ES2304634T3 - Procedimiento para la preparacion de derivados de (3-oxo-2,3-dihidro-1h-isoindol-1-il)-acetilguanidina. - Google Patents

Abstract

Procedimiento para preparar compuestos de la fórmula I (Ver fórmula) en la que significan R1 y R2, cada uno de forma independiente, hidrógeno, F, Cl, trifluorometoxi, 2,2,2- trifluoroetoxi, trifluorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo o alquilo con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C; R3 Alk-R4 o trifluorometilo; Alk alquilo con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C; R4 hidrógeno, trifluorometilo o cicloalquilo con 3, 4, 5, 6 ó 7 átomos de C; así como sus sales, caracterizado porque (Ver fórmula) a) se formila la amida de la fórmula IV y, a continuación, se cicla al compuesto de la fórmula VI, b) se hace reaccionar el compuesto de la fórmula VI con un alcoxicarbonilmetilen-trifenilfosforano, con un 1-alcoxi- 1-trimetilsiloxietileno o con un fosfonoacetato de trialquilo, para dar el compuesto de la fórmula VII, y c) se hace reaccionar el compuesto de la fórmula VII con guanidina para dar el compuesto de la fórmula I, en donde, en los compuestos de las fórmulas IV, VI y VII, R1 a R3 son como se han definido en la fórmula I, y R5 es alcoxi con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C; así como sus sales.

Description

Procedimiento para la preparación de derivados de (3-oxo-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-il)-acetilguanidina.

La presente invención se refiere a procedimientos para preparar derivados de (3-oxo-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-il)-acetilguanidina a través de derivados de 3-hidroxi-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-ona o derivados del éster acrílico de 3-(2-carbamoil-fenilo) como etapas intermedias, a un procedimiento para la separación en racematos, así como a productos intermedios del procedimiento según la invención.

El documento WO 02/081443 describe derivados de (3-oxo-2,3-dihidro-1H-isoindol-5-il)guanidina en calidad de agonistas de MC4-R y que se utilizan para el tratamiento de diabetes.

Los derivados de (3-oxo-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-il)-acetilguanidina de la fórmula I

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1

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son inhibidores de NHE1 y se describen en el documento WO 03/101450. Sin embargo, las síntesis descritas en dicho documento conducen a mezclas racémicas de regioisómeros, lo cual implica procedimientos de separación costosos y reduce el rendimiento del compuesto deseado. Hasta la fecha, sólo ha sido posible obtener los isómeros mediante una separación cromatográfica costosa sobre soportes quirales. No obstante, el rendimiento total de la sustancia está restringido en separaciones cromatográficas.

Existía, por consiguiente, un gran interés en encontrar procedimientos de preparación regioselectivos para los derivados de (3-oxo-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-il)-acetilguanidina, así como procedimientos para obtener los enantiómeros. La preparación mejorada, regioselectiva, de los derivados racémicos de (3-oxo-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-il)-acetilguanidina tuvo lugar por dos vías independientes que se muestran en los esquemas 1 y 3. La resolución de los racematos se consiguió por cristalización, en forma de sales de los ácidos D- ó L-tartárico 2,3-O-acilados, como se muestra en el esquema 5. La suave racemización, catalizada por una base, del enantiómero no deseado en cada caso hace posible una amplia conversión del racemato en el enantiómero deseado. Los procedimientos mencionados permiten la preparación sencilla de derivados de (3-oxo-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-il)-acetilguanidina enantioméricamente enriquecidos o enantioméricamente puros. Mediante los nuevos procedimientos se hace posible la preparación simple de grandes cantidades de sustancia de los compuestos de la fórmula I a escala industrial.

Por lo tanto, la presente invención se refiere a un procedimiento para preparar compuestos de la fórmula I

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en la que significan

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R1 y R2, cada uno independientemente, hidrógeno, F, Cl, trifluorometoxi, 2,2,2-trifluoroetoxi, trifluorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo o alquilo con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

\newpage

R3

Alk-R4 o trifluorometilo;

Alk

alquilo con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

R4

hidrógeno, trifluorometilo o cicloalquilo con 3, 4, 5, 6 ó 7 átomos de C;

así como sus sales;

caracterizado porque, como se muestra en el esquema 1,

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Esquema 1

3

a) se formila la amida de la fórmula IV y, a continuación, se cicla al compuesto de la fórmula VI,

b) se hace reaccionar el compuesto de la fórmula VI con un alcoxicarbonilmetilen-trimetilfosforano, con un 1-alcoxi-1-trimetilsiloxietileno o con fosfonoacetato de trialquilo para dar el compuesto de la fórmula VII, y

c) se hace reaccionar el compuesto de la fórmula VII con guanidina para dar el compuesto de la fórmula I,

en donde, en los compuestos de las fórmulas IV, VI y VII,

R1 a R3 están definidos como en la fórmula I, y

R5 es alcoxi con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

así como sus sales.

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Objeto de la invención es, asimismo, un procedimiento para preparar compuestos de la fórmula I,

en los que significan

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\textoinvisible

R1 y R2, cada uno independientemente, hidrógeno, F, Cl, trifluorometoxi, 2,2,2- trifluoroetoxi, trifluorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo o alquilo con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

R3

Alk-R4 o trifluorometilo;

Alk

alquilo con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

R4

hidrógeno, trifluorometilo o cicloalquilo con 3, 4, 5, 6 ó 7 átomos de C;

así como sus sales;

caracterizado porque, como se muestra en el esquema 2,

\newpage

Esquema 2

4

a) el compuesto de la fórmula II se hace reaccionar con la amina de la fórmula III para dar la amida de la fórmula IV,

b) la amida de la fórmula IV se formila en la posición orto a la función amida para dar la formil-amida de la fórmula V,

c) la formil-amida de la fórmula V se cicla al compuesto de la fórmula VI,

d) el compuesto de la fórmula VI se hace reaccionar con un alcoxicarbonilmetilen-trifenilfosforano, con un 1-alcoxi-1-trimetilsiloxietileno o con un fosfonoacetato de trialquilo para dar el compuesto de la fórmula VII

y

e) el compuesto de la fórmula VII se hace reaccionar con guanidina para dar el compuesto de la fórmula I,

en donde, en los compuestos de las fórmulas II, III, IV, V, VI y VII,

R1 a R3 son, cada uno, como se han definido en la fórmula I,

R5 es alcoxi con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C, y

X es Cl, Br, OH, o alcoxi con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

así como sus sales.

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El compuesto de la fórmula II se hace reaccionar, típicamente, en un disolvente inerte tal como un éter, hidrocarburo o hidrocarburo halogenado, por ejemplo diclorometano, a una temperatura entre -30ºC y el punto de ebullición del disolvente, preferentemente a TA, con una amina de la fórmula III, eventualmente en presencia de un agente de activación, para dar la amida de la fórmula IV.

La orto-formilación se puede llevar a cabo, por ejemplo, disponiendo inicialmente un compuesto de alquil-metal, por ejemplo un compuesto de alquil-litio, preferentemente t-BuLi, con un complejo de ligandos, preferentemente TMEDA, en un disolvente inerte tal como un éter o hidrocarburo, por ejemplo THF, a una temperatura entre -100ºC y 0ºC, preferentemente, entre -80ºC y -50ºC. Luego se agrega la amida de la fórmula IV y se efectúa la deprotonación durante un período de 10 minutos a 10 horas, preferentemente,entre10 minutos y 60 minutos, a una temperatura entre -100ºC y 0ºC, preferentemente entre -80ºC y -50ºC. Subsiguientemente, se agrega un agente formilador, preferentemente DMF, y se realiza la reacción con el anión a una temperatura entre -100ºC y 40ºC, preferentemente entre -80ºC y la temperatura ambiente. Se prefiere dejar que la solución alcance la temperatura ambiente tras la adición de la DMF durante un período de 10 minutos a 3 horas, por ejemplo en un plazo de 30 minutos. La amida de la fórmula V, formada como intermedio, generalmente cicla directamente a la isoindolona de la fórmula VI.

La isoindolona de la fórmula VI se hace reaccionar con un alcoxi-(C_{1}-C_{4})-carbonilmetilen-trifenilfosforano en un disolvente inerte tal como un éter, hidrocarburo o hidrocarburo halogenado, por ejemplo tolueno, a una temperatura entre 0ºC y el punto de ebullición del disolvente, preferentemente entre 20ºC y el punto de ebullición del disolvente, o con un fosfonoacetato de trialquilo-(C_{1}-C_{4}) en presencia de una base, por ejemplo hidruro sódico, en un disolvente inerte tal como un éter, hidrocarburo o hidrocarburo halogenado, por ejemplo 1,2-dimetoxietano, a una temperatura entre 0ºC y el punto de ebullición del disolvente, preferentemente entre 20ºC y el punto de ebullición del disolvente. De manera alternativa, la isoindolona de la fórmula VI se hace reaccionar con un 1-alquil-(C_{1}-C_{4})-oxi-1-trimetilsiloxietileno, en presencia de un ácido de Lewis, por ejemplo cloruro de titanio (IV) o triflato de trimetilsililo, en un disolvente inerte tal como un éter, hidrocarburo o hidrocarburo halogenado, por ejemplo diclorometano, a una temperatura entre -80ºC y el punto de ebullición del disolvente, preferentemente a una temperatura entre -80ºC y 20ºC (Synth. Commun. 1987, 17, 1).

El éster de la fórmula VII se puede hacer reaccionar por medio de procedimientos generalmente conocidos con guanidina para dar la acilguanidina de la fórmula I. Preferentemente, la reacción se lleva a cabo de forma conocida para los expertos en la técnica en un disolvente orgánico prótico o aprótico, polar pero inerte. Por ejemplo, en la reacción del éster metílico (fórmula VII; R5 = OCH_{3}) con guanidina, se han acreditado disolventes tales como metanol, isopropanol o THF, a temperaturas desde 20ºC hasta el punto de ebullición de estos disolventes. En la mayoría de las reacciones de compuestos de la fórmula VII con guanidina exenta de sales, la operación se lleva a cabo, por ejemplo, en disolventes inertes y apróticos, por ejemplo éteres tales como THF, dimetoxietano o dioxano. Sin embargo, también se puede utilizar agua cuando se emplea una base, por ejemplo NaOH, como disolvente en la reacción de compuestos de la fórmula VII con guanidina. En la reacción de compuestos de la fórmula VII con sales de la guanidina, por ejemplo hidrocloruro de guanidina, la reacción se efectúa, típicamente, en presencia de una base, por ejemplo, terc-butóxido de potasio, metilato sódico o etilato sódico, en un disolvente inerte tal como dimetilformamida, NMP, 2-propanol, a una temperatura entre 20ºC y el punto de ebullición del disolvente.

Además de los ésteres de ácidos carboxílicos de la fórmula VII, también es posible usar derivados ácidos activados adicionales en la reacción con guanidina, por ejemplo cloruros, tioésteres o anhídridos de ácido carboxílico, También se puede llevar a cabo una activación del ácido carboxílico, por ejemplo con DCC. Los derivados de ácidos activados se pueden preparar de forma conocida para los expertos en la técnica, directamente a partir de los ésteres de ácidos carboxílicos en que se basan de la fórmula VII, o a partir de los correspondientes ácidos carboxílicos que se pueden obtener de los ésteres por medio de métodos de hidrólisis habituales. En J. March, Advanced Organic Chemistry, tercera edición (John Wiley & Sons, 1985, pág. 350) se indica una serie de métodos adecuados para preparar derivados de ácidos carboxílicos activados, citando la fuente bibliográfica.

Las etapas del procedimiento descritas en los esquemas 1 y 2 se pueden efectuar, de manera independiente una de otra, de forma continua o discontinua. Se puede efectuar un tratamiento de la mezcla de reacción en cualesquiera de las etapas del procedimiento. El tratamiento y, si se desea, la purificación de los productos se realiza por métodos habituales tales como extracción, separación de pH, cromatografía o cristalización, y los secados habituales.

Los compuestos de partida de las fórmulas II y III están disponibles en el comercio o se pueden preparar de acuerdo con, o de manera similar a los procedimientos descritos en la bibliografía y que resultan familiares para los expertos en la técnica.

Asimismo, se reivindica un procedimiento para preparar compuestos de la fórmula I

5

en la que significan

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R1 y R2, cada uno independientemente, hidrógeno, F, Cl, trifluorometoxi, 2,2,2- trifluoroetoxi, trifluorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo o alquilo con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

R3

Alk-R4 o trifluorometilo;

Alk

alquilo con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

R4

hidrógeno, trifluorometilo o cicloalquilo con 3, 4, 5, 6 ó 7 átomos de C;

así como sus sales;

caracterizado porque, como se muestra en el esquema 3,

Esquema 3

6

a) se hace reaccionar la amina de la fórmula IX, a través de una sal de diazonio, con un éster alquílico del ácido acrílico para dar el derivado de ácido cinámico de la fórmula XI,

b) se hace reaccionar el compuesto de la fórmula XI con la amina de la fórmula III y con guanidina, para dar la acilguanidina de la fórmula I,

en donde, en los compuestos de las fórmulas III, IX y XI,

R1 a R3 son, cada uno, como se han definido en la fórmula I, y

R6 es alcoxi con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

así como sus sales.

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La presente invención se refiere también a un procedimiento para preparar los compuestos de la fórmula I

7

en la que significan

\vocalinvisible

\textoinvisible

R1 y R2, cada uno independientemente, hidrógeno, F, Cl, trifluorometoxi, 2,2,2- trifluoroetoxi, trifluorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo o alquilo con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

R3

Alk-R4 o trifluorometilo;

Alk

alquilo con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

R4

hidrógeno, trifluorometilo o cicloalquilo con 3, 4, 5, 6 ó 7 átomos de C;

así como sus sales;

caracterizado porque, como se muestra en el esquema 4,

Esquema 4

8

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a) el compuesto nitrogenado de la fórmula VIII se hace reaccionar para dar la amina de la fórmula IX,

b) la amina de la fórmula IX se hace reaccionar para dar la sal de diazonio de la fórmula X,

c) la sal de diazonio de la fórmula X se hace reaccionar con un éster alquílico del ácido acrílico para dar el derivado de ácido cinámico de la fórmula XI,

d) el compuesto de la fórmula XI se hace reaccionar para dar la amida de la fórmula XII, y

e) el compuesto de la fórmula XII se hace reaccionar para dar la acilguanidina de la fórmula I, ya sea haciendo reaccionar el compuesto de la fórmula XII en presencia de una base para dar el derivado de isoindolona de la fórmula XIII y, subsiguientemente, por reacción con guanidina, con activación, para dar la acilguanidina de la fórmula I (alternativa A), o, tras la formación del derivado de isoindolona de la fórmula XIII, en presencia de una base, a partir del compuesto de la fórmula XII, convirtiendo el compuesto de la fórmula XIII en el éster de la fórmula XIV y, subsiguientemente, haciendo reaccionar con guanidina para dar la acilguanidina de la fórmula I
(alternativa B), o

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haciendo reaccionar el compuesto de la fórmula XII, en presencia de una base fuerte, para dar el éster de la fórmula XIV y, subsiguientemente, mediante reacción con guanidina para dar la acilguanidina de la fórmula I (alternativa C), o

haciendo reaccionar directamente el compuesto de la fórmula XII con guanidina, en presencia de una base, con una guanilación y ciclación simultáneas, para dar la isoindolona de la fórmula I (alternativa D),

en donde, en los compuestos de las fórmulas VIII, IX, X, XI, XII, XIII y XIV,

R1 a R3 son, cada uno, como se han definido en la fórmula I, y

R6 y R7 son, cada uno independientemente, alcoxi con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

así como sus sales.

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Los compuestos nitrogenados de la fórmula VIII se pueden reducir por métodos conocidos (descritos, por ejemplo, en "Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie", Volumen XI/1, Compuestos nitrogenados II, Editorial Georg Thieme, Stuttgart, 1957, pág. 360 y sigs.), para dar la anilina de la fórmula IX. Se prefiere la hidrogenación catalítica, por ejemplo con Pd/C, por ejemplo con Pd/C al 5% o Pd/C al 10%, en un disolvente tal como, por ejemplo, un alcohol, preferentemente etanol, bajo una atmósfera de hidrógeno desde 1 bar hasta 200 bar de presión, preferentemente una presión desde 1 bar hasta 10 bar.

La subsiguiente diazotación de la anilina de la fórmula IX se efectúa en un disolvente inerte, preferentemente etanol, en presencia de un ácido cuyo anión no sustituye el propio ion diazonio, por ejemplo HBF_{4} o HPF_{6}, preferentemente HBF_{4} o, por ejemplo, H_{2}SO_{4}, y en presencia de un nitrito, preferentemente NaNO_{2}, a una temperatura entre -30ºC y el punto de ebullición del disolvente, preferentemente entre 0ºC y 30ºC.

La sal diazonio de la fórmula X se hace reaccionar, preferentemente, de manera directa con un éster alquílico-(C_{1}-C_{4}) de ácido acrílico, preferentemente éster etílico del ácido acrílico, en presencia de un catalizador de paladio, preferentemente Pd(OAc)_{2}, a una temperatura entre 0ºC y el punto de ebullición del disolvente, preferentemente entre 45ºC y 55ºC, para dar el derivado de ácido cinámico de la fórmula XI.

La función ácido benzoico del compuesto de la fórmula XI se puede convertir en la amida de la fórmula XII por métodos conocidos por los expertos en la técnica, preferentemente a través del cloruro ácido o con ayuda de DCC. Esta reacción también se puede llevar a cabo de manera tal que la amida de la fórmula XII se cicle en la mezcla de reacción directamente al éster de la fórmula XIV, es decir la reacción del compuesto de la fórmula XI para dar el éster de la fórmula XIV se lleva a cabo en una sola etapa. Esto se puede realizar bajo condiciones de reacción básicas de la formación de amida, o la ciclación se puede producir mediante la adición de una base, por ejemplo trietilamina, base de Hünig o terc-butilato de potasio. Una alternativa adicional consiste en convertir el compuesto de la fórmula XI directamente en el compuesto de la fórmula I, llevando a cabo sucesivamente la formación de amida, ciclación y guanidación en el mismo recipiente de reacción, en cuyo caso la reacción se puede efectuar sin aislar etapas intermedias.

Para la reacción adicional del compuesto de la fórmula XII en la acilguanidina de la fórmula I existen 4 alternativas:

Alternativa A: La reacción de la amida de la fórmula XII se realiza, preferentemente, usando una solución alcalina acuosa, preferentemente una solución de NaOH acuosa, en un disolvente tal como un alcohol, preferentemente metanol o etanol, a una temperatura entre -30ºC y el punto de ebullición de disolvente, preferentemente a TA. Tienen lugar tanto la saponificación de la función éster como la ciclación en el derivado de isoindolona de la fórmula XIII. El compuesto de la fórmula XIII se activa por acilación por procedimientos generalmente conocidos (y como se describe en el esquema 1), por ejemplo empleando el cloruro ácido o con DCC, y se obtiene la acilguanidina de la fórmula I.

Alternativa B: Como en la alternativa A, se produce la síntesis del ácido carboxílico de la fórmula XIII. Subsiguientemente, se usan procedimientos estándares para la preparación del éster, preferentemente empleando SOCl_{2} en un alcohol tal como metanol o etanol, para preparar, por ejemplo, el éster metílico o etílico de la fórmula XIV. El éster de la fórmula XIV se convierte, subsiguientemente, en la acilguanidina de la fórmula I, como se ha descrito para el esquema 1.

Alternativa C: La reacción de la amida de la fórmula XII se lleva a cabo en una solución de una base fuerte, preferentemente metilato o t-butilato, en un alcohol tal como metanol o etanol, y se obtiene el éster metílico o etílico de la fórmula XIV. La reacción del éster de la fórmula XIV para dar la acilguanidina de la fórmula I se efectúa de la forma descrita en el esquema 1.

Alternativa D: La amida de la fórmula XII se hace reaccionar bajo condiciones habituales para la acilación de la guanidina. Como disolventes se utiliza un disolvente inerte tal como un éter, hidrocarburo o hidrocarburo halogenado, preferentemente DMF. De manera habitual, se hace reaccionar inicialmente una sal de guanidinio con una base fuerte, preferentemente KOtBu, lo que libera la guanidina libre. La mezcla se agrega a la solución del compuesto de la fórmula XII en un disolvente tal como un alcohol, éter, hidrocarburo o hidrocarburo halogenado, por ejemplo DMF, NMP ó 2-propanol. En este caso, se producen simultáneamente la guanilación y la ciclación en la isoindolona de la fórmula I. Una variante consiste en ciclar el compuesto de la fórmula XI en el compuesto de la fórmula XIV y, a continuación, hacer reaccionar in situ el compuesto de la fórmula I de manera sucesiva en el tiempo, utilizando una cantidad catalítica de una base fuerte, por ejemplo terc-butilato de potasio o metilato sódico o etilato sódico, en un disolvente, por ejemplo DMF, NMP ó 2- propanol.

Se otorga preferencia a la alternativa D, en la que la reacción del derivado de ácido benzoico de la fórmula XI se lleva a cabo en un procedimiento de un único recipiente, para dar la acilguanidina de la fórmula I.

Las etapas de procedimiento descritas en el esquema 2 se pueden llevar a efecto de forma continua o discontinua. Se puede realizar un procesamiento de la mezcla de reacción después de cada una de las etapas del procedimiento. El tratamiento y, si se desea, la purificación de los productos se realiza por medio de métodos habituales tales como extracción, separación de pH, cromatografía o cristalización, y los secados habituales.

Los compuestos de partida de las fórmulas III y VIII están disponibles en el comercio o se pueden preparar de acuerdo con, o de manera similar a los procedimientos descritos en la bibliografía y que son conocidos por los expertos en la técnica.

Objeto de la invención son también compuestos de la fórmula XII

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en la que significan

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R1 y R2, cada uno independientemente, hidrógeno, F, Cl, trifluorometoxi, 2,2,2- trifluoroetoxi, trifluorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo o alquilo con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

R3

Alk-R4 o trifluorometilo;

Alk

alquilo con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

R4

hidrógeno, trifluorometilo o cicloalquilo con 3, 4, 5, 6 ó 7 átomos de C;

R6

alcoxi con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

así como sus sales.

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Asimismo, se reivindica el uso de los compuestos de la fórmula XII como intermedios en la síntesis.

Los compuestos de la fórmula I en forma enantioméricamente enriquecida o enantioméricamente pura se pueden preparar, de manera ventajosa, por un nuevo procedimiento de separación en racematos que también forma parte del objeto de la presente invención. A tal efecto, los racematos de los compuestos de la fórmula I se cristalizan como sales de ácidos D- o L-tartárico 2,3-O-acilados, en el curso de lo cual los enantiómeros se enriquecen en el cristal o en las aguas madre. Subsiguientemente, se liberan nuevamente las bases libres de las sales.

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Por lo tanto, la presente invención se refiere a un procedimiento para aislar compuestos de las fórmulas Ia y Ib

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en los que significan

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\textoinvisible

R1 y R2, cada uno independientemente, hidrógeno, F, Cl, trifluorometoxi, 2,2,2- trifluoroetoxi, trifluorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo o alquilo con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

R3

Alk-R4 o trifluorometilo;

Alk

alquilo con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

R4

hidrógeno, trifluorometilo o cicloalquilo con 3, 4, 5, 6 ó 7 átomos de C;

así como sus sales,

caracterizado porque, como se muestra en el esquema 5,

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Esquema 5

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a) se hace reaccionar el compuesto de la fórmula I para formar sales de un ácido D- o L-tartárico 2,3-O-acilado, y se obtienen las dos sales de las fórmulas XVa y XVb separadamente por cristalización, y

b) se liberan las bases libres de las fórmulas Ia y Ib de las dos sales de las fórmulas XVa y XVb, respectivamente,

en donde, en los compuestos de las fórmulas I, XVa y XVb,

R1 a R3 son, cada uno, como se han definido en las fórmulas Ia y Ib,

R* significa

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R8

significa alquilo con 1, 2, 3, 4, 5 ó 6 átomos de C o fenilo, que está no sustituido o está sustituido con 1, 2 ó 3 sustituyentes del grupo de F, Cl, Br, I, alquilo con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C, o alcoxi con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C.

También se reivindica el procedimiento anteriormente descrito, en el que el enantiómero no deseado de la fórmula Ia o Ib se vuelve a racemizar.

El racemato del compuesto de la fórmula I se cristaliza con un derivado de ácido tartárico R*, por ejemplo ácido O,O'-dibenzoil-D-tartárico, ácido O,O'-dibenzoil-L-tartárico, ácido O,O'-di(4-metilbenzoil)-L-tartárico, ácido O,O'-di(4-metilbenzoil)-D-tartárico, ácido O,O'-di(4-metoxibenzoil)-L-tartárico o ácido O,O'-di(metoxibenzoil)-D-tartárico, preferentemente con ácido O,O'-dibenzoil-L-tartárico o ácido O,O'-dibenzoil-D-tartárico, en un disolvente adecuado, por ejemplo en un éter, por ejemplo éter dietílico, éter diisopropílico, dimetoxietano, tetrahidrofurano o dioxano, en un hidrocarburo halogenado, por ejemplo diclorometano, triclorometano, tetraclorometano, 1,2-diclorometano o tricloroetileno, en un alcohol, por ejemplo metanol, etanol, n-propanol, 2-propanol, butanol, en un éster, por ejemplo acetato etílico o acetato butílico, en agua, o en mezclas de disolventes, preferentemente en 2-propanol, dimetoxietano o acetato etílico, a una temperatura entre -10ºC y el punto de ebullición del disolvente, preferentemente a 0ºC hasta 40ºC. Una variante del procedimiento consiste en utilizar para la separación mezclas de dos o más ácidos D- o L-tartáricos 2,3-O-acilados de la misma configuración, portadores de diferentes grupos acilo.

La formación de sal a partir del compuesto de la fórmula I y del derivado del ácido tartárico R* se puede llevar a cabo usando cantidades equivalentes, es decir se pueden usar 0,5 moles del derivado de ácido tartárico R* que contiene dos grupos ácido carboxílico por mol del compuesto de la fórmula I. Sin embargo, el compuesto de la fórmula I también puede cristalizar con menos de 0,5 moles de equivalentes del ácido D- o L-tartárico 2,3-O-acilado, por ejemplo con desde 0,25 moles a 0,5 moles del derivado de ácido tartárico R* por mol del compuesto de la fórmula I, en particular con desde 0,25 moles a 0,3 moles del derivado de ácido tartárico R* por mol de compuesto de la fórmula I. A continuación, cristaliza el enantiómero deseado, en forma de la sal de la fórmula XVa o XVb, y el enantiómero no deseado se encuentra presente, en su mayor parte, en las aguas madre en forma de los enantiómeros de la fórmula Ib o Ia y no en la forma de la sal de la fórmula XVa o XVb. La pureza enantiómera de las sales de las fórmulas XVa y XVb se puede aumentar por cristalización repetida o agitando los primeros cristales con disolvente fresco a temperaturas elevadas y subsiguiente enfriamiento.

Tras la separación de las dos sales de las fórmulas XVa y XVb, y la separación de la sal de la fórmula XVa o XVb del enantiómero indeseado Ib o Ia, se liberan seguidamente, y de forma típica, los compuestos enantioméricamente enriquecidos de las sales por medio de la adición de una base auxiliar, por ejemplo una amina, por ejemplo trietilamina, una base inorgánica tal como NaHCO_{3}, Na_{2}CO_{3} o soluciones acuosas de las mismas. Es habitual trabajar en un disolvente adecuado, por ejemplo en un éter, por ejemplo éter dietílico, éter diisopropílico, dimetoxietano, tetrahidrofurano o dioxano, en un hidrocarburo halogenado, por ejemplo diclorometano, triclorometano, tetraclorometano, 1,2-dicloroetano o tricloroetano, en un alcohol, por ejemplo metanol, etanol, n-propanol, 2-propanol o butanol, en un éster, por ejemplo acetato de etilo o acetato de butilo, o en agua o en mezclas de disolventes, preferentemente en acetato de etilo, 2-propanol, diclorometano o agua, o mezclas de los mismos, en cuyo caso la mezcla de reacción puede tener una o múltiples fases, a una temperatura entre -10ºC y el punto de ebullición del disolvente, preferentemente entre 10ºC y 40ºC. Esto se puede hacer, por ejemplo, de manera tal que la sal esté disuelta en una solución acuosa de NaHCO_{3} y el enantiómero de la fórmula Ia o Ib se extraiga entonces usando un disolvente orgánico, por ejemplo acetato de etilo.

El enantiómero Ia o Ib en cada caso indeseado se puede convertir de nuevo en el racemato de la fórmula I por un procedimiento de racemización, quedando, por lo tanto, disponible para otra etapa de separación en racematos. En este caso, el enantiómero indeseado se trata, preferentemente, en un disolvente tal como un alcohol, por ejemplo 2-propanol, a una temperatura entre -10ºC y el punto de ebullición del disolvente, preferentemente, a 0ºC hasta 40ºC, con pequeñas cantidades de una base, por ejemplo KOH, la mezcla de reacción se neutraliza y se aísla el racemato tras un tratamiento extractivo acuoso. Este procedimiento se puede llevar a cabo por medio de la selección adecuada de la cantidad de base y de la temperatura de reacción, de manera que se produzca prácticamente la racemización exclusiva y no haya cambios químicos en la sustancia.

Objeto de la presente invención son, además, compuestos de las fórmulas XVa y XVb

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en las que significan

\quad

R1 y R2, cada uno independientemente, hidrógeno, F, Cl, trifluorometoxi, 2,2,2- trifluoroetoxi, trifluorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo o alquilo con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

R3

Alk-R4 o trifluorometilo;

Alk

alquilo con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

R4

hidrógeno, trifluorometilo o cicloalquilo con 3, 4, 5, 6 ó 7 átomos de C;

R* significa

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R8

alquilo con 1, 2, 3, 4, 5 ó 6 átomos de C o fenilo, que está no sustituido o sustituido con 1, 2 ó 3 sustituyentes del grupo de F, Cl, Br, I, alquilo con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C, o alcoxi con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C.

\vskip1.000000\baselineskip

Si los compuestos anteriormente descritos, por ejemplo los compuestos de las fórmulas I, Ia, Ib, VII, XII, XIV, XVa o XVb, contienen uno o más centros de asimetría, pueden tener, independientemente, configuración S o R, a menos que se indique lo contrario. Los compuestos pueden estar presentes en forma de isómeros ópticos, diastereoisómeros, racematos o mezclas de los mismos, a menos que estén definidos de manera más precisa. En los dobles enlaces, puede estar presente la configuración E o Z, a menos que se indique lo contrario. La presente invención incluye todas las formas tautómeras de los compuestos anteriormente descritos, por ejemplo de los compuestos de las fórmulas I, Ia, Ib, XVa y XVb.

Los radicales alquilo pueden ser de cadena lineal o ramificada. Esto es válido también cuando portan sustituyentes o se presentan como sustituyentes de otros radicales, por ejemplo en radicales fluoroalquilo o radicales alcoxi. Ejemplos de radicales alquilo son metilo, etilo, n-propilo, isopropilo (= 1-metiletilo), n-butilo, isobutilo (= 2-metilpropilo), sec-butilo (= 1-metilpropilo), terc-butilo (= 1,1-dimetiletilo), n-pentilo, isopentilo, terc-pentilo, neopentilo y hexilo. Radicales alquilo preferidos son metilo, etilo, n-propilo e isopropilo, más preferentemente metilo o etilo. En los radicales alquilo, uno o varios, por ejemplo 1, 2, 3, 4 ó 5 átomos de hidrógeno, pueden estar sustituidos con átomos de flúor. Ejemplos de estos radicales fluoroalquilo son trifluorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo y pentafluoroetilo, preferentemente trifluorometilo o 2,2,2-trifluoroetilo. Los radicales alquilo sustituidos pueden estar sustituidos en cualquier
posición.

Ejemplos de radicales cicloalquilo son ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo o cicloheptilo.

Los radicales fenilo pueden estar no sustituidos o mono- o poli-sustituidos, por ejemplo mono-, di- o tri-sustituidos con radicales idénticos o diferentes. Cuando un radical fenilo está sustituido, porta preferentemente uno o dos sustituyentes idénticos o diferentes. En los radicales fenilo monosustituidos, el sustituyente puede estar dispuesto en posición 2, en posición 3 o en posición 4. Fenilo disustituido puede estar sustituido en posición 2,3, posición 2,4, posición 2,5, posición 2,6, posición 3,4 o posición 3,5. En radicales fenilo trisustituidos, los sustituyentes pueden estar dispuestos en posición 2,3,4, posición 2,3,5, posición 2,4,5, posición 2,4,6, posición 2,3,6 o en posición 3,4,5.

Los compuestos anteriormente descritos, por ejemplo los compuestos de las fórmulas I, Ia y Ib, se pueden usar en los procedimientos según la invención en forma de sus sales y/o se pueden aislar en forma de sus sales. Las sales se pueden obtener por métodos habituales, por ejemplo mediante reacción con ácidos o bases en un disolvente, o por intercambio de aniones o intercambio de cationes procedentes de otras sales. Sales por adición de ácidos útiles, por ejemplo de los compuestos de las fórmulas I, Ia y Ib son, por ejemplo, halogenuros, en especial hidrocloruros, hidrobromuros, lactatos, sulfatos, citratos, tartratos, acetatos, fosfatos, metilsulfonatos, bencenosulfonatos, p-toluenosulfonatos, adipatos, fumaratos, gluconatos, glutamatos, glicerolfosfatos, maleatos, benzoatos, oxalatos y pamoatos, y trifluoroacetatos. En el caso de preparación de ingredientes activos, se da preferencia a sales fisiológicamente aceptables y sales farmacéuticamente aceptables. Ejemplos incluyen sales de compuestos de las fórmulas I, Ia y Ib con ácido fumárico, en particular sales que contienen un mol de ácido fumárico por mol del compuesto de la fórmula I, Ia o Ib y son, por lo tanto, hidrógeno-fumaratos o hemi-fumaratos. Propiedades ventajosas tales como cristalinidad, estabilidad, una higroscopicidad particularmente baja, una escasa tendencia a la racemización y buena solubilidad, son características especialmente, por ejemplo, del hidrógeno-fumarato de (S)-N-{2-[3-oxo-2-(2,2,2-trifluoroetil)-6-trifluorometil-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-il]-acetil}-guanidina hidrato de la fórmula XVI que, igualmente, forma parte del objeto de la presente invención en todas sus formas tautómeras.

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Cuando los compuestos contienen un grupo ácido, pueden formar sales con bases, por ejemplo sales de metales alcalinos, preferentemente sales de sodio o sales de potasio, o sales de amonio, por ejemplo sales con amoniaco o aminas orgánicas o aminoácidos. Los compuestos que contienen un grupos básico y un grupo ácido pueden estar presentes también en forma de un ion bipolar.

Una forma de realización de la presente invención se refiere a compuestos en los que R1 y R2 no son ambos hidrógeno, en particular a compuestos en los que R1 es hidrógeno y R2 es flúor, cloro o trifluorometilo, especialmente trifluorometilo. En compuestos en los que R1 es hidrógeno, el sustituyente R2 está dispuesto, preferentemente, en posición para del anillo de benceno, en relación con el grupo C=O en el sistema de isoindolona.

El grupo Alk representa, preferentemente, alquilo con 1, 2 ó 3 átomos de C, en particular con 1 ó 2 átomos de C y, en especial, con 1 átomo de C. R4 representa, preferentemente, trifluorometilo o cicloalquilo con 3, 5 ó 6 átomos de C, en particular 3 átomos de C, más preferentemente trifluorometilo. Una forma de realización de la presente invención se refiere a compuestos en los que R3 significa trifluorometilo ó 2,2,2-trifluoroetilo, en particular 2,2,2-trifluoroetilo.

Una forma de realización especial de la presente invención se refiere a la preparación de N-{2-[3-oxo-2-(2,2,2-trifluoroetil)-6-trifluorometil-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-il]acetil}-guanidina y sus formas enantiómeras y sales.

X representa, preferentemente, cloro o metoxi, en particular cloro. R5 representa, preferentemente, metoxi o etoxi, en particular etoxi. R6 representa, preferentemente, metoxi o etoxi, en particular etoxi. R7 representa, preferentemente, metoxi o etoxi, en particular etoxi.

En una forma de realización de la presente invención, R8 significa fenilo que está no sustituido o sustituido con 1, 2 ó 3 sustituyentes del grupo de F, Cl, alquilo con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C o alcoxi con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C, en particular fenilo no sustituido.

Los compuestos de las fórmulas I, Ia, Ib, XVa y XVb y sus sales farmacéuticamente aceptables son acilguanidinas sustituidas e inhiben el antiportador celular de sodio-protón (intercambiador Na*/H*, NHE - siglas en inglés), en particular el subtipo NHE-1.

Debido a las propiedades inhibidoras del NHE, los compuestos de las fórmulas I, Ia, Ib, XVa, XVb y XVI y/o sus sales farmacéuticamente aceptables son adecuados para la prevención y el tratamiento de enfermedades habitualmente causadas por la activación o por un NHE activado, así como de enfermedades que son provocadas por las lesiones relacionadas con el NHE como causa secundaria. Los compuestos de las fórmulas I, Ia, Ib, XVa y XVb se pueden utilizar también para el tratamiento y la prevención de enfermedades en las que el NHE sólo está parcialmente inhibido, usando, por ejemplo, una dosis menor.

Dado que los inhibidores de NHE actúan predominantemente a través de su influencia sobre la regulación del pH celular, por lo general se les puede combinar, de forma ventajosa, con otros compuestos que regulan el valor de pH intracelular, siendo útiles para dicha combinación los inhibidores del grupo de enzimas de las anhidrasas carbónicas, inhibidores de los sistemas que trasportan iones bicarbonato tales como el co-trasportador de bicarbonato sódico (NBC), o del intercambiador de cloruro-bicarbonato dependiente del sodio (NCBE), así como también los inhibidores de NHE con acción inhibitoria sobre otros subtipos de NHE, porque pueden reforzar o modular los efectos reguladores de pH, farmacológicamente relevantes, de los inhibidores de NHE descritos en este documento.

El uso de los compuestos de las fórmulas I, Ia, Ib, XVa, XVb o XVI se relaciona con la prevención y con el tratamiento de enfermedades agudas o crónicas en medicina veterinaria y humana. Así, los inhibidores del NHE de acuerdo con la invención son adecuados para tratar trastornos inducidos por isquemia y reperfusión.

Como consecuencia de sus propiedades farmacológicas, los compuestos que se describen en este documento son apropiados como fármacos antiarrítmicos. Su componente cardioprotector hace que estos inhibidores de NHE sean extraordinariamente adecuados para la profilaxis y el tratamiento del infarto, y también para el tratamiento de la angina de pecho, en cuyo caso también inhiben de forma preventiva o reducen en gran medida los procesos fisiopatológicos cuando surgen lesiones inducidas por la isquemia, en particular cuando se desencadenan arritmias cardiacas inducidas por isquemia. Debido a sus acciones protectoras contra las situaciones patológicas de hipoxia e isquemia, los compuestos de las fórmulas I, Ia, Ib, XVA, XVb y XVI utilizados de acuerdo con la invención, y/o sus sales farmacéuticamente aceptables, como consecuencia de la inhibición del mecanismo de intercambio Na^{+}/H^{+}, se pueden utilizar como fármacos para el tratamiento de todas las lesiones agudas o crónicas inducidas por isquemia, así como de los trastornos primaria o secundariamente inducidos por los mismos.

Esto también se refiere a su uso como fármacos para intervenciones quirúrgicas. De esta forma, los compuestos se pueden utilizar en el trasplante de órganos, en donde los compuestos se pueden usar para la protección de los órganos en el donante antes y durante su extracción, para proteger los órganos extraídos, por ejemplo en el curso de los tratamientos con o su almacenamiento en líquidos de baño fisiológico, y también en el curso de la transferencia al organismo receptor.

Los compuestos de acuerdo con la invención son, igualmente, valiosos fármacos con acción protectora en la realización de intervenciones quirúrgicas de angioplastia, por ejemplo sobre el corazón y también sobre los órganos y vasos periféricos.

Los compuestos de acuerdo con la invención se pueden utilizar también cuando se efectúan operaciones de bypass, por ejemplo en intervenciones de bypass de las arterias coronarias y en el Injerto por Bypass de Arterias Coronarias (CABG, en sus siglas en inglés).

Dependiendo de su acción contra las lesiones inducidas por la isquemia, los compuestos de la fórmula I según la invención se pueden usar también para la resucitación tras un paro cardiaco.

Los compuestos de acuerdo con la invención son de interés para los fármacos contra arritmias que amenazan la vida. Se finaliza la fibrilación ventricular y se restaura el ritmo sinusal fisiológico del corazón.

Puesto que los inhibidores de NHE1 de tejidos y órganos humanos, especialmente del corazón, protegen eficazmente no sólo contra las lesiones causadas por isquemia y reperfusión, sino también contra la acción citotóxica de medicamentos tales como los que se utilizan, en particular, en la terapia del cáncer y de las enfermedades autoinmunes, la administración combinada con inhibidores de NHE es adecuada para inhibir los efectos secundarios citotóxicos, especialmente cardiotóxicos, de los compuestos mencionados. La reducción de los efectos citotóxicos, en especial la cardiotoxicidad, resultante de la co-medicación con inhibidores de NHE1 también permite aumentar la dosis de los agentes terapéuticos citotóxicos y/o prolongar el tratamiento con estos fármacos. El beneficio terapéutico de dichas terapias citotóxicas se puede incrementar de manera considerable con la combinación con inhibidores de NHE.

Adicionalmente, los inhibidores de NHE1 se pueden usar en el caso de una sobreproducción perjudicial para el corazón de hormonas tiroideas, tirotoxicosis o cuando las hormonas tiroideas se administran de forma externa. Los compuestos de las fórmulas I, Ia, Ib, XVa, XVb y XVI y/o sus sales farmacéuticamente aceptables son adecuados, por lo tanto, para mejorar la terapia con medicamentos cardiotóxicos.

De acuerdo con su efecto cardioprotector contra las lesiones inducidas por isquemia, los compuestos según la invención son también apropiados como medicamentos para el tratamiento de isquemias del sistema nervioso, en especial del sistema nervioso central, siendo adecuados, por ejemplo, para el tratamiento del ictus o del edema cerebral.

Los inhibidores de NHE también son adecuados para el tratamiento y la profilaxis de enfermedades y trastornos inducidos por la hiperexcitabilidad del sistema nervioso central, en particular para el tratamiento de trastornos epilépticos, espasmos clónicos y tónicos de inducción central, estados de depresión psicológica, trastornos de ansiedad y psicosis. En estos casos, es posible utilizar los inhibidores de NHE descritos en este documento solos o en combinación con otras sustancias que poseen actividad antiepiléptica o ingredientes activos antipsicóticos, o inhibidores de la anhidrasa carbónica, por ejemplo con acetazolamida, y con otros inhibidores de NHE o del intercambiador de cloruro-bicarbonato dependiente del sodio (NCBE).

Adicionalmente, los inhibidores de NHE también son adecuados para el tratamiento de tipos de choque, por ejemplo del choque alérgico, cardiogénico, hipovolémico y bacteriano.

Del mismo modo, los compuestos de las fórmulas I, Ia, Ib, XVA, XVb y XVI y/o sus sales farmacéuticamente aceptables se pueden usar para la prevención y el tratamiento de enfermedades trombóticas, dado que, como inhibidores de NHE, son capaces por sí mismos de inhibir la agregación plaquetaria. Además, son capaces de inhibir o prevenir la liberación excesiva, que se produce tras la isquemia y reperfusión, de mediadores de la inflamación y coagulación, en particular del factor de von Willebrand y de proteínas de selectina trombogénica. De este modo, resulta posible reducir y eliminar la acción patógena de importantes factores trombogénicos. Los inhibidores de NHE de la presente invención se pueden combinar, en consecuencia, con otros ingredientes activos anticoagulantes y/o trombolíticos, por ejemplo el activador del plasminógeno tisular recombinante o natural, estreptoquinasa, uroquinasa, ácido acetilsalicílico, antagonistas de trombina, antagonistas del factor Xa, sustancias medicinales con actividad fibrinolítica, antagonistas del receptor de tromboxano, inhibidores de la fosfodiesterasa, antagonistas del factor VIIa, clopidogrel, ticlopidina, etc. Resulta especialmente favorable utilizar los presentes inhibidores de NHE en combinación con inhibidores de NCBE y/o con inhibidores de la anhidrasa carbónica, por ejemplo con acetazolamida.

Adicionalmente, los inhibidores de NHE se distinguen por un potente efecto inhibitorio sobre la proliferación de células, por ejemplo la proliferación celular de fibroblastos y la proliferación de células músculo-vasculares lisas. Los compuestos de las fórmulas I, Ia, Ib, XVa, XVb y XVI y/o sus sales farmacéuticamente aceptables son de utilidad, por lo tanto, como valiosos agentes terapéuticos en enfermedades en las que la proliferación representa una causa primaria o secundaria y, por consiguiente, se les puede usar como agentes anti-ateroscleróticos, agentes para la insuficiencia renal crónica y cánceres.

Se ha podido demostrar que los inhibidores de NHE inhiben la migración celular. Los compuestos de las fórmulas I, Ia, Ib, XVa, XVb y XVI y/o sus sales farmacéuticamente aceptables son adecuados, por tanto, como valiosos agentes terapéuticos para enfermedades en las que la migración celular representa una causa primaria o secundaria, por ejemplo cánceres con una pronunciada tendencia a las metástasis.

Adicionalmente, los inhibidores de NHE exhiben un retraso o prevención de los trastornos fibróticos. Por lo tanto, son excelentes agentes adecuados para el tratamiento de la fibrosis cardiaca, pulmonar, hepática, renal y otros trastornos fibróticos. Se les puede usar, por tanto, para el tratamiento de hipertrofias e hiperplasias de órganos, por ejemplo del corazón y de la próstata. Por consiguiente, son apropiados para la prevención y el tratamiento de la insuficiencia cardiaca (insuficiencia cardiaca congestiva = ICC) y para el tratamiento y la prevención de la hiperplasia o hipertrofia prostática.

Dado que se produce un incremento significativo del NHE en hipertensos esenciales, los compuestos de las fórmulas I, Ia, Ib, XVa, XVb y XVI y/o sus sales farmacéuticamente aceptables son adecuados para la prevención y el tratamiento de la hipertensión arterial y para el tratamiento de trastornos cardiovasculares. En estos casos, se les puede usar solos o con un elemento de combinación y formulación adecuado para el tratamiento de la hipertensión arterial y de trastornos cardiovasculares. Por ejemplo, se pueden combinar con uno o múltiples diuréticos con acción similar a la tiazida, diuréticos de asa, antagonistas de la aldosterona y pseudo-aldosterona, tales como hidroclorotiazida, indapamida, politiazida, furosemida, piretanida, torasemida, bumetanida, amilorida, triamtereno, espironolactona o eplerona. Los inhibidores de NHE de la presente invención se pueden usar, asimismo, en combinación con antagonistas del calcio tales como verapamil, diltiazem, amlodipina o nifedipino, y con inhibidores de la ECA, por ejemplo ramipril, enalapril, lisinopril, fosinopril o captopril. Elementos de combinación favorable adicionales son también los bloqueadores \beta tales como metoprolol, albuterol, etc., antagonistas del receptor de angiotensina y sus subtipos de receptores tales como losartan, irbesartan, valsartan, omapatrilato, gemopatrilato, antagonistas de la endotelina, inhibidores de la renina, agonistas del receptor de adenosina, inhibidores y activadores de los canales de potasio tales como glibenclamida, glimepirida, diazóxido, cromakalim, minoxidil y sus derivados, activadores del canal de potasio sensible al ATP mitocondrial (canal mitoK(ATP)), inhibidores de Kv1.5, etc.

Se ha demostrado que los inhibidores de NHE1 poseen un importante efecto antiinflamatorio y que se les puede utilizar, por lo tanto, como fármacos antiinflamatorios. La inhibición de la liberación de mediadores de la inflamación es digna de destacar en este contexto. Por consiguiente, los compuestos se pueden usar solos o en combinación con un antiinflamatorio en la prevención o el tratamiento de trastornos inflamatorios crónicos y agudos. Los elementos de combinación utilizados de manera conveniente son antiinflamatorios esteroides y no esteroides. Los compuestos de la invención se pueden usar también para la prevención o el tratamiento de enfermedades causadas por protozoos, tal como es el caso de la malaria o la coccidiosis en las aves de corral.

Se ha encontrado, asimismo, que los inhibidores de NHE exhiben un efecto beneficioso sobre las lipoproteínas séricas. Se reconoce, por lo general, que los niveles excesivamente altos de lípidos en sangre, denominado hiperlipoproteinemia, representan un factor de riesgo esencial para el desarrollo de lesiones vasculares arterioscleróticas, en particular, la cardiopatía coronaria. La reducción de las lipoproteínas elevadas en suero es, por consiguiente, de enorme importancia para la profilaxis y la regresión de lesiones ateroscleróticas. Adicionalmente a la reducción del colesterol total en suero, resulta especialmente importante reducir la proporción de fracciones de lípidos aterogénicos específicos en este colesterol total, en especial las lipoproteínas de baja densidad (LDL) y de las lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL), dado que estas fracción lipídicas constituyen un factor de riesgo aterogénico. Por el contrario, se atribuye una función protectora contra la cardiopatía coronaria a las lipoproteínas de alta densidad. En consecuencia, los agentes hipolipidemiantes deberían ser capaces de reducir no sólo el colesterol total, sino también, y en especial, las fracciones de colesterol séricas LDL y VLDL. Se ha observado ahora que los inhibidores de NHE1 exhiben valiosas propiedades, utilizables en terapia, en relación con su influencia sobre los niveles de lípidos en suero. Por ejemplo, reducen significativamente las concentraciones séricas elevadas de LDL y VLDL, como se puede observar, por ejemplo, como consecuencia de un aumento de la ingesta de una dieta rica en colesterol y lípidos, o en casos de alteraciones metabólicas patológicas, por ejemplo las hiperlipidemias de origen genético. Se les puede utilizar, por lo tanto, para la profilaxis y la regresión de lesiones ateroscleróticas al eliminar un factor de riesgo causal. Se incluyen no sólo las hiperlipidemias primarias, sino también determinadas hiperlipidemias secundarias como las que se producen, por ejemplo, en la diabetes. Adicionalmente, los inhibidores de NHE dan lugar a una marcada reducción de infartos inducidos por anomalías metabólicas y, de manera particular, a una reducción importante del tamaño del infarto inducido y de su gravedad.

Los compuestos según la invención de las fórmulas I, Ia, Ib, XVa, XVb y XVI encuentran, por lo tanto, un uso conveniente en la preparación de un fármaco para el tratamiento de la hipercolesterolemia; en la preparación de un fármaco para la prevención de la aterogénesis; en la preparación de un fármaco para la prevención y el tratamiento de la aterosclerosis, en la preparación de un fármaco para la prevención y el tratamiento de enfermedades inducidas por niveles elevados de colesterol, en la preparación de un fármaco para la prevención y el tratamiento de enfermedades inducidas por la disfunción endotelial, en la preparación de un fármaco para la prevención y el tratamiento de la hipertensión inducida por la aterosclerosis, en la preparación de un fármaco para la prevención y el tratamiento de trombosis inducidas por la aterosclerosis, en la preparación de un fármaco para la prevención y el tratamiento de las lesiones isquémicas inducidas por la hipercolesterolemia y por la disfunción endotelial, y de las lesiones post-isquémicas de reperfusión, en la preparación de un fármaco para la prevención y el tratamiento de hipertrofias cardiacas y cardiomiopatías inducidas por la hipercolesterolemia y la disfunción endotelial, así como de la insuficiencia cardiaca congestiva (ICC), en la preparación de un medicamento para la prevención y el tratamiento de vasoespasmos coronarios e infartos de miocardio inducidos por la hipercolesterolemia y la disfunción endotelial, en la preparación de un medicamento para el tratamiento de los trastornos mencionados, en combinación con agentes hipotensores, preferentemente con inhibidores de la enzima conversora de la angiotensina (ECA) y antagonistas del receptor de la angiotensina. Se ha encontrado que una combinación de un inhibidor de NHE con un ingrediente activo que reduce los niveles de lípidos en sangre, preferentemente con un inhibidor de la HMG-CoA-reductasa (por ejemplo, lovastatina o pravastatina), que genera una acción hipolipidemiante y aumenta, de este modo, las propiedades hipolipidemiantes del inhibidor de NHE,
constituye una combinación favorable dotada de un efecto potenciado, y que reduce el uso de ingredientes activos.

Así, los inhibidores de NHE dan lugar a una protección eficaz contra las lesiones endoteliales de diversos orígenes. Esta protección de los vasos contra el síndrome de disfunción endotelial hace de los compuestos de las fórmulas I, Ia, Ib, XVa, XVb y XVI y/o sus sales farmacéuticamente aceptables, fármacos valiosos para la prevención y el tratamiento de los vasoespasmos coronarios, vasculopatías periféricas, en particular la claudicación intermitente, aterogénesis y aterosclerosis, hipertrofia del ventrículo izquierdo y cardiomiopatía dilatada, así como de los trastornos trombóticos.

Igualmente, se ha encontrado que los inhibidores de NHE son adecuados en el tratamiento de la diabetes no insulino-dependiente (NIDDM), en el trascurso del cual la resistencia a la insulina resulta limitada. En este caso, puede ser beneficioso potenciar la actividad antidiabética y la calidad de acción de los compuestos de acuerdo con la invención, combinándolos con una biguanida tal como metformina, con una sulfonilurea antidiabética tal como gliburida, glimepirida, tolbutamida, etc., con un inhibidor de la glucosidasa, con un agonista de PPAR tal como rosiglitazona, pioglitazona, etc., con un producto de insulina de diferente forma de administración, con un inhibidor de DB4, con un sensibilizador de insulina o con meglitinida.

Además de los efectos antidiabéticos agudos, los inhibidores de NHE contrarrestan el desarrollo de complicaciones tardías de la diabetes y, por lo tanto, se les puede usar como fármacos para la prevención y el tratamiento de lesiones tardías de la diabetes tales como nefropatía diabética, neuropatía diabética, retinopatía diabética, cardiomiopatía diabética y de otros trastornos producidos como consecuencia de la diabetes. En este sentido, se les puede combinar, de manera conveniente, con los medicamentos antidiabéticos descritos anteriormente para el tratamiento de la NIDDM. La combinación con una forma de dosificación beneficiosa de insulina podría ser especialmente importante en este contexto.

Los inhibidores de NHE exhiben, además de los efectos protectores contra acontecimientos isquémicos agudos y los acontecimientos subsecuentes de estrés, igualmente agudos, a la reperfusión, también acciones directas, terapéuticamente útiles, contra enfermedades y trastornos de la totalidad del organismo de los mamíferos, asociados con las manifestaciones del proceso, crónicamente progresivo, del envejecimiento y que se producen de manera independiente de estados de hipofunción aguda, y bajo condiciones normales, no isquémicas. Estas manifestaciones patológicas, relacionadas con la edad e inducidas durante el prolongado período de envejecimiento, tales como enfermedad, invalidez y muerte, que ahora son susceptibles de tratamiento con inhibidores de NHE, son enfermedades y trastornos causados básicamente por cambios relacionados con la edad de los órganos vitales y su función, y que adquieren una creciente importancia en el organismo durante su envejecimiento.

Enfermedades relacionadas con la alteración funcional o manifestaciones de desgaste de órganos, asociadas con la edad, son, por ejemplo, la respuesta y reactividad inadecuadas de los vasos sanguíneos a las reacciones de contracción y relajación. Este declive, relacionado con la edad, de la reactividad vascular a los estímulos de constricción y relajación, que constituyen un proceso esencial del sistema cardiovascular y, por lo tanto, de la vida y de la salud, se pueden eliminar o reducir de manera significativa con los inhibidores de NHE. Una función importante y una medida del mantenimiento de la reactividad vascular es el bloqueo o retraso de la progresión, relacionada con la edad, de la disfunción endotelial, que se puede eliminar de manera muy importante con inhibidores de NHE. Por lo tanto, los inhibidores de NHE son excepcionalmente adecuados para el tratamiento y la prevención de la progresión, relacionada con la edad, de la disfunción endotelial, en especial, de la claudicación intermitente.

Un ejemplo de otra variable que caracteriza el proceso de envejecimiento es la disminución de la capacidad de contracción del corazón y la reducción de la adaptación del corazón a un gasto de bombeo requerido de este órgano. La eficacia disminuida del corazón, como consecuencia del proceso de envejecimiento, está relacionada, en la mayoría de los casos, con una disfunción cardiaca causada, entre otras, por el depósito de tejido conjuntivo en el tejido del miocardio. Este depósito de tejido conjuntivo se caracteriza por un aumento del peso del corazón, por una hipertrofia del mismo y por una función cardiaca restringida. Fue sorprendente el que ha sido posible inhibir prácticamente por completo este envejecimiento del órgano cardiaco. Por consiguiente, los inhibidores de NHE son extraordinariamente apropiados para el tratamiento y la prevención de la insuficiencia cardiaca y de la insuficiencia cardiaca congestiva (ICC).

La inhibición de la proliferación no sólo permite la curación de determinadas formas de cáncer que ya se hayan producido, sino también la reducción y un retraso altamente significativo de la incidencia del cáncer, relacionada con la edad, mediante inhibidores de NHE. Un hallazgo particularmente digno de mención es la supresión o el retraso significativo de los trastornos de todos los órganos y no sólo determinados tipos de cáncer. Por lo tanto, los inhibidores de NHE son altamente adecuados para el tratamiento y, en especial, la prevención de tipos de cánceres relacionados con la edad.

Mediante el uso de inhibidores de NHE se observa un retraso, muy significativo en el tiempo, de la incidencia de enfermedades relacionadas con la edad de todos los órganos investigados, incluidos el corazón, vasos sanguíneos, hígado, etc., así como un retraso altamente significativo también del cáncer en ancianos. Adicionalmente, se registra una sorprendente prolongación de la vida que, hasta la fecha, no se ha alcanzado con ningún grupo de medicamentos ni productos naturales. Este efecto exclusivo de los inhibidores de NHE permite, además del uso único de los ingredientes activos en seres humanos y animales, combinar estos inhibidores de NHE con otros principios, medidas, sustancias y productos naturales activos que se utilizan en geriatría y que se basan en diferentes mecanismos de acción. Estas clases de ingredientes activos que se usan en terapia geriátrica son: en particular, vitaminas y sustancias con actividad antioxidante. Dado que existe una correlación entre carga calórica o ingesta de alimentos y el proceso de envejecimiento, es posible combinarlos con medidas dietéticas, por ejemplo con supresores del apetito. Asimismo, es igualmente posible contemplar una combinación con medicamentos hipotensores tales como inhibidores de la ECA, antagonistas de los receptores de angiotensina, diuréticos, antagonistas de Ca^{2+}, etc., o con fármacos que normalizan el metabolismo tales como agentes reductores del colesterol.

Por lo tanto, los inhibidores de NHE son extraordinariamente adecuados para prevenir cambios tisulares relacionados con la edad y para prolongar la vida, conservando una alta calidad de vida.

Los compuestos de acuerdo con la invención son eficaces inhibidores del antiportador celular de sodio-protón (intercambiador Na/H), que está incrementado en numerosas enfermedades (hipertensión esencial, aterosclerosis, diabetes, etc.), así como en células susceptibles de medición, por ejemplo, en eritrocitos, trombocitos o leucocitos. Los compuestos utilizados de acuerdo con la invención son, por lo tanto, apropiados como herramientas científicas excelentes y sencillas, por ejemplo en su uso como agentes de diagnóstico para determinar y distinguir diferentes tipos de hipertensión, así como también de aterosclerosis, diabetes y complicaciones tardías de la misma, trastornos proliferativos, etc.

También se reivindica un medicamento para uso humano, veterinario o fitoprotector que, junto con vehículos y excipientes farmacéuticamente aceptables, comprende una cantidad efectiva de uno o múltiples compuestos de las fórmulas XVa, XVb y XVI y/o de sus sales farmacéuticamente aceptables, solos o en combinación con otros ingredientes activos farmacológicos o fármacos. Los fármacos que comprenden un compuesto de las fórmulas I, Ia, Ib, XVa, XVb y XVI y/o sus sales farmacéuticamente aceptables se pueden administrar, por ejemplo, por vía oral, parenteral, intravenosa, rectal, transcutánea o por inhalación, dependiendo la vía preferida de administración de las características particulares de la enfermedad. Los compuestos de las fórmulas I, Ia, Ib, XVa, XVb y XVI se pueden usar solos o junto con excipientes farmacéuticos, tanto en medicina veterinaria como humana. Los medicamentos comprenden, por lo general, ingredientes activos de las fórmulas I, Ia, Ib, XVa, XVb y XVI y/o sus sales farmacéuticamente aceptables, en una cantidad desde 0,01 mg hasta 1 g por unidad de dosis.

Los excipientes que resultan adecuados para la formulación farmacéutica deseada son familiares para los expertos en la técnica gracias a sus conocimientos de la misma. Además de disolventes, formadores de gel, bases para supositorios, excipientes para comprimidos y otros vehículos para ingredientes activos, es posible utilizar, por ejemplo, antioxidantes, dispersantes, emulsionantes, antiespumantes, saborizantes, conservantes, solubilizadores o colorantes.

Para una forma de administración oral, los compuestos activos se mezclan con aditivos adecuados para los mismos tales como vehículos, estabilizadores o diluyentes inertes, convirtiéndolos por medio de métodos convencionales en formas de dosificación apropiadas tales como comprimidos, grageas, cápsulas de gelatina dura, soluciones acuosas, alcohólicas u oleosas. Ejemplos de vehículos inertes que se pueden usar son goma arábiga, magnesia, carbonato de magnesio, fosfato de potasio, lactosa, glucosa o almidón, en particular almidón de maíz. La formulación se puede efectuar en forma de granulado seco o granulado húmedo. Ejemplos de vehículos o disolventes oleosos adecuados son aceites vegetales o animales tales como aceite de girasol o aceite de hígado de bacalao.

Para la administración subcutánea, intramuscular o intravenosa, los compuestos activos utilizados, si se desea con las sustancias habituales para ellos tales como solubilizadores, emulsionantes u otros excipientes, se llevan a solución, suspensión o emulsión. Ejemplos de disolventes útiles son: agua, solución salina fisiológica o alcoholes, por ejemplo etanol, propanol, glicerol, así como soluciones de azúcar tales como soluciones de glucosa o manitol o, también, una mezcla de los diferentes disolventes mencionados.

Formulaciones farmacéuticas adecuadas para la administración en forma de aerosoles o nebulizadores son, por ejemplo, soluciones, suspensiones o emulsiones del ingrediente activo de las fórmulas I, Ia, Ib, XVa, XVb y XVI y/o sus sales farmacéuticamente aceptables en un disolvente farmacéuticamente aceptable, en particular etanol o agua, o una mezcla de estos disolventes. Si es preciso, la formulación puede contener también otros excipientes farmacéuticos tales como tensioactivos, emulsionantes y estabilizadores, y un gas propelente. Una formulación de este tipo contiene, normalmente, el ingrediente activo en una concentración de aproximadamente 0,1% hasta 10%, en especial de aproximadamente 0,3 a 3% en peso.

La dosis del ingrediente activo de las fórmulas I, Ia, Ib, XVa, XVb y XVI a administrar y la frecuencia de administración dependen de la potencia y duración de acción de los compuestos utilizados; adicionalmente, también dependen de la naturaleza y gravedad del trastorno a tratar, así como del sexo, edad, peso y respuesta individual del mamífero a tratar.

En promedio, la dosis diaria de un compuesto de las fórmulas I, Ia, Ib, XVa, XVb y XVI y/o de sus sales farmacéuticamente aceptables para un paciente con un peso de aproximadamente 75 kg es de al menos 0,001 mg/kg, preferentemente, 0,01 mg/kg, hasta un máximo de 10 mg/kg, preferentemente, 1 mg/kg, de peso corporal. En caso de episodios agudos del trastorno, por ejemplo inmediatamente después de haber sufrido un infarto de miocardio, pueden ser necesarias dosificaciones superiores y, especialmente, más frecuentes, por ejemplo de hasta 4 dosis únicas al día. Sobre todo en el caso de administración i.v., por ejemplo, en un paciente infartado en una unidad de cuidados intensivos, pueden ser necesarios, por ejemplo, hasta 700 mg al día, y los compuestos de acuerdo con la invención se pueden administrar como infusión.

Lista de abreviaturas

DCC

diciclohexil-carbodiimida

DIP

éter diisopropílico

TLC

cromatografía de capa fina

DMF

N,N-dimetilformamida

EE

acetato etílico

eq.

equivalente

Et_{3}N

trietilamina

Et_{2}O

éter dietílico

EtOH

etanol

h

hora(s)

HEP

n-heptano

HOAc

ácido acético

KOtBu

2-metil-propan-2-olato de potasio

MeOH

metanol

min

minuto(s)

p.f.

punto de fusión

MTB

terc-butil-metiléter

NMP

1-metilpirrolidin-2-ona

Pd(OAc)_{2}

acetato de paladio (II)

TA

temperatura ambiente

Rt

tiempo de retención

tBu

terc-butilo

THF

tetrahidrofurano

TMEDA

N,N,N',N'-tetrametil-etano-1,2-diamina

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Los tiempos de retención (Rt) descritos más adelante se refieren a análisis de HPLC con los siguientes parámetros:

Método A

Fase estacionaria: Waters Simmetry C8 (5\mu), 3,9x150 mm

Fase móvil: CH_{3}CN isocrático/CF_{3}CO_{2}H acuoso al 0,1% 40:60; \lambda=220 nm; 1 ml/min.

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Método B

Fase estacionaria: Waters Simmetry C8 (5\mu), 3,9x150 mm

Fase móvil: CH_{3}CN isocrático/CF_{3}CO_{2}H acuoso al 0,1% 35:65; \lambda=230 nm; 1 ml/min.

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Método C

Fase estacionaria: Waters Simmetry C8 (5\mu), 3,9x150 mm

Fase móvil: CH_{3}CN isocrático/CF_{3}CO_{2}H acuoso al 0,1% 50:50; \lambda=220 nm; 1 ml/min.

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Ejemplo 1 a) N-(2,2,2-trifluoro-etil)-4-trifluorometil-benzamida

16

Se disolvieron 5,0 g (24 mmol) de cloruro de 4-trifluorometil-benzoílo y 5,0 ml (36 mmol) de trietilamina en 50 ml de CH_{2}Cl_{2} y se agregaron lentamente, gota a gota, 2,4 g (24 mmol) de 2,2,2-trifluoroetilamina a TA. Se agitó a TA durante 4 h y, a continuación, se separaron los componentes volátiles bajo presión reducida. El residuo se recogió usando 100 ml de MTB y se lavó inicialmente con 30 ml de una solución acuosa saturada de Na_{2}CO_{3} y, seguidamente, con 30 ml de una solución acuosa saturada de NaHSO_{4}. El secado se llevó a cabo sobre MgSO_{4} y se obtuvieron 6,1 g (94%) de una resina incolora, que cristalizó en reposo; p.f.: 117ºC

R_{f} (DIP) = 0,50, MS(EI): 271 (M+1)^{+}.

b) (R,S)-3-hidroxi-2-(2,2,2-trifluoro-etil)-5-trifluorometil-2,2-dihidroisoindol-1-ona

17

Se disolvieron 0,37 ml (2,4 mmol) de TMEDA y 1,4 ml (2,3 mmol) de una solución 1,5 M de t-BuLi en n-pentano a -75ºC en 2 ml de THF (anhidro) y se agregó, gota a gota, una solución de 0,30 g (1,1 mmol) de N-(2,2,2-trifluoro-etil)-4-trifluorometil-benzamida en 2 ml de THF a -75ºC. La mezcla se agitó a -75ºC durante 3 h y, a continuación, se agregaron 0,43 ml (5,5 mmol) de DMF, gota a gota, y la mezcla se calentó a TA durante 30 min. La mezcla de reacción se vertió sobre 100 ml de una solución acuosa saturada de NaHCO_{3} y se extrajo 3 veces con sendos 30 ml de EE. El secado se realizó sobre MgSO_{4} y el disolvente se separó bajo presión reducida. La cromatografía sobre gel de sílice, usando DIP, proporcionó 80 mg de (R,S)-3-hidroxi-2-(2,2,2-trifluoroetil)-5-trifluorometil-2,3-dihidroisoindol-1-ona, además de 110 mg de mezcla con el material de partida. Esta mezcla se separó nuevamente por HPLC de fase inversa (véanse las condiciones más adelante) y se obtuvieron 40 mg adicionales de (R,S)-3-hidroxi-2-(2,2,2-trifluoroetil)-5-trifluorometil-2,3-dihidroisoindol-1-ona; rendimiento global, 30%.

HPLC: gradiente, tiempo de recorrido 20 min

Eluyente: CF_{3}CO_{2}H acuoso al 0,1%, acetonitrilo (Chromasolv); caudal: 30 ml/min

Columna: Waters Xterra® MS C_{18}5 \mum, 30x100 mm

Gradiente:

0-2,5 min

acetonitrilo al 10%

3,0 min

acetonitrilo al 25%

14,0 min

acetonitrilo al 75%

15,0 min

acetonitrilo al 95%

17,5 min

acetonitrilo al 10%

R_{f} (DIP) = 0,50; MS(EI): 299 (M+1)^{+}.

c) Éster etílico del ácido (RS)-[3-oxo-2-(2,2,2-trifluoro-etil)-6-trifluorometil-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-il]-acético

18

Bajo atmósfera de argón se disolvió éster etílico del ácido (dietoxifosforil)-acético (135 mg, 0,6 mmol) en dimetoxietano anhidro (10 ml). Se agregaron a esta solución 17,6 mg de NaH (60% en aceite) a TA, y se agitó a TA durante 10 min. A continuación, se agregó una solución de 120 mg (0,04 mmol) de (RS)-3-hidroxi-2-(2,2,2-trifluoroetil)-5-trifluorometil-2,3-dihidro-isoindol-1-ona en dimetoxietano anhidro (5 ml) y, seguidamente, el residuo se agitó a reflujo durante 2 h. La solución de reacción se dejó enfriar; entonces, la solución de reacción se vertió sobre 50 ml de una solución al 5% de hidrógenocarbonato sódico y se extrajo dos veces con sendos 20 ml de acetato etílico; la fase orgánica se secó sobre MgSO_{4} y se concentró bajo presión reducida, y el residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando DIP como eluyente. Se obtuvieron 90 mg (61%) de éster etílico del ácido (RS)-[3-oxo-2-(2,2,2-trifluoro-etil)-6-trifluorometil-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-il]-acético en forma de aceite incoloro, que cristalizó en heptano en forma de sólido de color beis.

R_{f}(DIP) = 0,31

El espectro de RMN fue idéntico al del material preparado en el Ejemplo 4.

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d) (R,S)-N-{2-[3-oxo-2-(2,2,2-trifluoro-etil)-6-trifluorometil-2,3-dihidro-H-isoindol-1-il]-acetil}-guanidina

19

Como se describe en el Ejemplo 2 g, se puede hacer reaccionar éster etílico del ácido (RS)-[3-oxo-2-(2,2,2-trifluoro-etil)-6-trifluorometil-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-il]-acético con guanidina.

Ejemplo 2 a) Ácido 2-nitro-4-trifluorometil-benzoico

20

Se agregaron lentamente, en porciones, 11,97 g de ácido 4-trifluorometil-benzoico (63 mmol) a TA a 48 ml de HNO_{3} (al 100%). Subsiguientemente, la mezcla se calentó a reflujo durante 1 h y, a continuación, se enfrió a TA y se vertió sobre aproximadamente 600 g de hielo. La mezcla se agitó durante 1 h y, seguidamente, se separó por filtración el precipitado y se lavó con 1 l de agua. El filtrado se extrajo con 300 ml de CH_{2}Cl_{2} y la fase orgánica se combinó con el precipitado y se secó sobre Na_{2}SO_{4}. El disolvente se separó en vacío y el residuo recristalizó disolviendo 1 l de DIP a 68ºC, agregando 2 l de HEP a esta temperatura y, por último, enfriando la solución lentamente a TA. El producto cristalizado se lavó con 1 l de HEP y se secó en vacío para obtener 7,1 g (48%), p.f. 136ºC-138ºC.

b) Ácido 2-amino-4-trifluorometil-benzoico

21

Se disolvieron 250 g de ácido 2-nitro-4-trifluorometil-benzoico (1,06 mol) en 1 l de EtOH y se agregaron 7,5 g de Pd/C (al 5%). La mezcla se hidrogenó bajo 1-2,5 bar de presión de hidrógeno. Durante la captación de hidrógeno, la temperatura aumentó temporalmente desde 10ºC hasta 104ºC. Después de 2 h, la incorporación de hidrógeno se completó. Subsiguientemente, se separó por filtración el catalizador y el disolvente se separó en vacío para obtener 215 g (99%) de una sólido de color amarillo pálido, p.f. 174-176ºC.

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c) Ácido 2-((E)-2-etoxicarbonil-vinil)-4-trifluorometil-benzoico

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22

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Se disolvieron 520 mg de NaNO_{2} (7,6 mmol) en 2 ml de agua y se agregaron, gota a gota, a 0ºC a una solución de 1,3 g de ácido 2-amino-4-trifluorometil-benzoico (6,5 mmol) en 2,6 ml de una solución acuosa al 48% de HBF_{4} y 30 ml de etanol. Seguidamente, la mezcla se agitó a 0ºC durante 10 min, a continuación, se calentó a TA. Se agregaron, entonces, 0,3 ml adicionales de una solución acuosa al 48% de HBF_{4}, entonces se agregaron 30 ml de etanol, 0,9 g de acrilato etílico (9,0 mmol) y 26,9 mg de Pd(OAc)_{2} (0,12 mmol). Subsiguientemente, la mezcla se agitó a 50-60ºC durante 1 h. Se separó, entonces, el disolvente en vacío y el residuo se recogió con 25 ml de EE y se lavó inicialmente con 25 ml de una solución acuosa 1N de HCl y, a continuación, con 25 ml de una solución acuosa saturada de NaCl. La fase orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4} y el disolvente se separó bajo presión reducida. El residuo se suspendió en 25 ml de heptano y el producto precipitado se separó por filtración. Rendimiento: 1,3 g (69%) de un sólido de color pardo pálido. Se purificó por cristalización una muestra analítica a partir de heptano/acetato etílico.

El espectro de RMN fue idéntico al del material preparado en el Ejemplo 3a.

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d) Éster etílico del ácido (E)-3-[2-(2,2,2-trifluoro-etilcarbamoil)-5-trifluorometil-fenil]-acrílico

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23

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Se disolvieron 1,3 g de ácido 2-(2-etoxicarbonil-vinil)-4-trifluorometil-benzoico (4,5 mmol) y 453 mg de 2,2,2-trifluoro-etilamina (4,5 mmol) en 5 ml de DMF y se agregaron 0,93 g de DCC. La mezcla se agitó a TA durante 4 h. El producto secundario de urea se separó por filtración y, entonces, se separó el disolvente en vacío. El residuo recristalizó a partir de DIP y se obtuvieron 1,6 g (96%) de cristales blancos. El espectro de RMN fue idéntico al del material preparado en el Ejemplo 3b.

e) Ácido (RS)-[3-oxo-2-(2,2,2-trifluoro-etil)-6-trifluorometil-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-il]-acético

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24

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Se disolvieron 2,2 g de éster etílico del ácido (E)-3-[2-(2,2,2-trifluoro-etil-carbamoil)-5-trifluorometil-fenil]-acrílico (5,9 mmol) en 10 ml de metanol y se agregaron 1,5 ml de una solución acuosa 5M de NaOH (7,5 mmol). La mezcla se agitó a TA durante 18 h y a continuación se ajustó a pH 7 usando una solución acuosa de HCl. Se separaron los disolventes en vacío y el residuo se suspendió en 10 ml de agua. Esta suspensión se ajustó a pH 2 usando una solución acuosa 2N de HCl, y se extrajo 3 veces con sendos 10 ml de EE. El secado se llevó a cabo sobre Na_{2}SO_{4} y el disolvente se separó en vacío. El residuo cristalizó con éter dietílico/DIP, p.f.: 202-204ºC.

Rendimiento: 1,8 g (89%).

RMN H^{1} (400 MHz, CDCl_{3}): \delta = 3,07 (dd, J_{1} = 17 Hz, J_{2} = 6 Hz, 1H), 3,23 (dd, J_{1} = 17 Hz, J_{2} = 5 Hz, 1 H), 4,27 (m, 1 H), 4,58 (m, 1 H), 5,08 (t, J = 5 Hz, 1 H), 7,91 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7,96 (d, J = 8 Hz, 1 H), 8,12 (s, 1 H), 12,50 (bs, 1 H) ppm.

Análisis de combustión: C_{13}H_{9}F_{6}NO_{3} (341,2): calc. C 45,76, H 2,66, N 4,10; hallado C 45,71, H 2,43, N 4,11.

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f) Éster etílico del ácido (RS)-[3-oxo-2-(2,2,2-trifluoro-etil)-6-trifluorometil-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-il]-acético

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25

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Se disolvieron 2,6 ml de SOCl_{2} (35 mmol) en 20 ml de etanol y, a -10ºC, se agregaron 3,4 g de ácido (R,S)-[3-oxo-2-(2,2,2-trifluoro-etil)-6-trifluorometil-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-il]-acético (10 mmol). La mezcla se agitó a TA durante 18 h y, subsiguientemente, se separaron los componentes volátiles bajo presión reducida. El residuo se cromatografió sobre gel de sílice usando 3:1 HEP/EA. Rendimiento: 3,0 g (81%) de un aceite incoloro que cristalizó a partir de heptano en forma de sólido de color beis.

El espectro de RMN fue idéntico al del material preparado en el Ejemplo 4.

g) (R,S)-N-{2-[3-oxo-2-(2,2,2-trifluoro-etil)-6-trifluorometil-2,3-dihidro-H-isoindol-1-il]-acetil}-guanidina

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Se disolvió hidrocloruro de guanidina (11,5 g, 120 mmol) en NMP (45 ml) y se agregó KOtBu (11,2 g, 100 mmol) con agitación, y se dejó la mezcla bajo agitación a TA durante 1,5 h y se filtró. A TA y bajo agitación se agregó el filtrado, gota a gota, a una solución de éster etílico del ácido (RS)-[3-oxo-2-(2,2,2-trifluoroetil)-6-trifluorometil-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-il]-acético (7,38 g, 20 mmol) en NMP (12 ml) y se agitó durante 60 min adicionales a TA. Subsiguientemente, se agregó agua helada (270 ml), la mezcla se ajustó a pH 7 usando HCl 2N, se agregó acetato de etilo (60 ml) y, subsiguientemente, se ajustó el pH a 8-8,5 mediante la adición de una solución de NaHCO_{3}. La mezcla se agitó vigorosamente a TA durante 1 h y el precipitado formado se separó por filtración con succión y se lavó con agua. Se obtuvieron 7,06 g (83%) de (R,S)-N-{2-[3-oxo-2-(2,2,2-trifluoroetil)-6-trifluorometil-2,3-dihidro-H-isoindol-1-il]-acetil}-guanidina, un compuesto de inclusión con 0,5 equivalentes de acetato de etilo, en forma de cristales de color amarillo pálido, p.f. 160-161ºC con calentamiento gradual, escape de acetato de etilo desde aproximadamente 90ºC.

R_{f} (acetato de etilo/metanol) = 0,45

RMN H^{1} (400 MHz, CDCl_{3}): \delta = 2,54 (dd, J_{1} = 8 Hz, J_{2} = 16 Hz, 1 H), 3,09 (dd, J_{1} = 4 Hz, J_{2} = 16 Hz, 1 H), 4,25 (m, 1H), 4,64 (m, 1 H), 5,18 (m, 1 H), 6,65 (bs, 2 H), 7,75 (bs, 2 H), 7,88 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7,95 (d, J = 8 Hz, 1 H), 8,02 (s, 1 H) ppm.

C_{14}H_{12}F_{6}N_{4}O_{2} \cdot ½ C_{4}H_{8}O_{2} (426,33): calc. C 45,08, H 3,78, N 13,14; hallado C 45,07, H 3,79, N 13,01.

Ejemplo 3 a) Ácido 2-((E)-2-etoxicarbonil-vinil)-4-trifluorometil-benzoico (variante del Ejemplo 2c)

27

Se agregaron 658 ml de una solución acuosa al 48-50% de HBF_{4}, a TA, a 339 g de ácido 2-amino-4-trifluorometil-benzoico (1.65 mol) en 6,8 l de EtOH (anhidro). La temperatura aumentó desde 21ºC a 26ºC. A continuación, la mezcla se enfrió a 0ºC y se agregó, gota a gota, una solución de 125 g de NaNO_{2} en 500 ml de agua a entre 0ºC y 5ºC durante 17 minutos. La solución de color inicialmente amarillo pálido se tornó en una suspensión de color inicial anaranjado-rojo y, finalmente, en una suspensión de color amarillo claro. El progreso de la reacción se vigiló por HPLC (método B; ácido 2-amino-4-trifluorometil-benzoico, rt = 6,4 min; producto intermedio: sal de 2-carboxi-5-trifluorometil-bencenodiazonio = 1,1 min.). En el plazo de 30 min, la conversión a la sal de 2-carboxi-5-trifluorometil-bencenodiazonio estuvo completa en > 99%. Luego se agregó la mezcla a 231 g de éster etílico del ácido acrílico (2,31 mol), 11,1 g de Pd(OAc)_{2} (49 mmol) y 6,8 l de etanol (anhidro) y se calentó la mezcla de reacción a 49-51ºC. Se observó una evolución uniforme de aumento de nitrógeno al aumentar la temperatura. La reacción se vigiló por HPLC (método B: ácido 2-((E)-2-etoxicarbonil-vinil)-4-trifluorometil-benzoico, rt = 16,4 min). Después de 45 min, el grado de conversión fue superior a 99%. Entonces, la mezcla se enfrió a TA y se separó el disolvente bajo presión reducida. El residuo se recogió en 3 l de EE y se separó por filtración. Se lavó, entonces, el filtrado inicialmente 3 veces con sendos 2,1 l de una solución acuosa de HCl, y, a continuación, con 1 l de una solución acuosa saturada de NaCl. El secado se efectuó sobre Na_{2}SO_{4} y se separó el disolvente en vacío para obtener 449 g de un sólido de color pardo claro. Teniendo en consideración una impureza (ácido 4-trifluorometil-benzoico; 6,3%) y residuos de disolvente (EE; 4%), se obtuvo un rendimiento de 83%. Se purificó una muestra analítica por cristalización a partir de heptano/acetato de etilo. P.f.: 1322-133ºC.

RMN H^{1} (400 MHz, CDCl_{3}): \delta = 1,36 (t, J = 7 Hz, 3 H), 4,31 (q, J = 7 Hz, 2 H), 6,41 (d, J = 16 Hz, 1 H), 7,72 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7,86 (s, 1 H), 8,21 (d, J = 8 Hz, 1 H), 8,51 (d, J = 16 Hz, 1 H), 8,5-9,5 (bs, 1 H) ppm.

Análisis de combustión: C_{13}H_{11}F_{3}O_{4} (288,23): calc. C 54,17, H 3,85; hallado C 54,24, H 3,74.

b) Éster etílico del ácido (E)-3-[2-(2,2,2-trifluoroetilcarbamoil)-5-trifluorometil-fenil]-acrílico

28

A una temperatura entre 15 y 16ºC y durante 24 min, se agregaron 315 g de cloruro de oxalilo (2,48 mol) a una mezcla de 650 g de ácido 2-((E)-2-etoxicarbonil-vinil)-4-trifluorometil-benzoico (2,25 mol), 33 ml de DMF y 7,8 l de CH_{2}Cl_{2}. Durante la adición, se observó el desprendimiento de gas. La mezcla se agitó a TA durante 1 h y, a continuación, se enfrió a 5ºC y se agregaron, entonces, 285 g de Et_{3}N (2,81 mol) a una temperatura entre 5ºC y 10ºC durante un período de 27 min. La mezcla se agitó a 5ºC durante 10 min adicionales, seguidamente, se agregaron 279 g de 2,2,2-trifluoroetilamina (2,81 mol) a una temperatura entre 9ºC y 20ºC durante un período de 27 min. La mezcla se agitó a TA durante 10 min, en el curso de los cuales precipitó un espeso precipitado y, para mejorar la agitabilidad de la mezcla, se agregó 1 l adicional de CH_{2}Cl_{2}. La reacción se vigiló por HPLC (método C: ácido 2-((E)-2-etoxicarbonil-vinil)-4-trifluorometil-benzoico, rt = 5,9 min; éster etílico del ácido (E)-3-[2-(2,2,2-trifluoroetilcarbamoil)-5-trifluorometil-fenil]-acrílico, rt = 13,2 min). Después de agitar a TA durante 50 min adicionales, la reacción se completó. Los constituyentes volátiles de la mezcla de reacción se separaron entonces bajo presión reducida, y el residuo se recogió con 12 l de EE y se lavó 3 veces con sendos 2,5 l de agua y, a continuación, dos veces con sendos 2,5 l de una solución acuosa saturada de NaHCO_{3} y, finalmente, con 1,5 l de una solución acuosa saturada de NaCl. El secado se realizó sobre MgSO_{4} y el disolvente se separó bajo presión reducida para obtener 802 g de éster etílico del ácido (E)-3-[2-(2,2,2-trifluoroetil-carbamoil)-5-trifluorometil-fenil]-acrílico en forma de sólido de color pardo. Esta sustancia bruta se combinó con el producto bruto de otro lote (177 g) y se disolvió a 60-70ºC en 3 l de EE y se agregaron 14 l de HEP a esta temperatura en porciones de 1 l. Se calentó, entonces, la mezcla a 80ºC y se agitó a esta temperatura durante 1,5 h. Esta mezcla se agregó, entonces, a 5,6 l de HEP a 70ºC y, a continuación, la mezcla se enfrió a TA con agitación, durante un período de 5 h. El producto se separó por filtración, se lavó con 3 l de HEP y se secó al aire para obtener 689 g de éster etílico del ácido (E)-3-[2-(2,2,2-trifluoroetil-carbamoil)-5-trifluorometil-fenil]-acrílico (67%) en forma de sólido de color pardo claro. P.f.: 161,5-162ºC.

RMN H^{1} (400 MHz, CDCl_{3}): \delta = 1,33 (t, J = 7 Hz, 3 H), 4,05 (m, 2 H), 4,26 (q, J = 7 Hz, 2 H), 6,19 (bs, 1 H), 6,46 (d, J = 16 Hz, 1 H), 7,63 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7,68 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7,87 (s, 1 H), 7,90 (d, J = 16 Hz, 1 H) ppm.

Análisis de combustión: C_{15}H_{13}F_{6}NO_{3} (369,27): calc. C 48,79, H 3,55, N 3,79; hallado C 48,93, H 3,51, N 3,92.

c) (R,S)-N-{2-[3-oxo-2-(2,2,2-trifluoro-etil)-6-trifluorometil-2,3-dihidro-H-isoindol-1-il]-acetil}-guanidina

29

Se suspendieron 386 g de éster etílico del ácido (E)-3-[2-(2,2,2-trifluoroetil-carbamoil)-5-trifluorometil-fenil]-acrílico (1,05 mol) en 600 ml de DMF, y se agregó lentamente, en porciones y a una temperatura entre 5ºC y 15ºC a 4,7 g de KOtBu (42 mmol). La ciclación a la isoindolona se vigiló por TLC (HEP/EA = 2:1; acrilato de etilo: R_{f} = 0,32; isoindolona: R_{f} = 0,41). Después de una hora, la reacción estuvo completa. En el período intermedio, se suspendieron 587 g de KOtBu en 2,2 l de DMF y se agregaron 600 g de cloruro de guanidinio a una temperatura entre 20ºC y 25ºC. La mezcla se agitó a 25ºC durante 1 h y, entonces, se separó por filtración el KCl. El filtrado que comprende la guanidina liberada se agregó, seguidamente, a la mezcla de reacción que comprende la isoindolona y se agitó a TA durante 2 h. La conversión a la acilguanidina se vigiló por HPLC (método b; longitud de onda 230 nm y 254 nm; isoindolona: rt = 15,1 min; acilguanidina: rt = 2,9 min). Subsiguientemente, la mezcla de reacción se vertió sobre 14 l de agua helada, se ajustó a pH 8,5-9,0 usando una solución acuosa de HCl y se extrajo 4 veces con sendos 3 l de EA. Entonces, se lavó la mezcla 3 veces con sendos 3 l de una solución acuosa saturada de NaCl y se secó sobre Na_{2}SO_{4}, y el disolvente se separó bajo presión reducida. Se obtuvieron 329 g (82%) de un sólido de color pardo. El producto se combinó con otros 3 lotes del mismo procedimiento de preparación; cantidad total, 842 g. Estos 842 g (2,2 mol) se digirieron en 2 l de EE y 5 l de Et_{2}O a 30ºC durante 2 h. A continuación, se separó el sólido por filtración, se lavó 2 veces con sendos 2 l de Et_{2}O y se secó bajo presión reducida. Se obtuvieron 693 g (82% de recuperación) de un sólido de color casi blanco. El compuesto cristalizó a partir de 2-propanol como compuesto de inclusión con 0,5 equivalentes de 2-propanol.

El espectro de RMN fue idéntico al del enantiómero S preparado en el Ejemplo 5b.

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Ejemplo 4 Éster etílico del ácido (RS)-(2-(2,2,2-trifluoroetil)-3-oxo-6-trifluorometil-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-il)-acético, por reacción en un único recipiente a partir de ácido 2-((E)-2-etoxicarbonilvinil)-4-trifluorometil-benzoico

100

A temperatura ambiente se agregó SOCl_{2} (1,98 g, 27,2 mmol) a una suspensión de ácido 2-((E)-2-etoxicarbonil-vinil)-4-trifluorometil-benzoico (2,9 g, 10,1 mmol) en tolueno (30 ml). Se agitó a temperatura ambiente durante 5 min y, a continuación, se calentó a 105ºC (temperatura del baño) en un plazo de 30 min. A aproximadamente 70ºC, se inició el desprendimiento de gas. La mezcla se agitó a 105ºC durante 3 h, luego se enfrió a temperatura ambiente, se filtró con succión a través de una capa de tierra de diatomeas (2,5 x 0,5 cm) y se lavó con tolueno, y el filtrado se concentró por evaporación en vacío. El cloruro ácido se obtuvo en forma de un aceite de color rojo-pardo (3,34 g). Se disolvieron 2,2,2-trifluoroetilamina (1,2 g, 12,1 mmol) y trietilamina (2,58 g, 25,3 mmol) a 5ºC en diclorometano (15 ml), y el cloruro ácido, disuelto en diclorometano (20 ml), se agregó, gota a gota, con enfriamiento con hielo a una velocidad tal que la temperatura se mantuvo entre 5ºC y 10ºC. Se retiró, entonces, el baño de hielo y se separaron por destilación el exceso de trifluoroetilamina y una porción del diclorometano bajo vacío suave. Subsiguientemente, la mezcla se calentó a ebullición bajo reflujo durante 10 h. Después de enfriarla, la mezcla se diluyó con diclorometano (50 ml) y se extrajo dos veces con una solución acuosa 2N de HCl (50 ml cada vez), y las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua (100 ml), se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron bajo presión reducida. Se obtuvo éster etílico del ácido (RS)-(2-(2,2,2-trifluoroetil)-3-oxo-6-trifluorometil-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-il)-acético (3,51 g, 94%) en forma de aceite de color pardo oscuro, que se purificó por cristalización a partir de n-heptano. P.f.: 54,5-55,5ºC.

RMN H^{1} (400 MHz, CDCl_{3}): \delta = 1,15 (t, J = 7 Hz, 3 H), 2,85 (dd, J_{1} = 6 Hz, J_{2} = 16 Hz, 1 H), 3,01 (dd, J_{1} = 5 Hz, J_{2} = 16 Hz, 1 H), 3,83 (m, 1 H), 4,12 (q, J = 7 Hz, 2 H), 4,73 (m, 1 H), 5,17 (t, J = 6 Hz, 1 H), 7,80 (m, 2 H), 8,01 (d, J = 8 Hz, 1 H) ppm.

Análisis de combustión: C_{15}H_{13}F_{6}NO_{3} (369,27): calc. C 48,79, H 3,55, N 3,79; hallado C 48.54, H 3,49, N 3,79.

Ejemplo 5 a) (S)-N-{2-[3-oxo-2-(2,2,2-trifluoroetil)-6-trifluorometil-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-il]-acetil}-guanidina, sal del ácido O,O'-dibenzoil-L-tartárico

30

Se cargaron inicialmente como sólidos (RS)-N-{2-[3-oxo-2-(2,2,2-trifluoroetil)-6-trifluorometil-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-il]-acetil}-guanidina (compuesto de inclusión con acetato de etilo, contenido de 87,06% por RMN, 44 g, 100 mmol) y ácido O,O'-dibenzoil-L-tartárico (11,2 g, 31 mmol), y se agregó, gota a gota, 2-propanol (500 ml) con agitación. Después de 30 min, la mezcla se calentó a 70ºC. Se obtuvo, una vez más, una solución casi transparente. Se la dejó enfriar a temperatura ambiente en un plazo de 4 h y, subsiguientemente, se agitó a esta temperatura durante la noche. A continuación, la mezcla se agitó a 10ºC durante 4 h y, entonces, se filtró con succión. El residuo se lavó dos veces con 2-propanol (100 ml cada vez) y se secó al aire. Se obtuvieron 28,05 g de (S)-N-{2-[3-oxo-2-(2,2,2-trifluoroetil)-6-trifluorometil-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-il]-acetil}-guanidina, sal del ácido O,O'-dibenzoil-L-tartárico (rendimiento de 74% basado en el enantiómero (S)), con una pureza enantiómera de 82% ee por HPLC (Chiracel OD/21, 250 x 4,6 mm, 50:5:2 n-heptano/etanol/metanol, 1 ml/min, 30ºC, en forma de cristales incoloros. Se cargaron inicialmente 20 g (14,6 mmol) de estos cristales y se agregó, gota a gota, 2-propanol (400 ml). La mezcla se calentó a 80ºC con agitación y, entonces, se dejó enfriar gradualmente a temperatura ambiente. La mezcla se agitó a esta temperatura durante 2 h adicionales y, a continuación, se filtró con succión, y el residuo se lavó dos veces con 2-propanol (50 ml cada vez), y se secó al aire. Se obtuvieron 16,3 g (rendimiento de 100% basado en el enantiómero (S)) de (S)-N-{2-[3-oxo-2-(2,2,2-trifluoroetil)-6-trifluorometil-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-il]-acetil}-guanidina, sal del ácido O,O'-dibenzoil-L-tartárico, en forma de cristales incoloros, p.f. 192-193ºC, pureza enantiómera > 97% ee por HPLC (condiciones como las anteriores).

Análisis de combustión: C_{14}H_{12}F_{6}N_{4}O_{2} \cdot ½ C_{18}H_{14}O_{8} (561,43): calc. C 49,21, H 3,41, N 9,98; hallado C 49,17, H 3,30, N 9,97.

b) (S)-N-{2-[3-oxo-2-(2,2,2-trifluoroetil)-6-trifluorometil-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-il]-acetil}-guanidina

31

Se disolvió (S)-N-{2-[3-oxo-2-(2,2,2-trifluoroetil)-6-trifluorometil-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-il]-acetil}-guani-
dina, sal del ácido O,O'-dibenzoil-L-tartárico (113 mg, 0,20 mmol) en una mezcla de agua (1 ml) y acetato etílico (5 ml), y se agregó una solución de NaHCO_{3} (50 mg) en agua (7,5 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 16 h y, a continuación, se extrajo tres veces con acetato etílico (5 ml cada vez). Las fases orgánicas combinadas se agitaron una vez con una solución de NaHCO_{3} (50 mg) en agua (20 ml) y, seguidamente, con agua pura (20 ml), se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron por evaporación bajo presión reducida. Se obtuvieron 75 mg (97%) de (S)-N-{2-[3-oxo-2-(2,2,2-trifluoroetil)-6-trifluorometil-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-il]-acetil}-guanidina. El producto cristalizó a partir de 2-propanol en forma de compuesto de inclusión con 0,5 equivalentes de 2-propanol, p.f.: 80-82ºC. La sustancia puede recristalizar a partir de acetato etílico y cristaliza con 0,5 equivalentes de acetato etílico, p.f.: 121,5-122ºC.

Pureza enantiómera >97% por HPLC (Chiracel OD/21, 250\cdot4,6 mm, 4:1 n-heptano/2-propanol, 1 ml/min, 30ºC).

RMN H^{1} (400 MHz, CDCl_{3}): \delta = 2,54 (dd, J_{1} = 8 Hz, J_{2} = 16 Hz, 1 H), 3,09 (dd, J_{1} = 4 Hz, J_{2} = 16 Hz, 1 H), 4,25 (m 1 H), 4,64 (m, 1 H), 5,18 (m, 1 H), 6,65 (bs, 2 H), 7,75 (bs, 2 H), 7,88 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7,95 (d, J = 8 Hz, 1 H), 8,02 (s, 1 H) ppm.

Análisis de combustión (compuesto de inclusión con 0,5 equivalentes de 2-propanol): C_{14}H_{12}F_{6}N_{4}O_{2} \cdot ½ C_{3}H_{8}O (412,32): calc. C 45,15, H 3,91, N 13,59; hallado C 45,23, H 4,27, N 13,10.

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Ejemplo 6 (RS)-N-{2-[3-oxo-2-(2,2,2-trifluoroetil)-6-trifluorometil-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-il]-acetil}-guanidina por racemización de (R)-N-{2-[3-oxo-2-(2,2,2-trifluoroetil)-6-trifluoro-metil-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-il]-acetil}-guanidina

32

Se disolvió (R)-N-{2-[3-oxo-2-(2,2,2-trifluoroetil)-6-trifluorometil-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-il]-acetil}-guani-
dina (compuesto de inclusión con 0,5 equivalentes de 2-propanol (M = 412,3), 43 g, 104 mmol; obtenido por la concentración de las aguas madre que se obtuvo en la concentración de (S)-N-{2-[3-oxo-2-(2,2,2-trifluoroetil)-6-trifluorometil-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-il]-acetil}-guanidina, sal del ácido O,O'-dibenzoil-L-tartárico en el Ejemplo 5a), y tratamiento con NaHCO_{3}, según se ha descrito en el Ejemplo 5b)), en 2-propanol (1,8 l) y, a temperatura ambiente, se agregó una solución de KOH, al 85%, 660 mg, 10 mmol) en 2-propanol (400 ml), con agitación. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 24 h y, entonces, se acidificó usando ácido acético glacial (720 mg, 1,5 ml), y se concentró por evaporación bajo presión reducida, a una temperatura máxima del baño de 40ºC, y el residuo se fraccionó entre agua (500 ml) y acetato etílico (400 ml). La fase acuosa se extrajo dos veces con acetato etílico (300 ml cada vez). Las fases orgánicas combinadas se agitaron con una solución de NaHCO_{3} (10 g) en agua (500 ml) y, una vez más, con agua pura. La fase orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró por evaporación bajo presión reducida, a una temperatura máxima del baño de 40ºC. Se obtuvieron 39,8 g de (RS)-N-{2-[3-oxo-2-(2,2,2-trifluoroetil)-6-trifluorometil-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-il]-acetil}-guanidina, contenido de 87% por RMN, compuesto de inclusión con 0,5 equivalentes de acetato etílico, en forma de cristales de color amarillo pálido, rendimiento: 87%. P.f.: 164-166ºC tras calentamiento suave, escape de acetato etílico desde aproximadamente 100ºC.

Relación enantiómera 49:51 por HPLC (Chiracel OD/21, 250 x 4,6 mm, 4:1 n-heptano/2-propanol, 1 ml/min, 30ºC).

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Ejemplo 7 Hidrógeno-fumarato de (S)-N-{2-[3-oxo-2-(2,2,2-trifluoroetil)-6-trifluorometil-2,3-di-hidro-1H-isoindol-1-il]-acetil}-guanidina hidrato

33

Se disolvió (S)-N-{2-[3-oxo-2-(2,2,2-trifluoroetil)-6-trifluorometil-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-il]-acetil}-guanidina [compuesto de inclusión con 0,5 equivalentes de 2-propanol, (M = 412,3), 110 g, 266 mmol] en dimetoxietano (2 l) y se mezcló con una solución de ácido fumárico (0,5 M en 9:1 dimetoxietano/agua, 512 ml), y la solución transparente formada se concentró por evaporación bajo presión reducida. El residuo se recogió con diclorometano (2 l) y la mezcla se concentró nuevamente por evaporación bajo presión reducida. El residuo se suspendió en agua (1,5 l), se filtró con succión a temperatura ambiente, y se secó al aire a temperatura ambiente durante la noche. Se obtuvieron 125,9 g (95%) de hidrógeno-fumarato de (S)-N-{2-[3-oxo-2-(2,2,2-trifluoroetil)-6-trifluorometil-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-il]-acetil}-guanidina hidrato, en forma de cristales incoloros, p.f. 210ºC.

Determinación de la inhibición de NHE

La concentración inhibitoria CI_{50} para la inhibición de NHE-1 se determinó del modo siguiente:

La CI_{50} de inhibición de NHE-1 se determinó en un ensayo de FLIPR, midiendo la recuperación en pH_{i} en líneas de células transfectadas, que expresan NHE-1 humano.

El ensayo se llevó a cabo en un FLIPR (siglas en inglés de lector de placa de imágenes fluorescentes) con placas de microtitulación de 96 pocillos de paredes negras y base transparente. Las líneas celulares transfectadas que expresan los diferentes subtipos de NHE (la línea celular parental LAP-1 no exhibe actividad NHE endógena como consecuencia de mutagénesis y subsiguiente selección), se sembraron el día anterior, con una densidad de \sim25.000 células/pocillo. El medio de crecimiento para las células transfectadas (Iscove + suero de ternero fetal al 10%) contenía, adicionalmente, G418 como antibiótico de selección para garantizar la presencia de las secuencias transfectadas.

El ensayo real se inició con la separación del medio de crecimiento y la adición de 100 \mul de tampón de carga por pocillo (BCECF-AM 5 \muM [éster acetoximetílico de 2',7'-bis(carboxietil)-5- (y -6-)-carboxifluorosceína] en NH_{4}Cl 20 mM, cloruro de colina 115 mM, MgCl_{2} 1 mM, CaCl_{2} 1 mM, KCl 5 mM, HEPES 20 mM, glucosa 5 mM; pH 7,4 [ajustado con KOH]). Seguidamente, las células se incubaron a 37ºC durante 20 minutos. Esta incubación dio lugar a la carga de las células con la tinción fluorescente, cuya intensidad de fluorescencia depende del pH_{i}, y con NH_{4}Cl, que torna las células ligeramente alcalinas.

El precursor no fluorescente de la tinción BCECF-AM es, al igual que el éster, permeable a las membranas. En el interior de las células, las esterasas liberaron la tinción BCECF real, que es impermeable a las membranas.

Después de esta incubación durante 20 minutos, se separó el tampón de carga que contenía NH_{4}Cl y BCECF-AM libre lavando tres veces en un lavador de células (Tecan Columbus), con 400 \mul en cada caso de tampón de lavado (cloruro de colina 133,8 mM, KCl 4,7 mM, MgCl_{2} 1,25 mM, CaCl_{2} 1,25 mM, K_{2}HPO_{4} 0,97 mM, KH_{2}PO_{4} 0,23 mM, HEPES 5 mM, glucosa 5 mM; pH 7,4 [ajustado con KOH]). El volumen residual que permaneció en los pocillos fue de 90 \mul (50-125 \mul posible). Esta etapa de lavado retiró el BCECF-AM libre y condujo, como consecuencia de la separación de los iones de NH_{4}^{+} externos, a una acidificación intracelular (\sim pH_{i} 6,3-6,4).

Dado que el equilibrio de NH_{4}^{+} intracelular con NH_{3} y H^{+} resultó alterado por la separación del NH_{4}^{+} extracelular, así como por el subsiguiente pasaje instantáneo del NH_{3} a través de las membranas celulares, el proceso de lavado dio lugar a que H^{+} se mantuviera en el interior de las células, lo que fue la causa de la acidificación intracelular. Eventualmente, ésta puede conducir a la lisis celular si persiste el tiempo suficiente. En este punto, fue importante que el tampón de lavado estuviera exento de sodio (< 1 mM), dado que los iones sodio extracelulares conducirían a la recuperación instantánea en el pH_{i} como consecuencia de la actividad de las isoformas de NHE clonadas.

Resultó igualmente importante que todos los tampones utilizados (tampón de carga, tampón de lavado, tampón de recuperación) no contuvieran iones HCO_{3}., puesto que la presencia de bicarbonato daría lugar a la activación de los sistemas reguladores del pH_{i} dependientes del bicarbonato, que interferirían, y que se encuentran presentes en la línea celular LAP-1 parental.

A continuación, las placas de microtitulación con las células acidificadas (hasta 20 minutos después de la acidificación) se transfirieron al FLIPR. En el FLIPR, la tinción fluorescente intracelular se excitó por la luz con una longitud de onda de 488 nm, generada por un láser de argón, y se seleccionaron los parámetros medidos (potencia del láser, tiempo de iluminación y apertura de la cámara CCD incorporada en el FLIPR), de forma que la señal media de fluorescencia por pocillo estuviera entre 30.000 y 35.000 unidades de fluorescencia relativa.

La verdadera medición en el FLIPR se inició tomando la cámara CCD una imagen cada dos segundos, bajo control de software. Después de 10 segundos, se inició la recuperación del pH intracelular mediante la adición de 90 \mul de tampón de recuperación (NaCl 133,8 mM, KCl 4,7 mM, MgCl_{2} 1,25 mM, CaCl_{2} 1,25 mM, K_{2}HPO_{4} 0,97 mM, KH_{2}PO_{4} 0,23 mM, HEPES 10 mM, glucosa 5 mM; pH 7,4 [ajustado con NaOH]) por medio de la pipeta de 96 pocillos incorporada en el FLIPR.

Los controles positivos (actividad de NHE de 100%) usados fueron pocillos a los que se había agregado tampón de recuperación puro, en tanto que los controles negativos (actividad de NHE de 0%) recibieron tampón de lavado. Se agregó tampón de recuperación con el doble de concentración de la sustancia de ensayo a todos los demás pocillos. La medición en el FLIPR finalizó después de 60 mediciones (dos minutos).

Los datos brutos se exportaron al programa ActivityBase. Este programa calculó en primer lugar las actividades de NHE para cada concentración de sustancia analizada y, a partir de éstas, los valores de CI_{50} para las sustancias. Puesto que la evolución de la recuperación del pH_{i} no fue lineal a lo largo de todo el experimento, sino que disminuyó más bien hacia el final, debido a la reducción de la actividad de NHE con valores superiores de pH_{i}, fue importante seleccionar, para la evaluación de la medición, la parte en la que el incremento de fluorescencia de los controles positivos fue lineal.

34

Claims (23)

1. Procedimiento para preparar compuestos de la fórmula I

35

en la que significan

\vocalinvisible

\textoinvisible

R1 y R2, cada uno de forma independiente, hidrógeno, F, Cl, trifluorometoxi, 2,2,2- trifluoroetoxi, trifluorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo o alquilo con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

R3

Alk-R4 o trifluorometilo;

Alk

alquilo con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

R4

hidrógeno, trifluorometilo o cicloalquilo con 3, 4, 5, 6 ó 7 átomos de C;

así como sus sales,

caracterizado porque

36

a) se formila la amida de la fórmula IV y, a continuación, se cicla al compuesto de la fórmula VI,

b) se hace reaccionar el compuesto de la fórmula VI con un alcoxicarbonilmetilen-trifenilfosforano, con un 1-alcoxi-1-trimetilsiloxietileno o con un fosfonoacetato de trialquilo, para dar el compuesto de la fórmula VII, y

c) se hace reaccionar el compuesto de la fórmula VII con guanidina para dar el compuesto de la fórmula I,

en donde, en los compuestos de las fórmulas IV, VI y VII,

R1 a R3 son como se han definido en la fórmula I, y

R5 es alcoxi con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

así como sus sales.

2. Procedimiento para preparar compuestos de la fórmula I según la reivindicación 1, en el que significan

\vocalinvisible

\textoinvisible

R1 y R2, cada uno de forma independiente, hidrógeno, F, Cl, trifluorometoxi, 2,2,2-trifluoroetoxi, trifluorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo o alquilo con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

R3

Alk-R4 o trifluorometilo;

Alk

alquilo con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

R4

hidrógeno, trifluorometilo o cicloalquilo con 3, 4, 5, 6 ó 7 átomos de C;

así como sus sales;

caracterizado porque

37

a) el compuesto de la fórmula II se hace reaccionar con la amina de la fórmula III para dar la amida de la fórmula IV,

b) la amida de la fórmula IV se formila en posición orto en la función amida para dar la formil-amida de la fórmula V,

c) la formil-amida de la fórmula V se cicla en el compuesto de la fórmula VI,

d) el compuesto de la fórmula VI se hace reaccionar con un alcoxicarbonilmetilen-trifenilfosforano, con un 1-alcoxi-1-trimetilsiloxietileno o con un fosfonoacetato de trialquilo, para dar el compuesto de la fórmula VII, y

e) el compuesto de la fórmula VII se hace reaccionar con guanidina para dar el compuesto de la fórmula I,

en donde, en los compuestos de las fórmulas II, III, IV, V, VI y VII,

R1 a R3 son, cada uno, como se han definido en la fórmula I,

R5 es alcoxi con 1, 2, 3, ó 4 átomos de C, y

X es Cl, Br, OH o alcoxi con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

así como sus sales.

3. Procedimiento según las reivindicaciones 1 y/ó 2, en el que las etapas del procedimiento se llevan a cabo, cada una de forma independiente, de manera continua o discontinua.

4. Procedimiento según una o más de las reivindicaciones 1, 2 ó 3, en el que el compuesto de la fórmula I se define como N-{2-[3-oxo-2-(2,2,2-trifluoroetil)-6-trifluorometil-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-il]-acetil}-guanidina, y sus sales farmacéuticamente aceptables.

5. Procedimiento para preparar compuestos de la fórmula I

38

en la que significan

\vocalinvisible

\textoinvisible

R1 y R2, cada uno de forma independiente, hidrógeno, F, Cl, trifluorometoxi, 2,2,2- trifluoroetoxi, trifluorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo o alquilo con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

R3

Alk-R4 o trifluorometilo;

Alk

alquilo con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

R4

hidrógeno, trifluorometilo o cicloalquilo con 3, 4, 5, 6 ó 7 átomos de C;

así como sus sales;

caracterizado porque

39

a) se hace reaccionar la amina de la fórmula IX, a través de una sal de diazonio, con un éster alquílico del ácido acrílico para dar el derivado del ácido cinámico de la fórmula XI,

b) se hace reaccionar el compuesto de la fórmula XI con la amina de la fórmula III y con guanidina para dar la acilguanidina de la fórmula I,

en donde, en los compuestos de las fórmulas III, IX y XI,

R1 a R3 son como se han definido en la fórmula I, y

R6 es alcoxi con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

así como sus sales.

6. Procedimiento para preparar compuestos de la fórmula I según la reivindicación 5, en el que significan

\vocalinvisible

\textoinvisible

R1 y R2, cada uno de forma independiente, hidrógeno, F, Cl, trifluorometoxi, 2,2,2- trifluoroetoxi, trifluorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo o alquilo con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

R3

Alk-R4 o trifluorometilo;

Alk

alquilo con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

R4

hidrógeno, trifluorometilo o cicloalquilo con 3, 4, 5, 6 ó 7 átomos de C;

así como sus sales;

caracterizado porque

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40

\vskip1.000000\baselineskip

a) se hacen reaccionar los compuestos nitrogenados de la fórmula VIII para dar la amina de la fórmula IX,

b) se hace reaccionar la amina de la fórmula IX para dar la sal de diazonio de la fórmula X,

c) se hace reaccionar la sal de diazonio de la fórmula X con un acrilato de alquilo para dar el derivado de ácido cinámico de la fórmula XI,

d) se hace reaccionar el compuesto de la fórmula XI para dar la amida de la fórmula XII, y

\newpage

e) se hace reaccionar el compuesto de la fórmula XII para dar la acilguanidina de la fórmula I, ya sea por reacción del compuesto de la fórmula XII, en presencia de una base, para dar el derivado de isoindolona de la fórmula XIII y, subsiguientemente, por reacción con guanidina, con activación, para dar la acilguanidina de la fórmula I (alternativa A), o, tras la formación del derivado de isoindolona de la fórmula XIII, en presencia de una base, desde el compuesto de la fórmula XII, por conversión del compuesto de la fórmula XIII en el éster de la fórmula XIV y, subsiguientemente, haciéndolo reaccionar con guanidina, para dar la acilguanidina de la fórmula I (alternativa B), o por reacción del compuesto de la fórmula XII en presencia de una base fuerte en el éster de la fórmula XIV y, subsiguientemente, haciéndolo reaccionar con guanidina, para dar la acilguanidina de la fórmula I (alternativa C), o

haciendo reaccionar directamente el compuesto de la fórmula XII con guanidina, en presencia de una base, con una guanilación y ciclación simultáneas, para dar la isoindolona de la fórmula I (alternativa D),

en donde, en los compuestos de las fórmulas VIII, IX, X, XI, XII, XIII y XIV,

R1 a R3 son, cada uno, como se han definido en la fórmula I, y

R6 y R7 son, cada uno de forma independiente, alcoxi con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

así como sus sales.

7. Procedimiento según la reivindicación 6, en el que en la etapa e) del procedimiento se utiliza la alternativa D.

8. Procedimiento según las reivindicaciones 6 y/ó 7, en el que las etapas d) y e) del procedimiento se llevan a cabo como procedimientos en un único recipiente.

9. Procedimiento según las reivindicaciones 5 y/ó 6, en el que las etapas del procedimiento se llevan a cabo, cada una de forma independiente, de manera continua o discontinua.

10. Procedimiento según una o varias de las reivindicaciones 5 a 9, en el que el compuesto de la fórmula I se define como N-{2-[3-oxo-2-(2,2,2-trifluoroetil)-6-trifluorometil-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-il]-acetil}-guanidina, así como sus sales farmacéuticamente aceptables.

11. Compuestos de la fórmula XII

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41

\vskip1.000000\baselineskip

en los que significan

\vocalinvisible

\textoinvisible

R1 y R2, cada uno de forma independiente, hidrógeno, F, Cl, trifluorometoxi, 2,2,2- trifluoroetoxi, trifluorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo o alquilo con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

R3

Alk-R4 o trifluorometilo;

Alk

alquilo con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

R4

hidrógeno, trifluorometilo o cicloalquilo con 3, 4, 5, 6 ó 7 átomos de C;

R6

alcoxi con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

así como sus sales.

12. Compuestos de la fórmula XII según la reivindicación 11, para utilizar como intermedios en la síntesis.

\newpage

13. Procedimiento para aislar compuestos de las fórmulas Ia y Ib

\vskip1.000000\baselineskip

42

\vskip1.000000\baselineskip

en que significan

R1 y R2, cada uno de forma independiente, hidrógeno, F, Cl, trifluorometoxi, 2,2,2- trifluoroetoxi, trifluorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo o alquilo con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

R3

Alk-R4 o trifluorometilo;

Alk

alquilo con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

R4

hidrógeno, trifluorometilo o cicloalquilo con 3, 4, 5, 6 ó 7 átomos de C;

así como sus sales;

caracterizado porque

\vskip1.000000\baselineskip

43

\vskip1.000000\baselineskip

a) se hace reaccionar el compuesto de la fórmula I para dar sales de un ácido D- o L-tartárico 2,3-O-acilado y se obtienen las dos sales de las fórmulas XVa y XVb de forma separada por cristalización, y

b) se liberan las bases libres de las fórmulas Ia y Ib de las dos sales de las fórmulas XVa y XVb, respectivamente,

en donde, en los compuestos de las fórmulas I, XVa y XVb,

R1 a R3 son como se han definido en las fórmulas Ia y Ib,

\newpage

R* significa

44

R8

significa alquilo con 1, 2, 3, 4, 5 ó 6 átomos de C o fenilo, que está no sustituido o sustituido con 1, 2 ó 3 sustituyentes del grupo de F, Cl, Br, I, alquilo con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C, o alcoxi con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C.

14. Procedimiento según la reivindicación 13, en el que el enantiómero no deseado de la fórmula Ia o Ib se vuelve a racemizar.

15. Procedimiento según las reivindicaciones 13 y/ó 14, en el que los compuestos de las fórmulas Ia y Ib son (R)-N-{2-[3-oxo-2-(2,2,2-trifluoroetil)-6-trifluorometil-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-il]-acetil}-guanidina y (S)-N-{2-[3-oxo-2-(2,2,2-trifluoroetil)-6-trifluorometil-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-il]-acetil}-guanidina.

16. Compuestos de las fórmulas XVa y/o XVb

45

en las que significan

\vocalinvisible

\textoinvisible

R1 y R2, cada uno de forma independiente, hidrógeno, F, Cl, trifluorometoxi, 2,2,2- trifluoroetoxi, trifluorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo o alquilo con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

R3

Alk-R4 o trifluorometilo;

Alk

alquilo con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C;

R4

hidrógeno, trifluorometilo o cicloalquilo con 3, 4, 5, 6 ó 7 átomos de C;

R* significa

46

R8

alquilo con 1, 2, 3, 4, 5 ó 6 átomos de C o fenilo, que está no sustituido o sustituido con 1, 2 ó 3 sustituyentes del grupo de F, Cl, Br, I, alquilo con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C o alcoxi con 1, 2, 3 ó 4 átomos de C.

17. Hidrógeno-fumarato de (S)-N-{2-[3-oxo-2-(2,2,2-trifluoroetil)-6-trifluorometil-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-il]-acetil}-guanidina hidrato de la fórmula XVI

47

18. Compuesto de la fórmula XVa o XVb según la reivindicación 16, o de la fórmula XVI según la reivindicación 17, para utilizar como medicamento.

19. Uso de un compuesto de las fórmulas XVa y/o XVb según la reivindicación 16, o de la fórmula XVI según la reivindicación 17, solo o en combinación con otros fármacos o ingredientes activos, para preparar un medicamento para el tratamiento o la profilaxis de lesiones agudas o crónicas, enfermedades o secuelas indirectas de órganos y tejidos causadas por episodios de isquemia o reperfusión, para el tratamiento o la profilaxis de arritmias, de la fibrilación ventricular cardiaca amenazante para la vida, del infarto de miocardio, de la angina de pecho, para el tratamiento o la profilaxis de estados isquémicos del corazón, de estados isquémicos del sistema nervioso periférico y central, o del ictus, o de estados isquémicos de órganos y tejidos periféricos, para el tratamiento o la profilaxis de estados de choque, de enfermedades en las que la proliferación celular representa una causa primaria o secundaria de cáncer, de metástasis, de hipertrofia prostática y de hiperplasia prostática, de aterosclerosis o de trastornos del metabolismo de los lípidos, de la hipertensión arterial, de la hipertensión esencial, de enfermedades del sistema nervioso central, de enfermedades resultantes de una sobre-excitabilidad del SNC, epilepsia o convulsiones de inducción central, de enfermedades del sistema nervioso central, en especial de estados de ansiedad, depresiones o psicosis, para el tratamiento o la profilaxis de la diabetes mellitus no insulino-dependiente (NIDDM), o lesiones tardías de la diabetes, de trombosis, de trastornos resultantes de la disfunción endotelial, de la claudicación intermitente, para el tratamiento o la profilaxis de trastornos fibróticos de órganos internos, trastornos fibróticos del hígado, trastornos fibróticos del riñón, trastornos fibróticos de vasos sanguíneos y trastornos fibróticos del corazón, para el tratamiento o la profilaxis de la insuficiencia cardiaca o de la insuficiencia cardiaca congestiva, de trastornos inflamatorios agudos o crónicos, de trastornos causados por protozoos, de la malaria o de la coccidiosis en aves de corral, y para usar en intervenciones quirúrgicas y trasplantes de órganos, para conservar y almacenar trasplantes para procedimientos quirúrgicos, para usar en operaciones de bypass, para usar en la resucitación tras un paro cardiaco, para prevenir los cambios tisulares relacionados con la edad, para preparar un medicamento dirigido contra el envejecimiento o para prolongar la vida, para el tratamiento y reducción de los efectos cardiotóxicos en la tirotoxicosis, o para preparar un agente de diagnóstico.

20. Agente curativo para uso humano, veterinario y/o fitoprotector, que contiene una cantidad efectiva de un compuesto de la fórmula XVa o XVb, según la reivindicación 16, junto con excipientes y aditivos farmacéuticamente aceptables.

21. Agente curativo para uso humano, veterinario y/o fitoprotector, que comprende una cantidad efectiva de un compuesto de la fórmula XVa o XVb, según la reivindicación 16, junto con excipientes y aditivos farmacéuticamente aceptables, en combinación con otros ingredientes activos farmacológicos o medicamentos.

22. Agente curativo para uso humano, veterinario y/o fitoprotector, que comprende una cantidad efectiva de un compuesto de la fórmula XVI, según la reivindicación 17, junto con excipientes y aditivos farmacéuticamente aceptables.

23. Agente curativo para uso humano, veterinario y/o fitoprotector, que comprende una cantidad efectiva del compuesto de la fórmula XVI, según la reivindicación 17, junto con excipientes y aditivos farmacéuticamente aceptables, en combinación con otros ingredientes activos farmacológicos o medicamentos.