ES2267149T3 - Nuevos derivados de criptoficina como agentes antineoplasicos. - Google Patents

Nuevos derivados de criptoficina como agentes antineoplasicos. Download PDF

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Rima S. Al-Awar
William J. Ehlhardt
Subbaraju V. Gottumukkala
Michael J. Martinelli
Eric D. Moher
Richard E. Moore
John E. Munroe
Bryan H. Norman
Vinod F. Patel
Chuan Shih
John E. Toth
Venkatraghavan Vasudevan
James E. Ray
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Wayne State University
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Wayne State University
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Abstract

ESTA INVENCION SE REFIERE A NUEVOS COMPUESTOS DE CRIPTOFICINA, QUE PUEDEN SER UTILES PARA LA INTERRUPCION DEL SISTEMA DE LA MICROTUBULINA, COMO AGENTES ANTINEOPLASTICOS EN EL TRATAMIENTO DEL CANCER. ESTA INVENCION SE REFIERE TAMBIEN A UNA FORMULACION DESTINADA A LA ADMINISTRACION DE LOS NUEVOS COMPUESTOS DE CRIPTOFICINA.

Description

Nuevos derivados de criptoficina como agentes antineoplásicos.
Esta invención se refiere a los campos de la química farmacéutica y orgánica, y proporciona nuevos compuestos de criptoficina útiles como agentes anti microtubulares.
Las enfermedades neoplásicas, caracterizadas por la proliferación de células no sujetas al control normal del crecimiento celular, son la principal causa de muerte en los seres humanos y otros mamíferos. La experiencia química en la quimioterapia del cáncer ha demostrado que son deseables fármacos nuevos y más efectivos para tratar estas enfermedades.
El sistema de microtúbulos de las células eucariotas es un componente principal del citoesqueleto y es un ensamblaje y desensamblaje dinámico; esto es, los heterodímeros de tubulina se polimerizan y forman los microtúbulos. Los microtúbulos juegan un papel clave en la regulación de la arquitectura, metabolismo y división celular. El estado dinámico de los microtúbulos es crítico para su funcionamiento normal. Con respecto a la división celular, la tubulina se polimeriza en los microtúbulos que forman el huso mitótico.
A continuación los microtúbulos se despolimerizan cuando ha concluido el papel del huso mitótico. De acuerdo con esto, los agentes que interrumpen la polimerización o despolimerización de los microtúbulos, e inhiben por tanto la mitosis, comprenden algunos de los agentes quimioterapéuticos más efectivos del cáncer en el uso clínico.
De manera adicional, los compuestos reivindicados en el presente documento poseen también propiedades fungicidas. De manera adicional, dichos agentes que tienen la capacidad de interrumpir el sistema de microtúbulos pueden ser útiles con objetivos de investigación.
Se conocen algunos compuestos de criptoficina en la bibliografía; sin embargo, siempre se han deseado compuestos que tengan mayor solubilidad y estabilidad para la mayor parte de usos farmacéuticos. De manera adicional, una librería genérica de compuestos de criptoficina proporcionaría opciones de tratamiento adicional para el paciente que padece cáncer. Los solicitantes han descubierto ahora nuevos compuestos que pueden proporcionar mayor solubilidad en agua así como compuestos que tienen la capacidad de interrumpir el sistema de microtúbulos. Los compuestos de esta invención pueden ser útiles para el tratamiento de los neoplasmas. Se pueden preparar dichos compuestos usando procedimientos sintéticos totales, y son por tanto muy adecuados para el desarrollo como agentes farmacéuticamente útiles.
La invención reivindicada en el presente documento proporciona compuestos de acuerdo con la fórmula (I)
1
en la que:
Ar se selecciona entre fenilo, un grupo aromático no sustituido, un grupo aromático sustituido con un átomo de halógeno o un grupo alquilo C_{1}-C_{7}, un grupo heteroaromático de 3 a 8 miembros no sustituidos, alquilo C_{1}-C_{12}, alquenilo C_{2}-C_{12}, alquinilo C_{2}-C_{12}, NR^{51}R^{52}, OR^{53}, y un grupo de fórmula Ar';
2
R^{1} se selecciona entre halógeno y OH;
R^{2} es halógeno u OR^{31}, con la condición de que, pero no ambos, de R^{1} y R^{2} sea halógeno;
R^{3} es un grupo alquilo C_{1}-C_{6};
R^{4} es H u OH;
R^{5} es H u OH; o R^{4} y R^{5} pueden tomarse de forma conjunta para formar un segundo enlace entre C_{13} y C_{14};
R^{6} se selecciona entre los grupos bencilo, hidroxibencilo, (alcoxi C_{1}-C_{3})bencilo, halohidroxibencilo, dihalodihidroxibencilo, halo(alcoxi C_{1}-C_{3})bencilo y dihalo(alcoxi C_{1}-C_{3})bencilo
R^{7} es H o un grupo alquilo C_{1}-C_{6} inferior;
R^{8} es H o un grupo alquilo C_{1}-C_{6} inferior;
R^{9} es H o un grupo alquilo C_{1}-C_{6} inferior;
R^{10} es H o un grupo alquilo C_{1}-C_{6} inferior;
R^{11} es hidrógeno;
R^{31} es R^{32};
R^{32} se selecciona entre los aminoácidos que se producen de manera natural, los carbohidratos C_{12}H_{22}O_{11} y C_{6}H_{10}O_{5} y los carbohidratos C_{12}H_{22}O_{11} y C_{6}H_{10}O_{5} que soportan entre 1 y 3 sustituyentes amino, el (sacárido)q en el que el sacárido es lactosa, maltosa, sacarosa, fructosa o almidón y C(O)R^{33};
R^{33} es R^{37}R^{38};
R^{37} es alquilo (C_{1}-C_{6})
R^{38} es COOR^{39}, 3 NH_{2} o un aminoácido que se produce de manera natural;
R^{39} es H o alquilo(C_{1}-C_{6});
R^{40}, R^{41}, y R^{42} se seleccionan cada uno de manera independiente entre hidrógeno, OR^{43}, halo, NH_{2}, NO_{2}, OPO(OR^{46})_{2}, OR^{44}fenilo, y R^{45};
R^{43} es alquilo C_{1}-C_{6};
R^{44} es alquileno C_{1}-C_{6};
R^{45} se selecciona entre un grupo aromático y un grupo aromático sustituido con un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C_{1}-C_{7};
R^{46} se selecciona entre H, Na, y -C(CH_{3})_{3};
R^{51} se selecciona entre hidrógeno y alquilo C_{1}-C_{3};
R^{52} se selecciona entre hidrógeno y alquilo C_{1}-C_{3};
R^{53} se selecciona entre alquilo C_{1}-C_{12};
R^{54} se selecciona entre hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, un grupo aromático, fenilo, COOR^{57}, PO_{3}H, SO_{3}H, SO_{2}R^{58}, NR^{59}R^{60}, NHOR^{61}, NHCH_{2}R^{61'}, CN, NO_{2}, halógeno, OR^{62}, y SR^{63};
R^{55} se selecciona entre hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, un grupo aromático, fenilo, COOR^{57}, PO_{3}H, SO_{3}H, SO_{2}R^{58}, NR^{59}R^{60}, NHOR^{61}, NHCH_{2}R^{61'}, CN, NO_{2}, halógeno, OR^{62}, y SR^{63};
\newpage
R^{56} se selecciona entre hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, un grupo aromático, fenilo, COOR^{57}, PO_{3}H, SO_{3}H, SO_{2}R^{58}, NR^{59}R^{60}, NHOR^{61}, NHCH_{2}R^{61'}, CN, NO_{2}, halógeno, OR^{62}, y SR^{63};
R^{57} se selecciona entre hidrógeno y alquilo C_{1}-C_{12};
R^{58} se selecciona entre hidrógeno y alquilo C_{1}-C_{12};
R^{59} se selecciona entre hidrógeno, alquilo (C_{1}-C_{6}) y fluorenilmetoxicarbonilo (FMOC);
R^{60} se selecciona entre hidrógeno y alquilo (C_{1}-C_{6});
R^{61} se selecciona entre hidrógeno, OR^{64}, CH_{2}NHR^{65}, NHR^{65} y fluorenilmetoxicarbonilo (FMOC);
R^{61'} se selecciona entre hidrógeno, OR^{64}, CH_{2}NHR^{65}, NHR^{65} y fluorenilmetoxicarbonilo (FMOC);
R^{62} se selecciona entre hidrógeno y alquilo C_{1}-C_{6};
R^{63} se selecciona entre hidrógeno y alquilo C_{1}-C_{6};
R^{64} se selecciona entre hidrógeno, alquilo (C_{1}-C_{6}), y CH_{2}NR^{66}R^{67};
R^{65} se selecciona entre hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, NH_{2}, y fluorenilmetoxicarbonilo (FMOC);
R^{66} se selecciona entre hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6} y fluorenilmetoxicarbonilo (FMOC);
R^{67} se selecciona entre hidrógeno y alquilo C_{1}-C_{6};
q es 2, 3, ó 4;
X es O, NH o amino (alquilo C_{1}-C_{7}); y
Y es C, O, NH, S, SO, SO_{2}, o amino (alquilo C_{1}-C_{7});
o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos.
Normalmente Y es O. Normalmente X es O.
Normalmente, R^{6} es bencilo, hidroxibencilo, halohidroxibencilo, dihalohidroxibencilo, haloalcoxibencilo o dihaloalcoxibencilo, R^{9} es isobutilo y R^{10} es hidrógeno.
Normalmente, R^{7} y R^{8} son cada uno metilo.
Normalmente, R^{2} es glicinato.
La presente invención proporciona también una formulación farmacéutica que comprende un compuesto de la invención y uno o más vehículos o diluyentes farmacéuticamente aceptables. Se proporciona también un compuesto de acuerdo con la invención para uso en el tratamiento del cuerpo humano o animal, de manera particular para el uso en el tratamiento de un neoplasma en un mamífero o una infección fúngica en un mamífero.
La presente invención proporciona también el uso de un compuesto de la invención en la fabricación de un medicamento para uso en el tratamiento de un neoplasma en un mamífero o una infección fúngica en un mamífero.
Tal como se usa en el presente documento, dicho grupo alquilo C_{1}-C_{7} puede ser una cadena lineal o ramificada, saturada o insaturada. Entre los ejemplos se incluyen metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, propenilo, etenilo, sec-butilo, n-pentilo, isobutilo, ert-butilo, sec-butilo, grupos butilo metilados, pentilo, tert pentilo, sec-pentilo y grupos pentilo metilados. El término "alquenilo" se refiere a un grupo alquilo, tal como se ha definido anteriormente, que tiene entre uno y tres enlaces dobles. El término "alquinilo" se refiere a un grupo alquilo, tal como se ha definido anteriormente, que tiene al menos un triple enlace. Se prefiere de forma especial que el alquinilo tenga únicamente un triple enlace. El término alquilo C_{1}-C_{n'}; en el que n' es un entero comprendido entre 2 y 12 significa un grupo alquilo que tiene entre uno y el número indicado de átomos de carbono. El grupo alquilo C_{1}-C_{n'} puede ser de cadena lineal o ramificada.
Tal como se usa en el presente documento, el término "alcoxibencilo" se refiere a un grupo bencilo que tiene un sustituyente alcoxilo en cualquier posición disponible del anillo bencilo. Se prefiere de manera especial el metoxilo. De acuerdo con esto, el término "haloalcoxibencilo" se refiere a un grupo bencilo que tiene un sustituyente halo además de un sustituyente alcoxilo. Cada grupo halo o alcoxilo se sustituye en cualquier carbono disponible. De manera similar, "halohidroxibencilo" se refiere a un grupo bencilo sustituido con hidroxilo que tiene también un sustituyente halo en cualquier carbono disponible del anillo bencilo. Finalmente, el término "dihaloalcoxibencilo" se refiere a un bencilo sustituido con alcoxilo que de manera adicional tiene dos sustituyentes halo, sustituido cada uno de manera independiente en cualquier carbono disponible en el anillo bencilo.
"Aromático sustituido" se refiere a un grupo sustituido con entre uno y tres sustituyentes seleccionados entre el grupo constituido por un alquilo C_{1}-C_{7} y halo.
El término "alquilo inferior" debería referirse a grupos alquilo saturados e insaturados inferiores. (Por ejemplo, un grupo saturado no tiene enlaces dobles ni triples.
Tal como se usa en el presente documento, "grupo aromático no sustituido" se refiere a anillos aromáticos comunes que tienen 4n+2 electrones en un sistema conjugado monocíclico o bicíclico, por ejemplo, furilo, pirrolilo, tienilo, piridilo, y similares, o un sistema conjugado bicíclico, por ejemplo, indolilo o naftilo.
Tal como se usa en el presente documento "grupo aromático sustituido" se refiere a dicho grupo aromático sustituido con un único grupo seleccionado entre el grupo constituido por un grupo halógeno y alquilo C_{1}-C_{6}.
Tal como se usa en el presente documento, "heteroaromático" se refiere a anillos aromáticos que contienen uno o más átomos de carbono seleccionados entre el grupo constituido por oxígeno, nitrógeno, y azufre. Un grupo especialmente preferido de anillos heteroaromáticos tiene entre tres y seis miembros. Se prefiere de manera particular que el grupo heteroaromático tenga entre uno a tres átomos distintos al carbono en el anillo. Un grupo heteroaromático preferido es un anillo de cinco miembros que contiene un átomo de oxígeno.
Tal como se usa en el presente documento, "halógeno" o "halo" se refiere a aquellos miembros del grupo de la tabla periódica históricamente conocidos como halógenos. Entre los procedimientos de halogenación se incluye la adición de haluros de hidrógeno, y la sustitución a alta temperatura, y la fotohalogenación, y dichos procedimientos son conocidos por aquellas personas expertas en la técnica. Los halógenos especialmente preferidos incluyen, cloro, fluoro, y bromo.
Tal como se usa en el presente documento, el término "mamífero" debería referirse a la clase Mamíferos de los vertebrados superiores. El término "animal" debería incluir mamíferos, reptiles, anfibios, y peces. El término mamífero incluye un ser humano. El término "tratamiento" tal como se usa en el presente documento incluye la profilaxis de la dolencia nombrada o la mejora o eliminación de la dolencia una vez se ha establecido esta. Los compuestos de criptoficina reivindicados en el presente documento pueden ser útiles con objetivos de sanidad veterinaria así como para el tratamiento de un paciente humano.
Tal como se usa en el presente documento, el término "derivatizar" se refiere a las transformaciones químicas estándar conocidas por los técnicos que dan lugar a los compuestos deseados de esta invención.
Los procedimientos reivindicados en el presente documento proporcionan un medio para preparar compuestos de criptoficina totalmente sintéticos. De manera conveniente, se pueden ciclar los aminoácidos comercialmente disponibles a la molécula de criptoficina.
Muchos de los compuestos de criptoficina conocidos tienen la actividad antitumoral prometedora; sin embargo, la mala solubilidad en agua puede producir consecuencias durante la administración intravenosa del fármaco. Se relacionan dichas consecuencias con el uso de tensioactivos de solubilización, tales como Cremophor, que pueden poseer toxicidad inherente. La presente invención proporciona nuevos compuestos de criptoficina que tienen actividad antitumoral así como mayores propiedades de solubilidad en agua. Dichos compuestos tienen características de solubilidad deseada así como una potencia aceptable.
Los procedimientos para preparar los compuestos de esta invención se completan de manera más preferible en presencia de un solvente. El técnico experto puede seleccionar los solventes apropiados usando metodologías estándar. Entre los solventes orgánicos inertes adecuados se incluyen los conocidos por los técnicos expertos, por ejemplo, tetrahidrofurano (THF) y dimetilformamida (DMF). Se prefiere de manera especial DMF. Los solventes de base acuosa pueden ser apropiados para alguno de los procedimientos utilizados en el presente documento. Se puede ajustar el pH de dichos solventes acuosos tal como se desee para facilitar el procedimiento.
Se proporcionan en forma tabular algunos compuestos típicos de esta invención.
TABLA 1
4
5
6
Los compuestos adicionales de interés son como se nombran en la Tabla I; sin embargo, Ar es Ar' en vez de fenilo, y R^{54} es OCH_{3} en la posición para del Ar', mientras que R^{55} y R^{56} son cada uno hidrógeno.
Otros compuestos adicionales de interés son como se nombran en la Tabla I; sin embargo, un grupo NH sustituye el O en la posición Y de la molécula. Por ejemplo, un compuesto en esta serie es:
8
Otros compuestos preferidos de manera adicional son, por ejemplo, pero no se limitan a, los nombrados en la Tabla I en los que cada compuesto nombrado tiene un único grupo metilo en lugar de un grupo dimetilo gem en la posición 6 del anillo de criptoficina. Véase, por ejemplo, 23 a continuación.
Los compuestos especialmente preferidos de esta invención tienen un grupo dimetilo en la posición 6 del anillo de criptoficina.
Un compuesto preferido de esta invención es tal como se presenta en la Tabla I en la que Ar es Ar'; únicamente uno de R^{54}, R^{55}, R^{56} es OCH_{3}; R^{9} y R^{10} son metilo cada uno.
Por lo general se emplean agentes slilantes conocidos en los procedimientos para fabricar los compuestos de esta invención. Véase, por ejemplo, Calvin, E. W., "Silicon Reagents in Organic Synthesis", Academic Press, (Londres, 1988). Entre los agentes sililantes particularmente útiles se incluyen agentes "alquil sililo tri-inferiores", dicho término anterior contempla triisopropilsililo, trimetilsililo y trietilsililo, haluros de trimetilsililo, ureas sililadas tales como bis (trimetilsilil) urea (BSU) y amidas sililadas tales como N,O-bis (trimetilsilil) acetamida (BSA). De estas, se prefiere BSA.
Se definen algunas de las características preferidas de esta invención en la siguiente forma tabular, en la que se pueden seleccionar las características de manera independiente para proporcionar las formas de realización preferidas de esta invención:
A)
R^{8} es etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo o isopentilo;
B)
R^{7} es etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, pentilo, o isopentilo;
C)
R^{7} es H, R8 es metilo, R3 es metilo, y X e Y no son ambos O;
D)
R^{3} es etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, pentilo o isopentilo;
E)
R^{9} es metilo, etilo, propilo, butilo, isobutilo, pentilo, o isopentilo;
F)
R^{10} es metilo, etilo, propilo, butilo, isobutilo, pentilo, o isopentilo;
G)
Un compuesto de criptoficina en el que al menos uno de los grupos seleccionados entre el grupo constituido por C-3, C-6, C-7, C-10, C-16, C-17, y C-18 tiene estereoquímica R (numerando tal como se muestra en la Fórmula I más arriba.);
H)
Un compuesto de criptoficina en el que al menos uno de los grupos seleccionados entre el grupo constituido por C-3, C-6, C-7, C-10, C-16, C-17, y C-18 tiene estereoquímica S (numerando tal como se muestra en la Fórmula I más arriba.);
I)
Ar' es fenilo con un sustituyente seleccionado entre el grupo constituido por NR^{59}R^{60}, NHOR^{61}, y NHCH R^{61};
J)
Un compuesto en el que se selecciona Y entre el grupo constituido por alquilamino, NH, y O;
K)
Un compuesto en el que Y es O, R^{7} y R^{10} son cada uno hidrógeno; R^{9} es alquilo C_{1}-C_{6}; y R^{1} es halo;
L)
R^{7}, R^{8} son cada uno metilo;
M)
R^{7} es hidrógeno;
N)
R^{2} es un glicinato;
O)
R^{2} es un acilato
R)
R^{4} y R^{5} forman un doble enlace;
T)
se usa un compuesto de Fórmula I para la preparación de un medicamento para uso en la interrupción de un sistema de microtubulina;
U)
se usa un compuesto de Fórmula I para la preparación de un medicamento para uso como un agente antineoplásico;
V)
se usa un compuesto de Fórmula I para la preparación de un medicamento para uso en el tratamiento del cáncer en un mamífero;
W)
se usa un compuesto de Fórmula I para la preparación de un medicamento para uso como un agente antifúngico;
R^{6} se selecciona entre el grupo constituido por
9
10
DD) Ar es fenilo;
EE) Ar es fenilo sustituido con uno o dos de entre el grupo constituido por halo y metilo;
Se usa un compuesto de Fórmula I para la preparación de un medicamento para uso en este tratamiento de una infección fúngica;
KK) R^{4} y R^{5} son cada uno hidrógeno;
LL) Ar es fenilo sustituido con para etilo;
MM) Ar es fenilo sustituido con para metilo;
NN) Y es NH;
OO) R^{3} es metilo;
Se puede usar el compuesto de la presente invención en un procedimiento para aliviar una dolencia patológica producida por la hiperproliferación de células en mamífero, que comprende administrar a un sujeto una cantidad efectiva de una composición farmacéutica o veterinaria descrita en el presente documento para inhibir la proliferación de las células. Dicho procedimiento puede comprender de manera adicional la administración al sujeto de al menos una terapia adicional dirigida a aliviar la dolencia patológica. Dicha dolencia patológica se caracteriza por la formación de neoplasmas. Normalmente los neoplasmas se seleccionan entre el grupo constituido por los mamarios, células pequeñas del pulmón, adenocarcinoma pancreático, sistema nervioso central (SNC), ovario, próstata, sarcoma del tejido blando o hueso, cabeza y cuello, gástrico que incluye pancreático y esofágico, estómago, mieloma, vejiga, renal, neuroendocrino que incluye tiroides y neoplasmas de la enfermedad no de Hodgkins y de Hodgkin.
Tal como se usa en el presente documento, "neoplásico" se refiere a un neoplasma, que es un crecimiento anormal, dicho crecimiento se produce debido a una proliferación de células no sujetas a las limitaciones usuales del crecimiento. Tal como se usa en el presente documento, "agente antineoplásico" es cualquier compuesto, composición, premezcla, comezcla o mezcla que inhibe, elimina, retarda, o invierte el fenotipo neoplásico de una célula.
Se pueden clasificar los agentes antimicóticos en tres grupos según su mecanismo molecular de acción. El primer grupo está constituido por agentes entre los que se incluyen la colchicina y la colcemida, que inhiben la formación de los microtúbulos secuestrando la tubulina. El segundo grupo está constituido por agentes entre los que se incluyen la vinblastina y la vincristina, que inducen la formación de agregados paracristalinos de la tubulina. La vinblastina y la vincristina son agentes anticancerosos bien conocidos: su acción de interrumpir el huso mitótico inhibe de manera preferencial las células hiperproliferativas. El tercer grupo está constituido por agentes, entre los que se incluye el taxol, que promueven la polimerización de la tubulina, y de esta manera estabilizan los microtúbulos.
La exhibición del fenotipo a la resistencia al fármaco y la resistencia a múltiples fármacos por muchas células tumorales, y el modo de acción clínicamente probado de los agentes anti-microtubulares frente a las células neoplásicas necesitan el desarrollo de agentes anti-microtubulares citotóxicos para las células neoplásicas no resistentes al fármaco así como citotóxicos para las células neoplásicas con un fenotipo resistente al fármaco.
En el tratamiento del cáncer se usan normalmente la quimioterapia, la terapia de radiación, la terapia con modificadores de la respuesta biológica y la inmunoterapia. Cada modo de terapia tiene indicaciones específicas que son conocidas por aquellas personas normalmente expertas en la técnica, y se pueden emplear una o todas en un intento por conseguir la destrucción total de las células neoplásicas. Por otra parte, se proporciona también mediante la invención presente la quimioterapia de combinación, quimioterapia que utiliza los compuestos de Fórmula I en combinación con otros agentes neoplásicos, ya que por lo general la terapia de combinación es más efectiva que el uso de un único agente antineoplásico. De esta manera, un aspecto adicional de la presente invención proporciona composiciones que contienen una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos un compuesto de Fórmula I, que incluye las sales de adición no tóxicas de las mismas, que sirven para proporcionar los beneficios anteriormente mencionados. Se pueden proporcionar también dichas composiciones conjuntamente con líquidos, geles, o vehículos sólidos, diluyentes, coadyuvantes y excipientes fisiológicamente tolerables. Se pueden encontrar dichos vehículos, coadyuvantes y excipientes en la U.S. Pharmacopeia, Vol. XXII y el National Formulary Vol. XVII, U. S. Pharmacopeia Convention, Inc., Rockville, MD (1989). Se proporcionan los modos adicionales de tratamiento en la AHFS Drug Information, 1993 e. por el American Hospital Formulary Service, pp. 522-660. Se conocen bien cada una de estas referencias y están fácilmente disponibles para los técnicos expertos.
La presente invención proporciona de manera adicional una composición farmacéutica usada para tratar la enfermedad neoplásica que contiene al menos un compuesto de Fórmula I y al menos un agente antineoplásico adicional. Entre los agentes antineoplásicos que se pueden utilizar en combinación con los compuestos de Fórmula I se incluyen los que se recogen en el Merck Index 11, pp 16-17, Merck & Co., Inc (1989). El Merck Index es ampliamente conocido, y está fácilmente disponible para los técnicos expertos.
En una forma de realización adicional de esta invención, los agentes antineoplásicos pueden ser antimetabolitos, entre los que se pueden incluir sin limitarse de forma alguna a los que se seleccionan entre el grupo constituido por metotrexato, 5-fluoroacilo, 6-mercaptopurina, citosina, arabinósido, hidroxiurea, y 2-clorodesoxiadenosina. En otra forma de realización de la presente invención, los agentes antineoplásicos contemplados son agente alquilantes entre los que se pueden incluir sin limitarse de forma alguna a los que se seleccionan entre el grupo constituido por ciclofosfamida, mefalán, busulfán, paraplatina, clorambucilo, y mostaza nitrogenada. En una forma de realización adicional, los agentes antineoplásicos son alcaloides de plantas entre los que se pueden incluir sin limitarse de forma alguna a los que se seleccionan entre el grupo constituido por vincristina, vinblastina, taxol, y etopósido. En una forma de realización adicional, los agentes antineoplásicos contemplados son antibióticos entre los que se pueden incluir sin limitarse de forma alguna a los que se seleccionan entre el grupo constituido por doxorubicina, daunorubicina, mitomicina C, y bleomicina. En una forma de realización adicional, los agentes antineoplásicos contemplados son hormonas entre los que se pueden incluir sin limitarse de forma alguna a las que se seleccionan entre el grupo constituido por calusterona, diomostavolona, propionato, epitiostanol, mepitiostano, testolactona, tamoxifen, fosfato de poliestradiol, acetato de megesterol, flutamida, nilutamida, y trilotano.
En una forma de realización adicional, los agentes antineoplásicos contemplados incluyen enzimas que pueden incluir las que se seleccionan entre el grupo constituido por derivados de la L-Asparginasa y la aminoacridina, tales como, pero no se limitan a, amsacrina. Entre los agentes antineoplásicos adicionales se incluyen los descritos por Skeel, Roland T., ``Antineoplastic Drug and Biologic Response Modifier: Classification, Use and Toxicity of Clinically Useful Agent's Handbook of Cancer Chemotherapy (3ª ed.), Little Brown & Co. (1991).
Se pueden administrar estos compuestos y composiciones a mamíferos para uso veterinario. Por ejemplo, se pueden tratar animales domésticos de la misma manera que un paciente clínico humano. De manera general, variará la dosificación requerida para el efecto terapéutico de acuerdo con el tipo de uso, modo de administración, así como las necesidades concretas de los individuos huésped. Normalmente, las dosificaciones oscilarán entre aproximadamente 0,001 a 1000 mg/kg, y de manera más usual entre 0,01 y 10 mg/kg del peso corporal del huésped. De manera alternativa, se pueden administrar las dosificaciones dentro de estos intervalos mediante infusión constante durante un período extendido de tiempo, que excede de manera usual de 24 horas, hasta que se obtienen los beneficios terapéuticos deseados. Por tanto, se debe seleccionar la dosificación del fármaco, así como la vía de administración, en función de la efectividad relativa, la toxicidad relativa, las características de crecimiento del tumor y el efecto del compuesto de Fórmula I sobre el ciclo celular, la farmacocinética del fármaco, la edad, el sexo, la condición física del paciente y el tratamiento previo, que se pueden determinar por el técnico experto.
Se puede formular el compuesto de Fórmula I, con o sin agentes antineoplásicos adicionales, en composiciones terapéuticas tanto en forma natural como de sales. Entre las sales no tóxicas farmacéuticamente aceptables se incluyen las sales de adición de base que se pueden derivar de bases inorgánicas tales como por ejemplo, hidróxidos de sodio, potasio, amonio, calcio o férricos, y dichas bases orgánicas tales como isopropilamina, trimetilamina, 2-etilamino etanol, histidina y procaína. Pueden formarse también dichas sales en forma de sales de adición de ácido con algunos grupos catiónicos libres, y se formarán por lo general con ácidos inorgánicos tales como por ejemplo, ácidos clorhídrico o fosfórico, o ácidos orgánicos tale como acético, oxálico, tartárico y mandélico. Para los técnicos expertos, se describen los excipientes adicionales que de forma adicional comprende la invención en, por ejemplo, la U.S Pharmacopeia.
La adecuación de vehículos concretos para inclusión en una composición terapéutica dada depende de la ruta preferida de administración. Por ejemplo, se pueden formular composiciones antineoplásicas para administración oral. Dichas composiciones se preparan normalmente en forma de soluciones o suspensiones líquidas, o en formas sólidas. La formulación oral incluye de manera usual aditivos tales como ligantes, rellenos, vehículos, conservantes, agentes estabilizantes, emulsificantes, tampones, manitol, lactosa, almidón, estearato de magnesio, sacarina sódica, celulosa y carbonato de magnesio. Estas composiciones pueden tomar la forma de soluciones, suspensiones, comprimidos, píldoras, cápsulas, formulaciones de dosificación sostenida, o polvos, y normalmente contiene de un 1% a un 95% de ingrediente activo. De manera más preferible, la composición contiene entre aproximadamente un 2% y aproximadamente un 70% de ingrediente activo.
Se pueden preparar las composiciones de la presente invención en forma de inyectables, bien como soluciones, suspensiones, o emulsiones líquidas; en formas sólidas para solución en o suspensión en líquido antes de la inyección. Se pueden administras dichos inyectables por vía subcutánea, intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, intratecal, o intrapleural. El ingrediente o ingredientes activos se mezclan a menudo con diluyentes, vehículos, o excipientes que son fisiológicamente tolerables y compatibles con el(los) ingrediente(s) activo(s). Los diluyentes y excipientes adecuados son por ejemplo, agua, solución salina, dextrosa, glicerol y las combinaciones de os mismos. De manera adicional, si se desea, las composiciones pueden contener cantidades menores de sustancias auxiliares tales como agentes humectantes o emulsificantes, agentes estabilizantes o agentes tamponantes del pH.
Se pueden usar los compuestos de la invención en los procedimientos para usar los compuestos de Fórmula I para inhibir la proliferación de células en mamíferos poniendo en contacto estas células con un compuesto de Fórmula I en cantidad suficiente para inhibir la proliferación de células en mamíferos. Una forma de realización preferida es un procedimiento para inhibir la proliferación de células de mamífero hiperproliferativas. Para los objetivos de esta invención "células de mamíferos hiperproliferativas" son células de mamíferos que no están sujetas a las limitaciones características de crecimiento (muerte celular programada por ejemplo). Una forma de realización preferida adicional es cuando la célula de mamífero es humana. Se puede usar también el compuesto de la invención para poner en contacto la célula de mamífero con al menos un compuesto de Fórmula I y al menos un agente antineoplásico. Se describen más arriba los tipos de agentes antineoplásicos contemplados.
Se puede usar también el compuesto de la invención en los procedimientos en los que un compuesto de Fórmula I inhibe la proliferación de células hiperproliferativas con fenotipos resistentes al fármaco entre los que se incluyen aquellas con fenotipos múltiples resistentes al fármaco, poniendo en contacto dicha célula con un compuesto de Fórmula I en una cantidad suficiente para inhibir la proliferación de una célula de mamífero hiperproliferativa. Una forma de realización preferida es cuando la célula de mamífero es humana. Se puede usar el compuesto de Fórmula I con al menos un agente antineoplásico adicional, descrito más arriba.
Se pueden usar también los compuestos de la invención para aliviar las dolencias patológicas producidas por las células de mamífero hiperproliferantes, por ejemplo, la neoplasia, administrando a un sujeto una cantidad efectiva de una composición farmacéutica que contiene el compuesto de Fórmula I para inhibir la proliferación de las células hiperproliferantes. Tal como se usa en el presente documento "dolencia patológica" se refiere a cualquier patología emergente de la proliferación de células de mamífero que no están sujetas a las limitaciones normales del crecimiento. Dicha proliferación de células puede deberse a neoplasmas tal como se ha descrito más arriba.
En una forma de realización preferida adicional las células neoplásicas son humanas. Se pueden aliviar dichas dolencias patológicas utilizando un compuesto de Fórmula I en combinación con otras terapias, así como con otros agentes antineoplásicos.
Puede evaluarse la efectividad del compuesto reivindicado usando procedimientos estándar conocidos por los técnicos expertos.
Los ejemplos de dichos procedimientos son como sigue:
Se ha encontrado que los compuestos de esta invención son útiles frente a los hongos patógenos. Por ejemplo, se puede ilustrar la utilidad para tratar Cryptococcus neoformans con resultados de ensayo frente a Cryptococcus neoformans empleando medio de agar dextrosa con nitrógeno base de levadura. En la realización del ensayo, se solubiliza un compuesto de esta invención en dimetil sulfóxido suplementado con Tween 20. Se realizan dos diluciones dobles con agua destilada estéril/DMSO al 10 por ciento para obtener concentraciones finales del fármaco en las placas de ensayo de dilución del agar que oscilan entre 0,008 \mug/ml y 16,0 \mug/ml frente a un panel de 84 cepas de Cryptococcus neoformans. Se determina la concentración inhibitoria mínima frente al panel de 84 aislados de Cryptococcus neoformans para ilustrar la actividad antifúngica deseada.
Se seleccionan los compuestos respecto de las concentraciones inhibitorias mínimas frente a KB, una línea celular del carcinoma nasofaríngeo humano, LoVo, una línea celular del adenocarcinoma colorectal humano usando el ensayo Corbett, véase Corbett, T. H. y col. Cytotoxic Anticancer Drugs: Models and Concepts for Drug Discovery and Development, pp 35-87, Kluwer Academic Publishers: Norwell, 1992. Véase también, Valeriote, y col. Discovery and Development of Anticancer Agents; Kluwer Academic Publisher, Norwell, 1993 se usa para la evaluación de los compuestos.
Se evalúan de manera adicional los compuestos más activos respecto de la citotoxicidad frente a cuatro diferentes tipos de células, por ejemplo, una leucemia de murina, un tumor sólido de murina, un tumor sólido humano, y un fibroblasto de malignidad baja usando el ensayo Corbett.
Se evalúan los compuestos de manera adicional frente a un espectro amplio de tumores de murina y humanos implantados en ratones, entre los que se incluyen tumores resistentes al fármaco.
La carga del tumor (T/C) (carga media del tumor en animales tratados frente a la carga media del tumor en animales no tratados) se usa como evaluación adicional. El National Cancer Institute Standards considera como activos valores de T/C que sean menores del 42%; el National Cancer Institute Standard considera que los valores T/C menores de un 10% tienen actividad excelente y actividad clínica potencial.
Material
La vinblastina, citocalasina B, isotiocianato de tetrametilrodamina (TRITC) - faloidina, sulforodamina B (SRB) y anticuerpos frente a la tubulina \beta y vimentina están comercialmente disponibles de vendedores comerciales reconocidos. Están también comercialmente disponibles las sales de Earle que contienen el Medio Basal Tagle (BME) y el Suero Bovino Fetal (FBS).
Líneas celulares
La línea de leucemia de las células T de Jurkat y las células A-10 de músculo liso aórtico de rata se obtienen de la American Type Culture Collection y se cultivan en BME que contiene FBS al 10% y 50 \mug/ml de sulfato de gentamicina. Las células del carcinoma de ovarios humano (SKOV3) y una sublínea que se ha seleccionado por su resistencia a la vinblastina (SKVLB1) procede de una generosa donación del doctor Victor Ling del Ontario Cancer Institute. Ambas líneas celulares se mantuvieron en BME que contenía FBS al 10% y 50 \mug/ml de sulfato de gentamicina. Se añadió vinblastina hasta una concentración final de 1 \mug/ml a células SKVLB1 24 horas después del paso para mantener la presión de selección para las células que sobreexpresan la glicoproteína P.
Proliferación celular y ensayos de bloqueo del ciclo
Se llevaron a cabo los ensayos de proliferación celular tal como se ha descrito por Skehan y col. Para las células Jurkat, se trataron los cultivos con los fármacos indicados tal como se ha descrito por Skehan, y se determinaron los números totales de células contando las células en un hemacitómetro. Se determinó el porcentaje de células en mitosis mediante tinción con Giemsa al 0,4% en PBS seguida por lavado rápido con PBS. Se puntuaron al menos 1000 células por tratamiento respecto de la presencia de figuras mitóticas, y se calculó el índice mitótico en forma de relación de células con figuras mitóticas respecto del número total de células contadas.
Ensayos de inmunofluorescencia
Se hicieron crecer células A-10 en confluencia próxima sobre cubres de vidrio en BME/FBS al 10%. Se añadieron los compuestos en PBS a las concentraciones finales indicadas y se incubaron las células durante 24 horas más. Para la tinción de lo microtúbulos y los filamentos intermedios, se fijaron las células con metanol frío y se incubaron con PBS que contenía suero de ternero al 10% para bloquear los emplazamientos de enlace no específicos. A continuación se incubaron las células a 37ºC durante 60 min con anti-\beta-tubulina monoclonal o con anti-vimentina monoclonal a las diluciones recomendadas por el fabricante. Se visualizaron de manera posterior los anticuerpos primarios de enlace mediante una incubación de 45 minutos con IgG de conejo antiratón conjugada con fluoresceína. Se montaron los cubres sobre portas de microscopio y se examinaron y fotografiaron los modelos de fluorescencia usando un Fotomicroscopio III de Zeiss equipado con óptica de epifluorescencia para la fluoresceína. Para la tinción de los microfilamentos, se fijaron las células con paraformaldehído al 3%, se permeabilizaron con Triton X-100 al 0,2% y se redujeron químicamente con borohidruro de sodio (1 mg/mL). Se añadió a continuación PBS que contenía TRITC-faloidina 100 nM y se dejó incubar la mezcla durante 45 min. A 37ºC. Se lavaron rápidamente las células con PBS antes que se montaran los cubres y se fotografiaron inmediatamente tal como se ha descrito anteriormente.
Efectos de las criptoficinas y la viblastina sobre la proliferación de células Jurkat y el ciclo celular
Se determinaron las curvas de dosis-respuesta respecto de los efectos de los compuestos de criptoficina y la vinblastina sobre la proliferación celular y el porcentaje de células en mitosis.
Efectos de la citocalasina B, vinblastina y criptoficinas sobre el citoesqueleto
Se hicieron crecer células del músculo liso aórtico (A-10) sobre cubres de vidrio y se trataron con PBS, citocalasina B 2 \muM, vinblastina 100 nM o compuestos de criptoficina 10 nM. Tras 24 horas, se visualizaron los microtúbulos y filamentos intermedios de vimentina mediante inmunofluorescencia indirecta, y se tiñeron los microfilamentos usando TRITC-faloidina. Se examinaron los efectos morfológicos de cada fármaco. Las células no tratadas desplegaron extensas redes completas de microtúbulos con centros que organizaban los microtúbulos perinucleares. Los filamentos intermedios con vimentina estuvieron distribuidos de manera homogénea a través del citoplasma, mientras que los haces de microfilamentos se concentraron a lo largo del eje mayor de la célula. La citocalasina B produjo la despolimerización completa de los microfilamentos junto con la acumulación de residuos paracristalinos. Este compuesto no afecta la distribución de los microtúbulos o los filamentos intermedios. Se observaron los microtúbulos tratados con criptoficina y los intermedios con vimentina respecto de la depleción de los microtúbulos, y el colapso de los filamentos intermedios con rimentina.
Efectos de las criptoficinas y la vinblastina sobre los microtúbulos estabilizados con taxol
Se trataron células A-10 durante 3 horas con taxol 0 o 10 \muM antes de la adición de PBS, vinblastina 100 nM o compuesto de criptoficina 10 nM. Tras 24 horas, se examinó la organización de microtúbulos mediante inmunofluorescencia tal como se ha descrito anteriormente. En comparación con los de las células control, los microtúbulos en las células tratadas con taxol se enlazaron de manera extensiva, especialmente en las regiones polares de las células. Como anteriormente, la vinblastina produjo la despolimerización completa de los microtúbulos de las células no pretratadas. Sin embargo, el pretratamiento con taxol evitó la despolimerización de los microtúbulos en respuesta a la vinblastina. De manera similar, se observaron los microtúbulos pretratados con taxol mediante el tratamiento con criptoficina.
Reversibilidad de la despolimerización de los microtúbulos mediante la vinblastina y la criptoficina
Se trataron células A-10 con vinblastina 100 nM o criptoficinas 10 nM durante 24 h., dando como resultado la despolimerización completa de los microtúbulos. A continuación se lavaron las células y se incubaron en medio libre de fármaco durante períodos de 1 hora o 24 horas. Los microtúbulos se repolimerizaron rápidamente tras la eliminación de la vinblastina, mostrando niveles significativos de microtúbulos tras 1 hora y recuperación morfológica completa a las 24 horas. Se visualizaron las células respecto del estado de los microtúbulos tras el tratamiento con un compuesto de criptoficina de esta invención en 1 hora o 24 horas después de la eliminación de los compuestos de criptoficina.
Efectos de la combinación de vinblastina y criptoficinas sobre la proliferación celular
Se trataron células SKOV3 con combinaciones de criptoficinas y vinblastina durante 48 horas. A continuación se determinaron los porcentajes de células supervivientes y se calcularon las DI_{50} para cada combinación.
Toxicidad de las criptoficinas, vinblastina y taxol respecto de las células SKOV3 y SKVLB1
Las células SKVLB1 son resistentes a los fármacos anticancerosos producidos de manera natural debido a su sobreexpresión de glicoproteína P. Se observaron las capacidades de los compuestos de taxol, vinblastina y criptoficina para inhibir el crecimiento de las células SKOV3 y SKVLB1. El taxol produjo la inhibición dependiente de la dosis de la proliferación de ambas líneas celulares con DI_{50} para las células SKOV3 y SKVLB1 de 1 y 8000 nm, de manera respectiva. La viblastina inhibió también el crecimiento de ambas líneas celulares, con DI_{50} de 0,35 y 4200 nM para las células SKOV3 y SKVLB1, de manera respectiva. Los compuestos de criptoficina de esta invención muestran actividad con una DI_{50} de entre aproximadamente 1 a aproximadamente 1000 pM para las células SKOV3 y SKVLB1.
De esta manera, se puede demostrar que la presente invención proporciona nuevos compuestos de criptoficina que son potentes inhibidores de la proliferación celular, actuando mediante la interrupción de las redes de microtúbulos y la inhibición de la mitosis. Estos estudios pueden ilustrar que los compuestos de criptoficina interrumpen la organización de los microtúbulos y de esta manera, las funciones celulares normales, incluyendo las de la mitosis.
Los agentes antimicrotubulares clásicos, tales como la colchicina y los alcaloides de la Vinca, bloquean la división celular en la mitosis. Parece apropiado comparar el efecto de uno de estos agentes sobre la proliferación celular con los compuestos de criptoficina. Para este objetivo, se seleccionó el alcaloide de la Vinca vinblastina como representativo de los agente antimicrotubulares clásicos. De acuerdo con esto, se comparó el efecto de los compuestos de criptoficina y vinblastina sobre la proliferación y progresión del ciclo celular de la línea celular de leucemia de célula T de Jurkat.
Puesto que los efectos mitóticos están habitualmente mediados por la interrupción de los microtúbulos en los husos mitóticos, los efectos de los compuestos de criptoficina sobre las estructuras citoesqueléticas se caracterizan mediante la microscopía de fluorescencia. La tinción con inmunofluorescencia de las células tratadas con un compuesto tanto de criptoficina como de vinblastina demuestra que ambos compuestos producen la pérdida completa de los microtúbulos. Los estudios similares con células SKOV 3 pueden demostrar que los efectos antimicrotubulares de los compuestos de criptoficina no son únicos en la línea celular del músculo liso.
Selección del carcinoma del colon humano GC3
Se sembraron los pocillos seleccionados de una placa de 96 pocillos con células del carcinoma del colon humano GC3 (1x10 células en 100 \mul de medio de ensayo/pocillo) veinticuatro horas antes de la adición del compuesto de ensayo. Se añadió medio de ensayo libre de células al resto de pocillos seleccionados de la placa de 96 pocillos. Se suplementó el medio de ensayo (se uso el medio RPMI - 1640; sin embargo, sería aceptable cualquier medio que permitiera sobrevivir a las células) con suero bovino fetal dializado al 10% y tampón HEPES 25 mM.
Se almacenó el compuesto de ensayo en una botella ámbar antes del ensayo. Se preparó solución madre de dimetilsulfóxido fresco (200 \mug/ml) inmediatamente antes de la preparación de las diluciones de la muestra de ensayo en solución salina tamponada con fosfato (PBS). Se preparó una dilución 1:20 de dimetilsulfóxido en PBS de manera que la concentración final fue de 10 \mug/ml. Se prepararon diluciones en serie 1:3 usando PBS (5 ml antes del muestreo previo de 1 ml de PBS). Se usaron tubos Falcon 2054 para el ensayo.
Se añadió por triplicado una muestra de 10 \mul por cada dilución del compuesto de ensayo en los pocillos de las placas GC3. Se incubaron las placas durante 72 horas a aproximadamente 37ºC. Se añadió a cada pocillo una muestra de 10 \mul de disolución madre de sal de bromuro de 3-[4,5-dimetil-2-il]-2,5-difeniltetrazolio ("MTT" 5 mg/ml en PBS). Se incubaron las placas durante aproximadamente una hora a 37º. Se centrifugaron las placas, se decantó el medio de los pocillos y se añadieron a cada pocillo 100 \mul de ácido-isopropanol (HCl 0,04 N en isopropanol). Se leyó la placa al cabo de una hora usando una longitud de onda de ensayo de 570 nm (lector SpectraMax).
La evaluación de los compuestos de Fórmula I sugiere que los compuestos pueden ser útiles en los procedimientos de tratamiento descritos en el presente documento. De manera adicional, los compuestos serán útiles para interrumpir el sistema de microtúbulos.
Puede completarse la preparación de los compuestos de esta invención usando varios protocolos que implican un éster activado seguido por cromatografía y un ácido que induce el desbloqueo cuando es necesario.
11
12
Por ejemplo, el tratamiento de 1 (en el que los números en negrita se refieren a los números del compuesto indicados en la sección de Ejemplos) con anhídrido acético en presencia de trietilamina y 4-dimetilamino piridina proporciona 3 con un rendimiento del 89% tras la cromatografía instantánea. De manera similar se prepara 4 a partir de 1 mediante la adición de anhídrido succínico seguido por la purificación en HPLC de fase reversa. La exposición de la solución de piridina de 1 al cloro clorhidrato de nicotinoílo comercialmente disponible en presencia de trietilamina y 4-dimetilamino piridina seguido por la cromatografía y el tratamiento con cloruro de hidrógeno da lugar a 7 con un rendimiento alto. Se preparó la sal de piridinio 8 con un rendimiento del 47% de acuerdo con el procedimiento de Nicolau, Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1994, 33 por el que se trata 1 con p-toluénsulfonato 2-fluoro-1-metilpiridinio comercialmente disponible seguido por la purificación con HPLC en fase reversa con intercambio aniónico concomitante (acetato por p-toluénsulfonato) y liofilización. Se prepararon todos los ésteres 5, 9, 11, 13, 15, 17, 19, y 21 con rendimientos de moderados a altos a partir de 1 y aminoácidos N-t-boc protegidos (excepto en el caso de 5 y 9) con activación mediante la adición de 1,3-diciclohexilcarbodiimida en presencia de 4-dimetilamino piridina. Se prepararon las sales de clorhidrato 10, 12, 14, 16, 18, 20 y 22 con rendimiento alto a partir de 9, 11, 15, 17, 19, y 21 de manera respectiva tras tratamiento con una solución 4,0 M de cloruro de hidrógeno en dioxano y eliminación del solvente al vacío. La sal de disodio 6 se deriva de 5 tras la rotura del t-butil éster inducida por ácido clorhídrico y tratamiento con hidróxido de sodio. El ácido necesario 24 para la preparación de 5 se sintetiza con un rendimiento del 63% por medio de una secuencia de 5 etapas que caracterizan el procedimiento de Johns, Synthesis, 1988, 142, para instalar la funcionalidad del fosfato.
13
Se han ensayado algunos de los nuevos conjugados respecto de la citotoxicidad in vitro en el modelo de célula tumoral GC3. A partir de los resultados representados en la Tabla 2 resulta claro que es inherente a esta serie de compuestos la actividad de buena a excelente relativa a la de la criptoficina 55 (1).
La preparación de cualquier éster del tipo 2 (R^{1} o R^{2} derivado de un ácido carboxílico) incluye una variedad de tecnologías que emplean cloruros de ácido, anhídridos, y reactivos activantes comunes (por ejemplo., carbodiimidas). ^{2} Se puede usar cualquier base débil y/o catalizadores (aminas, carbonatos) para ayudar en la esterificación.
Podría llevarse a cabo la conversión de los carbamatos 9, 11, 13, 15, 17, 19, y 21 a las correspondientes sales con cualquier ácido fuerte, nominalmente, ácidos minerales compuestos de haluros de hidrógeno, sulfatos de hidrógeno, fosfatos de hidrógeno, nitratos de hidrógeno, percloratos de hidrógeno, o ácidos orgánicos fuertes tales como trifluoroacético, p-toluénsulfónico, y metanosulfónico. Se podrían usar los mismos ácidos para producir sales de tipo 7 a partir de la correspondiente base libre. Una variedad de contraiones (cationes) podría comprender sales de tipo 6 entre las que se incluyen cualquiera de los metales alcalinos y alcalinotérreos. Una variedad de contraiones (aniones) podría comprender sales del tipo 8, nominalmente, cualquier base conjugada de un ácido (orgánico o mineral).
TABLA 2 Datos de citotoxicidad in vitro para los derivados de criptoficina usando el ensayo descrito más arriba
Compuesto DI_{50} de GC3 (nM)
1 0,065
3 83
4 31
6 3,7
7 116
8 2,2
10 - - -
12 0,10
14 21
16 230
18 2,6
20 - - -
22 7,2
26 - - -
Se indican los resultados de los compuestos adicionales de esta invención y el ensayo GC3
\vskip1.000000\baselineskip
14
400 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
17
700
20
Se han ensayado los compuestos adicionales de esta invención en el ensayo GC3 y tenían valores DI_{50} que oscilaban entre menos de uno y aproximadamente 700 nM; sin embargo, los valores más típicos fueron menores de
100 nM.
Se muestran en la Tabla 3 los resultados de los estudios de solubilidad preliminares comparativos entre 27, 1, y 12. Estos resultados indican la mejora de la solubilidad de 12.
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 3 Solubilidades comparativas de los compuestos de criptoficina 1, 12 y 27 
\vskip1.000000\baselineskip
Volumen ajustado del excipiente
tampón de acetato 0,05 M % v/v 27 (mg/ml) 1 (mg/ml) 12 mg/ml)
1 Propilén Glicol 15 BQL BQL > 2,0
\hskip0,2cm Etanol 10
2 Propilén Glicol 15 BQL 0,0026 >2,0
\hskip0,2cm Polietileno 20
\hskip0,2cm Glicol 3000
3 Polisorbato 80 1 (p/v) BQL 0,3113 1-2
4 Emulphor EL719 1(p/v) 0,0272 0,3611 1,5
5 Tampón Acetato 0,05 M pH 4,0 100 < 0,001 < 0,001 0,03
(BQL = Por debajo de los límites de cuantificación, aproximadamente 0,001 mg/ml)
Se determinó una comparación de las características de estabilidad entre 1 y 12 en pH acuoso comprendido entre 4-8 a temperatura ambiente durante 6 horas. Los resultados de estos estudios demostraron claramente la superior solubilidad en medio acuoso y perfil de estabilidad de 12. Por ejemplo, a pH 8, la Criptoficina 55 tenía un valor de solubilidad de 10 mg/mL a temperatura ambiente en comparación con una solubilidad de 30 mg/mL para 12 bajo sustancialmente las mismas condiciones. A un pH de 4, la Criptoficina 55 tenía un valor de solubilidad en agua de aproximadamente 50 mg/mL; sin embargo, la solubilidad en agua de la Criptoficina 55 disminuye a medida que el pH se vuelve básico, mientras que la solubilidad en agua de 12 permaneció sustancialmente estacionaria durante el intervalo de pH estudiado.
Basándose en los resultados de los estudios de solubilidad y estabilidad, se escogieron los vehículos parenterales apropiados para determinar las características de solubilidad/estabilidad absolutas de 12. La Tabla 4 ilustra el perfil de solubilidad de 12 en estos vehículos. Los resultados preliminares indican una estabilidad aceptable de 12 en la formulación 6 durante hasta 3 semanas.
TABLA 4 Solubilidad del glicinato de criptoficina 12 en diversos vehículos parenterales 
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Excipiente % v/v 12 (mg/ml)
1 Etanol 10 0,11
\hskip0,2cm Propilén Glicol 10
\hskip0,2cm Tampón Citrato 0,05 M qs
\hskip0,2cm pH 4,0
2 Etanol 10 1,99
\hskip0,2cm Propilén Glicol 10
\hskip0,2cm Tampón Acetato 0,05 M qs
\hskip0,2cm pH 4,0
3 Etanol 10 1,29
\hskip0,2cm Tampón Acetato 0,05 M qs
\hskip0,2cm pH 4,0
4 Propilén Glicol 10 1,58
\hskip0,2cm Tampón Acetato 0,05 M qs
pH 4,0
\hskip0,2cm 5 Polisorbato 80 0,5 (p/v) 2,21
\hskip0,2cm Tampón Acetato 0,05 M qs
6 Etanol 10 10,27
\hskip0,2cm Propilén Glicol 25
\hskip0,2cm Tampón Acetato 0,05 M qs
\hskip0,2cm pH 40
7 Etanol 10 4,32
\hskip0,2cm Propilén Glicol 15
\hskip0,2cm Tampón Acetato 0,05 M qs
\hskip0,2cm pH 4,0
De esta manera, es factible conseguir altas concentraciones de un compuesto de esta invención en un vehículo que no contiene tensioactivo o un emulsificante, lo que a su vez debe permitir evaluaciones clínicas y toxicológicas sencillas de estos compuestos. El éster de glicinato (12) también da lugar a una mejor estabilidad en un medio ambiente acuoso en un intervalo de pH fisiológico durante largos períodos de tiempo, indicando una mejora de la semivida bajo condiciones normales. Aunque es necesario preparar concentrados de 1 y 27 para el almacenamiento y a continuación diluido antes de la administración, es factible preparar fácilmente soluciones para uso de los compuestos de esta invención.
Se pueden preparar los compuestos de Fórmula I usando un compuesto de Fórmula II
22
en la que
Ar, R^{1}, R^{2}, R^{3}, R^{4}, R^{5}, R^{7}, R^{8}, R^{9}, R^{10} tienen los significados definidos más arriba en la Fórmula I.
R^{13} se selecciona entre el grupo constituido por t-butilcarbamato (BOC);
R^{24} se selecciona entre el grupo constituido por
\vskip1.000000\baselineskip
23
(N-hidroxisuccinimida, "NHS" en el presente documento), N-hidroxisulfosuccinimida y las sales de la misma, 2-nitrofenilo, 4-nitrofenilo, y 2,4-diclorofenilo;
Z es O, NH o alquilamino;
Y es O, NH, o alquilamino.
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24
en los que los grupos R y diversos sustituyentes son como se ha definido anteriormente en el presente documento y en toda esta memoria; pueden prepararse poniendo en contacto un compuesto de fórmula IV
25
R^{25} es
con un ácido de fórmula
26
R^{27} se selecciona entre el grupo constituido por H, alquilo C_{1}-C_{12} y arilo;
y un agente sililante. La bis N,O-trimetilsilil acetamida (BSA) es un agente sililante especialmente preferido.
Tal como se usa en el presente documento, la frase "sustituyente de éster activo" se refiere a un sustituyente que convierte el sustituyente indicado en un buen grupo saliente. Se pueden seleccionar los sustituyentes apropiados con las directrices de las guías de referencia estándar, por ejemplo, "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, (Londres y Nueva York, 1973); Greene, T. W. "Protecting Groups in Organic Síntesis", Wiley (Nueva York, 1981). Véase especialmente las páginas 180 a 184 de Greene. Un grupo sustituyente de éster activo especialmente preferido es la N-hidroxi-succinimida. Otros grupos preferidos incluyen, no se limitan de ninguna forma a:
27
(O-N-hidroxisuccinimida), O-N-hidroxisulfosuccinimida y las sales de la misma, O-2-nitrofenilo, O-4-nitrofenilo, y O-2,4-diclorofenilo, en los que O se refiere al grupo oxígeno necesario para formar la funcionalidad éster.
Tal como se usa en el presente documento el término "amida" se refiere a una funcionalidad amida que se puede romper usando condiciones alcalinas. Por ejemplo, el término se refiere pero no se limita de ninguna forma a, -NMe_{2}. Para directrices adicionales, véase por ejemplo Greene, T. W. "Protecting Groups in Organic Synthesis", Wiley (Nueva York, 1981).
Tal como se usa en el presente documento la frase "sustituyente del éster activo" se refiere a un sustituyente que convierte el sustituyente OR^{24} en un buen grupo saliente. Se pueden seleccionar los sustituyentes apropiados con directrices de las guías de referencia estándar, por ejemplo, "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, (Londres y Nueva York, 1973); Greene, T. W. "Protecting Groups in Organic Synthesis", Wiley (Nueva York, 1981). Un grupo R^{25} especialmente preferido es N-hidroxi-succinimida. (NHS)
Los procedimientos descritos en el presente documento se completan de manera más preferible en presencia de un solvente. El técnico puede seleccionar un solvente apropiado para los procedimientos descritos anteriormente. Son particularmente preferidos los solventes orgánicos inertes, sin embargo, bajo ciertas condiciones, puede ser apropiado un solvente acuoso. Por ejemplo, si R^{27} es hidrógeno y R^{13} es BOC, será efectiva una base acuosa como solvente.
Cuando el sustituyente R^{6} deseado en el compuesto de Fórmula I contiene una amina, entonces el sustituyente amina del grupo R^{6} deberá protegerse usando un grupo protector de amino. El técnico puede seleccionar fácilmente un grupo protector de amino apropiado usando las directrices de los trabajos estándar, que incluyen, por ejemplo, "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum press, (Londres y Nueva York, 1973); Greene, T. W. "Protecting Groups in Organic Synthesis", Wiley (Nueva York, 1981).
R^{27} deberá ser un grupo que permita la eliminación del sustituyente -CO_{2}R^{27} usando condiciones ácidas, neutras, o básicas débiles. Los grupos R^{27} preferidos incluyen, pero no se limitan de ninguna forma a, hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, triclorometilo, tricloroetilo, y metiltiometilo. Se prefiere de manera especial que R^{27} sea hidrógeno.
Para proporcionar directrices adicionales para el técnico, se proporcionan los siguientes esquemas:
Se pueden preparar compuestos de Fórmula I usando un compuesto de fórmula II
28 
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en la que
Ar, R^{1}, R^{2}, R^{3}, R^{4}, R^{5}, R^{7}, R^{8}, R^{9}, R^{10} tienen los significados definidos más arriba para la Fórmula I. El término R^{11} es tal como se ha definido para R^{11} más arriba.
R^{13} es un grupo protector de amino seleccionado;
R^{24} se selecciona entre el grupo constituido por
el sustituyente del éster activo, el sustituyente de amida, O-2-nitrofenilo, O-4-nitrofenilo, y O-2,4-diclorofenilo;
X es O, NH o alquilamino;
Y es C, O, NH, S, SO, SO_{2} o alquilamino.
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29 
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en la que los grupos R y diversos sustituyentes son tal como se han definido anteriormente en el presente documento y en toda la memoria; se pueden preparar poniendo en contacto un compuesto de fórmula IV
30
R^{25} es
Con un ácido de fórmula
31
R^{27} se selecciona entre el grupo constituido por H, alquilo C^{1}-C^{12}, y arilo;
y un agente sililante. La bis N,O-trimetilsilil acetamida (BSA) es un agente sililante especialmente preferido.
Tal como se usa con respecto a R^{25}, la frase "sustituyente del éster activo" se refiere a un sustituyente que convierte el sustituyente OR^{24} en un buen grupo saliente. Se pueden seleccionar los sustituyentes apropiados con directrices procedentes de las guías de referencia estándar, por ejemplo, "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, (Londres y Nueva Cork, 1973); Greene, T. W. "Protecting Groups in Organic Synthesis", Wiley (Nueva Cork, 1981). Un grupo R^{25} especialmente preferido es la N-hidroxi-succinimida. (NHS)
Los procedimientos descritos en el presente documento se completan de manera más preferible en presencia de un solvente. El técnico puede seleccionar un solvente apropiado para los procedimientos descritos anteriormente. Son particularmente preferidos los solventes orgánicos inertes; sin embargo, bajo ciertas condiciones puede ser apropiado un solvente acuoso. Por ejemplo, si R^{27} es hidrógeno y R^{13} es BOC será efectiva una base acuosa como solvente.
Cuando el sustituyente R^{6} deseado en el compuesto de Fórmula I contiene una amina, entonces deberá protegerse el sustituyente amina del grupo R^{6} usando un grupo protector de amino. El técnico puede seleccionar fácilmente un grupo protector de amino apropiado usando las directrices para los trabajos estándar, que incluyen, por ejemplo, "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, (Londres y Nueva York, 1973); Greene, T. W. "Protecting Groups in Organic Synthesis", Wiley (Nueva York, 1981).
R^{27} deberá ser un grupo que permita la eliminación del sustituyente -CO_{2}R^{27} usando condiciones ácidas, neutras, o básicas débiles. Los grupos R^{27} preferidos incluyen, pero no se limitan de ninguna forma a, hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, triclorometilo, tricloroetilo, y metiltiometilo. Se prefiere de manera especial que R^{27} sea hidrógeno.
Para proporcionar directrices adicionales para el técnico, se proporcionan los siguientes esquemas:
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Esquema I
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32 
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Esquema I'
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33
Tal como se usa en el Esquema I' y en toda la memoria, R^{1'} es halógeno, SH, amino, monoalquilamino, dialquilamino, trialquilamonio, alquiltio, dialquilsulfonio, sulfato, fosfato o un grupo OH protegido o SH protegido; R^{2} es OH o SH; R^{26} es un grupo protector de alcohol introducido durante una parte del procedimiento sintético para proteger un grupo alcohol que puede reaccionar de otra manera en el curso de las manipulaciones químicas, y se elimina a continuación en la última etapa de la síntesis. Se describen numerosas reacciones para la formación y eliminación de dichos grupos protectores en numerosos trabajos estándar, que incluyen, por ejemplo, "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, (Londres y Nueva York, 1973); Greene, T. W. "Protecting Groups in Organic Síntesis", Wiley (Nueva York, 1981). El técnico experto puede seleccionar un grupo protector de alcohol apropiado, particularmente con las directrices proporcionadas en dichos trabajos. Un grupo protector de alcohol particularmente útil es tert-butildimetilsililo (TBS). Se pueden derivatizar los productos de dichos esquemas usando procedimientos estándar para proporcionar otros compuestos de criptoficina.
34
En general, los términos de los procedimientos de esta invención son como se ilustra a continuación:
35
36 
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R^{6} y R^{11'} son tal como se han definido en el presente documento en toda la memoria.
Se puede derivatizar de manera adicional el producto de los esquemas proporcionados en el presente documento usando procedimientos estándar para proporcionar compuestos de criptoficina adicionales.
El técnico puede utilizar materiales y reactivos de partida para preparar los compuestos deseados usando las directrices de los esquemas previos y los siguientes ejemplos.
Se puede preparar el material de partida éster, por ejemplo, como sigue:
37
38
R^{6} tiene el significado definido más arriba.
Se proporcionan los siguientes esquemas para proporcionar directrices adicionales. Se usan algunas abreviaturas en los Esquemas, Preparaciones y Ejemplo que se conocen por lo general en la técnica. Por conveniencia, estas abreviaturas incluyen:
DMAP
4-dimetilaminopiridina
BOC
Tert-butoxicarbonilo
mcpba
Ácido m-cloroperbenzoico
TMSCl
Clorotrimetilsilano
HEW
Reacción de Horner-Emmons-Wadsworth (reacción estándar para la olefinación de un aldehído usando un fosfonato y una base)
TMG
1,1,3,3-tetrametilguanidina (base estándar usada para la reacción HEW)
DIBAL
Hidruro de diisobutilaluminio (reactivo estándar para la reducción de un éster insaturado a un alcohol arílico)
SAE
Epoxidación Asimétrica Repentina (reacción establecida para la epoxidación enantioselectiva de alcoholes arílicos)
TBS
Tert-butildimetilsililo
TBS-Otf
Trifluorometanosulfonato TBS (reactivo estándar para la t-butildimetilsililación de alcoholes)
AIBN
2,2'-azobis (isobutironitrilo) (iniciador del radical estándar)
ACN
Acetonitrilo
DBU
1,8-diazabiciclo[5.4.0] undec-7-eno (base amina estándar)
EDCI
1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida.
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El esquema para preparar el éster se explica de manera adicional en la Sección de preparación del presente documento, que proporciona una aplicación específica del esquema para la conveniencia de los técnicos expertos.
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Esquema I
39 
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Esquema I (continuación)
40 
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Esquema I (continuación)
41 
\newpage
Esquema I (continuación)
42
los sustituyentes Ar reivindicados en el presente documento. No se pretende que la ilustración del esquema limite el esquema de la síntesis únicamente en el anillo fenilo ilustrado. Más bien, el técnico puede aplicar ampliamente este procedimiento para proporcionar materiales de partida deseados para los compuestos reivindicados en el presente documento.
El tiempo de reacción necesario está relacionado con los materiales de partida y la temperatura de trabajo. El tiempo de reacción óptimo para un procedimiento dado es, como siempre, un compromiso que se determina considerando los objetivos competitivos del rendimiento, que está favorecido por tiempos de reacción cortos, y el rendimiento máximo, que está favorecido por tiempos de reacción largos.
Se pueden preparar algunos compuestos de esta invención usando una ruta biosintética. Por ejemplo, se trata una solución de criptoficina 3 (aproximadamente 0,24 mmol) en DME-H_{2}O (2:1, 15,0 mL) a aproximadamente 0ºC con bromosuccinimida (aproximadamente 65 mg) y se deja calentar a temperatura ambiente. Tras aproximadamente 24 horas se elimina el solvente, y se disuelve el residuo en un solvente tal como CH_{3}CN y se somete a HPLC en fase reversa (CH_{3}CN/H_{2}O 65:35, se prefieren 6 mL/min) para dar una mezcla de criptoficinas. Se vuelve a cromatografiar la mezcla mediante HPLC en fase normal (hexano/acetato de etilo 1:1, se prefieren 3 mL/min) para dar las criptoficinas deseadas.
Asimismo, se pone la criptoficina 3 (aproximadamente 40 mg, 0,063 mmol) en DME/H_{2}O 2:1 (aproximadamente 6 mL) y se añade N-clorosuccinimida (0,075 mmol) y se calienta a aproximadamente 60-70ºC durante aproximadamente 24 horas. Se añade una cantidad adicional de NCS (8 mg) y el calentamiento continua durante aproximadamente otras 24 horas. Se elimina el solvente y se somete el residuo a HPLC (H_{2}O/CH_{3}CN al 35% 6 mL/min) para dar los compuestos de criptoficina deseados. La mezcla resultante se purifica de manera adicional mediante HPLC usando metanol/agua (aproximadamente 4:1) para obtener los compuestos de criptoficina purificados deseados.
Se proporcionan los siguientes ejemplos para ilustrar de manera adicional la invención. No se debe considerar que el alcance de la invención se limita o restringe a los siguientes ejemplos.
Preparación 1
Etapa 1
Metil 5.fenilpent-2 (E)-enoato
Se agitó una solución de fosfonoacetato de trimetilo (376 g, 417 mL, 2,07 mol) en THF (750 mL) a 0ºC en un matraz de fondo redondo con 3 bocas de 3 L equipado con un agitador mecánico y una entrada de N_{2}. Se añadió tetrametil guanidina pura (239 g, 260 mL, 2,07 mol) gota a gota mediante un embudo de adición a la solución enfriada. Se agitó la solución de color amarillo pálido transparente enfriada durante 25 minutos a 0ºC. Se añadió una solución de hidrocinamaldehído (90%, 253 g, 248 mL, 1,9 mol) en THF (125 mL) gota a gota lentamente a la solución de reacción. Tras la finalización de la adición, se agitó la reacción durante 10 h elevando la a temperatura ambiente. La GC indicó una relación 95:5 de producto a material de partida. Se añadieron 500 ml de agua al recipiente de reacción y se agitó la reacción durante la noche separándola en dos capas. Se aisló la capa orgánica y se extrajo la capa acuosa con t-BuOMe. Se combinaron las capas orgánicas y se secaron sobre MgSO_{4}, a continuación se concentraron al vacío para dar como resultado un aceite de color naranja. Se destiló el producto crudo a 129ºC/0,3 mm de Hg dando como resultado 360,5 g, rendimiento del 91,7%, de un aceite de color amarillo ligeramente transparente.
EIMS m/z 190 (13; M+), 159 (410), 158 (39), 131 (90), 130 (62), 117 (22), 104 (12), 95 (57), 91 (100), 77 (21), 65 (59); HREIMS m/z 190,0998 (C_{12}H_{14}O_{2} D -0,4 mnu); UV Imáx (e) 210 (8400), 260 (230) nm; IR nmáx 3027, 2949, 1723, 1658, 1454, 1319, 1203, 978, 700 cm^{-1}; ^{1}H RMN d (CDCl_{3}) 7,15-7,3 (Ph-H5; bm), 7,00 (3-H; dt, 15,6/6,6), 5,84 (2-H; dt, 15,6/1,2), 3,70 (OMe; s), 2,76 (5-H2; t, 7,2), 2,51 (4-h2; bdt, 6,6/7,2); ^{13}C RMN d (CDCl_{3}) 166,9 (1), 148,3 (3), 140,6 (Ph-1'), 128,4/128,2 (Ph2'/3'/5'6'), 126,1 (Ph 4'), 121,4 (2).51,3 (OMe), 34,2/33,8 (4/5).
Etapa 2
5-fenil-pent-2-en-1-ol
Se introdujo en un matraz de fondo redondo con 4 bocas de 12 L equipado con un termopar, agitador mecánico y entrada de N_{2} una solución de éster de enoato (310,5 g, 1,5 mol) en THF (1,5 L) y se enfrió a -71ºC mediante un baño de i-PrOH/CO_{2}. Se añadió al recipiente de reacción gota a gota DIBAL (2,5 L, 1,5 M en tolueno, 3,75 mol) a una velocidad para mantener la temperatura de reacción < -50ºC. Tras la adición completa, se agitó la reacción durante la noche con la temperatura de reacción < -50ºC. La TLC (3:1 Hexanos:EtOAc, SiO_{2}) indicó ausencia de material de partida tras 16 h. Se dejó elevar la temperatura de reacción a -15ºC. La reacción se detuvo lentamente con HCl 1 N (150 mL). En este punto, la reacción se organizó en forma de un sólido gelatinoso. Se empleó una espátula para disociar el semisólido y se añadió HCl 1 N (200 mL) haciendo la mezcla más fluida. Se añadió el HCl concentrado (625 mL) para formar un sistema en dos fases. Se separaron las capas y se extrajo el producto con t-BuOMe. Se secó la capa orgánica sobre MgSO_{4} y se concentró al vacío para dar como resultado un aceite de color amarillo pálido transparente, 247,8 g. Se destiló el producto crudo a 145ºC/0,25 mm de Hg dando como resultado 209,7 g, 86,2%.
EIMS m/z 162 (1:M+) 144 (16), 129 (7), 117 (9) 108 (6), 92 (17), 91 (100), 75 (5), 65 (12), HREIMS m/z 162, 1049 (C_{11}H_{14}O, d -0,4 mmu); UV 1max (e) 206 (360); IR nmax 3356, 2924, 1603, 1496, 1454, 970, 746, 700 cm^{-1}; ^{1}H RMN d 7,15-7,3 (Ph-H5; m), 5,70 (3-H; dt, 15,6/6,0, 5,61 (2-H; dt, 15,6/4,8), 4,02 (1-H2; dt, 6,0/7,2); ^{13}C RMN d 141,6 (Ph 1'), 131,8 (3), 129, 5 (2), 128,3/128,2 (Ph 2'/3'/5'/6'), 125,7 (Ph 4'), 63,3 (1), 35,4/33,8 (4/5).
Etapa 3
(2S,3S)-2,3-epoxi-5-fenil-1-pentanol
A un matraz de fondo redondo con tres bocas de 1 L equipado con agitador mecánico, termopar y entrada de nitrógeno se le añadió CH_{2}Cl_{2} (350 mL), se secó con tamices moleculares de 4 \ring{A} (30 g) y tartrato de L- (+) -dietilo (7,62 g, 0,037 mol). Se enfrió la mezcla resultante a -20ºC y se trató con Ti(O-i-Pr)_{4} (9,2 mL, 0,031 mol), seguido por la adición de hidroperóxido de t-butilo (4,0 M en CH_{2}Cl_{2}, 182 mL, 0,78 mol) a una velocidad para mantener la temperatura ^{2} a -20ºC. Se agitó la reacción a la misma temperatura durante 5 h y se filtró a continuación en una solución de sulfato ferroso heptahidratado (132 g) y ácido tartárico (40 g) en agua (400 mL) a 0ºC. Se agitó la mezcla durante 20 min, se transfirió a continuación en un embudo separador y se extrajo con t-BuOMe (2 x 200 mL). Se agitó la fase orgánica combinada con solución de NaOH al 30% que contenía NaCl, durante 1 h a 0ºC. Se separaron las capas de nuevo y se extrajo la fase acuosa con t-BuOMe. Se lavó la fase orgánica combinada con salmuera, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró para dar como resultado 52,8 g como un aceite ámbar.
Etapa 4
(2R,3R)-2-hidroxi-3-metil-5-fenilpentan-1-ol
A un matraz de fondo redondo con 3 bocas de 5 L equipado con agitador mecánico, termopar y entrada de nitrógeno se le añadieron hexanos (1 L) y se enfriaron a 0ºC. Se añadió una solución 2,0 M de Me_{3}Al en hexanos (800 mL, 1,6 mol), seguida por una solución de epóxido (120 g, 0,677 mol) en hexanos (250 mL)/CH_{2}Cl_{2} (50 mL) manteniendo la temperatura por debajo se 20ºC. Tras la adición completa, se agitó la mezcla de reacción turbia a 5ºC durante 35 min, tras de lo cual se añadió gota a gota una solución de HCl al 10% (300 mL), seguida por la adición de HCl concentrado (350 mL). Se separaron las capas y se lavó la fase orgánica con salmuera y se secó sobre MgSO_{4}. Tras la eliminación de los compuestos volátiles al vacío, se obtuvieron 122,1 gramos de aceite.
Etapa 5
Tosilato de (2R,3R)-2-hidroxi-3-metil-5-fenilpent-1-ilo
A un matraz de fondo redondo con 3 bocas de 2 L equipado con agitador mecánico y entrada de nitrógeno se le añadieron diol (58 g, 0,30 mol), óxido de dibutilestaño (1,5 g, 0,006 mol, 2 mol%), cloruro de toluénsulfonilo (57,5 g, 0,30 mol), CH_{2}Cl_{2} (580 mL) y trietilamina (42,0 mL, 0,30 mol). Se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 2 h (aunque la reacción se completó al cabo de 1 h), se filtró, se lavó con agua y se secó sobre MgSO_{4}. La concentración de los compuestos volátiles al vacío dio como resultado 104,1 gramos de un aceite de color ligeramente ámbar.
Etapa 6
Tosilato de (2R,3R)-2-[(tert-butildimetilsilil)oxi]-3-metil-5-fenilpent-1-ilo
Se trató una solución de tosilato (100 g, 0,29 mol) y trietilamina (81,0 mL, 0,58 mol) en CH_{2}Cl_{2} (1200 mL) con TBS-OTf (99 mL, 0,43 mol) gota a gota con agitación continua durante otros 20 min. Se lavó la reacción dos veces con salmuera, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró hasta sequedad. Se disolvió el aceite en una cantidad mínima de hexanos y se filtró sobre una almohadilla de sílice, eluyendo con hexanos:EtOAc (9:1) para dar como resultado 134 g de un aceite de color ligeramente ámbar.
Etapa 7
Tosilato de (2R,3R,5RS)-2-[(tert-butildimetilsilil)oxi]-3-metil-5-bromo-5-fenilpent-1-ilo
A un matraz de fondo redondo con 3 bocas de 5L equipado con un agitador mecánico, condensador de reflujo y entrada de nitrógeno se le añadió CCl_{4} (1680 mL) TBS Ts (140 g, 0,30 mol), NBS (65 g, 0,365 mol) y AIBN (16,5 g, 0,10 mol). Se desgasificó la mezcla mediante evacuación bajo vacío completo con agitación, y se rellenó con nitrógeno (3x). A continuación se calentó la mezcla de reacción a reflujo, después de lo cual el color llegó a ser marrón oscuro. Tras 15 min a reflujo vigoroso, la mezcla de reacción llegó a ser amarillo suave, y los análisis cromatográficos indicaron que se completó la reacción. Tras enfriar a temperatura ambiente, se filtró la reacción y se concentró el filtrado hasta sequedad. Se volvió a disolver el residuo en hexanos y se filtró de nuevo, y se concentró hasta sequedad para dar como resultado 170,3 gramos como un aceite de color ámbar.
Etapa 8
Tosilato de (2R,3R)-2-[(tert-butildimetilsili)oxi]-3-metil-5-fenilpent-4(E)-en-1-ilo
A un matraz de fondo redondo con 3 bocas de 2 L equipado con un agitador mecánico, condensador de reflujo y entrada de nitrógeno se le añadió una solución de bromuro (100 g, 0,186 mol) en acetonitrilo (700 mL).
Se añadió DBU (83,6 mL, 0,557 mol) y la solución marrón oscura resultante se agitó a reflujo durante 15 min. Tras enfriar a temperatura ambiente, se eliminó el solvente al vacío, y se digirió el residuo en CH_{2}Cl_{2} (200 mL) y se filtró a través de una almohadilla de sílice. Se evaporaron de nuevo los compuestos volátiles y se disolvió el residuo en EtOAc y se lavó con agua, salmuera y se secó sobre MgSO_{4} y se concentró hasta sequedad. La cromatografía mplc (Prep 500) preparativa dio como resultado el compuesto insaturado deseado (50,3 g, rendimiento del 60% sobre 4 etapas).
Etapa 9
(3S,4R)-3-[(tert-butildimetilsilil)oxi]-4-metil-6-fenilhex-5(E)-en-1-nitrilo
Se disolvió el tosilato (50 g, 0,11 mol) en DMSO (1 L) y se trató con KCN (14,2 g, 0,22 mol) y agua (25 mL), y se agitó la mezcla resultante a 60ºC bajo nitrógeno durante 18 h. Tras enfriar a temperatura ambiente, se repartió la mezcla de reacción entre EtOAc (1 L) y agua (1 L). Se extrajo la fase acuosa con EtOAc (500 mL), y se lavó la fase orgánica combinada con salmuera y se secó sobre Na_{2}SO_{4}. La cromatografía instantánea sobre sílice con CH_{2}Cl_{2} dio como resultado el nitrilo deseado con un rendimiento del 92%.
Etapa 10
Metil (5S,6R)-5-[(tert-butildimetilsilil)oxi]-6-metil-8-fenilocta-2 (E)-7 (E)-dienoato
Se disolvió el nitrilo (14,67 g, 46,5 mmol) en tolueno (200 mL) y se enfrió a -78ºC bajo nitrógeno. Se añadió gota a gota con agitación vigorosa a una solución 1,5 M de DIBAL en tolueno (37,2 mL, 55,8 mmol). Después que se completó la adición, se retiró el baño de enfriamiento y se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 1 h. Se vertió cuidadosamente la mezcla de reacción en HCl 1 N y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 30 min. Se separaron las capas y se lavó la capa orgánica con una solución acuosa saturada de tartrato de sodio potasio (2x), salmuera y se secó sobre Na_{2}SO_{4}. Se eliminaron los compuestos volátiles al vacío, y se usó el aceite de color amarillo pálido crudo directamente en la condensación posterior. Se disolvió el aldehído crudo del anterior en THF (90 mL) y se trató con fosfonoacetato de trimetilo (9,03 mL, 55,8 mmol) y tetrametilguanidina (7,0 mL, 55,8 mmol) a temperatura ambiente bajo nitrógeno. Se agitó la mezcla de reacción durante 16 h, se repartió a continuación entre EtOAc (200 mL) y agua (100 mL). Se extrajo la fase acuosa de la parte inferior con EtOAc (100 mL) y se lavó la fase orgánica combinada con agua, salmuera y se secó sobre Na_{2}SO_{4}. Se eliminaron los compuestos volátiles al vacío, y se cromatografió el aceite de color amarillo crudo (17,0 g) sobre gel de sílice con CH_{2}Cl_{2}:ciclohexano (1:1 a 2:1) para dar como resultado 13,67 gramos del éster deseado, 78,5%.
43
Se disolvió metil éster (2,673 mmol) en acetona, y a continuación se añadió LiOH acuoso 1 N (26 mL) a temperatura ambiente. Se diluyó de manera adicional la mezcla turbia con acetona (20 mL) y se agitó la mezcla de color amarillo resultante a temperatura ambiente durante 23,5 h. Se diluyó la reacción con dietil éter (400 mL) y se lavaron las fases orgánicas con HCl 1 N (120 mL), salmuera (200 mL) y H_{2}O (160 mL). Se secaron las fases orgánicas y se concentraron a vacío para dejar un aceite de color amarillo que se purificó mediante cromatografía en columna (gradiente AcOH al 5% + EtOAc/Hexanos al 20% - 40%) para dar ácido carboxílico como un aceite de color amarillo (960 mg, 100%).
^{1}H RMN (CDCl_{3}) d 7,38-7,19 (m, PhH_{5}), 7,09 (ddd, J = 15,2, 7,6 y 7,9 Hz, 3-H), 6,38 (d, J = 16 Hz, 8-H, 6,16 (dd, J = 16 y 8 Hz, 7-H), 5,85 (d, J = 15,8 Hz, 2-H), 3,81-3,75 (m, 5-H), 2,49-2,37 (m, 6-H, 4-CH_{2}), 1,12 (d, J = 6,7 Hz, 6-Me), 0,91 (s, SiCMe_{3}), 0,065 (s, SiMe), 0,068 (s, SiMe) ppm;
IR u (CHCl_{3}) 2957, 2930, 2858, 1697, 1258, 1098, 838 cm^{-1};
MS (FD) 360,2 (M^{+}, 100);
[\alpha]_{D}^{+}87,6º (c 10,5, CHCl_{3});
El análisis calculado para C_{21}H_{32}O_{3} requiere C, 69,95; H, 8,95%. Encontrado: C, 69,19; H, 8,39%.
44
A una solución agitada de ácido carboxílico (2 mmol) en dimetilformamida seca (5,50 ml) se le añadieron 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) carbodiimida (2,4 mmol) y N-hidroxisuccinimida (2,6 mmol) a temperatura ambiente. Se agitó la mezcla durante 28 h y se diluyó a continuación con EtOAc (100 mL) y se lavó con HCl acuoso 1 N (2 x 50 mL), H_{2}O (75 mL), se secó y se concentró al vacío para dejar un aceite. Se purificó el producto crudo mediante cromatografía en columna (gradiente: EtOAc/Hexanos 5-30%) para dar el éster activo en forma de un aceite de color amarillo pálido (724 mg, 80%).
^{1}H RMN (CDCl_{3}) d 7,36-7,20 (m, PhH_{5}, 3-H), 6,38 (d, J = 16 Hz, 8-H), 6,14 (dd, J = 16,1 y 8,0 Hz, 7-H). 6,03 (d, J = 16 Hz, 2-H), 3,79 (q, J = 4,3 Hz, 5-H), 2,94 (brs, CH_{2}CH_{2}), 2,58-2,42 (m, 6-H, 4-CH_{2}), 1,10 (d, J = 6,8 Hz, 6-Me), 0,90 (s, SiCMe_{3}), 0,05 (s, SiMe_{2}) ppm;
IR u (CHCl_{3}) 2957, 2931, 2858, 1772, 1741, 1648, 1364, 1254, 1092, 1069, 838 cm^{-1};
MS (FD) 457 (M^{+}, 100);
[\alpha]_{D}^{+}71,3º (c 10,1, CHCl_{3});
El análisis calculado para C_{25}H_{35}NO_{5} requiere: C, 65,61; H, 7,71; N, 3,06%. Encontrado: C, 65,51; H, 7,56; N, 3,02%.
45
A una solución agitada de éter de sililo (2,50 g, 5,47 mmol) en CH_{3}CN (130 mL) se le añadió HF acuoso al 48% (15 mL) a 0ºC. Se agitó la solución a 0ºC durante 0,75 h y a continuación a temperatura ambiente durante 4 h. Se diluyó la reacción con dietil éter (300 mL) y se lavó con H_{2}O hasta que el lavado estuvo \sim pH 7. Se secaron las fases orgánicas (MgSO_{4}) y se concentraron al vacío para dar un residuo de color amarillo que se recristalizó en Et_{2}O para dar un alcohol en forma de cristales blancos (1,46 g, 78%).
^{1}H RMN (CDCl_{3}) d 7,41-7,20 (m, PhH_{5}, 3-H), 6,48 (d, J = 16 Hz, 8-H), 6,15 - 6,07 (m, 7-H, 2-H), 3,71 - 3,65 (m, 5-H), 2,83 (brs, CH_{2}CH_{2}), 2,60 - 2,33 (m, 6-H, 4-CH_{2}), 1,95 (brs, 5-=H), 1,14 (d, J = 6,8 Hz, 6-Me) ppm;
IR u (Kbr) 3457, 1804, 1773, 1735, 1724, 1209, 1099, 1067, 1049, 975, 744, 694 cm^{-1};
UV (EtOH) I_{max} 250 (e = 20535) nm;
MS (FD) 343,2 (M^{+}, 100);
[\alpha]_{D}-57,8º (c 10,56, CHCl_{3});
El análisis calculado para C_{19}H_{21}NO_{5}S requiere: C, 66,46; H, 6,16; N, 4,08%. Encontrado; C, 66,49; H, 6,16; N, 4,07%.
46
Ejemplo 1 Preparación del acetato de criptoficina 55 (3)
A una solución de 1 (93 mg, 0,13 mmol) en 659 ml de cloruro de metileno a 0ºC se le añadió trietilamina (55 ml, 0,40 mmol), 4-dimetilamino piridina (1,6 mg, 0,013 mmol), y anhídrido acético (19 ml, 0,20 mmol). Tras agitar a 0ºC durante 1 hora se detuvo súbitamente la reacción con 19 ml de metanol, se concentró a 0,5 volúmenes, y se aplicó de manera directa a una columna de cromatografía instantánea (19 gramos de gel de sílice instantáneo). La elución con acetato de etilo-hexanos (3:1) proporcionó 88 mg (89%) del compuesto del título en forma de una espuma blanca:
500 MHz ^{1}H RMN (CDCl_{3}) d 7,38-7,31 (m, 5H), 7,24 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 7,22-7,18 (m, 1H), 7,10 (dd, 1H, J = 8,5, 2,1 Hz), 6,88 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 6,75 (ddd, 1H, J = 15, 13, 4,6 Hz), 5,78 (dd, 1H, J = 15, 1,0 Hz), 5,55 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 5,46 (dd, 1H, J = 9,8, 1,2 Hz), 4,95 (dd, 1H, J = 11, 2,9 Hz), 4,89 (ddd, 1H, J = 9,9, 9,9, 1,7 Hz), 4,81 (d, 1H, J = 9,8 Hz), 4,79-4,74 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,39 (dd, 1H, J = 13, 8,1 Hz), 3,22 (dd, 1H, J = 13, 4,1 Hz), 3,16 (dd, 1H, J =
14, 5,1 Hz), 3,07 (dd, 1H, J = 14, 7,6 Hz), 2,65-2,55 (m, 2H), 2,47-2,39 (m, 1H), 1,95 (ddd, 1H, J = 14, 13, 4,6 Hz), 1,86-1,77 (m, 1H), 1,73-1,66 (m, 1H), 1,68 (s, 3H), 1,27 (s, 3H), 1,19 (s, 3H), 1,09 (d, 3H, J = 7,1 Hz), 1,03 (d, 3H, J =
6,7 Hz), 0,97 (d, 3H, J = 6,6 Hz).
Ejemplo 2 Preparación del succinato de criptoficina 55 (4)
A una solución de 1 (27 mg, 0,038 mmol) y anhídrido succínico (5,7 mg, 0,057 mmol) en 383 ml de cloruro de metileno a temperatura ambiente se le añadieron trietilamina (16 ml, 0,115 mmol) y 4-dimetilamino piridina (4,7 mg, 0,038 mmol). Tras agitar durante 19 h, se añadieron otros 5,7 mg (0,057 mmol) de anhídrido succínico y 4,7 mg (0,038 mmol) de 4-dimetilamino piridina seguido por agitación 29 h más. Se trató la reacción con 0,5 ml de ácido clorhídrico acuoso 1 N y se lavó con cloruro de metileno (3 X 0,5 ml). Se secaron los extractos orgánicos combinados (Na_{2}SO_{4}), se filtraron, y se concentraron al vacío hasta una espuma blanca. La purificación mediante HPLC^{7} en fase reversa proporcionó 10 mg (32%) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (CDCl_{3}) d 7,36-7,31 (m, 6H), 7,22 (br s, 1H), 7,08 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,02 (br s, 1H), 6,87 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,61 (m, 1H), 5,94-5,87 (m, 2H), 5,51 (d, 1H, J = 9,8 Hz), 4,95 (dd, 1H, J = 10, 2,8 Hz), 4,87-4,76 (m, 3H), 3,90 (s, 3H), 3,39 (dd, 1H, J = 16, 5,6 Hz), 3,28 (dd, 1H, J = 16, 8,1 Hz), 3,17 (dd, 1H, J = 16, 5,6 Hz), 3,05 (dd, 1H, J = 16, 8,2 Hz), 2,68-2,62 (m, 1H), 2,60-2,46 (m, 2H), 2,45-2,28 (m, 3H), 2,01-1,93 (m, 2H), 1,88-1,70 (m, 2H), 1,26 (s, 3H), 1,18 (s, 3H), 1,12 (d, 3H, J = 7,0 Hz), 1,04 (d, 3H, J = 6,6 Hz), 1,00 (d, 3H, J = 6,5 Hz).
Ejemplo 3 Preparación del fenilacetato de (2'-di-t-butilfosfatil) criptoficina 55 (5)
A una solución de 1 (0,102 mmol), 24 (46 mg, 0,134 mmol), y 4-dimetilamino piridina (12 mg, 0,102 mmol) en 250 ml de cloruro de metileno anhidro a temperatura ambiente se le añadió una solución de 1,3-diciclohexilcarbodiimida (27 mg, 0,134 mmol) en 50 ml de cloruro de metileno. Tras agitar a temperatura ambiente durante 6 h, se diluyó la reacción con 1 ml de acetato de etilo-hexanos (3:1) y se filtró a través de un parche de celite, se lavó con acetato de etilo-hexanos (3:1). El filtrado y los lavados se concentraron al vacío hasta una espuma púrpura. La cromatografía (15 g de gel de sílice instantáneo), eluyendo con acetato de etilo-hexanos (4:1) proporcionó 86 mg (82%) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (CDCl_{3}) d 7,35 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 7,30-7,19 (m, 8H), 7,11 (dd, 1H, J = 8,4, 2,0 Hz), 7,02 (t, 1H, J = 7,5 Hz), 6,87 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,84 (d, 1H, J = 7,5 Hz), 6,73 (ddd, 1H, J = 15, 13, 4,7 Hz), 5,92 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 5,79 (dd, 1H, J = 15, 1,0 Hz), 5,43 (dd, 1H, J = 9,4, 1,8 Hz), 4,98 (dd, 1H, J = 12, 3,1 Hz), 4,81 (ddd, 1H, J 0 9,9, 9,9, 1,8 Hz), 4,75 (d, 1H, J = 9,4 Hz), 4,73-4,67 (m, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,49 (d, 1H, J = 16 Hz), 3,44-3,38 (m, 1H), 3,38 (d, 1H, J = 16 Hz), 3,27-3,17 (m, 2H), 3,10 (dd, 1H, J = 14, 8,2 Hz), 2,55-2,46 (m, 2H), 2,37-2,27 (m, 1H), 1,95 (ddd, 1H, J = 14, 12, 4,5 Hz), 1,83-1,70 (m, 2H), 1,49 (s, 18H), 1,27 (s, 3H), 1,20 (s, 3H), 1,03 (d, 3H, J = 6,5 Hz), 0,97 (d, 3H, J = 6,4 Hz), 0,92 (d, 3H, J = 7,0 Hz).
Ejemplo 4 Preparación de la sal de disodio (2'-fosfatil) fenilacetato de Criptoficina 55 (6)
A una solución de 5 (84 mg, 0,081 mmol) en 400 ml de cloruro de metileno a temperatura ambiente se le añadió una solución 4,0 M de cloruro de hidrógeno en 1,4-dioxano (81 ml, 0,33 mmol). Se dejó agitar la solución de color amarillo pálido a temperatura ambiente durante 2 h. Tras la concentración al vacío hasta dar una espuma semiblanca, el dihidrógeno fosfato crudo se disolvió en 614 ml de tetrahidrofurano y se trató con una solución acuosa de hidróxido de sodio 5,00 N (33 ml, 0,163 mmol). Tras agitar durante 10 min, se concentró la mezcla al vacío hasta una espuma de color tostado. Se activó la sal cruda en 1 ml de acetonitrilo caliente y 0,1 ml de agua caliente. Se filtraron los compuestos insolubles y se concentró el filtrado al vacío para proporcionar 69 mg (87%) del compuesto del título en forma de un sólido blanco: 500 MHz ^{1}H RMN (MeOH-d_{4}) d 7,58 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 7,38-7,32 (m, 2H), 7,32-7,28 (m, 3H, 7,28 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 7,17 (dd, 1H, J = 8,5, 2,1 Hz), 7,09 (ddd, 1H, J = 7,8, 7,8, 1,7 Hz), 6,98 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 6,79-6,70 (m, 2H), 6,67 (d, 1H, J = 7,4 Hz), 5,91 (dd, 1H, J = 25, 1,7 Hz), 5,45 (dd, 1H, J = 9,4, 1,6 Hz), 5,06 (dd, 1H, J = 10, 2,7 Hz), 5,01 (d, 1H, J = 9,4 Hz), 4,89-4,80 (m, 1H), 4,47 (dd, 1H, J = 11, 3,8 Hz), 3,84 (s, 3H), 3,67 (d, 1H, J = 16 Hz), 3,45 (d, 1H, J = 14 Hz), 3,42 (d, 1H, J = 16 Hz), 3,18 (dd, 1H, J = 14, 3,8 Hz), 3,12 (d, 1H, J = 14 Hz), 2,77 (dd, 1H, J = 14, 11 Hz), 2,67-2,60 (m, 1H), 2,56-2,48 (m, 1H), 2,31-2,22 (m, 1H), 1,96-1,88 (m, 1H), 1,85-1,77 (m, 2H), 1,22 (s, 3H), 1,20 (s, 3H), 1,03 (d, 3H, J = 6,2 Hz), 0,98 (d, 3H, J = 6,1 Hz), 0,93 (d, 3H, J = 7,1 Hz).
Ejemplo 5 Preparación de la sal de clorhidrato nicotinato de Criptoficina 55 (7)
A una solución de 1 (50 mg, 0,071 mmol) en 354 ml de piridina a temperatura ambiente se le añadió cloro clorhidrato de nicotinoílo (15 mg, 0,085 mmol) seguido por trietilamina (23 ml, 0,170 mmol). Tras agitar durante 1,5 h, se le añadió 4-dimetilamino piridina (8,6 mg, 0,071 mmol). Tras agitar 5 h, se le añadió más trietilamina (23 ml, 0,170 mmol), 4-dimetilamino piridina (8,6 mg, 0,071 mmol), y cloro clorhidrato de nicotinoílo (15 mg, 0,085 mmol) junto con un lavado de 50 ml de piridina. Tras agitar 18 h, se trató la reacción con 0,5 ml de bicarbonato de sodio saturado acuoso y se lavó con cloruro de metileno (4 x 1 ml). Se secaron los extractos orgánicos combinados (Na_{2}SO_{4}), se filtraron, y se concentraron al vacío hasta dar un aceite marrón claro. La cromatografía (14 g de gel de sílice instantáneo), eluyendo con acetato de etilo-hexanos (10:1) proporcionó 49 mg (85%) de la base libre en forma de una espuma blanca. Se disolvió el nicotinato en 1 ml de cloruro de metileno y se trató con una solución 1,0 M de cloruro de hidrógeno en dietil éter (90 ml, 0,090 mmol). Se dejó estar la solución clara, incolora, a temperatura ambiente durante 5 min. La eliminación del solvente al vacío produjo 51 mg del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (CDCl_{3}) d 8,94 (s, 1H), 8,78 (br s, 1H), 8,29 (d, 1H, J = 7,0 Hz), 7,57 (br s, 1H), 7,38 (d, 2H, J = 7,1 Hz), 7,30-7,16 (m, 5H), 7,10 (dd, 1H, J = 8,4, 1,7 Hz), 6,88 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,71 (m, 1H), 5,80 (d, 1H, J = 15 Hz), 5,74 (d, 1H, J = 9,6 Hz), 5,56 (br s, 1H), 5,00 (d, 1H, J = 9,6 Hz), 4,95 (t, 1H, J = 8,9 Hz), 4,84 (d, 1H, J = 9,8 Hz), 4,77-4,72 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,39 (dd, 1H, J = 13, 8,2 Hz), 3,23-3,14 (m, 2H), 3,06 (dd, 1H, J = 14, 7,6 Hz), 2,81-2,74 (m, 1H), 2,62-2,45 (m, 2H), 1,93 (ddd, 1H, J = 14, 12, 4,8 Hz), 1,78-1,70 (m, 1H), 1,66-1,59 (m, 1H), 1,25 (s, 3H), 1,20 (d, 3H, J = 7,0 Hz), 1,19 (s, 3H), 0,98 (d, 3H, J = 6,7 Hz, 0,84 (d, 3H, J = 6,5 Hz).
Ejemplo 6 Preparación de la sal de acetato de N-metil piridionio Criptoficina 55 (8)
A una solución de 1 (53 mg, 0,075 mmol) en 751 ml de cloruro de metileno a 0ºC se le añadió trietilamina (13 ml, 0,090 mmol) seguido por p-toluénsulfato de 2-fluoro-1-metilpiridinio (23 mg, 0,083 mmol). Se calentó la mezcla de reacción heterogénea a temperatura ambiente y se agitó durante 3,5 h en cuyo tiempo se añadieron otros 11 mg (0,039 mmol) de p-toluénsulfonato de 2-fluoro-1-metilpiridinio. Tras agitar durante 14,5 h, se añadieron otros 11 mg (0,039 mmol) de p-toluénsulfonato de 2.fluoro-1-metilpiridinio y 13 ml (0,090) de trietilamina tras 2,5 h. tras agitar 1 h más, se concentró la reacción al vacío hasta una espuma naranja. La purificación mediante HPLC en fase reversa^{8} con intercambio aniónico concomitante (acetato por p-toluénsulfonato) seguida por liofilización dio como resultado 30 mg (47%) del compuesto del título en forma de un sólido blanco: 500 MHz ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) d 8,65-8,58 (m, 2H), 8,36 (t, 1H, J = 7,8 Hz), 7,68 (d, 1H, J = 8,9 Hz), 7,60 (d, 1H, J = 6,6 Hz), 7,48 (t, 1H, J = 6,6 Hz), 7,35-7,21 (m, 6H), 7,19 (dd, 1H, J = 8,5, 1,9 Hz), 7,05 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 6,49 (ddd, 1H, J = 16, 13, 4,0 Hz), 5,91 (d, 1H, J = 16 Hz), 5,72 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 5,66 (dd, 1H, J = 8,0, 1,9 Hz), 5,32-5,27 (m, 1H), 4,73 (dd, 1H, J = 9,7, 4,3 Hz), 4,24 (ddd, 1H, J = 11, 9,8, 3,7 Hz), 3,05-2,97 (m, 2H), 2,77-2,57 (m, 3H), 2,54-2,47 (m, 1H), 1,76 (s, 3H), 1,68-1,62 (m, 1H), 1,55-1,46 (m, 1H), 1,37-1,30 (m, 1H), 1,15 (d, 3H, J = 7,0 Hz), 1,13 (s, 3H), 1,00 (s, 3H), 0,88 (d, 3H, J = 6,7 Hz), 0,73 (d, 3H, J = 6,5 Hz).
Ejemplo 7 Preparación de (D)-alaninato de 55 N-t-Boc-3-(3-cloro-4-metoxifenil) Criptoficina 55 (9)
A una solución de 1 (23 mg, 0,033 mmol), N-t-Boc-3-(3-cloro-4-metoxifenil)-(D)-alanina^{4c} (16 mg, 0,049 mmol), y 4-dimetilamino piridina (pocos cristales) en 143 ml de cloruro de metileno anhidro a temperatura ambiente se le añadió una solución de 1,3-diciclohexilcarbodiimida (10 mg, 0,049 mmol) en 20 ml de cloruro de metileno, Tras agitar durante 2 h, la mezcla de reacción blanca turbia se diluyó con acetato de etilo-hexanos (2:1, 1 ml), se agitó durante 10 min, y se filtró a través de un parche de celite, se lavó con acetato de etilo:hexanos (2:1). El filtrado y los lavados se concentraron al vacío hasta un aceite incoloro. La cromatografía (14 g de gel de sílice instantáneo, 2:1 acetato de etilo-hexanos) dio como resultado 29 mg (88%) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (CDCl_{3}) d 7,42-7,27 (m, 5H), 7,24 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 7,25-7,18 (m, 1H), 7,09 (dd, 1H, J = 8,4, 1,9 Hz), 6,91-6,86 (m, 2H), 6,84-6,70 (m, 3H), 5,75 (d, 1H, J = 15 Hz), 5,53 (d, 1H, J = 9,6 Hz), 5,47 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 5,00 (dd, 1H, J = 10, 2,9 Hz), 4,90-4,80 (m, 2H), 4,78-4,71 (m, 1H), 4,63 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 4,19-4,12 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,88 (s, 3H), 3,40 (dd, 1H, J = 13, 8,1 Hz), 3,25-3,12 (m, 2H), 3,07 (dd, 1H, J = 14, 7,6 Hz), 2,67-2,57 (m, 2H), 2,39-2,27 (m, 2H), 2,15 (dd, 1H, J = 14, 8,0 Hz), 2,01 (ddd, 1H, J = 14, 12, 4,2 Hz), 1,87-1,76 (m, 2H), 1,39 (s, 9H), 1,27 (s, 3H), 1,20 (s, 3H), 1,09-1,04 (m, 6H), 1,01 (d, 3H, J = 6,3 Hz).
Ejemplo 8 Preparación de la sal de clorhidrato de Criptoficina 55 3-(3-cloro-4-metoxifenil)-(D)-alaninato (10)
A una solución de 9 (27 mg, 0,027 mmol) en 265 ml de cloruro de metileno a temperatura ambiente se le añadió una solución 4,0 M de cloruro de hidrógeno en 1,4-dioxano (33 ml, 0,133 mmol). Tras agitar durante 3 h, se concentró la mezcla de reacción clara, incolora al vacío para proporcionar 26 mg (96%, corregido para un 5% en peso de dioxano) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (MeOH-d_{4}) d 7,79 (d, 1H, J = 7,3 Hz), 7,49-7,45 (m, 2H), 7,43-7,48 (m, 3H), 7,31 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 7,20 (dd, 1H, J = 8,4, 2,1 Hz), 7,13 (d, 1H, J = 2,2 Hz), 7,07-6,95 (m, 3H), 6,71 (ddd, 1H, 15, 13, 3,8 Hz), 5,98 (dd, 1H, J = 15, 1,8 Hz), 5,69 (d, 1H, J = 10 Hz), 5,22 (d, 1H, J = 10 Hz), 5,18 (dd, 1H), J = 10, 2,5 Hz), 4,89-4,80 (m, 1H), 4,53 (dd, 1H, J = 11, 3,7 Hz), 4,16 (dd, 1H, J = 10, 4,4 Hz), 3,88 (s, 3H), 3,87 (s, 3H), 3,51 (dd, 1H, J = 13, 9,9 Hz), 3,20 (dd, 1H, J = 14, 3,7 Hz), 3,14 (dd, 1H, J = 13, 2,3 Hz), 2,82-2,75 (m, 3H), 2,45 (dd, 1H, J = 15, 4,5 Hz), 2,42-2,34 (m, 1H), 2,08-2,00 (m, 1H), 1,97-1,86 (m, 3H), 1,27 (s, 3H), 1,21 (s, 3H), 1,16 (d, 3H, J = 7,1 Hz), 1,10 (d, 3H, J = 6,1 Hz), 1,06 (d, 3H, J = 6,0 Hz).
Ejemplo 9 Preparación del N-t-Boc-glicinato de Criptoficina 55 (11)
A una solución de 1 (118 mg, 0,167 mmol), N-t-Boc-glicina (44 mg, 0,251 mmol), y 4-dimetilamino piridina (2,0 mg, 0,0167 mmol) en 490 ml de cloruro de metileno anhidro a temperatura ambiente se le añadió una solución de 1,3-diciclohexilcarbodiimida (52 mg, 0,251 mmol) en 67 ml de cloruro de metileno. Tras agitar durante 50 min, la mezcla de reacción blanca turbia se diluyó con acetato de etilo-hexanos (3:1, 1 ml), se agitó durante 10 min, y se filtró a través de un parche de celite, se lavó con acetato de etilo-hexanos (3:1). Se concentraron el filtrado y los lavados al vacío hasta dar un aceite incoloro. La cromatografía (19 g de gel de sílice instantáneo, 3:1/acetato de etilo-hexanos) dio como resultado 138 mg (96%) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (CDCl_{3}) d 7,34(s, 5H), 7,24 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 7,23-7,19 (m, 1H), 7,10 (dd, 1H, J = 8,4, 2,0 Hz), 6,88 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,79-6,70 (m, 1H), 5,77 (d, 1H, J = 13 Hz), 5,50 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 5,47 (d, 1H, J = 9,8 Hz), 4,97 (dd, 1H, J = 11, 2,7 Hz), 4,89 (t, 1H, J = 10 Hz), 4,83 (d, 1H, J = 9,8 Hz), 4,79-4,72 (m, 1H), 4,68 (br s, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,66 (dd, 1H, J =
18, 5,3 Hz), 3,42-3,35 (m, 2H), 3,21 (dd, 1H, J = 13, 4,0 Hz), 3,17 (dd, 1H, J = 15, 5,1 Hz), 3,08 (dd, 1H, J = 15, 7,6 Hz), 2,66-2,57 (m, 2H), 2,47-2,38 (m, 1H), 1,95 (ddd, 1H, J = 14, 12, 4,7 Hz), 1,85-1,77 (m, 1H), 1,75-1,67 (m, 1H), 1,43 (s, 9H), 1,27 (s, 3H), 1,20 (s, 3H), 1,08 (d, 3H, J = 7,0 Hz), 1,03 (d, 3H, J = 6,7 Hz), 0,98 (d, 3H, J = 6,5 Hz).
Ejemplo 9 Preparación de la sal de clorhidrato de Criptoficina 55 glicinato (12)
A una solución de 11 (122 mg, 0,141 mmol) en 471 ml de cloruro de metileno a temperatura ambiente se le añadió una solución 4,0 M de cloruro de hidrógeno en 1,4-dioxano (178 ml, 0,707 mmol), tras agitar durante 1 h y 20 minutos, se concentró la mezcla de reacción clara, incolora al vacío para proporcionar 120 mg (99%, corregido para un 7% en peso de dioxano) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (MeOH-d_{4}) d 7,81 (dd, 1H, J = 8,5, 2,2 Hz), 7,46-7,41 (m, 2H), 7,40-7,36 (m, 3H), 7,31 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 7,20 (dd, 1H, J = 8,4, 2,1 Hz), 7,01 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,70 (ddd, 1H, J = 15, 13, 3,7 Hz), 5,97 (dd, 1H, J = 15, 1,7 Hz), 5,55 (d, 1H, J = 9,9 Hz), 5,18 (d, 1H, J = 9,9 Hz), 5,14 (dd, 1H, J = 10, 2,8 Hz), 4,84 (t, 1H, J = 10 Hz), 4,52 (dd, 1H, J = 11, 3,7 Hz), 3,87 (s, 3H), 3,78 (d, 1H, J = 18 Hz), 3,50 (dd, 1H, J = 13, 9,8 Hz), 3,23 (d, 1H, J = 18 Hz), 3,20 (dd, 1H, J = 14, 3,6 Hz), 3,13 (dd, 1H, J = 13, 2,4 Hz), 2,80-2,69 (m, 3H), 2,41-2,32 (m, 1H), 1,99-1,92 (m, 1H), 1,91-1,81 (m, 2H), 1,25 (s, 3H), 1,20 (s, 3H), 1,12 (d, 3H, J = 7,0 Hz), 1,06 (d, 3H, J = 6,2 Hz), 1,04 (d, 3H, 6,2 Hz).
Ejemplo 10 Preparación de N-t-Boc-alaninato de Criptoficina 55 (13)
A una solución de 1 (102 mg, 0,145 mmol), N-t-Boc-b-alanina (41 mg, 0,217 mmol), y 4-dimetilamino piridina (18 mg, 0,145 mmol) en 400 ml de cloruro de metileno anhidro a temperatura ambiente se le añadió una solución de 1,3-diciclohexilcarbodiimida (45 mg, 0,217 mmol) en 82 ml de cloruro de metileno. Tras agitar durante 3,5 h, se diluyó la mezcla de reacción blanca turbia con acetato de etilo-hexanos (3:1, 1 ml), se agitó durante 10 min, y se filtró a través de un parche de celite, lavando con acetato de etilo-hexanos (3:1). Se concentraron el filtrado y los lavados al vacío hasta un aceite incoloro. La cromatografía (21 g de gel de sílice instantáneo, 2:1 a continuación 4:1/acetato de etilo-hexanos) dio como resultado 121 mg (95%) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (CDCl_{3}) d 7,44-7,39 (m, 2 H), 7,37-7,31 (m, 3H), 7,32 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 7,20 (dd, 1H, J = 8,4, 2,1 Hz), 7,01 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,72 (ddd, 1H, J = 15, 13, 3,7 Hz), 5,96 (dd, 1H, J = 15, 1,6 Hz), 5,51 (d, 1H, J = 9,8 Hz), 5,11-5,06 (m, 1H), 5,08 (d, 1H, J = 9,8 Hz), 4,90-4,83 (m, 1H), 4,50 (dd, 1H, J = 11, 3,6 Hz), 3,86 (s, 3H), 3,52-3,46 (m, 1H), 3,20 (dd, 1H, J = 14, 3,6 Hz), 3,13 (br d, 1H, J = 14 Hz), 3,05-2,92 (m, 2H), 2,79-2,63 (m, 3H), 2,45-2,37 (m, 1H), 2,24 (dt, 1H, J = 16, 7,0 Hz), 2,08-1,99 (m, 1H), 1,96-1,79 (m, 3H, 1,43 (s, 9H), 1,25 (s, 3H), 1,21 (s, 3H), 1,12 (d, 3H, J = 7,0 Hz), 1,06 (d, 3H, J = 6,2 Hz), 1,02 (d, 3H, J = 6,1 Hz).
Ejemplo 11 Preparación de la sal de clorhidrato de Criptoficina 55 b-alaninato (14)
A una solución de 13 (119 mg, 0,136 mmol) en 452 ml de cloruro de metileno a temperatura ambiente se le añadió una solución de cloruro de hidrógeno en 1,4-dioxano (170 ml, 0,679 mmol). Tras agitar durante 2 h y 15 minutos, se concentró al vacío la mezcla de reacción blanca turbia para proporcionar 110 mg (96% corregido para un 4% en peso de dioxano) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (MeOH-d_{4}) d 7,80 (dd, 1H, J = 9,7, 2,3 Hz), 7,45-7,40 (m, 2H), 7,39-7,32 (m, 3H), 7,20 (dd, 1H, J = 8,4, 2,1 Hz), 7,01 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,68 (ddd, 1H, J = 15, 13, 3,8 Hz), 5,98 (dd, 1H, J = 15, 1,7 Hz), 5,48 (dd, 1H, J = 9,4, 1,0 Hz), 5,15-5,11 (m, 1H), 5,13 (d, 1H, J = 9,4 Hz), 4,82 (t, 1H, J = 10 Hz), 4,51 (dd, 1H, J = 11, 3,7 Hz), 3,90 (s, 3H), 3,50 (dd, 1H, J = 14, 9,8 Hz), 3,20 (dd, 1H, J = 14, 3,7 Hz), 3,14 (dd, 1H, J = 14, 2,4 Hz), 2,85 (t, 2H, J = 7,0 Hz), 2,80-2,65 (m, 5H), 2,54 (dt, 1H, J = 17, 7,4 Hz), 2,42-2,33 (m, 1H), 2,22 (dt, 1H, J = 17, 6,7 Hz), 1,90-1,81 (m, 3H), 1,25 (s, 3H), 1,20 (s, 3H), 1,13 (d, 3H, J = 7,1 Hz), 1,08 (d, 3H, J = 6,3 Hz), 1,04 (d, 3H, J = 6,2 Hz).
Ejemplo 12 Preparación de N-t-Boc-g-aminobutirato de Criptoficina 55 (15)
A una solución de 1 (48 mg, 0,068 mmol), ácido N-t-Boc-4-aminobutírico (18 mg, 0,088 mmol), y 4-dimetilamino piridina (8 mg, 0,068 mmol) en 150 ml de cloruro de metileno anhidro a temperatura ambiente se le añadió una solución de 1,3-diciclohexilcarbodiimida (18 mg, 0,088 mmol) en 50 ml de cloruro de metileno. Tras agitar durante 45 min, se diluyó la mezcla de reacción blanca turbia con acetato de etilo-hexanos (3:1, 0,5 ml), se agitó durante 5 min, y se filtró a través de un parche de celite, lavando con acetato de hexilo-hexanos (3:1). Se concentraron el filtrado y los lavados al vacío hasta un aceite incoloro. La cromatografía (15 g de gel de sílice instantáneo, 3:1/acetato de etilo-hexanos) dio como resultado 55 mg (90%) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (CDCl_{3}) d 7,38-7,32 (m, 5H), 7,24 (d, 1H, J = 1,9 Hz), 7,22-7,19 (m, 1H), 7,10 (dd, 1H, J = 8,4, 1,9 Hz), 6,88 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,75 (ddd, 1H, J = 15, 13, 3,9 Hz), 5,78 (d, 1H, J = 15 Hz), 5,60-5,55 (m, 1H), 5,49 (dd, 1H, J = 9,8, 1,4 Hz), 4,81 (d, 1H, J = 9,8 Hz), 4,78-4,70 (m, 1H), 4,44 (br s, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,40 (dd, 1H, J = 14, 8,1 Hz), 3,22 (dd, 1H, J = 14, 4,1 Hz), 3,22-3,15 (m, 1H), 3,08 (dd, 1H, J = 14, 7,8 Hz), 2,89-2,82 (m, 2H), 2,67-2,56 (m, 2H), 2,47-2,38 (m, 1H), 2,11-2,04 (m, 1H), 2,00-1,77 (m, 3H), 1,75-1,67 (m, 1H), 1,45 (s, 9H), 1,50-1,40 (m, 2H), 1,27 (s, 3H), 1,20 (s, 3H), 1,09 (d, 3H, J = 7,0 Hz), 1,04 (d, 3H, J = 6,6 Hz), 0,98 (d, 3H, J = 6,6 Hz).
Ejemplo 13 Preparación de la sal de clorhidrato de Criptoficina 55 g-aminobutirato (16)
A una solución de 15 (53 mg, 0,059 mmol) en 297 ml de cloruro de metileno a temperatura ambiente se le añadió una solución 1,0 M de cloruro de hidrógeno en dietil éter (297 ml, 0,297 mmol). El material de partida precipitó en forma de una pasta blanca, que se volvió a disolver con 150 ml más de cloruro de metileno. Tras agitar durante 4 h, se añadieron otros 59 ml (0,059 mmol) de solución de cloruro de hidrógeno. Se continuó la agitación durante otras 14 h y se concentró la mezcla de reacción al vacío para proporcionar 49 mg (100%) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) d 8,49 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,72 (br s, 3H), 7,44-7,33 (m, 5H), 7,32 (d, 1H, J = 1,9 Hz), 7,29 (dd, 1H, J = 9,4, 2,6 Hz), 7,20 (dd, 1H, J = 8,5, 1,9 Hz), 7,06 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 6,48 (ddd, 1H, J = 15, 13, 3,9 Hz), 5,87 (d, 1H, J = 15 Hz), 5,37 (d, 1H, J = 9,7 Hz), 5,33 (d, 1H, J = 9,7 Hz), 5,04-5,01 (m, 1H), 4,73 (t, 1H, J = 11 Hz), 4,25 (ddd, 1H, J = 12, 9,8, 3,5 Hz), 3,82 (s, 3H), 3,40-3,30 (m, 1H), 3,07-3,01 (m, 2H), 2,72 (dd, 1H, J = 14, 12 Hz), 2,65-2,47 (m, 4H), 2,38-2,28 (m, 1H), 2,21 (dt, 1H, J = 17, 7,5 Hz), 1,97 (dt, 1H, J =
17, 7,5 Hz), 1,80-1,70 (m, 3H), 1,54-1,46 (m, 2H), 1,17 (s, 3H), 1,03 (s, 3H), 1,01 (d, 3H, J = 7,0 Hz), 0,99 (d, 3H, J = 5,8 Hz), 0,95 (d, 3H, J = 5,8 Hz).
Ejemplo 14 Preparación de N-t-Boc (L)-alaninato de Criptoficina 55 (17)
A una solución de 1 (103 mg, 0,146 mmol), N-t-Boc (L)-alanina (41 mg, 0,219 mmol), y 4-dimetilamino piridina (18 mg, 0,146 mmol) in 400 mL de cloruro de metileno anhidro a temperatura ambiente se le añadió una solución de 1,3-diciclohexilcarbodiimida (45 mg, 0,219 mmol) en 87 mL de cloruro de metileno. Tras agitar durante 5 h y 50 min, se trató la mezcla de reacción Blanca turbia con otros 5,5 mg (0,029 mmol) de N-t-Boc-(L)-alanina, 6,0 mg (0,029 mmol) de 1,3-diciclohexilcarbodiimida, y unos pocos cristales de 4-dimetilamino piridina. Tras agitar 1 h más, se diluyó la reacción con acetato de etilo-hexanos (3:1, 1 mL), se agitó durante 10 min, y se filtró a través de un parche de celite, se lavó con acetato de etilo:hexanos (3:1). Se concentraron el filtrado y los lavados al vacío hasta un aceite incoloro. La cromatografía (22 g gel de sílice instantáneo, 1,5:1 a continuación 2:1 a continuación 4:1/acetrato de etilo-hexanos) dio como resultado 96 mg (75%) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 M Hz ^{1}H RMN (CDCl_{3}) d 7,35-7,30 (m, 5H), 7,26-7,21 (m, 2H), 7,10 (dd, 1H, J = 8,4, 1,9 Hz), 6,88 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,76 (ddd, 1H, J = 15, 13, 4,2 Hz), 5,77 (d, 1H, J = 15 Hz), 5,52 (d, 1H, 7,6 Hz), 5,44 (d, 1H, J = 9,7 Hz), 4,98 (dd, 1H, J = 11, 2,5 Hz), 4,85-4,81 (m, 2H), 4,75 (q, 1H, J = 6,8 Hz), 4,56 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 4,01-3,96 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,41 (dd, 1H, J = 13, 8,3 Hz), 3,20 (dd, 1H, J = 13, 4,0 Hz), 3,16 (dd, 1H, J = 15, 5,9 Hz), 3,08 (dd, 1H, J = 15, 7,6 Hz), 2,65-2,57 (m, 2H), 2,40-2,31 (m, 1H), 2,02-1,96 (m, 1H), 1,87-1,73 (m, 2H), 1,43 (s, 9H), 1,27 (s, 3H), 1,20 (s, 3H), 1,11-1,02 (m, 9H), 0,99 (d, 3H, J = 6,3 Hz).
Ejemplo 15 Preparación de la sal de clorhidrato de Criptoficina 55 (L)-alaninato (18)
A una solución de 17 (95 mg, 0,108 mmol) en 361 mL de cloruro de metileno a temperatura ambiente se le añadió una solución 4,0 N de cloruro de hidrógeno en 1,4-dioxano (135 mL, 0,542 mmol). Tras agitar durante 2,5 h, se concentró al vacío la mezcla de reacción blanca turbia para proporcionar 90 mg (96%, corregido para un 6% en peso de dioxano) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (MeOH-d_{4}) d 8,54 (d, 1H, 7,6 Hz), 7,81 (br d, 1H, J = 9,7 Hz), 7,46-7,44 (m, 2H), 7,39-7,37 (m, 3H), 7,32 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 7,20 (dd, 1H, J =
8,4, 2,0 Hz), 7,01 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 6,69 (ddd, 1H, J = 15, 11, 3,7 Hz), 5,99 (d, 1H, 15 Hz), 5,55 (d, 1H, J = 9,8 Hz), 5,20 (d, 1H, J = 9,8 Hz), 5,15 (dd, 1H, J = 11, 2,7 Hz), 4,78 (t, 1H, J = 11 Hz), 4,53-4,50 (m, 1H), 3,87 (s, 3H), 3,65 (q, 1H, J = 7,3 Hz), 3,50 (dd, 1H, J = 13, 9,8 Hz), 3,20 (dd, 1H, J = 14, 3,5 Hz), 3,14 (br d, 1H, J = 13 Hz), 2,81-2,71 (m, 3H), 2,41-2,34 (m, 1H), 1,98-1,93 (m, 1H), 1,88-1,82 (m, 2H), 1,41 (d, 3H, J = 7,3 Hz), 1,25 (s, 3H), 1,20(s, 3H), 1,13 (d, 3H, J = 7,0 Hz), 1,06 (d, 3H, J = 6,2 Hz), 1,04 (d, 3H, 6,0 Hz).
Ejemplo 16 Preparación de N-t-Boc-(D)-alaninato de Criptoficina 55 (19)
A una solución de 1 (25 mg, 0,035 mmol), N-t-Boc-(D) alanina (10 mg, 0,053 mmol), y 4-dimetilamino piridina (0,4 mg, 0,0035 mmol) en 130 mL de cloruro de metileno anhidro a temperatura ambiente, se le añadió una solución de 1,3-diciclohexilcarbodiimida (11 mg, 0,053 mmol) en 47 mL de cloruro de metileno. Tras agitar durante 5,5 h, se diluyó la mezcla de reacción blanca turbia con acetato de etilo-hexanos (3:1, 0,5 mL), se agitó durante 10 min, y se filtró a través de un parche de celite, lavando con acetato de etilo:hexanos (3:1). Se concentraron al vacío el filtrado y los lavados hasta un aceite incoloro. La cromatografía (15 g de gel de sílice instantáneo, 2:1/acetato de etilo-hexanos) dio como resultado 26 mg (83%) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 M Hz ^{1}H RMN (CDCl_{3}) d 7,49-7,29 (m, 5H), 7,24 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 7,22-7,18 (m, 1H), 7,09 (dd, 1H, 8,4, 2,0 Hz), 6,87 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,76 (ddd, 1H, J = 15, 13, 4,4, Hz), 5,77 (d, 1H, 15 Hz), 5,56 (d, 1H, J = 9,9 Hz), 5,48 (d, 1H, J = 7,7 Hz), 5,01 (dd, 1H, J = 10, 2,6 Hz), 4,91 (t, 1H, J = 9,4 Hz), 4,84 (d, 1H, J = 9,9 Hz), 4,81-4,73 (m, 2H), 3,99-3,93(m, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,39 (dd, 1H, J = 13, 8,0 Hz), 3,22 (dd, 1H, J = 13, 3,6 Hz), 3,17 (dd, 1H, J = 14, 5,0 Hz), 3,08 (dd, 1H, J = 14 Hz), 2,68-2,58(m, 2H), 2,42-2,35(m, 1H), 2,04-1,94 (m, 1H), 1,87-1,50 (m, 2H), 1,42 (s, 9H), 1,27 (s, 3H), 1,20 (s, 3H), 1,09 (d, 3H, J = 7,1 Hz), 1,04 (d, 3H, J = 6,4 Hz), 0,99 (d, 3H, J = 6,3 Hz), 0,65 (d, 3H, J = 6,8 Hz).
Ejemplo 17 Preparación de la sal de clorhidrato de Criptoficina 55 (D)-alaninato (20)
A una solución de 18 (24 mg, 0,027 mmol) en 274 mL de cloruro de metileno a temperatura ambiente se le añadió una solución 4,0 M de cloruro de hidrógeno en 1,4-dioxano (34 mL, 0,137 mmol). Tras agitar durante 3,5 h, se concentró al vacío la mezcla de reacción transparente incolora para proporcionar 24 mg (100%, corregido para un 8% de dioxano) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 M Hz ^{1}H RMN (MeOH-d_{4}) d 7,79 (d, 1H, J =
9,5 Hz), 7,47-7,40 (m, 2H), 7,40-7,36 (m, 3H), 7,31 (d, 1H,J = 2,0 Hz), 7,20 (dd, 1H, J = 8,4, 2,0 Hz), 7,01 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,71 (ddd, 1H, J = 15, 13, 3,7 Hz), 5,98 (dd, 1H, J = 15, 1,6 Hz), 5,65 (d, 1H, J = 10 Hz), 5,20 (d, 1H, J = 10 Hz), 5,17 (dd, 1H, J = 11, 2,5 Hz), 4,88-4,78(m, 1H), 4,53 (dd, 1H, J = 11, 3,7 Hz), 3,95 (q, 1H, J = 7,2 Hz), 3,87 (s, 3H), 3,51 (dd, 1H, J = 13, 9,8 Hz), 3,20 (dd, 1H, J = 14, 3,6 Hz), 3,14 (dd, 1H, J = 13, 2,3 Hz), 2,81-2,74(m, 3H), 2,41-2,34 (m, 1H), 2,07-1,99(m, 1H), 1,96-1,84 (m 2H), 1,26 (s, 3H), 1,21 (s, 3H), 1,15 (d, 3H, J = 7,1 Hz), 1,09 (d, 3H, J = 6,0 Hz), 1,05 (d, 3H, J = 6,0 Hz), 0,80 (d, 3H, J = 7,4 Hz).
Ejemplo 18 Preparación de Na-Ne-di-t-Boc-(L)-lisinato de Criptoficina 55 (21)
A una solución de 1 (105 mg, 0,149 mmol), Na-Ne-di-t-Boc (L)-lisina (67 mg, 0,193 mmol), y 4-dimetilamino piridina (18 mg, 0,149 mmol) en 400 mL de cloruro de metileno anhidro a temperatura ambiente, se le añadió una solución de 1,3-diciclohexilcarbodiimida (40 mg, 0,193 mmol) en 96 mL de cloruro de metileno. Tras agitar durante 4 h, se trató la mezcla de reacción Blanca turbia con otros 10 mg (0,030 mmol) de Na-Ne-di-t-Boc-(L)-lisina y 6,1 mg (0,030 mmol) de 1,3-diciclohexilcarbodiimida en una solución en 100 mL de cloruro de metileno. Tras agitar 1 h más, se diluyó la mezcla de reacción blanco turbia con acetato de etilo-hexanos (3:1, 1 mL), se agitó durante 10 min, y se filtró a través de un parche de celite, lavando con acetato de etilo:hexanos (3:1). Se concentraron al vacío el filtrado y los lavados hasta una espuma blanca que se volvieron a someter a las condiciones anteriores usando 34 mg (0,097 mmol) de Na-Ne-di-t-Boc-(L)-lisina, 20 mg (0,097 mmol) de 1,3-diciclohexilcarbodiimida, y 9,1 mg (0,075 mmol) de 4-dimetilamino piridina. Tras agitar durante 1,5 h, se procesó la reacción tal como anteriormente para proporcionar una espuma blanca cruda. La cromatografía (21 g de gel de sílice instantáneo, 1:1 a continuación 4:1/acetato de etilo-hexanos) dio como resultado 112 mg (73%) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (MeOH-d_{4}) d 7,42-7,37 (m, 2H), 7,36-7,29 (m, 3H), 7,27 (br s,1H), 7,16 (br d, 1H, J = 8,5 Hz), 6,97 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 6,72 (ddd, 1H, J = 15, 13, 3,5 Hz), 5,92 (d, 1H, J = 15 Hz), 5,50 (d, 1H, J = 11 Hz), 5,11-5,04 (m, 2H), 4,84 (t, 1H, J = 10 Hz), 4,48 (dd, 1H, J = 11, 3,6 Hz), 3,84 (s, 3H), 3,75 (br s,1H), 3,50-3,43 (m, 1H), 3,17 (dd, 1H, J = 14, 3,6 Hz), 3,11 (d, 1H, J = 14 Hz), 2,97-2,91 (m, 2H), 2,76-2,58 (m, 3H), 2,36-2,27 (m, 1H), 1,98-1,80 (m, 3H), 1,48-1,38 (m, 2H), 1,43 (s, 9H), 1,40 (s, 9H), 1,35-1,25 (m, 2H), 1,23 (s, 3H) 1,20 (s, 3H), 1,15-1,09 (m, 2H), 1,07 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 1,06 (d, 3H, J = 6,0 Hz), 1,01 (d, 3H, J = 6,1 Hz).
Ejemplo 19 Preparación de la sal de diclorhidrato de Criptoficin 55 (L)-lisinato (22)
A una solución de 21 (107 mg, 0,103 mmol) en 345 mL cloruro de metileno a temperatura ambiente, se le añadió una solución 4,0 M de cloruro de hidrógeno en 1,4-dioxano (155 mL, 0,621 mmol). Tras agitar durante 4 h, se filtró la mezcla de reacción blanca turbia. Se lavó el sólido blanco recogido con cloruro de metileno (2 x 1 mL) y se secó al vacío a temperatura ambiente para proporcionar 87 mg (93%) del compuesto del título: 500 M Hz ^{1}H RMN (MeOH-d_{4}) d 8,61 (d, 1H, J = 7,7 Hz), 7,81 (d, 1H, J = 7,7 Hz), 7,47-7,44 (m, 2H), 7,40-7,38 (m, 3H), 7,31 (d, 1H, J = 2,2 Hz), 7,20 (dd, 1H, J = 8,4, 2,2 Hz), 7,00 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,63 (ddd, 1H, J = 15, 13, 4,0 Hz), 6,00 (dd, 1H, J = 15, 1,6 Hz), 5,55 (d, 1H, J = 9,8 Hz), 5,20 (d, 1H, J = 9,8 Hz), 5,15 (dd, 1H, J = 10, 2,9 Hz), 4,68 (t, 1H, J = 11 Hz), 4,55-4,49 (m, 1H), 3,87 (s, 3H), 3,79 (t, 1H, J = 5,6 Hz), 3,52 (dd, 1H, J = 14, 9,9 Hz), 3,20 (dd, 1H, J = 14, 3,6 Hz), 3,13 (dd, 1H, J = 13, 2,4 Hz), 3,06-2,98 (m, 1H), 2,94-2,87 (m, 1H), 2,85-2,74 (m, 3H), 2,45-2,38 (m, 1H), 1,98-1,76 (m, 5H), 1,71-1,64 (m, 2H), 1,39-1,30 (m, 2H), 1,25 (s, 3H), 1,18 (d, 3H, J = 8,2 Hz), 1,17 (s, 3H), 1,08 (d, 3H, J = 6,2 Hz), 1,05 (d, 3H, J = 6,1 Hz).
Ejemplo 20 Preparación de ácido 2'-(di-t-Butilfosfatil) fenilacético (24)
A una solución de alcohol 2'-hidroxifenetilo (1,05 g, 7,60 mmol) en 15,2 mL de N, N-dimetilformamida a 0ºC, se le añadieron imidazol (621 mg, 9,11 mmol) y cloruro de tert-butildimetilsilo (1,26 g, 8,34 mmol). Tras agitar a 0ºC durante 40 min y a temperatura ambiente durante 45 min, se añadieron otros 155 mg (2,28 mmol) de imidazol y 229 mg (1,52 mmol) de cloruro de tert-butildimetilsililo. Se dejó agitar la reacción durante 15 min más en cuyo tiempo se añadieron 150 mL de tert-butil metil éter. Se lavó la mezcla con ácido clorhídrico 1 N frío (1 X 15 mL) seguido por agua (1 X 15 mL). Se secó la capa orgánica (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró al vacío hasta dar un aceite de color amarillo. La cromatografía (70 g de gel de sílice instantáneo), eluyendo con hexanos-acetato de etilo (5:1) proporcionó 1,81 g (94%) del éter de sililo 1º en forma de un aceite de color crema pálido. A una solución de éter de sililo (506 mg, 2,00 mmol) y di-tert-butil dietilfosforamida (600 mL de un 93%, 2,00 mmol) en 2 mL de tetrahidrofurano a temperatura ambiente se le añadió 1-H-tetrazol (421 mg, 6,01 mmol). Tras agitar durante 45 min se enfrió la mezcla de reacción a -10ºC y se trató de manera rápida con una solución de ácido m-cloroperbenzoico (450 mg de un 99%, 2,61 mmol) en 3,6 mL de cloruro de metileno. Se dejó calentar la reacción blanca turbia a temperatura ambiente y se agitó durante 15 min. Se detuvo súbitamente la mezcla de reacción con 4 mL de bisulfito de sodio acuoso al 10%, se agitó de manera vigorosa durante 10 min, se diluyó con 15 mL de tert-butil metil éter, y se lavó con bisulfito de sodio acuoso al 10% (2 X 10 mL) seguido por hidróxido de sodio acuoso 0,5 N (2 X 10 mL). Se secó la capa orgánica (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró al vacío hasta dar un aceite incoloro (941 mg) que se usó de manera directa en la siguiente etapa. El fosfato crudo se disolvió en 10 mL de tetrahidrofurano, se enfrió a 0ºC, y se trató con una solución 1 M de fluoruro de tetra-n-butilamonio en tetrahidrofurano (2,4 mL, 2,4 mmol). Tras agitar a 0ºC durante 20 min y a temperatura ambiente durante 1,5 h, se diluyó la reacción en 60 mL de tert-butil metil éter y se lavó con agua (1 X 10 mL) seguido por salmuera (1 X 10 mL). Se secó la capa orgánica (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró al vacío hasta dar un aceite de color amarillo. La cromatografía (50 g de gel de sílice instantáneo), eluyendo con acetato de etilo-hexanos (3:1) proporcionó 525 mg (79%) del alcohol de 1º en forma de un aceite de color crema. A una solución del alcohol (123 mg, 0,372 mmol) en acetonitrilo-tetracloruro de carbono (1:1, 1,49 mL) a temperatura ambiente se le añadió agua (1,1 mL) seguido por periodato de sodio (239 mg, 1,12 mmol) y clorhidrato de rutenio (III) (1,8 mg, 0,0082 mmol). Se dejó agitar rápidamente la mezcla de color marrón a temperatura ambiente durante 55 min. Tras la concentración al vacío y la cromatografía (8 g de gel de sílice instantáneo, eluyendo con metanol-acetato de etilo al 10%) se obtuvieron 109 mg (85%) del compuesto del título en forma de un aceite de color púrpura: 500 M Hz ^{1}H RMN (CDCl_{3}) d 7,49 (d, 1H, J = 7,53 Hz), 7,30-7,15 (m, 3H), 3,77 (s, 2H), 1,51 (s, 18H).
Ejemplo 21
Se prepararon los compuestos de los Ejemplos 21-26 usando sustancialmente los procedimientos tal como se han descrito anteriormente en el presente documento.
Propiedades espectrales de la Criptoficina-129
EIMS m/z (intensidad relativa) 654/656 (2,1/0,8, M-HBr), 412/414 (9,7/3,6), 280/282 (10,3/3,5), 227 (15,2), 195/197 (50,1/16,3), 105 (100), 91 (100); EIMS de alta resolución m/z 654,2687(C_{35}H_{43}ClN_{2}O_{8}, D 2,1 mmu). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) unidad amino o hidroxi ácido d (posición del carbono, multiplicidad; J en Hz) ácido 7-bromo-5,8-dihidroxi-6-metil-8-fenil-2-octenoico (A) 5,76 (2,d; 15,3), 6,68 (3,ddd; 15,3,9,9 y 5,6, 2,29 (4,ddd; 14,2, 10,6 y 10,4), 2,67 (4,dd; 14,2 y 5,4), 4,95 (5, ddd; 10,3, 10,3 y 1,8), 2,47 (6,m), 1,15 (6-Me, d; 6,5), 4,29 (7, dd; 9,1 y 2,1), 4,84 (8, d; 9,0, 7,34-7,39 (10/11/12/13/14,m); 3-cloro-4-metoxifenilalanina (B) 4,80 (2,m), 5,73 (2-NH, d; 8,8), 3,01 (3, dd; 14,6 y 7,6), 3,16 (3, dd; 14,3 y 5,6), 7,23 (5, d; 2,0), 3,87 (7-OMe, s), 6,84 (8, d; 8,4), 7,09 (9, dd; 8,4 y 2,0); ácido 3-amino-2-metilpropiónico (C) 2,73 (2, m), 1,23 (2-Me, d; 7,2), 3,25 (3, ddd; 13,5, 6,5 y 6,5), 3,53 (3, ddd; 13,4, 5,4 y 3,9), 6,93 (3-NH, brt; 6,1); ácido léucico (D) 4,91 (2, dd; 10,5 y 2,8, 1,49 (3,m), 1,80 (3, m), 1,73 (4, m). 0,92 (4-Me, d; 6,5), 0,89 (5, d; 6,5). ^{13}C RMN (CDCl_{3}) unidad d (posición del carbono) A 165,4 (1), 125,2 (2), 141,3 (3), 36,6 (4), 75,7 (5), 37,9 (6), 11,8 (6-Me), 60,3 (7), 76,7 (8), 141,6 (9), 126,8 (10/14), 128,7 (11/13), 128,8 (12); B 171,0 (1), 53,6 (2), 35,0 (3), 130,0 (4), 131,0 (5), 122,4 (6), 153,9 (7), 56,1 (7-OMe), 112,3 (8), 128,4 (9); C 175,4 (1), 38,4 (2), 14,0 (2-Me), 41,3 (3), D 170,2 (1), 71,3 (2), 39,6 (3), 24,8 (4), 23,2 (4-Me), 21,4 (5).
Ejemplo 22 Propiedades espectrales de la Criptoficina-138
EIMS m/z (intensidad relativa) 734/736 (0,3/0,1), 654/656 (0,6/0,2), 412/414 (12,6/4,7), 313/315 (20,4/12,5) 280 (7,6), 227 (3,5), 195/197 (44,7/15,6), 155/157 (35,4/13,6), 105 (33,6), 91 (34,2), 80/82 (100/100); EIMS de alta resolución m/z 734,1985 (C_{35}H_{44}ClBrN_{2}O_{8}, D-1,6 mmu),654,2722 (C_{35}H_{43}ClN_{2}O_{8}, D-1, 4 mmu) . ^{1}H RMN (CDCl_{3}) unidad de amino o hidroxi ácido d (posición del carbono, multiplicidad; J en Hz) ácido 7-bromo-5,8-dihidroxi-6-metil-8-fenil-2-octenoico (A) 5,78 (2, d; 15,5), 6,69 (3, ddd; 15,1, 9,8 y 5,3), 2,33 (4, m), 2,71 (4, m), 4,97 (5, ddd; 10,4, 10,4 y 1,6), 2,45 (6, m), 1,17 (6-Me, d; 6,3), 4,40 (7, dd; 10,1 y 2,2), 5,06 (8, d; 10,1), 7,36-7,42 (10/11/12/13/14, m); 3-cloro-4-metoxifenilalanina (B) 4,82 (2, m), 5,69 (2-NH, d; 8,7), 3,02 (3, dd; 14,5 y 7,5), 3,17 (3, dd; 14,5 y 5,4), 7,23 (5, d; 2,1), 3,88 (7-OMe, s), 6,85 (8, d; 8,4), 7,09 (9, dd; 8,4 y 1,9); ácido 3-amino-2-metilpropiónico (C) 2,73 (2,m), 1,23 (2-Me, d; 7,3), 3,25 (3, ddd; 13,4, 6,5 y 6,5), 3,54 (3, m), 6,92 (3-NH, brt; 5,7); ácido léucico (D) 4,91 (2, dd; 10,6 y 2,7), 1,43 (3, m), 1,82 (3, m), 1,75 (4, m), 0,93 (4-Me, d; 6,6), 0,90 (5, d; 6,6). ^{13}C RMN (CDCl_{3}) unidad d (posición del carbono) A 165,4 (1), 125,2 (2), 141,2 (3), 36,6 (4), 76,5 (5), 38,2 (6), 11,7(6-Me), 55,3 (7), 87,4 (8), 137,4 (9), 128,0 (10/14), 128,7 (11/13), 129,3 (12); B 171,0 (1), 53,6 (2), 35,0 (3), 129,9 (4), 131,0 (5), 122,4 (6), 153,9 (7), 56,1 (7-OMe), 112,2 (8), 128,4 (9); C 175,5 (1), 38,4 (2), 14,0 (2-Me), 41,2 (3), D 170,2 (1), 71,2 (2), 39,6 (3), 24,8 (4), 23,2 (4-Me), 21,4 (5).
Ejemplo 23 Propiedades espectrales de la Criptoficina-139
EIMS m/z (intensidad relativa) 732/734 (0,3/0,3), 652/654 (0,9/0,5), 533 (13,6), 445(5,7), 195/197 (9,2/11,4), 105 (96,2), 80/82 (100/100); EIMS de alta resolución m/z 732,1783 C_{35}H_{42}ClBrN_{2}O_{8}, 3,0 mmu), 652,2573 (C_{35}H_{41}ClN_{2}O_{8}, E -2,1 mmu). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) unidad amino o hidroxiácido d (posición del carbono, multiplicidad; J en Hz) ácido 7-bromo-8-oxo-5-hidroxi-6-metil-8-fenil-2-octenoico (A) 5,75 (2, d; 15,4), 6,68 (3, ddd; 15,2, 10,1 y 5,0), 2,31 (4, ddd; 14,2, 10,7 y 10,7), 2,63 (4, dd; 14,4 y 5,1), 5,09 (5, ddd; 9,7, 9,7 y 1,5), 2,46 (6, m), 1,18 (6-Me, d; 6,6), 5,41 (7, d; 3,5), 7,94 (10/14, brd; 8,6), 7,50 (11/13, t; 7,8), 7,63 (12, brt; 7,5); 3-cloro-4-metoxifenilalanina (B) 4,80 (2,m), 5,64 (2-NH, d; 8,3), 3,04 (3, dd; 14,6 y 7,2), 3,14 (3, dd; 14,4 y 5,5), 7,22 (5,d; 2,0), 3,87 (7-OMe, s), 6,84 (8, d; 8,3), 7,08 (9, dd; 8,3 y 2,3); ácido amino-2-metilpropiónico (C) 2,76 (2,m), 1,26 (2-Me, d; 7,1),3,31 (3, ddd; 13,7, 6,8 y 6,6), 3,53 (3 m), 6,95 (3-NH, brt; 5,9); ácido léucico (D) 4,93 (2, dd; 10,6 y 3,0), 1,51 (3, m), 1,95 (3, m), 1,80 (4,m), 0,97 (4-Me, d; 6,8), 0,91 (5, d, 6,6), ^{13}C RMN (CDl_{3}) unidad d (posición del carbono) A 165,2 (1), 125,3 (2), 141,0 (3), 36,2 (4), 76,0 (5), 39,3 (6), 13,8 (6-Me), 51,8 (7), 192,3 (8), 134,2 (9), 128,7 (10/14), 129,0 (11/13), 134,0 (12); B 170,9 (1), 53,7 (2), 35,0 (3), 129,8 (4), 131,0 (5), 122,4 (6), * (7, no observado)), 56,2 ( 7-OMe), 112,3 (8), 128,4 (9); C 175,6 (1), 38,3 (2), 14,2 (2-Me), 41,1 (3), D 170,2 (1), 71,1 (2), 39,8 (3), 24,7, 23,2 (4-Me), 21,3 (5).
Ejemplo 24 Propiedades espectrales de la Criptoficina-145
EIMS m/z (intensidad relativa) 734/736/738 (0,5/0,6/0,2), 654,656 (1,5/1,1), 412/414 (2,2/1,0), 313/315 (19,5/
12,9), 227 (4,1), 195/197 (11,5/3,7), 105 (14,6), 91 (25,2), 80/82 (100/100); EIMS de alta resolución m/z 736,1980 (C_{35}H_{44}ClBrN_{2}O_{8}, E -3,1 mmu), 654,2714 (C_{35}H_{43}C_{1}N_{2}O_{8}, z -0,6 mmu). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) unidad amino o hidro amino o hidroxi ácido d (posición del carbono, multiplicidad; J en Hz) ácido 7-bromo-5,8 dihidroxi-6-metil-8-fenil-2-octenoico (A) 5,81 (2, d; 15,7), 6,72 (3, m), 2,31 (4, m), 2,77 (4, m), 5,62 (5, m), 2,42 (6, m), 1,22 (6-Me, d; 7,0), 4,23 (7, dd; 8,0 y 3,2), 4,94 (8, d; 7,9), 7,32-7,28 (10/11/12/13/14, m); 3-cloro-4-metoxifenilalanina (B) 4,82 (2, m), 5,72 (2-NH, brs), 3,05 (3, m), 3,15 (3, m), 7,23 (5, brs), 3,88(7-OMe, s), 6,84 (8, brd; 7), 7,09 (9, m); ácido 3-amino-2-metilpropiónico (C) 2,75 (2, m), 1,25 (2-Me, d; 7,0), 3,30 (3, m), 3,53 (3, m), 6,97 (3-N, brs); ácido léucico (D) 4,90 (2, dd; 9,7 y 3,6), 1,58 (3, m), 1,82 (3, m), 1,70 (4, m). 0,95(4-Me, d; 6,6), 0,89 (5, d; 6,6). ^{13}C RMN (CDCl_{3}) unidad d (posición del carbono) A 165,14 (1), 125,2 (2), 141,3 (3), 35,8 (4), 75,8 (5), 41,2 (6), 13,4 (6-Me), 60,7 (7), 76,5 (8), 141,6 (9), 126,8 (10/14), 128,5 (11/13), 128,6 (12); B 170,5 (1), 53,7 (2), 35,0 (3), 129,9 (4), 131,0 (5), 122,4 (6), 154,0 (7), 56,2 (7, OMe), 112,3 (8), 128,5 (9); C 175,4 (1), 38,4 (2), 14,1 (2-Me), 41,2 (3), D 170,5 (1), 71,3 (2), 39,7 (3), 24,6 (4), 22,9 (4-e), 21,5 (5).
Ejemplo 25 Propiedades espectrales de la Criptoficina-140
EIMS m/z (intensidad relativa) 690/692 (2,3/1,8), 654/656 (3,8/2,2), 412/414 (5,4/2,1), 280/282 (5,4/2,2), 227 (10,2), 195/197 (27,8/10/4), 155/157 (53,7/16/4), 105 (81,0), 91 (100); EIMS de alta resolución m/z 690,2427 (C_{35}H_{44}
Cl_{2}N_{2}O_{8},E 4,8 mmu), 654,2760 (C_{35}H_{43}ClN_{2}O_{8}, -5,2 mmu). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) unidad amino o hidroxi ácido d (posición del carbono, multiplicidad; J en Hz) ácido 7-cloro-5,8-dihidroxi-6-metil-8-fenil-2-octenoico (A) 5,77 (2, d; 15,4), 6,68 (3, ddd; 15,3, 9,8 y 5,6), 2,29 (4, m), 2,67 (4,m), 4,98 (5, ddd; 10,3, 10,3 y 1,7), 2,64 (6, m), 1,15 (6-Me, d; 6,6), 4,19 (7, dd; 9,2 y 2,1), 4,72 (8, d; 9,2), 7,33-7,39 (10/11/12/13/14, m); 3-cloro-4-metoxifenilalanina (B) 4,81 (2, m), 5,69 (2-NH, d; 8/8), 3,01 (3, dd; 14,5 y 7,5), 3,16 (3, dd; 14,5 y 5,5), 7,23 (5, d; 2,1), 3,87 (7-OMe, s), 6,84 (8, d; 8,3), 7,09 (9, dd; 8,4 y 2,0); ácido amino-2-metilpropiónico (C) 2,73 (2, m), 1,22 (2-Me, d; 7,3), 3,24 (3, ddd; 13,5, 6,8 y 6,8), 3,53 (3, m), 6,91 (3-NH, brt; 6,0); ácido léucico (D) 4,89 (2,dd; 10,4 y 2,9), 1,39 (3, m), 1,69-1,80 (3/4, m). 0,90 (4-Me, d; 6,4), 0,87 (5, d; 6,6). ^{13}C RMN (CDCl_{3}) unidad d (posición del carbono) A 165,4 (1), 125,2, 141,4 (3), 36,7 (4), 75,5 (5), 38,1 (6), 10,4 (6-Me), 65,0 (7), 75,8 (8), 141,4 (9), 126,8 (10/14), 128,7 (11/13, 128,8 (12); B 171,0 (1), 53,6 (2), 35,0 (3), 129,9 (4), 131,0 (5), 122,4 (6), 153,9 (7), 56,1 (7-Ome), 112,2 (8), 128,4 (9); C 175,5 (1), 38,4 (2), 14,1 (2-Me), 41,3 (3), D 170,3 (1), 71,3 (2), 39,5 (c), 24,7 (4), 23,2 (4-Me), 21,4 (5).
Ejemplo 26 Propiedades espectrales de la Criptoficina -141
EIMS m/z (intensidad relativa) 654/656 (1,8/0,8, M-HCl), 412/414 (7,6/3,1), 280/282 (3,2/2,0), 227 (8,4), 195/197 (35,6/11,9), 155/157 (100/37,2), 105 (68,1), 91 (88,4); EIMS de alta resolución m/z 690,2468 (C_{35}H_{44}Cl_{2}N_{2}O_{8}, \AE 0,6 mmu), 654,2706 (C_{35}H_{43}ClN_{2}O_{8}, \AE 0,2 mmu). ^{1}H RMN (CDCl^{3}) unidad amino o hidroxi ácido (posición del carbono, multiplicidad; J en Hz) ácido 7-cloro-5,8-dihidroxi-6-metil-8-fenil-2-octenoico (A) 5,69 (2,d; 15,4, 6,62 (3, ddd; 15,1, 9,9 y 5,2), 2,07 (4, m), 2,49 (4, dd, 14,4 y 5,4), 4,96 (5, ddd; 10,5, 10,5 y 1,8), 1,88 (6, m), 1,07 (6-Me, d; 6,8, 4,24 (7, dd; 8,9 y 1,9), 4,73 (8, d; 8,8), 2,80 (8-OH, Pico amplio), 7,32 (10/14, dd; 7,6 y 1,9), 7,36-7,42 (11/12/13, m); 3-cloro-4-metoxifenilalanina (B) 4,78 (2, m), 5,65 (2-NH, d; 8,6), 3,00 (3, dd; 14,4 y 7,2), 3,13 (3, dd; 14,4 y 5,6), 7,20 (5, d; 2,3), 3,86 (7-OMe, s), 6,82 (8, d; 8,3), 7,06 (9, dd; 8,3 y 2,2); ácido 3-amino-2-metilpropiónico (C) 2,73 (2, ), 1,23 (2-Me, d; 7,2) 3,27 (3, ddd; 13,5, 6,8 y 6,8), 3,51 (3, ddd; 13,5, 5,0 y 3,8), 6,91 (3-NH, brt; 6,0); ácido léucico (D) 4,83 (2, dd; 10,4 y 2,9), 1,48 (3, m), 1,70 (3, m), 1,76 (4, m). 0,99 (4-Me, d; 6,5), 0,95 (5, d; 6,5). ^{13}C RMN (CDCl_{3}) unidad d (posición del carbono) A 165,3 (1), 125,2 (s), 141,0 (3), 36,2 (4), 75,5 (5), 39,3 (6), 10,8 (6-Me), 70,0 (7), 76,2 (8), 138,9 (9), 126,7 (10/14), 129,0 (11/13), 129,0 (12); B 170,9 (1), 53,6 (2), 35,0 (3), 129,8 (4), 131,0 (5), 122,4 (6), 153,9 (7), 56,1 (7-)Me), 112,2 (8), 128,4 (9); C 175,5 (1), 38,2 (2), 14,1 (2-Me), 41,1 (3), D 170,2 (1), 71,2 (2), 39,6 (3), 24,8 (4), 23,2 (4-Me), 21,4 (5).
Ejemplo 27 Esquema 1 Procedimientos experimentales 
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47
A una solución del alqueno 1 (1,15 g, 3,52 mmol) en 50 mL de CH_{2}Cl_{2} a -78ºC, se le añadió piridina (0,3 mL, 3,9 mmol) y 0,98 mL de una solución de Rojo Sudán 7B al 0,1%en CH_{2}Cl_{2}. Se burbujeó ozono lentamente hasta que el color rojo cambió a color amarillo. Se monitorizó el progreso de la reacción mediante TLC. Tras la finalización, se añadieron polvo de zinc (1,63 g, 24,9 mmol) y 3,4 mL de ácido acético glacial. Se retiró el baño frío y se dejó calentar la mezcla lentamente hasta temperatura ambiente y se agitó 2 h más. Se filtró la mezcla de reacción a través de Celite y se lavó con CuSO_{4} (3 x 30 mL), seguido por agua (3 x 20 mL) y finalmente NaHCO_{3} acuoso saturado (2 x 20 mL). Se secó la capa orgánica sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró al vacío para dar 0,937 g (88%) del aldehído deseado que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional: ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) d 9,74-9,73 (d, 1 h, J = 1,97 Hz), 7,06-6,82 (m, 1 H), 5,91-5,86 (d, 1 H, J = 15,4 Hz), 4,1-4,0 (m, 1 H), 3,73 (s, 3 H), 2,55-2,4 (m, 3 H), 1,09-1,07 (d, 3 H, J = 6,8 Hz), 0,87 (s, 9 H), 0,08 (s, 3 H), 0,06 (6, 3 H).
48
Se añadió a una solución de cloruro de 2,5-dimetilbencil trifenilfosfonio en 120 mL de THF a -78ºC metilitio (9,6 mL, 14,4 mmol), gota a gota, en forma de una solución 1,5 M en dietil éter complejado con bromuro de litio. Se dejo calentar la solución lentamente a 0ºC y se enfrió a -78ºC. Se añadió el aldehído 2 en 40 mL de THF gota a gota al iluro a -78ºC. Se agitó la mezcla a -78ºC durante 15 min y a continuación se calentó lentamente a temperatura ambiente. Tras una hora a temperatura ambiente, se añadió NH_{4}Cl saturado (50 mL) y se extrajo la solución con éter. Se lavó la capa de éter con agua (2 x 50 ml), y a continuación salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró al vacío. Se purificó el estireno crudo en forma de una mezcla de isómeros E:Z sobre gel de sílice usando EtOAc/hexanos al 2% para dar como resultado 2,32 g (58%) de un aceite transparente.
La mezcla E:Z se mantuvo a reflujo durante 8 h en 120 mL de benceno en presencia de tiofenol (0,3 mL) y 1,1'-azobis (ciclohexanocarbonitrilo) (VAZO) (0,16 g). A continuación se enfrió la solución a temperatura ambiente, se concentró bajo vacío y se purificó mediante cromatografía en columna (gel de sílice, EtOAc/hexanos al 2-5%) para dar como resultado 2,2 g (95%) del isómero E puro en forma de un aceite transparente: [\alpha]^{20}_{D} + 34,6º (cl. 0, MeOH); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) d 7,3-7,0 (m, 4 H), 6,62-6,57 (d, 1 H, J = 15,8 Hz), 6,11-6,03 (dd, 1 H, J = 15,8, 8,1 Hz), 5,93-5,88 (d, 1 H, J = 15,5 Hz), 3,82-3,78 (m, 1 H), 3,78 (s, 3 H), 2,6-2,34 (m, 3 H), 2,37 (s, 3 H), 2,34 (s, 3 H), 1,18-1,16 (d, 3 H, J = 6,8 Hz), 0,96 (s, 9 H), 0,13 (s, 3 H), 0,11(s, 3 H); ^{13}C RMN (75 M Hz, CDCl_{3}) d 167,2, 146,9, 136,9, 135,7, 133,3, 132,4, 130,5, 128,8, 128,1, 126,5, 123,2, 75,5, 51,8, 43,4, 37,9, 26,2, 21,4, 19,7, 18,5, 16,7, - 4,0, - 4,2; IR (CHCl_{3}) 2955, 2930, 2858, 1718, 1658, 1603, 1496, 1472, 1438, 1362, 1325, 1280, 1258, 1097, 1040 cm^{-1}; Anal. Calcd para C_{24}H_{38}O_{3}Si: C, 71,59; H, 9,51. Encontrado: C, 71,38; H, 9,30.
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49
A una solución del éster 3 (2,2 g, 5,46 mmol) en 10 mL de THF se le añadieron 11 mL de una solución de KOH 2 M. A la vez que se agitaba de manera vigorosa, la mezcla resultante se calentó a 65ºC durante 24 h. Tras enfriar a temperatura ambiente, se añadieron 11 mL de una solución 2 M de HCl y la mezcla resultante se agitó de manera vigorosa durante 30 min más. Se añadió acetato de etilo (50 mL) a la mezcla y se separaron las capas. Se extrajo de manera adicional la capa acuosa con acetato de etilo (2 x 30 ml). Se lavaron las capas orgánicas combinadas con salmuera al 50% (3 x 30 ml), se secaron sobre Na_{2}SO_{4}, se filtraron y se concentraron al vacío para dar como resultado 2,12 g (100%) del ácido deseado en forma de un aceite amarillo espeso: ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) d 7,26-6,95 (m, 4 H), 6,62-6,57 (d, 1 H, J = 15,8 Hz), 6,1-6,02 (dd, 1 H, J = 15,8, 8,0 Hz), 5,92-5,87 (d, 1 H, J = 15,7 Hz), 3,9-3,8 (m, 1 H), 2,6-2,2 (m, 3 H), 2,36 (s, 3 H), 2,34 (s, 3 H), 1,18-1,15 (d, 3 H, J = 6,8 Hz), 0,94 (s, 9 H), 0,12 (s, 3 H), 0,11
(s, 3 H).
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50
A una solución del ácido 4 a 0ºC (2,12 g, 5,46 mmol) y diisopropiletilamina (2,9 mL, 16,4 mmol) en 7 mL de DMF se añadió gota a gota cloruro difenilfosfínico (1,1 mL, 6,01 mmol). Tras 5 min de agitación a 0ºC y 30 min a temperatura ambiente, se añadió gota a gota la sal TFA de 3-(3-cloro-4-metoxifenil)-D-alanina-2,2,2-tricloroetil éster 5 en 7 mL de DMF. Se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 2 h, se vertió en 100 mL de agua y se lavó con dietil éter (3 x 50 mL). Se lavaron las capas orgánicas combinadas con salmuera, se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron a través de Celite y se concentraron al vacío. La purificación mediante la cromatografía en columna (gel de sílice, EtOAc/hexanos al 10-30%) dio 2,86 g (72%) de la amida 6 en forma de una espuma blanca: [\alpha]^{20}_{D} + 44,8º (cl, 0, MeOH); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) d 7,25(s, 1 H), 7,22 (s, 1 H), 7,1-6,83 (m, 5 H), 6,6-6,55 (d, 1 H J = 15,7 Hz), 6,11-6,03 (dd, 1 H, J = 15,6, 8,1 Hz), 5,95,8 (m, 2 H), 5,18-5,05 (m, 1 H), 4,83-4,75 (q, 2 H, J = 12,0 Hz), 3,9 (s, 3 H), 3,83-3,68 (m, 1 H), 3,3-3,1 (m, 2 H), 2,6-2,36 (m, 3 H), 2,36 (s, 3 H), 2,32 (s, 3 H), 1,16-1,14 (d, 3 H, J = 6,7 Hz), 0,95 (s, 9 H), 0,11 (s, 3 H), 0,05 (s, 3H); ^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}) d 170,0, 165,1, 154,2, 143,1, 136,4, 135,3, 133,0, 132,0, 131,0, 130,9, 130,0, 128,4, 128,3, 127,7, 126,1, 124,6, 112,3, 112,1, 94,2, 75,0, 74,7, 56,0, 52,9, 42,8, 37,5, 36,5, 25,8, 20,9, 19,3, 18,0, 16,4, - 4,3, - 4,7; IR (CHCl_{3}) 3428, 2957, 2930, 2857, 1759, 1676, 1645, 1606, 1503, 1464, 1442, 1380, 1349, 1281, 1259, 1173, 1067 cm^{-1}.
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Ejemplo 27 Esquema 1 Procedimientos experimentales 
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51 
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A una solución del alqueno 1 (1,15 g, 3,52 mmol) en 50 mL de CH_{2}Cl_{2} a -78ºC, se le añadió piridina (0,3 mL, 3,9 mmol) y 0,98 mL de una solución al 0,1% de Rojo Sudán 7B en CH_{2}Cl_{2}. Se burbujeó ozono lentamente hasta que el color rojo cambió a color amarillo. Se monitorizó el progreso de la reacción mediante TLC. Tras la finalización, se añadieron polvo de zinc (1,63 g, 24,9 mmol) y 3,4 mL de ácido acético glacial. Se retiró el baño frío y se dejó calentar la mezcla lentamente a temperatura ambiente y se agitó durante 2 h más. Se filtró la mezcla de reacción a través de Celite y se lavó con CuSO_{4} (3 x 30 mL), seguido por agua (3 x 20 mL) y finalmente NaHCO_{3} acuoso saturado (2 x 20 mL). Se secó la capa orgánica sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró al vacío para dar 0,937 g (88%) del aldehído deseado que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional: ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) d 9,74-9,73 (d, 1 h, J = 1,97 Hz), 7,06-6,82 (m, 1 H), 5,91-5,86 (d, 1 H, J = 15,4 Hz), 4,1-4,0 (m, 1 H), 3,73 (s, 3 H), 2,55-2,4 (m, 3 H), 1,09-1,07 (d, 3 H, J = 6,8 Hz), 0,87 (s, 9 H), 0,08 (s, 3 H), 0,06 (6, 3 H):
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52 
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A una solución de cloruro de 2,5-dimetilbencil trifenilfosfonio en 120 mL de THF a -78ºC se añadió gota a gota metilitio (9,6 mL, 14,4 mmol), en forma de una solución 1,5 M en dietil éter complejado con bromuro de litio. Se dejo calentar la solución lentamente a 0ºC y se enfrió a -78ºC. Se añadió el aldehído 2 en 40 mL de THF gota a gota al iluro a -78ºC. Se agitó la mezcla a -78ºC durante 15 min y a continuación se calentó lentamente a temperatura ambiente. Tras una hora a temperatura ambiente, se añadió NH_{4}Cl saturado (50 mL) y se extrajo la solución con éter. Se lavó la capa de éter con agua (2 x 50 ml), y a continuación salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró al vacío. Se purificó el estireno crudo en forma de mezcla de isómeros E:Z sobre gel de sílice usando EtOAc/hexanos al 2% para dar como resultado 2,32 g (58%) de un aceite transparente.
La mezcla E:Z se mantuvo a reflujo durante 8 h en 120 mL de benceno en presencia de tiofenol (0,3 mL) y 1,1'-azobis (ciclohexanocarbonitrilo) (VAZO) (0,16 g). A continuación se enfrió la solución a temperatura ambiente, se concentró bajo vacío y se purificó mediante cromatografía en columna (gel de sílice, EtOAc/hexanos al 2-5%) para dar como resultado 2,2 g (95%) del isómero E puro en forma de un aceite transparente: [\alpha]^{20}_{D} + 34,6º (cl. 0, MeOH); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) d 7,3-7,0 (m, 4 H), 6,62-6,57 (d, 1 H, J = 15,8 Hz), 6,11-6,03 (dd, 1 H, J = 15,8, 8,1 Hz), 5,93-5,88 (d, 1 H, J = 15,5 Hz), 3,82-3,78 (m, 1 H), 3,78 (s, 3 H), 2,6-2,34 (m, 3 H), 2,37 (s, 3 H), 2,34 (s, 3 H), 1,18-1,16 (d, 3 H, J = 6,8 Hz), 0,96 (s, 9 H), 0,13 (s, 3 H), 0,11(s, 3 H); ^{13}C RMN (75 M Hz, CDCl_{3}) d 167,2, 146,9, 136,9, 135,7, 133,3, 132,4, 130,5, 128,8, 128,1, 126,5, 123,2, 75,5, 51,8, 43,4, 37,9, 26,2, 21,4, 19,7, 18,5, 16,7, - 4,0, - 4,2; IR (CHCl_{3}) 2955, 2930, 2858, 1718, 1658, 1603, 1496, 1472, 1438, 1362, 1325, 1280, 1258, 1097, 1040 cm^{-1}; Anal. Calcd para C_{24}H_{38}O_{3}Si: C, 71,59; H, 9,51, Encontrado: C, 71,38; H, 9,30.
53 
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A una solución del éster 3 (2,2 g, 5,46 mmol) en 10 mL de THF se le añadieron 11 mL de una solución de KOH 2 M. A la vez que se agitaba de manera vigorosa, la mezcla resultante se calentó a 65ºC durante 24 h. Tras enfriar a temperatura ambiente, se añadieron 11 mL de una solución 2 M de HCl y la mezcla resultante se agitó de manera vigorosa durante 30 min más. Se añadió acetato de etilo (50 mL) a la mezcla y se separaron las capas. Se extrajo de manera adicional la capa acuosa con acetato de etilo (2 x 30 ml). Se lavaron las capas orgánicas combinadas con salmuera al 50% (3 x 30 ml), se secaron sobre Na_{2}SO_{4}, se filtraron y se concentraron al vacío para dar como resultado 2,12 g (100%) del ácido deseado en forma de un aceite amarillo espeso: ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) d 7,26-6,95 (m, 4 H), 6,62-6,57 (d, 1 H, J = 15,8 Hz), 6,1-6,02 (dd, 1 H, J = 15,8, 8,0 Hz), 5,92-5,87 (d, 1 H, J = 15,7 Hz), 3,9-3,8 (m, 1 H), 2,6-2,2 (m, 3 H), 2,36 (s, 3 H), 2,34 (s, 3 H), 1,18-1,15 (d, 3 H, J = 6,8 Hz), 0,94 (s, 9 H), 0,12 (s, 3 H), 0,11
(s, 3 H).
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54 
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A una solución del ácido 4 a 0ºC (2,12 g, 5,46 mmol) y diisopropiletilamina (2,9 mL, 16,4 mmol) en 7 mL de DMF se añadió cloruro difenilfosfínico (1,1 mL, 6,01 mmol) gota a gota. Tras 5 min de agitación a 0ºC y 30 min a temperatura ambiente, se añadió gota a gota la sal TFA de 3-(3-cloro-4-metoxifenil)-D-alanina-2,2,2-tricloroetil éster 5 en 7 mL de DMF. Se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 2 h, se vertió en 100 mL de agua y se lavó con dietil éter (3 x 50 mL). Se lavaron las capas orgánicas combinadas con salmuera, se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron a través de Celite y se concentraron al vacío. La purificación mediante cromatografía en columna (gel de sílice, EtOAc/hexanos al 10-30%) dio 2,86 g (72%) de la amida 6 en forma de una espuma blanca: [\alpha]^{20}_{D} + 44,8º (cl, 0, MeOH); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) d 7,25(s, 1 H), 7,22 (s, 1 H), 7,1-6,83 (m, 5 H), 6,6-6,55 (d, 1 H J = 15,7 Hz), 6,11-6,03 (dd, 1 H, J = 15,6, 8,1 Hz), 5,9-5,8 (m, 2 H), 5,18-5,05 (m, 1 H), 4,83-4,75 (q, 2 H, J = 12,0 Hz), 3,9 (s, 3 H), 3,83-3,68 (m, 1 H), 3,3-3,1 (m, 2 H), 2,6-2,36 (m, 3 H), 2,36 (s, 3 H), 2,32 (s, 3 H), 1,16-1,14 (d, 3 H, J = 6,7 Hz), 0,95 (s, 9 H), 0,11 (s, 3 H), 0,05 (s, 3H); ^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}) d 170,0, 165,1, 154,2, 143,1, 136,4, 135,3, 133,0, 132,0, 131,0, 130,9, 130,0, 128,4, 128,3, 127,7, 126,1, 124,6, 112,3, 112,1, 94,2, 75,0, 74,7, 56,0, 52,9, 42,8, 37,5, 36,5, 25,8, 20,9, 19,3, 18,0, 16,4, - 4,3, - 4,7; IR (CHCl_{3}) 3428, 2957, 2930, 2857, 1759, 1676, 1645, 1606, 1503, 1464, 1442, 1380, 1349, 1281, 1259, 1173, 1067 cm^{-1}.
Ejemplo 29
55
Se preparó el éster (2,1 g) a partir de 2,5 g del aldehído 2 y 5,0 g de cloruro de 3-metilbencil trifenilfosfonio con un rendimiento del 65% usando el procedimiento descrito más arriba: [\alpha]^{20}_{D} + 45,55º (c 1,0, MeOH): ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) d 7,22-6,88 (m, 5 H), 6,37-6,31 (d, 1 H, J = 16,0 Hz), 6,18-6,10 (dd, 1 H, J = 16,0, 8,0 Hz), 5,86-5,81 (d, 1 H, J = 15,5 Hz), 3,8-3,7 (m, 4 H), 2,5-2,3 (m, 6 H), 1,11-1,08 (d, 3 H, J = 6,9 Hz), 0,91 (s, 9H), 0,061 (s, 3 H),0,052 (s, 3 H); ^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}) d 166,7,146,4, 137,5, 135,9, 131,6, 130,4, 128,3, 127,7, 126,7, 123,1, 122,8, 75,0, 51,3, 42,7, 37,4, 33,8, 25,8, 21,9, 21,3, 18,0, 16,0, -4,5, -4,6; IR (CHCl_{3}) 2953, 2931, 2859, 1718, 1658, 1604, 1472, 1454, 1438, 1258 cm^{-1}.
Se preparó el ácido (1,93 g) a partir de 2,0 g del éster con un rendimiento del 100% usando el procedimiento descrito más arriba: ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) d 7,22-7,0 (m, 5 H), 6,38-6,33 (d, 1 H, J = 16,0 Hz), 6,18-6,10 (dd, 1 H, J = 16,0, 8,0 Hz), 5,87-5,82 (d, 1 H, J = 15,7 Hz), 3,8-3,7 (m, 1 H), 2,5-2,35 (m, 3 H),2,34 (s, 3 H), 1,12-1,09 (d, 3 H, J = 6,8 Hz), 0,9 (s, 9 H), 0,068 (s, 3 H), 0,061 (s, 3 H).
Se preparó la amida (2,9 g) a partir de 1,93 g del ácido con un rendimiento del 72% usando el procedimiento descrito más arriba: ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) d 7,22-7,1 (m, 4 H), 7,1-7,0(m, 2 H), 6,9-6,8 (m, 2 H), 6,36-6,30 (d, 1 H, J = 16,0 Hz), 6,19-6,11 (dd, 1 H, J = 16,0, 8,0 Hz), 5,82-5,77 (m, 2 H), 5,1-5,0 (m, 1 H), 4,78-4,71 (q, 2 H, J = 12,0 Hz), 3,86 (s, 3 H), 3,8-3,7 (m, 1 H), 3,25-3,15 (m, 2 H), 2,5-2,3 (m, 6 H), 1,1-1,08 (d, 3 H, J = 6,8 Hz), 0,88 (s, 9 H), 0,056 (s, 3 H), 0,044 (s, 3 H).
Se preparó el alcohol (2,0 g) a partir de 2,4 g de la amida de partida con un rendimiento del 100% usando el procedimiento descrito más arriba: ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) d 7,25-6,8 (m, 8 H), 6,46-6,41 (d, 1 H, J = 15,9 Hz), 6,16-6,07 (dd, 1 H, J = 16,0, 8,8 Hz), 5,95-5,8 (m, 2 H), 5,1-5,0 (m, 1 H), 4,81-4,7 (q, 2 H, J = 12,0 Hz), 3,87 (s, 3 H), 3,7-3,6 (m, 1 H), 3,22-3,05 (m, 2 H), 2,5-2,34 (m, 3 H), 2,34 (s, 3 H), 1,8-1,7 (bs, 1 H), 1,151,13 (d, 3 H, J = 6,8 Hz).
Se preparó el sustrato (2,3 g) a partir de 2,0 g del alcohol de partida con un rendimiento del 76% usando el procedimiento descrito más arriba: [\alpha]^{20}_{D} + 31,6º (c 1,08, MeOH); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) d 7,2-7,0 (m, 6 H), 6,84-6,81 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 6,80-6,73 (m, 1 H), 6,53-6,50 (bd, 1 H, J = 7,3 Hz), 6,4-6,35 (d, 1 H, J = 15,8 Hz), 6,03-5,95 (dd, 1 H, J = 15,8, 8,5 Hz), 5,9-5,85 (d, 1 H, J = 15,7 Hz), 5,42-5,35 (bt, 1 H, J = 6,38 Hz), 5,1-4,82 (m, 3 H), 4,8-4,67 (q, 2 H, J = 12,0 Hz), 3,85 (s, 3 H), 3,28-3,26 (d, 2 H, J = 6,46 Hz), 3,23-3,16 (dd, 1 H, J = 14,3, 5,8 Hz), 3,1-3,03 (dd, 1 H, J = 14,2, 6,7 Hz), 2,7-2,4 (m, 3 H), 2,33 (s, 3 H), 1,8-1,5 (m, 3 H), 1,43 (s, 9 H), 1,2 (s, 3 H), 1,15 (s, 3 H), 1,12-1,1 (d, 3 H, J = 6,7 Hz), 0,88-0,86 (d, 3 H, J = 6,2 Hz), 0,84-0,82 (d, 3 H, J = 6,4 Hz); ^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}) d 170,6, 170,0, 165,2, 154,0, 139,2, 138,0, 136,7, 135,8, 131,8, 131,1, 129,7, 128,8, 128,4, 128,2, 126,8, 125,3, 123,3, 122,23, 112,1, 94,2, 78,9, 74,5, 71,3, 56,0, 53,1, 48,6, 43,9, 41,0, 39,4, 36,5, 33,3, 28,3, 24,7, 22,9, 22,7, 22,3, 21,3, 21,2, 16,5; IR (CHCl_{3}) 3426, 3383, 2967, 2935, 2874, 2841, 1727, 1710, 1680, 1646, 1605, 1504, 1368, 1280, 1259, 1169, 1151 cm^{-1}.
Se preparó el estireno (0,86 g) a partir de 2,2 g del carbamato de partida con un rendimiento del 54% usando el procedimiento descrito más arriba: [\alpha]^{20}_{D} + 33,1º (c 1,03, MeOH); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) d 7,24-7,0 (m, 7 H), 6,85-6,82 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 6,82-6,70 (m, 1 H), 6,39-6,34 (d, 1 H, J = 15,8 Hz), 6,03-5,95 (dd, 1H, J = 15,8, 8,7 Hz), 5,78-5,73 (d, 1 H, J = 15,2 Hz), 5,67-5,64 (d, 1 H, J = 7,8 Hz), 5,1-5,0 (m, 1 H), 4,87-4,83 (dd, 1 H, J = 10,2, 3,5 Hz), 4,8-4,7 (m, 1 H), 3,9 (s, 3 H), 3,45-3,38 (dd, 1 H, J = 13,4, 8,6 Hz), 3,2-3,0 (m, 3 H), 2,6-2,3 (m, 3 H), 2,32 (s, 3 H), 1,75-1,25 (m, 3 H), 1,22 (s, 3 H), 1,15 (s, 3 H), 1,13-1,11 (d, 3 H, J = 6,8 Hz), 0,75-0,72 (t, 6 H, J = 5,7 Hz); ^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}) d 177,9, 170,5, 170,3, 165,1, 154,0, 142,1, 138,0, 136,6, 135,6, 131,8, 130,8, 129,9, 129,6, 128,4, 128,22, 128,17, 126,7, 124,5, 123,3, 122,5, 112,3, 71,4, 56,1, 54,3, 46,4, 42,7, 42,2, 39,4, 36,5, 35,3, 24,5, 22,8, 22,6, 22,5, 21,2, 21,1, 17,2; IR (CHCl_{3}) 3424, 3021, 3017, 2965, 1747, 1711, 1680, 1652, 1528, 1503, 1485, 1259, 1151, 1067 cm^{-1}; Anal. Calcd para C_{37}H_{47}ClN_{2}O_{7}: C, 66,60; H, 7,10; N, 4,20, Encontrado: C, 66,79; H, 7,03; N, 4,25.
Ejemplo 30 
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56 
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Se preparó el compuesto del título, epóxido b, a partir de 0,667 g del estireno de partida con un rendimiento del 29% usando el procedimiento descrito más arriba: ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) d 7,37,0 (m, 7 H), 6,90-6,87 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 6,87-6,75 (m, 1 H), 5,79-5,74 (d, 1 H, J = 14,8 Hz),5,54-5,51 (d, 1 H, J = 7,8 Hz), 5,28-5,22 (m, 1 H), 4,89-4,85 (dd, 1 H, J = 10,4, 3,5 Hz), 4,82-4,75 (m, 1 H), 3,92 (s, 3 H), 3,69-3,68 (d, 1 H, J = 1,63), 3,51-3,44 (dd, 1 H, J = 13,4, 8,6 Hz), 3,2-3,1 (m, 2 H), 2,98-2,95 (dd, 1 H, J = 7,6, 1,6 Hz), 2,65-2,32 (m, 3 H), 2,32 (s, 3 H), 1,85-1,6 (m, 3 H), 1,4-1,25 (m, 1 H), 1,27 (s, 3 H), 1,21 (s, 3 H), 1,21-1,18 (d, 3 H, J = 7,5 Hz), 0,90-0,86 (t, 6 H, J = 6,13 Hz).
Ejemplo 31 
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57 
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A una solución del epóxido b (0,1 g, 0,147 mmol) en 5,0 ml de CHCl_{3} a -60ºC, se le añadió clorotrimetil silano (0,093 mL, 0,74 mmol). Se agitó la solución a -60ºC durante 30 min y a temperatura ambiente durante 1,5 h antes de concentrarse bajo vacío. Se purificó el residuo resultante que contenía una mezcla 50:50 de las clorohidrinas sin y anti mediante HPLC en fase reversa para dar como resultado 0,028 g (27%) del trans isómero deseado: ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) d 7,28-7,2 (m, 5 H), 7,13-7,1 (dd, 1 H, J = 8,32, 1,95 Hz), 6,91-6,88 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 6,88-6,78 (m, 1 H), 5,86-5,81 (d, 1 H, J = 15,0 Hz), 5,73-5,71 (d, 1 H, J = 7,8 Hz), 5,24-5,17 (t, 1 H, J = 9,4 Hz), 5,0-4,96 (dd, 1 H, J = 9,58, 2,93 Hz), 4,81-4,74 (m, 1 H), 4,67-4,64 (d, 1 H, J = 9,73 Hz), 4,06-4,03 (dd, 1 H, J = 9,6, 1,1 Hz), 3,92 (s, 3 H), 3,47-3,39 (dd, 1 H, J = 13,2, 8,3 Hz), 3,24-3,0 (m, 3 H), 2,8-2,4 (m, 2 H), 2,4(s, 3 H), 1,9-1,4 (m, 4 H), 1,28 (s, 3 H), 1,22 (s, 3 H), 1,09-1,07 (d, 3 H, J = 6,95 Hz), 0,98-0,96 (d, 6 H, J = 6,4 Hz).
Ejemplo 32
58
Se preparó el éster (2,75 g) a partir de 3,39 g del aldehído 2 y 7,7 g de cloruro de 4-metoxibencil trifenilfosfonio con un rendimiento del 54% usando el procedimiento descrito más arriba: [\alpha]^{20}_{D} + 71,85º (c 1,03, MeOH): ^{1}H RMN (300 M Hz, CDCl_{3}) d 7,25-7,21 (m, 2 H, J = 9,0 Hz), 7,0-6,85 (m, 1 H), 6,81-6,78 (d, 2 H, J = 8,5 Hz), 6,30-6,23 (d, 1 H, J = 16,3 Hz), 6,0-5,9 (dd, 1 H, J = 16,3, 8,2 Hz), 5,81-5,75 (d, 1 H, J = 14,26 Hz), 3,75 (s, 3 H), 3,67 (s, 4 H), 2,42-2,22 (m, 3 H), 1,05-1,02 (d, 3 H, J = 6,8 Hz), 0,86 (s, 9 H), 0,005 (s, 3 H), -0,001 (s, 3 H); ^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}) d 166,7, 158,8, 146,4, 130,4, 129,7, 129,7, 127,0, 122,7, 113,8, 75,0, 55,2, 51,3, 42,7, 37,4, 25,8, 18,0, 16,1, -4,5, -4,6; IR (CHCl_{3}) 3010, 2955, 2930, 2898, 2857, 1718, 1658, 1607, 1511 cm^{-1}.
Se preparó el ácido (1,58 g) a partir de 1,7 g de éster con un rendimiento del 96% usando el procedimiento descrito más arriba: ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) d 7,3-7,27 (d, 2 H, J = 8,7 Hz), 7,13-7,03 (m, 1 H), 6,86-6,83 (d, 2 H, J = 8,6 Hz), 6,35-6,29 (d, 1 H, J = 16,0 Hz), 6,04-5,96 (dd, 1 H, J = 15,9, 8,0 Hz), 5,87-5,81 (d, 1 H, J = 15,8 Hz), 3,8 (s, 3 H), 3,79-3,7 (m, 1 H), 2,5-2,33 (m, 3 H), 1,1-1,08 (d, 3 H, J = 6,8 Hz), 0,9 (s, 9 H), 0,058 (s, 3 H), 0,055 (s, 3H).
Se preparó la amida (2,09 g) a partir de 1,58 g de ácido con un rendimiento del 70% usando el procedimiento descrito más arriba: [\alpha]^{20}_{D} + 2,0º (c 1,0, CHCl_{3}); ^{1}H RMN (300 M Hz, CDCl_{3}) d 7,28-7,26 (d, 2 H, J = 7,33 Hz), 7,18-7,17 (d, 1 H, J = 1,8 Hz), 7,04-7,0 (dd, 1 H, J = 8,5, 1,8 Hz), 6,90-6,79 (m, 3 H), 6,32-6,27 (d, 1 H, J = 16,0 Hz), 6,05-5,97 (dd, 1 H, J = 16,0, 8,1 Hz), 5,83-5,76 (m, 3 H), 5,09-5,05 (m, 1 H), 4,82-4,7 (q, 2 H, J = 11,9 Hz), 3,86 (s, 3 H), 3,8 (s, 3 H), 3,77-3,7 (m, 1 H), 3,24-3,17 (dd, 1 H, J = 14,2, 5,7 Hz), 3,13-3,07 (dd, 1 H, J = 14,2, 5,94 Hz), 2,5-2,3 (m, 3 H), 1,09-1,06 (d, 3 H, J = 6,8 Hz), 0,89 (s, 9 H), 0,048 (s, 3 H), 0,038 (s, 3 H); ^{13}C RMN (75 M Hz, CDCl_{3}) d 169,9, 165,1, 158,7, 154,2, 143,0, 135,5, 131,0, 130,4, 129,6, 128,4, 127,0, 124,6, 122,5, 113,8, 112,1, 94,2, 75,0, 74,7, 56,0, 55,2, 52,9, 42,5, 37,4, 36,4, 25,8, 18,0, 16,4, -4,4, -4,7; IR (CHCl_{3}) 2957, 2931, 2857, 1757, 1676, 1644, 1607, 1511, 1503 cm^{-1}.
Se preparó el alcohol (1,35 g) a partir de 1,63 g de la amida de partida con un rendimiento del 98% usando el procedimiento descrito más arriba: [\alpha]^{20}_{D} + 55,7º (c 1,0, MeOH); ^{1}H RMN (300 M Hz, CDCl_{3}) d 7,31-7,29 (d, 2 H, J = 7,9 Hz), 7,18 (s, 1 H), 7,05-7,02 (d, 1 H, J = 8,3 Hz), 7,0-6,87 (m, 1 H), 6,86-6,83 (d, 3 H, J = 8,2 Hz), 6,44-6,38 (d, 1 H, J = 15,8 Hz), 6,05,82 (m, 3 H), 5,10-5,0 (m, 1 H), 4,81-4,7 (q, 2 H, J = 11,8 Hz), 3,87 (s, 3 H), 3,81 (s, 3 H), 3,67-3,6 (m, 1 H), 3,24-3,19 (dd, 1 H, U = 14,1, 6,1 Hz), 3,12-3,07 (dd, 1 H, J = 14,4, 5,9 Hz), 2,5-2,25 (m, 3 H), 1,8-1,6 (bs, 1 H), 1,14-1,12 (d, 3 H, J = 6,6 Hz); ^{13}C RMN (75 MHz, CDC_{l3}) d 170,1, 165,2, 159,0, 154,2, 142,5, 131,2, 131,0, 129,8, 128,7, 128,4, 127,2, 125,0, 122,4, 113,9, 112,2, 94,2, 74,7, 73,8, 56,05, 55,2, 53,0, 43,2, 37,1, 36,4, 16,8; IR (CHCl_{3}) 3428, 2964, 2936, 2912, 2874, 2840, 1758, 1677, 1645, 1607, 1512, 1503, 1258, 1175 cm^{-1}.
Se preparó el sustrato (1,69 g) a partir de 1,26 g del alcohol de partida con un rendimiento del 89% usando el procedimiento descrito más arriba: [\alpha]^{20}_{D} + 35,2º (c 1,02, MeOH); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) d 7,26-7,23 (d, 21 H, J = 8,0 Hz), 7,18-7,17 (d, 1 H, J = 1,7 ), 7,07-7,03 (dd, 1 H, J = 8,4, 1,6), 6,85-6,7 (m, 4 H), 6,53-6,5 (d, 1 H, J = 7,9 Hz), 6,36-6,31 (d, 1 H, J = 15,8 Hz), 5,9-5,81 (m, 2 H), 5,42-5,35 (t, 1 H), 5,1-4,95 (m, 2 H), 4,94-4,90 (dd, 1 H, J = 9,6, 3,4 Hz), 4,81-4,67 (q, 2 H, J = 11,9 Hz), 3,85 (s, 3 H), 3,79 (s, 3 H), 3,28-3,26 (d, 2 H, J = 6,5 Hz), 3,23-3,16 (dd, 1 H, J = 14,3, 5,8 Hz), 3,09-3,02 (dd, 1 H, J = 14,1, 6,7 Hz), 2,61-2,4 (m, 3 H), 1,8-1,5 (m, 3 H), 1,43 (s, 9 H), 1,20 (s, 3 H), 1,15 (s, 3 H), 1,11-1,09 (d, 3 H, J = 6,7 Hz), 0,87-0,85 (d, 3 H, J = 6,4 Hz), 0,84-0,82 (d, 3 H, J = 6,5 Hz); ^{13}C RMN (75 M Hz, CDCl_{3}) d 174,9, 170,6, 169,9, 165,3, 159,0, 154,0, 139,3, 135,4, 131,1, 131,0, 129,6, 128,8, 128,4, 127,8, 127,2, 125,2, 122,2, 113,9, 112,2, 94,3, 74,5, 71,3, 56,0, 55,2, 53,1, 48,6, 43,9, 41,0, 39,4, 36,5, 28,3, 24,7, 22,9, 22,7, 22,3, 21,4, 16,6; IR (CHCl_{3}) 3426, 3383, 2965, 2936, 2874, 2840, 1728, 1711, 1680, 1646, 1607, 1512, 1465, 1367, 1254, 1175, 1067 cm^{-1}.
Se preparó el producto estireno (0,676 g) a partir de 1,43 g del carbamato de partida con un rendimiento del 65% usando el procedimiento descrito más arriba: ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) 7,26-7,23 (d, 3 H, J = 8,4 Hz), 7,20-7,19 (d, 1 H, J = 1,8 Hz), 7,07-7,03 (dd, 1 H, J = 8,4, 1,9 Hz), 6,84-6,81 (d, 3 H, J = 8,5 Hz), 6,86,7 (m, 1 H), 6,36-6,31 (d, 1 H, J = 15,8 Hz), 5,89-5,81 (dd, 1 H, J = 15,8, 8,8 Hz), 5,78-5,73 (d, 1 H, J = 13,7 Hz), 5,68-5,66 (d, 1 H, J = 7,9 Hz), 5,05-4,99 (ddd, 1 H, J = 10,6, 6,6, 1,6 Hz), 4,87-4,82 (dd, 1 H, J = 9,7, 3,1 Hz), 4,78-4,7 (m, 1 H), 3,86 (s, 3 H), 3,79 (s, 3 H), 3,45-3,37 (dd, 1H, J = 13,4, 8,6 Hz) 3,15-3,0 (m, 3 H), 2,6-2,25 (m, 3 H), 1,7-1,3 (m, 3 H), 1,22 (s, 3 H), 1,15 (s, 3 H), 1,12-1,1 (d, 3 H, J = 6,8 Hz), 0,76-0,75 (d, 3 H, J = 2,9 Hz), 0,74-0,73 (d, 3 H, J = 2,8 Hz).
Ejemplo 33
59
A una solución de tert-butóxido de potasio a 0ºC (1,17 g, 10,5 mmol) en 120 mL de THF se le añadió bromuro de p-nitro-bencil trifenilfosfonio (5,0 g, 10,5 mmol), en pequeñas porciones durante un período de 30 min. Se agitó la mezcla a 0ºC durante 1 h. Se añadió gota a gota el aldehído 2 en 20 ml de THF al iluro preformado. Se agitó la mezcla a 0ºC durante 15 min, a continuación se calentó lentamente a temperatura ambiente y se agitó durante toda la noche. Se añadió NH_{4}Cl saturado acuoso (50 ml) y se extrajo la solución con acetato de etilo. Se lavó la capa orgánica con salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró al vacío. Se purificó el estireno crudo en forma de una mezcla de los isómeros E:Z sobre gel de sílice usando EtOAc/hexanos al 2% para dar como resultado 0,5 g del isómero z y 1,1 g del isómero E (42%) en forma de un aceite amarillo: [\alpha]^{20}_{D} + 63,81º (c 1,05, MeOH); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) d 8,18-8,15 (d, 2 H, J = 8,6 Hz), 7,47-7,44 (d, 2 H, J = 8,7 Hz), 7,0-6,85 (m, 1 H), 6,5-6,3 (m, 2 H), 5,87-5,82 (d, 1 H, J = 15,6 Hz), 3,8-3,73 (m, 1 H), 3,73 (s, 3 H), 2,55-2,35 (m, 3 H), 1,13-1,11 (d, 3 H, J = 6,9 Hz), 0,90 (s, 9 H), 0,059 (s, 3 H), 0,047 (s, 3 H); ^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}) 166,5, 145,5, 143,9, 137,3, 128,7, 126,4, 123,9, 123,1, 74,6, 51,3, 42,8, 37,8, 33,8, 25,7, 24,3, 21,9, 18,0, 16,3, -4,4, -4,7; IR (CHCl_{3}) 2953, 2931, 2859, 1719, 1658, 1596, 1518, 1472, 1438, 1345, 1259, 1110 cm^{-1}.
Se preparó la amida (3,06 g) a partir de 2,55 g de ácido con un rendimiento del 65% usando el procedimiento descrito más arriba: [\alpha]^{20}_{D} + 70,67º (c 1,05, MeOH); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) d 8,15-8,12 (d, 2 H, J = 8,7 Hz), 7,45-7,42 (d, 2 H, J = 8,7 Hz), 7,17-7,16 (d, 1 H, J = 2,0 Hz), 7,04-7,01 (dd, 1 H, J = 8,45, 1,9 Hz), 6,88-6,82 (m, 2 H), 6,43-6,3 (m, 2 H), 5,93-5,91 (d, 1 H, J = 7,5 Hz), 5,84-5,79 (d, 1 H, J = 15,3 Hz), 5,1-5,0 (m, 1 H), 4,82-4,69 (q, 2 H, J = 11,9 Hz), 3,85 (s, 3 H), 3,8-3,7 (m, 1 H), 3,24-3,18 (dd, 1 H, J = 14,3, 5,7 Hz), 3,13-3,06 (dd, 1 H, J = 14,2, 6,05 Hz), 2,52-2,3 (m, 3 H), 1,11-1,09 (d, 3 H, J = 6,8 Hz), 0,88 (s, 9 H), 0,041 (s, 3 H), 0,032 (s, 3 H); ^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}) d 170,0, 165,0, 154,2, 146,5, 144,0, 142,2, 137,4, 136,0, 131,0, 128,7, 128,4, 126,4, 124,9, 123,9, 122,5, 112,1, 94,1, 74,72, 74,67, 56,0, 52,9, 42,7, 37,8, 36,4, 25,7, 18,0, 16,5, -4,7, -4,3; IR (CHCl_{3}) 3429, 2957, 2931, 2858, 1757, 1677, 1645, 1597, 1517, 1503, 1345, 1259, 1180, 1110, 1067, 1026 cm^{-1}.
Se preparó el sustrato (3,3 g) a partir de 2,54 g del alcohol de partida con un rendimiento del 87% del procedimiento descrito más arriba: [\alpha]^{20}_{D} + 38,2º (c 1,07, MeOH); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) d 8,23-8,2 (d, 2 H, J = 8,7 Hz), 7,52-7,49 (d, 2 H, J = 8,7 Hz), 7,21(s, 1 H), 7,12-7,08 (dd, 1 H, J = 8,2, 1,8 Hz), 6,89-6,86 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 6,86-6,75 (m, 1 H), 6,6-6,58 (d, 1 H, J = 8,0 Hz), 6,55-6,5 (d, 1 H, J = 15,9 Hz), 6,31-6,23 (dd, 1 H, J = 15,8, 8,5 Hz), 5,97-5,92 (d, 1 H, J = 15,5 Hz), 5,4-5,3 (bt, 1 H), 5,2-5,0 (m, 2 H), 4,98-4,94 (dd, 1 H, J = 9,5, 3,6 Hz), 4,86-4,72 (q, 2 H, J = 12 Hz), 3,9 (s, 3 H), 3,33-3,3 (d, 1 H, J = 6,6 Hz), 3,27-3,22 (dd, 1 H, J = 14,1, 5,7 Hz), 3,14-3,07 (dd, 2 H, J = 14,0, 6,7 Hz), 2,8-2,5 (m, 3 H), 2,9-1,47 (m, 3 H), 1,47 (s, 9 H), 1,3-1,2 (m, 9 H), 0,91-0,89 (d, 3 H, J = 6,4 Hz), 0,87-0,85 (d, 3 H, J = 6,4 Hz); ^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}) d 176,8, 170,6, 169,9, 165,1, 156,2, 154,0, 146,8, 143,2, 138,8, 135,8, 135,4, 131,1, 129,7, 128,7, 128,4, 126,7, 126,6, 125,5, 123,9, 122,2, 112,1, 94,2, 79,0, 76,2, 74,5, 71,2, 56,0, 53,1, 48,5, 43,9, 41,2, 39,4, 36,5, 33,3, 28,3, 24,7, 22,9, 22,7, 22,3, 21,4, 16,3; IR (CHCl_{3}) 3426, 3385, 2967, 2936, 2874, 2841, 1712, 1681, 1646, 1597, 1519, 1500, 1345, 1280, 1259, 1170, 1150, 1067, 1024 cm^{-1}.
Se preparó el producto estireno (0,55 g) a partir de 1,77 g del carbamato de partida con un rendimiento del 42% usando el procedimiento descrito más arriba: ^{1}H RMN (300 M Hz, CDCl_{3}) 8,23-8,21 (d, 2 H, J = 8,7 Hz), 7,52-7,49 (d, 2 H, J = 8,7 Hz), 7,24-7,2 (m, 2 H), 7,11-7,08 (dd, 1 H, J = 8,5, 1,92 Hz), 6,89-6,87 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 6,86-6,72 (m, 1 H), 6,56-6,51 (d, 1 H, J = 15,9 Hz), 6,33-6,25 (dd, 1 H, J = 15,9, 8,7 Hz), 5,94-5,91 (d, 1 H, J = 7,8 Hz), 5,83-5,78 (d, 1 H, J = 15,2 Hz), 5,175,12 (m, 1 H), 4,92-4,88 (dd, 1 H, J = 9,7, 3,6 Hz), 4,8-4,75 (m, 1 H), 3,92 (s, 3 H), 3,5-3,43 (dd, 1 H, J = 13,5, 8,73 Hz), 3,2-3,1 (m, 3 H), 2,7-2,35 (m, 3 H), 1,8-1,6 (m, 2 H), 1,4-1,19 (m, 1H), 1,2 (s, 3 H), 1,16-1,14 (d, 6 H), 0,82-0,81 (d, 3 H, J = 3,73 Hz), 0,80-79 (d, 3 H, J = 3,87 Hz).
Ejemplo 34 
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60 
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^{1}H RMN (300 M Hz, CDCl_{3}) 8,5 (s, 1 H), 7,76-7,74 (d, 2 H, J = 7,4 Hz), 7,58-7,56 (d, 2 H, J = 7,4 Hz), 7,5-7,1 (m, 8 H), 7,03-7,0 (d, 1 H, J = 8,2 Hz), 6,81-6,78 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 6,78-6,65 (m, 1 H), 6,37-6,34 (d, 1 H, J = 7,3 Hz), 5,84-5,81 (t, 1 H, J = 5,2 Hz), 5,69-5,64 (d, 1 H, J = 15,0 Hz), 5,18-5,15 (bd, 1 H, J = 9,0 Hz), 4,83-4,6 (m, 2 H), 4,45-4,43 (d, 2 H, J = 6,7 Hz), 4,24-4,19 (t, 1 H, J = 6,6 Hz), 3,99 (bs, 2 H), 3,81 (s, 3 H), 3,61 (s, 1 H), 3,46-3,39 (dd, 1 H, J = 13,4, 8,8 Hz), 3,2-2,8 (m, 5 H), 2,6-2,3 (m, 3 H), 1,8-1,3 (m, 3 H), 1,2 (s, 3 H), 1,14 (5, 3 H), 1,12-1,1 (d, 3 H, J = 6,8 Hz), 0,86-0,81 (t, 6 H, J = 7,3 Hz).
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Ejemplo 35 
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61 
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^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) d 9,5 (bs, 2 H), 7,6-7,57 (d, 2 H, J = 8,1 Hz), 7,24-7,18 (m, 5 H), 7,05-7,03 (d, 1 H, J = 8,3 Hz), 6,84-6,82 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 6,82-6,65 (m, 1 H), 6,02-6,0 (d, 1 H, J = 7,6 Hz), 5,72-5,67 (d, 1 H, J = 15,3 Hz), 5,19-5,16 (bd, 1 H, J = 10,5 Hz), 4,9-4,6 (m, 2 H), 3,85 (s, 3 H), 3,64 (s, 1 H), 3,55-3,4 (m, 3 H), 3,2-2,95 (m, 3 H), 2,90-2,88 (d, 1 H, 7,11 Hz), 2,6-2,3 (m, 3 H), 2,0-1,3 (m, 3 H), 1,2 (s, 3 H), 1,15 (s, 3 H), 1,13-1,11 (d, 3 H, J = 6,9 Hz), 0,90-0,84 (t, 6 H, J = 7,2 Hz).
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Esquema 2
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Esquema 2 (continuación)
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Esquema 2 (continuación)
64
Ejemplo 36
Mediante el Esquema 2
Al alqueno 17 (0,3 g, 0,50 mmol) en 9,0 mL de CH_{2}Cl_{2}/1,0 mL de MeOH a -78ºC se le añadió 2-picolino (0,07 mL, 0,074 mmol). Esta solución se sometió a 1,2 equivalentes de ozono, y el ozónido resultante se detuvo súbitamente con sulfuro de dimetilo (1,1 mL, 2,2 mmol). Se calentó la mezcla lentamente a temperatura ambiente y se agitó durante toda la noche. Se lavó la solución con agua (2 x 20 ml, se secó sobre Na_{2}SO_{4}, se filtró y se concentró al vacío para dar como resultado 0,251 g (87%) del aldehído 18: ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) d 9,64-9,63 (d, 1 H, J = 1,05 Hz), 7,25-7,2 (m, 2 H), 7,08-7,05 (d, 1 H, J = 8,2 Hz),6,86-6,83 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 6,83-6,7 (m, 1 H), 5,81-5,76 (d, 1 H, J = 15,1 Hz), 5,75-5,65 (bs, 1 H), 5,38-5,3 (m, 1 H), 4,85-4,81 (dd, 1 H, J = 10,2, 3,2 Hz), 4,804,7 (m, 1 H), 3,87 (s, 3 H), 3,46-3,39 (dd, 1 H, J = 13,5, 8,7 Hz), 3,2-3,0 (m, 3 H), 2,7-2,4 (m, 3 H), 1,8-1,6 (m, 2 H), 1,4-1,3 (m, 1 H), 1,23 (s, 3 H), 1,18-1,16 (d, 6 H), 0,94-0,92 (d, 3 H, J = 6,5 Hz), 0,88-0,86 (d, 3 H, J = 6,4 Hz).
Esquema 3
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Esquema 4
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Esquema 4 (continuación)
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Esquema 5
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Esquema 5 (continuación)
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Esquema 6
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Esquema 7
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72
Ejemplo 37
Mediante el Esquema 3
A una solución de la Criptoficina 53 (0,15 g, 0,23 mmol) en 3 mL de DME y 2,0 mL de H_{2}O, se le añadieron 5 gotas de H_{2}SO_{4} concentrado. Se agitó la mezcla durante toda la noche y se añadieron 5 gotas más de H_{2}SO_{4} y se agitó de manera continua durante otras 24 h. Se añadió lentamente NaHCO_{3} saturado hasta que disminuyó toda la reactividad y se extrajo la mezcla con CH_{2}Cl_{2}. Se lavó la capa orgánica con salmuera, se secó sobre Na_{2}SO_{4}, se filtró y se concentró. Se purificó el residuo resultante mediante cromatografía en columna (gel de sílice, MeOH/CH_{2}Cl_{2} al 2% para dar como resultado 0,13 g de dioles. A la mezcla de dioles en 4,0 mL de THF y 2,0 mL de H_{2}O se le añadió NalO_{4} (0,144 g, 0,675 mmol). Se agitó la mezcla resultante durante toda la noche a temperatura ambiente. Se concentró la mezcla al vacío y se añadieron 5 mL de H_{2}O y se extrajeron con CH_{2}Cl_{2}. Se secaron las capas orgánicas combinadas sobre Na_{2}SO_{4}, se filtraron y se concentraron al vacío para dar 0,10 g (77%) del aldehído 18.
Al cloruro de 4-hidroximetilbencil trifenilfosfonio protegido con TIPS (0,23 g, 0,4 mmol) en 3,0 mL de THF a -78ºC se le añadieron gota a gota 0,25 mL de una solución 1,6 M de n-butillitio. Se calentó la mezcla lentamente a 0ºC y se agitó durante 10 min más. Al aldehído 18 en 4,0 mL de THF y a -78ºC se le añadieron gota a gota 2,5 mL de la solución de iluro naranja 0,13 M. Se agitó la mezcla resultante a -78ºC durante 2 h y a temperatura ambiente durante 30 min. Se añadió NH_{4}Cl saturado (20 mL) junto con acetato de etilo (10 mL), se separaron las capas y la orgánica se lavó con agua (3 x 10 mL) y salmuera. Finalmente, tras secar esta sobre MgSO_{4}, se filtró la fase orgánica, se concentró al vacío y se purificó el residuo resultante usando la cromatografía en columna (gel de sílice EtOAc/hexanos al 70%) para dar 0,09 g (62%) del estireno deseado.
Ejemplo 38
73
A una solución de Criptoficina 53 (2,0 g, 2,99 mmol) en 30 mL de DME, se le añadió una solución de ácido perclórico acuoso 2 M (15 mL, 30 mmol), y se agitó la mezcla resultante durante 6 horas. Tras la neutralización cuidadosa con NaHCO_{3} saturado (50 mL) se extrajo la mezcla con CH_{2}Cl_{2} (4 x 100 mL) y se secaron las capas orgánicas combinadas sobre Na_{2}SO4, se filtraron y se concentraron al vacío. La purificación mediante cromatografía en columna (gel de sílice, MeOH/CH_{2}Cl_{2} al 5%) proporcionó los dioles 19 (1,5 g) con un rendimiento del 72% en forma de una mezcla anti/sin 3:1.
A una solución de los dioles (1,0 g, 1,46 mmol) en 20 mL de THF y 15 ml de agua, se le añadió NalO_{4} (1,9 g, 8,9 mmol) y se agitó la mezcla bajo nitrógeno durante toda la noche. Tras eliminar el volumen de THF bajo presión reducida, se diluyó el residuo con agua (100 mL) y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (4 x 50 mL). Se lavaron los extractos orgánicos combinados con salmuera (1 x 25 mL), se secaron sobre Na_{2}SO_{4}, se filtraron y se concentraron bajo vacío. Se eliminó el benzaldehído residual disolviendo el sólido en 100 mL de tolueno y eliminando de manera subsiguiente el tolueno a 40ºC en un evaporador rotatorio. Dos evaporaciones adicionales a partir de tolueno proporcionaron el aldehído 18 en forma de una espuma amarilla (0,828 g) con un rendimiento del 98%. El aldehído resultante se usó sin purificación adicional y se almacenó a -23ºC por razones de estabilidad: [\alpha]^{20}_{D} +23,0º (c 0,565, CHCl_{3}); ^{1}H RMN (300 M Hz, CDCl_{3}) \delta 9,64-9,63 (d, 1 H, J = 1,4 Hz), 7,28-7,26 (m, 1 H), 7,21-7,20 (d, 1 H, J = 1,9 Hz), 7,08-7,05 (dd, 1 H, J = 7,1, 1,7 Hz), 6,87-6,84 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 6,82-6,72 (m, 1 H), 5,80-5,75 (d, 1 H, J = 15,0 Hz), 5,54-5,51 (d, 1 H, J = 7,7 Hz), 5,40-5,33 (m, 1H), 4,85-4,81 (dd, 1 H, J = 9,7, 3,2 Hz), 4,78-4,71 (m, 1 H), 3,88 (s, 3 H), 3,46-3,39 (dd, 1 H, J = 13,5, 8,6 Hz), 3,15-3,03 (m, 3 H), 2,68-2,35 (m, 3 H), 1,82-1,63 (m, 2 H), 1,45-1,37 (m, 1 H), 1,24 (s, 3 H), 1,19-1,16 (d, 3 H, J = 7,1 Hz), 1,18 (s, 3 H), 0,94-0,92 (d, 3 H, J = 6,5 Hz), 0,89-0,87(d, 3 H, J = 6,5 Hz); ^{13}C C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 200,7, 177,8, 170,6, 170,1, 165,1, 153,9, 141,1, 130,7, 129,8, 128,1, 124,9, 122,3, 112,3, 73,4, 71,1, 56,0, 54,6, 49,9, 46,4, 42,7, 39,2, 36,1, 35,2, 24,7, 22,8, 22,7, 21,3, 10,7; IR (CHCl_{3}) 3422, 2964, 2936, 1755, 1730, 1718, 1678, 1529, 1504, 1487,1474, 1464, 1442, 1320, 1303, 1281, 1259, 1244, 1185, 1151, 1127, 1067 cm^{-1}; Anal. (C_{29}H_{39}ClN_{2}O_{6}): C, H, N.
Ejemplo 39
74
Al bromuro de 4-(triisopropilsiloximetil) bencil trifenilfosfonio (7,6 g, 12,2 mmol) en 100 mL de THF a -50ºC se le añadieron gota a gota 8,0 mL de una solución 1,5 M de n-butillitio (8,1 mL, 12,2 mmol). Se calentó la mezcla lentamente a temperatura ambiente y se agitó durante 30 min más. Al aldehído 18 (2,95 g, 5,1 mmol), en 100 mL de THF y a -78ºC se le añadió gota a gota la solución de iluro rojo mediante una aguja de doble embocadura. Se agitó la mezcla resultante a -78ºC durante 3 h y a temperatura ambiente durante 45 min. Se añadió NH_{4}Cl saturado (100 mL) junto con acetato de etilo (100 mL), se separaron las capas y se extrajo la capa acuosa con acetato de etilo (2 x 50 mL). Se lavaron las capas orgánicas combinadas con agua (3 x 40 mL) y salmuera, se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron al vacío. Se purificó el residuo amarillo resultante usando la cromatografía en columna (gel de sílice, EtOAc/hexanos al 10-20-50% para dar 3,6 g (84%) del estireno deseado en forma de un sólido blanco y en forma de una mezcla de los isómeros E:Z.
Se disolvió la mezcla de isómeros (7,3 g, 8,7 mmol) en 240 mL de benceno y se calentó a reflujo en presencia de 1,1'-azobis (ciclohexanocarbonitrilo) (VAZO) (0,32 g, 0,87 mmol) y tiofenol (3,7 mL, 4,0 mmol). Tras 5 h a reflujo, se concentró la solución y se purificó el residuo mediante cromatografía en columna (gel de sílice, EtOAc/hexanos al 5-50%) para dar 6,7 g (92%) del isómero E 20 en forma de un sólido blanco: [\alpha]^{20}_{D} + 31,9º (c 1,0, CHCl_{3}); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,3-7,22 (m, 5 H), 7,20-7,19 (d, 1 H, J = 1,95 Hz), 7,07-7,04 (dd, 1 H, J = 8,4, 2,0 Hz), 6,85-6,82 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 6,8-6,7 (m, 1 H), 6,4-6,38 (d, 1 H, J = 15,8 Hz), 6,02-5,94 (dd, 1 H, J = 15,8, 8,8 Hz), 5,77-5,72 (d, 1 H, J = 14,9 Hz), 5,56-5,54 (d, 1 H, J = 7,9 Hz), 5,1-4,7 (m, 5 H), 3,9 (s, 3 H), 3,45-3,37 (dd, 1 H, J = 13,5, 8,5 Hz), 3,2-3,0 (m, 3 H), 2,6-2,3 (m, 3 H), 1,7-1,5 (m, 2 H), 1,41,0 (m, 31 H), 0,75-0,71 (t, 6 H, J = 6,1 Hz); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 177,8, 170,5, 170,4, 165,2, 153,9, 142,1, 141,1, 135,2, 131,5, 130,8, 129,7, 129,6, 128,1, 125,9, 124,5, 122,4, 112,2, 77,0, 71,4, 64,7, 56,0, 54,4, 46,4, 42,7, 42,2, 39,4, 36,5, 35,3, 24,5, 22,8, 22,6, 22,5, 21,2, 17,9, 17,2, 11,9; IR (CHCl_{3}) 3423, 2962, 2945, 2867, 1746, 1712, 1681, 1652, 1528, 1503, 1485, 1473, 1464, 1303, 1259 cm^{-1}; Anal. (C_{46}H_{67}ClN_{2}O_{8}Si): C, H, N.
Ejemplo 40
75
Se añadió el ácido 3-cloroperoxibenzoico (0,27 g, 1,59 mmol) a una solución del estireno 20 a 0ºC (1,25 g, 1,49 mmol) en 20 mL de CH_{2}Cl_{2}. Se agitó la solución durante 1 h a 0ºC y durante toda la noche a temperatura ambiente. Se concentró la solución al vacío y se separaron los epóxidos resultantes mediante HPLC en fase reversa para dar como resultado 0,67 g del epóxido \beta 22 (57%) en forma de un sólido blanco: [\alpha]^{20}_{D} + 20,9º (c 0,765, CHCl_{3}); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,35-7,33 (d, 2 H, J = 7,8 Hz), 7,26-7,2 (m, 4 H), 7,05-7,02 (bd, 1 H, J = 8,2 Hz), 6,84-6,81 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 6,81-6,65 (m, 1 H), 5,8-5,65 (m, 2 H), 5,25-5,15 (m, 1 H), 4,9-4,7 (m, 4 H), 3,9 (s, 3 H), 3,7 (s, 1 H), 3,46-3,42 (dd, 1 H, J = 13,4, 8,8 Hz), 3,15-3,0 (m, 3 H), 2,93-2,9 (d, 1 H, J = 7,3 Hz), 2,6-2,4 (m, 2 H), 1,8-1,6 (m, 3 H), 1,4-1,0 (m, 31 H), 0,83-0,79 (t, 6 H, J = 5,3 Hz); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 177,7, 170,5, 170,4, 165,1, 153,9, 142,1, 141,6, 136,7, 135,1, 130,7, 129,8, 128,1, 125,9, 125,5, 124,6, 122,3, 112,2, 75,9, 71,0, 64,6, 63,0, 58,9, 56,0, 54,6, 46,3, 42,7, 40,5, 39,2, 36,8, 35,2, 24,2, 22,8, 22,7, 22,6, 18,0, 13,4, 11,9; IR (CHCl_{3}) 3424, 2962, 2945, 2867, 1751, 1712, 1682, 1528, 1503, 1485, 1473, 1464, cm^{-1}; Anal. (C_{46}H_{67}ClN_{2}O_{9}Si): C, H, N.
Ejemplo 41
76
Se añadió gota a gota el fluoruro de tetrabutilamonio (0,14 mL, 0,14 mmol), en forma de una solución 1,0 M en THF, a una solución a 0ºC del epóxido \beta 22 (0,1 g, 0,117 mmol) en 3,5 mL de THF. Se dejó calentar la solución a temperatura ambiente y se continuó la agitación durante otros 20 min, seguida por la adición de agua (10 mL) y acetato de etilo (20 mL). Se separaron las capas y se extrajo la acuosa con CH_{2}Cl_{2} (3 x 20 mL). Se secaron las capas orgánicas combinadas sobre Na_{2}SO_{4} anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío para dar como resultado el alcohol libre. La purificación mediante cromatografía en columna (gel de sílice, EtOAc-hexanos al 70-100%) dio como resultado 0,068 g (84%) del alcohol puro 23 en forma de un sólido blanco: [\alpha]^{20}_{D} + 26,2 0º (c 0,435, CHCl_{3}); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,39-7,36 (d, 2 H, J = 7,8 Hz), 7,26-7,23 (d, 3 H, J = 9,1 Hz), 7,18 (s, 1 H), 7,05-7,02 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 6,85-6,82 (d, 1 H, J = 8,2 Hz), 6,82-6,7 (m, 1 H), 5,72-5,67 (d, 1 H, J = 15,1 Hz), 5,55-5,52 (d, 1 H, J = 7,8 Hz), 5,22-5,17(m, 1 H), 4,85-4,7 (m, 4 H), 3,9 (s, 3 H), 3,7 (s, 1 H), 3,45-3,38 (dd, 1 H, J = 13,4, 9,3 Hz), 3,2-3,0 (m, 3 H), 2,92-2,89 (d, 1 H, J = 7,6 Hz), 2,65-2,4(m, 2 H), 1,8-1,6 (m, 4 H), 1,4-1,2 (m, 1 H), 1,22 (s, 3 H), 1,16 (s, 3 H), 1,16-1,13 (d, 3 H, J = 7,2 Hz), 0,86-0,82 (t, 6 H, J = 6,5 Hz); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 177,8, 171,0, 170,4, 165,5, 153,8, 141,5, 141,4, 135,7, 133,5, 130,6, 130,0, 128,0, 127,1, 125,6, 124,6, 122,2, 112,3, 77,2, 76,5, 76,0, 71,0, 64,2, 63,1, 58,8, 56,0, 54,7, 46,3, 42,7, 40,5, 39,3, 36,9, 35,1, 24,5, 22,7, 22,5, 22,1, 13,4; IR ( CHCl_{3}) 3422, 2992, 2963, 2936, 2874, 1751, 1713, 1682, 1651, 1504, 1486, 1303, 1259, 1186, 1165, 1151, 1067 cm^{-1}; FAB HRMS [M + H] cacld para (C_{37}H_{48}ClN_{2}O_{9}) 699,3048, encontrado 699,3054.
Ejemplo 42
77
A una solución del alcohol 23 a 0ºC (0,08 g, 0,114 mmol), N-(tert-butoxicarbonil) glicina (0,034 g, 0,194 mmol) y 4-dimetilamino piridina (DMAP) (0,04 g, 0,034 mmol) en 2,0 mL de CH_{2}Cl_{2} se le añadió 1,3-diciclohexilcarbodiimida (DCC) (0,040 g, 0,194 mmol). Se agitó la mezcla a 0ºC durante 10 min y a temperatura ambiente durante 45 min, se filtró y se concentró al vacío. Se purificó el residuo resultante usando cromatografía en columna (gel de sílice, EtOAc/hexanos al 70-80%) para dar 0,07 g (72%) del éster en forma de un sólido blanco: [\alpha]^{20}_{D} + 18,5º (c 0,65, CHCl_{3}); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,4-7,2 (m, 6 H), 7,11-7,08 (dd, 1 H, J = 8,4, 1,8 Hz), 6,9-6,87 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 6,86-6,7 (m, 1 H), 5,78-5,73 (d, 1 H, J = 15,2 Hz), 5,64-5,62 (d, 1 H, J = 7,4 Hz), 5,3-5,22 (m, 1 H), 5,22 (s, 2 H), 5,1-5,0 (bs, 1 H), 4,9-4,7(m, 2 H), 4,0-3,99 (d, 2 H, J = 5,4 Hz), 3,9 (s, 3 H), 3,73-3,72 (d, 1 H, J = 1,0 Hz), 3,5-3,43 (dd, 1 H, J = 13,4, 8,6 Hz), 3,2-3,0 (m, 3 H), 2,95-2,92 (d, 1 H, J = 6,4 Hz), 2,65-2,4 (m, 2 H), 1,8-1,6 (m, 3 H), 1,5 (s, 9 H), 1,45-1,3 (m, 1 H), 1,26 (s, 3 H), 1,2 (s, 3 H), 1,2-1,17 (d, 3 H, J = 8,7 Hz), 0,9-0,86 (t, 6 H, J = 6,3 Hz); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 177,7, 170,6, 170,3, 170,2, 165,1, 155,6, 153,8, 141,4, 137,1, 135,6, 130,6, 129,9, 128,6, 128,0, 125,7, 124,7, 122,2, 112,2, 79,9, 75,8, 70,9, 66,4, 63,1, 58,5, 56,0, 54,7, 48,9, 46,3, 42,7, 42,4, 40,5, 39,3, 36,8, 35,2, 28,2, 24,5, 22,8, 22,7, 22,6, 21,2, 13,5; Anal.(C_{44}H_{58}ClN_{3}O_{12}): C, H, N.
Ejemplo 43 
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78
Se añadió cloruro de trimetilsililo (0,09 mL, 0,75 mmol) a una solución de epóxido b 24 (0,16 g, 0,187 mmol) en 5,0 mL de CHCl_{3} a -60ºC. Tras 2 h de agitación a entre -60ºC y -40ºC se añadieron 0,09 mL más de TMSCl y se continuó la agitación durante 3 h. Se dejó calentar la solución hasta temperatura ambiente, se concentró y purificó mediante HPLC preparativa en fase reversa (55:45) de CH_{3}CN:H_{2}O para separar las dos clorohidrinas resultantes. Esta purificación dio como resultado 0,058 g (35%) de la clorohidrina 25 deseada:[\alpha]^{20}_{D} + 50,5º (c 1,075, CHCl_{3} ); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,42-7,2 (m, 6 H), 7,13-7,09 (dd, 1 H, J = 8,4, 1,8 Hz), 6,9-6,87 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 6,85-6,7 (m, 1 H), 5,9-5,8 (m, 2 H), 5,2 (s, 3 H), 5,15-5,05 (m, 1 H), 5,0-4,9 (m, 1 H), 4,8-4,72 (m, 1 H), 4,71-4,68 (d, 1 H, J = 9,7 Hz), 4,07-4,03 (d, 1 H, J = 9,3 Hz), 3,99-3,97 (d, 2 H, J = 5,5 Hz), 3,9 (s, 3 H), 3,44-3,37 (dd, 1 H, J = 13,6, 8,3 Hz), 3,23-3,14 (m, 2 H), 3,08-3,0 (dd, 1 H, J = 14,5, 8,0 Hz), 2,75-2,4 (m, 3 H), 2,0-1,7(m, 3 H), 1,5 (s, 10 H), 1,26 (s, 3 H), 1,21 (s, 3 H), 1,08-1,06 (d, 3 H, J = 7,0 Hz), 0,977-0,963 (d, 3 H, J = 4,0 Hz), 0,956-0,942 (d, 3 H, J = 4,1 Hz); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) 177,5, 170,5, 170,2, 170,1, 165,3, 153,9, 142,2, 139,0, 138,3, 136,1, 130,8, 129,9, 128,7, 128,2, 128,1, 124,5, 122,3, 112,2, 80,0, 76,1, 73,9, 71,1, 66,2, 61,7, 56,1, 54,6, 46,4, 42,7, 42,3, 39,6, 38,4, 36,3, 35,1, 28,2, 24,8, 23,0, 22,9, 22,7, 21,5, 8,6; IR (CHCl_{3}) 3428, 3009, 2966, 2935, 1750, 1714, 1683, 1504, 1486, 1369, 1259, 1193, 1162, 1127, 1067; FAB HRMS [M + H] cacld para (C_{44}H_{60}ClN_{3}O_{12}) 892,3554, encontrado 892,3565.
Ejemplo 44
79
Se añadió una solución de cloruro de hidrógeno 4 M en 1,4-dioxano (0,08 mL, 0,33 mmol) a una solución del glicinato 25 (0,058 g, 0,065 mmol) en 0,2 mL de CH_{2}Cl_{2}. Se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 3 h, se concentró al vacío y se mantuvo bajo vacío durante 3 días para eliminar el 1,4-dioxano proporcionando de esta manera la sal de clorhidrato 26 deseada con un rendimiento cuantitativo: [\alpha]^{20}_{D} + 26,2º (c 0,58, MeOH ); ^{1}H RMN (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,48-7,42 (q, 4 H, J = 11,2 Hz), 7,31-7,3 (d, 1 H, J = 2,0 Hz), 7,21-7,19 (dd, 1 H, J = 8,5, 2,0 Hz), 7,01-7,0 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 6,8-6,7 (m, 1 H), 6,0-5,95 (dd, 1 H, J = 15,2, 1,5 Hz), 5,3 (d, 2 H, J = 1,3 Hz), 5,16-5,1 (m, 1 H), 5,09-5,07 (dd, 1 H, J = 10,0, 3,6 Hz), 4,84-4,82 (d, 1 H, J = 9,8 Hz), 4,54-4,51 (dd, 1 H, J = 11,3, 3,7 Hz),4,05-4,03 (dd, 1 H, J = 9,5, 1,8 Hz), 3,9 (s, 2 H), 3,86 (s, 3 H), 3,5-3,47 (d, 1 H, J = 13,5 Hz), 3,22-3,18 (dd, 1 H, J = 14,5, 3,6 Hz), 3,14-3,11 (d, 1 H, J = 13,5 Hz), 2,8-2,77 (d, 1 H, J = 14,4 Hz), 2,78-2,75 (m, 2 H), 2,55-2,35 ( m, 2 H), 1,9-1,55 (m, 4 H), 1,4-1,3 (m, 1H), 1,24 (s, 3 H), 1,2 (s, 3 H), 1,04-1,03 (d, 3 H, J = 7,0 Hz), 1,02-1,0 (t, 6H, J = 7,2 Hz); ^{11}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 178,9, 173, 8, 171,9, 168,3, 155,3, 144,2, 141,8, 136,7, 132,3, 131,5, 129,75, 129,7, 129,4, 125,2, 123,3, 113,5, 77,2, 74,7, 72,6, 68,5, 63,5, 57,6, 56,7, 47,6, 44,1, 41,1, 40,4, 37,9, 36,5, 26,3, 23,6, 23,5, 22,2, 9,0; IR (KBr) 3412, 2961, 2935, 1752, 1722, 1669, 1504, 1473, 1279, 1259, 1207, 1151, 1126, 1065 cm^{-1}.
Ejemplo 45
80
A la clorohidrina 25 (0,14 g, 0,16 mmol), N-(tert-butoxicarbonil) glicina (0,041 g, 0,24 mmol) y 4 dimetilamino piridina (DMAP) (0,002 g, 0,016 mmol) en 0,7 ml de CH_{2}Cl_{2} se les añadió 1,3-diciclohexilcarbodiimida (DCC) (0,049 g, 0,24 mmol). Se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 1 h, se filtró usando acetato de etilo y se concentró al vacío. Se purificó el residuo resultante usando cromatografía en columna (gel de sílice, EtOAc/hexanos 50-60-70%) para dar 0,158 g (97%) del diglicinato 27 en forma de un sólido blanco: [\alpha]^{20}_{D} + 44,0º (c 1,25, CHCl_{3}); ^{1}H RMN (300 M Hz, CDCl_{3})) \delta 7,4-7,2 (m, 7 H), 7,13-7,10 (bd, 1 H, J = 9,8 Hz), 6,91-6,88 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 5,8-5,77 (d, 1 H, J = 15,3 Hz), 5,6-5,58 (m, 1 H), 5,49-5,46 (d, 1 H, J = 9,6 Hz), 5,19 (s, 2 H), 5,1-4,7 (m, 6 H), 3,98-3,97 (d, 2 H, J = 5,0 Hz), 3,93 (s, 3 H), 3,69-3,62 (dd, 1 H, J = 18,2, 4,0 Hz), 3,5-3,0 (m, 5 H), 2,7-2,35 (m, 3 H), 2,0-1,7 (m, 3 H), 1,49 (s, 9 H), 1,44 (s, 9 H), 1,28 (s, 3 H), 1,22 (s, 3 H), 1,1-1,08 (d, 3 H, J = 7,0 Hz), 1,06-1,04 (d, 3 H, J = 6,4 Hz), 1,0-0,98 (d, 3 H, J = 6,2 Hz); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 177,6, 170,4, 169,9, 168,5, 165,0, 155,2, 153,9, 141,6, 138,6, 137,3, 136,3, 130,8, 129,8, 128,2, 128,1, 124,6, 122,3, 112,2, 79,9, 74,7, 71,1, 66,2, 60,0, 56,0, 54,5, 46,5, 42,8, 42,4, 41,8, 39,5, 38,0, 36,5, 35,2, 28,2, 28,15, 24,8, 23,1, 22,8, 22,6, 21,4, 9,9; IR (CHCl_{3}) 3431, 2982, 2966, 2935, 2872, 1756, 1713, 1685, 1504, 1369, 1258, 1193, 1161; FAB HRMS [M - BOC + H] cacld para (C46H63Cl_{2}NO_{13}) 949,3769, encontrado 949,3777.
Ejemplo 46
81
Se añadió una solución de cloruro de hidrógeno 4 M en 1,4-dioxano (0,1 mL, 0,42 mmol) a una solución del diglicinato 27 (0,044 g, 0,042 mmol) en 0,2 mL de CH_{2}Cl_{2}. Se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 3 h, se concentró al vacío y se mantuvo bajo vacío durante 3 días para eliminar el 1,4-dioxano residual proporcionando de esta manera las sales de clorhidrato 28 deseadas con un rendimiento cuantitativo: [\alpha]^{20}_{D} + 33,1º (c 0,865, MeOH); ^{1}H RMN (500 MHz,CD_{3}OD) \delta 7,77-7,74 (d, 1 H), 7,46-7,41 (q, 4 H, J = 20,3, 8,4 Hz), 7,29-7,28 (d, 1 H, J = 2,1 Hz), 7,18-7,16 (dd, 1 H, J = 8,6, 2,1 Hz), 6,99-6,97 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 6,7-6,6 (m, 1 H), 5,95-5,92 (d, 1 H, J = 15,3 Hz), 5,54-5,52 (dd, 1 H, J = 9,5, 1,4 Hz), 5,5 (s, 1 H), 5,28 (s, 2 H), 5,21-5,19 (d, 1H, J = 9,4 Hz), 5,12-5,09 (dd, 1 H, J = 10,5, 3,1 Hz), 4,87-4,85 (d, 1 H, J = 12,4 Hz), 4,5-4,47 (dd, 1H, J = 11,3, 3,7 Hz), 3,9 (s, 2 H), 3,84 (s, 3 H), 3,82-3,79 (d, 1 H, J = 17,8 Hz), 3,48-3,45 (d, 1 H, J = 13,7 Hz), 3,35-3,3 (m, 1 H),3,19-3,15 (dd, 1 H, J = 14,5, 3,8 Hz), 3,11-3,09 (d, 1 H, J = 13,8 Hz), 2,77-2,6 (m, 3 H), 2,37-2,3 (m, 1 H), 1,95-1,75 (m, 3 H), 1,22 (s, 3 H), 1,17 (s, 3 H), 1,08-1,07 (d, 3 H, J = 7,0 Hz), 1,03-1,02 (d, 3 H, J = 6,4 Hz), 1,0-0,99 (d, 3 H, J = 6,2 Hz); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 178,8, 173,8, 171,9, 168,5, 168,2, 167,8, 155,4, 143,5, 139,3, 137,6, 132,2, 131,4, 129,7, 129,5, 129,4, 125,3, 123,3, 113,5, 77,9, 76,2, 72,4, 68,2, 60,8, 57,7, 56,7, 47,5, 44,2, 41,2, 40,5, 39,8, 37,9, 36,5, 26,3, 23,7, 23,4, 22,0, 9,9; IR (KBr) 3417, 3234, 2959, 2873, 2622, 1757, 1724, 1673, 1504, 1473, 1303, 1259, 1221, 1150, 1065 cm^{-1}.
Ejemplo 47 
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82
Se agitó una mezcla de ácido libre del fragmento C' (0,22 g, 1,02 mmol), DMAP (0,032 g, 0,26 mmol) y DCC (0,21 g, 1,02 mmol) durante 30 min a 0ºC en 6,5 mL de CH_{2}Cl_{2}. Se añadió el alcohol libre 29 (0,35 g, 0,51 mmol) en 6,0 mL de CH_{2}Cl_{2}. Se agitó la mezcla a 0ºC durante 10 min y a temperatura ambiente durante 24 h, y finalmente se calentó a reflujo durante 3 h y se enfrió hasta temperatura ambiente. Se concentró la mezcla de reacción al vacío y se filtró a través de Celite usando EtOAc. Se purificó el residuo resultante usando cromatografía en columna (gel de sílice, EtOAc/hexanos al 60-70%) para dar 0,38 g (85%) del éster anterior en forma de un sólido blanco: [\alpha]^{20}_{D} + 23,2º (c 1,0, CHCl_{3} ); H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,4-7,2 (m, 6 H), 7,12-7,08 (dd, 1 H, J = 8,4, 2,0 Hz), 6,9-6,87 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 6,87-6,75 (m, 1 H), 6,47-6,42 (d, 1 H, J = 15,8 Hz), 6,11-6,03 (dd, 1 H, J = 15,8, 8,8 Hz), 5,82-5,77 (d, 1 H, J = 14,9 Hz), 5,61-5,58 (d, 1 H, J = 7,8 Hz), 5,12 (s, 2 H), 5,12-4,75 (m, 4 H), 3,9 (s, 3 H), 3,49-3,42 (dd, 1 H, J = 13,4, 8,7 Hz), 3,29-3,27 (d, 1 H, J = 6,5 Hz), 3,2-3,1 (m, 3 H), 2,65-2,3 (m, 3 H), 1,8-1,6 (m, 3 H), 1,47 (s, 9 H), 1,45-1,3 (m, 1 H), 1,3-1,15 (m, 15 H), 0,79-0,75 (t, 6 H, J = 6,4 Hz); ^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 177,8, 170,4, 165,1, 153,9, 141,9, 136,7, 135,1, 131,1, 130,8, 129,7, 128,3, 128,2, 126,2, 124,6, 122,4, 112,2, 76,9, 71,3, 66,0, 56,0, 54,4, 48,2, 46,4, 43,7, 42,6, 42,2, 39,4, 36,4, 35,2, 28,3, 24,5, 22,8, 22,6, 21,2, 17,2; IR (CHCl_{3}) 3426, 2968, 2935, 2874, 2841, 1746, 1713, 1684, 1652, 1504, 1486, 1474, 1368, 1318, 1304, 1259, 1244, 1165, 1151, 1067 cm^{-1}; FAB HRMS [M - BOC + H] calcd para (C_{42}H_{57}ClN_{3}O_{9}) 782,3783, encontrado 782,3788.
Ejemplo 48 
\vskip1.000000\baselineskip
83
Se añadió ácido 3-cloroperoxibenzoico (0,092 g, 0,54 mmol) a una solución del estireno de partida (0,45 g, 0,51 mmol) a 0ºC en 9,0 mL de CH_{2}Cl_{2}. Se agitó la solución durante 1 h a 0ºC y durante toda la noche a temperatura ambiente. Se concentró esta al vacío y se disolvieron los epóxidos resultantes en 10 mL de CHCl_{3}, y se enfriaron a -60ºC. Se añadió TMSCl preparado recientemente (0,25 mL, 1,95 mmol) a la solución a -60ºC y se agitó la mezcla durante 1 h. Se añadió más TMSCl (0,5 mL, 3,9 mmol) y se continuó agitando entre -60ºC y -40ºC durante 2 h más. Se dejó calentar la solución hasta temperatura ambiente y se añadió más TMSCl (0,25 mL, 1,95 mmol). Tras 30 min de agitación a temperatura ambiente se concentró y purificó la solución mediante HPLC preparativa para separar las clorohidrinas resultantes. Esta purificación proporcionó 0,1 g (22%) de la clorohidrina deseada: [\alpha]^{20}_{D} + 47,9º (c 0,75, CHCl_{3}); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,5-7,2 (m, 6 H), 7,13-7,10 (dd, 1 H, J = 8,4, 1,9 Hz), 6,91-6,88 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 6,87-6,75 (m, 1 H), 5,85-5,8 (d, 1 H, J = 14,9 Hz), 5,75-5,6 (m, 1 H), 5,22-5,1 (m, 3 H), 5,0-4,9 (m, 2 H), 4,8-4,72 (m, 1 H), 4,71-4,68 (d, 1 H, J = 9,6 Hz), 4,07-4,03 (d, 1 H, J = 9,5 Hz), 3,9 (s, 3 H), 3,45-3,38 (dd, 1 H, J = 13,4, 8,5 Hz), 3,31-3,26 (d, 1 H, J = 6,4 Hz), 3,25-3,0 (m, 4 H), 2,8-2,65 (bd, 1 H), 2,6-2,35 (m, 2H), 1,9-1,7 (m, 3 H), 1,47 (s, 10 H), 1,27 (s, 3 H), 1,25 (s, 6 H), 1,22 (s, 3 H), 1,09-1,07 (d, 3 H, J = 7,0 Hz), 0,98-0,96 (m, 6 H); ^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 177,5, 170,5, 165,2, 153,9, 142,5, 137,0, 130,8, 129,8, 128,2, 124,5, 122,4, 112,2, 79,1, 76,1, 73,9, 71,1, 65,6, 61,7, 56,1, 54,5, 48,2, 46,4, 43,7, 42,7, 39,6, 38,4, 36,3, 35,2, 28,3, 24,8, 23,0, 22,9, 22,8, 22,7, 21,5, 8,6; IR (CHCl_{3}) 3426, 2967, 2934, 2873, 2841, 1715, 1684, 1605, 1504, 1485, 1474, 1442, 1368, 1305, 1258, 1151 cm^{-1}; FAB HRMS [M - BOC + H] calcd para (C_{42}H_{58}ClN_{3}O_{10}) 834,3499, encontrado 834,3487.
Ejemplo 49
84
Se añadió una solución 4 M de cloruro de hidrógeno en 1,4-dioxano (0,11 mL, 0,43 mmol) a una solución de la clorohidrina (0,08 g, 0,086 mmol) en 0,35 mL de CH_{2}Cl_{2}. Se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 3 h, se concentró al vacío y se mantuvo bajo vacío durante 3 días para eliminar el 1,4-dioxano proporcionando de esta manera la sal de clorhidrato deseada (mostrada más arriba) (0,075) con un rendimiento cuantitativo:
[\alpha]^{20}_{D} + 28,0º (c 0,5, CH_{3}OH ); ^{1}H RMN (300 MHz, CD_{3}OH) 6 8,52-8,49 (d, 1 H, J = 7,5 Hz), 7,84-7,81 (d, 2 H, J = 9,6 Hz), 7,49-7,39 (q, 4 H, J = 8,3 Hz), 7,32-7,31 (d, 1 H, J = 1,9 Hz), 7,22-7,19 (dd, 1 H, J = 8,4, 2,1 Hz), 7,02-7,0 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 6,8-6,7 (m, 1 H), 6,0-5,9 (dd, 1 H, J = 15,4, 1,0 Hz), 5,22 (s, 2 H), 5,2-5,0 (m, 2 H), 4,85-4,81 (d, 1 H, J = 9,6 Hz), 4,6-4,5 (m, 1 H), 4,06-4,03 (dd, 1 H, J = 9,6, 1,5 Hz), 3,9 (s, 3 H), 3,54-3,46 (dd, 1 H, J = 13,5, 9,7 Hz), 3,25-3,11 (m, 2 H), 3,11 (s, 2 H), 2,8-2,7 (m, 2 H), 2,6-2,3 (m, 2 H), 1,9-1,5 (m, 3 H), 1,3 (s, 7 H), 1,25 (s, 3 H), 1,2 (s, 3 H), 1,06-1,03 (d, 3 H, J = 6,9 Hz), 1,02-1,01 (d, 3 H, J = 3,2 Hz), 1,0-0,99 (d, 3 H, J = 3,4 Hz); ^{13}C RMN (63 MHz, CD_{3}OH) \delta 178,9, 176,5, 173,8, 171,8, 168,3, 155,3, 144,2, 141,6, 137,4, 132,3, 131,5, 129,8, 129,4, 129,3, 125,2, 123,3, 113,5, 77,2, 74,7, 72,6, 67,8, 63,5, 57,6, 56,7, 47,7, 47,6, 44,1, 42,3, 41,1, 40,4, 37,9, 36,5, 26,2, 23,7, 23,4, 22,2, 9,0; IR (CHCl_{3}) 3421, 2964, 2935, 2873, 2841, 1717, 1676, 1528, 1504, 1477, 1464, 1405, 1282, 1259, 1185, 1152, 1067 cm^{-1}; FAB HRMS [M -Cl] calcd para (C_{42}H_{58}Cl_{3}N_{3}O_{10}) 834,3499, encontrado 834,3504.
Ejemplo 50
85
Se preparó el estireno (se muestra más arriba) (0,67 g) a partir del aldehído 18 (1,0 g, 1,73 mmol) y cloruro de 3-metilbencil trifenilfosfonio (0,886 g, 2,2 mmol) con un rendimiento del 58% de acuerdo con el procedimiento descrito más arriba para el estireno 20: [\alpha]^{20}_{D} + 33,1º (c 1,0, CH_{3}OH ); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,24-7,0 (m, 7 H), 6,85-6,82 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 6,82-6,7(m, 1 H), 6,39-6,34 (d, 1 H, J = 15,8 Hz), 6,03-5,95 (dd, 1 H, J = 15,8, 8,7 Hz), 5,78-5,73 (d, 1 H, J = 15,2 Hz), 5,67-5,64 (d, 1 H, J = 7,8 Hz), 5,1-5,0 (m, 1 H), 4,87-4,83 (dd, 1 H, J = 10,2, 3,5 Hz), 4,8-4,7 (m, 1 H), 3,9 (s, 3 H), 3,45-3,38 (dd, 1 H, J = 13,4, 8,6 Hz), 3,2-3,0 (m, 3 H), 2,6-2,3 (m, 3 H), 2,32 (s, 3 H), 1,75-1,25 (m, 3 H), 1,22 (s, 3 H), 1,15 (s, 3 H), 1,13-1,11 (d, 3 H, J = 6,8 Hz), 0,75-0,72 (t, 6 H, J = 5,7 Hz); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 177,9, 170,5, 170,3, 165,1, 154,0, 142,1, 138,0, 136,6, 135,6, 131,8, 130,8, 129,9, 129,6, 128,4, 128,22, 128,17, 126,7, 124,5, 123,3, 122,5, 112,3, 71,4, 56,1, 54,3, 46,4, 42,7, 42,2, 39,4, 36,5, 35,3, 24,5, 22,8, 22,6, 22,56, 21,2, 21,1, 17,2; IR (CHCl_{3}) 3424, 3021, 3017, 2965, 1747, 1711, 1680, 1652, 1528, 1503, 1485, 1259, 1151, 1067 cm^{-1}.
Ejemplo 51
86
Se añadió ácido 3-cloroperoxibenzoico (0,19 g, 1,1 mmol) al estireno (se muestra más arriba) (0,667 g, 1,0 mmol) en 5,0 mL de CH_{2}Cl_{2}. Se agitó la solución resultante durante toda la noche, se concentró al vacío para dar los epóxidos \beta y \alpha en una relación 1,8:1, a favor del \beta. La separación de los dos epóxidos mediante HPLC en fase reversa (70:30) de CH_{3}CN:H_{2}O, proporcionó 0,20 g del epóxido \beta principal en forma de un sólido blanco: ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) 6 7,3-7,0 (m, 7 H), 6,9-6,87 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 6,87-6,75 (m, 1 H), 5,79-5,74 (d, 1 H, J = 14,8 Hz), 5,54-5,51 (d, 1 H, J = 7,8 Hz), 5,28-5,22 (m, 1 H), 4,89-4,85 (dd, 1 H, J = 10,4, 3,5 Hz), 4,82-4,75 (m, 1 H), 3,9 (s, 3 H), 3,69-3,68 (d, 1 H, J = 1,6 Hz), 3,51-3,44 (dd, 1 H, J = 13,4, 8,6 Hz), 3,2-3,1 (m, 2 H), 2,98-2,95 (dd, 1 H, J = 7,6, 1,6 Hz), 2,65-2,32 (m, 3 H), 2,32 (s, 3 H), 1,85-1,6 (m, 3 H), 1,4-1,25 (s, 3 H), 1,27 (s, 3 H), 1,21 (s, 3 H), 1,21-1,18 (d, 3 H, J = 7,5 Hz), 0,90-0,86 (t, 6 H, J = 6,13 Hz).
Ejemplo 52
87
A una solución del epóxido \beta (se muestra más arriba) (0,1 g, 0,147 mmol) en 5,0 mL de CHCl_{3}, a -60ºC, se le añadió clorotrimetilsilano (0,093 mL, 0,74 mmol). Se agitó la solución a -60ºC durante 30 min a temperatura ambiente durante 1,5 h antes de concentrarse bajo vacío. El residuo resultante, que contenía una mezcla 50:50 de las clorohidrinas sin y anti, se purificó mediante HPLC en fase reversa para dar como resultado 0,028 g (27%) del isómero trans deseado: ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) 6 7,28-7,2 (m, 5 H), 7,13-7,1 (dd, 1 H, J = 8,3, 1,9 Hz), 6,91-6,88 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 6,88-6,78 (m, 1 H), 5,86-5,81 (d, 1 H, J = 15,0 Hz), 5,73-5,71 (d, 1 H, J = 7,8 Hz), 5,24-5,17 (t, 1 H, J = 9,4 Hz), 5,0-4,96 (dd, 1 H, J = 9,6, 2,9 Hz), 4,81-4,74 (m, 1 H), 4,67-4,64 (d, 1 H, J = 9,7 Hz), 4,06-4,03 (dd, 1 H, J = 9,6, 1,1 Hz), 3,92 (s, 3 H), 3,47-3,39 (dd, 1 H, J = 13,2, 8,3 Hz), 3,42-3,0 (m, 3 H), 2,8-2,4 (m, 2 H), 2,4 (s, 3 H), 1,9-1,4 (m, 4 H), 1,28 (s, 3 H), 1,22 (s, 3 H), 1,09-1,07 (d, 3 H, J = 7,0 Hz), 0,98-0,96 (d, 6 H, J = 6,4 Hz).
Ejemplo 53
88
Se preparó estireno (se muestra más arriba) (0,095 g) a partir del aldehído 18 (0,2 g, 0,345 mmol) y cloruro de 3,4-dimetilbencil trifenilfosfonio (0,26 g, 0,62 mmol) con un rendimiento del 63% de acuerdo con el procedimiento descrito más arriba para el estireno 20: [\alpha]^{20}_{D} + 27,8º (c 0,576, CHCl_{3} ); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,22-7,18 (d, 1 H, J = 1,6 Hz), 7,12-7,02 (m, 5 H), 6,87-6,81 (d, 1 H, J = 8,3 Hz), 6,80-6,71(m, 1 H), 6,40-6,30 (d, 1 H, J = 15,8 Hz), 6,00-5,88 (dd, 1 H, J = 15,8, 8,8 Hz), 5,80-5,70 (d, 1 H, J = 15,1 Hz), 5,55-5,45 (d, 1 H, J = 7,7 Hz), 5,10-4,97 (m, 1 H), 4,90-4,80 (dd, 1 H, J = 9,4, 2,8 Hz), 4,80-4,70 (m, 1 H), 3,88 (s, 3 H), 3,50-3,35 (dd, 1 H, J = 13,3, 4,8 Hz), 3,20-3,00 (m, 3 H), 2,60-2,48 (m, 2 H), 2,45-2,30 (m, 1 H), 2,23 (s, 3 H), 2,24 (s, 3 H), 1,80-1,55 (m, 2 H), 1,40-1,30 (m, 1 H), 1,22 (s, 3 H), 1,16 (s, 3 H), 1,14-1,10 (d, 3 H, J = 6,8 Hz), 0,80-0,73 (m, 6 H); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 177,9, 170,5, 170,3, 165,1, 154,0, 142,2, 136,5, 135,9, 134,3, 131,6, 130,8, 129,7, 129,5, 128,8, 128,1, 127,2, 124,4, 123,6, 122,4, 112,2, 71,4, 56,0, 54,2, 46,4, 42,6, 42,1, 39,4, 36,4, 35,2, 24,5, 22,7, 22,6, 22,5, 21,1, 19,6, 19,3, 17,2; IR (CHCl_{3}) 3424, 2965, 2935, 1746, 1711, 1681, 1652, 1527, 1503, 1485, 1259, 1187, 1164, 1151, 1067, 970, 727 cm^{-1}; Anal. (C_{38}H_{49}ClN_{2}O_{7}) C, H, N.
Ejemplo 54
89
Se preparó este epóxido \beta (0,06 g) a partir del estireno (se muestra más arriba) (0,3 g, 0,44 mmol) usando ácido 3-cloroperoxibenzoico (0,081 g, 0,47 mmol) con un rendimiento del 20% usando el procedimiento descrito más arriba: [\alpha]^{20}_{D} + 20,0º (c 1,43, CHCl_{3} ); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,26-6,96 (m, 6 H), 6,98 (s, 1 H), 6,84-6,82 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 6,79-6,65 (m, 1 H), 5,73-5,69 (d, 1 H, J = 11,9 Hz), 5,68-5,67 (d, 1 H, J = 4,6 Hz), 5,29-5,15 (m, 1 H), 4,83-4,76 (dd, 1 H, J = 9,7, 2,8 Hz), 4,75-4,58 (m, 1 H), 3,86 (s, 3 H), 3,61-3,60 (d, 1 H, J = 1,6 Hz), 3,46-3,38 (dd, 1 H, J = 13,4, 8,8 Hz), 3,14-2,97 (m, 3 H), 2,92-2,89 (dd, 1 H, J = 7,7, 1,6 Hz), 2,59-2,35 (m, 2 H), 2,25 (s, 6 H), 1,78-1,58 (m, 3 H), 1,28-1,09 (m, 1 H), 1,21 (s, 3 H), 1,15 (s, 3 H), 1,15-1,12 (d, 3 H, J = 7,8 Hz), 0,85-0,77 (m, 6 H); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 177,8, 170,4, 170,3, 164,9, 154,0, 141,7, 137,0, 136,9, 134,0, 130,8, 129,9, 129,5 128,1, 126,7, 124,6, 123,2, 122,4, 122,3, 75,9, 71,04, 62,8, 59,1, 56,1, 54,3, 46,4, 42,7, 40,7, 39,2, 36,8, 35,2, 24,4, 22,8, 22,6, 21,0, 19,7, 19,4, 13,6; IR (KBr) 3419, 2962, 1752, 1721, 1681, 1654, 1534, 1504, 1473, 1442, 1302, 1282, 1259, 1192, 1126, 1066 cm^{-1} Anal. (C_{38}H_{49}ClN_{2}O_{8}) C, H, N.
Ejemplo 55
90
A una solución del estireno (se muestra más arriba) (0,492 g, 0,72 mmol) en 2,4 mL de CH_{2}Cl_{2} a 0º, se le añadió ácido 3-cloroperoxibenzoico (0,137 g, 0,79 mmol) y tolueno (1,2 mL) y se continuó agitando a 0ºC durante 30 minutos. Se retiró el baño de hielo y se dejó agitar la reacción a temperatura ambiente durante 24 horas. Tras diluir con 10 mL de CH_{2}Cl_{2}, se lavó la solución con Na_{2}SO_{3} (1 x 10 mL), H_{2}O (1 x 10 mL), NaHCO_{3} al 10% (1 x 10 mL) y se secó sobre Na_{2}SO_{4}. La concentración proporcionó una mezcla de epóxidos crudos b/a en una relación 2:1.
Se disolvieron los epóxidos crudos (0,445 g, 0,638 mmol) en 10 mL de CHCl_{3} seco, se enfriaron a -60ºC y se trataron con cloruro de trimetilsililo (0,2 mL, 1,5 mmol). Se continuó la agitación durante 90 minutos y se concentró la solución al vacío. Se purificaron las clorohidrinas crudas mediante HPLC en fase reversa (CH_{3}CN/H_{2}O para dar el producto (se muestra más arriba) (0,115 g) con un rendimiento del 21% en forma de un sólido blanco: [\alpha]^{20}_{D}-45,9º (c 0,59,CHCl_{3} ); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) d 7,26-7,01 (m, 5 H), 6,85-6,82 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 6,80-6,71 (m, 1 H), 5,71-5,66 (d, 1 H, J = 15,1 Hz), 5,50-5,47 (d, 1 H, J = 7,6 Hz), 5,13-5,08 (t, 1 H, J = 8,8 Hz), 4,89-4,84 (m, 2 H), 4,814,71 (m, 1 H), 4,09-4,06 (d, 1 H, J = 9,4 Hz), 3,87 (s, 3 H), 3,44-3,37 (dd, 1 H, J = 13,4, 8,4 Hz), 3,16-3,06 (m, 3 H), 2,60-2,54 (m, 2 H), 2,26 (s, 6 H), 2,26-2,14 (m, 1 H), 1,89-1,81 (m, 1 H), 1,70-1,62 (m, 2 H), 1,58-1,46 (m, 2H) 1,23 (s, 3 H), 1,17 (s, 3 H), 0,97-0,95 (d, 3 H, J = 6,6 Hz), 0,93-0,90 (m, 6 H); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 177,7, 170,5, 170,1, 165,2, 153,9, 142,3, 137,7, 137,3, 135,1, 130,7, 130,2, 129,8, 128,5, 128,1, 124,6, 124,4, 122,3, 112,2, 75,9, 74,2, 71,2, 68,8, 56,0, 54,4, 46,4, 42,7, 39,6, 38,4, 36,2, 35,2, 24,8, 22,9, 22,8, 22,7, 21,7, 19,8, 19,5, 8,6; IR (KBr) 3421, 2960, 1756, 1721, 1675, 1504, 1258, 1195, 1151, 1126, 1066 cm^{-1}; Anal. (C_{38}H_{50}Cl_{2}N_{2}O_{8}) C, H, N.
Ejemplo 56
91
Se preparó el estireno (se muestra más arriba) (0,21 g) a partir del aldehído 18 (0,5 g, 0,87 mmol) y cloruro de 4-metoxibencil trifenilfosfonio (0,47 g, 1,12 mmol) con un rendimiento del 36% de acuerdo con el procedimiento descrito más arriba para el estireno 20: [\alpha]^{20}_{D} + 31,6º (c 1,03, CHCl_{3}); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,26-7,23 (d, 3 H, J = 8,4 Hz), 7,20-7,19 (d, 1 H, J = 1,8 Hz), 7,07-7,03 (dd, 1H, J = 8,4, 1,9 Hz), 6,84-6,81 (d, 3 H, J = 8,5 Hz), 6,80-6,7 (m, 1 H), 6,36-6,31 (d, 1 H, J = 15,8 Hz), 5,89-5,81 (dd, 1 H, J = 15,8, 8,8 Hz), 5,78-5,73 (d, 1 H, J = 13,7 Hz), 5,68-5,66 (d, 1 H, J = 7,9 Hz), 5,05-4,99 (ddd, 1 H, J = 10,6, 6,6, 1,6 Hz), 4,87-4,82 (dd, 1 H, J = 9,7, 3,1 Hz), 4,78-4,7 (m, 1 H), 3,86 (s, 3 H), 3,79 (s, 3 H), 3,45-3,37 (dd, 1 H, J = 13,4, 8,6 Hz), 3,15-3,0 (m, 3 H),2,6-2,25 (m, 3 H), 1,7-1,3 (m, 3 H), 1,22 (s, 3 H), 1,15 (s, 3 H), 1,12-1,1 (d, 3 H, J = 6,8 Hz), 0,76-0,75 (d, 3 H, J = 2,9 Hz), 0,74-0,73 (d, 3 H, J = 2,8 Hz); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 177,8, 170,5, 170,4, 165,1, 159,1, 153,9, 142,1, 135,8, 131,0, 130,8, 129,7, 129,5, 128,2, 127,9, 127,2, 124,5, 122,4, 113,9, 112,3, 77,1, 71,4, 56,0, 55,2, 54,4, 46,4, 42,7, 42,1, 39,4, 36,4, 35,3, 24,5, 22,8, 22,6, 21,2, 17,3; IR (CHCl_{3}) 3422, 3003, 2964, 2936, 2873, 2840, 1746, 1712, 1681, 1651, 1607, 1527, 1512, 1504, 1485, 1465, 1301, 1251 cm^{-1}; Anal.(C_{37}H_{47}ClN_{2}O_{8}) C, H, N.
Ejemplo 57
92
Se añadieron al estireno (se muestra más arriba) (0,3 g, 0,44 mmol) 19 mL de acetona, 9 mL de H_{2}O, 9 mL de CH_{2}Cl_{2} y NaHCO_{3} sólido (1,2 g, 14,5 mmol) y se enfrió la mezcla a 0ºC. Se preparó una solución de oxona (1,08 g, 1,8 mmol) en 9 mL de H_{2}O y se añadió (2 mL) a la mezcla de estireno fría. Tras 30 min de agitación vigorosa a 0ºC se añadieron 2 mL más de solución de Oxona y de nuevo se añadieron otros 2 mL, tras otros 30 min, para un total de 6 mL de solución de oxona. Se monitorizó el progreso de la reacción mediante HPLC en fase reversa y se encontró que se completó tras 2,5 h de agitación. Mientras todavía a 0ºC, la reacción se detuvo súbitamente con NaHCO_{3} saturado acuoso (50 mL) y se añadieron también 50 mL más de CH_{2}Cl_{2}. Se separaron las capas y se lavó la capa orgánica con Na_{2}SO_{3} acuoso al 10% (50 mL) seguido por NaHCO_{3} saturado acuoso (50 mL), a continuación salmuera y finalmente se secó sobre Na_{2}SO_{4}, se filtró y se concentró al vacío. Se separaron la mezcla de los epóxidos b y a mediante HPLC en fase reversa (45:55) de CH_{3}CN:H_{2}O para proporcionar 0,12 g del epóxido b en forma de un sólido blanco con un rendimiento del 39%: [\alpha]^{20}_{D} + 25,8º (c 0,66, CHCl_{3}); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,26-7,15 (m, 4 H), 7,05-7,03 (d, 1 H, J = 8,6 Hz),6,9-6,87 (d, 2 H, J = 8,6 Hz), 6,85-6,82 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 6,82-6,7 (m, 1 H), 5,74-5,69 (d, 1 H,
J = 15,1 Hz), 5,54-5,52 (d, 1 H, J = 7,8 Hz),5,22-5,16 (m, 1 H),4,84-4,7 (m, 2 H), 3,87 (s, 3 H), 3,81 (s, 3 H), 3,63 (s, 1 H), 3,46-3,38 (dd, 1 H, J = 13,5, 8,8 Hz), 3,2-3,0 (m, 3 H), 2,91-2,89 (d, 1 H, J = 7,4 Hz), 2,6-2,38 (m, 2 H), 1,8-1,6 (m, 3 H), 1,4-1,23 (m, 1 H), 1,22 (s, 3 H), 1,15 (s, 3 H), 1,15-1,12 (d, 3 H, J = 8,9 Hz), 0,84-0,80 (t, 6 H, J = 6,0 Hz); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 177,7, 170,5, 170,4, 165,1, 159,8, 153,9, 141,6, 136,8, 130,7, 129,7, 128,6, 128,1, 126,9, 124,6, 122,3, 114,1, 112,2, 75,9, 71,0, 62,8, 58,9, 56,0, 55,2, 54,6, 46,3, 42,7, 40,6, 39,2, 36,8, 35,2, 24,4, 22,8, 22,7, 22,6, 21,1, 13,5; IR (CHCl_{3}) 3423, 3009, 2964, 2936, 2874, 2840, 1751, 1713, 1681, 1653, 1614, 1517, 1504, 1486, 1464, 1442, 1303, 1281, 1257, 1183, 1173, 1152 cm^{-1}; Anal. (C_{37}H_{47}ClN_{2}O_{9}) C, H, N.
Ejemplo 58
93
Se preparó estireno (se muestra más arriba) (0,649 g) a partir del aldehído 18 (0,911 g, 1,57 mmol) y cloruro de 4-(tert-butildimetilsiloxi) bencil trifenilfosfonio (1,7 g, 3,27 mmol) con un rendimiento del 53% de acuerdo con el procedimiento descrito más arriba para el estireno 20: [\alpha]^{20}_{D} + 30,83º (c 0,52, CHCl_{3} ); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,25 (s, 1 H), 7,26-7,20 (d, 2 H, J = 8,5 Hz), 7,12 - 7,06 (dd, 1 H, J = 8,3, 1,6 Hz), 6,92-6,86 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 6,84-6,78 (d, 2 H, J = 8,5 Hz), 6,44-6,33 (d, 1 H, J = 15,9 Hz), 5,95-5,85 (dd, 1 H, J = 15,8, 8,8 Hz), 5,85-5,77 (d, 1 H, J = 15,5 Hz), 5,68-5,55 (bd, 1 H, J = 7,9 Hz), 5,15-5,00 (m, 1 H), 4,95-4,80 (dd, 1 H, J = 10,0, 3,0 Hz), 4,85-4,75 (m, 1 H), 3,91 (s, 3 H), 3,53-3,43 (dd, 1 H, J = 13,4, 8,6 Hz), 3,23-3,08 (m, 3 H), 2,65-2,50 (m, 2 H), 2,50-2,35 (m, 3 H), 1,75-1,60 (m, 2 H), 1,45-1,36 (m, 1 H), 1,27 (s, 3 H), 1,20 (s, 3 H), 1,16-1,13 (d, 3 H, J = 6,8 Hz), 1,01 (s, 9 H), 0,85-0,74 (m, 6 H), 0,22 (s, 6 H) ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 177,8, 170,5, 170,4, 165,1, 155,2, 153,9, 142,1, 131,1, 130,8, 130,1, 129,7, 128,2, 128,1, 127,1, 124,5, 122,4, 120,2, 112,2, 71,4, 56,0, 54,4, 46,4, 42,7, 42,2, 39,4, 36,5, 35,3, 25,6, 24,5, 22,8, 22,7, 21,2, 18,1, 17,3, -4,5; IR (CHCl_{3}) 3422, 3030, 3008, 2961, 2932, 2899, 2860, 1745, 1712, 1681, 1604, 1527, 1509, 1485, 1442, 1370, 1339, 1303, 1258, 1169, 1151, 1067, 1007, 970, 912, 841, 822, 792 cm^{-1}; Anal. (C_{42}H_{59}ClN_{2}O_{8}Si) C, H, N.
Ejemplo 59 
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94 
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A una solución a -70ºC del fenol protegido con sililo (0,084 g, 0,107 mmol), en 4 mL de THF seco, se le añadió una solución de THF 1,0 M de fluoruro de tetrabutilamonio (TBAF) (0,11 mL, 0, 11 mmol). Se agitó la solución de color amarillo claro a -70ºC durante 30 minutos, a continuación se detuvo súbitamente con 2 mL de NH_{4}Cl saturado y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3 x 25 mL). Se secaron los extractos orgánicos combinados sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron al vacío. La purificación del producto crudo mediante PLC radial (gel de sílice, EtOAc/hexanos al 50-100%) proporcionó el alcohol deseado (0,067 g) con un rendimiento del 93% en forma de un sólido blanco: [\alpha]^{20}_{D} + 30,83º (c 0,52, CHCl_{3} ); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,40-7,32 (m, 1 H), 7,28-7,20 (m, 3 H), 7,13-7,05 (dd, 1 H, J = 8,3, 1,6 Hz), 6,95-6,75 (m, 5 H), 6,57 (s, 1 H), 6,42-6,33 (d, 1 H, J = 15,9 Hz), 5,93-5,83 (dd, 1 H, J = 15,8, 8,8 Hz), 5,83-5,78 (d, 1 H, J = 15,5 Hz), 5,75-5,73 (bd, 1 H, J = 7,9 Hz), 5,15-5,00 (m, 1 H), 4,93-4,85 (dd, 1 H, J = 10,0, 3,0 Hz), 4,85-4,75 (m, 1 H), 3,90 (s, 3 H), 3,54-3,40 (dd, 1 H, J = 13,4, 8,6 Hz), 3,25-3,02 (m, 3 H), 2,65-2,35 (m, 3 H), 1,80-1,60 (m, 2 H), 1,45-1,36 (m, 1 H), 1,27 (s, 3 H), 1,20 (s, 3 H), 1,17-1,12 (d, 3 H, J = 6,8 Hz), 0,86-0,74 (d, 6 H, J = 5,0 Hz); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 177,9, 170,7, 170,6, 156,0, 154,0, 142,6, 137,1, 131,3, 130,8, 129,5, 128,9, 128,1, 127,4, 124,3, 122,5, 115,6, 112,3, 77,2, 71,5, 56,1, 54,5, 46,5, 42,7, 42,1, 39,4, 36,5, 35,3, 24,6, 22,8, 22,7, 21,2, 17,3; IR (CHCl_{3}) 3597, 3421,3319, 2964, 2935, 2874, 2841, 1746, 1711, 1680, 1652, 1610, 1513, 1504, 1485, 1464, 1259, 1170, 1152, 1067 cm^{-1}; Anal. (C_{36}H_{46}ClN_{2}O_{8}) C, H, N.
Ejemplo 60 
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95 
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Se calentó una solución del fragmento C' del ácido (0,040 g, 0,184 mmol) y carbonildiimidazol (CDI) (0,040 g, 0,25 mmol) en 2 mL de tolueno bajo nitrógeno a 45ºC durante 45 minutos. Tras la adición del alcohol (se muestra más arriba) (0,10 g, 0,15 mmol) en 1 mL de tolueno, se calentó de nuevo la reacción a 45ºC durante 4 h. Tras enfriar a temperatura ambiente, se diluyó la mezcla de reacción con EtOAc (100 mL), se lavó con HCl 0,1 N (1 x 10 mL), agua (1 x 10 mL), NaHCO_{3} saturado (1 x 10 mL) y salmuera (1 x 10 mL). Se secó la capa orgánica sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró al vacío para proporcionar el éster crudo como una espuma amarilla. La purificación mediante PLC radial (gel de sílice, EtOAC-hexanos al 50%) proporcionó el éster crudo (0,097) g con un rendimiento del 75% en forma de un sólido amarillo: [\alpha]^{20}_{D} + 17,2º (c 0,58, CHCl_{3}); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,40-7,34 (d, 2 H, J = 8,5 Hz), 7,29-7,22 (m, 3 H), 7,13-7,00 (m, 3 H), 6,92-6,86 (d, 1 H, J = 8,8 Hz), 6,86-6,76 (m, 1 H), 6,50-6,38 (d, 1 H,
J = 15,9 Hz), 6,10-5,97 (dd, 1 H, J = 15,8, 8,8 Hz), 5,85-5,75 (d, 1 H, J = 15,1 Hz), 5,55-5,45 (d, 1 H, J = 7,9 Hz), 5,15-5,06 (m, 1 H), 5,06-4,96 (m, 1 H), 4,95-4,85 (m, 1 H), 4,83-4,72 (dd, 1 H, J = 10,0, 3,0 Hz), 3,92 (s, 3 H), 3,53-3,35 (m, 3 H), 3,22-3,06 (m, 3 H), 2,65-2,50 (m, 2 H), 2,48-2,35 (m, 1 H), 1,80-1,65 (m, 2 H), 1,49 (s, 9 H), 1,40 (s, 6 H), 1,27 (s, 3 H), 1,21 (s, 3 H), 1,20-1,15 (d, 3 H, J = 6,9 Hz), 0,86-0,77 (d, 6 H, J = 6,3 Hz); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 177,8, 170,5, 170,4 165,1, 156,0, 153,9, 150,0, 142,0, 134,5, 130,8, 130,6, 130,4, 129,6, 128,2, 126,9, 124,6, 122,4, 121,5, 112,2, 79,2, 71,3, 56,0, 54,4, 48,2, 46,4, 44,0, 42,7, 42,1, 39,5, 36,5, 35,2, 28,3, 24,9, 24,5, 22,9, 22,8, 22,7, 21,3, 17,2; IR (CHCl_{3}) 3425, 2970, 2934, 2874, 1746, 1711, 1684, 1604, 1505, 1442, 1394, 1368, 1305, 1258, 1166, 1123, 1067, 1015, 971 cm^{-1}; Anal. (C_{41}H_{55}ClN_{3}O_{9}) C, H, N.
Ejemplo 61
96
Se añadieron al estireno (se muestra más arriba) (0,276 g, 0,32 mmol) 12 mL de acetona, 6 mL de H_{2}O, 6 mL de CH_{2}Cl_{2} y NaHCO_{3} sólido (0,84 g, 10 mmol) y se enfrió la mezcla a 0ºC. Se preparó una solución de Oxona (0,78 g, 1,27 mmol) en 6 mL de H_{2}O y se añadieron (2 mL) a la mezcla de estireno fría. Tras 30 min de agitación vigorosa a 0ºC se añadieron 2 mL más de solución de Oxona y de nuevo se añadieron otros 2 mL, tras otros 30 min, para un total de 6 mL de solución de Oxona. Se monitorizó el progreso de la reacción mediante HPLC en fase reversa y se encontró que se completó tras 2,5 h de agitación. Mientras que aún más, a 0ºC, la reacción se detuvo súbitamente con NaHCO_{3} saturado acuoso (50 mL) y se añadieron también 50 mL más de CH_{2}Cl_{2}. Se separaron las capas y se lavó la capa orgánica con Na_{2}SO_{3} acuoso al 10% (50 mL), seguido por NaHCO_{3} saturado acuoso (50 mL), a continuación salmuera y finalmente se secó sobre Na_{2}SO_{4}, se filtró y se concentró al vacío para dar 0,272 g de los epóxidos crudos en forma de una espuma amarilla.
A una solución de los epóxidos en 4 mL de CH_{2}Cl_{2} a -60ºC se le añadió cloruro de trimetilsililo (0,2 mL, 1,54 mmol). Tras 3 horas a -60ºC, se añadieron 5 mL de HCl 0,1 N para hidrolizar cualquier éter de trimetilsililo y se calentó la mezcla a temperatura ambiente. Se separaron las capas y se secó la capa orgánica sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró al vacío. Se purificaron las clorohidrinas crudas dos veces mediante PLC radial (gel d sílice EtOAC/hexanos 50-60-70-100%) y finalmente mediante HPLC en fase reversa (CH_{3}CN/H_{2}O) para dar el producto (se muestra más arriba) (0,090 g, 3 1%) en forma de un sólido blanco: [\alpha]^{20}_{D} + 42,7º (c 3,0, CHCl_{3}); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,48-7,44 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 7,31-7,26 (m, 4 H), 7,16-7,10 (m, 3 H), 6,92-6,89 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 6,87-6,81 (m, 1 H), 5,84-5,79 (d, 1 H, J = 15,1 Hz), 5,58-5,55 (d, 1 H, J = 7,8 Hz), 5,24-5,19 (t, 1 H, J = 8,9 Hz), 5,05-4,95 (m, 2 H), 4,79-4,75 ( m, 1 H), 4,72-4,69 (d, 1 H, J = 9,5 Hz), 4,04-4,01 (dd, 1 H, J = 1,3, 9,3 Hz), 3,93 (s, 3 H), 3,47-3,40 (m, 3 H), 3,25-3,06 (m, 3 H), 2,75-2,70 (d, 1 H, J = 13,9 Hz), 2,55-2,41 (m, 2 H), 1,90-1,71 (m, 2 H), 1,63 (s, 1 H), 1,48 (s, 9 H), 1,39 (s, 6 H), 1,28 (s, 3 H), 1,22 (s, 3 H), 1,09-1,06 (d, 3 H, J = 6,9 Hz), 1,0-0,96 (m, 6 H); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 177,6, 170,4, 170,2, 165,2, 153,9, 142,3, 136,1, 130,8, 129,7, 129,1, 128,2, 124,5, 122,4, 121,9, 112,2, 76,1, 74,0, 71,1, 61,5, 56,5, 54,4, 46,4, 44,1, 42,7, 39,6, 38,4, 36,3, 35,2, 28,3, 24,8, 22,9, 22,8, 22,7, 21,5, 8,6; IR (CHCl_{3}) 3417, 2974, 2934, 1755, 1720, 1677, 1505, 1473, 1368, 1320, 1258, 1205, 1167, 1153, 1123, 1066 cm^{-1}; FAB HRMS [M - BOC] calcd para (C_{41}H_{56}Cl_{2}N_{3}O_{10}) 820,3343, encontrado 820,3354.
Ejemplo 62
97
Se añadió a la amina protegida con BOC (se muestra más arriba) (0,070 g, 0,067 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (0,25 mL) una solución de HCl 4 M (0,1 mL, 0,4 mmol) en 1,4-dioxano. Tras 2 h de agitación a temperatura ambiente, se eliminaron los solventes bajo vacío durante 2 días para dar el producto en forma de un sólido blanco (0,062 g) con un rendimiento del 95%: [\alpha]^{20}_{D} + 27,68º (c 2,5, CHCl_{3}); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,79-7,76 (d, 1 H, J = 7,9 Hz), 7,48-7,38 (m, 2 H), 7,27-7,26 (d, 1 H, J = 1,2 Hz), 7,17-7,08 (m, 3 H), 6,98-6,95 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 6,71-6,60 (m, 1 H), 5,95-5,90 (d, 1 H, J = 15,2 Hz), 5,14-5,01 (m, 2 H), 4,50-4,46 (dd, 1 H, J = 3,0, 11,0 Hz), 3,99-3,96 (d, 1 H, J = 9,1 Hz), 3,82 (s, 3 H), 3,49-3,42 (m, 1 H), 3,19 (s, 2 H), 3,2-3,06 (m, 2 H), 2,77-2,68 (m, 2 H), 2,49-2,46 (t, 1 H, J = 6,8 Hz), 2,44-2,31 (q, 1 H, J = 11,4 Hz), 1,85-1,65 (m, 2 H), 1,60-1,50 (m, 1 H), 1,46 (s, 6 H), 1,20 (s, 3 H), 1,16 (s, 3 H), 1,08-0,94 (m, 9 H); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 178,9, 175,6, 173,8, 171,9, 155,3, 151,8, 144,2, 139,5, 132,2, 131,5, 130,7, 129,4, 125,2, 123,3, 122,6, 113,5, 77,2, 74,8, 72,6, 63,2, 57,6, 56,7, 50,1, 48,3, 48,0, 47,4, 44,1, 42,7, 41,1, 40,4, 37,8, 36,5, 28,8, 26,2, 23,6, 23,4, 22,2, 9,0; IR (KBr) 3418, 2961, 2934, 1751, 1724, 1671, 1608, 1505, 1474, 1464, 1442, 1303, 1282, 1259, 1203, 1169, 1152, 1126, 1065, 1018; FAB HRMS [M -Cl] calcd para (C_{41}H_{56}Cl_{2}N_{3}O_{10}) 820,3343, encontrado 820,3354.
Ejemplo 63 
\vskip1.000000\baselineskip
98
Se añadió gota a gota fluoruro de tetrabutilamonio (TBAF) (4,0 mL, 4,1 mmol), en forma de una solución 1,0 M en THF, a una solución a -78ºC del alcohol protegido 20 (3,1 g, 3,69 mmol) en 120 mL de THF. Se agitó la solución a -78ºC durante 10 min y se retiró el baño de hielo seco, dejando calentar esta solución hasta temperatura ambiente. Tras 30 min a temperatura ambiente, se detuvo súbitamente la reacción con agua (80 mL) y acetato de etilo (100 mL). Se separaron las capas y se extrajo la acuosa con CH_{2}Cl_{2} (3 x 50 mL). Se secaron las capas orgánicas combinadas sobre Na_{2}SO_{4} anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío para dar como resultado el alcohol libre. La purificación mediante columna de cromatografía (gel de sílice, EtOAc/hexanos 50-70-100%) dio como resultado 2,51 g (99%) del alcohol puro 29 en forma de un sólido blanco: [\alpha]^{20}_{D} + 30,0º (c 1,0, CHCl_{3}); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,31 (s, 4 H), 7,26-7,21 (m, 1 H), 7,27,19 (d, 1 H, J = 1,8 Hz), 7,07-7,03 (dd, 1 H, J = 8,4, 1,7 Hz), 6,85-6,82 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 6,82-6,7 (m, 1 H), 6,43-6,37 (d, 1 H, J = 15,9 Hz), 6,05-5,97 (dd, 1 H, J = 15,9, 8,7 Hz), 5,77-5,72 (d, 1 H, J = 15,0 Hz), 5,58-5,55 (d, 1 H, J = 7,9 Hz), 5,08-5,02 (dd, 1 H, J = 9,4, 6,3 Hz), 4,87-4,83 (dd, 1 H, J = 10,2, 3,1 Hz), 4,8-4,67 (m, 1 H), 4,67 (s, 2 H), 3,87 (s, 3 H), 3,44-3,37 (dd, 1 H, J = 13,5, 8,5 Hz), 3,2-3,0 (m, 3H), 2,6-2,3 (m, 3 H), 1,8-1,6 (m, 3 H), 1,4-1,25 (m, 1 H), 1,22 (s, 3 H), 1,15 (s, 3 H), 1,14 1,12 (d, 3 H, J = 6,8 Hz), 0,76-0,73 (t, 6 H,
J = 5,5 Hz); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 177,7, 170,7, 170,5, 165,4, 153,8, 142,0, 140,5, 135,9, 131,3, 130,7, 130,0, 129,9, 128,1, 127,1, 126,1, 124,5, 122,2, 112,2, 77,0, 71,3, 64,6, 56,0, 54,6, 46,4, 42,7, 42,1, 39,4, 36,4, 35,2, 24,5, 22,8, 22,6, 21,2, 17,2; IR (CHCl_{3}) 3423, 3011, 2965, 2935, 2874, 2841, 1747, 1712, 1681, 1652, 1528, 1503, 1485, 1442, 1371, 1303, 1259, 1151 cm^{-1}; Anal.(C_{37}H_{47}ClN_{2}O_{8}) C, H, N.
Ejemplo 64 
\vskip1.000000\baselineskip
99
A una solución del alcohol 29 (0,13 g, 0,19 mmol) en 2,0 mL de THF, se le añadió trifenil fosfina (0,065 g, 0,25 mmol), ftalamida (0,037 g, 0,25 mmol) y finalmente azodicarboxilato de dietilo (DEAD) (0,04 mL, 0,25 mmol). Se agitó a temperatura ambiente la solución amarilla resultante durante 2 h y se detuvo súbitamente con H_{2}O (10 mL) y CH_{2}Cl_{2} (10 mL). Se extrajo la capa acuosa con CH_{2}Cl_{2} (2 x 10 mL) y se secaron las capas orgánicas combinadas sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron al vacío. Se purificó el residuo resultante mediante PLC radial (gel de sílice, EtOAc/hexanos 50-60-70%) para dar ftalamida 30 (0,14 g) en forma de un sólido blanco con un rendimiento del 90%: [\alpha]^{20}_{D} + 19,2º (c 1,0, CHCl_{3}); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,9-7,8 (m, 2 H), 7,72-7,69 (m, 2 H), 7,39-7,36 (d, 2 H, J = 8,0 Hz), 7,28-7,26 (d, 2 H, J = 5,3 Hz), 7,25-7,2 (m, 1 H), 7,19-7,18 (d, 1 H, J = 1,9 Hz), 7,06-7,03 (dd, 1 H, J = 8,5, 1,9 Hz), 6,85-6,82 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 6,81-6,7 (m, 1 H), 6,39-6,33 (d, 1 H, J = 15,9 Hz), 6,01-5,93 (dd, 1 H, J = 15,8, 8,8 Hz), 5,75-5,7 (d, 1 H, J = 15,4 Hz), 5,47-5,44 (d, 1 H, J = 7,9 Hz), 5,05-5,0 (dd, 1 H, J = 9,4, 6,3 Hz), 4,8 (s, 2 H), 4,83-4,7(m, 2 H), 3,87 (s, 3 H), 3,4-3,36 (dd, 1 H, J = 13,4, 8,6 Hz), 3,18-3,02 (m, 3 H), 2,6-2,25 (m, 3 H), 1,65-1,5(m, 2 H), 1,35-1,22(m, 1 H), 1,21 (s, 3 H), 1,14 (s, 3 H), 1,12-1,09 (d, 3 H, J = 6,8 Hz), 0,71-0,69 (d, 3 H, J = 6,4 Hz), 0,65-0,63 (d, 3 H, J = 6,4 Hz); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 177,8, 170,5, 170,4, 167,8, 165,2, 153,9, 142,0, 136,3, 135,6, 133,9, 131,9, 131,1, 130,7, 130,6, 129,8, 128,9, 128,6, 128,5, 128,1, 126,3, 124,6, 123,2, 122,3, 112,2, 76,9, 71,3, 56,0, 54,5, 46,4, 42,6, 42,1, 41,2, 39,4, 36,4, 35,2, 24,4, 22,8, 22,6, 22,5, 21,1, 17,2 IR (CHCl_{3}) 3421, 2967, 2935, 2873, 2840, 1747, 1716, 1682, 1527, 1503, 1485, 1433, 1395, 1259, 1151.
Ejemplo 65
100
A la ftalamida 30 (0,1 g, 0,123 mmol) en 1,8 mL de EtOH, se le añadió n-butilamina (0,04 mL, 0,369 mmol). Se calentó la solución a 75ºC durante 2 días, se concentró al vacío y se purificó mediante PLC radial (gel d sílice, MeOH/CH_{2}Cl_{2} al 10-25%) para proporcionar la amina libre 31 (0,048 g) con un rendimiento del 57%.
Ejemplo 66
101
A N-(tert-butoxicarbonil) sarcosina (0,07 g, 0,37 mmol) en 1,5 mL de DMF se le añadió hidrato de 1-hidroxibenzotriazol (HOBT) (0,05 g, 0,37 mmol) y clorhidrato de (1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDCI) (0,071 g, 0,37 mmol). Tras 45 min de agitación a temperatura ambiente, se añadió a la solución la amina 31 (0,17 g, 0,25 mmol) en 2,5 mL de DMF gota a gota mediante una aguja de doble embocadura. Se agitó la mezcla resultante durante 3 h más, se detuvo súbitamente con H_{2}O (10 mL) y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3 x 10 mL). Se secaron los extractos orgánicos combinados sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron al vacío. La purificación del producto crudo resultante mediante PLC radial (gel de sílice, EtOAC/hexanos 70-80-100% proporcionó la amida 32 deseada (0,15 g) con un rendimiento del 71% en forma de un sólido blanco: [\alpha]^{20}_{D} + 22,4º (c 1,0, CHCl_{3}); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,27-7,1 (m, 6 H), 7,04-7,0 (dd, 1 H, J = 8,5, 1,9 Hz), 6,82-6,79 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 6,79-6,65 (m, 1 H), 6,38-6,32 (d, 1 H, J = 15,9 Hz), 6,3-6,2 (bs, 1 H), 6,01-5,93 (dd, 1 H, J = 15,9, 8,7 Hz), 5,75-5,70 (d, 1 H, J = 15,0 Hz), 5,65-5,6 (m, 1 H), 5,0-4,99 (dd, 1 H, J = 9,3, 6,1 Hz), 4,84-4,79 (dd, 1 H, J = 9,6, 3,6 Hz), 4,74-4,67 (m, 1 H), 4,42-4,4 (d, 2 H, J = 5,7 Hz), 3,87 (s, 2 H), 3,84 (s, 3 H), 3,42-3,34 (dd, 1 H, J = 13,5, 8,6 Hz), 3,15-3,0 (m, 3 H), 2,9 (s, 3 H), 2,6-2,25 (m, 3 H), 1,8-1,5 (m, 2 H), 1,4 (s, 9 H), 1,39-1,25 (m, 1 H), 1,19 (s, 3 H), 1,12 (s, 3 H), 1,1-1,08 (d, 3 H, J = 6,8 Hz), 0,73-0,72 (d, 3 H, J = 4,4 Hz), 0,71-0,69 (d, 3 H, J = 4,3 Hz); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 177,7, 170,5, 170,4, 169,2, 165,2, 153,9, 141,9, 137,3, 136,0, 131,1, 130,7, 130,3, 129,8, 128,6, 128,1, 127,7, 126,3, 124,6, 122,3, 112,2, 80,6, 76,9, 71,3, 56,0, 54,5, 53,1, 46,4, 42,8, 42,7, 42,0, 39,4, 36,4, 35,8, 35,2, 28,2, 24,5, 22,8, 22,6, 21,2, 17,1; IR (CHCl_{3}) 3427, 2967, 2935, 2874, 2841, 1747, 1680, 1526, 1504, 1484, 1464, 1442, 1393, 1369, 1302, 1281, 1259, 1151, 1067.
Ejemplo 67
102
Se epoxidó la amida 32 (0,34 g, 0,398 mmol) usando mCPBA (0,072 g, 0,42 mmol) en 1,2 mL de CH_{2}Cl_{2} de acuerdo con el procedimiento descrito más arriba para dar los epóxidos b y a en una relación 2:1. Se disolvió la mezcla cruda resultante de los epóxidos en CHCl_{3} (0,3 g, 0,345 mmol) y se enfrió a -60ºC. Se añadió TMSCl (0,22 mL, 1,73 mmol) y se agitó la solución a entre -50ºC y -20ºC durante 2 h. Se añadió más TMSCl (0,44 mL, 0,173 mmol) y se dejó calentar la solución hasta temperatura ambiente. Se concentró la solución al vacío y se purificó el producto resultante mediante cromatografía en columna (EtOAc/hexanos al 70-80%) y dos veces mediante PLC radial (gel de sílice, MeOH/CH_{2}Cl_{2} al 2-5%) para dar la trans clorohidrina 34 (0,1 g) con un rendimiento del 48% en forma de un sólido blanco: [\alpha]^{20}_{D} + 46,9º (c 0,85, CHCl_{3}); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) d 7,36-7,34 (d, 2 H, J = 7,9 Hz), 7,29-7,26 (d, 2 H, J = 8,3 Hz), 7,21 (s, 2 H), 7,08-7,05 (d, 1 H, J = 8,3 Hz), 6,86-6,83 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 6,8-6,7(m, 1 H), 6,5-6,2 (bs, 1 H), 5,79-5,74 (d, 1 H, J = 15,2 Hz), 5,64-5,62 (d, 1 H J = 7,7 Hz), 5,18-5,12 (t, 1 H, J = 9,1 Hz), 4,94-4,9 (dd, 1 H, J = 9,9, 3,5 Hz), 4,8-4,67 (m, 1 H), 4,66-4,63 (d, 1 H, J = 9,6 Hz), 4,47-4,45 (d, 2 H, J = 5,3 Hz), 4,02-3,98 (d, 1 H, J = 9,5 Hz), 3,89 (s, 2 H), 3,88 (s, 3 H), 3,41-3,34 (dd, 1 H, J = 13,6, 8,5 Hz), 3,2-3,0 (m, 3 H), 2,94 (s, 3 H), 2,69-2,68 (bdd, 1 H, J = 14,3, 2,1 Hz), 2,51-2,3 (m, 2 H), 1,8-1,6 (m, 3 H), 1,42 (s, 10 H), 1,22 (s, 3 H), 1,17 (s, 3 H), 1,03-1,01 (d, 3 H, J = 6,9 Hz), 0,94-0,9 (t, 6 H, J = 5,5 Hz); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 177,6, 170,4, 170,2, 165,2, 153,9, 142,4, 139,1, 130,8, 129,7, 128,3, 128,2, 127,9, 124,4, 122,4, 112,2, 80,7, 76,1, 73,9, 71,2, 61,8, 56,1, 54,4, 53,1, 46,4, 42,7, 39,6, 38,4, 36,3, 35,9, 35,2, 28,2, 24,8, 23,0, 22,9, 22,7, 21,5, 8,5; IR (KBr) 3419, 3317, 2964, 2932, 1755, 1670, 1538, 1504, 1473, 1392, 1368, 1301, 1258, 1151, 1066; FAB HRMS [M + H] calcd para (C_{45}H_{62}Cl_{2}N_{4}O_{11}) 905,3870, encontrado 905,3876.
Ejemplo 68
103
Se preparó la sal de clorhidrato 35 (0,041 g) de la amina protegida con BOC 34 con un rendimiento cuantitativo de acuerdo con el procedimiento descrito más arriba usando HCl 4 M en 1,4-dioxano: ^{1}H RMN (300 MHz, MeOD) \delta 8,47-8,45 (d, 1 H, J = 7,7 Hz), 7,79-7,76 (d, 1 H, J = 8,9 Hz), 7,39-7,36 (d, 2 H, J = 8,1 Hz), 7,3-7,27 (d, 3 H, J = 9,0 Hz), 7,17-7,14 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 6,98-6,95 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 6,75-6,6 (m, 1 H), 5,94-5,89 (d, 1 H, J = 15,1 Hz), 5,2-5,0 (m, 2 H), 4,78-4,75 (d, 1 H, J = 9,4 Hz), 4,5-4,42 (m, 1 H), 4,41 (s, 2 H), 4,01-3,98 (d, 1 H, J = 9,5 Hz), 3,82 (s, 3 H), 3,8 (s, 2 H), 3,5-3,4 (m, 1 H), 3,19-3,13 (dd, 1 H, J = 14,4, 3,4 Hz), 3,11-3,06 (dd, 1 H, J = 13,2, 1,9 Hz), 2,8-2,6 (m, 2 H), 2,7 (s, 3 H), 2,5-2,2 (m, 2 H), 1,85-1,45 (m, 3 H), 1,3-1,2 (m, 1 H), 1,2 (s, 3 H), 1,15 (s, 3 H), 1,0-0,94 (q, 9 H, J = 11,3, 6,0 Hz); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 178,9, 173,7, 171,9, 168,3, 166,3, 155,4, 144,2, 140,5, 139,7, 132,2, 131,5, 129,7, 129,4, 128,8, 125,2, 123,3, 113,5, 77,2, 74,7, 72,6, 63,7, 57,6, 56,6, 50,7, 47,4, 44,1, 43,9, 41,1, 40,4, 37,8, 36,5, 33,7, 26,2, 23,6, 23,4, 22,1, 9,0; IR (KBr) 3410, 3058, 2961, 2933, 1752, 1721, 1675, 1539, 1504, 1463, 1440, 1282, 1259, 1196, 1154, 1127, 1066.
Ejemplo 69
104
Se calentó una suspensión de hidruro de sodio (suspensión al 60%) (0,041 g, 1,0 mmol) y bromuro de 4-carbometoxibencil trifenilfosfonio (0,5 g, 1,0 mmol) en 10 mL de THF a 65ºC durante 1 h y se enfrió hasta temperatura ambiente. Se añadió gota a gota esta mezcla naranja al aldehído 18 (0,46 g, 0,79 mmol) en THF (10 mL) a -78ºC. Se calentó la solución resultante hasta temperatura ambiente, se agitó 2 h más y se detuvo súbitamente con NH_{4}Cl saturado (30 mL) y EtOAc (30 mL). Se separaron las capas y se extrajo la acuosa de manera adicional con EtOAc (2 x 20 mL). Se lavaron los extractos orgánicos combinados con salmuera (30 mL), se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron al vacío. Se purificó el estireno crudo mediante cromatografía en columna (gel de sílice, EtOAc/hexanos al 50-65%) para dar el estireno límpido (0,129 g) con un rendimiento del 23%: [\alpha]^{20}_{D} + 29,7º (c 1,15, CHCl_{3}); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,03-8,0 (d, 2 H, J = 8,2 Hz), 7,44-7,41 (d, 2 H, J = 8,3 Hz), 7,3-7,25 (m, 1 H), 7,24-7,23 (d, 1 H, J = 1,6 Hz), 7,11-7,08 (dd, 1 H, J = 8,3, 1,9 Hz), 6,89-6,86 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 6,86-6,8 (m, 1 H), 6,52-6,46 (d, 1 H, J = 15,9 Hz), 6,23-6,15 (dd, 1 H, J = 15,8, 8,8 Hz), 5,83-5,8 (d, 1 H, J = 15,3 Hz), 5,64-5,61 (d, 1 H, J = 7,9 Hz), 5,14-5,09 (dd, 1H, J = 9,4, 6,5 Hz), 4,91-4,87 (dd, 1 H, J = 10,2, 3,6 Hz), 4,85-4,75 (m, 1 H), 3,95 (s, 3 H), 3,91 (s, 3 H), 3,5-3,4 (dd, 1 H, J = 13,5, 8,7 Hz), 3,2-3,1 (m, 3 H), 2,9-2,3 (m, 3 H), 1,8-1,6 (m, 3 H), 1,4-1,3 (m, 1 H), 1,26 (s, 3 H), 1,2 (s, 3 H), 1,2-1,18 (d, 3 H, J = 6,9 Hz), 0,8-0,78 (d, 3 H, J = 5,6 Hz), 0,78-0,76 (d, 3 H, J = 6,0 Hz); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 177,8, 170,4, 166,7, 165,1, 153,9, 141,8, 141,1, 133,1, 130,8, 129,9, 129,7, 128,9, 128,2, 125,9, 124,6, 122,4, 112,2, 76,8, 71,3, 56,0, 54,4, 52,0, 46,4, 42,7, 42,2, 39,5, 36,5, 35,2, 24,5, 22,8, 22,6, 21,2, 17,1; IR (CHCl_{3}) 3424, 2964, 2936, 2874, 2841, 1748, 1716, 1681, 1608, 1528, 1503, 1485, 1437, 1283, 1259 cm^{-1}; Anal. (C_{38}H_{47}ClN_{2}O_{9}) C, H, N.
Ejemplo 70
105
Se añadieron al estireno (se muestra más arriba) (0,42 g, 0,59 mmol) 30 mL de acetona, 15 mL de H_{2}O, 15 mL de CH_{2}Cl_{2} y NaHCO_{3} sólido (1,7 g, 20,2 mmol) y se enfrió la mezcla a 0ºC. Se preparó una solución de oxona (1,4 g, 2,3 mmol) en 12 mL de H_{2}O y se añadió (2 mL) a la mezcla de estireno fría. Tras 30 min de agitación vigorosa a 0ºC se añadieron 2 mL más de solución de oxona y se calentó la solución hasta temperatura ambiente. Se añadieron 2 mL más de solución de oxona cada 2 h hasta que se consumieron los 12 mL. Se agitó la reacción un total de 5 horas y se detuvo súbitamente con NaHCO_{3} saturado acuoso (50 mL) y 50 mL de CH_{2}Cl_{2}. Se separaron las capas y se lavó la capa orgánica con Na_{2}SO_{3} acuoso al 10% (50 mL), seguido por NaHCO_{3} saturado acuoso (50 mL), a continuación salmuera y finalmente se secó sobre Na_{2}SO_{4}, se filtró y se concentró al vacío. Se purificó la mezcla cruda mediante HPLC en fase reversa (45:55) de CH_{3}CN:H_{2}O para proporcionar 0,14 g (rendimiento del 33%) de los epóxidos b y a y 0,14 g de una mezcla de biepoxidación.
Se disolvió la mezcla de los epóxidos b/a (0,14 g, 0,19 mmol) en 3,0 mL de CHCl_{3} y se enfrió a -60ºC. Se añadió clorotrimetil silano (0,1 mL, 0,77 mmol) a la solución a -60ºC y se agitó la mezcla durante 1,5 h. Se añadió más TMSCl (0,1 mL, 0,77 mmol) y se dejó calentar la solución hasta temperatura ambiente. Tras 1 h de agitación a temperatura ambiente, se concentró y purificó la solución mediante PLC radial (MeOH/CH_{2}Cl_{2} al 1-2%) para dar 0,044 g (rendimiento del 30%) de la clorohidrina deseada (se muestra más arriba) en forma de un sólido blanco:
[\alpha]^{20}_{D} + 50,0º (c 0,75, CHCl_{3}); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,1-8,08 (d, 2 H, J = 8,1 Hz), 7,54-7,51 (d, 2 H, J = 8,2 Hz), 7,3-7,25 (m, 1 H), 7,25 (s, 1 H), 7,13-7,09 (dd, 1 H, J = 8,5, 1,5 Hz), 6,91-6,88 (d, 1 H, J = 8,3 Hz), 6,87-6,78 (m, 1 H), 5,86-5,8 (d, 1 H, J = 15,5 Hz), 5,7-5,6 (m, 1 H), 5,24-5,18 (t, 1 H, J = 9,2 Hz), 4,99-4,95 (dd, 1 H, J = 10,0, 3,6 Hz), 4,8-4,7 (m, 1 H), 4,76-4,73 (d, 1 H, J = 9,5 Hz), 4,09-4,06 (d, 1 H, J = 9,6 Hz), 3,97 (s, 3 H), 3,93 (s, 3 H), 3,45-3,38 (dd, 1 H, J = 13,6, 8,6 Hz), 3,25-3,0 (m, 3 H), 2,75-2,62 (m, 1 H), 2,6-2,4(m, 2 H), 1,9-1,6 (m, 3 H), 1,5-1,4 (m, 1 H), 1,27 (s, 3 H), 1,22 (s, 3 H), 1,1-1,07 (d, 3 H, J = 6,95 Hz), 0,98-0,95 (t, 6 H, J = 5,3 Hz); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 177,5, 170,6, 170,3, 166,3, 165,4, 153,9, 143,8, 142,2, 138,7, 130,7, 130,4, 129,9, 128,1, 128,08, 124,6, 122,3, 112,2, 76,1, 73,8, 71,1, 61,4, 56,0, 54,6, 52,2, 46,4, 42,7, 39,6, 38,4, 36,3, 35,1, 24,8, 23,0, 22,9, 22,7, 21,5, 8,7; IR (CHCl_{3}) 3425, 2962, 2935, 2873, 2842, 1750, 1720, 1680, 1528, 1504, 1484, 1438, 1284, 1259, 1194, 1152, 1114, 1067 cm^{-1}. Anal. (C_{38}H_{46}Cl_{2}N_{2}O_{10}) C, H, N.
Ejemplo 71
106
A una solución del alcohol 23 (0,32 g, 0,46 mmol) en 8,5 mL de CH_{2}Cl_{2} se le añadió NaHCO_{3} sólido (0,19 g, 2,29 mmol), trifenil fosfina (0,18 g, 0,69 mmol) y finalmente N-clorosuccinimida (0,092 g, 0,69 mmol). Se agitó la mezcla a 0ºC durante 20 min y se detuvo súbitamente con NaHCO_{3} saturado acuoso (20 mL). Se separaron las capas y se extrajo la acuosa con CH_{2}Cl_{2} (3 x 10 mL). Se lavaron las capas orgánicas combinadas con salmuera, se secaron sobre Na_{2}SO_{4}, se filtraron y se concentraron al vacío. Se purificó el sólido amarillo crudo mediante PLC radial (gel de sílice, EtOAc/hexanos al 20-50%) para dar 0,26 g del cloruro de bencilo 36 con un rendimiento del 79% en forma de un sólido blanco: [\alpha]^{20}_{D} + 25,6º (c 0,9, CHCl_{3}); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,4-7,38 (d, 2 H, J = 7,9 Hz), 7,26-7,23 (d, 3 H, J = 8,3 Hz), 7,19-7,18 (d, 1 H, J = 1,9 Hz), 7,06-7,03 (dd, 1 H, J = 8,3, 1,9 Hz), 6,85-6,82 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 6,8-6,7 (m, 1 H), 5,74-5,69 (d, 1 H, J = 15,4 Hz), 5,49-5,47 (d, 1 H, J = 7,8 Hz), 5,22-5,17 (m, 1 H), 4,85-4,8 (dd, 1 H, J = 9,7, 3,0 Hz), 4,78-4,7 (m, 1 H), 4,6 (s, 2 H), 3,9 (s, 3 H), 3,69-3,68 (d, 1 H, J = 1,3 Hz), 3,45-3,38 (dd, 1 H, J = 13,4, 8,6 Hz), 3,2-3,0 (m, 3 H), 2,92-2,89 (dd, 1 H, J = 7,6, 1,6 Hz), 2,6-2,4 (m, 2 H), 1,8-1,6 (m, 3 H), 1,4-1,3 (m, 1 H), 1,22 (s, 3 H), 1,16 (s, 3 H), 1,16-1,13 (d, 3 H, J = 8,6 Hz), 0,86-0,82 (t, 6 H, J = 6,8 Hz); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 177,8, 175,1, 170,3, 164,9, 154,0, 141,6, 137,7, 137,1, 130,8, 129,5, 128,9, 128,1, 125,9, 124,6, 122,4, 112,3, 77,2, 75,8, 71,1, 63,1, 58,5, 56,1, 54,4, 46,4, 45,7, 42,7, 40,5, 39,3, 36,8, 35,2, 24,5, 22,8, 22,6, 21,2, 13,5; IR (CHCl_{3}) 3416, 3284, 2961, 2933, 2873, 2839, 1752, 1721, 1680, 1658, 1536, 1504, 1473, 1442, 1321, 1302, 1281, 1259, 1192, 1150, 1126, 1066 cm^{-1}; Anal. (C_{37}H_{46}Cl_{2}N_{2}O_{8}) C, H, N.
Ejemplo 72
107
Se añadió dietil amina (0,09 mL, 0,84 mmol) al cloruro de bencilo 36 (0,03 g, 0,042 mmol) en 0,3 mL de THF. Se agitó la mezcla durante toda la noche a temperatura ambiente y se detuvo súbitamente con NaHCO_{3} saturado acuoso (5 mL). Se extrajo la capa acuosa con CH_{2}Cl_{2} (3 x 5 mL). Se lavaron las capas orgánicas con salmuera, se secaron sobre Na_{2}SO_{4}, se filtraron y se concentraron al vacío. Se purificó el sólido amarillo crudo mediante PLC radial (gel de sílice, EtOAc/hexanos 50-70-80%) para dar 0,026 g de la amina 37 con un rendimiento del 82% en forma de un sólido blanco: [\alpha]^{20}_{D} + 25,9º (c 0,9, CHCl_{3}); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,35-7,32 (d, 2 H, J = 7,9 Hz), 7,25-7,12 (m, 4 H), 7,06-7,02 (dd, 1 H, J = 8,4, 1,6 Hz), 6,84-6,82 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 6,82-6,7 (m, 1 H), 5,74-5,69 (d, 1 H,
J = 15,2 Hz), 5,57-5,55 (d, 1 H, J = 7,8 Hz), 5,22-5,17 (m, 1 H), 4,85-4,7 (m, 2 H), 3,86 (s, 3 H), 3,66 (s, 1 H), 3,57 (s, 2 H), 3,46-3,38 (dd, 1 H, J = 13,4, 8,7 Hz), 3,2-3,0 (m, 3 H), 2,93-2,91 (d, 1 H, J = 7,4 Hz), 2,6-2,4 (m, 6 H), 1,8-1,6 (m, 3 H), 1,4-1,3 (m, 1 H), 1,22 (s, 3 H), 1,15 (s, 3 H), 1,15-1,12 (d, 3 H, J = 9,2 Hz), 1,07-1,03 (t, 6 H, J = 7,1 Hz), 0,86-0,82 (t, 6 H, J = 6,3 Hz); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 177,9, 170,4, 170,3, 164,9, 154,0, 141,7, 140,1, 135,2, 130,8, 129,6, 129,1, 128,1, 125,4, 124,6, 122,4, 112,3, 77,2, 75,8, 71,1, 62,9, 58,9, 57,1, 56,0, 54,4, 46,6, 46,4, 42,7, 40,6, 39,3, 36,8, 35,2, 24,5, 22,8, 22,6, 21,2, 13,5, 11,5; IR( CHCl_{3}) 3424, 2969, 2936, 2874, 1752, 1711, 1682, 1605, 1527, 1503, 1485, 1303, 1259, 1190, 1151, 1067 cm^{-1} Anal. (C_{41}H_{56}ClN_{3}O_{8}) C, H, N.
Ejemplo 73
108
Se añadió una solución de HCl 4 M en 1,4-dioxano (0,04 mL, 0,166 mL) gota a gota a una solución de epóxido 37 (0,05 g, 0,066 mmol) a -66ºC en 0,8 mL de CHCl_{3}. Se agitó la mezcla a -66ºC durante 10 min, tras los cuales se retiró el baño de hielo seco dejando calentar la solución hasta temperatura ambiente. Se eliminaron los solventes al vacío y se colocó la sal resultante bajo alto vacío durante 3 días para eliminar el dioxano residual dando como resultado por lo tanto 0,054 g de la clorohidrina 38 deseada exclusivamente con un rendimiento cuantitativo: [\alpha]^{20}_{D} + 29,3º (c 1,0, MeOH); ^{1}H RMN (300 MHz, MeOD) \delta 8,5-8,47 (d, 1 H, J = 7,5 Hz), 7,79-7,76 (d, 1 H, J = 8,8 Hz), 7,53 (s, 4 H), 7,26-7,25 (d, 1 H, J = 1,6 Hz), 7,17-7,14 (dd, 1 H, J = 8,6, 1,6 Hz), 6,97-6,94 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 6,75-6,6 (m, 1 H), 5,96-5,90 (d, 1 H, J = 15,3 Hz), 5,2-5,0 (m, 2 H), 4,85-4,82 (d, 1 H, J = 8,9 Hz), 4,5-4,4 (m, 1 H), 4,33 (s, 2 H), 4,02-3,98 (d, 1 H, J = 9,3 Hz), 3,8 (s, 3 H), 3,49-3,42 (dd, 1 H, J = 13,3, 9,9 Hz), 3,2-3,0 (m, 6 H), 2,8-2,6 (m, 2 H), 2,5-2,2 (m, 2 H), 1,8-1,5 (m, 3 H), 1,34-1,3 (m, 7 H), 1,2 (s, 3 H), 1,15 (s, 3 H), 1,01-0,99 (d, 3 H, J = 7,2 Hz), 0,98-0,94 (t, 6 H, J = 5,4 Hz); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 178,9, 173,8, 171,8, 168,3, 155,4, 144,1, 143,4, 132,3, 132,2, 131,5, 131,1, 130,4, 129,4, 125,2, 123,3, 113,5, 77,2, 74,8, 72,6, 63,2, 57,6, 56,7, 56,66, 48,0, 47,5, 44,1, 41,1, 40,4, 37,8, 36,5, 26,2, 23,6, 23,4, 22,2, 9,07, 9,0; IR (KBr) 3414, 2960, 2934, 1751, 1721, 1671, 1521, 1504, 1463, 1443, 1259, 1197, 1155, 1127, 1065 cm^{-1}.
Ejemplo 74
109
Se preparó el epóxido (se muestra más arriba) (0,147 g) con un rendimiento del 81%, de acuerdo con el procedimiento descrito más arriba a partir del cloruro de bencilo 36 (0,15 g, 0,21 mmol) y N-(tert-butoxicarbonil) piperazina (0,195 g, 1,05 mmol): [\alpha]^{20}_{D} + 25,4º (c 0,65, CHCl_{3}); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,37-7,23 (m, 5 H), 7,11-7,08 (d, 1 H, J = 8,6 Hz), 6,9-6,87 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 6,86-6,72 (m, 1 H), 5,78-5,73 (d, 1 H, J = 15,2 Hz), 5,53-5,5 (d, 1 H, J = 7,7 Hz), 5,28-5,23 (m, 1 H), 4,88-4,70 (m, 2 H), 3,9 (s, 3 H), 3,7 (s, 2 H), 3,54 (s, 2 H), 3,5-3,4 (m, 5 H), 3,2-3,05 (m, 3 H), 3,0-2,95 (d, 1 H, J = 7,4 Hz), 2,65-2,4 (m, 6 H), 1,85-1,6 (m, 3 H), 1,5 (s, 9 H), 1,45-1,4 (m, 1 H), 1,27 (s, 3 H), 1,2 (s, 3 H), 1,2-1,18 (d, 3 H, J = 8,3 Hz), 0,91-0,87 (t, 6 H, J = 6,1 Hz)); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 177,9, 170,3, 170,26, 164,9, 154,7, 154,0, 141,7, 138,4, 135,6, 130,8, 129,5, 129,3, 128,1, 125,5, 124,6, 122,4, 112,3, 79,5, 77,2, 75,8, 71,1, 62,9, 62,6, 58,8, 56,1, 54,4, 52,8, 46,3, 42,7, 40,6, 39,3, 36,7, 35,2, 28,3, 24,5, 22,8, 22,6, 21,2, 13,4; IR (CHCl_{3}) 3425, 3008, 2965, 2937, 2874, 2817, 1752, 1709, 1683, 1527, 1484, 1463, 1459, 1427, 1367, 1259, 1167, 1150 cm^{-1}; FAB HRMS [M - BOC] calcd para (C_{46}H_{64}ClN_{4}O_{10}) 867,4311, encontrado 867,4300.
Ejemplo 75
110
A una solución del epóxido (se muestra más arriba) (0,135 g, 0,156 mmol) en 3,0 mL de CHCl_{3} a -66ºC se le añadió gota a gota cloruro de trimetilsililo (0,16 mL, 1,2 mL). Se agitó la mezcla a -66ºC durante 2 h y se añadió más TMSCl (0,16 mL, 1,2 mL) Tras 1 h más a -66ºC, se retiró el baño de hielo, dejando calentar la solución lentamente hasta temperatura ambiente. Se eliminaron los solventes al vacío y se purificó el sólido resultante mediante PLC radial (gel de sílice, MeOH/CH_{2}Cl_{2} al 2-5%) para dar 0,13 g de la clorohidrina (se muestra más arriba) con un rendimiento del 92%: [\alpha]^{20}_{D} + 50,0º (c 1,0, CHCl_{3}) ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,34 (s, 4 H), 7,21-7,2 (d, 2 H, J = 1,4 Hz), 7,08-7,05 (dd, 1 H, J = 8,6, 1,6 Hz), 6,86-6,83 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 6,82-6,7 (m, 1 H), 5,8-5,75 (d, 1 H, J = 15,1 Hz), 5,65-5,62 (d, 1 H, J = 7,8 Hz), 5,2-5,1 (m, 1 H), 5,0-4,7 (m, 2 H), 4,66-4,63 (d, 1 H, J = 9,7 Hz), 4,02-4,0 (d, 1 H, J = 9,6 Hz), 3,88 (s, 3 H), 3,49-3,48 (d, 2 H, J = 4,2 Hz), 3,45-3,3 (m, 5 H), 3,2-3,0 (m, 3 H), 2,7-2,3 (m, 7 H), 1,8-1,6 (m, 3 H), 1,45 (s, 10 H), 1,23 (s, 3 H), 1,17 (s, 3 H), 1,04-1,02 (d, 3 H, J = 6,9 Hz), 0,93-0,91 (d, 6 H, J = 6,3 Hz); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 177,5, 170,5, 170,2, 165,2, 154,6, 153,9, 142,3, 139,1, 137,3, 130,8, 129,8, 129,5, 128,1, 127,9, 124,5, 122,3, 112,2, 79,5, 76,0, 73,9, 71,1, 62,4, 61,9, 56,1, 54,5, 52,8, 46,4, 42,7, 39,6, 38,4, 36,4, 35,2, 28,3, 24,7,23,0, 22,9, 22,7, 21,5, 8,6; IR (CHCl_{3}) 3424, 3007, 2966, 2936, 2872, 2820, 1751, 1712, 1682, 1528, 1504, 1483, 1426, 1367, 1259, 1168, 1150, 1127, 1067, 1006 cm^{-1} Anal. (C_{46}H_{64}Cl_{2}N_{4}O_{10}) C, H, N.
Ejemplo 76
111
Se prepararon las sales de clorhidrato (0,116 g) de piperazina protegida con BOC (0,122 g, 0,13 mmol) con un rendimiento cuantitativo de acuerdo con el procedimiento descrito más arriba usando HCl 4 M en 1,4-dioxano (0,32 ml, 1,3 mmol): [\alpha]^{20}_{D} + 26,3º (c 0,7, MeOH); ^{1}H RMN (300 MHz, MeOD) \delta 8,47-8,45 (d, 1 H, J = 7,5 Hz), 7,78-7,75 (d, 1 H, J = 9,2 Hz), 7,6-7,52 (q, 4 H, J = 16,9, 7,9 Hz), 7,27-7,26 (d, 1 H, J = 1,15 Hz), 7,18-7,14 (dd, 1 H, J = 8,6, 1,8 Hz), 6,98-6,95 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 6,75-6,6 (m, 1 H), 5,95-5,9 (d, 1 H, J = 15,4 Hz), 5,2-5,0 (m, 2 H), 4,85-4,82 (d, 1 H, J = 9,9 Hz), 4,5-4,4 (m, 1 H), 4,4 (s, 2 H), 4,0-3,98 (d, 1 H, J = 9,3 Hz), 3,8 (s, 3 H), 3,6-3,4 (m, 9 H), 3,32-3,29 (d, 1 H, J = 11,3 Hz), 3,19-3,13 (dd, 1 H, J = 14,8, 3,5 Hz), 3,1-3,06 (d, 1 H, J = 13,7 Hz), 2,8-2,6 (m, 2 H), 2,5-2,3 (m, 2 H), 1,85-1,5 (m, 3 H), 1,3-1,2 (m, 1 H), 1,2 (s, 3 H), 1,15 (s, 3 H), 1,02-0,95 (q, 9 H, J = 13,4, 6,3 Hz); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 178,8, 173,7, 171,9, 168,3, 155,4, 144,2, 143,7, 132,8, 132,2, 131,5, 130,4, 129,9, 129,4, 125,2, 123,3, 113,5, 77,2, 74,8, 72,6, 63,1, 61,2, 57,6, 56,7, 49,2, 47,5, 44,1, 42,1, 41,1, 40,3, 37,8, 36,5, 26,3, 23,7, 23,4, 22,2, 9,0; IR (KBr) 3415, 2960, 2933, 2455, 1749, 1721, 1671, 1504, 1475, 1442, 1304, 1258, 1197, 1152, 1126, 1065, 1012 cm^{-1} FAB HRMS [M - HCl_{2}] calcd para (C_{41}H_{57}Cl_{2},N_{4}O_{8}) 803,3553, encontrado 803,3563.
Ejemplo 77
112
Se preparó el epóxido (se muestra más arriba) (0,15 g) con un rendimiento del 78%, de acuerdo con el procedimiento descrito más arriba a partir del cloruro de bencilo 36 (0,16 g, 0,22 mmol) y el tert-butil-N-(2-aminoetil) carbamato (0,35 g, 2,22 mmol): [\alpha]^{20}_{D} + 22,3º (c 1,0, CHCl_{3}); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,41-7,38 (d, 2 H, J = 7,8 Hz), 7,31 (s, 1 H), 7,26-7,24 (d, 3 H, J = 8,0 Hz), 7,11-7,08 (dd, 1 H, J = 8,4, 1,7 Hz), 6,88-6,86 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 6,86-6,72 (m, 1 H), 5,88-5,8 (bs, 1 H), 5,78-5,73 (d, 1 H, J = 15,2 Hz), 5,28-5,22 (m, 1 H), 5,2-5,08 (bs, 1 H), 4,95-4,7(m, 2 H), 3,91 (s, 3 H), 3,87 (s, 2 H), 3,7 (s, 1 H), 3,45-3,38 (dd, 1 H, J = 13,4, 8,4 Hz), 3,35-3,0 (m, 5 H), 2,96-2,93 (dd, 1 H, J = 7,5, 1,2 Hz), 2,89-2,78 (m, 2 H), 2,65-2,4 (m, 2 H), 1,85-1,65 (m, 3 H), 1,49 (s, 9 H), 1,48-1,3 (m, 1 H), 1,27 (s, 3 H), 1,2 (s, 3 H), 1,19-1,17 (d, 3 H, 7,1 Hz), 0,91-0,87 (t, 6 H, J = 6,8 Hz); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 177,7, 170,4, 165,0, 156,0, 153,9, 141,5, 139,9, 135,6, 130,7, 129,7, 128,5, 128,1, 125,6, 124,7, 122,3, 112,2, 77,2, 75,7, 71,0, 63,0, 58,8, 56,0, 54,5, 52,9, 48,5, 46,3, 42,7, 40,5, 39,3, 36,8, 35,2, 28,3, 24,5, 22,83, 22,8, 22,6, 21,2, 13,5; IR (CHCl_{3}) 3425, 3009, 2967, 2936, 2874, 2841, 1751, 1709, 1685, 1504, 1368, 1280, 1259, 1165, 1153, 1067 cm^{-1}; Anal. (C_{44}H_{61}ClN_{4}O_{10}) C, H, N.
Ejemplo 78
113
A una solución del epóxido (se muestra más arriba) (0,065 g, 0,076 mmol) en 0,9 mL de CH_{2}Cl_{2} a -78ºC se le añadió gota a gota HCl 4 M en 1,4-dioxano (0,09 ml, 0,38 mmol). Se agitó la solución a -78ºC durante 30 min y a continuación se dejó calentar lentamente hasta temperatura ambiente. Se agitó esta 2 h más a temperatura ambiente y se concentró al vacío para dar como resultado la clorohidrina (se muestra más arriba) (0,063 g) con un rendimiento cuantitativo: [\alpha]^{20}_{D} + 16,6º (c 1,0, MeOH); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,54-8,52 (d, 1 H, J = 7,7 Hz), 7,84-7,81 (dd, 1 H, J = 8,8, 1,7 Hz), 7,63-7,53 (q, 4 H, J = 20,0, 8,2 Hz), 7,31-7,3 (d, 1 H, J = 2,0 Hz), 7,22-7,18 (dd, 1 H, J = 8,4, 2,0 Hz), 7,02-6,99 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 6,8-6,7 (m, 1 H), 6,0-5,92 (d, 1 H, J = 15,0 Hz), 5,2-5,0 (m, 2 H), 4,9-4,8 (m, 1 H), 4,6-4,4 (m, 1 H), 4,3 (s, 2 H), 4,07-4,03 (dd, 1 H, J = 9,5, 1,4 Hz), 3,86 (s, 3 H), 3,6-3,1 (m, 7 H), 2,82-2,7 (m, 2 H), 2,6-2,3 (m, 2 H), 1,9-1,6 (m, 3 H), 1,25 (s, 3 H), 1,2 (s, 3 H), 1,05-0,99 (m, 9 H); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 178,8, 173,8, 171,9, 168,3, 155,3, 144,2, 143,1, 132,2, 131,5, 131,4, 130,3, 129,4, 125,2, 123,2, 113,5, 77,2, 74,7, 72,6, 63,2, 57,6, 56,7, 52,4, 47,5, 45,5, 44,1, 41,1, 40,3, 37,8, 36,9, 36,5, 26,3, 23,7, 23,5, 22,2, 9,0; IR (KBr) 3412, 2961, 2933, 1749, 1721, 1663, 1504, 1462, 1442, 1259, 1199, 1152, 1126, 1065 cm^{-1}; FAB HRMS [M - HCl_{2}] calcd para (C_{39}H_{55}Cl_{2}N_{4}O_{8}) 777,3397, encontrado 777,3407.
Ejemplo 79
114
Se preparó el estireno (se muestra más arriba) (1,2 g) en forma de una mezcla de los isómeros E:Z a partir del aldehído 18 (1,0 g, 1,73 mmol) y el bromuro de 4-(etil-2-tert-butildimetilsiloxi) bencil trifenilfosfonio (1,23 g, 2,08 mmol) con un rendimiento del 86% de acuerdo con el procedimiento descrito más arriba para el estireno 20.
Se disolvió la mezcla de isómeros en tolueno (50 mL) y se calentó a reflujo en presencia de 1,1'-azobis (ciclohexanocarbonitrilo) (VAZO) (0,040 g, 0,16 mmol) y tiofenol (0,061 mL, 0,59 mmol) durante 3 horas. Se purificó el residuo tras la concentración mediante PLC radial (EtOAc/hexanos al 20-75%) para dar el isómero E (0,813 g, 68%) en forma de una espuma blanca: [\alpha]^{20}_{D} + 35,6º (c 0,56, MeOH); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,26-7,12 (m, 6 H), 7,07-7,04 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 6,85-6,82 (d, 1 H, J = 8,4 Hz),6,83-6,70 (m, 1 H), 6,40-6,35 (d, 1 H, J = 15,8 Hz), 6,0-5,92 (dd, 1 H, J = 15,4, 8,7 Hz), 5,77-5,72 (d, 1 H, J = 15,2 Hz), 5,46-5,43 (d, 1 H, J = 7,7 Hz), 5,07-5,02 (m, 1 H), 4,86-4,83 (m, 1 H), 4,82-4,74 (m, 1 H), 3,88 (S, 3 H), 3,78-3,74 (t, 2 H, J = 7,1 Hz), 3,44-3,37 (dd, 1 H, J = 12,5, 8,6 Hz), 3,15-3,08(m, 3 H), 2,81-2,77 (t, 2 H, J = 7,1 Hz), 2,57-2,52 (m, 2 H), 2,43-2,35 (m, 1 H),1,74-1,56 (m, 2 H),1,38-1,23 (m, 1 H), 1,22 (s, 3 H), 1,16 (s, 3 H), 1,13-1,11 (d, 3 H, J = 6,8 Hz), 0,88 (s, 9 H), 0,84-0,72 (m, 6 H), 0,0 (s, 6 H); ^{13}C RMN (75MHz, CDCl_{3}) \delta 177,9, 170,5, 170,3, 165,1, 154,0, 142,2, 138,6, 134,6, 131,5, 130,9, 129,6, 129,4, 128,2, 126,0, 125,3, 124,5, 122,5, 112,3, 92,9, 77,0, 71,4, 64,4, 56,1, 54,3, 46,5, 42,7, 42,2, 39,4, 39,2, 36,5, 35,3, 25,9, 24,5, 22,8, 22,7, 22,6, 21,2, 17,2, -5,44; IR (CHCl_{3}) 3423, 2959, 2931, 2858, 1747, 1712, 1681, 1605, 1527, 1503, 1485, 1442, 1370, 1339, 1303, 1281, 1258, 1194, 1151, 1095, 1067, 1025, 1007, 838 cm^{-1}; Anal. (C_{44}H_{63}ClN_{2}O_{8}Si) C, H, N.
Ejemplo 80
115
Se añadió piridina (0,06 mL, 0,76 mmol) seguida por el reactivo de Dess-Martin (0,161 g, 0,379 mmol) al alcohol libre del estireno (se muestra más arriba) (0,135 g, 0,189 mmol) a 0ºC en 4,5 mL de CH_{2}Cl_{2}. Se agitó la mezcla durante 30 min a 0ºC, 20 min a temperatura ambiente, a continuación se filtró usando EtOAc a través de Celite y se concentró finalmente al vacío. La purificación rápida del producto crudo mediante PLC radial (gel de sílice, EtOAc/CH_{2}Cl_{2} al 80-100%) proporcionó el aldehído deseado (0,08 g), con un rendimiento del 59% en forma de un sólido blanco: ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) 9,77-9,76 (t, 1 H, J = 2,0 Hz), 7,3-7,2 (m, 6 H), 7,06-7,02 (dd, 1 H, J = 8,3, 2,0 Hz), 6,85-6,82 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 6,81-6,7 (m, 1 H), 5,74-5,68 (d, 1 H, J = 15,3 Hz), 5,51-5,48 (d, 1 H, J = 7,8 Hz), 5,22-5,17 (m, 1 H), 4,85-4,81 (dd, 1 H, J = 10,3, 3,6 Hz), 4,77-4,71 (m, 1 H), 3,87 (s, 3 H), 3,72-3,71 (d, 2 H, J = 2,0 Hz), 3,69-3,68 (d, 1 H, J = 1,5 Hz), 3,45-3,38 (dd, 1 H, J = 13,5, 8,7 Hz), 3,17-3,0 (m, 3 H), 2,92-2,89 (dd, 1 H, J = 7,6, 1,8 Hz), 2,6-2,4 (m, 2 H), 1,8-1,6 (m, 3 H), 1,4-1,3 (m, 1 H), 1,22 (s, 3 H), 1,16 (s, 3 H), 1,16-1,13 (d, 3 H, J = 8,3 Hz), 0,86-0,82 (t, 6 H, J = 6,3 Hz).
Ejemplo 81
116
Se añadieron tetrahidrofurano (3,2 mL) y H_{2}O (3,2 mL) al aldehído (se muestra más arriba) (0,08 g, 0,112 mmol) y se enfrió la mezcla a 0ºC. Se añadieron también de manera consecutiva 2-metil-2-buteno (3,2 mL), seguido por NaClO_{2} (0,081 g, 0,896 mmol) y NaH_{2}PO_{4}H_{2}O (0,0139 g, 1,0 mmol). Se dejó calentar la mezcla hasta temperatura ambiente y se agitó de manera vigorosa durante 5 h. Se diluyó la solución con 10 mL de CH_{2}Cl_{2} y se separaron las capas. Se extrajo la capa acuosa con CH_{2}Cl_{2} (3 x 10 mL) y se secaron los extractos orgánicos combinados sobre Na_{2}SO_{4}, se filtraron y se concentraron al vacío. Se purificó el producto crudo dos veces mediante PLC radial (gel de sílice, MeOH/CH_{2}Cl_{2} 5-10-25%) para dar 0,03 g del ácido carboxílico (se muestra más arriba) con un rendimiento del 37% en forma de un sólido blanco: [\alpha]^{20}_{D} + 24,5º (c 0,33, MeOH ); ^{1}H RMN (300 MHz,CD_{3}OD) \delta 7,75-7,71 (dd, 1 H, J = 10,3, 1,9 Hz), 7,31-7,2 (m, 5 H), 7,16-7,13 (dd, 1 H, J = 8,4, 1,9 Hz), 6,97-6,95 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 6,8-6,6 (m, 1 H), 5,87-5,81 (d, 1 H, J = 15,3 Hz), 5,19-5,14 (dd, 1 H, J = 11,0, 5,0 Hz), 4,9-4,8 (m, 2 H), 4,48-4,43 (dd, 1 H,
J = 11,5, 3,5 Hz), 3,8 (s, 3 H), 3,77 (s, 1 H), 3,53 (s, 2 H), 3,5-3,4 (m, 1 H), 3,17-3,11 (dd, 1 H, J = 14,3, 3,5 Hz), 3,05-3,0 (d, 1 H, J = 13,6 Hz), 2,95-2,92 (dd, 1 H, J = 7,7, 1,7 Hz), 2,8-2,6 (m, 2 H), 2,5-2,3 (m, 1 H), 1,8-1,6 (m, 3 H), 1,4-1,2 (m, 1 H), 1,17 (s, 3 H), 1,13 (s, 3 H), 1,13-1,1 (d, 3 H, J = 9,2 Hz), 0,83-0,81 (d, 6 H, J = 6,3 Hz); ^{13}C RMN (126 MHz, CDCl_{3}) \delta 178,8, 173,7, 172,0, 168,2, 155,4, 143,4, 138,1, 136,8, 132,2, 131,2, 130,8, 129,3, 126,8, 125,4, 123,3, 113,5, 77,7, 72,4, 64,4, 60,0, 57,5, 56,6, 47,4, 44,1, 41,7, 40,7, 38,6, 36,5, 25,9, 23,4, 23,3, 21,6, 14,0; IR (KBr) 3417, 2961, 2934, 2874, 1750, 1721, 1674, 1561, 1504, 1464, 1441, 1300, 1259, 1194, 1151, 1066 cm^{-1}; FAB HRMS [M + H] calcd para (C_{38}H_{48}ClN_{2}O_{10}) 727,2997, encontrado 727,3005.
Ejemplo 82
117
A una mezcla de cloruro de [(2-metil-4-tiazolil) metil] trifenilfosfonio (0,496 g, 1,2 mmol) en 10 mL de THF a -78ºC se le añadió gota a gota una solución 1,6 M de n-butillitio (0,8 mL, 1,2 mmol). Se calentó la mezcla lentamente a temperatura ambiente y se agitó durante 45 min más. Al aldehído 18 (0,5 g, 0,865 mmol), en 15 mL de THF y a -78ºC, se le añadió gota a gota la solución de iluro naranja mediante una aguja de doble embocadura. Se agitó la mezcla resultante a -78ºC durante 2 h y a temperatura ambiente durante 1,5 h. Se añadió NH_{4}Cl saturado (30 mL) junto con acetato de etilo (30 mL), se separaron las capas y se extrajo la acuosa con acetato de etilo (2 x 20 mL). Se lavaron las capas orgánicas combinadas con agua (2 x 20 mL) y salmuera, se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron al vacío. Se purificó el residuo amarillo resultante usando cromatografía en columna (gel de sílice, EtOAc/hexanos 50-70-80% para dar 0,4 g del estireno deseado junto con óxido de trifenilfosfina. El óxido de trifenil fosfina se eliminó fácilmente mediante HPLC en fase reversa usando CH_{3}CN: H_{2}O (50:50) para dar 0,2 g (34%) del tiazol puro (se muestra más arriba) en forma de un sólido blanco: [\alpha]^{20}_{D} + 16,7º (c 1,0, CHCl_{3}); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,3-7,2 (m, 1 H), 7,18-7,17 (d, 1 H, J = 1,7 Hz), 7,06-7,03 (dd, 1 H, J = 8,5, 1,8 Hz), 6,83 (s, 1 H), 6,83-6,8 (d, 1 H, J = 9,0 Hz), 6,8-6,67 (m, 1 H), 6,37-6,35 (m, 2 H), 5,85-5,82 (d, 1 H, J = 7,9 Hz), 5,76-5,71 (d, 1 H, J = 15,1 Hz), 5,05-5,0 (dd, 1 H, J = 9,0, 6,0 Hz), 4,86-4,82 (dd, 1 H, J = 10,2, 3,6 Hz), 4,77-4,68 (m, 1 H), 3,85 (s, 3 H), 3,44-3,37 (dd, 1 H, J = 13,4, 8,6 Hz), 3,2-3,0 (m, 3 H), 2,68 (s, 3 H), 2,6-2,3 (m, 3 H), 1,8-1,6 (m, 2 H), 1,43-1,3 (m, 1 H), 1,2 (s, 3 H), 1,14 (s, 3 H), 1,12-1,1 (d, 3 H, J = 6,9 Hz), 0,79-0,78 (d, 3 H, J = 3,1 Hz), 0,77-0,76 (d, 3 H, J = 3,1 Hz); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 177,8, 170,5, 166,0, 165,2, 153,9, 153,0, 142,1, 136,7, 132,7, 130,8, 129,8, 128,1, 124,6, 124,4, 122,3, 114,1, 112,2, 76,9, 71,4, 56,0, 54,4, 46,4, 42,7, 41,9, 39,3, 36,5, 35,3, 24,5, 22,8, 22,7, 22,6, 21,2, 19,2, 17,1; IR (CHCl_{3}) 3423, 3027, 3008, 2965, 2935, 2874, 1747, 1712, 1681, 1652, 1604, 1528, 1504, 1485, 1259, 1181, 1152, 1067 cm^{-1}; Anal.(C_{34}H_{44}ClN_{3}O_{7}S) C, H, N.
Ejemplo 83
118
Al estireno (se muestra más arriba) (0,25 g, 037 mmol) se le añadieron 15 mL de acetona, 6 mL de H_{2}O, 6 mL de CH_{2}Cl_{2} y NaHCO_{3} sólido (1,0 g, 11,9 mmol) y se enfrió la mezcla a 0ºC. Se preparó una solución de oxona (0,92 g, 1,5 mmol) en 8 mL de H_{2}O y se añadió (2 mL) a la mezcla de estireno fría. Tras 30 min de agitación vigorosa a 0ºC se añadieron 2 mL más de solución de oxona y de nuevo se añadieron otros 2 mL. Se monitorizó el progreso de la reacción mediante HPLC en fase reversa y se encontró que e completó tras 2 h de agitación. Mientras aún más, a 0ºC, se detuvo la reacción súbitamente con NaHCO_{3} saturado acuoso (40 mL) y 40 mL de CH_{2}Cl_{2}. Se separaron las capas y se lavó la capa orgánica con Na_{2}SO_{3} acuoso al 10% (40 mL), seguido por NaHCO_{3} saturado acuoso (40 mL), a continuación salmuera y finalmente se secó sobre Na_{2}SO_{4}, se filtró y se concentró al vacío. Se separaron la mezcla de epóxidos b y a (54:46) mediante HPLC en fase inversa (50:50) de CH_{3}CN:H_{2}O para proporcionar 0,09 g del epóxido b (se muestra más arriba) en forma de un sólido blanco con un rendimiento del 35%: [\alpha]^{20}_{D} + 26,0º (c 1,0, CHCl_{3}); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,19-7,18 (d, 2 H, J = 1,8 Hz), 7,1 (s, 1 H), 7,06-7,03 (dd, 1 H, J = 8,5, 1,9 Hz), 6,85-6,82 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 6,82-6,7 (m, 1 H), 5,76-5,71 (d, 1 H, J = 15,2 Hz), 5,49-5,47 (d, 1 H, J = 7,8 Hz), 5,23-5,18 (m, 1 H), 4,88-4,84 (dd, 1 H, J = 10,3, 3,6 Hz), 4,8-4,7 (m, 1 H), 3,88 (s, 3 H), 3,79 (d, 1 H, J = 0,93 Hz), 3,45-3,38 (dd, 1 H, J = 13,4, 8,6 Hz), 3,35-3,32 (d, 1 H, J = 7,2 Hz), 3,2-3,0 (m, 3 H), 2,7 (s, 3 H), 2,6-2,4 (m, 2 H), 1,8-1,6 (m, 3 H), 1,4-1,3 (m, 1 H), 1,23 (s, 3 H), 1,16 (s, 3 H), 1,14-1,12 (d, 3 H, J = 6,8 Hz), 0,89-0,87 (d, 3 H, J = 6,5 Hz), 0,86-0,84 (d, 3 H, J = 6,4 Hz); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 177,9, 170,33, 170,3, 166,9, 165,0, 154,0, 151,9, 141,8, 130,8, 129,5, 128,2, 124,5, 122,4, 116,4, 112,3, 75,8, 71,1, 61,3, 56,1, 55,2, 54,3, 46,4, 42,7, 40,3, 39,3, 36,6, 35,2, 24,5, 22,85, 22,8, 22,6, 21,2, 19,1, 13,3; IR (CHCl_{3}) 3425, 3007, 2964, 2936, 2874, 2841, 1751, 1711, 1682, 1604, 1528, 1503, 1485, 1464, 1303, 1259, 1185, 1152, 1067 cm^{-1}; Anal. (C_{3},H_{44}ClN_{3}O_{7}S) C, H, N.
Ejemplo 84
119
Se preparó estireno (se muestra más arriba) (0,5 g), a partir del aldehído 18 (1,3 g, 2,2 mmol) y bromuro de 2.fluorobenciltrifenilfosfonio (1,7 g, 3,8 mmol) con un rendimiento del 33% de acuerdo con el procedimiento descrito más arriba para el estireno 20: [\alpha]^{20}_{D} + 17,0º (c 1,16, CHCl_{3}); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,40-7,34 (m, 1 H), 7,23-6,96 (m, 6 H), 6,83-6,80 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 6,78-6,70 (m, 1 H), 6,57-6,52 (d, 1 H, J = 16,0 Hz), 6,10-6,02 (dd, 1 H, J = 8,8, 16,0 Hz), 5,76-5,71 (d, 1 H, J = 15,3 Hz), 5,50-5,47 (d, 1 H, J = 7,8 Hz), 5,05-4,95 (m, 1 H), 4,85-4,80 (dd, 1 H, J = 9,6, 3,1 Hz), 4,75-4,69 (m, 1 H), 3,85 (s, 3 H), 3,42-3,34 (dd, 1 H, J = 13,5, 8,7 Hz), 3,13-3,05 (m, 3 H), 2,56-2,51 (m, 2 H), 2,37-2,33 (m, 1 H), 1,68-1,58 (m, 2 H), 1,34-1,23 (m, 1 H), 1,20 (s, 3 H), 1,13 (s, 3 H), 1,13-1,11 (d, 3 H, J = 7,3 Hz), 0,79-0,70 (m, 6 H); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 177,9, 170,5, 170,4, 165,1, 154,0, 142,0, 137,4, 133,0, 132,9, 130,8, 129,6, 128,8, 128,2, 127,0, 126,9, 124,6, 124,1, 115,9, 115,5, 112,3, 76,9, 71,4, 56,1, 54,4, 46,4, 42,7, 42,6, 39,4, 36,5, 35,3, 24,5, 22,8, 22,7, 22,6, 21,1, 17,2; IR (CHCl_{3}) 3423, 2965, 2935, 2874, 1747, 1711, 1681, 1605, 1527, 1503, 1487, 1457, 1441, 1370, 1340, 1321, 1280, 1259, 1151, 1093, 1067, 1009, 970 cm^{-1}; Anal. (C_{36}H_{44}ClFN_{2}O_{7}) C, H, N.
Ejemplo 85
120
A una solución del estireno (se muestra más arriba) (0,26 g, 0,387 mmol) en 1,3 mL de CH_{2}Cl_{2} a 0ºC, se le añadió ácido 3-cloroperoxibenzoico (0,07 g, 0,41 mmol) y tolueno (0,65 mL) y se continuó la agitación a 0ºC durante 30 minutos. Se retiró el baño de hielo y se dejó agitar la reacción a temperatura ambiente durante 24 horas. Se purificó el residuo tras la concentración mediante HPLC en fase reversa (CH_{3}CN/ H_{2}O) para dar el epóxido b (se muestra más arriba) en forma de una espuma blanca (0,058 g, corregido en un 24% respecto del estireno recuperado: [\alpha]^{20}_{D} + 18,98º (c 1,41, CHCl_{3}); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,30-7,00 (m, 6 H), 6,86-6,83 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 6,80-6,75 (m, 1 H), 5,76-5,71 (d, 1 H, J = 15,1 Hz), 5,47-5,45 (d, 1 H, J = 7,8 Hz), 5,23-5,20 (m, 1 H), 4,86-4,82 (dd, 1 H, J = 10,3, 3,5 Hz), 4,78-4,70 (m, 1 H), 4,01 (s, 1 H), 3,88 (s, 3 H), 3,45-3,38 (dd, 1 H, J = 13,4, 8,6 Hz), 3,12-3,08 (m, 3 H), 2,91-2,88 (d, 1 H, J = 7,8 Hz), 2,59-2,53 (m, 2 H), 1,80-1,71 (m, 3 H), 1,46-1,25 (m, 1 H), 1,23 (s, 3 H), 1,16 (s, 3 H), 1,16-1,14 (d, 3 H, J = 7,2 Hz), 0,87-0,83 (m, 6 H); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 178,1, 170,5, 170,3, 165,0, 142,0, 131,0, 129,7, 129,6, 128,3, 126,1 126,08, 124,65, 124,5, 122,6, 115,5, 115,2, 112,4, 76,0, 71,2, 62,6, 56,2, 54,4, 53,5, 46,5, 42,8, 40,6, 39,4, 36,9, 35,3, 24,7, 22,9, 22,8, 21,3, 13,8; IR (CHCl_{3}) 3417, 2962, 2948, 1754, 1721, 1681, 1653, 1534, 1504, 1473, 1459, 1441, 1303, 1282, 1258, 1191, 1148, 1127, 1066 cm^{-1}; FAB HRMS [M + H] para (C_{36}H_{45}ClFN_{2}O_{8}) cald 687,2848, encontrado 687,2857.
Ejemplo 86
500
Se preparó el estireno (se muestra más arriba) (0,85 g), en forma de una mezcla E/Z, a partir del aldehído 18 (2,0 g, 3,45 mmol) y bromuro de 3-fluorobencil trifenilfosfonio (1,92 g, 4,25 mmol) con un rendimiento del 37% de acuerdo con el procedimiento descrito más arriba para el estireno 20. Se disolvió la mezcla de isómeros en benceno (25 mL) y se calentó a reflujo en presencia de 1,1'-azobis (ciclohexanocarbonitrilo) (VAZO) (0,04 g, 0,16 mmol) y tiofenol (0,06 mL, 0,58 mmol) durante 20 horas. Se purificó el residuo tras la concentración mediante PLC radial EtOAc/hexanos al 20-100%) para dar el isómero E (0,652 g, 77%) en forma de una espuma blanca: [\alpha]^{20}_{D} + 30,55º (c 0,98, CHCl_{3}); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,30-7,01 (m, 8 H), 6,95-6,88 (m, 1 H), 6,86-6,83 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 6,81-6,72 (m, 1 H), 6,40-6,35 (d, 1 H, J = 15,9 Hz), 6,07-5,99 (dd, 1 H, J = 8,8, 15,9 Hz), 5,78-5,73 (d, 1 H, J = 15,1 Hz), 5,50-5,47 (d, 1 H, J = 7,9 Hz), 5,08-5,02 (dd, 1 H, J = 9,7, 6,7 Hz), 4,87-4,82 (dd, 1 H, J = 9,7, 3,0 Hz), 4,78-4,71 (m, 1 H), 3,88 (s, 3 H), 3,45-3,37 (dd, 1 H, J = 13,5, 8,6 Hz), 3,15-3,08 (m, 3 H), 2,59-2,52 (m, 2 H), 2,43-2,34 (m, 1 H), 1,72-1,63 (m, 2 H), 1,36-1,26 (m, 1 H), 1,22 (s, 3 H), 1,16 (s, 3 H), 1,15-1,12 (d, 3 H, J = 6,9 Hz), 0,80-0,73 (m, 6 H); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 177,8, 170,5, 170,4, 165,1, 165,0, 153,9, 141,9, 137,3, 131,7, 130,8, 130,6, 130,0, 129,6, 128,1, 124,6, 122,4, 114,4, 114,1, 112,6, 112,2, 76,8, 71,3, 56,0, 54,4, 46,4, 42,7, 42,1, 39,5, 36,5, 35,2, 24,5, 22,8, 22,64, 22,6, 21,2, 17,2; IR (CHCl_{3}) 3423, 3008, 2965, 2936, 2874, 1747, 1712, 1680, 1652, 1585, 1528, 1503, 1486, 1464, 1442, 1320, 1303, 1259, 1193, 1147, 1127, 1067, 973 cm^{-1}; Anal. (C_{36}H_{44}ClFN_{2}O) C, H, N.
Ejemplo 87
501
A una solución del estireno anterior (0,622 g, 0,927 mmol) en 3,0 mL de CH_{2}Cl_{2} a 0ºC, se le añadieron ácido 3-cloroperoxibenzoico (0,170 g, 0,985 mmol) y tolueno (1,5 mL) y se continuó la agitación a 0ºC durante 30 minutos. Se retiró el baño de hielo y se dejó agitar la reacción a temperatura ambiente durante 22 horas. Se purificó el residuo tras la concentración mediante HPLC en fase reversa (CH_{3}CN/H_{2}O para dar el epóxido b (se muestra más arriba) en forma de una espuma amarilla (0,067 g, 11%): [\alpha]^{20}_{D} + 26,23º (c 1,54, CHCl_{3}); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,37-6,92 (m, 7 H), 6,86-6,83 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 6,82-6,73 (m, 1 H), 5,75-5,70 (d, 1 H, J = 15,5 Hz), 5,48-5,45 (d, 1 H,
J = 7,8 Hz), 5,22-5,17 (m, 1 H), 4,85-4,81 (dd, 1 H, J = 3,1, 9,8 Hz), 4,76-4,70 (m, 1 H), 3,88 (s, 3 H), 3,68-3,67 (d, 1 H, J = 0,89 Hz), 3,46-3,38 (dd, 1 H, J = 8,6, 13,5 Hz), 3,13-3,07(m, 3 H), 2,90-2,87 (dd, 1 H, J = 1,5, 7,4 Hz), 2,60-2,37 (m, 2 H), 1,82-1,64 (m, 3 H), 1,36-1,25 (m, 1 H), 1,22 (s, 3 H), 1,16 (s, 3 H), 1,15-1,12 (d, 3 H, J = 6,9 Hz), 0,88-0,83 (m, 6 H); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 177,9, 170,4, 165,0, 154,0, 141,6, 139,5, 130,8, 130,4, 130,2, 129,6, 128,2, 124,7, 122,4, 121,3, 115,6, 115,3, 112,3, 112,2, 75,8, 71,1, 63,2, 58,2, 56,1, 54,5, 46,4, 42,8, 40,4, 39,4, 36,8, 35,3, 24,5, 22,85, 22,82, 22,7, 21,2, 13,4; IR (KBr) 3416, 3034, 2963, 2934, 2874, 1751, 1721, 1680, 1658, 1539, 1504, 1473, 1442, 1304, 1280, 1258, 1192, 1144, 1066 cm^{-1}; Anal. (C_{36}H_{44}ClFN_{2}O_{8}) C, H, N.
Ejemplo 88
502
Se preparó el estireno (se muestra más arriba) (1,24 g), en forma de una mezcla E/Z, a partir del aldehído 18 (1,5 g, 2,6 mmol) y bromuro de 4-flurobencil trifenilfosfonio (1,4 g, 3,1 mmol) con un rendimiento del 71% de acuerdo con el procedimiento descrito más arriba para el estireno 20. Se disolvió la mezcla de isómeros en benceno (40 mL) y se calentó a reflujo en presencia de 1,1'-azobis (ciclohexanocarbonitrilo) (VAZO) (0,050 g, 0,20 mmol) y tiofenol (0,076 mL, 0,74 mmol) durante 24 horas. Se purificó el residuo tras la concentración mediante PLC radial (EtOAc/hexanos al 20-100%) para dar el isómero E (1,06 g) en forma de una espuma blanca que contenía óxido de trifenilfosfina mediante RMN. Se purificó una muestra mediante HPLC en fase reversa (60:40) CH_{3}CN:H_{2}O para dar 0,092 g de sólido puro: [\alpha]^{20}_{D} + 27,49º (c 1,05, CHCl_{3}); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,31-6,96 (m, 7 H), 6,85-6,83 (d, 1 H, J = 8,5 Hz), 6,81-6,74 (m, 1 H), 6,39-6,34 (d, 1 H, J = 15,8 Hz), 5,96-5,88 (dd, 1 H, J = 8,8, 15,8 Hz), 5,77-5,72 (d, 1 H, J = 15,2 Hz), 5,49-5,47 (d, 1 H, J = 7,7 Hz), 5,07-5,02 (m, 1 H), 4,86-4,83 (dd, 1 H, J = 9,2, 2,5 Hz), 4,82-4,73 (m, 1 H), 3,87 (s, 3 H), 3,45-3,38 (dd, 1 H, J = 13,4, 8,5 Hz), 3,14-3,08 (m, 3 H),2,57-2,52 (m, 2 H), 2,43-2,34 (m, 1 H), 1,71-1,58 (m, 2 H), 1,36-1,29 (m, 1 H), 1,22 (s, 3 H), 1,16 (s, 3 H), 1,14-1,11 (d, 3 H, J = 6,9 Hz), 0,78-0,73 (m, 6 H); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 177,8, 170,5, 170,3, 165,1, 160,2, 154,0, 142,0, 137,6, 132,9, 132,8, 130,8, 130,4, 130,0, 129,6, 128,2, 127,6, 127,5, 124,6, 122,4, 115,6, 115,2, 112,2, 71,3, 56,0, 54,4, 46,4, 42,7, 42,1, 39,5, 36,4, 35,2, 24,5, 22,8, 22,6, 21,2, 17,2; IR (KBr) 3421, 3289, 2862, 2933, 1751, 1722, 1678, 1604, 1534, 1509, 1259, 1228, 1149, 1066, 1024, 1011, 971, 815 cm^{-1}; Anal. (C_{36}H_{44}ClFN_{2}O_{7}) C, H, N.
Ejemplo 89 
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503 
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A una solución del estireno (se muestra más arriba) (0,906 g, 1,35 mmol) en 4,5 mL de CH_{2}Cl_{2} a 0ºC se le añadió ácido cloroperoxibenzoico (0,25 g, 1,45 mmol) y tolueno (2,2 mL) y se continuó la agitación a 0ºC durante 30 minutos. Se retiró el baño de hielo y se dejó agitar la reacción a temperatura ambiente durante 23 horas. Tras diluir con 20 mL de CH_{2}Cl_{2}, se lavó la mezcla de reacción con Na_{2}S_{2}O_{5} (1 x 10 mL), agua (1 x 10 mL), NaHCO_{3} saturado (1 x 10 mL) y salmuera (1 x 10 mL) y finalmente se secó sobre Na_{2}SO_{4}. La filtración y concentración proporcionaron 0,814 g del producto en forma de una mezcla de los epóxidos b/a. Se purificó una porción de 0,23 g mediante HPLC de fase inversa (CH_{3}CN/ H_{2}O) para dar 0,073 g del epóxido b (se muestra más arriba) en forma de una espuma blanca: [\alpha]^{20}_{D} + 25,6º (c 0,626, CHCl_{3}); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,26-7,03 (m, 7 H), 6,85-6,83 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 6,82-6,72 (m, 1 H), 5,74-5,69 (d, 1 H, J = 15,2 Hz), 5,44-5,42 (d, 1 H, J = 7,9 Hz), 5,23-5,18 (m, 1 H), 4,85-4,81 (dd, 1 H, J = 9,7, 2,9 Hz), 4,77-4,73 (m, 1 H), 3,88 (s, 3 H), 3,66 (s, 1 H), 3,46-3,39 (dd, 1 H, J = 13,5, 8,8 Hz), 3,12-3,07 (m, 3 H), 2,89-2,87 (dd, 1 H, J = 1,5, 7,7 Hz), 2,60-2,54 (m, 1 H), 2,49-2,41 (m, 1 H), 1,81-1,65 (m, 3 H), 1,34-1,25 (m, 1 H), 1,22 (s, 3 H), 1,16 (s, 3 H), 1,15-1,13 (d, 3 H, J = 7,0 Hz),0,87-0,82 (m, 6 H); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 177,8, 170,3, 164,9, 164,7, 154,0, 141,6, 137,8, 132,4, 130,7, 129,6, 128,1, 127,3, 127,2, 124,6, 122,4, 115,8, 115,5, 112,2, 75,8, 71,0, 63,0, 58,2, 56,0, 54,4, 46,3, 42,7, 40,4, 39,3, 36,7, 35,2, 23,5, 22,8, 22,76, 22,6, 21,1, 13,3; IR (CHCl_{3}) 3426, 3030, 3006, 2964, 2936, 1752, 1711, 1683, 1608, 1514, 1485, 1442, 1303, 1281, 1259, 1188, 1155, 1067, 838 cm^{-1}; Anal. (C_{36}H_{44}ClFN_{2}O_{8}) C, H, N.
Ejemplo 90 
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504 
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Se añadió gota a gota una solución 4 M de HCl en dioxano (0,4 mL, 1,6 mmol) durante 5 minutos a una solución a -70ºC de epóxido b (se muestra más arriba) (0,44 g, 0,64 mmol) en 30 mL de CH_{2}Cl_{2}. Tras 2 h más de agitación a -70ºC, se concentró la solución al vacío. Se purificó el producto crudo mediante PLC radial (gel de sílice, EtOAc/CH2Cl2 30-50-100%) seguido por HPLC en fase reversa (50:50) de CH_{3}CN:H_{2}O para dar 0,152 g (33%) de la clorohidrina deseada (se muestra más arriba) como una espuma blanca:
[\alpha]^{20}_{D} + 60,0 (c 2,62, CHCl_{3}); ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,41-7,05 (m, 7H), 6,87-6,84 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,83-6,77 (m, 1H), 5,80-5,75 (d, 1H, J = 15,4 Hz), 5,52-5,49 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 5,13-5,21 (m, 1H), 4,94-4,90 (dd, 1H, J = 9,7,3,2 Hz), 4,75-4,72 (m, 1H), 4,67-4,63 (d, 1H, J = 9,5 Hz), 4,00-3,95 (m, 1H), 3,89 (s, 3H), 3,42-3,35 (dd, 1H, J = 8,3, 13,5 Hz), 3,20-3,02 (m, 3H), 2,71-2,65 (m, 1H), 2,49-2,37 (m, 2H), 1,82-1,63 (m, 2H), 1,51-1,38 (m, 2H), 1,23 (s, 3H), 1,17 (s, 3H), 1,04-1,02 (d, 3H, J = 7,0 Hz). 0,97-0,85 (m, 6H); ^{13}C RMN (63 MHz, CDCl_{3}) \delta 177,6, 170,5, 170,3, 165,3, 160,7, 153,9, 142,2, 137,5, 134,5, 130,8, 129,8, 129,7, 128,2, 124,6, 122,2, 76,1, 74,0, 71,1, 61,4, 56,1, 54,5, 46,4, 42,7, 39,6, 38,4, 36,3, 35,1, 24,8, 23,0, 22,9, 22,7, 21,5, 8,6; IR (CHCl_{3}) 3423, 2965, 2935, 2873, 1751, 1715, 1679, 1607, 1528, 1504, 1485, 1464, 1442, 1302, 1281, 1193, 1159, 1152, 1127, 1067 cm^{-1}; Anal. (C_{36}H_{45}Cl_{2}N_{2}O_{8}) C, H, N.
\newpage
Ejemplo 91 Criptoficinas-151, -152, -153, -154, 155, -156, -159, 160, -161, -166, 167, -172, -181, -188, 234, 236, 238, 247, 251 y 255 
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TABLA 1
505
TABLA 2 
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506 
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Se describe a continuación el procedimiento típico adaptado para el acoplamiento de la criptoficina-108 con una variedad de trifenilfosforanos usando la preparación de criptoficina-152 como un ejemplo ilustrativo.
Criptoficina-152: Se generó cinamiltrifenilfosforano mediante el tratamiento de cloruro de cinamil trifenilfosfonio (0,311 g, 0,750 mmol) en THF (5,7 mL) con butillitio (300 \muL de solución 2,5 M en hexano, 0,750 mmol) a -78ºC y dejando calentar lentamente los contenidos hasta la temperatura ambiente. Se añadió lentamente el cinamiltrifenilfosforano de esta mezcla de reacción (1,46 mL, 0,812 mmol) al aldehído (68,6 mg, 0, 122 mmol) en THF (3 mL) a -78ºC y se continuó la agitación durante 2 h. Se condujo la mezcla de reacción a la temperatura ambiente, se trató con NH_{4}Cl saturado (5 mL) seguido por agua (15 mL) y se extrajo con acetato de etilo (40 mL). Se lavó la capa orgánica con agua, se secó sobre MgSO_{4} y se evaporó. Se aplicó el residuo a una columna ODS pequeña y se eluyó con H_{2}O/CH_{3}CN 1:1 y H_{2}O/CH_{3}CN 1:3. Se evaporó la última fracción para obtener una mezcla de criptoficina-152 y su isómero Z (E/Z 7:3, 64,3 mg, 80%).
Se hizo reaccionar el aldehído (criptoficina-108) usando el mismo procedimiento experimental con 1-naftilmetil trifenilfosforano, 3-metoxibencil trifenilfosforano, 3,5-dimetoxibencil trifenilfosforano, metoximetil trifenilfosforano, 2,4-dimetibencil trifenilfosforano, 3-furanmetil trifenilfosforano, p-trifluometilbencil trifenilfosforano, 2-metilbencil trifenilfosforano, 3,5-dimetilbencil trifenilfosforano, 2-naftilmetil trifenilfosforano, 2-fluorobencil trifenilfosforano, 3,5-diflurobencil trifenilfosforano, 4-hidroximetilbenciltrifenilfosforano, 4-(t-Boc-aminoetil) benciltrifenilfosforano, 3-(N-t-Boc-amino) benciltrifenilfosforano y feniltiometiltrifenilfosfonio para obtener criptoficinas-151, -153, -154, -156, -159, -160, -161, -166, -167, -172, -181, -188, -234, -236, -247 y 255 respectivamente.
Se usó butillitio como base en la generación de iluros a partir de sus cloruros de trifenilfosfonio o sales de bromuro correspondientes, excepto porque se usó fenillitio en la preparación de metoximetiltrifenilfosforano, 3-furanmetil trifenilfosforano y 4-hidroximetilbenciltrifenilfosforano.
Una reacción similar que implicaba bromuro de hidroximetiltrifenilfosfonio, n-butillitio y criptoficina-108 dio como resultado un análogo inesperado de criptoficina 155.
Se adaptó un procedimiento ligeramente modificado para la preparación del carboxi metilo análogo de criptoficina-251. Se trató una solución de THF (5 mL) de bromuro de 4-(carboximetil) benciltrifenil-fosfonio (0,289 g, 0,59 mmol) con fenillitio (1,8 M, 653 \muL; 1,18 mmol) a -78ºC durante 5 min y se transfirió al matraz en un baño de agua helada. Tras 30 min, se añadieron lentamente 0,9 mL de esta mezcla de reacción a un matraz que contenía criptoficina-108 (35 mg) en 3 mL de THF a -78ºC y se dejó agitar los contenidos durante 2 h. Se acidificó la mezcla de reacción con HCl 1N (1 mL), se añadió agua (30 mL) y se extrajo con acetato de etilo (30 mL x 2). Se secó la capa orgánica sobre MgSO_{4} y se evaporó. Se sometió el residuo a cromatografía instantánea sobre sílice ODS eluyendo con H_{2}O/CH_{3}CN 1:1 y H_{2}O/CH_{3}CN 35:65. Se evaporó y purificó la última fracción en una columna HPLC de fase reversa (Econosil C18,
10 \mu, 250 x 10 mm, 3 mL/min, solución de ácido acético al 0,5% en H_{2}O/CH_{3}CN 2:3) para obtener la criptoficina-251 (10 mg).
En las tabla 1 y 2 se resumen los datos experimentales claves implicados en la generación de análogos de estireno y los datos de citotoxicidad.
Sales de trifenilfosfonio: Están comercialmente disponibles el cloruro de cinamil trifenilfosfonio, cloruro de 1-naftilmetil trifenilfosfonio, cloruro de metoximetiltrifenilfosfonio y bromuro de 2-metilbencil trifenilfosfonio, en donde el cloruro de 3-metoxibencil trifenilfosfonio, el cloruro de 3,5-dimetoxibencil trifenilfosfonio, y el cloruro de 2,4 dimetilbencil trifenilfosfonio se prepararon mediante trifenilfosfina sometida a reflujo con un exceso ligero del cloruro correspondiente en tolueno durante 4 h. El bromuro de 4-trifluometilbencil trifenilfosfonio, bromuro de 3-fluoronmetilbenciltrifenilfosfonio, el bromuro de 2-naftilmetiltrifenilfosfonio, el bromuro de 3,5-difluorobencil trifenilfosfonio, el bromuro de 4-(t-butildimetilsililoximetil) benciltrifenilfosfonio, el bromuro de 4-(N-t-Boc-aminoetil) benciltrifenilfosfonio y el bromuro de 3-(N-t-Boc-amino) benciltrifenil-fosfonio se prepararon tratando los bromuros correspondientes con trifenilfosfina en tolueno a temperatura ambiente durante 12 h. El bromuro de 4-(carboximetil) benciltrifenilfosfonio se preparó tratando el bromuro con trifenilfosfina en una solución 5:1 de tolueno/THF a temperatura ambiente durante 48 h. El bromuro de 3-flurometilo, el bromuro de 2.naftalénmetilo y el bromuro de 3-(N-t-Boc-amino) bencilo se produjeron de manera respectiva a partir de 3-furonmetanol, 2-naftalenmetanol y alcohol de 3-(N-t-Boc-amino) bencilo tras el tratamiento con PBr_{3} en THF a -78ºC. ^{ref}. Están disponibles comercialmente 3-furometanol y 2-naftalénmetanol - El alcohol de 3-(N-t-Boc-amino) bencilo se preparó a partir de una muestra comercial del alcohol de 3 aminobencilo. El bromuro de 4-(t-butildimetilsilioximetil bencilo) y el bromuro de 4-(N-t-Boc-aminoetil) bencilo se prepararon a partir de muestras comerciales del metiléster del ácido 4-hidroximetilbenzoico y el ácido 4-aminometilbenzoico usando los siguientes procedimientos experimentales.
Bromuro de 4-(t-butildimetilsililoximetil) bencilo: Se trató una mezcla del metiléster del ácido 4-hidroximetil-benzoico (2 g) y trietilamina (3,36 mL) en diclorometano (15 mL) con t-butildimetilsililtriflato (4,47 g) a -78ºC. Tras 30 min se dejaron calentar los contenidos hasta la temperatura ambiente y se continuó la agitación durante otros 30 min. Se añadieron el agua (30 mL) y el acetato de etilo (60 mL) a la mezcla de reacción y se lavó la capa orgánica con KHSO_{4} 0,3 M, agua y salmuera, se secó sobre MgSO_{4} y se filtró. Se evaporó el solvente y se sometió el residuo a cromatografía instantánea en columna de sílice eluyendo con EtOAc/hexano al 10% para obtener el metil éster del ácido 4-(t-butildimetilsililoximetil) benzoico (3,3 g, rendimiento del 95%).
Se enfrió hidruro de litioaluminio (0,21 g) dispersado en dietil éter (20 mL) a -78ºC bajo argón y se trató gota a gota con el metil éster del ácido 4-(t-butildimetilsililoximetil) benzoico (2,05 g) en 10 mL de dietil éter. Tras 30 minutos se añadió acetato de etilo (2 mL) para disipar el hidruro en exceso, y a continuación se añadió cloruro de amonio saturado (1,5 mL). Se separó el precipitado mediante filtración y se lavó con éter. Se evaporó el solvente para dar el alcohol de 4-(t-butildimetilsililoximetil) bencilo (1,71 g, rendimiento del 93%).
Se disolvió el alcohol de 4-(t-butildimetilsililoximetil) bencilo (1,7 g) en THF (15 mL) y se trató con tribromuro de fósforo (0,609 g) a -78ºC. Tras 30 min, se diluyó la reacción con dietil éter (80 mL) y se lavó con bicarbonato de sodio saturado (30 mL), agua y salmuera, se secó sobre MgSO_{4}. Se evaporó la capa de éter y se sometió el residuo a cromatografía instantánea en sílice usando EtOAc/hexano al 5% como eluyente para obtener el bromuro de 4-(t-butildimetilsililoximetil) bencilo (1,05 g, rendimiento del 49%).
Bromuro de 4-(N-t-Boc-aminoetil) bencilo: Se añadió ácido 4-(aminoetil) benzoico (0,75 g, 5 mmol) a una solución de carbonato de di-t-butilo (2,18 g, 10 mmol) en trietilamina-dimetilformamida (1:9, 7,5 mL). A temperatura ambiente y se calentó la mezcla de reacción a 40-50ºC durante 10 min. Después que se disolvieran los aminoácidos continuó la agitación a temperatura ambiente durante otra hora. Se eliminó el solvente bajo vacío y se acidificó el residuo con HCl diluido (pH > 2) y se extrajo de manera inmediata con EtOAc y se secó la capa orgánica sobre MgSO_{4}. Se trató el residuo obtenido tras la eliminación del solvente con un exceso de diazometano (generado a partir de diazald) en éter durante 30 min y el exceso de diazometano se descompuso mediante ácido acético. Se cromatografió el residuo obtenido tras la eliminación del solvente sobre columna de sílice (20 g) usando hexanos/EtOAc (9:1) para la elusión para dar metil 4-(N-t-Boc-aminoetil) benzoato (1,07 g, rendimiento del 81%).
A una suspensión fría de LiAlH_{4} (60 mg, 1,5 mmol) en éter (5 mL) a -78ºC se le añadió gota a gota una solución de metil 4-(N-t-Boc-aminoetil) benzoato (0,8 g, 3 mmol) en éter (5 mL) y se dejaron calentar los contenidos hasta la temperatura ambiente. Tras 3 h, se añadió una cantidad adicional d LiAlH_{4} (100 mg) y se continuó la reacción a temperatura ambiente durante 10 min más. Se destruyó el exceso de LiAlH_{4} con EtOAc seguido por cloruro de amonio saturado (1,0 mL). Se filtró el sólido precipitado y se lavó con éter. Se evaporó el filtrado para dar el alcohol de 4-(N-t-Boc-aminoetil) bencilo (250 mg, 35%).
Se trató una solución de alcohol de 4-(N-t-Boc-aminoetil) bencilo (250 mg, 1,1 mmol) en THF (5 mL) con tribromuro de fósforo (30 \muL, 0,32 mmol) a -78ºC durante 2 h. Tras este período, se disipó la reacción con NaHCO_{3} sólido (50 mg) y se filtró para eliminar los sólidos y se evaporó el filtrado para dar el bromuro de 4-(t-Boc-aminoetil) bencilo (300 mg, 95%).
Se separaron los isómeros deseados E a partir de las mezclas E/Z correspondientes mediante cristalización en soluciones de acetato de etilo/éter de etilo. En el caso del cinamilo y otros pocos análogos con selectividad E/Z insignificante, se sometió la mezcla cruda a la isomerización usando el siguiente procedimiento ilustrativo descrito para el análogo de cinamilo, criptoficina-152.
Isomerización: Se disolvió una mezcla de criptoficina-152 y su isómero cis (E/Z 7:3, 62 mg, 0,10 mmol) en benceno (3 mL) y se mantuvo a reflujo con tiofenol (10 \muL, 0,10 mmol) y 1,1'-azobis (carbonitrilo) (12 mg, 0,05 mmol). Tras 16 h, se condujo la mezcla a la temperatura ambiente y se aplicó a una columna pequeña de sílice. Se lavó la columna con diclorometano y se eluyó el compuesto con acetato de etilo/diclorometano 1:1. Se evaporó el solvente para dar como resultado la criptoficina-151 (53 mg, 85%), contaminada aún con aproximadamente un 5% de su isómero cis.
Criptoficina-151: EIMS m/z (intensidad relativa) 688/690 (3,3/1,5), 412/414 (18/6), 277 (100), 233 (18), 195/197 (16/6), 193 (29), 141 (38); EIMS de alta resolución m/z 688,2900 (calcd para C_{39}H_{45}ClN_{2}O_{7}) \Delta 1,5 mmu). Véase la tabla 3 para los datos de ^{1}H RMN, véase la tabla 4 para los datos de ^{13}C RMN.
Criptoficina-152: EIMS m/z (intensidad relativa) 664/666 (24/7), 412/414 (21/7), 253 (100), 91 (85); EIMS de alta resolución m/z 664,2939 (calcd para C_{37}H_{45}ClN_{2}O_{7}), \Delta - 2,3 mmu). Véase la tabla 3 para los datos de ^{1}H RMN; véase la tabla 4 para los datos de ^{13}C RMN.
Criptoficina-153: EIMS m/z (intensidad relativa) 668/670 (3,7/1,4), 412/414 (32/12), 257 (62), 198 (100), 195/197 (36/11); EIMS de alta resolución m/z 668,2817 (calcd para C_{36}H_{45}ClN_{2}O_{8}, \Delta 4,7 mmu). Véase la tabla 3 para los datos de ^{1}H RMN; véase la tabla 4 para lo datos de ^{13}C RMN.
Criptoficina-154: EIMS m/z (intensidad relativa) 698/700 (2,5/0,8), 412/414 (18/5), 287 (28), 228 (35), 195/197 (18/6), 139 (100); EIMS de alta resolución m/z 698,2946 (calcd para C_{37}H_{47}ClN_{2}O_{9}), \Delta 2,5 mmu). Véase la tabla 3 para los datos de ^{1}H RMN: véase la tabla 4 para los datos de ^{13}C RMN.
Criptoficina-155: EIMS m/z (intensidad relativa) 604/606 (20/6), 412/414 (24/8), 280/282 (24/8), 195/197 (100/33); EIMS de alta resolución m/z 604,2894 (calcd para C_{32}H_{45}ClN_{2}O_{7}, \Delta 2,1 mmu). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) unidad \delta de amino o hidroxi ácido (posición del carbono, multiplicidad; J en Hz) A 5,76 (2, d; 15,5), 6,66 (3, ddd; 15,5, 9,5 y 5,9), 2,32 - 2,44 (4-H2, m), 4,92 (5, m), 2,66 - 2,76 (6, m), 0,98 (6-Me, d; 6,8), 5,21 (7, t; 10,9), 5,46 (8, dt; 10,9 y 7,4), 2,00 (9- H_{2}, m), 1,38 (10-H_{2} m), 0,91 (10-Me, t; 7,5); B 4,81 (2, m), 5,70 (2-NH, d; 8,5), 3,04 (3, dd; -14,5 y 7,2), 3,14 (3, dd; -14,5 y 5,6), 7,22 (5, d; 2,2), 3,87 (7-OMe, s), 6,84 (8, d; 8,5), 7,08 (9, dd; 8,5 y 2,2); C 2,66 - 2,76 (2, m), 1,22 (2-Me, d; 7,4), 3,27 (3, dt; 13,5 y 6,8), 3,52 (3, m), 6,93 (3-NH, br t; 6,4); D 4,86 (2, dd; 9,8 y 3,5), 1,49 (3, m), 1,71-1,80 (3/4, m), 0,90 (4-Me, d; 6,0), 0,94 (5, d; 6,5); ^{13}C RMN (CDCl_{3}) unidad \delta (posición del carbono) A 165,5 (1), 125,0 (2), 141,6 (3), 36,5 (4), 77,9 (5), 36,2 (6), 17,7 (6-Me), 130,0 (7), 131,6 (8), 29,6 (9-H2), 22,8 (10-H2), 13,8 (11-H3); B 171,0^{a} (1), 53,5 (2), 35,1 (3), 129,9 (4), 131,0 (5), 122,4 (6), 153,9 (7), 56,1 (7-OCH_{3}), 112,2 (8), 128,4 (9); C 175,6 (1), 38,3 (2), 14,0 (2-Me), 41,2 (3); D 170,9ª (1), 71,6 (2), 39,5 (3), 24,7 (4),21,4 (4-Me), 23,1 (5). ^{a} las señales son intercambiables.
Criptoficina-156: EIMS m/z (intensidad relativa) 412/414 (23/6), 381 (11), 280/282 (22/6), 195/197 (100/33); EIMS de alta resolución m/z 592,2568 (calcd para C_{30}H_{41}ClN_{2}O_{8}, \Delta -1,6 mmu). Véase la tabla 3 para los datos de ^{1}H RMN; véase la tabla 4 para los datos de ^{13}C RMN.
Criptoficina-159: EIMS m/z (intensidad relativa) 666 (3), 412/414 (16/4), 396 (52), 255 (100), 195/197 (30/8), 91 (54); EIMS de alta resolución m/z 666,3060 (calcd para C_{37}H_{47}ClN_{2}O_{7}, \Delta 1,1 mmu). Véase la tabla 3 para los datos de ^{1}H RMN; véase la tabla 4 para los datos de ^{13}C RMN.
Criptoficina-160: EIMS m/z (intensidad relativa) 628/630 (9/4), 412/414 (63/23), 280 (25), 217 (89), 195/197 (89/30); EIMS de alta resolución m/z 628,2432 (calcd para C_{33}H_{41}ClN_{2}O_{8}, \Delta 2,0 mmu). Véase la tabla 3 para los datos de ^{1}H RMN; véase la tabla 4 para los datos de ^{13}C RMN.
Criptoficina 161: EIMS m/z (intensidad relativa) 706/708 (6/2), 412/414 (49/18), 295 (15), 280/282 (25/7), 195/197 (100/34); EIMS de alta resolución m/z 706,2623 (calcd para C_{36}H_{42}ClF_{3}N_{2}O_{7}, \Delta 1,0 mmu). Véase la tabla 3 para los datos de ^{1}H RMN; véase la tabla 4 para los datos de ^{13}C RMN.
Criptoficina-166: EIMS m/z (intensidad relativa) 652/654 (1,1/0,4), 412/414 (18/5), 241 (37), 195/197 (64/20); EIMS de alta resolución m/z 652,2918 (calcd para C_{36}H_{45}ClN_{2}O_{7}), \Delta - 0,02 mmu. Véase la tabla 3 para los datos de ^{1}H RMN; véase la tabla 4 para los datos de ^{13}C RMN.
Criptoficina-167: EIMS m/z (intensidad relativa) 666/668 (3,4/1,1), 412/414 (26/9), 280 (11), 255 (67), 195/197 (46/15); EIMS de alta resolución m/z 666,3058 (calcd para C_{37}H_{47}ClN_{2}O_{7}, \Delta 1,4 mmu). Véase la tabla 3 para los datos de ^{1}H RMN; véase la tabla 4 para los datos de ^{13}C RMN.
Criptoficina-172: EIMS m/z (intensidad relativa) 688/690 (3/2), 412/414 (12/4), 277 (67), 218 (100), 195/197 (29/10), 141 (63); EIMS de alta resolución m/z 688,2916 (calcd para C_{39}H_{45}ClN_{2}O_{7}, \Delta - 0,1 mmu). Véase la tabla 3 para los datos de ^{1}H RMN; véase la tabla 4 para los datos de ^{13}C RMN.
Criptoficina-181: EIMS m/z (intensidad relativa) 656/658 (9,0/3,3), 412/414 (84/34), 245 (71), 195/197 (47/7); EIMS de alta resolución m/z 656,2674 (calcd para C_{35}H_{42}ClFN_{2}O_{7}, \Delta -0,9 mmu). Véase la tabla 3 para los datos de ^{1}H RMN; véase la tabla 4 para los datos de ^{13}C RMN.
Criptoficina-188: EIMS m/z (intensidad relativa) 674/676 (20/4), 412/414 (57/20), 280/282 (20/7), 263 (13), 195/197 (89/27); EIMS de alta resolución m/z 674,2551 (calcd para C_{35}H_{41}ClF_{2}N_{2}O_{7}, \Delta 1,9 mmu). Véase la tabla 3 para los datos de ^{1}H RMN; véase la tabla 4 para los datos de ^{13}C RMN.
Criptoficina-234: La mezcla que contenía criptoficina 234 y un 15% de su isómero z (58,3 mg) cristalizó de manera repetida en soluciones d EtOAc/éter de etil para obtener la criptoficina-234 (47 mg) y su isómero z (11 mg). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) amino o hidroxi ácido unidad \delta (posición del carbono, multiplicidad; J en Hz) A 5,77 (2, d; 15,2), 6,68 (3, ddd; 15,2, 9,7 y 5,4), 2,37 (4, dt; 14,2 y 10,5), 2,52 (4, m),4,99 (5, m), 2,55 (6, m), 1,13 (6-Me, d; 6,8), 5,99 (7, dd; 15,8 y 8,8), 6,40 (8, d; 15,8), 7,25^{a} (2'/6', d; 8,2), 7,29^{a} (3'/5', d; 8,2), 4,71 (4'-CH_{2}OTBDMS, brs), 0,08 (6H) y 0,93 (9H) (4'-CH_{2}OTBDNS); B 4,81 (2, m), 5,77 (2-NH, oscurecido por otra señal), 3,03 (3, dd; -14,4 y 7,3), 3,14 (3, dd; 14,4 y 5,4), 7,22 (5, d; 2,0), 3,86 (7-OMe, s), 6,83 (8, d; 8,4), 7,07 (9, dd; 8,4 y 2,0); C 2,71 (2, m), 1,22 (2-Me, d; 7,2), 3,29 (3, m), 3,49 (3, m), 6,98 (3-NH, br t; 5,6); D 4,84 (2, m), 1,36 (3, m), 1,59 - 1,71 (3/4, m), 0,73 (4-Me, d, 6,4), 0,77 (5, d, 6,2). ^{a} Intercambiable; ^{13}C RMN (CDCl_{3}) unidad \delta (posición del carbono) A 165,5 (1), 125,2 (2), 141,4 (3), 36,4 (4), 77,4 (5), 42,2 (6), 17,3 (6-Me), 129,6 (7), 131,6 (8), 136,4 (1'), 126,0^{a} (2'/6'), 126,3^{a} (3'/5'), 140,9 (4'), 64,7 (4'-CH_{2}O-), 25,9 y - 5,3 (4'-CH_{2}OTBDMS); B 171,0^{b} (1), 53,6 (2), 35,1 (3), 129,9 (4), 131,0 (5), 122,4 (6), 153,9 (7), 56,1 (7-OCH_{3}), 112,2 (8), 128,4 (9); C 175,6 (1), 38,3 (2), 14,0 (2-Me), 41,1 (3); D 170,9^{b} (l), 71,5 (2), 39,5 (3), 24,5 (4), 22,7 (4-Me), 21,2(5). ^{a \ y \ b} las señales son intercambiables.
Criptoficina-236: ^{1}H RMN (CDCl_{3}) unidad \delta de amino o hidroxiácido (posición del carbono, multiplicidad; J en Hz) A 5,76 (2, d; 15,2), 6,68 (3, ddd; 15,2, 9,6 y 5,6), 2,37 (4, m), 2,51 (4, m), 5,00 (5, m), 2,54 (6, m), 1,13 (6-Me, d; 6,9), 6,00 (7, dd; 15,9 y 8,6), 6,39 (8, d; 15,9), 7,20 - 7,30 (2'/3'/5'/6', br m), 4,28 (4'-CH_{2}NH-t-Boc, d; 4,9), 4,80 (4' CH_{2}NH-t-Boc, d; 4,9), 1,46 (4'-CH_{2}NH-t-Boc; s); B 4,80 (2, m), 5,65 (2-NH, d; 8,5), 3,04 (3, dd; -14,4 y 6,9), 3,13 (3, dd; -14,4 y 5,5), 7,22 (5, d; 2,2), 3,87 (7-OMe, s), 6,83 (8, d; 8,4), 7,08 (9, dd; 8,4 y 2,2); C 2,71 (2, m), 1,22 (2-Me, d; 7,3), 3,27 (3, m), 3,51 (3, m), 6,93 (3-NH, br t; 5,6); D 4,84 (2, dd; 9,9 y 3,5), 1,36 (3, m), 1,58 - 1,70 (3/4, m), 0,74 (4-Me, d, 6,4), 0,78 (5, d,6,4) ^{13}C RMN (CDCl_{3}) unidad \delta (posición del carbono) A 165,4 (1), 125,2 (2), 141,4 (3), 36,5 (4), * (5), 42,2 (6), 17,3 (6-Me), 130,1 (7), 131,4 (8), 135,9 (1'), 126,4 (2'/6'), 127,8 (3'/5'), 138,4 (4'), 44,4 (4'-CH_{2}NH-t-Boc), 28,4 (4'-CH_{2}NH-t-Boc); B 170,9 (1), 53,5 (2), 35,1 (3), 129,9 (4), 131,1 (5), (6), 154,0 (7), 56,2 (7-OCH_{3}), 112,3 (8), 128,4(9) C 175,6 (1), 38,3 (2), 14,0 (2-Me), 41,2(3); D 170,9(1), 71,6 (2), 39,6 (3), 24,5 (4), 22,7 (4-Me), 21,3 (5). * escondido bajo la señal del solvente.
Criptoficina-238: Se trató criptoficina-234 (14 mg) en THF (1,5 mL) con solución de fluoruro de tetrabutilamonio (25 \muL, 1 M en THF a 0ºC. Tras 1 h, se añadió a la mezcla de reacción NH_{4}Cl saturado (5 ml) seguido por agua (15 ml) y se extrajo con EtOAc (50 ml). Se secó la capa de EtOAc sobre MgSO_{4} y se evaporó. Se purificó el residuo en una pequeña columna de sílice usando CH_{2}Cl_{2} y EtOAC como eluyentes. Se evaporó la última fracción para obtener criptoficina-238 (11,8 mg). EIMS m/z (intensidad relativa) 668/670 (3/0,5), 412/414 (38/14), 257 (29), 195/197 (25/10; EIMS de alta resolución m/z 668,2898 (calcd para C_{36}H_{45}ClN_{2}O_{8}), \Delta - 3,4 mmu). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) unidad \delta de amino o hidroxiácido (posición del carbono, multiplicidad; J en Hz) A 5,76 (2, d; 15,6), 6,68 (3, ddd; 15,6, 9,8 y 5,5), 2,36 (4, dt; 14,4 y 10,4), 2,51 (4, br dd; 14,4 y 5,1), 5,00 (5, m), 2,55 (6,m), 1,13 (6-Me, d; 6,8), 6,01 (7, dd; 15,9 y 8,8), 6,40 (8, d; 15,9), 7,31 (2'/3'/5'/6', br s), 4,47 (4'-CH_{2}OH, brs); B 4,80 (2, m), 5,78 (2-NH, d; 8,4), 3,01 (3, dd; -14,4 y 7,4), 3,13 (3, dd; -14,4 y 5,5), 7,21 (5, d; 2,0), 3,86 (7-ONe, s), 6,83 (8, d; 8,5), 7,07 (9, dd; 8,5 y 2,0); C 2,71 (2, m), 1,21 (2-Me, d; 7,1), 3,28 (3, m), 3,49 (3, m), 6,98 (3-NH, br t; 6,0); D 4,84 (2, dd; 9,9 y 3,2), 1,35 (3,m), 1,58 - 1,71 (3/4, m), 0,74 (4-Me, d; 6,4), 0,77 (5, d; 6,3); ^{13}C RMN (CDCl_{3}) unidad \delta (posición del carbono) A 165,5 (1), 125,2 (2), 141,4 (3), 36,4 (4), 77,4 (5), 42,2 (6), 17,3(6-Me), 130,1 (7), 131,4 (8), 136,1 (1'), 126,3^{a} (2'/6' ),127,2^{a} (3'/5'), 140,4(4'), 64,9 (4'-CH_{2}OH); B 171,0^{b} (1), 53,7 (2), 35,0 (3), 129,9 (4), 131,0 (5), 122,3 (6), 153,9 (7), 56,1 (7-OCH_{3}), 112,2 (8), 128,4 (9); C 175,6 (1), 38,2 (2), 14,0 (2-Me), 41,1 (3); D 170,8^{b} (1), 71,5 (2), 39,5 (3), 24,5 (4), 22,7 (4-Me), 21,3 (5). ^{a \ y \ b} las señales son intercambiables.
Criptoficina-246: Se trató criptoficina-236 (9 mg, 0,012 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (50 \muL) con HCl 4 N en dioxano (20 \muL, 0,08 mmol) a temperatura ambiente. Tras 1 H, se evaporó el solvente y se sometió el residuo a cromatografía instantánea en una columna de sílice C18 pequeña (Alltech, 500 mg) usando metanol/agua (1:1) para la elusión. La primera fracción (3 mL) tras la evaporación del solvente proporcionó la criptoficina-246 (7 mg), 85%). ^{1}H RMN (CD_{3}OD) unidad \delta de amino o hidroxiácido (posición del carbono, multiplicidad; J en Hz) A 5,92 (2, dd; 15,2 y 1,7), 6,69 (3, ddd; 15,2, 11,1 y 3,8), 2,35 (4, m), 2,68 (4, m), 5,06 (5, m), 2,63 (6, m), 1,15 (6-Me, d; 7,4), 6,18 (7, dd; 15,9 y 8,9), 6,50 (8, d; 15,9), 7,40 (2'/6', br d; 8,2), 7,46 (3'/5', br d; 8,2), 4,08 (4'-CH_{2}NH_{2}HCl, s); B 4,51 (2, dd; 11,1 y 3,4), 2,75 (3, m), 3,17 (3, dd; -14,5 y 3,9), 7,27 (5, d; 2,0), 3,83 (7-OMe, s), 6,97 (8, d; 8,5), 7,16 (9, dd; 8,5 y 2,0); C 2,73 (2, m), 1,17 (2-Me, d; 8,0), 3,26 (3, m), 3,56 (3, m); D 4,92 (2, dd; 9,8 y 3,9), 1,35 (3, m), 1,54 - 1,65 (3/4, m), 0,71(4-Me, d; 6,4), 0,75 (5, d; 6,4); ^{13}C RMN (CD_{3}OD) unidad \delta (posición del carbono) A 168,4 (1), 125,7 (2), 143,5 (3), 37,7 (4), 78,6 (5), 43,5 (6), 17,5 (6-Me), 133,6 (7), 131,9 (8), 139,5^{a} (1'), 128,0 (2'/6t 130,3 (3'/5' ), 133,3ª (4'), 44,0 (4'-CH_{2}NH_{2}HCl); B 174,1 (1), 57,4 (2), 36,3 (3), 132,2 (4), 131,5 (5), 123,3 (6), 155,4 (7), 56,6 (7-OCH_{3}), 113,5 (8), 129,3 (9); C 177,5 (1), 39,0 (2), 15,1 (2-Me), 41,2 (3); D 172,3 (1), 72,8 (2), 41,0 (3), 25,7 (4), 21,7(4-Me), 23,2 (5) . ^{a} las señales son intercambiables.
Criptoficina-250: Se trató una solución de criptoficina-247 (5,1 mg) en diclorometano (80 \mul) con ácido clorhídrico (40 \mul, 4 N en dioxano). Tras 2 h se concentró la mezcla de reacción, se diluyó con agua y se pasó a través de una columna ODS corta. Se lavó la columna con agua (5 mL) seguido por CH_{3}CN (3 mL). Se evaporó la fracción última para obtener la criptoficina-250 (5 mg). Esta se purificó de manera adicional en HPLC de fase reversa (Econosil C18, 25 cm x 10 mm, 10 \mu, 35% H_{2}O/CH_{3}CN, 4 ml/min) para obtener una muestra pura (4 mg, t_{R} 18 min): EIMS m/z (intensidad relativa) 653/655 (15/10), 533 (33), 242 (48), 195/197 (36/13); EIMS de alta resolución m/z 653,2865 (calcd para C_{35}H_{44}ClN_{3}O_{7}, \Delta 0,3 mmu). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) unidad \delta de amino o hidroxi ácido (posición del carbono, multiplicidad; J en Hz) A 5,78 (2, d; 15,1), 6,68 (3, ddd; 15,1, 9,6 y 5,4), 2,35 (4, dt; 14,4 y 10,7), 2,48 (4, br dd; 14,4 y 5,1), 5,01 (5, m), 2,53 (6, m), 1,12 (6-Me, d; 6,8), 6,01 (7, dd; 15,9 y 8,7), 6,33 (8, d; 15,9), 6,81 m, 6,89 d, 6,94 s y 6,99 m (2'/3'-NH3/4'/6'), 7,15 (5', t; 7,8); B 4,79 (2, m), 5,95 (2-NH), 3,02 (3, dd; -14,4 y 7,3), 3,15 (3, dd; 14,4 y 5,5), 7,22 (5, d; 2,0), 3,86I (7-OMe, s), 6,84 (8, d; 8,4), 7,08 (9, dd; 8,4 y 2,0); C 2,70 (2, m), 1,23 (2-Me, d; 7,1), 3,27 (3, m), 3,51 (3, m), 6,99 (3-NH, m); D 4,87 (2, dd; 9,8 y 3,2), 1,39 (3, m), 1,59 - 1,73 (3/4, m), 0,76 (4 Me, d, 5,4), 0,80 (5, d, 5,6); A 165,8 (1), 125,2 (2), 141,5 (3), 36,4 (4), 77,3 (5), 42,0 (6), 17,1 (6-Me), 131,0 (7), 131,3 (8), 138,3 (1'), 116,0 (2'), 121,1 (4'), 130,0 (5'), 118,0(6'); B 171,2 (1), 54,0 (2), 35,0 (3), 129,8 (4), 131,0 (5), 122,4 (6), 153,9 (7), 56,1 (7-OCH_{3}), 112,3 (8), 128,4 (9); C 175,6 (1), 38,2 (2), 14,2 (2-Me), 41,0 (3); D 170,9 (1), 71,5 (2), 39,6 (3), 24,6 (4), 22,8 (4-Me), 21,4 (5).
Criptoficina-251: EIMS m/z (intensidad relativa) 696 (0,7), 652 (M^{+} - CO_{2}; 0,7), 412/414 (4/2), 285 (6), 241 (5), 195/197 (11/3); EIMS de alta resolución m/z (calcd para C_{37}H_{45}ClN_{2}O_{9}, \Delta mmu). Véase la tabla 3 para los datos de ^{1}H RMN; véase la tabla 4 para los datos de ^{13}C RMN.
Criptoficina-255: ^{1}H RMN (CDCl_{3}) unidad \delta de amino o hidroxi ácido (posición del carbono, multiplicidad; J en Hz) A 5,78 (2, d; 15,1), 6,67 (3, ddd; 15,1, 9,5 y 5,9), 2,37 (4, dt; 14,9 y 10,3), 2,45 (4, m), 4,96 (5, m), 2,52 (6, m), 1,09 (6-Me, d; 6,8), 5,74 (7, dd; 15,1 y 8,9), 6,24 (8, d; 15,1), 7,20 - 7,33 (2'/3'/4'/5'/6', m); B 4,83 (2, m), 5,64 (2-NH, d; 8,8), 3,05 (3, dd; -14,6 y 7,1), 3,14 (3, dd; -14,6 y 5,4), 7,22 (5, d; 2,0), 3,88 (7-OMe, 5), 6,85 (8, d; 8,5), 7,08 (9, dd; 8,5 y 2,0); C 2,72 (2, m), 1,23 (2-Me, d; 7,3), 3,29 (3, m), 3,50 (3, m), 6,95 (3-NH, m); D 4,86 (2, dd; 10,0 y 3,4), 1,49 (3, m), 1,63 - 1,85 (3/4, m), 0,89 (4-Me, d, 6,4), 0,94 (5, d, 6,4).
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TABLA 3 500 MHz Datos de ^{1}H RMN par alas Criptoficinas-3, -151, -152, -153, -154, -156, -159, -160, -161, -166, -167, -172, 181, -188 y 251
P = posición
507
Espectro registrado en CDCl_{3}; Los desplazamientos químicos son de los protones o metilos o metoxilos o la función hidroxi metilo situada en el carbono indicado en la tabla. Los desplazamientos químico de los protones en unidades B y C están comprendidos en el intervalo de \pm 0,2 ppm y constantes de acoplamiento en el intervalo de \pm 0,5 Hz de los valores correspondientes de criptoficina-3. J (H, H) en Hz para 151: 3', 4' = 8,3; 5', 6' = 8,0; 7', 8' = 8,1; J (H, H) en Hz para 152: 6,7 = 8,7; 7,8 = 15,3; 8,9 = 10,5; 9,10 = 15,7; 2', 3' = 3', 4' = 4', 5' = 5', 6' = 7,4; J (H, H) en Hz para 153: 2', 4' = 2', 6' = 2,0; 4', 5' = 5', 6' = 7,9; J (H, H) en Hz para 154: 2', 4' = 4', 6' = 2,2; \delta para 8-OCH_{3} de la unidad A en 156 es 3,51: J (H, H) en Hz para 156: 6,7 = 9,3; 7,8 = 12,6; J (H, H) en Hz para 159: 5',
6' = 8,3; J (H, H) en Hz para 161: 2', 3' = 4', 5' = 8,1; J (H, H) en Hz para 251: 2' 3' = 5', 6' = 8,2; las constantes de acoplamiento observables para el resto de los protones en la tabla están dentro del intervalo \pm 0,5 Hz de los valores correspondientes en 3.
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TABLA 4 125 MHz datos de ^{13}C RMN para las criptoficinas-3, -151, -152, -153, -154, -156, -159, -160, -161, -166, -167, -172, -181, -188 y 251 
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121
Espectro registrado en CDCl_{3}. Los desplazamientos químicos de los carbonos de las unidades B y C están comprendidos dentro del intervalo de \pm 0,5 ppm de los valores de la criptoficina-3. * señales enmascaradas bajo la señal de CDCl_{3}; ** señales que no se encontrarían. \dagger señal para 8-OCH_{3} de la unidad A; ^{a} señales en una columna que podrían ser intercambiables. E, carbono 3'-OCH_{3} de la unidad A de la criptoficina-153 se hizo resonar a \delta 55,1 y los carbonos 3' y 5' -OCH_{3} de 154 se hicieron resonar a \delta 55,3. Las señales de los carbonos 2' y 4' -CH_{3} de 159 se observaron a \delta 19,7 y 20,9 de manera respectiva. La señal del carbono 2'-CH_{3} de 166 se observó 19,8. Las señales de los carbonos 3' y 5'-CH_{3} de 167 se observaron a \delta 21,2. Los carbonos del metileno y carboxilo de 4'-CH_{2}COOH se observaron a \delta 40,4 y 174,5 de manera respectiva.
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(Tabla pasa a página siguiente)
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Ejemplo 92 Análogos de epóxido
Criptoficinas-157, 158, 164, 165, 168, 169, 170, 171, 173, 174, 177, 178, 179, 180, 182, 183, 200, 242 y 269.
TABLA 5
122
123
^{\text{*}} 188 requiere 6 equivalentes de MCPBA Y 36 h para la conversión del 70% de los epóxidos. **Mezcla inseparable
* 188 requiere 6 equivalentes de MCPBA y 36 h para la conversión del 70% de los epóxidos. **Mezcla inseparable.
Procedimiento general para la epoxidación de los análogos de estireno: Se dejó agitar a temperatura ambiente una solución de análogo de estireno (0,1 mmol) y ácido m-cloroperoxibenzoico (0,3 mmol) en 3 mL de diclorometano. Tras 16 h, se diluyó la mezcla de reacción con diclorometano (3 mL) y se lavó con tampón fosfato (0,1 M, pH 8, 5 mL) para eliminar el ácido 3-clorobenzoico generado durante la reacción. Se separó la capa orgánica, se trató con sulfuro de dimetilo (20 \muL) para detener súbitamente el exceso de perácido y se sometió al lavado con tampón por una segunda vez. Se separó la capa de diclorometano, se secó sobre MgSO_{4}, se evaporó y se mantuvo bajo vacío durante 24 horas. Se sometió el residuo a HPLC en columna de fase reversa (Econosil C18, 10 \mu, 250 mm x 22 mm, H_{2}O/CH_{3}CN al 35%, 6 mL/min) para obtener los epóxido RR y SS.
En la tabla 3 se resumen los detalles experimentales y los datos de citotoxicidad.
Criptoficinas-157 y -158: Se trató criptoficina-151 con m-CPBA y se aislaron los productos usando HPLC en fase reversa para obtener las criptoficinas-157 y -158.
Criptoficina-157: EIMS m/z (intensidad relativa) 704/706 (1/0,3), 195/197 (14/4), 141 (100), 115 (27); EIMS de alta resolución m/z 704,2865 (calcd para C_{39}H_{45}ClN_{2}O_{8}, con un error de - 0,1 mmu); véase la tabla 6 para los datos de ^{1}H RMN; véase la tabla 7 para los datos de ^{13}C RMN.
Criptoficina-158: EIMS m/z (intensidad relativa) 704/706 (2,2/1,9), 195/197 (25/9), 141 (100); EIMS de alta resolución m/z 704,2862 (calcd para C_{39}H_{45}ClN_{2}O_{8}, con un error de 0,3 mmu); véase la tabla 6 para los datos de ^{1}H RMN; véase la tabla 7 para los datos de ^{13}C RMN.
Criptoficinas-164 y -165: Se dejó agitar a temperatura ambiente una solución de criptoficina-152 (53 mg, 0,08 mmol) y ácido m-cloroperoxibenzoico (15 mg, 0,087 mmol) en 3 ml de diclorometano. Se sometió la mezcla de reacción. Se sometió la mezcla de reacción al mismo procedimiento de elaboración y purificación para obtener los compuestos 164/165ª y 164/165B (5 mg cada uno), el material de partida (10 mg), y otros productos de descomposición. Se analizaron las estructuras gruesas para ver si eran criptoficinas-164 y -165 pero no podría asignarse la estereoquímica de la fracción epóxido en los compuestos.
Criptoficina-164/165A: ^{1}H RMN (CDCl_{3}) unidad \delta de amino o hidroxi ácido (posición del carbono, multiplicidad; J en Hz) A 5,77 (2, d; 15,1), 6,67 (3, ddd; 15,1, 9,7 y 5,4,), 2,37 (4, m), 2,44 (4,m), 4,98 (5, m), 2,48 (6, m), 1,06 (6-Me, d; 6,7), 5,83 (7, dd; 15,6 y 8,5), 5,40 (8, dd; 15,6 y 7,8), 3,32 (9, dd; 7,9 y 2,0), 3,75 (10, d; 2,0), 7,26 (2'/6', m), 7,37-7,37 (3'/4'/5', m); B 4,82 (2, m), 5,75 (2-NH, d; 9,2), 3,04 (3, dd; -14,5 y 7,3), 3,14 (3, dd; -14,5 y 5,5), 7,23 (5, d; 2,2), 3,87(7-OMe, s), 6,84 (8, d; 8,2), 7,09 (9, dd; 8,2 y 2,2); C 2,73 (2, m), 1,23 (2-Me, d; 7,2), 3,29 (3, m), 3,51 (3, m), 6,97 (3-NH, br t; 6,3); D 4,88 (2, dd; 10,0 y 3,7), 1,52 (3, m), 1,79 (3/4, m), 0,92 (4-Me, d; 6,5), 0,95 (5, d; 6, 5) . ^{13}C RMN (CDCl_{3}) unidad \delta (posición del carbono) A 165,4 (1), 125,3 (2), 141,2 (3), 36,5 (4), 77,0 (5), 41,3 (6), 17,0 (6-Me), 136,2 (7), 129,4 (8), 62,5 (9), 60,1 (10), 136,9 (1'), 125,4 (2'/6'), 128,7 (3'/5') , 128,4 (4'); B 171,0 (1), 53,6 (2), 35,0(3), 129,9 (4), 131,0 (5), 122,4 (6), 154,0 (7), 56,1 (7-OMe), 112,3 (8), 128,3 (9); C 175,6 (1), 38,3 (2), 14,1(2-Me), 41,2 (3); D 170,8 (1), 71,5 (2), 39,6 (3), 24,7 (4), 21,4 (4-Me), 22,9 (5).
Criptoficina-164/165B: ^{1}H RMN (CDCl_{3}) unidad \delta de amino o hidroxi ácido (posición del carbono, multiplicidad; J en Hz) A 5,76 (2, d; 15,3), 6,66 (3, ddd; 15,3, 9,6 y 5,7,), 2,36 (4, m), 2,40 (4, m), 5,00 (5, m), 2,47 (6, m), 1,08 (6-Me, d; 6,8), 5,85 (7, dd; 15,5 y 8,5), 5,43 (8, ddd; 15,5, 7,6 y 0,6), 3,35 (9, dd; 7,6 y 1,9), 3,75 (10, d; 1,9), 7,27 -7,37 (2'/3'/4'/5'/6', m); B 4,82 (2, m), 5,65 (2-NH, d; 8,5), 3,04 (3, dd; -14,4 y 7,2), 3,14 (3, dd; -14,4 y 5,5), 7,22 (5, d; 2,1), 3,87 (7-OMe, s), 6,84 (8, d; 8,5), 7,08 (9, dd; 8,5 y 2,1); C 2,72 (2,m), 1,22 (2-Me, d; 7,2), 3,27 (3,m), 3,52 (3,m), 6,90 (3-NH, br t; 6,3); D 4,87 (2, dd; 9,8 y 3,8), 1,48 (3, m), 1,77 (3, m), 1,73 (4, m), 0,89 (4-Me, d; 6,4), 0,90 (5, d; 6,6). ^{13}C RMN (CDCl_{3}) unidad \delta (posición del carbono) A 165,4 (1), 125,2 (2), 141,2 (3), 36,4 (4), 41,3 (6), 16,9 (6-Me), 135,9 (7), 129,1 (8), 62,3 (9), 60,4 (10), 136,8 (1'), 125,5 (2'/6'), 128,6 (3'/5'), 128,4 (4'); B 170,9 (1), 53,6 (2), 35,1 (3), 129,8 (4), 131,0 (5), 122,4 (6),154,0 (7), 56,1(7-OMe), 112,2 (8), 128,4 (9); C 175,5 (1), 38,3 (2), 14,0 (2-Me), 41,2 (3); D 170,8 (1), 71,4 (2), 39,7 (3), 24,7 (4), 21,5(4-Me), 22,9 (5).
Criptoficinas-168 y 169: Se trató criptoficina-153 con m-CPBA y se aislaron los productos usando HPLC en fase reversa para obtener criptoficinas-168 y -169.
Criptoficina-168: EIMS m/z (intensidad relativa) 684/686 (7/2), 412/414 (17/6), 280/282 (12/6), 257 (20), 212/214 (14/4), 195/197 (69/24), 121 (100); EIMS de alta resolución m/z 684,2789 (calcd para C_{36}H_{45}ClN_{2}O_{9}, con un error de 2,6 mmu); véase la tabla 6 para los datos de ^{1}H RMN; véase la tabla 7 para los datos de ^{13}C RMN:
Criptoficina-169: véase la tabla 6 para los datos de ^{1}H RMN; véase la tabla 7 para los datos de ^{13}C RMN.
Criptoficinas-170 y 171: Se trató Criptoficina-159 con m-CPBA y se aislaron los productos usando HPLC en fase reversa para obtener las criptoficinas-170 y -171.
Criptoficina-170: EIMS m/z (intensidad relativa) 682/684 (4/3), 412/414 (11/4), 280/282 (25/4), 255 (25), 195/197 (52/17); EIMS de alta resolución m/z 682,3043 (calcd para C_{37}H_{47}ClN_{2}O_{8}, con un error de -2,2 mmu); véase la tabla 6 para los datos de ^{1}H RMN; véase la tabla 7 para los datos de ^{13}C RMN.
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Criptoficina-171; EIMS m/z (intensidad relativa) 682/684 (2,0/0,7), 412/414 (7/4), 280/282 (14/4), 255 (19), 195/197 (50/17); EIMS de alta resolución m/z 682,3006 (calcd para C_{37}H_{47}ClN_{2}O_{8}, con un error de 1,5 mmu); véase la tabla 6 para los datos de ^{1}H RMN; véase la tabla 7 para los datos de ^{13}C RMN.
Criptoficinas-173 y 174: Se trató criptoficina-171 con m-CPBA y se aislaron los productos usando HPLC en fase reversa para obtener la criptoficinas-173 y -174.
Criptoficina-173: EIMS m/z (intensidad relativa) 704/706 (1,3/0,4), 412/414 (5,1/1,9), 277 (6,3), 141 (100); EIMS de alta resolución m/z 704,2838 (calcd para C_{39}H_{45}ClN_{2}O_{8}, con un error de 2,7 mmu) véase la tabla 6 para los datos de ^{1}H RMN; véase la tabla 7 para los datos de ^{13}C RMN.
Criptoficina-174: véase la tabla 6 para los datos de ^{1}H RMN; véase la tabla 7 para los datos de ^{13}C RMN.
Criptoficinas-177 y 178: Se trató criptoficina-166 con m-CPBA y se aislaron los productos usando HPLC en fase reversa para obtener las criptoficinas-177 y -178.
Criptoficina-177: EIMS m/z (intensidad relativa) 668 (2,7), 412/414 (9/3), 280/282 (11/4), 241 (16), 195/197 (45/17), 105 (100); EIMS de alta resolución m/z 668,2835 (calcd para C_{36}H_{45}ClN_{2}O_{8}, con un error de 2,9 mmu); véase la tabla 6 para los datos de ^{1}H RMN; véase la tabla 7 para los datos de ^{13}C RMN.
Criptoficina-178: EIMS m/z (intensidad relativa) 668/670 (4/1,4), 412/414 (17/6), 280/282 (12/4), 241 (24), 195/ 197 (59/18), 105 (100); EIMS de alta resolución m/z 668,2836 (calcd para C_{36}H_{45}ClN_{2}O_{8}, con un error de 2,9 mmu); véase la tabla 6 para los datos de ^{1}H RMN; véase la tabla 7 para los datos de ^{13}C RMN.
Criptoficinas-179 y 180: Se trató criptoficina-167 con m-CPBA y se aislaron los productos usando el mismo procedimiento descrito más arriba para la epoxidación de la criptoficina-151, para obtener las criptoficinas-179 y -180.
Criptoficina-179: EIMS m/z (intensidad relativa) 682/684 (25/13), 412/414 (100/43), 280/282 (200/50), 255 (100), 211 (100), 195/197 (100/100), 121 (100); EIMS de alta resolución m/z 682,2992 (calcd para C_{37}H_{47}ClN_{2}O_{8}, con un error de 2,9 mmu); véase la tabla 6 para los datos de ^{1}H RMN; véase la tabla 7 para los datos de ^{13}C RMN.
Criptoficina-180: EIMS m/z (intensidad relativa) 682/684 (4/3), 412/414 (14/7), 280/282 (16/11), 255 (10), 195/197 (58/21), 119 (100); EIMS de alta resolución m/z 682,3021 (calcd para C_{37}H_{47}ClN_{2}O_{8}, con un error de 0 mmu); véase la tabla 6 para los datos de ^{1}H RMN; véase la tabla 7 para los datos de ^{13}C RMN.
Criptoficinas-182 y 183: Se trató criptoficina-181 con m-CPBA y se aislaron los productos usando HPLC en fase reversa para obtener las criptoficinas-182 y -183.
Criptoficina-182: EIMS m/z (intensidad relativa) 672 (1), 412/414 (11/4), 280/282 (10/4), 245 (12), 195/197 (40/12), 109 (77); EIMS de alta resolución m/z 672,2590 (calcd para C_{35}H_{42}ClFN_{2}O_{8}, con un error de 2,3 mmu); véase la tabla 6 para los datos de ^{1}H RMN; véase la tabla 7 para los datos de ^{13}C RMN.
Criptoficina-183: EIMS m/z (intensidad relativa) 672/674 (5/2), 412/414 (32/12), 280/282 (13/4), 245 (29), 195/197 (92/30), 109 (100); EIMS de alta resolución m/z 672,2620 (calcd para C_{35}H_{42}ClFN_{2}O_{8}, con un error de - 0,7 mmu; véase la tabla 6 para los datos de ^{1}H RMN; véase la tabla 7 para los datos de ^{13}C RMN.
Criptoficinas-200: Se trató criptoficina-188 con m-CPBA y se aislaron los productos usando el mismo procedimiento general, excepto en que se añadió una cantidad adicional de perácido (3 equivalentes) tras 12 h y se continuó la agitación durante 36 h para obtener las criptoficinas-200 y los epóxidos SS.
Criptoficina-200: EIMS m/z (intensidad relativa) 690/692 (42/16), 412/414 (7/1), 263 (19), 195/197 (27); EIMS de alta resolución m/z 690,2494 (calcd para C_{35}H_{41}ClF_{2}N_{2}O_{8}, con un error de 2,6 mmu); véase la tabla 6 para los datos de ^{1}H RMN; véase la tabla 7 para los datos de ^{13}C RMN.
Criptoficina-242: Se trató criptoficina-236 con m-CPBA y se aislaron los productos usando el mismo procedimiento general para obtener las criptoficinas-242 y sus epóxidos SS. Se purificó criptoficina-242 mediante HPLC en fase normal (Econosil Si, 250 x 10 mm, 10 \mu, Et=Ac; Hexanos, 1:1, 3 mL/min, t_{R} 81 min).
Criptoficina 242: ^{1}H RMN (CDCl_{3}) unidad \delta de amino o hidroxi ácido (posición del carbono, multiplicidad; J en Hz) A 5,73 (2, d; 15,4), 6,64 (3, ddd; 15,4, 10,2 y 5,0), 2,42 (4, m), 2,57 (4, m), 5,14 (5, m), 1,79 (6, m), 1,12 (6-Me, d; 6,7), 2,93 (7, dd; 8,4 y 1,6), 3,69 (8, d; 1,6), 7,26a (2'/6', d; 8,2), 7,22a (3'/5', d; 8,2), 4,28 (4'-CH_{2}NH-t-Boc, d; 5,9), 4,96 (4'-CH_{2}NH-t-Boc, brs ), 1,44 (4'-CH_{2}NH-t-Boc, s); B 4,66 (2, m), 5,66 (2-NH, d; 7,8), 2,92 (3, dd; -14,5 y 7,2), 3,14 (3, dd; -14,5 y 5,0), 7,21 (5, d; 2,0), 3,85 (7-OMe, s), 6,88 (8, d; 8,5), 7,09 (9, dd; 8,5 y 2,0); C 2,68 (2, m), 1,17 (2-Me, d; 7,4), 3,33 (3, m), 3,39 (3, m), 6,95 (3-NH, br t; 6,1); D 4,85 (2, dd; 10,0 y 3,3), 1,37 (3, m), 1,67-1,73 (3/4, m), 0,84 (4-Me, d; 6,7), 0,86 (5, d; 6,7); ^{13}C RMN (CDCl_{3}) unidad \delta (posición del carbono) A 165,7 (1), 125,4 (2), 141,7 (3), 37,2 (4), 76,6 (5), 40,9 (6), 13,7 (6-Me), 63,4 (7), 59,0 (8), 136,4 (1'), 126,2^{b} (2'/6'), 127,9^{b}) (3'/5'), 140,2 (4'), 44,5 ((4'-CH_{2}NH-t-Boc), 28,5 ((4'-CH_{2}NH-t-Boc); B 171,2 (1),54,6 (2), 35,5 (3), 130,5 (9), 131,2 (5), 122,5 (6), 154,4 (7), 56,5 (7-OCH_{3}), 112,7 (8), 128,8 (9); C * (1), 38,6 (2), 14,4 (2-Me), 41,1 (3); D 171,2 (1), 71,6 (2), 39,9 (3), 24,9 (4), 23,1 (4-Me), 21,4 (5). ^{a \ y \ b} las señales con superíndices idénticos son inter-
cambiables.
Criptoficina-269: Se trató criptoficina-243 (6 mg) en acetona (1,2 mL) con K_{2}CO_{3} sólido bajo agitación vigorosa en un vial de reacción a temperatura ambiente. Tras 12 h, se filtró la mezcla de reacción y se evaporó al solvente. Se purificó el residuo en una columna de sílice corta usando mezclas de CH_{2}Cl_{2} y EtOAc para obtener la criptoficina-269 (5,1 mg). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) unidad \delta de amino o hidroxi ácido (posición del carbono, multiplicidad; J en Hz) A 5,70 (2, d; 15,4), 6,67 (3, m), 2,42 (4, dt; 14,4 y 10,4), 2,53 (4, m), 5,11 - 5,19 (5, m), 1,63 - 1,83 (6, m), 1,14 (6-Me, d; 6,8), 2,92 (7, d; 7,6), 3,69 (8, br s), 7,37a (2'/6', d; 7,9), 7,24ª (3'/5', d; 7,9), 4,71 (4'-CH_{2}OH, s); B 4,74 - 4,85 (2, m), 5,76 (2-NH, d; 8,3), 2,98 (3, dd; -14,5 y 7,7), 3,13 (3, dd; -14,5 y 5,3), 7,20 (5, br s), 3,86 (7-OMe, s), 6,82 (8, d; 8,3), 7,05 (9, br d; 8,3); C 2,68 (2, m), 1,14 (2-Me, d; 7,3), 3,32 (3, m), 3,45 (3, m), 6,98 (3-NH, br m); D 4,74 - 4,85 (2, m), 1,35 (3, m), 1,63 - 1,83 (3/4, m), 0,85 (4-Me, d; 6,1), 0,87 (5, d; 6,1) ^{a} las señales con superíndices idénticos son intercambiables.
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(Tabla pasa a página siguiente)
TABLA 6 Datos de ^{1}H RMN para las Criptoficinas-1, -157, -158, -168, -169, -170, -173, -174, -177, -178, -179, -180, -182, -183 y 200
124
Espectro registrado en CDCl_{3}; Los desplazamientos químicos son para el protón o la función metilo o metoxilo situada en el carbono indicado en la tabla. Los desplazamientos químicos de los protones en las unidades B y C están comprendidos en el intervalo de \pm 0,2 ppm y las constantes de acoplamiento están comprendidas dentro del intervalo de \pm 0,5 Hz de los valores para aquellos de la criptoficina-1. J (H, H) en Hz para 157: 2', 3' = 3', 4' = 7,7; 5', 6' = 6 ', 7', 8' = 7,9; 5', 7' = 1,5; 6', 8' = 1,1; J (H, H) en Hz para 168: 4', 5' = 5', 6' = 8,0; J (H, H) en Hz parar 173: 3', 4' = 8,5; 1', 3' = 1,4; 5', 6' = 7', 8' = 8,3; Los acoplamientos observables de los protones en el segmento arilo de 158, 169 y 174 están comprendidos dentro del intervalo de \pm 0,5 Hz de los valores de 157, 168, y 173 de manera respectiva. Las constantes de acoplamiento observables para el resto de los protones en la tabla están comprendidas dentro del intervalo de \pm 0,5 hz de los valores de la criptoficina-1.
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(Tabla pasa a página siguiente)
TABLA 7 Datos de ^{13}C RMN para las Criptoficinas-157, -158, -168, -169, -170, -173, -1, -177, -18, -179, -10, -12, -1 y 200
125
Espectro registrado en CDCl_{3}. Los desplazamientos químicos de los carbonos en las unidades B y C están comprendidos dentro del intervalo de \pm 0,5 ppm de los valores de criptoficina-1. * Señales enmascaradas bajo la señal del CDCl_{3}. ** No se encontrarían las señales. \dagger, ^{a \ y \ b} las señales con superíndices idénticos en una columna son intercambiables. Se observó la señal del 3'-OCH_{3} en 168 y 169 a d 55,3. Las señales de los carbonos 2' y 4' -CH_{3} de 170 se observaron de manera respectiva a d 18,9 y 21,0. El carbono 2'-CH_{3} de 177 y 178 se hizo resonar a d 19,0 y 18,9 de manera respectiva. Las señales 3' y 5'-CH_{3} de 179 se observaron a d 21,3 y las de 180 se observaron a 21,2.
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(Tabla pasa a página siguiente)
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Ejemplo 93 Análogos de clorohidrina
Criptoficinas-163, 184, 185, 186, 187, 191, 192, 193, 194, 195, 212, 216, 217, 222, 223, 224, 243, 252, 253, 263, 264, 265, 272, y 273.
TABLA 8 
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126 
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127
* Criptoficina-200 experimenta únicamente una conversión del 30 5 bajo estas condiciones.
** Una mezcla de epóxidos RR de 3,4 - y análogos de 2,3-dimetilfenilo.
*** Una mezcla de epóxidos RR y SS.
* Criptoficina-200 experimenta únicamente una conversión del 30% bajo estas condiciones,
** Una mezcla de epóxidos RR y análogos de 3,4 - y 2,3-dimetilfenilo.
*** Una mezcla de epóxidos RR y SS.
Criptoficina-163: A una solución de criptoficina-81 (12 mg, 0,018 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (1,5 ml) a 0ºC se le añadió m-CPBA (5 mg, 0,029 mmol) seguido por HCl en ácido acético (solución 1,0 M, 25 \muL) y se dejó elevar la temperatura hasta la temperatura ambiente y se continuó la agitación durante 6 h. La evaporación del solvente seguida por la cromatografía instantánea del residuo sobre una columna de sílice C18 (12 cm x 1 cm) usando mezclas de H_{2}O y CH_{3}CN dio como resultado una mezcla de clorohidrinas (12 mg, 93%). La purificación intentada en HPLC en fase reversa condujo a la hidrólisis parcial en dioles. Sin embargo, la purificación mediante HPLC en fase normal (sílice Econosil, 250 mm x 10 mm), 1:1 EtOAc/hexano) proporcionó la criptoficina-163 (t_{R} 37,2 min, 3,0 mg). En las tablas 9 y 10 se proporcionan de manera respectiva los datos de RMN de protón y carbono.
Criptoficina-184, -185, -186, 187 y 224: Se convirtió una mezcla de cloruro de 3,4-dimetilbencil trifenilfosfonio (7:3) en 3,4- y 2,3-dimetilbencil trifenilfoforanos y se trató a continuación con criptoficina-108 usando el mismo procedimiento descrito más arriba para la preparación de la criptoficina-152. Se obtuvo una mezcla inseparable de cuatro isómeros del estireno con un rendimiento combinado del 68%. Se trató la mezcla (45 mg) en CH_{2}Cl_{2} (3 mL) con m-CPBA (25 mg) a temperatura ambiente y se mantuvo bajo agitación durante 15 h. Se eliminó el solvente y se sometió el residuo a HPLC (Econosil C18, 250 x 22 mm 7:3 H_{2}O/CH_{3}CN, 6 mL/min) y se recogieron dos fracciones I (t_{R} 54,0 min, 20 mg) y II (t_{R} 61,5 min, 12 mg) Se trató la Fracción I (9 mg) en CH_{2}Cl_{2} con TMSCl (40 \muL) a -78ºC y se dejó elevar la temperatura gradualmente hasta temperatura ambiente. Tras 3 h, la evaporación del solvente seguida por la cromatografía en HPLC de fase reversa (Econosil C18, 10 m, 250 x 22 mm, 35:65 H_{2}O/CH_{3}CN, 6 mL/min) proporcionó la criptoficina-186 (t_{R} 57,8 min, 4,7 mg), la criptoficina-224 (t_{R} 74,5 min, 2,3 mg) y la criptoficina-184 (t_{R} 78,2 min, 2,6 mg). Usando el mismo procedimiento, se trató la Fracción II con TMSCl y se separaron los compuestos para obtener la criptoficina-185 (t_{R} 65,0 min, 0,7 mg) y la criptoficina-187 (t_{R} 69,2 min, 8,0 mg).
Criptoficina-184: EIMS m/z (intensidad relativa) 682/684 (1,1/0,4), 236 (10), 195 (9), 135 (100), 119 (83); EIMS de alta resolución m/z 682,2999 (M^{+} -HCl, calcd para C_{37}H_{47}ClN_{2}O_{8}, con un error de 2,2 mmu); En las tablas 9 y 10 se proporcionan de manera respectiva los datos de resonancia de protón y carbono.
Criptoficina-185: EIMS m/z (intensidad relativa) 682/684 (6/2), 412/414 (14/5), 280/282 (14/5), 255 (10), 195/197 (50/16), 119 (100); EIMS de alta resolución m/z 682,3015 (M^{+} -HCl, calcd para C_{37}H_{47}ClN_{2}O_{8}, con un error de 0,6 mmu); en las tablas 9 y 10 se proporcionan de manera respectiva los datos de resonancia de protón y carbono.
Criptoficina -186: EIMS m7z (intensidad relativa) 682/684 (1,3/0,6), 412/414 (2,5/0,8), 254 (7), 195 (11), 119 (100); EIMS de alta resolución m/z 682,3015 (M^{+} -HCl, calcd para C_{37}H_{47}ClN_{2}O_{8}, con un error de 0,6 mmu). En las tablas 9 y 10 se proporcionan de manera respectiva los datos de resonancia de protón y carbono.
Criptoficina -187: EIMS m/z (intensidad relativa) 682/684 (0,9/0,2), 412/414 (3/1), 255 (3), 254 (7), 195 (11), 135 (100), 119 (94); EIMS de alta resolución m/z 682,3044 (M^{+} -HCl, calcd para C_{37}H_{47}ClN_{2}O_{8}, con un error de -2,3 mmu). En las tablas 9 y 10 se proporcionan de manera respectiva los datos de protón y carbono.
Criptoficina -224: EIMS m/z (intensidad relativa) 682/684 (3/1), 412/414 (3/1), 255 (4), 254 (9), 195/197 (28/6), 119 (100); EIMS de alta resolución m/z 682,3064 (M^{+} -HCl, calcd para C_{37}H_{47}ClN_{2}O_{8}, con un error de - 4,3 mmu); En las tablas 9 y 10 se proporcionan de manera respectiva los datos de protón y carbono.
Criptoficinas -191, 192, -193, -194, -195, -212, -216, -217, -222 y -223 Procedimiento general para la preparación de clorohidrinas
Se enfrió una solución de epóxido RR en cloroformo a -60ºC y se trató con cloruro de trimetilsililo en exceso (10 equivalentes). Tras 2 h, se evaporó el solvente y se purificó el residuo en un HPLC de fase reversa (Econosil C18, 10 \mu, 35% H_{2}O/CH_{3}CN, 3 mL/min) para obtener clorohidrinas trans y cis.
Se resumen en la tabla 8 los detalles experimentales para la preparación de las criptoficinas-191, 192, -193, -194, -195, -212, -216, -217, -222, -223 y 224, y la citotoxicidad.
Criptoficina-195: EIMS m/z (intensidad relativa) 684/686 (3/2), 412/414 (12/4), 257 (11), 195/197 (46/15); EIMS de alta resolución m/z 684,2784 (M^{+}-HCl, calcd para C_{36}H_{45}ClN_{2}O_{9}, \Delta 3,0 mmu); véase la tabla 9 para los datos de ^{1}H RMN; véase la tabla 10 para los datos de ^{13}C RMN.
Criptoficina-212: EIMS m/z (intensidad relativa); EIMS de alta resolución m/z, calcd para C_{35}H_{41}ClF_{2}N2O_{8}, \Delta mmu); véase la tabla 9 para los datos de ^{1}H RMN; véase la tabla 10 para los datos de ^{13}C RMN.
Criptoficina-216: EIMS m/z (intensidad relativa) 682/684 (6/3), 412/414 (6/2), 255 (4), 195/197 (21/7); EIMS de alta resolución m/z 682,2990 (M^{+}-HCl, calcd para C_{37}H_{47}ClN_{2}O_{8}, \Delta 3,1 mmu) ^{1}H RMN (CDCl_{3}) unidad \delta de amino o hidroxi ácido (posición del carbono, multiplicidad; J en Hz) A 5,79 (2, d; 15,4), 6,70 (3, ddd; 15,4, 9,5 y 5,4), 2,36 (4, m), 2,67 (4, br dd; 14,9 y 4,9), 5,01 (5, m), 2,52 (6, m), 1,07(6-Me, d; 7,1), 4,07 (7, br d; 9,8), 5,01 (8, d; 9,8), 2,36 (2'-CH_{3}, s), 7,01 (2', br s), 2,31 (4'-CH_{3}, s), 7,06 (5', brd; 8,1), 7,32 (6', d; 8,1) B 4,81 (2, m), 5,71 (2-NH, d; 8,5), 3,02 (3, dd; 14,4 y 7,4), 3,16 (3, dd; -14,4 y 5,6), 7,23 (5, d; 2,0), 3,88 (7-OMe, s), 6,85 (8, d; 8,3), 7,09 (9, dd; 8,3 y 2,0); C 2,74 (2, m), 1,23 (2-Me, d; 7,1), 3,25 (3, m), 3,53 (3, m), 6,93 (3-NH, br m); D 4,93 (2, dd; 10,2 y 3,2), 1,49 (3, m), 1,68 - 1,85 (3/4, m), 0,95(4-Me, d; 6,4), 0,96 (5, d; 6,4).
Criptoficina-217: EIMS m/z (intensidad relativa) 682/684 (3/1), 412/414 (6/1), 255 (5), 195/197 (23/7); EIMS de alta resolución m/z 682,2920 (M^{+}-HCl, calcd para C_{37}H_{47}ClN_{2}O_{8}, \Delta 10,1 mmu); ^{1}H RMN (CDCl_{3}) unidad \delta de amino o hidroxi ácido (posición del carbono, multiplicidad; J en Hz) A 5,72 (2, d; 15,4), 6,66 (3, ddd; 15,4, 9,7 y 5,4), 2,17 (4, dt; 13,9 y 10,9), 2,53 (4, br dd; 13,9 y 5,0), 5,08 (5, m), 1,61 (6, m), 0,88 (6-Me, d; 6,8), 4,28 (7, br d; 9,6), 5,13 (8, d; 9,6), 2,38 (2'-CH_{3}, s), 7,03 (2', br s), 2,32 (4'-CH_{3}, s), 7,03 (5', brd; 8,5), 7,17 (6', d; 8,5); B 4,80 (2, m), 5,66 (2-NH, d; 8,1), 3,03 (3, dd; -14,4 y 7,2), 3,14 (3, dd; -14,4 y 5,6), 7,21 (5, d; 1,6), 3,87 (7-OMe, s), 6,83 (8, d; 8,3), 7,08 (9, dd; 8,3 y 1,7); C 2,74 (2, m), 1,24 (2-Me, d; 7,1), 3,29 (3, m), 3,50 (3, m), 6,96 (3-NH, br m); D 4,89 (2, dd; 9,8 y 3,4), 1,52 (3, m), 1,87 (3, m), 1,72 (4, m), 0,94 (4-Me, d; 7,3), 0,97 (5, d; 6,8).
Criptoficina-222: EIMS m/z (intensidad relativa) 718/720 (0,4/0,2), 682/684 (13/7), 412/414 (15/5), 280/282 (16/5), 255 (12), 195/197 (59/19), 119 (100); EIMS de alta resolución m/z 718,2767 (calcd para C_{37}H_{48}Cl_{2}N_{2}O_{8}, \Delta 2,1 mmu). véase la tabla 9 para los datos de ^{1}H RMN, véase la tabla 10 para los datos de; ^{13}C RMN 10.
Criptoficina-223: EIMS m/z (intensidad relativa) 672/674 (1/0,8), 412/414 (3/1), 195/197 (15/3), 149 (100), 109 (35); EIMS de alta resolución m/z 708,2373 (calcd para C_{35}H_{43}FCl_{2}N_{2}O_{8}, \Delta 0,7mmu). Véase la tabla 9 para los datos de ^{1}H RMN, véase la tabla 10 para los datos de ^{13}C RMN.
Criptoficinas-243
Epoxidación de criptoficina-238: Se disolvió Criptoficina-238 (11,8 mg) en diclorometano (1,5 mL) y se trató con MCPBA (9,6 mg). Tras 15 h, se diluyó la mezcla de reacción con diclorometano (3 mL). Se trató la capa orgánica con sulfuro de dimetilo (10 \muL) y se repitió el tampón de lavado. Se evaporó la capa orgánica y se purificó sin éxito el residuo en un HPLC de fase reversa (Econosil C18, 25 cm x 22 mm, 10 \mu, 35% H_{2}O/CH_{3}CN, 6 mL/min) para dar una mezcla de epóxido RR y SS (6,2 mg).
Tratamiento con TMSCl: Se disolvió la mezcla en cloroformo (1 mL) y se trató con TMSCl (15 \muL) a -60ºC. Tras 2h, se evaporó el solvente, se sometió el residuo (7 mg) a un HPLC de fase normal (Econosil Si, 25 cm x 10 mm, 10 \mu, EtOAc/hexano al 85%, 4 mL/min). Se purificó la fracción recogida en 30 min en un HPLC de fase reversa (Econosil C18, 25 cm x 10 mm, 10 \mu, H_{2}O/CH_{3}CN al 45%, 3 mL/min) para obtener la criptoficina-243
(2,4 mg).
Criptoficina-243: ^{1}H RMN (CDCl_{3}) unidad \delta de amino o hidroxi ácido (posición del carbono, multiplicidad; J en Hz) A 5,76 (2 d; 15,0), 6,67 (3, ddd; 15,0, 9,6 y 5,4), 2,35 (4, dt; 14,4 y 10,4)64(4, br dd; 14,4 y 5,1), 5,07 (5, m), 2,50 (6, m), 1,04 (6-Me, d; 6,8), 4,02 (7, br d; 9,8), 4,68 (8, d; 9,8), 7,39 (2'/3'/5'/6', br s), 4,70 (4'-CH_{2}OH, brs); B 4,74 (2, m), 5,72 (2-NH, d; 7,8), 2,99 (3, dd; -14,4 y 7,3), 3,14 (3, dd; -14,4 y 5,6), 7,22 (5, d; 2,0), 3,88 (7-OMe, s), 6,84 (8, d; 8,4), 7,08 (9, dd; 8,4 y 2,0); C 2,73 (2, m), 1,21 (2-Me, d; 7,1), 3,23 (3, dt; 13,7 y 7,1), 3,50 (3, dt; 13,7 y 4,5), 6,93 (3-NH, br dd; 7,1 y 4,5); D 4,91 (2, dd; 10,0 y 3,4), 1,47 (3, m), 1,64 - 1,84 (3/4,m), 0,94 (4-Me, d; 6,4), 0,95 (5, d; 6,3); ^{13}C RMN (CDCl_{3}) unidad \delta (posición del carbono) A 165,6 (1), 125,0 (2), 141,9 (3), 36,3 (4), 76,4 (5), 38,3 (6), 8,7 (6-Me), 74,0 (7), 62,0 (8), 137,7 (1'), 127,4^{a} (2'/6'), 128,2^{a} (3'/5'), 142,2 (4'), 64,6 (4'-CH_{2}OH); B 171,1^{b} (1), 53,6 (2), 35,1 (3), 129,9 (4), 131,0 (5), 122,4 (6), 154,0 (7), 56,2 (7-OCH_{3}), 112,3 (8), 128,4 (9); C 175,4 (1), 38,5 (2), 14,1(2-Me), 41,2 (3); D 170,5^{b} (1), 71,4 (2), 39,7 (3), 24,8 (4), 23,2 (4-Me), 21,6 (5) . ^{a \ y \ b} las señales con superíndice idéntico son intercambiables.
Criptoficinas-252 y 253
Epoxidación de la criptoficina-247: Se disolvió criptoficina-247 (12 mg) en diclorometano (1 mL) y se trató con MCPBA (9,8 mg). Tras 15 h, la mezcla de reacción se diluyo con diclorometano (3 mL) y se lavó con tampón fosfato 0,1 M a pH 8 (3 mL). Se separó la capa orgánica y se repitió de nuevo el tampón de lavado tras añadir sulfuro de dimetilo (15 mL). Se evaporó la capa orgánica y se purificó el residuo (11,5 mg) en un HPLC de fase reversa (Econosil C18, 25 cm x 10 mm, 10 \mu, H_{2}O/CH_{3}CN al 35%, 3 mL/min) para dar un epóxido RR mayor (5 mg) y un epóxido SS menor (3 mg).
Epóxido RR: ^{1}H RMN (CDCl_{3}) unidad \delta de amino o hidroxi ácido (posición del carbono, multiplicidad; J en Hz) A 5,74 (2, d; 15,6), 6,67 (3, ddd; 15,6, 9,5 y 5,6), 2,44 (4, dt; 14,7 y 10,5), 2,50 - 2,58 (4,m), 5,15 (5,m), 1,62 - 1,81 (6, m), 1,12 (6-Me, d; 6,8), 2,91 (7, dd; 7,3 y 1,5), 3,66 (8, d; 1,5), 7,38 (2', br s), 6,54 (3'-NH, s), 1,51 (3'-NH-tBoc), 7,21 - 7,30 (4'/5',m), 6,91 (6', br d; 6,8); B 4,79 (2, m), 5,69 (2-NH, d; 8,5), 3,00 (3, dd; 14,5 y 7,3), 3,13 (3, dd; 14,5 y 5,5), 7,20 (5, d; 2,0), 3,86 (7-OMe, s), 6,83 (8, d; 8,3), 7,06 (9, dd; 8,3 y 2,0); C 2,70 (2, m), 1,22 (2-Me, d; 7,1), 3,30 (3, m), 3,46 (3, m), 6,97 (3-NH, m); D 4,83 (2, dd; 10,0 y 3,4), 1,36 (3, m), 1,62 - 1,81 (3/4, m),0,85 (4-Me, d; 5,9),0,87 (5, d; 5,6).
Desprotección del grupo amino y preparación de las clorohidrinas: Se trató una solución de epóxido RR (8,0 mg) en diclorometano (100 \muL) con ácido clorhídrico (50 \muL, 4 N en dioxano). Tras 30 min, se evaporó el solvente y se purificó el residuo en un HPLC en fase reversa (Econosil C18, 25 cm x 10 mm, 10 \mu, H_{2}O/CH_{3}CN al 40%, 3,5 mL/min) para obtener la criptoficina-252 (5 mg, t_{R} min) y la criptoficina-253 (2 mg, t_{R} min).
Datos de citotoxicidad de la criptoficina-252: Línea celular (# de veces más potente que la criptoficina-1) KB (1,20) y LoVo (1,25)
Criptoficina-252: EIMS m/z (intensidad relativa) 670/672 (7,2/2,2), 669/671 (19,2/7,8), 280/282 (6,8/2,4), 242 (4,7), 195/197 (43/12); EIMS de alta resolución m/z 669,2856 (M^{+} -2HCl-H)) calcd para C_{35}H_{44}ClN_{3}O_{8}, un error de -3,9 mmu; ^{1}H RMN (MeOH) unidad \delta de amino o hidroxi ácido (posición del carbono, multiplicidad; J en Hz) A 5,93 (2, d; 15,1), 6,61 - 6,78 (3, m), 2,33 (4, dt; 14,7 y 9,8), 2,69 - 2,80 (4, m), 5,11 (5, m), 2,46 (6, m), 0,95 - 1,04 (6-Me, m), 3,99 (7, brd; 9,4), 4,62 (8, d; 9,4), 7,28 (2', br s), 7,17 (4', brd; 8,1), 7,07 (5', t; 8,1), 6,98 (6', d; 8,1); B 4,50 (2, dd; 10,5 y 3,2), 2,69 - 2,80 (3, m), 3,18 (3, brd; 13,7), 6,61 - 6,78 (5, 8 y 9, m), 3,86 (7-OMe, s); C 2,69 - 2,80 (2, m), 1,19 (2-Me, d; 7,3), 3,28 (3, brd; 13,4), 3,58 (3, br d; 13,4); D 5,01 (2, dd; 9,8 y 2,7), 1,53 (3, m), 1,70 - 1,84 (3/4, m), 0,95 - 1,04 (4/5-Me, m).
Criptoficina-253: ^{1}H RMN (MeOH) unidad \delta de amino o hidroxi ácido (posición del carbono, multiplicidad; J en Hz) A 5,84 (2, dd; 15,3 y 1,6), 6,60 - 6,74 (3, m), 2,10 (4, dt; 14,9 y 11,2), 2,64 (4, m), 5,05 (5, m), 1,50 (6, m), 0,90 (6-Me, d; 6,8), 4,01 (7, dd; 9,5 y 1,2), 4,75 (8, d; 9,5), 6,60-6,74 (2'/4'/6', m), 7,09 (5', t; 7,8); B 4,48 (2, dd; 11,4 y 3,9), 2,71 (3, dd; 14,4 y 11,4), 3,16 (3, dd; 14,4 y 3,7), 7,26 (5, d; 2,2), 3,86 (7-OMe, s), 6,96 (8, d; 8,4), 7,15 (9, dd; 8,4 y 2,2); C 2,76 (2, m), 1,18 (2-Me, d; 7,3), 3,26 (3, m), 3,58 (3, dd; 13,5 y 3,1); D 4,94 (2, dd; 9,4 y 3,8), 1,58 (3, m), 1,80 (3, m), 1,70 (4, m), 0,97 (4 Me, d; 6,1), 0,98 (5, d; 6,3).
Criptoficinas-263, 264 y 265
Se disolvió una mezcla de criptoficina-242 y su epóxido ss (26 mg) en CH_{2}Cl_{2} (5 ml) y se trató con TMSCl (solución 1,0 M en CH_{2}Cl_{2}, 120 \muL) a -78ºC. Tras 3 h, se evaporó el solvente y se sometió el residuo (27 mg) a HPLC en fase reversa (Econosil C18, 250 mm x 22 mm, 10 \mu, 65:35 CH_{3}CN/H_{2}O, 6 mL/min) para dar la criptoficina-264 (6,0 mg, t_{R} 43 min), y una mezcla de criptoficinas-263 y 265 (15,8 mg, t_{R} 59 min). Se separaron las criptoficinas-263 y 265 mediante HPLC en fase normal (sílice Econosil, 250 mm x 10 mm, 10 \mu, 55: 45 EtOAc/hexano, 3 mL/min) para dar la criptoficina-265 (7,1 mg, 51 min) y la criptoficina-263 (7,8 mg, 79,0 min).
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Datos de citotoxicidad
Criptoficina # Citotoxicidad, # de veces más potente que la cripto-1
KB
LoVo
263 1,67 0,56
264 0,044 0,023
265 0,0033 0,021
Criptoficina-263: ^{1}H RMN (CDCl_{3}) unidad \delta de amino o hidroxi ácido (posición del carbono, multiplicidad; J en Hz) A 5,79 (2, d; 15,6), 6,68 (3, m), 2,37 (4, m), 2,66 (4, br dd; 14,2 y 4,2), 5,10 (5, m), 2,49 (6, m), 1,03 (6-Me, d; 6,8), 4,00 (7, br d; 9,4), 4,64 (8, d; 9,4), 7,35 (2'/6', br d; 7,9), 7,29 (3'/5', brd; 7,9), 4,31 (4'-CH_{2}NH-t-BOC, d; 4,8), 4,92 (4'-CH_{2}NH-t-BOC, brs), 1,45 (4'-CH_{2}NH-t-BOC, s); B 4,79 (2, m), 5,76 (2-NH, d; 8,6), 3,01 (3, dd; -14,4 y 7,3), 3,15 (3, dd; -14,4 y 4,9), 7,23 (5, d; 1,3), 3,87 (7-OMe, s), 6,84 (8, d; 8,4), 7,09 (9, br d; 8,4); C 2,73 (2, m), 1,22 (2-Me, d; 7,2), 3,24 (3, m), 3,53 (3, m), 6,93 (3-NH, br t; 5,5); D 4,92 (2, dd; 9,7 y 3,1), 1,48 (3, m), 1,78 (3, m), 1,73 (4, m), 0,93 (4-Me, d; 6,4), 0,94 (5, d; 6,4); ^{13}C RMN (CDCl_{3}) unidad \delta (posición del carbono) A 165,6 (1), 125,3 (2), 141,6 (3), 36,4 (4), 76,5 (5), 38,3 (6), 8,7(6-Me), 74,1 (7), 61,8 (8), 137,5^{a} (1'), 128,3 (2'/6'), 128,0 (3'/5'), 140,3^{a} (4'), 44,2 (4'-CH_{2}NH-t-BOC), 28,4 & 155,9 (4'-CH_{2}NH-t-BOC); B 171, 1^{b} (1), 53,7 (2), 35,1 (3), 130,0 (4), 131,1 (5), 122,4 (6), 154,0 (7), 56,2 (7-OCH_{3}), 112,3 (8), 128,5 (9); C 175,4 (1), 38,4 (2), 14,1(2-Me), 41,3 (3); D 170,6^{b} (1), 71,4 (2), 39,8 (3), 24,8 (4), 23,2 (4-Me), 21,6 (5) . ^{a \ y \ b} las señales con superíndices idénticos son inter-
cambiables.
Criptoficina-264: ^{1}H RMN (CDCl_{3}) unidad \delta de amino o hidroxi ácido (posición del carbono, multiplicidad; J en Hz) A 5,71 (2, d; 15,4), 6,63 (3, ddd; 15,4, 9,9 y 5,5), 2,12 (4, m), 2,51 (4, br dd; 14,2 y 5,0), 5,05 (5, m), 1,47 (6, m), 0,92 (6-Me, d; 6,8), 4,06 (7, dd; 9,6 y 1,5), 4,87 (8, d; 9,6), 7,29 (2'/6', br d; 8,4), 7,27 (3'/5', brd; 8,4), 4,33 (4' CH_{2}NH-t-BOC, brs), 1,47 (4'-CH_{2}NH-t-BOC, s); B 4,80 (2, m), 5,69 (2-NH, brs), 3,01 (3, dd; -14,5 y 7,2), 3,13 (3, dd; 14,5 y 5,4), 7,21 (5, d; 2,0), 3,86 (7-OMe, s), 6,83 (8, d; 8,4), 7,07 (9, dd; 8,4 y 2,0); C 2,73 (2, m), 1,23 (2-Me, d; 7,3), 3,28 (3, m), 3,52 (3, m), 6,93 (3-NH, br t; 5,7); D 4,86 (2, m), 1,50 (3, m), 1,86 (3, m), 1,73 (4, m), 0,95 (4 Me, d; 6,6), 0,98 (5, d; 6,8); ^{13}C RMN (CDCl_{3}) unidad \delta (posición del carbono) A 165,4 (1), 125,1 (2), 141,4 (3), 36,2 (4), 76,0 (5), 38,3 (6), 8,8 (6-Me), 74,3 (7), 68,4 (8), 136,6^{a} (1'), 128,0 (2'/6'), 127,7 (3'/5'), 140,3^{a} (4'), 44,2 (4'-CH_{2}NH-t-BOC), 28,4 (4'-CH_{2}NH-t-BOC); B 171,0^{b} (1), 53,6 (2), 35,0 (3), 129,9 (4), 131,0 (5), 122,4 (6), 153,9 (7), 56,1 (OCH_{3}), 112,2 (8), 128,4 (9); C 175,4 (1), 38,5 (2), 14,1 (2 Me), 41,2 (3); D 170,4^{b} (1), 71,4 (2), 39,8 (3), 24,8 (4), 23,2 (4-Me), 21,7 (5). a y b las señales con superíndices idénticos son intercambiables.
Criptoficina-265: ^{1}H RMN (CDCl_{3}) unidad \delta de amino o hidroxi ácido (posición del carbono, multiplicidad; J en Hz) A 5,74 (2, d; 15,5), 6,68 (3, ddd; 15,5, 9,9 y 5,3), 2,36 (4, m), 2,54 (4, br dd; 14,2 y 4,9), 5,40 (5,m), 1,87 (6,m), 1,05 (6-Me, d; 7,0), 3,71 (7, br t; 5,8), 5,07 (8, d; 5,3), 7,36 (2'/6', br d; 8,2), 7,28 (3'/5', brd; 8,2),4,30 (4'-CH_{2}NH-t-BOC, brs), 4,91 (4'-CH_{2}NH-t-BOC, brs), 1,46 (4'-CH_{2}NH-t-BOC, s); B 4,78 (2,m), 5,70 (2-NH, brs), 3,03 (3, dd; -14,5 y 7,1), 3,12 (3, dd; -14,5 y 5,5),7,2 (5, d; 1,8), 3,87 (7 OMe, s), 6,84 (8, d; 8,4), 7,07 (9, dd; 8,4 y 1,8); C 2,72 (2,m), 1,23 (2-Me, d; 7,1), 3,33 (3,m), 3,48 (3, m), 6,97 (3-NH, br t; 5,7); D 4,83 (2, dd; 9,7 y 4,3), 1,43 (3, m), 1,70 (3, m), 1,63 (4, m), 0,93 (4-Me, d; 6,4), 0,88 (5, d; 6,4); ^{13}C RMN (CDCl_{3}) unidad \delta (posición del carbono) A 165,5 (1), 125,0 (2), 142,0 (3), 34,6 (4), 74,4 (5), 39,8 (6), 12,9 (6 Me), 77,5 (7), 66,7 (8), 137,3^{a} (1'), 127,9 (2'/6'), 127,8 (3'/5'), 139, 9^{a} (4'), 44,2 (4'-CH_{2}NH-t-BOC), 28,4 (4'-CH_{2}NH-t-BOC); B 171,0^{b} (1), 53,6 (2), 35,1 (3), 129,9 (4), 131,0 (5), 122,4 (6), 154,0 (7), 56,1 (7-OCH_{3}), 112,3 (8), 128,4 (9); C 175,6 (1), 38,4 (2), 14,1 (2-Me), 41,3 (3); D 170,3b (1), 71,5 (2), 39,4 (3),24,7 (4), 22,8 (4-Me), 21,6 (5) . ^{a \ y \ b} las señales con superíndices idénticos son inter-
cambiables.
Criptoficina-272: Se trató criptoficina-263 (4,9 mg, 0,06 mmol) en CH_{2}Cl_{2} con HCl 4 N en dioxano (30 \muL, 0,012 mmol) a temperatura ambiente. Tras 3 h, se eliminó el solvente y se mantuvo el residuo bajo vacío durante 2 d para eliminar las últimas trazas de dioxano, para dar la criptoficina-272 (4,4 mg, 98%). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) unidad \delta de amino o hidroxi ácido (posición del carbono, multiplicidad; J en Hz) A 5,94 (2, dd; 15,0, 1,8), 6,69 (3, ddd; 15,0, 11,1 y 4,9), 2,36 (4,m), 2,72 (4,m), 5,13 (5, m), 2,48 (6, m), 1,01(6-Me, d; 7,1), 4,02 (7, dd; 9,4 y 2,0), 4,84 (8, d; 9,4), 7,45 (2' /6', d; 8,4), 7,51 (3'/5', d; 8,4), 4,11 (4'-CH_{2}NH_{2}HCl, s); B 4,51 (2, dd; 11,2 y 3,9), 2,74 (3, m), 3,18 (3, dd; -14,5 y 3,9), 7,28 (5, d; 2,2), 3,84 (7-OMe, s), 6,98 (8, d; 8,4), 7,17 (9, dd; 8,4 y 2,3); C 2,77 (2, m), 1,19 (2-Me, d; 7,5), 3,29 (3, m), 3,58 (3, dd; 13,7 y 3,3); D 5,02 (2, dd; 9,5 y 3,8), 1,56 (3, m), 1,78 (3, m), 1,78 (4, m), 0,97 (4-Me, d; 6,6), 0,99 (5, d; 6,6); ^{13}C RMN (CD_{3}OD) unidad \delta (posición del carbono) A 168,4 (1), 125,4 (2), 144,0 (3), 37,7 (4), 77,3 (5), 40,4 (6), 8,1 (6-Me), 74,8 (7), 63,3 (8),142,5^{a} (1'), 130,0 (2/6 ) 130,3^{a} (35) 134,6ª (4'), 44,0 (4'-CH_{2}NH_{2}HCl); B 174,1 (1), 57,4 (2), 36,3 (3), 132,2 (4), 131,5 (5), 123,3 (6), 155,4 (7), 56,6 (7-OCH_{3}), 113,5 (8), 129,3 (9); C 177,5 (1), 39,1 (2), 15,1 (2-Me), 41,2 (3); D 172,1 (1), 72,8 (2), 41,2 (3), 26,0 (4), 22,1 (4-Me), 23,6 (5). ^{a} las señales son intercambiables.
Criptoficinas-273: Se añadió ácido 3-cloroperbenzoico (128 mg) a una solución de criptoficina-234 (146 mg) en CH_{2}Cl_{2} (8 mL) a 0ºC. Se dejó calentar la solución lentamente a la temperatura ambiente y se continuó la agitación durante 12 h. Se diluyó la mezcla de reacción con CH_{2}Cl_{2} (7 mL) y se lavó con tampón fosfato (2 x 10 mL, 0,1 M, pH 8). Se separó la capa orgánica y se trató con sulfuro de dimetilo (50 mL) para detener súbitamente el exceso de perácido, y se sometió de nuevo al tampón de lavado. Se evaporó la capa orgánica y se sometió el residuo a HPLC en fase reversa (250 mm x 22 mm, 10 \mu, H_{2}O/CH_{3}CN al 15%, 6 mL/min) para obtener el epóxido RR (74 mg,
50%).
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128 
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Se trató una solución del epóxido (74 mg) en THF (3 mL) con 115 \muL de una solución 1 M de fluoruro de tetrabutiamonio en CH_{2}Cl_{2}. Tras 1,5 h, se añadió una solución de NH_{4}Cl saturado a la mezcla de reacción y se extrajo con EtOAc (2 x 30 mL). Se secó el extracto orgánico sobre MgSO_{4} y se evaporó. Se purificó el residuo en una columna de sílice pequeña usando EtOAc/CH_{2}Cl_{2} para obtener la criptoficina-269 (62 mg, 98%).
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129 
\newpage
A una solución de criptoficina-269 (62 mg), N-(t-BOC) glicina (30 mg) y DMAP (8 mg) en CH_{2}Cl_{2} (3 mL) se le añadió DCC (160 \muL, solución 1 M en CH_{2}Cl_{2} a 0ºC. Se agitó la mezcla de reacción a 0ºC durante 15 min y a temperatura ambiente durante 2 h. Al término de este período, se filtró la mezcla y se concentró al vacío. Se sometió el residuo a cromatografía instantánea en sílice ODS usando H_{2}O/CH_{3}CN al 75 - 30% para obtener el éster de N-t-BOC-glicinato de la criptoficina-269 (64,4 mg, 85%).
130 
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A una solución de éster de glicinato (64,4 mg) en cloroformo (3 mL) a -60ºC se le añadieron 200 \muL de una solución 1 M de TMSCl en CH_{2}Cl_{2}. Tras 1 h, se evaporó el solvente y se purificó el residuo en una columna de sílice pequeña usando EtOAC/hexanos al 40 - 90% para obtener la clorohidrina trans del glicinato (60 mg, 89%).
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131 
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Se trató una solución de la clorohidrina (55 mg) en diclorometano (0,25 mL) con una solución 4 M de cloruro de hidrógeno en 1,4-dioxano (0,1 mL). Se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 2h, se concentró al vacío y se secó en el criocongelador durante 48 h. Se obtuvo la criptoficina-273 como un sólido blanco.
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132
TABLA 9 Datos de ^{1}H RMN para la Criptoficina-8, 163, 184, 185, 186, 187, 191, 192, 193, 194, 195, 212, 222, 223 y 224
133 
\newpage
Espectro registrado en CDCl_{3}; Los desplazamientos químicos son para los protones o la función metilo o metoxilo situadas en los carbonos indicados en la tabla. Los desplazamientos químicos de los protones de la unidades B y C están comprendidos dentro del intervalo de \pm 0,2 ppm y las constantes de acoplamiento están comprendidas dentro del intervalo de \pm 0,5 Hz para aquellos valores de la criptoficina-8. J (H, H) en Hz para 163: 2', 3' = 5', 6' = 8,7; J (H, H) en Hz para 186: 2', 6' = 2,0; 5', 6' = 7,7; J (H, H) en Hz para 193 y 194; 3', 4' = 8,5; J (H, H) en Hz para 195: 2', 3' = 3', 4' = 7,9; 2', 6' = 4' 6' = 2,4. Las constantes de acoplamiento observables para el resto de los protones en la tabla están comprendidas dentro del intervalo de \pm 0,5 Hz para aquellos de los valores de la criptoficina-8. J (H, H) y J (H, F) en Hz para 212: 3'-F, 4-H = 4-H, 5-F 0 8,7; 2', 4' = 4', 6' = 2,3.
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(Tabla pasa a página siguiente)
TABLA 10 125 MHz, Datos de ^{13}C RMN para las Criptoficinas-8, -163, -184, -185, -186, 187, 191, 192, 194, 195, 222, 223 y 224
134
135
Espectro registrado en CDCl_{3}. Los desplazamientos químicos de los carbonos en las unidades B y C están comprendidos dentro del intervalo de \pm 0,5 ppm de los valores de criptoficina-8. * No se encontrarían las señales debido al tamaño más pequeño de la muestra. \dagger Las asignaciones son de prueba. El carbono 4-OMe de 163 y también el de 195 se hicieron resonar a \delta 55,3. Los carbonos 2'-Me y 3'-Me de 185 aparecieron a \delta 15,0 y 20,9 de manera respectiva. Se observaron los carbonos 3'-Me y 4'-Me de 186 a \delta 19,6 y 19,9 de manera respectiva. Se observaron los mismos carbonos de manera respectiva a \delta 19,5 y 19,8 en 187 y a \delta 19,5 y 19,8 en 224. Los carbonos 3' y 5'-me de 223 se observaron a 21,3.
Ejemplo 94
El grupo R general en 2' (a continuación) está comprendido por un sustituyente éter y diversos sustituyentes acilo, tal como se representa en la Tabla 1 (también a continuación). Se prepararon los nuevos análogos de criptoficina con rendimiento moderado a alto mediante técnicas de esterificación. Véase, Mulzer, J., Trost B. M. Fleming, I., Ed. Comprehensive Organic Synthesis; 6:323-380, (Pergamon press: Oxford, 1991); Benz, G. Trost, B. M., Fleming, I, Ed., Comprehensive Organic Synthesis, 6:381-417, (Pergamon press: Oxford, 1991). Se prepararon las sales de clorhidrato de amina con alto rendimiento a partir de los correspondientes carbamatos de t-butilo tras el tratamiento con ácido clorhídrico mientras que la sal disódica 7' se derivó de 6' después que el ácido clorhídrico indujera la rotura del éter d t-butilo y el tratamiento con hidróxido de sodio. La sal de piridinio 9' se preparó a partir de 1' siguiendo el procedimiento de Nicolao. Nicolao, y col. Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 33:1583+ (1994).
136
(tal como se usan en la descripción de los procedimientos de síntesis a continuación)
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(Tabla pasa a página siguiente)
TABLA 1 Grupos R de estructura general 2' (más arriba)
137
La preparación de los conjugados que se representa en la Tabla 1 sigue varios protocolos, que implican normalmente metodología de ésteres activados seguido por cromatografía y desbloqueo inducido por ácidos donde es necesario. De esta forma, el tratamiento de 1' con anhídrido acético en presencia de trietilamina y 1-dimetilamino piridina proporciona 3' con un rendimiento del 89% tras cromatografía súbita. De manera similar, se puede preparar 5' a partir de 1' mediante el concurso del anhídrido succínico seguido por purificación^{7} mediante HPLC de fase reversa. De manera alternativa, se puede preparar 5' con rendimiento elevado tras tratamiento ácido con el mono-t-butil éster 4'. La exposición de una solución en piridina de 1' a clorhidrato de cloruro de nicotinoílo comercialmente disponible en presencia de trietilamina y de 4-dimetilamino piridina seguida por cromatografía y tratamiento con cloruro de hidrógeno da lugar a 8' con alto rendimiento. La sal de piridinio 9' se prepara con un rendimiento del 47% de acuerdo con el procedimiento de Nicolau (ya citado), en el que se trata 1' con p-toluensulfonato de 2-fluorometilpiridinio comercialmente disponible seguido por purificación mediante HPLC de fase reversa con intercambio aniónico concomitante (acetato por el p-toluensulfonato) y liofilización. El resto de los ésteres se preparan con rendimientos de moderados a altos a partir de 1' y (excepto en el caso de 4', 6, 10', 43' y 45') amino ácidos N-t-boc protegidos comercialmente disponibles con activación mediante el concurso de 1,3-diciclohexilcarbodiimida en presencia de 4-dimetilaminopiridina. Las sales de clorhidrato se preparan con rendimientos elevados a partir del tratamiento con una solución de cloruro de hidrógeno 4,0 M en dioxano, y eliminación del solvente a vacío. La sal disódica 7' se deriva de 6' tras rotura del éster de t-butilo inducida mediante ácido clorhídrico y tratamiento con hidróxido de sodio. El ácido 24' necesario para la preparación de 5' se sintetiza con un rendimiento del 63% mediante una secuencia en cinco pasos que ilustra el procedimiento de Johns para instalar la funcionalidad fosfato. Perich, J. W.; Johns R. B. y col., Synthesis, 1988; 142.
138
Se han ensayado algunos de los nuevos conjugados respecto de su citotoxicidad en vitro en el modelo de la célula tumoral Gc3, tal como se describe más arriba en el presente documento. Estos resultados se muestran en la Tabla 2 siguiente:
TABLA 2 Datos de citotoxicidad en vitro para derivados de la criptoficina
Compuesto Gc3 DI_{50} (nM) Compuesto Gc3 DI_{50} (nM)
1' 0,065 28' 2,6
3' 83 30' 30
5' 31 32' 7,2
7' 3,7 34' 6,5
8' 116 36' 2,8
9' 2,2 38' 1,6
11' 6,8 40' 2,0
13' 7,0 42' 15
15' 60 44' 28
17' 3,6 46' 50
19' 0,10 47' 2,5
21' 21 48' 10
25' 230
Los estudios de estabilidad se llevaron a cabo a Ph acuoso comprendido entre 4-8, y se determinó el porcentaje de producto remanente.
La conversión de los t-butil carbamatos en las sales correspondientes se puede llevar a cabo con un ácido fuerte, nominalmente ácidos minerales formados a partir de haluros de hidrógeno, sulfatos de hidrogeno, fosfatos de hidrógeno, nitratos de hidrógeno, percloratos de hidrogeno, o ácidos orgánicos fuertes tañes como trifluoroacético, p-toluenosulfónico, y metanosulfónico. Se pueden usar los mismos ácidos para producir sales del tipo 8' a partir de la correspondiente base libre. Entre la variedad de contraiones (cationes) se comprenden sales del tipo 7' que incluyen cualquiera de los metales alcalinos y alcalinotérreos. Entre la variedad de contraiones (aniones) se comprenden sales del tipo 9' que incluyen prácticamente cualquier base conjugada de un ácido (orgánico o mineral).
Preparación del acetato de Criptoficina 55 (3') (LSN 362376). A una solución de 1' (93 mg, 0,13 mmol) en 659 \mul de cloruro de metileno a 0ºC se añadieron trietilamina (55 \mul, 0,40 mmol), 4-dimetilamino piridina (1,6 mg, 0,013 mmol), y anhídrido acético (19 \mul, 0,20 mmol). Tras agitación a 0ºC durante 1 h, la reacción se detuvo bruscamente con 19 \mul de metanol, se concentró hasta 0,5 del volumen, y se aplicó directamente a una columna de cromatografía súbita (19 g de gel de sílice súbito). La elución con acetato de etilo - hexanos (3:1) proporcionó 88 mg (89%) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (CDCl_{3}) d 7,38-7,31 (m, 5H), 7,24 (d, 1H,
J = 2,1 Hz), 7,22-7,18 (m, 1H), 7,10 (dd, 1H, J = 8,5, 2,1 Hz), 6,88 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 6,75 (ddd, 1H, J = 15, 13, 4,6 Hz), 5,78 (dd, 1H, J = 15, 1,0 Hz), 5,55 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 5,46 (dd, 1H, J = 9,8, 1,2 Hz), 4,95 (dd, 1H, J = 11, 2,9 Hz), 4,89 (ddd, 1H, J = 9,9, 9,9, 1,7 Hz), 4,81 (d, 1H, J = 9,8 Hz), 4,79-4,74 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,39 (dd, 1H,U = 13, 8,1 Hz), 3,22 (dd, 1H, J = 13, 4,1 Hz), 3,16 (dd, 1H, J = 14, 5,1 Hz), 3,07 (dd, 1H, J = 14, 7,6 Hz), 2,65-2,55 (m, 2H), 2,47-2,39 (m, 1H), 1,95 (ddd, 1H, J = 14, 13, 4,6 Hz), 1,86-1,77 (m, 1H), 1,73-1,66 (m, 1H), 1,68 (s, 3H), 1,27 (s, 3H), 1,19 (s, 3H), 1,09 (d, 3H, J = 7,1 Hz), 1,03 (d, 3H, J = 6,7 Hz), 0,97 (d, 3H, J = 6,6 Hz).
Preparación del tert-butil éster succinato de Criptoficina 55 (4') (LSN 384665). A una solución de 1' (133 mg, 0,188 mmol), mono-tert-butil ester^{10} del ácido succínico (66 mg, 0,377 mmol) y 4-dimetilamino piridina (2,3 mg, 0,019 mmol) en 850 \mul de cloruro de metileno anhidro a temperatura ambiente se añadió una solución de 1,3-diciclohexilcarbodiimida (78 mg, 0,377 mmol) en 92 \mul de cloruro de metileno. Tras agitación a temperatura ambiente durante 1 h, la reacción se trató con 150 mg de celite, y se diluyó con 1 ml de acetato de etilo - hexanos (3:1), y se filtró a través de un tapón de celite, lavando con acetato de etilo - hexanos (31). El filtrado y los lavados se concentraron a vacío para dar un aceite de color crema. La cromatografía (25 de gel de sílice súbito) eluyendo con acetato de hexilo - hexanos (2:1) proporcionó 157 mg (97%) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (CDCl_{3}) d 7,38-7,30 (m, 5H),7,24 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 7,22-7,18 (m, 1H), 7,09 (dd, 1H, J = 8,5, 2,0 Hz), 6,88 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 6,74 (ddd, 1H, J = 15, 10, 4,6 Hz), 5,76 (d, 1H, J = 15 Hz), 5,51 (d, 1H, J = 8,0 Hz),5,47 (d, 1H, J = 9,6 Hz), 4,97 (dd, 1H, J = 11, 3,1 Hz), 4,90 (t, 1H, J = 9,3 Hz), 4,83 (d, 1H, J = 9,6 Hz), 4,79-4,73 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,39 (dd, 1H, J = 13, 8,0 Hz), 3,22 (dd, 1H, J = 13, 4,0 Hz), 3,16 (dd, 1H, J = 14, 5,1 Hz), 3,08 (dd, 1H,
J = 14, 7,6 Hz),2,63-2,55 (m, 2H),2,44-2,37 (m, 1H),2,32-2,21 (m, 2H),2,19-2,06 (m, 2H),1,99-1,92 (m, 1H),1,85-1,68 (m, 2H), 1,42 (s, 9H), 1,27 (s, 3H), 1,19 (s, 3H), 1,08 (d, 3H, J = 7,0 Hz), 1,03 (d, 3H, J = 6,6 Hz), 0,98 (d, 3H,
J = 6,5 Hz).
Preparación del succinato de Criptoficina 55 (5') (LSN 377092) a partir del tert-butil éster succinato de Criptoficina 55 (4'). A una solución de 4' (127 mg, 0,147 mmol) en 491 \mul de cloruro de metileno a temperatura ambiente, se añadió una solución de cloruro de hidrógeno 4 M en 1,4-dioxano (184 \mul, 0,737 mmol). Se dejó agitando la solución a temperatura ambiente durante 5 h. La concentración a vacío proporcionó 119 mg (100%) del compuesto del título en forma de una espuma blanca.
Preparación del succinato de Criptoficina 55 (5') (LSN 377092) a partir de anhídrido succínico. A una solución de 1' (27 mg, 0,038 mmol) y anhídrido succínico (5,7 mg, 0,057 mmol) en 383 \mul de cloruro de metileno a temperatura ambiente se añadieron trietilamina (16 \mul, 0,115 mmol) y 4-dimetilamino piridina (4,7 mg, 0,038 mmol). Tras agitación durante 19 h, se añadieron 5,7 mg (0,057 mmol) de anhídrido succínico y 4,7 mg (0,038 mmol) de 4-dimetilamino piridina, agitando durante 29 h más. La reacción se trató con 0,5 ml de una solución acuosa de cloruro de hidrógeno 1 N y se lavó con cloruro de metileno (3 X 0,5 mL). Los extractos orgánicos combinados se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para dar una espuma blanca. La purificación mediante HPLC^{7} en fase reversa proporcionó 10 mg (32%) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (CDCl_{3}) d 7,36-7,31 (m, 6H), 7,22 (br s,1H), 7,08 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,02 (br s,1H), 6,87 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,61 (m, 1H), 5,94-5,87 (m, 2H), 5,51 (d, 1H, J 9,8 Hz), 4,95 (dd, 1H, J = 10, 2,8 Hz), 4,87-4,76 (m, 3H), 3,90 (s, 3H), 3,39 (dd, 1H, J = 16, 5,6 Hz), 3,28 (dd, 1H, J = 16, 8,2 Hz), 3,17 (dd, 1H, J = 16, 5,6 Hz), 3,05 (dd, 1H, J = 16, 8,2 Hz), 2,68-2,62 (m, 1H), 2,60-2,46 (m, 2H), 2,45-2,28 (m, 3H), 2,01-1,93(m, 2H), 1,88-1,70 (m, 2H), 1,26 (s, 3H), 1,18 (s,3H) 1,12 (d, 3H, J = 7,0 Hz), 1,04 (d, 3H, J = 6,6 Hz), 1,00 (d, 3H, J = 6,5 Hz).
Preparación del (2'-di-t-butilfosfatil)fenilacetato de Criptoficina 55. (6' ) (LSN 379407). A una solución de 1' (0,102 mmol), 24' (46 mg, 0,134 mmol), y 4-dimetilamino piridina (12 mg, 0,102 mmol) en 250 \mul de cloruro de metileno acuoso a temperatura ambiente, se añadió una solución de 1,3-diciclohexilcarbodiimida (27 mg, 0,134 mmol) en 50 \mul de cloruro de metileno. Tras agitación a temperatura ambiente durante 6h, la reacción se diluyó con 1 ml de acetato de etilo - hexanos (3:1), y se filtró a través de un tapón de celite, lavando con acetato de etilo - hexanos (2:1). El filtrado y los lavados se concentraron a vacío para dar una espuma de color púrpura. La cromatografía (15 g de gel de sílice súbito, eluyendo con acetato de etilo - hexanos (4:1) proporcionó 86 mg (82%) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (CDCl_{3}) d 7,35 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 7,30-7,19 (m, 8H), 7,11 (dd, 1H, J = 8,4, 2,0 Hz), 7,02 (t, 1H, J = 7,5 Hz), 6,87 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,84 (d, 1H, J = 7,5 Hz), 6,73 (ddd, 1H, J = 15, 13, 4,7 Hz), 5,92 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 5,79 (dd, 1H, J = 15, 1,0 Hz), 5,43 (dd, 1H, J = 9,4, 1,8 Hz), 4,98 (dd, 1H, J = 12, 3,1 Hz), 4,81 (ddd, 1H, J = 9,9, 9,9, 1,8 Hz), 4,75 (d, 1H, J = 9,4 Hz), 4,73-4,67 (m, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,49 (d, 1H, J = 16 Hz), 3,44-3,38 (m, 1H), 3,38 (d, 1H, J = 16 Hz), 3,27-3,17 (m, 2H), 3,10 (dd, 1H, J = 14, 8,2 Hz), 2,55-2,46 (m, 2H), 2,37-2,27 (m, 1H), 1,95 (ddd, 1H, J = 14, 12, 4,5 Hz), 1,83-1,70 (m, 2H), 1,49 (s, 18H), 1,27 (s, 3H), 1,20 (s, 3H), 1,03 (d, 3H, J = 6,5 Hz), 0,97 (d, 3H, J = 6,4 Hz), 0,92 (d, 3H, J = 7,0 Hz).
Preparación del ácido 2'-(di-t-Butilfosfatil)fenilacético (24') (LSN 379402). A una solución de alcohol de 2'-hidroxifenetilo (1,05 g, 7,60 mmol) en 15,2 mL de N,N-dimetilformamida a 0ºC, se añadió imidazol (621 mg, 9,11 mmol) y cloruro de tert-butildimetilsililo (1,26 g, 8,34 mmol). Tras agitación a 0ºC durante 40 min y a temperatura ambiente durante 45 min, se añadieron otros 155 mg (2,28 mmol) de imidazol y 229 mg (1,52 mmol) de cloruro de tert-butildimetilsililo. Se dejó agitando la reacción durante 15 min más, y en dicho momento se añadieron 150 mL de tert-butil metil éter. La mezcla se lavó con cloruro de hidrógeno acuoso 1N (1 X 15 mL) seguido por agua (1 X 15 mL). La capa orgánica se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró a vacío para dar un aceite amarillo. La cromatografía (70 g de gel de sílice súbito) eluyendo con acetato de etilo - hexanos (5:1) proporcionó 1,81 g (94%) del éter de sililo primario en forma de un aceite de color crema suave. A una solución del éter de sililo (506 mg, 2,00 mmol) y di-tert-butil dietilfosforamidita (600 \mul de 93%, 2,00 mmol) en 2 mL de tetrahidrofurano a temperatura ambiente, se añadió 1-H-tetrazol (421 mg, 6,01 mmol). Tras agitación durante 45 min, la mezcla de reacción se enfrió hasta -10ºC, y se trató rápidamente con una solución de ácido m-cloroperbenzoico (450 mg del 99%, 2,61 mmol) en 3,6 mL de cloruro de metileno. La reacción de color blanco turbio se dejó calentar a temperatura ambiente y se dejó agitar durante 15 min. La reacción se detuvo bruscamente con 4 ml de una solución acuosa de bisulfito de sodio al 10%, se agitó vigorosamente durante 10 min, se diluyó con 15 ml de tert-butil metil éter, y se lavó con bisulfito de sodio al 10%, (2 X 10 mL), seguido por una solución acuosa de hidróxido de sodio 0,5 N (2 X 10 mL). La capa orgánica se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró a vacío para dar un aceite amarillo, que se usó directamente en la siguiente etapa. El fosfato crudo se disolvió en 10 ml de tetrahidrofurano, se enfrió hasta 0ºC, y se trató con una solución de fluoruro de tetra-n-butilamonio en tetrahidrofurano (2,4 mL, 2,4 mmol). Tras agitación 0ºC durante 20 min y a temperatura ambiente durante 1,5 h, la reacción se diluyó en 60 ml de tert butil metil éter, y se lavó con agua (1 X 10 mL), seguido por salmuera (1 X 10 mL). La capa orgánica se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró a vacío para dar un aceite amarillo. La cromatografía (50 g de gel de sílice súbito, eluyendo con acetato de etilo - hexanos (3:1) proporcionó 525 mg (79%) del alcohol primario en forma de una espuma de color crema. A una solución del alcohol (123 mg, 0,372 mmol) en acetonitrilo - tetracloruro de carbono (1:1, 1,49 mL) a temperatura ambiente se añadieron agua (1,1 mL) seguida por peryodato de sodio (239 mg, 1,12 mmol) y cloruro de rutenio(III) hidrato (1,8 mg, 0,0082 mmol). Se dejo la mezcla marrón agitando rápidamente a temperatura ambiente durante 55 min. Tras concentración a vacío, y cromatografía (8 g de gel de sílice súbito, eluyendo con metanol - acetato de etilo al 10%, se obtuvieron 109 mg (85%) del compuesto del título en forma de un aceite de color púrpura: 500 MHz ^{1}H RMN (CDCl_{3}) d 7,49 (d, 1H,
J = 7,53 Hz), 7,30-7,15 (m, 3H), 3,77 (s, 2H), 1,51 (s, 18H).
Preparación de la sal disódica del (2' -fosfatil) fenilacetato de Criptoficina 55 (7') (LSN 374122). A una solución de 6' (84 mg, 0,081 mmol) en 400 \mul de cloruro de metileno a temperatura ambiente se añadió una solución de cloruro de hidrógeno 4 M en 1,4-dioxano (81 \mul, 0,33 mmol). La solución de color amarillo suave se dejó agitando a temperatura ambiente durante 2 h. Tras concentración a vacío, para dar una espuma de color crema, el dihidrógenofosfato crudo se disolvió en 614 \mul de tetrahidrofurano, y se trató con una solución acuosa de hidróxido de sodio 5,00 N (33 \mul, 0,163 mmol). Tras agitación durante 10 min, la mezcla se concentró a vacío, para dar una espuma de color castaño. La sal cruda se capturó en 1 mL de acetonitrilo caliente, y 0,1 ml de agua. Se eliminó por filtración el material insoluble, y el filtrado se concentró a vacío, para dar 69 mg (87%) del compuesto del título en forma de un sólido blanco: 500 MHz ^{1}H RMN (MeOH-d_{4}) d 7,58 (d, 1H, J = 8,2 Hz),7,38-7,32 (m, 2H), 7,32-7,28 (m, 3H), 7,28 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 7,17 (dd, 1H, J = 8,5, 2,1 Hz), 7,09 (ddd, 1H, J = 7,8, 7,8, 1,7 Hz),6,98 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 6,79-6,70 (m, 2H), 6,67 (d, 1H, J = 7,4 Hz), 5,91 (dd, 1H, J = 15, 1,7 Hz), 5,45 (dd, 1H, J = 9,4, 1,6 Hz), 5,06 (dd, 1H, J = 10, 2,7 Hz), 5,01 (d, 1H, J = 9,4 Hz), 4,89-4,80 (m, 1H), 4,47 (dd, 1H, J = 11, 3,8 Hz), 3,84 (s, 3H), 3,67 (d, 1H, J = 16 Hz), 3,45 (d, 1H, J = 14 Hz), 3,42 (d, 1H, J = 16 Hz), 3,18 (dd, 1H, J = 14, 3,8 Hz), 3,12 (d, 1H, J = 14 Hz), 2,77 (dd, 1H, J = 14, 11 Hz), 2,67-2,60 (m, 1H), 2,56-2,48 (m, 1H), 2,31-2,22 (m, 1H), 1,96-1,88 (m, 1H), 1,85-1,77 (m, 2H), 1,22 (s, 3H), 1,20 (s, 3H), 1,03 (d, 3H, J = 6,2 Hz), 0,98 (d, 3H, J = 6,1 Hz), 0,93 (d, 3H, J = 7,1 Hz).
Preparación de la sal de clorhidrato del nicotinato de Criptoficina 55 (8') (LSN 368265). A una solución de 1' (50 mg, 0,071 mmol) en 354 \mul de piridina a temperatura ambiente se añadió clorhidrato de cloruro de nicotinoílo (15 mg, 0,085 mmol) seguido por trietilamina (23 \mul, 0,170 mmol), tras agitar durante 1,5 h, se añadió 4-dimetilamino piridina (8,6 mg, 0,071 mmol). Tras agitar 5 h, se añadió más trietilamina (23 \mul, 0,170 mmol), 4-dimetilamino piridina (8,6 mg, 0,071 mmol), y clorhidrato de cloruro de nicotinoílo (15 mg, 0,085 mmol) junto con el aclarado con 50 \mul de piridina. Tras agitar durante 18 h se trató la reacción con 0,5 mL de solución saturada acuosa de bicarbonato de sodio, y se lavó con cloruro de metileno (4 X 1 mL). Los extractor orgánicos combinados se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y concentraron a vacío para dar un aceite ce dolor marrón pálido. La cromatografía (14 g de gel de sílice súbito), eluyendo con acetato de etilo - hexanos (10:1) proporcionó 49 mg (85%) de la base libre en forma de una espuma blanca. El nicotinato se disolvió en 1 ml de cloruro de metileno y se trató con una solución de cloruro de hidrógeno 1,0 M en dietil éter (90 ml, 0,090 mmol). La solución transparente e incolora se dejó reposar a temperatura ambiente durante 5 min. La eliminación del solvente a vacío produjo 51 mg del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (CDCl_{3}) d 8,94 (s,1H), 8,78 (br s,1H), 8,29 (d, 1H, J = 7,0 Hz), 7,57 (br s,1H), 7,38 (d, 2H, J = 7,1 Hz), 7,30-7,16 (m, 5H), 7,10 (dd, 1H, J = 8,4, 1,7 Hz), 6,88 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,71 (m, 1H), 5,80 (d, 1H, J = 15 Hz), 5,74 (d, 1H, J = 9,6 Hz), 5,56 (br s, 1H), 5,00 (d, 1H, J = 9,6 Hz), 4,95 (t, 1H, J = 8,9 Hz), 4,84 (d, 1H,
J = 9,8 Hz), 4,77-4,72 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,39 (dd, 1H, J = 13, 8,2 Hz), 3,23-3,14 (m, 2H), 3,06 (dd, 1H, J = 14, 7,6 Hz), 2,81-2,74 (m, 1H), 2,62-2,45 (m, 2H), 1,93 (ddd, 1H, J = 14, 12, 4,8 Hz), 1,78-1,70 (m, 1H), 1,66-1,59 (m, 1H), 1,25 (s, 3H), 1,20 (d, 3H, J = 7,0 Hz), 1,19 (s, 3H), 0,98 (d, 3H, J = 6,7 Hz), 0,84 (d, 3H, J = 6,5 Hz).
Preparación de la sal de acetato de N-metilpiridinio de Criptoficina 55 (9') (LSN 366550). A una solución de 1' (53 mg, 0,075 mmol) en 751 l de cloruro de metileno a 0ºC se añadió trietilamina (13 \mul, 0,090 mmol) seguido por p-toluenosulfonato de 2-fluoro-1metilpiridinio (23 mg, 0,083 mmol). La mezcla de reacción heterogénea se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante 3,5 h, en cuyo momento se añadieron otros 11 mg (0,039 mmol) de p-toluenosulfonato de 2-fluoro-1-metilpiridinio. Tras agitar durante 14,5 h se añadieron otros 11 mg (0,039 mmol) de p-toluenosulfonato de 2-fluoro-1-metilpiridinio y 13 \mul (0,090) de trietilamina tras 2,5 h. Tras agitar durante 1 hora más, la reacción se concentró a vacío para dar una espuma de color naranja. La purificación mediante HPLC^{8} en fase reversa con un intercambio iónico concomitante (acetato por p-toluenosulfonato) seguido de liofilización dio como resultado 30 mg (47%) del compuesto del título en forma de un sólido blanco. 500 MHz ^{1}H RMN (CDCl_{3}) d 8,65- 8,58 (m, 2H), 8,36 (t, 1H, J = 7,8 Hz), 7,68 (d, 1H, J = 8,9 Hz), 7,60 (d, 1H, J = 6,6 Hz), 7,48 (t, 1H, J = 6,6 Hz), 7,35-7,21 (m, 6H), 7,19 (dd, 1H, J = 8,5, 1,9 Hz), 7,05 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 6,49 (ddd, 1H, J = 16, 13, 4,0 Hz), 5,91 (d, 1H, J = 16 Hz), 5,72 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 5,66 (dd, 1H, J = 8,0, 1,9 Hz), 5,32-5,27 (m, 1H), 4,73 (dd, 1H, J = 9,7, 4,3 Hz), 4,24 (ddd, 1H, J = 11, 9,8, 3,7 Hz), 3,93 (s,3H) 3,81 (s, 3H), 3,32 (dd, 1H, J = 13, 9,3 Hz), 3,05-2,97 (m, 2H), 2,77-2,57 (m, 3H), 2,54-2,47 (m, 1H), 1,76 (s, 3H), 1,68-1,62 (m, 1H), 1,55-1,46 (m, 1H), 1,37-1,30 (m, 1H), 1,15 (d, 3H, J = 7,0 Hz), 1,13 (s, 3H), 1,00 (s, 3H), 0,88 (d, 3H, J = 6,7 Hz), 0,73 (d, 3H, J = 6,5 Hz).
Preparación del N-t-Boc-3-(3-cloro-metoxifenil)-(D)-alaninato de Criptoficina 55 (10') (LSN 382049). A una solución de 1' (23 mg, 0,033 mmol), -t-Boc-3-(3-cloro-metoxifenil) - (D)-alanina^{4C} (16 mg, 0,049 mmol), y 4-dimetilamino piridina (pocos cristales) en 143 \mul de cloruro de metileno anhidro a temperatura ambiente se añadió una solución de 1,3-diciclohexilcarbodiimida (10 mg, 0,049 mmol) en 20 \mul de cloruro de metileno. Tras agitar durante 2 h, la mezcla de reacción de color blanco turbio se diluyó con acetato de etilo - hexanos (2:1, 1 ml), se agitó durante 10 min, y se filtró a través de un tapón de celite, lavando con acetato de etilo - hexanos (2:1). El filtrado y los lavados se concentraron a vacío para dar un aceite incoloro. La cromatografía (14 g de gel de sílice súbito, acetato de etilo - hexanos (2:1) proporcionó 29 mg (88%) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (CDCl_{3}) d 7,42-7,27 (m, 5H), 7,24 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 7,25-7,18 (m, 1H), 7,09 (dd, 1H, J = 8,4, 1,9 Hz), 6,91-6,86 (m, 2H), 6,84-6,70 (m, 3H), 5,75 (d, 1H, J = 15 Hz), 5,53 (d, 1H, J = 9,6 Hz), 5,47 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 5,00 (dd, 1H,
J = 10, 2,9 Hz),4,90-4,80 (m, 2H),4,78-4,71 (m, 1H), 4,63 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 4,19-4,12 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,88 (s, 3H), 3,40 (dd, 1H, J = 13, 8,1 Hz), 3,25-3,12 (m, 2H), 3,07 (dd, 1H, J = 14, 7,6 Hz), 2,67-2,57 (m, 2H), 2,39-2,27 (m, 2H), 2,15 (dd, 1H, J = 14, 8,0 Hz), 2,01 (ddd, 1H, J = 14, 12, 4,2 Hz), 1,87-1,76 (m, 2H), 1,39 (s, 9H), 1,27 (s, 3H), 1,20 (s, 3H),1,09-1,04 (m, 6H), 1,01 (d, 3H, J = 6,3 Hz).
Preparación de la sal de clorhidrato del 3-(3-cloro-4-metoxifenil) (D)-alaninato de Criptoficina 55 (11') (LSN 382048). A una solución de 10' (27 mg, 0,027 mmol) en 265 ml de cloruro de metileno a temperatura ambiente se añadió una solución cloruro de hidrógeno 4,0 M en 1,4-dioxano (33 ml, 0,133 mmol). Tras agitar durante 3 h, la mezcla de reacción incolora se concentró a vacío para dar 26 mg (96%, corregida para un dioxano al 5% en peso) del compuesto del título en forma de una espuma blanca. 500 MHz ^{1}H RMN (MEOH-d_{4}) d 7,79 (d, 1H, J = 7,3 Hz),7,49-7,45 (m, 2H), 7,43-7,48 (m, 3H), 7,31 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 7,20 (dd, 1H, J = 8,4, 2,1 Hz), 7,13 (d, 1H, J = 2,2 Hz), 7,07-6,95 (m, 3H), 6,71 (ddd, 1H, 15, 13, 3,8 Hz), 5,98 (dd, 1H, J = 15, 1,8 Hz), 5,69 (d, 1H, J = 10 Hz), 5,22 (d, 1H, J = 10 Hz), 5,18 (dd, 1H, J = 10, 2,5 Hz),4,89-4,80 (m, 1H), 4,53 (dd, 1H, J = 11, 3,7 Hz), 4,16 (dd, 1H, J = 10, 4,4 Hz), 3,88 (s, 3H), 3,87 (s, 3H), 3,51 (dd, 1H, J = 13, 9,9 Hz), 3,20 (dd, 1H, J = 14, 3,7 Hz), 3,14 (dd, 1H, J = 13, 2,3 Hz), 2,82-2,75 (m, 3H), 2,45 (dd, 1H, J = 15, 4,5 Hz), 2,42-2,34(m, 1H), 2,08-2,00 (m, 1H), 1,97-1,86 (m, 3H), 1,27 (s, 3H), 1,21 (s, 3H), 1,16 (d, 3H, J = 7,1 Hz), 1,10 (d, 3H, J = 6,1 Hz), 1,06 (d, 3H, J = 6,0 Hz).
Preparación del N-t-Boc-(L)-fenilalaninato de Criptoficina 55 (12') (LSN 382235). A una solución de 1' (29 mg, 0,041 mmol), N-t-Boc-L)-fenilalanina (16 mg, 0,062 mmol), y 4-dimetilamino piridina (0,5 mg, 0,0041 mmol) en 165 \mul de cloruro de metileno anhidro a temperatura ambiente se añadió una solución de 1,3-diciclohexilcarbodiimida (13 mg, 0,062 mmol) en 42 \mul de cloruro de metileno. Tras agitar durante 40 min, la mezcla de reacción turbia se diluyó con acetato de etilo - hexanos (2:1, 0,5 ml), se agitó durante 10 min, y se filtró a través de un tapón de celite, lavando con acetato de etilo - hexanos (2:1). El filtrado y los lavados se concentraron a vacío hasta un aceite incoloro. La cromatografía (12 g de gel de sílice súbito, acetato de etilo - hexanos (2:1) proporcionó 20 mg (50%) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (MEOH-d_{4}) d 7,40-7,47 (m, 2H), 7,26-7,37 (m, 6H), 7,12-7,22 (m, 4H), 7,00 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,78-6,71 (m, 1H), 5,94 (d, 1H, J = 15 Hz), 5,48 (d, 1H, J = 9,5 Hz), 5,15-5,10 (m, 1H), 5,06 (d, 1H, J = 9,5 Hz), 4,68 (t, 1H, J = 9,7 Hz), 4,52 (dd, 1H, J = 11, 3,7 Hz), 4,14-4,10 (m, 1H), 3,87 (s, 3H), 3,49 (d, 1H, J = 13 Hz), 3,20 (dd, 1H, J = 14, 3,7 Hz), 3,14 (d, 1H, J = 13 Hz), 2,77 (dd, 1H, J = 14, 11 Hz), 2,67 (dd, 1H, J = 14, 6,2 Hz),2,62-2,57 (m, 2H), 2,51 (dd, 1H, J = 14, 9,1 Hz), 2,31-2,23 (m, 1H), 2,00-1,92 (m, 1H), 1,91-1,82 (m, 2H), 1,38 (s, 9H), 1,26 (s, 3H), 1,24 (s, 3H), 1,08 (d, 3H, J = 5,9 Hz), 1,03 (d, 3H, J = 5,8 Hz), 0,87 (d, 3H,
J = 7,0 Hz).
Preparación de la sal de clorhidrato del (L)-fenilalaninato de Criptoficina 55 (13') (LSN 382236). A una solución de 12' (18 mg, 0,019 mmol) en 189 \mul de cloruro de metileno a temperatura ambiente, se añadió una solución de cloruro de hidrógeno 4,0 M en 1,4-dioxano (24 \mul, 0,094 mmol). Tras agitar durante 4 h, la mezcla de reacción incolora y transparente se concentró a vacío para dar 15 mg (88%, corregido para un 2% en peso de dioxano) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (MEOH-d_{4}) d 7,79 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 7,48-7,23 (m, 1H), 7,20 (dd, 1H, J = 8,6, 1,6 Hz), 6,75-6,68 (m, 1H), 5,97 (d, 1H, J = 16 Hz), 5,55 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 5,15-5,11 (m, 2H), 4,71 (t, 1H, J = 10 Hz),4,55-4,51 (m, 1H), 3,87 (s, 3H), 3,21 (dd, 1H, J = 14, 3,8 Hz), 3,17-3,10 (m, 2H), 2,94 (dd, 1H, J = 15, 8,1 Hz), 2,78 (dd, 1H, J = 14, 12 Hz), 2,69-2,63 (m, 2H),2,34-2,27 (m, 1H), 1,98-1,92 (m, 1H),1,89-1,82 (m, 2H), 1,25 (s,3H), 1,22 (s, 3H), 1,06 (d, 3H, J = 6,2 Hz), 1,03 (d, 3H, J = 6,1 Hz), 0,89 (d, 3H,
J = 7,0 Hz).
Preparación de la sal de clorhidrato del (L)-histidinato de Criptoficina 55 (15') (LSN 384046). A una solución de 1' (19 mg, 0,027 mmol), complejo de N,N'-di-t-Boc-(L)-histidina en benceno (18 mg, 0,040 mmol), y 4-dimetilamino piridina (0,3 mg, 0,0027 mmol) en 100 \mul de cloruro de metileno anhidro a temperatura ambiente, se añadió una solución de 1,3-diciclohexilcarbodiimida (8,3 mg, 0,040 mmol) en 35 \mul de cloruro de metileno. Tras agitar durante 60 min, se añadieron otros 18 mg de complejo de N,N'-di-t-Boc-(L)-histidina en benceno (0,040 mmol) y 8,3 mg de 1,3-diciclohexilcarbodiimida ( 0,040 mmol). La mezcla de reacción de color blanco turbio se agitó durante 4 h más, se diluyó con acetato de etilo - hexanos (3:1, 0,5 ml), se agitó durante 10 min, y se filtró a través de un tapón de celite, y se lavó con acetato de etilo - hexanos (3:1). El filtrado y los lavados se concentraron a vacío para dar un aceite incoloro. La cromatografía (13 g de gel de sílice súbito, acetato de etilo - hexanos (3:1) proporcionó 17 mg (61%) del compuesto N,N'-di-t-Boc (14') en forma de una espuma blanca. A una solución de 14 (17 mg, 0,016 mmol) en 160 \mul de cloruro de metileno a temperatura ambiente se añadió una solución de cloruro de hidrógeno 4,0 M en 1,4-dioxano (24 \mul, 0,098 mmol). Tras agitar durante 5 h, la mezcla de reacción incolora blanca turbia se concentró a vacío para dar 15,7 mg (100%, corregido para dioxano al 4% en peso) del compuesto del título en forma de una espuma blanca. 500 MHz ^{1}H RMN (MEOH-d_{4}) d 8,91 (s,1H), 7,77 (d, 1H, J = 9,5 Hz), 7,517,37 (m, 6H), 7,31 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 7,20 (dd, 1H, J = 8,4, 2,1 Hz),6,66-6,58 (m, 1H), 5,99 (d, 1H, J = 15 Hz), 5,57 (d, 1H, J = 9,6 Hz), 5,20 (d, 1H, J = 9,6 Hz), 5,15 (dd, 1H, J = 10, 3,0 Hz), 4,58 (t, 1H, J = 11 Hz), 4,53 (dd, 1H, 11, 3,8 Hz), 4,14 (t, 1H, J = 6,4 Hz), 3,87 (s, 3H), 3,55-3,47 (m, 1H), 3,27-3,12 (m, 3H), 2,81-2,68 (m, 3H), 2,40-2,31 (m, 1H), 1,98-1,81 (m, 3H), 1,25 (s, 3H), 1,21 (s, 3H), 1,10-1,04 (m, 6H), 1,04 (d, 3H, J = 6,1 Hz).
Preparación del N-t-Boc-(L)-prolinato de Criptoficina 55 (16') (LSN 382926). A una solución de 1' (19 mg, 0,027 mmol), N-t-Boc-(L)-prolina (8,7 mg, 0,040 mmol), y 4-dimetilamino piridina (0,3 mg, 0,0027 mmol) en 100 \mul de cloruro de metileno anhidro a temperatura ambiente se añadió una solución de 1,3-diciclohexilcarbodiimida (8,3 mg, 0,040 mmol) en 35 \mul de cloruro de metileno. La mezcla de reacción blanca transparente se diluyó con acetato de etilo - hexanos (3:1, 0,5 mL), se agitó durante 10 min, y se filtró a través de un tapón de celite, lavando con acetato de etilo - hexanos (3:1). El filtrado y los lavados se concentraron a vacío para dar un aceite incoloro La cromatografía (15 g de gel de sílice súbito, acetato de etilo - hexanos (3:1) proporcionó 11 mg (46%) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (CDCl_{3}) d 7,39-7,30 (m, 5H), 7,24 (d, 1H, J 2,0 Hz), 7,21-7,18 (m, 1H), 7,09 (dd, 1H, J = 8,4, 2,0 Hz), 6,87 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,80-6,68 (m, 1H), 5,77 (d, 1H, J = 15 Hz), 5,61 (br s,1H), 5,56 (t, 1H, J = 9,5 Hz), 5,04-4,68 (m, 4H), 4,19-4,15 (m, 1H), 3,90 (s,3H), 3,41-3,34 (m, 2H), 3,27-3,02 (m, 4H), 2,64-2,50 (m, 2H), 2,35-2,25 (m, 1H), 2,10-2,00 (m, 1H), 1,90-1,72 (m, 3H), 1,70-1,50 (m, 3H), 1,44 (s, 9H), 1,28 (s, 3H), 1,20 (s, 3H), 1,08-0,90 (m, 9H).
Preparación de la sal de clorhidrato del (L)-prolinato de Criptoficina 55 (17') (LSN 382927). A una solución de 16' (11 mg, 0,012 mmol) en 122 \mul de cloruro de metileno a temperatura ambiente, se añadió una solución de cloruro de hidrógeno 4,0 M en 1,4-dioxano (15 \mul, 0,061 mmol) . Tras agitar durante 5 h, la mezcla de reacción incolora y transparente se concentró a vacío para dar 10 mg (100%) del compuesto del título en forma de un sólido blanco: 500 MHz ^{1}H RMN (MEOH-d_{4}) d 7,77 (dd, 1H, J = 9,4, 2,3 Hz),7,48-7,42 (m, 2H), 7,39-7,35 (m, 3H), 7,31 (d, 1H, J = 2,2 Hz), 7,20 (dd, 1H, J = 8,4, 2,2 Hz), 7,01 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,68 (ddd, 1H, J = 15, 13, 3,8 Hz), 5,98 (dd, 1H, J = 15, 1,4 Hz), 5,52 (d, 1H, J = 9,8 Hz), 5,18 (d, 1H, J = 9,8 Hz), 5,18-5,14 (m, 1H), 4,78 (t, 1H, J = 10 Hz), 4,52 (dd, 1H, J = 11, 3,9 Hz), 3,99 (t, 1H, J = 7,3 Hz), 3,87 (s, 3H), 3,48 (dd, 1H, J = 14, 9,7 Hz), 3,28-3,12 (m, 4H), 2,82-2,73 (m, 3H), 2,42-2,34 (m, 2H), 2,09-1,79 (m, 6H), 1,24 (s, 3H), 1,88 (s, 3H), 1,16 (d, 3H,
J = 7,0 Hz), 1,07 (d, 3H, J = 6,3 Hz), 1,04 (d, 3H, J = 6,2 Hz).
Preparación del N-t-Boc-glicinato de Criptoficina 55 (18') (LSN 379403). A una solución de 1' (118 mg, 0,167 mmol), N-t-Boc-glicina (44 mg, 0,251 mmol), y 4-dimetilamino piridina (2,0 mg, 0,0167 mmol) en 490 \mul de cloruro de metileno anhidro a temperatura ambiente, se añadió una solución de 1,3-diciclohexilcarbodiimida (52 mg, 0,251 mmol) en 67 \mul de cloruro de metileno. Tras agitar durante 50 min, la mezcla de reacción blanca incolora se diluyó con acetato de etilo - hexanos (3:1, 1 mL) se agitó durante 10 min, y se filtró a través de un tapón de celite, lavando con acetato de etilo - hexanos (3:1). El filtrado y los lavados se concentraron a vacío para dar un aceite incoloro. La cromatografía (19 g de gel de sílice súbito, acetato de etilo - hexanos (3:1) proporcionó 138 mg (96%) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (CDCl_{3}) d 7,34 (s, 5H), 7,24 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 7,23-7,19 (m, 1H), 7,10 (dd, 1H, J = 8,4, 2,0 Hz), 6,88 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,79-6,70 (m, 1H), 5,77 (d, 1H, J = 13 Hz), 5,50 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 5,47 (d, 1H, J = 9,8 Hz), 4,97 (dd, 1H, J = 11, 2,7 Hz), 4,89 (t, 1H, J = 10 Hz), 4,83 (d, 1H, J = 9,8 Hz),4,79-4,72 (m, 1H), 4,68 (br s,1H), 3,91 (s, 3H), 3,66 (dd, 1H, J = 18, 5,3 Hz),3,42-3,35 (m, 2H), 3,21 (dd, 1H, J = 13,4,0 Hz), 3,17 (dd, 1H, J = 15, 5,1 Hz), 3,08 (dd, 1H, J = 15, 7,6 Hz),2,66-2,57 (m, 2H),2,47-2,38 (m, 1H), 1,95 (ddd, 1H, J = 14, 12, 4,7 Hz), 1,85-1,77 (m, 1H), 1,75-1,67 (m, 1H), 1,43 (s, 9H), 1,27 (s, 3H) 1,20 (s, 3H), 1,08 (d, 3H, J = 7,0 Hz), 1,03 (d, 3H, J = 6,7 Hz), 0,98 (d, 3H, J = 6,5 Hz).
Preparación de la sal de clorhidrato del glicinato de Criptoficina 55 (19' ) (LSN 368422). A una solución de 18' (122 mg, 0,141 mmol) en 471 \mul de cloruro de metileno a temperatura ambiente, se añadió una solución de cloruro de hidrógeno en 1,4-dioxano (178 \mul, 0,707 mmol). Tras agitar durante 1 H 20 min, la mezcla de reacción incolora y transparente se concentró a vacío para dar 120 mg (99%, corregido para dioxano al 7% en peso) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (MEOH-d_{4}) d 7,81 (dd, 1H, J = 8,5, 2,2 Hz), 7,46-7,41 (m, 2H), 7,40-7,36 (m, 3H), 7,31 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 7,20 (dd, 1H, J = 8,4, 2,1 Hz), 7,01 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,70 (ddd,1M, J = 15, 13, 3,7 Hz), 5,97 (dd, 1H, J = 15, 1,7 Hz), 5,55 (d, 1H, J = 9,9 Hz), 5,18 (d, 1H, J = 9,9 Hz), 5,14 (dd, 1H, J = 10, 2,8 Hz), 4,84 (t, 1H, J = 10 Hz), 4,52 (dd, 1H, J = 11, 3,7 Hz), 3,87 (s, 3H), 3,78 (d, 1H, J = 18 Hz), 3,50 (dd, 1H, J = 13, 9,8 Hz), 3,23 (d, 1H, J = 18 Hz), 3,20 (dd, 1H, J = 14, 3,6 Hz), 3,13 (dd, 1H, J = 13, 2,4 Hz), 2,80-2,69 (m, 3H), 2,41-2,32 (m, 1H), 1,99-1,92 (m, 1H), 1,91-1,81 (m, 2H), 1,25 (s, 3H), 1,20 (s, 3H), 1,12 (d, 3H,
J = 7,0 Hz), 1,06 (d, 3H, J = 6,2 Hz), 1,04 (d, 3H, 6,2 Hz).
Preparación del N-t-Boc-\beta-alaninato de Criptoficina 55 (20') (LSN 379404). A una solución de 1' (102 mg, 0,145 mmol), t-Boc-D-alanina (41 mg, 0,217 mmol), y 4-dimetilamino piridina (18 mg, 0,145 mmol) en 400 \mul de cloruro de metileno a anhidro temperatura ambiente, se añadió una solución de1,3-diciclohexilcarbodiimida (45 mg, 0,217 mmol) en 85 \mul de cloruro de metileno. Tras agitar durante 3,5 h, la mezcla de reacción blanca turbia se diluyó con acetato de etilo - hexanos (3:1, 1 mL), se agitó durante 10 min, y se filtró a través de un tapón de celite, lavando con acetato de etilo - hexanos (3:1). El filtrado y los lavados se concentraron a vacío para dar un aceite incoloro. La cromatografía (21 g de gel de sílice súbito, acetato de etilo - hexanos (primero 2:1 y después 4:1) proporcionó 121 mg (95%) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (CDCl_{3}) d 7,44-7,39 (m, 2H), 7,37-7,31 (m, 3H), 7,32 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 7,20 (dd, 1H, J = 8,4, 2,1 Hz), 7,01 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,72 (ddd, 1H,
J = 15, 13, 3,7 Hz), 5,96 (dd, 1H, J = 15, 1,6 Hz), 5,51 (d, 1H, J = 9,8 Hz), 5,11-5,06 (m, 1H), 5,08 (d, 1H, J = 9,8 Hz), 4,90-4,83 (m, 1H), 4,50 (dd, 1H, J = 11, 3,6 Hz), 3,86 (s, 3H), 3,52-3,46 (m, 1H), 3,20 (dd, 1H, J = 14, 3,6 Hz), 3,13 (br d, 1H, J = 14 Hz), 3,05-2,92 (m, 2H), 2,79-2,63 (m, 3H), 2,45-2,37 (m, 1H), 2,24 (dt, 1H, J = 16, 7,0 Hz), 2,08-1,99 (m, 1H), 1,96-1,79 (m, 3H), 1,43 (s, 9H), 1,25 (s, 3H), 1,21 (s, 3H), 1,12 (d, 3H, J = 7,0 Hz), 1,06 (d, 3H,
J = 6,2 Hz), 1,02 (d, 3H, J = 6,1 Hz) .
Preparación de la sal de clorhidrato del p-alaninato de Criptoficina 55 (21') (LSN 377718). A una solución de 20' (119 mg, 0,136 mmol) en 452 \mul de cloruro de metileno a temperatura ambiente, se añadió una solución de cloruro de hidrógeno 4,0 M en 1,4-dioxano (170 l, 0,679 mmol). Tras agitar durante 2 h 15 min, la mezcla de reacción blanca turbia se concentró a vacío para dar 110 mg (96%, corregido para dioxano al 4% en peso) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (MEOH-d_{4}) d 7,80 (dd, 1H, J = 9,7, 2,3 Hz), 7,45-7,40 (m, 2H), 7,39-7,32 (m, 3H), 7,20 (dd, 1H, J = 8,4, 2,1 Hz), 7,01 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,68 (ddd, 1H, J = 15, 13, 3,8 Hz), 5,98 (dd, 1H, J = 15, 1,7 Hz), 5,48 (dd, 1H, J = 9,4 1,0 Hz), 5,15-5,11 (m, 1H), 5,13 (d, 1H, J = 9,4 Hz), 4,82 (t, 1H, J = 10 Hz), 4,51 (dd, 1H, J = 11, 3,7 Hz), 3,90 (s, 3H), 3,50 (dd, 1H, J = 14, 9,8 Hz), 3,20 (dd, 1H, J = 14, 3,7 Hz), 3,14 (dd, 1H, J = 14, 2,4 Hz), 2,85 (t, 2H, J = 7,0 Hz), 2,80-2,65 (m, SH), 2,54 (dt, 1H, J = 17, 7,4 Hz), 2,42-2,33 (m, 1H), 2,22 (dt, 1H, J = 17, 6,7 Hz), 1,90-1,81 (m, 3H), 1,25 (s, 3H), 1,20 (s, 3H), 1,13 (d, 3H, J = 7,1 Hz), 1,08 (d, 3H, J = 6,3 Hz), 1,04 (d, 3H, J = 6,2 Hz.
Preparación del N-t-Boc-\gamma-aminobutirato de Criptoficina 55 (22') (LSN 379401). A una solución de 1' (48 mg, 0,068 mmol), ácido N-t-Boc-4-aminobutírico (18 mg, 0,088 mmol), y 4-dimetilamino piridina (8 mg, 0,068 mmol) en 150 \mul de cloruro de metileno anhidro a temperatura ambiente, se añadió una solución de 1,3-diciclohexilcarbodiimida (18 mg, 0,088 mmol) en 150 \mul de cloruro de metileno. Tras agitar durante 45 min, la mezcla de reacción blanca turbia se diluyó con acetato de etilo - hexanos (3:1, 0,5 mL), se agitó durante 5 min, y se filtró a través de un tapón de celite, lavando con acetato de etilo - hexanos (3:1). El filtrado y los lavados se concentraron a vacío para dar un aceite incoloro. La cromatografía (15 g de gel de sílice súbito, acetato de etilo - hexanos (3:1) proporcionó 55 mg (90%) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (CDCl_{3}) d 7,38-7,32 (m, 5H), 7,24 (d, 1H,
J = 1,9 Hz), 7,22-7,19 (m, 1H), 7,10 (dd, 1H, J = 8,4, 1,9 Hz), 6,88 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,75 (ddd, 1H, J = 15, 13, 3,9 Hz), 5,78 (d, 1H, J = 15 Hz),5,60-5,55 (m, 1H), 5,49 (dd, 1H, J = 9,8, 1,4 Hz), 4,96 (dd, 1H, J = 11, 3,0 Hz), 4,89 (t, 1H, J = 9,2 Hz), 4,81 (d, 1H, J = 9,8 Hz), 4,78-4,70 (m, 1H), 4,44 (br s, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,40 (dd, 1H, J = 14, 8,1 Hz), 3,22 (dd, 1H, J = 14, 4,1 Hz),3,22-3,15 (m, 1H) 3,08 (dd, 1H, J = 14, 7,8 Hz),2,89-2,82 (m, 2H),2,67-2,56 (m, 2H),2,47-2,38 (m, 1H),2,11-2,04 (m, 1H),2,00-1,77 (m, 3H),1,75-1,67 (m, 1H), 1,45 (s, 9H),1,50-1,40 (m, 2H), 1,27 (s, 3H), 1,20 (s, 3H), 1,09 (d, 3H, J = 7,0 Hz), 1,04 (d, 3H, J = 6,6 Hz), 0,98 (d, 3H, J = 6,6 Hz).
Preparación de la sal de clorhidrato del \gamma-aminobutirato de Criptoficina 55 (25') (LSN 368513). A una solución de 22' (53 mg, 0,059 mmol) en 297 \mul de cloruro de metileno a temperatura ambiente se añadió una solución de cloruro de hidrógeno 1,0 M en dietil éter (297 l, 0,297 mmol). El material de partida precipitó en forma de una pasta blanca, que se redisolvió con 150 \mul más de cloruro de metileno. Tras agitar durante 4 h, se añadieron otros 59 (0,059 mmol) de solución de cloruro de hidrógeno. Se continuó la agitación durante 14 h más, y la mezcla de reacción se concentró a vacío para dar 49 mg (100%) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) d 8,49 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,72 (br s, 3H), 7,44-7,33 (m, 5H), 7,32 (d, 1H, J = 1,9 Hz), 7,29 (dd, 1H, J = 9,4, 2,6 Hz), 7,20 (dd, 1H, J = 8,5, 1,9 Hz), 7,06 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 6,48 (ddd, 1H, J = 15, 13, 3,9 Hz), 5,87 (d, 1H, J = 15 Hz), 5,37 (d, 1H, J = 9,7 Hz), 5,33 (d, 1H, J = 9,7 Hz), 5,04-5,01 (m, 1H), 4,73 (t, 1H, J = 11 Hz), 4,25 (ddd, 1H, J = 12, 9,8, 3,5 Hz), 3,82 (s, 3H), 3,40-3,30 (m, 1H), 3,07-3,01 (m, 2H), 2,72 (dd, 1H, J = 14, 12 Hz), 2,65-2,47 (m, 4H), 2,38-2,28 (m, 1H), 2,21 (dt, 1H, J = 17, 7,5 Hz), 1,97 (dt, 1H, J = 17, 7,5 Hz), 1,80-1,70 (m, 3H), 1,54-1,46 (m, 2H), 1,17 (s, 3H), 1,03 (s, 3H), 1,01 (d, 3H, J = 7,0 Hz), 0,99 (d, 3H, J = 5,8 Hz), 0,95 (d, 3H, J = 5,8 Hz).
Preparación del N-t-Boc-(L)-alaninato de Criptoficina 55 (26') (LSN 379405). A una solución de 1' (103 mg, 0,146 mmol), N-t-Boc-(L)-alanina (41 mg, 0,219 mmol), y 4-dimetilamino piridina (18 mg, 0,146 mmol) en 400 de cloruro de metileno anhidro a temperatura ambiente, se añadió una solución de 1,3-diciclohexilcarbodiimida (45 mg, 0,219 mmol) en 87 \mul de cloruro de metileno. Tras agitar durante 5 h 50 min, la mezcla de reacción blanca turbia se trató con otros 5,5 mg (0,029 mmol) de N-t-Boc-(L)-alanina, 6,0 mg (0,029 mmol) de 1,3-diciclohexilcarbodiimida, y unos pocos cristales de 4-dimetilamino piridina. Tras agitar durante 1 hora más, la reacción se diluyó con acetato de etilo - hexanos (3:1, 1 mL), se agitó durante 10 min, y se filtró a través de un tapón de celite, lavando con acetato de etilo - hexanos (3:1). El filtrado y los lavados se concentraron a vacío para dar un aceite incoloro, y se filtró a través de un tapón de celite, lavando con acetato de etilo - hexanos (3:1). El filtrado y los lavados se concentraron a vacío para dar un aceite incoloro. La cromatografía (22 g de gel de sílice súbito, acetato de etilo - hexanos (primero 1,5:1 a continuación 2:1 y después 4:1) proporcionó 96 mg (75%) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (CDCl_{3}) d 7,35-7,30 (m, 5H), 7,26-7,21 (m, 2H), 7,10 (dd, 1H, J = 8,4, 1,9 Hz), 6,88 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,76 (ddd, 1H, J = 15, 13, 4,2 Hz), 5,77 (d, 1H, J = 15 Hz), 5,52 (d, 1H, 7,6 Hz), 5,44 (d, 1H, J = 9,7 Hz), 4,98 (dd, 1H, J = 11, 2,5 Hz), 4,85-4,81 (m, 2H), 4,75 (q, 1H, J = 6,8 Hz), 4,56 (d, 1H, J = 7,8 Hz),4,01-3,96 (m, 1H), 3,91 (s, 3H),3,41 (dd, 1H, J = 13, 8,3 Hz), 3,20 (dd, 1H, J = 13, 4,0 Hz), 3,16 (dd, 1H, J = 15, 5,9 Hz), 3,08 (dd, 1H,
J = 15, 7,6 Hz), 2,65-2,57 (m, 2H), 2,40-2,31 (m, 1H), 2,02-1,96 (m, 1H), 1,87-1,73 (m, 2H), 1,43 (s, 9H), 1,27 (s, 3H), 1,20 (s,3H), 1,11-1,02 (m, 9H), 0,99 (d, 3H, J = 6,3 Hz).
Preparación de la sal de clorhidrato del (L)-alaninato de Criptoficina 55 (28') (LSN 377719). A una solución de 26' (95 mg, 0,108 mmol) en 361 \mul de cloruro de metileno a temperatura ambiente, se añadió una solución de cloruro de hidrógeno 4,0 M en 1,4-dioxano (135 \mul, 0,542 mmol). Tras agitar durante 2,5 h, la mezcla de reacción blanca turbia se concentró a vacío para dar 90 mg (96%, corregido para dioxano al 6% en peso) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (MeOH-d_{4}) d 8,54 (d, 1H, 7,6 Hz), 7,81 (br d, 1H, J = 9,7 Hz), 7,46-7,44 (m, 2H), 7,39-7,37 (m, 3H), 7,32 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 7,20 (dd, 1H, J = 8,4, 2,0 Hz), 7,01 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 6,69 (ddd, 1H, J = 15, 11, 3,7 Hz),5,99 (d, 1H, 15 Hz), 5,55 (d, 1H, J = 9,8 Hz), 5,20 (d, 1H, J = 9,8 Hz), 5,15 (dd, 1H, J = 11, 2,7 Hz), 4,78 (t, 1H, J = 11 Hz), 4,53-4,50 (m, 1H) 3,87 (s, 3H), 3,65 (q, 1H, J = 7,3 Hz), 3,50 (dd, 1H,
J = 13, 9,8 Hz), 3,20 (dd, 1H, J = 14, 3,5 Hz), 3,14 (br d, 1H, J = 13 Hz), 2,81-2,71 (m, 3H), 2,41-2,34 (m, 1H), 1,98-1,93 (m, 1H), 1,88-1,82 (m, 2H), 1,41 (d, 3H, J = 7,3 Hz), 1,25 (s, 3H), 1,20 (s, 3H), 1,13 (d, 3H, J = 7,0 Hz), 1,06 (d, 3H, J = 6,2 Hz), 1,04 (d, 3H, 6,0 Hz).
Preparación del N-t-Boc-(D)-alaninato de Criptoficina 55 (29') (LSN 382426). A una solución de 1' (25 mg, 0,035 mmol), N-t-Boc-(D)-alanina (10 mg, 0,053 mmol), y 4-dimetilamino piridina (0,4 mg, 0,0035 mmol) en 130 de cloruro de metileno anhidro a temperatura ambiente, se añadió una solución de 1,3-diciclohexilcarbodiimida (11 mg, 0,053 mmol) en 471 \mul de cloruro de metileno. Tras agitar durante 5,5 h, la mezcla de reacción blanca turbia se diluyó con acetato de etilo - hexanos (3:1, 0,5 mL), se agitó durante 10 min, y se filtró a través de un tapón de celite, lavando con acetato de etilo - hexanos (3:1). El filtrado y los lavados se concentraron a vacío para dar un aceite incoloro. La cromatografía (15 g de gel de sílice súbito, acetato de etilo - hexanos (2:1) proporcionó 26 mg (83%) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (CDCl_{3}) d 7,49-7,29 (m, 5H), 7,24 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 7,22-7,18 (m, 1H), 7,09 (dd, 1H, 8,4, 2,0 Hz), 6,87 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,76 (ddd, 1H, J = 15, 13, 4,4, Hz), 5,77 (d, 1H, 15 Hz), 5,56 (d, 1H, J = 9,9 Hz), 5,48 (d, 1H, J = 7,7 Hz), 5,01 (dd, 1H, J = 10, 2,6 Hz), 4,91 (t, 1H, J = 9,4 Hz), 4,84 (d, 1H, J = 9,9 Hz), 4,81-4,73 (m, 2H), 3,99-3,93 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,39 (dd, 1H, J = 13, 8,0 Hz), 3,22 (dd, 1H, J = 13, 3,6 Hz), 3,17 (dd, 1H, J = 14, 5,0 Hz), 3,08 (dd, 1H, J = 14 Hz), 2,68-2,58 (m, 2H), 2,42-2,35 (m, 1H), 2,04-1,94 (m, 1H), 1,87-1,50 (m, 2H), 1,42 (s, 9H), 1,27 (s, 3H), 1,20 (s, 3H), 1,09 (d, 3H, J = 7,1 Hz), 1,04 (d, 3H,
J = 6,4 Hz), 0,99 (d, 3H, J = 6,3 Hz), 0,65 (d, 3H, J = 6,8 Hz).
Preparación de la sal de clorhidrato del (D)-alaninato de Criptoficina 55 (30') (LSN 382425). A una solución de 29' (24 mg, 0,027 mmol) en 274 \mul de cloruro de metileno a temperatura ambiente, se añadió una solución de cloruro de hidrógeno 4,0 M en 1,4-dioxano (34 \mul, 0,137 mmol). Tras agitar durante 3,5 h, la mezcla de reacción transparente e incolora se concentró a vacío para dar 24 mg (100%, corregido para dioxano al 8% en peso) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (MeOH-d_{4}) d 7,79 (d, 1H, J = 9,5 Hz), 7,47-7,40 (m, 2H), 7,40-7,36 (m, 3H), 7,31 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 7,20 (dd, 1H, J = 8,4, 2,0 Hz), 7,01 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,71 (ddd, 1H, J = 15, 13, 3,7 Hz), 5,98 (dd, 1H, J = 15, 1,6 Hz), 5,65 (d, 1H, J = 10 Hz), 5,20 (d, 1H, J = 10 Hz), 5,17 (dd, 1H, J = 11, 2,5 Hz), 4,88-4,78 (m, 1H), 4,53 (dd, 1H, J = 11, 3,7 Hz), 3,95 (q, 1H, J = 7,2 Hz), 3,87 (s, 3H), 3,51 (dd, 1H, J = 13, 9,8 Hz), 3,20 (dd, 1H, J = 14, 3,6 Hz), 3,14 (dd, 1H, J = 13, 2,3 Hz), 2,81-2,74 (m, 3H), 2,41-2,34 (m, 1H), 2,07-1,99 (m, 1H), 1,96-1,84 (m 2H), 1,26 (s, 3H), 1,21 (s, 3H), 1,15 (d, 3H, J = 7,1 Hz), 1,09 (d, 3H, J = 6,0 Hz), 1,05 (d, 3H, J = 6,0 Hz), 0,80 (d, 3H, J = 7,4 Hz).
Preparación del N\alpha-N\varepsilon-di-t-Boc-(L)-lisinato de Criptoficina 55 (31') (LSN379406). A una solución de 1' (105 mg, 0,149 mmol), N\alpha-N\varepsilon-di-t-Boc-(L)-lisina (67 mg, 0,193 mmol), y 4-dimetilamino piridina (18 mg, 0,149 mmol) en 400 \mul de cloruro de metileno anhidro a temperatura ambiente, se añadió una solución de 1,3-diciclohexilcarbodiimida (40 mg, 0,193 mmol) en 96 \mul de cloruro de metileno. Tras agitar durante 4 h, la mezcla de reacción blanca turbia se trató con otros 10 mg (0,030 mmol) de N\alpha-N\varepsilon-di-t-Boc-(L)-lisina y 6,1 mg (0,030 mmol) de 1,3-diciclohexilcarbodiimida como solución en 100 de cloruro de metileno. Tras agitar durante 1 hora más, la mezcla de reacción blanca turbia se diluyó con acetato de etilo - hexanos (3:1, 1 mL), se agitó durante 10 min, y se filtró a través de un tapón de celite, lavando con acetato de etilo - hexanos (3:1). El filtrado y los lavados se concentraron a vacío para dar una espuma blanca, que se volvió a someter a las condiciones anteriores usando 34 mg (0,097 mmol) de N\alpha-N\varepsilon-di-t-Boc-(L)-lisina, 20 mg (0,097 mmol) de 1,3-diciclohexilcarbodiimida, y 9,1 mg (0,075 mmol) de 4-dimetilamino piridina. Tras agitar durante 1,5 h, la reacción se procesó como más arriba para proporcionar una espuma blanca. La cromatografía (21 g de gel de sílice súbito, acetato de etilo - hexanos (1:1 y a continuación 4:1) proporcionó 112 mg (73%) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (MeOH-d_{4}) d 7,42-7,37 (m, 2H), 7,36-7,29 (m, 3H), 7,27 (br s,1H), 7,16 (br d, 1H, J = 8,5 Hz), 6,97 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 6,72 (ddd, 1H, J = 15, 13, 3,5 Hz), 5,92 (d, 1H, J = 15 Hz), 5,50 (d, 1H, J = 11 Hz), 5,11-5,04 (m, 2H), 4,84 (t, 1H, J = 10 Hz), 4,48 (dd, 1H, J = 11, 3,6 Hz), 3,84 (s, 3H), 3,75 (br s, 1H), 3,50-3,43 (m, 1H), 3,17 (dd, 1H, J = 14, 3,6 Hz), 3,11 (d, 1H, J = 14 Hz), 2,97-2,91 (m, 2H), 2,76-2,58 (m, 3H), 2,36-2,27 (m, 1H), 1,98-1,80 (m, 3H), 1,48-1,38 (m, 2H), 1,43 (s, 9H), 1,40 (s, 9H), 1,35-1,25 (m, 2H), 1,23 (s, 3H), 1,20 (s, 3H), 1,15-1,09 (m, 2H), 1,07 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 1,06 (d, 3H, J = 6,0 Hz), 1,01 (d, 3H, J = 6,1 Hz).
Preparación de la sal de diclorhidrato del (L)-lisinato de Criptoficina 55 (32')(LSN 377562). A una solución de 31' (107 mg, 0,103 mmol) en 345 \mul de cloruro de metileno a temperatura ambiente, se añadió una solución de cloruro de hidrógeno 4,0 M en 1,4-dioxano (155 \mul, 0,621 mmol). Tras agitar durante 4 h, la mezcla de reacción blanca turbia se lavó con cloruro de metileno (2 x 1 mL) y se secó a vacío a temperatura ambiente para dar 87 mg (93%) del compuesto del título 500 MHz ^{1}H RMN (MeOH-d_{4}) d 8,61 (d, 1H, J = 7,7 Hz), 7,81 (d, 1H, J = 7,7 Hz), 7,47-7,44 (m, 2H), 7,40-7,38 (m, 3H), 7,31 (d, 1H, J = 2,2 Hz), 7,20 (dd, 1H, J = 8,4, 2,2 Hz), 7,00 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,63 (ddd, 1H, J = 15, 13, 4,0 Hz), 6,00 (dd, 1H, J = 15, 1,6 Hz), 5,55 (d, 1H, J = 9,8 Hz), 5,20 (d, 1H, J = 9,8 Hz), 5,15 (dd, 1H, J = 10, 2,9 Hz), 4,68 (t, 1H, J = 11 Hz), 4,55-4,49 (m, 1H), 3,87 (s, 3H), 3,79 (t, 1H, J = 5,6 Hz), 3,52 (dd, 1H, J = 14, 9,9 Hz), 3,20 (dd, 1H, J = 14, 3,6 Hz), 3,13 (dd, 1H, J = 13, 2,4 Hz), 3,06-2,98 (m, 1H), 2,94-2,87 (m, 1H), 2,85-2,74 (m, 3H), 2,45-2,38 (m, 1H), 1,981,76 (m, 5H), 1,71-1,64 (m, 2H), 1,39-1,30 (m, 2H), 1,25 (s, 3H), 1,18 (d, 3H,
J = 8,2 Hz), 1,17 (s, 3H), 1,08 (d, 3H, J = 6,2 Hz), 1,05 (d, 3H, J = 6,1 Hz).
Preparación del N\alpha-N\varepsilon-di-t-Boc-(D)-lisinato de Criptoficina 55 (33') (LSN 382504). A una solución de 1' (24 mg, 0,035 mmol), N\alpha-N\varepsilon-di-t-Boc-(D)-lisina 247 mg, 0,069 mmol), y 4-dimetilamino piridina (0,4 mg, 0,0035 mmol) en 140 \mul de cloruro de metileno anhidro a temperatura ambiente, se añadió una solución de 1,3-diciclohexilcarbodiimida (14 mg, 0,069 mmol) en 30 \mul de cloruro de metileno. Tras agitar durante 70 min, la mezcla de reacción blanca turbia se diluyó con acetato de etilo - hexanos (3:1, 0,5 mL), se agitó durante 10 min, y se filtró a través de un tapón de celite, lavando con acetato de etilo - hexanos (3:1). El filtrado y los lavados se concentraron a vacío para dar un aceite de color crema. La cromatografía (15 g de gel de sílice súbito, acetato de etilo - hexanos (2:1) proporcionó 30 mg (87%) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (MeOH-d_{4}) d 7,46-7,40 (m, 2H),7,39-7,31 (m, 3H), 7,31 (d, 1H, J = 1,8 Hz), 7,20 (dd, 1H, J = 8,4, 1,8 Hz), 7,01 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,75 (ddd, 1H, J = 16, 11, 3,7 Hz), 5,93 (d, 1H, J = 16 Hz), 5,59 (d, 1H, J - 10 Hz),5,13-5,09 (m, 2H), 4,92 (t, 1H, J = 9,8 Hz), 4,52 (dd, 1H, J = 11, 3,6 Hz), 3,87 (s, 3H), 3,79-3,75(m, 1H), 3,48 (d, 1H, J = 13 Hz), 3,21 (dd, 1H, J = 14, 3,7 Hz), 3,12 (d, 1H, J = 13 Hz), 2,97-2,91(m, 2H), 2,80-2,62 (m, 3H), 2,41-2,32 (m, 1H), 1,98-1,82 (m, 3H), 1,48-1,38 (m, 2H), 1,46 (s, 9H) 1,42 (s, 9H), 1,35-1,20 (m, 2H), 1,25 (s, 3H), 1,21 (s, 3H)1,15-0,09 (m, 2H), 1,14 (d, 3H, J = 7,0 Hz), 1,07 (d, 3H, J = 6,0 Hz), 1,03 (d, 3H, J = 6,0 Hz).
Preparación de la sal de di clorhidrato del (D)-lisinato de Criptoficina 55 (34') (LSN 377503). A una solución de 33' (28 mg, 0,027 mmol) en 181 \mul de cloruro de metileno a temperatura ambiente, se añadió una solución de cloruro de hidrógeno 4,0 M en 1,4-dioxano (41 \mul, 0,162 mmol). Tras agitar durante 5,5 h, la mezcla de reacción blanca turbia se concentró a vacío para dar 25 mg (96%, corregido para dioxano al 4,5% en peso) del compuesto del título en forma de un sólido de color crema. 500 MHz ^{1}H RMN (MeOH-d_{4}) d 8,47 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 7,76 (dd, 1H, J = 9,6, 2,1 Hz), 7,47-7,36 (m, 5H), 7,28 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 7,17 (dd, 1H, J = 8,4, 2,1 Hz), 6,98 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,68 (ddd, 1H, J = 15, 11, 3,7 Hz), 5,95 (dd, 1H, J = 15, 1,1 Hz), 5,67 (d, 1H, J = 10 Hz), 5,21 (d, 1H, J = 10 Hz), 5,14 (dd, 1H,
J = 10, 2,5 Hz), 4,83-4,77 (m, 1H), 4,52-4,49 (m, 1H), 3,92 (t, 1H, J = 6,1 Hz), 3,84 (s, 3H), 3,47 (dd, 1H, J = 14, 9,8 Hz), 3,18 (dd, 1H, J = 14, 3,6 Hz), 3,12 (dd, 1H, J = 14, 2,2 Hz), 2,83 (t, 2H, J = 7,6 Hz), 2,78-2,70 (m, 3H), 2,38-2,30 (m, 1H), 2,02-1,82 (m, 3H), 1,52-1,43 (m, 2H), 1,23 (s, 3H) 1,22-1,00 (m, 4H), 1,18 (s, 3H), 1,13 (d, 3H, J = 8,2 Hz), 1,06 (d, 3H, J = 6,2 Hz), 1,02 (d, 3H, J = 6,1 Hz).
Preparación del N-t-Boc-\gamma-t-butil éster del (L)-glutamato de Criptoficina 55 (35')(LSN 382366). A una solución de 1' (27 mg, 0,038 mmol), g-t-butil éster del ácido N-t-Boc-(L)-glutámico (17 mg, 0,057 mmol), y 4-dimetilamino piridina (0,5 mg, 0,0038 mmol) en 150 \mul de cloruro de metileno anhidro a temperatura ambiente, se añadió una solución de 1,3-diciclohexilcarbodiimida (12 mg, 0,057 mmol) en 41 \mul de cloruro de metileno. Tras agitar durante 60 min, la mezcla de reacción blanca turbia se diluyó con acetato de etilo - hexanos (2:1, 2 mL), se agitó durante 10 min, y se filtró a través de un tapón de celite, lavando con acetato de etilo - hexanos (2:1). El filtrado y los lavados se concentraron a vacío para dar un aceite de color crema. La cromatografía (15 g de gel de sílice súbito, acetato de etilo - hexanos (1:1) proporcionó 28 mg (74%) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (CDCl_{3}) d 7,39-7,29 (m, 5H), 7,24 (d, 1H, J = 1,9 Hz), 7,22-7,18 (m, 1H), 7,10 (dd, 1H, J = 8,5, 1,9 Hz), 6,87 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 6,76 (ddd, 1H, J = 15, 13, 4,5 Hz), 5,78 (d, 1H, J = 15 Hz), 5,65 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 5,43 (d, 1H,
J = 9,7 Hz), 4,99 (dd, 1H, J = 10, 2,7 Hz),4,90-4,80 (m, 1H), 4,83 (d, 1H, J = 9,7 Hz), 4,69-4,61 (m, 1H), 4,55 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 4,01-3,96 (m, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,40 (dd, 1H, J = 13, 8,0 Hz), 3,24 (dd, 1H, J = 13, 4,1 Hz), 3,18 (dd, 1H, J = 15, 5,0 Hz), 3,11 (dd, 1H, J = 15, 7,9 Hz),2,65-2,57 (m, 2H),2,39-2,30 (m, 1H), 2,14-2,09 (m, 2H), 2,00-1,92 (m, 1H), 1,87-1,73 (m, 3H), 1,60-1,50 (m, 1H), 1,44 (s, 18H), 1,27 (s, 3H), 1,21 (s, 3H), 1,08 (d, 3H, J = 7,0 Hz), 1,05 (d, 3H, J = 6,4 Hz), 1,00 (d, 3H, J = 6,3 Hz).
Preparación de la sal de clorhidrato del (L)-\alpha-glutamato de Criptoficina 55 (36') (LSN 382367). A una solución de 35' (23 mg, 0,023 mmol) en 232 \mul de cloruro de metileno de a temperatura ambiente, se añadió una solución de cloruro de hidrógeno 4,0 M en 1,4-dioxano (2941, 0,116 mmol). Tras agitar durante 8,5 h, la mezcla de reacción incolora transparente se concentró a vacío para dar 20 mg (97, corregido para dioxano al 3% en peso) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (MeOH-d_{4}) d 7,79 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 7,50-7,36 (m, 5H), 7,31 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 7,20 (dd, 1H, J = 8,6, 2,0 Hz), 7,01 (d, 1H, J 8,6 Hz), 6,75-6,65 (m, 1H), 5,98 (d, 1H, 15 Hz), 5,57 (d, 1H, J = 9,7 Hz), 5,20 (d, 1H, J = 9,7 Hz),5,15 (dd, 1H, J = 11, 3,0 Hz), 4,90-4,80 (m, 1H), 4,52 (dd, 1H, J = 11, 3,7 Hz), 3,87 (s, 3H),3,80-3,66 (m, 1H), 3,49 (dd, 1H, J = 13, 10 Hz), 3,21 (dd, 1H, J = 14, 3,6 Hz),3,15 (dd, 1H, J = 14, 2,3 Hz), 2,82-2,72 (m, 3H), 2,41-2,30 (m, 3H), 2,05-1,81 (m, 5H), 1,25 (s, 3H), 1,20 (s, 3H), 1,15 (d, 3H, J = 7,1 Hz), 1,07 (d, 3H, J = 6,2 Hz), 1,05 (d, 3H, J = 6,1 Hz).
Preparación N-t-Boc-\beta-t-butil éster-(L) aspartato de Criptoficina 55 (37') (LSN 382501) y del N-t-Boc-\beta-t-butil éster-(D)-aspartato de criptoficina 55 (39') (LSN 387040). A una solución de 1' (176 mg, 0,249 mmol), \beta-t-butil éster del ácido N-t-Boc-(L)-aspártico (144 mg, 0,499 mmol), y 4-dimetilamino piridina (2,0 mg, 0,066 mmol) en 1,0 ml de cloruro de metileno anhidro de a temperatura ambiente, se añadió una solución de 1,3-diciclohexilcarbodiimida (103 mg, 0,499 mmol) en 200 \mul de cloruro de metileno. Tras la mezcla de reacción blanca turbia agitar durante 45 min, se trató con 88 mg de celite y se diluyó con acetato de etilo - hexanos (3:1), se agitó durante 10 min y se filtró a través de un tapón de celite, lavando con acetato de etilo - hexanos (3:1). El filtrado y los lavados se concentraron a vacío para dar un aceite de color crema. La cromatografía (30 g de gel de sílice súbito, acetato de etilo - hexanos (2:1) proporcionó el compuesto 37' puro (Rf inferior) junto con fracciones mixtas. Las fracciones mixtas se sometieron a cromatografía (25 g de gel de sílice súbito, acetato de etilo - hexanos (primero 1:1, luego 2:1) y se consiguió más 37' junto con 39' (Rf mayor). Se mezclaron todas las fracciones que contenían 39' puro para dar 149 mg (61%) en forma de una espuma blanca, aunque todas las fracciones contenían 39' puro se combinaron para dar 56 mg (23%) en forma de una espuma blanca. 500 MHz Datos de ^{1}H RMN (CDCl_{3}) para 37' d 7,39-7,30 (m, 5H), 7,24 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 7,24-7,18 (m, 1H), 7,09 (dd, 1H, J = 8,4, 2,0 Hz), 6,88 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,76 (ddd, 1H, J = 15, 13, 4,3 Hz), 5,75 (d, 1H, 15 Hz), 5,50 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 5,46 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 5,01-4,98 (m, 2H), 4,93 (t, 1H, J = 9,9 Hz), 4,85 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 4,78-4,71 (m, 1H), 4,17-4,10 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,41 (dd, 1H, J = 13, 8,2 Hz), 3,22 (dd, 1H, J = 13, 3,9 Hz), 3,17 (dd, 1H, J = 14, 5,1 Hz), 3,09 (dd, 1H, J = 14, 7,7 Hz), 2,61-2,50 (m, 4H), 2,36-2,28 (m, 1H), 2,02-1,97 (m, 1H) 1,83-1,76 (m, 2H), 1,45 (s, 9H), 1,41 (s, 9H) 1,28 (s, 3H), 1,20 (s, 3H), 1,06-1,01 (m, 6H), 0,99 (d, 3H,
J = 6,2 Hz). Datos de ^{1}H RMN (CDCl_{3}) para 39' d 7,39-7,30 (m, 5H), 7,24 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 7,24-7,18 (m, 1H), 7,09 (dd, 1H, J = 8,4, 2,0 Hz), 6,88 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,73 (ddd, 1H, J = 15, 13, 4,3 Hz), 5,74 (d, 1H, 15 Hz), 5,47 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 5,42 (d, 1H, J = 9,1 Hz), 5,29 (d, 1H, J = 9,0 Hz), 4,98 (dd, 1H, J = 10, 3,0 Hz), 4,92 (t, 1H, J = 9,6 Hz), 4,85 (d, 1H, J = 9,1 Hz),4,77-4,71 (m, 1H), 4,18-4,12 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,39 (dd, 1H, J = 13, 8,1 Hz), 3,21 (dd, 1H, J = 13, 4,0 Hz), 3,16 (dd, 1H, J = 14, 5,2 Hz), 3,07 (dd, 1H, J = 14, 7,6 Hz), 2,63-2,52 (m, 2H), 2,45 (dd, 1H, J = 17, 5,8 Hz), 2,36-2,26 (m, 1H), 2,22 (dd, 1H, J = 17, 4,5 Hz),1,99-1,90 (m, 1H), 1,86-1,69 (m, 2H), 1,47 (s, 9H), 1,43 (s, 9H), 1,25 (s, 3H), 1,19 (s, 3H), 1,11 (d, 3H, J = 7,0 Hz), 1,03 (d, 3H, J = 6,5 Hz), 0,99 (d, 3H, J = 6,4 Hz).
Preparación de la sal de clorhidrato del (L)-aspartato de Criptoficina 55 (38') (LSN 382502) A una solución de 37' (146 mg, 0,149 mmol) en 498 \mul de cloruro de metileno a temperatura ambiente se añadió una solución de cloruro de hidrógeno 4,0 M en 1,4-dioxano (374 \mul, 1,49 mmol). Tras agitar durante 19 h, la mezcla de reacción incolora y transparente se concentró a vacío para dar 131 mg (100%, corregido para dioxano al 2% en peso) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (MeOH-d_{4}) d 7,79 (d, 1H, J = 7,6 Hz),7,45-7,36 (m, 5H), 7,31 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 7,20 (dd, 1H, J = 8,6, 2,0 Hz), 7,01 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 6,75 (ddd, 1H, J = 15, 13, 3,7 Hz), 5,96 (dd, 1H, 15, 1,8 Hz), 5,54 (d, 1H, J = 10 Hz), 5,17 (d, 1H, J = 10 Hz), 5,14 (dd, 1H, J = 11, 2,1 Hz), 4,89 (t, 1H, J = 11 Hz), 4,52 (dd, 1H, J = 11, 3,7 Hz), 3,87 (s,3H), 3,55 (t, 1H, J = 4,4 Hz), 3,52-3,47 (m, 1H), 3,21 (dd, 1H, J = 14, 3,6 Hz), 3,13 (d, 1H, J = 14 Hz), 2,99 (dd, 1H, J = 18, 5,0 Hz), 2,83 (dd, 1H, J = 18, 3,9 Hz),2,81-2,68 (m, 3H), 2,352,28 (m, 1H), 2,02-1,84 (m, 3H), 1,26 (s, 3H), 1,21 (s, 3H), 1,08-1,02 (m, 9H).
Preparación de la sal de clorhidrato del (D)-aspartato de Criptoficina 55 (40') (LSN 387039). A una solución de 39' (53 mg, 0,054 mmol) en 271 \mul de cloruro de metileno a temperatura ambiente se añadió una solución de cloruro de hidrógeno 4,0 M en 1,4-dioxano (136 \mul, 0,542 mmol). Tras agitar durante 14 h, la mezcla de reacción incolora y transparente se concentró a vacío para dar 47 mg (94%, corregido para un contenido en dioxano del 6%) el compuesto del título en forma de una espuma blanca:500 MHz ^{1}H RMN (MeOH-d_{4}) d 7,79 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 7,45-7,36 (m, 5H), 7,31 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 7,20 (dd, 1H, J = 8,6, 2,0 Hz), 7,01 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 6,71 (ddd, 1H, J = 15, 13, 3,7 Hz), 5,96 (dd, 1H, 15, 1,8 Hz), 5,63 (d, 1H, J = 10 Hz), 5,19 (d, 1H, J = 10 Hz), 5,15 (dd, 1H, J = 11, 2,1 Hz), 4,86-4,80 (m, 1H), 4,55-4,50 (m, 1H), 4,24 (dd, 1H, J = 8,4, 4,0 Hz), 3,87 (s, 3H), 3,50 (dd, 1H, J = 13, 9,7 Hz), 3,21 (dd, 1H, J = 14, 3,6 Hz), 3,14 (dd, 1H, J = 13, 2,5 Hz), 2,80-2,70 (m, 3H), 2,402,32 (m, 1H), 2,21 (dd, 1H, J = 18, 4,0 Hz), 2,09-1,97 (m, 2H), 1,92-1,84 (m, 2H), 1,26 (s, 3H), 1,21 (s, 3H), 1,15 (d, 3H, J = 7,1 Hz), 1,08 (d, 3H, J = 6,1 Hz), 1,04 (d, 3H, J = 6,0 Hz).
Preparación del N-t-Boc-\alpha-t-butil éster del (L)-glutamato de Criptoficina 55 (41') (LSN 382572). A una solución de 1' (23 mg, 0,033 mmol), \alpha-t-butil éster del ácido N-t-Boc-(L)-glutámico (15 mg, 0,049 mmol), y 4-dimetilamino piridina (0,4 mg, 0,0033 mmol) en 120 \mul de cloruro de metileno anhidro a temperatura ambiente, se añadió una solución de 1,3-diciclohexilcarbodiimida (10 mg, 0,049 mmol) en 40 \mul de cloruro de metileno. Tras agitar durante 45 min, la mezcla de reacción blanca turbia se diluyó con acetato de etilo - hexanos (3:1, 0,5 mL), se agitó durante 10 min, y se filtró a través de un tapón de celite, lavando con acetato de etilo - hexanos (3:1). El filtrado y los lavados se concentraron a vacío para dar un aceite de color crema. La cromatografía (15 g de gel de sílice súbito, acetato de etilo - hexanos (2:1) proporcionó 24 mg (75%) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (CDCl_{3}) d 7,39-7,30 (m, 5H), 7,24 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 7,20-7,16 (m, 1H), 7,09 (dd, 1H, J = 8,4, 2,1 Hz), 6,87 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,74 (ddd, 1H, J = 15, 13, 4,6 Hz), 5,78 (d, 1H, J = 15 Hz), 5,55 (br d, 1H, J = 6,4 Hz), 5,46 (dd, 1H, J = 9,6, 1,0 Hz), 4,96 (dd, 1H, J = 11, 3,0 Hz), 4,91-4,80 (m, 2H),4,83 (d, 1H, J = 9,6 Hz), 4,72 (br s,1H), 3,99 (br s,1H), 3,91 (s, 3H), 3,39 (dd, 1H, J = 13, 7,9 Hz), 3,24 (dd, 1H, J = 13, 3,9 Hz), 3,18 (dd, 1H, J = 14, 4,5 Hz), 3,09 (dd, 1H, J = 14, 7,8 Hz), 2,63-2,55 (m, 2H), 2,44-2,37 (m, 1H), 2,10-1,92 (m, 3H), 1,85-1,78 (m, 1H), 1,76-1,61 (m, 3H), 1,46 (s, 9H), 1,45 (s, 9H), 1,27 (s,3H), 1,20 (s, 3H), 1,08 (d, 3H, J = 7,0 Hz), 1,04 (d, 3H, J = 6,6 Hz), 0,98 (d, 3H, J = 6,4 Hz).
Preparación de la sal de clorhidrato del (L)-\gamma-glutamato de Criptoficina 55 (42') (LSN 382514). A una solución de 41' (21 mg,0,021 mmol) en 212 \mul de cloruro de metileno a temperatura ambiente, se añadió una solución de cloruro de hidrógeno 4,0 M en 1,4-dioxano (53 \mul, 0,212 mmol). Tras agitar durante 23,5 h, la mezcla de reacción se diluyó con metanol y se hizo pasar a través de un tapón pequeño de celite. La concentración a vacío dio 20 mg (100%, corregido para dioxano al 6% en peso) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (MeOH-d_{4}) d 7,79 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 7,50-7,29 (m, 6H), 7,20 (dd, 1H, J = 8,4, 2,0 Hz), 7,01 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,66 (ddd, 1H, J 15, 13, 3,7 Hz), 5,97 (dd, 1H, 15, 1,5 Hz), 5,52 (dd, 1H, J = 10, 0,8 Hz), 5,14 (dd, 1H, J = 11, 3,0 Hz), 5,10 (d, 1H, J = 10 Hz), 4,90-4,80 (m, 1H), 4,51 (dd, 1H, J = 11, 3,7 Hz),3,90-3,80 (m, 1H), 3,87 (s, 3H), 3,50 (dd, 1H,J = 13, 10 Hz), 3,19 (dd, 1H, J = 14, 3,7 Hz), 3,13 (dd, 1H, J = 14, 2,3 Hz),2,81-2,67 (m, 3H),2,41-2,32 (m, 2H),2,15-2,06 (m, 1H), 1,97-1,79 (m, 5H), 1,25 (s, 3H), 1,19 (s, 3H), 1,13 (d, 3H, J = 7,1 Hz), 1,08 (d, 3H, J = 5,9 Hz), 1,04 (d, 3H, J = 5,8 Hz).
\newpage
Preparación del N,N'-di-t-Boc-(S)-2,3diaminopropionato de Criptoficina 55 (43')(LSN 382765). A una solución de 1' (21 mg, 0,030 mmol), ácido N,N'-di-t-Boc-(S)-2,3-diaminopropionico (18 mg, 0,060 mmol), y 4-dimetilamino piridina (0,3 mg, 0,0030 mmol) en 110 \mul de cloruro de metileno anhidro a temperatura ambiente se añadió una solución de 1,3-diciclohexilcarbodiimida (12 mg, 0,060 mmol) en 39 \mul de cloruro de metileno. Tras agitar durante 70 min, la mezcla de reacción blanca turbia se diluyó con acetato de etilo - hexanos (3:1, 0,5 mL), se agitó durante 10 min, y se filtró a través de un tapón de celite, lavando con acetato de etilo - hexanos (3:1). El filtrado y los lavados se concentraron a vacío para dar un aceite de color crema. La cromatografía (15 g de gel de sílice súbito, acetato de etilo - hexanos (2:1) proporcionó 24 mg (80%) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (MeOH-d_{4}) d 7,49- 7,40 (m, 2H), 7,38-7,30 (m, 4H), 7,19 (dd, 1H, J = 8,5, 1,9 Hz), 7,00 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 6,74 (ddd, 1H, J = 16, 11, 3,5 Hz), 5,95 (d, 1H, J = 16 Hz), 5,49 (d, 1H, J = 10 Hz), 5,16-5,08 (m, 2H), 4,90-4,80 (m, 1H), 4,51 (dd, 1H, J = 11, 3,7 Hz),4,06-4,10 (m, 1H), 3,87 (s, 3H), 3,48 (d, 1H, J = 13 Hz), 3,19 (dd, 1H, J = 14, 3,7 Hz), 3,14 (d, 1H, J = 13 Hz), 3,03 (dd, 1H, J = 14, 4,2 Hz), 2,94-2,87 (m, 1H), 2,802,59 (m, 3H), 2,39-2,30 (m, 1H), 1,98-1,81 (m, 3H), 1,43 (s, 18H), 1,25 (s, 3H), 1,21 (s, 3H), 1,10 (d, 3H, J = 7,0 Hz), 1,07 (d, 3H, J = 6,0 Hz), 1,03 (d, 3H, J = 5,8 Hz).
Preparación de la sal de clorhidrato del (S)-2,3-diaminopropionato de Criptoficina 55 (44') (LSN 382764). A una solución de 43' (21 mg, 0,021 mmol) en 211 \mul de cloruro de metileno a temperatura ambiente, se añadió una solución de cloruro de hidrógeno 4,0 M en 1,4-dioxano (42 \mul, 0,169 mmol). Tras agitar durante 5 h, la mezcla de reacción se concentró a vacío para dar 18,5 mg (100%, corregido para dioxano al 3% en peso) del compuesto del título en forma de un sólido blanco: 500 MHz ^{1}H RMN (MeOH-d_{4}) d 7,50-7,39 (m, 5H), 7,31 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 7,20 (dd, 1H, J = 8,4, 2,0 Hz), 7,01 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,68 (ddd, 1H, J = 15, 11, 3,8 Hz), 5,99 (dd, 1H, 15, 1,7 Hz), 5,56 (d, 1H, J = 9,6 Hz), 5,24 (d, 1H, J = 9,6 Hz) 5,16 (dd, 1H, J = 10, 3,1 Hz), 4,90-4,80 (m, 1H), 4,51 (dd, 1H,J = 11, 3,8 Hz), 4,04-4,00 (m, 1H), 3,87 (s, 3H), 3,50-3,45 (m, 1H), 3,26 (dd, 1H, J = 14, 4,0 Hz), 3,22-3,12 (m, 3H), 2,81-2,75 (m, 3H), 2,42-2,32 (m, 1H), 1,98-1,78 (m, 3H), 1,25 (s, 3H), 1,19 (s, 3H), 1,22-1,16 (m, 3H), 1,07 (d, 3H, J = 6,4 Hz), 1,04 (d, 3H, J = 6,3 Hz).
Preparación del N-t-Boc-(L)-serinato de Criptoficina 55 (45') (LSN 384340). A una solución de 1' (38 mg, 0,053 mmol), N-t-Boc-O-tert-butildimetilsilil-(L)-serina^{11} (51 mg, 0,160 mmol), y 4-dimetilamino piridina (0,6 mg, 0,0053 mmol) en 200 \mul de cloruro de metileno anhidro a temperatura ambiente, se añadió una solución de 1,3-diciclohexilcarbodiimida (33 mg, 0,160 mmol) en 69 \mul de cloruro de metileno. Tras agitar durante 4 h, la mezcla de reacción blanca turbia se diluyó con acetato de etilo - hexanos (2:1, 1 mL), se agitó durante 10 min, y se filtró a través de un tapón de celite, lavando con acetato de etilo - hexanos (2:1). El filtrado y los lavados se concentraron a vacío para dar un aceite incoloro, que se usó directamente en la siguiente etapa. A una solución del éter de sililo crudo (54 mg, 0,054 mmol) en 268 de tetrahidrofurano a temperatura ambiente, se añadió 268 de una solución madre de fluoruro de hidrógeno - piridina (preparada a partir de 0,5 g de HF · piridina (Aldrich), 4 mL de tetrahidrofurano, y 1 mL de piridina). Tras agitar durante 4 h, se añadieron otros 67 de solución madre de HF-piridina. Tras agitar durante 30 min, la reacción se trató con 0,6 ml de bicarbonato de sodio acuoso saturado, y se lavó con acetato de etilo 1 mL X 3). Los extractos orgánicos combinados se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para dar una espuma de color amarillo claro. La cromatografía (16 g de gel de sílice súbito, acetato de etilo - hexanos (primero 3:1 y luego 6:1) proporcionó 26 mg (44%) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (MeOH-d_{4}) d 7,79 (dd, 1H, J = 9,5, 2,4 Hz), 7,45-7,38 (m, 2H), 7,37-7,29 (m, 3H), 7,29 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 7,18 (dd, 1H,
J = 8,4, 2,0 Hz), 6,99 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,72 (ddd, 1H, J = 15, 13, 3,7 Hz), 5,95 (dd, 1H, J = 15, 1,6 Hz), 5,53 (d, 1H, J = 9,5 Hz), 5,12-5,08 (m, 2H), 4,94 (t, 1H, J = 10 Hz), 4,52 (dd, 1H, J = 12, 3,6 Hz), 3,92 (t, 1H, J = 4,6 Hz), 3,85 (s, 3H), 3,52-3,46 (m, 3H), 3,20 (dd, 1H, J = 14, 3,5 Hz), 3,14 (dd, 1H, J = 13, 3,0 Hz), 2,75 (dd, 1H, J = 14, 11 Hz), 2,73-2,66 (m, 1H),2,65-2,59 (m, 1H),2,38-2,29 (m, 1H),2,00-1,82 (m, 3H), 1,43 (s, 9H), 1,25 (s, 3H), 1,22 (s, 3H),1,10-1,06 (m, 6H), 1,03 (d, 3H, 6,0 Hz).
Preparación de la sal de clorhidrato del (L)-serinato de Criptoficina 55 (46') (LSN 384339). A una solución de 45' (26 mg, 0,029 mmol) en 291 \mul de cloruro de metileno a temperatura ambiente, se añadió una solución de cloruro de hidrógeno 4,0 M en 1,4-dioxano (36 \mul, 0,146 mmol). Tras agitar durante 2,5 h, la mezcla de reacción incolora transparente se concentró a vacío para dar 23 mg (94%, corregido para dioxano a un 2% en peso) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (MeOH-d_{4}) d 7,48-7,40 (m, 2H), 7,39-7,31 (m, 3H), 7,31 (d, 1H, J = 2,2 Hz), 7,20 (dd, 1H, J = 8,5, 2,0 Hz), 7,01 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 6,70 (ddd, 1H, J = 15, 13, 3,7 Hz), 5,95 (dd, 1H, 15, 1,8 Hz), 5,59 (d, 1H, J = 10 Hz), 5,20 (d, 1H, J = 10 Hz), 5,14 (dd, 1H, J = 11, 2,1 Hz), 4,94 (t, 1H, J = 10 Hz), 4,52 (dd, 1H, J = 3,5 Hz), 3,96 (dd, 1H, J = 11, 3,9 Hz), 3,83 (dd, 1H, J = 11, 2,8 Hz), 3,66 (t, 1H, J = 3,2 Hz), 3,50 (d, 1H, J = 14 Hz), 3,20 (dd, 1H, J = 14, 3,5 Hz), 3,13 (d, 1H, J = 14 Hz), 2,80-2,71 (m, 3H), 2,38-2,28 (m, 1H), 2,01-1,82 (m, 3H), 1,26 (s, 3H), 1,21 (s, 3H), 1,13 (d, 3H, J = 7,0 Hz), 1,07 (d, 3H, J = 6,1 Hz), 1,05 (d, 3H, J = 6,1 Hz).
Preparación de la sal de clorhidrato del glicidilglicinato de Criptoficina 55 (47') (LSN 387750). A una solución de 1' (18 mg, 0,026 mmol), N-t-Boc-glicidilglicina (12 mg, 0,051 mmol), y 4-dimetilamino piridina (0,3 mg, 0,0026 mmol) en 128 \mul de cloruro de metileno anhidro y 28 \mul de N,N-dimetilformamida a temperatura ambiente, se añadió una solución de 1,3-diciclohexilcarbodiimida (11 mg, 0,051 mmol) en 28 \mul de cloruro de metileno. Tras agitar durante 3 h, se añadieron otros 24 mg (0,102 mmol) de N-t-Boc-glicidilglicina y 22 mg (0,102 mmol) de 1,3-diciclohexilcarbodiimida en 30 \mul de N,N-dimetilformamida. Tras agitar durante 1,5 h, la mezcla de reacción blanca turbia se diluyó con acetato de etilo - hexanos (3:1, 0,5 mL), se agitó durante 10 min, y se filtró a través de un tapón de celite, lavando con acetato de etilo - hexanos (3:1). El filtrado y los lavados se concentraron a vacío para dar un aceite incoloro. La cromatografía (12 g de gel de sílice súbito, metanol al 1% en acetato de etilo) proporcionó 12 mg de una espuma blanca, que se usó tal cual en el siguiente experimento. A una solución del N-Boc glicidilglicinato (12 mg, 0,013 mmol) procedente del anterior en 130 \mul de cloruro de metileno a temperatura ambiente se añadió una solución de cloruro de hidrógeno 4,0 M en 1,4-dioxano (16 \mul, 0,065 mmol). Tras agitar durante 3,5 h, la mezcla de reacción se concentró a vacío para dar 11 mg (100%) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (MeOH-d_{4}) d 7,45-7,29 (m, 5H), 7,31 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 7,20 (dd, 1H, J = 8,4, 2,1 Hz), 7,01 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,72 (ddd, 1H, J = 15, 11, 3,8 Hz), 5,96 (dd, 1H, 15, 1,4 Hz), 5,49 (dd, 1H, J = 10, 0,8 Hz), 5,14-5,09 (m, 2H), 4,90-4,80 (m, 1H), 4,51 (dd, 1H, J = 11, 3,9 Hz), 3,91-3,84 (m, 1H), 3,87 (s, 3H), 3,70-3,65 (m, 2H), 3,50 (d, 1H, J = 14 Hz), 3,38 (d, 1H, J = 18 Hz), 3,19 (dd, 1H, J = 14, 3,6 Hz), 3,12 (d, 1H, J = 14 Hz), 2,82-2,63 (m, 3H), 2,40-2,30 (m, 1H), 1,97-1,80 (m, 3H), 1,25 (s, 3H), 1,20 (s, 3H), 1,12 (d, 3H, J = 7,0 Hz), 1,06 (d, 3H, J = 6,0 Hz), 1,03 (d, 3H, J = 5,9 Hz).
Preparación del 3,6,9-tioxadecanoato de Criptoficina 55 (48') (LSN 387414). A una solución de 1' (18 mg, 0,026 mmol), ácido 3,6,9-trioxadecanoico (7,8 \mul, 0,051 mmol), y 4-dimetilamino piridina (0,3 mg, 0,0026 mmol) en 100 \mul de cloruro de metileno a temperatura ambiente, se añadió una solución de 1,3-diciclohexilcarbodiimida (11 mg, 0,051 mmol) en 28 de cloruro de metileno. Tras agitar durante 30 min, la mezcla de reacción blanca turbia se diluyó con acetato de etilo - hexanos (3:1, 0,5 mL), se agitó durante 10 min y se filtró a través de un tapón de celite, lavando con acetato de etilo - hexanos (3:1). El filtrado y los lavados se concentraron a vacío para dar un aceite de color crema. La cromatografía (12 g de gel de sílice súbito, metanol al 2% en acetato de etilo) proporcionó 19 mg (86%) del compuesto del título en forma de una espuma blanca: 500 MHz ^{1}H RMN (CDCl_{3}) d 7,49-7,29 (m, 5H), 7,24 (d, 1H, J = 1,8 Hz), 7,22-7,19 (m, 1H), 7,10 (dd, 1H, J = 8,4, 1,8 Hz), 6,87 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,74 (ddd, 1H,
J = 15, 10, 4,5 Hz), 5,32-5,28 (m, 2H), 5,56 (d, 1H, J = 9,7 Hz), 4,98-4,90 (m, 2H), 4,83 (d, 1H, J = 9,7 Hz),4,77-4,71 (m, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,83 (d, 1H, J = 17 Hz),3,65-3,55 (m, 7H), 3,42-3,33 (m, 6H), 3,24-3,18 (m, 2H), 3,03 (dd, 1H, J = 15, 8,1 Hz), 2,69-2,61 (m, 1H), 2,61-2,56 (m, 1H), 2,54-2,46 (m, 1H), 2,00-1,93 (m, 1H), 1,85-1,77 (m, 1H), 1,72-1,66 (m, 1H), 1,26 (s, 3H), 1,19 (s, 3H), 1,09 (d, 3H, J = 7,0 Hz), 1,02 (d, 3H, J = 6,6 Hz), 0,97 (d, 3H, J = 6,5 Hz).

Claims (18)

1. Un compuesto de fórmula I
139
en la que:
Ar se selecciona entre fenilo, un grupo aromático no sustituido, un grupo aromático sustituido con un átomo de halógeno o un grupo alquilo C_{1}-C_{7}, un grupo heteroaromático de 3 a 8 miembros no sustituidos, alquilo C_{1}-C_{12}, alquenilo C_{2}-C_{12}, alquinilo C_{2}-C_{12}, NR^{51}R^{52}, OR^{53}, y un grupo de fórmula Ar';
140
R^{1} se selecciona entre halógeno y OH;
R^{2} es halógeno u OR^{31}, con la condición de que uno, pero no ambos, de R^{1} y R^{2} sea halógeno;
R^{3} es un grupo alquilo C_{1}-C_{6};
R^{4} es H u OH;
R^{5} es H u OH; o R^{4} y R^{5} pueden tomarse de forma conjunta para formar un segundo enlace entre C_{13} y C_{14};
R^{6} se selecciona entre los grupos bencilo, hidroxibencilo, (alcoxi C_{1}-C_{3})bencilo, halohidroxibencilo, dihalodihidroxibencilo, halo(alcoxi C_{1}-C_{3})bencilo y dihalo(alcoxi C_{1}-C_{3})bencilo;
R^{7} es H o un grupo alquilo C_{1}-C_{6} inferior;
R^{8} es H o un grupo alquilo C_{1}-C_{6} inferior;
R^{9} es H o un grupo alquilo C_{1}-C_{6} inferior;
R^{10} es H o un grupo alquilo C_{1}-C_{6} inferior;
R^{11} es hidrógeno;
R^{31} es R^{32};
R^{32} se selecciona entre los aminoácidos que se producen de manera natural, los carbohidratos C_{12}H_{22}O_{11} y C_{6}H_{10}O_{5} y los carbohidratos C_{12}H_{22}O_{11} y C_{6}H_{10}O_{5} que soportan entre 1 y 3 sustituyentes amino, el (sacárido)q en el que el sacárido es lactosa, maltosa, sacarosa, fructosa o almidón y C(O)R^{33};
R^{33} es R^{37}R^{38};
R^{37} es alquilo (C_{1}-C_{6})
R^{38} es COOR^{39} 141, NH_{2} o un aminoácido que se produce de manera natural;
R^{39} es H o alquilo(C_{1}-C_{6});
R^{40}, R^{41}, y R^{42} se seleccionan cada uno de manera independiente entre hidrógeno, OR^{43}, halo, NH_{2}, NO_{2}, OPO(OR^{46})_{2}, OR^{44}fenilo, y R^{45};
R^{43} es alquilo C_{1}-C_{6};
R^{44} es alquileno C_{1}-C_{6};
R^{45} se selecciona entre un grupo aromático y un grupo aromático sustituido con un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C_{1}-C_{7};
R^{46} se selecciona entre H, Na, y -C(CH_{3})_{3};
R^{51} se selecciona entre hidrógeno y alquilo C_{1}-C_{3};
R^{52} se selecciona entre hidrógeno y alquilo C_{1}-C_{3};
R^{53} se selecciona entre alquilo C_{1}-C_{12};
R^{54} se selecciona entre hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, un grupo aromático, fenilo, COOR^{57}, PO_{3}H, SO_{3}H, SO_{2}R^{58}, NR^{59}R^{60}, NHOR^{61}, NHCH_{2}R^{61'}, CN, NO_{2}, halógeno, OR^{62}, y SR^{63};
R^{55} se selecciona entre hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, un grupo aromático, fenilo, COOR^{57}, PO_{3}H, SO_{3}H, SO_{2}R^{58}, NR^{59}R^{60}, NHOR^{61}, NHCH_{2}R^{61'}, CN, NO_{2}, halógeno, OR^{62}, y SR^{63};
R^{56} se selecciona entre hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, un grupo aromático, fenilo, COOR^{57}, PO_{3}H, SO_{3}H, SO_{2}R^{58}, NR^{59}R^{60}, NHOR^{61}, NHCH_{2}R^{61'}, CN, NO_{2}, halógeno, OR^{62}, y SR^{63};
R^{57} se selecciona entre hidrógeno y alquilo C_{1}-C_{12};
R^{58} se selecciona entre hidrógeno y alquilo C_{1}-C_{12};
R^{59} se selecciona entre hidrógeno, alquilo (C_{1}-C_{6}) y fluorenilmetoxicarbonilo (FMOC);
R^{60} se selecciona entre hidrógeno y alquilo (C_{1}-C_{6});
R^{61} se selecciona entre hidrógeno, OR^{64}, CH_{2}NHR^{65}, NHR^{65} y fluorenilmetoxicarbonilo (FMOC);
R^{61'} se selecciona entre hidrógeno, OR^{64}, CH_{2}NHR^{65}, NHR^{65} y fluorenilmetoxicarbonilo (FMOC);
R^{62} se selecciona entre hidrógeno y alquilo C_{1}-C_{6};
R^{63} se selecciona entre hidrógeno y alquilo C_{1}-C_{6};
R^{64} se selecciona entre hidrógeno, alquilo (C_{1}-C_{6}), y CH_{2}NR^{66}R^{67};
R^{65} se selecciona entre hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, NH_{2}, y fluorenilmetoxicarbonilo (FMOC);
R^{66} se selecciona entre hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6} y fluorenilmetoxicarbonilo (FMOC);
R^{67} se selecciona entre hidrógeno y alquilo C_{1}-C_{6};
q es 2, 3, ó 4;
X es O, NH o amino (alquilo C_{1}-C_{7}); y
Y es C, O, NH, S, SO, SO_{2}, o amino (alquilo C_{1}-C_{7});
o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos.
2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que Y es O.
3. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 2, en el que X es O.
4. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 3, en el que R^{6} es bencilo, hidroxibencilo, halohidroxibencilo, dihalodihidroxibencilo, haloalcoxibencilo o dihaloalcoxibencilo, R^{9} es isobutilo y R^{10} es hidrógeno.
5. Un compuesto seleccionado entre acetato de Criptoficina 55, succinato de Criptoficina 55, (2'-di-t-butilfosfatil) fenilacetato de Criptoficina 55, (2'-fosfatil) fenilacetato de Criptoficina 55, nicotinoato de Criptoficina 55, Criptoficina 55 N-metil piridinio, N-t-Boc-3-(3-cloro-4-metoxifenil)-(D)-alaninato de Criptoficina 55, 3-(3-cloro-4-metoxifenil)-(D)-alaninato de Criptoficina 55, N-t-Boc-glicinato de Criptoficina 55, N-t-Boc-3-alaninato de Criptoficina 55, N-t-Boc-3-aminobutirato de Criptoficina 55, N-t-Boc-(L)-alaninato de Criptoficina 55, N-t-Boc-(D)-alaninato de Criptoficina 55, y N\alpha-N\varepsilon-di-t-Boc-(L)-lisinato de Criptoficina 55; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, en los que Criptoficina 55 es un alcohol de fórmula
142 
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6. Un compuesto seleccionado entre
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143 
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o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
7. Un compuesto seleccionado entre
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o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
8. Un compuesto que se selecciona entre tert-butil éster succinato de Criptoficina 55, (2'-di-t-butilfosfatil)fenilacetato de Criptoficina 55, (2'-fosfatil)fenilacetato de Criptoficina 55, nicotinoato de Criptoficina 55, Criptoficina 55 N-metilpiridinio, N-t-Boc-3-(3-cloro-4-metoxifenil)-(D)-alaninato de Criptoficina 55, N-t-Boc-(L)-fenilalaninato de Criptoficina 55, (L)-fenilalaninato de Criptoficina 55, (L)-histidinato de Criptoficina 55, N-t-Boc-(L)-prolinato de Criptoficina 55, (L)-prolinato de Criptoficina 55, N-t-Boc-glicinato de Criptoficina 55, glicinato de Criptoficina 55, N-t-Boc-\beta-alaninato de Criptoficina 55, b-alaninato de Criptoficina 55, N-t-Boc-\gamma-aminobutirato de Criptoficina 55, g-aminobutirato de Criptoficina 55 N-t-Boc-(L)-alaninato de Criptoficina 55, (L)-alaninato de Criptoficina 55, N-t-Boc-(D)-alaninato de Criptoficina 55, (D)-alaninato de Criptoficina 55, N\alpha-N\varepsilon-di-t-Boc-(L)-lisinato de Criptoficina 55, (L)-lisinato de Criptoficina 55 N\alpha-N\varepsilon-di-t-Boc-(D)-lisinato de Criptoficina 55, (D)-lisinato de Criptoficina 55 N-t-Boc-\gamma-t-butil éster-(L)-glutamato de Criptoficina 55 (L)-\alpha-glutamato de Criptoficina 55, N-t-Boc-\beta-t-butil éster aspartato de Criptoficina 55, (D)-aspartato de Criptoficina 55, N-t-Boc-a-t-butil éster-(L)-glutamato de Criptoficina 55, (L)-\gamma-glutamato de Criptoficina 55, N,N'-di-t-Boc-(S)-2,3-diaminopropionato de Criptoficina 55, (S)-2,3-diaminopropionato de Criptoficina 55, N-t-Boc-(L) -serinato de Criptoficina 55, (L)-serinato de Criptoficina 55, y succinato de Criptoficina 55; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos; donde la Criptoficina 55 es un alcohol como se define en la reivindicación 5.
9. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que R^{7} y R^{8} son cada uno metilo.
10. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y 9, en el que R^{2} es glicinato.
11. Un compuesto de fórmula
158
siendo dicho compuesto un glicinato de Criptoficina 55,o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
12. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 11, que es la sal del clorhidrato del glicinato de Criptoficina 55.
13. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores para uso en el tratamiento de un cuerpo de animal o de ser humano.
14. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 13, para su uso en el tratamiento de un neoplasma en un mamífero.
15. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 13, para su uso en el tratamiento de una infección fúngica en un mamífero.
16. Uso de un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 en la fabricación de un medicamento para el uso en el tratamiento de un neoplasma en un mamífero.
17. Uso de un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 en la fabricación de un medicamento para el uso en el tratamiento de una infección fúngica en un mamífero.
18. Una formulación que comprende un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 y uno o más vehículos o diluyentes farmacéuticamente aceptables.
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