JPH03169815A

JPH03169815A - 肝臓障害予防及び治療剤

Info

Publication number: JPH03169815A
Application number: JP1307741A
Authority: JP
Inventors: Hiroyuki Ide; 博之井出; Toshihiko Ariyoshi; 有吉　敏彦; Shunichi Kitajima; 北島　俊一
Original assignee: Nippon Mining Co Ltd
Current assignee: Eneos Corp
Priority date: 1989-11-29
Filing date: 1989-11-29
Publication date: 1991-07-23

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は、肝臓障害を予防するための予防剤又は肝臓障
害を改善するための治療剤に関する。

〔従来の技術及び問題点〕

肝臓障害には、肝毒物等により肝代謝障害が引き起こさ
れ、肝細胞の機能低下に基づいて起こる、例えば急性又
は慢性の肝炎、肝硬変、劇症肝炎、薬物性肝炎、ウイル
ス性肝炎、アルコール性肝炎、脂肪肝等が有る。このよ
うな肝臓障害の予防或いは治療剤は、種々知られている
が、治療効果，副作用等の問題などがあり、十分に満足
すべき状態にない．本発明者は，上記現状に鑑み，亀類の甲羅について，鋭
意研究を進めた結果、この甲羅中に肝臓障害を予防，す
なわち強肝作用及び治癒する成分が含まれていることを
見い出し、新しい肝臓障害予防及び治療剤を提案した（
特願昭６３−１５９２５８号）。

しかし、この予防及び治療剤には、薬効成分以外の成分
が多く含まれ，効果を挙げるためには、多量の投与を必
要とした．〔問題点を解決するための手段〕本発明者は、かかる現状に鑑み、甲羅中の肝臓障害に対
する薬効成分の探求を進めた結果、この成分の一つが、
核酸塩基のウラシルであることが分かり、この知見によ
り、さらに研究を進めた結果，ウラシル以外の他の核酸
塩基であるグアニン、アデニン、ヒボキサンチン、シト
シン及びキサンチンも同様の効果を有することが分った
．本発明は、かかる知見に基づきなされたもので、本発
明の目的は、副作用が極めて少なく、肝臓障害に対し優
れた効果を有する肝臓障害予防及び治療剤を提案するこ
とにある．本発明は、グアニン、アデニン、ヒポキサンチン、ウラ
シル、シトシンまたはキサンチンのいずれか一種又は二
種以上の化合物を有効成分として含むことからなる肝臓
障害予防及び治療剤で有る．上記グアニン、アデニン、
ヒポキサンチン、ウラシル、シトシンまたはキサンチン
は、何れも核酸塩基戒分であり、デオキシリボ核酸（Ｄ
ＮＡ）やリボ核酸の加水分解により得られるものである
。

本発明では，これらの成分を含有するものであり，これ
らの成分は天然物から抽出して得られるものでも合成に
より得られるものでも、いずれも用いることができる．
これらの成分は，単独で用いることができるが、２種以
上混合して用いることもできる．これらの戒分を肝臓障
害予防及び治療剤として用いる場合は、散剤、液剤、懸
濁剤、乳剤顆粒剤等の形態とし、経口或いは経官等での
経腸投与による方法でも、また注射剤の形態とし、経静
脈投与としても良い．また、この投与量は，患者の病理
状態、年齢、体重或いは併用薬剤等を考．慮して適宜選
定される．一般的には、経口投与で０．１〜１０，ＯＯ
Ｏｍｇ／日程度である。以下、本発明の実施例を示す．〔実施例〕（実施例１）スッポンからの　　、スッポンの背中を凍結乾燥し、これを破砕器により粉末
とし，この粉末８００ｇに５倍量の水を加えて，室温で
，２時間攪拌した後、３０００ｒｐｎ＋テ１０分間遠心
分離した．その上清をエバポレーターで４５℃の温度で
減圧下に濃縮し、これにメタノールを加えて７０％メタ
ノール水溶液とし、３０００ｒｐｍ、４℃の温度で２０
分間の遠心分離により除タンパクした後、再びエバポレ
ーターで減圧濃縮した。この濃縮液を３００Ｏｒｐｍで
１０分間遠心分離した後、その上清をセファデックＸ　
Ｇ　−　２５　（５０ｍｍφＸ　９００ｍｍ）を用い、
水を溶離液としてゲル濾過を行い、紫外線の照射により
黄色蛍光を発する黄色蛍光両分を集め、これを減圧濃縮
し、再び水を加えて溶かした．この液を、ＤＥ−５２を
用いた陰イオン交換樹？カラムクロマトグラフィーで，
１１■Ｏを溶離液として分離し、黄色蛍光画分（紫外線
により黄色蛍光を発する流出分）と青色蛍光及び短波長
吸収画分に分離した．次いで、後者の青色蛍光及び短波
長吸収画分をシリカゲル力ラムクロマトグラフィーで、
青色蛍光画分（紫外線により青色蛍光を発する流出分）
、短波長吸収画分（２５４ｎｍの波長の光を吸収する流
出分）及び結晶画分（蛍光及び吸光を有せず、結晶とな
った留出分）とに分離した。

このうちの結晶画分を，クロロホルムにより再結晶して
棒状結晶約２０ａ＋ｇを得た．この結晶について，シリ
カゲルを用いた薄層クロマトグラフィーにおけるＲｆ値
（展開溶媒；酢酸：アセトン：メタノール：ベンゼン＝
５：ｌＯ：３０：５５）、融点、紫外吸収スペクトル、
赤外吸収スペクトル、元素分析及び質量分析を行った．
この結果を第１表に示した。

これらの物性値から，この結晶成分がウラシルであるこ
とが確認された．適舅』Ｕυ４艷上記で得た結晶成分を蒸留水に０．０ｚ％濃度に溶解し
て被験液Ａを調整した．この被験液はゾンデを用いて，
それぞれ１回につき５一〇／ｋｇ経口投与した．また，市販の合成ウラシル（特級、キシダ化学株式会社
）を用いて．　０．０２．　０．２０及び２．００％水
溶液を調製して、被験液Ｂ，Ｃ．Ｄとし，同様に，それ
ぞれ１回につき５　ｍｆｆｉ／ｋｇ経口投与した．退妻
Ｑ［毀体重１５０ｇのウイスタ一系雄性ラットを１群４匹で用
いた。また、肝臓障害の起炎薬物として四塩化炭素（Ｃ
ＣＬ）を２０％となるようにコーン油で希釈調製し、そ
の２　ｎ＋Ｑ／ｋｇを腹腔内投与を行なった。

このＣＣＵ，の腹腔内投与から２４時間経過した後、腹
大静脈より採血し、開腹後肝臓を摘出した。これらにつ
き、血清ＧＯＴ及びＧＰＴ活性を検査し、さらに摘出肝
臓の病理標本を作製し、１１−Ｅ染色を施して病理組織
学的検査を行った。

莢股韮立通謀Ａ群：ＣＣＱ４投与１２時間前、直前及びＣＣＱ４投与
６時間後に被験液Ａを投与。

Ｂ群：ＣＣＱ４投与ｌ２時間前、直前及びＣＣＱ４投与
６時間後に被験液Ｂを投与。

Ｃ群二〇〇ｆｌ４投与１２時間前，直前及びＣＣＱ４投
与６時間後に被験液Ｃを投与。

Ｄ群：ＣＣＱ４投与１２時間前、直前及びＣＣＬ投与６
時間後に被験液Ｄを投与。

Ｅ群：比較としてＣＣＱ４投与のみ。

Ｆ群：比較としてＣＣＱ，投与に代えコーン油のみを２
　ｍＱ／ｋｇ腹腔内に投与。

藝一果上記の検査結果を第２表に記載した。

一方、病理組織学的検査の結果、Ｅ群は中心静脈の細胞
壊死や中間帯におよぶ腫大肝細胞が多数見られ、細胞浸
潤も著しかったが、Ａ−Ｄ群では、中心静脈域にのみ腫
大肝細胞が見られたにすぎなかった。

上記結果から、スッポンに背甲から抽出されたウラシル
を投与したＡ群も、合成で得られたウラシルを投与した
群も、いずれも血清ＧＯＴ，　ＧＰＴの上昇抑制が認め
られ，また組織学的な検査から肝臓障害に対し予防効果
、即ち強肝作用があることは、明らかである，（実施例２）実施例１において，試験群の構成を次のように代えた以
外は、実施例ｌと全く同様の試験を行った。

只遣』１ｌ東暖Ａ群：ＣＣＱ４投与直前に被験液Ｂを投与。

Ｂ群：　ｃｃｎ，投与直前に被験液Ｃを投与。

Ｃ群：　ＣＣＱ．投与直前に被験液Ｄを投与。

Ｄ群：比較としてｃｃｎ，投与のみ。

藍一来この検査結果を第３表に記載した。

一方、病理組織学的検査の結果、Ｄ群は中心静脈の細胞
壊死や中間帯におよぶ腫大肝細胞が多数見られ、細胞浸
潤も著しかった。これに対し，Ａ〜Ｃ群は、中心静脈域
にのみ腫大肝細胞が見られたにすぎなかった．上記結果から、被験液を投与したＡ−Ｃ群は血清ＧＯＴ
，　ＧＰＴの上昇抑制が認められ、また組織学的な検査
から肝臓障害を抑制していることは明らかである。

（実施例３）実施例１において、試験群の構成を次のように代えた以
外は、実施例１と全く同様の試験を行った．試遣』１０東戊Ａ群：被験液Ｂを３日間連続投与後にＣＣｆｌ，投与。

Ｂ群：被験液Ｃを３日間連続投与後にＣＣＱ４投与。

Ｃ群：被験液Ｄを３日間連続投与後にｃｃＱ４投与。

Ｄ群：比較としてＣＣＵ，投与のみ。

藍一来この検査結果を第４表に記載した。

第４表（平均値）一方、病理組織学的検査の結果、Ｄ群は中心静脈の細胞
壊死や中間帯におよぶ腫大肝細胞が多数見られ、細胞浸
潤も著しかった。これに対し、Ａ〜Ｃ群は，中心静脈域
にのみ腫大肝細胞が見られたにすぎなかった。

上記結果から、被験液を投与したＡ−Ｃ群は血清ＧＯＴ
．　ＧＰＴが低く、また組織学的な検査からｃｃｎ４に
よる肝臓障害の程度が低いことは明らかで、肝臓障害予
防機能を有することが分かる。

（実施例４）実施例１において、試験群の構戊を次のように代えた以
外は，実施例１と全く同様の試験を行った。

試Ｅ』Ｉｌ４暖Ａ群：ＣＣＱ４投与６時間後に被験液Ｃを投与。

Ｂ群：　ｃｃｎ．投与６時間後に被験液Ｄを投与。

Ｃ群：比較としてＣＣＱ４投与のみ。

慧一見この検査結果を第５表に記載した。

第５表（平均値）一方、病理組織学的検査の結果、Ｃ群は中心静脈の細胞
壊死や中間帯におよぶ腫大肝細胞が多数見られ、細胞浸
潤も著しかった。これに対し，Ａ．Ｂ群は、中心静脈域
にのみ腫大肝細胞が見られたにすぎなかった．上記結果から、被験液を投与したＡ−Ｃ群は血清ＧＯＴ
．ＧＰＴが低く、また組織学的な検査からＣＣＱ４によ
る肝臓障害の程度が低いことは明らかで、肝ｌＩＦｉ７
ｔ害の治癒効果を有することが分かる。

（実施例５）実施例ｌにおいて、試験群の構成を、経口投与と静脈内
投与と投与方法を代えた以外は、実施例１と同様の試験
を行った。

抜旌艷Δ様友Ａ群：　ＣＣＱ，投与直前に被験液Ｃを経口投与。

Ｂ群二〇ＣＩｌ４投与直前に被験液Ｃを静脈内投与。

Ｃ群：比較としてＣＣＱ４投与のみ。

糀一来この検査結果を第６表に記載した。

第６表（平均値）一方、病理組織学的検査の結果、Ｃ群は中心静脈の細胞
壊死や中間帯におよぶ腫大肝細胞が多数見られ、細胞浸
潤も著しかった。これに対し，Ａ、Ｂ群は、中心静脈域
にのみ腫大肝細胞が見られたにすぎなかった。

上記結果から、経口投与の場合も、静脈内投与の場合も
血清ＧＯＴ，　ＧＰＴが低く、また組織学的な検査から
、投与方法の如何にかかわらず，肝１１１１１！害の防
止効果を有することが分かる。

（実施例６）逮１目１ｌ盟Ｅ２実施例１と同様の合或ウラシルを用いて、０．０２、０
．２０及び２．００％水溶液を調製して，被験液Ｂ．Ｃ
、Ｄとし，ゾンデを用い、それぞれ５ｍＱ／ｋｇ経口投
与した。

髭Ｅし虹糞実施例１と同様なラットを１群４匹で用いた。

また、肝臓障害の起炎薬物としてアリルアルコールを２
％となるように生理食塩水で希釈調製し，その１．８ｔ
Ｑ／ｋｇを腹腔内投与した．このアリルアルコール投与
から２４時間経過した後、腹大静脈より採血し、同時に
開腹して，肝臓を摘出した。これらにつき、血清ＧＯＴ
及びＧＰＴ活性を検査し、さらに摘出肝臓の病理標本を
作製し、１１−Ｅ染色を施して病理組織学的検査を行っ
た．莢歇豆皇豊玖Ａ群：アリルアルコール投与と同時に被験液Ｂを投与。

Ｂ群：アリルアルコール投与と同時に被験液Ｃを投与。

Ｃ群：アリルアルコール投与と同時に被験液Ｄを投与。

Ｄ群：比較としてアリルアルコール投与のみ。

Ｅ群：比較としてアリルアルコール投与に代え生理食塩
水のみを１　．　８ｍｌ２／　ｋｇ腹腔内に投与。

監一来この検査結果を第７表に記載した。

一方、病理組織学的検査の結果、Ｄ群は門脈域から中間
帯におよぶ広範囲の壊死が認められ細胞浸潤が著しかっ
た。これに対し，Ａ−Ｃ群では門脈域にわずかな壊死像
が認められたにすぎなかった。

上記結果から、被験液を投与したＡ−Ｃ群は血清ＧＯＴ
．　ＧＰＴが低く、また組織学的な検査からアリ／Ｌ／
　７　／ｔ／コールによる肝臓障害の程度が低いことは
明らかで、肝臓障害の予防効果を有することが分かる。

（実施例７）実施例６において、試験群の構或を次のように代えた以
外は，実施例６と全く同様の試験を行った。

Ｘ違ＪｆＬＬ色皮Ａ群：アリルアルコール投与６時間後に被験液Ｂを投与
６Ｂ群：アリルアルコール投与６時間後に被験液Ｃを投与
．Ｃ群：アリルアルコール投与６時間後に被験液Ｄを投与
。

Ｄ群：比較としてアリルアルコール投与のみ。

輩一来この検査結果を第８表に記載した。

一方、病理組織学的検査の結果、Ｄ群は門脈域から中間
帯におよぶ広範囲の壊死が認められ細胞浸潤が著しかっ
た。これに対し、Ａ−Ｃ群では門脈域にわずかな壊死像
が認められたにすぎなかった。

上記結果から、被験液を投与したＡ−Ｃ群は血清ＧＯＴ
．　ＧＰＴが低く，また組織学的な検査からアリルアル
コールによる肝臓障害の程度が低いことは明らかで、肝
臓障害の治癒効果を有することが分かる。

（実施例８）校抜旌△盟盟実施例６と同様に行った。

莢腹友盟実施例６において、肝臓障害の起炎薬物とじてＤ−ガラ
クトサミンの１０％生理食塩水を用い、その５ｍｕ／ｋ
ｇを腹腔内投与した以外は、実施例６と同様の方法で行
った。

莢腹韮立且裟Ａ群＝Ｄ−ガラクトサミン投与と同時に被験液Ｂを投与
。

Ｂ群＝Ｄ−ガラクトサミン投与と同時に被験液Ｃを投与
。

Ｃ群＝Ｄ−ガラクトサミン投与と同時に被験液Ｄを投与
．Ｄ群：比較としてＤ−ガラクトサミン投与のみ。

Ｅ群：比較としてＤ−ガラクトサミン投与に代え生理食
塩水のみを１．８ｍｆｌ／ｋｇ腹腔内に投与。

蟇一来この検査結果を第９表に記載した。

一方、病理組織学的検査の結果、Ｄ群は肝小コ散在性壊
死が著しく、細胞浸潤像も認められた。

これに対し、Ａ−Ｃ群ではわずかな壊死像が認占られた
にすぎなかった．上記結果から、被験液を投与したＡ．Ｂ群は１清ＧＯＴ
，ＧＰＴが低く，また組織学的な検査がらＡ一Ｃ群はＤ
−ガラクトサミンによる肝臓障害の程度ズ低いことは明
らかで、肝ｍＨ害の予防効果を有１ることか分かる．（実施例９）実施例８において，試験群の構成を次のよう番二代えた
以外は、実施例８と全く同様の試験を行てた。

鉱七ＪＬＩＬ暖Ａ群：Ｄ−ガラクトサミン投与６時間後に被験液Ｃを投
与．Ｂ群：Ｄ−ガラクトサミン投与６時間後に被験液Ｅを投
与．Ｃ群：比較としてＤ−ガラクトサミン投与のみ．蟇一果この検査結果を第１０表に記載した。

一方、病理組織学的検査の結果、Ｃ群は肝小葉散在性壊
死が著しく、細胞浸潤像も認められた。

これに対し．Ａ．Ｂ群ではわずかな壊死像が認められた
にすぎなかった。

上記結果から，被験液を投与したＡ．Ｂ群は血清ＧＯＴ
．　ＧＰＴが低く，また組織学的な検査からＤ−ガラク
トサミンによる肝臓障害の程度が低いことは明らかで、
肝臓障害の治癒効果を有することが分かる．（実施例１０）盈歇蓋生災毀市販のウラシル、ヒボキサンチン及びアデニンを生理食
塩水を用いて２％溶液として懸濁させ，被験液Ｅ，Ｆ，
Ｇとし、ゾンデを用い，それぞれ２ｎ＋Ｍ／ｋｇ経口投
与した．抜駿左孟体重１５０　ｇのウィスタ一系雄性ラットを１群３匹で
用いた．また，肝臓障害の起炎薬物としてＣＣＱ４を２
０％となるようにコーン油で稀釈調整し、その２ｍｆｌ
／ｋｇを腹腔投与を行った。このＣＣＵ，の腹腔内投与
から２４時間経過した後，腹大静脈より採血し，開腹後
肝臓を摘出した。これらにつき、血清ＧＯＴ，　ＧＰＴ
及びＩＣＤＩｆ活性を測定し、摘出した肝臓の一部から
ミクロゾームを調製し，チトクロームＰ　−　４．５　
０量，及びｂ５量、アニリンヒドロキシラーゼ（Ａｎｉ
ｌｉｎｅ　ｈｙｄｒｏｘｙｌａａｅ）．アミノビリン，
Ｎ−ジメチラーゼ（Ａｍｉｎｏｐｙｌｉｎｅ　Ｎ−ｄｅ
ｍｅｔｈｙｌａｓｅ），　７−エトキシクマリン，Ｏ−
ジエチラーゼ（Ｅｔｈｏｘｙｃｏｕｍａｒ−ｉｎｅ　Ｏ
−ｄｅｅｔｈｙｌａｓｅ）及びグルコース−６−フォス
フエート（Ｇｌｕｃｏｓｅ−６−ｐｈｏｓｐｈａｔａｓ
ｅ）活性を測定した．さらに摘出肝臓の病理標本を作製
し．Ｈ−Ｅ染色を施して病理組織学的検査を行った．芙腹韮立盈處Ａ群：ＣＣＱ４投与３０分前に被験液Ｅを投与。

Ｂ群：　ｃｃｎ．投与３０分前に被験液Ｆを投与。

Ｃ群：　ＣＣＱ，投与３０分前に被験液Ｇを投与。

Ｄ群：比較としてＣＣａ４投与のみ．Ｅ群：比較としてＣＣｎ４投与に代え生理食塩水のみを
２ｍＱ／ｋｇ腹腔内に投与．監一果上記の検査結果を第１１表に記載した。

一方，病理組織学的検査の結果、Ｄ群は中心静脈域の壊
死ならびに門脈域にわたる肝細胞の腫大が認められ、細
胞浸潤も著しかったが，Ａ−Ｃ群では、中心静脈域にの
み腫大肝細胞が見られたにすぎなかった。

上記結果から、ウラシル、ヒポキサンチンおよびアデニ
ンを投与することにより障害は改善され、特にアデニン
の効果は顕著であった。

（実施例１１）披簾戒坐災毀市販のグアニン、シトシン及びキサンチンを生理食塩水
を用いて２％溶液として懸濁させ、被験液Ｈ．Ｉ．Ｊと
し、ゾンデを用い、それぞれ２ｍＭ／ｋｇ経口投与した
．凰監左迭試験群構成を次のように設定し、試験方法は実施例１０
と全く同様の方法で行った。

鉱ｍ欠檀滅，Ａ群：ＣＣＬ投与３０分前に被験液Ｈを投与。

Ｂ群：ＣＣ１２４投与３０分前に被験液工を投与。

Ｃ群：　ＣＣＱ４投与３０分前に被験液Ｊを投与。

Ｄ群：比較としてＣＣＱ４投与のみ。

慧一星上記の検査結果を第■２表に記載した６一方、病理組織
学的検査の結果、Ｄ群は中心静脈域の壊死ならびに門脈
域にわたる肝細胞の腫大が認められ、細胞浸潤も著しか
ったが、Ａ−Ｃ群では、中心静脈域にのみ腫大肝細胞が
見られたにすぎなかった。

上記結果から、グアニン、シトシンおよび゛キサンチン
を投与することにより障害は改善され、特にグアニンの
効果は顕著であった。

〔発明の効果〕

以上のように本発明の肝蔵障害予防及び治療剤は、副作
用が少なく、肝蔵障害に対し極めて優れた効果を有する
ものである。

Claims

【特許請求の範囲】

グアニン、アデニン、ヒポキサンチン、ウラシル、シト
シンまたはキサンチンのいずれか一種又は二種以上の化
合物を有効成分として含む肝臓障害予防及び治療剤。