ES2260337T3 - Procedimiento para preparar suspensiones de particulas submicronicas de agentes farmaceuticos. - Google Patents

Abstract

Método para preparar partículas de tamaño submicrométrico de un compuesto farmacéuticamente activo cuya solubilidad es mayor en un primer disolvente miscible en agua que en un segundo disolvente que es acuoso, comprendiendo el proceso las etapas de: (i) disolver el compuesto farmacéuticamente activo en el primer disolvente miscible en agua para formar una solución, seleccionándose el primer disolvente de entre el grupo formado por N-metil-2-pirrolidinona, 2- pirrolidona, sulfóxido de dimetilo, dimetilacetamida, ácido láctico, metanol, etanol, isopropanol, 3- pentanol, n-propanol, glicerina, butilenglicol, etilenglicol, propilenglicol, monoglicéridos mono- y di-acilados, isosorbido de dimetilo, acetona, dimetilformamida, 1, 4-dioxano, acetato de etilo, acetato de propilo, polietilenglicol, polietilenglicol ésteres, sorbitanos de polietilenglicol, monoalquil polietilenglicol éteres, polipropilenglicol, alginato de polipropileno, propilenglicol 10 butanodiol, propilenglicol 10 metilglucosa éter, propilenglicol 20 metilglucosa éter, propilenglicol 15 estearil éter, dicaprilato de propilenglicol, dicaprato de propilenglicol, laurato de propilenglicol; (ii) mezclar la solución con el segundo disolvente para definir una presuspensión; y (iii) añadir energía a la presuspensión para formar partículas que tengan un tamaño de partícula medio efectivo inferior a aproximadamente 2 ìm, y dicha etapa de adición de energía comprende homogeneización, homogeneización por flujo a contracorriente, microfluidización o sonicación.

Description

Procedimiento para preparar suspensiones de partículas submicrónicas de agentes farmacéuticos.

Antecedentes de la invención Campo técnico

La presente invención se refiere a la preparación de un compuesto farmacéuticamente activo. Con más particularidad, la invención se refiere a la fabricación de nanosuspensiones de compuestos farmacéuticamente activos para su administración parenteral u oral.

Estado de la técnica anterior

Existe un número cada vez mayor de medicamentos farmacéuticos formulados que son poco solubles o insolubles en soluciones acuosas. Estos medicamentos representan un desafío para suministrarlos en formas inyectables como vía administración parenteral. Los medicamentos que son insolubles en agua pueden tener ventajas significativas cuando se formulan en forma de suspensión estable de partículas submicrónicas. Para la utilización segura y eficaz de estas formulaciones es esencial un control preciso del tamaño de partícula. Las partículas deben tener un diámetro inferior a siete micras para asegurarse el paso a través de los capilares sin provocar embolias (Allen y col., 1987; Davis y Taube, 1978; Schroeder y col., 1978; Yokel y col., 1981).

En la Patente de Estados Unidos No. 2.745.785 se describe una aproximación al suministro de un medicamento insoluble. Esta patente describe un método para preparar cristales de penicilina G adecuados para la administración parenteral. El método incluye la etapa de recristalizar la penicilina G a partir de una solución de formamida mediante la adición de agua para reducir la solubilidad de la penicilina G. La patente No. 2.745.785 prevé además que las partículas de penicilina G pueden estar recubiertas de agentes humidificantes como lecitina, o de emulsionantes, agentes tensioactivos y antiespumantes, o sorbitan o polioxialquilen ésteres parciales de ácidos grasos superiores o derivados de los mismos, o alcoholes aril alquil poliéter o sales de los mismos. La patente No. 2.745.785 revela además la micronización de la penicilina G madiante chorro de aire a presión para formar cristales que oscilan entre aproximadamente 5 y 20 micras.

Se revela otra aproximación en la Patente de Estados Unidos No. 5.118.528, que describe un proceso para preparar nanopartículas. El proceso incluye las etapas de: (1) preparar una fase líquida de una sustancia en un disolvente o mezcla de disolventes a la cual se puede añadir uno o más agentes tensioactivos, (2) preparar una segunda fase líquida de un no disolvente o una mezcla de no disolventes, el no disolvente es miscible con el disolvente o la mezcla de disolventes para la sustancia, (3) añadir conjuntamente las soluciones (1) y (2) agitando; y (4) eliminar los disolventes no deseados para producir una suspensión coloidal de nanopartículas. La Patente 5.118.528 revela que produce partículas de sustancia inferiores a 500 nm sin necesidad de energía. En particular, la Patente 5.118.528 establece que no es deseable utilizar equipos de gran potencia como sonicadores u homogeneizadores.

En la Patentes de Estados Unidos No. 4.826.689 y la EP-A-0.169.618 se describe un método para elaborar partículas de tamaño uniforme a partir de medicamentos insolubles en agua o de otros compuestos orgánicos. En primer lugar se disuelve un compuesto orgánico sólido adecuado en un disolvente orgánico, y se puede diluir la solución con un no disolvente. A continuación, se infunde un líquido acuoso de precipitación, que precipita las partículas no agregadas con un diámetro medio sustancialmente uniforme. Se separan entonces las partículas del disolvente orgánico. Según el compuesto orgánico y el tamaño deseado de partícula, los parámetros de temperatura, la proporción de no disolvente con respecto al disolvente orgánico, la velocidad de infusión, la velocidad de agitación y el volumen pueden modificarse de acuerdo con la invención. La Patente No. 4.826.689 y la EP-A-0.169.618 revelan que este proceso genera un medicamento en un estado metaestable, inestable termodinámicamente, y que se convierte eventualmente en un estado cristalino más estable. Las Patentes 4.826.689 y EP-A-0.169.618 revelan la captura del medicamento en un estado metaestable en el existe una energía libre entre la de la solución de partida del medicamento y la de la forma cristalina estable. Las Patentes 4.826.689 y EP-A-0.169.618 revelan la utilización de inhibidores de cristalización (por ejemplo, polivinilpirrolidinona) y de agentes tensioactivos (por ejemplo, poli(oxietilen)-co-oxipropileno) para que el precipitado se vuelva lo suficientemente estable como para ser aislado mediante centrifugación, filtración mediante membrana o por ósmosis inversa.

En las Patentes de Estados Unidos Nos. 5.091.188, 5.091.187 y 4.725.442 se describe (a) bien sea el revestimiento de las pequeñas partículas de medicamento con fosfolípidos naturales o sintéticos, o (b) la disolución del medicamento en un vehículo lipofílico adecuado y la formación de una emulsión estabilizada con fosfolípidos naturales o semisintéticos. Uno de los inconvenientes de estas aproximaciones es que dependen de la calidad de la materia prima del medicamento y que no revelan las etapas de cambio de la morfología de la materia prima para que el material se convierta en una forma friable, de más fácil procesado.

Otra aproximación para proporcionar medicamentos insolubles de suministro parenteral es revelada en la Patente de Estados Unidos No. 5.145.684. Esta patente describe la molienda en húmedo de un medicamento insoluble en presencia de un modificador superficial para proporcionar una partícula de medicamento con un tamaño de partícula real medio inferior a 400 nm. La Patente 5.145.684 recalca la conveniencia de no utilizar disolventes en su proceso. La Patente 5.145.684 revela que el modificador superficial es adsorbido en la superficie de la partícula del medicamento en una cantidad suficiente como para impedir la aglomeración en partículas más grandes.

Todavía otro intento para proporcionar medicamentos insolubles para su administración parenteral se describe en la Patente de Estados Unidos No. 5.922.355. La Patente 5.922.355 revela el suministro de partículas de tamaño submicrométrico de medicamentos insolubles mediante la utilización de una combinación de modificadores superficiales y un fosfolípido, seguido de la reducción del tamaño de partícula por medio de técnicas tales como sonicación, homogeneización, molienda, microfluidización, precipitación o recristalización. No se revela en la Patente 5.922.355 el cambio de las condiciones de proceso para fabricar cristales en una forma más friable.

La Patente de Estados Unidos No. 5.780.062 revela un método para preparar pequeñas partículas de medicamentos insolubles mediante (1) la disolución del medicamento en un primer disolvente miscible en agua, (2) la preparación de una segunda solución de un polímero y un anfifilo en un segundo disolvente acuoso en el cual el medicamento es sustancialmente insoluble con lo cual se forma un complejo polímero/anfifilo y (3) la mezcla de las soluciones procedentes de las etapas primera y segunda para precipitar un agregado del medicamento y del complejo polímero/
anfifilo.

La Patente de Estados Unidos No. 5.858.410 revela una nanosuspensión farmacéutica adecuada para la administración parenteral. La Patente 5.858.410 revela el hecho de someter al menos un compuesto sólido terapéuticamente activo disperso en un disolvente a una homogeneización a alta presión en un homogeneizador de pistón por intervalos para formar partículas con un diámetro medio, determinado por espectroscopía de correlación de fotones (PCS), de 10 nm a 1.000 nm, siendo la proporción de partículas superiores a 5 \mum en la población total inferior al 0,1% (distribución de cantidad determinada con un contador Coulter), sin conversión previa en una masa fundida, en la cual el compuesto activo es sólido a temperatura ambiente y es insoluble, solamente poco soluble o moderadamente soluble en agua, medios acuosos y/o disolventes orgánicos. Los ejemplos de la Patente 5.858.410 revelan una molienda por chorro antes de la homogeneización.

La Patente de Estados Unidos No. 4.997.454 revela un método para elaborar partículas de tamaño uniforme a partir de compuestos sólidos. El método de la Patente 4.997.454 incluye las etapas de disolver el compuesto sólido en un disolvente adecuado seguido de la infusión del líquido de precipitación, precipitando por este medio las partículas no agregadas con un diámetro medio sustancialmente uniforme. Las partículas entonces se separan del disolvente. La Patente 4.997.454 no recomienda la formación de partículas en un estado cristalino porque durante el procedimiento de precipitación el cristal puede disolverse y recristalizarse ampliando así el rango de distribución del tamaño de partícula. La Patente 4.997.454 fomenta, durante el procedimiento de precipitación, la captura de las partículas en un estado metaestable.

La Patente de Estados Unidos No. 5.605.785 revela un proceso para formar dispersiones nanoamorfas de compuestos útiles en fotografía. El proceso para la formación de dispersiones nanoamorfas incluye cualquier proceso conocido de emulsificación que produzca una fase dispersa que presente particulados amorfos.

La US-A-4.606.940 describe un proceso para la formación y encapsulación concurrente de pequeñas partículas de un compuesto activo. El proceso comprende la adición, bajo agitación, de la solución de un material de encapsulación y un electrolito en un segundo disolvente a una solución del compuesto activo en un primer disolvente para precipitar el compuesto activo encapsulado.

La WO 99/16643 describe una composición para la administración oral que comprende una forma cristalina sustancialmente pura del activo farmacéutico levosimendan. La US-A-5.122.543 describe una suspensión acuosa que comprende cristales cúbicos o cuboidales de carbamacepina con un tamaño de 10 a 200 \mum.

Sumario de la invención

La presente invención proporciona un método para preparar partículas submicrométricas de un compuesto farmacéuticamente activo de acuerdo con la reivindicación 1. El término "compuesto orgánico" se utiliza a veces aquí en lugar de "compuesto farmacéuticamente activo".

La presente invención proporciona un método para preparar partículas de tamaño submicrométrico de un compuesto orgánico, cuya solubilidad es mayor en un primer disolvente miscible en agua que en un segundo disolvente, el cual es acuoso. El proceso incluye las etapas de: (i) disolver el compuesto orgánico en el primer disolvente miscible en agua para formar una solución, seleccionándose el primer disolvente de entre el grupo formado por N-metil-2-pirrolidinona, 2-pirrolidona, sulfóxido de dimetilo, dimetilacetamida, ácido láctico, metanol, etanol, isopropanol, 3-pentanol, n-propanol, glicerina, butilenglicol, etilenglicol, propilenglicol, monoglicéridos mono- y di-acilados, isosorbido de dimetilo, acetona, dimetilformamida, 1,4-dioxano, polietilenglicol, polietilenglicol ésteres, sorbitanos de polietilenglicol, monoalquil polietilenglicol éteres, polipropilenglicol, alginato de polipropileno, butanodiol PPG-10, metilglucosa PPG-10 éter, metilglucosa PPG-20 éter, estearil PPG-15 éter, dicaprilato de propilenglicol, dicaprato de propilenglicol, laurato de propilenglicol; (ii) mezclar la solución con el segundo disolvente para definir una presuspensión; y (iii) añadir energía a la presuspensión para formar partículas que tengan un tamaño de partícula medio efectivo inferior a aproximadamente 2 \mum.

La presente invención proporciona asimismo un método para preparar partículas de tamaño submicrométrico de un compuesto orgánico, cuya solubilidad es mayor en un primer disolvente miscible en agua que en un segundo disolvente que es acuoso, comprendiendo el proceso las etapas de: (i) disolver el compuesto orgánico en el primer disolvente miscible en agua para formar una solución, seleccionándose el primer disolvente de entre el grupo formado por de N-metil-2-pirrolidinona, 2-pirrolidona, sulfóxido de dimetilo, dimetilacetamida, ácido láctico, metanol, etanol, isopropanol, 3-pentanol, n-propanol, glicerina, butilenglicol, etilenglicol, propilenglicol, monoglicéridos mono- y di-acilados, isosorbido de dimetilo, acetona, dimetilformamida, 1,4-dioxano, acetato de etilo, acetato de propilo, polietilenglicol, polietilenglicol ésteres, sorbitanos de polietilenglicol, monoalquil polietilenglicol éteres, polipropilenglicol, alginato de polipropileno, butanodiol PPG-10, metilglucosa PPG-10 éter, metilglucosa PPG-20 éter, estearil PPG-15 éter, dicaprilato de propilenglicol, dicaprato de propilenglicol, laurato de propilenglicol; (ii) mezclar la solución con el segundo disolvente para definir una presuspensión en la cual el compuesto orgánico se encuentra en una forma amorfa, una forma semicristalina o en una forma líquida sobreenfriada tal como se determina por DSC y que tiene un tamaño de partícula medio efectivo; y (iii) recocer la presuspensión para formar partículas que tengan esencialmente el mismo tamaño de partícula efectivo medio de la presuspensión y en una forma más estable.

La presente invención proporciona también un método para preparar partículas de tamaño submicrométrico de un compuesto orgánico, cuya solubilidad es mayor en un primer disolvente miscible en agua que en un segundo disolvente que es acuoso. El proceso incluye las etapas de: (i) disolver el compuesto orgánico en el primer disolvente miscible en agua para formar una solución, seleccionándose el primer disolvente de entre el grupo formado por N-metil-2-pirrolidinona, 2-pirrolidona, sulfóxido de dimetilo, dimetilacetamida, ácido láctico, metanol, etanol, isopropanol, 3-pentanol, n-propanol, glicerina, butilenglicol, etilenglicol, propilenglicol, monoglicéridos mono- y di-acilados, isosorbido de dimetilo, acetona, dimetilformamida, 1,4-dioxano, acetato de etilo, acetato de propilo, polietilenglicol, polietilenglicol ésteres, sorbitanos de polietilenglicol, monoalquil polietilenglicol éteres, polipropilenglicol, alginato de polipropileno, butanodiol PPG-10, metilglucosa PPG-10 éter, metilglucosa PPG-20 éter, estearil PPG-15 éter, dicaprilato de propilenglicol, dicaprato de propilenglicol, laurato de propilenglicol; (ii) mezclar la solución con el segundo disolvente para definir una presuspensión de partículas en una forma friable; y (iii) añadir energía a la presuspensión para formar partículas que tengan un tamaño de partícula efectivo medio inferior a aproximadamente
2 \mum.

Breve descripción de los dibujos

No es aplicable. Los Dibujos han sido incorporados en el texto.

Descripción detallada de la invención

Se describen los métodos o procesos para formar partículas de un compuesto orgánico que tiene un tamaño de partícula efectivo medio adecuado para la administración parenteral y, preferentemente, el tamaño de partícula es inferior a aproximadamente 2 \mum. Las partículas del compuesto orgánico pueden encontrarse también en una forma adecuada para la administración oral. El tamaño de partícula para las formas de dosificación oral puede ser superior a 2 \mum y típicamente es inferior a aproximadamente 7 \mum. Sin embargo, las partículas pueden sobrepasar los 7 \mum siempre que éstas tengan la biodisponibilidad suficiente y demás características de una forma de dosificación oral. Las formas de dosificación oral incluyen pastillas, cápsulas, comprimidos, cápsulas de gel blandas y duras, u otro vehículo de administración para suministrar un medicamento vía oral.

Los procesos pueden separarse en tres categorías generales. Cada una de las categorías de proceso comparte las etapas de: (1) disolver un compuesto orgánico en un primer disolvente orgánico miscible en agua para crear una primera solución, (2) mezclar la primera solución con un segundo disolvente acuoso para precipitar el compuesto orgánico y crear una presuspensión, y (3) añadir energía a la presuspensión en forma de mezcla de alto esfuerzo de cizalla o calor para proporcionar una forma estable del compuesto orgánico que tenga los rangos de tamaños deseados definidos anteriormente.

Las tres categorías de procesos se distinguen basándose en las propiedades físicas del compuesto orgánico tal como lo determinan los estudios de difracción de rayos X, de calorimetría de exploración diferencial (DCS) u otro estudio adecuado realizado antes y después de la etapa de adición de energía. En la primera categoría del proceso, antes de la etapa de adición de energía, el compuesto orgánico en presuspensión tiene una forma amorfa, una forma semicristalina o una forma líquida sobreenfriada y un tamaño de partícula medio efectivo. Después de la etapa de adición de energía, el compuesto orgánico se encuentra en una forma cristalina con un tamaño de partícula medio efectivo que es esencialmente el mismo que él de la presuspensión (es decir, desde menos de aproximadamente 2 \mum).

En la segunda categoría del proceso, antes de la etapa de adición de energía, el compuesto orgánico se encuentra en forma cristalina y tiene un tamaño de partícula medio efectivo. Después de la etapa de adición de energía, el compuesto orgánico se encuentra en forma cristalina con esencialmente el mismo tamaño de partícula medio efectivo que antes de la etapa de adición de energía pero es menos probable que los cristales se agreguen después de la etapa de adición de energía.

La menor tendencia del compuesto orgánico a agregarse se observa por dispersión de luz dinámica láser y microscopía óptica.

En la tercera categoría del proceso, antes de la etapa de adición de energía, el compuesto orgánico se encuentra en forma cristalina friable y tiene un tamaño de partícula medio efectivo. Con el término "friable" se da a entender que las partículas son frágiles y se rompen con más facilidad en partículas más pequeñas. Después de la etapa de adición de energía, el compuesto orgánico se encuentra en forma cristalina con un tamaño de partícula medio efectivo más pequeño que los cristales de la presuspensión. Al tomar las medidas necesarias para situar el compuesto orgánico en una forma cristalina que sea friable, la etapa posterior de adición de energía puede llevarse a cabo de forma más rápida y eficaz cuando se compara con un compuesto orgánico en una morfología cristalina menos friable.

La etapa de adición de energía puede llevarse a cabo de cualquier forma en la cual la presuspensión se vea expuesta a fuerzas de cavitación, de esfuerzo de cizalla o de impacto. La etapa de adición de energía puede ser una etapa de recocido. En esta invención, se entiende por recocido el proceso de conversión de materia que es termodinámicamente inestable en una forma más estable mediante la aplicación única o reiterada de energía (calor directo o esfuerzo mecánico), seguido de la relajación térmica. Esta reducción de energía puede realizarse mediante la conversión de la forma sólida desde una estructura reticular menos ordenada hasta más otra ordenada. Como alternativa, esta estabilización puede llevarse a cabo mediante una reordenación de las moléculas del agente tensioactivo en la interfase sólido-líquido.

Estas tres categorías de proceso se comentarán por separado a continuación. Se debe entender, sin embargo, que condiciones de proceso tales como la elección de los agentes tensioactivos o la combinación de agentes tensioactivos, la cantidad de agente tensioactivo utilizada, la temperatura de reacción, la velocidad de mezcla de las soluciones, la velocidad de precipitación y similares pueden seleccionarse para que cualquier medicamento pueda ser procesado bajo cualquiera de las categorías comentadas a continuación.

La primera categoría del proceso, así como la segunda y tercera categorías del proceso pueden dividirse además en dos subcategorías, Método A y B, mostrados esquemáticamente a continuación.

1

\vskip1.000000\baselineskip

2

El compuesto farmacéutico, tal como se describe aquí, puede ser cualquier entidad química orgánica cuya solubilidad disminuya de un disolvente a otro. El compuesto farmacéuticamente activo puede seleccionarse de entre varios grupos como, sin limitarse a, antihiperlipidémicos; antimicrobianos, por ejemplo antibacterianos como sulfadiazina, antifúngicos como itraconazol; medicamentos antiinflamatorios no esteroideos, por ejemplo indometacina; agentes antihipercolesterémicos, por ejemplo probucol; y compuestos esteroideos, por ejemplo dexametasona; inmunosupresores, por ejemplo ciclosporina A, tacrolimus y mofetil micofenolato. O el compuesto orgánico podría provenir del grupo de adyuvantes o excipientes de preparaciones farmacéuticas y cosmética, tal como, sin limitarse a, conservantes, por ejemplo propilparaben.

El primer disolvente es un disolvente o mezcla de disolventes en la cual el compuesto orgánico de interés es relativamente soluble y que es miscible con el segundo disolvente. Ejemplos de estos disolventes incluyen, sin limitarse a: polivinilpirrolidona, N-metil-2-pirrolidinona (también denominada N-metil-2-pirrolidona), 2-pirrolidona, sulfóxido de dimetilo, dimetilacetamida, ácido láctico, metanol, etanol, isopropanol, 3-pentanol, n-propanol, glicerol, butilenglicol (butanodiol), etilenglicol, propilenglicol, monoglicéridos mono- y di-acilados (como caprilato de glicerilo), isosorbido de dimetilo, acetona, dimetilformamida, 1,4-dioxano, polietilenglicol (por ejemplo, PEG-4, PEG-8, PEG-9, PEG-12, PEG-14, PEG-16, PEG-120, PEG-75, PEG-150), polietilenglicol ésteres (por ejemplo, dilaurato de PEG-4, dilaurato de PEG-20, isoestearato de PEG-6, palmitoestearato de PEG-8, palmitoestearato de PEG-150), polietilenglicol sorbitanos (como isoestearato de sorbitan-PEG-20), monoalquil polietilenglicol éteres (por ejemplo, dimetil PEG-3 éter, dimetil PEG-4 éter), polipropilenglicol (PPG), alginato de polipropileno, PPG-10-butanodiol, metilglucosa PPG-10 éter, metilglucosa PPG-20 éter, estearil PPG-15 éter, dicaprilato/dicaprato de propilenglicol, laurato de propilenglicol.

Método A

En el Método A (véase la Figura 1), el compuesto orgánico ("medicamento") se disuelve primero en el primer disolvente para crear una primera solución. El compuesto orgánico puede añadirse desde aproximadamente un 0,1% (peso/volumen) hasta aproximadamente un 50% (peso/volumen) según la solubilidad del compuesto orgánico en el primer disolvente. Puede resultar necesario calentar el concentrado desde aproximadamente 30ºC hasta aproximadamente 100ºC para asegurar la total disolución del compuesto en el primer disolvente.

Se proporciona una segunda solución acuosa con uno o más modificadores superficiales opcionales tal como un agente tensioactivo aniónico, un agente tensioactivo catiónico, un agente tensioactivo no iónico o una molécula biológica de superficie activa añadida a la misma. Agentes tensioactivos aniónicos adecuados son, sin limitarse a, laurato de potasio, sulfato de lauril-sodio, dodecilsulfato de sodio, alquil sulfatos de polioxietileno, alginato de sodio, sulfosuccinato de dioctil-sodio, fosfatidilcolina, fosfatidilglicerol, fosfatidilinosina, fosfatidilserina, ácido fosfatídico y sus sales, ésteres de glicerilo, carboximetilcelulosa de sodio, ácido cólico y otros ácidos biliares (por ejemplo ácido cólico, desoxicólico, glicocólico, taurocólico, glicodesoxicólico) y sales de los mismos (por ejemplo desoxicolato de sodio, etc...). Agentes tensioactivos catiónicos adecuados incluyen, pero no se limitan a, compuestos de amonio cuaternario como el cloruro de benzalconio, bromuro de cetiltrimetilamonio, cloruro de laurildimetilbencilamonio, clorhidratos de acilcarnitina, o haluros de alquil-piridinio. Como agentes tensioactivos aniónicos, se pueden utilizar fosfolípidos. Como fosfolípidos adecuados se incluyen, por ejemplo, fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina, fosfatidilinositol, fosfatidilglicerol, ácido fosfatídico, lisofosfolípidos, fosfolípido de huevo o soja o combinaciones de los mismos. El fosfolípido puede estar salificado o no, hidrogenado o parcialmente hidrogenado o ser semisintético natural o sintético.

Como agentes tensioactivos no iónicos adecuados se incluyen: polioxietilen éteres de alcoholes grasos (Macrogol y Brij), polioxietilen-sprbitan ésteres de ácidos grasos (Polisorbatos), polioxietilen ésteres de ácidos grasos (Myri), sorbitan ésteres (Span), monoestearato de glicerol, polietilenglicoles, polipropilenglicoles, alcohol cetílico, cetoestearil alcohol, estearil alcohol, arilalquil poliéter alcoholes, copolímeros polioxietileno-polioxipropileno (poloxómeros), polaxaminas, metilcelulosa, hidroxicelulosa, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, celulosa no cristalina, polisacáridos incluidos almidón y sus derivados como hidroxietilalmidón (HES), polivinil alcohol y polivinilpirrolidona. En una forma preferente de la invención, el agente tensioactivo no iónico es un copolímero de polioxietileno y polioxipropileno, preferentemente un copolímero en bloque de propilenglicol y etilenglicol. Estos polímeros se venden bajo la marca POLOXAMER, también denominada a veces PLURONIC®, y vendido por varios suministradores incluido Spectrum Chemical y Ruger. Entre los polioxietilen ésteres de ácidos grasos se incluyen aquellos que tienen cadenas alquilo cortas. Un ejemplo de un agente tensioactivo como éste es SOLUTOL® HS 15, polietileno-660-hidroxiestearato, fabricado por BASF S.A.

Las moléculas biológicas de superficie activa incluyen moléculas como albúmina, caseína, heparina, hirudina o demás proteínas apropiadas.

También puede resultar deseable añadir un agente de ajuste del pH a la segunda solución, por ejemplo hidróxido de sodio, ácido clorhídrico, tampón tris o citrato, acetato, lactato, meglumina o similares. La segunda solución tiene que tener un pH en el rango desde aproximadamente 3 hasta aproximadamente 11.

Para las formas de dosificación oral se puede utilizar uno o más de los siguientes excipientes: gelatina, caseína, lecitina (fosfátidos), goma de acacia, colesterol, tragacanto, ácido esteárico, cloruro de benzalconio, estearato de calcio, monoestearato de glicerilo, alcohol cetoestearílico, cetomacrogol, cera emulsionante, sorbitan ésteres, polioxietilen alquil éteres, por ejemplo macrogol éteres como cetomacrogol 1000, derivados polioxietileno de aceite de ricino, polioxietilen sorbitan ésteres de ácidos grasos, por ejemplo Tweens TM comercial, polietilenglicoles, estearatos de polioxietileno, dióxido de silicio coloidal, fosfatos, dodecilsulfato de sodio, carboximetilcelulosa de calcio, carboximetilcelulosa sódica, metilcelulosa, hidroxietilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, ftalato de hidroxipropilmetilcelulosa, celulosa no cristalina, silicato de aluminio-magnesio, trietanolamina, polivinil alcohol (PVA) y polivinilpirrolidona (PVP). La mayoría de estos excipientes están descritos en detalle en Handbook of Pharmaceutical Excipients, publicado conjuntamente por la American Pharmaceutical Association y la Pharmaceutical Society of Great Britain, the Pharmaceutical Press, 1986. Los modificadores superficiales son comerciales y/o pueden ser preparados por medio de técnicas conocidas en este campo. Se pueden utilizar combinados dos o más modificadores superficiales.

Preferentemente, el método para preparar partículas de tamaño submicrométrico de un compuesto orgánico incluye las etapas de añadir la primera solución a la segunda solución. La velocidad de adición depende del tamaño del lote y de la cinética de precipitación para el compuesto orgánico. Típicamente, para un proceso en laboratorio a pequeña escala (preparación de 1 litro), la velocidad de adición es de aproximadamente 0,05 cc por minuto a aproximadamente 10 cc por minuto. Durante la adición, las soluciones deben estar bajo agitación constante. Utilizando microscopía óptica se ha observado que se forman partículas amorfas, sólidos semicristalinos o un líquido sobreenfriado para crear una presuspensión. El método incluye además la etapa de someter la presuspensión a una etapa de recocido para convertir las partículas amorfas, el líquido sobreenfriado o el sólido semicristalino en un estado sólido cristalino más estable. Las partículas resultantes tendrán un tamaño de partícula efectivo medio tal según se mida mediante métodos de dispersión de luz dinámica (por ejemplo, espectroscopía de fotocorrelación, difracción láser, dispersión de luz láser de bajo ángulo (LALLS), dispersión de luz láser de medio ángulo (MALLS), métodos de oscurecimiento de luz (método Coulter, por ejemplo)), reología, o microscopía (óptica o electrónica) dentro de los rangos establecidos anteriormente.

La etapa de adición de energía implica la adición de energía por medio de la homogeneización por sonicación, homogeneización por flujo a contracorriente, microfluidización. Se puede enfriar o calentar la muestra durante esta etapa. La etapa de recocido puede realizarse en un homogeneizador de pistón a intervalos, por ejemplo con el que vende Avestin Inc. bajo la designación de producto EmulsiFlex-C160. Como alternativa, el recocido puede realizarse por ultrasonicación mediante un procesador ultrasónico como Vibra-Cell Ultrasonic Processor (600 W), fabricado por Sonics and Materials, Inc. De igual manera, el recocido puede realizarse por medio de un aparato de emulsificación tal como se describe en la Patente de Estados Unidos No. 5.720.551.

Según la velocidad de recocido, puede resultar deseable ajustar la temperatura de la muestra procesada dentro del rango de aproximadamente -30ºC a 30ºC. Como alternativa, para efectuar el cambio de fase deseado en el sólido procesado, puede resultar necesario también calentar la presuspensión a una temperatura dentro del rango de aproximadamente 30ºC a aproximadamente 100ºC durante la etapa de recocido.

Método B

El método B difiere del Método A en los siguientes aspectos. La primera diferencia es que se añade a la primera solución un agente tensioactivo o una combinación de agentes tensioactivos. Los agentes tensioactivos pueden seleccionarse de entre los grupos de agentes tensioactivos aniónicos, no iónicos y catiónicos expuestos anteriormente.

Ejemplo Comparativo del Método A y del Método B y de la Patente de Estados Unidos No. 5.780.062

La Patente de Estados Unidos No. 5.780.062 revela un proceso para preparar pequeñas partículas de un compuesto orgánico mediante la disolución del compuesto en un primer disolvente adecuado miscible en agua en primer lugar. Se prepara una segunda solución disolviendo un polímero y un anfifilo en la solución acuosa. La primera solución se añade entonces a la segunda solución para formar un precipitado que consiste en el compuesto orgánico y un complejo polímero-anfifilo. La Patente No. 5.780.062 no revela la utilización de la etapa de adición de energía de esta invención en los Métodos A y B. Se pone en evidencia típicamente la falta de estabilidad por agregación rápida y crecimiento de las partículas. En algunos casos, las partículas amorfas se recristalizan en grandes cristales. La adición de energía a la presuspensión de la forma descrita anteriormente porporciona partículas que muestran velocidades reducidas de agregación y de crecimiento, así como la no recristalización cuando se almacena el producto.

Los Métodos A y B se distinguen además del proceso de la patente No. 5.780.062 por la ausencia de una etapa de formación de un complejo polímero-anfifilo antes de la precipitación. En el Método A, no se puede formar un complejo como éste ya que no se añade ningún polímero a la fase diluyente (acuosa). En el Método B, el agente tensioactivo, que puede actuar también como anfifilo, o polímero, se disuelve con el compuesto orgánico en el primer disolvente. Esto impide la formación de complejos anfifilo-polímero antes de la precipitación. En la Patente No. 5.780.062, la precipitación de pequeñas partículas depende de la formación de un complejo anfifilo-polímero antes de la precipitación. La Patente No. 5.780.062 revela que el complejo anfifilo-polímero forma agregados en la segunda solución acuosa. La Patente No. 5.780.062 explica que el compuesto orgánico hidrofóbico interactúa con el complejo anfifilo-polímero reduciendo la solubilidad de estos agregados y provocando la precipitación. En la presente invención se ha demostrado que la inclusión del agente tensioactivo o polímero en el primer disolvente (Método B) conduce, al añadirlo posteriormente al segundo disolvente, a la formación de un particulado más uniforme, más fino que el proporcionado mediante el proceso señalado en la Patente No. 5.780.062.

Con este propósito, se prepararon y analizaron dos formulaciones. Cada una de las formulaciones tiene dos soluciones, un concentrado y un diluyente acuoso, que se mezclan conjuntamente y luego se someten a sonicación. El concentrado en cada formulación posee un compuesto orgánico (itraconazol), un disolvente miscible en agua (N-metil-2-pirrolidinona o NMP) y posiblemente un polímero (poloxamer 188). El diluyente acuoso tiene agua, un tampón tris y posiblemente un polímero (poloxamer 188) y/o un agente tensioactivo (desoxicolato de sodio). El diámetro medio de partícula de las partículas orgánicas se mide antes y después de la sonicación.

La primera formulación A tiene como concentrado itraconazol y NMP. El diluyente acuoso incluye agua, poloxamer 188, tampón tris y desoxicolato de sodio. Así, el diluyente acuoso incluye un polímero (poloxamer 188) y un anfifilo (desoxicolato de sodio), que pueden formar un complejo polímero/anfifilo y, por tanto, que están de acuerdo con el descubrimiento de la Patente No. 5.780.062. (Sin embargo, de nuevo, la Patente No. 5.780.062 no revela una etapa de adición de energía).

La segunda formulación B tiene como concentrado itraconazol, NMP y poloxamer 188. El diluyente acuoso incluye agua, tampón tris y desoxicolato de sodio. Esta formulación se hace de acuerdo con la presente invención. Como el diluyente acuoso no contiene ninguna combinación de un polímero (poloxamer) y un anfifilo (desoxicolato de sodio), no se puede formar un complejo polímero/anfifilo antes de la etapa de mezcla.

La Tabla 1 muestra los diámetros medios de partícula medidos por difracción láser en tres preparaciones de suspensiones repetidas. Se realizó una determinación inicial de tamaño, después de lo cual la muestra fue sometida a sonicación durante 1 minuto. Entonces se repitió la determinación del tamaño. La reducción de los grandes tamaños según la sonicación del Método A fue indicadora de una agregación de las partículas.

TABLA 1

Método	Concentrado	Diluyente Acuoso	Diámetro medio	Después de
			de partícula (micras)	sonicación (1 minuto)
A	Itraconazol (18%),	Poloxamer 188	18,7	2,36
	N-metil-2-	(2,3%), desoxicolato	10,7	2,46
	pirrolidinona (6 ml)	de sodio (0,3%),	12,1	1,93
		tampón tris (5 mM, pH
		8), agua (cantidad
		suficiente hasta 94 ml)
B	Itraconazol (18%	Desoxicolato de sodio	0,194	0,198
	poloxamer 188,	(0,3%), tampón tris (5	0,178	0,179
	(37%) N-metil-2-	mM, pH 8), agua	0,181	0,177
	pirrolidinona (6 ml)	(cantidad suficiente
		hasta 94 ml)

Se puede administrar una suspensión de medicamento que resulte de la aplicación de los procesos descritos en esta invención directamente como solución inyectable siempre que se utilice agua para inyección en la formulación y se aplique un medio apropiado para la esterilización de la solución. La esterilización se puede realizar mediante esterilización por separado del concentrado de medicamento (medicamento, disolvente y agente tensioactivo opcional) y del medio diluyente (agua y los tampones y agentes tensioactivos opcionales) antes de la mezcla para formar la presuspensión. Los métodos de esterilización incluirían la prefiltración primero a través de un filtro de 3,0 micras seguida de filtración a través de un filtro de partículas de 0,45 micras, seguida de esterilización por calor o vapor o filtración estéril a través de dos filtros redundantes de membrana de 0,2 micras.

Opcionalmente se puede producir una suspensión libre de disolventes eliminando el disolvente después de la precipitación. Esto puede realizarse por centrifugación, diálisis, diafiltración, fraccionación de campo de fuerza, filtración a alta presión u otras técnicas de separación bien conocidas en la técnica. La eliminación total de N-metil-2-pirrolidinona se realizó mediante una a tres centrifugaciones sucesivas; después de cada centrifugación (18.000 rpm durante 30 minutos) se decantó y apartó el sobrenadante. Se añadió un nuevo volumen de vehículo de la suspensión sin disolvente orgánico a los sólidos remanentes y se dispersó la mezcla por homogeneización. Otros especialistas en la técnica
reconocerán que se podrían aplicar, en esta etapa de reconstitución, otras técnicas de mezcla de alto esfuerzo de cizalla.

Además, cualquier excipiente no deseado, tal como agentes tensioactivos, puede ser sustituido por un excipiente más deseable mediante la utilización de los métodos de separación descritos en el párrafo anterior. El disolvente y el primer excipiente pueden retirarse junto con el agente tensioactivo después de la centrifugación o filtración. Entonces se puede añadir un nuevo volumen de vehículo de la suspensión sin disolvente y sin el primer excipiente. Como alternativa, se puede añadir un nuevo agente tensioactivo. Por ejemplo, una suspensión compuesta de medicamento, N-metil-2-pirrolidinona (disolvente), poloxamer 188 (primer excipiente), desoxicolato de sodio, glicerol y agua puede ser sustituida por fosfolípidos (nuevo agente tensioactivo), glicerol y agua después de la centrifugación y eliminación del sobrenadante.

I. Primera Categoría de Proceso

Los métodos de la primera categoría de proceso en general incluyen la etapa de disolver el compuesto orgánico en un primer disolvente miscible en agua, seguido de la etapa de mezclar esta solución con una solución acuosa para formar una presuspensión en la cual el compuesto orgánico se encuentra en forma amorfa, semicristalina o como líquido sobreenfriado, determinado por estudios de difracción de rayos X, DSC, microscopía óptica u otras técnicas analíticas, y con un tamaño de partícula efectivo medio dentro de uno de los rangos de tamaño de partícula efectivo establecido anteriormente. La etapa de mezcla es seguida por una etapa de adición de energía y, en una forma preferente de la invención, de una etapa de recocido.

II. Segunda Categoría de Proceso

Los métodos de la segunda categoría de los procesos incluyen esencialmente las mismas etapas que aquellas de la primera categoría de procesos pero difieren en lo siguiente. Métodos de difracción de rayos X, DSC u otras técnicas analíticas adecuadas de la presuspensión muestran que el compuesto orgánico presenta una forma cristalina con un tamaño de partícula medio efectivo. El compuesto orgánico, después de la etapa de adición de energía, tiene esencialmente el mismo tamaño de partícula efectivo medio que antes de la etapa de adición de energía, pero tiende a agregarse menos en partículas más grandes cuando se compara con el de las partículas de la presuspensión. Sin aludir a ninguna teoría, se cree que las diferencias en la estabilidad de las partículas pueden deberse a una reordenación de las moléculas del agente tensioactivo en la interfase sólido-líquido.

III. Tercera Categoría de Proceso

Los métodos de la tercera categoría modifican las primeras dos etapas de aquellas etapas primera y segunda de los procesos para garantizar que el compuesto orgánico en la presuspensión se encuentra en forma friable y que tiene un tamaño medio de partícula efectivo (por ejemplo, en forma de agujas y láminas finas). Las partículas friables pueden formarse mediante la selección de los disolventes, agentes tensioactivos o combinaciones de agentes tensioactivos adecuados, la temperatura de las soluciones individuales, la velocidad de mezcla y la velocidad de precipitación y similares. Se puede mejorar también la friabilidad introduciendo defectos reticulares (por ejemplo, planos de estratificación) durante las etapas de mezcla de la primera solución con la solución acuosa. Esto se debería a una cristalización rápida tal como la que se da en la etapa de precipitación. En la etapa de adición de energía estos cristales friables se convierten en cristales cinéticamente estabilizados y que tienen un tamaño de partícula medio efectivo más pequeño que los de la presuspensión. Cinéticamente estabilizado significa que las partículas tienen menor tendencia a agregarse en comparación con las partículas que no están cinéticamente estabilizadas. En este caso, la etapa de adición de energía provoca una ruptura de las partículas friables. Al garantizar que las partículas de la presuspensión se encuentran en un estado friable, el compuesto orgánico puede prepararse más fácilmente y más rápidamente en partículas dentro de los rangos de tamaño deseados cuando se compara con el procesamiento de un compuesto orgánico en el cual no se han tomado medidas para convertirlo en una forma friable.

Control Polimórfico

El proceso puede comprender las etapas adicionales de controlar la estructura cristalina del compuesto farmacéuticamente activo para producir finalmente una suspensión del compuesto en el rango deseado de tamaño, así como la estructura cristalina deseada. Se entiende por el término "estructura cristalina" la disposición de los átomos dentro de la célula unitaria del cristal. Los compuestos farmacéuticamente activos que pueden cristalizarse en distintas estructuras cristalinas se denominan polimorfos. La identificación de los polimorfos es una etapa importante en la formulación de medicamentos ya que distintos polimorfos del mismo medicamento pueden presentar diferencias en la solubilidad, actividad terapéutica, biodisponibilidad y estabilidad de la suspensión. En consecuencia, es importante controlar la forma polimorfa del compuesto para asegurar la pureza del producto y la reproducibilidad lote a
lote.

Las etapas para controlar la forma polimorfa de un compuesto incluyen la siembra de la primera solución, del segundo disolvente o de la presuspensión para asegurar la formación del polimorfo deseado. La siembra incluye la utilización de un compuesto simiente o la adición de energía. Preferentemente, el compuesto simiente es el compuesto farmacéuticamente activo en la forma polimorfa deseada. Como alternativa, el compuesto simiente puede ser también una impureza inerte o un compuesto orgánico con una estructura similar a la del polimorfo deseado, por ejemplo una sal biliar.

El compuesto simiente puede precipitar de la primera solución. Este método incluye las etapas de añadir el compuesto farmacéuticamente activo en una cantidad suficiente para sobrepasar la solubilidad del compuesto farmacéuticamente activo en el primer disolvente, creando una solución supersaturada. La solución supersaturada se trata para que precipite el compuesto farmacéuticamente activo en la forma polimorfa deseada. El tratamiento de la solución supersaturada incluye estabilizar la solución durante un tiempo hasta que se observe la formación de un cristal o cristales para crear una mezcla simiente. También es posible añadir energía a la solución supersaturada para que el compuesto farmacéuticamente activo precipite fuera de la solución en el polimorfo deseado. Se puede añadir energía de muchas maneras, incluidas las etapas de adición de energía descritas anteriormente. Además se puede añadir energía por calentamiento o exposición de la presuspensión a fuentes de energía electromagnética, haz de partículas o haz electrónico. La energía electromagnética incluye la utilización de un haz láser, energía electromagnética dinámica u otras fuentes de radiación. Se contempla además la utilización de ultrasonidos, campos electroestáticos y campos magneticos estáticos como fuentes de adición de energía.

Preferentemente, el método para producir cristales simientes a partir de una solución supersaturada estabilizada incluye las etapas de: (i) añadir una cantidad del compuesto farmacéuticamente activo al primer disolvente orgánico para crear una solución supersaturada; (ii) estabilizar la solución supersaturada para formar cristales detectables creando una mezcla simiente; y (iii) mezclar la mezcla simiente con el segundo disolvente para precipitar el compuesto farmacéuticamente activo generando una presuspensión. A continuación, la presuspensión puede ser procesada tal como se describe en detalle anteriormente para proporcionar una suspensión acuosa del compuesto farmacéuticamente activo en el polimorfo deseado y en el rango de tamaño deseado.

La siembra puede realizarse también mediante adición de energía a la primera solución, al segundo disolvente o a la presuspensión siempre que el líquido o líquidos expuestos contengan el compuesto farmacéuticamente activo o un material simiente. Se puede añadir la energía de la misma manera que la descrita anteriormente para la solución supersaturada.

En consecuencia, se describe la composición de una materia de un compuesto farmacéuticamente activo en una forma polimorfa deseada esencialmente libre de polimorfo o polimorfos no especificados. Se expone un ejemplo en el Ejemplo 16 a continuación, en el cual la siembra durante la microprecipitación proporciona un polimorfo de itraconazol esencialmente libre de polimorfo de materia prima. Se prevé que los métodos de esta invención puedan aplicarse normalmente para producir selectivamente un polimorfo deseado para numerosos compuestos farmacéuticamente activos.

Ejemplos Ejemplos de la Categoría 1 del Proceso Ejemplo 1 Preparación de la suspensión de itraconazol mediante la utilización de la Categoría 1 del Proceso, Método A con homogeneización

En un matraz de 3 l se añaden 1.680 ml de agua para inyección. Se calienta el líquido a 60-65ºC y luego se añaden lentamente 44 gramos de Pluronic F-68 (poloxamer 188), y 12 gramos de desoxicolato de sodio, agitando después de cada adición para disolver los sólidos. Al terminar la adición de sólidos, se agita durante otros 15 minutos a 60-65ºC para asegurar la disolución completa. Se prepara un tampón Tris 50 mM (trometamina) disolviendo 6,06 gramos de tris en 800 ml de agua para inyección. Se valora esta solución a un pH 8,0 con ácido clorhídrico 0,1M. Se diluiye la solución resultante hasta 1 litro con más agua para inyección. Se añaden 200 ml del tampón tris a la solución de poloxamer/desoxicolato. Se agita perfectamente para mezclar las soluciones.

En un vaso de pico de 150 ml se añaden 20 gramos de itraconazol y 120 ml de N-metil-2-pirrolidinona. La mezcla se calienta a 50-60ºC agitando para disolver los sólidos. Después de comprobar visualmente la disolución total, se agita durante 15 minutos más para asegurar la disolución completa. La solución de itraconazol-NMP se enfría a temperatura ambiente.

Se carga la bomba de una jeringa (dos jeringas de vidrio de 60 ml) con los 120 ml de la solución de itraconazol preparada anteriormente. Mientras tanto, toda la solución de agente tensioactivo se vierte en la tolva de un homogeneizador enfriada a 0-5ºC (esto se puede realizar utilizando una tolva con camisa exterior por la cual circula el refrigerante, o rodeando la tolva de hielo). Se coloca un agitador mecánico dentro de la solución de agente tensioactivo de forma que las paletas estén completamente sumergidas. Con la bomba de la jeringa se añade lentamente (1-3 ml/min) la totalidad de la solución de itraconazol a la solución de agente tensioactivo agitado, enfriado. Se recomienda una velocidad de agitación de al menos 700 rpm. Se analiza una parte alícuota de la suspensión resultante (Suspensión A) por microscopía óptica (Hoffman Modulation Contrast) y por difracción láser (Horiba). Se observa por microscopía óptica que la suspensión A se compone de partículas amorfas aproximadamente esféricas (por debajo de 1 micra), unidas unas a otras en agregados o desplazándose libremente con movimiento browniano. Véase la Figura 3. Las medidas de dispersión de luz dinámica dan típicamente un modelo de distribución bimodal que indica la presencia de agregados (10-100 micras de tamaño) y la presencia de partículas amorfas aisladas cuyo diámetro mediano de partícula oscila entre 200 y 700 nm.

La suspensión se homogeneiza inmediatamente (a 10.000 hasta 30.000 psi) durante 10-30 minutos. Al final de la homogeneización, la temperatura de la suspensión en la tolva no supera los 75ºC. La suspensión homogeneizada se recoge en botellas de 500 ml, que se enfrían inmediatamente en el refrigerador (2-8ºC). Se analiza esta suspensión (Suspensión B) por microscopía óptica y se descubre que se compone de pequeñas láminas alargadas de una longitud de 0,5 a 2 micras y un ancho en el rango de 0,2-1 micra. Véase la Figura 4. Las medidas de dispersión de luz dinámica indican típicamente un diámetro mediano de 200-700 nm.

Figura 3 Partículas amorfas antes de la homogeneización (Ejemplo 1)

3

Figura 4 Partículas después del recocido por homogeneización

4

Estabilidad de la Suspensión A ("Presuspensión") (Ejemplo 1)

Durante el examen microscópico de la parte alícuota de la Suspensión A, se observó directamente la cristalización del sólido amorfo. Se almacenó la Suspensión A a 2-8ºC durante 12 horas y se estudió por microscopía óptica. La inspección visual general de la muestra reveló una floculación aguda, con algunos de los contenidos depositados en el fondo del recipiente. El examen microscópico indicó la presencia de grandes cristales alargados, parecidos a láminas con una longitud por encima de 10 micras.

Estabilidad de la Suspensión B

En comparación con la inestabilidad de la Suspensión A, la Suspensión B era estable a 2-8ºC durante el período de estudio preliminar de estabilidad (1 mes). La microscopía en la muestra estabilizada demostró claramente que no había tenido lugar ningún cambio significativo en la morfología o el tamaño de las partículas. Esto se confirmó por medidas de dispersión de luz.

Ejemplo 2 Preparación de la suspensión de itraconazol utilizando la Categoría 1 del Proceso, Método A con ultrasonicación

En un recipiente de acero inoxidable de 500 ml se añaden 252 ml de agua para inyección. Se calienta el líquido a 60-65ºC y luego se añaden lentamente 6,6 gramos de Pluronic F-68 (poloxamer 188) y 0,9 gramos de desoxicolato de sodio, agitando después de cada adición para disolver los sólidos. Al terminar la adición de sólidos, se agita durante otros 15 minutos a 60-65ºC para asegurar la disolución completa. Se prepara un tampón Tris 50 mM (trometamina) disolviendo 6,06 gramos de tris en 800 ml de agua para inyección. Se valora esta solución a un pH 8,0 con ácido clorhídrico 0,1M. Se diluye la solución resultante hasta 1 litro con más agua para inyección. Se añaden 30 ml del tampón tris a la solución de poloxamer/desoxicolato. Se agita perfectamente para mezclar las soluciones.

En un contenedor de 30 ml se añaden 3 gramos de itraconazol y 18 ml de N-metil-2-pirrolidinona. Se calienta la mezcla a 50-60ºC y se agita para disolver los sólidos. Después de que se observe visualmente la disolución total, se agita durante 15 minutos más para asegurar la disolución completa. La solución de itraconazol-NMP se enfría a temperatura ambiente.

Se carga la bomba de una jeringa con los 18 ml de la solución de itraconazol preparada en una etapa previa. Se coloca un agitador mecánico dentro de la solución de agente tensioactivo de forma que las paletas estén completamente sumergidas. Se enfría el recipiente a 0-5ºC por inmersión en un baño de hielo. Con la bomba de la jeringa se añade lentamente (1-3 ml/min) la totalidad de la solución de itraconazol a la solución de agente tensioactivo agitado, enfriado. Se recomienda una velocidad de agitación de al menos 700 rpm. Se sumerge el cuerno del ultrasonicador en la suspensión resultante para que la sonda se encuentre aproximadamente 1 cm por encima del fondo del recipiente de acero inoxidable. Se somete a sonicación (10.000 a 25.000 Hz, al menos 400 W) durante 15 a 20 minutos a intervalos de 5 minutos. A los primeros 5 minutos de sonicación se retira el baño de hielo y se prosigue la sonicación. Al final de la ultrasonicación, la temperatura de la suspensión en el recipiente no supera los 75ºC.

Se recoge la suspensión en una botella de vidrio de Tipo I de 500 ml, que se enfría inmediatamente en el refrigerador (2-8ºC). Las características morfológicas de las partículas de la suspensión antes y después de la sonicación eran muy similares a las que se observadas en el Método A antes y después de la homogeneización (véase el Ejemplo
1).

Ejemplo 3 Preparación de la suspensión de itraconazol utilizando la Categoría 1 del Proceso, Método B con homogeneización

Se prepara un amortiguador Tris 50 mM (trometamina) mediante la disolución de 6,06 gramos de tris en 800 ml de agua para inyección. Se valora esta solución a un pH 8,0 con ácido clorhídrico 0,1M. Se diluye la solución resultante hasta 1 litro con más agua para inyección. En un matraz de 3 l se añaden 1.680 ml de agua para inyección. Se añaden 200 ml del tampón tris a los 1.680 ml de agua. Se agita perfectamente para mezclar las soluciones.

En un vaso con pico de 150 ml se añaden 44 gramos de Pluronic F-68 (poloxamer 188) y 12 gramos de desoxilato de sodio a 120 ml de N-metil-2-pirrolidinona. La mezcla se calienta a 50-60ºC y se agita para disolver los sólidos. Después de que se observe visualmente la disolución total, se agita durante 15 minutos más para asegurar la disolución completa. A esta solución, se añaden 20 gramos de itraconazol y se agita hasta que esté totalmente disuelto. La solución de itraconazol-agente tensioactivo-NMP se enfría a temperatura ambiente.

Se carga la bomba de una jeringa (dos jeringas de vidrio de 60 ml) con los 120 ml de la solución concentrada de itraconazol preparada anteriormente. Mientras tanto, la solución de tampón tris diluida preparada anteriormente se vierte en la tolva de un homogeneizador enfriada a 0-5ºC (esto se puede realizar utilizando una tolva con camisa exterior por la cual circula el refrigerante, o rodeando la tolva de hielo). Se coloca un agitador mecánico dentro de la solución de tampón de forma que las paletas estén completamente sumergidas. Con la bomba de la jeringa se añade lentamente (1-3 ml/min) la totalidad del concentrado de itraconazol-agente tensioactivo a la solución tampón agitada y enfriada. Se recomienda una velocidad de agitación de al menos 700 rpm. Se homogeneiza inmediatamente la suspensión enfriada resultante (a 10.000 hasta 30.000 psi) durante 10-30 minutos. Al final de la homogeneización, la temperatura de la suspensión en la tolva no supera los 75ºC.

La suspensión homogeneizada se recoge en botellas de 500 ml, que se enfrían inmediatamente en el refrigerador (2-8ºC). Las características morfológicas de las partículas de la suspensión antes y después de la homogeneización eran muy similares a las observadas en el Ejemplo 1, excepto que en la categoría 1B del proceso, el material prehomogeneizado tendía a formar menos y más pequeños agregados, que resultaron en un tamaño de partícula global más pequeño tal como se midió por difracción láser. Después de la homogeneización, los resultados de dispersión de luz dinámica eran básicamente idénticos a los presentados en el Ejemplo 1.

Ejemplo 4 Preparación de la suspensión de itraconazol utilizando la Categoría 1 del Proceso, Método B con ultrasonicación

En un matraz de 500 ml se añaden 252 ml de agua para inyección. Se preparan un tampón tris 50 mM (trometamina) disolviendo 6,06 gramos de tris en 800 ml de agua para inyección. Se valora esta solución a un pH 8,0 con ácido clorhídrico 0,1M. La solución resultante se diluye hasta 1 litro con más agua para inyección. Se añaden 30 ml del tampón tris al agua. Se agita perfectamente para mezclar las soluciones.

En un vaso con pico de 30 ml se añaden 6,6 gramos de Pluronic F-68 (poloxamer 188) y 0,9 gramos de desoxicolato de sodio a 18 ml de N-metil-2-pirrolidinona. La mezcla se calienta a 50-60ºC y se agita para disolver los sólidos. Después de que se observe visualmente la disolución total, se agita durante 15 minutos más para asegurar la disolución completa. A esta solución, se añaden 3,0 gramos de itraconazol y se agita hasta que esté totalmente disuelto. La solución de itraconazol-agente tensioactivo-NMP se enfría a temperatura ambiente.

Se carga la bomba de una jeringa (una jeringa de vidrio de 30 ml) con los 18 ml de la solución concentrada de itraconazol preparada previamente. Se coloca un agitador mecánico dentro de la solución de tampón de forma que las paletas estén completamente sumergidas. El recipiente se enfría a 0-5ºC por inmersión en baño de hielo. Con la bomba de la jeringa se añade lentamente (1-3 ml/min) la totalidad del concentrado de itraconazol-agente tensioactivo a la solución tampón agitada, enfriada. Se recomienda una velocidad de agitación de al menos 700 rpm. Se somete a sonicación inmediatamente la suspensión enfriada resultante (10.000 a 25.000 Hz, al menos 400 W) durante 15-20 minutos, a intervalos de 5 minutos. A los primeros 5 minutos de sonicación, se retira el baño de hielo y se prosigue con la sonicación. Al final de la ultrasonicación, la temperatura de la suspensión en la tolva no supera los 75ºC.

Se recoge la suspensión resultante en una botella de 500 ml, que se enfría inmediatamente en el refrigerador (2-8ºC). Las características morfológicas de las partículas de la suspensión antes y después de la sonicación eran muy similares a las observadas en el Ejemplo 1, excepto que en la Categoría 1 del Proceso, Método B, el material sometido a presonicación tendía a formar menos y más pequeños agregados que resultaron en un tamaño de partículas global más pequeño, tal como se midió por difracción láser. Después de la ultrasonicación, los resultados de dispersión de luz dinámica fueron básicamente idénticos a los presentados en el Ejemplo 1.

Ejemplos de la Categoría 2 del Proceso Ejemplo 5 Preparación de la suspensión de itraconazol (1%) con Solutol® HR 75% (PEG-660 12-hidroxiestearato) Categoría 2 de Proceso, Método B

Se pesaron en un vaso con pico el solutol (2,25 g) y el itraconazol (3,0 g) y se añadieron 36 m de N-metil-2-pirrolidinona (NMP) filtrada. Se agitó esta mezcla con poco calor (hasta 40ºC) durante 15 minutos aproximadamente hasta que los ingredientes de la solución se disolvieran. Se enfrió la solución a temperatura ambiente y se filtró a través de un filtro de 0,2 micras bajo vacío. Se llenaron dos jeringas de 60 ml con el concentrado filtrado de medicamento y se colocaron en una bomba de jeringa. La bomba se ajustó para suministrar aproximadamente 1 ml/min de concentrado a una solución acuosa de tampón rápidamente agitada (400 rpm). La solución de tampón se componía de 22 g/l de glicerina en tampón tris 5 mM. Durante toda la adición de concentrado se mantuvo la solución tampón en un baño de hielo a 2-3ºC. Al final de la precipitación, después de la adición completa del concentrado a la solución de tampón, se centrifugaron aproximadamente 100 ml de la suspensión durante 1 hora, se apartó el sobrenadante. Se resuspendió el precipitado en una solución de un 20% de NMP en agua, y se centrifugó de nuevo durante 1 hora. Se secó el material durante toda la noche en un horno a vacío a 25ºC. Se trasladó el material seco a un frasco y se analizó por difractometría de rayos X utilizando radiación con cromo (véase la Figura 5).

Se sometieron a sonicación otras partes alícuotas de 100 ml de la suspensión microprecipitada durante 30 minutos a 20.000 Hz, a amplitud total del 80% (amplitud total = 600 W). La muestra sometida a sonicación fue homogeneizada en 3 partes alícuotas iguales, cada una durante 45 minutos (Avestin C5, 2-5ºC, 15.000-20.000 psi). Las fracciones combinadas se centrifugaron durante 3 horas aproximadamente, se eliminó el sobrenadante y se resuspendió el precipitado en un 20% de NMP. La mezcla resuspendida se volvió a centrifugar (15.000 rpm a 5ºC). Se decantó el sobrenadante y se secó al vacío el precipitado durante toda la noche a 25ºC. Se sometió el precipitado a análisis por difractometría de rayos X (véase la Figura 5). Tal como se ve en la Figura 5, los modelos de difracción de rayos X de las muestras procesadas, antes y después de la homogeneización, son esencialmente idénticas, muestran aún un modelo significativamente diferente si se compara con la materia prima de partida. La suspensión no homogeneizada es inestable y se aglomera cuando se almacena a temperatura ambiente. Se cree que la estabilización que se produce como resultado de la homogeneización surge de la disposición del agente tensioactivo en la superficie de la partícula. Esta disposición tendría que resultar en una menor propensión a la agregación de las partículas.

Figura 5 Difractograma de rayos X del itraconazol microprecipitado con polietilenglicol-660 12-hidroxiestearato antes y después de la homogeneización (Ejemplo 5)

5

C. Ejemplos de la Categoría del Proceso Ejemplo 6 Preparación de una suspensión de carbamacepina utilizando la Categoría 3 del Proceso, Método A con homogeneización

Se disolvieron 2,08 g de carbamacepina en 10 ml de NMP. Posteriormente, se vertió por goteo 1,0 ml de este concentrado, a 0,1 ml/min, dentro de 20 mL de una solución agitada de lecitina al 1,2% y de glicerina al 2,25%. La temperatura del sistema de lecitina se mantuvo a 2-5ºC durante toda la adición. A continuación, la predispersión fue homogeneizada en frío (5-15ºC) durante 35 minutos a 15.000 psi. Se incrementó la presión a 23.000 psi y la homogeneización siguió durante otros 20 minutos. Las partículas producidas por el proceso tenían un diámetro medio de 0,881 \mum, siendo un 99% de las partículas inferior a 2,44 \mum.

Ejemplo 7 Preparación de una suspensión de carbamacepina al 1% con Solutol® al 0,125% utilizando la Categoría 3 del Proceso, Método B con homogeneización

Se preparó un concentrado de medicamento al 20% en carbamacepina y al 5% en ácido glicodesoxicólico (Sigma Chemical Co.) en N-metil-2-pirrolidinona. La etapa de microprecipitación implicaba la adición del concentrado de medicamento a la solución receptora (agua destilada) a una velocidad de 0,1 ml/min. La solución receptora se agitó y se mantuvo a aproximadamente 5ºC durante la precipitación. Después de la precipitación, las concentraciones finales de los ingredientes eran al 1% en carbamacepina y al 0,125% en Solutol®. Se examinaron los cristales de medicamento bajo microscopio óptico mediante contraste de fase positiva (400 X). El precipitado se componía de finas agujas de aproximadamente 2 micras de diámetro que oscilaban entre 50 y 150 micras de longitud.

La homogeneización (homogeneizador a pistón por intervalos Avestin C-50) a aproximadamente 20.000 psi durante aproximadamente 15 minutos resultó en pequeñas partículas, menos de 1 micra de tamaño y muy disgregadas. El análisis por difracción láser (Horiba) del material homogeneizado mostró que las partículas tenían un tamaño medio de 0,4 micras, el 99% de las partículas de menos de 0,8 micras. La sonicación a baja potencia, adecuada para romper las partículas aglomeradas, pero no con la suficiente energía para provocar una cominución en partículas individuales, de la muestra antes del análisis por Horiba no tuvo ningún efecto sobre los resultados (los números eran los mismos con y sin sonicación). Este resultado era coherente con la ausencia de aglomeración de las partículas.

Las muestras preparadas mediante el proceso anterior fueron centrifugadas y las soluciones de sobrenadante fueron sustituidas por una solución de sustitución compuesta por un 0,125% en Solutol®. Después de centrifugar y sustituir el sobrenadante, las concentraciones de los ingredientes en suspensión eran del 1% en carbamacepina y el 0,125% en Solutol®. Las muestras se volvieron a homogeneizar en un homogeneizador de pistón por intervalos y se almacenaron a 5ºC. Después de un almacenamiento de 4 semanas, la suspensión tenía un tamaño medio de partícula de 0,751 con un 99% de menos de 1,729. Los números registrados proceden del análisis Horiba en las muestras no sometidas a sonicación.

Ejemplo 8 Preparación de una suspensión de carbamacepina al 1% con glicodesoxicolato de sodio al 0,06% y poloxamer 188 al 0,06% utilizando la Categoría 3 del Proceso, Método B con homogeneización

Se preparó un concentrado de medicamento que comprendía un 20% de carbamacepina y un 5% de glicodesoxicolato en N-metil-2-pirrolidinona. La etapa de microprecipitación implicaba la adición del concentrado de medicamento a la solución receptora (agua destilada) a una velocidad de 0,1 ml/min. Así, éste y los siguientes ejemplos demuestran que la adición de un agente tensioactivo u otro excipiente a la solución de precipitación acuosa en los Métodos A y B anteriores es opcional. La solución receptora se agitó y se mantuvo a aproximadamente 5ºC durante la precipitación. Después de la precipitación, las concentraciones finales de los ingredientes eran del 1% en carbamacepina y el 0,125% en Solutol®. Se examinaron los cristales de medicamento bajo microscopio óptico mediante contraste de fase positiva (400 X). El precipitado se componía de finas agujas de aproximadamente 2 micras de diámetro que oscilaban entre 50 y 150 micras de longitud. La comparación del precipitado con la materia prima antes de la precipitación revela que la etapa de precipitación en presencia del modificador superficial (ácido glicodesoxicólico) resulta en cristales muy delgados que son mucho más finos que la materia prima de partida (véase la Figura 6).

La homogeneización (homogeneizador de pistón por intervalos Avestin C-50) a aproximadamente 20.000 psi durante aproximadamente 15 minutos resultó en pequeñas partículas, menos de 1 micra de tamaño y muy disgregadas. El análisis por difracción láser (Horiba) del material homogeneizado mostró que las partículas tenían un tamaño medio de 0,4 micras, con un 99% de la partículas de menos de 0,8 micras. La sonicación de la muestra antes del análisis Horiba no tuvo ningún efecto sobre los resultados (los números eran los mismos con y sin sonicación). Este resultado era coherente con la ausencia de aglomeración de las partículas.

Las muestras preparadas mediante el proceso anterior fueron centrifugadas y las soluciones de sobrenadante fueron sustituidas por una solución de sustitución compuesta por un 0,06% de ácido glicodesoxicólico (Sigma Chemical Co.) y un 0,06% de Poloxamer 188. Las muestras se volvieron a homogeneizar en un homogeneizador de pistón por intervalos y se almacenaron a 5ºC. Después de un almacenamiento de 2 semanas, la suspensión tenía un tamaño medio de partícula de 0,531 micras con un 99% de menos de 1,14 micras. Los números registrados proceden del análisis Horiba en las muestras no sometidas a sonicación.

Figura 6 Cristales de carbamacepina antes de la homogeneización (Ejemplo 6)

6

Figura 7 Microparticulado de carbamacepina después de homogeneización (Avestin C-50) (Ejemplo 6)

7

Análisis Matemático (Ejemplo 8) de la fuerza necesaria para romper las partículas precipitadas en comparación con la fuerza necesaria para romper las partículas de la material prima de partida (carbamacepina):

El ancho de los cristales más grandes vistos en la materia prima de carbamacepina (Figura 6, imagen de la izquierda) es aproximadamente 10 veces más grande que el ancho de los cristales en el material microprecipitado (Figura 6, imagen de la derecha). Suponiendo que la relación del espesor de los cristales (1:10) es proporcional a la relación del ancho de los cristales (1:10), entonces el momento de la fuerza necesaria para separar el cristal más grande en la materia prima tendría que ser aproximadamente 1.000 veces mayor que la fuerza necesaria para romper el material microprecipitado, ya que:

Eq. 1e_{L} = 6PL/(Ewx^{2})

donde,

e_{L} =

alargamiento longitudinal necesario para romper el cristal ("valor de campo")

P =

carga en el haz

L =

distancia desde la carga hasta el fulcro

E =

módulo de elasticidad

w =

ancho del cristal

x =

espesor del cristal

Supongamos que L y E son iguales para la materia prima y el material precipitado. Además, supongamos que
w/w_{0} = x/x_{0} = 10. Entonces,

(e_{L})_{0} = 6P_{0}L/(Ew_{0}x_{0}^{2}), \hskip0.5cm donde el subíndice “0” se refiere a la materia prima

e_{L} = 6PL/(Ewx^{2}), \hskip0.5cm para el microprecipitado

Igualando (e_{L})_{0} y e_{L},

6PL/(Ewx^{2}) = 6P_{0}L/(Ew_{0}x_{0}^{2})

Después de simplificar,

P = P_{0} (w/w_{0})(x/x_{0})^{2} = P_{0} (0,1)(0,1)^{2} = 0,001 P_{0}

Por tanto, la fuerza de elasticidad, P, necesaria para romper el sólido microprecipitado es mil veces la fuerza requerida necesaria para romper el sólido cristalino de partida. Si, debido a la precipitación rápida, se introducen defectos reticulares o propiedades amorfas, entonces el módulo (E) debería disminuir, facilitando aun más la separación del microprecipitado.

Ejemplo 9 Preparación de la suspensión al 1,6% (peso/volumen) de prednisolona con desoxicolato de sodio al 0,05% y N-metil-2-pirrolidinona al 3%. Categoría 3 del Proceso, Método B

En la Figura 8 se muestra un esquema del proceso general de fabricación. Se preparó una solución concentrada de prednisolona y desoxicolato de sodio. Se añadieron la prednisolona (32 g) y el desoxicolato de sodio (1 g) a un volumen suficiente de 1-metil-2-pirrolidona (NMP) para producir un volumen final de 60 ml. La concentración resultante de prednisolona era aproximadamente de 533,3 mg/ml y la concentración de desoxicolato de sodio era aproximadamente de 16,67 mg/ml. Se añadieron 60 ml de concentrado de NMP a 2 l de agua enfriada a 5ºC a una velocidad de adición de 2,5 ml/min mientras se agitaba a aproximadamente 400 rpm. La suspensión resultante contenía cristales en forma de agujas delgadas inferiores a 2 \mum de ancho (Figura 9). La concentración contenida en la suspensión precipitada era del 1,6% (peso/volumen) de prednisolona, el 0,05% de desoxicolato de sodio y el 3% de NMP.

Se ajustó el pH de la suspensión precipitada a 7,5-8,5 con hidróxido de sodio y ácido clorhídrico, luego se homogeneizó (homogeneizador de pistón por intervalos Avestin C-50) durante 10 pasadas a 10.000 psi. Se eliminó el NMP mediante 2 etapas sucesivas de centrifugación reemplazando cada vez el sobrenadante por una nueva solución de agente tensioactivo, que contenía las concentraciones deseadas de agentes tensioactivos necesarios para estabilizar la suspensión (véase la Tabla 2). La suspensión fue homogeneizada durante otras 10 pasadas a 10.000 psi. La suspensión final contenía partículas con un tamaño medio de partículas inferior a 1 \mum, y el 99% de partículas inferior a 2 \mum. La Figura 10 es un fotomicrograma de la suspensión final de prednisolona después de la homogeneización.

Se utilizó una variedad de distintos agentes tensioactivos a concentraciones variables en la etapa de centrifugación/sustitución del agente tensioactivo (véase la Tabla 2). La Tabla 2 enumera las combinaciones de agentes tensioactivos que eran estables con respecto al tamaño de partícula (medio < 1 \mum, el 99% < 2 \mum), pH (6-8), concentración de medicamento (inferior al 2% de pérdida) y re-suspensibilidad (resuspendido en 60 segundos o menos).

Figura 8 Diagrama del Proceso de Microprecipitación para la Prednisolona (Ejemplos 9-12)

8

Notablemente, este proceso prevé la adición del compuesto activo a un diluyente acuoso sin la presencia de un agente tensioactivo u otro aditivo. Ésta es una modificación del proceso, Método B en la Figura 2.

Figura 9 Fotomicrograma de la suspensión de prednisolona antes de la homogeneización (Hoffman Modulation Contrast, aumento x 1250)

9

Figura 10 Fotomicrograma de la suspensión de prednisolona después de la homogeneización (Hoffman Modulation Contrast, aumento x 1250)

10

TABLA 2 Lista de las suspensiones estables de prednisolona preparadas por el proceso de microprecipitación de la Figura 8 (Ejemplo 9)

100

Tamaño de partícula (por dispersión de luz láser), en micras:

5ºC: 0,80 (medio); 1,7 (99%)

25ºC: 0,90 (medio); 2,51 (99%)

40ºC: 0,99 (medio); 2,03 (99%)

Diferencia en la concentración de itraconazol entre las muestras almacenadas a 5 y 25º C: < 2%

Ejemplo 10 Preparación de la suspensión de prednisolona utilizando la Categoría 3 del Proceso, Método A con homogeneización

Se disolvieron 32 g de prednisolona en 40 ml de NMP. Para efectuar la disolución era necesario calentarla suavemente a 40-50ºC. Posteriormente se vertió por goteo el concentrado de NMP del medicamento a 2,5 ml/min en 2 litros de una solución agitada que se componía de lecitina al 1,2% y glicerina al 2,2%. No se añadieron otros modificadores superficiales. El sistema de agente tensioactivo se tamponó a pH = 8,0 con amortiguador tris 5 mM y la temperatura se mantuvo a 0º hasta 5ºC durante todo el proceso de precipitación. La dispersión post-precipitada entonces fue homogeneizada en frío (5-15ºC) durante 20 pasadas a 10.000 psi. Después de la homogeneización se eliminó el NMP mediante centrifugación de la suspensión, eliminación del sobrenadante y sustitución del mismo por una nueva solución de agente tensioactivo. Esta suspensión post-centrifugada entonces se volvió a homogeneizar en frío (5-15ºC) durante otras 20 pasadas a 10.000 psi. Las partículas producidas por este proceso tenían un diámetro medio de 0,927 \mum con un 99% de la partículas de menos de 2,36 \mum.

Ejemplo 11 Preparación de la suspensión de nabumetona utilizando la Categoría 3 del Proceso, Método B con homogeneización

Se disolvió el agente tensioactivo (2,2 g de Poloxamer 188) en 6 ml de N-metil-2-pirrolidinona. Se agitó esta solución a 45ºC durante 15 minutos, después de lo cual se añadió 1,0 g de nabumetona. El medicamento se disolvió rápidamente. Se preparó un diluyente que se componía de tampón Tris 5 mM con un 2,2% de glicerina, y se ajustó a pH 8. Se enfrió una parte de 100 ml del diluyente en un baño de hielo. Se añadió lentamente (0,8 ml/min aproximadamente) el concentrado de medicamento al diluyente agitando vigorosamente. Esta suspensión bruta se homogeneizó a 15.000 psi durante 30 minutos y luego a 20.000 psi durante 30 minutos (temperatura = 5ºC). Se descubrió que la nanosuspensión final tenía un diámetro efectivo de 930 nm (analizado por difracción láser). El 99% de las partículas era inferior a aproximadamente 2,6 micras.

Ejemplo 12 Preparación de la suspensión de nabumetona utilizando la Categoría 3 del Proceso, Método B, con homogeneización y utilizando Solutol® HS 15 como agente tensioactivo. Sustitución del líquido sobrenadante por un medio de fosfolípidos

Se disolvió la nabumetona (0,987 gramos) en 8 ml de N-metil-2-pirrolidinona. A esta solución se añadieron 2,2 gramos de Solutol® HS 15. Se agitó esta mezcla hasta la disolución completa del agente tensioactivo en el concentrado de medicamento. Se preparó el diluyente que se componía de tampón Tris 5 mM con un 2,2% de glicerina, y se ajustó a pH 8. Se enfrió el diluyente en un baño de hielo, y se añadió lentamente (0,5 ml/min aproximadamente) el concentrado de medicamento al diluyente agitando vigorosamente. Se homogeneizó esta suspensión bruta durante 20 minutos a 15.000 psi y durante 30 minutos a 20.000 psi.

Se centrifugó la suspensión a 15.000 rpm durante 15 minutos y se eliminó y descartó el sobrenadante. Se resuspendieron los gránulos sólidos remanentes en un diluyente que se componía de un 1,2% de fosfolípidos. Este medio era igual en volumen a la cantidad de sobrenadante eliminado en la etapa previa. La suspensión resultante se homogeneizó entonces a aproximadamente 21.000 psi durante 30 minutos. Se analizó la suspensión final por difracción láser y se descubrió que contenía partículas con un diámetro medio de 542 nm y una distribución acumulativa de partículas del 99% con un tamaño inferior a 1 micra.

Ejemplo 13 Preparación de la suspensión de itraconazol al 1% con poloxamer con partículas de un diámetro medio de aproximadamente 220 nm

Se preparó el concentrado de itraconazol disolviendo 10,02 gramos de itraconazol en 60 ml de N-metil-2-pirrolidinona. Se necesitaba un calentamiento a 70ºC para disolver el medicamento. Se enfrió entonces la solución a temperatura ambiente. Se preparó una parte de tampón tris(hidroximetil)aminometano 50 mM (amortiguador tris) y se ajustó el pH a 8,0 con ácido clorhídrico 5M. Se preparó una solución acuosa de agente tensioactivo combinando 22 g/l de poloxamer 407, 3,0 g/l de fosfátidos de huevo, 22 g/l de glicerina y 3,0 g/l de dihidrato de colato sódico. Se mezclaron 900 ml de la solución de agente tensioactivo con 100 ml del tampón tris para proporcionar 1.000 ml de diluyente acuoso.

Se añadió el diluyente acuoso a la tolva del homogeneizador (APV Gaulin Modelo 15MR-8TA), la cual se enfrió mediante una camisa exterior de hielo. Se agitó rápidamente (4.700 rpm) la solución y se controló la temperatura. Se añadió lentamente el concentrado de itraconazol utilizando una bomba de jeringa, a una velocidad de aproximadamente 2 ml/min. La adición finalizó a los 30 minutos aproximadamente. La suspensión resultante se agitó durante 30 minutos más mientras se seguía enfriando la tolva en una camisa exterior de hielo, y se retiró una parte alícuota para su análisis por microscopía óptica de cualquier dispersión de luz dinámica. La suspensión remanente se homogeneizó posteriormente durante 15 minutos a 10.000 psi. Al final de la homogeneización la temperatura había subido a 74ºC. Se recogió la suspensión homogeneizada en una botella de vidrio de Tipo I de 1 l y se tapó con un tapón de caucho. Se almacenó la botella que contenía la suspensión en un refrigerador a 5ºC.

Una muestra de la suspensión antes de la homogeneización mostró que la muestra se componía tanto de partículas libres, grupos de partículas como de cuerpos multilamelares de lípidos. No se pudieron visualizar claramente las partículas libres debido al movimiento browniano; sin embargo, parece que numerosos agregados se componían de material amorfo, no cristalino.

La muestra homogeneizada contenía partículas submicrométricas libres sin vesículas visibles de lípidos. La dispersión de luz dinámica mostró una distribución monodispersa a escala logarítmica con un diámetro medio de aproximadamente 220 nm. El corte acumulativo de tamaño más alto de un 99% era de aproximadamente 500 nm. La Figura 11 muestra una comparación de la distribución de tamaño de la nanosuspensión preparada con la de un producto típico parenteral de emulsión de grasas (10% de Intralipid®, Pharmacia).

Figura 11 Comparación de las distribuciones de tamaño de las nanosuspensiones (esta invención) con una emulsión de grasas comercial (Ejemplo 13)

11

Ejemplo 14 Preparación de una nanosuspensión de itraconazol al 1% con hidroxietilalmidón

Preparación de la Solución A: Se disolvió el hidroxietilalmidón (1 g, Ajinomoto) en 3 ml de N-metil-2-pirrolidinona (NMP). Se calentó esta solución en un baño de agua a 70-80ºC durante 1 hora. En otro recipiente se añadió 1 g de itraconazol (Wyckoff). Se añadieron 3 ml de NMP y se calentó la mezcla a 70-80ºC para su disolución (aproximadamente 30 minutos). Se añadió a esta solución caliente el fosfolípido (Lipoid S-100). Se siguió calentando a 70-90ºC durante 30 minutos hasta que estuviera totalmente disuelto el fosfolípido. Se combinó la solución de hidroxietilalmidón con la solución de itraconazol/fosfolípido. Se calentó esta mezcla durante 30 minutos más a 80-95ºC para disolver la mezcla.

Adición de la Solución A al Amortiguador Tris: Se enfriaron 94 ml de tampón 50 mM tris(hidroximetil)aminometano en un baño de hielo. A medida que la solución tris se estaba agitando rápidamente, se añadía gota a gota lentamente (menos de 2 cc/minuto) la Solución A caliente (véase más arriba).

Al finalizar la adición, la suspensión resultante fue sometida a sonicación (Procesador Cole-Parmer Ultrasonic, 20.000 Hz, ajuste de la amplitud al 80%) mientras se seguía enfriando en el baño de hielo. Se utilizó una sonda compacta de una pulgada. Se siguió con la sonicación durante 5 minutos. Se retiró el baño de hielo, se quitó la sonda y se reajustó, y se volvió a sumergir la sonda en la suspensión. Se sometió de nuevo a sonicación la suspensión durante otros 5 minutos sin el baño de hielo. La sonda del sonicador se quitó de nuevo y se reajustó, y después de la inmersión de la sonda se sometió a sonicación la muestra durante otros 5 minutos. En este punto, la temperatura de la suspensión había subido a 82ºC. Se enfrió rápidamente de nuevo la suspensión en un baño de hielo y cuando se descubrió que se encontraba por debajo de la temperatura ambiente se vertió en una botella de vidrio de Tipo I y se tapó. La visualización microscópica de las partículas indicó que las partículas individuales tenían un tamaño del orden de una micra o menos.

Después de un año de almacenamiento a temperatura ambiente, se volvió a evaluar la suspensión con respecto al tamaño de las partículas y se descubrió que tenían un diámetro medio de aproximadamente 300 nm.

Ejemplo 15 Ejemplo predictivo del Método A mediante la utilización de HES

La presente invención contempla la preparación de una nanosuspensión de itraconazol al 1% con hidroxietilalmidón mediante la utilización del Método A siguiendo las etapas del Ejemplo 14 con excepción de que se añadiría el HES a la solución de tampón tris en lugar de a la solución de NMP. Puede que sea necesario calentar la solución acuosa para disolver el HES.

Ejemplo 16 Siembra durante la homogeneización para convertir una mezcla de polimorfos en un polimorfo más estable Preparación de la muestra

Se preparó una nanosuspensión de itraconazol por medio de un método de microprecipitación-homogeneización como sigue. Se disolvieron el itraconazol (3 g) y el Solutol HR (2,25 g) en 36 ml de N-metil-2-pirrolidinona (NMP) con poco calor y agitando para formar una solución de concentrado de medicamento. Se enfrió la solución a temperatura ambiente y se filtró a través de un filtro de nylon de 0,2 \mum bajo vacío para eliminar el medicamento o la materia particulada no disuelta. Se observó la solución bajo luz polarizada para asegurarse de que no había ningún material cristalino después de la filtración. Se añadió entonces la solución de concentrado de medicamento, a 1,0 ml/minuto, a aproximadamente 264 ml de una solución acuosa de tampón (22 g/l de glicerina en tampón tris 5 mM). Se mantuvo la solución acuosa a 2-3ºC y se agitó continuamente a 400 rpm aproximadamente durante la adición del concentrado de medicamento. Se centrifugaron aproximadamente 100 ml de la suspensión resultante y se resuspendieron los sólidos en una solución prefiltrada de un 20% de NMP en agua. Se volvió a centrifugar esta suspensión y se trasladaron los sólidos a un horno de vacío para secarla durante toda la noche a 25ºC. La muestra sólida resultante fue etiquetada como SMP 2 PRE.

Caracterización de la muestra

La muestra SMP 2 PRE y una muestra de la materia prima de itraconazol fueron analizadas mediante difractometría en polvo de rayos X. Las mediciones se realizaron por medio de un Rigaku MiniFlex + instrumento con radiación de cobre, un paso progresivo de 0,02º 2\theta y una velocidad de exploración de 0,25º 2\theta/minuto. Los modelos resultantes de la difracción en polvo se muestran en la Figura 12. Los modelos muestran que la SMP 2 PRE es significativamente diferente de la materia prima, lo que sugiere la presencia de un polimorfo o seudopolimorfo distinto.

Las trazas de calorimetría de exploración diferencial (DSC) para las muestras se muestran en las Figuras 13a y 13b. Se calentaron ambas muestras a 2º/min a 180ºC en cubetas de aluminio herméticamente selladas.

La traza para la materia prima de itraconazol (Figura 13a) muestra una endoterma marcada a aproximadamente 165ºC.

La traza para la SMP 2 PRE (Figura 13b) muestra dos endotermas a aproximadamente 159ºC y 153ºC. Este resultado, en combinación con los modelos de difracción en polvo de rayos X, sugiere que la SMP 2 PRE se compone de una mezcla de polimorfos, y que la forma predominante es un polimorfo que es menos estable que el polimorfo presente en la materia prima.

Se proporciona otra evidencia de esta conclusión mediante la traza de DSC en la Figura 14, que muestra que al calentar la SMP 2 PRE durante la primera transición, luego mediante enfriamiento y recalentamiento, el polimorfo menos estable se funde y se recristaliza para formar el polimorfo más estable.

Siembra

Se preparó una suspensión combinando 0,2 g de SMP 2 PRE sólida y 0,2 g de materia prima de itraconazol con agua destilada hasta un volumen final de 20 ml (muestra sembrada). Se agitó la suspensión hasta que los sólidos estuvieran humidificados. Se preparó una segunda suspensión de la misma manera pero sin añadir la materia prima de itraconazol (muestra no-sembrada). Se homogeneizaron ambas suspensiones a aproximadamente 18.000 psi durante 30 minutos. La temperatura final de las suspensiones después de la homogeneización era de aproximadamente 30ºC. Se centrifugaron entonces las suspensiones y se secaron los sólidos durante aproximadamente 16 horas a 30ºC.

La Figura 15 muestra las trazas de DSC de las muestras sembradas y no-sembradas. La velocidad de calentamiento para ambas muestras fue de 2º/min a 180ºC en cubetas de aluminio herméticamente selladas. La traza para la muestra no-sembrada muestra dos endotermas, lo que indica que la mezcla de los polimorfos sigue estando presente después de la homogeneización. La traza para la muestra sembrada muestra que la siembra y la homogeneización provocan la conversión de los sólidos en el polimorfo estable. Por tanto, parece que la siembra influye en la cinética de la transición desde la forma polimorfa menos estable hasta la más estable.

Ejemplo 17 Siembra durante la precipitación para formar un polimorfo estable preferente Preparación de la muestra

Se preparó un concentrado de medicamento de itraconazol-NMP disolviendo 1,67 g de itraconazol en 10 ml de NMP con agitación y calentamiento suave. Se filtró dos veces la solución utilizando filtros de jeringa de 0,2 \mum. Se prepararon entonces las nanosuspensiones de itraconazol mediante la adición de 1,2 ml del concentrado de medicamento a 20 ml de una solución receptora acuosa a aproximadamente 3ºC, agitando a aproximadamente 500 rpm. Se preparó una nanosuspensión sembrada utilizando una mezcla de aproximadamente 0,02 g de materia prima de itraconazol en agua destilada como solución receptora. Se preparó una nanosuspensión no-sembrada utilizando agua destilada solamente como solución receptora. Se centrifugaron ambas suspensiones, se decantaron los sobrenadantes y se secaron los sólidos en un horno de vacío a 30ºC durante aproximadamente 16 horas.

Caracterización de las muestras

La Figura 16 muestra una comparación de las trazas de DSC para los sólidos procedentes de las suspensiones sembradas y no-sembradas. Se calentaron las muestras a 2º/min hasta 180ºC en cubetas de aluminio herméticamente selladas. La línea de discontinua representa la muestra no-sembrada, que muestra dos endotermas lo que indica la presencia de una mezcla polimorfa.

La línea continua representa la muestra sembrada, que muestra solamente una endoterma cerca de la temperatura de fusión esperada de la materia prima, lo que indica que el material de siembra indujo la formación exclusiva del polimorfo más estable.

Ejemplo 18 Control del polimorfo mediante la siembra del concentrado de medicamento

Se determinó experimentalmente que la solubilidad del itraconazol en NMP, a temperatura ambiente (aproximadamente 22ºC), era de 0,16 g/ml. Se preparó una solución de concentrado de medicamento de 0,20 g/ml disolviendo 2,0 g de itraconazol y 0,2 g de Poloxamer 188 en 10 ml de NMP con calentamiento y agitación. Luego se dejo enfriar esta solución a temperatura ambiente para producir una solución supersaturada. Se realizó inmediatamente un experimento de microprecipitación en el cual se añadieron 1,5 ml de concentrado de medicamento a 30 ml de una solución acuosa que contenía un 0,1% de desoxicolato, 2,2% de glicerina. Se mantuvo la solución acuosa a \sim2ºC y a una velocidad de agitación de 350 rpm durante la etapa de adición. Se homogeneizó la presuspensión resultante a \sim13.000 psi durante aproximadamente 10 minutos a 50ºC. Se centrifugó entonces la suspensión, se decantó el sobrenadante y se secaron los cristales sólidos en un horno de vacío a 30ºC durante 135 horas.

Se estabilizó posteriormente el concentrado de medicamento supersaturado mediante su almacenamiento a temperatura ambiente con el fin de inducir la cristalización. A los 12 días, el concentrado de medicamento era nebuloso, lo que indica que había tenido lugar la formación de cristales. Se preparó una suspensión de itraconazol a partir del concentrado de medicamento de la misma manera que en el primer experimento, mediante la adición de 1,5 ml a 30 ml de una solución acuosa que contenía un 0,1% de desoxicolato, un 2,2% de glicerina. Se mantuvo la solución acuosa a \sim5ºC y a una velocidad de agitación de 350 rpm durante la etapa de adición. Se homogeneizó la presuspensión resultante a \sim13.000 psi durante aproximadamente 10 minutos a 50ºC. Entonces se centrifugó la suspensión, se decantó el sobrenadante y se secaron los cristales sólidos en un horno de vacío a 30ºC durante 135 horas.

Caracterización de las muestras

Se utilizó análisis por difracción en polvo de rayos X para determinar la morfología de los cristales secos. Los modelos resultantes se muestran en la Figura 17. Se determinó que los cristales procedentes del primer experimento (utilizando un nuevo concentrado de medicamento) se componían del polimorfo más estable. Por el contrario, los cristales procedentes del segundo experimento (concentrado de medicamento estabilizado) estaban compuestos predominantemente del polimorfo menos estable, con una pequeña cantidad de polimorfo más estable presente. Por lo tanto, se cree que la estabilización indujo a la formación de cristales del polimorfo menos estable en el concentrado de medicamento, que actuaron luego como material de siembra durante las etapas de microprecipitación y homogeneización de modo que se formara preferentemente el polimorfo menos estable.

Figura 12 Modelos de difracción en polvo de rayos X para la materia prima de itraconazol (arriba) y SMP-2-PRE (abajo). El modelo de materia prima ha sido desplazado hacia arriba para más claridad. (Ejemplo 16)

\vskip1.000000\baselineskip

12

Figura 13a Traza de DSC para la materia prima de itraconazol (Ejemplo 16)

13

Figura 13b Traza de DSC para SMP-2-PRE (Ejemplo 16)

14

Figura 14 Traza de DSC para SMP-2-PRE que muestra la fusión del polimorfo menos estable a su calentamiento a 160ºC, recristalización incluso a su enfriamiento y fusión posterior del polimorfo más estable a su recalentamiento a 180ºC (Ejemplo 16)

15

Figura 15 Comparación de las muestras SMP-2-PRE después de homogeneización. Línea continua = muestra sembrada con materia prima de itraconazol. Línea discontinua = muestra no-sembrada. La línea continua ha sido cambiada de 1 W/g para más claridad (Ejemplo 16)

16

Figura 16 Efecto de la siembra durante la precipitación. Línea discontinua = muestra no-sembrada, línea continua = muestra sembrada con materia prima de itraconazol. La traza no-sembrada (línea discontinua) ha sido cambiada hacia arriba de 1,5 W/g para más claridad (Ejemplo 17)

17

Figura 17 Efecto de la siembra del concentrado de medicamento durante la estabilización. El modelo de difracción de rayos X de arriba es para los cristales preparados a partir del nuevo concentrado de medicamento, y es coherente con el polimorfo estable (véase la Figura 12, arriba). El modelo de abajo es para los cristales preparados a partir de concentrado de medicamento estabilizado (sembrado), y es coherente con el polimorfo metaestable (véase la Figura 12, abajo). El modelo de arriba ha sido cambiado hacia arriba para más claridad (Ejemplo 18)

18

Claims (25)

1. Método para preparar partículas de tamaño submicrométrico de un compuesto farmacéuticamente activo cuya solubilidad es mayor en un primer disolvente miscible en agua que en un segundo disolvente que es acuoso, comprendiendo el proceso las etapas de:

(i)

disolver el compuesto farmacéuticamente activo en el primer disolvente miscible en agua para formar una solución, seleccionándose el primer disolvente de entre el grupo formado por N-metil-2-pirrolidinona, 2-pirrolidona, sulfóxido de dimetilo, dimetilacetamida, ácido láctico, metanol, etanol, isopropanol, 3-pentanol, n-propanol, glicerina, butilenglicol, etilenglicol, propilenglicol, monoglicéridos mono- y di-acilados, isosorbido de dimetilo, acetona, dimetilformamida, 1,4-dioxano, acetato de etilo, acetato de propilo, polietilenglicol, polietilenglicol ésteres, sorbitanos de polietilenglicol, monoalquil polietilenglicol éteres, polipropilenglicol, alginato de polipropileno, propilenglicol 10 butanodiol, propilenglicol 10 metilglucosa éter, propilenglicol 20 metilglucosa éter, propilenglicol 15 estearil éter, dicaprilato de propilenglicol, dicaprato de propilenglicol, laurato de propilenglicol;

(ii)

mezclar la solución con el segundo disolvente para definir una presuspensión; y

(iii)

añadir energía a la presuspensión para formar partículas que tengan un tamaño de partícula medio efectivo inferior a aproximadamente 2 \mum, y dicha etapa de adición de energía comprende homogeneización, homogeneización por flujo a contracorriente, microfluidización o sonicación.

2. Método según la reivindicación 1, caracterizado porque la presuspensión producida en la etapa (ii) comprende dicho compuesto farmacéuticamente activo en una forma amorfa, en una forma semicristalina o en una forma líquida sobreenfriada y tiene un tamaño de partícula efectivo medio determinado; y en la etapa (iii) la presuspensión es recocida para formar las partículas del compuesto farmacéuticamente activo que tienen esencialmente el mismo tamaño de partícula efectivo medio de la presuspensión y en una forma más estable.

3. Método según la reivindicación 1, caracterizado porque dicha mezcla de la solución con el segundo disolvente forma la presuspensión con partículas en una forma friable similar a agujas.

4. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 ó 3 que comprende además la etapa de mezclar dentro del segundo disolvente uno o más modificadores superficiales seleccionados de entre el grupo formado por agentes tensioactivos aniónicos, agentes tensioactivos catiónicos, agentes tensioactivos no iónicos y modificadores biológicos de superficie activa, opcionalmente en dos o tres etapas.

5. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 ó 3 que comprende además la etapa de mezclar dentro de la solución uno o más modificadores superficiales seleccionados de entre el grupo formado por agentes tensioactivos aniónicos, agentes tensioactivos catiónicos, agentes tensioactivos no iónicos y modificadores biológicos de superficie activa, opcionalmente en cualquiera de dos a cinco etapas.

6. Método según la reivindicación 4 ó 5 caracterizado porque el agente tensioactivo no iónico se selecciona de entre el grupo formado por polioxietilen éteres de alcoholes grasos, polioxietilen sorbitan ésteres de ácidos grasos, polioxietinel ésteres de ácidos grasos, sorbitan ésteres, monoestearato de glicerina, polietilenglicoles, polipropilenglicoles, alcohol cetílico, cetoestearil alcohol, estearil alcohol, arilalquil poliéter alcoholes, copolímeros polioxietileno-polioxipropileno, polaxaminas, metilcelulosa, hidroxicelulosa, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, celulosa no cristalina, polisacáridos, almidón, derivados de almidón, hidroxietilalmidón, polivinil alcohol y polivinilpirrolidona.

7. Método según la reivindicación 4 ó 5, caracterizado porque el agente tensioactivo aniónico se selecciona de entre el grupo formado por laurato de potasio, estearato de trietanolamina, sulfato de lauril-sodio, dodecilsulfato de sodio, alquil polioxietilen sulfatos, alginato de sodio, sulfosuccinato de dioctil-sodio, fosfatidilglicerol, fosfatidilinositol, fosfatidilserina, ácido fosfatídico y sus sales, gliceril ésteres, carboximetilcelulosa de sodio, ácidos biliares y sus sales, ácido cólico, ácido desoxicólico, ácido glicocólico, ácido taurocólico, ácido glicodesoxicólico y carboximetilcelulosa de calcio.

8. Método según la reivindicación 4 ó 5 caracterizado porque el agente tensioactivo catiónico se selecciona de entre el grupo formado por compuestos de amonio cuaternario, cloruro de benzalconio, bromuro de cetiltrimetilamonio, quitosanos y cloruro de laurildimetilbencilamonio.

9. Método según la reivindicación 4 ó 5, caracterizado porque los modificadores biológicos de superficie activa se seleccionan de entre el grupo formado por albúmina, caseína, heparina, hirudina o demás proteínas.

10. Método según la reivindicación 4, caracterizado porque el primer disolvente es N-metil-2-pirrolidinona.

11. Método según la reivindicación 10, caracterizado porque el modificador superficial es un copolímero de oxietileno y oxipropileno.

12. Método según la reivindicación 11, caracterizado porque el copolímero de oxietileno y oxipropileno es un copolímero en bloque.

13. Método según la reivindicación 4 ó 5, caracterizado porque al menos uno de los modificadores superficiales es un ácido biliar o una sal del mismo.

14. Método según la reivindicación 4 ó 5, caracterizado porque al menos uno de los segundos modificadores de superficie se selecciona de entre ácido desoxicólico, ácido glicocólico, ácido glicodesoxicólico, ácido taurocólico y las sales de estos ácidos.

15. Método según la reivindicación 4 comprende además la etapa de añadir un agente de ajuste del pH al segundo disolvente.

16. Método según la reivindicación 15, caracterizado porque el agente de ajuste del pH se selecciona de entre el grupo formado por hidróxido de sodio, ácido clorhídrico, tampón tris, tampón citrato, acetato, lactato y meglumina.

17. Método según la reivindicación 15, caracterizado porque el agente de ajuste del pH se añade al segundo disolvente para llevar el pH del segundo disolvente dentro del rango de aproximadamente 3 a aproximadamente 11.

18. Método según la reivindicación 1 que comprende además la etapa de mezclar dentro del segundo disolvente un fosfolípido.

19. Método según la reivindicación 18, caracterizado porque el fosfolípido se selecciona de entre fosfolípidos naturales y fosfolípidos sintéticos.

20. Método según la reivindicación 18, caracterizado porque el fosfolípido se selecciona de entre el grupo formado por fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina, fosfatidilinositol, fosfatidilglicerol, ácido fosfatídico, lisofosfolípidos, fosfolípido de huevo y fosfolípido de soja.

21. Método según la reivindicación 2, caracterizado porque la etapa de adición de energía incluye la etapa de convertir las partículas de la presuspensión en una forma cristalina, tal como se determina por DSC.

22. Método según la reivindicación 2, caracterizado porque las partículas después de la etapa de adición de energía tienen una tendencia reducida a agregarse en partículas más grandes cuando se compara con las partículas de la presuspensión.

23. Método según la reivindicación 2, caracterizado porque las partículas de la presuspensión tienen un tamaño de partícula efectivo medio de aproximadamente 2 \mum a aproximadamente 50 \mum.

24. Método según la reivindicación 2, caracterizado porque las partículas de la presuspensión tienen un tamaño de partícula efectivo medio inferior a aproximadamente 400 nm.

25. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 24 caracterizado porque dicha etapa de adición de energía comprende la homogeneización, la homogeneización por flujo a contracorriente o la microfluidización.