ES2230692T3 - N, o-carboximetilquitosano unido de manera covalente y utilizaciones del mismo. - Google Patents

Abstract

La invención se refiere a composiciones covalentes a base de N,O-carboximetil-citosano (NOCC) susceptible de enlace intramolecular o intermolecular, bien por enlace directo o por una fracción de puente. La invención se refiere también a procedimientos de producción de estas composiciones a base de NOCC así como sus modos de utilización. Estas composiciones a base de NOCC son útiles en la administración de compuestos, terapéuticamente activos, así como en materia de curado de heridas.

Description

N, O-carboximetilquitosano unido de manera covalente y utilizaciones del mismo.

Antecedentes de la invención

Los polímeros han disfrutado de un incremento en su utilización en aplicaciones médicas en años recientes. Los citados polímeros, los cuales pueden ser materiales sintéticos o proceder de fuentes naturales, han sido utilizados para aplicaciones tan diversas como el suministro de agentes terapéuticos, por ejemplo, de fármacos, en formulaciones de liberación temporal; en reconstrucción de defectos en tejidos (por ejemplo, en cirugía plástica); en la protección de tejidos dañados o en la prevención de adherencias post-quirúrgicas.

Las adherencias post-quirúrgicas son provocadas por una combinación de factores, entre los cuales se incluyen los traumatismos derivados de manipulación y el secado de los tejidos durante la cirugía propiamente dicha. Para intentar mejorar estos problemas se han descrito un determinado número de técnicas. Para revestir el área de cirugía, antes y durante la cirugía, con vistas a minimizar el secado y actuar como "cojín" para evitar algunos de los traumatismos derivados de la manipulación, se han utilizado un determinado número de soluciones de polímeros altamente concentradas. En la patente USA nº. 4.819.617, concedida a Goldberg et al., en la patente USA nº. 4.886.787, concedida a Belder et al., y en la solicitud de patente USA de nº de serie 08/436.770, se han descrito ejemplos de estas técnicas. Entre los materiales utilizados se incluyen polivinilpirrolidona, dextranos, carboximetilcelulosa y un determinado número de otros polímeros, tales como ácido hialurónico ("HA"). Una serie de patentes de Goldberg et al., en particular las patentes USA nºs. 5.080.893 y 5.140.016, muestran la utilización de pretratamiento de puntos quirúrgicos con soluciones de ácido hialurónico, como un medio para evitar las adherencias quirúrgicas.

El ácido hialurónico presenta diversos problemas asociados con su utilización. Uno de los problemas derivados de la utilización del ácido hialurónico es su coste. El ácido hialurónico puede ser obtenido a partir de crestas de gallo o de cordones umbilicales humanos y demanda una sustancial purificación para obtenerlo en estado lo suficientemente puro para ser utilizado en técnicas quirúrgicas. Ver, por ejemplo, la patente USA nº. 4.141.973, concedida a Balazs, la cual describe procedimientos para la purificación del ácido hialurónico. El ácido hialurónico puede ser también obtenido en forma recombinante, pero resulta caro. Incluso en el caso de que el elevado coste y/o las dificultades derivadas de la purificación pudieran ser justificadas, el ácido hialurónico puede tener proteínas asociadas con el mismo, las cuales pueden provocar la infección de la herida quirúrgica abierta.

Como sistemas de suministro de fármacos se han utilizado una diversidad de polímeros, por ejemplo, para la liberación lenta de agentes terapéuticos. Los sistemas de suministro de fármacos poliméricos son generalmente de dos tipos: polímeros que atrapan físicamente un fármaco y polímeros a los cuales se les une químicamente un agente terapéutico. En el primer caso, el fármaco es liberado por medio de difusión gradual a partir de la matriz polimérica, a medida que la misma se descompone o degrada, mientras que en el caso del segundo sistema de polímeros, el fármaco es liberado químicamente a partir del polímero. Los citados polímeros de liberación lenta pueden ser administrados a un sujeto, por ejemplo, mediante inyección o implantación, con vistas a proporcionar terapia de fármaco durante un determinado período de tiempo prolongado. Los polímeros de liberación lenta resultan convenientes, debido a que la dosificación prolongada incrementa el grado de cumplimiento del paciente con la pauta de administración del fármaco, reduciendo o eliminando la necesidad de administración de fármaco repetida. Además, una formulación de polímero de liberación lenta puede ser implantada en un órgano o tejido concreto, proporcionando, en algunos casos, la acción terapéutica localizada del fármaco liberado, a la vez que una disminución de los efectos secundarios generales.

La quitina, el bloque componente principal de los caparazones de los crustáceos y de muchos insectos ha sido modificada para ser utilizada como polímero en aplicaciones médicas. La quitina puede ser obtenida de una manera relativamente poco costosa, principalmente a partir de productos residuales, los cuales podrían ser, por otro lado, desechados. La patente USA nº. 4.619.995, concedida en base a una solicitud de Hayes, describe un nuevo derivado de quitina, el NOCC. El NOCC presenta sustitutos carboximetilo sobre algunos de tanto los puntos hidroxilo como amino de las unidades de glucosamina de la estructura de quitosano y puede ser utilizado en forma no reticulada como solución; puede ser reticulado o complejado en forma de gel estable. Por ejemplo, en las composiciones NOCC de Hayes, el grado de sustitución era habitualmente inferior a uno, con una distribución de sustitución de hidroxilo a sustitución de amino de aproximadamente 2:1. Así pues, aproximadamente el 50% de los grupos amino del material NOCC de Hayes no está sustituido por grupos carboximetilo (ver también la patente USA nº. 5.412.084, concedida a Elson et al.). Como resultado de estas propiedades físicas ventajosas y de su relativo bajo coste en comparación con materiales tales como ácido hialurónico, el NOCC presenta propiedades ventajosas para su utilización en aplicaciones tales como técnicas quirúrgicas.

Los procedimientos para la reticulación de NOCC descritos anteriormente han adolecido, no obstante, de algunas desventajas. Por ejemplo, el NOCC ha sido reticulado covalentemente a través de la utilización de reactivos bifuncionales, tales como glioxal, en el cual cada uno de los dos grupos aldehído del glioxal reaccionan con un grupo amino de NOCC, dando lugar a un producto reticulado (ver, por ejemplo, la patente USA nº. 4.619.995, mencionada anteriormente). Este producto incluye el esqueleto 2-carbono del glioxal, en forma de resto puente de unión unido covalentemente, del aducto reticulado; este resto puente de unión no puede ser eliminado rápidamente a partir del NOOC reticulado sin destruir el NOCC reticulado. El NOCC ha sido también reticulado iónicamente, por ejemplo, mediante la adición de un catión, tal como calcio divalente, para formar geles. No obstante, los geles NOCC reticulados iónicamente presentan tan solo una estabilidad moderada, a saber, al calor y a disolventes y pueden disolverse en soluciones acuosas.

Por consiguiente, constituye un objetivo de la presente invención el de proporcionar NOCC unido covalentemente, en el cual no se encuentre presente ningún resto puente de unión.

Constituye un nuevo objetivo de la invención el de proporcionar un derivado de NOCC, en el cual un agente terapéutico se encuentra unido a NOCC de forma liberable, o atrapado por NOCC, para proporcionar un compuesto de liberación sostenida que comprende NOCC y un agente terapéutico.

Constituye un objetivo adicional de la presente invención el de proporcionar NOCC reticulado, en el cual la unión tiene lugar a través de un enlace entre un grupo carboxilo de una cadena de N,O-carboximetilquitosano y un grupo amino de una cadena de N,O-carboximetilquitosano.

Constituye todavía un nuevo objetivo de la presente invención el de proporcionar procedimientos para el tratamiento de las heridas, mediante la administración a un sujeto de NOCC unido.

Constituye otro objetivo de la invención el de proporcionar procedimientos para evitar las adherencias post-quirúrgicas, mediante la administración a un sujeto de NOCC unido.

Constituye todavía un nuevo objetivo de la invención el de proporcionar procedimientos para la administración de un agente terapéutico a un sujeto, mediante la administración al mismo de una composición que comprende NOCC y un agente terapéutico.

Estos y otros objetivos, características y ventajas de la invención resultarán evidentes a partir de la siguiente descripción y reivindicaciones.

Resumen de la invención

La invención proporciona nuevas composiciones de NOCC, procedimientos para la preparación de las citadas composiciones y procedimientos para ser utilizados para composiciones de NOCC.

Definiciones

Tal y como se utiliza en el presente documento, el término "unión" se refiere al procedimiento de formación de un enlace covalente entre dos grupos o restos funcionales reactivos (por ejemplo, dos grupos funcionales de NOCC, o un grupo funcional de NOCC y un grupo funcional de un agente activo), por ejemplo, un grupo amino y un grupo carboxilo. La unión puede ser lograda mediante la utilización de un reactivo de acoplamiento, el cual favorezca la reacción de dos grupos funcionales reactivos con cualquier otro, para formar un enlace directo, o con un reactivo reticulado, el cual modifique al menos uno de los grupos funcionales, antes de la reacción con el otro grupo funcional y da como resultado la incorporación de un resto puente de unión en el producto unido covalentemente. La unión puede tener lugar entre dos grupos funcionales de una cadena NOCC sencilla (unión intramolecular), entre grupos funcionales de dos cadenas NOCC o entre una cadena NOCC y un agente activo (ambas formas de unión intermolecular).

Por ejemplo, un grupo carboxilo y un grupo amino pueden reaccionar a través de la utilización de un reactivo de acoplamiento, tal como carbodiimida, por ejemplo, la diciclohexilcarbodiimida (DCC). La reacción favorecida por la DCC da como resultado la formación de un enlace amida directo entre el grupo amino y el grupo carboxilo, a saber, el grupo carboxilo, a saber, por medio de una reacción de deshidratación. El experto en la materia conoce ya de la existencia de muchos reactivos de acoplamiento carbodiimida y muchos de ellos se encuentran disponibles en el comercio. Entre los ejemplos se incluyen la DCC y la 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)-carbodiimida (EDC), (ambas disponibles en, por ejemplo, Aldrich Chemical, Milwakee, WI). Resultan también conocidos otros agentes de acoplamiento, los cuales pueden ser utilizados en la presente invención. Por ejemplo, se conocen una diversidad de agentes, por ejemplo, para el acoplamiento de aminoácidos. Entre los reactivos de acoplamiento ejemplarizados se incluyen BOP, HBTU, TBTU, TOPPipU, PyBOP y BOP-Cl (ver, por ejemplo, G.A. grant, Ed., "Synthetic Peptides; A User's Guide". W.H. Freeman, New York (1992), Chap. 3 and M. Bodansky, "Principles of Peptide Synthesis", 2nd edition, Spring-Verlag (1993).

El término "unión intermolecular", tal y como se utiliza en el presente documento, se refiere a la unión entre dos compuestos químicos, más que a la unión intramolecular dentro de una molécula. Así pues, la unión de NOCC a un agente activo, o la unión de una cadena de NOCC a una segunda cadena de NOCC, es identificada en el presente documento como una unión intermolecular. Cuando el NOCC está unido a un agente activo, el producto NOCC-agente activo es identificado en el presente documento como un "aducto NOCC-agente activo".

La utilización de un "reactivo puente de unión", en el sentido en el cual se utiliza el término en el presente documento, da como resultado la formación de una unión covalente entre los dos grupos funcionales, incorporando la citada unión un resto puente de unión o un resto de unión. Así pues, el grupo amino de un aminoácido puede reaccionar con un grupo carboxilo de NOCC (para formar un primer enlace amida) y el grupo carboxilo restante del aminoácido puede reaccionar con un grupo amino de NOCC (formando un segundo enlace amida). Así pues, puede formarse una unión puente covalente entre dos grupos funcionales de NOCC, con un intermedio puente de unión resto aminoácido entre los dos grupos funcionales de NOCC. Las dos reacciones del reactivo puente de unión no precisan ser simultáneas, por ejemplo, un aminoácido soportando un grupo bloqueante sobre la funcionalidad carboxilo puede estar unido a NOCC (mediante reacción de un grupo carboxilo de NOCC con el grupo amino libre del aminoácido) y el grupo bloqueante puede ser eliminado, para revelar un resto carboxilo del aminoácido, el cual es capaz después de reaccionar con un grupo amino de NOCC. Para ejemplos de reactivos puente de unión ver, por ejemplo, S.S. Wong, "Chemistry of Protein Conjugtion and Cross-Linking", CRC Press (1991) y G.T. Hermanson, "Bioconjugate Techniques", Academic Press(1995).

Por parte de los expertos en la materia se observará que los dos grupos funcionales reactivos que deben ser unidos pueden ser diferentes (por ejemplo, un grupo amino y un grupo carboxilo) o pueden ser iguales (por ejemplo, dos grupos amino). Para unir dos grupos funcionales distintos, pueden utilizarse reactivos de acoplamiento o reactivos de reticulación (puente de unión), mientras que cuando los grupos funcionales son iguales, se prefiere generalmente un reactivo puente de unión.

Los términos "paciente" o "sujeto", tal y como se utilizan en el presente documento, se refieren a un animal, preferiblemente a un animal de sangre caliente, tal como un mamífero, incluyendo ganado vacuno, ovejas, cerdos, caballos, perros, gatos y humanos.

Los términos "agente terapéuticamente activo" o "agente activo", tal y como se utilizan en el presente documento, se refieren a compuestos que presentan utilidades terapéuticas conocidas en un sujeto. Entre los agentes terapéuticamente activos se incluyen fármacos tales como antibióticos, antiinflamatorios, antihipertensivos, fármacos para la reducción del colesterol y fármacos antineoplásicos. Entre los agentes terapéuticamente activos se incluyen compuestos de origen natural y de origen sintético, los cuales pueden ser, por ejemplo, proteínas, péptidos, carbohidratos y pequeñas moléculas. Los agentes activos pueden ser agentes activos libres en solución y/o cuando están unidos a NOCC, tal y como se describe en el presente documento. Si un agente activo es activo solamente en estado libre, el mismo se encuentra unido preferiblemente a NOCC a través de un enlace covalente que puede ser roto.

El término "tratamiento de la herida" es conocido en el estado de la técnica y, tal y como se utiliza en el presente documento, se refiere a tratamientos para mejorar o favorecer el cicatrizado de las heridas, incluyendo el desbridamiento de heridas, la prevención o la minimización de la infección y la inflamación, la aplicación tópica de agentes activos a las heridas, la absorción de fluido exudado, la hidratación de las heridas y el vendaje de las heridas.

En un aspecto, las invención proporciona N,O-carboximetilquitosano unido, en el cual la unión tiene lugar a través de un enlace entre un grupo carboxilo de una cadena de N,O-carboximetilquitosano y un grupo amino de una cadena de N,O-carboximetilquitosano.

El enlace que une un grupo carboxilo y un grupo amino puede ser un enlace amida, por ejemplo, un enlace amida que une un grupo O-carboximetilo (por ejemplo, un grupo 3-, o 6-carboximetilo) o un grupo N-carboximetilo, de una cadena de NO-carboximetilquitosano, con un grupo 2-amino de una cadena N,O-carboximetilquitosano. El NOCC unido covalentemente puede estar en forma de hidrogel o en una forma deshidratada que absorbe 50 o más veces su peso de líquido, el cual puede atrapar un agente activo, tal como un compuesto terapéuticamente activo. La unión intermolecular puede ocurrir a través de un enlace entre un grupo carboxilo de una primera cadena de N,O-carboximetilquitosano y un grupo amino de una segunda cadena de N,O-carboximetilquitosano y el NOCC unido intermolecularmente puede tener un peso molecular promedio de al menos 500.000 daltons. La unión puede tener lugar a través de un enlace amida directo entre un grupo carboxilo de la primera cadena de N,O-carboximetilquitosano, o la primera y segunda cadenas de N,O-carboximetilquitosano pueden estar unidas a través de un resto puente. En determinadas aplicaciones, la unión es intramolecular.

En otro aspecto, la invención proporciona un procedimiento para la preparación de un N,O-carboximetilquitosano unido. El procedimiento incluye el paso de hacer reaccionar N,O-carboximetilquitosano en presencia de un agente de acoplamiento, en condiciones tales que un grupo amino de la cadena de N,O-carboximetilquitosano forma un enlace amida directo con un grupo carboxilo de una cadena de N,O-carboximetilquitosano, preparando de este modo el N,O-carboximetilquitosano unido directamente. El agente de acoplamiento puede ser un reactivo tal como carbodiimida o un agente de acoplamiento seleccionado de entre el grupo que comprende BOP, HBTU, TBTU, TOPPipU, PyBOP y BOP-Cl. El procedimiento puede incluir, opcionalmente, la utilización de un catalizador que favorece la formación de enlace amida, tal como N-hidroxisuccinimida o HOBt.

En otro aspecto, la invención proporciona un procedimiento para la unión directa de un agente activo a N,O-carboximetilquitosano, a saber, para formar un aducto NOCC-agente activo. El procedimiento incluye el hacer reaccionar el N,O-carboximetilquitosano y el agente activo en presencia de un reactivo de acoplamiento, en condiciones tales que se forme un enlace covalente directo entre el N,O-carboximetilquitosano y el agente activo, uniendo con ello intermolecularmente de forma directa el agente activo al N,O-carboximetilquitosano para formar el aducto NOCC-agente activo. Al igual que ocurre con los compuestos NOCC descritos anteriormente, el enlace covalente puede ser un enlace amida; preferiblemente, pero opcionalmente, el enlace covalente es hidrolizable, a saber, puede ser hidrolizado, preferiblemente en condiciones fisiológicas, a través de procedimientos enzimáticos o no enzimáticos. Un grupo carboxilo del agente activo puede reaccionar con un grupo amino del N,O-carboximetilquitosano para formar el enlace amida, el cual puede ser un enlace directo entre un grupo carboxilo del agente activo y un grupo amino de la cadena de N,O-carboximetilquitosano. Alternativamente, un grupo amino del agente activo puede reaccionar con un grupo carboxilo de N,O-carboximetilquitosano para formar el enlace amida, el cual puede ser un enlace directo entre un grupo amino del agente activo y un grupo carboxilo de una cadena de N,O-carboximetilquitosano. El agente activo puede ser cualquier agente que pueda reaccionar con NOCC, incluyendo proteínas y péptidos. En algunas realizaciones, el N,O-carboximetilquitosano unido al agente activo es el mismo N,O-carboximetilquitosano unido intra o intermolecularmente. El agente activo puede ser un compuesto terapéuticamente activo.

En todavía otro aspecto, la invención proporciona un compuesto que comprende N,O-carboximetilquitosano unido a un agente activo (a saber, un aducto NOCC-agente activo), o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en el cual el NOCC está unido al agente activo a través de un enlace amida. La composición puede incluir, adicionalmente, un soporte farmacéuticamente aceptable. El resto N,O-carboximetilquitosano puede estar unido al agente activo directamente o a través de un resto puente de unión.

En todavía otro aspecto la invención proporciona un procedimiento para la administración de un compuesto terapéuticamente eficaz a un paciente. El procedimiento incluye la aplicación de un aducto covalente de N,O-carboximetilquitosano y un compuesto terapéuticamente eficaz, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en un soporte farmacéuticamente aceptable, a un paciente, en condiciones tales que el compuesto terapéuticamente eficaz sea administrado al paciente.

Además, la invención proporciona un procedimiento para minimizar las adherencias post-quirúrgicas. El procedimiento incluye el paso de aplicar una cantidad eficaz de N,O-carboximetilquitosano unido covalentemente, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, al tejido, en condiciones tales que las adherencias post-quirúrgicas queden minimizadas.

La invención proporciona también procedimientos para la tratamiento de la herida. El procedimiento incluye el paso de aplicar una cantidad eficaz del N,O-carboximetilquitosano unido covalentemente o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, a una herida, bajo condiciones tales que se favorezca el cicatrizado de la herida.

En todavía otro aspecto, la invención proporciona N,O-carboximetilquitosano unido intermolecularmente a través de un puente de unión, en el que la unión mediante puente de unión se produce a través de un enlace entre un grupo carboxilo de una primera cadena de N,O-carboximetilquitosano y un grupo carboxilo de una segunda cadena de N,O-carboximetilquitosano.

En otro aspecto, la invención proporciona N,O-carboximetilquitosano unido intermolecularmente a través de un puente de unión, en el cual la unión mediante puente de unión tiene lugar a través de un enlace amida entre los grupos amino sobre la primera y la segunda cadenas de N,O-carboximetilquitosano, en donde los grupos amino están unidos a través de un resto puente de unión.

Descripción detallada de la invención

La invención pertenece a NOCC unido covalentemente, a NOCC que esta unido covalentemente a un agente terapéutico, a procedimientos para la preparación de composiciones nuevas y a procedimientos para el tratamiento de un sujeto mediante la administración de las nuevas composiciones de NOCC de la invención.

I. Compuestos

En un aspecto, la invención proporciona N,O-carboximetilquitosano unido covalentemente, en el cual la unión tiene lugar a través de un enlace entre un grupo carboxilo de una cadena de N,O-carboximetilquitosano y un grupo amino de una cadena de N,O-carboximetilquitosano. La invención proporciona también sales farmacéuticamente aceptables del NOCC unido covalentemente. Las composiciones pueden incluir adicionalmente un soporte farmacéuticamente aceptable. La unión covalente puede ser lograda a través de la utilización de un reactivo de acoplamiento o de un reactivo puente de unión, tal y como se describe en el presente documento. La unión puede ser intramolecular (entre grupos amino y carboxilo de una cadena NOCC sencilla) o intermolecular (entre grupos amino y grupos carboxilo de diferentes cadenas de NOCC).

El enlace preferido es un enlace amida. Así pues, por ejemplo, la utilización de un agente de acoplamiento, tal como carbodiimida, da como resultado la unión directa de un grupo amino de NOCC con un grupo carboxilo de NOCC, para formar un enlace directo amida. No obstante, puede también utilizarse un resto puente. Por ejemplo, un grupo amino de NOCC puede estar directamente unido (intermolecularmente) a un resto carboxilo de un aminoácido; el grupo amino del aminoácido puede estar directamente unido a un grupo carboxilo de NOCC (el cual puede estar sobre la misma cadena de NOCC o sobre una cadena diferente de NOCC) para proporcionar un grupo amino de NOCC unido a un grupo carboxilo de NOCC, a través de un enlace amida (o más de un enlace amida), el cual incluye un resto puente de unión (en este ejemplo, un esqueleto de aminoácido). El enlace amida une preferiblemente un grupo 3-, o 6-carboximetilo, o un grupo N-carboximetilo, de una cadena de N,O-carboximetilquitosano, con un grupo 2-amino de una cadena de N,O-carboximetilquitosano.

De manera ventajosa, el NOCC unido covalentemente puede estar en forma de gel, incluyendo un hidrogel. Tal y como se describe en los Ejemplos, infra, la unión de NOCC con un reactivo de acoplamiento produce geles con rapidez. Los citados geles pueden ser manipulados con facilidad y aplicados a, por ejemplo, heridas o a puntos de cirugía, para propósitos terapéuticos, tales como el tratamiento de la herida o la inhibición de las adherencias quirúrgicas. Según una practica de la invención, el gel atrapa un agente activo, por ejemplo, un compuesto terapéuticamente activo, tal como un fármaco. En esta realización, el NOCC unido covalentemente sirve como soporte para el agente terapéuticamente activo, para proporcionar liberación sostenida o actividad del agente. El agente terapéuticamente activo está físicamente atrapado dentro de la matriz del gel y puede escapar mediante difusión a través de los poros del gel, o puede ser liberado por medio de degradación física o química de la estructura del gel.

La unión intermolecular puede tener lugar a través de un enlace entre un grupo carboxilo de una primera cadena de N,O-carboximetilquitosano y un grupo amino de una segunda cadena de N,O-carboximetilquitosano. El derivado de NOCC resultante unido intermolecularmente presenta generalmente un peso molecular superior al peso molecular promedio de las cadenas de NOCC individuales utilizadas en la reacción de unión. Por ejemplo, el NOCC unido intermolecularmente puede tener un peso molecular promedio de al menos 500.000 daltons. La unión puede tener lugar a través de un enlace amida directo entre un grupo carboxilo de la primera cadena de NOCC y un grupo amino de la cadena de NOCC. En determinados casos, la primera y la segunda cadena de NOCC pueden estar unidas a un resto puente de unión.

La unión puede ser también intramolecular (a saber, entre grupos funcionales de una cadena de NOCC sencilla). El peso molecular promedio del citado NOCC unido intramolecularmente no resulta significativamente distinto del peso molecular promedio del NOCC no unido, si bien el peso molecular aparente, medido a través de técnicas tales como filtración de gel, puede parecer diferente debido a los cambios en el tamaño o forma moleculares que acompañan al procedimiento de unión. Se tendrá en cuenta que una determinada cadena NOCC puede estar a la vez unida intramolecularmente e intermolecularmente. El NOCC unido intramolecularmente puede también estar unido a un agente activo, para formar un aducto NOCC-agente activo.

En otro aspecto, la invención proporciona un compuesto que comprende N,O-carboximetilquitosano unido covalentemente a un agente activo (para formar un aducto NOCC-agente activo), o una de sus sales farmacéuticamente aceptables. El N,O-carboximetilquitosano puede estar unido al agente activo a través de un enlace amida. El grupo N,O-carboximetilquitosano puede estar covalentemente unido al agente activo a través de un resto puente de unión, o el NOCC puede estar directamente unido al agente activo sin un resto puente de unión. Los compuestos unidos intermolecularmente, con o sin un resto puente de unión, pueden ser preparados mediante unión intermolecular del agente activo con NOCC, tal y como se describe más adelante con mayor detalle.

El agente activo puede estar unido a NOCC, de tal forma que el mismo puede ser liberado del NOCC, en forma terapéuticamente eficaz. Así pues, por ejemplo, un compuesto terapéuticamente activo puede estar unido a NOCC a través de un enlace que puede ser hidrolizado in vivo, ya sea enzimática o no enzimáticamente. Por ejemplo, determinados enlaces amida pueden ser hidrolizados a través de enzimas, tales como proteasas. (Para ejemplos de otros enlaces que pueden ser rotos in vivo, ver, por ejemplo, R.B. Silverman, "The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action", (1992), Chp. 8, Academic Press). Así pues, la invención proporciona un aducto NOCC-agente activo, el cual puede liberar el agente activo a través de la rotura química del enlace covalente entre el NOCC y el agente activo. Para la administración a un paciente, la composición puede también incluir un soporte farmacéuticamente estable.

En todavía otro aspecto, la invención proporciona N,O-carboximetilquitosano unido a través de puente intermolecularmente, en donde la unión a través de puente de unión tiene lugar a través de un enlace entre un grupo carboxilo de una primera cadena de N,O-carboximetilquitosano y un grupo carboxilo de una segunda cadena de N,O-carboximetilquitosano.

En otro aspecto, la invención proporciona N,O-carboximetilquitosano unido intermolecularmente a través de puente de unión, en donde la unión tiene lugar a través de un enlace amida entre grupos amino sobre una primera y una segunda cadena de N,O-carboximetilquitosano, en donde los grupos amino están unidos a través de un resto puente de unión. Así pues, por ejemplo, un ácido dicarboxílico, tal como el ácido succínico, puede ser utilizado como un reactivo puente de unión bifuncional entre dos grupos amino de NOCC, de tal forma que el NOCC unido través de puente está unido a través de al menos un (o, en este ejemplo, dos) enlaces amida. La citada unión a través de puente puede ser lograda mediante la reacción de NOCC con, por ejemplo, anhídrido succínico, para proporcionar NOCC succinilado; los restos de carboxilato succínico pueden entonces ser unidos directamente a los grupos amino de una segunda cadena de NOCC (preferiblemente en presencia de un reactivo de acoplamiento), para proporcionar NOCC unido a través de puente, en el cual la unión a través de puente tiene lugar a través de un enlace amida entre grupos amino sobre la primera y la segunda cadenas de NOCC.

II. Procedimientos

En otro aspecto, la invención proporciona un procedimiento para la preparación de N,O-carboximetilquitosano unido covalentemente. El procedimiento incluye el paso de hacer reaccionar N,O-carboximetilquitosano en presencia de un reactivo de acoplamiento, en condiciones tales que un grupo amino de una cadena de N,O-carboximetilquitosano forma un enlace amida con un grupo carboxilo de una cadena de N,O-carboximetilquitosano, permitiendo con ello la preparación de N,O-carboximetilquitosano unido covalentemente.

La utilización de reactivos de acoplamiento para favorecer la reacción de un grupo amino con un grupo carboxilo para formar un enlace amida resulta conocida y, a tal efecto, se dispone de una diversidad de reactivos y procedimientos de acoplamiento adecuados para el citado propósito (ver, por ejemplo, G.A. Grant, Ed., "Synthetic Peptides: A User's Guide", supra, u M. Bodansky, "Priciples of Peptide Synthesis", supra). El reactivo de acoplamiento puede ser una carbodiimida; tal como DCC o EDC, o el reactivo de acoplamiento ser seleccionado de entre otros reactivos, tales como BOP, HBTU, TBTU, TOPPipU, PyBOP y BOP-Cl. Opcionalmente, el procedimiento puede incluir la utilización de un catalizador, a la vez que se potencia la formación de enlace amida. Entre los ejemplos de catalizadores se incluyen la N-hidroxisuccinimida y HOBt. Las reacciones de unión pueden ser llevadas a cabo en una diversidad de disolventes, si bien la limitada solubilidad del NOCC en muchos disolventes orgánicos requerirá generalmente que el disolvente sea agua o una mezcla acuosa. Se apreciará el hecho de que en soluciones de NOCC puede tener lugar tanto la unión intramolecular como la unión intermolecular. La cantidad de producto intramolecular formado en comparación con la cantidad de producto unido intermolecularmente puede ser alterada por factores tales como la dilución (las soluciones diluidas favorecen generalmente la reacción intramolecular) o la presencia de otros agentes que pueden reaccionar con NOCC.

En otro aspecto, la invención proporciona un procedimiento para la unión intermolecular de un agente activo a N,O-carboximetilquitosano, para formar un aducto NOCC-agente activo. El procedimiento incluye hacer reaccionar N,O-carboximetilquitosano y el agente activo en presencia de un reactivo de acoplamiento, en condiciones tales que se forme un enlace directo entre el N,O-carboximetilquitosano y el agente activo, dando lugar con ello a la unión directa (intermolecular) entre el agente activo y el N,O-carboximetilquitosano, para formar el aducto NOCC-agente activo. El enlace directo puede ser un enlace amida o, en algunos casos, un enlace tal como un éster o un tioéster. Si un agente terapéuticamente activo se une a NOCC, ello puede resultar ventajoso para que el enlace directo sea capaz de hidrólisis (u otra rotura, tal como oxidación o reducción), en las condiciones encontradas in vivo. Así pues, el agente puede ser separado por rotura del NOCC después de la administración a un paciente, por ejemplo, a través de un enzima, liberando el compuesto terapéuticamente activo.

Un grupo carboxilo del agente activo puede reaccionar con un grupo amino del N,O-carboximetilquitosano para formar un enlace amida, el cual puede ser un enlace directo entre un grupo carboxilo del agente activo y un grupo amino de la cadena de N,O-carboximetilquitosano. Alternativamente, un grupo amino del agente activo puede reaccionar con un grupo carboxilo de N,O-carboximetilquitosano para formar un enlace amida, el cual puede ser un enlace directo entre un grupo amino del agente activo y un grupo carboxilo de la cadena de N,O-carboximetilquitosano. El agente activo es, preferiblemente, un compuesto terapéuticamente activo. Puede utilizarse cualquier agente activo que incluya un grupo funcional que sea capaz de reaccionar con NOCC, o con un grupo puente de unión unido a NOCC, Por ejemplo, el agente activo puede ser una proteína o un péptido, el cual puede estar unido a NOCC a través de una diversidad de vías, incluyendo la unión directa (por ejemplo, a través de la amina terminal o el grupo carboxilo terminal de una proteína, o a través de un grupo reactivo de una cadena lateral, tal como una amina, un grupo carboxilo, un grupo hidroxilo, o un grupo tiol de una proteína). El N,O-carboximetilquitosano puede estar inter o intramolecularmente unido a N,O-carboximetilquitosano.

La unión de un agente activo con NOCC en presencia de un reactivo de acoplamiento puede también dar lugar a la unión directa intermolecular o intramolecular del NOCC, tal como se ha descrito supra. La formación del aducto NOCC-agente activo puede resultar favorecida, por ejemplo, mediante la utilización de grupos protectores para bloquear temporalmente los grupos reactivos de NOCC. Por ejemplo, los grupos amino de NOCC desprotegidos. El NOCC protegido puede entonces unirse directamente al agente activo que contiene amina, en presencia de un reactivo de acoplamiento, sin que tenga lugar una excesiva unión intramolecular o intermolecular de NOCC. Una vez completada la formación del aducto NOCC-agente activo protegido, los grupos protectores de amina sobre la cadena de NOCC pueden ser eliminados para proporcionar el aducto NOCC-agente activo. De forma similar, los grupos carboxilo del OCC pueden ser bloqueados cuando se desee obtener unión directa de un agente activo que contiene carboxilo. (Para una referencia general a grupos protectores, ver, por ejemplo, T.W. Green y P.G.M. Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis"., 2nd Ed. John Wiley & Sons (1991).

En todavía otro aspecto, la invención proporciona un procedimiento para la administración a un paciente de un compuesto terapéuticamente eficaz. El procedimiento incluye aplicar un aducto NOCC-agente activo, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, opcionalmente en un soporte farmacéuticamente aceptable, a un paciente, en condiciones tales que el compuesto terapéuticamente eficaz sea administrado al paciente. El compuesto terapéuticamente eficaz puede ser liberado mediante rotura del enlace covalente con NOCC, tal como se ha descrito anteriormente. Los compuestos de NOCC unidos covalentemente con un agente terapéuticamente activo pueden ser preparados tal como se describe en el presente documento. Cuando el aducto NOCC-agente activo se encuentra en forma de gel, el gel puede ser administrado de forma directa. El aducto puede ser también disuelto o suspendido en un soporte farmacéuticamente aceptable, para su administración a través de otras rutas, las cuales resultan convencionales en la técnica.

En todavía otro aspecto, la invención proporciona un procedimiento para minimizar las adherencias post-quirúrgicas. El procedimiento incluye el paso de aplicar una cantidad eficaz de N,O-carboximetilquitosano unido covalentemente, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, al tejido, en condiciones tales que la adherencia post-quirúrgica resulte minimizada. En la solicitud de patente USA de número de serie 08/436.770 se describen ejemplos de la administración de geles de NOCC para evitar las adherencias post-quirúrgicas.

La invención proporciona también procedimientos para la tratamiento de heridas, por ejemplo, desbridamiento de heridas, prevención o minimización de infección y de inflamación, aplicación tópica de agentes activos a las heridas, absorción de fluido exudado, hidratación de heridas o vendaje de heridas. El procedimiento incluye el paso de aplicar una cantidad eficaz de N,O-carboximetilquitosano unido covalentemente, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, a una herida en condiciones adecuadas para la tratamiento de la herida, es decir en condiciones que favorezcan el cicatrizado de la misma. Se apreciará que el NOCC unido covalentemente puede presentarse en forma de un gel (por ejemplo, un hidrogel) o en forma de sólido, por ejemplo, un sólido seco, siempre y cuando la composición de NOCC sea capaz de absorber cantidades sustanciales de exudado líquido procedente de la herida. De forma ventajosa, una composición de NOCC unido de la invención, cuando es aplicada en forma seca, puede absorber al menos 50 veces su peso en seco en líquido y, en determinadas realizaciones, pude absorber hasta 500 veces si peso en líquido. Se apreciará también el hecho de que la tratamiento de la herida según los procedimientos de la invención puede incluir combinaciones de dos o más modalidades de tratamiento de heridas descritas en el presente documento, por ejemplo, NOCC unido covalentemente, al cual se le ha unido un agente activo, puede ser aplicado a una herida tanto para absorber exudado como para proporcionar una formulación de liberación sostenida del agente activo para potenciar el cicatrizado de la herida, potenciando con ello el cicatrizado de la herida a través de una combinación de mecanismos.

Ejemplificación Ejemplo 1 Unión de NOCC mediada por carbodiimida

A una solución de agua desionizada (200 ml) se le añadió NOCC seco (2,0 gramos) y una pequeña cantidad de cloruro sódico (0,5 gramos) y fue sometida a agitación durante un período aproximado de 30 minutos. Para asegurar la adecuada disolución del polímero se aplicó la cantidad mínima de calor. El pH de la solución fue ajustado para medir entre 7 y 8. Si el pH alcanzaba valores por encima de ocho, se añadía ácido clorhídrico a la solución para reducirlo a entre 7 y 8. La adición de ácido provocaba, a veces, la precipitación parcial de NOCC, en cuyo caso la mezcla era sometida a agitación hasta alcanzar de nuevo la total disolución del NOCC (por regla general durante un período mínimo de 3 horas). La carbodiimida EDC (1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)-carbodiimida) era disuelta en 5-7 mililitros de agua y el pH de la solución de EDC se ajustó para medir entre siete y ocho. La solución de EDC fue entonces añadida a la solución de NOCC, gota a gota, con agitación vigorosa. N-hidroxisuccinimida (NHS) fue disuelta en agua (3-5 ml), el pH se ajustó entre 7 y 8, como anteriormente, y la solución de NHS fue añadida a la mezcla de NOCC/EDC, preferiblemente una vez transcurridos entre 2 y 3 minutos después de la adición de EDC. La solución fue mantenida en agitación durante un período adicional de 15 minutos, o hasta que la solución gelificó, evitando con ello que la barra de agitación dejase de girar. Si el gel cuajaba rápidamente y resultaba difícil la agitación, la sustancia gelatinosa era sometida a agitación por medio de una espátula, con vistas a asegurar un correcto mezclado. La barra de agitación fue retirada con un recuperador y el vaso cubierto con parafina. Se permitió que la mezcla de reacción estuviese en reposo durante el transcurso de una noche a temperatura ambiente y que tuviera un tiempo de curación promedio de dieciocho horas. Se siguió el mismo procedimiento para la totalidad de preparaciones, variando únicamente las relaciones molares de EDC y de NHS. A lo largo de los experimentos, la solución fue sometida a agitación rápidamente y cualquiera de las adiciones fue llevada a cabo con lentitud, con vistas a evitar la formación de cualquier área de elevada concentración de reactivos. Las relaciones molares de reactivos utilizadas en las reacciones de unión se proporcionan en la Tabla 1.

1

Se averiguó que el orden de adición de los diversos componentes de reacción (por ejemplo, la adición de EDC a NOCC, después la adición de NHS a NOCC, o viceversa) tenía escaso efectos sobre el rendimiento o la pureza del producto. Cuando la relación molar de EDC a NOCC era relativamente elevada, la reacción transcurría rápidamente y la mezcla de reacción en algunos casos devenía tan viscosa que dificultaba el correcto mezclado de los reactivos adicionales (tales como la NHS) resultaba difícil.

Cuando se hicieron reaccionar soluciones de NOCC con EDC y NHS, la viscosidad se incrementaba de forma apreciable al cabo de quince minutos y la solución permanecía clara. Una vez transcurridos entre 30 minutos y 3 horas, en función del nivel de EDC añadido (el gel cuajaba más rápidamente con EDC incrementada), la solución dejaba de ser colable y transparente, y se formaba un gel claro (un hidrogel). La reacción producía un hidrogel para relleno, gelatinoso, el cual, una vez retirado del recipiente de reacción, conservaba su forma y era una sustancia tipo hidrogel firme. Cuando el hidrogel cuajaba no permanecía un exceso de masa de agua y el hidrogel no liberaba agua después de transcurridos varios días en reposo.

Si bien la reacción de unión directa transcurría en ausencia de NHS, la reacción no tenía lugar en ausencia de carbodiimida. No obstante, la NHS es el catalizador para las reacciones mediadas por carbodiimida y se averiguó que incrementaba de modo significativo la velocidad de la reacción de unión. Por ejemplo, a determinadas bajas relaciones molares de EDC-NOCC, y en ausencia de NHS, los geles preparados tardaban hasta un total de 12 horas en cuajarse firmemente; este período de tiempo se reducía a menudo hasta las 5-6 horas cuando en la mezcla de reacción se encontraba presente NHS. Los geles preparados con relaciones molas elevadas de EDC:NOCC y en ausencia de HNS cuajaban en tan solo 35 minutos, reduciéndose este periodo de tiempo a entre 10 y 15 minutos en presencia de HNS. Los rendimientos promedio (aprox. 80%) eran los mismos con o sin NHS. Así pues, la NHS modificaba la velocidad de reacción pero no incrementaba el rendimiento.

Sin pretender quedar vinculados por la teoría, se considera que la reacción de unión de NOCC mediada por carbodiimida transcurre a través de un mecanismo similar al mecanismo generalmente aceptado para la unión mediada por carbodiimida. Se considera que la adición de NHS potencia la rapidez de la reacción mediante la conversión del intermedio O-acilurea (formado a través de la reacción del grupo carboxilato de NOCC con la carbodiimida) a un éster de NHS activado, el cual reacciona después con un grupo amino de NOCC para formar el producto unido intermolecularmente.

Después de que la reacción se hubiera desarrollado durante el período de tiempo deseado, se aisló el producto. En general, el producto se presentaba en forma de un extremadamente hidrófilo hidrogel claro, no soluble. El hidrogel, que comprendía 2,0 gramos de NOCC en 200 ml de agua, fue purificado y reducido a forma sólida para su análisis. Inicialmente, el hidrogel fue dividido en cuatro partes iguales que fueron mezcladas individualmente en un mezclador con aproximadamente 200 ml de una mezcla 50:50 de acetona e isopropanol, a baja velocidad. Se formó un precipitado blanco en forma de copos, el cual fue después filtrado y liofilizado. El procedimiento de aislamiento podía ser modificado para incluir un paso que eliminaría cualquier sal (NaCl), subproductos (urea) o reactivos sobrantes (EDC, NHS). Para eliminar estas impurezas, se permitió que el hidrogel se hinchara en un gran vaso de agua desionizada (300-500 ml) y se colocó después en tubos de diálisis. Los tubos de diálisis llenos fueron remojados con agua desionizada durante un período de tiempo comprendido entre cinco y siete días, cambiando el agua dos veces por día. Una vez se hubo retirado el hidrogel hinchado de los tubos, el mismo fue deshidratado remojándolo en una mezcla 50:50 de acetona e isopropanol (2,0 L). Se formo un precipitado esponjoso de color blanco, el cual fue seguidamente liofilizado. Para este procedimiento, la utilización del mezclador fue considerada innecesaria, se obtuvo un precipitado mediante la impregnación del hidrogel en una mezcla de acetona e isopropanol al 50:50, durante un período de 24 horas, filtrándose luego el hidrogel a través de un embudo buchner y devolviéndolo a una mezcla fresca de acetona:isopropanol durante otro período de 2-3 días. El producto esponjoso de color blanco fue liofilizado. El producto final era un sólido de color blanco, que fue aplastado utilizando un mortero y una mano de almirez y después hecho pasar a través de un tamiz fino (300 \mum) para nuevos análisis.

El producto sólido purificado fue analizado y los resultados estaban en consonancia con el NOCC unido intra y/o intermolecularmente.

Ejemplo 2 Hinchado de geles de NOCC unido directamente

Sobre los productos de gel directamente unidos del Ejemplo 1 se llevaron a cabo dos diferentes tipos de experimentos de hinchado, con vistas a determinar la capacidad de los hidrogeles de absorber agua. El primer experimento de hinchado conllevaba la determinación de la cantidad de agua que era absorbida por la forma hidrogel (a saber, antes del aislamiento y de la purificación). Se permitió que los productos hidrogel de las reacciones de unión se hincharan en exceso de agua desionizada durante el transcurso de una noche, tomándose nota del volumen de agua añadido. El agua sobrenadante fue entonces eliminada por medio de filtración y medida, determinándose como consecuencia la cantidad de agua absorbida por el hidrogel.

En un segundo experimento, se permitió que 0,4 gramos del producto sólido purificado y aislado (0,40 gramos) se hincharan en agua desionizada (500 ml). El producto hinchado fue filtrado y se determinó la cantidad de agua absorbida. Se utilizaron productos con relaciones molares variables de NOCC, EDC y NHS.

A medida que se incrementaba la relación de EDC con respecto a NOCC, la cantidad de agua absorbida por el hidrogel descendía, sugiriendo que el hidrogel era menos polar debido a la extensiva unión intermolecular, o que el tamaño de poro del hidrogel era más pequeño, convirtiendo al hidrogel en menos permeable o menos capaz de expandirse para retener agua. Ciertamente, a la relación más elevada de EDC a NOCC de entre las utilizadas, el hidrogel realmente liberaba una pequeña cantidad de agua. Se averiguó también que los productos de unión secos, aislados, absorbían menos cantidad de agua cuando se empleaban relaciones de EDC a NOCC más elevadas. Se averiguó que el producto seco, aislado, podía absorber 50 veces su peso en agua cuando para llevar a cabo la unión se utilizó una relación NOCC:EDC:NHS de 1:1:0,04, pero el producto seco podía absorber más de 500 veces su peso en agua, cuando para la unión se utilizaba una relación NOCC:EDC:NHS de 10:1:0,04.

Se hizo también notar que la exposición a elevada temperatura (por ejemplo, mediante calentamiento en un autoclave) daba como resultado algo de pérdida de la rigidez del hidrogel.

Ejemplo 3 Unión directa de agentes al NOCC

Para la adición de agentes al NOCC se utilizó una versión modificada del procedimiento del Ejemplo 1. Se disolvió NOCC (2,0 gramos) en 200 ml de agua desionizada, se añadió NaCl (0,5 gramos) y la solución fue sometida a intensa agitación. Se ajustó el pH para situarlo entre siete y ocho. Si el pH estaba por encima de ocho se añadía ácido clorhídrico diluido y se procedía a agitar intensamente para redisolver cualquier NOCC que hubiera podido precipitar desde la solución. A esta solución se le añadió el agente (en este ejemplo se utilizaron butilamina y cisteina), se agitó intensamente y se añadieron las cantidades deseadas de EDC y de NHS a la mezcla de reacción. Para esta reacción con el aminoácido cisteina, la EDC y la NHS fueron añadidas a la mezcla de reacción. Para la reacción con el aminoácido cisteina, la EDC y la cisteina se mezclaron conjuntamente en 50 ml de tampón PBS y el NOCC se disolvió en 150 ml de tampón. Las dos soluciones fueron después mezcladas y se añadió el reactivo NHS. Las reacciones fueron llevadas a cabo a un pH al cual los grupos amino de la butilamina y de la cisteina se encontraban muy protonados.

El agente que tenía que unirse al NOCC fue proporcionado en exceso molar para minimizar la unión directa intramolecular del NOCC. Ciertamente, la reacción con butilamina o cisteina no producía, en las condiciones utilizadas, un hidrogel similar a los hidrogeles del Ejemplo 1. Más bien al contrario, las mezclas de reacción permanecían en forma de soluciones viscosas, sugiriendo que la unión intra o intermolecular de NOCC no se había producido en la extensión observada en las reacciones del Ejemplo 1.

Se averiguó que la utilización de elevadas relaciones molares de NOCC:EDC en las reacciones proporcionaba los productos caracterizados más fácilmente. El análisis elemental del producto de reacción butilamina:NOCC estaba de acuerdo con la formación del producto unido NOCC:butilamina. El análisis elemental del producto unido NOCC:cisteina demostró la presencia de azufre en el producto unido. Así pues, la reacción de unión esperada entre la cisteina y el NOCC tenía lugar incluso en presencia de fosfato en el tampón.

Los expertos en la materia se darán cuenta, o serán capaces de averiguar, utilizando únicamente experimentación rutinaria, la existencia de numerosos equivalentes a los procedimientos específicos descritos en el presente documento. Los citados equivalentes se consideran incluidos en el campo de aplicación de la presente invención y están cubiertos por las presentes reivindicaciones.

Claims (25)

1. N,O-carboximetilquitosano unido, en el cual la unión tiene lugar a través de un enlace entre un grupo carboxilo de una cadena de N,O-carboximetilquitosano y un grupo amino de una cadena de N,O-carboximetilquitosano, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.

2. N,O-carboximetilquitosano unido de la reivindicación 1, en el cual el enlace es un enlace amida, en donde, preferiblemente, el enlace amida une directamente un grupo 3-, 6-, o N-carboximetilo de una cadena de N,O-carboximetilquitosano con un grupo 2-amino de una cadena de N,O-carboximetilquitosano.

3. N,O-carboximetilquitosano unido de la reivindicación 1, en el cual el N,O-carboximetilquitosano está unido intermolecularmente, teniendo lugar dicha unión intermolecular a través de un enlace entre un grupo carboxilo de una primera cadena de N,O-carboximetilquitosano y un grupo amino de una segunda cadena de N,O-carboximetilquitosano.

4. N,O-carboximetilquitosano unido intermolecularmente de la reivindicación 3, en el cual el NOCC unido intermolecularmente de manera covalente tiene un peso molecular promedio de al menos 500.000 daltons.

5. N,O-carboximetilquitosano unido intermolecularmente de las reivindicaciones 3 ó 4, en el cual la unión tiene lugar a través de un enlace amida directo entre un grupo carboxilo de una primera cadena de N,O-carboximetilquitosano y un grupo amino de la segunda cadena de N,O-carboximetilquitosano.

6. N,O-carboximetilquitosano unido intermolecularmente de la reivindicación 3, en el cual la primera y segunda cadenas de N,O-carboximetilquitosano están unidas a través de una unidad puente de unión.

7. N,O-carboximetilquitosano unido de la reivindicación 1, en el cual la unión es intramolecular.

8. N,O-carboximetilquitosano unido intermolecularmente a través de un puente, en el cual la unión a través de puente tiene lugar a través de un enlace entre un grupo carboxilo de una primera cadena de N,O-carboximetilquitosano y un grupo carboxilo de una segunda cadena de N,O-carboximetilquitosano, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.

9. N,O-carboximetilquitosano unido intermolecularmente a través de un puente, en el cual la unión a través de puente tiene lugar a través de un enlace amida entre grupos amino sobre la primera y la segunda cadenas de N,O-carboximetilquitosano, en el cual dichos grupos amino están unidos a través de una unidad de unión a través de puente, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.

10. N,O-carboximetilquitosano unido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el cual el NOCC unido covalentemente se encuentra en forma de hidrogel.

11. N,O-carboximetilquitosano unido de la reivindicación 10, en el cual el hidrogel atrapa un agente terapéuticamente activo.

12. N,O-carboximetilquitosano unido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, que comprende además un agente terapéuticamente activo unido al N,O-carboximetilquitosano.

13. Procedimiento para la preparación de un N,O-carboximetilquitosano unido, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, que comprende hacer reaccionar N,O-carboximetilquitosano en presencia de un agente de acoplamiento.

14. Procedimiento de la reivindicación 13, en el cual el reactivo de acoplamiento es una carbodiimida, que se selecciona preferiblemente de entre BOP, HBTU, TBTU, TOPPipU, PyBOP y BOP-Cl.

15. Procedimiento de la reivindicación 13 ó 14, que comprende adicionalmente un catalizador que promueve la formación de enlace amida, en el cual, preferiblemente, el catalizador es N-hidroxisuccinimida o HOBt.

16. Procedimiento para unir intermolecularmente un agente terapéuticamente activo con N,O-carboximetilquitosano unido, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, para formar un aducto de NOCC-agente terapéuticamente activo, que comprende hacer reaccionar el N,O-carboximetilquitosano unido y el agente terapéuticamente activo en presencia de un reactivo de acoplamiento.

17. Procedimiento de la reivindicación 16, en el cual un grupo carboxilo del agente terapéuticamente activo reacciona con un grupo amino de N,O-carboximetilquitosano para formar un enlace amida directo; o un grupo amino del agente terapéuticamente activo reacciona con un grupo carboxilo de N,O-carboximetilquitosano para formar un enlace amida directo.

18. Procedimiento de las reivindicaciones 16 ó 17, en el cual el agente terapéuticamente activo se selecciona de entre proteínas y péptidos.

19. Composición que comprende N,O-carboximetilquitosano unido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, unido covalentemente a un agente terapéuticamente activo o a una de sus sales farmacéuticamente aceptables; en donde el N,O-carboximetilquitosano está unido al agente terapéuticamente activo a través de un enlace amida.

20. Composición de la reivindicación 19, en la cual el grupo N,O-carboximetilquitosano está unido covalentemente al agente terapéuticamente activo a través de una unidad puente de unión.

21. Composición de la reivindicación 19, en el cual el grupo N,O-carboximetilquitosano está directamente unido al agente terapéuticamente activo.

22. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 19 a 21, que comprende además un soporte farmacéuticamente aceptable.

23. N,O-carboximetilquitosano unido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, o una composición según cualquiera de las reivindicaciones 19 a 22, para utilizar en la administración de un compuesto terapéuticamente eficaz a un paciente que tenga necesidad.

24. N,O-carboximetilquitosano unido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, para utilizar en el tratamiento de heridas, en donde, preferiblemente, el tratamiento de heridas incluye al menos uno de desbridamiento de la herida, minimización de la infección, aplicación de un agente terapéuticamente activo a la herida, absorción de fluido exudado e hidratación de la herida.

25. N,O-carboximetilquitosano unido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, para utilizar en la minimación de las adherencias post-quirúrgicas.