ES2229212T3 - Precursores de nucleotidos de pirimidina para el tratamiento de la hepatitis inflamatoria. - Google Patents

Precursores de nucleotidos de pirimidina para el tratamiento de la hepatitis inflamatoria.

Info

Publication number
ES2229212T3
ES2229212T3 ES94903322T ES94903322T ES2229212T3 ES 2229212 T3 ES2229212 T3 ES 2229212T3 ES 94903322 T ES94903322 T ES 94903322T ES 94903322 T ES94903322 T ES 94903322T ES 2229212 T3 ES2229212 T3 ES 2229212T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
endotoxin
uridine
acid
compounds
liver
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
ES94903322T
Other languages
English (en)
Inventor
Reid Warren Von Borstel
Michael Kevin Bamat
Bradley M. Hiltbrand
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Wellstat Therapeutics Corp
Original Assignee
Wellstat Therapeutics Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Wellstat Therapeutics Corp filed Critical Wellstat Therapeutics Corp
Application granted granted Critical
Publication of ES2229212T3 publication Critical patent/ES2229212T3/es
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/513—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. cytosine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/513—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. cytosine
    • A61K31/515—Barbituric acids; Derivatives thereof, e.g. sodium pentobarbital
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A61K31/7072—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid having two oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. uridine, uridylic acid, thymidine, zidovudine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/02—Local antiseptics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/02—Antidotes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

SE DESCRIBEN PRECURSORES DE NUCLEOTIDO DE PIRIMIDINA QUE INCLUYEN DERIVADOS DE ACILO DE CITIDINA, URIDINA Y OROTATO E INHIBIDORES DE FOSFORILASA DE URIDINA Y SU USO PARA AUMENTAR LA RESISTENCIA A LA SEPSIS O INFLAMACION GENERAL.

Description

Precursores de nucleótidos de pirimidina para el tratamiento de la hepatitis inflamatoria.
Campo de la invención
Esta invención se refiere en general a precursores de nucleótidos de pirimidina que incluyen derivados acílicos de citidina, uridina y orotato, y a los usos profilácticos y terapéuticos de estos compuestos. La invención se refiere también a la administración de estos compuestos, solos o en combinaciones, con o sin otras sustancias, a animales. Estos compuestos son capaces de incrementarla resistencia de un animal a la endotoxina bacteriana y a otros estímulos inflamatorios y mediadores inflamatorios.
Antecedentes de la invención
La septicemia, también conocida como síndrome septicémico, es una consecuencia de una infección grave por bacterias, hongos o virus. La septicemia causa decenas de miles de muertos en Estados Unidos todos los años; es una causa principal de muerte de pacientes en unidades quirúrgicas de cuidados intensivos.
La septicemia es una alteración inflamatoria en la que las citoquinas endógenas y otras moléculas bioactivas, producidas o provocadas como respuesta a un estímulo inflamatorio, como una endotoxina bacteriana (un componente de la pared celular de las bacterias gram-negativas), produce varios síntomas, incluyendo fiebre, neutropenia, alteraciones de la coagulación sanguínea, hipotensión, choque y lesión orgánica.
La septicemia (o en su forma más grave el choque septicémico), es un ejemplo de una clase más amplia de enfermedad denominada el "síndrome de respuesta inflamatoria sistémica" (SIRS), que es una reacción del organismo a estímulos inflamatorios como la endotoxina (que puede estar presente en el torrente circulatorio sin bacteremia, p.ej., debido a un escape de endotoxina procedente de bacterias gram-negativas en la circulación, procedentes de una infección localizada o del intestino); el SIRS se puede desencadenar también por bacterias gram-positivas, hongos, virus y también puede ser una consecuencia de alteraciones autoinmunitarias o de la administración de citoquinas inflamatorias terapéuticas.
El tratamiento actual del SIRS implica apoyo respiratorio y circulatorio, pero no se dirige directamente a la mejora de la resistencia de los tejidos a estímulos inflamatorios, como la endotoxina o mediadores inflamatorios.
Se están desarrollando anticuerpos monoclonales para neutralizar las endotoxinas o los mediadores de sus efectos biológicos. Sin embargo, es caro o poco práctico usar anticuerpos como profilaxis en pacientes susceptibles, antes del establecimiento de los síntomas de envenenamiento por endotoxina. Además, es difícil determinar qué pacientes son susceptibles de beneficiarse del tratamiento con anticuerpos, ya que el tiempo requerido para cultivar e identificar los organismos infecciosos, a menudo excede del límite de tiempo para la puesta en práctica de una terapia efectiva. Se han encontrado problemas similares en intentos para usar antagonistas de receptores de mediadores inflamatorios específicos, como la interleuquina-1.
Las citoquinas endógenas y otras moléculas bioactivas producidas por macrófagos, células de Kupffer (macrófagos sésiles en el hígado) y otros tipos celulares, actúan como mediadores de la toxicidad de la endotoxina, como respuesta a la endotoxina. Entre los más significativos de estos mediadores se encuentran el factor de necrosis tumoral (TNF) y la interleuquina (IL-1). Otros incluyen en factor activador de plaquetas (PAF), la interleuquina-6, los leucotrienos y otros derivados del ácido araquidónico. La administración de estas citoquinas o mediadores produce síntomas similares a al menos algunos de los provocados por la endotoxina. La producción o actividad elevada de TNF (o sensibilidad elevada a TNF), o IL-1, que produce lesión tisular, puede producirse por sustancias o patologías distintas de la endotoxina bacteriana. Tales enfermedades incluyen la infección con bacterias gram- positivas, virus u hongos, o lesión hepática. Las citoquinas inflamatorias pueden producir lesiones tisulares si están presentes en exceso pero, cuando se producen en cantidades moderadas, son importantes en la defensa frente a organismos infecciosos o virus. Por ejemplo, los anticuerpos frente a TNF pueden reducir la toxicidad de una dosis administrada de endotoxina (bloqueando los efectos negativos del TNF producido por la endotoxina), pero pueden tener un efecto deletéreo en el caso de algunas infecciones bacterianas, convirtiendo un estado subletal de infección en una infección letal aplastante (Havell, J. Immunol., 1987, 139:4225-4231; Echtenacher et al., J. Immunol., 1990, 145:3762-3766). Por tanto, hay problemas inherentes a las estrategias para el tratamiento del síndrome septicémico o del SIRS con sustancias que inactivan directamente las citoquinas inflamatorias.
El hígado es un sitio principal de eliminación o destoxificación de la endotoxina (Farrar y Corwin, Ann. N. Y. Acad. Sci., 1966, 133:668-684) y proteínas inflamatorias, como el TNF; a la inversa, el hígado es susceptible de lesión por endotoxina y sus mediadores. En las lesiones hepáticas debidas a muchas causas (p.ej. tetracloruro de carbono, deficiencia de colina, infección vírica, síndrome de Reye, alcohol) interviene en parte la endotoxina bacteriana o mediadores producidos por la endotoxina, incluso cuando no están presentes los síntomas de la septicemia sistémica (Nolan, Gastroenterology, 1975, 69:1346-1356; Nolan, Hepatology, 1989, 10:887-891). La toxicidad hepática es limitante de dosis en pacientes que reciben inyecciones intencionales de endotoxina por su posible eficacia en el tratamiento del cáncer (Engelhardt et al, Cancer Research, 1991, 51:2524-2530). Se ha descrito que el hígado es el primer órgano vital que presenta alteraciones patológicas en el choque septicémico (Kang et al., J. Histochem. Cytochem., 1988, 36:665-678). Además, la disfunción hepática se produce en las etapas tempranas de la septicemia y puede iniciar una insuficiencia orgánica secuencial (Wang et al., Arch. Surg.., 1991, 126:219-224).
El hígado es importante para regular la sensibilidad de un animal a la endotoxina. Diversos tratamientos que dificultan la función o el metabolismo del hígado, como el envenenamiento con acetato de plomo, cicloheximida, actinomicina D o galactosamina, pueden incrementar la sensibilidad de los animales a la endotoxina o el TNF, en algunos casos en varios órdenes de magnitud.
Las lesiones hepáticas inducidas por galactosamina son únicas porque son fácilmente reversibles durante un periodo, antes de que se produzca la muerte celular. La galactosamina reduce selectivamente los nucleótidos de uridina hepáticos, bloqueándolos en UDP-hexosaminas, que no se convierten nuevamente en nucleótidos libres. Esto puede conducir a lesiones hepáticas, si la reducción de nucleótidos de uridina es suficientemente prolongada, debido a la alteración de la síntesis de RNA y proteínas. La deficiencia bioquímica inducida por galactosamina se invierte fácilmente mediante administración de uridina, que reemplaza los nucleótidos de uridina retenidos por la galactosamina. Por tanto, la administración de uridina justo antes o después de la administración de galactosamina atenúa la lesión hepática inducida por galactosamina y, consecuentemente, restablece la sensibilidad a endotoxina hacia sus valores normales (Galanos et al., PNAS, 1979, 76:5939-5943).
De forma similar, la hipersensibilidad a endotoxina en ratones tratados deliberadamente con la hepatotoxina de roedores TCDD, se invirtió parcialmente mediante administración de uridina (Rosenthal et al., Toxicology, 1989, 56:239-251).
Sin embargo, en contraste con estas situaciones en las que la uridina restablecía parcialmente la resistencia a la endotoxina reducida experimentalmente, se describió que la uridina no tenía un efecto protector en ratones normales expuestos a endotoxina (Markley et al., J. Trauma 1970, 10:598-607), es decir, no producía una resistencia a endotoxina superior a la normal.
Se han ensayado la uridina, citidina y orotato para efectos sobre la función hepática en alteraciones hepáticas y en modelos experimentales, con resultados variados. Shafer e Isselbacher (Gastroenterology, 1961, 40:782-784) describieron que la infusión intravenosa diaria de 25 a 100 miligramos de citidina y uridina, durante 3 a 7 días, a pacientes con cirrosis hepática no tenía efecto sobre el estado clínico. El ácido orótico añadido a la dieta de una rata en una concentración del 1 por ciento produce una infiltración grasa del hígado (von Euler et al, J. Biol. Chem., 1963, 238:2464-2469); el ácido orótico administrado mediante inyección intraperitoneal redujo las lesiones hepáticas en ratas tratadas con tetracloruro de carbono, dicloroetano, DDT, y 9,10-dimetil-1,2-benzantraceno (Pates et al., Farmakol Toksikol., 1968, 31:717-719). La lisina-orotato potenciaba la toxicidad de extractos hepatotóxicos del hongo Amanita Phalloides; el orotato sódico y el ácido orótico no producían ningún efecto sobre la toxicidad del extracto de Amanita (Halacheva et al., Toxicon, 1988, 26:571-576). El ácido orótico se ha administrado clínicamente a seres humanos para el tratamiento de la hiperbilirrubinemia neonatal y para mejorar la recuperación del infarto de miocardio (O'Sullivan, Aust. N.Z. J. Med., 1973, 3:417-422). El orotato no se absorbe bien tras la administración oral, en parte debido a su escasa solubilidad.
JP-03135918A (AJINOMOTO), describe el uso de inmunoestimuladores que comprenden citidina y uridina, para el tratamiento de p.ej. la disfunción hepática.
WO 89/03837, describe el uso de derivados acílicos de citidina y uridina, para el tratamiento, p.ej., de enfermedades hepáticas y lesiones hepáticas. Se menciona el transporte mejorado de citidina y uridina aciladas a través de la barrera gastrointestinal. Se demuestra que la triacetil-uridina y la triacetil-citidina atenúan la lesión hepática inducida por tetracloruro.
A partir de US-A-874602, se sabe que se puede administrar 5-bencil-acilo-uridina, un inhibidor de la uridina-fosforilasa, como una alternativa a la uridina en sí, para tratar varias patologías.
US-A-3161565, describe la acción regenerativa del orotato de lisina sobre tejidos hepáticos, y su efecto mejorador sobre la cirrosis.
Los ensayos clínicos que implican la administración de uridina (p.ej. para el propósito de atenuar la toxicidad al hospedador del fármaco antineoplásico 5-fluorouracilo), se han complicado debido a las propiedades biológicas de la uridina en sí. La uridina se absorbe escasamente tras la administración oral; la diarrea es limitativa de la dosis en seres humanos (van Groeningen et al., Proceedings of the AACR, 1987, 28:195). La administración parenteral de uridina requiere el uso de un catéter venoso central (con la consecuente incomodidad y riesgo de infección), ya que la flebitis fue un problema en ensayos clínicos tempranos, cuando la uridina se administraba a través de un catéter venoso braquial (van Groeningen et al., Cancer Treat Rep., 1986, 70:745-50).
La administración de derivados acílicos de uridina y citidina, que son fácilmente absorbidos desde el intestino hacia el torrente circulatorio, y que se hidrolizan después para producir uridina o citidina libres en la circulación, resuelven el problema de la escasa absorción oral de los nucleosidos libres (solicitudes de patente de EE.UU. de n^{os} de serie 438.493, 115.929, y 903.107).
Objetos de la invención
Un objeto principal de la invención es proporcionar sustancias terapéuticas y profilácticas que sean efectivas para mejorar la supervivencia y evitar las lesiones tisulares del síndrome de respuesta inflamatoria sistémica, incluyendo la septicemia.
Un objeto principal de esta invención es proporcionar una familia de compuestos que incrementen de forma efectiva la resistencia a la inflamación sistémica. La administración de estos compuestos a un animal, antes, durante o después de la exposición a endotoxina u otros estímulos inflamatorios, evita o trata los efectos de la inflamación sistémica.
Un objeto adicional de esta invención es proporcionar una familia de compuestos para el uso en la fabricación de medicamentos para el tratamiento de la hepatitis inflamatoria.
Un objeto adicional de la invención es proporcionar compuestos que se puedan administrar oralmente o parenteralmente.
Sumario de la invención
Estos y otros objetos de la invención se logran mediante precursores de nucleótidos de pirimidina, como el ácido orótico o sus sales, uridina, citidina o derivados de profármacos de dichas sustancias, incluyendo derivados acílicos o ésteres de fosfato, que se pueden usar en la fabricación de medicamentos administrados a animales, incluyendo mamíferos como los seres humanos. La administración de estos compuestos solos o en combinación, es útil en la fabricación de medicamentos para el tratamiento o prevención de la hepatitis inflamatoria.
Por tanto, los compuestos de la invención, solos o en combinación, son útiles en la fabricación de medicamentos para el tratamiento y prevención de la septicemia o los efectos tóxicos de las citoquinas inflamatorias; son útiles como sustancias profilácticas en pacientes bajo riesgo de septicemia, p.ej., pacientes sometidos a procedimientos quirúrgicos, o afectados por quemaduras o heridas graves, o inmunodeprimidos como consecuencia de la quimioterapia para el cáncer u otras enfermedades.
Un aspecto importante de esta invención es el descubrimiento de que los precursores de nucleótidos de pirimidina como orotato, uridina o citidina, y los derivados acílicos de tales compuestos, tienen propiedades terapéuticas inesperadas.
Compuestos de la invención
Los compuestos útiles para mejorar la resistencia a estímulos inflamatorios o mediadores inflamatorios, tienen las siguientes estructuras:
En todos los casos, excepto donde se indique, las letras y las letras con subíndices que simbolizan sustituyentes variables en las estructuras químicas de los compuestos de la invención, se aplican sólo a la estructura que precede inmediatamente a la descripción del símbolo.
(1) Uridina o un derivado acílico de uridina que tiene la fórmula:
1 
\vskip1.000000\baselineskip
en la que R_{1}, R_{2}, R_{3} y R_{4} son iguales o diferentes, y cada uno es hidrógeno o un radical acílico de un metabolito, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.
(2) Citidina o un derivado acílico de citidina que tiene la fórmula:
\vskip1.000000\baselineskip
2 
\vskip1.000000\baselineskip
en la que R_{1}, R_{2}, R_{3} y R_{4} son iguales o diferentes, y cada uno es hidrógeno o un radical acilo de un metabolito, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.
(3) Un derivado acílico de uridina que tiene la fórmula:
\vskip1.000000\baselineskip
3 
\vskip1.000000\baselineskip
en la que R_{1}, R_{2}, R_{3} y R_{4} son iguales o diferentes, y cada uno es hidrógeno o un radical acílico de:
a. un ácido graso no ramificado con 5 a 22 átomos de carbono,
b. un aminoácido seleccionado de glicina, las formas L de fenil-alanina, alanina, valina, leucina, isoleucina, tirosina, prolina, hidroxi-prolina, serina, treonina, cistina, cisteína, ácido aspártico, ácido glutámico, arginina, lisina, histidina, carnitina y ornitina,
c. un ácido dicarboxílico que tiene 3-22 átomos de carbono,
d. un ácido carboxílico seleccionado de uno o más del grupo formado por ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido láctico, ácido enol-pirúvico, ácido lipoico, ácido pantoténico, ácido aceto-acético, ácido p-amino-benzoico, ácido beta-hidroxi-butírico, ácido orótico y creatina.
\newpage
(4) Un derivado acílico de citidina que tiene la fórmula:
\vskip1.000000\baselineskip
4 
\vskip1.000000\baselineskip
en la que R_{1}, R_{2}, R_{3} y R_{4} son iguales o diferentes, y cada uno es hidrógeno o un radical acílico de:
a. un ácido graso no ramificado con 5 a 22 átomos de carbono,
b. un aminoácido seleccionado de glicina, las formas L de fenil-alanina, alanina, valina, leucina, isoleucina, tirosina, prolina, hidroxi-prolina, serina, treonina, cistina, cisteína, ácido aspártico, ácido glutámico, arginina, lisina, histidina, carnitina y ornitina,
c. un ácido dicarboxílico que tiene 3-22 átomos de carbono,
d. un ácido carboxílico seleccionado de uno o más del grupo formado por ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido láctico, ácido enol-pirúvico, ácido lipoico, ácido pantoténico, ácido aceto-acético, ácido p-amino-benzoico, ácido beta-hidroxi-butírico, ácido orótico y creatina.
(5) Un derivado acílico de uridina que tiene la fórmula:
\vskip1.000000\baselineskip
5 
\vskip1.000000\baselineskip
en la que uno de R_{1}, R_{2} o R_{3} es un resto hidrocarbil-oxi-carbonilo que contiene 2-26 átomos y los sustituyentes R restantes son independientemente un resto hidrocarbil-oxi-carbonilo o hidrocarbil-carbonilo o H o fosfato.
\newpage
(6) Un derivado acílico de citidina que tiene la fórmula:
6
en la que al menos uno de R_{1}, R_{2}, R_{3} o R_{4} es un resto hidrocarbil-oxi-carbonilo que contiene 2-26 átomos de carbono y los sustituyentes R restantes son independientemente un resto hidrocarbil-oxi-carbonilo o hidrocarbil-carbonilo o H o fosfato.
(7) Ácido orótico o sus sales:
7
Las sales farmacéuticamente aceptables del ácido orótico incluyen aquéllas en las que el componente catiónico de la sal es sodio, potasio, un aminoácido básico, como arginina o lisina, metil-glutamina, colina o cualquier otro catión hidrosoluble atóxico, con un peso molecular inferior a aproximadamente 1000 daltons.
8) Derivados de orotato sustituidos por alcohol:
8
en la que R_{1} es un radical de un alcohol que contiene de 1 a 20 átomos de carbono, unidos al orotato a través de una unión éster.
La invención abarca también las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos anteriormente descritos.
Compuestos ventajosos de la invención son los ésteres de ácidos grasos de cadena corta de uridina o citidina. Compuestos particularmente ventajosos son triacetil-uridina, triacetil-citidina o sales del ácido orótico.
Inhibidores de uridina-fosforilasa
Los siguientes compuestos son útiles en la invención como alternativa o adjunto a los precursores de nucleótidos de pirimidina mencionados anteriormente. Estas sustancias elevan los niveles de nucleótido de uridina tisulares, inhibiendo el catabolismo de la uridina endógena o exógena. La administración conjunta de inhibidores de uridina-fosforilasa con precursores de nucleótidos de pirimidina, reduce la cantidad de precursor de nucleótido requerido para obtener una ventaja terapéutica.
Ejemplos de inhibidores de uridina-fosforilasa incluyen, pero no están limitados a, derivados de 5-bencil-barbiturato o 5-benciliden-barbiturato, incluyendo 5-bencil-barbiturato, 5-bencil-oxi-bencil-barbiturato, 5-bencil-oxi-bencil-1-[(1-hidroxi-2-etoxi)metil]barbiturato, 5-bencil-oxi-bencil-acetil-1-[(1-hidroxi-2-etoxi)metil]barbiturato y 5-metoxi-bencil-acetil-aciclobarbiturato, 2,2'-anhidro-5-etil-uridina y compuestos de aciclouridina, particularmente compuestos de aciclouridina sustituidos por 5-bencilo, incluyendo, pero no limitados a, bencil-aciclouridina, bencil-oxi-bencil-aciclouridina, amino-metil-bencil-aciclouridina, amino-metil-bencil-oxi-bencil-aciclouridina, hidroxi-metil-bencil-aciclouridina e hidroxi-metil-bencil-oxi-bencil- aciclouridina. Véanse también WO 89/09603 y WO 91/16315.
Descripción detallada de la invención
La invención de interés se refiere a precursores de nucleótidos de pirimidina que incluyen derivados acílicos de citidina, uridina y orotato y al uso de estos compuestos y/o de inhibidores de uridina-fosforilasa en la fabricación de medicamentos para el tratamiento o prevención de la hepatitis inflamatoria en animales, incluyendo los seres humanos.
La invención aquí descrita implica métodos para incrementar la resistencia de un animal a estímulos inflamatorios y mediadores. Los ejemplos presentados más adelante demuestran tanto la profilaxis como el tratamiento de la toxicidad, debido a la endotoxina y a otros estímulos inflamatorios.
A. Definiciones
El término "precursor de nucleótido de pirimidina", según se usa aquí, se refiere a un compuesto que se convierte en un nucleótido de pirimidina tras la administración a un animal. Éste incluye especialmente citidina, uridina o ácido orótico, o profármacos (incluyendo derivados acílicos) de estos compuestos.
El término "derivado acílico", según se usa aquí, significa un derivado de un nucleósido de pirimidina, en el que un sustituyente acílico orgánico sustancialmente atóxico derivado de un ácido carboxílico, está unido a uno o más de los grupos hidroxilo libres del resto ribosa del nucleósido de oxipurina, con una unión éster y/o en el que dicho sustituyente está unido al sustituyente amina en el anillo de purina de la citidina, con una unión amida. Tales sustituyentes acílicos derivan de ácidos carboxílicos que incluyen, pero no están limitados a, compuestos seleccionados de: un ácido graso, un aminoácido, ácido nicotínico, ácidos dicarboxílicos, ácido láctico, ácido p-aminobenzoico y ácido orótico. Sustituyentes acílicos ventajosos son compuestos que normalmente están presentes en el cuerpo, bien como constituyentes de la dieta o como metabolitos intermediarios.
El término "sales farmacéuticamente aceptables", según se usa aquí, significa sales con sales de adición ácidas farmacéuticamente aceptables de los derivados, que incluyen, pero no están limitados a ácidos sulfúrico, clorhídrico o fosfórico.
El término "administrado conjuntamente" significa que al menos dos de los compuestos de la invención se administran durante un marco de tiempo en el que los períodos respectivos de actividad farmacológica se solapan.
El término "aminoácidos", según se usa aquí, incluye, pero no está limitado a, glicina, las formas L de alanina, valina, leucina, isoleucina, fenil-alanina, tirosina, prolina, hidroxi-prolina, serina, treonina, cisteína, cistina, metionina, triptófano, ácido aspártico, ácido glutámico, arginina, lisina, histidina, ornitina, hidroxi-lisina, carnitina, y otros aminoácidos presentes en la naturaleza.
El término "ácidos grasos", según se usa aquí, significa ácidos carboxílicos alifáticos que tienen 2-22 átomos de carbono. Tales ácidos grasos pueden ser saturados, parcialmente saturados o poliinsaturados.
El término "ácidos dicarboxílicos", según se usa aquí, significa ácidos grasos con un segundo sustituyente de ácido carboxílico.
El término "cantidad terapéuticamente efectiva", según se usa aquí, se refiere a la cantidad que proporciona efectos terapéuticos para una enfermedad y una pauta de administración determinadas.
El término "septicemia", según se usa aquí, es una alteración inflamatoria sistémica en la que las citoquinas endógenas y otras moléculas bioactivas, producidas o liberadas como respuesta a un estímulo inflamatorio, como una endotoxina bacteriana (un componente de la pared celular de bacterias gram-negativas), produce diversos síntomas, incluyendo fiebre, neutropenia, alteraciones de la coagulación sanguínea, hipotensión, choque y lesiones orgánicas.
El término "estímulo inflamatorio", según se usa aquí, significa una sustancia exógena que desencadena una respuesta inflamatoria en un animal. Ejemplos de estímulos inflamatorios incluyen bacterias, hongos, virus, fragmentos o componentes inviables de bacterias (como la endotoxina), hongos o virus, o sustancias que desencadenan respuestas alérgicas o anafilácticas. En el caso de alteraciones autoinmunitarias, elementos endógenos de los tejidos de un paciente, p.ej. proteínas celulares particulares, funcionan como estímulos inflamatorios.
El término "mediador", según se usa aquí, significa compuestos bioactivos endógenos o exógenos (p.ej. polipéptidos recombinantes), proteínas o polipéptidos que intervienen típicamente en los efectos biológicos de la endotoxina u otros estímulos inflamatorios como los polisacáridos fúngicos. Ejemplos de tales sustancias incluyen, pero no están limitados al factor de necrosis tumoral (TNF), interleuquina-1 (IL-1), interleuquina-6 (IL-6), inhibidor del activador del plasminógeno (PAI), leucotrienos, elementos de la cascada del complemento, óxido nítrico, o factor activador de plaquetas.
B. Compuestos de la invención
Una característica principal de la presente invención es el descubrimiento inesperado de que la uridina y otros precursores de nucleótidos de pirimidina protegen, de hecho, animales por lo demás normales (p.ej. modelos animales en los que el organismo no ha recibido una sustancia sensibilizante hepatotóxica clinicamente irrelevante, como galactosamina o TCDD), de la toxicidad debida a la endotoxina bacteriana u otros estímulos inflamatorios que producen lesiones tisulares a través de la producción de mediadores inflamatorios endógenos.
Los niveles de nucleótidos de uridina tisular se pueden incrementar mediante la administración de varios precursores. La uridina y la citidina se incorporan en grupos de nucleótidos celulares mediante fosforilación en posición 5'; los nucleótidos de citidina y uridina son interconvertibles a través de reacciones de aminación y desaminación enzimática. El ácido orótico es un intermediario clave en la biosíntesis de novo de nucleótidos de pirimidina.
La incorporación de ácido orótico en los grupos de nucleótidos requiere fosfo-ribosil-pirofosfato (PRPP) celular. Alternativamente (o además de la provisión de precursores de nucleótidos exógenos), la disponibilidad de uridina hacia los tejidos se incrementa mediante la administración de compuestos que inhiben la uridina-fosforilasa, la primera enzima en la vía para la degradación de la uridina. Los compuestos de la invención útiles para incrementar la resistencia a la endotoxina o a mediadores inflamatorios incluyen la uridina, citidina, orotato, formas de profármacos de estos nucleótidos de pirimidina, particularmente derivados acílicos y ésteres de fosfato, e inhibidores de la enzima uridina-fosforilasa. Los compuestos de la invención tienen las siguientes estructuras:
En todos los casos, excepto que se indique lo contrario, las letras y las letras con subíndices que simbolizan sustituyentes variables en las estructuras químicas de los compuestos de la invención, son aplicables sólo a la estructura que precede inmediatamente la descripción del símbolo.
(1) Un derivado acílico de uridina que tiene la fórmula:
9
en la que R_{1}, R_{2}, R_{3} y R_{4} son iguales o diferentes, y cada uno es hidrógeno o un radical acílico de un metabolito, con la condición de que al menos uno de dichos sustituyentes R no sea hidrógeno, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.
(2) Un derivado acílico de citidina que tiene la fórmula:
10
en la que R_{1}, R_{2}, R_{3} y R_{4} son iguales o diferentes, y cada uno es hidrógeno o un radical acilo de un metabolito, con la condición de que al menos uno de dichos sustituyentes R no sea hidrógeno, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.
Los compuestos de la invención útiles para incrementar la resistencia a endotoxina incluyen:
(3) Un derivado acílico de uridina que tiene la fórmula:
11
en la que R_{1}, R_{2}, R_{3} y R_{4} son iguales o diferentes, y cada uno es hidrógeno o un radical acilo de:
a. un ácido graso no ramificado con 5 a 22 átomos de carbono,
b. un aminoácido seleccionado del grupo formado por glicina, las formas L de alanina, valina, leucina, isoleucina, tirosina, prolina, hidroxi-prolina, serina, treonina, cistina, cisteína, ácido aspártico, ácido glutámico, arginina, lisina, histidina, carnitina y ornitina,
c. un ácido dicarboxílico que tiene 3-22 átomos de carbono,
d. un ácido carboxílico seleccionado de uno o más de ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido láctico, ácido enolpirúvico, ácido lipoico, ácido pantoténico, ácido aceto-acético, ácido p-amino-benzoico, ácido beta-hidroxi-butírico, ácido orótico y creatina.
(4) Derivados acílicos de citidina que tienen la fórmula:
12
en la que R_{1}, R_{2}, R_{3} y R_{4} son iguales o diferentes, y cada uno es hidrógeno o un radical acílico de:
a. un ácido graso no ramificado con 5 a 22 átomos de carbono,
b. un aminoácido seleccionado del grupo formado por glicina, las formas L de fenil-alanina, alanina, valina, leucina, isoleucina, tirosina, prolina, hidroxi-prolina, serina, treonina, cistina, cisteína, ácido aspártico, ácido glutámico, arginina, lisina, histidina, carnitina y ornitina,
c. un ácido dicarboxílico que tiene 3-22 átomos de carbono,
d. un ácido carboxílico seleccionado de uno o más de ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido láctico, ácido enolpirúvico, ácido lipoico, ácido pantoténico, ácido aceto-acético, ácido p-amino-benzoico, ácido beta-hidroxi-butírico, ácido orótico y creatina.
(5) Un derivado acílico de uridina que tiene la fórmula:
13
en la que al menos uno de R_{1}, R_{2} o R_{3} es un resto hidrocarbil-oxi-carbonilo que contiene 2-26 átomos de carbono y los sustituentes R restantes son, independientemente, un resto hidrocarbil-oxi-carbonilo o hidrocarbil-carbonilo o H o fosfato.
(6) Un derivado acílico de citidina que tiene la fórmula:
14
en la que al menos uno de R_{1}, R_{2}, R_{3} o R_{4} es un resto hidrocarbil-oxi-carbonilo que contiene 2-26 átomos de carbono y los restantes sustituyentes son independientemente un resto hidrocarbil-oxi-carbonilo o hidrocarbil-carbonilo o H o fosfato.
(7) Acido orótico o sus sales:
15 
\vskip1.000000\baselineskip
Las sales farmacéuticamente aceptables del ácido orótico incluyen aquéllas en las que el componente catiónico de la sal es sodio, potasio, un aminoácido básico, como arginina o lisina, metil-glutamina, colina o cualquier otro catión hidrosoluble atóxico, con un peso molecular inferior a aproximadamente 1000 daltons.
(8) Derivados de orotato sustituidos por alcohol:
16
en la que R_{1} es un radical de un alcohol que contiene de 1 a 20 átomos de carbono, unidos al orotato a través de una unión éster.
La invención abarca también las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos anteriormente descritos.
Compuestos ventajosos de la invención son los ésteres de ácidos grasos de cadena corta de uridina o citidina. Compuestos particularmente ventajosos son triacetil-uridina o triacetil-citidina.
Inhibidores de uridina-fosforilasa
Ejemplos de inhibidores de uridina-fosforilasa incluyen, pero no están limitados a, derivados de 5-bencil-barbiturato o 5-benciliden-barbiturato, incluyendo 5-bencil-barbiturato, 5-bencil-oxi-bencil-barbiturato, 5-bencil-oxi-bencil-1-[(1-hidroxi-2-etoxi)metil]barbiturato, 5-bencil-oxi-bencil-acetil-1-[(1-hidroxi-2-etoxi)metil]barbiturato y 5-metoxi-bencil-acetil-aciclobarbiturato, 2,2'-anhidro-5-etiluridina y compuestos de aciclouridina, particularmente compuestos de aciclouridina sustituidos por 5-bencilo, incluyendo, pero no limitados a, bencil-aciclouridina, bencil-oxi-bencil-aciclouridina, amino-metil-bencil-aciclouridina, amino-metil-bencil-oxi-bencil-aciclouridina, hidroxi-metil-bencil-aciclouridina e hidroxi-metil-bencil-oxi-bencil-aciclouridina. Véanse también WO 89/09603 y WO 91/16315.
Composiciones de la invención
En una realización de la invención, las nuevas composiciones farmacéuticas comprenden como principio activo uno o más precursores de nucleótidos de pirimidina seleccionados del grupo formado por uridina, citidina, ácido orótico o sus sales, y derivados acílicos de estos precursores de nucleótidos de pirimidina, junto con un vehículo aceptable.
Las composiciones, dependiendo del uso pretendido y de la vía de administración, se fabrican en forma de líquido, suspensión, comprimido, cápsula, gragea, solución inyectable o supositorio (véase análisis de formulación más adelante).
En otra realización de la invención, la composición comprende al menos un precursor de nucleótido de pirimidina y una sustancia que inhibe la degradación de uridina, como un inhibidor de la enzima uridina-fosforilasa. Ejemplos de inhibidores de uridina-fosforilasa incluyen, pero no están limitados a derivados de 5-bencil-barbiturato o 5-benciliden-barbiturato, incluyendo 5-bencil-barbiturato, 5-bencil-oxi-bencil-barbiturato, 5-bencil-oxi-bencil-1-[(1-hidroxi-2-etoxi)metil]barbiturato, 5-bencil-oxi-bencil-acetil-1-[(1-hidroxi-2-etoxi)metil]barbiturato y 5-metoxi-bencil-acetil-aciclobarbiturato, 2,2'-anhidro-5-etil-uridina y compuestos de aciclouridina, particularmente compuestos de aciclouridina sustituidos por 5-bencilo, incluyendo, pero no limitados a, bencil-aciclouridina, bencil-oxi-bencil-aciclouridina, aminometil-bencil-aciclouridina, aminometil-bencil-oxi-bencil-aciclouridina, hidroxi-metil-bencil-aciclouridina e hidroximetil-bencil-oxi-bencil-aciclouridina. Véanse también WO 89/09603 y WO 91/16315.
Usos terapéuticos de los compuestos y composiciones de la invención en la fabricación de medicamentos
Los compuestos, composiciones y métodos de la invención pueden ser útiles para incrementar la resistencia a endotoxina u otros estímulos inflamatorios o mediadores en animales. Los compuestos incluyen precursores de nucleótidos de pirimidina, así como compuestos que inhiben la degradación enzimática de uridina.
Los compuestos de la invención se usan en la fabricación de medicamentos para el tratamiento de seres humanos; sin embargo, la invención no está destinada a ser tan limitada, estando en proyecto en la invención tratar todos los animales que experimenten un efecto beneficioso a partir de la administración de los compuestos activos de la invención.
Una característica principal de la invención es el descubrimiento de que la administración de precursores de nucleótidos de uridina produce una resistencia supranormal a los efectos tóxicos o letales de la endotoxina u otros estímulos inflamatorios o mediadores inflamatorios in vivo.
La invención se caracteriza además por la administración oral o sistémica de un compuesto o composición farmacéutica que contiene precursores de nucleótidos de pirimidina (o sus profármacos) y/o sustancias que inhiben el catabolismo de la uridina, con el propósito de incrementar la resistencia a la endotoxina, otros estímulos inflamatorios o sus mediadores.
SIRS, septicemia y choque septicémico
Los compuestos, composiciones y métodos de la invención son útiles en la fabricación de medicamentos para reducir las lesiones tisulares debidas al síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SIRS), incluyendo la septicemia desencadenada por organismos bacterianos (tanto bacterias gram-positivas como gram-negativas), víricos, fúngicos o parasitarios (p.ej. malaria). Todos estos tipos de organismos infecciosos estimulan la formación o liberación de mediadores inflamatorios endógenos, produciendo lesiones tisulares.
Los compuestos de la invención se usan en la fabricación de medicamentos para administrar a pacientes con síntomas de septicemia, p.ej. fiebre, neutropenia, hipotensión, etc., o, profilácticamente, a pacientes con riesgo de septicemia, p.ej. pacientes quirúrgicos, pacientes con quemaduras o heridas graves, o pacientes con catéteres en el tracto urinario.
Para el tratamiento o prevención de las lesiones tisulares debidas a la septicemia, se administran dosis de los compuestos de la invención que varían entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 40 gramos por día, ventajosamente entre 3 y 30 gramos por día, dependiendo de la respuesta y estado del paciente. En pacientes con síndrome septicémico grave, los compuestos de la invención se administran típicamente en forma de líquido o suspensión, a través de un tubo nasogástrico, especialmente si tal tubo está ya colocado para el suministro de suspensiones de nutrientes u otros productos de alimentación por sonda nasogástrica. Los pacientes con enfermedades menos graves reciben típicamente los compuestos de la invención, bien en forma líquida o en cápsulas o comprimidos. Los pacientes que no toleran la administración oral de los compuestos de la invención (p.ej. pacientes con nutrición parenteral total debido a lesión del tracto gastrointestinal) reciben compuestos de la invención que sean suficientemente hidrosolubles, como la uridina en sí, mediante infusión intravenosa.
Después de un episodio de choque, traumatismo o septicemia, los pacientes entran a menudo en un estado persistente de hipermetabolismo, que puede conducir a una insuficiencia orgánica múltiple, que empieza normalmente con insuficiencia hepática. La fase hipermetabólica se debe a la influencia de la endotoxina y sus mediadores en la regulación metabólica (Cerra et al., en Molecular and cellular mechanisms of septic shock, 265-277, Alan R. Liss, 1989).
El hipermetabolismo y la insuficiencia orgánica es una de las causas principales de mortalidad entre los pacientes quirúrgicos de cuidados intensivos. Como se demuestra en los ejemplos, los compuestos de la invención son efectivos para reducir las lesiones tisulares e incrementar la supervivencia en animales sometidos a endotoxina y otros inductores de septicemia e insuficiencias orgánicas. Los compuestos, composiciones y métodos de la invención son útiles para el tratamiento de pacientes con riesgo de insuficiencia orgánica hipermetabólica.
Una consecuencia grave de la septicemia es la propensión a las alteraciones de la coagulación, especialmente la coagulación intravascular diseminada (DIC). En la DIC, tanto la coagulación como la fibrinolisis están activadas, de forma que los factores de coagulación sanguíneos se consumen rápidamente y se forman agregados de trombina en la circulación. La DIC puede producir, bien hemorragia o formación de trombos, o ambos. El hígado es el sitio principal para la síntesis de factores de coagulación y para limpiar los microagregados de trombina de la circulación. Los efectos protectores y terapéuticos de los compuestos, composiciones y métodos de la invención atenúan las alteraciones producidas en la coagulación sanguínea, inducidas por la septicemia (véase Ejemplo 11).
Reducción de la toxicidad de las citoquinas terapéuticas
En muchos de los efectos biológicos de la endotoxina y otros estímulos inflamatorios interviene la liberación de moléculas bioactivas endógenas (mediadores) procedentes de células diana, particularmente macrófagos y células de Kupffer (macrófagos sésiles en el hígado). La evidencia de esto es que los macrófagos en la cepa C3H/HEJ de ratones son genéticamente insensibles a la endotoxina (en términos de liberación de citoquinas tras la exposición a endotoxina), y la endotoxina es relativamente atóxica en esta cepa. Sin embargo, estos ratones son sensibles a péptidos bioactivos liberados normalmente desde macrófagos, p.ej., el factor de necrosis tumoral (TNF), y la toxicidad de los LPS se restablece mediante transplante de macrófagos normales. Se mantiene generalmente que el TNF es un mediador primario de la toxicidad de la endotoxina, pero la interleuquina-1 (IL-1) y otras sustancias participan también en la expresión de la toxicidad de la endotoxina y la septicemia.
Los compuestos, composiciones y métodos de la invención son útiles, por tanto, para modificar los efectos biológicos de las citoquinas inflamatorias, bien producidas endógenamente (especialmente por macrófagos), o introducidas en el cuerpo de fuentes exógenas (p.ej. polipéptidos producidos mediante tecnología del DNA recombinante y fermentación).
Diversas citoquinas inflamatorias e incluso la endotoxina en sí, tienen aplicaciones terapéuticas potenciales. El factor de necrosis tumoral, como sugiere su nombre, puede destruir tumores y es sinérgico con el interferón-alfa en la inhibición de las infecciones víricas. Por tanto, el TNF, e incluso la endotoxina bacteriana en sí (que provoca la liberación de TNF endógeno), se han administrado a pacientes para el tratamiento del cáncer. Las clases de citoquinas inflamatorias que tienen actividad terapéutica y toxicidad que limita su uso clínico, incluyen el TNF, interleuquinas e interferones. Los compuestos, composiciones y métodos de la invención son útiles para prevenir o tratar la toxicidad que se produce durante la administración terapéutica de tales citoquinas, así como los estímulos inflamatorios.
Cuando la endotoxina se administra a pacientes de cáncer mediante infusión intravenosa, la toxicidad hepática limita la dosis de endotoxina que se puede administrar (Engelhardt R. et al., Cancer. Res. 1991, 51:2524-30). En cánceres no hepáticos, la protección del hígado frente a la endotoxina permite la administración de mayores dosis de endotoxina a fin de maximizar su eficacia antineoplásica. La endotoxina tiene también propiedades inmunoestimuladoras. Por tanto, los compuestos de la invención son útiles para mejorar el índice terapéutico de la endotoxina, análogos de endotoxina o derivados (p.ej. lípido A, lípido X, monofosforil-lípido A, etc.) o sus mediadores. La toxicidad hepática es también limitativa de la dosis durante la administración intencionada de TNF a seres humanos (Kimura et al., Cancer Chemother. Pharmacol. 1987, 20:223-229). Los estímulos inflamatorios de origen fúngico o de levaduras, como los polisacáridos glucano o lentinano, se usan también terapéuticamente como inmunomoduladores para el tratamiento de infecciones o cáncer (Seljelid, Scand. J. Immunol. 1989, 29:181-92).; Bowers et al., J. Surg. Res. 1989, 47 :183-8). El RNA dúplex, como poliinosina-policitidina, tiene también actividad terapéutica como estímulo inflamatorio para el tratamiento del cáncer o infecciones.
De forma similar, el péptido inflamatorio interleuquina-1 (IL-1), que interviene en algunas acciones de la endotoxina, tiene un potencial terapéutico importante (p.ej. en el restablecimiento de la hematopoyesis tras la lesión producida por la quimioterapia del cáncer), pero su uso está limitado por efectos secundarios tóxicos que se pueden atenuar mediante la utilización de los compuestos, composiciones y métodos de la invención.
La interleuquina-2 (IL-2) se usa clínicamente para el tratamiento de diversas variedades de cáncer, también tiene una actividad potencial como inmunomodulador en el tratamiento de diversas infecciones y en la modulación de la respuesta a vacunas. La toxicidad hepática como respuesta a IL-2 no es inusual en pacientes que reciben dosis terapéuticas de IL-2 para el tratamiento del cáncer (Viens et al., J. Immunother. 1992, 11:218-24). En un modelo experimental de hepatitis autoinmunitaria inducida por administración de concanavalina A a ratones, se describen lesiones hepáticas relacionadas con la producción elevada de IL-2 endógena (Tiegs et al., J. Clin. Invest. 1992, 90:196-203), como se demuestra en el Ejemplo 10, los compuestos, composiciones y métodos de la invención son efectivos para atenuar las lesiones hepáticas en este modelo. Los compuestos, composiciones y métodos de la invención son útiles para reducir los efectos secundarios cuando se administran conjuntamente con IL-2; además, los compuestos, composiciones y métodos de la invención son útiles para tratar la hepatitis autoinmunitaria.
La interleuquina-6, que tiene potencial terapéutico en la mejora de la producción de plaquetas sanguíneas, induce receptores hepáticos de TNF, incrementando así la sensibilidad tisular al TNF. Los compuestos, composiciones y métodos de la invención son útiles, por tanto, para usar en combinación con IL-6 o sustancias similares que afectan a la sensibilidad tisular a TNF o a la producción del mismo (Van Bladel et al., Cytokine, 1991, 3:149-54).
La combinación de una citoquina terapéutica particular, un precursor de nucleótido de pirimidina y/o un inhibidor de uridina-fosforilasa se usa para el tratamiento de las alteraciones para las que se sabe que una citoquina terapéutica particular es efectiva. Por ejemplo, la interleuquina-2 se usa para el tratamiento del cáncer renal, cáncer de colon, melanoma, linfoma, leucemia y otras enfermedades neoplásicas. El TNF tiene eficacia antineoplásica frente a diversos tipos de cáncer, pero su uso en terapia ha estado limitado hasta ahora por su toxicidad (Kimura et al., Cancer Chemoter. Pharmacol. 1987, 20:223-9). La endotoxina ha mostrado una eficacia antineoplásica significativa (Engelhardt R. et al., Cancer Res., 1991, 51:2524-30).
Para la prevención o tratamiento de la toxicidad debida a la administración de citoquinas terapéuticas, se administran diariamente de 0,5 a 40 gramos de un precursor de nucleótido de pirimidina, durante uno a varios días, dependiendo de la duración del tratamiento con citoquina. Los precursores de nucleótidos de pirimidina se administran antes, durante o después de la administración de la citoquina terapéutica. Las citoquinas terapeúticas se administran en las dosis y tratamientos particulares ya establecidos para el tratamiento experimental y clínico de diversas formas de cáncer, excepto porque se pueden tolerar dosis incrementadas de citoquinas cuando se administran los precursores de nucleótidos de pirimidina de la invención, como se determinaría en estudios simples de aumento de la dosis para cada citoquina o estímulo inflamatorio.
Hepatitis inflamatoria: alteraciones hepáticas que implican a la endotoxina o mediadores
El hígado es susceptible de lesión por endotoxina o sus mediadores, particularmente cuando la función hepática está dificultada. En las lesiones hepáticas procedentes de muchas causas originarias (p.ej. deficiencia de colina, síndrome de Reye o alcohol), que incrementan la sensibilidad hepática a endotoxina o inhiben la eliminación de endotoxina, intervienen en parte la endotoxina bacteriana (presente normalmente en la circulación portal debido al escape de pequeñas cantidades procedentes del intestino en el torrente circulatorio) o mediadores producidos por la endotoxina (Nolan, Gastroenterology, 1975, 69:1346-1356; Nolan, Hepatology, 1989, 10:887-91). La toxicidad hepática es limitativa de la dosis en pacientes que reciben inyecciones intencionales de endotoxina para su posible eficacia en el tratamiento del cáncer (Engelhardt et al., Cancer Research, 1991, 51:2524-2530).
Como se demuestra en los Ejemplos más adelante, los compuestos, composiciones y métodos de la invención reducen significativamente las lesiones hepáticas inducidas por endotoxina y otros estímulos inflamatorios y mediadores. Los compuestos, composiciones y métodos de la invención son útiles para tratar, prevenir o atenuar las lesiones hepáticas en una gran variedad de enfermedades en cuya etiología está implicada la hepatotoxicidad debida a endotoxina u otros estímulos inflamatorios o mediadores (esté o no presente el síndrome septicémico sistémico). Las enfermedades en las que están implicadas las lesiones hepáticas por endotoxina o sus mediadores (p.ej. TNF) incluyen, pero no están limitadas a los siguientes estados de enfermedad:
A. Síndrome de Reye
El síndrome de Reye se caracteriza por una insuficiencia hepática rápida y se encuentra más comúnmente en niños, como complicación de la gripe y otras infecciones víricas; la aspirina puede ser un factor de riesgo. Se cree que la etiología del síndrome de Reye implica a la endotoxina o mediadores inflamatorios. La endotoxemia se encuentra en la mayoría o todos los pacientes con el síndrome de Reye; un modelo animal para el síndrome de Reye implica el tratamiento de ratas con una combinación de endotoxina y aspirina (Kilpatrick et al., Metabolism, 1989, 38:73-7).
B. Lesiones hepáticas de alcohólicos
La endotoxina y el TNF contribuyen a los problemas hepáticos asociados con la exposición a alcohol (Nolan JP, Hepatology, 1989, 10:887-91; Arai M., Nakano S., Okuno F., et al., Hepatology, 1989, 9:846-851; McClain CJ y Cohen DA., Hepatology, 1989, 9:349-351).
C. Hepatitis fulminante
El factor de necrosis tumoral está implicado en la etiología y progresión de la hepatitis fulminante, que puede conducir rápidamente a la insuficiencia hepática y la muerte (Aderka et al., Med. Hypotheses, 1988, 27:193-6).
D. Hepatitis vírica
La endotoxina contribuye a las lesiones de los hepatocitos producidas durante la hepatitis vírica. La hepatitis vírica reduce la DL_{50} de la endotoxina en modelos animales, y la exclusión de la endotoxina endógena de animales experimentales (mediante colectomía o usando roedores axénicos) reduce las lesiones hepáticas producidas por una exposición vírica (Gut et al., J. Infect. Disease, 1984, 149:621). En algunos casos de hepatitis, las respuestas inmunitarias o inflamatorias a la infección hepática vírica en las que intervienen los linfocitos T o macrófagos, contribuyen a las lesiones hepáticas. En cualquier situación, los compuestos, composiciones y métodos de la invención son útiles para tratar las lesiones hepáticas relacionadas con la infección vírica.
E. Infecciones parasitarias
En las lesiones hepáticas y la morbilidad que se produce durante la infección por malaria interviene en parte el TNF (Clark et al., Am. J. Pathol. 1987, 129:192-9).
F. Lesiones hepáticas durante la nutrición parenteral total
Las complicaciones hepáticas son comunes en pacientes que reciben nutrición parenteral total (TPN) y que no tienen una enfermedad hepática subyacente. Pappo et al., J. Surg. Res., 1991, 51:106-12) describieron que la endotoxina, LPS o derivada de la proliferación de las bacterias gram-negativas intestinales es responsable de la degeneración grasa hepática asociada con TPN, y que la descontaminación intestinal y la actividad específica anti-LPS de la polimixina B reduce la infiltración grasa del hígado durante la TPN. La polimixina B, que se une a LPS y la inactiva, es tóxica en seres humanos, pero sirvió para demostrar que en la hepatopatía observada durante la TPN intervienen en parte la endotoxina o el TNF. Por tanto, la inclusión de compuestos de la invención en soluciones de TPN es útil para reducir las lesiones hepáticas inducidas por TPN.
G. Envenenamiento por plomo
El envenenamiento por plomo puede incrementar espectacularmente la sensibilidad a la endotoxina. La interferencia con el metabolismo hepático inducida por plomo está implicada en el efecto del plomo sobre la toxicidad de la endotoxina (Taki et al., Eur. Surg. Res., 1985, 17:140-9).
H. Hepatectomía parcial
Tras la hepatectomía parcial (p.ej. para eliminación de tejido canceroso), la morbilidad y mortalidad por insuficiencia hepática no es inusual. El tejido hepático que experimenta regeneración tras una hepatectomía parcial en animales es hipersensible a los efectos deletéreos de la endotoxina y sus mediadores (Shirai et al., Acta Pathol. Jpn., 1987, 37:1127-1134).
I. Hepatitis posanestésica
Los anestésicos de inhalación, como el halotano, pueden inducir hepatitis, particularmente si el flujo de sangre hepático está también dificultado. La endotoxina está implicada en la etiología de la hepatitis posanestésica (Lomanto et al., Anesth. Analg., 1972, 51:264-270), los compuestos de la invención son útiles, por tanto, para la administración a pacientes (profilácticamente, terapéuticamente o ambos), sometidos a anestesia de inhalación, para prevenir y tratar la hepatitis. El traumatismo en sí puede contribuir a la hepatitis posanestésica. Adicionalmente, el traumatismo induce frecuentemente la translocación de bacterias y endotoxina del intestino hacia otros tejidos, a través del torrente circulatorio. Los pacientes quirúrgicos están entre los grupos más susceptibles de envenenamiento por endotoxina (debido a infección). Por tanto, el tratamiento de pacientes quirúrgicos con precursores de nucleótidos de pirimidina (antes, durante o después de la cirugía), incrementa significativamente su resistencia al envenenamiento con endotoxina.
J. Hepatitis colestática
Las lesiones hepáticas debidas a la obstrucción del conducto biliar o la colestasis intrahepática es debida en parte a endotoxina derivada entéricamente (Shibayama Y., 1989, J. Pathol., 159:335-9).
K. Transplante de hígado
En pacientes que reciben transplantes de hígado, la presencia de niveles de endotoxina elevados preoperativamente y al final del período anhepático está asociada con el fallo del injerto y con una elevada mortalidad. Los pacientes con una disfunción primaria de sus transplantes tienen típicamente una endotoxemia grave. La endotoxemia podría ser una causa, más que un efecto, de las complicaciones perioperatorias y la pérdida del injerto (Yokoyama et al., 1989, Transplant Proced., 21:3833-41). En una situación clínica, un animal, como un ser humano, recibe un compuesto de la invención por vía nasogástrica o parenteralmente tras un transplante, en dosis que varían de aproximadamente 2 a aproximadamente 40 gramos diarios, ventajosamente divididas en una a aproximadamente cuatro dosis. El hígado donador se puede perfundir también con un compuesto de la invención, ventajosamente uridina, citidina, ácidos oróticos o sus sales o derivados acílicos, previamente o durante el implante en el receptor.
Las endotoxinas y mediadores inflamatorios también están implicados en otras alteraciones hepáticas; la diversidad de los ejemplos específicos analizados anteriormente sirve para indicar que los compuestos, composiciones y métodos de la invención son útiles en el tratamiento y prevención de una amplia variedad de enfermedades hepáticas.
Para el tratamiento de la hepatitis inflamatoria, se administran diariamente de 0,5 a 40 gramos (ventajosamente de 3 a 30 gramos) de un precursor de nucleótido de pirimidina, ventajosamente divididos en una a aproximadamente cuatro dosis. La duración del tratamiento depende de la mejora de los síntomas clínicos; las alteraciones hepáticas inflamatorias agudas requerirán típicamente un tratamiento más corto que las enfermedades degenerativas crónicas.
Otras alteraciones
Como se demuestra en los Ejemplos 2, 4-6 y 9, los compuestos de la invención protegen tejidos distintos del hígado, p.ej. músculo, como indican los niveles séricos de creatina-fosfoquinasa (CPK), en animales tratados con endotoxina o con el agente inflamatorio fúngico Zimosán. La actividad sérica de CPK es elevada como consecuencia de las lesiones del músculo esquelético o cardíaco.
La caquexia, un síndrome de pérdida de peso, debilitación de tejidos y mala utilización de nutrientes es una complicación común en pacientes con cáncer. El TNF está implicado en la iniciación y mantenimiento de estados caquécticos; la "caquectina" es un sinónimo del TNF. Los compuestos, composiciones y métodos de la invención son útiles para tratar pacientes con caquexia.
Aplicaciones veterinarias
En caballos y otros animales grandes, existe un síndrome común conocido como laminitis, que es una consecuencia de la entrada de endotoxina del intestino en la circulación sistémica (a menudo después de que el animal coma alimentos ricos en carbohidratos en exceso, cambiando las poblaciones bacterianas en el intestino). Los compuestos, composiciones y métodos de la invención, debido a que atenúan las lesiones tisulares debidas a endotoxina, son útiles para tratar o prevenir la laminitis y otros efectos de envenenamiento con endotoxina en animales.
Administración y formulación de compuestos y composiciones de la invención
Los compuestos y composiciones de la invención se administran oralmente, mediante inyección parenteral, intravenosamente o mediante otros medios, dependiendo de la enfermedad que se esté tratando y del estado del paciente.
Los compuestos y composiciones de la invención se administran crónicamente, intermitentemente o agudamente, según se necesite. En el caso de un suceso que implique toxicidad de endotoxina o síndrome inflamatorio sistémico, los compuestos y composiciones se administran previamente, durante o después de tal suceso.
Los compuestos farmacológicamente activos se combinan opcionalmente con vehículos farmacéuticamente aceptables adecuados, que comprenden excipientes y sustancias auxiliares, las cuales facilitan el tratamiento de los compuestos activos. Éstos se administran como comprimidos, grageas, cápsulas y supositorios. Las composiciones se administran por ejemplo oralmente, rectalmente, vaginalmente, o se liberan a través de saco bucal de la boca, y se pueden aplicar en forma de solución mediante inyección, oralmente o mediante administración tópica. Las composiciones pueden contener de aproximadamente 0,1 a 99 por ciento, preferiblemente de aproximadamente 50 a 90 por ciento del compuesto o compuestos activos, junto con el excipiente o excipientes.
Para la administración parenteral mediante inyección o infusión intravenosa, los compuestos activos se ponen en suspensión o se disuelven en medio acuoso, como agua o solución salina estériles. Las soluciones inyectables o suspensiones contienen opcionalmente un agente tensioactivo, como ésteres de poli-oxi-etilen-sorbitán, ésteres de sorbitán, éteres de poli-oxi-etileno, o solubilizantes, como propilenglicol o etanol. La solución típicamente contiene de 1 a 25% de los compuestos activos.
Excipientes adecuados incluyen sustancias de relleno, como azúcares, por ejemplo, lactosa, sacarosa, manitol o sorbitol, preparaciones de celulosa y/o fosfatos cálcicos, por ejemplo fosfato tricálcico o hidrogenofosfato cálcico, así como aglutinantes, como pasta de almidón, que usa por ejemplo almidón de maíz, almidón de trigo, almidón de arroz o almidón de patata, gelatina, tragacanto, metil-celulosa, hidroxi-propil-metil-celulosa, carboxi-metil-celulosa sódica y/o polivinil-pirrolidona.
Las sustancias auxiliares incluyen reguladores de flujo y lubricantes, por ejemplo, sílice, talco, ácido estéarico o sus sales, como estearato de magnesio o estearato cálcico y/o polietilenglicol. Se proporcionan núcleos de grageas con recubrimientos adecuados que, si se desea, son resistentes a los jugos gástricos. Con este propósito, se usan soluciones de azúcar concentrado, que contienen opcionalmente goma arábiga, talco, polivinil-pirrolidona, polietilenglicol y/o dióxido de titanio, soluciones de barniz y disolventes orgánicos adecuados o mezclas de disolventes. A fin de producir recubrimientos resistentes a los jugos gástricos, se usan soluciones de preparaciones de celulosa adecuadas, como ftalato de acetil-celulosa o ftalato de hidroxi-propil-metil-celulosa.
Opcionalmente, se añade a los recubrimientos de los comprimidos o grageas colorantes o pigmentos, por ejemplo, para su identificación o a fin de caracterizar las diferentes dosis de compuesto.
Las preparaciones farmacéuticas de la presente invención se fabrican de una manera que es conocida en sí misma, por ejemplo, mediante procedimientos convencionales de mezcladura, granulación, fabricación de grageas, disolución o liofilización. Por tanto, se obtienen preparaciones farmacéuticas para uso oral, combinando el compuesto o compuestos activos con excipientes sólidos, triturando opcionalmente la mezcla resultante y tratando la mezcla de gránulos, tras añadir sustancias auxiliares adecuadas, si se desea o se necesita, para obtener comprimidos o núcleos de grageas.
Otras preparaciones farmacéuticas que son útiles para el suministro oral incluyen cápsulas cerradas a presión hechas de gelatina, así como cápsulas de cierre hermético suave hechas de gelatina y un plastificante como glicerol o sorbitol. Las cápsulas conformadas a presión contienen el compuesto o compuestos activos en forma de gránulos que se mezclan opcionalmente con sustancias de relleno como lactosa, aglutinantes como almidones y/o lubricantes, como talco o estearato de magnesio y, opcionalmente, estabilizadores. En las cápsulas blandas, los compuestos activos preferiblemente se disuelven o se ponen en suspensión en líquidos adecuados como aceites grasos, parafina líquida o polietilenglicoles. Además, se añaden opcionalmente estabilizadores. Otras formulaciones para administración oral incluyen soluciones, suspensiones o emulsiones. En particular, es ventajosa una forma líquida adecuada para administración a través de un catéter entérico, p.ej., un tubo nasogástrico, particularmente para pacientes encamados o inconscientes.
Las preparaciones farmacéuticas que se usan rectalmente incluyen, por ejemplo, supositorios que están formados por una combinación de compuestos activos con una base de supositorio. Bases de supositorio adecuadas son, por ejemplo. triglicéridos naturales o sintéticos, hidrocarburos de parafina, polietilenglicoles o alcanoles superiores. Además, son útiles cápsulas rectales de gelatina que están formadas por una combinación de los compuestos activos con una base. Los materiales de base incluyen, por ejemplo, triglicéridos líquidos, polietilenglicoles o hidrocarburos de parafina.
Formulaciones adecuadas para administración parenteral incluyen soluciones acuosas de los compuestos activos en forma hidrosoluble, por ejemplo sales hidrosolubles. Además, se administran suspensiones de los compuestos activos, según se precise, en suspensiones oleosas inyectables. Los disolventes lipófilos o vehículos adecuados incluyen aceites grasos, por ejemplo, aceite de sésamo, o ésteres de ácidos grasos sintéticos, por ejemplo oleato de etilo o triglicéridos. Las suspensiones inyectables acuosas incluyen sustancias que incrementan la viscosidad de la suspensión, que incluyen, por ejemplo, carboxi-metil-celulosa sódica, sorbitol y/o dextrano. La suspensión contiene opcionalmente estabilizadores.
Síntesis de los compuestos de la invención
Se sintetizan derivados acilados de nucleósidos de pirimidina haciendo reaccionar un nucleósido de pirimidina o congénere con un ácido carboxílico activado. Un ácido carboxílico activado es aquél que se ha tratado con reactivos apropiados para hacer su carbono carboxilato más susceptible al ataque nucleófilo que en el caso del ácido carboxílico original. Ejemplos de ácidos carboxílicos activados útiles para la síntesis de los compuestos de la invención son cloruros de ácido, anhídridos de ácido, ésteres de n-hidroxi-succinimida, o ácidos carboxílicos activados con BOP-DC. Los ácidos carboxílicos pueden estar conectados también con nucleósidos de pirimidina o congéneres, con reactivos de unión, como diciclo-hexil-carbodiimida (DCC).
Durante la preparación de los compuestos acílicos de la invención, cuando la fuente de ácido del derivado acílico deseado tiene grupos que interfieren con las reacciones de acilación, p.ej., grupos hidroxilo o amino, estos grupos se bloquean con grupos protectores, p.ej., t-butil-dimetil-silil-éteres o grupos t-BOC, respectivamente, antes de la preparación del anhídrido. Por ejemplo, el ácido láctico se convierte en ácido 2-t-butil-dimetil-siloxi-propiónico con t-butil-dimetil-clorosilano, seguido de hidrólisis del éster resultante con una base acuosa. El anhídrido se forma haciendo reaccionar el ácido protegido con DCC. Con aminoácidos, se prepara el derivado N-t-BOC, usando técnicas estándar, que se convierte luego al anhídrido con DCC. Con ácidos que contienen más de un grupo carboxilato (p.ej. ácidos succínico, fumárico o adípico), el anhídrido ácido del ácido dicarboxílico adecuado se hace reaccionar con un nucleósido de pirimidina en piridina o piridina más dimetil-formamida o dimetil-acetamida.
Los aminoácidos se unen a los grupos amino exocíclicos de la citidina y a los grupos hidroxilo sobre el resto aldosa de los nucleósidos de pirimidina o sus congéneres, mediante métodos estándar usando DCC en un disolvente adecuado, particularmente una mezcla de (i) cloruro de metileno y (ii) dimetil-acetamida o dimetil-formamida.
Se preparan derivados carbil-oxi-carbonilo de nucleósidos de pirimidina no metilados, haciendo reaccionar el nucleósido con el carbil-cloroformiato apropiado en un disolvente, como piridina o piridina con dimetil-formamida, en condiciones anhidras. El disolvente se elimina al vacío, y el residuo se purifica mediante cromatografía en columna.
Será obvio para el experto en la materia que se pueden usar otros métodos de síntesis para preparar los compuestos de la invención.
Ejemplos Ejemplo 1 La triacetiluridina y la uridina incrementan la supervivencia en ratones tratados con E. coli muerta Propósito
El síndrome septicémico se puede iniciar por bacterias gram-negativas, incluso si no están vivas, ya que el desencadenante primario es la endotoxina, un componente de la pared celular bacteriana. El propósito de este estudio fue determinar el efecto de la triacetil-uridina y de la uridina parenteral sobre la supervivencia de ratones tratados con una dosis letal de bacterias E. coli muertas.
Métodos
Se dividieron dieciocho ratones Balb/C hembra (de ocho semanas de edad) en grupos de seis animales cada uno. Todos los ratones recibieron 500 microgramos de un polvo de acetona de E. coli (serotipo 0111:B4), puesto en suspensión mediante sonicación en 0,2 ml de solución salina. Los ratones de un grupo recibieron uridina (2000 mg/kg en 0,2 ml de solución salina), mediante inyección i.p., dos horas antes de la administración de la E. coli. Otro grupo de ratones recibió triacetil-uridina (6000 mg/kg en un vehículo de aceite de maíz/agua 1:1, que contenía Tween 80 al 2,5%), mediante intubación oral. La supervivencia se controló durante una semana.
A. n = 6 E. coli (testigo)
B. n = 6 E. coli (testigo) + Uridina i.p.
C. n = 6 E. coli (testigo) + TAU p.o.
Resultados
Los animales del grupo testigo parecían estar en estado de choque y estaban hipotérmicos 18 horas después de la administración del polvo de E. coli. Los animales de los grupos tratados estaban activos y mantenían la temperatura corporal, aunque sus pieles estaban defectuosas durante las primeras 48 horas del período de observación. Los animales que sobrevivían 48 horas se recuperaban completamente. Todos los ratones tratados sólo con E. coli morían en 48 horas. Todos los ratones tratados con uridina o triacetil-uridina sobrevivían a la administración de E. coli muerta.
Ejemplo 2 Estudio de dosis y respuesta de uridina en la protección de tejidos de las lesiones por endotoxina Propósito
El propósito de este estudio fue determinar las características de dosis y respuesta para la uridina, como prevención de las lesiones tisulares inflamatorias producidas por la endotoxina (LPS).
Métodos
Los ratones Balb/C hembra (de ocho semanas de edad) se dividieron en seis grupos de seis animales cada uno. Un grupo de animales permaneció sin tratar, para proporcionar valores de base para índices químicos séricos de lesión tisular. Los ratones de los cinco grupos restantes recibieron 100 microgramos de endotoxina de Salmonella typhimurium mediante inyección i.p. en un volumen de 0,2 ml de solución salina. Dos horas antes de la administración de la endotoxina, los cinco grupos de ratones recibieron uridina en dosis de 0, 500, 1000, 2000 y 4000 mg/kg i.p. (en 0,2 ml de solución salina), respectivamente. Dieciocho horas después de la administración de la endotoxina, se recogieron muestras de sangre para la determinación de los valores químicos séricos de los indicadores de lesión tisular.
Resultados
La uridina produjo una protección de los tejidos frente a la lesión procedente de administración de endotoxina, dependiente de la dosis. ALT, AST y SDH son indicadores específicos de lesión hepática; CPK es un indicador de lesión muscular; La LDH es liberada tanto por el hígado como por el músculo. La dosis de uridina más efectiva en ratones en este experimento fue 2000 mg/kg.
TABLA 1 La uridina atenúa las lesiones tisulares inducidas por la endotoxina
17
*= Diferente del testigo (LPS i.p.), P < 0,02
ALT = Alanina-aminotransferasa
AST = Aspartato-aminotransferasa
LDH = Lactato-deshidrogenasa
CPK = Creatina-fosfoquinasa
SDH = Sorbitol-deshidrogenasa
Ejemplo 3 La triacetil-uridina oral mejora la supervivencia de ratones tratados con una dosis letal de endotoxina de Salmonella Typhimurium Propósito
En el síndrome septicémico producido por bacterias gram-negativas interviene principalmente la endotoxina, un lipopolisacárido constituyente de la pared bacteriana. El propósito de este experimento fue determinar el efecto de un profármaco de uridina (triacetil-uridina; TAU) administrado oralmente, sobre la supervivencia de ratones tratados con una dosis letal de endotoxina de Salmonella Typhimurium purificada (LPS).
Métodos
Se dividieron veinte ratones Balb/C hembra (de ocho semanas de edad) en dos grupos de diez animales cada uno. Todos los ratones recibieron 100 microgramos de endotoxina de Salmonella Typhimurium mediante inyección intraperitoneal en 0,2 ml de solución salina. Un grupo de ratones recibió triacetil-uridina (6000 mg/kg en un vehículo de aceite de maíz/agua 1:1, que contenía Tween 80 al 2,5%), mediante intubación oral. La supervivencia se controló durante una semana.
Resultados
Los diez animales que recibieron endotoxina sola murieron en 48 horas. Nueve de los diez ratones que recibieron TAU oral sobrevivieron durante el período de observación de siete días y parecían haberse recuperado completamente.
Ejemplo 4 La triacetil-uridina oral reduce las lesiones tisulares producidas por la endotoxina Propósito
La endotoxina bacteriana produce lesiones en el hígado y otros órganos, que se pueden valorar y cuantificar determinando los niveles séricos de enzimas y otros marcadores de la integridad y función tisular. El propósito de este estudio fue determinar las características de dosis y respuesta de la triacetil-uridina (TAU) administrada oralmente en la atenuación de los daños tisulares debidos a la endotoxina.
Métodos
Se dividieron ratones Balb/C hembra (de ocho semanas de edad) en dos grupos de seis animales cada uno. Un grupo de animales permaneció sin tratar para proporcionar valores basales para índices químicos séricos de lesión tisular. Los ratones de los otros cuatro grupos recibieron 100 microgramos de endotoxina de Salmonella typhimurium mediante inyección i.p., en un volumen de 0,2 ml de solución salina. Tres grupos de ratones tratados con endotoxina recibieron también TAU, 24, 6 y 2 horas antes de la endotoxina, en dosis de 2000, 4000 y 6000 mg/kg, mediante intubación oral, en un volumen de 0,4 ml; un grupo adicional recibió una dosis única de 6000 mg/kg de TAU, dos horas antes de la endotoxina. La TAU se formuló como suspensión en carboximetilcelulosa al 1% en agua. El grupo restante (testigo) recibió el vehículo de carboximetilcelulosa mediante intubación oral.
Resultados
La administración oral de TAU redujo los niveles de indicadores químicos séricos de lesión tisular. El efecto beneficioso sobre la prevención de las lesiones tisulares inducidas por la endotoxina era dependiente de la dosis. Una única dosis de 6000 mg/kg de TAU 2 horas antes de la endotoxina proporcionaba aproximadamente el mismo grado de protección que tres de dichas dosis, 24, 6 y 2 horas antes de la endotoxina.
TABLA 2 La TAU atenúa las lesiones tisulares inducidas por la endotoxina
18
*= Diferente del testigo (LPS i.p. + vehículo p.o.), P < 0,2
ALT = alanina-aminotransferasa
AST = aspartato-aminotransferasa
LDH = lactado-deshidrogenasa
CPK = creatina-fosfoquinasa
SDH = sorbitol-deshidrogenasa
Ejemplo 5 La uridina reduce el daño tisular en ratones tratados con carragenano como potenciador de la toxicidad de la endotoxina
El carragenano es un polisacárido derivado del hongo claviformo que modifica la actividad de los macrófagos, que son los principales mediadores celulares de la respuesta inflamatoria sistémica a la endotoxina. Los macrófagos liberan péptidos inflamatorios y otros compuestos como respuesta a la endotoxina. El pretratamiento con carragenano sensibiliza a los macrófagos, de forma que se requiere mucha menos endotoxina de lo normal para provocar una respuesta inflamatoria sistémica grave. Además, en los efectos tóxicos de la combinación de carragenano más endotoxina, comparada con la endotoxina sola está implicado un espectro de mediadores inflamatorios algo diferente (Franks et al., Infection and Immunity, 59: 2609-2614 [1991]). El propósito de este experimento fue determinar el efecto de la uridina sobre las lesiones tisulares inducidas por una combinación de carragenano y endotoxina.
Métodos
Se dividieron ratones Balb/C hembra (de ocho semanas de edad) en cinco grupos de seis animales cada uno. Un grupo de animales permaneció sin tratar para proporcionar valores basales para los índices químicos séricos de lesión tisular. Los ratones de los otros cuatro grupos recibieron 2 mg de carragenano lambda en 0,2 ml de solución salina, mediante inyección i.p.; tres de estos grupos recibieron también, una hora después, 2 microgramos de endotoxina de Salmonella Typhimurium, también mediante inyección i.p. en un volumen de 0,2 ml de solución salina. Dos de los grupos que recibieron carragenano y endotoxina también recibieron uridina (2000 mg/kg i.p. en 0,2 ml de solución salina); un grupo se trató con uridina 30 minutos después de la administración de la endotoxina, y los otros recibieron 3 pretratamientos con uridina, 24, 6 y 2 horas antes de la administración de endotoxina, a 2000 mg/kg/dosis i.p.. Dieciocho horas después de la administración de la endotoxina, se recogieron muestras de sangre para la determinación de valores químicos séricos de indicadores del daño tisular.
Resultados
La combinación de carragenano con una dosis baja de endotoxina (2 mg) producía un daño tisular significativo, según se evaluó mediante los índices químicos séricos. El tratamiento con uridina, bien antes o después de la administración de endotoxina, produjo la atenuación significativa del daño tisular debido a la combinación de carragenano-endotoxina. Los datos se muestran debajo.
TABLA 3 La uridina atenúa el daño tisular inducido por la endotoxina en ratones sensibilizados con carragenano
19
*= Diferente del testigo, P < 0,5
ALT = alanina-aminotransferasa
AST = aspartato-aminotransferasa
LDH = lactado-deshidrogenasa
CPK = creatina-fosfoquinasa
SDH = sorbitol-deshidrogenasa
Ejemplo 6 La uridina mejora la supervivencia en ratones tratados con zimosán Propósito
El Zimosán es un componente de la levadura, principalmente polisacárido, que induce la inflamación sistémica y la activación del complemento. En infecciones fúngicas en general (incluyendo pero no limitadas a infecciones por levadura), tales polisacáridos participan en la inducción una respuesta septicémica. La administración de Zimosán a roedores se considera que es un modelo adecuado para el síndrome de insuficiencia orgánica múltiple (Goris et al. (1986) Arch. Surg. 121: 897-901; Steinberg et al. (1989) Arch. Surg., 124 :1390-1395). La mortalidad a dosis letales mínimas de Zimosán se debe en parte a lesiones intestinales que conducen a la translocación de bacterias y toxinas bacterianas desde el intestino hacia el torrente circulatorio (Deitch et al., (1992) J. Trauma, 32:141-
147).
Métodos
Se dividieron ratones Balb/C hembra (de ocho semanas de edad) en grupos de cinco animales cada uno:
1.
Zimosán 15 mg
2.
Zimosán 15 mg + uridina
3.
Zimosán 20 mg
4.
Zimosán 20 mg + uridina
5.
Basal
Se puso en suspensión timosán A en aceite mineral a una concentración de 50 mg/ml y se administró mediante inyección intraperitoneal. Se administró uridina (2000 mg/kg) mediante inyección intraperitoneal en un volumen de 0,2 ml, dos horas antes de la administración del Zimosán.
18 Horas después de la administración del Zimosán, se recogieron muestras sanguíneas de ambos grupos de ratones que habían recibido 20 mg de Zimosán y del grupo basal (sin tratar), para la medición posterior de los índices químicos séricos de lesión tisular.
Resultados A. Supervivencia a las 48 horas
Grupo Supervivencia
Zimosán 15 mg/kg 0/5
Zimosán 15 mg/kg + uridina 5/5
Zimosán 20 mg/kg 0/5
Zimosán 20 mg/kg + uridina 3/5
B. Supervivencia a los 14 días (recuperación completa)
Zimosán 15 mg/kg 0/5
Zimosán 15 mg/kg + uridina 4/5
La uridina incrementaba significativamente el tiempo de supervivencia y la incidencia de supervivientes a largo plazo entre los ratones tratados con Zimosán.
C. Índices químicos séricos de lesión tisular TABLA 4 La uridina atenúa la lesión tisular inducida por Zimosán
20
ALT = alanina-aminotransferasa
AST = aspartato-aminotransferasa
LDH = lactado-deshidrogenasa
CPK = creatina-fosfoquinasa
Ejemplo 7 Comparación de los efectos de uridina frente a arginina sobre la supervivencia de ratones tratados con endotoxina Propósito
Se ha descrito que el aminoácido arginina tiene efectos beneficiosos sobre el síndrome septicémico (Leon et al., J. parenteral and enteral nutrition, 1991, 15:503-508). El propósito de este estudio fue comparar la eficacia de la uridina con la de la arginina, una sustancia que soporta la función hepática en el síndrome septicémico y que se usa clínicamente para este propósito.
Métodos
Se dividieron ratones Balb/C hembra que pesaban 25 gramos en cinco grupos de cinco o seis animales cada uno. Los ratones de los cinco grupos restantes recibieron 125 gramos de endotoxina de Salmonella typhimurium (LPS), mediante inyección i.p. en un volumen de 0,2 ml de solución salina. Dos horas antes de la administración de la endotoxina, los cinco grupos de ratones recibieron inyecciones de:
1) Solución salina (testigos)
2) Uridina 2000 mg/kg
3) Arginina 25 mg/kg
4) Arginina 250 mg/kg
5) Arginina 1250 mg/kg
Todos los fármacos se administraron i.p. en 0,2 ml de solución salina. Los números de ratones supervivientes en cada grupo se determinaron a las 16, 20 y 24 horas.
Resultados
Sólo uno de los animales testigo estaba vivo 16 horas después de la LPS; en contraste, la mayoría de los animales tratados con uridina o arginina estaban vivos en este momento. Sin embargo, alrededor de 24 horas después de la administración de la endotoxina, los únicos animales supervivientes estaban en el grupo tratado con uridina. Las tres dosis de arginina incrementaban el tiempo de supervivencia (pero no producían ningún superviviente a largo plazo), y la dosis inferior (25 mg/kg) era más efectiva que la dosis superior (1250 mg/kg). La uridina era claramente más efectiva que la arginina para favorecer la supervivencia de los animales tratados con endotoxina.
TABLA 5 Efecto de la uridina frente a la arginina sobre la supervivencia tras la administración de LPS
21
Ejemplo 8 El ácido orótico incrementa la supervivencia de ratones tratados con la endotoxina de Salmonella typhimurium Propósito
En el síndrome septicémico producido por bacterias gram-negativas interviene principalmente la endotoxina, un constituyente lipopolisacárido de la pared bacteriana. El propósito de este experimento fue determinar el efecto del orotato sobre la supervivencia de ratones tratados con una dosis letal de endotoxina de Salmonella typhimurium purificada.
Métodos
Se dividieron veinte ratones Balb/C hembra (de ocho semanas de edad) en dos grupos de diez animales cada uno. Un grupo de ratones recibió cuatro tratamientos con orotato de lisina (200 mg/kg/dosis; 9 a.m. y 2 p.m. cada vez en dos días consecutivos). El orotato de lisina es una sal hidrosoluble del ácido orótico; la lisina por sí sola no incrementa la supervivencia de los ratones tratados con endotoxina. Los animales testigo recibieron 0,2 ml de agua estéril en el mismo programa de tratamiento. Todos los ratones recibieron 100 microgramos de endotoxina de Salmonella typhimurium (LPS) mediante inyección intraperitoneal en 0,2 ml de solución salina, inmediatamente después de la última dosis de orotato de lisina. La supervivencia se controló durante una semana.
Resultados
Todos los ratones del grupo testigo murieron en 48 horas. Nueve de los diez ratones tratados con orotato de lisina sobrevivieron durante todo el período de observación de 72 horas, y estaban todavía vivos y parecían recuperarse completamente una semana después de la administración de LPS.
TABLA 6
El orotato incrementa la supervivencia de ratones tratados con endotoxina Supervivencia tras el tratamiento con endotoxina
22
Ejemplo 9 El ácido orótico protege los tejidos frente a la lesión por endotoxina Propósito
El propósito de este estudio fue demostrar el efecto protector del ácido orótico en la prevención de las lesiones inflamatorias tisulares producidas por la endotoxina.
Métodos
Se dividieron ratones Balb/C hembra (de ocho semanas de edad) en tres grupos de seis animales cada uno. Un grupo de animales permaneció sin tratar, para proporcionar valores basales para los índices químicos séricos de lesión tisular. Los ratones de los dos grupos restantes recibieron 100 microgramos de endotoxina de Salmonella Typhimurium (LPS), mediante inyección i.p. en un volumen de 0,2 ml de solución salina. Dos horas antes de la administración de endotoxina, los ratones de un grupo recibieron orotato de lisina en una dosis correspondiente a 100 mg/kg de ácido orótico libre. Dieciocho horas después de la administración de endotoxina, se recogieron muestras de sangre para la determinación del contenido de indicadores químicos séricos de lesión tisular.
Resultados
El orotato protegía los tejidos frente a la lesión producida por administración de endotoxina.
TABLA 7 El orotato atenúa las lesiones tisulares inducidas por endotoxina
23
*= Diferente del testigo (LPS i.p.), P <0,2
ALT = alanina-aminotransferasa
AST = aspartato-aminotransferasa
LDH = lactado-deshidrogenasa
CPK = creatina-fosfoquinasa
SDH = sorbitol-deshidrogenasa
Ejemplo 10 La uridina y la triacetil-uridina atenúan las lesiones hepáticas producidas por concanavalina A Propósito
La interleuquina-2 (IL-2) se usa clínicamente para el tratamiento de diversas variedades de cáncer. La toxicidad hepática como respuesta a IL-2, no es inusual en pacientes que reciben dosis terapéuticas de IL-2 para el tratamiento del cáncer (Viens et al., J. Immunother., 1992, 11:218-24). En un modelo experimental de hepatitis autoinmunitaria inducida mediante administración de concanavalina A (Con A) a ratones, se describe que las lesiones hepáticas están relacionadas con la producción elevada de IL-2 endógena (Tiegs et al., J. Clin. Invest., 1992, 90:196-203). El propósito de este estudio fue demostrar la utilidad de los compuestos y métodos de la invención para atenuar las lesiones hepáticas iniciadas por la administración de Con A.
Métodos
Se dividieron ratones Balb/C (de ocho semanas de edad) en cuatro grupos de cinco animales cada uno. Un grupo de animales permaneció sin tratar para proporcionar valores basales para los índices químicos séricos de lesión tisular. Los ratones de los tres grupos restantes recibieron 10 mg/kg de concanavalina A mediante inyección intravenosa (vena de la cola) en un volumen de 0,2 ml de solución salina. Dos horas antes de recibir la Con A, uno de estos grupos de ratones recibió uridina (2000 mg/kg i.p. en 0,2 ml de solución salina), y otro grupo recibió triacetil-uridina (6000 mg/kg oralmente, en 0,6 ml de una emulsión de aceite de maíz/agua 1:1, que contenía Tween 80 al 2,5%); el grupo restante tratado con Con A (testigo) recibió 0,2 ml de solución salina i.p., dos horas antes de la Con A. Veinte horas después de la administración de Con A se recogieron las muestras de sangre de todos los ratones para la determinación de los niveles séricos de varios índices de lesión tisular o disfunción metabólica.
Resultados
La administración de Con A produjo lesiones significativas en el hígado, como se valoró mediante los niveles séricos de las enzimas ALT, AST y SDH. La Con A no elevaba significativamente los niveles de creatina fosfoquinasa (CK), una enzima que se encuentra principalmente en el músculo; las lesiones tisulares debidas a la Con A en este modelo se localizan más específicamente en el hígado que las lesiones debidas a la endotoxina. La uridina y la TAU reducían ambas las lesiones hepáticas producidas por la administración de Con A, como se muestra en la Tabla 8, debajo.
TABLA 8 La uridina y la triacetiluridina atenúan las lesiones hepáticas producidas por la concanavalina A
24
*= Diferente del testigo, P < 0,2
ALT = alanina-aminotransferasa
AST = aspartato-aminotransferasa
LDH = lactado-deshidrogenasa
CPK = creatina-fosfoquinasa
SDH = sorbitol-deshidrogenasa
Las lesiones hepáticas en el modelo de Con A usado en este estudio están relacionadas con niveles de IL-2 elevados, y en ellas intervienen los linfocitos T. Por tanto, las composiciones y métodos de la invención son útiles para reducir los efectos secundarios debidos a la administración terapéutica de la IL-2; además, los compuestos y métodos de las invenciones son útiles para tratar la hepatitis autoinmunitaria.
Ejemplo 11 La uridina atenúa las alteraciones en la coagulación sanguínea inducidas por la septicemia Propósito
La coagulación intravascular diseminada (DIC) es una consecuencia grave de la septicemia, en la que tanto la coagulación sanguínea como la fibrinólisis están activadas, de forma que los factores de coagulación sanguínea se consumen rápidamente. La DIC puede producir hemorragia o formación de trombos. El hígado es el sitio principal para la síntesis de factores de coagulación y para eliminar los microagregados de trombina de la circulación. El propósito de este experimento fue determinar el efecto de precursores de nucleótidos de pirimidina sobre las alteraciones de la coagulación inducidas por la septicemia. Se usó el tiempo de tromboplastina parcial como un índice del estado del sistema de coagulación sanguínea.
Métodos
Se dividieron treinta ratones Balb/C hembra (de ocho semanas de edad) en tres grupos de diez animales cada uno. Un grupo de ratones permaneció sin tratar y se usó para determinar los valores basales para el tiempo de tromboplastina parcial. Dos grupos de ratones recibieron 30 mg/kg de E. coli muerta (cepa 0111:B4). Dos horas antes de la administración de E. coli, un grupo recibió uridina (2000 mg/kg) mediante inyección intraperitoneal. 20 Horas después de la administración de E. coli, se recogieron muestras de plasma de los treinta ratones, para la determinación del tiempo de tromboplastina parcial (PTT). Se recogieron 0,27 ml de sangre a través del plexo retroorbital, en un tubo que contenía 0,03 ml de citrato sódico al 3,5%, de pH 4. Se separó el plasma mediante centrifugación y se transfirieron 100 microlitros de plasma a un tubo limpio de Eppendorf de 1,5 ml, para la determinación del PTT con un kit comercial.
Resultados
La administración de E. coli muerta produjo una prolongación del tiempo de tromboplastina parcial normal. La uridina atenuaba el cambio en el tiempo de coagulación inducido por la septicemia, como se muestra en la Tabla 9.
TABLA 9 La uridina atenúa las alteraciones en el tiempo de tromboplastina parcial inducidas por la sepsis
25
Ejemplo 12 Lesiones hepáticas combinadas debidas a células T y endotoxina
Varias formas importantes de hepatitis vírica, así como la hepatitis autoinmunitaria se inician mediante células T citotóxicas que atacan a los hepatocitos que portan antígenos virales u otros apropiados. Debido a que la endotoxina participa en las lesiones hepáticas iniciadas por diversos agentes distintos, como tetracloruro de carbono, deficiencia de colina, etanol o colestasis, se llevaron a cabo estudios para determinar si las lesiones hepáticas producidas por las células T inducían la hipersensibilidad hepática a la endotoxina. A continuación de este experimento, se investigó el efecto de la TAU sobre las lesiones hepáticas combinadas debidas a los linfocitos T y la endotoxina.
Ejemplo 12A
La concanavalina A favorece las lesiones tisulares inducidas por la endotoxina
Grupos (n=6) de ratones Balb/C hembra, de ocho semanas de edad, recibieron concanavalina A (2,5 mg/kg i.v.), endotoxina (Salmonella typhimurium, 0,5 mg/kg), o una combinación de Con A y endotoxina. La Con A se administró veinticuatro horas antes que la endotoxina. Se recogieron muestras sanguíneas 18 horas después de la inyección de endotoxina (o su vehículo, en los grupos de ratones que no recibieron endotoxina). El grupo "basal" de ratones recibió sólo vehículo (solución salina) en vez de Con A o endotoxina.
TABLA 1 La concanavalina A favorece los daños tisulares inducidos por la endotoxina
26
ALT = alanina-aminotransferasa
AST = aspartato-aminotransferasa
LDH = lactado-deshidrogenasa
CPK = creatina-fosfoquinasa
SDH = sorbitol-deshidrogenasa
La endotoxina o Con A solas, en las dosis usadas en este experimento, produjeron mínimas lesiones en el hígado y el músculo, como se determinó mediante los niveles enzimáticos séricos (ALT, AST, LDH y SDH son marcadores de las lesiones hepáticas;CPK es un indicador de las lesiones musculares). Sin embargo, en ratones tratados con la combinación de Con A y endotoxina, se observaron lesiones significativamente mayores. La toxicidad de Con A en este modelo se cree que está específicamente relacionada con las lesiones hepáticas en las que intervienen los linfocitos T (Tiegs et al., J. Clin. Invest., 90:196-203, 1992). Por tanto, estos resultados respaldan la opinión de que la endotoxina derivada entéricamente participa en las lesiones hepáticas atribuidas a los linfocitos T citotóxicos (es decir en la hepatitis vírica y autoinmunitaria), como se ha demostrado para las lesiones hepáticas iniciadas por otros ataques primarios, incluyendo tetracloruro de carbono, deficiencia de colina, D-galactosamina e infecciones víricas.
Ejemplo 12B
La TAU atenúa las lesiones hepáticas combinadas debidas a los CTL y la endotoxina
En la hepatitis experimental iniciada por administración intravenosa de concanavalina A (Con A) interviene la activación de linfocitos T citotóxicos (CTL). Las lesiones hepáticas en este modelo producen un incremento notable en la sensibilidad a los efectos tóxicos de la endotoxina bacteriana. La administración secuencial de Con A y endotoxina produce lesiones hepáticas mayores que aditivas (véase Ejemplo 12 A). La lesión de los hepatocitos en la hepatitis vírica y autoinmunitaria implica mecanismos similares, con lesiones iniciadas por las células T y exacerbadas por la endotoxina derivada entéricamente y otros procesos inflamatorios.
La TAU protege el hígado de animales experimentales de las lesiones iniciadas, bien por la endotoxina o por la Con A. En este experimento, se ensayó la TAU para efectos protectores hepáticos en ratones sometidos a lesiones hepáticas combinadas, producidas por la administración secuencial de Con A y endotoxina.
Métodos
Se dividieron ratones Balb/C (de ocho semanas de edad), en tres grupos de siete animales cada uno. Un grupo de animales permaneció sin tratar para proporcionar valores basales de los índices químicos séricos de lesión tisular. Los ratones de los dos grupos restantes recibieron 2 mg/kg de concanavalina A, mediante inyección intravenosa (vena de la cola), en un volumen de 0,2 ml de solución salina, seguida 24 horas más tarde por la endotoxina de Salmonella typhimurium (10 microgramos i.p.). Uno de estos grupos de ratones recibió TAU (6000 mg/kg oralmente, en 0,6 ml de metilcelulosa, dos horas antes de la Con A, y, nuevamente, 2 horas antes de la endotoxina; el grupo restante tratado con Con A/endotoxina recibió vehículo (metil-celulosa) solo. Dieciocho horas después de la administración de la endotoxina, se recogieron muestras de sangre de todos los ratones, para la determinación de los niveles séricos de diversos índices de lesión tisular o disfunción metabólica.
Resultados
La administración secuencial de Con A y endotoxina produjo lesiones hepáticas significativas, como se valoró mediante los índices químicos séricos de lesión hepática. La TAU, administrada oralmente, atenuaba notablemente estas lesiones hepáticas combinadas.
La TAU oral atenúa las lesiones hepáticas producidas por concanavalina A + LPS
27
*= Diferente del testigo (LPS i.p.), P < 0,2
ALT = alanina-aminotransferasa
AST = aspartato-aminotransferasa
LDH = lactado-deshidrogenasa
CPK = creatina-fosfoquinasa
SDH = sorbitol-deshidrogenasa

Claims (4)

1. Uso de un derivado acílico de uridina, citidina o ácido orótico, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o prevención de la hepatitis inflamatoria.
2. Uso, según la reivindicación 1, en el que dicho derivado acílico de uridina es triacetil-uridina.
3. Uso, según la reivindicación 1 ó 2, en el que el medicamento comprende además un inhibidor de uridina-fosforilasa.
4. Uso de uridina o citidina en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o prevención de la hepatitis inflamatoria.
ES94903322T 1992-12-08 1993-12-01 Precursores de nucleotidos de pirimidina para el tratamiento de la hepatitis inflamatoria. Expired - Lifetime ES2229212T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US98773092A 1992-12-08 1992-12-08
US987730 1992-12-08

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2229212T3 true ES2229212T3 (es) 2005-04-16

Family

ID=25533509

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES94903322T Expired - Lifetime ES2229212T3 (es) 1992-12-08 1993-12-01 Precursores de nucleotidos de pirimidina para el tratamiento de la hepatitis inflamatoria.

Country Status (15)

Country Link
EP (2) EP0679160B1 (es)
JP (3) JPH08503699A (es)
KR (1) KR100315890B1 (es)
CN (2) CN1089239C (es)
AT (1) ATE282627T1 (es)
AU (2) AU5730594A (es)
CA (2) CA2150940C (es)
DE (1) DE69333699T2 (es)
ES (1) ES2229212T3 (es)
HK (1) HK1004484A1 (es)
IL (1) IL107900A (es)
MX (1) MX9307765A (es)
PT (1) PT679160E (es)
WO (1) WO1994013687A1 (es)
ZA (1) ZA939208B (es)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5691320A (en) 1987-10-28 1997-11-25 Pro-Neuron, Inc. Acylated pyrimidine nucleosides for treatment of systemic inflammation and inflammatory hepatitis
US6329350B1 (en) 1987-10-28 2001-12-11 Pro-Neuron, Inc. Pyrimidine nucleotide precursors for treatment of systemic inflammation and inflammatory hepatitis
WO1996001115A1 (en) * 1994-07-01 1996-01-18 Pro-Neuron, Inc. Pyrimidine nucleotide precursors for treatment of systemic inflammation and inflammatory hepatitis
SE9701219D0 (sv) * 1997-04-04 1997-04-04 Astra Pharma Prod New compounds
US20020006913A1 (en) 1997-11-04 2002-01-17 Von Borstel Reid W. Antimutagenic compositions for treatment and prevention of photodamage to skin
SE521031C2 (sv) * 1999-05-05 2003-09-23 Srinivas Uppugunduri Nya specifika inhibitorer av akut och kronisk inflammation
EP1402892A4 (en) * 2001-06-11 2006-11-08 Kyowa Hakko Kogyo Kk Antiinflammatoric and antitussive compositions
EP3002010A1 (en) * 2014-09-30 2016-04-06 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Food intake, body weight and glucose metabolism regulation by modulation of P2Y6 receptor signaling
EP3169332A1 (en) * 2014-07-16 2017-05-24 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften Food intake, body weight and glucose metabolism regulation by modulation of p2y6 receptor signaling
WO2018038599A1 (en) * 2016-08-23 2018-03-01 N.V. Nutricia Product and method for increasing uridine concentration in blood plasma
WO2023058731A1 (ja) 2021-10-07 2023-04-13 ヤマサ醤油株式会社 皮膚外用組成物及びその利用、並びに皮膚外用組成物原料
CN114469981A (zh) * 2021-12-16 2022-05-13 中国科学院动物研究所 尿苷在促进组织器官再生或治疗和/或预防和/或缓解和/或改善组织器官损伤中的应用

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1297398A (es) * 1969-08-06 1972-11-22
US3868451A (en) * 1971-03-30 1975-02-25 Abbott Lab Adenosine-5{40 -esters in treating angina pectoris
JPS6037182B2 (ja) * 1977-03-24 1985-08-24 日本冶金工業株式会社 耐食性にすぐれた高強度オ−ステナイトステンレス鋼
JPS6037183B2 (ja) * 1977-03-24 1985-08-24 日本冶金工業株式会社 耐食性にすぐれた高力オ−ステナイトステンレス鋼
JPS5585659A (en) * 1978-12-25 1980-06-27 Daido Steel Co Ltd Free-cutting nonmagnetic high-manganese steel
JPS58126956A (ja) * 1982-01-22 1983-07-28 Nippon Steel Corp プレス加工性の優れた高強度薄鋼板
JPS6054374B2 (ja) * 1982-04-21 1985-11-29 新日本製鐵株式会社 オ−ステナイト鋼板および鋼帯の製造方法
WO1985000608A1 (en) * 1983-07-20 1985-02-14 Teijin Limited Antineoplastic agent
JPS60174797A (ja) * 1984-02-21 1985-09-09 Funai Corp Ν−アロイルチミジン誘導体ならびに抗腫瘍活性物質の毒性低下剤
KR890002033B1 (ko) * 1985-08-31 1989-06-08 한국과학기술원 최저온용 합금 및 그 제조방법
AU2789989A (en) * 1987-10-28 1989-05-23 Pro-Neuron, Inc. Acylated uridine and cytidine and uses thereof
EP0712629B1 (en) * 1987-10-28 2003-06-18 Wellstat Therapeutics Corporation Acyl deoxyribonucleoside derivatives and uses thereof
US4874602A (en) * 1988-02-22 1989-10-17 Paul Calabresi Reduction of the severity 3'-azido-3'-deoxythymidine-induced anemia using benzylacyclouridine
US5077280A (en) * 1988-04-12 1991-12-31 Brown University Research Foundation Treatment of viral infections
JP2529605B2 (ja) * 1989-10-23 1996-08-28 株式会社大塚製薬工場 免疫賦活剤
JPH03169815A (ja) * 1989-11-29 1991-07-23 Nippon Mining Co Ltd 肝臓障害予防及び治療剤
US5141943A (en) * 1990-04-12 1992-08-25 Brown University Research Foundation 5-benzyl barbiturate derivatives

Also Published As

Publication number Publication date
JPH08503699A (ja) 1996-04-23
CA2150940C (en) 2007-08-21
IL107900A (en) 1999-12-22
WO1994013687A1 (en) 1994-06-23
PT679160E (pt) 2005-02-28
CN1095268A (zh) 1994-11-23
CA2588495A1 (en) 1994-06-23
EP1486210A1 (en) 2004-12-15
EP0679160A4 (en) 1997-06-11
MX9307765A (es) 1994-06-30
CA2150940A1 (en) 1994-06-23
CA2588495C (en) 2009-11-17
JP2007332144A (ja) 2007-12-27
CN1211089C (zh) 2005-07-20
EP0679160B1 (en) 2004-11-17
ATE282627T1 (de) 2004-12-15
HK1004484A1 (en) 1998-11-27
DE69333699D1 (de) 2004-12-23
IL107900A0 (en) 1994-05-30
ZA939208B (en) 1994-08-08
KR100315890B1 (ko) 2002-06-27
AU5730594A (en) 1994-07-04
CN1309970A (zh) 2001-08-29
CN1089239C (zh) 2002-08-21
AU7881398A (en) 1998-10-08
JP2005162757A (ja) 2005-06-23
KR950704342A (ko) 1995-11-20
DE69333699T2 (de) 2006-07-27
AU732120B2 (en) 2001-04-12
EP0679160A1 (en) 1995-11-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6232298B1 (en) Pyrimidine nucleotide precursors for treatment of systemic inflammation and inflammatory hepatitis
ES2257721T3 (es) Metodos para reducir la toxicidad de agentes quimioterapeuticos y antivirales con nucleosidos de pirimidina acilados.
JP2007332144A (ja) 全身性炎症と炎症性肝炎の治療のためのピリミジンヌクレオチド前駆体
JP2008007525A (ja) 全身性炎症および炎症性肝炎の処置のためのピリミジンヌクレオチド前駆体
JP7417658B2 (ja) 癌治療のためのシタラビンコンジュゲート
FI111370B (fi) Menetelmä virusvastaisten monoesteriyhdisteiden valmistamiseksi
JP2584947B2 (ja) アシル化ピリミジンヌクレオシドによる化学療法剤および抗ウイルス剤毒性の治療
CN1312254A (zh) 新的核苷
US6329350B1 (en) Pyrimidine nucleotide precursors for treatment of systemic inflammation and inflammatory hepatitis
US7776838B1 (en) Treatment of chemotherapeutic agent and antiviral agent toxicity with acylated pyrimidine nucleosides
AU2006236108A1 (en) Pyrimidine nucleotide precursors for treatment of systemic inflammation and inflammatory hepatitis
AU2491301A (en) Pyrimidine nucleotide precursors for treatment of systemic inflammation and inflammatory hepatitis
AU2005232281A1 (en) Pyrimidine nucleotide precursors for treatment of systemic inflammation and inflammatory hepatitis
AU5262499A (en) Pyrimidine nucleotide precursors for treatment of systemic inflammation and inflammatory hepatitis