ES2258150T3

ES2258150T3 - Compuestos inmunomodulares.

Info

Publication number: ES2258150T3
Application number: ES02746260T
Authority: ES
Inventors: Per Axel Bjork; Tomas Fex; Lars Olof Goran Pettersson; Poul Sorensen; Dorthe Da Graca Thrige
Original assignee: Active Biotech AB
Current assignee: Active Biotech AB
Priority date: 2001-07-04
Filing date: 2002-07-02
Publication date: 2006-08-16
Anticipated expiration: 2022-07-02
Also published as: HUP0401204A2; BR0210776A; YU101603A; SE0102404D0; CA2451749A1; HUP0401204A3; AU2002315996B2; JP2005501033A; NZ530316A; CN1522254A; NO20035684D0; EP1409485A1; MXPA04000017A; DE60210977D1; WO2003004495A1; HRP20031055A2; NO20035684L; DE60210977T2; HK1066809A1; RU2004103079A

Abstract

Un compuesto que tiene la fórmula general (I) (Ver fórmula) en la que X representa un enlace o un grupo seleccionado entre alquilo C1_3 sustituido o no sustituido, NH-C(O) alquilo C1_3, NH-C(O)-CH2-O-CH2 o C(O)-NH-(resto de aminoácido); Y representa NR4, O o S; R1 representa H, halo, CF3, alquilo inferior o alcoxi inferior; R2 y R4 representan independientemente H o alquilo inferior; y R3 representa H, halo, alquilo inferior o alcoxi inferior, donde halo es F, Cl o Br; donde alquilo inferior representa grupos alquilo saturados o insaturados, lineales, ramificados o cíclicos que tienen 1-6 átomos de carbono; y donde alcoxi inferior representa grupos alcoxi saturados o insaturados, lineales, ramificados o cíclicos que tienen 1-6 átomos de carbono, con la condición de que R2 no es H, cuando X es un enlace, Y es NH y R3 es H, o sus sales farmacéuticamente aceptables.

Description

Compuestos inmunomodulares.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a compuestos inmunomoduladores, a composiciones farmacéuticas que comprenden dichos compuestos, al uso de dichos compuestos así como a un método de tratamiento de enfermedades que se benefician de la inmunomodulación, en el que se administran dichos compuestos.

Antecedentes de la invención

El sistema inmunitario tiene la capacidad de controlar la homeostasis entre la activación e inactivación de los linfocitos a través de diferentes mecanismos reguladores durante y después de una respuesta inmune. Entre éstos, hay mecanismos que inhiben específicamente y/o detienen una respuesta inmune. De este modo, cuando es presentado un antígeno por las moléculas MHC al receptor de las células T, las células T se activan de forma apropiada solamente en presencia de señales co-estimuladoras adicionales. En ausencia de señales accesorias no hay activación de los linfocitos ni se induce un estado de inactivación funcional denominado anergia o tolerancia, ni se delecionan específicamente las célulasT por apoptosis.

Una señal co-estimuladora de este tipo implica la interacción de CD80 sobre las células especializadas presentadoras de antígeno con CD28 sobre las células T, que se ha demostrado que son esenciales para la activación completa de las células T. (Lenschow et al. (1996) Annu. Rev. Immunol., 14, 233-258).

Técnica anterior

En el documento US 4.312.870, se describe el compuesto A como uno de varios compuestos psicoactivos pero sin ningún dato biológico. Algunos compuestos relacionados están descritos por A. Carotti en Bioorganic & Medicinal Chemistry 6 (1998) 389-399, y de los datos relativos a estos compuestos se deduce que el sustituyente de ácido carboxílico disminuye en gran medida la actividad biológica medida como afinidad para el receptor de la benzodiazepina del CNS.

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El documento EP 0354693A1 (Boots) describe compuestos inmunomoduladores de la estructura general B pero no incluye las estructuras en las que R7 y/o R8 son COOH o contienen un grupo COOH.

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Similarmente el documento EP 0354694A1 (Boots) describe compuestos inmunomoduladores de la estructura general C pero no están descritas las estructuras en las que R6 y/o R7 son COOH o contienen un grupo COOH.

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También, el documento WO9111448 (Boots) describe compuestos inmunomoduladores de la estructura general D pero aquí no están las estructuras en las que R7 y/o R8 y R8' son COOH o contienen un grupo COOH.

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Sumario de la invención

La presente invención se refiere en un primer aspecto a un nuevo compuesto que tiene la fórmula general (I)

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en la que X representa un enlace o un grupo seleccionado entre alquilo C_{1-3} sustituido o no sustituido, NH-C(O)-alquilo C_{1-3}, NH-C(O)-CH_{2}-O-CH_{2} o C(O)-NH-(resto de aminoácido);

Y representa NR4, O o S;

R1 representa H, halo, CF_{3}, alquilo inferior o alcoxi inferior;

R2 y R4 representan independientemente H o alquilo inferior; y

R3 representa H, halo, alquilo inferior o alcoxi inferior,

donde halo es F, Cl o Br;

donde alquilo inferior representa grupos alquilo saturados o insaturados, lineales, ramificados o cíclicos que tienen 1-6 átomos de carbono; y

donde alcoxi inferior representa grupos alcoxi saturados o insaturados, lineales, ramificados o cíclicos que tienen 1-6 átomos de carbono,

con la condición de que R2 no es H, cuando X es un enlace y Y es NH y R3 es H,

o sus sales farmacéuticamente aceptables.

En una realización preferida de la invención el compuesto X es un enlace y en otra realización preferida Y es NH.

En realizaciones adicionales, el compuesto se selecciona del grupo que comprende

ácido {[3-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-fenilcarbamoil]-metoxi}-acético,

ácido N-[4-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-fenil]-succinámico,

ácido 4-[4-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-fenilcarbamoil]-butírico,

ácido {[4-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-fenilcarbamoil]-metoxi}-acético,

ácido 4-[4-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-fenilcarbamoil]-2-fenil-butírico,

ácido N-[3-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-fenil]-succinámico,

ácido 2-{[4-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-fenilcarbamoil]-metil}-benzoico,

ácido 2-cloro-4-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoico,

ácido 4-(6,8-dimetil-3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoico,

ácido 4-(8-metoxi-6-metil-3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoico,

ácido 4-(6,8-dimetoxi-3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoico,

ácido 4-(7,9-dimetoxi-3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoico,

ácido 4-(6-metil-3-oxo-8-trifluorometil-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoico,

ácido 4-(7,9-dicloro-3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoico,

ácido [4-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-fenil]-propiónico,

ácido [4-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-fenil]-acético,

ácido 4-(4-metil-3-oxo-3H-cromeno[4,3-c]pirazol-2-il)-benzoico,

ácido 4-(3-oxo-3H-tiocromeno[4,3-c]pirazol-2-il)-benzoico,

ácido 4-(5-metil-3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoico,

ácido 2-[4-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoilamino]-3-fenil-propiónico, y

ácido 2-[4-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoilamino]-2-acético.

En otra realización más, dicho compuesto es un antagonista de CD80, capaz de inhibir la interacción entre CD80 y CD28.

La presente invención se refiere en un segundo aspecto a un compuesto como se ha descrito antes para uso como un medicamento.

En una realización preferida, dicho compuesto se usa como un medicamento para el tratamiento de enfermedades elegidas del grupo que comprende artritis reumatoide, esclerosis múltiple, diabetes, asma, transplantes, lupus eritematoso sistémico y psoriasis.

La presente invención se refiere en un cuarto aspecto a una composición farmacéutica que comprende dicho compuesto como ingrediente activo en asociación con un adyuvante, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

En una realización preferida, dicha composición farmacéutica se usa para el tratamiento de enfermedades elegidas del grupo que comprende artritis reumatoide, esclerosis múltiple, diabetes, asma, transplantes, lupus eritematoso sistémico y psoriasis.

La presente invención se refiere en un quinto aspecto al uso de un compuesto que tiene la fórmula general (I')

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Y representa NR4, O o S;

R1 representa H, halo, CF_{3}, alquilo inferior o alcoxi inferior;

R2 y R4 representan independientemente H o alquilo inferior; y

R3 representa H, halo, alquilo inferior o alcoxi inferior,

donde halo es F, Cl o Br;

o sus sales farmacéuticamente aceptables, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades que se benefician de la inmunomodulación.

En una realización, dichas enfermedades se eligen del grupo que comprende artritis reumatoide, esclerosis múltiple, diabetes, asma, transplantes, lupus eritematoso sistémico y psoriasis.

En otra realización, dicha cantidad terapéuticamente eficaz diaria está dentro del intervalo de 0,001-10 mg/kg de peso corporal, preferiblemente dentro del intervalo de 0,1-5 mg/kg de peso corporal.

Descripción detallada de la invención

Según la presente invención, se ha encontrado que los compuestos de la fórmula general I son antagonistas de CD80. Los compuestos de la fórmula general I inhiben la interacción entre CD80 y CD28. Las propiedades antagonistas de CD80 de los compuestos de la fórmula general I han sido establecidas en experimentos de resonancia de plasmones de superficie (BIAcore).

Se prefiere que X en la fórmula general I sea un enlace y en tales casos otros sustituyentes, tales como un meta-cloro adyacente, mejoran la actividad.

Los compuestos de la presente invención pueden estar en la forma ácida pero pueden estar también en la forma de sales farmacéuticamente aceptables.

Los compuestos de la presente invención pueden estar también en la forma de profármacos, especialmente ésteres con alcoholes apropiados. Los profármacos pueden tener mejores propiedades farmacocinéticas y/o de solubilidad.

Puesto que los compuestos de la fórmula I son antagonistas de CD80 capaces de interferir con la interacción CD80 - CD28, son útiles para el tratamiento de trastornos inflamatorios y enfermedades autoinmunes, por ejemplo, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, diabetes, asma, transplantes, lupus eritematoso sistémico y psoriasis.

Se administran preferiblemente cantidades eficaces de los compuestos de la fórmula I a un paciente que necesita tal tratamiento siguiendo las vías usuales de administración y se formulan en composiciones farmacéuticas usuales que comprenden una cantidad eficaz del ingrediente activo y un vehículo adecuado farmacéuticamente aceptable. Tales composiciones pueden tomar una variedad de formas, por ejemplo, soluciones, suspensiones, emulsiones, comprimidos, cápsulas y polvos, preparadas para administración oral, soluciones estériles para administración parenteral, supositorios para administración rectal o formulaciones tópicas adecuadas. Los procedimientos convencionales para la selección y preparación de formulaciones farmacéuticas adecuadas están descritos por ejemplo en "Pharmaceuticals - The Science of Dosage Form Design", M. B. Aulton, Churchill Livingstone, 1988.

Una dosis diaria adecuada para uso en el tratamiento de cualquiera de las enfermedades mencionadas antes está dentro del intervalo de 0,001 mg/kg a 10 mg/kg de peso corporal, en particular dentro del intervalo de 0,01 mg/kg a 5 mg/kg de peso corporal, dependiendo de la enfermedad específica a ser tratada, de la edad y peso del paciente específico, y de la respuesta específica del paciente a la medicación. La dosis individual exacta, así como la dosis diaria, será determinada de acuerdo a los principios médicos estándar bajo la dirección de un médico.

Se pueden añadir a la formulación diferentes aditivos para mejorar la estabilidad o facilitar la administración del fármaco. La composición farmacéutica puede contener también sustancias adicionales terapéuticamente útiles aparte de uno o más compuestos de la fórmula general I.

La presente invención se ilustra además por la siguiente parte experimental no limitante.

Parte experimental

Los compuestos de la fórmula general I se pueden preparar por los métodos que se describen a continuación. Los documentos de patentes de la técnica anterior citados antes incluyen también métodos sintéticos útiles.

Por tanto, los compuestos de la fórmula general I en los que Y = N y X es una cadena alquílica se pueden preparar como se muestra en la siguiente reacción;

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El material de partida está disponible por procedimientos conocidos (por ejemplo, Savini et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry 6 (1998) 389-399) y la reacción con derivados de hidrazina se lleva a cabo calentando en un disolvente adecuado tal como n-butanol. En los casos en que el ácido se esterifica en las condiciones de reacción, la hidrólisis hace volver al ácido. La preparación de los derivados de hidrazina se realizó siguiendo los procedimientos publicados (Hunsberger et al., J. Org. Chem. 21 (1956) 394, 395, 396. Harden F. A. et al., J. Med. Chem. 34 (1991) 2892-8).

Los compuestos en los que R4 es alquilo inferior se pueden obtener por la subsiguiente alquilación. Si la alquilación da como resultado la formación de un éster, se obtiene fácilmente el correspondiente ácido por hidrólisis.

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Los compuestos de la fórmula general I en los que Y = O y X es una cadena alquílica se pueden preparar de acuerdo con diferentes procedimientos publicados (por ejemplo, Ghosh C. K. et al., Synthesis (1978) 779-781; Frogett J. A. et al., J. Chem. Research (S) (1997) 30-31). A continuación se describe una ruta sintética, cuando R2 = Me. El grupo ciano se hidroliza posteriormente para producir el correspondiente ácido.

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Los compuestos de la fórmula general I en los que Y = S y X es una cadena alquílica se pueden preparar como se muestra a continuación usando procedimientos descritos en la bibliografía (Donelly M. X. D. et al., J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1 (1993) 1729-1735; Lombardino J. G. et al., J. Med. Chem. 24 (1981) 830-834). La oxidación final se lleva a cabo agitando al aire.

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Los compuestos en los que X es un enlace se pueden obtener también a partir de los correspondientes derivados de cianuro y los derivados de aminoácido se preparan por condensación del ácido con el apropiado aminoácido.

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Los compuestos en los que X es NH-C(O)-(alquil)- y NH-C(O)-CH_{2}-O-CH_{2}- se pueden preparar por reducción del grupo nitro (L. Savini et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry 6 (1998) 389-399) y subsiguiente acilación con el anhidrido apropiado.

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Ejemplos

Los siguientes ejemplos pretenden ilustrar la invención sin restringir su alcance. La denominación de los compuestos se hizo utilizando la Autonom. 2.1 de Beilstein. Los espectros NMR se registraron en un instrumento Bruker ARX 400. Las constantes de acoplamiento en el área aromática son las denominadas principalmente singletes (s), dobletes (d), tripletes (t) con el fin de reflejar la apariencia del espectro NMR.

Ejemplo 1 Ácido {[3-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-fenilcarbamoil]-metoxi}-acético

A una suspensión de 2-(3-amino-fenil)-2,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-3-ona (0,050 g, 0,18 mmol) en DMF (0,8 ml) se añadieron anhidrido glicólico (0,025 g, 0,22 mmol) y 4-dimetilaminopiridina (0,007 g, 0,05 mmol). Se agitó la solución límpida a temperatura ambiente y el producto precipitó durante la reacción. Después de 3 h se añadió agua a la mezcla. Se recogió el precipitado, se lavó con agua y se secó para dar el ácido {[3-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-fenilcarbamoil]-metoxi}-acético (0,064 g): ^{1}H NMR (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 12,8 (1H, bs), 10,02 (1H, s), 8,69 (1H, s), 8,37 (1H, s), 8,18 (1H, d), 7,95 (1H, d), 7,62-7,70 (2H, m), 7,49-7,55 (2H, m), 7,33 (1H, t), 4,19 (2H, s), 4,17 (2H, s); ESI MS m/z 393 (M+H^{+}).

Utilizando esencialmente el mismo procedimiento se prepararon los siguientes compuestos:

Ácido N-[4-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-fenil]-succinámico

^{1}H NMR (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 9,98 (1H, s), 8,67 (1H, s), 8,18 (1H, d), 8,08 (2H, d), 7,58-7,70 (4H, m), 7,51 (1H, t), 2,47-2,57 (4H, m); ESI MS m/z 377 (M+H^{+}).

Ácido 4-[4-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-fenilcarbamoil]-butírico

^{1}H NMR (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 9,89 (1H, s), 8,67 (1H, s), 8,18 (1H, d), 8,08 (2H, d), 7,60-7,69 (4H, m), 7,51 (1H, t), 2,33 (2H, t), 2,25 (2H, t), 1,75-1,83 (2H, m); ESI MS m/z 391 (M+H^{+}).

Ácido {[4-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-fenilcarbamoil]-metoxi}-acético

^{1}H NMR (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 12,76 (1H, bs), 9,86 (1H, s), 8,68 (1H, d), 8,19 (1H, d), 8,11 (2H, d), 7,61-7,69 (4H, m), 7,52 (1H, t), 4,19 (2H, s), 4,15 (2H, s); ESI MS m/z 393 (M+H^{+}).

Ácido 4-[4-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-fenilcarbamoil]-2-fenil-butírico

^{1}H NMR (400 MHz, DMSO-d_{6}) (contiene algo del regioisómero 3-fenilo) \delta 9,86 (1H, s), 8,67 (1H, s), 8,18 (1H, d), 8,07 (2H, d), 7,58-7,69 (4H, m), 7,51 (1H, t), 7,20-7,38 (5H, m), 3,55 (1H, t), 2,10-2,30 (3H, m), 1,90-2,02 (1H, m); ESI MS m/z 467 (M+H^{+}).

Ácido N-[3-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-fenil]-succinámico

^{1}H NMR (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 10,05 (1H, s), 8,68 (1H, s), 8,31 (1H, s), 8,17 (1H, d), 7,90 (1H, d), 7,62-7,70 (2H, m), 7,48-7,55 (2H, m), 7,30 (1H, t), 2,49-2,57 (4H, m); ESI MS m/z 377 (M+H^{+}).

Ácido 2-{[4-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-fenilcarbamoil]-metil}-benzoico

^{1}H NMR (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 10,11 (1H, s), 8,67 (1H, s), 8,18 (1H, d), 8,08 (2H, d), 7,85 (1H, d), 7,59-7,69 (4H, m), 7,46-7,54 (2H, m), 7,35 (2H, t), 4,07 (2H, s) ; ESI MS m/z 493 (M+H^{+}).

Ejemplo 2 Ácido 4-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoico

Se agitó una solución de éster etílico del ácido 4-cloro-quinolin-3-carboxílico (11,8 mg, 0,5 mmol) y ácido 4-hidrazino-benzoico (7,6 mg, 0,5 mmol) en n-butanol (0,5 ml) a 115ºC durante la noche en un tubo sellado. Después de enfriar a 50-70ºC, se añadió heptano (1,0 ml) y se dejó que el producto cristalizara después de un enfriamiento posterior a temperatura ambiente. Se separó el disolvente y se lavó el producto con heptano y se secó bajo vacío para dar el ácido 4-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoico (13 mg). ^{1}H NMR (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 12,9 (1H, s), 8,77 (1H, d), 8,38 (2H, d), 8,25 (1H, d), 8,03 (2H, d), 7,65-7,77 (2H, m), 7,58 (1H, t).

Ácido 3-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoico

^{1}H NMR (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 12,87 (1H, bs), 8,78 (1H, s), 8,72 (1H, d), 8,46 (1H, d), 8,23 (1H, d), 7,63-7,72 (3H, m), 7,51-7,56 (2H, m); ESI MS m/z 306 (M+H^{+}).

Ácido 2-cloro-4-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoico

En esta reacción se usó la sal hidrocloruro del ácido 2-cloro-4-hidrazino-benzoico y después se añadió también a la mezcla Et_{3}N (2 equivalentes). ^{1}H NMR (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 13,00 (1H, bs), 8,76 (1H, d), 8,44 (1H, s), 8,22-8,28 (2H, m), 7,94 (1H, d), 7,65-7,74 (2H, m), 7,55 (1H, t); ESI MS m/z 340 (M+H^{+}).

Ácido 4-(6-metil-3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoico

^{1}H NMR (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 12,1 (1H, s), 8,52 (1H, d), 8,38 (2H, d), 8,12 (1H, d), 8,03 (2H, d), 7,56 (1H, d), 7,48 (1H, t), 2,58 (3H, s).

Ácido 4-(8-metil-3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoico

^{1}H NMR (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 12,9 (1H, s), 8,73 (1H, d), 8,39 (2H, d), 8,06 (1H, s), 8,03 (2H, d), 7,64 (1H, d), 7,53 (1H, d), 2,50 (3H, s, en señal DMSO).

Ácido 4-(6,8-dimetil-3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoico

^{1}H NMR (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 8,48 (1H, s), 8,38 (1H, d), 8,03 (2H, d), 7,92 (1H, s), 7,40 (1H, s), 2,57 (3H, s), 2,45 (3H, s).

Ácido 4-(8-terc-butil-3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoico

^{1}H NMR (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 12,9 (1H, s), 8,75 (1H, d), 8,40 (2H, d), 8,17 (1H, s), 8,03 (2H, d), 7,81 (1H, d), 7,69 (1H, d), 1,40 (9H, s).

Ácido 4-(8-metoxi-6-metil-3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoico

^{1}H NMR (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 12,3 (1H, s), 8,45 (1H, d), 8,41 (2H, d), 8,03 (2H, d), 7,49 (1H, d), 7,21 (1H, d), 3,93 (3H, s), 2,57 (3H, s).

Ácido 4-(8-metoxi-3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoico

^{1}H NMR (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 12,9 (1H, s), 8,71 (1H, d), 8,41 (2H, d), 8,03 (2H, d), 7,70 (1H, d), 7,61 (1H, d), 7,32 (1H, dd), 3,94 (3H, s).

Ácido 4-(6,8-dimetoxi-3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoico

^{1}H NMR (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 8,40 (2H, d), 8,31 (1H, s), 8,03 (2H, d), 7,18 (1H, d), 6,93 (1H, d), 4,03 (3H, s), 3,95 (3H, s).

Ácido 4-(7,9-dimetoxi-3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoico

^{1}H NMR (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 12,6 (s, 1H), 8,61 (1H, s), 8,36 (2H, d), 8,01 (2H, d), 6,79 (1H, d), 6,69 (1H, d), 4,00 (3H, s), 3,87 (3H, s).

Ácido 4-(3-oxo-8-trifluorometil-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoico (60% de pureza por NMR)

^{1}H NMR (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 13,1 (1H, s), 8,85 (1H, d), 8,38 (2H, d), 8,10 (1H, s), 8,03 (2H, d), 7,87 (1H, d), 7,73 (1H, d).

Ácido 4-(6-fluoro-3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoico

^{1}H NMR (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 13,0 (1H, s), 8,58 (1H, s), 8,37 (2H, d), 8,06 (1H, d), 8,04 (2H, d), 7,54-7,66 (2H, m).

Ácido 4-(6-cloro-3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoico

^{1}H NMR (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 8,47 (1H, s), 8,36 (2H, d), 8,24 (1H, d), 8,04 (2H, d), 7,88 (1H, d), 7,57 (1H, t).

Ácido 4-(8-cloro-3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoico (85% de pureza por NMR)

^{1}H NMR (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 13,0 (1H, s), 8,82 (1H, d), 8,38 (2H, d), 8,20 (1H, s), 8,03 (2H, d), 7,76 (2H, s).

Ácido 4-(7,9-dicloro-3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoico (60% de pureza por NMR)

^{1}H NMR (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 13,0 (s, 1H), 8,81 (1H, s), 8,36 (2H, d), 8,04 (2H, d), 7,78 (1H, d), 7,71 (1H, d).

Ejemplo 3 Ácido [4-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-fenil]-propiónico

Se calentó a 84ºC en un baño de aceite durante 10 horas, una suspensión de éster etílico del ácido 4-cloro-quinolin-3-carboxílico (0,050 g, 0,21 mmol) y ácido 3-(4-hidrazino-fenil)-propiónico (0,046 g, 0,25 mmol) en 2-propanol (3 ml). Se recogió el precipitado, se lavó con 2-propanol y se secó para obtener el 2-propiléster del producto (0,031 g). ^{1}H NMR (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 12,8 (1H, bs), 8,66 (1H, d), 8,18 (1H, d), 8,07 (2H, d), 8,04 (2H, d), 7,60-7,72 (2H, m), 7,52 (1H, t), 7,26 (2H, d), 4,85 (1H, m), 2,82 (2H, t), 2,55 (2H, t), 1,12 (6H, d).

El éster (0,019 g) se hidrolizó disolviéndolo en EtOH (0,8 ml) y NaOH 1 M (0,4 ml). Después de 90 minutos, se acidificó la mezcla con HCl 2 M y se recogió el precipitado, se lavó con agua y se secó para dar el ácido [4-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-fenil]-propiónico (0,016 g): ^{1}H NMR (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 8,66 (1H, s), 8,18 (1H, d), 8,07 (2H, d), 8,61-8,69 (2H, m), 7,51 (1H, t), 7,26 (2H, d), 2,81 (2H, t), 2,52 (2H, t); ESI MS m/z 334 (M+H^{+}).

Éster n-butílico del ácido [4-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-fenil]-acético

^{1}H NMR (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 12,8 (1H, bs), 8,68 (1H, d), 8,18 (1H, d), 8,13 (2H, d), 7,61-7,72 (2H, m), 7,53 (1H, t), 7,30 (2H, d), 4,02 (2H, t), 3,63 (2H, s), 1,52 (2H, m), 1,28 (2H, m), 0,83 (3H, t); y

Ácido [4-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-fenil]-acético

^{1}H NMR (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 8,67 (1H, s), 8,19 (1H, d), 8,11 (2H, d), 7,61-7,69 (2H, m), 7,52 (1H, t), 7,29 (2H, d), 3,54 (2H, s); ESI MS m/z 320 (M+H^{+}).

Ejemplo 4 Ácido 3-(4-hidrazino-fenil)-propiónico

Se trató con nitrito de sodio (0,21 g, 3,0 mmol) en H_{2}O (1,7 ml) a 0ºC, una suspensión de ácido 3-(4-aminofenil)-propiónico (0,50 g, 3,0 mmol) en ácido clorhídrico concentrado (3,5 ml). Se agitó la reacción durante 45 minutos tras lo cual se añadió gota a gota a 0ºC cloruro estannoso (1,26 g, 6,7 mmol) en ácido clorhídrico concentrado (1,5 ml). Se agitó la reacción durante 1 hora a temperatura ambiente. Se recogió el precipitado y se secó para obtener la sal hidrocloruro (0,54 g). Se disolvió la sal (0,100 g) en una pequeña cantidad de agua y se alcalinizó con NaOH 1 M. Se separó el material sólido por filtración y se acidificó el filtrado con ácido para dar un precipitado. Se recogió el sólido, se lavó con agua y se secó para dar el ácido 3-(4-hidrazino-fenil)-propiónico (0,050 g): ^{1}H NMR (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 6,90 (2H, d), 6,64 (2H, d), 2,63 (2H, t), 2,39 (2H, t).

Utilizando esencialmente el mismo procedimiento se preparó el siguiente compuesto:

Hidrocloruro del ácido 2-cloro-4-hidrazino-benzoico

En esta reacción se recogió la sal hidrocloruro y se purificó por recristalización en etanol: ^{1}H NMR (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 8,97 (1H, bs), 7,76 (1H, d), 7,03 (1H, s), 6,88 (1H, d).

Ejemplo 5 4-[3-(2-Hidroxi-fenil)-5-oxo-4,5-dihidro-pirazol-1-il]-benzonitrilo

Se calentó a 125ºC en un baño de aceite, una suspensión de 4-hidroxicumarina (0,71 g, 4,4 mmol) y 4-cianofenilhidrazina (0,88 g, 6,6 mmol) en tolueno seco. Se destiló el tolueno lentamente durante la reacción para separar el agua. Se separó un total de 30 ml de tolueno. Después de 3 horas, se dejó que se enfriara la solución y se filtró el precipitado, se lavó con tolueno y se secó. Se disolvió el producto crudo en CH_{2}Cl_{2}. Se separó el material sólido por filtración antes de lavar la solución con HCl 2 M. Se secó la fase orgánica, se filtró y se evaporó el disolvente para dar 4-[3-(2-hidroxi-fenil)-5-oxo-4,5-dihidro-pirazol-1-il]-benzonitrilo (0,44 g): ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 9,86 (1H, s), 8,01 (2H, d), 7,73 (2H, d), 7,41 (1H, s), 7,23-7,26 (1H, m), 7,08 (1H, d), 6,98 (1H, t), 3,99 (2H, s).

Ejemplo 6 4-(4-Metil-3-oxo-3H-cromeno[4,3-c]pirazol-2-il]-benzonitrilo

Se calentó a 120ºC en un baño de aceite durante 15 minutos, una mezcla de 4-[3-(2-hidroxi-fenil)-5-oxo-4,5-dihidro-pirazol-1-il]-benzonitrilo (0,25 g, 0,9 mmol) y ortoacetato de trietilo (1,6 ml). Después de enfriar, se filtró el precipitado, se lavó con éter dietílico y se secó para dar 4-(4-metil-3-oxo-3H-cromeno[4,3-c]pirazol-2-il]-benzonitrilo (0,22 g): ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,35 (2H, d), 8,18 (2H, d), 7,70 (2H, d), 7,58-7,62 (1H, m), 7,47-7,51 (2H, m), 2,84 (3H, s); ESI MS m/z 302 (M+H^{+}).

Ejemplo 7 Ácido 4-(4-metil-3-oxo-3H-cromeno[4,3-c]pirazol-2-il)-benzoico

Se calentó a 100ºC en un baño de aceite durante 19 horas, una mezcla de 4-(4-metil-3-oxo-3H-cromeno[4,3-c]pirazol-2-il]-benzonitrilo (0,30 g, 0,10 mmol), ácido acético (0,4 ml), H_{2}SO_{4} (0,4 ml) y agua (0,4 ml). Después de enfriar, se añadió agua y se recogió el precipitado, se lavó con agua y se secó para dar el ácido 4-(4-metil-3-oxo-3H-cromeno[4,3-c]pirazol-2-il)-benzoico (0,029 g): ^{1}H NMR (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 8,21 (2H, d), 8,13 (1H, d), 8,01 (2H, d), 7,67-7,75 (2H, m), 7,54-7,58 (1H, m), 2,78 (3H, s); ESI MS m/z 321 (M+H^{+}).

Ácido 4-(3-oxo-3H-tiocromeno[4,3-c]pirazol-2-il)-benzoico

^{1}H NMR (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 9,29 (1H, s), 8,44 (1H, d), 8,24 (2H, d), 8,03 (2H, d), 7,98 (1H, d), 7,67-7,76 (2H, m); ESI MS m/z 323 (M+H^{+}).

Ejemplo 8 Éster metílico del ácido 4-oxo-tiocroman-3-carboxílico

Se enfrió a -78ºC bajo N_{2}, LHMDS (1,12 g, 6,7 mmol) disuelto en THF anhidro (7 ml). Se añadió gota a gota a lo largo de 20 minutos, tiocroman-4-ona (1,00 g, 6,1 mmol) en THF anhidro (20 ml). Después de 60 minutos adicionales se añadió gota a gota a lo largo de 5 minutos cianoformiato de metilo (0,62 g, 7,3 mmol) en THF anhidro (1,5 ml), y se agitó después la suspensión a -78ºC durante 80 minutos. Se vertió la suspensión sobre NH_{4}Cl al 10% y se extrajo con éter. Se lavó la fase orgánica con agua, se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se evaporó el disolvente. El producto crudo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (heptano:acetato de etilo 10:1) para dar el éster metílico del ácido 4-oxo-tiocroman-3-carboxílico (0,65 g): ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}; tautómero enol) \delta 12,64 (1H, s), 7,83 (1H, d), 7,25-7,29 (2H, m), 7,16-7,20 (1H, m), 3,84 (3H, s), 3,71 (2H, s).

Ejemplo 9 4-(3-Oxo-1,4-dihidro-3H-tiocromeno[4,3-c]pirazol-2-il)-benzonitrilo

Se calentaron a 118ºC en un baño de aceite bajo N_{2}, éster metílico del ácido 4-oxo-tiocroman-3-carboxílico (0,200 g, 0,90 mmol) y 4-cianofenilhidrazina (0,132 g, 0,99 mmol) junto con una pequeña cantidad de ácido piválico. Después de 1 hora, se enfrió la mezcla a temperatura ambiente y después se trituró con éter. Se filtró el precipitado y se secó para dar 4-(3-oxo-1,4-dihidro-3H-tiocromeno[4,3-c]pirazol-2-il)-benzonitrilo (0,233 g): ^{1}H NMR (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 8,06 (2H, d), 7,92 (2H, d), 7,80-7,83 (1H, m), 7,30-7,33 (1H, m), 7,18-7,25 (2H, m), 3,91 (2H, s).

Ejemplo 10 4-(3-Oxo-3H-tiocromeno[4,3-c]pirazol-2-il)-benzonitrilo

Se agitó vigorosamente a temperatura ambiente una solución de 4-(3-oxo-1,4-dihidro-3H-tiocromeno[4,3-c]pirazol-2-il)-benzonitrilo (0,100 g, 0, 33 mmol) en DMSO (2 ml) y se insufló aire a través de la solución. Después de 48 horas, se filtró el precipitado, se lavó con tolueno y se secó. Se recristalizó el producto crudo en tolueno para dar 4-(3-oxo-3H-tiocromeno[4,3-c]pirazol-2-il)-benzonitrilo (0,036 g): ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,65 (1H, s), 8,53 (1H, d), 8,38 (2H, d), 7,72 (2H, d), 7,66 (2H, t), 7,58-7,62 (1H, m). ESI MS m/z 304 (M+H^{+}).

Ejemplo 11 Ácido 4-(5-metil-3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoico

Se añadió una suspensión de ácido 4-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoico (0,050 g, 0,16 mmol) en DMF (1 ml) en pequeñas porciones a una suspensión de NaH (55%) (0,017 g, 0,39 mmol) en DMF (0,5 ml) bajo N_{2}. Se agitó la reacción a temperatura ambiente. Después de 1 hora, se añadió MeI (0,053 g, 0,38 mmol). Después de 24 horas más, se añadió agua y se separó el material sólido (que consiste principalmente en el producto éster) por filtración. Se acidificó el filtrado con HCl 2 M. Se recogió el precipitado, se lavó con agua y se secó para dar el ácido 4-(5-metil-3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoico (0,018 g). Este material contenía aproximadamente el 10% del producto éster: ^{1}H NMR (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 8,89 (1H, s), 8,34 (2H, d), 8,29 (1H, d), 7,99 (2H, d), 7,85 (1H, d), 7,76 (1H, t), 7,72 (1H, t), 4,00 (3H, s); ESI MS m/z 320 (M+H^{+}).

Ejemplo 12 Ácido 2-[4-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoilamino]-3-fenil-propiónico

Se disolvió ácido 4-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoico (30 mg, 0,1 mmol) en DMF (0,5 ml) y se añadieron 18 mg (0,1 mmol) de carbonildiimidazol (90% de pureza) y se agitó la mezcla durante 4 horas. Se disolvió fenilalanina (33 mg, 0,2 mmol) en H_{2}O (0,5 ml) junto con trietilamina (0,05 ml) y se añadió al ácido activado. Se calentó esta mezcla de reacción a 75ºC durante 2 horas. Después de enfriarla se acidificó y se diluyó 5x con H_{2}O. Se filtró el precipitado y se lavó con H_{2}O y se secó bajo vacío. Por cromatografía de FlashTube usando EtOAc/MeOH (7:3) se obtuvo una pequeña cantidad de ácido 2-[4-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoilamino]-3-fenil-propiónico. El material contenía aproximadamente un 10% del material de partida. ^{1}H NMR (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 8,7 (1H, s), 8,31 (2H, d), 8,21 (1H, d), 7,82 (2H, d), 7,70 (1H, d), 7,62 (1H, t), 7,50 (1H, t), 7,2-7,3 (4H, m), 7,17 (1H, t), 4,50 (1H, m), 3,1-3,2 (2H, m).

Ácido 2-[4-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoilamino]-2-acético

^{1}H NMR (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 8,7 (1H, s), 8,36 (2H, d), 8,22 (1H, d), 7,92 (2H, d), 7,70 (1H, d), 7,63 (1H, t), 7,51 (1H, t), 3,85 (2H, d).

Ejemplo 13 Protocolo de ensayo de competición de la fluorescencia resuelta en el tiempo: interacciones CD28-CD80

Reactivo	Proveedor
Anticuerpo anti-conejo marcado con Eu (\alphaR-Eu)	Wallac Oy, Turku, Finland,
\begin{minipage}[t]{73mm} IgG de conejo anti-ratón, específica del fragmento Fc (R\alpha mIg(Fc)) \end{minipage}	Jackson Immunoresearch Laboratories Inc.,
CD28 humano-IgG1 de ratón (Fc) (CD28-mFc)	Active Biotech Research AB
\begin{minipage}[t]{73mm} CD28 humano-Fab C215 de ratón (C215Fab-hCD28) \end{minipage}	Active Biotech Research AB
Fab C215 de ratón	Active Biotech Research AB
\begin{minipage}[t]{73mm}IgG Kappa de cadena ligera de cabra anti-ratón conjugada con biotina (G\alpha Mk\text{-}biot) \end{minipage}	Southern Biotechnology Ass. Inc.
Estreptavidina-aloficocianina (SA-APC)	Wallac Oy, Turku, Finland,

Tampón de ensayo

Tris-HCl 50 mM, NaCl 150 mM, Tween 20 al 0,05%, pH 7,8, que contiene BSA al 0,1% (p/v), añadido antes de su uso.

Preparación de la muestra

Las sustancias a ser analizadas en cuanto a sus efectos inhibidores, se diluyeron serialmente a partir de las concentraciones stock de 20 mM (DMSO) en tampón de ensayo hasta las concentraciones de preparación de 200, 100, 50 y 25 \muM. La concentración final en los pocillos fue 100, 50, 25 y 12,5 \muM respectivamente. La concentración máxima final de DMSO tolerada en el ensayo era el 0,5%. Cuando se consideró apropiado se ajustaron las series de dilución y se extendieron para medir la IC_{50}.

\newpage

Control

Se diluyó CTLA4-hIg (Fc) hasta concentraciones de trabajo 20 nM y 2 nM, dando como resultado concentraciones finales de 10 nM y 1 nM en el pocillo. A estas concentraciones (10 nM y 1 nM) se observaron niveles de inhibición de aproximadamente 90% y 30%.

Preparación de la mezcla de reactivos Para 1 placa

A un tubo que contenía 1,1 ml de tampón de ensayo, se añadieron los siguientes reactivos:

Reactivo	Volumen/1,1 ml de	Concentración de	Concentración final
	tampón de ensayo	la preparación	en el pocillo
\alphaR-Eu	4,2 \mul a partir de 0,528 mg/ml	2 \mug/ml	1 \mug/ml
R\alphamFc	2,8 \mul a partir de 2,4 mg/ml	6 \mug/ml	3 \mug/ml
CD28-mFc	2,6 \mul a partir de 0,4 mg/ml	0,95 \mug/ml (10 nM)	0,48 \mug/ml (5 nM)
G\alpham\kappa-biotina	8,8 \mul a partir de 0,5 mg/ml	4 \mug/ml	2 \mug/ml
SA-APC	15,4 \mul a partir de 1 mg/ml	16 \mug/ml	8 \mug/ml

Mezcla CD80FabC215

Se transfirieron a un nuevo tubo 900 \mul de la mezcla de reactivos anterior. Se añadió CD80FabC215 a una concentración de preparación de 20 nM (esto es 4,3 \mul del stock de 0,4 mg/ml). La concentración final en el pocillo fue 10 nM.

Mezcla FabC215

A los 200 \mul restantes se añadió la mezcla de reactivos C215Fab como control para la unión no específica (NSB). 0,5 \mul de un stock de 0,36 mg/ml dieron una concentración de preparación de 20 nM y una concentración final en el pocillo de 10 nM.

Distribución (pipeteado)

La mezcla de reactivos que contiene C215Fab se transfirió a una placa de microtitulación de 96 pocillos con semiárea negra, a la columna 12, filas E-H (4 pocillos), 10 \mul/pocillo con una pipeta electrónica de un único canal. Se transfirieron 10 \mul/pocillo de la mezcla de reactivos que contiene CD80FabC215 con una pipeta electrónica de un único canal a los otros pocillos de la placa.

B0: Se pipetearon 10 \mul/pocillo de tampón de ensayo a los pocillos que contienen CD80FabC215 en la columna 12, filas A-D (4 pocillos).

NSB: Se pipetearon 10 \mul/pocillo de tampón de ensayo a los pocillos que contienen C215Fab en la columna 12, filas E-H (4 pocillos).

Se pipetearon por duplicado 10 \mul/pocillo de CTLA4-hIg(Fc) 20 y 2 nM (concentración final 10 y 1 nM) en los pocillos 11 E-F y 11 G-H.

Series de dilución de las muestras: 10 \mul/pocillo por duplicado a los pocillos restantes.

Incubación

Se cubrió la placa con una cubierta de plástico y se incubó en la oscuridad: inicialmente durante 1 hora en una plataforma de agitación a temperatura ambiente (RTS), manteniendo a + 4ºC durante la noche, y finalmente 1 hora a RTS antes de la lectura.

Medida

Se midió la placa en un contador Viictor 1420 Multilabel usando el protocolo LANCE (#2) midiendo la emisión a longitudes de onda duales, de ambos, APC (665 nm) y Europio (615 nm). Primera medida: excitación 340 nm, emisión 665 nm, retardo 50 \mus, ventana temporal 200 \mus. Segunda medida: excitación 340 nm, emisión 615 nm, retardo 50 ms, ventana temporal 200 \mus.

Cálculos

Se determinó la relación de la señal de fluorescencia 1000 * 665 nm/615 nm, a partir de la cual se calculó el porcentaje de inhibición. Se realizó un logit b plot (Logit b = LN (% unido/ 100% - % unido), representado frente a la concentración logarítmica) a partir del cual se midió la IC_{50}.

El ensayo se realizó al menos dos veces con el fin de tener dos valores comparables de la IC_{50} de los compuestos.

Resultados

Se obtuvieron los siguientes resultados representativos:

ácido 4-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoico

IC_{50} = 0,48 \muM

ácido 2-cloro-4-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoico

IC_{50} = 0,27 \muM

ácido 3-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoico

IC_{50} = 0,88 \muM

ácido N-[4-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-fenil]-sucinámico

IC_{50} = 0,6 \muM

ácido [4-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-fenil]-propiónico

IC_{50} = 1,6 \muM

IC_{50} = 3,9 \muM

ácido 4-(3-oxo-3H-tiocromeno[4,3-c]pirazol-2-il)-benzoico

IC_{50} = 13,5 \muM.

Claims

1. Un compuesto que tiene la fórmula general (I)

13

Y representa NR4, O o S;

R1 representa H, halo, CF_{3}, alquilo inferior o alcoxi inferior;

R2 y R4 representan independientemente H o alquilo inferior; y

R3 representa H, halo, alquilo inferior o alcoxi inferior,

donde halo es F, Cl o Br;

con la condición de que R2 no es H, cuando X es un enlace, Y es NH y R3 es H,

o sus sales farmacéuticamente aceptables.

2. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que X es un enlace.

3. Un compuesto según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que Y es NH.

4. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, seleccionado del grupo que comprende

ácido 2-cloro-4-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoico,

ácido 4-(6,8-dimetil-3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoico,

ácido 4-(7,9-dicloro-3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoico,

ácido [4-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-fenil]-propiónico,

ácido [4-(3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-fenil]-acético,

ácido 4-(4-metil-3-oxo-3H-cromeno[4,3-c]pirazol-2-il)-benzoico,

ácido 4-(3-oxo-3H-tiocromeno[4,3-c]pirazol-2-il)-benzoico,

ácido 4-(5-metil-3-oxo-3,5-dihidro-pirazolo[4,3-c]quinolin-2-il)-benzoico,

5. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, que es un antagonista de CD80, capaz de inhibir la interacción entre CD80 y CD28.

6. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, para uso como un medicamento.

7. Un compuesto según la reivindicación 6, para uso como un medicamento para el tratamiento de enfermedades elegidas del grupo que comprende artritis reumatoide, esclerosis múltiple, diabetes, asma, transplantes, lupus eritematoso sistémico y psoriasis.

8. El uso de un compuesto como se ha definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, como un profármaco, preferiblemente en la forma de un éster.

9. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, como ingrediente activo en asociación con un adyuvante, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

10. Una composición farmacéutica según la reivindicación 9, para el tratamiento de enfermedades elegidas del grupo que comprende artritis reumatoide, esclerosis múltiple, diabetes, asma, transplantes, lupus eritematoso sistémico y psoriasis.

11. El uso de un compuesto que tiene la fórmula general (I)

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Y representa NR4, O o S;

R1 representa H, halo, CF_{3}, alquilo inferior o alcoxi inferior;

R2 y R4 representan independientemente H o alquilo inferior; y

R3 representa H, halo, alquilo inferior o alcoxi inferior,

donde halo es F, Cl o Br;

12. El uso según la reivindicación 11, donde dichas enfermedades se eligen del grupo que comprende artritis reumatoide, esclerosis múltiple, diabetes, asma, transplantes, lupus eritematoso sistémico y psoriasis.