puede durar diferentes periodos de tiempo después de la administración, dependiendo del número de administraciones de péptidos, y durante este tiempo al individuo se administra alérgeno completo correspondiente a los péptidos usados para producir el estado de hiporreactividad. La ventana óptima puede estar entre 2 semanas y 2 meses. Típicamente, una administración única (inyección) de péptido dura durante varios meses para dar solamente el 50% de reactividad después de cuatro meses (es decir, la administración (por ejemplo, inyección) posterior de péptido o péptidos puede dar una respuesta de fase tardía (por ejemplo, respuesta asmática tardía) de aproximadamente el 50% de la LPR original cuando la segunda administración (por ejemplo, inyección) es cuatro meses después de la primera). Típicamente, la reactividad completa (capacidad de respuesta) ha reaparecido después de 8 a 12 meses. Sin embargo, con múltiples inyecciones y una dosis global superior de péptido, la hiporreactividad puede durar más tiempo.

Típicamente, una serie de administraciones de composiciones que comprenden dosis crecientes (con o sin una dosis de "mantenimiento") de péptidos se realiza durante un periodo de tiempo preestablecido con un intervalo entre administraciones de varios días (se ha demostrado ahora que el intervalo óptimo es aproximadamente 2-8 semanas). Después de la administración de péptido, se realiza la administración de la proteína completa (con o sin otras proteínas frente a las que también es deseable la inducción de hiporreactividad). Esto puede estar seguido de inyecciones adicionales del antígeno de proteína completa. Finalmente, se puede realizar un ensayo de exposición en el que se mide la respuesta del sujeto a la exposición al antígeno de proteína completa.

Por tanto, como un ejemplo y como se describe con más detalle en la Sección Experimental más adelante en este documento, se selecciona un individuo que se sabe que es alérgico a desescamaciones de gato y, en particular, el alérgeno de desescamaciones de gato Fel d 1. Al individuo se administra un ciclo de péptidos que contienen epítopo de célula T del alérgeno Fel d 1 (por ejemplo, una composición que comprende los siguientes péptidos: EIC
PAVKRDVDLFLTGT (SEC ID Nº 1); LFLTGTPDEYVEQVAQY (SEC ID Nº 2); EQVAQYKALPVVLENA (SEC ID Nº 3); KALPVVLENARILKNCV (SEC ID Nº 4); RILKNCVDAKMTEEDKE (SEC ID Nº 5); KMTEEDKE
NALSLLDK (SEC ID Nº 6); KENALSLLDKIYTSPL (SEC ID Nº 7); LTKVNATEPERTAMKK (SEC ID Nº 8); TAMKKIQDCYVENGLI (SEC ID Nº 9); SRVLDGLVMTTISSSK (SEC ID Nº 10); ISSSKDCMGEAVQNTV (SEC ID Nº 11); y AVQNTVEDLKLNTLGR (SEC ID Nº 12)).

Se genera un estado de hiporreactividad frente a Fel d 1 en el individuo, como puede ensayar mediante, por ejemplo, ensayo en la piel del individuo mediante inyección intradérmica de Fel d 1. Una semana después de la administración de la última dosis del péptido y, mientras que todavía está en un estado de hiporreactividad, al individuo se administra alérgeno Fel d 1 completo. Típicamente se administra una pequeña cantidad de Fel d 1, por ejemplo, 4 ó 5 ng. Típicamente, esto es seguido de dosis mayores, por ejemplo, de 100 ng a 100 \mug y posiblemente más, que se suministran típicamente en intervalos de 2 semanas para permitir que el Fel d 1 administrado previamente expanda el grupo de células T que generan tolerancia antes de la administración de la dosis adicional.

Se entenderá que se pueden usar protocolos de tratamiento similares para otros antígenos. Si el antígeno es un autoantígeno, puede ser preferible usar dosis mayores, por ejemplo, de 1 a 10 mg de autoantígeno.

Se entenderá que en los métodos, el antígeno completo que se administra al individuo es parte del protocolo terapéutico y no para ensayar la sensibilidad frente al antígeno completo. Por tanto, el método para desensibilizar el individuo incluye específicamente la etapa de administrar el antígeno completo con el propósito de aumentar la desensibilización frente al antígeno y no con el propósito de ensayar el efecto de la administración de péptidos solos sobre la sensibilidad del individuo frente al antígeno completo.

Se prefiere que el método no sea uno que incluya la administración de una composición primaria que comprende un alérgeno frente al que un individuo puede ser gravemente alérgico, por ejemplo, una composición primaria que comprenda péptidos de fosfolipasa A2 de veneno de abeja seguido de administración de fosfolipasa A2 de veneno de abeja o una composición primaria que comprenda péptidos de alérgeno de cacahuetes seguido de administración de alérgeno de cacahuete completo.

En una descripción más preferida, al individuo se administra un ciclo de antígenos peptídicos a los que él o ella se han expuesto previamente y que conduce a un estado de hiporreactividad o tolerancia en el individuo frente al antígeno y después se administra al individuo, mientras que todavía está en el estado de hiporreactividad, el antígeno completo correspondiente, es decir, del cual el péptido o los péptidos usados para producir el estado de hiporreactividad se obtuvieron o produjeron y un antígeno completo adicional, diferente, por ejemplo, un alérgeno. Típicamente se administran entre 1 ng y 10 mg de antígeno completo, por ejemplo, entre 10 ng y 1 mg, o entre 100 ng y 100 \mug, por ejemplo, entre 1 y 10 \mug. De este modo, el individuo se puede desensibilizar frente al antígeno completo adicional, diferente (y también frente al antígeno completo correspondiente al péptido incluso si el individuo no es alérgico frente a ese antígeno completo), en el sentido de que el individuo tiene células T que pueden reconocer el antígeno completo correspondiente al péptido, es decir,

\hbox{tiene células T  con sensibilidad a
antígeno  sin tener en cuenta su fenotipo Th1/Th2.}

Típicamente, el individuo es alérgico al antígeno completo adicional, diferente y es frente a este antígeno frente al que se tiene que desensibilizar el individuo. Se entenderá que el método se puede usar para desensibilizar el individuo frente a uno o dos o tres o cuatro o más antígenos usando esta técnica. Por tanto, como un ejemplo, el tratamiento para un individuo alérgico a gato, ácaro del polvo doméstico y céspedes puede incluir la administración de una composición primaria que comprende péptidos de alérgeno de desescamaciones de gato Fel d 1, administrados en un ciclo adecuado para inducir un estado de hiporreactividad frente al antígeno de desescamaciones de gato. Mientras que todavía está en el estado de hiporreactividad se administra al individuo una composición secundaria que comprende alérgeno de gato completo (Fel d 1), alérgeno de ácaro de polvo doméstico completo y alérgeno de césped completo o una pluralidad de composiciones secundarias que comprenden cada alérgeno completo. Usando este método, el individuo se puede desensibilizar frente a alérgeno de gato, alérgeno de ácaro de polvo doméstico y alérgeno de césped.

Se entenderá que no es esencial que todos los antígenos completos se administren simultáneamente, aunque esto se prefiere particularmente por conveniencia y para hacer el mejor uso del entorno que genera tolerancia. Si los dos antígenos diferentes no se administran simultáneamente o sustancialmente simultáneamente, se prefiere más que el antígeno correspondiente a los péptidos se administre en primer lugar y el segundo antígeno se administre en el mismo sitio que el primer antígeno.

Se entenderá que puede ser deseable administrar dosis adicionales de uno o más de los antígenos completos. Típicamente, las dosis adicionales se administrarían dos veces por semana o al mes. Se pueden dar dosis adicionales si, después del ensayo del individuo frente a reactividad a los antígenos mediante, por ejemplo, exposición a antígeno (midiendo la magnitud de la reacción), se sugiere que se requieren dosis adicionales.

Los métodos, por tanto, proporcionan la oportunidad de tratar los individuos que son alérgicos a múltiples alérgenos en un periodo de tiempo relativamente breve. El método también es beneficioso en el tratamiento de individuos que son muy gravemente alérgicos a determinadas cosas pero menos alérgicos frente a otras. Por tanto, por ejemplo, el antígeno peptídico o polipeptídico administrado en la composición primaria (en la etapa (1)) se puede dirigir a un alérgeno débil y después se podría administrar el antígeno polipeptídico seleccionado, más fuerte usando dosis crecientes de ese alérgeno fuerte. Por tanto, como un ejemplo, cuando el individuo que se tiene que tratar es débilmente alérgico a descamaciones de gato pero es muy gravemente alérgico a cacahuetes, el individuo se puede tratar con un ciclo de péptidos que contienen epítopos de célula T de alérgeno de desescamaciones de gato para inducir un estado de hiporreactividad. Entonces, el individuo tendría una dosis de alérgeno de gato completo al mismo tiempo que una dosis muy baja de alérgeno de cacahuete completo. Al individuo se administran posteriormente dosis crecientes de alérgeno de cacahuete completo junto con dosis adicionales de alérgeno de gato.

Se entenderá que se pueden seleccionar combinaciones de péptidos y alérgenos completos para ajustar el tratamiento del individuo dependiendo de necesidades del individuo (por ejemplo, frente a qué alérgenos necesita desensibilizarse el individuo y frente a qué alérgenos el individuo es levemente alérgico o gravemente alérgico).

Además, los métodos, particularmente el primer método, se pueden usar para sensibilizar el individuo frente a un autoantígeno, es decir, cuando el antígeno polipeptídico seleccionado es un autoantígeno. El autoantígeno puede ser cualquiera asociado a cualquier enfermedad autoinmune. La siguiente es una lista no exhaustiva de enfermedades autoinmunes y autoantígenos implicados que se pueden usar en el método de la invención: MBP (proteína básica de mielina) de Esclerosis Múltiple, PLP (proteína proteolipídica) y/o MOG (glicoproteína de mielina de oligodendrocito); GAD de Diabetes (ácido glutámico descarboxilasa), insulina y/o IA-2 (una molécula similar a proteína tirosina-fosfatasa); colágeno de Artritis Reumatoide y/o HSP (proteínas de choque térmico); tiroglobulina de Tiroiditis; proteínas histona de Lupus Eritematoso Sistémico y/o cadena pesada de inmunoglobulina; Sag (antígeno S del ojo) de Enfermedad de Behcet, HLA-B44, HLA-B51, y/o HSP65; gliadina de Enfermedad Celíaca/Dermatitis herpetiforme (en vez del uso de gliadina completa, puede ser útil usar una fracción de gliadina que sea capaz de regular negativamente la proliferación de células T específicas de gliadina. Una fracción adecuada puede ser la fracción \alpha descrita en Maurano et al (2001) Scand. J. Immunol. 53: 290-295); y receptor de acetilcolina de Miastenia grave.

Los métodos también se pueden aplicar generalmente para tratar autoinmunidad de tipo Th1, tal como artritis reumatoide, diabetes y esclerosis múltiple (MS) en individuos que no son alérgicos. Por tanto, en una realización un individuo tiene MS pero no es alérgico a gatos. Sin embargo, el individuo se habrá expuesto a alérgeno de desescamaciones de gato. Al individuo se administra un ciclo adecuado de péptidos de desescamaciones de gato para inducir un entorno hiporreactivo o que genera tolerancia adecuado frente al alérgeno de desescamaciones de gato y después se coadministra una composición secundaria que comprende péptidos de desescamaciones de gato o alérgeno de desescamaciones de gato sustancialmente completo con proteína básica de mielina. De este modo, las células T específicas de gato, presentes en el entorno al que se inyecta la proteína básica de mielina, regularán negativamente la respuesta inmune inapropiada del individuo frente a

\hbox{células específicas de proteína 
básica de mielina, tratando de este modo la MS.}

Los métodos también se pueden aplicar generalmente para tratar rechazo de injerto o trasplante. Por ejemplo, el antígeno de trasplante (antígeno polipeptídico seleccionado frente al que se desensibilizaría el individuo) puede ser una molécula de HLA-A2 u otra molécula codificada por un gen de MHC. Aproximadamente el 50% de los caucásicos expresan la molécula de MHC de Clase I HLA-A2. Ésta es una molécula muy inmunógena y cuando un destinatario no A2 obtiene un injerto A2 hay una respuesta fuerte de células T y B frente a la molécula. Los receptores de células T del hospedador reconocen un péptido de HLA-A2 presentado por sus propias moléculas de MHC y reaccionan (esto es similar a la enfermedad de Behcet que se ha mencionado anteriormente, en la que parece que un péptido común tanto a las moléculas HLA-B44 como HLA-B51 actúa como un péptido antigénico). Por tanto, la terapia con el péptido puede conducir a un estado de injerto exitoso.

De forma adecuada, los métodos se pueden usar para desensibilizar frente a cualquier proteína que provoque una respuesta de células T patógena, incluyendo proteínas de látex o del ácaro, Trichopyton tonsurans, que provoca hipersensibilidad Th1 en la piel.

Se entenderá que los métodos son particularmente adecuados para desensibilizar un individuo frente a más de un antígeno polipeptídico de forma simultánea.

La vía de administración usada para administrar una cualquiera de la composición primaria, composición secundaria y/o una composición que comprende el primer antígeno polipeptídico o una molécula de mayor tamaño que contiene el primer antígeno polipeptídico se puede realizar usando cualquier técnica incluyendo inyección intradérmica, inyección subcutánea, inyección intramuscular, inyección intravenosa, técnicas de administración transdérmica, intranasal, oral incluyendo inhalada por la boca, intraocular o intratecal.

Son vías de administración preferidas las inyecciones intradérmica, intramuscular, intravenosa y subcutánea, prefiriéndose particularmente las vías de inyección intradérmica o subcutánea. Otra vía de administración preferida es mediante el uso de una técnica de inyección de partículas transdérmica.

Se prefiere particularmente que las composiciones primarias, composiciones secundarias y cualquier otra composición (por ejemplo, las coadministradas con las composiciones secundarias) se administran a sustancialmente al mismo sitio para hacer el mejor uso del entorno localizado, que genera tolerancia, generado por la administración del antígeno polipeptídico de la composición primaria o molécula de mayor tamaño que contiene el antígeno polipeptídico de la composición primaria. Sin embargo, el especialista en la técnica entenderá, después de leer la presente memoria descriptiva, que las composiciones primarias y secundarias se pueden administrar a sitios diferentes y usando diferentes técnicas de administración.

Se entenderá por el especialista en la técnica, después de leer la presente memoria descriptiva, que puede ser deseable administrar la composición secundaria durante un periodo de tiempo y en un ciclo de administración, por ejemplo, usando un protocolo de dosis crecientes. De este modo, se piensa que la hiporreactividad o el entorno que genera tolerancia se pueden expandir. Típicamente, las dosis crecientes entran dentro del intervalo de aproximadamente 1 ng a 1 mg, típicamente de 10 ng a 100 \mug o más típicamente 100 ng a 10 \mug.

Si se realizan múltiples administraciones en la segunda etapa de la invención, se prefiere que las administraciones sean sustancialmente al mismo sitio en el individuo. Típicamente cuando se administra una pluralidad de antígenos polipeptídicos seleccionados en la composición secundaria (o composiciones secundarias), los antígenos se administran simultáneamente al mismo sitio y típicamente como una composición combinada única. Sin embargo, si se seleccionan múltiples antígenos para la desensibilización, por supuesto es posible administrar una pluralidad de diferentes composiciones secundarias a dos o más sitios diferentes.

Aunque puede ser posible que los péptidos, polipéptidos o antígenos sustancialmente completos se presenten en forma bruta, es preferible presentar los mismos como una formulación farmacéutica para el uso en las diversas composiciones administradas al individuo en la práctica de los presentes métodos. Una formulación farmacéutica comprende uno o más péptidos, polipéptidos o antígenos sustancialmente completos como se definen en este documento junto con una o más sustancias auxiliares tales como soportes o vehículos farmacéuticamente aceptables para las mismas y opcionalmente uno o más ingredientes diferentes tales como un excipiente o estabilizante. Los diversos soportes, vehículos y excipientes tienen que ser "aceptables" en el sentido de ser compatibles con los demás ingredientes de la formulación y no ser perjudiciales para el destinatario de la misma. Típicamente, los soportes o vehículos para inyección y la formulación final son estériles y sin pirógenos.

Más particularmente, pueden estar presentes sustancias auxiliares, tales como agentes humectantes o emulsionantes, sustancias de tamponamiento de pH y similares, en las composiciones de la presente invención como un excipiente o vehículo. Estos excipientes, vehículos y sustancias auxiliares son generalmente agentes farmacéuticos que no inducen ninguna respuesta inmune en el individuo que recibe la composición y que se pueden administrar sin toxicidad indebida. Los excipientes farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no sin limitación, líquidos tales como agua, solución salina, polietilenglicol, ácido hialurónico, glicerol y etanol. Las sales farmacéuticamente aceptables también se pueden incluir en las mismas, por ejemplo, sales de ácidos minerales tales como clorhidratos, bromhidratos, fosfatos, sulfatos y similares; y las sales de ácidos orgánicos tales como acetatos, propionatos, malonatos, benzoatos y similares. También se prefiere, aunque no se requiere, que la preparación contenga un excipiente farmacéuticamente aceptable que sirva como un estabilizante para el péptido, polipéptido, proteína u otras moléculas similares en la composición. Los ejemplos de soportes adecuados que también actúan como estabilizantes para péptidos, polipéptidos y proteínas incluyen, sin limitación, calidades farmacéuticas de dextrosa, sacarosa, lactosa, trehalosa, manitol, sorbitol, inositol, dextrano y similares. Otros soportes adecuados incluyen, de nuevo sin limitación, almidón, celulosa, fosfatos sódicos o cálcicos, ácido cítrico, ácido tartárico, glicina, polietilenglicoles (PEG) de alto peso molecular y combinaciones de los mismos. Una discusión más extensa de excipientes, vehículos y sustancias auxiliares farmacéuticamente aceptables está disponible en REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES (Mack Pub. Co., N. J. 1991).

Las formulaciones útiles en la práctica de los presentes métodos incluyen las adecuadas para administración oral (por ejemplo, sublingual o inhalada), parenteral (incluyendo subcutánea, transdérmica, intradérmica, intramuscular e intravenosa y rectal) o transdérmica, aunque la vía más adecuada puede depender de, por ejemplo, la afección y el trastorno del destinatario. Las formulaciones se pueden presentar de forma conveniente en una forma de dosificación unitaria y se pueden preparar mediante cualquiera de los métodos bien conocidos en la técnica de farmacia. Los métodos descritos en este documento, por tanto, incluirán normalmente la etapa de llevar a asociación una composición de la presente invención como se define en este documento o una sal farmacológicamente aceptable o un solvato de la misma ("ingrediente activo") con un soporte, vehículo o excipiente que constituye uno o más ingredientes accesorios.

Las formulaciones de la presente invención adecuadas para administración oral se pueden presentar como unidades separadas tales como cápsulas, obleas o comprimidos que contienen cada una una cantidad predeterminada del ingrediente activo; como un polvo o gránulos; como una solución o una suspensión en un líquido acuoso o un líquido no acuoso; o como una emulsión líquida de aceite en agua o una emulsión líquida de agua en aceite. El ingrediente activo también se puede presentar como un bolo, electuario o pasta. Las formulaciones para inhalación se pueden presentar en cualquiera de los modos que se conoce que son eficaces, por ejemplo, inhaladores de dosis medida.

Las formulaciones para administración parenteral incluyen soluciones de inyección estériles acuosas y no acuosas que pueden contener antioxidantes, tampones, bacteriostáticos y solutos que convierten la formulación en isotónica con la sangre del destinatario pretendido; y suspensiones estériles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspensión y agentes espesantes. Las formulaciones se pueden presentar en recipientes de dosis unitaria o multidosis, por ejemplo, ampollas y viales sellados, y se pueden almacenar en un estado secado por congelación (liofilizado) que requiere solamente la adición del soporte líquido estéril, por ejemplo, agua para inyección, inmediatamente antes del uso. Se pueden preparar soluciones y suspensiones para inyección improvisada a partir polvos, gránulos y comprimidos estériles del tipo que se ha descrito previamente.

Las formulaciones para administración rectal se pueden presentar como un supositorio con los soportes habituales, tales como manteca de cacao o polietilenglicol.

Los péptidos, polipéptidos o antígenos/alérgenos sustancialmente completos de la invención también se pueden administrar por vía intranasal, mediante inhalación, por vía oral o mediante inyección a una dosis de 0,0001 a 1 \mug/kg por dosis. Se prefieren dosis en la región de 10 ng a 10 mg por individuo humano, tal como de 10 \mug a 1 mg o de 100 \mug a 1 mg, ventajosamente aproximadamente 80 \mug.

Las formulaciones de dosificación unitaria preferidas son las que contienen una dosis eficaz del ingrediente activo como se describe en este documento o una fracción apropiada del mismo. Se entenderá que cuando se usa un ciclo de administración de dosis diferentes del péptido o los polipéptidos en la etapa (1), es decir, en la composición primaria o la composición o las composiciones usadas en la etapa (2), es decir, en la composición secundaria u otras composiciones que se tienen que administrar, se pueden preparar formulaciones de dosificación unitaria para cada dosis en el ciclo. Por tanto, típicamente, para un ciclo de péptidos o polipéptidos que se tienen que administrar, está disponible una dosificación unitaria del péptido para cada dosis típicamente creciente.

En algunas realizaciones preferidas, una o más de la composición primaria, composición secundaria y cualquier composición adicional (por ejemplo, la composición que comprende el primer antígeno polipeptídico o una molécula mayor que contiene el primer antígeno polipeptídico) se pueden formular como una composición particulada (en polvo). Más particularmente, la formulación de partículas que comprende el péptido, polipéptido o antígeno completo se puede realizar usando químicas de formulación farmacéutica convencionales. Por ejemplo, las moléculas de antígeno se pueden combinar con uno o más excipientes o vehículos farmacéuticamente aceptables para proporcionar una composición formulada adecuada.

Las composiciones formuladas se pueden preparar después como partículas usando técnicas convencionales, tales como mediante evaporación simple (secado al aire), secado al vacío, secado por pulverización, secado por congelación (liofilización), secado por congelación con pulverización, recubrimiento por pulverización, precipitación, formación de partículas en fluido supercrítico y similares. Si se desea, las partículas resultantes se pueden densificar usando las técnicas descritas en la Publicación Internacional Nº WO 97/48485.

Estos métodos se pueden usar para obtener partículas de ácido nucleico que tienen un tamaño que varía de aproximadamente 0,01 a aproximadamente de 250 \mum, preferiblemente de aproximadamente 10 a aproximadamente 150 \mum y mucho mas preferiblemente de aproximadamente 20 a aproximadamente 60 \mum; y una densidad de partículas que varía de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 25 g/cm^{3} y una densidad volúmica de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 3,0 g/cm^{3} o superior.

De forma similar, se pueden obtener partículas de adyuvantes seleccionados que tienen un tamaño que varía de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 250 \mum, preferiblemente de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 150 \mum y mucho más preferiblemente de aproximadamente 20 a 60 \mum; una densidad de partículas que varía de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 25 g/cm^{3} y una densidad volúmica de preferiblemente aproximadamente 0,5 a aproximadamente 3,0 g/cm^{3} y mucho mas preferiblemente de aproximadamente 0,8 a aproximadamente 1,5 g/cm^{3}.

Los recipientes de dosificaciones unitarias únicas o multidosis, en los que se pueden envasar las partículas antes del uso, pueden comprender un recipiente sellado herméticamente que encierra una cantidad adecuada de las partículas que comprende el antígeno de interés. Las composiciones particuladas se pueden envasar como una formulación estéril y el recipiente sellado herméticamente se puede diseñar para conservar la esterilidad de la composición hasta el uso en los métodos de la invención. Si se desea, los recipientes se pueden adaptar para el uso directo en un sistema de jeringa sin aguja. Tales recipientes pueden adoptar la forma de cápsulas, bolsas de papel de plata, sobrecitos, casetes y similares. En este documento se describen jeringas sin aguja apropiadas y, por lo demás, se conocen en la técnica.

El recipiente en el que se envasan las partículas se puede etiquetar adicionalmente para identificar la composición y proporcionar información de dosificación pertinente. Además, el recipiente se puede etiquetar con una información en la forma preestablecida por una agencia gubernamental, por ejemplo, la Administración de Alimentos y Fármacos, en la que la información indica la aprobación por la agencia bajo la ley Federal de fabricación, uso o venta del antígeno, adyuvante (o composición de vacuna) contenida en el mismo para administración a un ser humano.

Después de su formación, la composición particulada (por ejemplo, polvo) se puede suministrar por vía transdérmica al tejido del individuo usando una técnica de inyección de partículas transdérmica. En la técnica se conocen diversos dispositivos de aceleración de partículas adecuados para inyección de partículas transdérmica y se usarán en la práctica de la invención. Un sistema de inyección de partículas transdérmico particularmente preferido emplea una jeringa sin aguja para disparar partículas que contienen fármaco sólido en dosis controladas al interior y a través de la piel y tejido intactos. Véase, por ejemplo, la Patente de Estados Unidos Nº 5.630.796 Bellhouse et al. que describe una jeringa sin aguja (también conocido como "el dispositivo de jeringa sin aguja PowderJect"). En la técnica se conocen otras configuraciones de jeringa sin aguja y se describen en este documento. Preferiblemente, las composiciones particuladas se suministrarán usando un sistema de jeringa sin aguja tal como los descritos en las Publicaciones Internacionales Nº WO 94/24263, WO 96/04947, WO 96/12513 y WO 96/20022. El suministro de partículas de tales sistemas de jeringa sin aguja se practica típicamente con partículas que tienen un tamaño aproximado que varía generalmente de 0,1 a 250 \mum, variando preferiblemente entre aproximadamente 10-70 \mum. También se pueden suministrar partículas mayores a aproximadamente 250 \mum por los dispositivos, siendo la limitación superior el punto en el que el tamaño de las partículas provocaría una lesión en las células cutáneas. La distancia real que penetrarán las partículas suministradas hasta una superficie diana depende del tamaño de partícula (por ejemplo, el diámetro de partícula nominal que asume una geometría de partícula generalmente esférica), densidad de partículas, la velocidad inicial a la que la partícula impacta con la superficie y la densidad y viscosidad cinemática del tejido cutáneo al que se dirige. En este aspecto, las densidades de partícula óptimas para el uso en inyección sin aguja varían generalmente entre aproximadamente 0,1 y 25 g/cm^{3}, preferiblemente entre aproximadamente 0,9 y 1,5 g/cm^{3} y las velocidades de inyección generalmente varían entre aproximadamente 100 y 3.000 m/s o superior. Con una presión de gas apropiada, se pueden acelerar partículas que tienen un diámetro promedio de 10-70 \mum a través de la boquilla a velocidades que alcanzan las velocidades supersónicas de un flujo de gas de accionamiento.

Si se desea, estos sistemas de jeringa sin aguja se pueden proporcionar en un estado precargado que contiene una dosificación adecuada de las partículas que comprenden el péptido, polipéptido o antígeno completo de interés. La jeringa cargada se puede envasar en un recipiente sellado herméticamente, que se puede etiquetar adicionalmente como se ha descrito anteriormente.

Las composiciones en polvo se administran al individuo que se tiene que tratar de un modo compatible con la formulación dosificación y en una cantidad que será profilácticamente y/o terapéuticamente eficaz. La cantidad de la composición que se tiene que suministrar, generalmente en el intervalo de 0,5 \mug/kg a 100 \mug/kg de molécula de ácido nucleico por dosis, depende del sujeto que se tiene que tratar. Las dosis para péptidos fisiológicamente activos y proteínas varían generalmente de aproximadamente 0,1 \mug a aproximadamente 20 mg, preferiblemente de 10 \mug a aproximadamente 3 mg. La cantidad exacta necesaria variará dependiendo de la edad y el estado general del individuo que se tiene que tratar, la gravedad de la afección que se está tratando, la preparación particular suministrada, el sitio de administración así como otros factores. Una cantidad apropiada eficaz se puede determinar fácilmente por el especialista en la técnica.

En un tercer aspecto, se proporciona un sistema terapéutico (o, como se puede denominar, un kit de partes) para desensibilizan un individuo frente a un o más antígenos polipeptídicos. El sistema comprende (1) un péptido que contiene células T o una pluralidad de péptidos que contienen epítopos de célula T de un antígeno y (2) una composición que contiene el epítopo de célula T de un péptido como se define en (1) y que contiene adicionalmente un epítopo de célula T de uno o más antígenos polipeptídicos frente al que se tiene que desensibilizar el individuo, en el que la composición es capaz de permanecer sustancialmente en el sitio de su administración.

Dicho de otro modo, en un tercer aspecto se proporciona un sistema terapéutico para desensibilizar un individuo frente a uno o más antígenos polipeptídicos. El sistema comprende una composición primaria que comprende un primer antígeno polipeptídico que contiene un epítopo de célula T y una composición secundaria que comprende el primer antígeno polipeptídico y al menos un segundo

\hbox{antígeno diferente frente al que se
tiene que desensibilizar  el individuo.}

Típicamente, las composiciones capaces de permanecer en el sitio de administración son capaces o se formulan para ser capaces de localizarse en el sitio de administración. Las composiciones y formulaciones adecuadas se han descrito anteriormente en relación con los métodos de la invención. De forma conveniente, la composición secundaria comprende un antígeno sustancialmente completo correspondiente al péptido o los péptidos presentes en la composición primaria. Preferiblemente, el antígeno polipeptídico es un alérgeno. Típicamente, la composición secundaria comprende un epítopo de célula T del primer antígeno polipeptídico y al menos un epítopo de célula T de un antígeno polipeptídico diferente. La composición secundaria puede comprender una fusión de un péptido que contiene epítopos de célula T y un antígeno polipeptídico sustancialmente completo diferente.

En un cuarto aspecto se proporciona un sistema terapéutico (o, como se puede denominar, un kit de partes) para desensibilizar un individuo frente a uno o más antígenos polipeptídicos, que contienen cada uno un epítopo de célula T. El sistema comprende (1) uno o más antígenos peptídicos que contienen epítopos de célula T, (2) una composición que contiene un epítopo de célula T de un péptido definido en (1) y (3) una composición que contiene un epítopo de célula T de un antígeno polipeptídico diferente en el que las composiciones definidas en (2) y (3) son capaces de localizarse en el sitio de su administración. Típicamente, la composición definida en (2) es el antígeno sustancialmente completo correspondiente al péptido o los péptidos como se define en (1) y la composición definida en (3) es un antígeno sustancialmente completo. Preferiblemente, el antígeno es un alérgeno.

En un quinto aspecto se proporciona un sistema terapéutico (o, como se puede denominar, un kit de partes) para desensibilizar un individuo frente a uno o más antígenos polipeptídicos, comprendiendo el sistema uno o más antígenos peptídicos que contienen un epítopo de célula T y un primer antígeno sustancialmente completo correspondiente al antígeno o los antígenos peptídicos. Típicamente, el sistema comprende adicionalmente un segundo antígeno polipeptídicos sustancialmente completo que es diferente del primer alérgeno sustancialmente completo. Preferiblemente, el antígeno es un alérgeno.

Por tanto, la invención incluye diversos sistemas terapéuticos (o kits de partes) para desensibilizar un individuo frente a un antígeno seleccionado (por ejemplo, un alérgeno). Los sistemas contienen un antígeno peptídico como se ha definido anteriormente en este documento y antígeno sustancialmente completo, en el que ambos componentes se tienen que usar en un protocolo de tratamiento para desensibilizar el individuo frente al antígeno. Típicamente, el kit de partes incluye instrucciones para usar los dos componentes en un protocolo terapéutico. De forma adecuada, el antígeno peptídico es uno que, cuando se administra a un individuo adecuado, da lugar a un estado de hiporreactividad en el individuo frente al antígeno del que se obtiene. Un ejemplo de este tipo de sistema terapéutico es uno que contiene un péptido Fel d 1 tal como uno o más de los siguientes péptidos: EICPAVKRDVDLFLTGT (SEC ID Nº 1); LFLTGTP
DEYVEQVAQY (SEC ID Nº 2); EQVAQYKALPVVLENA (SEC ID Nº 3); KALPVVLENARILKNCV (SEC ID Nº 4); RILKNCVDAKMTEEDKE (SEC ID Nº 5); KMTEEDKENALSLLDK (SEC ID Nº 6); KENALSLLDKIYTSPL (SEC ID Nº 7); LTKVNATEPERTAMKK (SEC ID Nº 8); TAMKKIQDCYVENGLI (SEC ID Nº 9); SRVLDGLVMT
TISSSK (SEC ID Nº 10); ISSSKDCMGEAVQNTV (SEC ID Nº 11); AVQNTVEDLKLNTLGR (SEC ID Nº 12) y péptidos sustancialmente homólogos a una cualquiera o más de las SEC ID Nº 12 y Fel d 1 completo. Por tanto, el péptido Fel d 1 y el Fel d 1 completo se tienen que usar terapéuticamente en un protocolo de tratamiento. Este tipo de sistema puede contener opcionalmente alérgeno completo (por ejemplo, Fel d 1 completo) para establecer la eficacia de la desensibilización usando los demás componentes.

La invención también incluye un sistema terapéutico (o kit de partes) que contiene un ciclo de péptidos de un antígeno (por ejemplo, un alérgeno) como se ha definido y antígeno sustancialmente completo. El sistema puede incluir un ciclo de péptidos y un ciclo de antígeno sustancialmente completo. El ciclo de péptidos de un antígeno es uno que, cuando se administra a un individuo adecuado, da lugar a un estado de hiporreactividad en el individuo frente al antígeno del que se obtiene o produce. Típicamente, como se ha descrito anteriormente, el ciclo de péptidos puede ser un ciclo de péptidos de dosis creciente. En una realización, el sistema terapéutico puede contener un único antígeno péptido que contiene un epítopo de célula T pero presente envasado de forma separada en una serie de concentraciones crecientes o en dosis unitarias crecientes para la administración en dosis crecientes al individuo. En una realización adicional, el sistema puede contener diferentes antígenos peptídicos envasados de forma separada o envasados conjuntamente (por ejemplo, presentes en la misma solución acuosa estéril y sin pirógenos). De forma adecuada, en algunas realizaciones, la pluralidad de péptidos se envasa en una serie de concentraciones crecientes o dosificaciones unitarias crecientes para la administración en dosis crecientes al individuo. Otras combinaciones adecuadas se pueden considerar fácilmente por el especialista en la técnica dadas las enseñanzas en este documento.

El alérgeno también se puede envasar en una serie de concentraciones crecientes o en dosificaciones unitarias crecientes para administración en dosis crecientes al individuo.

Por tanto, como un ejemplo, un sistema terapéutico para desensibilizar un individuo frente a desescamaciones de gato contiene uno cualquiera o más péptidos seleccionados de EICPAVKRDVDLFLTGT (SEC ID Nº 1), LFLTGTP
DEYVEQVAQY (SEC ID Nº 2), EQVAQYKALPVVLENA (SEC ID Nº 3), KALPVVLENARILKNCV (SEC ID Nº 4), RILKNCVDAKMTEEDKE (SEC ID Nº 5), KMTEEDKENALSLLDK (SEC ID Nº 6), KENALSLLDKIYTSPL (SEC ID Nº 7), LTKVNATEPERTAMKK (SEC ID Nº 8), TAMKKIQDCYVENGLI (SEC ID Nº 9), SRVLDGLVMT
TISSSK (SEC ID Nº 10), ISSSKDCMGEAVQNTV (SEC ID Nº 11), AVQNTVEDLKLNTLGR (SEC ID Nº 12) y péptidos sustancialmente homólogos a una cualquiera o más de la SEC ID Nº 1-12, envasadas de forma separada en dosificaciones unitarias de 5 \mug, 10 \mug, 25 \mug y 50 \mug y antígeno Fel d 1 completo envasado de forma separada en dosificaciones unitarias de 1 ng a 50 \mug. Se pueden proporcionar instrucciones adecuadas para indicar al médico cómo administrar los péptidos para proporcionar un estado óptimo de hiporreactividad frente a Fel d 1 antes de la administración del alérgeno Fel d 1 completo. Se pueden considerar sistemas y kits terapéuticos similares para la desensibilización frente a otros antígenos.

En una realización preferida, la invención incluye un sistema terapéutico para desensibilizar un individuo frente a múltiples antígenos (por ejemplo, múltiples alérgenos). El sistema contiene un antígeno peptídico al que se ha expuesto previamente el individuo, antígeno sustancialmente completo correspondiente al péptido, es decir, del que se obtuvo o produjo el antígeno peptídico y uno o más antígenos sustancialmente completos frente a los que se tiene que desensibilizar el individuo. Típicamente, el sistema terapéutico contiene el péptido, los péptidos o el ciclo de péptidos como se ha descrito anteriormente y el antígeno correspondiente al péptido o los péptidos. Sin embargo, además, el sistema terapéutico contiene el

\hbox{uno o más antígenos completos  frente a los que se tiene
que desensibilizadar el individuo.}

Por tanto, en una realización, el sistema terapéutico es para desensibilizar al individuo frente a alérgeno de cacahuete. El individuo se ha expuesto a alérgeno de desescamaciones de gato (pero puede no ser alérgico a desescamaciones de gato), pero es alérgico a alérgeno de cacahuete. El sistema contiene un ciclo de péptidos Fel d 1 para producir un estado de hiporreactividad, Fel d 1 completo, y

\hbox{un ciclo
de alérgeno de cacahuete  completo en dosificaciones
crecientes.}

En otra realización, el sistema terapéutico es para desensibilizar el individuo frente a desescamaciones de gato, ácaros de polvo doméstico y polen de césped. El individuo es alérgico a alérgeno de desescamaciones de gato, alérgenos de ácaro de polvo doméstico y polen de césped. El sistema contiene un ciclo de péptidos Fel d 1 para producir un estado de hiporreactividad, Fel d 1 completo y alérgeno de ácaro de polvo doméstico completo y alérgeno de polen de césped completo.

En un sexto aspecto de la invención se proporciona el uso de un péptido que contiene epítopos de célula T de un antígeno (por ejemplo, un alérgeno) al que se ha expuesto el individuo en la fabricación de un medicamento para generar en el individuo un estado de hiporreactividad frente al antígeno para permitir la desensibilización frente a uno o más antígenos polipeptídicos, que contienen

\hbox{cada un epítopo de célula
T. Preferiblemente, el  antígeno es un alérgeno.}

En un séptimo aspecto se proporciona el uso de una composición que contiene un epítopo de célula T de uno o más antígenos polipeptídicos frente a los que se tiene que desensibilizar el individuo, en la fabricación de un medicamento para la administración a un individuo al que se ha administrado un péptido que contiene epítopos de célula T, o un ciclo de péptidos que contienen un epítopo de célula T, de un antígeno, tal como un alérgeno, al que se ha expuesto el individuo, para generar en el individuo un estado de hiporreactividad frente al antígeno y, si la composición no contiene un epítopo de célula T del péptido o los péptidos administrados, al individuo se ha administrado adicionalmente una composición que contiene dicho epítopo de célula T, en el que las composiciones se localizan sustancialmente en el sitio de administración.

En un octavo aspecto se proporciona el uso de un péptido que contiene epítopos de célula T de un antígeno, preferiblemente un alérgeno, al que se ha expuesto el individuo, en la fabricación de un medicamento para generar en el individuo un estado de hiporreactividad frente al antígeno para permitir la desensibilización frente a uno o más alérgenos sustancialmente completos.

En un noveno aspecto se proporciona el uso de un primer antígeno sustancialmente completo, preferiblemente un alérgeno, al que se ha expuesto un individuo, en la fabricación de un medicamento para desensibilizar el individuo frente a uno o más antígenos polipeptídicos, en el que al individuo se ha administrado un péptido que contiene epítopos de célula T o un ciclo de péptidos que contienen epítopos de célula T, del primer antígeno y posteriormente al individuo se ha administrado antígeno sustancialmente completo frente al que se tiene que desensibilizar el individuo.

En un décimo aspecto se proporciona el uso de un antígeno sustancialmente completo, preferiblemente un alérgeno, al que se ha expuesto un individuo, en la fabricación de un medicamento para desensibilizar el individuo frente al antígeno, en el que al individuo se ha administrado un péptido que contiene epítopos de célula T, o un ciclo de péptidos que contienen epítopos de célula T del antígeno.

C. Parte experimental

A continuación hay ejemplos de realizaciones específicas para realizar la presente invención. Los ejemplos se ofrecen solamente con propósitos ilustrativos y no tienen por objeto limitar el alcance de la presente invención de ninguna manera.

Se han realizado esfuerzos para garantizar la precisión con respecto a los números usados (por ejemplo, cantidades, temperaturas, etc.), pero, por supuesto, se debe permitir cierto error experimental y desviación.

Figura 1. Administración de péptidos seguido de proteína completa disminuye la reacción de fase temprana cutánea a Fel d 1. En un experimento clínico controlado con placebo, doble ciego, a los sujetos se inyectó por vía transdérmica proteína Fel d 1 completa y la magnitud de la reacción se midió a los 15 minutos (nivel basal). Se administró una serie de inyecciones de péptidos obtenidos de la secuencia de Fel d 1. La dosis de péptidos comenzó en 5 \mug para cada péptido y aumentó hasta que se hubo administrado una dosis acumulativa de 90 \mug. Aproximadamente 2-4 semanas después se inyectó la proteína completa (proteína completa). 3-6 meses más tarde se realizó la exposición a proteína completa y se definió la magnitud de la reacción cutánea a los 15 minutos (resultado).

Figura 2. Administración de péptidos seguido de proteína completa disminuye la reacción de fase tardía cutánea a Fel d 1. En un experimento clínico controlado con placebo, doble ciego, a los sujetos se inyectó por vía transdérmica proteína Fel d 1 completa y se midió la magnitud de la reacción a las 6 horas (nivel basal). Se administró una serie de inyecciones de péptidos obtenidos de la secuencia de Fel d 1. La dosis de péptidos comenzó en 5 \mug de cada péptido y aumentó hasta que se hubo administrado una dosis acumulativa de 90 \mug. Aproximadamente 2-4 semanas más tarde se inyectó la proteína completa (proteína completa). 3-6 meses más tarde se realizó la exposición a proteína completa y se definió la magnitud de la reacción cutánea a las 6 horas (resultado).

Figura 3. Se administraron péptidos del alérgeno de gato Fel d 1 por vía intradérmica a intervalos de 2 veces por semana con el siguiente programa de dosis: 0,1 \mug, 1,0 \mug, 5,0 \mug, 10,0 \mug, 25,0 \mug. No se observó ninguna reacción asmática tardía aislada (n=8 sujetos; datos agrupados). EICPAVKRDVDLFLTGT (SEC ID Nº 1), LFLTGTP
DEYVEQVAQY (SEC ID Nº 2), EQVAQYKALPVVLENA (SEC ID Nº 3), KALPVVLENARILKNCV (SEC ID Nº 4), RILKNCVDAKMTEEDKE (SEC ID Nº 5), KMTEEDKENALSLLDK (SEC ID Nº 6), KENALSLLDKIYTSPL (SEC ID Nº 7), LTKVNATEPERTAMKK (SEC ID Nº 8), TAMKKIQDCYVENGLI (SEC ID Nº 9), SRVLDGLVMT
TISSSK (SEC ID Nº 10), ISSSKDCMGEAVQNTV (SEC ID Nº 11), AVQNTVEDLKLNTLGR (SEC ID Nº 12).

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Ejemplo 1

Desensibilización frente a Fel d 1

En este ejemplo, en un estudio doble ciego, controlado con placebo, a 16 sujetos se inyectó por vía intradérmica una mezcla de los péptidos: EICPAVKRDVDLFLTGT (SEC ID Nº 1), LFLTGTPDEYVEQVAQY (SEC ID Nº 2), EQVAQYKALPVVLENA (SEC ID Nº 3), KALPVVLENARILKNCV (SEC ID Nº 4), RILKNCVDAKMTEEDKE (SEC ID Nº 5), KMTEEDKENALSLLDK (SEC ID Nº 6), KENALSLLDKIYTSPL (SEC ID Nº 7), LTKVNATE
PERTAMKK (SEC ID Nº 8), TAMKKIQDCYVENGLI (SEC ID Nº 9), SRVLDGLVMTTISSSK (SEC ID Nº 10), ISSSKDCMGEAVQNTV (SEC ID Nº 11), AVQNTVEDLKLNTLGR (SEC ID Nº 12) (comenzando con 5 \mug de cada péptido y aumentando la dosis hasta que se consiguió una dosis acumulativa de 90 \mug) obtenidos de la secuencia del alérgeno de gato principal Fel d 1. Un grupo de control de 8 individuos recibió diluyente solo (placebo). Posteriormente (después de aproximadamente un mes) se les inyectó proteína completa por vía intradérmica. Finalmente, después de 3-6 meses, se evaluó su respuesta a la exposición intradérmica a la proteína completa en términos del tamaño (en mm^{2}) de la reacción cutánea medida a los 15 minutos y 6 horas post-inyección. Las reacciones frente a las proteínas inyectadas se compararon con la reacción a exposiciones a proteína equivalentes realizadas antes de la inyección de péptidos.

La Figura 1 muestra que la inyección de péptidos seguido de proteína conduce a una disminución estadísticamente significativa en el tamaño de la respuesta cutánea a la exposición a proteína completa a los 15 minutos.

La Figura 2 muestra que la inyección de péptido solo es capaz de provocar una disminución significativa en el tamaño de la reacción frente a la inyección de proteína completa, pero que el efecto de las inyecciones de péptido y la inyección de proteína es incluso mayor que la inyección de péptido solo, ya que la combinación de ambos disminuye de forma marcada el tamaño de la reacción frente a la inyección de "resultado" de 3-6 meses medida 6 horas después de la exposición a proteína.

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Ejemplo 2

Desensibilización frente a alérgeno de ácaro de polvo doméstico, Der p 1

En este ejemplo, a los sujetos se les inyectó por vía intradérmica una mezcla de péptidos: EICPAVKRDVDLFLTGT (SEC ID Nº 1), LFLTGTPDEYVEQVAQY (SEC ID Nº 2), EQVAQYKALPVVLENA (SEC ID Nº 3), KALPVVLE
NARILKNCV (SEC ID Nº 4), RILKNCVDAKMTEEDKE (SEC ID Nº 5), KMTEEDKENALSLLDK (SEC ID Nº 6), KENALSLLDKIYTSPL (SEC ID Nº 7), LTKVNATEPERTAMKK (SEC ID Nº 8), TAMKKIQDCYVENGLI (SEC ID Nº 9), SRVLDGLVMTTISSSK (SEC ID Nº 10), ISSSKDCMGEAVQNTV (SEC ID Nº 11), AVQNTVEDLKLN
TLGR (SEC ID Nº 12) y péptidos sustancialmente homólogos a una cualquiera o más de las SEC ID Nº 1-12. (comenzando en 5 \mug de cada péptido y aumentando la dosis hasta que se consigue una dosis acumulativa de 90 \mug) obtenidos de la secuencia del alérgeno de gato principal Fel d 1. Un grupo de control recibe diluyente solo (placebo). Posteriormente (después de aproximadamente un mes) se les inyectó por vía intradérmica la proteína Fel d 1 completa que se mezcla con el alérgeno Der p 1 de proteína de ácaro de polvo doméstico. Finalmente, después de 3-6 meses, se evaluó su respuesta a exposición intradérmica con la proteína Fel d 1 completa y la proteína Der p 1 completa en términos del tamaño (en mm^{2}) de la reacción cutánea medida a los 15 minutos y 6 horas post-inyección. Las reacciones frente a las proteínas inyectadas se comparan con la reacción a exposiciones a proteína equivalentes realizadas antes de la inyección de péptido.

La reacción cutánea tanto a Fel d 1 como Der p 1 se espera que disminuya 15 minutos después de la inyección y/o 6 horas después de la inyección.

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Ejemplo 3

Desensibilización frente a alérgeno de ácaro de polvo doméstico, Der p 1

En este ejemplo, a los sujetos se inyectó por vía intradérmica una mezcla de péptidos: EICPAVKRDVDLFLTGT (SEC ID Nº 1), LFLTGTPDEYVEQVAQY (SEC ID Nº 2), EQVAQYKALPVVLENA (SEC ID Nº. 3), KALPVVLE
NARILKNCV (SEC ID Nº 4), RILKNCVDAKMTEEDKE (SEC ID Nº 5), KMTEEDKENALSLLDK (SEC ID Nº 6), KENALSLLDKIYTSPL (SEC ID Nº 7), LTKVNATEPERTAMKK (SEC ID Nº 8), TAMKKIQDCYVENGLI (SEC ID Nº 9), SRVLDGLVMTTISSSK (SEC ID Nº 10), ISSSKDCMGEAVQNTV (SEC ID Nº 11), AVQNTVEDLKLN
TLGR (SEC ID Nº 12) y péptidos sustancialmente homólogos a una cualquiera o más de las SEC ID Nº 1-12. (comenzando en 5 \mug de cada péptido y aumentando la dosis hasta que se consigue una dosis acumulativa de 90 \mug) obtenidos de la secuencia del alérgeno de gato principal Fel d 1. Un grupo de control recibe diluyente solo (placebo). Posteriormente (después de aproximadamente un mes) se les inyectó por vía intradérmica una emulsión que contiene los péptidos Fel d 1 administrados previamente junto con un péptido del alérgeno de proteína de ácaro de polvo doméstico Der p 1. Finalmente, después de 3-6 meses se evaluó su respuesta a la exposición intradérmica con la proteína Fel d 1 completa y la proteína Der p 1 completa en términos del tamaño (en mm^{2}) de la reacción cutánea medida a los 15 minutos y 6 horas post-inyección. Las reacciones frente a las proteínas inyectadas se comparan con la reacción frente a exposiciones de proteína equivalente realizadas antes de la inyección de
péptido.

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Ejemplo 4

Desensibilización frente a proteína básica de mielina (MBP)

En este ejemplo, a los sujetos se inyectó por vía transdérmica una mezcla de péptidos EICPAVKRDVDLFLTGT (SEC ID Nº 1), LFLTGTPDEYVEQVAQY (SEC ID Nº 2), EQVAQYKALPVVLENA (SEC ID Nº 3), KALPVVLE
NARILKNCV (SEC ID Nº 4), RILKNCVDAKMTEEDKE (SEC ID Nº 5), KMTEEDKENALSLLDK (SEC ID Nº 6), KENALSLLDKIYTSPL (SEC ID Nº 7), LTKVNATEPERTAMKK (SEC ID Nº 8), TAMKKIQDCYVENGLI (SEC ID Nº 9), SRVLDGLVMTTISSSK (SEC ID Nº 10), ISSSKDCMGEAVQNTV (SEC ID Nº 11), AVQNTVEDLKLN
TLGR (SEC ID Nº 12) y péptidos sustancialmente homólogos a una cualquiera o más de las SEC ID Nº 1-12. (comenzando en 5 \mug de cada péptido y aumentando la dosis hasta que se consigue una dosis acumulativa de 90 \mug) obtenidos de la secuencia del alérgeno principal de gato Fel d 1. Un grupo de control recibe diluyente solo (placebo). Posteriormente (después de aproximadamente un mes) se les inyectó por vía intradérmica la proteína Fel d 1 completa que se mezcla con autoantígeno de proteína básica de mielina (MBP). Finalmente, después de 3-6 meses se evaluó su respuesta a la exposición intradérmica con la proteína Fel d 1 completa en términos del tamaño (en mm^{2}) de la reacción cutánea medida a los 15 minutos y 6 horas post-inyección. La inducción de hiporreactividad frente a MBP se mide mediante evaluación de puntuaciones de síntomas, por ejemplo, usando la "escala de estado de discapacidad ampliada" (Kurtze JF. Rating neurological impairment in multiple sclerosis: an expanded disability status scale (EDSS). Neurology 33; 1444-52 (1983) y/o la "Scripps neurological rating scale" Sharrack B & Hughes RA. Clinical scales for multiple sclerosis J. Neurol. Sci. 135; 1-9 (1996) y el uso de formación de imágenes por resonancia magnética (MRI) del cerebro. Adicionalmente, se espera que respuestas de células T in vitro frente a MBP disminuyan en términos de capacidad proliferativa y producción de IFN\gamma. La reacción frente a la proteína Fel d 1 inyectada se compara con la reacción a exposición de proteína equivalente realizada antes de la inyección de péptido.

La reacción cutánea a Fel d 1 disminuye a los 15 minutos después de la inyección y/o 6 horas después de la inyección. Además, las puntuaciones de síntomas registradas con los instrumentos que se han enumerado anteriormente se espera que muestren una mejora asociada a la disminución en reactividad frente a MBP.

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Ejemplo 5

Desensibilización frente a alérgeno tanto de gato como de perro

En este ejemplo, a un individuo con asma alérgica inducida por gato y también con sensibilización alérgica frente a alérgeno de perro (s) se inyectó por vía intradérmica una mezcla de péptidos del alérgeno de gato principal, Fel d 1. Los péptidos eran específicamente EICPAVKRDVDLFLTGT (SEC ID Nº 1), LFLTGTPDEYVEQVAQY (SEC ID Nº 2), EQVAQYKALPVVLENA (SEC ID Nº 3), KALPVVLENARILKNCV (SEC ID Nº 4), RILKNCVDAKMTEEDKE (SEC ID Nº 5), KMTEEDKENALSLLDK (SEC ID Nº 6), KENALSLLDKIYTSPL (SEC ID Nº 7), LTKVNATE
PERTAMKK (SEC ID Nº 8), TAMKKIQDCYVENGLI (SEC ID Nº 9), SRVLDGLVMTTISSSK (SEC ID Nº 10), ISSSKDCMGEAVQNTV (SEC ID Nº 11), AVQNTVEDLKLNTLGR (SEC ID Nº 12). Los péptidos se inyectaron en dosis divididas incrementales a intervalos de aproximadamente 2 semanas. Las dosis se administraron en un volumen de 100 microlitros y contenían las siguientes concentraciones de cada uno de los 12 péptidos: 1 \mug, 5 \mug, 10 \mug, 25 \mug, 50 \mug, 100 \mug y 100 \mug en ese orden.

En diversos momentos durante el tratamiento, al individuo también se inyectaron por vía intradérmica 30 unidades biológicas de extracto de desescamaciones de gato completo (BU; obtenido en ALK, Horsholm, Dinamarca) y extracto de desescamaciones de perro (30 BU) por la misma vía.

La magnitud de la respuesta cutánea alérgica de fase temprana (15 minutos) y de fase tardía (6 horas) a ambos extractos de alérgeno se midió antes y 4 semanas después del ciclo de inyecciones de péptido. La magnitud de las reacciones fue la siguiente:

TABLA 1

35

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Además de los cambios en la reactividad de fase tardía cutánea a ambos alérgenos, la eficacia clínica del tratamiento con péptido con respecto a los síntomas se confirmó por mejora en las puntuaciones de síntomas nasales después de la exposición a alérgeno nasal con extracto de desescamaciones de gato (no se realizó el alérgeno de perro).

Los resultados demuestran que el tratamiento con péptidos obtenidos de una proteína se puede usar para inducir hiporreactividad no solamente en la proteína precursora sino también en otra proteína, suponiendo que las proteínas completas se coadministran durante o brevemente después de la administración de un ciclo de péptidos.

Claims

1. Uso de

(ii): un polipéptido que comprende una segunda secuencia de antígeno polipeptídico completa o un polipéptido que comprende una parte de la segunda secuencia de antígeno polipeptídico, parte que contiene un epítopo de célula T,

para la fabricación de un medicamento para desensibilizar un individuo frente al segundo antígeno polipeptídico mediante un método que comprende:

(b): administrar una composición secundaria al individuo, en la que dicha composición secundaria comprende el polipéptido que comprende la segunda secuencia de antígeno completa o el polipéptido que comprende la parte de la segunda secuencia polipeptídica

por lo que el estado hiporreactivo generado en la etapa (a) y la administración de la composición secundaria son suficientes para desensibilizar el individuo frente al segundo antígeno polipeptídico

y en el que el primer antígeno polipeptídico es diferente del segundo antígeno polipeptídico y en el que el individuo se ha expuesto previamente al primer o al segundo antígeno polipeptídico.

2. Uso de acuerdo con la reivindicación 1 en el que el individuo se ha expuesto previamente al primer antígeno polipeptídico y en el que la composición secundaria comprende el polipéptido que comprende la segunda secuencia de antígeno completa o el polipéptido que comprende la parte de la segunda secuencia polipeptídica y se coadministra con el polipéptido que comprende la primera secuencia de antígeno polipeptídico completa o el polipéptido que comprende la parte de la primera secuencia de antígeno polipeptídico, por lo que el estado hiporreactivo generado en la etapa (a) y dicha coadministración son suficientes para desensibilizar el individuo frente al segundo antígeno polipep-
tídico.

3. Uso de la reivindicación 1, en el que una pluralidad de composiciones secundarias se administra al individuo en la etapa (b) y cada composición secundaria contiene un antígeno polipeptídico diferente, desensibilizando de este modo el individuo frente a una pluralidad de antígenos polipeptídicos.

4. Uso de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el individuo es alérgico frente al primer antígeno polipeptídico o el segundo antígeno polipeptídico.

5. Uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 en el que el primer antígeno polipeptídico es un alérgeno.

6. Uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que el primer antígeno polipeptídico o antígeno polipeptídico seleccionado es un alérgeno aéreo.

7. Uso de la reivindicación 6, en el que el alérgeno aéreo se selecciona del grupo que consiste en un alérgeno de desescamaciones de gato, un alérgeno de desescamaciones de perro, un alérgeno de ácaro de polvo doméstico, un alérgeno de polen, un alérgeno de césped y un alérgeno alimentario.

8. Uso de la reivindicación 7, en el que el alérgeno de desescamaciones de gato es Fel d 1.

9. Uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que la composición primaria comprende una pluralidad de primeros antígenos polipeptídicos que contienen cada uno un epítopo de célula T.

10. Uso de la reivindicación 9, en el que la composición primaria comprende uno o más péptidos Fel d 1 seleccionados del grupo que consiste en EICPAVKRDVDLFLTGT (SEC ID Nº 1), LFLTGTPDEYVEQVAQY (SEC ID Nº 2), EQVAQYKALPVVLENA (SEC ID Nº 3), KALPVVLENARILKNCV (SEC ID Nº 4), RILKNCVDAKMTEED
KE (SEC ID Nº 5), KMTEEDKENALSLLDK (SEC ID Nº 6), KENALSLLDKIYTSPL (SEC ID Nº 7), LTKVNATE
PERTAMKK (SEC ID Nº 8), TAMKKIQDCYVENGLI (SEC ID Nº. 9), SRVLDGLVMTTISSSK (SEC ID Nº 10), ISSSKDCMGEAVQNTV (SEC ID Nº 11), AVQNTVEDLKLNTLGR (SEC ID Nº 12) y péptidos sustancialmente homólogos a una cualquiera o más de las SEC ID Nº 1-12.

11. Uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 en el que la etapa (a) comprende una serie de administraciones de la composición primaria.

12. Uso de la reivindicación 11, en el que la composición primaria se administra al individuo en una serie de dosis crecientes del primer antígeno polipeptídico realizada a lo largo de un periodo de tiempo.

13. Uso de las reivindicaciones 1 a 12, en el que el segundo antígeno polipeptídico es un alérgeno.

14. Uso de la reivindicación 13, en el que el segundo antígeno polipeptídico es un alérgeno de una cualquiera o más de las siguientes fuentes: látex; plantas, tales como césped, árboles y ambrosía; pólenes; hongos y mohos; alimentos; insectos picadores incluyendo avispas; los chirnomidae (mosquitos no mordedores); arañas y ácaros; moscas tales como mosca doméstica, mosca de la fruta, mosca azul de la oveja y mosca del gusano barrenador; gorgojo de los cereales; gusano de seda; abeja; larvas de mosquitos no mordedores; larvas de polilla de la colmena; gusano de harina; cucaracha; larvas de escarabajo Tenibrio molitor; y mamíferos tales como gato, perro, caballo, vaca, cerdo, oveja, conejo, rata, cobaya, ratón y gerbo.

15. Uso de la reivindicación 14, en el que el alérgeno se selecciona del grupo que consiste en Der p 1; Der p 2; Der p 3; Der p 4; Der p 5; Der p 6; Der p 7; Der p 9; Der f 1; Der f 2; Der f 3; Der f 4; Der f 7; cadena 1 ó 2 de Fel d 1; Hev b 1; Hev b 3; Lol p 1; Lol p 2a; Lol p 3; Lol p 5a; Lol p 5b; isoforma 9 de Lol p; Lol p 11; Ole e 1; Par j P2; Par j P5; Par j P8; Par j P9; Par j 1; Phl p 1; Phl p 2; Phl p 5; Phl p 5b; Phl p 5a; VES V 5; VES M 1; VES V 1; VES V 2; VES VI; Bet v 1; Bet v 2; Bet v 3; Bet v4; Que a I; Car b I; Aln g I; Rubisco; Ara h 1; Amb a 1; Amb a 2; Amb a 1.3; Amb a 1.2; Amb a 1.1; precursor de Cry j IB, precursor de Cry j IA, precursor de Cry j II; proteína Cry j II; precursor de Cry j I; Can f 1; Can f 2; fragmento de albúmina sérica; Equ c1; Equ c 2; Eur m 1; POA P 9; Cr p1; Cr p2; Bla g 2; Bla g 4; y Bla g 5.

16. Uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en el que el segundo antígeno polipeptídico es un autoantígeno.

17. Uso la reivindicación 16, en el que el autoantígeno se asocia a uno cualquiera de los siguientes trastornos autoinmunes: Esclerosis Múltiple; Diabetes; Artritis Reumatoide; Tiroiditis; Lupus Eritematoso Sistémico; Enfermedad de Behcet; Enfermedad Celíaca; o Miastenia grave.

18. Uso de la reivindicación 17, en el que el autoantígeno se selecciona del grupo que consiste en: proteína básica de mielina (MBP); proteína proteolipídica (PLP); glicoproteína de mielina de oligodendrocito (MOG); ácido glutámico descarboxilasa (GAD); insulina; IA-2 (una proteína similar a proteína fosfatasa); colágeno; proteínas de choque térmico (HSP); tiroglobulina; proteínas histona; cadena pesada de inmunoglobulina; antígeno S del ojo (Sag); HLA-B44, HLA B51; HSP65; gliadina; y receptor de acetilcolina.

19. Uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en el que el segundo antígeno polipeptídico es de un antígeno de trasplante.

20. Uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19, en el que la composición secundaria se coadministra con el polipéptido que comprende la primera secuencia de antígeno polipeptídico completa o el polipéptido que comprende la parte de la primera secuencia de antígeno polipeptídico y dicha coadministración incluye administración de dos composiciones separadas.

21. Uso de las reivindicación 20, en el que la composición secundaria se administra a un primer sitio y la composición que comprende el polipéptido que comprende la primera secuencia de antígeno polipeptídico completa o el polipéptido que comprende la parte de la primera secuencia de antígeno polipeptídico se administra a un segundo sitio.

22. Uso de la reivindicación 20, en el que la composición secundaria y la composición que comprende el polipéptido que comprende la primera secuencia de antígeno polipeptídico completa o el polipéptido que comprende la parte de la primera secuencia de antígeno polipeptídico se administran al mismo sitio.

23. Uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, en el que la etapa (b) incluye administración de una pluralidad de composiciones secundarias, comprendiendo cada una de dichas composiciones secundarias un antígeno polipeptídico diferente, por lo que el individuo se desensibiliza frente a más de un antígeno polipeptídico.

24. Uso de la reivindicación 23, en el que la pluralidad de composiciones secundarias se combinan.

25. Uso de la reivindicación 24, en el que la pluralidad de composiciones secundarias se combinan adicionalmente con el polipéptido que comprende la primera secuencia de antígeno polipeptídico completa o el polipéptido que comprende la parte de la primera secuencia de antígeno polipeptídico.

26. Uso de la reivindicación 24, en el que la pluralidad de composiciones secundarias y la composición que comprende el polipéptido que comprende la primera secuencia de antígeno polipeptídico completa o el polipéptido que comprende la parte de la primera secuencia de antígeno polipeptídico se administran al mismo sitio.

27. Uso de la reivindicación 24, en el que las composiciones secundarias se administran a un primer sitio y la composición que comprende el polipéptido que comprende la primera secuencia de antígeno polipeptídico completa o el polipéptido que comprende la parte de la primera secuencia de antígeno polipeptídico se administra a un segundo sitio.

28. Uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19 en el que en la etapa (b) el polipéptido que comprende la primera secuencia de antígeno polipeptídico completa o el polipéptido que comprende la parte de la primera secuencia de antígeno polipeptídico se administra al individuo en un sitio de administración y permanece sustancialmente localizada en dicho sitio de administración.

29. Uso de la reivindicación 28, en el que el polipéptido que comprende la primera secuencia de antígeno polipeptídico completa o el polipéptido que comprende la parte de la primera secuencia de antígeno polipeptídico se administra en una formulación de liberación lenta o en una emulsión de aceite y agua.

30. Uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 29 en el que al menos una de dicha composición primaria, composición secundaria o una composición que comprende el polipéptido que comprende la primera secuencia de antígeno polipeptídico completa o el polipéptido que comprende la parte de la primera secuencia de antígeno polipeptídico se administra usando inyección intradérmica, inyección subcutánea, inyección intramuscular, inyección intravenosa, técnica de administración transdérmica, intranasal, oral, intraocular o intratecal.

31. Uso de la reivindicación 30, en el que al menos una de dicha composición primaria, composición secundaria o una composición que comprende el polipéptido que comprende la primera secuencia de antígeno polipeptídico completa o el polipéptido que comprende la parte de la primera secuencia de antígeno polipeptídico comprende un soporte o vehículo acuoso o líquido.

32. Uso de la reivindicación 30, en el que al menos una de dicha composición primaria, composición secundaria o una composición que comprende el polipéptido que comprende la primera secuencia de antígeno polipeptídico completa o el polipéptido que comprende la parte de la primera secuencia de antígeno polipeptídico se proporciona en una forma en polvo seco.

33. Uso de la reivindicación 32 en el que dicha composición en polvo seco se administra usando una técnica de inyección de partículas transdérmica.

34. Productos que contienen:

(ii): un polipéptido que comprende una segunda secuencia de antígeno completa o un polipéptido que comprende una parte de la segunda secuencia de antígeno polipeptídico, parte que contiene un epítopo de célula T, como una preparación combinada para uso simultáneo, separado o secuencial en un método para desensibilizar el individuo frente al segundo antígeno polipeptídico que comprende las etapas (a) y (b) como se ha definido en la reivindicación 1 y en el que el primer antígeno polipeptídico es diferente del segundo antígeno polipeptídico y en el que el individuo se ha expuesto previamente al primer o segundo antígeno polipeptídico.

35. Productos de acuerdo con la reivindicación 34 en los que la composición primaria o secundaria es capaz de permanecer sustancialmente en el sitio de su administración.

36. Uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la composición primaria y secundaria se coadministran en forma de una composición única.

37. Uso de acuerdo con la reivindicación 1 en el que la composición primaria y secundaria se administran en forma de composiciones separadas.