JPH029824A

JPH029824A - 肝臓障害予防及び治療剤

Info

Publication number: JPH029824A
Application number: JP63159258A
Authority: JP
Inventors: Hiroyuki Ide; 博之井出; Toshihiko Ariyoshi; 有吉　敏彦; Masato Yasuda; 保田　正人; Shunichi Kitajima; 北島　俊一
Original assignee: Nippon Mining Co Ltd
Current assignee: Eneos Corp
Priority date: 1988-06-29
Filing date: 1988-06-29
Publication date: 1990-01-12

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は、肝臓障害を予防するための医薬又は肝臓障害
を改善するための治療剤に関する。

〔従来の技術〕

古来、亀類の肉、血液或いは甲羅は、疲労を回復させ（
治労）、熱を去り（去熱、過熱）、体を涼しく（消熱）
、心を安らかにさせ（定心）、血を補い（補血）、解毒
の効果があるとされている。

〔発明が解決しようとする問題点〕

しかしながら、その具体的な効果の科学的な解明は、は
とんど行なわれていないのが現状である。

本発明者は、上記現状に鑑み、亀類の甲羅について、鋭
意研究を進めた結果、この甲羅中に肝臓障害を予防、す
なわち強肝作用及び治癒する成分が含まれていることを
見い出した。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明は、かかる知見に基づいてなされたもので１本発
明によって新しい肝臓障害予防及び治療剤を提供するこ
とができるものである。

本発明は、亀類の甲羅又はこれを凍結乾燥させた後、粉
砕したもの或いは粉砕物からの抽出物を有効成分として
含有することから成るもので、好ましくは、前記抽出物
が水により抽出されたもので、さらにはこの抽出物が含
むゲル濾過による３００〜１０００の分子量画分にある
物質を有効成分として含有する肝臓障害予防及び治療剤
に関するものである。

上記本発明において、亀類としては、スツポン、タイマ
イ、イシガメ、ウミガメ或いはクサガメ等を用いること
ができるが、入手し易いスツポンを用いることが、特に
好ましい。この亀類の甲羅は、そのまま粉末にして用い
ることもできるが、特にスツポンにおいては、時間の経
過による有効成分の損失や変質を防ぐため、スツポン生
体の解体後。

−担、凍結乾燥した後、粉末化する方法が、有効成分を
逃さずに容易に粉末化できるので好ましい。

また、本発明においては亀類の甲羅の抽出物を用いるこ
ともできる。この抽出は、アルコール、ケトン等の有機
溶剤を用いても良いが、水で十分に有効成分が抽出され
てくる。この場合、水は加熱しても良いが、冷水で抽出
しても良い。

一方、この抽出物について、肝臓障害予防及び治癒に効
果ある有効成分を分画した結果、この成分は複数からな
ることが推定され、この成分の一種は、少なくともゲル
濾過による３００〜１０００の分子量画分に存在する物
質であることが判明した。

従って、この抽出物をゲル濾過、カラムクロマトグラフ
ィー、蒸留、晶析等の手段で、有効成分のみを分離、採
取して、使用することにより、より効果的に肝障害の予
防及び治療を行うことができることは言うまでもない。

本発明の肝臓障害予防及び治療剤は亀類の甲羅（粉砕物
）、その凍結乾燥粉砕物、粉砕物の抽出物、もしくはこ
れらの処理物を有効成分として含有するものであるが、
無毒性であるために経口、非経口のいずれにおいても投
与することができる。投Ｆ８ｉ−量としては０．１ｍｇ
〜５ｇ７日程度でよい。

本発明の肝臓障害予防及び治療剤の投与によって肝障害
による遊出酵素或いは肝障害の指標酵素である血清グル
タミン酸−オキサロ酢酸トランスアミラーゼ（ＧＯＴ）
、グルタミン酸−ピルピン酸トランスアミラーゼ（ＧＰ
Ｔ）、インクエン酸脱水酵素（ＩＣＤＨ）の上昇抑制効
果が認められ、また、組織学的にも肝臓障害に対して予
防及び治療効果が認められるものである。

以下に実施例を示す。

〔実施例〕

（実施例１）（夾隨塵乳聚スツポンの背中を凍結乾燥し、これを破砕器により粉末
とし、この粉末２５ｇに水５０＋＋＋Ｒを加え、２時間
攪拌し、ゲル状となったものをガーゼで濾過して被検液
を調製した。この被検液は、ゾンデを用いて、それぞれ
１回につき１　ｍＱ／個体経口投与した。

ヌＪＬ析族体重１５０ｇのウィスター系雄性ラットを用い、また、
肝臓障害の起炎薬物として四塩化炭素を２０％となるよ
うにコーン油で希釈して、　２　ｎ＋Ｑ／ｋｇを腹腔的
投与を行なった。この四塩化炭素の腹腔的投与から２４
時間経過した後、頭静脈より採血し、開腹後肝臓を摘出
した。これらにつき、　血清ＧＯＴ及びＧＰＴ活性、血
清ＩＣＤＨ，肝ミクロゾーム膜酵素のグルコース−６−
ホスファターゼ（Ｇ−６−Ｐａｇｅ）活性、ヂトクロー
ムｂ５、　チトクロームＰ−４５０量及び７−ＥＣ活性
を検査し、さらに肝臓のＨ−Ｅ染色及び組織化学的にＧ
−６−Ｐａｓｅを検査した。

ヌ１■１先１戊Ａ群二四塩化炭素投与１２及び１時間前に被検液を投与
。

Ｂ群二四塩化炭素投与２４．１２及び１時間前に被検液
を投与。

Ｃ群二四塩化炭素投与１２及び１時間前及び四塩化炭素
投与１２時間後に被検液を投与。

０群：比較として四塩化炭素投与のみ。

Ｅ群：比較として四塩化炭素投与に代えコーン油のみを
２　ａ＋４／ｋｇＮＩ腔内に投与。

庫−呆上記の検査結果を第１表に記載した。

（平均イω 一方、組織学的な検査の結果、Ｄ群は、中心静脈の細胞
壊死や中間帯におよぶ種火肝細胞が多数見られ、細胞浸
潤も著しかった。これに対し、Ａ〜Ｃ群は、中心静脈域
にのみ種火肝細胞が見られたにすぎず、組織化学的にも
Ｇ−６−Ｐａｓｅは広範囲に見られた。

上記結果から、被検液を投与したＡ−Ｃ群は、いずれも
血清ＧＯＴ、　ＧＰＴ、　ＩＣＤＨの上昇抑制および肝
ミクロゾームＧ−６−Ｐａｓｅ、チトクロームＰ−４５
０，７−ＥＣの減少抑制が認められた。また組織学的な
検査からも肝臓障害に対し予防効果、即ち強肝作用があ
ることは、明らかである。

（実施例２）実施例１において、試験群の構成を次のように代えた以
外は、実施例１と全く同様の試験を行った。

基１１艮Φ」１文Ａ群二四塩化炭素投与３及び６時間後に被検液を投与。

Ｂ群二四塩化炭素投与９及び１２時間後に被検液を投与
。

Ｃ群二四塩化炭素投与３．６．９及び１２時間後に被検
液を投与。

Ｄ群：比較として四塩化炭素投与のみ。

結果上記の検査結果を第２表に記載した。

第　２　表　　　　　（平均値）一方１組織学的な検査の結果、Ｄ群は、中心静脈の細胞
壊死や中間帯におよぶ種火肝細胞が多数見られ、細胞浸
潤も著しかった。これに対し、Ａ〜Ｂ群は、中心静脈域
にのみ種火肝細胞が見られたにすぎず、組織化学的にも
Ｇ−６−Ｐａｓｅは広範囲に見られた。Ｃ群は、改善傾
向は認められたが、Ｄ群との間に顕著な差は求められな
かった。

上記結果から、被検液を投与したＡ−Ｂ群は。

いずれも血清ＧＯＴ、　ＧＰＴ、ＩＣＤＨの上昇抑制お
よび肝ミクロゾームＧ−６−Ｐａｇｅ、チトクロームＰ
−４５０，１−ＥＣの減少抑制が認められた。また組織
学的な検査からも肝ｍ障害に対し治癒効果があることは
明らかである。尚、Ｃ群に肝臓障害の改善効果があまり
認められなかったのは、投与回数の増加で、強制投与か
らくるストレスなどの影響が逆効果になったものと推定
される。

（実施例３）被検液の調製スツポンの背中を凍結乾燥し、これを破砕器により粉末
とし、　この粉末１０ｇに１０倍量の水を加えて２４時
間攪拌した後、３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離して
、その上清を凍結乾燥した。これを水に懸濁し、再度３
０００ｒρｍで１０分１ｆｆｌ遠心分離した。得られた
上清をセファデックスＧ−７５（１４＋ｎｒ＠φＸ　９
００ｍｍ）を用い、水を溶離液としてゲル濾過を行い、
　５ｍρづつ留出液を採取し、第１図に示す溶出パター
ンを得た。このうち、　１０〜２０番までの留出液を集
めて高分子物質画分と、また２５〜４５番までの留出液
を集めて低分子物質画分とし、これらをそれぞれ凍結乾
燥し、２ｄの水を加えて被検液とした。この被検液は、
ゾンデを用いて、それぞれ１回につき０　、２ｎ＋Ｑを
経口投与した。

試験方法体重３０ｇのｄｄｙ系雄性マウスを用い、また、肝臓障
害の起炎薬物として四塩化炭素を０．７５％となるよう
にコーン油で希釈して、　　０．５＋ａｎ／１００ｇ　
Ｂすの割合で腹腔的投与を行なった。この四塩化炭素の
腹腔的投与から２４時間経過した後、エーテル麻酔下で
開腹し、事大動脈より採血した後、肝臓を摘出した。こ
れらにつき、血清ＧＯＴ、　ＧＰＴ活性及びＩＣＤＨ活
性、チトクロームＰ−４５０量及び７−　ＥＣ活性及び
肝臓のトＥ染色による組織学的な検査をした。

ヌ験群の構成Ａ群：四塩化炭素投与１２及び１時間前及び四塩化炭素
投与１２時間後に高分子物質画分の被検液を投与。

Ｂ群二四塩化炭素投与１２及び１時間前及び四塩化炭素
投与１２時間後に低分子物質画分の被検液を投与９０群：比較として四塩化炭素投与のみ。

禎−困上記の検査結果を第３表に記載した。

第　３　表　　　　　　　　　（平均値）一方、組織学
的な検査の結果、Ａ、０群は、中心静脈から中間帯に及
ぶ細胞壊死像が認められた。

これに対し、Ｂ群は中心静脈域に限局して壊死像が認め
られたにすぎなかった。

上記データから、Ｂ群は、いずれも血清ＧＯＴ。

ＧＰＴ、　ＩＣＤＨの上昇抑制及びチトクロームＰ−４
５０，７−ＥＣの減少抑制が認められた。また組織学的
な検査からも肝臓障害に対し予防及び治療効果があるこ
とは、明らかである。

この結果、低分子物質画分に肝臓障害予防及び治癒効果
を有する成分が含まれていることが分かる。

（実施例４）被検液の調製スツポンの背中を凍結乾燥し、これを破砕器により粉末
とし、　この粉末ｌｏｇに１０倍量の水を加えて２４時
間攪拌した後、３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離して
、その上清を凍結乾燥した。これを、水に懸濁し再度３
０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。得られた上清を
セファデックスＧ−７５（１４ｍＩφＸ　９００ｍｍ）
を用い、水を溶離液としてゲル濾過を行い、５＋ａＱづ
つ留出液を採取し、２５〜４５番までの低分子物質画分
を集め、これを凍結乾燥し、再び水を加えて溶かした。

この液を、セファデックスＧ−２５（１４ｎ＋＋ａφＸ
　９００ｍｍ）を用い、水を溶離液としてゲル濾過を行
った。この溶出パターンを第２図に示した。得られた溶
出液のうち、２０〜２５番の両分を糖画分として集め、
また、２７〜４７番の両分を蛍光画分として集め、これ
らをそれぞれ凍結乾燥し、２ｍＧの水を加えて被検液と
した。この被検液は、実施例３と同様にゾンデを用いて
、それぞれ１回につき０．２＋ＩＱを経口投与した。

人災ガ蒸実施例３と同様の方法で行った。

試験群の構成Ａ群二四塩化炭素投与１２及び１時間前及び四塩化炭素
投与１２時間後に糖両分の被検液を投与。

Ｂ群二四塩化炭素投与１２及び１時間前及び四塩化炭素
投与１２時間後に蛍光画分の被検液を投与。

０群：比較として四塩化炭素投与のみ。

潜ヨニ肢上記の検査結果を第４表に記載した。

第　４　表　　　　　　　　　（平均値）一方、組織学
的な検査の結果、Ａ、Ｃ群は、中心静脈から中間帯に及
ぶ細胞壊死像が認められた。

上記データから、Ｂ群は、　いずれも血清ＧＯＴ。

ＧＰＴ、ＩＣＤ）ｌの上昇抑制及びチトクロームＰ−４
５０、？−ＥＣの減少抑制が認められた。また組織学的
な検査からも肝臓障害に対し予防及び治療効果があるこ
とは、明らかである。

この結果、蛍光画分に肝臓障害予防及び治癒効果を有す
る成分が含まれていることが分かる。また、この蛍光画
分は１分子量が３００〜１０００の範囲内にあり、紫外
線を当てることにより蛍光を発する物質が含まれている
。

（実施例５）被検液の調製スツポンの背中を凍結乾燥し、これを破砕器により粉末
とし、この粉末１００ｇに１０倍量の水を加えて、２時
間攪拌した後、３０００ｒρｍで１０分間遠心分離した
。その上清をエバポレータで４５℃減圧下に濃縮し、こ
れにメタノールを加えて７０％メタノール水溶液とし、
３０００ｒｐｍ、　　１０分間の遠心分離により除タン
パクした後、再びエバポレーターで減圧濃縮した。この
濃縮液を３０００ｒｐＨで１０分間遠心分離した後、そ
の上清をセファデックスＧ−２５（５０＋ｍｍφＸ　９
００［１１１１）を用い、水を溶離液としてゲル濾過を
行い、紫外線の照射により蛍光を発する蛍光画分を集め
、これを減圧濃縮し、再び水を加えて溶かした。この液
を、陰イオン交換樹脂カラムクロマトグラフィーで、黄
色蛍光画分（紫外線により黄色蛍光を発する流出分）と
青色蛍光及び短波長吸収画分に分離した。次いで、後者
の青色蛍光及び短波長吸収画分をシリカゲルカラムクロ
マトグラフィーで、青色蛍光画分（紫外線により青色蛍
光を発する流出分）、短波長吸収画分（２５４ｎｍの波
長の光を吸収する流出分）及び結晶画分（蛍光及び吸光
を有せず、結晶となった留出分）とに分離した。これら
をそれぞれ減圧濃縮し、　１　、２ｍＭとなるように水
を加え、その内の０．６ｍＱを水で４倍希釈して２．４
ｍＭとし、また４種の両分の残りの０．６ｍＱずつを混
合して２．４ｍＱにし、それを被検液とした。

この被検液は、ゾンデを用いて、それぞれ１回につきＯ
，１ｍ１ｌｉを経口投与又は尾静脈内投与した。四塩化
炭素単独投与群には生食を同様に投与した。

ヌ験方法実施例３と同様の方法で行った。

試験群の構成Ａ群：四塩化炭素投与１２及び１時間前及び四塩化炭素
投与１２時間後に黄色蛍光画分の被検液を投与。　　　
　　　　　（Ａ−１：経口Ａ−２＝静脈内）Ｂ群：四塩
化炭素投与１２及び１時間前及び四塩化炭素投与１２時
間後に青色蛍光画分の被検液を投与。　　　　　　　　
（Ｂ−１：経口Ｂ−２＝静脈内）Ｃ群：四塩化炭素投与
１２及び１時間前及び四塩化炭素投与１２時間後に短波
長吸収画分の被検液を投与　　　　　　　（Ｃ−１：経
口Ｃ−２：静脈内）Ｄ群二四塩化炭素投与１２及び１時
間前及び四塩化炭素投与１２時間後に結晶画分の被検液
を投与。

（Ｄ−１：経口Ｄ−２：静脈内）Ｅ群二四塩化炭素投与の１２及び１時間前と四塩化炭素
投与１２時間後に黄色蛍光、青色蛍光、短波長吸収、結
晶の各分画を混合した被検液を投与。

（Ｅ−１：経口Ｅ−２：静脈内）Ｆ群：比較として四塩化炭素投与のみ。

（Ｆ−１：経口Ｆ−２：静脈内）結果上記の検査結果を第５表に記載した。

第５表（平均値）一方、組織学的な検査の結果、Ａ、Ｂ、Ｆ群は中心静脈
から中間体におよぶ細胞壊死像が認められたが、Ｃ，Ｄ
、Ｅ群では中心静脈域に限局した壊死像が認められたに
すぎなかった。また、Ｃ１Ｄ、Ｅ群では投与経路により
若干差がみられ、経口投与の方が改善効果は大であった
。

上記データから、Ｃ，Ｄ、Ｅ群は、いずれも血清ＧＯＴ
、　ＧＰＴ、ＩＣＤＨの上昇抑制が認められ、また組織
学的な検査から肝臓障害に対し予防及び治療効果がある
ことは明らかである。

この結果、短波長吸収分画および結晶分画に、肝臓障害
予防及び治癒効果を有する成分が含まれていることが分
かる。

〔発明の効果〕

本発明の肝臓障害予防及び治療剤は、亀類の甲羅又はこ
れを凍結乾燥させた後、粉砕したもの或いは抽出物を有
効成分として含有させたため、肝臓障害に対して、極め
て優れた予防及び治癒効果を有する。

【図面の簡単な説明】

第１図は、実施例３におけるセファデックスＧ−７５を
用いたゲル濾過の溶出パターンを示した図である。第２図は、実施例４におけるセファデックスＧ−２５を
用いたゲル濾過の溶出パターンを示した図である。代理人　弁理士　戸　１）親　男第　　１図第　　２図フラグしヨシＮＯ（各５ｍ文）

Claims

【特許請求の範囲】

（１）亀類の甲羅、その凍結乾燥粉砕物、粉砕物の抽出
物、もしくはこれらの処理物を有効成分として含有して
なる肝臓障害予防及び治療剤。
（２）請求項（１）の亀類の甲羅の凍結乾燥粉砕物の抽
出物が、水によって抽出されたもので、ゲル濾過による
３００〜１０００の分子量画分内にある物質を含むもの
であることを特徴とする肝臓障害予防及び治療剤。