ES2248657T3 - Metodos mejorados para el cultivo de celulas de mamiferos "in vitro". - Google Patents

Metodos mejorados para el cultivo de celulas de mamiferos "in vitro".

Info

Publication number
ES2248657T3
ES2248657T3 ES03004806T ES03004806T ES2248657T3 ES 2248657 T3 ES2248657 T3 ES 2248657T3 ES 03004806 T ES03004806 T ES 03004806T ES 03004806 T ES03004806 T ES 03004806T ES 2248657 T3 ES2248657 T3 ES 2248657T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
cells
citrate
lactate
cultivation
citric acid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
ES03004806T
Other languages
English (en)
Inventor
Ulrich Behrendt
Horst Eberhardt
Berthold Szperalski
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
F Hoffmann La Roche AG
Original Assignee
F Hoffmann La Roche AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=27798778&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=ES2248657(T3) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by F Hoffmann La Roche AG filed Critical F Hoffmann La Roche AG
Application granted granted Critical
Publication of ES2248657T3 publication Critical patent/ES2248657T3/es
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/0018—Culture media for cell or tissue culture
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/30—Organic components
    • C12N2500/38—Vitamins

Landscapes

  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Método para reducir el consumo de glucosa y/o la producción de lactato durante el cultivo de células animales en un medio exento de suero, caracterizado porque el cultivo se realiza en presencia de ácido cítrico o de una sal del mismo en una concentración de 1 a 50 mmoles/l, esta cantidad de ácido cítrico o de citrato no está fijado a un complejo quelato de hierro ni de otro ion de metal de transición y el medio contiene una cantidad adicional de ácido cítrico o de citrato en un complejo de tipo quelato de hierro que se añade como fuente de hierro al medio exento de suero.

Description

Métodos mejorados para el cultivo de células de mamíferos "in vitro".
La invención proporciona un método mejorado para reducir la formación de lactato y/o el consumo de glucosa en cultivos de células de mamíferos por adición de un ácido bi- o tricarboxílico, p. ej. el ácido cítrico.
Antecedentes de la invención
La optimización de los procesos de cultivo celular se ha orientado siempre a la longevidad de las células (Bibila, T.A. y Robinson, D.K., Biotechnol. Progr. 11, 1-13, 1995). La integral del número de células viables a lo largo del tiempo se utiliza a menudo como indicativo del éxito del cultivo y guarda una relación positiva con la formación de producto. En este documento, esta integral se define como CTI (CTI = Cell Density Time Integral).
El lactato, aparte del amoníaco, es el principal producto residual que se forma durante el cultivo de células de mamíferos. El amoníaco puede eliminarse con facilidad "in vivo", pero no existen mecanismos similares en las condiciones de cultivos celulares. Un método para solucionar este problema consiste en usar sustratos alternativos que sean relativamente no amonicogénicos (Hassell, T. y col., J. Cell Sci. 96, 501-508, 1990). En las condiciones típicas de cultivo, las células consumen glucosa en gran cantidad y la metabolizan principalmente en forma de lactato. La acumulación de lactato afecta negativamente el crecimiento celular, la CTI y la producción de proteína, como consecuencia del pH y/o del ajuste del pH por los álcalis (Chang, Y.H.D. y col., Biotecnol. Bioeng. 47, 319-326, 1995; Omasa, T. y col., Biotechnol. Bioeng. 39, 556-565, 1992; y Chen, K. y col., Biotechnol. Bioeng. 72,
55-62, 2001).
Se han realizado muchos intentos por reducir la formación del lactato. Glacken, M.W. y col., Biotechnol. Bioeng. 28, 1376-1389, 1986; Hu, W.S. y col., Dev. Biol. Stand. 66, 279-290, 1987; y Xie, L. y Wang, D.I.C., Cytotechnology 15, 17-29, 1994) han sugerido el cultivo de células de mamíferos con pequeñas concentraciones de glucosa y alimentación controlada dinámica de glucosa. La idea consistía en conseguir un desplazamiento metabólico del flujo de mucha glucosa/lactato a baja glucosa/lactato. Sin embargo, estos métodos requieren la adaptación a las células y necesitan mecanismos de control de alimentación diseñados cuidadosamente. Por ello son complicados y difíciles de llevar a la práctica (patente US-6 156 570).
Otros métodos para reducir la formación de lactato se basan en medios de ingeniería genética. Un método es el descrito por Chen, K. y col., Biotechnol. Bioeng. 72, 55-62, 2001. Chen y col. sugieren manipular los mecanismos metabólicos que conducen al lactato en las células de mamíferos por inactivación por lo menos de una copia de los genes de la lactato-deshidrogenasa en dichas células. Otro método es el descrito por Irani, N. y col., J. Biotechnol. 66, 238-246, 1999. Los autores introducen el gen de la piruvato-carboxilasa en el genoma de la célula hospedante. Se supone que se reduce la conversión de piruvato a lactato y por ello se mejora la longevidad de los cultivos
celulares.
El objetivo de la invención consiste en proporcionar un método simple para reducir el consumo de glucosa y/o la formación de lactato durante el cultivo de células de mamíferos.
Hace ya mucho tiempo que se conoce la adición del citrato férrico como sustitutivo de la transferrina en medios exentos de suero para el cultivo de células de mamíferos (véase, p. ej. Toyoda, K. e Inouye, K., Agric. Biol. Chem. 55, 1631-1633, 1991; Franek, F. y Dolnikova, J., Cytotechnology 7, 33-38, 1991; Kovar, J. y Franek, F., Exp. Cell Res. 182, 358-369, 1989; Schneider, Y.J., J. Immunol. Meth. 116, 65-77, 1989; y Kovar, J., Hybridoma 7, 255-263, 1988).
Resumen de la invención
Ahora se ha encontrado de modo sorprendente que la adición de uno o varios ácidos bi- o tricarboxílicos inhibe considerablemente el consumo de glucosa y/o la formación de lactato a partir de la glucosa y por lo tanto mejora la densidad celular y la viabilidad celular durante el cultivo de células de mamíferos. Sobre la base de estos hallazgos, el rendimiento de una proteína de interés (POI), producida mediante dicho cultivo celular, aumenta considerablemente cuando se utiliza el método de la presente invención. La adición de ácido di- o tricarboxílico reduce además entre el 50% y el 70% la cantidad de álcali que tiene que añadirse para mantener constante el valor del pH.
La presente invención se refiere, pues, a un método para reducir el consumo de glucosa y/o la producción de lactato durante el cultivo de células animales en un medio exento de suero, caracterizado porque el cultivo se lleva a cabo en presencia de ácido cítrico o de una sal del mismo, en una concentración de 1 a 50 mmoles/l, esta cantidad de ácido cítrico o de citrato no está fijada en un complejo de tipo quelato de un ion de hierro o de otro metal de transición y el medio contiene una cantidad adicional de ácido cítrico o de citrato en un complejo quelato de hierro, que se añade como fuente de hierro al medio exento de suero.
En una forma preferida de ejecución de la invención, las células de animales son células de mamíferos, con preferencia células de hibridoma o de mieloma, células CHO, NS0, BHK o HeLa, que producen anticuerpos monoclonales u hormonas proteináceas.
En otra forma preferida de ejecución de la invención, las células se cultiva en una fermentación en partida alimentada, en perfusión discontinua, en diálisis, en estado sólido o en fermentación continua, con preferencia durante un tiempo de 10 a 20 días.
Descripción detallada de la invención
Según la invención, la velocidad específica del consumo de glucosa (\mug/10^{6} células x día) se reduce en torno al 40%, con preferencia en más del 40%, es decir, del 40 al 60%, en relación a un proceso de fermentación utilizando un método en el que está presente el citrato sin complejar. La velocidad específica de formación del lactato (\mug/10^{6} células x día) se reduce en torno al 50%, con preferencia en más del 50%, es decir, entre el 50 y el 70%, con respecto a un proceso de fermentación que utilice un método en el que esté presente el citrato complejado.
La acumulación de lactato en el medio del cultivo celular puede inhibir el crecimiento celular y la producción de la POI durante el cultivo celular. La concentración de lactato que inhibe el crecimiento varía según la línea celular. La concentración de lactato después de un cierto tiempo de proceso de cultivo es el resultado de la velocidad de producción de lactato y de la CTI. Esta invención reduce la producción específica de lactato, de modo que el período se prolonga antes de alcanzarse la concentración inhibidora o, en el mejor caso, el lactato se mantiene por debajo de la concentración inhibidora. Sin embargo, según esta invención se produce un 
\hbox{aumento considerable de la CTI durante el
cultivo.}
El cultivo de las células se lleva a cabo a escala de producción, es decir, en biorreactores de 10-10.000 l de volumen. Estos métodos se describen, por ejemplo, en Bibila, T.A. y Robinson, D.K., Biotechnol. Prog. 11, 1-13, 1995.
El medio de fermentación es con preferencia un medio exento de suero. Tales medios se han descrito con profusión en el estado de la técnica (véase, p. ej. Murakami, H., Monoclonal Antibodies: Production and Application, pp. 107-141, 1989).
Los ácidos bi- y tricarboxílicos se añaden con preferencia en forma de sales de metal alcalino o de ácidos libres, en una concentración entre 1 y 50 mmoles/l. Con preferencia, esta cantidad de ácido carboxílico no está fijada en un complejo quelato de hierro ni de otro metal de transición. Sin embargo, el medio puede contener con preferencia una cantidad adicional de ácido bi- o tricarboxílico o una sal de los mismos, por ejemplo de citrato, en forma de complejo quelato con hierro, que se añade como fuente de hierro al medio exento de suero. Tal como se ha mencionado anteriormente, el citrato de hierro es ampliamente conocido como aditivo de medios exentos de suero, en los que actúa como fuente de hierro, en lugar de por ejemplo la transferrina.
El término "ácido bi- o tricarboxílico complejado" significa una solución acuosa de cantidades estequiométricas de dicho ácido e iones de hierro que conduce a la formación de un complejo con arreglo a la ley de la acción de masa.
El término "proteína de interés (POI)" significa cualquier proteína, cuya expresión sea deseada. El término contempla con preferencia todas las formas recombinantes de una proteína deseada. Tales proteínas de interés son por ejemplo las hormonas proteicas tales como la eritropoyetina, o anticuerpos y similares. Tales proteínas recombinantes han sido objeto de reseña p. ej. por parte de Hudson, P.J. y Souriau, C., Expert. Opin. Biol. Ther. 1, 845-855, 2001.
Las células de mamíferos son con preferencia líneas celulares recombinantes, tales como las células CHO o las células de hibridoma o las células de mieloma que se transforman con vectores de expresión capaces de expresar tal proteína de interés. Tales métodos son bien conocidos en el estado de la técnica y se han recopilado p. ej. en Colosimo, A. y col., Biotechniques 29, 314-331, 2000.
La fermentación en modo de partida alimentada se lleva a cabo con preferencia en biorreactores agitados durante 4-10 días. La densidad celular se sitúa con preferencia entre 0,2 y 10 x 10^{6} células/ml. El PO_{2} se sitúa con preferencia entre 15 y 30% y el pH entre 6,9 y 7,3.
La fermentación en modo de diálisis (Corner, M.J. y col., Cytotechnology 3, 295-299, 1990) puede llevarse a cabo en biorreactores agitados de diálisis durante 12-16 días. La densidad celular se sitúa con preferencia entre 0,2 y 30 x 10^{6} células/ml, el PO_{2} se sitúa entre el 15 y el 30% y el pH entre 6,9 y 7,3.
Como medio de fermentación se emplea con preferencia un medio común exento de suero y para la alimentación se emplea una solución concentrada de nutrientes.
Los siguientes ejemplos y referencias se facilitan para ayudar la comprensión de la presente invención, el verdadero alcance de la misma se define en las reivindicaciones anexas.
Ejemplo 1
Se descongelan células de una línea celular de mieloma (Sp2/0) y se expanden hasta 2 l en frascos "spinner" durante un período de aproximadamente 14 días para la inoculación en un biorreactor de 10 l. Pasados 2-4 días se dividen las células o se transfieren a un biorreactor de 100 l y se sigue su cultivo durante 2-4 días. El biorreactor de 100 l sirve como inóculo para el reactor de producción de 1000 l. Se utiliza para cada paso del inóculo una densidad celular inicial de 0,2 a 0,4 x 10^{6} células viables por ml.
El biorreactor de producción trabaja en modo de diálisis. El biorreactor es un reactor de tipo tanque agitado con un volumen útil de 900-1300 l. La aireación se efectúa por rociado (sparging). Se controlan los siguientes parámetros de proceso: el pH, la temperatura, la presión de pO^{2} y la velocidad de agitación. El biorreactor está equipado para el modo de diálisis con cartuchos de fibra hueca. Se conectan los cartuchos a un circuito externo con un depósito de medio de diálisis. Se inicia la diálisis del cultivo 2-4 días después de la inoculación. Durante la fermentación se llena el depósito repetidamente con medio fresco de diálisis. Algunos componentes del medio se alimentan al biorreactor en forma de soluciones estériles separadas. Estos son la glucosa, los aminoácidos, las vitaminas y los oligoelementos.
La fermentación se da por terminada después de 16 días como máximo.
Se añade el citrato al medio de fermentación y al medio de diálisis.
Resultados del ejemplo 1
En las tablas 1 y 2 se recoge la velocidad específica de consumo de la glucosa y la CTI de las partidas con y sin adición de citrato (se hallan resultados similares empleando fumarato). Se realiza la fermentación en modo de diálisis en un volumen de 1000 l. La adición de citrato al medio reduce la velocidad de consumo de glucosa en un 44% y aumenta la CTI en un 105%. Al mismo tiempo se reduce la velocidad de producción específica del lactato en un 60% (tablas 3 y 4).
Durante la fermentación, la velocidad específica de producción de la POI se mantiene casi constante, por lo tanto, las cantidades de la POI aumentan con respecto a la CTI.
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 1 Fermentaciones en modo de diálisis sin adición de citrato
partida nº velocidad específica de consumo de glucosa en CTI en unidades relativas
\mug/10^{6} células x día
1 663 134
2 873 98
3 776 96
4 736 100
5 1424 72
media: 894 100 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 2 Fermentación en modo de diálisis con la adición de 2,4 mmoles/l de citrato
partida nº velocidad específica de consumo de glucosa en CTI en unidades relativas
\mug/10^{6} células x día
6 705 142
7 351 262
8 429 219
9 549 195
10 481 208
11 355 275
TABLA 2 (continuación)
partida nº velocidad específica de consumo de glucosa en CTI en unidades relativas
\mug/10^{6} células x día
12 535 213
13 537 128
14 519 215
15 578 192
media: 504 205 
\vskip1.000000\baselineskip
La adición del citrato al medio de fermentación reduce en un 66% la cantidad de álcali requerido para ajustar el pH durante el cultivo (tablas 3 y 4).
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 3 Fermentaciones en modo diálisis sin adición de citrato
partida nº velocidad específica de consumo de glucosa en adición álcali en unid. rel
\mug/10^{6} células x día
1 506 110
2 746 111
3 574 59
4 595 77
5 1064 144
media: 697 100 
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 4 Fermentaciones en modo diálisis con adición de 2,4 mmoles/l de citrato
partida nº velocidad específica de consumo de glucosa en adición álcali en unid. rel
\mug/10^{6} células x día
6 491 107
7 176 18
8 200 19
9 320 13
10 241 40
11 200 17
12 284 15
TABLA 4 (continuación)
partida nº velocidad específica de consumo de glucosa en adición álcali en unid. rel
\mug/10^{6} células x día
13 338 8
14 259 55
15 307 46
media: 282 34
Ejemplo 2
Se descongelan células de una línea celular de mieloma (Sp2/0) y se expanden hasta 2 l en frascos "spinner" para la inoculación en un biorreactor de 10 l.
El biorreactor de producción trabaja en modo de partida alimentada. El biorreactor es un reactor de tipo tanque agitado con un volumen útil de 9-13 l. La aireación se efectúa por rociado. Se controlan los siguientes parámetros de proceso: el pH, la temperatura, la presión de pO^{2} y la velocidad de agitación. La alimentación del cultivo se inicia 2-4 días después de la inoculación. Algunos componentes del medio se alimentan al biorreactor en forma de soluciones estériles separadas. Estos son la glucosa, los aminoácidos, las vitaminas y los oligoelementos.
La fermentación se da por terminada después de 10 días como máximo.
Se añade el ácido cítrico al medio de fermentación y al medio de alimentación.
Resultados del ejemplo 2
En las tablas 5 y 6 se recoge la velocidad específica de producción y la CTI de las partidas con y sin adición de citrato. Se realiza la fermentación en modo de partida alimentada en un volumen de 10 l. La adición de citrato al medio reduce la velocidad de consumo de glucosa en un 44% y aumenta la CTI en un 241%. Al mismo tiempo se reduce la velocidad de producción específica del lactato en un 52% (tablas 3 y 4). Esto pone de manifiesto la inhibición del flujo metabólico de la glucosa por glucólisis debida a la adición del citrato.
TABLA 5 Fermentaciones en modo de partida alimentada sin adición de citrato
pda. nº velocidad espec. consumo glucosa en velocidad espec. producción lactato en CTI en unid. rel.
\mug/10^{6} células x día \mug/10^{6} células x día
1 1206 670 84
2 939 509 84
3 779 527 104
4 703 471 140
5 1022 714 75
6 948 727 62
7 839 665 90
8 1233 867 86
9 912 612 90
10 967 668 184
media 955 643 100
TABLA 6 Fermentaciones en modo de partida alimentada con adición de 2,4 mmoles/l de citrato
pda. nº velocidad espec. consumo glucosa en velocidad espec. producción lactato en CTI en unid. rel.
\mug/10^{6} células x día \mug/10^{6} células x día
11 443 230 478
12 715 392 321
13 451 304 224
media 536 309 341
Lista de referencias
Bibila, T.A. y Robinson, D.K., Biotechnol. Prog. 11, 1-13, 1995
Chang, Y.H.D. y col., Biotechnol. Bioeng. 47, 319-326, 1995
Chen, K. y col., Biotechnol. Bioeng. 72, 55-62, 2001
Colosimo, A. y col., Biotechniques 29, 314-331, 2000
Corner, M.J. y col., Cytotechnology 3, 295-299, 1990
Franek, F. y Dolnikova, J., Cytotechnology 7, 33-38, 1991
Glacken, M.W. y col., Biotechnol. Bioeng. 28, 1376-1389, 1986
Hassell, T. y col., J. Cell Sci. 96, 501-508, 1986
Hu, W.S. y col., Dev. Biol. Stand. 66, 279-290, 1987
Hudson, P.J. y Souriau, C., Expert. Opin. Biol. Ther. 1, 845-855, 2001
Irani, N. y col., J. Biotechnol. 66, 238-246, 1999
Kovar, J. y Franek, F., Exp. Cell Res. 182, 358-269, 1989
Kovar, J., Hybridoma 7, 255-263, 1988
Murakami, H., Monoclonal Antibodies: Production and Application 107-141, 1989
Omasa, T. y col., Biotechnol. Bioeng. 39, 556-565, 1992
Schenider, Y.J., J. Immunol. Meth. 116, 65-77, 1989
Toyoda, K. e Inouye, K., Agric. Biol. Chem. 55, 1631-1633, 1991
patente US-6 156 570
Xie, L. y Wang, D.I.C., Cytotechnology 15, 17-29, 1994

Claims (3)

1. Método para reducir el consumo de glucosa y/o la producción de lactato durante el cultivo de células animales en un medio exento de suero, caracterizado porque el cultivo se realiza en presencia de ácido cítrico o de una sal del mismo en una concentración de 1 a 50 mmoles/l, esta cantidad de ácido cítrico o de citrato no está fijado a un complejo quelato de hierro ni de otro ion de metal de transición y el medio contiene una cantidad adicional de ácido cítrico o de citrato en un complejo de tipo quelato de hierro que se añade como fuente de hierro al medio exento de suero.
2. Método según la reivindicación 1, caracterizado porque las células de animales son células de mamíferos.
3. Método según la reivindicación 2, caracterizado porque las células de mamíferos son células de mieloma, de hibridoma o células CHO.
ES03004806T 2002-03-05 2003-03-04 Metodos mejorados para el cultivo de celulas de mamiferos "in vitro". Expired - Lifetime ES2248657T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP02004366 2002-03-05
EP02004366 2002-03-05

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2248657T3 true ES2248657T3 (es) 2006-03-16

Family

ID=27798778

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES03004806T Expired - Lifetime ES2248657T3 (es) 2002-03-05 2003-03-04 Metodos mejorados para el cultivo de celulas de mamiferos "in vitro".

Country Status (11)

Country Link
US (1) US7390660B2 (es)
EP (1) EP1342780B1 (es)
JP (2) JP4476554B2 (es)
KR (1) KR100576589B1 (es)
CN (1) CN100398640C (es)
AT (1) ATE304047T1 (es)
CA (1) CA2417689C (es)
DE (1) DE60301510T2 (es)
DK (1) DK1342780T3 (es)
ES (1) ES2248657T3 (es)
MX (1) MXPA03001487A (es)

Families Citing this family (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2593521C (en) 2005-01-05 2016-06-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Cell culture method and utilization of the same
DE102005046225B4 (de) * 2005-09-28 2012-01-05 Cellca Gmbh Verbessertes Zellkulturmedium
KR20090074040A (ko) 2006-09-13 2009-07-03 아보트 러보러터리즈 세포 배양의 개선
US8911964B2 (en) 2006-09-13 2014-12-16 Abbvie Inc. Fed-batch method of making human anti-TNF-alpha antibody
TW200902708A (en) 2007-04-23 2009-01-16 Wyeth Corp Methods of protein production using anti-senescence compounds
US20090042253A1 (en) * 2007-08-09 2009-02-12 Wyeth Use of perfusion to enhance production of fed-batch cell culture in bioreactors
SG10201702951RA (en) 2008-10-20 2017-06-29 Abbvie Inc Viral inactivation during purification of antibodies
SG10201702922VA (en) 2008-10-20 2017-06-29 Abbvie Inc Isolation and purification of antibodies using protein a affinity chromatography
CN104928336B (zh) 2009-10-26 2020-05-08 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 用于生产糖基化免疫球蛋白的方法
EP3147355B1 (en) 2010-12-27 2020-07-22 Kyowa Kirin Co., Ltd. Method for preparing aqueous solution containing culture medium and chelating agent
EP2702077A2 (en) 2011-04-27 2014-03-05 AbbVie Inc. Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins
US9067990B2 (en) 2013-03-14 2015-06-30 Abbvie, Inc. Protein purification using displacement chromatography
US9505833B2 (en) 2012-04-20 2016-11-29 Abbvie Inc. Human antibodies that bind human TNF-alpha and methods of preparing the same
WO2013158273A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Abbvie Inc. Methods to modulate c-terminal lysine variant distribution
US9334319B2 (en) 2012-04-20 2016-05-10 Abbvie Inc. Low acidic species compositions
WO2013176754A1 (en) 2012-05-24 2013-11-28 Abbvie Inc. Novel purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography
US9206390B2 (en) 2012-09-02 2015-12-08 Abbvie, Inc. Methods to control protein heterogeneity
US9512214B2 (en) 2012-09-02 2016-12-06 Abbvie, Inc. Methods to control protein heterogeneity
WO2014159579A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Abbvie Inc. MUTATED ANTI-TNFα ANTIBODIES AND METHODS OF THEIR USE
WO2014151878A2 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosacharides
US9017687B1 (en) 2013-10-18 2015-04-28 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography
EP3052640A2 (en) 2013-10-04 2016-08-10 AbbVie Inc. Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins
AU2014331776B2 (en) 2013-10-11 2020-10-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Metabolically optimized cell culture
US11390663B2 (en) 2013-10-11 2022-07-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Metabolically optimized cell culture
US9181337B2 (en) 2013-10-18 2015-11-10 Abbvie, Inc. Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same
US8946395B1 (en) 2013-10-18 2015-02-03 Abbvie Inc. Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography
US9085618B2 (en) 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
US20150139988A1 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Abbvie, Inc. Glycoengineered binding protein compositions
WO2015155975A1 (ja) 2014-04-07 2015-10-15 東洋製罐グループホールディングス株式会社 動物細胞用培養液、及び培養容器
WO2023167852A2 (en) 2022-03-02 2023-09-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Cell culture methods for antibody production

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5328844A (en) * 1990-05-09 1994-07-12 University Of Colorado Foundation, Inc. Culture media for mammalian cells
WO1993000423A1 (en) 1991-06-21 1993-01-07 Novo Nordisk A/S Iron chelate culture medium additive
JP3046415B2 (ja) * 1991-10-04 2000-05-29 日水製薬株式会社 浮遊細胞用無血清合成培地
JPH0870858A (ja) * 1993-12-24 1996-03-19 Eiken Chem Co Ltd 動物細胞培養用培地
US5719050A (en) * 1993-12-24 1998-02-17 Eiken Chemical Co., Ltd. Animal cell culturing media containing N-acetyl-L-glutamic acid
US5856179A (en) * 1994-03-10 1999-01-05 Genentech, Inc. Polypeptide production in animal cell culture
US6156570A (en) 1997-03-20 2000-12-05 Regents Of The University Of Minnesota Process for the continuous culture of cells
UA74557C2 (en) * 1999-09-03 2006-01-16 Applied Research Systems A method for producing a heterologous secreted protein from chinese hamster ovaries cells grown on microcarriers
US6762053B2 (en) * 2000-06-09 2004-07-13 Vitrolife, Inc. Mammalian gamete and embryo culture media and culture media supplements
WO2002066603A2 (en) * 2001-02-15 2002-08-29 Centocor, Inc. Chemically defined medium for cultured mammalian cells

Also Published As

Publication number Publication date
JP2010000094A (ja) 2010-01-07
EP1342780B1 (en) 2005-09-07
KR100576589B1 (ko) 2006-05-04
KR20030074204A (ko) 2003-09-19
CA2417689A1 (en) 2003-09-05
US7390660B2 (en) 2008-06-24
DE60301510T2 (de) 2006-06-14
CA2417689C (en) 2006-05-09
DE60301510D1 (de) 2005-10-13
US20030175951A1 (en) 2003-09-18
JP2003250533A (ja) 2003-09-09
DK1342780T3 (da) 2005-12-12
EP1342780A1 (en) 2003-09-10
JP4476554B2 (ja) 2010-06-09
CN1442478A (zh) 2003-09-17
ATE304047T1 (de) 2005-09-15
JP5191970B2 (ja) 2013-05-08
CN100398640C (zh) 2008-07-02
MXPA03001487A (es) 2005-09-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2248657T3 (es) Metodos mejorados para el cultivo de celulas de mamiferos "in vitro".
ES2533074T3 (es) Medio de cultivo celular mejorado
ES2659117T3 (es) Proceso de cultivo celular de CHO
EP2563903B1 (en) Improved cell culture medium
JP5587795B2 (ja) 発酵培地、及びそのプロセス
JP6300121B2 (ja) 大腸菌細胞の高濃度培養方法
CN105366814A (zh) 一种利用光合细菌和单细胞藻类改善水质的方法及其应用
CN103627655A (zh) 室内生物絮团的培养方法
ES2222407T3 (es) Proceso para la produccion de o-acetil-l-serina por fermentacion.
CN109576212B (zh) 高密度接种培养中种子细胞的培养方法及其应用
CN106430626A (zh) 一种促进水产养殖生物絮凝过程建立的方法
CN104561200A (zh) 一种有效改善重组蛋白在大肠杆菌中可溶性表达的方法
CN105483063A (zh) 一种螺旋藻培养基
WO2021187411A1 (ja) 動物細胞の培養方法
CN110267983A (zh) 加帽和未加帽抗体半胱氨酸的大规模生产工艺及其在治疗性蛋白缀合中的应用
ES2784146T3 (es) Adición de hierro para mejorar el cultivo celular
US3930944A (en) Urokinase production
KR101625595B1 (ko) 재조합 단백질 생산 증가를 위한 염화리튬을 포함하는 세포 배양용 배지 조성물 및 이의 용도
CN112680396B (zh) 单抗或重组蛋白大规模生产中细胞扩增的方法
Stramaglia et al. Improving Protein Production in CHO Cells
KR20010019217A (ko) 종속영양배양에 의한 고농도 클로렐라 배양방법
WO2012008920A1 (en) Materials and methods for enhanced iron uptake in cell culture
RU2196820C2 (ru) Способ размножения стромальных клеток тестикул (семенников), мужских половых зародышевых клеток, сперматогоний, сперматоцитов и сперматозоидов
JPH089968A (ja) ｎ−酪酸を含有することを特徴とする動物細胞培養用培地及び培養方法
KR20050070512A (ko) 재조합 단백질의 생산성을 증가시키는 무혈청 배지 및동물세포 배양방법