ES2293419T3 - Bifidobacterias y preparaciones que las contienen. - Google Patents

Bifidobacterias y preparaciones que las contienen. Download PDF

Info

Publication number
ES2293419T3
ES2293419T3 ES05011028T ES05011028T ES2293419T3 ES 2293419 T3 ES2293419 T3 ES 2293419T3 ES 05011028 T ES05011028 T ES 05011028T ES 05011028 T ES05011028 T ES 05011028T ES 2293419 T3 ES2293419 T3 ES 2293419T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
bifidobacterium longum
preparations
oligosaccharides
strain
vitamins
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
ES05011028T
Other languages
English (en)
Inventor
Giuseppe Claudio Viscomi
Leone Gabriele Rotini
Lorenzo Morelli
Patrizio Ferrari
Maria Rosaria Pantaleo
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Alfa Wasserman SpA
Original Assignee
Alfa Wasserman SpA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Alfa Wasserman SpA filed Critical Alfa Wasserman SpA
Application granted granted Critical
Publication of ES2293419T3 publication Critical patent/ES2293419T3/es
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C19/00—Cheese; Cheese preparations; Making thereof
    • A23C19/02—Making cheese curd
    • A23C19/032—Making cheese curd characterised by the use of specific microorganisms, or enzymes of microbial origin
    • A23C19/0323—Making cheese curd characterised by the use of specific microorganisms, or enzymes of microbial origin using only lactic acid bacteria, e.g. Pediococcus and Leuconostoc species; Bifidobacteria; Microbial starters in general
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C19/00—Cheese; Cheese preparations; Making thereof
    • A23C19/06—Treating cheese curd after whey separation; Products obtained thereby
    • A23C19/061—Addition of, or treatment with, microorganisms
    • A23C19/062—Addition of, or treatment with, microorganisms using only lactic acid bacteria, e.g. pediococcus, leconostoc or bifidus sp., or propionic acid bacteria; Treatment with non-specified acidifying bacterial cultures
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
    • A23C9/1234—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt characterised by using a Lactobacillus sp. other than Lactobacillus Bulgaricus, including Bificlobacterium sp.
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
    • A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
    • A23K10/18—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions of live microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
    • A23K50/40—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for carnivorous animals, e.g. cats or dogs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/15—Vitamins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/745—Bifidobacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/10—Laxatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/12—Antidiarrhoeals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/14—Prodigestives, e.g. acids, enzymes, appetite stimulants, antidyspeptics, tonics, antiflatulents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/02—Nutrients, e.g. vitamins, minerals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/51—Bifidobacterium
    • A23V2400/533—Longum
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Un cultivo biológicamente puro de la cepa Bifidobacterium longum LMG P-21587.

Description

Bifidobacterias y preparaciones que las contienen.
La presente invención se refiere al uso de un microorganismo no patógeno del género Bifidobacterium longum con objeto de favorecer la salud gastrointestinal y en particular prevenir y/o tratar las indisposiciones del tracto gastrointestinal, particularmente del intestino.
Se conocen desde hace mucho tiempo muchos tipos de bacterias utilizadas como agentes de fermentación para conservación de alimentos o preparación de alimentos lácteos como yogur u otros productos lácteos; estas bacterias se designan bajo el término genérico de "bacterias de ácido láctico" y comprenden muchos géneros como Lactococcus, Lactobacillus, Streptococcus, Bifidobacterium y Pediococcus.
En fecha más reciente, estas bacterias están siendo objeto de mayor atención debido a que, una vez ingeridas, han demostrado propiedades notables en el hombre y los animales; en particular cepas de Lactobacillus o Bifidobacterium, administradas a veces juntas en combinación, han demostrado eficacia en la colonización de la mucosa intestinal y en la ayuda a la salud de las personas, por prevención de la colonización por otros microorganismos nocivos, como se indica en las Patentes U.S. 5.494.664 y 6.241.983 y en las Solicitudes de Patente Internacional WO 0033854 y WO 0110453.
Estos microorganismos se denominan también "probióticos" y un requisito fundamental para su efecto beneficioso es que los mismos puedan alcanzar la mucosa intestinal en tal número y con tal vitalidad que sean capaces de persistir y colonizar el intestino, para lo cual es necesario que resistan convenientemente al bajo pH del estómago.
La toma de productos probióticos está recomendada en el caso de indisposiciones intestinales, tales como estreñimiento o diarrea y después de períodos de tratamiento con antibióticos, es decir en particular en todas aquellas circunstancias que conducen a un empobrecimiento de la flora bacteriana intestinal y también en todas aquellas circunstancias en las cuales una alimentación pobre en fibras, las condiciones del entorno, o el estrés disminuyen la vitalidad de la flora bacteriana intestinal.
El restablecimiento de niveles adecuados de microorganismos presentes naturalmente en la flora bacteriana humana por utilización de cepas bacterianas bien caracterizadas y extraídas de la flora de personas sanas es el objetivo de una administración de este tipo.
La actividad colonizadora de microorganismos exógenos en el intestino depende de su concentración, de su capacidad para colonizar y de las condiciones del entorno que encuentran aquéllos en el intestino, debido a que la administración de una cantidad mayor, una alta capacidad de colonización y condiciones de entorno adecuadas contribuyen a su efecto protector y curativo mediante la colonización de grandes porciones en el interior del intestino sin efectos secundarios dado que los mismos son productos de origen natural. En particular, debe subrayarse que la posible presencia de fibras alimenticias, como por ejemplo inulina o fructo-oligosacáridos, contribuye en gran medida a la colonización debido a que estos compuestos son un sustrato para el producto probiótico y por consiguiente aumentan las posibilidades de colonización. Dichos oligosacáridos han sido denominados también "prebióticos" debido a su acción sinérgica con el probiótico.
Descripción de la invención
Cultivos biológicamente puros de dos cepas de Bifidobacterium longum denominadas W11 y W11a, depositadas en las Colecciones Coordinadas Belgas de Microorganismos - BCCM LMG-Collection, que ha registrado las mismas bajo los números de acceso LMG P-21586 y LMG P-21587. La invención se refiere a un cultivo biológicamente puro de la cepa Bifidobacterium longum LMG P-21587 (W11a), su uso como producto probiótico con preparaciones de tipo farmacéutico o alimentario y las preparaciones de tipo farmacéutico o alimentario que contienen el mismo, útiles para favorecer la salud gastrointestinal y prevenir y tratar las patologías intestinales son el objeto de la presente invención.
Las dos cepas de Bifidobacterium longum W11 (cepa de referencia) y W11a han sido aisladas de la flora bacteriana intestinal de un hombre sano y se han seleccionado entre muchas otras cepas de Bifidobacterium longum aisladas al mismo tiempo debido a que han demostrado capacidad colonizadora en la flora bacteriana intestinal y capacidad de adherencia a las células intestinales, características ambas que, juntas, hacen de ellas agentes probióticos muy satisfactorios capaces de favorecer la buena salud del tracto gastrointestinal y restablecer su funcionalidad alterada por gastroenteritis de origen diverso.
El cultivo bacteriano objeto de la presente invención se ha producido primeramente en laboratorio y posteriormente en preparaciones industriales y está compuesto de cepas puras que se han desarrollado durante 20 horas a 37ºC en un medio de cultivo adecuado denominado TPY que contiene como ingredientes principales caseína-peptona tríptica, peptona de soja, extracto de levadura y glucosa además de sales de potasio, calcio, magnesio y cinc.
A partir de estos cultivos primarios se han preparado subcultivos subsiguientes con la finalidad de aumentar el número de células de cepas puras hasta obtener los cultivos madre que se han utilizado como inoculación para la producción industrial del cultivo bacteriano del material probiótico Bifidobacterium longum W11a.
El proceso de producción industrial de dicho cultivo bacteriano prevé los pasos siguientes:
1.
fermentación a un pH controlado entre 5,5 y 7,5;
2.
separación de la biomasa bacteriana del caldo de cultivo por centrifugación;
3.
liofilización de la biomasa bacteriana, después de adición de crioprotectores adecuados seleccionados de proteidos, carbohidratos y sales minerales para salvaguardar la vitalidad de las células a lo largo del paso de congelación y liofilización, posiblemente también con adición de un precipitado proteico con la finalidad de aumentar la resistencia de la cepa a la degradación enzimática y a condiciones de pH ácido;
4.
molienda y granulación del cultivo liofilizado.
El producto así preparado contiene un promedio de aproximadamente 1 x 10^{10} a aproximadamente 1 x 10^{12} células vivas de Bifidobacterium longum W11a por cada gramo de producto final, analizado de acuerdo con métodos microbiológicos de recuento bacteriano conocidos por las personas expertas en la técnica, como por ejemplo los consignados en Ison A.P. y Matthew G.B., Applied Microbial Physiology, a Practical Approach, compiladores Rhodes P.M. y Stanbury P.F. - IRL Press Oxford, 103-130, 1997.
El cultivo bacteriano se ha comprobado en ensayos de colonización del intestino de ratones con resultados positivos dado que el recuento de la cantidad de carga bacteriana de Bifidobacterium longum LMG P-21586 ha exhibido un valor mayor que 1 x 10^{6} células vivas por cada gramo de heces de ratón.
Objeto adicional de la presente invención, partiendo estrictamente del objeto principal, es el uso del cultivo biológicamente puro obtenido de las cepas de Bifidobacterium longum W11a como material probiótico en preparaciones de tipo farmacéutico o alimentario útiles para favorecer la salud gastrointestinal y en la prevención y el tratamiento de las patologías intestinales tales como diarreas, gastroenteritis de diverso origen, estreñimiento, intestino irritable, enfermedad diverticular y enfermedades inflamatorias crónicas del intestino. La eficacia de los cultivos bacterianos que contienen el Bifidobacterium longum W11a para favorecer la salud gastrointestinal puede incrementarse añadiendo a las preparaciones de tipo farmacéutico o alimentario que las contienen fibras alimenticias en la forma de oligosacáridos indigeribles, por ejemplo fructo-oligosacáridos o inulina, que no son absorbidos ni hidrolizados en el primer tracto del intestino y refuerzan la actividad y estimulan el metabolismo de las cepas de Bifidobacterium longum LMG P-21587 con desventaja de las bacterias patógenas. Los oligosacáridos preferidos en la realización de la presente invención son mezclas de fructo-oligosacáridos constituidas por una unidad básica consistente en una molécula de glucosa (G), unida a una cadena de moléculas de fructosa (F) de fórmula general GFn, con n \leq 4, teniendo un grado de polimerización, es decir un número de unidades de monosacárido, comprendido entre 2 y 20. Los fructo-oligosacáridos utilizados como materiales prebióticos asociados con los dos tipos de materiales probióticos objeto de la presente invención tienen un grado de polimerización entre 2 y 10, preferiblemente entre 3 y 6.
Las preparaciones objeto de la presente invención pueden contener, junto con diversos excipientes tales como edulcorantes, por ejemplo aspartamo, manitol o sorbitol, sustancias saborizantes y colorantes, vitaminas, preferiblemente vitaminas de los grupos E, B1, B2, B6 y B12, que tienen la finalidad de favorecer adicionalmente la salud por restablecimiento del componente vitamínico que sufre una disminución acusada durante las patologías del tracto intestinal.
Objeto de la presente invención son tanto preparaciones farmacéuticas como productos alimentarios que contienen cultivos bacterianos de Bifidobacterium longum denominado W11a y registrados con el número de acceso LMG P-21587, opcionalmente en asociación con materiales prebióticos, preferiblemente fructo-oligosacáridos o inulina, y/o vitaminas, preferiblemente vitaminas de los grupos E, B1, B2, B6 y B12.
Las preparaciones farmacéuticas están hechas preferiblemente de composiciones administrables por vía oral en forma de cápsulas, tabletas, sobres, trociscos, suspensiones líquidas, suplementos orales secos, suplementos orales líquidos, viales y algunos otros que contienen una carga bacteriana de células vivas de Bifidobacterium longum W11a entre 1 x 10^{7} y 1 x 10^{11} al final del periodo de estabilidad.
Dichas preparaciones farmacéuticas pueden contener también agentes prebióticos como los fructo-oligosacáridos o la inulina, preferiblemente de 0,5 a 5 g de fructo-oligosacárido por cada dosis, más preferiblemente de 1 a 3 g, y/o vitaminas, preferiblemente vitaminas de los grupos E, B1, B2, B6 y B12. Cantidades de material probiótico de 1 x 10^{7} a 1 x 10^{11} de células vivas de Bifidobacterium longum pueden incorporarse también en la fabricación de muchas clases de productos alimentarios tales como leche, yogur, quesos frescos tales como ricotta, stracchino y mozzarella (clases de queso italiano), helados, productos fabricados a partir de leche fermentada, productos constituidos por cereales fermentados, leche en polvo, productos para niños y productos para animales domésticos. Los ensayos para la comprobación del recuento bacteriano han demostrado que la cepa de Bifidobacterium longum objeto de la presente invención es resistente, por lo que no sufre una mortalidad notable durante los procesos tecnológicos de producción de las preparaciones farmacéuticas o alimenticias, o a todo lo largo del período normal de almacenamiento de la misma. De hecho, estas preparaciones bacterianas se han sometido a ensayos de estabilidad que han demostrado una resistencia extremadamente satisfactoria de la cepa bacteriana a la temperatura ambiente, por lo que su venta puede continuarse durante no menos de dos años después de su fabricación.
Los ejemplos consignados más adelante en esta memoria son útiles para una ilustración adicional de la invención y no deben considerarse como limitación de la misma.
Ejemplo 1 Método de fabricación del cultivo bacteriano de la cepa Bifidobacterium longum W11 (Ejemplo de Referencia)
El "cultivo primario" de la cepa de Bifidobacterium longum W11 utilizado como inoculación de las fermentaciones industriales es exactamente el mismo que el depositado en las Colecciones Coordinadas Belgas de Microorganismos - BCCM LMG-Collection - Laboratorium voor Microbiologie, Universidad de Gante, que al aceptar la cepa expedida ha ratificado la pureza y la vitalidad de la cepa, y ha registrado la misma con el número de acceso LMG P-21586.
Para obtener este "cultivo primario" dicha cepa se ha dejado crecer en un medio de cultivo denominado TPY que tiene la composición siguiente referida a un litro:
- Peptona tríptica de caseína
10 g
- Peptona de soja
5 g
- Extracto de levadura
5 g
- Glucosa
10 g
- K_{2}HPO_{4} anhidro
2 g
- MgCl_{2}\cdot6H_{2}O
0,5 g
- ZnSO_{4}\cdot7H_{2}O
0,25 g
- CaCl_{2}\cdot2H_{2}O
0,15 g
- Tween 80
1 ml
- Hidrocloruro de cisteína
0,5 g
- Agua bidestilada
cs hasta 1000 ml
El crecimiento se ha llevado a cabo a 37ºC durante 20 horas y después de ello el cultivo se ha distribuido, con la adición de crioprotectores adecuados seleccionados de proteidos, carbohidratos y sales minerales, en viales que se han congelado y guardado en nitrógeno líquido a -196ºC.
Partiendo del "cultivo primario", con un porcentaje de inoculación de 3%, se han preparado 3 subcultivos con la finalidad de aumentar el número de células de la cepa bacteriana.
El último subcultivo de aproximadamente 10 litros, denominado "cultivo madre", se ha utilizado para inocular el reactor del "cultivo intermedio" que tenía una capacidad de aproximadamente 300 litros.
El proceso subsiguiente de fabricación industrial del cultivo biológicamente puro de Bifidobacterium longum W11 comprende los pasos siguientes:
1.
fermentación a un pH controlado entre 6,5 y 7,0;
2.
separación de la biomasa bacteriana del caldo de cultivo;
3.
protección de la biomasa bacteriana por medio de una solución de crioprotectores seleccionados de proteidos, carbohidratos y sales minerales con la finalidad de salvaguardar la vitalidad de las células durante los pasos subsiguientes de congelación y liofilización, y posiblemente también por inclusión en un precipitado proteico con la finalidad de proporcionar también a la cepa resistencia a la degradación enzimática y a condiciones de pH ácido;
4.
liofilización;
5.
molienda y granulación del cultivo liofilizado;
6.
mezcla del cultivo liofilizado;
7.
envasado.
El producto obtenido contiene aproximadamente 8 \textdiv 10 x 10^{10} células vitales por cada gramo.
Ejemplo 2 Método de fabricación del cultivo bacteriano de la cepa de Bifidobacterium longum W11a
El cultivo bacteriano biológicamente puro de Bifidobacterium longum W11a se ha preparado de acuerdo con el método descrito en el Ejemplo 1 a partir de un "cultivo primario" de la cepa de Bifidobacterium longum que corresponde exactamente a la depositada en las Colecciones Coordinadas Belgas de Microorganismos - BCCM LMG - Collection - Laboratorium Voor Microbiologie, Universidad de Gante, que ha ratificado la pureza y la vitalidad de la cepa y ha registrado la misma con el número de acceso LMG P-21587.
Ejemplo 3 Ensayos de colonización in vivo (Ejemplo de Referencia)
Los ensayos se han llevado a cabo en 4 grupos de 2 ratones, habiendo recibido cada ratón dos dosis, la segunda 16 horas después de la primera, de una solución de glucosa que contenía Bifidobacterium longum LMG P-21586 a una concentración igual a 1,6 x 10^{9} CFU (unidades formadoras de colonias)/60 \mul.
La capacidad de la cepa en cuanto a la colonización del intestino de estos ratones se ha comprobado por cálculo de la cantidad de Bifidobacterium longum presente en las heces: la primera toma de muestras se ha realizado antes de iniciar las administraciones, mientras que las tomas de muestras subsiguientes se han realizado respectivamente 2, 4, 8, 24, y 48 horas después de la segunda administración. La cantidad de la cepa de Bifidobacterium longum encontrada en las heces ha estado situada en la región de 10^{6} CFU/g, demostrando así que ha tenido lugar colonización. En particular, se ha encontrado que el Bifidobacterium longum resulta ser el componente principal de la flora bacteriana con respecto a todas las cepas de bifidobacterias encontradas en las heces.
Ejemplo 4 Formulación en bolsas en asociación con fructo-oligosacáridos y vitaminas (Ejemplo de Referencia)
Se consigna como ejemplo la preparación de bolsas, cada una de las cuales pesa 3 g para disolución en agua o leche y que contiene 250 mg de cultivo bacteriano biológicamente puro correspondiente a aproximadamente 2 x 10^{10} células vivas de Bifidobacterium longum W11, 2500 mg de fructo-oligosacáridos y vitaminas de los grupos B1, B2, B6 y B12.
En particular, se ha utilizado como fructo-oligosacárido el producto disponible comercialmente denominado
Actilight® 950P compuesto de una mezcla de fructo-oligosacáridos formados por una cadena de moléculas de fructosa unidas a una molécula de glucosa de fórmula general GFn con n \leq 4 y con un grado de polimerización entre 2
y 10.
La composición cuali-cuantitativa detallada de las bolsas es como sigue:
1
2
Método de preparación
Se lleva a cabo un primer paso de mezcladura de las vitaminas con una parte alícuota de Actilight® 950P, seguido por tamizado sobre un tamiz que tiene 0,5 mm de abertura de malla. Esta primera mezcla se añade a una segunda parte alícuota de Actilight® 950P y se lleva a cabo un segundo paso de mezcladura. Por último, se añaden el cultivo bacteriano de Bifidobacterium longum W11, la parte alícuota restante de Actilight® 950P y los otros componentes de la formulación, con mezcladura adicional seguida por un tamizado final sobre un tamiz de 0,8 mm.
El producto se distribuye luego en bolsas de aluminio que pesan 3 g. El proceso tecnológico de preparación de las bolsas no causa deterioro alguno a la vitalidad de la cepa.
Ensayos de estabilidad
Los ensayos de estabilidad se han llevado a cabo sobre las bolsas midiendo la carga bacteriana en el tiempo cero y respectivamente después de 1, 2 y 3 meses de almacenamiento a 22ºC para fijar así el tiempo de semi-vida. El análisis de los datos después de 1, 2 y 3 meses ha demostrado que la mortalidad ha sido muy baja en estos periodos de tiempo, resultando que al cabo de dos años el número de células vivas para cada dosis no es inferior a 5 x 10^{9} células en la formulación de bolsas indicada anteriormente. Dicho resultado demuestra que esta preparación es perfectamente adecuada para los objetivos que pretende alcanzar la presente invención.
Ejemplo 5
(Ejemplo de Referencia)
Formulaciones de cápsulas blandas de gel en asociación con vitaminas
Se han preparado cápsulas blandas de gel con la composición cuali-cuantitativa siguiente:
3
obteniendo una suspensión homogénea del cultivo bacteriano de Bifidobacterium longum W11, las vitaminas, la lecitina de soja y los mono- y diglicéridos de los ácidos grasos en lecitina de soja, distribuyendo dicha suspensión en cápsulas ovaladas de tamaño 7,5 hechas de gelatina alimenticia, glicerol, dióxido de titanio y óxido de hierro amarillo.

Claims (8)

1. Un cultivo biológicamente puro de la cepa Bifidobacterium longum LMG P-21587.
2. Uso del cultivo biológicamente puro de acuerdo con la reivindicación 1 como material probiótico para la fabricación de preparaciones de tipo farmacéutico o alimentario a fin de favorecer la salud gastrointestinal y prevenir y tratar patologías intestinales.
3. Preparaciones de tipo farmacéutico o alimentario que contienen una carga bacteriana entre 1 x 10^{7} y 1 x 10^{11} células vivas procedentes de un cultivo biológicamente puro producido a partir de la cepa de Bifidobacterium longum LMG P-21587.
4. Preparaciones de acuerdo con la reivindicación 3, caracterizadas porque contienen un material prebiótico en forma de oligosacáridos.
5. Preparaciones de acuerdo con la reivindicación 4, caracterizadas porque los oligosacáridos son fructo-oligosacáridos con un grado de polimerización entre 2 y 10 o inulina.
6. Preparaciones de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 3 a 5, caracterizadas porque contienen vitaminas.
7. Preparaciones de acuerdo con la reivindicación 6, caracterizadas porque las vitaminas son las vitaminas E, B1, B2, B6 y B12.
8. Preparaciones de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 3 a 7, caracterizadas porque se seleccionan de cápsulas, tabletas, sobres, trociscos, suspensiones líquidas, suplementos orales secos, suplementos orales líquidos, viales, leche, yogur, queso fresco, helados, productos fabricados a partir de cereales fermentados, leche en polvo, productos para niños y productos para animales domésticos.
ES05011028T 2002-09-06 2003-06-23 Bifidobacterias y preparaciones que las contienen. Expired - Lifetime ES2293419T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IT000564A ITBO20020564A1 (it) 2002-09-06 2002-09-06 Bifidobatteri e preparazioni che li contengono.
ITBO02A0564 2002-09-06

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2293419T3 true ES2293419T3 (es) 2008-03-16

Family

ID=31726535

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES03013441T Expired - Lifetime ES2268226T3 (es) 2002-09-06 2003-06-23 Basterias bifidobacterium longun y preparaciones que las contienen.
ES05011028T Expired - Lifetime ES2293419T3 (es) 2002-09-06 2003-06-23 Bifidobacterias y preparaciones que las contienen.

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES03013441T Expired - Lifetime ES2268226T3 (es) 2002-09-06 2003-06-23 Basterias bifidobacterium longun y preparaciones que las contienen.

Country Status (13)

Country Link
US (1) US6960341B2 (es)
EP (2) EP1609852B1 (es)
JP (1) JP4011532B2 (es)
KR (1) KR100574455B1 (es)
CN (1) CN100386427C (es)
AT (2) ATE376053T1 (es)
CA (1) CA2436752C (es)
DE (2) DE60316995T2 (es)
DK (2) DK1398369T3 (es)
ES (2) ES2268226T3 (es)
IT (1) ITBO20020564A1 (es)
PT (2) PT1398369E (es)
SI (2) SI1398369T1 (es)

Families Citing this family (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7029702B2 (en) * 1998-07-07 2006-04-18 Ritter Natural Sciences Llc Method for increasing lactose tolerance in mammals exhibiting lactose intolerance
US10066254B2 (en) 2002-05-20 2018-09-04 Cedars-Sinai Medical Center Diagnosis of constipation by analysis of methane concentration
EP2251017B1 (en) 2002-05-20 2015-03-25 Cedars-Sinai Medical Center Manipulation of the rate of gastrointestinal transit by modulating intestinal methane concentration
RU2006108554A (ru) * 2003-08-18 2007-09-27 Дзе Байо Бэлэнс Корпорейшн (Us) Устойчивая жидкая пробиотическая композиция, ее получение и применения
WO2006012536A2 (en) * 2004-07-22 2006-02-02 Ritter Andrew J Methods and compositions for treating lactose intolerance
US20100233312A9 (en) * 2005-04-11 2010-09-16 The Procter & Gamble Company Compositions comprising probiotic and sweetener components
WO2007138538A2 (en) 2006-05-28 2007-12-06 Cipla Medpro Research And Development (Pty) Ltd Probiotic strain and antimicrobial peptide derived therefrom
US8557233B2 (en) * 2007-03-28 2013-10-15 Alimentary Heath Limited Probiotic bifidobacterium strains
CN101998859B (zh) * 2008-03-18 2014-03-05 亚历山大·弗拉基米罗维奇·季科夫斯基 用于预防与抗生素肠道给药相关的生态失调的药物组合物
US9771199B2 (en) 2008-07-07 2017-09-26 Mars, Incorporated Probiotic supplement, process for making, and packaging
US20110189148A1 (en) * 2008-06-25 2011-08-04 Ritter Pharmaceuticals, Inc. Lactose compositions with decreased lactose content
ES2331863B1 (es) * 2008-07-15 2010-10-27 Consejo Superior De Investigaciones Cientificas (Csic) Bacterias y productos derivados para fortalecer las defensas y reducir el riesgo de enfermedad.
KR101017448B1 (ko) * 2008-09-18 2011-02-23 주식회사한국야쿠르트 대장의 건강 증진 효능을 갖는 비피도박테리움 롱검 에이취와이8004 및 이를 유효성분으로 함유하는 제품
WO2010098822A1 (en) 2009-02-24 2010-09-02 Ritter Pharmaceuticals, Inc. Prebiotic formulations and methods of use
CN101649303B (zh) * 2009-05-08 2011-09-28 内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司 一种双歧杆菌及其应用和含有双歧杆菌的食品组合物
JP2012526752A (ja) * 2009-05-11 2012-11-01 ネステク ソシエテ アノニム ビフィドバクテリウム・ロンガムｎｃｃ２７０５（ｃｎｃｍｉ−２６１８）及び免疫障害
EP2270134A1 (en) * 2009-07-03 2011-01-05 Nestec S.A. Oxidative stress resistant Bifidobacteria
WO2011137249A1 (en) 2010-04-28 2011-11-03 Ritter Pharmaceuticals, Inc. Prebiotic formulations and methods of use
RU2470518C1 (ru) * 2011-05-27 2012-12-27 Закрытое акционерное общество "АЛЕВ" Молочный йогурт с пробиотическими культурами
US9173910B2 (en) 2012-02-29 2015-11-03 The General Hospital Corporation Compositions of microbiota and methods related thereto
US9289418B2 (en) 2013-03-15 2016-03-22 Cedars-Sinai Medical Center Methods of diagnosis, selection, and treatment of diseases and conditions caused by or associated with methanogens
EP2967060A4 (en) 2013-03-15 2016-11-23 Cedars Sinai Medical Center METHODS OF DIAGNOSING, SELECTING AND TREATING DISEASES AND CONDITIONS CAUSED BY OR ASSOCIATED WITH METHANOGENIC BACTERIA
CN104095180A (zh) * 2013-04-12 2014-10-15 中国科学院烟台海岸带研究所 一种益生菌菊粉片及其制备方法
US10633714B2 (en) 2013-07-21 2020-04-28 Pendulum Therapeutics, Inc. Methods and systems for microbiome characterization, monitoring and treatment
WO2016025762A1 (en) 2014-08-13 2016-02-18 Cedars-Sinai Medical Center Anti-methanogenic compositions and uses thereof
CA2964480A1 (en) 2014-10-31 2016-05-06 Whole Biome Inc. Methods and compositions relating to microbial treatment and diagnosis of disorders
US10736871B2 (en) 2015-04-01 2020-08-11 Cedars-Sinai Medical Center Anti-methanogenic lovastatin analogs or derivatives and uses thereof
US20180125902A1 (en) * 2015-04-30 2018-05-10 Probiotical S.P.A. Use of antibiotics with specific therapeutic activities combined with the simultaneous use of lactobacilli and/or bifidobacteria with a non-transferable antibiotic resistance, having the same therapeutic indication
BR112017026298A2 (pt) 2015-06-08 2018-09-11 Chr Hansen As produtos de bala de goma e de bala de marshmallow à base de glicerina com bactérias probióticas
CN105112333A (zh) * 2015-08-31 2015-12-02 江南大学 一种具有良好肠道定殖能力的长双歧杆菌及筛选方法和应用
PL3554283T3 (pl) 2016-12-14 2021-04-19 Chr. Hansen A/S Wyroby w postaci cukierków piankowych na bazie gliceryny i białka z bakteriami probiotycznymi
EP3577213B1 (en) * 2017-01-31 2024-06-05 Kansas State University Research Foundation Microbial cells, methods of producing the same, and uses thereof
CN106978340B (zh) * 2017-06-04 2018-01-30 合肥职业技术学院 一种双歧杆菌专用培养装置
EP3675882A4 (en) 2017-08-30 2021-07-28 Pendulum Therapeutics, Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF MICROBIOMA ASSOCIATED DISORDERS
CN110438042A (zh) * 2019-07-23 2019-11-12 广东益可维健康科技有限公司 一株长双歧杆菌及其应用
KR102607676B1 (ko) * 2019-12-04 2023-11-29 선 바이오 (주) 내산소성 비피도박테리움 균주를 유효성분으로 포함하는 반려동물용 생균제 조성물 및 이의 제조방법
CN112353823A (zh) * 2020-12-16 2021-02-12 梁爱军 一种能在胃肠同时发挥作用的益生菌液
CN112715660A (zh) * 2021-01-18 2021-04-30 润盈生物工程（上海）有限公司 一种干预慢性肾炎及尿毒症的长双歧杆菌膳食组合及应用
CN115474695B (zh) * 2021-05-31 2024-01-19 仙乐健康科技股份有限公司 一种调节宿主肠道微生物平衡的制剂

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK0768375T4 (da) * 1992-07-06 2002-09-16 Nestle Sa Mælkesyrebakterier
US6241983B1 (en) * 1994-10-28 2001-06-05 Metagenics, Inc. Bacteria-and fiber-containing composition for human gastrointestinal health
US6306638B1 (en) * 1996-10-22 2001-10-23 Food Industry Research And Development Institute Mutant bifidobacteria strains with acid, bile salt and oxygen tolerance
EP0856259B1 (en) * 1996-12-23 1998-08-12 SITIA-YOMO S.p.A. Composition for feed use comprising lyophilized live lactic bacteria
PT931543E (pt) * 1997-12-19 2002-09-30 Merck Patent Gmbh Comprimidos de varias camadas contendo microorganismos probioticos como por exemplo lactobacilus ou bifidobacterias
AU2202099A (en) 1997-12-26 1999-07-19 Research Development Foundation Mammalian circadian regulator (m-rigui2 (m-per2))
KR20010074845A (ko) 1998-08-24 2001-08-09 마틴 씨. 바루크 맥박 전이 시간 측정 장치 및 측정 방법
NL1010770C2 (nl) * 1998-12-09 2000-06-13 Nutricia Nv Preparaat dat oligosacchariden en probiotica bevat.
TR200200300T2 (tr) * 1999-08-05 2003-03-21 Societe Des Produits Nestle S.A. İshali önlemeye elverişli bifidobakteriler.

Also Published As

Publication number Publication date
PT1398369E (pt) 2006-12-29
DK1609852T3 (da) 2007-12-27
CA2436752A1 (en) 2004-03-06
SI1398369T1 (sl) 2006-12-31
EP1398369A1 (en) 2004-03-17
ATE376053T1 (de) 2007-11-15
CN100386427C (zh) 2008-05-07
ES2268226T3 (es) 2007-03-16
JP2004097222A (ja) 2004-04-02
DE60307191D1 (de) 2006-09-14
PT1609852E (pt) 2008-01-25
US6960341B2 (en) 2005-11-01
EP1609852A1 (en) 2005-12-28
JP4011532B2 (ja) 2007-11-21
KR100574455B1 (ko) 2006-04-27
EP1609852B1 (en) 2007-10-17
US20040047850A1 (en) 2004-03-11
DE60307191T2 (de) 2007-07-26
CA2436752C (en) 2010-02-02
DE60316995T2 (de) 2008-07-24
ITBO20020564A1 (it) 2004-03-07
ATE335071T1 (de) 2006-08-15
SI1609852T1 (sl) 2008-02-29
KR20040022386A (ko) 2004-03-12
DE60316995D1 (de) 2007-11-29
DK1398369T3 (da) 2006-10-23
CN1480528A (zh) 2004-03-10
EP1398369B1 (en) 2006-08-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2293419T3 (es) Bifidobacterias y preparaciones que las contienen.
US10583158B2 (en) Compositions comprising bacterial strains
TWI802545B (zh) 包含細菌菌株之組合物
ES2437940T3 (es) Composición probiótica para uso en el tratamiento de la inflamación del intestino
ES2568955T3 (es) Microorganismos metabólicamente activos y métodos para su producción
US20100166721A1 (en) Probotic compositions and uses thereof
US20110165127A1 (en) Dairy-derived probiotic compositions and uses thereof
BR112013031659B1 (pt) Uso de uma composição
BRPI0314060B1 (pt) composição compreendendo variante ou componente de variante de lactobacillus fermentum e usos da variante ou componente de variante de lactobacillus fermentum e da composição
CN107927794A (zh) 一种益生菌功能食品组合物及其制备方法
CA3138520C (en) Probiotic bacterial strains that produce short chain fatty acids and compositions comprising same
ES2760256T3 (es) Composición
CN110150667A (zh) 一种提升免疫力并调节肠道功能的保健品及其制备方法
KR20220018964A (ko) 더 큰 내약성 및 연장된 저장 수명을 위한 미생물 조성물 및 방법
US11224620B2 (en) Compositions comprising bacterial strains
ES2239341T3 (es) Uso de una preparacion deshidratada que contiene bacterias propionicas para la preparacion de una composicion dietetica absorbible susceptible de mejorar el equilibrio biologico de la flora del tracto intestinal.
BR102022021803A2 (pt) Processo de produção e aplicação de metabólitos de probióticos na inibição de microrganismos patogênicos
WO2022271002A1 (es) Alimento en fermentación dinámica controlada para bacteriostasis de microorganismos benéficos manteniéndolos vivos y metabólicamente activos para consumo humano