ES2242651T3 - Derivados del acido nervonico, su preparacion y uso. - Google Patents
Derivados del acido nervonico, su preparacion y uso.Info
- Publication number
- ES2242651T3 ES2242651T3 ES00977695T ES00977695T ES2242651T3 ES 2242651 T3 ES2242651 T3 ES 2242651T3 ES 00977695 T ES00977695 T ES 00977695T ES 00977695 T ES00977695 T ES 00977695T ES 2242651 T3 ES2242651 T3 ES 2242651T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- compound
- formula
- gla
- acid
- animals
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
- C07C69/52—Esters of acyclic unsaturated carboxylic acids having the esterified carboxyl group bound to an acyclic carbon atom
- C07C69/533—Monocarboxylic acid esters having only one carbon-to-carbon double bond
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
- A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
- A61K31/22—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin
- A61K31/23—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin of acids having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms
- A61K31/231—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin of acids having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms having one or two double bonds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
- C07C69/52—Esters of acyclic unsaturated carboxylic acids having the esterified carboxyl group bound to an acyclic carbon atom
- C07C69/587—Monocarboxylic acid esters having at least two carbon-to-carbon double bonds
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Immunology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
Compuesto de fórmula (I): CH3 - (CH2)7 - CH = CH - (CH2)13 - C(O) - O- (CH2)3 - OR (I) donde R es hidrógeno (H) o un residuo de un ácido carboxílico; o una sal del compuesto en la que R es H, o un hidrato de la misma.
Description
Derivados del ácido nervónico, su preparación y
uso.
La presente invención se refiere a determinados
ésteres de ácidos grasos y a su preparación, y al uso de tales
compuestos o de formulaciones farmacéuticas de los mismos en
medicina en un mamífero, incluyendo el hombre, como agentes
antiinflamatorios o inmunomoduladores, por ejemplo.
Es sabido en general que los ácidos grasos
incluyen los ácidos carboxílicos que constituyen glicéridos tales
como los triacilgliceroles, que son los ésteres carboxílicos que
están comprendidos en las células de almacenamiento de grasas de las
plantas y los animales. Muchos de tales ácidos grasos son compuestos
de cadena recta que tienen de tres a dieciocho átomos de carbono
(C_{3}-C_{18}); y exceptuando los compuestos de
C_{3} y de C_{5}, tan sólo están presentes en cantidades
considerables ácidos que contienen un número par de átomos de
carbono, debido a su biosíntesis. Hay ácidos grasos tanto saturados
como insaturados, tales como los ácidos grasos insaturados de
C_{18} que son el ácido oleico, el ácido
\alpha-linoleico y el ácido
\gamma-linolénico (GLA), teniendo cada uno de
dichos ácidos un enlace doble de carbono-carbono,
dos y tres enlaces dobles de carbono-carbono,
respectivamente. La notación convencional alude por consiguiente a
estos ácidos como ácidos grasos 18:1, 18:2 y 18:3, respectivamente.
La configuración en torno a estos enlaces dobles es habitualmente
una configuración cis, lo cual hace que descienda el punto de
fusión de la grasa correspondiente (en comparación con los
correspondientes compuestos saturados y de configuración
trans).
Además de estos ácidos grasos de cadena corta y
mediana, son también conocidos y han sido investigados los que
tienen cadenas más largas, tales como los de
C_{16}-C_{24}, y en particular los que se
obtienen de aceites de pescado, tales como los ácidos
eicosapentaenoico (EPA, 20:5 (n-3)) y
docosahexaenoico (DHA, 22:6 (n-3)), donde en
(n-x) x indica la posición del primer enlace doble
de carbono-carbono con respecto al grupo metilo
terminal en el ácido graso.
Además de en relación con su metabolismo
dietético y su potencial uso dietético, algunos ácidos grasos han
sido investigados en relación con afecciones médicas tales como la
esquizofrenia (GLA y DHA) y el trastorno bipolar (EPA y DHA).
Algunos han sido también propuestos para mejorar el transporte de
drogas biológicamente activas ("bioactivos") a través de las
membranas de los lípidos uniendo directa o indirectamente el
bioactivo a determinados ácidos grasos. Por ejemplo, en la
descripción impresa de patente al amparo del PCT (PTC = Tratado de
Cooperación en Materia de Patentes) Nº WO 96/34846 se describe que
pueden ser usados de esta manera cualesquiera de los ácidos grasos
esenciales (que incluyen al GLA, al DHA y al EPA) o cualquier otro
ácido graso de C_{12-30} que tenga al menos dos
enlaces dobles de carbono-carbono. De entre los de
una amplia gama de posibles bioactivos y ácidos grasos
(12-30: \geq 2) que se mencionan en esa
descripción impresa de patente se describe específicamente el
GLA-GLA, que es un par de moléculas de GLA unidas
mediante una mitad de
propano-1,3-diol, y concretamente
1,3-(di-z,z,z-octadeca-6,9,12-trienoiloxi)propano.
Sin embargo, no se indican para GLA-GLA resultados
biológicos en ensayos farmacológicos de tipo alguno, aparte de una
indicación de que el compuesto fue administrado a ratas y ratones a
razón de hasta 10 g/kg sin evidencia de diarrea (es decir, en
ausencia de toxicidad, y no en presencia de efecto terapéutico).
Sin embargo, se menciona al
GLA-GLA como un posible compuesto de
propano-1,3-diol que tiene una
amplia gama de usos que se enumeran, incluyendo el tratamiento de
enfermedades inflamatorias. No obstante, como se indica más adelante
haciendo en particular referencia al Ejemplo 4, descubrimos que el
GLA:GLA carecía de efecto en nuestros ensayos para determinar la
actividad antiinflamatoria. En consecuencia, podría ser de esperar
que otras combinaciones de ácidos grasos (12-30:
\geq 2) unidos por medio de una mitad de
propano-1,3-diol podrían también no
presentar acción antiinflamatoria, especialmente cuando tal acción
no haya sido ya demostrada para al menos una de las mitades de ácido
graso implicadas.
Además, en la WO 96/34846 no se contempla la
posibilidad de usar otros tipos de ácidos grasos, tales como
aquéllos que tienen solamente un enlace doble de
carbono-carbono. Uno de tales tipos distintos de
ácido graso es el ácido nervónico. El ácido nervónico (24:1
(n-9)) es ácido cis (o
z)-tetracos-15-enoico, no está
clasificado como un ácido graso esencial, y tiene solamente un
enlace C=C insaturado. Este ácido juega un papel en la biosíntesis
de la mielina y es uno de los principales ácidos grasos de los
esfingolípidos cerebrales. El ácido nervónico ha venido estando por
consiguiente implicado en enfermedades que conllevan desmielinación,
tales como la adrenoleucodistrofia (ALD) y la esclerosis múltiple
(MS). Se ha propuesto por consiguiente administrar ácido nervónico o
una fuente del mismo en forma de formulación farmacéutica del mismo
a los pacientes que padecen de estados de desmielinación (como se
describe en la publicación de la memoria impresa de patente al
amparo del PCT Nº WO 91/07955), o administrar ácido nervónico o un
derivado funcional del mismo en forma de suplemento dietético, y por
ejemplo en forma de alimentos infantiles o para bebés, o a mujeres
embarazadas o en periodo de lactancia (como se describe en la
publicación de la descripción impresa de patente al amparo del PCT
Nº PCT/GB95/01985). A pesar de que las causas precisas de la
esclerosis múltiple no son aún conocidas, la poderosa evidencia con
la que se cuenta en la actualidad sugiere que la esclerosis múltiple
es fruto de un proceso autoinmune que es iniciado por un factor
medioambiental, y posiblemente por una infección viral inespecífica,
en un individuo genéticamente susceptible, en cuyo proceso las
células inmunes confunden la mielina con un invasor foráneo y la
atacan. Este proceso produce inflamación perivascular en el sistema
nervioso central y finalmente daña no tan sólo la mielina, sino
también el tejido nervioso subyacente. Sin embargo, no se sabe del
ácido nervónico que tenga efecto general alguno en la inflamación o
en las enfermedades inflamatorias.
Como resultado del daño que es infligido a la
mielina y al tejido nervioso, es rota la barrera hematoencefálica,
lo que permite a las células T activadas entrar en el cerebro y
reclutar otros linfocitos. Las células T activadas liberan
linfotoxina, interferón gamma (IFN-\gamma) y otras
citoquinas inflamatorias. La linfotoxina puede dañar los
oligodendrocitos, y el IFN-\gamma, del que se ha
demostrado que provoca exacerbaciones de la esclerosis múltiple,
estimula al sistema inmunológico de una serie de maneras de las que
se piensa que agravan la esclerosis múltiple. Las células llamadas
oligodendrocitos sintetizan proteínas y lípidos específicos de la
mielina, y su papel es decisivo tanto para la formación normal de la
vaina mielínica como para el funcionamiento normal del cerebro.
Por ejemplo, el IFN-\gamma
aumenta la expresión de las moléculas de la clase II del complejo
mayor de histocompatibilidad (MHC) en los macrófagos, e induce su
expresión en los astrocitos, las microglia y las células
endoteliales. Los péptidos mielínicos antigénicos que van asociados
a estas moléculas de MHC son reconocidos por las células T, las
cuales proliferan en respuesta a la presentación del antígeno,
amplificando la respuesta inmune.
Los macrófagos activados por
IFN-\gamma también liberan factor de necrosis
tumoral (TNF), del cual se ha demostrado que daña los
oligodendrocitos in vitro. Por añadidura, son secretadas
citoquinas, proteinasas y lipasas, y las células B son inducidas a
sintetizar anticuerpos. Esta respuesta redunda en desmielinación y
gliosis, lo cual hace que los impulsos nerviosos sean enlentecidos o
detenidos y produce los síntomas de la esclerosis múltiple.
Se ha descubierto ahora sorprendentemente que
ciertos derivados del ácido nervónico poseen actividad
antiinflamatoria y/o inmunomoduladora. Además, algunos de estos
derivados ayudan al paso del ácido nervónico a través de la barrera
hematoencefálica.
En consecuencia, la presente invención aporta un
compuesto de fórmula (I):
(I)CH_{3} ---
(CH_{2})_{7} --- CH = CH --- (CH_{2})_{13} ---
\uelm{C}{\uelm{\dpara}{O}}--- O ---(CH_{2})_{3} --- OR
donde R es hidrógeno (H) o un
residuo de un ácido
carboxílico
o una sal de los compuestos en los que R es
H.
La definición de la fórmula (I) también incluye,
allí donde ello sea aplicable, isómeros individuales y mezclas de
los mismos.
A título de antecedentes, el vocablo
"bioprecursor" o "prodroga" significa un derivado
farmacológicamente aceptable, como p. ej. un éster (tal como un
derivado consistente en un éster biolábil de un grupo -COOH), que es
convertido in vivo en un compuesto de la presente invención.
Las adecuadas prodrogas pueden ser determinadas haciendo referencia
a Goodman y Gilman, The Pharmacological Basis of Therapeutics, 8ª
Edición, McGraw-Hill, Int. Ed. 1992, y en particular
a "Biotransformation of Drugs", pp. 13-15.
El ácido carboxílico al que se alude en la
definición de R tiene preferiblemente de 1 a 26 átomos de carbono y
puede ser de cadena recta o de cadena ramificada, saturado o
insaturado. Más preferiblemente, el ácido carboxílico es de cadena
recta y es seleccionado de entre los miembros del grupo que consta
de ácidos grasos monoinsaturados y poliinsaturados. Son
particularmente preferidos los compuestos de fórmula (I) en los que
R es un residuo de un ácido graso monoinsaturado o poliinsaturado de
C_{18} a C_{24} que tiene de 1 a 6 enlaces dobles de
carbono-carbono. Se prefiere en especial que R sea
un residuo de ácido nervónico (24:1 (n-9)), ácido
docosahexaenoico (22:6 (n-3)) o ácido
\gamma-linolénico (18:3 (n-6)),
donde x en (n-x) indica la posición del primer
enlace doble con respecto al grupo metilo terminal del ácido
graso.
El experto en la materia comprenderá que los
compuestos de fórmula (I) en los que R es H son útiles como
intermedios en la síntesis de otros compuestos de fórmula (I). En
consecuencia, la presente invención aporta un método para la
preparación de los compuestos de fórmula (I) en los que R es un
residuo de un ácido carboxílico, comprendiendo dicho método el paso
de hacer que el compuesto de fórmula (IA), y concretamente
1-(z-15-tetracosenoiloxi)-3-hidroxipropano:
(IA)CH_{3}
--- (CH_{2})_{7} --- CH = CH --- (CH_{2})_{13}
---
\uelm{C}{\uelm{\dpara}{O}}--- O ---(CH_{2})_{3} --- OH
reaccione con el correspondiente
ácido carboxílico de fórmula R-H, donde R es como se
ha definido para la fórmula
(I).
Las condiciones adecuadas para esta reacción de
esterificación son conocidas para los expertos en la materia e
incluyen la presencia de ácido hipofosforoso, preferiblemente con
calentamiento hasta el reflujo bajo una atmósfera inerte tal como
una atmósfera de nitrógeno.
El propio compuesto de fórmula (IA) puede ser
preparado de manera convencional, tal como mediante la reacción del
cloruro ácido de ácido nervónico (es decir,
CH_{3}-(CH_{2})_{7}-CH =
CH-(CH_{2})_{13}-COCl) con
propano-1,3-diol en presencia de una
base tal como una base orgánica, como por ejemplo trialquilaminas,
como p. ej. trietilamina y tributilamina, y piridina,
2,6-dimetilpiridina y quinolina, preferiblemente en
un disolvente aprótico orgánico tal como un alcano halogenado, como
por ejemplo diclorometano, éter, tetrahidrofurano y tolueno. La
reacción es preferiblemente llevada a cabo con enfriamiento, tal
como hasta aproximadamente 0ºC bajo una atmósfera inerte tal como
una atmósfera de nitrógeno.
El cloruro ácido de ácido nervónico (cloruro de
z-15-tetracosenoilo) puede ser
preparado de manera convencional a partir de ácido nervónico y
cloruro de tionilo, tricloruro de fósforo o especialmente
pentacloruro de fósforo, preferiblemente en un disolvente polar tal
como un éter en condiciones anhidras y preferiblemente bajo una
atmósfera inerte.
En el caso de la preparación del compuesto de
fórmula (I) en la que R es el residuo de ácido nervónico, el proceso
en dos pasos que ha sido descrito anteriormente puede ser llevado a
cabo en un solo recipiente a partir de ácido nervónico,
propano-1,3-diol y ácido
hipofosforoso, por ejemplo.
El ácido nervónico es suministrado comercialmente
por la Aldrich Chemicals, UK, o está disponible por otros medios
como se describe, por ejemplo, en la descripción impresa de patente
US Nº US 5 194 448 o en la publicación de la descripción impresa de
patente al amparo del PCT Nº PTC/GB95/01985.
Como se ha mencionado anteriormente, se ha
descubierto sorprendentemente que los compuestos de fórmula (I) en
la que R es distinto de H, y concretamente los compuestos de fórmula
(IB):
(IB)CH_{3}
--- (CH_{2})_{7} --- CH = CH --- (CH_{2})_{13}
---
\uelm{C}{\uelm{\dpara}{O}}--- O ---(CH_{2})_{3} --- OR^{1}
donde R^{1} es un residuo de un
ácido carboxílico poseen actividad antiinflamatoria y/o
inmunomoduladora.
Los residuos de ácido carboxílico preferidos son
como los que han sido descritos anteriormente con respecto a la
definición de R.
En consecuencia, la presente invención aporta los
siguientes compuestos específicos de fórmula (IB):
1-(z-15-tetracosenoiloxi)-3-(z,z,z-6,9,12-octadecatrienoiloxi)propano
(al que se llama de aquí en adelante
NA:GLA);
NA:GLA);
1-(z-15-tetracosenoiloxi)-3-(z-4,7,10,13,16,19-docosahexaenoiloxi)propano
(al que se llama de aquí en adelante NA:DHA); y
1,3-di-(z-15-tetracosenoiloxi)propano
(al que se llama de aquí en adelante NA:NA).
En el sentido en el que se le utiliza en la
presente, el vocablo "antiinflamatorio" significa la capacidad
de reducir, mejorar o impedir la inflamación o una respuesta
inflamatoria. En el sentido en el que se le utiliza en la presente,
el vocablo "inmunomodulador" significa la capacidad de modular
una respuesta inmune, tal como a base de suprimir o estimular una
respuesta de este tipo. Los expertos en la materia comprenderán que
para el tratamiento o la prevención de ciertos estados médicos puede
ser deseable tanto la actividad antiinflamatoria como la actividad
inmunomoduladora.
Los efectos antiinflamatorios y/o
inmunomoduladores de los compuestos de fórmula (IB) pueden ser
observados en los ensayos de encefalomielitis alérgica experimental
(EAE) que se describen más detalladamente a continuación en los
Ejemplos. La encefalomielitis alérgica experimental es una
enfermedad inflamatoria autoinmune del sistema nervioso central que
está caracterizada por infiltrados inflamatorios perivasculares y
subpiales y lesiones de desmielinación. Esta enfermedad puede ser
inducida mediante inmunización con cordón espinal homogeneizado
íntegro o material cerebral, mielina purificada u oligodendrocitos o
componentes purificados de mielina, combinados con adyuvantes. El
uso de adyuvantes tales como el adyuvante de Freund es necesario
para estimular la respuesta inmunológica que finalmente redunda en
la enfermedad. Debido a la relativa facilidad de purificación, han
sido extensivamente estudiados como encefalitógenos en la
encefalomielitis alérgica experimental la proteína básica mielínica
(MBP) y la proteína proteolipídica (PLP) y sus fragmentos.
Los modelos de encefalomielitis alérgica
experimental pueden clasificarse en términos generales como
encefalomielitis alérgica experimental monofásica aguda o
encefalomielitis alérgica experimental recurrente crónica:
En la encefalomielitis alérgica experimental
aguda, los animales susceptibles a los que se les inyectan pequeñas
dosis de antígenos mielínicos en adyuvante completo de Freund (CFA)
sucumben a la enfermedad paralítica en un periodo de tiempo de 10 a
14 días. El inicio de la enfermedad es observado en forma de pérdida
de tono de la cola y/o de leve parálisis de las patas traseras que
progresa llegando a convertirse en emaciación muscular en las
caderas y en la región lumbar. En los casos graves, la parálisis
puede extenderse a los miembros delanteros. Si los animales no
llegan a estar moribundos, la gravedad de la parálisis disminuye y
los animales se recuperan. La encefalomielitis alérgica experimental
aguda clásica puede ser observada en ratas de Lewis; siendo tales
modelos ideales para estudiar los efectos de una droga y/o
inmunoterapia dirigida a reducir la inflamación aguda del sistema
nervioso central.
La gradación clínica y la clasificación del
déficit neurológico depende de la raza de animal que se use y del
curso de la enfermedad. Se usa en general una clasificación de 0 a 6
puntos que va desde el estado asintomático (0) hasta la muerte
(6).
Antes de que dé comienzo la aparición de signos
clínicos, los animales pierden peso, y el examen del sistema
nervioso central revela infiltración de células mononucleares,
particularmente en el cordón espinal. A continuación de la aparición
de signos clínicos, números crecientes de células mononucleares
infiltran el sistema nervioso central y se acumulan en las zonas
subpiales del cordón espinal antes de la infiltración del
parénquima. Las técnicas de inmunohistoquímica y aislamiento celular
han identificado las células predominantes como macrófagos y células
T CD4+. Es digno de mención el hecho de que la desmielinación no es
un signo clásico de encefalomielitis alérgica experimental aguda, y
por consiguiente este ensayo es indicativo de la actividad
antiinflamatoria/inmunomoduladora en general, en lugar de tan sólo
aquélla que pudiera acompañar a las enfermedades desmielinantes.
La encefalomielitis alérgica experimental crónica
está caracterizada por una continuación del déficit neurológico sin
recuperación, a continuación de un episodio de encefalomielitis
alérgica experimental aguda.
Como alternativa, después de la fase aguda tiene
lugar una plena recuperación (remisión), a continuación de lo cual
tienen lugar fases de enfermedad clínica e histológica y adicionales
remisiones. Ésta es la encefalomielitis alérgica experimental
recurrente (y remitente) crónica, que se parece más a los síntomas
de la esclerosis múltiple que el modelo agudo. A pesar de que la
encefalomielitis alérgica experimental recurrente crónica ha sido
caracterizada en muchas especies, los modelos murinos tienen la
ventaja de un sistema inmunológico perfectamente caracterizado y de
la disponibilidad de una amplia gama de reactivos inmunológicos con
los cuales explorar la enfermedad.
Además de los efectos inflamatorios que existen
en el caso de la encefalomielitis alérgica experimental, la
encefalomielitis alérgica experimental recurrente crónica (CREAE)
presenta desmielinación primaria en estas zonas inflamatorias, que
es particularmente pronunciada en una fase de recaída.
Los resultados muy positivos obtenidos en los
ensayos de encefalomielitis alérgica experimental aguda con NA:NA
demuestran que el uso de la mitad de
propano-1,3-diol como elemento de
unión entre las dos mitades de acilo graso es de gran importancia,
puesto que el trinervonato de glicerilo (GTN), que consta de tres
mitades de acilo graso unidas a una cadena principal de glicerol, no
presentó efecto alguno en el curso de la encefalomielitis alérgica
experimental aguda. Sin embargo, no basta con suponer que la mera
presencia de la mitad de
propano-1,3-diol es en sí misma
suficiente para dar lugar a la obtención de resultados positivos.
Hemos descubierto que el NA:GLA también daba lugar a la obtención de
resultados positivos, mientras que los ensayos que se efectuaron
usando GLA:GLA presentaron ausencia de efecto. Esto es sorprendente
puesto que lo descrito en la descripción impresa de patente al
amparo del PCT Nº WO 96/34846, a la que se ha aludido anteriormente,
podría conducir a prever que el GLA:GLA daría lugar a la obtención
de resultados biológicos particularmente beneficiosos. Por
consiguiente, el simple hecho de unir entre sí dos mitades de ácido
graso (R^{1}) por medio de una mitad de
propano-1,3-diol no necesariamente
redunda en la obtención de un compuesto que tenga actividad
inmunomoduladora y/o antiinflamatoria.
Por consiguiente, parecería que los derivados de
propano-1,3-diol de ácido nervónico
tuviesen actividades imprevisibles y distintas en comparación con
las de los ácidos grasos que tienen dos o más enlaces insaturados de
C=C. Ha sido establecida para el NA:NA una relación entre estructura
y actividad, y se ha demostrado asimismo que el ácido nervónico, en
forma de los derivados NA:NA y NA:GLA, presenta actividad
antiinflamatoria general, lo cual no ha sido demostrado
anteriormente.
En consecuencia, los compuestos de fórmula (IB)
pueden ser usados para el alivio de la artritis reumatoide, la
espondilitis reumatoide, la osteoartritis, la artritis gotosa y
otras afecciones artríticas, la inflamación articular, la eccema y
otras afecciones cutáneas inflamatorias, afecciones oculares
inflamatorias entre las que se incluye la conjuntivitis, la piresis
y otras afecciones asociadas a inflamación, incluyendo la reducción
de la necrosis tisular en la inflamación crónica, la supresión del
rechazo tisular a continuación de la cirugía de trasplante, la
enfermedad de Crohn y la colitis ulcerativa.
Los compuestos de fórmula (IB) pueden ser también
usados en el tratamiento o la profilaxis de estados inflamatorios de
las vías aéreas tales como el asma y la bronquitis. Otras afecciones
que son adecuadas para el tratamiento mediante un inmunomodulador
incluyen el lupus eritematoso sistémico, la esclerosis múltiple, la
miastenia gravis, la esclerosis sistémica progresiva, la dermatitis
atópica, la hiperinmunoglobina E, la hepatitis activa crónica
negativa para el antígeno de la hepatitis B, la tiroiditis de
Hashimoto, la fiebre mediterránea familiar, la enfermedad de Grave,
la anemia hemolítica autoinmune, la cirrosis biliar primaria y la
enfermedad inflamatoria del intestino. Se incluyen entre las
adicionales afecciones que son adecuadas para el tratamiento
mediante un inmunoestimulador cualesquiera en las que el sistema
inmunológico se vea comprometido o quede discapacitado o
disfuncional, tal como sucede en el caso de los pacientes de SIDA, y
aquéllas que van asociadas a infecciones virales tales como la
infección por
VIH.
VIH.
Los compuestos de fórmula (IB) que son preferidos
para ser usados como antiinflamatorio y/o inmunosupresor incluyen el
NA:NA y el NA:GLA, y especialmente el NA:GLA; y el preferido para
ser usado como inmunoestimulador es el NA:DHA.
Naturalmente, la cantidad de un compuesto de
fórmula (IB) (el ingrediente activo) que se requiera para lograr un
efecto terapéutico variará en dependencia tanto del compuesto
particular del que se trate como de la ruta de administración y del
mamífero sometido a tratamiento. Una dosis adecuada de un compuesto
de fórmula (IB) para un mamífero que padezca de una afección como
las definidas anteriormente está situada dentro de la gama de dosis
que va desde 0,1 hasta 1000 mg de base por kilogramo de peso
corporal, siendo la dosificación más preferida la de 0,5 a 500 mg/kg
de peso corporal del mamífero, tal como una dosificación de 1 a 50
mg/kg, y por ejemplo una dosificación de 5 a 25 mg/kg; siendo las
administraciones efectuadas dos o tres veces al día.
En el caso del tratamiento o de la profilaxis de
afecciones inflamatorias de las vías aéreas, una adecuada dosis
antiasmática de un compuesto de fórmula (IB) es de 1 mg a 10 mg de
base por kilogramo de peso corporal, siendo la dosificación más
preferida de 1 mg a 5 mg/kg de peso corporal del mamífero, y por
ejemplo una dosificación de 1 a 2 mg/kg.
Si bien es posible que un ingrediente activo sea
administrado en solitario en forma de la sustancia química sin
aditivos, es preferible presentarlo en forma de formulación
farmacéutica. Las formulaciones de la presente invención tanto para
uso veterinario como para uso médico humano comprenden un
ingrediente activo en asociación con un vehículo farmacéuticamente
aceptable para el mismo y opcionalmente con otro(s)
ingrediente(s) terapéutico(s). El (los)
vehículo(s) debe(n) ser "aceptable(s)" en
el sentido de ser compatible(s) con los otros ingredientes de
la formulación y no perjudicial(es) para el receptor de la
misma.
Convenientemente, el ingrediente activo
constituye de un 0,1% a un 99,9% en peso de la formulación.
Adecuadamente, las dosificaciones unitarias de una formulación
contienen una cantidad de entre 0,1 mg y 1 g del ingrediente activo.
Preferiblemente, la formulación es adecuada para ser administrada de
una a seis veces al día, tal como de dos a cuatro veces al día. Para
administración tópica, el ingrediente activo preferiblemente
constituye de un 1% a un 2% en peso de la formulación, pero el
ingrediente activo puede constituir una cantidad tan elevada como la
de un 10% en peso. Las formulaciones que son adecuadas para
administración nasal o bucal, tales como las formulaciones
autopropelentes para dispensación en forma de polvo que se describen
más adelante, pueden comprender de un 0,1 a un 20% en peso, y por
ejemplo aproximadamente un 2% en peso, de ingrediente activo.
Las formulaciones incluyen las que se encuentran
en una forma adecuada para administración oral, oftálmica, rectal,
parenteral (incluyendo la subcutánea, la vaginal, la
intraperitoneal, la intramuscular y la intravenosa), intraarticular,
tópica, nasal o bucal.
Las formulaciones pueden ser convenientemente
presentadas en forma de dosificación unitaria y pueden ser
preparadas por cualesquiera de los métodos que son perfectamente
conocidos en el arte de la farmacia. Todos los métodos incluyen el
paso de poner al ingrediente activo en asociación con el vehículo,
que constituye uno o varios ingredientes accesorios. En general, las
formulaciones son preparadas poniendo al ingrediente activo uniforme
e íntimamente en asociación con un vehículo líquido o con un
vehículo sólido finamente dividido o con ambos, y conformando
entonces de ser necesario al producto para así convertirlo en la
formulación deseada.
Las formulaciones de la presente invención que
son adecuadas para administración oral pueden estar en forma de
unidades discretas tales como cápsulas, sellos, tabletas o pastillas
cada uno de los cuales o cada una de las cuales contendrá una
cantidad predeterminada del ingrediente activo; en forma de un polvo
o de gránulos; en forma de una solución o una suspensión en un
líquido acuoso o en un líquido no acuoso; o en forma de una emulsión
de aceite en agua o una emulsión de agua en aceite. El ingrediente
activo puede también estar en forma de un bolo, un electuario o una
pasta. Para tales formulaciones es adecuada una gama de diluciones
del ingrediente activo en el vehículo tal como una dilución del 1%
al 99%, preferiblemente una dilución del 5% al 50%, y más
preferiblemente una dilución del 10% al 25%. En dependencia del
nivel de dilución, la formulación será un líquido a temperatura
ambiente (a una temperatura del orden de aproximadamente 20ºC) o un
sólido de bajo punto de fusión. Por ejemplo, las composiciones en
las que el NA:GLA es el ingrediente activo son miscibles en todas
las proporciones a temperatura ambiente, mientras que las que
comprenden NA:NA son líquidos a temperatura ambiente cuando la
concentración es del orden de aproximadamente un 25% o menos.
Puede hacerse una tableta comprimiendo o
moldeando el ingrediente activo opcionalmente con uno o varios
ingredientes accesorios. Pueden prepararse tabletas comprimidas
comprimiendo en una máquina adecuada el ingrediente activo en forma
fluida, tal como en forma de polvo o de gránulos, opcionalmente
mezclado con un aglutinante, un lubrificante, un diluyente inerte,
un agente superficiactivo o un agente dispersante. Pueden hacerse
tabletas moldeadas moldeando en una máquina adecuada una mezcla del
ingrediente activo en polvo y un vehículo adecuado humedecido con un
diluyente inerte.
Las formulaciones para administración rectal
pueden estar en forma de un supositorio que incorpore el ingrediente
activo y un vehículo tal como manteca de cacao, o bien en forma de
un enema.
Las formulaciones que son adecuadas para
administración parenteral comprenden una solución, una suspensión o
una emulsión como las descritas anteriormente, y convenientemente
una preparación acuosa estéril del ingrediente activo que es
preferiblemente isotónica con la sangre del receptor.
Las formulaciones que son adecuadas para
administración intraarticular pueden estar en forma de una
preparación acuosa estéril del ingrediente activo que puede estar en
forma microcristalina, y por ejemplo en forma de una suspensión
microcristalina acuosa o en forma de una suspensión o dispersión
micelar. Pueden también usarse formulaciones liposomales o sistemas
poliméricos biodegradables para presentar el ingrediente activo
particularmente para administración tanto intraarticular como
oftálmica.
Las formulaciones que son adecuadas para
administración tópica incluyen preparaciones líquidas o semilíquidas
tales como linimentos, lociones o aplicaciones, emulsiones de aceite
en agua o de agua en aceite tales como cremas, ungüentos o pastas, o
soluciones o suspensiones tales como gotas. Por ejemplo, para
administración oftálmica el ingrediente activo puede ser presentado
en forma de colirios acuosos, y por ejemplo en forma de una solución
al 0,1-1,0%.
Las gotas según la presente invención pueden
comprender soluciones acuosas u oleosas estériles y pueden ser
preparadas disolviendo el ingrediente activo en una adecuada
solución acuosa que contenga un agente bactericida y/o fungicida y/o
cualquier otro preservativo adecuado. La solución resultante puede
ser entonces clarificada por filtración, transferida a un envase
adecuado, y a continuación envasada herméticamente y esterilizada
mediante autoclaveado o bien a base de mantenerla a una temperatura
de 90-100ºC por espacio de media hora. La solución
puede ser esterilizada por filtración y transferida al envase
mediante una técnica aséptica. Son preservativos y agentes
bactericidas y fungicidas adecuados para ser incluidos en las gotas
las sales fenilmercúricas (al 0,002%), el cloruro de benzalconio (al
0,01%) y el acetato de clorhexidina (al 0,01%). Los disolventes
adecuados para la preparación de una solución oleosa incluyen el
glicerol, el alcohol diluido y el propilenglicol.
Las lociones según la presente invención incluyen
aquéllas que son adecuadas para aplicación al ojo. Una loción ocular
puede comprender una solución acuosa estéril que contenga
opcionalmente un bactericida o preservativo y esté preparada por
métodos similares a los que son para la preparación de gotas. Las
lociones o los linimentos para aplicación a la piel pueden también
incluir un agente para acelerar el secado y refrigerar la piel, tal
como un alcohol, o un suavizador o humectador tal como glicerol o un
aceite tal como aceite de ricino o aceite de cacahuete.
Las cremas, los ungüentos o las pastas según la
presente invención son formulaciones semisólidas del ingrediente
activo para aplicación externa. Dichas formulaciones pueden hacerse
mezclando el ingrediente activo en forma granular o en polvo en
solitario o en solución o suspensión en una solución acuosa o no
acuosa en maquinaria adecuada con una base grasa o no grasa. La base
puede comprender uno o varios de los miembros del grupo que consta
de una parafina dura, blanda o líquida, glicerol, cera de abejas o
un jabón metálico; un mucílago; un aceite tal como un aceite
vegetal, como p. ej. aceite del almendra, de maíz, de cacahuete, de
ricino o de oliva; lanolina o sus derivados; o un éster de ácido
graso hecho a base de un ácido graso junto con un alcohol tal como
propilenglicol o macrogoles. La formulación puede también comprender
un adecuado agente superficiactivo, tal como un agente
superficiactivo aniónico, catiónico o no iónico tal como un glicol o
derivados polioxietilénicos del mismo. Pueden incorporarse agentes
de suspensión tales como gomas naturales, opcionalmente con otros
materiales inorgánicos tales como sílices silicáceas y otros
ingredientes tales como lanolina.
Las formulaciones que son adecuadas para
administración a la cavidad nasal o bucal incluyen aquéllas que son
adecuadas para inhalación o insuflación, e incluyen formulaciones
para pulverización y autopropelentes para dispensación en forma de
polvo tales como aerosoles y atomizadores. Cuando están en
dispersión, las formulaciones tienen preferiblemente un tamaño de
partículas que está situado dentro de la gama de tamaños de
partículas que va desde 10 hasta 200 \mu.
Tales formulaciones pueden estar en forma de un
polvo finamente molido para administración pulmonar desde un
dispositivo de inhalación de polvo, o de formulaciones
autopropelentes para dispensación en forma de polvo en las que el
ingrediente activo, en forma de un polvo finamente molido, puede
constituir hasta un 99,9% en peso de la formulación. En el caso de
la solución autopropelente y de las formulaciones para
pulverización, el efecto puede lograrse ya sea mediante la selección
de una válvula que presente las deseadas características de
pulverización (es decir, que sea capaz de producir una pulverización
que tenga el deseado tamaño de partículas) o bien a base de
incorporar el ingrediente activo en forma de un polvo en suspensión
con un tamaño de partículas controlado. Así la formulación, en lugar
de pasar al interior de los pulmones, es retenida en gran medida en
la cavidad nasal. Estas formulaciones autopropelentes pueden ser
formulaciones para dispensación en forma de polvo o bien
formulaciones que dispensen el ingrediente activo en forma de
gutículas de una solución o suspensión.
Las formulaciones autopropelentes para
dispensación en forma de polvo comprenden preferiblemente partículas
dispersadas de ingrediente activo sólido y un propelente líquido que
tiene un punto de ebullición de menos de 18ºC a presión atmosférica.
El propelente líquido puede ser cualquier propelente del que se sepa
que es adecuado para administración medicinal y puede comprender uno
o varios hidrocarburos alquílicos inferiores o hidrocarburos
alquílicos inferiores halogenados o mezclas de los mismos; siendo
especialmente preferidos los hidrocarburos alquílicos inferiores
clorados y fluorados. En general, el propelente constituye de un 50
a un 99,9% en peso de la formulación, mientras que el ingrediente
activo constituye de un 0,1 a un 20% en peso, y por ejemplo
aproximadamente un 2% en peso, de la formulación.
El vehículo farmacéuticamente aceptable en tales
formulaciones autopropelentes puede incluir otros constituyentes
además del propelente, y en particular un agente superficiactivo o
un diluyente sólido o ambos. Los agentes superficiactivos son
deseables por cuanto que los mismos impiden la aglomeración de las
partículas de ingrediente activo y mantienen al ingrediente activo
en suspensión. Son especialmente valiosos los agentes
superficiactivos no iónicos líquidos y los agentes superficiactivos
aniónicos sólidos o las mezclas de los mismos. Son agentes
superficiactivos no iónicos líquidos adecuados aquéllos que tienen
un balance hidrófilo-lipófilo (HLB, véase el Journal
of the Society of Cosmetic Chemists Vol. 1 pp.
311-326 (1949)) de menos de 10, y en particular
ésteres y ésteres parciales de ácidos grasos con alcoholes
polihídricos alifáticos, como por ejemplo monooleato de sorbitano y
trioleato de sorbitano, que están disponibles comercialmente como
"Span 80" (Nombre Comercial) y "Span 85" (Nombre
Comercial), respectivamente. El agente superficiactivo no iónico
líquido puede constituir de un 0,01 a un 20% en peso de la
formulación, si bien preferiblemente el mismo constituye menos de un
1% en peso de la formulación. Los adecuados agentes superficiactivos
aniónicos sólidos incluyen sales de metales alcalinos, amónicas y
amínicas de sulfosuccinato de dialquilo (donde los grupos alquilo
tienen de 4 a 12 átomos de carbono) y ácido alquilbencenosulfónico
(donde el grupo alquilo tiene de 8 a 14 átomos de carbono). Los
agentes superficiactivos aniónicos sólidos pueden constituir de un
0,01 a un 20% en peso de la formulación, si bien preferiblemente
constituyen menos de un 1% en peso de la composición. Los diluyentes
sólidos pueden ser ventajosamente incorporados en tales
formulaciones autopropelentes cuando la densidad del ingrediente
activo es considerablemente distinta de la densidad del propelente,
y ayudan asimismo a mantener al ingrediente activo en suspensión. El
diluyente sólido está en forma de un polvo fino que tiene
preferiblemente un tamaño de partículas que es del mismo orden como
el de las partículas del ingrediente activo. Los diluyentes sólidos
adecuados incluyen el cloruro sódico, el sulfato sódico y los
azúca-
res.
res.
Las formulaciones de la presente invención pueden
también estar en forma de una formulación autopropelente en la que
el ingrediente activo está presente en solución. Tales formulaciones
autopropelentes pueden comprender el ingrediente activo, el
propelente y el codisolvente, y ventajosamente un estabilizador
antioxidante. El propelente es uno o varios de los que ya han sido
citados anteriormente. Los codisolventes son elegidos por su
solubilidad en el propelente, por su capacidad para disolver el
ingrediente activo y por el hecho de tener el punto de ebullición
más bajo presentando al mismo tiempo estas propiedades anteriormente
mencionadas. Son adecuados codisolventes los alcoholes alquílicos
inferiores y las mezclas de los mismos. El codisolvente puede
constituir de un 5 a un 40% en peso de la formulación, si bien
preferiblemente constituye menos de un 20% en peso de la
formulación. Pueden incorporarse a tales formulaciones en solución
estabilizadores antioxidantes para inhibir el deterioro del
ingrediente activo, y son convenientes estabilizadores antioxidantes
los ascorbatos o bisulfitos metálicos. Dichos estabilizadores
antioxidantes están preferiblemente presentes en una cantidad de
hasta un 0,25% en peso de la formulación.
Tales formulaciones autopropelentes pueden ser
preparadas por cualquier método conocido en la técnica. Por ejemplo,
el ingrediente activo (ya sea en forma de partículas como las
descritas anteriormente en suspensión en un líquido adecuado o bien
en solución en una concentración de hasta un 20% en peso en un
codisolvente aceptable, según sea apropiado) es mezclado con
cualesquiera otros constituyentes del vehículo farmacéuticamente
aceptable. La mezcla resultante es enfriada e introducida en un
adecuado envase enfriado, y se añade a ello propelente en forma
líquida; y se cierra herméticamente el envase. Como alternativa,
tales formulaciones autopropelentes pueden ser preparadas mezclando
el ingrediente activo ya sea en forma de partículas como las
anteriormente descritas o bien en solución alcohólica o acuosa en
una concentración de un 2 a un 20% en peso, según sea apropiado,
junto con los restantes constituyentes del vehículo
farmacéuticamente aceptable aparte del propelente; introduciendo la
mezcla resultante, opcionalmente con algo de propelente, en el
interior de un envase adecuado; e inyectando el propelente, bajo
presión, al interior del envase a temperatura ambiente a través de
una válvula que constituye una parte del envase y es usada para
controlar la liberación de la formulación desde el mismo. Según lo
que es deseable, el envase es purgado retirando el aire del mismo en
una etapa conveniente en la preparación de la formulación
autopropelente.
Un envase adecuado para una formulación
autopropelente es uno que está provisto de una válvula que es apta
para ser accionada manualmente y está hecho de aluminio, acero
inoxidable o vidrio reforzado. Naturalmente, la válvula deberá ser
una que presente las deseadas características de pulverización de
partículas y suministre una cantidad fija de la formulación cada vez
que sea accionada la válvula, liberando por ejemplo aproximadamente
de 50 a 100 microlitros de formulación en cada suministro; siendo
perfectamente conocidos para los expertos en la materia los
dispositivos dispensadores de dosis dosificadas.
Las formulaciones de la presente invención pueden
también estar de forma de una solución acuosa o alcohólica diluida,
y opcionalmente en forma de una solución estéril, del ingrediente
activo destinada a ser usada en un nebulizador o atomizador, en el
que se usa una corriente de aire acelerado para producir una fina
neblina que consta de pequeñas gutículas de la solución. Tales
formulaciones contienen habitualmente un agente saborizante tal como
sacarina sódica y un aceite volátil. Un agente tamponante tal como
metabisulfito sódico y un agente superficiactivo pueden ser también
incluidos en una formulación de este tipo, que deberá también
contener un preservativo tal como metilhidroxibenzoa-
to.
to.
Otras formulaciones adecuadas para administración
nasal incluyen un polvo que tiene un tamaño de partículas de 20 a
500 micras y es administrado de la manera como se toma el rapé, es
decir, mediante inhalación rápida a través del conducto nasal desde
un envase del polvo al que se mantiene junto a la nariz.
Además de los ingredientes anteriormente
mencionados, las formulaciones de esta invención pueden incluir uno
o varios ingredientes adicionales tales como diluyentes, tampones,
agentes saborizantes, aglutinantes, agentes superficiactivos,
espesantes, lubricantes, preservativos como p. ej.
metilhidroxibenzoato (incluyendo antioxidantes), agentes
emulsionantes e ingredientes similares. Un vehículo o diluyente que
es particularmente preferido para ser usado en las formulaciones de
esta invención es un éster alquílico inferior de un ácido graso
monoinsaturado de C_{18} a C_{24} tal como el ácido oleico, como
por ejemplo oleato de etilo. Otros vehículos o diluyentes adecuados
incluyen triglicéridos o ésteres cápricos o caprílicos o mezclas de
los mismos, tales como los triglicéridos caprílicos/cápricos que se
venden con el nombre comercial Miglyol, como p. ej. el Miglyol
810.
Cualquier otro ingrediente terapéutico puede
comprender uno o varios de los siguientes: agentes antibióticos,
antifúngicos y antivirales.
Según la presente invención, se aportan por
consiguiente:
(a) un nuevo compuesto de fórmula (I), incluyendo
los compuestos de fórmula (IA) o una sal de los mismos y (IB);
(b) un método para preparar un compuesto de
fórmula (I) tal como mediante esterificación de un compuesto (IA)
para preparar un compuesto de fórmula (IB);
(c) una formulación farmacéutica que comprende
una cantidad eficaz y atóxica de un compuesto de fórmula (IB) y un
vehículo farmacéuticamente aceptable para el mismo;
(d) un método para preparar tales
formulaciones;
(e) un compuesto de fórmula (IB) destinado a ser
usado en medicina, tal como en la inhibición de inflamación y/o la
modulación del sistema inmunorregulador;
(f) el uso de un compuesto de fórmula (IB) en la
preparación de un medicamento tal como uno destinado al tratamiento
o a la profilaxis de la inflamación y/o de las afecciones asociadas
a la hiperestimulación o a la hipoestimulación del sistema
inmunológico; y
(g) el uso de un compuesto de fórmula (IA) en la
preparación de un compuesto de fórmula (IB).
Los ejemplos siguientes se dan a título de
ilustración de la presente invención. En las Descripciones y en los
Ejemplos siguientes, las estructuras de los productos finales fueron
determinadas por espectroscopia por resonancia magnética nuclear de
^{1}H y ^{13}C, usando un espectrómetro JEOL
JNM-GX 270. Los desplazamientos químicos de ^{1}H
y ^{13}C fueron medidos para soluciones en CDCl_{3} con respecto
al disolvente. Ner se refiere a la cadena de tetracosenoiloxi, Lin
se refiere a la cadena de \gamma-linolenoiloxi,
Doc se refiere a la cadena de docosahexanoiloxi, y Pol se refiere a
la cadena de propano-1,3-diol. Todas
las temperaturas que se indican son en grados Celsius.
Descripción
1
Pentacloruro de fósforo (0,123 moles, 25,6 g) fue
añadido gradualmente a una solución de ácido nervónico (suministrada
por la Aldrich Chemicals) (0,123 moles, 45,0 g) en éter etílico sin
agua (225 ml, C = 200 g.l^{-1}). La mezcla fue agitada a
temperatura ambiente bajo nitrógeno por espacio de 3 h y concentrada
hasta la sequedad, siendo así obtenido cloruro de
z-15-tetracosenoilo en forma de un
aceite bastante viscoso y de color amarillo pálido.
Descripción
2
Fueron calentados con agitación hasta 160ºC bajo
nitrógeno ácido
z,z,z-6,9,12-octadecatrienoico
(suministrado por la Sigma Chemicals) (0,180 moles, 50,0 g),
propano-1,3-diol (0,086 moles, 6,5
g) y ácido hipofosforoso (0,2 g). Tras haber transcurrido 6 h, la
cromatografía en capa delgada (éter de petróleo - éter etílico -
ácido acético 80:18:2) indicaba que la reacción había quedado
completada (R_{f}: 0,56). La mezcla fue enfriada hasta la
temperatura ambiente, y fue añadido éter de petróleo (700 ml). La
solución resultante fue lavada con bicarbonato sódico saturado (3x70
ml) y cloruro sódico saturado (3x70 ml). La solución fue entonces
secada con sulfato sódico anhidro y concentrada hasta la sequedad.
El monoéster y el ácido graso residuales fueron retirados por
destilación in vacuo (a 180ºC, 10^{-2} mbares). El aceite
resultante fue disuelto en éter de petróleo para formar una solución
al 33%, y fue pasado en descenso por una columna de sílice.
Finalmente fue retirado el hexano, habiendo sido así obtenido
1,3-di-(z,z,z-6,9,12-octadecatrienoiloxi)propano
en forma de un aceite incoloro.
^{1}H NMR: \delta: 0.89 (t, 6H, J=608 Hz,
Lin-H_{18}), 1.31 (m, 12H,
Lin-H_{15-17}), 1.41 (m, 4H, J=7.6
Hz, Lin-H_{4}), 1.65 (m, 4H, J=7.6Hz,
Lin-H_{3}), 1.96 (m, 2H, J=6.4 Hz,
Pol-H_{2}), 2.07 (dxt, 8H,
J_{4-5}=J_{14-15}=5.4 Hz,
J_{5-6}=J_{13-14}=6.8 Hz,
Lin-H_{5,14}), 2.31 (t, 4H, J=7.3 Hz,
Lin-H_{2}), 2.81 (t, 8H J=5.6 Hz,
Lin-H_{8.11}), 4.15 (t, 4H, J=6.8 Hz,
Pol-H_{1,3}), 5.30-5.43 (m, 12H,
Lin-H_{6,7,9,10,12,13}).
^{13}C CMR: \delta: 14.0
(Lin-C_{18}), 22.5 (Lin-C_{17}),
24.5 (Lin-C_{3}), 25.6
(Lin-C_{8,11}), 26.8
(Lin-C_{5}), 27.2 (Lin-C_{14}),
28.0 (Pol-_{2}), 29.0
(Lin-C_{4}), 29.3 (Lin-C_{15}),
31.5 (Lin-C_{16}), 34.1
(Lin-C_{2}), 60.8
(pol-C_{1,3})127.5
(Lin-C_{12}), 128.0 (Lin-C_{9}),
128.2 (Lin-C_{7}), 128.3
(Lin-C_{10}), 129.5 (Lin-C_{6}),
130.4 (Lin-C_{13}), 173.5
(Lin-C_{1}).
Descripción
3
Una solución de cloruro de
z-15-tetracosenoilo preparada según
la Descripción 1 (0,129 moles, 49,7 g) en cloruro de metileno (500
ml) fue añadida gota a gota (a lo largo de un periodo de tiempo de
2,5-3 h) a una mezcla de
propano-1,3-diol (0,780 moles, 58,9
g) y trietilamina (0,323 moles, 32,6 g) en cloruro de metileno (1200
ml) a 0ºC bajo nitrógeno. La mezcla fue dejada en agitación en el
baño de hielo por espacio de otras 2 h, hasta que la cromatografía
en capa delgada (éter de petróleo - éter etílico - ácido acético
80:18:2) indicó que empezaba a formarse el subproducto de la
reacción (R_{f} del producto: 0,16; R_{f} del subproducto:
0,63). La solución fue lavada con ácido sulfúrico 2M (2x150 ml),
bicarbonato sódico saturado (3x300 ml) y cloruro sódico saturado
(2x300 ml). La solución fue finalmente secada con sulfato sódico
anhidro, concentrada y purificada por cromatografía rápida sobre gel
de sílice (éter de petróleo - éter etílico 7:3), habiendo sido así
obtenido
1-hidroxi-3-(z-15-tetracosenoiloxi)propano
en forma de un sólido
blanco.
blanco.
^{1}H NMR: \delta: 0.85 (t, 3H, J=6.7 Hz,
Ner-H_{24}), 1.23 (m, 32H,
Ner-H_{4-13},
Ner-H_{18-23}), 1.59 (m, 2H,
J=7.3Hz, Ner-H_{3}, 1.84 (m, 2H, J=6.1 Hz,
Pol-H_{2}), 1.98 (dxt, 4H,
J_{14-15}=J_{16-17}=5.3 Hz,
J13._{14}=J_{17-18}=6.4 Hz,
Ner-H_{14,17}), 2.28 (t, 2H,
J_{2-3}=7.3 Hz, Ner-H_{2}), 3.66
(t, 2H, J=6.1 Hz, Pol-H_{1}), 4.21 (t, 2H, J=6.1
Hz, Pol-H_{3}), 5.33 (m, 2H
J_{14-15}=J_{16-17}=5.3 Hz,
Ner-H_{15,16}).
^{13}C NMR: \delta: 14.1
(Ner-C_{24}), 22.7 (Ner-C_{23}),
25.0 (Ner-C_{3}), 27.2-29.8
(Ner-C_{4-14},
Ner-C_{17-21}), 31.8
(Pol-C_{2}), 31.9 (Ner-C_{22}),
34.3 (Ner-C_{2}), 59.2
(Pol-C_{1}), 61.1 (Pol-C_{3}),
129.9 (Ner-C_{15,16}), 174.3
(Ner-C_{1}).
Descripción
4
Usando etanoato sódico en etanol, el ácido
nervónico fue convertido en el correspondiente éster etílico, y se
hizo que éste último reaccionase con glicerol a 160ºC. Esto tuvo
lugar en ausencia de disolvente y usando etóxido sódico como
catalizador. Al ser retirada agua en su formación, el equilibrio fue
fácilmente desplazado hacia la formación del triglicérido.
La siguiente tabla indica la evolución de la
reacción seguida por cromatografía de infiltración sobre gel;
habiendo sido tras 10 h convertido en trinervonato de glicerilo el
90% del material de partida.
Tiempo | Triglicéridos | Diglicéridos | Monoglicéridos | Nervonato de Etilo |
3 h | 56% | 26% | 3% | 15% |
5 h | 63% | 23% | 1% | 13% |
10 h | 90% | 0% | 0% | 10% |
Finalmente, la mezcla resultante fue destilada
bajo vacío usando un evaporador de laboratorio de película delgada
CD6 a 220ºC y 10^{-3} mbares. El nervonato de etilo residual fue
retirado con éxito, dejando trinervonato de glicerilo puro en forma
de un sólido blanco.
Una mezcla de
1-hidroxi-3-(z-15-tetracosenoiloxi)propano
preparado según la Descripción 3 (0,045 moles, 19,0 g), ácido
z,z,z-6,9,12-octadecatrienoico
(0,054 moles, 15,0 g) y ácido hipofosforoso (0,4 g) fue calentada
con agitación a 160ºC bajo nitrógeno. Tras haber transcurrido 5 h,
la cromatografía en capa fina (éter de petróleo - éter etílico -
ácido acético 80:18:2) indicaba que había reaccionado la mayor parte
del monoéster (R_{f}: 0,60). La mezcla fue enfriada hasta la
temperatura ambiente, y fue añadido éter de petróleo (800 ml). La
solución resultante fue lavada con bicarbonato sódico saturado (3x80
ml) y cloruro sódico saturado (3x80 ml). La solución fue entonces
secada con sulfato sódico anhidro, concentrada y purificada por
cromatografía rápida sobre gel de sílice (éter de petróleo - éter
etílico 19:1), habiendo sido así obtenido
1-(z,z,z-6,9,12-octadecatrienoiloxi)-3-(z-15-tetracosenoiloxi)propano
en forma de un aceite de color amarillo pálido.
^{1}H NMR: \delta: 0.88 (t, 3H, J=6.8 Hz,
Ner-H_{24}), 0.89 (t, 3H, J=6.8 Hz,
Lin-H_{18}). 1.26-1.36 (m, 38H,
Lin-H_{15-17},
Ner-H_{4-13},
Ner-H_{18-23}), 1.40 (m, 2H, J=7.8
Hz, Lin-H_{4}), 1.63 (m, 4H,
Lin-H_{3}, Ner-H_{3}), 1.96 (m,
2H, J=6.3 Hz, Pol-H_{2}), 2.02 (m, 4H,
Ner-H_{14-17}), 2.06 (m, 4H,
Lin-H_{5,14}), 2.30 (m, 4H, J=7.6 Hz,
Lin-H_{2}), Ner-H_{2}), 2.81 (t,
4H, J=5.8 Hz, Lin-H_{8,11}), 4.15 (t, 2H, J=6.3
Hz, Pol-H_{1}), 4.15 (t, 2H, J=6.3 Hz,
Pol-H_{3}), 5.30-5.43 (m, 8H,
Lin-H_{6,7,9,10,12,13,}
Ner-H_{15,16}).
^{13}C NMR: \delta: 14.0
(Lin-C_{18}), 14.1 (Ner-C_{24}),
22.6 (Lin-C_{17}), 22.7
(Ner-C_{23}), 24.5 (Lin-C_{3}),
24.9 (Ner-C_{3}), 25.6
(Lin-C_{8,11}), 26.8
(Lin-C_{5}), 28.0 (Pol-C_{2}),
29.1-29.8 (Lin-C_{4,14,15,}
Ner-C_{4-14},
Ner-C_{17-21}), 31.5
(Lin-C_{16}), 31.9 (Ner-C_{22}),
34.1 (Lin-C_{2}), 34.2
(Ner-C_{2}), 60.8 (Pol-C_{1,3}),
127.6 (Lin-C_{12}), 128.0
(Lin-C_{9}), 128.3 (Lin-C_{7}),
128.4 (Lin-C_{10}), 129.5
(Lin-C_{6}), 129.9
(Ner-C_{15,16}), 130.4
(Lin-C_{13}), 173.5 (Lin-C_{1}),
173.7 (Ner-C_{1}).
(a) Una mezcla de
1-hidroxi-3-(z-15-tetracosenoiloxi)propano
preparado según la Descripción 3 (0,033 moles, 14,0 g), ácido
z-4,7,10,13,16,19-docosahexaenoico
(0,040, 13,0 g) y ácido hipofosforoso (0,3 g) fue calentada con
agitación a 160ºC bajo nitrógeno. Tras haber transcurrido 5 h, la
cromatografía en capa delgada (éter de petróleo - éter etílico -
ácido acético 80:18:2) indicaba que había reaccionado la mayor parte
del monoéster (R_{f}: 0,56). La mezcla fue enfriada hasta la
temperatura ambiente, y fue añadido éter de petróleo (600 ml). La
solución resultante fue lavada con bicarbonato sódico saturado (3x60
ml) y cloruro sódico saturado (3x60 ml). La solución fue entonces
secada con sulfato sódico anhidro, concentrada y purificada por
cromatografía rápida sobre gel de sílice (éter de petróleo - éter
etílico 32:1), habiendo sido así producido
1-(z-4,7,10,13,16,19-docosahexaenoiloxi)-3-(z-15-tetracosenoiloxi)propano
en forma de un aceite de color amarillo pálido.
^{1}H NMR: \delta: 0.88 (t, 3H, J=6.6 Hz,
Ner-H_{24}), 0.97 (t, 3H, J=7.6 Hz,
Doc-H_{22}), 1.26(m, 32H,
Ner-H_{4-13,}
Ner-H_{18-23}), 1.61 (m, 2H, J=7.3
Hz, Ner-H_{3}), 1.96 (m, 2H, J=6.4 Hz,
Pol-H_{2}), 2.03 (m, 4H, J=6.8 Hz,
Ner-H_{14-17}), 2.08 (m, 2H, J=7.6
Hz, Doc-H_{21}), 2.29 (t, 2H, J=7.6 Hz,
Ner-H_{2}), 2.37 (m, 4H,
Doc-H_{2,3}), 2.85 (m, 10H
Doc-H_{6,9,12,15,18}), 4.15 (dxt, 4H,
J_{1,2}=J_{2,3}=6.1 Hz, Pol-H_{1,3}),
5.33-5.40 (m, 14H,
Doc-H_{4,5,7,8,10,11,}
Doc-H_{13,14,16,17,19,20,}
Ner-H_{15,16}).
^{13}C NMR: \delta: 14.1
(Ner-C_{24}), 14.2 (Doc-C_{22}),
20.5 (Doc-C_{21}), 22.7
(Doc-C_{3}, Ner-C_{23}), 24.9
(Ner-C_{3}), 25.6
(Doc-C_{5,9,12,15,18}), 27.2-29.7
(Pol-C_{2},
Ner-C_{4-14},
Ner-C_{17-21}), 31.9
(Ner-C_{22}), 34.1 (Doc-C_{2}),
34.2 (Ner-C_{2}), 60.7
(Pol-C_{3} 61.0 (`Pol-C_{1}),
127.0 (Doc-C_{19}), 127.8
(Doc-C_{5,16}), 128.0-128.2
(Doc-C_{7,8,10,11,13,14,}), 128.5
(Doc-C_{17}), 129.3 (Doc-C_{4}),
129.9 (Ner-C_{15,16}), 132.0
(Doc-C_{20}), 172.9 (Doc-C_{1}),
173.7 (Ner-C_{1}).
Una mezcla de ácido
z-15-tetracosenoico (suministrado
por la Sigma Chemicals) (0,286 moles, 104,7 g),
propano-1,3-diol (0,136, 10,3 g) y
ácido hipofosforoso (0,4 g) fue calentada con agitación a 160ºC bajo
nitrógeno. Tras haber transcurrido 6 h, la cromatografía en capa
delgada (éter de petróleo - éter etílico - ácido acético 80:18:2)
indicaba que la reacción había quedado concluida (R_{f}: 0,63). La
mezcla fue enfriada hasta la temperatura ambiente, y fue añadido
éter de petróleo (1500 ml). La solución resultante fue lavada con
bicarbonato sódico saturado (3x150 ml) y cloruro sódico saturado
(3x150 ml). La solución fue entonces secada con sulfato sódico
anhidro y concentrada hasta la sequedad. El monoéster y el ácido
graso residuales fueron retirados por destilación in vacuo (a
230ºC y 10^{-2} mbares). El aceite resultante fue disuelto en éter
de petróleo para así formar una solución al 33%, y fue pasado en
descenso por una columna de sílice. Finalmente fue retirado el
hexano, habiendo sido así obtenido
1,3-di-(z-15-tetracosenoiloxi)propano
en forma de un aceite incoloro.
^{1}H NMR: \delta: 0.88 (t, 6H, J=6.8 Hz,
Ner-H_{24}), 1.26 (m, 64H,
Ner-H_{13-14}
Ner-H_{18-23}), 1.59 (m, 4H,
J=7.6Hz, Ner-H_{3}), 1.96 (m, 2H, J=6.3 Hz
ol-H_{2}), 2.01 (dxt, 8H,
J_{14-15}=J_{16-17}=5.6 Hz,
J13._{14}=J_{17-18}=6.5 Hz,
Ner-H_{14,17}), 2.29 (m, 4H,
J_{2-3}=7.6 Hz, Ner-H_{2}),4.15
(t, 4H, J=6.3 Hz, Pol-H_{1,3}), 5.34 (5.34 (m, 4H
J_{14-15}=J_{16-17}=5.6 Hz,
Ner-H_{15,16}).
^{13}C NMR: \delta: 14.1
(Ner-C_{24}), 22.7 (Ner-C_{23}),
24.9 (Ner-C_{3}), 27.2-29.8
(Ner-C_{4-14},
(Ner-C_{17-21}),
Pol-C_{2}), 31.9 (Ner-C_{22}),
34.2 (Ner-C_{2}), 60.8
(Pol-C_{1,3}), 129.9
(Ner-C_{15,16}), 173.7
(Ner-C_{1}).
Fueron comparados como se indica a continuación
los efectos profilácticos ejercidos por el GLA:GLA (Descripción 2) y
por el NA:NA (Ejemplo 3) en la aparición y el desarrollo de
encefalomielitis alérgica experimental (EAE) en la rata de
Lewis:
A ratas macho de Lewis que pesaban
230-290 g el día de la inoculación les fueron
inyectados en cada almohadilla plantar trasera 0,1 ml de una
emulsión que contenía partes iguales de cordón espinal de cobayo,
salina tamponada con fosfato (PBS) y adyuvante incompleto de Freund
suplementado con 10 mg/ml de Mycobacterium tuberculosis
H_{37}Ra.
Los animales fueron pesados diariamente y
valorados con respecto a la enfermedad neurológica a partir del día
7 postinocualación (PI). Las ratas que presentaban síntomas de
encefalomielitis alérgica experimental fueron puntuadas de la manera
siguiente: 1: cola flácida (FT); 2: hipotonía de los miembros
traseros (HLH); 3: parálisis parcial de los miembros traseros
(PHLP); 4: parálisis total de los miembros traseros (CHLP); 5:
moribunda o muerta.
El GLA:GLA y el NA:NA (los aceites sin mezcla)
fueron administrados oralmente (a 45ºC) 5 días antes de la
inoculación y por espacio de 25 días tras la inoculación a razón de
una dosis de 1000 mg/kg de peso corporal/día. Los animales
sensibilizados de control recibieron vehículo de salina tamponada
con fosfato o se dejaron sin dosis, y cada grupo de tratamiento
contenía 7 animales. Entonces se tomaron muestras individuales de
los cerebros y de la sangre, y dichas muestras se almacenaron a
-20ºC antes del análisis de los ácidos grasos. Para 2 animales se
puso fin al tratamiento con NA:NA el día 21, puesto que las ratas
opusieron resistencia a los repetidos intentos de administrar la
droga oralmente.
Las ratas sensibilizadas a las que se dejó sin
dosis y los animales que recibían vehículo perdieron peso corporal
entre los días 10 y 12 tras la inoculación. Las ratas que fueron
tratadas con GLA:GLA y NA:NA presentaron pérdida de peso comenzando
a los 10 días después de la inoculación. Los animales de todos los
grupos de tratamiento ganaron peso corporal a los
18-20 días después de la inoculación.
Las ratas que se dejaron sin dosis y los animales
tratados con vehículo presentaron signos iniciales de enfermedad
entre los días 11 y 12 postinoculación (Tabla 1). La aparición de
los síntomas, la desaparición de los signos y la duración de la
enfermedad en las ratas tratadas con GLA:GLA y con NA:NA no fueron
significativamente distintas en comparación con los grupos de
control. Es interesante señalar que todos los animales que fueron
tratados con NA:NA sobrevivieron en comparación con los grupos de
control y tratado con GLA:GLA.
Tratamiento | Número de los | Día medio de la | Día medio de la | Duración media | Número de |
que enfermaron/ | aparición de los | desaparición final de | de los síntomas | individuos | |
total | síntomas (\pm DE) | los síntomas (\pm DE) | (días \pm DE) | muertos/total | |
Sin dosis | 7/7 | 12.4 \pm 1.0 | 17.8\pm1.2 | 5.4 \pm 1.1 | 1/7 |
Vehículo | 7/7 | 11.6 \pm 0.8 | 18.4 \pm 1.1 | 6.8 \pm 1.1 | 2/7 |
GLA:GLA | 7/7 | 11.9 \pm 0.9 | 18.0 \pm 0.7 | 6.1 \pm 0.8 | 2/7 |
NA:NA | 7/7 | 12.4 \pm 1.5 | 17.6 \pm 1.6 | 5.2 \pm 1.6 | 0/7 |
(\pm DE = \pm Desviación Estándar) |
Las puntuaciones neurológicas acumulativas
medias, que constituían una expresión gráfica del desarrollo diario
de la enfermedad, para las ratas que se dejaron sin dosis y para las
que fueron tratadas con vehículo fueron equiparables durante las
etapas iniciales de la encefalomielitis alérgica experimental. Los
datos acumulativos que fueron registrados para los animales que
recibieron vehículo llegaron a superar los valores que fueron
anotados para las ratas a las que se dejó sin dosis pero fueron
similares al perfil de enfermedad que presentó el grupo que fue
tratado con GLA:GLA. Las ratas que fueron inoculadas para
provocarles encefalomielitis alérgica experimental y fueron tratadas
con NA:NA tuvieron unas puntuaciones que fueron siempre inferiores a
las de los grupos de tratamiento en los que se dejó a los individuos
sin dosis y los individuos recibieron vehículo, respectivamente,
comenzando a los 14 días postinoculación.
Todas las ratas de control, tratadas con vehículo
y que recibieron dosis de GLA:GLA presentaron FT y HLH (Tabla 2). Es
interesante señalar que solamente 4 de 7 animales tratados con NA:NA
presentaron síntomas iniciales de la enfermedad. Además, ninguno de
los animales que recibieron NA:NA experimentó PHLP o CHLP, lo cual
está en marcado contraste con el grupo de control que recibió
vehículo y con el grupo que fue tratado con GLA:GLA. Por añadidura,
a los animales que recibieron dosis de NA:NA se les veía más activos
y menos incontinentes en comparación con las ratas a las que se dejó
sin dosis y con las que fueron tratadas con vehículo.
Síntoma | Tratamiento* | |||
Sin dosis | Vehículo | GLA:GLA | NA:NA | |
FT | 7/7 | 7/7 | 7/7 | 7/7 |
HLH | 7/7 | 7/7 | 7/7 | 4/7 |
PHLP | 3/7 | 5/7 | 4/7 | 0/7 # |
CHLP | 1/7 | 3/7 | 3/7 | 0/7 |
* Número de animales que presentaron síntomas/total | ||||
# P < 0,01 para el NA:NA frente al vehículo. Prueba de la probabilidad exacta de Fischer |
El tratamiento de las ratas que fueron inoculadas
para desarrollar encefalomielitis alérgica experimental con GLA:GLA
no alteró el curso de la encefalomielitis alérgica experimental
neurológica en comparación con las ratas a las que se dejó sin
dosificación y con las que fueron tratadas con vehículo. Sin
embargo, la administración de dosis de NA:NA a los animales que
habían sido sensibilizados para desarrollar encefalomielitis
alérgica experimental redujo claramente la intensidad global de la
enfermedad y redujo significativamente en particular la incidencia
de parálisis parcial en comparación con el grupo de tratamiento que
recibió vehículo. Los resultados sugieren que el NA:NA tiene un modo
inmunomodulador o antiinflamatorio de acción en el desarrollo de la
encefalomielitis alérgica experimental.
Ejemplo
Comparativo
Fueron valorados los efectos profilácticos que el
trinervonato de glicerilo (GTN, Descripción 4) ejerce en la
encefalomielitis alérgica experimental aguda en la rata de Lewis. La
inducción y la valoración de la encefalomielitis alérgica
experimental fueron como para el Ejemplo 4. El régimen de
dosificación supuso una administración oral en Miglyol 810 cinco
días antes de la inoculación y por espacio de 20 días tras la
inoculación. (Hágase referencia al Ejemplo 8 con respecto a la
insignificancia del uso de vehículos de salina tamponada con fosfato
o de Miglyol).
Los animales ganaron peso hasta el día 10, lo que
demuestra que el GTN administrado en la dieta no indujo efecto
adverso importante alguno. Los resultados indican la pérdida de peso
corporal característica en los animales tanto de control como
tratados antes de la aparición de los síntomas. No fueron distintos
los valores correspondientes a los animales de control y a los
animales que fueron tratados.
Todos los animales inoculados presentaron
déficits neurológicos asociados a la encefalomielitis alérgica
experimental. La aparición y desaparición de los síntomas junto con
la duración de la enfermedad en los animales tratados con GTN no
fueron significativamente distintas de las correspondientes a los
grupos en los que los individuos recibieron vehículo o fueron
dejados sin dosis (Tabla 3).
Tratamiento | Nº de ratas que | Día medio de | Día medio de | Duración media | Número de |
enfermaron | aparición de los | desaparición de | de los síntomas | ratas muertas | |
síntomas | los síntomas | (días) | |||
Sin dosis | 10/10 | 11.3 \pm 1.3 | 17.1 \pm 1.0 | 5.8 \pm 1.3 | 0/10 |
Vehículo | 10/10 | 11.5 \pm 0.5 | 17.0 \pm 0.5 | 5.5 \pm 0.5 | 0/10 |
GTN | 10/10 | 11.2 \pm 1.2 | 17.0 \pm 1.2 | 5.8 \pm 1.1 | 0/10 |
La Tabla 4 indica que las de un
70-80% de las ratas a las que se dejó sin dosis y
que fueron tratadas con vehículo experimentaron enfermedad
paralítica, y los datos obtenidos de los animales que recibieron GTN
confirman que el tratamiento no afectó significativamente a
parámetro alguno asociado a los déficits neurológicos en las ratas
que contrajeron encefalomielitis alérgica experimental.
Síntoma o estado | Tratamiento | ||
Sin dosis (%)* | Vehículo (%)* | GTN (%)* | |
PFT | 100 | 100 | 100 |
CFT | 100 | 100 | 100 |
HLH | 90 | 100 | 90 |
PHLP | 70 | 80 | 70 |
CHLP | 30 | 60 | 40 |
MD | 0 | 0 | 0 |
Estos resultados establecieron que el NA (NA =
ácido nervónico) no cruza la barrera hematoencefálica en esta forma.
Esto es sorprendente, puesto que el GTN tiene un enlace O-éster, lo
cual une las moléculas de ácido nervónico al glicerol. El glicerol
se encuentra en gran medida en la estructura de los lípidos
cerebrales, actuando como vehículo que es capaz de cruzar la barrera
hematoencefálica, y podría haber sido de esperar que el mismo
facilitase el paso del lípidos tales como el NA a través de esta
membrana. Esta prueba demuestra que las ideas anteriores relativas a
los adecuados vehículos para lípidos no pueden aplicarse al NA.
Usando una formulación alternativa fue valorado
como se indica a continuación el efecto profiláctico ejercido por el
compuesto del Ejemplo 3 (NA:NA) en la aparición y el desarrollo de
encefalomielitis alérgica experimental neurológica en la rata de
Lewis:
A ratas macho de Lewis que pesaban
240-360 g el día de la inoculación les fueron
inyectados en cada almohadilla plantar trasera 0,1 ml de una
emulsión que contenía partes iguales de cordón espinal de cobayo,
salina tamponada con fosfato (PBS) y adyuvante incompleto de Freund
suplementado con 10 mg/ml de Mycobacterium tuberculosis
H_{37}Ra.
Los animales fueron pesados diariamente y
valorados en relación con la enfermedad neurológica desde el día 7
postinocualación (PI). Las ratas que presentaron síntomas de
encefalomielitis alérgica experimental fueron puntuadas de la manera
siguiente: 1: cola flácida (FT); 2: hipotonía de los miembros
traseros (HLH); 3: parálisis parcial de los miembros traseros
(PHLP); 4: parálisis total de los miembros traseros (CHLP); 5:
moribunda o muerta.
El NA:NA (en forma de solución al 10% en peso en
oleato de etilo B.P.) (B.P. = Farmacopea Británica) fue administrado
oralmente (a 35-37ºC) 5 días antes de la inoculación
y por espacio de 22 días tras la inoculación a razón de una dosis de
1000 mg/kg de peso corporal/día. Los animales sensibilizados de
control recibieron vehículo de oleato de etilo o fueron dejados sin
dosis, y cada grupo de tratamiento contenía 10 animales. El día 23
tras la inoculación fueron tomadas muestras de los cerebros y del
plasma de las ratas individuales, y dichas muestras fueron
almacenadas a -20ºC antes del análisis de los ácidos grasos.
Se usó la prueba t de Student para valorar las
diferencias significantes en las puntuaciones neurológicas, y se usó
la prueba de la probabilidad exacta de Fisher para establecer la
presencia o ausencia de síntomas.
Las ratas sensibilizadas a las que se dejó sin
dosis y los animales que recibieron vehículo o NA:NA experimentaron
una pérdida característica de peso corporal entre los días 10 y 12
postinoculación. Los animales de todos los grupos de tratamiento
ganaron peso corporal a los 16-18 días
postinoculación.
Todas las ratas sensibilizadas a las que se dejó
sin dosis y a las que se trató con vehículo presentaron signos
neurológicos de encefalomielitis alérgica experimental (Tabla 3). En
contraste con ello, tan sólo los del 60% de los animales que
recibieron NA:NA experimentaron síntomas de la enfermedad. El día
medio de aparición y desaparición de los síntomas no se vio
significativamente alterado por el tratamiento con NA:NA. La
duración media de los síntomas en las ratas que recibieron NA:NA se
vio reducida, pero no significativamente, en comparación con el
grupo en el que se dejó a las ratas sin dosis y con el grupo en el
que las ratas fueron tratadas con oleato de etilo.
Tratamiento | Nº de ratas que | Día medio de | Día medio de | Duración media | Número de |
enfermaron | aparición de | desaparición de | de los síntomas | ratas muertas | |
los síntomas | los síntomas | (días) | |||
Sin dosis | 10/10 | 11.7 \pm 0.5 | 16.6 \pm 0.5 | 4.9 \pm 0.6 | 2/10 |
Vehículo | 10/10 | 12.2 \pm 0.6 | 17.2 \pm 0.6 | 4.9 \pm 0.9 | 0/10 |
NA:NA | 6/10* | 12.3 \pm 0.8 | 16.3 \pm 1.0 | 4.0 \pm 1.2 | 0/10 |
*P < 0,05 para NA:NA en comparación con los grupos sin dosis y tratado con vehículo |
Las puntuaciones neurológicas para las ratas que
recibieron dosis de NA:NA fueron más bajas en todos los casos en
comparación con los valores que fueron registrados para los animales
a los que se dejó sin dosis y para los animales que fueron tratados
con vehículo. Las puntuaciones neurológicas acumulativas medias para
las ratas a las que se dejó sin dosis y para los animales que
recibieron oleato de etilo fueron similares a lo largo de todo el
estudio. En contraste con ello, las puntuaciones acumulativas para
las ratas que fueron tratadas con NA:NA se vieron reducidas a los
12-13 días postinoculación y fueron marcadamente más
bajas que los valores de control durante el resto del estudio.
El número de ratas que habiendo sido tratadas con
NA:NA presentaron FT y HLH se vio significativamente reducido en
comparación con el grupo de tratamiento en el que se dejó a los
animales sin dosis y con el grupo de tratamiento en el que los
animales recibieron vehículo (Tabla 6 FT: P < 0,05, HLH: P <
0,01). Por añadidura, fueron menos los animales que habiendo
recibido NA:NA experimentaron síntomas paralíticos de
encefalomielitis alérgica experimental. Además, las ratas que fueron
tratadas con NA:NA estaban más activas, eran más conscientes de su
entorno y eran menos incontinentes en comparación con los grupos de
control.
Síntoma | Tratamiento* | ||
Sin dosis | Vehículo | NA:NA | |
FT | 10/10 | 10/10 | 6/10** |
HLH | 10/10 | 10/10 | 4/10*** |
PHLP | 6/10 | 7/10 | 3/10 |
CHLP | 2/10 | 2/10 | 1/10 |
* Número de animales que presentaban síntomas/total | |||
\begin{minipage}[t]{150mm}** P < 0,05 para NA:NA en comparación con el grupo en el que se dejó a los animales sin dosis y con el grupo en el que los animales recibieron vehículo\end{minipage} | |||
\begin{minipage}[t]{150mm}*** P < 0,01 para NA:NA en comparación con el grupo en el que se dejó a los animales sin dosis y con el grupo en el que los animales recibieron vehículo. \end{minipage} |
Este estudio demuestra claramente que el NA:NA
reduce significativamente los incidentes de enfermedad e inhibe la
aparición de síntomas iniciales no paralíticos a pesar de la
anterior pérdida característica de peso corporal en todas las ratas
tratadas. Asimismo, las puntuaciones neurológicas diarias se vieron
marcadamente reducidas por el tratamiento con NA:NA.
El anterior estudio (Ejemplo 4) para determinar
la eficacia del NA:NA en la encefalomielitis alérgica experimental
demostró que el compuesto reducía la intensidad global de la
enfermedad y suprimía significativamente los síntomas paralíticos en
comparación con el tratamiento con vehículo. La presente
investigación (Ejemplo 5) ha demostrado que la reformulación del
NA:NA en oleato de etilo facilitó la administración (permitiendo que
su temperatura se redujese hasta 35-37ºC) sin
pérdida de eficacia del compuesto en la encefalomielitis alérgica
experimental.
Los resultados indican claramente que el NA:NA
tiene un perfil inmunomodulador o antiinflamatorio de actividad en
la encefalomielitis alérgica experimental aguda en la rata.
Fue valorado como se indica a continuación el
efecto profiláctico de los compuestos del Ejemplo 1 (NA:GLA) y del
Ejemplo 2 (NA:DHA) en la aparición y el desarrollo de
encefalomielitis alérgica experimental neurológica en la rata de
Lewis:
A ratas macho de Lewis que pesaban
230-280 g el día de la inoculación les fueron
inyectados en cada almohadilla plantar trasera 0,1 ml de una
emulsión que contenía partes iguales de cordón espinal de cobayo,
salina tamponada con fosfato (PBS) y adyuvante incompleto de Freund
suplementado con 10 mg/ml de Mycobacterium tuberculosis
H_{37}Ra.
Los animales fueron pesados diariamente y
valorados con respecto a la enfermedad neurológica a partir del día
7 postinocualación (PI). Las ratas que presentaban síntomas de
encefalomielitis alérgica experimental fueron puntuadas de la manera
siguiente: 1: cola flácida (FT); 2: hipotonía de los miembros
traseros (HLH); 3: parálisis parcial de los miembros traseros
(PHLP); 4: parálisis total de los miembros traseros (CHLP); 5:
moribunda o muerta.
El NA:GLA (aceite sin mezcla) fue administrado
oralmente 5 días antes de la inoculación, y la administración fue
continuada por espacio de 25 días postinoculación, a razón de una
dosis de 750 mg/kg de peso corporal/día y de 1000 mg/kg de peso
corporal/día. Fue administrado NA:DHA (aceite sin mezcla) mediante
un idéntico régimen de dosificación a razón de una dosis de 500
mg/kg de peso corporal/día. Los animales sensibilizados de control
recibieron vehículo de PBS o no recibieron dosificación alguna. Los
grupos de tratamiento en los que los animales no recibieron
dosificación alguna, fueron tratados con vehículo y recibieron una
dosis baja de NA:GLA contenían 7 animales. Cuatro ratas recibieron
una dosis alta de NA:GLA, y 3 ratas recibieron dosis de NA:DHA. Se
tomaron entonces para análisis muestras individuales de los cerebros
y de la sangre.
Las ratas sensibilizadas que no recibieron
dosificación y los animales que recibieron vehículo perdieron peso
entre los días 8 y 10. Análogamente, las ratas que fueron tratadas
con NA:DHA presentaron pérdida de peso corporal comenzando a los 8
días después de la inoculación. Sin embargo, las ratas que fueron
tratadas con NA:DHA experimentaron un mayor incremento del peso
corporal durante la semana que siguió a la sensibilización, en
comparación con los grupos de control y de los animales que
recibieron dosificación. La pérdida de peso corporal que fue
experimentada por los animales que fueron tratados con una dosis
baja y alta de NA:GLA comenzó 2 días más tarde en comparación con lo
registrado en otros grupos de tratamiento.
Las ratas que no recibieron dosis y los animales
que recibieron vehículo presentaron signos iniciales de enfermedad
entre los días 10 y 11 postinocualación (Tabla 7).
Tratamiento | Número de | Día medio de la | Día medio de la | Número de |
(mg/kg/día) | animales que | aparición de los | desaparición final de | animales |
enfermaron/total | síntomas (\pm DE) | los síntomas (\pm DE) | muertos/total | |
Sin dosis | 7/7 | 10.7 \pm 0.8 | 20.3 \pm 0.8 | 0/7 |
Vehículo | 7/7 | 10.9 \pm 1.2 | 19.2 \pm 1.3 | 2/7 |
NA:GLA (750) | 7/7 | 11.3 \pm 0.8 | 19.0 \pm 0.8 | 0/7 |
NA:GLA (1000) | 4/4 | 11.3 \pm 0.5 | 18.8 \pm 1.3 | 0/4 |
NA:DHA (500) | 3/3 | 10.3 \pm 0.6 | 19.3 \pm 1.2 | 0/3 |
La aparición de la enfermedad se vio retrasada en
las ratas que fueron tratadas con NA:GLA y acelerada en los animales
a los que les fue administrado NA:DHA en comparación con los grupos
de control. Sin embargo, los valores para los animales que
recibieron dosis no fueron significativamente distintos de los datos
que fueron registrados para los grupos de tratamiento en los que los
animales no recibieron dosis y recibieron vehículo.
Las puntuaciones clínicas acumulativas medias,
que constituyen una expresión gráfica del desarrollo diario de la
enfermedad, para las ratas que no recibieron dosis de tratamiento y
para las que fueron tratadas con vehículo fueron equiparables a lo
largo de todo el experimento. Los datos que fueron registrados para
los animales que recibieron una dosis baja y alta de NA:GLA fueron
en todos los casos más bajos que los valores de control durante todo
el estudio. La puntuación diaria para las ratas que fueron tratadas
con NA:DHA se vio mejorada en comparación con los niveles que fueron
anotados para los animales de control y para los que fueron tratados
con NA:GLA. Todas las ratas de control y tratadas con droga
presentaron FT y HLH (Tabla 8). Sin embargo, fueron menos los
animales que habiendo recibido NA:GLA experimentaron PHLP (dosis
baja: 57% / dosis alta: 50%) y CHLP (dosis baja: 43% / dosis alta:
25%) en comparación con los controles y con las ratas que fueron
tratadas con NA:DHA. Asimismo, fue más temprano el desarrollo de
CHLP en las ratas que recibieron NA:DHA (11,3 \pm 1,3 y 12,7 \pm
1,3 respectivamente).
Síntoma | Tratamiento* (mg/kg/día) | ||||
Sin dosis | Vehículo | NA:GLA | NA:GLA | NA:GLA | |
(750) | (1000) | (500) | |||
FT | 7/7 | 7/7 | 7/7 | 4/4 | 3/3 |
HLH | 7/7 | 7/7 | 7/7 | 4/4 | 3/3 |
PHLP | 7/7 | 7/7 | 4/7 | 2/4 | 3/3 |
CHLP | 6/7 | 7/7 | 3/7 | 1/4 | 3/3 |
* Número de animales que presentaron síntomas/total |
La administración profiláctica de NA:GLA a razón
de 750 y 1000 mg/kg de peso corporal/día a ratas sensibilizadas para
desarrollar encefalomielitis alérgica experimental aguda retrasó la
aparición y redujo claramente la incidencia y la gravedad de la
enfermedad en comparación con los grupos de control. Los resultados
sugieren que el compuesto tiene actividad inmunosupresora o
antiinflamatoria, lo cual influenció la respuesta inmunológica al
neuroantígeno y la subsiguiente manifestación de la enfermedad. En
contraste con ello, el tratamiento con HA:DHA intensificó los
síntomas neurológicos, posiblemente debido a una intensificación de
la fase de inducción de la encefalomielitis alérgica experimental,
lo cual sugiere que el compuesto puede actuar como
inmunopotenciador.
Fueron valorados los efectos profilácticos
ejercidos por los compuestos del Ejemplo 3 (NA:NA) y del Ejemplo 1
(NA:GLA) en la encefalomielitis alérgica experimental crónica en el
modelo del ratón de Biozzi.
A ratones macho de Biozzi que pesaban
30-35 g les fueron inyectados en cada flanco 0,15 ml
de una emulsión que contenía cordón espinal de ratón liofilizado,
salina tamponada con fosfato y adyuvante incompleto de Freund
suplementado con Mycobacterium butyricum y Mycobacterium
tuberculosis H_{37}Ra.
Los animales fueron pesados diariamente y
valorados con respecto a la enfermedad neurológica a partir del día
7 postinocualación (PI). Los ratones que presentaron síntomas de
encefalomielitis alérgica experimental fueron puntuados de la manera
siguiente: 1: Cola Parcialmente Flácida (PFT); 2: Cola
Completamente Flácida (CFT); 3: Reflejo de Enderezamiento
Deteriorado (IRR); 4: Marcha Atáxica (AG); 5: Hipotonía de los
Miembros Traseros (HLH); 6: Parálisis Parcial de los Miembros
Traseros (PHLP); 7: Parálisis Total de los Miembros Traseros (CHLP);
8: Moribundo (M); 9: Muerto (D).
El NA:NA y el NA:GLA (ambos en solución al 10% en
peso en oleato de etilo B.P.) fueron administrados oralmente (a
35-37ºC) 5 días antes de la inoculación y por
espacio de 43 días postinoculación a razón de una dosis de 1000
mg/kg de peso corporal/día. Los animales sensibilizados de control
recibieron vehículo de oleato de etilo o no recibieron dosificación
alguna, y cada grupo de tratamiento contenía 10 animales. A los
43-44 días postinoculación se tomaron entonces
muestras individuales de los cerebros y de la sangre para
análisis.
\newpage
Los pesos corporales medios de los ratones que
habían sido sensibilizados para desarrollar encefalomielitis
alérgica experimental crónica y recibieron vehículo, NA:GLA o NA:NA
disminuyeron entre los días -4 y 2 postinoculación.
A los 16 días postinoculación tuvo lugar una
espectacular reducción del peso corporal en los ratones que no
recibieron dosificación alguna, mientras que no se registró una
similar pérdida de peso en los animales que recibieron vehículo,
NA:GLA o NA:NA. Los pesos corporales medios de los ratones que no
recibieron dosificación alguna y de los animales que recibieron
vehículo y NA:NA aumentaron de manera sostenida y llegaron a ser
equiparables a los 13-40 días postinoculación. Sin
embargo, los ratones que fueron tratados con NA:GLA no
experimentaron un similar incremento del peso corporal. Todos los
grupos presentaron pérdida de peso corporal a los
40-44 días postinoculación.
La aparición de síntomas agudos se produjo en los
de un 80% de los ratones que no recibieron dosificación alguna
aproximadamente a los 20 días postinoculación (Tabla 9). En
contraste con ello, tan sólo los de un 20-30% de los
animales presentaron enfermedad aguda en los grupos que fueron
tratados con vehículo y con compuesto. En los ratones que recibieron
NA:NA la desaparición de los signos de enfermedad aguda tuvo lugar
antes, y en consecuencia la duración de los déficits fue menor en
comparación con los ratones que contrajeron la enfermedad en otros
grupos.
Tratamiento | Nº de ratones | Día medio de | Día medio de | Duración media | Número de |
muertos | aparición de | desaparición de | de los síntomas | ratones | |
los síntomas | los síntomas | (días) | muertos | ||
Sin dosis | 8/10 | 19.9\pm4.2 | 31.9\pm1.6 | 12.0\pm4.2 | 0/10 |
Vehículo | 2/10 | 21.0\pm5.7 | 19.0\pm1.4 | 8.0\pm4.2 | 0/10 |
NA-GLA | 3/10 | 21.7\pm4.2 | 30.0\pm1.4 | 5.7\pm1.5 | 0/10 |
NA-NA | 3/10 | 22.3\pm3.8 | 24.7\pm3.2 | 2.3\pm1.2 | 0/10 |
En comparación con los animales que no recibieron
dosificación alguna fueron menos los ratones que habiendo sido
tratados con compuesto sufrieron una recaída (Tabla 10). Sin
embargo, los de un número similar de ratones que recibieron vehículo
experimentaron una recurrencia de los síntomas. Es interesante
señalar que en los animales que recibieron NA:GLA y NA:NA el
comienzo de la recaída se vio retrasado, pero no
significativamente.
Tratamiento | Nº de ratones | Día medio de | Día medio de | Duración media | Número de |
muertos | aparición de | desaparición de | de los síntomas | ratones | |
los síntomas | los síntomas | (días) | muertos | ||
Sin dosis | 9/10 | 35.6\pm2.7 | * | * | 0/10 |
Vehículo | 2/10 | 40.0\pm0.0 | * | * | 0/10 |
NA-GLA | 3/10 | 42.0\pm1.0 | * | * | 0/10 |
NA-NA | 3/10 | 43.3\pm1.2 | * | * | 1/10 |
* Se puso fin a la valoración antes de que concluyese la fase de recaída |
Las Tablas 11 y 12 describen el porcentaje de
ratones que no recibieron dosificación alguna, fueron tratados con
vehículo y fueron tratados con compuesto y presentaron los síntomas
progresivos de la enfermedad aguda y recurrente. Los resultados
demuestran claramente que los síntomas agudos y recurrentes son
suprimidos en los animales tratados con vehículo en comparación con
la aparición de la enfermedad en los ratones que no recibieron
dosificación alguna. Además, los signos neurológicos que presentaron
los animales que fueron tratados con vehículo son similares a los
síntomas que fueron experimentados por los animales que recibieron
NA:GLA y NA:NA. Las puntuaciones neurológicas medias para los
ratones que habían sido sensibilizados para desarrollar
encefalomielitis alérgica experimental recurrente crónica y no
recibieron dosificación alguna aumentaron característicamente al
haber transcurrido de 2 a 3 semanas después de la inoculación
inicial.
Al haber transcurrido 25-33 días
después de la sensibilización tuvo lugar una remisión de los
síntomas que fue seguida por una recidiva de los déficits
neurológicos. Los síntomas agudos y de recaída se vieron
marcadamente reducidos en los animales que recibieron vehículo,
NA:GLA y NA:NA. En particular, los síntomas neurológicos durante las
fases aguda y de recaída de la encefalomielitis alérgica
experimental recurrente crónica quedaron completamente eliminados en
los ratones que fueron tratados con NA:NA.
Síntoma o | Tratamiento | |||
Estado | Sin dosificación (%)/ | Vehículo (%)* | NA-GLA (%)* | NA-NA (%)* |
PFT | 80 | 20 | 20 | 10 |
CFT | 80 | 10 | 20 | 0 |
AG | 60 | 10 | 20 | 20 |
HLH | 80 | 20 | 30 | 10 |
PHLP | 50 | 10 | 20 | 0 |
CHLP | 30 | 0 | 20 | 0 |
*Porcentaje de ratones del grupo; n = 10 animales para todos los grupos |
\vskip1.000000\baselineskip
Síntoma o | Tratamiento | |||
Estado | Sin dosificación (%) | Vehículo (%)* | NA-GLA (%)* | NA-NA (%)* |
PFT | 40 | 0 | 10 | 20 |
CFT | 20 | 0 | 10 | 0 |
AG | 40 | 0 | 10 | 30 |
HLH | 60 | 10 | 30 | 30 |
PHLP | 50 | 0 | 0 | 0 |
CHLP | 0 | 0 | 0 | 0 |
*Porcentaje de ratones del grupo; n = 10 animales para todos los grupos |
\newpage
Los resultados demuestran que el tratamiento de
los ratones inoculados para desarrollar encefalomielitis alérgica
experimental recurrente crónica con el vehículo consistente en
oleato de etilo redujo significativamente la incidencia y gravedad
de las fases aguda y de recidiva de la encefalomielitis alérgica
experimental recurrente crónica en esta prueba.
La modificación de la encefalomielitis alérgica
experimental recurrente crónica mediante el tratamiento con vehículo
(el vehículo actúa como un disolvente para la droga y facilita su
administración) impide que pueda efectuarse una clara valoración de
la eficacia de los compuestos en la encefalomielitis alérgica
experimental recurrente crónica y está en contraste con los estudios
iniciales en la rata, en los que también se empleó oleato de etilo
(véase el Ejemplo 5).
Sin embargo, los resultados sugieren que el
tratamiento con NA:GLA y con NA:NA, particularmente en combinación
con oleato de etilo, tiene el potencial necesario para limitar la
duración de la enfermedad aguda y para retrasar la aparición de los
síntomas de recaída. Esto sustenta las conclusiones de los Ejemplos
anteriores con respecto a la eficacia de los compuestos en la
encefalomielitis alérgica experimental aguda en la rata.
Se estudió por consiguiente el uso de un vehículo
que carezca de la capacidad de modificar el curso de la
encefalomielitis alérgica experimental recurrente crónica en el
ratón de Biozzi. Este experimento se ocupó tan sólo de la salina
tamponada con fosfato (PBS), del Miglyol y del oleato de etilo, que
son vehículos para drogas y fueron evaluados a fin de valorar su
neutralidad con respecto al curso de la encefalomielitis alérgica
experimental.
El Miglyol 810, que es una mezcla de
triglicéridos que llevan cadenas acílicas de 8-10
átomos de carbono, fue primeramente objeto de un estudio comparativo
en comparación con la PBS (solución acuosa salina tamponada con
fosfato) para establecer su neutralidad con respecto a la evolución
de la encefalomielitis alérgica experimental.
La PBS es un vehículo de referencia, y se sabe de
la misma que no altera el curso de la encefalomielitis alérgica
experimental. Los efectos profilácticos del Miglyol 810 fueron
valorados en la encefalomielitis alérgica experimental recurrente
crónica (CREAE) en el modelo del ratón de Biozzi según un método
similar al del Ejemplo 7, pero usando vehículo de Miglyol 810 y
tratamiento postinoculación hasta el día 30 a razón de una dosis de
10 g/kg de peso corporal/día. [Explicación del régimen de
dosificación: Cuando un estudio se ocupa de un compuesto de prueba
tal como el NA:NA, la dosis indicada se refiere tan sólo a la
cantidad de compuesto de ensayo administrado, y no a la cantidad de
vehículo+compuesto. En este estudio con vehículo, puesto que no
estaba presente compuesto de ensayo alguno tal como el NA:NA, la
dosis se refiere a la cantidad de vehículo, o sea que es 10 veces
superior a la cantidad de compuesto de ensayo que habría estado
presente según todos los otros estudios en el modelo del ratón].
Los resultados demostraron claramente que todos
los ratones que fueron inoculados para desarrollar encefalomielitis
alérgica experimental recurrente crónica presentaron síntomas
paralíticos agudos estabilizados. En particular, el curso de la
enfermedad no se vio influenciado por la repetida administración
oral de PBS o Miglyol.
Por consiguiente, parecía que el Miglyol era
perfectamente adecuado para ser usado como vehículo en estudios
subsiguientes dirigidos a determinar la eficacia de los compuestos
en la encefalomielitis alérgica experimental recurrente crónica. Por
consiguiente, usando el Miglyol 810 en calidad del nuevo vehículo
fueron valorados de nuevo los efectos profilácticos del NA:NA y del
NA:GLA en la encefalomielitis alérgica experimental recurrente
crónica en el modelo del ratón de Biozzi (en dilución al 90%, 1000
mg/kg/día, hasta 43 días postinoculación).
Los pesos corporales medios de los ratones que
fueron sensibilizados para desarrollar encefalomielitis alérgica
experimental recurrente crónica y recibieron vehículo y NA:GLA
disminuyeron entre los días 1 y 4 postinoculación, contrariamente a
lo que sucedió en el caso de los ratones que no recibieron
dosificación alguna y de los ratones que fueron tratados con
NA:NA.
La aparición y la progresión de los síntomas
ocasionaron una espectacular reducción del peso corporal, lo cual
tuvo lugar en todos los grupos de animales entre los días 12 y 22
postinoculación, si bien las pérdidas de peso corporal para los
animales que fueron tratados con droga fueron menos importantes que
para los grupos de animales que no recibieron dosificación alguna y
de animales que fueron tratados con vehículo.
Los animales de todos los grupos experimentaron
una ganancia de peso corporal entre los días 23 y 31
postinoculación, lo cual estaba en correspondencia con la
desaparición de los déficits neurológicos. Es interesante señalar
que, contrariamente al caso de los animales que no recibieron
dosificación alguna y de los animales que fueron tratados con
vehículo, el peso corporal siguió aún aumentando para los ratones
que fueron tratados con NA:GLA y con NA:NA durante la aparición y la
progresión de los síntomas de la fase de recaída a partir de los 32
días postinoculación.
Los animales de cada grupo de tratamiento se
vieron muy afectados por la etapa aguda de la encefalomielitis
alérgica experimental recurrente crónica. En los ratones que
recibieron NA:GLA la duración de los síntomas fue más corta en
comparación con la correspondiente a los animales que fueron
tratados con NA:NA, a los animales que no recibieron dosificación
alguna y a los animales que fueron tratados con vehículo (Tabla
13).
Casi todos los animales de cada grupo sufrieron
una recaída (Tabla 14). No hubo diferencia en la aparición de los
síntomas entre los grupos; si bien la duración de los síntomas se
vio significativamente reducida para los ratones que fueron tratados
con NA:GLA en comparación con los grupos de animales que fueron
tratados con NA:NA, de animales que no recibieron dosificación
alguna y de animales que fueron tratados con vehículo.
Sorprendentemente, los animales que fueron
tratados con NA:NA presentaron una más larga duración de los
síntomas.
Tratamiento | Nº ratones | Día medio de | Día medio de | Duración media | Número de |
muertos | aparición de | desaparición de | de los síntomas | ratones | |
los síntomas | los síntomas | (días) | muertos | ||
Sin dosis | 12/12 | 15.8\pm1.5 | 26.7\pm1.0 | 10.9\pm1.2 | 2/12 |
Vehículo | 12/12 | 16.8\pm2.2 | 26.3\pm2.4 | 9.0\pm2.9 | 3/12 |
NA:GLA | 10/11 | 17.9\pm2.6 | 25.9\pm2.0 | 6.9\pm3.0 | 1/11 |
NA:NA | 12/12 | 17.1\pm1.9 | 26.3\pm 1.0 | 9.2\pm1.6 | 1/12 |
\vskip1.000000\baselineskip
Tratamiento | Nº ratones | Día medio de | Día medio de | Duración media | Número de |
muertos | aparición de | desaparición de | de los síntomas | ratones | |
los síntomas | los síntomas | (días) | muertos | ||
Sin dosis | 9/10 | 32.1\pm3.6 | 43.7\pm3.5 | 10.8\pm3.6 | 0/10 |
Vehículo | 8/9 | 33.5\pm6.7 | * | * | 5/9 |
NA:GLA | 8/9 | 33.1\pm4.9 | 39.8\pm5.0 | 7.0\pm4.2 | 3/9 |
NA:NA | 9/11 | 34.3\pm6.6 | 44.0\pm3.6 | 13.7\pm4.0 | 3/11 |
* \begin{minipage}[t]{130mm} En un animal tuvo lugar la desaparición de los síntomas paralíticos a los 45 días postinoculación. Los demás ratones murieron o presentaron parálisis.\end{minipage} | |||||
Las Tablas 15 y 16 describen el porcentaje de
ratones que no recibieron dosificación alguna, que fueron tratados
con vehículo y que fueron tratados con compuesto y que presentaron
los síntomas progresivos de la enfermedad aguda y recurrente. Los
resultados ponen claramente de manifiesto que los síntomas agudos y
de recaída en los animales que fueron tratados con NA:GLA están
disminuidos en comparación con la aparición de la enfermedad en
otros grupos de ratones. Además, los síntomas que presentaron los
ratones que fueron tratados con NA:NA parecen ser similares a los
síntomas que fueron experimentados por los animales que recibieron
el vehículo o no recibieron tratamiento alguno.
Las puntuaciones neurológicas medias para los
ratones que no recibieron dosificación alguna y para los ratones que
fueron tratados con vehículo se incrementaron característicamente 2
semanas después de la inoculación inicial. Las puntuaciones que
fueron obtenidas con el tratamiento con NA:NA no fueron distintas de
las de ambos grupos de control en la fase aguda de la enfermedad, y
fueron tan sólo ligeramente inferiores en la fase de recaída. En
contraste con estos resultados, los animales que fueron tratados con
NA:GLA tuvieron puntuaciones más bajas en las fases tanto aguda como
de recaída.
Síntoma o | Tratamiento | |||
Estado | Sin dosis (%)* | Vehículo (%)* | NA:GLA (%)* | NA:NA (%)* |
PFT | 100 | 100 | 91 | 100 |
CFT | 100 | 100 | 82 | 100 |
IRR | 100 | 100 | 82 | 100 |
AG | 100 | 100 | 73 | 100 |
HLH | 100 | 100 | 73 | 100 |
PHLP | 92 | 75 | 46 | 75 |
CHLP | 92 | 58 | 36 | 58 |
M | 0 | 0 | 0 | 0 |
D | 17 | 25 | 9 | 8 |
* Porcentaje de ratones del grupo; n = 12 animales para todos los grupos, excepto para NA:GLA, donde n = 11 |
\vskip1.000000\baselineskip
Síntoma o | Tratamiento | |||
Estado | Sin dosis (%)* | Vehículo (%)* | NA:GLA (%)* | NA:NA (%)* |
PFT | 90 | 89 | 89 | 82 |
CFT | 80 | 89 | 67 | 82 |
IRR | 80 | 89 | 67 | 82 |
AG | 70 | 89 | 56 | 82 |
HLH | 70 | 78 | 56 | 82 |
PHLP | 70 | 78 | 56 | 73 |
CHLP | 60 | 67 | 44 | 73 |
M | 0 | 0 | 11 | 0 |
D | 0 | 56 | 22 | 27 |
* \begin{minipage}[t]{155mm}Porcentaje de ratones del grupo; n = 9 animales para los grupos que fueron tratados con vehículo y con NA:GLA, n = 10 para el grupo en el que los animales no recibieron dosificación alguna, y n = 11 para el grupo en el que los animales fueron tratados con NA:NA\end{minipage} | ||||
Los resultados que fueron obtenidos para los
grupos de animales que no recibieron dosificación alguna y de
animales que fueron tratados con vehículo no fueron distintos y
confirmaron que el Miglyol 810 no alteraba el curso de la
enfermedad.
Sin embargo, los efectos del NA:NA y del NA:GLA
en el curso neurológico de la encefalomielitis alérgica experimental
recurrente crónica (CREAE) fueron distintos desde la evaluación
inicial.
Sorprendentemente, el NA:NA no pareció alterar
significativamente el curso de la CREAE, lo cual está en contraste
con los resultados que fueron obtenidos en el modelo de la rata con
encefalomielitis alérgica experimental aguda.
Sin embargo, el NA:GLA redujo claramente la
intensidad de los déficits neurológicos durante las fases tanto
aguda como de recaída.
Este estudio nos permitió determinar que el
NA:GLA era eficaz en ambos modelos: la encefalomielitis alérgica
experimental aguda en la rata y la encefalomielitis alérgica
experimental recurrente crónica en el ratón.
Tras haber sido concluidas determinadas
evaluaciones biológicas, los cerebros de las ratas o de los ratones
fueron extraídos y se determinó la composición de ácidos grasos de
los lípidos polares totales de los cerebros de rata/ratón.
La finalidad de estas investigaciones era la de
determinar si los niveles de ácido nervónico dentro del cerebro
habían aumentado a continuación del tratamiento con los derivados de
ácido nervónico de la invención.
El material biológico fue enviado para su
análisis al Dr. J. Hendersen de la University of Stirling, Institute
of Aquaculture, de Escocia. Los análisis fueron efectuados en dos
series de experimentos (que se detallan respectivamente en el
Ejemplo 6 y en el Ejemplo 7). Se detallan a continuación los
resultados.
La Tabla 17 indica el contenido de ácido
nervónico (NA) en los lípidos polares totales de cerebro de rata;
habiendo sido estos animales inoculados con encefalomielitis
alérgica experimental aguda.
Los análisis ponen de manifiesto que el
tratamiento con NA:DHA no incrementó los niveles de NA en los
lípidos cerebrales de las ratas en comparación con los animales
normales, con los animales que no recibieron dosificación alguna y
con los animales que fueron tratados con vehículo.
Sin embargo, hay un marcado incremento de los
niveles de NA en los lípidos cerebrales después del tratamiento con
NA:GLA, tanto para las dosis bajas como para las dosis altas.
La Tabla 18 indica el contenido de ácido
nervónico (NA) en los lípidos polares totales de cerebro de ratón;
habiendo sido estos animales inoculados con encefalomielitis
alérgica experimental recurrente crónica (CREAE).
Los análisis ponen de manifiesto que los cerebros
de los ratones que no recibieron dosificación alguna y de los
ratones que fueron tratados con vehículo tienen un nivel similar de
NA en sus lípidos. En contraste con ello, los animales que fueron
tratados con NA:GLA y con NA:NA presentan un incremento de los
niveles de NA en los lípidos cerebrales, siendo dicho incremento aún
mayor para los animales que fueron tratados con NA:NA.
A pesar de que tanto el DHA como el GLA
atraviesan la barrera hematoencefálica, los resultados obtenidos de
los análisis de los cerebros confirman claramente que estos dos
ácidos grasos actúan de manera distinta en forma de derivados de
propano-1,3-diol: Contrariamente al
caso del tratamiento con NA:DHA, el tratamiento con NA:GLA redunda
en un aumento del nivel de NA en los lípidos cerebrales, lo cual
puede significar que el NA cruza la barrera hematoencefálica en
forma de NA:GLA.
Es también digno de mención el hecho de que el
mayor incremento del nivel de NA en los lípidos cerebrales que fue
ocasionado por la administración de estos derivados correspondió a
los ratones que fueron tratados con NA:NA, lo cual demuestra la
importancia de la unidad de
propano-1,3-diol en la estructura
del compuesto para cruzar la barrera hematoencefálica.
Finalmente, los resultados hasta aquí obtenidos
nos llevan a la conclusión de que el NA:GLA, que presentó actividad
en los modelos tanto de la rata como del ratón con encefalomielitis
alérgica experimental aguda y recurrente crónica, respectivamente,
posee propiedades antiinflamatorias y es capaz de incrementar el
contenido de ácido nervónico en los lípidos cerebrales.
En una tableta | |
Ingrediente activo | 5.0 mg |
Lactosa | 82.0 mg |
Almidón | 10.0 mg |
Povidona | 2.0 mg |
Estearato de magnesio | 1.0 mg |
Se mezclan unos con otros el ingrediente activo,
la lactosa y el almidón. Los polvos son granulados usando una
solución de povidona en agua purificada. Se secan los gránulos, se
añade el estearato de magnesio, y se comprime la mezcla para
producir tabletas de 100 mg por tableta.
Ingrediente activo | 1.0 mg |
Parafina blanda blanca | hasta 100,0 g |
Se dispersa el ingrediente activo en un pequeño
volumen del vehículo, y se le incorpora a continuación al resto del
vehículo para producir un producto fluido y homogéneo. Se llenan
entonces con la dispersión tubos metálicos colapsables.
Ingrediente activo | 1.0 g |
Polawax GP 200 | 20.0g |
Lanolina anhidra | 2.0g |
Cera blanca de abejas | 2.5 g |
Hidroxibenzoato de metilo | 0.1g |
Agua destilada | hasta 100,0 g |
Se calientan juntas a 60ºC la polawax, la cera de
abejas y la lanolina. Se añade una solución de hidroxibenzoato de
metilo y se logra la homogeneización utilizando agitación a alta
velocidad. Se reduce la temperatura hasta 50ºC. Se añade y se
dispersa entonces el ingrediente activo. Se deja que la composición
se enfríe con agitación a baja velocidad.
Ingrediente activo | 1.0 g |
Monolaurato de sorbitano | 0.6 g |
Polysorbate 20^{MF} | 0.6 g |
Alcohol cetoestearílico | 1.2 g |
Glicerina | 8.0 g |
Hidroxibenzoato de metilo | 0.2 g |
Agua purificada B.P. | hasta 100,00 ml |
Se disuelven el hidroxibenzoato de metilo y la
glicerina en 70 ml del agua a 75º. Se funden juntamente a 75º y se
añaden a la solución acuosa el monolaurato de sorbitano, el
Polysorbate 20^{MF} (MF = marca de fábrica) y el alcohol
cetoestearílico. Se homogeneiza la emulsión resultante y se la deja
enfriarse con agitación continua, y se añade el ingrediente activo
en forma de suspensión en el agua restante. Se agita la suspensión
hasta haber quedado homogeneizada.
Se prepara una cápsula llenando una cápsula
bipartita de gelatina dura con 50 mg de ingrediente activo, 110 mg
de lactosa, 32 mg de talco y 8 mg de estearato de magnesio.
Ingrediente activo | 0.5 g |
Hidroxibenzoato de metilo | 0.01 g |
Hidroxibenzoato de propilo | 0.04 g |
Agua purificada B.P. | hasta 100,00 ml |
Se disuelven los hidroxibenzoatos de metilo y de
propilo en 70 ml de agua purificada, y se deja que se enfríe la
solución resultante. Se añade el ingrediente activo y se esteriliza
la solución mediante filtración a través de un filtro de membrana
(con un tamaño de poro de 0,22 \mum), y se envasa la solución en
adecuados envases estériles.
Para un envase de aerosol con una capacidad de
15-20 ml: Se mezcla el ingrediente activo (10 mg)
con un 0,2-0,2% de un agente lubrificante, tal como
Polysorbate 85^{MF} o ácido oleico o una mezcla de los mismos, en
un propelente tal como Freon^{MF}, preferiblemente en una
combinación de 1,2-dicloroetano y
difluoroclorometano, y se pone la mezcla en el interior de un
adecuado envase de aerosol adaptado para administración por
inhalación.
Para un envase de aerosol con una capacidad de
15-20 ml: Se disuelve el ingrediente activo (10 mg)
en etanol (6-8 ml), se añade un agente lubrificante
tal como Polysorbate 85^{MF}, y se dispersa la mezcla en un
propelente tal como Freon^{MF}, preferiblemente en una combinación
de 1,2-dicloroetano y difluoroclorometano, y se pone
la mezcla en el interior de un adecuado envase de aerosol adaptado
para la administración por inhalación nasal u oral.
Se prepara una inyección agitando un 1,5% en peso
de ingrediente activo en propilenglicol y agua. Se esteriliza la
solución por filtración.
Se prepara una composición oral mezclando 10
partes de ingrediente activo (NA:NA y/o NA:GLA) con 90 partes de
oleato de etilo, con lo cual se obtiene una dilución al 10% del
lípido en oleato de etilo.
Claims (22)
1. Compuesto de fórmula (I):
(I)CH_{3} -
(CH_{2})_{7} - CH = CH - (CH_{2})_{13} -
C(O) - O- (CH_{2})_{3} -
OR
donde R es hidrógeno (H) o un
residuo de un ácido carboxílico; o una sal del compuesto en la que R
es H, o un hidrato de la
misma.
2. Compuesto según la reivindicación 1, en el que
el ácido carboxílico al que se alude en la definición de R tiene de
1 a 26 átomos de carbono y puede ser de cadena recta o ramificada,
saturado o insaturado.
3. Compuesto según la reivindicación 1 o la
reivindicación 2, en el que el ácido carboxílico es de cadena recta
y es seleccionado de entre los miembros del grupo que consta de
ácidos grasos monoinsaturados y poliinsaturados.
4. Compuesto según cualquier reivindicación
precedente, en el que R es H o un residuo de un ácido graso
monoinsaturado o poliinsaturado de C_{18} a C_{24} que tiene de
1 a 6 enlaces dobles de carbono-carbono.
5. Compuesto según cualquier reivindicación
precedente, en el que R es H o un residuo de ácido nervónico (24:1
(n-9)), ácido docosahexaenoico (22:6
(n-3)) o ácido \gamma-linolénico
(18:3 (n-6)), donde x en (n-x)
indica la posición del primer enlace doble con respecto al grupo
metilo terminal del ácido graso.
6. Compuesto según cualquier reivindicación
precedente, seleccionado de entre los miembros del grupo que consta
de:
1-(z-15-tetracosenoiloxi)-3-hidroxipropano;
1-(z-15-tetracosenoiloxi)-3-(z,z,z-6,9,12-octadecatrienoiloxi)propano
(llamado de aquí en adelante NA:GLA);
1-(z-15-tetracosenoiloxi)-3-(z-4,7,10,13,16,19-docosahexaenoiloxi)propano
(llamado de aquí en adelante NA:
DHA); y
DHA); y
1,3-di-(z-15-tetracosenoiloxi)propano
(llamado de aquí en adelante NA:NA).
7. Método para la preparación de un compuesto
según cualquier reivindicación precedente, comprendiendo dicho
método los pasos de:
(a) hacer que un derivado reactivo de ácido
nervónico reaccione con
propano-1,3-diol en presencia de una
base para formar un compuesto de fórmula (IA):
(IA)CH_{3} -
(CH_{2})_{7} - CH = CH - (CH_{2})_{13} -
C(O) - O - (CH_{2})_{3} -
OH
y a continuación de ello, si se
desea,
(b) hacer que el compuesto de fórmula (IA)
reaccione con el correspondiente ácido carboxílico de fórmula
R^{1}-H para formar un compuesto de fórmula
(IB):
(IB)CH_{3} -
(CH_{2})_{7} - CH = CH - (CH_{2})_{13} -
C(O) - O - (CH_{2})_{3} -
OR^{1}
donde R^{1} es un residuo de un
ácido carboxílico; y,
opcionalmente,
formar un hidrato del mismo.
8. Método según la reivindicación 7, en el que el
compuesto de fórmula (IA) es preparado mediante la reacción del
cloruro ácido de ácido nervónico (es decir,
CH_{3}-(CH_{2})_{7}-CH =
CH-(CH_{2})_{13}-COCl) con
propano-1,3-diol en presencia de una
base.
9. Método según la reivindicación 7 o la
reivindicación 8, en el que las condiciones para la reacción de
esterificación (b) incluyen la presencia de ácido hipofosforoso,
opcionalmente con calentamiento hasta el reflujo bajo una atmósfera
inerte.
10. Compuesto según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 6, en el que R es distinto de H (es decir, un
compuesto de fórmula (IB) como el definido en la reivindicación 7)
para su uso en terapia.
11. Compuesto según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 6, en el que R es distinto de H (es decir, un
compuesto de fórmula (IB) como el definido en la reivindicación 7),
para ser usado como agente antiinflamatorio y/o inmunomodulador.
12. Compuesto según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 6, en el que R es H (es decir, un compuesto de
fórmula (IA) como el definido en la reivindicación 7), para ser
usado en la preparación de un compuesto según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 6 en el que R es distinto de H (es decir, un
compuesto de fórmula (IB) como el definido en la reivindicación
7).
13. Composición farmacéutica que comprende una
cantidad efectiva atóxica de un compuesto según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 6 en el que R es distinto de H (es decir, un
compuesto de fórmula (IB) como el definido en la reivindicación 7) y
un vehículo farmacéuticamente aceptable para el mismo.
14. Composición según la reivindicación 13, en la
que el vehículo comprende oleato de etilo.
15. Composición según la reivindicación 13 o la
reivindicación 14, en la que el compuesto es NA:NA y/o NA:GLA.
16. Composición según la reivindicación 13 o la
reivindicación 14, en la que el compuesto es NA:DHA.
17. Método para preparar una composición según
cualquiera de las reivindicaciones 13 a 16, comprendiendo dicho
método el paso de poner a un compuesto según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 6 en el que R es distinto de H (es decir, un
compuesto de fórmula (IB) como el definido en la reivindicación 7)
en asociación con un vehículo farmacéuticamente aceptable para el
mismo.
18. Uso de un compuesto de fórmula (IB) como el
definido en la reivindicación 7 en la preparación de un
medicamento.
19. Uso según la reivindicación 18, en el que el
medicamento es para el tratamiento o la profilaxis de la inflamación
y/o de afecciones asociadas a la hiperestimulación o la
hipoestimulación del sistema inmunológico.
20. Uso según la reivindicación 19, en el que la
afección es seleccionada de entre los miembros del grupo que consta
de artritis reumatoide, espondilitis reumatoide, osteoartritis,
artritis gotosa y otras afecciones artríticas; inflamaciones
articulares; eccema y otras afecciones inflamatorias de la piel;
afecciones inflamatorias del ojo incluyendo la conjuntivitis;
piresis; la reducción de la necrosis tisular en la inflamación
crónica; la supresión del rechazo tisular a continuación de la
cirugía de trasplante; la enfermedad de Crohn; y la colitis
ulcerativa.
21. Uso según la reivindicación 19, en el que la
afección es seleccionada de entre los miembros del grupo que consta
de lupus eritematoso sistémico, esclerosis múltiple, miastenia
gravis, esclerosis sistémica progresiva, dermatitis atópica,
hiperinmunoglobina E, hepatitis activa crónica negativa para el
antígeno de la hepatitis B, tiroiditis de Hashimoto, fiebre
mediterránea familiar, enfermedad de Grave, anemia hemolítica
autoinmune, cirrosis biliar primaria, enfermedad inflamatoria del
intestino y otras afecciones en las que el sistema inmunológico está
comprometido o incapacitado o es disfuncional, incluyendo el SIDA, y
las afecciones que van asociadas a infecciones virales, incluyendo
la infección por VIH.
22. Uso de un compuesto de fórmula (IA) como el
definido en la reivindicación 7 en la preparación de un compuesto de
fórmula (IB) como el definido en la reivindicación 7.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB9927629 | 1999-11-24 | ||
GBGB9927629.7A GB9927629D0 (en) | 1999-11-24 | 1999-11-24 | Compounds |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
ES2242651T3 true ES2242651T3 (es) | 2005-11-16 |
Family
ID=10864957
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
ES00977695T Expired - Lifetime ES2242651T3 (es) | 1999-11-24 | 2000-11-23 | Derivados del acido nervonico, su preparacion y uso. |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US6664406B1 (es) |
EP (1) | EP1232139B1 (es) |
JP (1) | JP3993434B2 (es) |
AT (1) | ATE297887T1 (es) |
AU (1) | AU775643B2 (es) |
CA (1) | CA2391953C (es) |
DE (1) | DE60020873T2 (es) |
ES (1) | ES2242651T3 (es) |
GB (2) | GB9927629D0 (es) |
NZ (1) | NZ518961A (es) |
WO (1) | WO2001038288A1 (es) |
Families Citing this family (29)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB0112324D0 (en) * | 2001-05-21 | 2001-07-11 | Croda Int Plc | Compounds |
WO2004084829A2 (en) * | 2003-03-20 | 2004-10-07 | Imagenetix, Inc. | Esterified fatty acid composition |
US20070149618A1 (en) * | 2004-02-17 | 2007-06-28 | Action Medicines, S.L. | Methods of use for 2,5-dihydroxybenzene sulfonic acid compounds for the treatment of cancer, rosacea and psoriasis |
US20080125485A1 (en) | 2004-02-17 | 2008-05-29 | Action Medicines | Use of 2,5-Dihydroxybenzene Derivatives for Treating Actinic Keratosis |
ES2238924B1 (es) * | 2004-02-17 | 2006-12-01 | Investread Europa, S.L. | Uso del acido 2,5-dihidroxibencenosulfonico, en la fabricacion de medicamentos de aplicacion en el tratamiento de enfermedades angiodependientes. |
US7776914B2 (en) | 2004-03-22 | 2010-08-17 | Imagenetix, Inc. | Esterified fatty acid composition |
PT2054051E (pt) | 2006-08-16 | 2013-04-03 | Amderma Pharmaceuticals Llc | Utilização de derivados 2,5-di-hidroxibenzeno para tratar ceratose actínica |
ES2491226T3 (es) | 2006-08-16 | 2014-09-05 | AmDerma Pharmaceuticals, LLC | Compuestos de 2,5-dihidroxibenceno para el tratamiento de psoriaris |
US8269062B2 (en) | 2006-11-21 | 2012-09-18 | National Research Council Of Canada | Lunaria annua, Cardamine graeca and Teesdalia nudicaulis FAE genes and their use in producing nervonic and eicosenoic acids in seed oils |
FR2940281B1 (fr) | 2008-12-22 | 2011-04-01 | Fabre Pierre Dermo Cosmetique | Ester de diol et d'acide gras polyinsature comme agent anti-acne |
CA2793959C (en) | 2010-03-25 | 2019-06-04 | Oregon Health & Science University | Cmv glycoproteins and recombinant vectors |
PL2691530T3 (pl) | 2011-06-10 | 2019-02-28 | Oregon Health & Science University | Glikoproteiny i rekombinowane wektory CMV |
EP2739410B1 (en) | 2011-08-05 | 2023-03-29 | Massachusetts Institute of Technology | Article comprising a liquid-impregnated surface |
JP5803424B2 (ja) * | 2011-08-22 | 2015-11-04 | Jnc株式会社 | ビニル酢酸の製造方法、ビニル酢酸誘導体及びその製造方法 |
EP2568289A3 (en) | 2011-09-12 | 2013-04-03 | International AIDS Vaccine Initiative | Immunoselection of recombinant vesicular stomatitis virus expressing hiv-1 proteins by broadly neutralizing antibodies |
EP2586461A1 (en) | 2011-10-27 | 2013-05-01 | Christopher L. Parks | Viral particles derived from an enveloped virus |
JP2015510857A (ja) | 2012-03-23 | 2015-04-13 | マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー | 食品包装および食品加工装置のための自己潤滑性表面 |
US9625075B2 (en) | 2012-05-24 | 2017-04-18 | Massachusetts Institute Of Technology | Apparatus with a liquid-impregnated surface to facilitate material conveyance |
US20130337027A1 (en) | 2012-05-24 | 2013-12-19 | Massachusetts Institute Of Technology | Medical Devices and Implements with Liquid-Impregnated Surfaces |
EP2679596B1 (en) | 2012-06-27 | 2017-04-12 | International Aids Vaccine Initiative | HIV-1 env glycoprotein variant |
CN109719109B (zh) | 2012-11-19 | 2023-01-06 | 麻省理工学院 | 采用液体浸渍表面的装置和方法 |
US20140178611A1 (en) | 2012-11-19 | 2014-06-26 | Massachusetts Institute Of Technology | Apparatus and methods employing liquid-impregnated surfaces |
US20150065381A1 (en) | 2013-09-05 | 2015-03-05 | International Aids Vaccine Initiative | Methods of identifying novel hiv-1 immunogens |
US10058604B2 (en) | 2013-10-07 | 2018-08-28 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers |
US9947481B2 (en) | 2014-06-19 | 2018-04-17 | Massachusetts Institute Of Technology | Lubricant-impregnated surfaces for electrochemical applications, and devices and systems using same |
EP3069730A3 (en) | 2015-03-20 | 2017-03-15 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble hiv-1 envelope glycoprotein trimers |
EP3072901A1 (en) | 2015-03-23 | 2016-09-28 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble hiv-1 envelope glycoprotein trimers |
CN115466178A (zh) * | 2021-06-11 | 2022-12-13 | 青岛海合生物科技有限公司 | 一种神经酸衍生物及其制备方法和应用 |
CN113495161B (zh) * | 2021-09-07 | 2021-11-16 | 宝枫生物科技(北京)有限公司 | 用于诊断缺血缺氧性脑病补充神经酸起效的生物标志物及其应用 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ATE135208T1 (de) | 1989-11-30 | 1996-03-15 | Croda Int Plc | Verwendung von nervonsäure und langkettiger fettsäuren zur behandlung demyelinisierender erkrankungen |
MY118354A (en) | 1995-05-01 | 2004-10-30 | Scarista Ltd | 1,3-propane diol derivatives as bioactive compounds |
-
1999
- 1999-11-24 GB GBGB9927629.7A patent/GB9927629D0/en not_active Ceased
-
2000
- 2000-11-23 EP EP00977695A patent/EP1232139B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-11-23 DE DE60020873T patent/DE60020873T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-11-23 AT AT00977695T patent/ATE297887T1/de active
- 2000-11-23 AU AU15333/01A patent/AU775643B2/en not_active Ceased
- 2000-11-23 ES ES00977695T patent/ES2242651T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-11-23 US US10/130,672 patent/US6664406B1/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-11-23 WO PCT/GB2000/004453 patent/WO2001038288A1/en active IP Right Grant
- 2000-11-23 GB GB0028525A patent/GB2357083B/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-11-23 JP JP2001539845A patent/JP3993434B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2000-11-23 CA CA002391953A patent/CA2391953C/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-11-23 NZ NZ518961A patent/NZ518961A/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP1232139B1 (en) | 2005-06-15 |
GB0028525D0 (en) | 2001-01-10 |
CA2391953A1 (en) | 2001-05-31 |
AU1533301A (en) | 2001-06-04 |
GB2357083A (en) | 2001-06-13 |
US6664406B1 (en) | 2003-12-16 |
JP3993434B2 (ja) | 2007-10-17 |
NZ518961A (en) | 2004-02-27 |
AU775643B2 (en) | 2004-08-12 |
DE60020873D1 (de) | 2005-07-21 |
DE60020873T2 (de) | 2006-05-04 |
GB9927629D0 (en) | 2000-01-19 |
WO2001038288A1 (en) | 2001-05-31 |
EP1232139A1 (en) | 2002-08-21 |
ATE297887T1 (de) | 2005-07-15 |
CA2391953C (en) | 2007-03-27 |
JP2003514886A (ja) | 2003-04-22 |
GB2357083B (en) | 2002-06-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
ES2242651T3 (es) | Derivados del acido nervonico, su preparacion y uso. | |
US6956059B2 (en) | Anti-inflammatory and immunomodulatory amino acid derivatives, their preparation and use | |
AU2002256799A1 (en) | Anti-inflammatory and immunomodulatory amino acid derivatives, their preparation and use | |
ES2292782T3 (es) | Nueva composicion farmaceutica. | |
ES2249257T3 (es) | Utilizacion de compuestos de lipoxina para la inhibicion de la respuesta de los neutrofilos inducida por tnf-alfa. | |
JP6462045B2 (ja) | スルフォラファンの単離及び精製 | |
ES2540551T3 (es) | Antagonistas de receptores opioides periféricos y usos de los mismos | |
JP2002537252A (ja) | 心血管事象を予防するための必須脂肪酸 | |
JP2016514723A (ja) | アスタキサンチン抗炎症性相乗的組み合わせ | |
KR20110044947A (ko) | 과잉활성 면역계 치료를 위한 사이클로리그난의 용도 | |
CN113853368A (zh) | 由支架部分制备的脂质缀合物 | |
JP2016519101A (ja) | オメガ−3脂肪酸およびトマトリコペンを含む抗炎症性相乗的組み合わせ | |
WO2008044691A1 (fr) | Agent antidépresseur | |
JP2000510857A (ja) | シクロスポリンと少なくとも一種のアルファ―グリセロリン酸エステルから成るキャリアとを含有する薬剤組成物 | |
JP6845548B2 (ja) | 粘膜免疫調節剤 | |
JPS58210011A (ja) | 抗腫瘍剤 | |
ES2363965A1 (es) | Cápsulas de principios activos betabloqueantes y ésteres de ácidos grasos poliinsaturados. | |
RU2006140277A (ru) | Незаменимые жирные кислоты, предназначенные для предупреждения и/или лечения депрессии у пациентов, страдающих коронарной болезнью коронарной артерии | |
JPS6345643B2 (es) | ||
JPS58210010A (ja) | 抗腫瘍剤 | |
JPH0211514A (ja) | スパガリン類製剤 | |
JPS58135810A (ja) | 抗腫瘍剤 |