ES2205926T3 - Metodo de produccion de vacunas inactivas asociadas con una emulsion de agua en aceite adyuvante. - Google Patents

Metodo de produccion de vacunas inactivas asociadas con una emulsion de agua en aceite adyuvante.

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ES2205926T3 ES99963591T ES99963591T ES2205926T3 ES 2205926 T3 ES2205926 T3 ES 2205926T3 ES 99963591 T ES99963591 T ES 99963591T ES 99963591 T ES99963591 T ES 99963591T ES 2205926 T3 ES2205926 T3 ES 2205926T3
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Abstract

Un método para preparar una vacuna inactivada, adyuvada en emulsión agua en aceite (w/o), caracterizado porque se mezcla, bajo condiciones suaves, una solución acuosa constando de uno o más antígenos inactivados con una emulsión w/o confeccionada.

Description

Método de producción de vacunas inactivas asociadas con una emulsión de agua en aceite adyuvante.
La presente invención tiene que ver con vacunas inactivadas y un método para producir dichas vacunas.
Las vacunas han sido ampliamente utilizadas para la profilaxis y tratamiento de enfermedades infecciosas en animales y el hombre. Las vacunas empleadas pueden ser divididas en dos categorías principales: vacunas vivas y vacunas inactivadas. Las vacunas vivas utilizan cepas benignas de existencia natural o cepas atenuadas de patógenos vivos. Las vacunas inactivadas constan de antígenos que se componen de microorganismos inactivados íntegros o componentes específicos (subunidades) de dichos microorganismos. En el caso de los últimos, se distinguen dos tipos de vacunas inactivadas: vacunas subunidad en el caso de componentes que hayan sido obtenidos vía purificación bioquímica, o vacunas recombinantes en el caso de que los componentes aislados de los microorganismos hayan sido preparados vía tecnología recombinante.
Las vacunas inactivadas tienen la ventaja sobre las vacunas vivas de que esta forma de inmunización contra los patógenos no tiene riesgo de infección. El problema general percibido con el uso de vacunas inactivadas es su incapacidad para provocar una respuesta inmune que sea suficiente para protección. Por consiguiente, las vacunas inactivadas son combinadas a menudo con un adyuvante, esto es, un compuesto o composición que sea capaz de aumentar la respuesta inmune general o específica en el sujeto vacunado. La administración de microorganismos inactivados, o componentes de los mismos, y el adyuvante conduce a una respuesta inmune fuerte, eficaz y generalmente protectora. Uno de los adyuvantes más frecuentemente utilizados es una emulsión agua en aceite (w/o). Las emulsiones w/o proporcionan un sistema de dos fases para la vacuna: una fase acuosa en la que se puede disolver o suspender el antígeno, y una fase oleosa en la que se dispersa la fase acuosa como pequeñas gotitas.
Las vacunas inactivadas que utilizan una emulsión w/o como adyuvante se preparan, generalmente, emulsionando una solución acuosa que consta del antígeno inactivado, un aceite apropiado y agentes emulsificantes hasta que se obtenga una emulsión w/o en la que los antígenos estén homogéneamente distribuidos sobre la fase acuosa. La producción de estas vacunas inactivadas, adyuvadas en emulsión w/o, necesitan tiempo y costes considerables, pero es considerado generalmente como necesario: únicamente una emulsión minuciosa del antígeno conduciría a una distribución homogénea de dicho antígeno en la emulsión w/o. En general, se considera que es necesario para estimular eficazmente la respuesta inmune. Sin embargo, el proceso de emulsificación es un proceso sumamente energético realizado bajo unas condiciones de proceso vigorosas, incluyendo altas temperaturas y/o fuertes fuerzas de corte. Para algunos antígenos, estas vigorosas condiciones de emulsión pueden alterar la estructura o conformación del antígeno, y reducir tal cual la eficacia de la vacuna resultante. El almacenamiento en forma emulsionada puede disminuir la estabilidad del antígeno porque el antígeno está presente en un estado disuelto o suspendido. Además, durante el almacenamiento los componentes químicos que están presentes en la emulsión pueden reducir la estabilidad del antígeno, como en el caso, por ejemplo, con virus envueltos: el contacto prolongado con el agente emulsificante destruye la cubierta viral, produciendo una eficacia disminuida de la vacuna.
GB-A-2170708 revela métodos para mezclar, bajo condiciones suaves, antígenos vivos acuosos con una emulsión w/o confeccionada. EP-A-838222 revela un método para la mezcla de antígenos vivos acuosos con una emulsión w/o confeccionada, la emulsión confeccionada constando además de un antígeno inactivado. Sin embargo, ningún documento revela métodos para el mezclado de antígeno inactivado con una emulsión w/o confeccionada.
De modo sorprendente, se ha descubierto ahora que se pueden preparar vacunas inactivadas, adyuvadas en emulsión w/o, mediante el mezclado simple de una solución acuosa constando del antígeno inactivado y una emulsión w/o confeccionada, dicho mezclado realizado bajo condiciones suaves. Se descubrió que las vacunas así obtenidas eran composiciones homogéneas, las cuales permanecían homogéneas durante periodos de tiempo prolongados, a pesar del hecho de que la solución acuosa que consta del antígeno inactivado no haya sido sometida en su totalidad a un proceso de emulsificación.
Como ya se indicó, la emulsificación es un proceso sumamente energético en el que una fase acuosa, un agente emulsificante (surfactante) y una fase no acuosa, preferentemente una fase oleosa, son mezclados bajo condiciones de proceso vigorosas. Sin embargo, el proceso de mezclado según la presente invención se lleva a cabo bajo condiciones de proceso extremadamente suaves comparadas con las condiciones de proceso del procedimiento de emulsificación, dichas condiciones suaves incluyendo fuerzas de corte bajas, o ninguna, y temperaturas ambiente. Preferentemente, el proceso de mezclado según la presente invención se lleva a cabo a mano, a temperatura ambiente.
El mezclado de dicha solución acuosa de antígeno y dicha emulsión w/o confeccionada según la invención puede ser llevado a cabo mediante simple sacudida, agitación o cualquier otra forma de combinar los dos constituyentes sin los excesivos parámetros de proceso que son necesarios para la emulsificación. Comparado con el tiempo necesario para la emulsificación, el mezclado según la invención puede ser llevado a cabo en un corto periodo de tiempo. Preferentemente, el mezclado se logra en unos pocos segundos o minutos. Más sorprendentemente, se descubrió que la simple sacudida a mano de dicha solución acuosa y la ya preparada emulsión w/o era suficiente para obtener una composición estable y homogénea de vacuna inactivada, con una eficacia similar a una vacuna inactivada preparada según un proceso de emulsificación patrón.
Según la invención, la solución acuosa consta de uno o más antígenos activados. Una solución acuosa comprendiendo dos o más antígenos inactivados diferentes puede ser utilizada, en el método según la invención, para obtener emulsiones de vacunas inactivadas multivalentes.
El método de preparación según la invención tiene varias ventajas sobre los métodos patrón de preparación: es fácil de llevar a cabo, exige menos tiempo y un proceso más económico. Una ventaja importante del método según la presente invención es el hecho de que el antígeno inactivado no está expuesto a los dañinos esfuerzos cortantes y/o altas temperaturas que ocurren durante el proceso de emulsificación: la estructura química del antígeno está mejor preservada.
En una forma de realización específica del método según la invención, la vacuna w/o adyuvada en emulsión w/o se prepara en el ámbito de acción anterior a la vacunación. El método proporciona una reacción veterinaria más flexible y adecuada en las circunstancias del ámbito de acción: en el caso de un brote, los antígenos inactivados necesarios pueden ser disueltos en una solución acuosa, mezclados a mano con una cantidad apropiada de una emulsión w/o estable confeccionada, y administrados posteriormente a los animales sujeto. De este modo, el método según la invención proporciona una rápida y eficaz preparación de emulsiones de vacuna inactivada en el ámbito de acción justo antes de su uso.
Una ventaja adicional del método según la invención es que, de esta forma, antes de la vacunación se pueden mezclar juntos antígenos inactivados que no son compatibles normalmente, para obtener una emulsión de vacuna inactivada multivalente. Puesto que los antígenos inactivados incompatibles son combinados justo antes de la vacunación, ellos están únicamente presentes en la emulsión durante un efímero periodo durante el cual no pueden ejercer su efecto adverso entre sí.
Otra ventaja del método según la invención es que los antígenos inactivados pueden ser almacenados por separado en forma desecada, preferentemente en forma liofilizada, para evitar el deterioro de los componentes durante el almacenamiento. La estabilidad de los antígenos inactivados decae mucho más rápido durante el almacenamiento en solución o suspensión que en forma desecada. Justo antes de la vacunación, los componentes desecados son reconstituidos con agua en una solución acuosa. Además, los componentes desecados de la vacuna necesitan menos capacidad de almacenamiento que sus correspondientes soluciones o suspensiones.
De este modo, la presente invención proporciona un método para preparar una vacuna inactivada, adyuvada en emulsión w/o, en donde bajo condiciones suaves se mezcla una solución acuosa, constando de uno o más antígenos inactivados, con una emulsión w/o confeccionada. Preferentemente, la solución acuosa y la emulsión w/o son agitadas o sacudidas. La solución acuosa y la emulsión w/o pueden ser mezcladas, preferentemente agitadas o sacudidas, por medios mecánicos o a mano, más preferentemente a mano. La emulsión w/o confeccionada puede comprender, adicionalmente, uno o más antígenos.
En una forma de realización adicional, la invención proporciona un método para preparar una vacuna inactivada, adyuvada en emulsión w/o, en donde justo antes de la vacunación se mezcla una solución acuosa, constando de uno o más antígenos inactivados, con una emulsión w/o ya preparada. Preferentemente, la solución acuosa y la emulsión w/o son agitadas o sacudidas, más preferentemente sacudidas. La solución acuosa comprende, preferentemente, una combinación de antígenos inactivados. La emulsión w/o confeccionada puede comprender, adicionalmente, uno o más antígenos.
En otra forma de realización, la invención proporciona un juego de porciones que se pueden utilizar para la preparación de una vacuna inactivada adyuvada en emulsión w/o, dicho juego comprendiendo al menos una dosis de antígeno inactivado y una dosis independiente de una emulsión w/o estable. Preferentemente, dicho juego consta de dos o más dosis de antígeno inactivado, cada dosis constituyendo un antígeno inactivado diferente. En un juego según la invención, el antígeno inactivado se presenta en forma de una solución o suspensión acuosa, o en una forma liofilizada estable. Preferentemente, el antígeno se presenta en una forma liofilizada estable tal como, por ejemplo, una liosfera, polvo o comprimido, que tenga que ser disuelta en un pequeño volumen de agua antes de su uso en un método según la invención. Además, la dosis independiente de emulsión w/o puede comprender uno o más antígenos.
Un juego según la invención es apropiado para su uso en la especialidad y proporciona vacunas hechas a medida. Dependiendo de las circunstancias del ámbito de acción, una selección apropiada de vacunas inactivadas es disuelta en un pequeño volumen de agua, agitada o sacudida con una cantidad adecuada de emulsión w/o y administrada posteriormente a los sujetos. De este modo, un juego según la presente invención permite una adecuada y rápida reacción hacia un brote en el ámbito de acción.
Un juego preferido según la invención comprende antígenos IBDV inactivados y, opcionalmente, uno o más antígenos inactivados de patógenos de pollo, preferentemente NDV e IBV.
Por lo que concierne a la invención, los antígenos inactivados están definidos como material inmunogénico derivado de microorganismos infecciosos (patógenos), el cual material inmunogénico es no replicativo en comparación con antígenos vivos. Los antígenos inactivados que son apropiados para su uso en el método o juego según la invención incluyen microorganismos enteros inactivados de origen viral, bacteriano o parasitario, extractos de dichos microorganismos o subunidades purificadas de dichos microorganismos. Ejemplos de microorganismos apropiados incluyen, pero no se limitan a, el Virus de la Enfermedad de Newcastle (NDV), el Virus de la Enfermedad Bursitis Infecciosa (IBDV), el Virus de la Bronquitis Infecciosa (IBV), E. coli, AAC, virus Reo, agentes coccidiales y otros. Los microorganismos pueden ser inactivados por medios químicos o físicos, siguiendo métodos convencionales. Agentes químicos apropiados son, por ejemplo, formaldehído, glutaraldehído, \beta-propiolactona, etilenimina y derivados. Agentes físicos apropiados para inactivación de microorganismos son, por ejemplo, radiación UV, radiación \gamma, choque térmico, y radiación X. Los antígenos inactivados también pueden ser componentes aislados (recombinantes) o subunidades de extractos de un patógeno, por ejemplo, proteína purificada, proteína-polisacárido, proteína-lipopolisacáridos, lipopolisacáridos y otros.
Los antígenos inactivados según la invención pueden ser producidos por métodos convencionales conocidos en la técnica, incluyendo purificación bioquímica o tecnología de ADN recombinante, o pueden ser adquiridos de fuentes comerciales. En el caso de lo último, los antígenos inactivados son presentados a menudo como polvo liofilizado, comprimido o liosfera, y tienen que ser disueltos en un pequeño volumen de agua antes de su uso en un método según la invención.
Las emulsiones w/o que son apropiadas para su uso en un método según la invención pueden ser producidas mediante métodos conocidos en la técnica, o pueden ser adquiridas comercialmente.
El componente oleoso de la emulsión w/o estará presente en una cantidad del 40% al 90% en peso, preferentemente del 50% al 80% en peso. Especialmente preferidas son las emulsiones w/o en las que el componente oleoso está presente en una cantidad del 55% en peso.
El componente oleoso de la emulsión w/o incluye aceites minerales tales como Bayol® y Drakeol®, y aceites metabolizables. Aceites metabolizables apropiados son aceites vegetales, aceites de pescado, aceites animales, tocoferol y derivados de tocoferol, y aceites producidos sintéticamente que puedan ser metabolizados y que no sean tóxicos para el cuerpo del sujeto. Las fuentes para aceites vegetales incluyen nueces, semillas y granos. Los aceites de nuez más frecuentemente utilizados son el aceite de cacahuete, el aceite de haba de soja, el aceite de coco y el aceite de oliva. Los aceites de semillas incluyen el aceite de cártamo, el aceite de algodón, el aceite de girasol, el aceite de semillas de sésamo, y otros. El aceite de granos incluye aceite de granos de cereales tales como maíz, trigo, avena, centeno, arroz y otros. Los aceites de pescado incluyen el aceite que pueda ser fácilmente recuperado de pescado, tal como el aceite de hígado de bacalao, aceite de hígado de tiburón, y otros. Los aceites animales apropiados incluyen aceite de hígado de ballena. Los aceites sintéticos incluyen algunos aceites de cadena ramificada que son sintetizados bioquímicamente en unidades de isopreno de 5 carbonos, y que son mencionados como terpenoides. El escualeno es un terpenoide insaturado ramificado que está presente en el aceite de hígado de tiburón. El escualeno y su análogo saturado escualano son aceites preferidos y, como los otros aceites de pescado, están fácilmente disponibles de fuentes comerciales o pueden ser producidos mediante métodos conocidos en la técnica.
El componente acuoso de la emulsión w/o incluye agua, un tampón, salino, y otros.
Las emulsiones w/o se pueden preparar mediante métodos convencionales utilizando agentes emulsificantes y/o agente surfactantes emulsificantes que incluyen Span 80, Span 85, Arlacel 80, Tween 80 y otros.
El tamaño de partícula de las gotitas de la fase dispersada es menor de 20 \mum, preferentemente menor de 1 \mum, más preferentemente menor de 0'5 \mum de diámetro. Preferentemente, la emulsión w/o según la invención es una emulsión estable.
Opcionalmente, las emulsiones w/o según la invención constan de uno o más antígenos.
Las vacunas inactivadas, adyuvadas en emulsión w/o, así preparadas mediante el método según la invención se pueden utilizar para vacunar animales y al hombre frente a patógenos causantes de enfermedades. Las vacunas se pueden administrar por rutas oral o vía parenteral tales como, por ejemplo, inyección subcutánea (s.c.), inyección intramuscular (i.m.), inyección intraperitoneal (i.p.). Otras rutas de administración que son favorecidas son la aplicación vía el tracto respiratorio, por ejemplo, gotas para ojos, gotas nasales, pulverizador aerosol.
Los ejemplos siguientes son para ilustración únicamente, y no son para ser interpretados como una limitación del campo de aplicación de la invención.
Leyenda para las figuras
Figura 1: Efecto en pollos de la adición de antígeno IBV inactivado a una emulsión w/o basada en aceite mineral (Ejemplo 4).
Ejemplos Ejemplo 1 Adición de antígeno inactivado de la enfermedad de Newcastle (NDV)
Preparación de las vacunas: se cultivó antígeno NDV en huevos de pollo, se recogió e inactivó (el antígeno NDV fue concentrado 32x por ultracentrifugación) y se utilizó proporcionalmente para la preparación de las vacunas: se añadió 1 ml de NDV concentrado inactivado antes de la emulsificación del aceite mineral (las vacunas obtenidas de esta forma son mencionadas como la formulación "antígeno-dentro", representando las vacunas de técnica anterior), o se añadió 1 ml de NDV concentrado inactivado a 500 ml de una emulsión w/o de aceite mineral confeccionada, y se sacudió a mano durante un minuto antes de la administración (las vacunas obtenidas de esta forma son mencionadas como formulaciones "antígeno-fuera", representando la invención). En algunos casos, la emulsión de aceite mineral confeccionada constaba de antígeno IBV adicional. Grupos de 9 pollos SPF hembras de cuatro semanas de edad fueron inyectados intramuscularmente con 0'5 ml de la formulación de vacuna indicada. Se tomaron muestras de sangre a tiempos indicados, y se determinaron los títulos de anticuerpos en suero mediante el ensayo de la inhibición de la hemaglutinación (IHA). Como se presenta en la Tabla 1, la formulación de vacuna NDV "antígeno-fuera" mostró perfiles de anticuerpos similares a la formulación de vacuna "antígeno-dentro". Las respuestas de los anticuerpos anti-IBV de las muestras están presentadas en la Tabla 2 y no se observaron grandes diferencias, indicando que la adición de antígeno NDV no tuvo influencia en la respuesta de los anticuerpos frente al antígeno IBV.
TABLA 1
Respuesta de los anticuerpos de pollos frente a NDV inactivado después de la vacunación. Las vacunas constan de uno o más antígenos en emulsión w/o de aceite mineral (Ejemplo 1); "dentro" = antígeno IBV o (IBV + NDV inactivado) añadido antes de la emulsificación del aceite mineral; "fuera" = antígeno NDV inactivado añadido a una emulsión w/o de aceite mineral confeccionada con antígeno IBV, o emulsión w/o de aceite mineral confeccionada sin antígeno IBV; spv = semanas postvacunación; control = salino.
1
TABLA 2
Respuesta de los anticuerpos de pollos frente a IBV inactivado después de la vacunación. Las vacunas constan de uno o más antígenos en emulsión w/o de aceite mineral (Ejemplo 1); "dentro" = antígeno IBV o (IBV + NDV inactivado) añadido antes de la emulsificación del aceite mineral; "fuera" = antígeno NDV inactivado añadido a una emulsión w/o de aceite mineral confeccionada con antígenos IBV, o una emulsión w/o de aceite mineral confeccionada sin antígeno IBV; spv = semanas postvacunación; control = salino.
2
Ejemplo 2 Adición de antígeno F11
Preparación de las vacunas: se utilizó proteína F11 de pilus obtenida de E. coli para preparar las vacunas similares al procedimiento descrito antes: se añadió 1 ml de antígeno F11 concentrado antes de la emulsificación del aceite mineral (formulación "antígeno-dentro"), o se añadió 1 ml de antígeno F11 concentrado a 500 ml de emulsión y se sacudió a mano durante un minuto antes de la administración (formulación "antígeno-fuera"). En algunos casos, la emulsión de aceite mineral confeccionada constaba de antígenos IBV y NDV adicionales. Grupos de 10 pollos SPF hembras de cuatro semanas de edad fueron inyectados intramuscularmente con la formulación de vacuna indicada
(10 \mug de F11 por dosis de vacuna). Se tomaron muestras de sangre a tiempos indicados, y se determinaron los títulos de anticuerpos en suero mediante un ELISA (incubación con placas de microtitulación recubiertas con F11 y suero de pollo; incubación con conjugado de anticuerpos anti-Ig de pollo-enzima). Cuando se añadió antígeno F11 a emulsiones w/o sin antígeno, o a emulsiones w/o constando de antígenos IBV + NDV, no se observaron diferencias significativas en la respuesta de los anticuerpos frente a F11 entre los diversos grupos (Tabla 3). Además, la adición de F11 a las emulsiones constando de antígenos IBV + NDV no tuvo influencia en la respuesta de los anticuerpos frente a IBV o NDV (datos no mostrados).
TABLA 3
Respuesta de los anticuerpos de pollos frente a proteína F11 de pilus después de la vacunación. La vacuna consta de uno o más antígenos en emulsión w/o de aceite mineral (Ejemplo 2); "dentro" = antígeno F11 y/o (IBV y NDV) añadido antes de la emulsificación del aceite mineral; "fuera" = antígeno F11 añadido a emulsión w/o de aceite mineral confeccionada con antígenos IBV y NDV, o emulsión w/o de aceite mineral confeccionada sin antígenos IBV y NDV; spv = semanas postvacunación; control = salino.
3
Ejemplo 3 Adición de virus inactivado de la enfermedad de gumboro (IBDV)
Preparación de las vacunas: se prepararon diversas vacunas, utilizando lotes diferentes de antígenos IBDV inactivados (10^{7'3} TCID_{50}/ml), similares al procedimiento descrito antes: se añadió 1 ml de antígeno IBDV concentrado inactivado antes de la emulsificación del aceite mineral (formulación "antígeno-dentro"), o se añadió 1 ml de antígeno IBDV concentrado inactivado a 500 ml de emulsión w/o de aceite mineral confeccionada, y se sacudió a mano durante un minuto antes de la administración (formulación "antígeno-fuera"). Grupos de 8 pollos SPF hembras de cuatro semanas de edad fueron inyectados intramuscularmente con la formulación de vacuna indicada. Se tomaron muestras de sangre a tiempos indicados, y se determinaron los títulos de anticuerpos en suero mediante un ELISA (incubación con placas de microtitulación recubiertas con IBDV y suero de pollo; incubación con conjugado de anticuerpos anti-Ig de pollo-enzima). Cuando se añadió IBDV concentrado inactivado a las emulsiones (Tabla 4), se encontró una respuesta de los anticuerpos significativamente superior a las 3 y 6 semanas postvacunación (respuesta rápida), en grupos que recibieron emulsiones con formulación de IBDV "fuera", comparada con la respuesta de los anticuerpos en los grupos que recibieron las correspondientes emulsiones con formulación de IBDV "dentro". No se observaron grandes diferencias en las fases posteriores después de la vacunación, indicando que, en el caso de vacunación con formulaciones de IBDV "antígeno-fuera", la respuesta de los anticuerpos fue muy rápida comparada con la vacunación con otras formulaciones "antígeno-fuera" (ver los resultados de los Ejemplos 1 y 2). También se puede concluir que la respuesta observada de los anticuerpos no depende de un lote concreto de antígeno.
Ejemplo 4 Adición de virus inactivado de la bronquitis infecciosa (IBV)
Preparación de las vacunas: Se prepararon vacunas con antígenos IBV similares al procedimiento descrito antes: se añadieron 10 ó 100 ml de antígeno IBV inactivado no concentrado antes de la emulsificación del aceite mineral (formulación "antígeno-dentro"), o añadidos respectivamente a 490 ó 400 ml de emulsión w/o de aceite mineral confeccionada, y se sacudió a mano durante 1 minuto antes de la administración (formulación "antígeno-fuera"). Grupos de 9 pollos SPF hembras de cuatro semanas de edad fueron inyectados intramuscularmente con la formulación de vacuna indicada. La adición de diferentes volúmenes de antígeno IBV inactivado a una emulsión w/o de aceite mineral produjo respuestas de los anticuerpos significativamente superiores, a las 3 semanas postvacunación (pv), comparadas con las respuestas de los anticuerpos observadas después de la vacunación con las formulaciones "antígeno-dentro". A las 6 y 12 semanas postvacunación no se observaron diferencias significativas en respuesta entre los tres grupos (Figura 1).
TABLA 4
Respuesta de los anticuerpos de pollos frente a IBDV después de la vacunación. Vacunas constando de antígenos en emulsión w/o de aceite mineral; "dentro" = antígeno IBDV inactivado añadido antes de la emulsificación del aceite mineral; "fuera" = antígeno IBDV inactivado añadido a emulsión w/o de aceite mineral confeccionada sin antígenos; spv = semanas postvacunación; control = salino.
(Tabla pasa página siguiente)
4
Ejemplo 5 Almacenamiento de emulsiones w/o a las que se añadió NDV inactivado
Vacunas preparadas según el Ejemplo 1 fueron almacenadas durante 3 meses a +4ºC antes de la vacunación. Se llevó a cabo el mismo procedimiento descrito en el Ejemplo 1, y en la Tabla 5 se muestran los resultados. No se observaron diferencias significativas en la respuesta de los anticuerpos entre la vacunación con formulaciones "antígeno-fuera" y la vacunación con formulaciones "antígeno-dentro", indicando que, incluso después de almacenar emulsiones w/o a las que se añadió antígeno inactivado después de la emulsificación, se comportaron similares a aquellas emulsiones a las que se añadió el antígeno inactivado antes de la emulsificación, y que no se alteró la homogeneidad de la emulsión.
TABLA 5
Respuesta de los anticuerpos de pollos frente a NDV inactivado después de la vacunación con vacunas. Las vacunas constan de uno o más antígenos en emulsión w/o de aceite mineral y han sido almacenadas durante 3 meses a 4ºC antes de su uso en la vacunación; "dentro" = antígeno IBV o (IBV + NDV inactivado) añadido antes de la emulsificación del aceite mineral; "fuera" = antígeno NDV inactivado añadido a una emulsión w/o de aceite mineral confeccionada con antígeno IBV, o emulsión w/o de aceite mineral confeccionada sin antígeno IBV; spv = semanas postvacunación; control = salino.
5

Claims (8)

1. Un método para preparar una vacuna inactivada, adyuvada en emulsión agua en aceite (w/o), caracterizado porque se mezcla, bajo condiciones suaves, una solución acuosa constando de uno o más antígenos inactivados con una emulsión w/o confeccionada.
2. Un método según la Reivindicación 1, caracterizado porque dicha solución acuosa y dicha emulsión w/o confeccionada son mezcladas justo antes de la vacunación.
3. Un método según la Reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque dicho antígeno es Virus inactivado de la Bursitis Infecciosa (IBDV) o componentes del mismo.
4. Un método según las Reivindicaciones 1-3, caracterizado porque la emulsión w/o confeccionada consta de uno o más antígenos.
5. Un juego de porciones que se puede utilizar para la preparación de una vacuna inactivada, adyuvada en emulsión w/o, justo antes de la vacunación; dicho juego comprendiendo al menos una dosis de antígeno inactivado en forma de una solución acuosa, suspensión, o en una forma liofilizada estable, y una dosis por separado de emulsión w/o.
6. Un juego según la Reivindicación 5, caracterizado porque dicho juego consta de dos o más dosis de antígeno inactivado, cada dosis constituyendo un antígeno inactivado diferente.
7. Un juego según la Reivindicación 5 ó 6, caracterizado porque al menos uno de los antígenos inactivados es antígeno IBDV inactivado.
8. Un juego según alguna de las Reivindicaciones 5 a 7, caracterizado porque dicha emulsión w/o consta de uno o más antígenos.
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