JP2002532559A - 不活化ｗ／ｏ乳濁液アジュバント化ワクチンの産生法 - Google Patents

不活化ｗ／ｏ乳濁液アジュバント化ワクチンの産生法

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Abstract

(57)【要約】 本発明は、１つまたは複数の不活化抗原を含む水溶液を穏やかな条件下で既製のｗ／ｏ乳濁液と混合した、不活化ｗ／ｏ乳濁液アジュバント化ワクチンの調製法に関する。好ましくは、ワクチンは、ワクチン接種の直前に調製される。水溶液およびｗ／ｏ乳濁液を機械的手段または手で撹拌または震盪する。本発明はまた、本発明の方法に使用されるパーツのキットに関する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 本発明は、不活化ワクチンおよび前記ワクチンの産生法に関する。
【０００２】 ワクチンは、動物およびヒトの感染症の予防および治療に広く一般に使用され
ている。使用されるワクチンは、主に２つのカテゴリー（生ワクチンおよび不活
化ワクチン）に分類することができる。生ワクチンは、生きた病原体の天然に存
在する穏やかな株または弱毒化株を利用する。不活化ワクチンは、不活化微生物
または前記微生物の特異的成分（サブユニット）からなる抗原を含む。後者の場
合、以下の２種の不活化ワクチンに区別される：生化学的精製によって得られて
いる成分であるサブユニットワクチンまたは微生物の単離組成物が組換え技術に
よって調製されている組換えワクチン。
【０００３】 不活化ワクチンは、病原体に対するこの免疫化法は感染の危険性はないという
点で、生ワクチンよりも有利である。不活化ワクチンの使用に際して認識されて
いる一般的な問題は、防御に十分な免疫応答の惹起能力である。したがって、不
活化ワクチンは、しばしばアジュバント（すなわち、ワクチン接種した被験体の
一般的または特異的免疫応答を亢進することができる化合物または組成物）と組
み合わされる。不活化微生物またはその成分およびアジュバントの投与により、
強力で、効果的で、一般的な防御免疫応答が得られる。最も一般的に使用される
アジュバントの１つは、油中水滴型（ｗ／ｏ）乳濁液である。ｗ／ｏ乳濁液によ
り、以下の二相系のワクチンが得られる：抗原が溶解または懸濁することができ
る水相および水相が小滴として分散される油相。
【０００４】 アジュバントとしてｗ／ｏ乳濁液を利用する不活化ワクチンは、通常、不活化
抗原、適切な油、および乳化剤を含む水溶液を抗原が水相に均一に分散してｗ／
ｏ乳濁液が得られるまで乳化することによって調製される。これらの不活化ｗ／
ｏ乳濁液アジュバント化ワクチンの産生は、相当な時間およびコストを必要とす
るが、一般に、抗原の完全な乳化のみによりｗ／ｏ乳濁液中で抗原が均一に分散
されることが必要である。これは、一般に免疫応答を有効に刺激するために必要
であると考えられている。しかし、乳化処理は、高温および／または強力な剪断
力を含む激しい処理条件下で行われる非常にエネルギーの高い処理である。いく
つかの抗原では、これらの激しい乳化処理により抗原の構造または高次構造が変
化し、それにより得られたワクチンの効力が減少し得る。乳化形態での保存は、
抗原が溶解または懸濁状態で存在するので抗原の安定性が減少し得る。さらに、
保存中、乳濁液中に存在する化学成分により抗原の安定性が減少し得る。例えば
、エンベロープに包まれたウイルスの場合のように、乳化剤との長期接触により
ウイルスエンベロープが破壊されてワクチンの効力が減少する。
【０００５】 驚いたことに、本発明で不活化ｗ／ｏ乳濁液アジュバント化ワクチンを不活化
抗原と既製のｗ／ｏ乳濁液を含む水溶液の穏やかな条件下での簡単な混合によっ
て調製することができることが見出された。したがって、得られたワクチンは均
一な組成物であり、不活化抗原を含む水溶液は概して乳化処理に供されていなか
ったという事実にもかかわらず、長期間均一なままであることが見出された。
【０００６】 既に示されているように、乳濁液は、水相、乳化剤（界面活性剤）、および非
水相（好ましくは油相）を激しい処理条件下で混合する非常にエネルギーの高い
処理である。しかし、本発明の混合処理は、乳化処理の処理条件と比較して非常
に穏やかな処理条件下（この穏やかな条件には低いか全く無い剪断力および周囲
温度が含まれる）で行われる。好ましくは、本発明の混合処理を、周囲温度で手
で行う。
【０００７】 本発明の抗原水溶液および既製のｗ／ｏ乳濁液の混合を、少しの震盪、撹拌、
または乳化に必要なさらなる処理を含まない２つの構成要素を組み合わせる任意
の他の方法によって行うことができる。乳化に必要な時間と比較して、本発明の
混合は短時間で行うことができる。好ましくは、混合を数秒または数分で行う。
さらに驚いたことに、水溶液および既に調製されているｗ／ｏ乳濁液の手による
わずかな震盪は、標準的な乳化処理によって調製した不活化ワクチンと類似の効
力を有する安定で均一な不活化ワクチン組成物を得るのに十分であることが見出
された。
【０００８】 本発明の水溶液は、１つまたは複数の不活化抗原を含む。２つまたはそれ以上
の異なる不活化抗原を含む水溶液を本発明の方法で使用して、多価不活化ワクチ
ン乳濁液を得ることができる。
【０００９】 本発明の調製法は、標準的な調製法よりいくつかの利点（実行が容易、短時間
、およびより経済的な処理である）がある。本発明の方法の重要な利点は、不活
化抗原が乳化処理中に生じる破壊的剪断力および／または高温に曝されずに抗原
の化学構造がより良好に保存されるという事実である。
【００１０】 本発明の方法の特定の実施形態では、ｗ／ｏ乳濁液アジュバント化ワクチンを
、ワクチン接種前に現場で調製する。本方法により、獣医は現場の環境に対応し
てより柔軟で適切な対応を行える。必要時に、不活化抗原を水溶液に懸濁し、適
切な量の安定で既製のｗ／ｏ乳濁液を手で混合して対象動物に投与することがで
きる。したがって、本発明の方法は、使用直前の不活化ワクチン乳濁液の迅速で
有効な調製を提供する。
【００１１】 本発明の方法のさらなる利点は、この方法では、通常適合しない不活化抗原と
共にワクチン接種前に混合して、多価不活化ワクチン乳濁液を得ることができる
という点にある。不適合な不活化抗原をワクチン接種直前に混合するので、抗原
はほんの短期間乳濁液中に存在し、その間抗原が互いに悪影響を及ぼし得ない。
【００１２】 本発明の別の利点は、不活化抗原を、保存中の成分の変質を防ぐために乾燥形
態、好ましくは凍結乾燥形態で個別に保存することができるという点にある。不
活化抗原の安定性は、溶液または懸濁液中では乾燥形態よりもはるかに速く減少
する。ワクチン接種直前に、乾燥成分を、水中で再構成して水溶液にする。乾燥
ワクチン成分は、さらに、対応する溶液または懸濁液よりも少量の保存容量しか
必要としない。
【００１３】 したがって、本発明は、１つまたは複数の不活化抗原を含む水溶液を穏やかな
条件下で既製のｗ／ｏ乳濁液と混合する、不活化ｗ／ｏ乳濁液アジュバント化ワ
クチンの調製法を提供する。好ましくは、水溶液およびｗ／ｏ乳濁液を撹拌また
は震盪する。水溶液およびｗ／ｏ乳濁液を、好ましくは機械的手段または手、よ
り好ましくは手で、混合、好ましくは撹拌または震盪することができる。既製の
ｗ／ｏ乳濁液は、１つまたは複数のさらなる抗原を含むことができる。
【００１４】 さらなる実施形態では、本発明は、１つまたは複数の不活化抗原を含む水溶液
を既に調製されたｗ／ｏ乳濁液とワクチン接種直前に混合する、不活化ｗ／ｏ乳
濁液アジュバント化ワクチンの調製法を提供する。好ましくは、水溶液およびｗ
／ｏ乳濁液を撹拌または震盪、より好ましくは震盪する。水溶液は、不活化抗原
の組み合わせを含むことが好ましい。既製のｗ／ｏ乳濁液は、１つまたは複数の
抗原をさらに含むことができる。
【００１５】 別の実施形態では、本発明は、不活化ｗ／ｏ乳濁液アジュバント化ワクチンの
調製に有用であり得るパーツのキットであって、前記キットが少なくとも１投薬
量の不活化抗原および別の投薬量の安定なｗ／ｏ乳濁液を含む、キットを提供す
る。好ましくは、このキットは２またはそれ以上の投薬量の不活化抗原を含み、
各投薬量は異なる不活化抗原から構成される。本発明のキットにおける不活化抗
原は、水溶液または懸濁液の形態または安定な凍結乾燥形態で存在する。好まし
くは、抗原は、安定な凍結乾燥形態（例えば、本発明の方法での使用前に少量の
水で溶解される溶媒圏、粉末、または錠剤）で存在する。さらに、ｗ／ｏ乳濁液
の個別の投薬量は、１つまたは複数の抗原を含む。
【００１６】 本発明のキットは、現場での使用に有用であり、特製のワクチンが得られる。
現場の状況に依存して、適切に選択した不活化ワクチンを少量の水に溶解させて
適量のｗ／ｏ乳濁液と撹拌または震盪して、被験体に投与する。したがって、本
発明のキットは、現場で適切且つ迅速に対応することができる。
【００１７】 本発明の好ましいキットは、不活化ＩＢＤＶ抗原および任意選択的に１つまた
は複数のニワトリ病原体の不活化抗原（好ましくは、ＮＤＶおよびＩＢＶ）を含
む。
【００１８】 本発明の目的では、不活化抗原を、生きた抗原とは異なる感染性微生物（病原
体）由来の非複製性の免疫原性物質と定義する。本発明の方法またはキットでの
使用に適切な不活化抗原には、ウイルス、細菌、または寄生虫起源の不活化全微
生物、前記微生物の抽出物、または前記微生物の精製サブユニットが含まれる。
適切な微生物の例には、ニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）、伝染性ファルビ
キウス病ウイルス（ＩＢＤＶ）、伝染性気管支炎ウイルス（ＩＢＶ）、大腸菌、
ＣＡＡ、Ｒｅｏウイルス、球虫類亜綱の作用因子などが含まれるが、これらに限
定されない。微生物を、従来の方法による化学的または物理的手段によって不活
化することができる。適切な化学薬品は、例えば、ホルムアルデヒド、グルタル
アルデヒド、β−プロピオラクトン、エチレンイミン、およびその誘導体である
。微生物の不活化に適切な物理的作用因子は、例えば、ＵＶ照射、γ線照射、「
熱ショック」、およびＸ腺照射である。不活化抗原はまた、病原体の単離（組換
え）成分またはサブユニットまたは抽出物（例えば、精製タンパク質、タンパク
質−多糖類、タンパク質−リポ多糖類、リポ多糖類など）であり得る。
【００１９】 本発明の不活化抗原を、生化学的精製または組換えＤＮＡ技術を含む当該分野
で公知の従来法によって産生させるか、市販品を購入することができる。後者の
場合、不活化抗原は、しばしは、凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ−ｆｒｉｅｄ ｏｒ
ｌｙｏｐｈｉｌｉｓｅｄ）粉末、錠剤、または溶媒圏として存在し、本発明の方
法での使用前に少量の水で溶解しなければならない。
【００２０】 本発明の方法での使用に適切なｗ／ｏ乳濁液を、当該分野で公知の方法によっ
て作製するか市販品を購入することができる。
【００２１】 ｗ／ｏ乳濁液の油成分は、４０〜９０重量％、好ましくは５０〜８０重量％の
量で存在する。油成分が５５重量％の量で存在するｗ／ｏ乳濁液が特に好ましい
。
【００２２】 ｗ／ｏ乳濁液の油成分には、鉱物油（Ｂａｙｏｌ（商品名）およびＤｒａｋｅ
ｏｌ（商品名）など）および代謝可能な油が含まれる。適切な代謝可能な油は、
植物油、魚油、動物油、トコフェロールおよびトコフェロール誘導体、ならびに
代謝可能で且つ被験体の身体に毒性のない合成油である。植物油の供給源には、
堅果、種、および穀物が含まれる。最も一般的に利用可能な堅果油は、ピーナッ
ツ油、ダイズ油、ココナッツ油、およびオリーブ油などが含まれる。種子油には
ベニバナ油、綿実油、ヒマワリ油、ゴマ油などが含まれる。穀物油には、穀物（
トウモロコシ、小麦、カラスムギ、ライ麦、コメなど）由来の油が含まれる。魚
油には、魚類から容易に回収することができる油（タラ肝油、サメ肝油など）が
含まれる。適切な動物油には、クジラ肝油が含まれる。合成油には、Ｃ５イソプ
レン単位から生化学的に合成され、テルペノイドと呼ばれる多数の分岐鎖油が含
まれる。スクアレンは、サメ肝油中に存在する分岐不飽和テルペノイドである。
スクアレンおよびその飽和アナログであるスクアランは共に好ましい油であり、
他の魚油は市販品を容易に利用することができるか当該分野で公知の方法によっ
て作製することができる。
【００２３】 ｗ／ｏ乳濁液の水性成分には、水、緩衝液、生理食塩水などが含まれる。
【００２４】 ｗ／ｏ乳濁液を、乳化剤および／または乳化界面活性剤（Ｓｐａｎ ８０、Ｓ
ｐａｎ ８５、Ａｒｌａｃｅｌ ８０、Ｔｗｅｅｎ ８０などが含まれる）を用
いた従来の方法によって調製することができる。
【００２５】 分散相の液滴の粒子サイズは、２０μｍ未満、好ましくは１μｍ未満、より好
ましくは０．５μｍ未満の直径である。好ましくは、本発明のｗ／ｏ乳濁液は安
定な乳濁液である。
【００２６】 任意選択的に、本発明のｗ／ｏ乳濁液は、１つまたは複数の抗原を含む。
【００２７】 したがって、本発明の方法によって調製した不活化ｗ／ｏ乳濁液アジュバント
化ワクチンを使用して、病原体に起因する疾患に対して動物およびヒトにワクチ
ン接種することができる。ワクチンを、経口または非経口経路（例えば、皮下（
ｓｃ．）注射、筋肉内（ｉｍ）注射、腹腔内（ｉｐ）注射など）で投与すること
ができる。好ましい他の投与経路は、気道を介した適用（例えば、目薬、点鼻薬
、エアゾールスプレー）である。
【００２８】 以下の実施例は、例示のみを目的とし、本発明の範囲を限定すると解釈されな
い。
【００２９】 図面の簡単な説明 図１は、ニワトリにおける鉱物油に基づいたｗ／ｏ乳濁液に対する不活化ＩＢ
Ｖ抗原の添加の効果に関する図である。
【００３０】 実施例 実施例１：不活化ニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）抗原の添加 ワクチンの調製：ＮＤＶ抗原をニワトリの卵中で増殖、回収し、および不活化
し（ＮＤＶ抗原を限外濾過にて３２倍に濃縮した）、ワクチン調製に比例的に使
用した。１ｍｌの濃縮不活化ＮＤＶを鉱物油の乳化前に添加するか（先行技術の
ワクチンを示すこの方法で得たワクチンを「抗原インサイド（ａｎｔｉｇｅｎ−
ｉｎｓｉｄｅ）」処方物と呼ぶ）、投与前に１ｍｌの濃縮不活化ＮＤＶを５００
ｍｌの既製の鉱物油ｗ／ｏ乳濁液に添加して手で１分間震盪した（本発明のワク
チンを示すこの方法で得たワクチンを「抗原アウトサイド（ａｎｔｉｇｅｎ−ｏ
ｕｔｓｉｄｅ）」処方物と呼ぶ）。いくつかの場合、既製の鉱物油乳濁液は、さ
らなるＩＢＶ抗原を含んでいた。９匹の４週齢の雌ＳＰＦニワトリ群に、０．５
ｍｌの表示のワクチン処方物を筋肉内注射した。血液サンプルを表示の時間で採
血し、血清中の抗体力価を血球凝集抑制テスト（ＨＩ）によって同定した。表１
に示すように、ＮＤＶ「抗原アウトサイド」ワクチン処方物は、「抗原インサイ
ド」ワクチン処方物と類似の抗体プロフィールを示した。サンプルの抗ＩＢＶ抗
体応答を表２に示したが、大きな差異は認められず、これは、ＮＤＶ抗原の添加
はＩＢＶ抗原に対する抗体応答に影響を与えないことを示す。
【００３１】
【表１】
【００３２】
【表２】
【００３３】 実施例２：Ｆ１１抗原の添加 ワクチンの調製：大腸菌由来のＦ１１線毛タンパク質を使用して上記と類似の
手順でワクチンを調製した。１ｍｌの濃縮Ｆ１１抗原を鉱物油の乳化前に添加す
るか（「抗原インサイド」処方物）、投与前に１ｍｌの濃縮Ｆ１１抗原を５００
ｍｌの乳濁液に添加して手で１分間震盪した（「抗原アウトサイド」処方物）。
いくつかの場合、既製の鉱物油乳濁液は、さらなるＩＢＶおよびＮＤＶ抗原を含
んでいた。１０匹の４週齢の雌ＳＰＦニワトリ群に、表示のワクチン処方物を筋
肉内注射した（１０μｇのＦ１１ワクチン量）。血液サンプルを表示の時間で採
血し、血清中の抗体力価をＥｌｉｓａ（Ｆ１１被覆マイクロタイタープレートと
ニワトリ血清とのインキュベーション、抗ニワトリＩｇ抗体−酵素結合物とのイ
ンキュベーション）によって同定した。Ｆ１１抗原を、抗原を含まないｗ／ｏ乳
濁液またはＩＢＶ＋ＮＤＶ抗原を含むｗ／ｏ乳濁液に添加した場合、種々の群の
間にＦ１１に対する抗体応答の有意差は認められなかった（表３）。さらに、Ｉ
ＢＶおよびＮＤＶ抗原を含む乳濁液へのＦ１１の添加は、ＩＢＶまたはＮＤＶの
いずれに対しても抗体応答に影響を与えなかった（データ示さず）。
【００３４】
【表３】
【００３５】 実施例３：不活化ガンボロ病ウイルス（ＩＢＤＶ）の添加 ワクチンの調製：種々のワクチンを、上記と類似の手順で異なるロットの不活
化ＩＢＤＶ抗原（１０７．３ＴＣＩＤ５０／ｍｌ）を用いて調製した。１ｍｌの
濃縮不活化ＩＢＤＶを鉱物油の乳化前に添加するか（「抗原インサイド」処方物
）、投与前に１ｍｌの濃縮不活化ＩＢＤＶを５００ｍｌの既製の鉱物油ｗ／ｏ乳
濁液に添加して手で１分間震盪した（「抗原アウトサイド」処方物）。８匹の４
週齢の雌ＳＰＦニワトリ群に、表示のワクチン処方物を筋肉内注射した。血液サ
ンプルを表示の時間で採血し、血清中の抗体力価をＥｌｉｓａ（ＩＢＤＶ被覆マ
イクロタイタープレートとニワトリ血清とのインキュベーション、抗ニワトリＩ
ｇ抗体−酵素結合物とのインキュベーション）によって同定した。濃縮不活化Ｉ
ＢＤＶを乳濁液に添加した場合（表４）、ワクチン接種から３週間後および６週
間後（急速な応答）にＩＢＤＶ「アウトサイド」処方物を含む乳濁液を投与した
群は対応するＩＢＤＶ「インサイド」処方物を含む乳濁液を投与した群より有意
に高い抗体応答が認められた。ワクチン接種後のより遅い段階では、大きな差異
は認められず、これは、ＩＢＤＶ「抗原アウトサイド」処方物でのワクチン接種
の場合、他の「抗原アウトサイド」処方物でのワクチン接種と比較して抗体応答
が非常に急速であることを示す（実施例１と実施例２の結果を参照のこと）。認
められた抗体応答は特定の抗原ロットに依存しないと結論付けることもできる。
【００３６】 実施例４：不活化伝染性気管支炎ウイルス（ＩＢＶ）の添加 ワクチンの調製：上記と類似の手順で、不活化ＩＢＶ抗原を用いてワクチンを
調製した。１０ｍｌまたは１００ｍｌの非濃縮不活化ＩＢＶ抗原を鉱物油の乳化
前に添加するか（「抗原インサイド」処方物）、投与前にそれぞれ４９０ｍｌま
たは４００ｍｌの既製の鉱物油ｗ／ｏ乳濁液に添加して手で１分間震盪した（「
抗原アウトサイド」処方物）。９匹の４週齢の雌ＳＰＦニワトリ群に、表示のワ
クチン処方物を筋肉内注射した。鉱物油ｗ／ｏ乳濁液への異なる体積の不活化Ｉ
ＢＶ抗原の添加により、「抗原インサイド」処方物でのワクチン接種に認められ
た抗体応答と比較してワクチン接種後（ｐｖ）から３週間後で有意に高い抗体応
答が認められた。ワクチン接種後から６週間および１２週間では、３つの群の間
での応答の有意差は認められなかった（図１）。
【００３７】
【表４】
【００３８】 実施例５：不活化ＮＤＶを添加したｗ／ｏ乳濁液の保存 実施例１にしたがって調製したワクチンを、ワクチン接種前に＋４℃で３ヶ月
保存した。実施例１に記載の手順と同一の手順を行い、結果を表５に示す。「抗
原インサイド」処方物でのワクチン接種と「抗原アウトサイド」処方物でのワク
チン接種との間に抗体応答の有意差は認められず、これは、保存後でさえ、不活
化抗原を乳化後に添加したｗ／ｏ乳濁液は不活化抗原を乳化前に添加したｗ／ｏ
乳濁液と類似の挙動をし、乳濁液の均一性は変化しなかったことを示す。
【００３９】
【表５】
【図面の簡単な説明】
【図１】 ニワトリにおける鉱物油に基づいたｗ／ｏ乳濁液に対する不活化ＩＢＶ抗原
の添加の効果に関する試験結果を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＵ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ， ＣＡ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＥＥ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＤ，Ｉ Ｌ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ， ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＲ，Ｔ Ｔ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ Ｆターム(参考） 4C085 AA03 BA51 BA59 CC04 DD41 DD86 FF03

Claims (8)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 １つまたは複数の不活化抗原を含む水溶液を穏やかな条件下
    で、既製のｗ／ｏ乳濁液と混合することを特徴とする、不活化ｗ／ｏ乳濁液アジ
    ュバント化ワクチンの調製法。
  2. 【請求項２】 前記水溶液および前記既製のｗ／ｏ乳濁液をワクチン接種の
    直前に混合することを特徴とする、請求項１に記載の方法。
  3. 【請求項３】 前記抗原が、不活化ＩＢＤＶまたはその成分であることを特
    徴とする、請求項１または請求項２に記載の方法。
  4. 【請求項４】 前記既製のｗ／ｏ乳濁液が１つまたは複数の抗原を含むこと
    を特徴とする、請求項１〜請求項３のいずれか１項に記載の方法。
  5. 【請求項５】 ワクチン接種直前の不活化、ｗ／ｏ乳濁液アジュバント化ワ
    クチンの調製に有用であり得るパーツのキットであって、前記キットが少なくと
    も１投薬量の不活化抗原および別の投薬量のｗ／ｏ乳濁液を含む、キット。
  6. 【請求項６】 前記キットが、２つまたはそれ以上の投薬量の不活化抗原を
    含み、各投薬量が異なる不活化抗原からなることを特徴とする、請求項５に記載
    のキット。
  7. 【請求項７】 少なくとも１つの前記不活化抗原が、不活化ＩＢＤＶ抗原で
    あることを特徴とする、請求項５または請求項６に記載のキット。
  8. 【請求項８】 前記ｗ／ｏ乳濁液が、１つまたは複数の抗原を含む、請求項
    ５〜請求項７のいずれか１項に記載のキット。
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