ES2201136T3 - Preparaciones terapeuticas de quasinoides con actividad antineoplasica, antiviral y herbistatica. - Google Patents
Preparaciones terapeuticas de quasinoides con actividad antineoplasica, antiviral y herbistatica.Info
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Abstract
LA PRESENTE INVENCION INCLUYE CUASINOIDES PURIFICADOS Y AISLADOS Y ANALOGOS DE CUASINOIDE DERIVADOS SINTETICAMENTE BASADOS EN UNA ESTRUCTURA DE CARBONO DE PICRASANO. SE TRATAN NUEVAS CADENAS LATERALES PARA C-15 EN AGENTES DE SOLUBILIZACION DE AGUA COMO LA GLICINA. SE MUESTRAN METODOS TERAPEUTICOS QUE EXTRAEN VENTAJOSAS PROPIEDADES ANTICANCERIGENAS, ANTIVIRALES Y HERBISTATICAS DE ESTOS CUASINOIDES, INCLUYENDO EL USO CONTRA TUMORES SOLIDOS Y CELULAS INFECTADAS POR EL VIRUS DE LA INMUNODEFICIENCIA HUMANA.
Description
Preparaciones terapéuticas de quasionoides con
actividad antineoplásica, antiviral y herbistatica.
La familia botánica Simaroubaceae incluye
numerosas especies distribuidas primariamente en regiones
pantropicales. Estas plantas han sido la fuente de una gran familia
de compuestos terpénicos amargos colectivamente denominados
quasinoides. Como muchos alcaloides de plantas o extractos de
plantas aislados naturalmente, se ha descubierto que los quasinoides
tienen una actividad biológica diversa que incluye actividad
antimalárica, insecticida, amebicida, antileucémica, y
antivírica.
La gran mayoría de los quasinoides son lactonas
altamente oxigenadas que incluyen el siguiente esqueleto de 20
carbonos,
convencionalmente denominado picrasano, aunque
los esqueletos de dieciocho, diecinueve, y veinticinco carbonos son
también conocidos. Se conocen muchas variantes de las estructuras de
anillo y de las cadenas laterales, particularmente en el
C-15 (Véase por ejemplo Polonsky, ``Quassinoid
Bitter Principles 11'', Fortschr. Chem. Org Naturst, Progress in the
Chemistry of Organic Natural Products, 1985, 47, 221). La presente
invención incluye ambos análogos de quasinoides tantos nuevos como
derivados sintéticamente, así como nuevos usos para tales
quasinoides sintéticos y quasinoides naturales previamente
identificados y aislados. En un aspecto de la presente invención se
describe un compuesto caracterizado por la
fórmula:
en la que R_{1} representa hidrógeno, alquilo,
alquenilo, e Y se representa mediante la
fórmula
(Fórmula III)---
\
\melm{\delm{\para}{R _{4} }}{C}{\uelm{\para}{R _{2} }}---R_{3}
en la que la cadena lateral Y de la fórmula III
anterior se puede modificar para llevar estructuras de anillo tales
como arilos o cicloalcanos. R_{2} y R_{3} tomados conjuntamente
forman un anillo de carbono de tres a ocho miembros
(C_{3}-C_{8}), y R_{4} tomada separadamente
representa hidrógeno, alquilo, hidroxialquilo, carboxilo, arilo,
alquenilo, cicloalcanos, cicloalquenos, glicina, glicosacáridos, un
aminoácido, peptido, polipéptido, proteína, y cualquiera de los
anteriores unidos al carbono central por un enlace éter, éster,
carbonilo, o glicosídico. Más específicamente, R_{2} y R_{3} se
pueden ser tomar conjuntamente para formar un cicloalcano de tres
miembros, siendo R_{4} un grupo
hidroximetilo.
En otras realizaciones más la cadena lateral Y se
puede representar como
(Fórmula IV)---C---
\
\melm{\delm{\para}{R _{7} }}{C}{\uelm{\para}{R _{5} }}---R_{6}
en la que R_{5} y R_{6} tomados conjuntamente
forman un anillo de carbono de tres a ocho miembros
(C_{3}-C_{8}), y R_{7} comprende además
hidrógeno, alquilo, hidroxialquilo, carboxilo, arilo, alquenilo,
cicloalcanos, cicloalquenos, glicina, glicosacáridos, aminoácidos,
un péptido, polipéptidos proteína, y cualquiera de los anteriores
unidos al carbono terminal de R_{7} por un enlace éter, éster, o
glicosídico están dentro del alcance de la presente invención. Más
aún, aquellas realizaciones en la que R_{5} y R_{6} tomados
conjuntamente forman un cicloalcano de cuatro miembros, y R_{7}
es un grupo hidroxilo; en la que R_{5} y R_{6} tomados
conjuntamente forman un cicloalcano de cinco miembros, y R_{7} es
un grupo hidroxilo; en la que R_{5} y R_{6} tomados
conjuntamente forman un cicloalcano de seis miembros, y R_{7} es
un grupo hidroxilo; en la que R_{5} y R_{6} tomados
conjuntamente forman un cicloalcano de siete miembros, y R_{7} es
un grupo hidroxilo; en la que R_{5} y R_{6} tomados
conjuntamente forman un cicloalcano de cuatro miembros, y R_{7}
comprende un grupo que tiene la
fórmula:
se consideran que están dentro del alcance de
esta
invención.
Otras realizaciones más de la presente invención
también incluyen el compuesto de la fórmula IV anterior en la que
R_{5} y R_{6} tomados conjuntamente comprenden un grupo de
carbono de doble enlace, y junto con R_{7} forman un cicloalqueno
de cinco miembros. Alternativamente la cadena lateral Y del
compuesto representado por la fórmula II puede ser representada
como
en la que R_{8} y R_{9} tomados separadamente
o juntos representan cicloalcanos o
cicloalquenos.
Otro aspecto de la presente invención es el uso
de los quasinoides descritos anteriormente sintéticamente derivados,
o quasinoides identificados, purificados y aislados previamentes,
para el tratamiento, junto con los vehículos farmacéuticos
adecuados, de trastornos neoplásicos tales como los tumores
sólidos.
Como se apreciará por los expertos en la técnica,
el vehículo farmacético particular puede ser una solución salina que
incorpora los estabilizantes, tampones, agentes antimicrobianos,
agentes fungicidas adecuados, u otras tales adiciones según se
requiera para su almacenamiento y liberación. Además, la presente
invención contempla el almacenamiento liofilizado, con activación
tras la mezcla, o por cualquier otra técnica de almacenamiento
conocida y utilizada por los expertos en la técnica farmacéutica.
Esta indicado su uso o el uso de conjugados de otros miembros de las
series de quasinoides como fármacos anticancerósos de amplio
espectro.
Las posibilidades para la conjugación son
amplias. Los principales requisitos son que los materiales de
conjugación aporten impermeabilidad al quasinoide y no interfieran
con su capacidad de inhibir el crecimiento a través de la
superficie celular. Adicionalmente, sería de esperar que los
materiales que tienen una utilidad terapéutica sean beneficiosos por
ser ni tóxicos ni inmunógenos y deben dar como resultado conjugados
que sean solubles en agua y/o fáciles de administrar. Las especies
activas de alto rendimiento y eficacia a bajo coste constituirían
propiedades deseables adicionales.
Los ejemplos de materiales de conjugación
adecuados incluyen el polietilenglicol, dextrano, dextrinas,
carboximetilcelulosa, polímeros de bloque de polioxietileno/
polioxipropileno (polioxiamina), poliglutamina y otras poliaminas,
copolímeros de
N-(2-hidroxipropil)metacrilamida, y otros
polímeros funcionalizados adecuadamente para permitir una formación
del conjugado fácil y funcional. El grado de polimerización del
polímero en el conjugado polímero- fármaco puede variar de N = 1 a N
= 1000 o más, siempre que el conjugado final sea impermeabilizante,
efectivo y capaz de alcanzar el sitio diana para liberar los
niveles terapéuticos del fármaco. La unión puede ser no hidrolizable
o hidrolizable y puede contener espaciadores de uno o más átomos
optimizados para aumentar la eficacia.
Con los compuestos de la presente invención se
pueden conjugar agentes dirigidos a un objetivo tales como los
anticuerpos monoclonales, compuestos químicos captados
diferencialmente por las células cancerígenas o viralmente
infectadas, o agentes conocidos que se dirigen al tejido cancerígeno
o viralmente infectado (por ejemplo, el tejido hepático es un
objetivo para los derivados del acetaminofeno o glicosacáridos) para
ayudar a la liberación efectiva en el lugar deseado del organismo
del agente anticanceroso o antiviral. Como apreciarán los expertos
en la técnica, se prefiere la liberación intravenosa, aunque la
liberación tópica, oral, o subcutánea puede ser también adecuada en
situaciones específicas.
Para preparar los conjugados que imparten la
especificidad de objetivo, se pueden combinar los quasinoides de
forma variada con, por ejemplo, proteínas, anticuerpos, ácidos
nucleicos, o incluso lípidos o sustancias derivadas de polímeros y
diversas macromoléculas que se presenta naturalmente tales como las
inmunoglobulinas, las hormona de crecimiento, insulina,
interferones, albúmina plasmática, fibrinógeno, activador del
plasminógeno, heparina, sulfato de condroitina, inhibidor de
tripsina de soja, L-asparaginasa, ribonucleasa, etc,
que funcionarían como receptores locales o dirigidos a un tipo
específico de célula (por ejemplo, células cancerosas) o a una
localización (por ejemplo, la médula osea).
Los objetos, aspectos, y ventajas adicionales de
los compuestos similares a los compuestos inventivos y conocidos de
la técnica anterior serán evidentes al considerar la descripción
detallada y los dibujos que se anexos siguientes. Los ejemplos
comprenden la síntesis y posteriores investigaciones que conciernen
a las propiedades de los compuestos quasinoides conocidos a partir
de la técnica anterior, por ejemplo, P. Grieco et al, J. Am.
Chem. Soc., 1993, 115 (14), 6078-93.
La figura 1 ilustra la estructura química de la
peninsularinona;
la figura 2 ilustra la estructura química de la
glaucarubolona, purificada y aislada de fuentes naturales;
la figura 3 ilustra la estructura física derivada
de ORTEP de la peninsularinona según lo visto en la figura 1;
la figura 4 es una gráfica que compara el
logaritmo de la concentración de glaucarubolona frente al incremento
después de 48 horas del número de células infectadas por el virus de
inmunodeficiencia felina (VIF) y de células testigo no
infectadas;
la figura 5 es una gráfica que compara el
logaritmo de la concentración de glaucarubolona frente al incremento
después de 72 horas del número de células infectadas por el virus de
inmunodeficiencia felina (VIF) y de células testigos no
infectadas;
la figura 6 es una gráfica que compara la
concentración de células frente al tiempo, para células Crandall de
riñón felino infectadas con virus de inmunodeficicencia felina (VIF)
y células testigo en contacto con un conjugado de
glaucarubolona-brefeldin A;
la figura 7 es una gráfica que compara la
concentración de células frente al tiempo, para células Crandall de
riñón felino infectadas con virus de inmunodeficicencia felina (VIF)
y de células testigo en contacto con glaucarubolona;
la figura 8 es una gráfica que compara el
logaritmo de la concentración de glaucarubolona frente al incremento
del número de células infectadas por el virus de la
inmunodeficiencia humana (VIH) y de células testigo no
infectadas;
la figura 9 es una gráfica que compara el
logaritmo de la concentración de un conjugado de
glaucarubolona-brefeldin A frente al incremento del
número de células infectadas por el virus de la inmunodeficiencia
humana (VIH) y de células testigo no infectadas;
la figura 10 es una gráfica que muestra la
inhibición por glaucarubolona de la oxidación del NADH en membranas
plasmáticas aisladas tanto de células HeLa como de células
hepáticas;
la figura 11 indica la inhibición de la oxidación
del NADH en células de planta de soja tratadas con
glaucarubolona;
la figura 12 es una gráfica que muestra el efecto
del equilibrio redox en la inhibición por glaucarubolona de la
oxidación del NADH en membranas plasmáticas de células HeLa; y
la figura 13 es una gráfica que muestra la
inhibición de la actividad NADH oxidasa de membranas plasmáticas de
células HeLa por un conjugado del fármaco
glaucarubolona-amino polietilenglicol.
En los siguientes ejemplos se describe el
aislamiento, purificación, síntesis, y la utilidad de los
quasinoides. Como apreciarán los expertos en la técnica, el
aislamiento de nuevos quasinoides, sujetos de la presente invención,
es posible no sólo de las raíces de Castela peninsularis,
sino de otras especies de Castela, subespecies, o
variedades, y de miembros relacionados de la familia Simaroubaceae.
La purificación y separación de los nuevos quasinoides se puede
hacer a partir del uso de extractos de disolventes tales como
metanol, etanol, disolventes aromáticos, u otros agente extractores
adecuados. La síntesis abarca todo, desde adiciones de cadena
lateral menor o sustracciones en el esqueleto carbonado del
picrasano, hasta síntesis completas según lo descrito in Grieco
et al., ``Synthetic studies on Quassinoids: Total Synthesis
of (-)-Chaparrinone,
H-Glaucarubolone, and (+) Glaucarubinone'', J.
Am. Chem. Soc., 1993, 115, 6078-6093, cuya
descripción se incorpora en la presente memoria como referencia.
Como será evidente a partir de esta descripción, se han aislado de
la naturaleza o sintetizado, numerosos compuestos dentro del alcance
de la presente invención y que tienen modificaciones en la cadena
lateral en la posición de C_{15}.
La utilidad terapéutica de los compuestos de la
presente invención primariamente recae en la evidencia derivada de
los estudios en cultivos celulares y de los experimentos en
animales vivos. La actividad frente a los cánceres de tumores
sólidos y células infectadas viralmente, la actividad citotóxica
diferencial basada en la inhibición de la NADH oxidasa, y la
actividad herbicida y herbistática se detalla en los siguientes
ejemplos. No obstante, como apreciarán los expertos en la técnica,
puede también existir un alcance más amplio de la actividad
terapéutica para ciertos compuestos.
El aislamiento y caracterización del quasinoide
(-)-peninsularinona (véase Figura 1) junto con un
quasinoide previamente identificado, la glaucarubolona (véase figura
2) se llevó a cabo mediante el uso de extractos de metanol de
raíces de Castela peninsularis. La estructura de
glaucarubolona se identificó mediante comparación de los espectros
de RMN de ^{1}H y ^{13}C de glaucarubolona aislada de la
naturaleza y purificada con aquellos obtenidos de la glaucarubolona
sintética.
La estructura de la peninsularinona se determinó
mediante una combinación de espectroscopia de RMN de ^{1}H y
^{13}C, espectroscopía de masas, y cristalografía de rayos X. El
espectro de masas de la peninsularinona indicó una fórmula
molecular de C_{28}H_{40}O_{10}. Además, el espectro de masas
exhibió un pico mayor a M- C_{8}H_{15}O_{3}. Una comparación
de los espectros de RMN de ^{1}H y ^{13}C de la peninsularinona
con los de la glaucarubolona reveló que los espectros eran muy
similares y sugirió que el hidroxilo del C(15) de la
glaucarabolone estaba acilado. En consonancia con los datos
espectrales de masa, el espectro RMN de ^{13}C reveló claramente
ocho átomos de carbono adicionales: un carbonilo (168,4 ppm), un
carbono cuaternario que soporta un oxígeno (75,4 ppm), dos metilenos
(40,8 y 29,6 ppm), tres grupos metilo (17,2, 17,4, y 8,3 ppm), y un
carbono metino (34,7 ppm). El espectro de RMN de ^{1}H exhibió un
cuatriplete AB centrado a \delta 2,88 (J = 15 Hz) que junto con
los datos de ^{13}C sugirieron la presencia de un metileno
adyacente al carbonilo y un carbono cuaternario que posee un átomo
de oxigeno: C(c)CH_{2}C=O. También fue claramente
evidente a partir del espectro de protón la presencia de un grupo
isopropilo y un grupo etilo, ambos presumiblemente unidos al mismo
carbono cuaternario que soporta un grupo hidroxilo. La configuración
absoluta del esqueleto carbocíclico de picrasano de los quasinoides
se deduce de las consideraciones de biosíntesis, datos de la
cristalografía de rayos-X, y síntesis totales. La
determinación de la configuración absoluta del carbono cuaternario
en la cadena lateral de C-15 se realizó llevó a cabo
mediante el análisis de rayos X de un mono cristal de
peninsularinona. El análisis de los datos de la cristalografía de
rayos X de peninsularinona indicó un cristal ortorrómbico (C2, Z =
8) con las siguientes dimensiones: a = 28,538 (25) \ring{A}, b =
6,866 (5) \ring{A}, c = 30,300 (26) \ring{A} 35 y \beta =
116,57 (2)º. El volumen del cristal fue 5310,13 \ring{A}^{3}
con una densidad de 1,342 g cm^{-3}.
Los espectros de resonancia magnética núclear de
protón (^{1}H) y carbono (^{13}C) se registraron en un
espectrómetro Varian VXR-400 MHz (100 MHz) o en un
espectrómetro Bruker AM-500 MHz (125 MHz) según se
indica. Los desplazamientos químicos se indican en partes por millón
(\delta) respecto al tetrametilsilano (\delta 0,0). Los
espectros de infrarrojo (IR) se registraron en un espectrómetro
Mattson FTIR de la serie Galaxy 4020. Las intensidades de absorción
se indican como fuerte (f), media (m), o débil (d). Los espectros de
masas de alta resolución se obtuvieron en un espectrómetro Kratos MS
80/RFAQ. Los análisis de elemento se hicieron en los laboratorios
Galbraith, Inc., Knoxville, TN. Los puntos de fusión se obtuvieron
en un aparato de calentamiento discontinuo
Fisher-Johns y no están corregidos. Las rotaciones
ópticas se obtuvieron en un polarímetro Perkin-Elmer
modelo 241. La cromatografía en capa fina (TLC) se llevó a cabo
usando placas preparadas recubiertas de gel de sílice E. Merck 60
F-240 (0,25 mm de grosor). Las placas se revelaron
mediante inmersión en una disolución de
p-anisaldehido y al calentarlas en una placa
caliente. El gel de sílice E. Merck 60 (230-400 de
malla) se usó para la cromatografía ultrarrápida en gel de sílice.
Todos los disolventes cromatográficos son de calidad de reactivo a
no ser que se indique otra cosa. La recogida de las fracciones
comenzó después de la elución de un frente de disolvente de la
columna.
Las raíces de la rosa Castela peninsularis
procedían de la Baia California (18 de Abril de 1993) (de World
Botanical Associates).
Las raíces subterráneas secadas (962 g) se
mojaron en 2800 ml de metanol. Después de tres días se escurrió el
material vegetal y aclaró con metanol (1 x 2800 ml). Se repitió el
proceso sobre los mismos 962 g de material vegetal un total de 9
veces. Los extractos de metanol reunidos y los lavados se
concentraron a vacío hasta una suspensión marrón (ca. 120 g) que se
diluyó con metanol/ cloroformo al 20% (1000 ml), se agitó durante 24
horas, y se filtró a través de una almohadilla de gel de sílice
ultrarrápida, lavándola bién con metanol/ cloroformo al 20%. El
filtrado y los lavados se concentraron a vacío hasta un aceite
marrón (ca. 32 g). Se sometió a cromatografía el aceite marrón en
690 g de gel de sílice ultrarrápida (empaquetada en metanol/
cloroformo al 10%). Se eluyó la columna sucesivamente, recogiendo
fracciones de 150 ml: se reunieron las fracciones 3B16 (porción I) y
se concentraron a vacío proporcionando 19 g de una suspensión; las
fracciones 17-28 (porción II) se reunieron y se
concentraron a vacío dando 2,0 g de una espuma amarilla.
La porción I (19 g) se sometió a cromatografía en
400 g de gel de sílice ultrarrápida (empaquetada en acetato de
etilo-hexanos 3:1). Se eluyó la columna
sucesivamente recogiendo fracciones de 75 ml: se reunieron las
fracciones 48-66 (VA) (acetato de
etilo-hexanos 3:1) y las fracciones
67-98 (113) (acetato de
etilo-hexanos 5:1). Las fracciones
48-66 (IA) se concentraron a vacío hasta un sólido
amarillo pálido (684 mg) que se cristalizó en acetato de etilo
proporcionando 161 mg de 2 en forma de agujas largas. Las aguas
madres se sometieron a cromatografía en 130 g de gel de sílice
ultrarrápida (empaquetado en metanol/ cloroformo al 2%). La columna
se eluyó sucesivamente, recogieron fracciones de 40 mL: las
fracciones 43-49 (metanol/ cloroformo al 5%) se
recogieron y se reunieron para proporcionar otros 216 mg de 2 en
forma de un sólido blanco. La porción IB se concentró a vacío hasta
una espuma amarilla (864 mg) que se sometió a cromatografía en 125 g
de gel de sílice ultrarrápido (empaquetado en metanol/ cloroformo al
5%). La columna se eluyó sucesivamente recogieron fracciones de 12
ml: las fracciones 43-55 se reunieron y se
concentraron a vacío dando un sólido blanquecino (371 mg) que se
cristalizó en acetato de etilo proporcionando 148 mg de 1 en forma
de agujas blancas pequeñas. La purificación de las aguas madres en
una cromatografía en capa fina preparativa(11 placas, 0,5 mm
de grosor, metanol/ cloroformo al 5%, con doble elución) dió otros
94 mg de 1 en forma de sólido blanco.
La porción II se sometió a cromatografía (2,0 g)
en 200 g de gel de sílice ultrarrápido (empaquetado en acetato de
etilo). La columna se eluyó sucesivamente recogiendo fracciones de
40 ml: las fracciones 17-41 se reunieron y se
concentraron a vacío proporcionando 681 mg de glaucarubolona
cristalina que fue identificada por comparación de sus datos
espectroscópicos (IR, IVIS, ^{1}H-RMN,
^{13}C-RMN) con aquellos recogidos previamente en
la bibliografía.
(-)-Peninsularinona 1: Rf 0,14
(acetato de etilo: hexanos, 2: 1), 0,20 (en metanol/ cloroformo al
5%); FTIR (KBO) 3520 (f), 2969 (m), 2884 (m), 1728 (f), 1680 (f),
1460 (d), 1385 (d), 1254 (m), 1229 (m), 1192 (m), 1115 (m), 988 (d),
961 (d), 916 (d) cryfl; 400 MHz ^{1}H-RMN
(C_{5}D_{5}N) \delta 9,78 (s anch, 1 H); 9,43 (s anch, 1 H);
7,46 (d, 1 H, J = 3,6 Hz); 6,42 (d 1 H, J = 11,2 Hz); 6,09 (s, 1
H); 4,79 (s, 1 H); 4,23 (s, 1 H); 4,14 (d, 1 H, J = 8,6 Hz); 4,03
(s anch, 1 H); 3,83 (d, 1 H, J = 8,6 Hz); 3,39 (s, 1 H); 3,09 (d
anch, 1 H, J = 12,4 Hz); 2,95 y 2,81 (c AB, 2 H, J = 15 Hz);
2,66-2,54 (m, 2 H); 2,25-2,10 (m, 2
H); 2,08-1,85 (m, 3 H); 1,71 (s, 3 H); 1,55 (s, 3
H); 1.39 (d, 3 H, J = Hz); 1,12-1,01 (m, 9H).
^{13}C-RMN (C_{5}D_{5}N) 100 MHz \delta
197,38; 172,02; 168,36; 162,29; 126,16; 110,73; 84,34;
79-97; 78,56; 75,41; 71,30; 70,78; 48,09; 45,99;
45,58; 45,44; 42,19; 40,85; 34,69; 32,74; 29,59; *25,90; 22,34;
17,45; 17,23; 15,52; 10,74; 8,30; EM de alta resolución (IQ) calcd.
para C_{28}H_{41}O_{10} (M + 1) m/e 537,2700; encontrado
537,2686; calcd. para C_{20}H_{25}O_{7} (M-
C_{8}H_{15}O_{3}) m/e 377,1601; encontrado 377,1594. Se
preparó una muestra analítica mediante recristalización en acetato
de etilo: p.f. 221-223ºC
[\alpha]^{25}_{D} = -22,6E (c 0,19; piridina). Anal.
calcd. para C_{28}H_{40}O_{10}: C: 62,67; H: 7,51; encontrado
C: 62,34; H: 7,62.
Los datos de rayos X para la peninsularinona:
Cristales monocíclicos con a = 28,538 (25) \ring{A}; b = 6,866 (5)
\ring{A}, c = 30,300 (26) \ring{A}, \beta = 116,57 (2)º y V =
5310,1 (9) \ring{A}^{3} a –172ºC. El grupo espacial fue C2, con
Z = 8 y D_{calc} = 1,342 g.cm^{-3}, F(000) = 2304. Las
reflexiones se midieron en un goniostato Picker modificado
localmente, \lambda (Moka) = 0,71069 \ring{A}. Las intensidades
se midieron usando un modo de barrido continuo con fondos
establecidos para 3818 reflexiones únicas de las cuales se
observaron 2512 (F > 2,33\sigma (F)) . La estructura se
resolvió por métodos directos (SHELXS-86) y se
refinó mediante una matriz completa de mínimos cuadrados. El índice
de discrepancia final fue de R = 0,072.
Además de productos aislados de la naturaleza
purificados, la presente invención incluye análogos naturales
modificados en la cadena lateral de los quasinoides. Principalmente
esto incluye la modificación en la cadena lateral del
C-15, aunque ciertas modificaciones en la estructura
del anillo o la variación de los sustituyentes en la posición
C-4 se contemplan dentro del alcance de la presente
invención.
Por ejemplo, como se ve en el esquema de síntesis
esquemático siguiente (fórmulas VIII a XIII, de aquí en adelante)
empezando con la glaucarubolona (fórmula VIII), mediante una
adecuada modificación química es posible obtener
15-oxi-(hidroxipivaloil)glaucarubolona
(fórmula XI) o 1, 5-oxi-(N,
N-dimetilglicin)glaucarubolona (fórmula
XIII).
La síntesis y caracterización de los anteriores
compuestos consistió en los espectros de resonancia magnética
nuclear de protón (^{1}H) y carbono (^{13}C) registrados en
espectrómetros Varian VXR-400 MHz (100 MHz) o en un
Bruker AM 500 MHz (125 MHz). Los desplazamientos químicos se recogen
en partes por millón (\sigma) respecto al tetrametilsilano
(\sigma 0,0). Los espectros de infrarrojo (IR) se obtuvieron en
un espectrómetro Perkin-Elmer modelo 298 o en un
espectrómetro FTIR Mattson de la serie Galaxy 4020. Las intensidades
de absorción se indican como fuerte (f), media (m), o débil (d). Los
espectros de masas de alta resolución se obtuvieron en un
espectrómetro Kratos MS 80/ RFAQ. Los análisis de elemento se
hicieron en los laboratorios Galbraith, Inc., Knoxville, TN, o en
los laboratorios Robertson Microlit, Inc., Madison, NJ. Los puntos
de fusión se obtuvieron en un aparato de calentamiento discontinuo
Fisher-Johns y no están corregidos. Las rotaciones
ópticas se obtuvieron en un polarímetro Perkin-Elmer
modelo 241. Las reacciones se siguieron con cromatografía de capa
fina (TLC) usando placas preparadas recubiertas de gel de sílice E.
Merck 60 F-254 (0,25 mm de grosor). Las placas se
revelaron mediante inmersión en una disolución de
p-anisaldehido y calentamiento en una placa
caliente. El gel de sílice E. Merck 60 (230-400 de
malla) se usó para la cromatografía ultrarrápida gel de sílice.
Todas las reacciones se llevaron a cabo en
material de vidrio secado en estufa (a 110ºC) en atmósfera de argón,
utilizando disolventes anhidros. Todos los disolventes son de
calidad de reactivo a no ser que se indique otra cosa. El
diclorometano, trietilamina, 2,6-lutidina, piridina,
clorotrimetilsilano, y trifluorometanosulfonato de trimetilsililo se
destilaron en hidruro cálcico. El tetrahidrofurano se destiló en
cetilbenzofenona de sodio.
1,11-Bis
(trimetilsililoxi)glaucarubolona (fórmula IX). Se trató una
disolución de 300 mg (0,761 mmol) de glaucarubolona (fórmula VIII)
en 8,5 ml de piperidina que contenía 1,3 ml (9,13 mmol) de
trietilamina a 0ºC con 898 \mul (4,56 mmol) de
trifluorometanosulfonato de trimetilsililo. Después de calentar
hasta temperatura ambiente y agitar durante 1 h se volvió a enfriar
la reacción a 0ºC y se trató cada 30 minutos con 761 \mul (0,761
mmol) de una solución 1,0 M de fluoruro de tetrabutilamonio en
tetrahidrofurano cada 30 minutos hasta que se añadieron un total de
5 equivalentes (3,81 mmol) de la solución de fluoruro de
tetrabutilamonio. Después de agitar a 0ºC durante 30 minutos
adicionales a temperatura ambiente durante 30 minutos se vertió la
mezcla de reacción sobre 17 ml de una disolución acuosa saturada de
bicarbonato de sodio y se diluyó con 20 ml de acetato de etilo. Se
separaron las fases y se lavó la fase orgánica con salmuera (1 x 17
ml). Las fases acuosas reunidas se lavaron con acetato de etilo (1 x
10 ml), se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron, y se
concentraron a vacío hasta un aceite marrón. El aceite se sometió a
cromatografía en 80 g de gel de sílice ultrarrápida eluyendo con
acetato de etilo - hexanos (4: 1) para dar 270 mg (66%) de
1,11-bis (trimetilsililoxi)glaucarubolona
(Fórmula IX) en forma de sólido blanco: Rf 0,72 (acetato de etilo -
hexanos, 4: 1); IR (KBr) 3595 (m), 3545 (d), 2970 (m), 2895 (d),
1720 (f), 1690 (f), 1327 (m), 1250 (f), 1190 (f), 1152 (m), 1057
(f), 922 (f), 840 (f), 758 (m), cm^{-1};
^{1}H-RMN (C_{5}D_{5}N) 400 MHz \sigma 7,93
(d, 1 H, J = 5,2 Hz); 6,04 (s anch, 1 H); 5,88 (d, 1 H, J = 4,8
Hz); 5,32 (dd, 1 H, J = 11,2; 5,2 Hz); 4,57 (s anch, 1 H); 4,23 (s,
1 H); 4,00 (d, 1 H, J = 8,2 Hz); 3,88 (t, 1 H, J = 4,8 Hz); 3,73
(d, 1 H, J = 8,2 Hz); 3,11 - 3,02 (m, 1 H); 3,06 (s, 1 H); 2,54 (m,
1 H); 2,26 (dd, 1 H, J 11,2; 6,4 Hz); 2,06 (dt, 1 H, J = 14,2; 2,8
Hz); 1,88 (t, 1 H, J = 14,2 Hz); 1,71 (s, 3 H); 1,66 (d, 3 H, J =
7,2 Hz); 1,32 (s, 3 H); 0,36 (s, 9 H); 0,32 (s, 9 H). 100 MHz
^{13}C-RMN (C_{5}D_{5}N) 100 MHz \sigma
198,49; 174,06; 160,92; 127,08; 113,61; 88,04; 81,02; 77,96; 71,71;
68,58; 49,83; 47,26; 46,04; 44,28; 44,09; 33,55; 25,85; 22,36;
16,25; 10,651 3,01; 1,55; EM de alta resolución (E) calcd. para
C_{26}H_{42}O_{8}Si_{2} (M) m/e calculado 538,2419,
encontrado 538,2393. Se preparó una muestra analítica mediante
recristalización en acetato de etilo: p.f. 228-230ºC
(dec); [\alpha]_{D}^{25} = -12 (c 0,55, piridina).
Anal. calcd. para C_{26}H_{42}O_{8}Si_{2}; C: 57,96; H:
7,86;encontrado C: 57,85; H: 8,09.
15-Oxi-(hidroxipivaloil)glaucarubolona
(fórmula XI). Se enfrío a 0ºC una disolución de 69 mg (0,13 mmol) de
1,11-bis(trimetilsililoxi)glaucarubolona
(fórmula IX) y 31 mg (0,26 mmol) de
4-dimetilaminopiridina en 0,64 ml de diclorometano y
se trató con 89 \mul (0,64 mmol) de trietilamina, seguido de 80
mg (0,32 mmol) del cloruro de ácido derivado del
tert-butildimetilsilil éter del ácido
hidroxipiválico (fórmula X). Después de calentar hasta temperatura
ambiente y agitar durante 2 horas se diluyó la mezcla heterogénea se
diluyó con hexanos (1 ml) y se filtró a través de un tapón pequeño
de gel de sílice con acetato de etilo (10 x 1 ml). El filtrado se
concentró y el residuo bruto se sometió a cromatografía en 20 g de
gel de sílice ultrarrápido eluyendo con
hexanos-acetato de etilo (5:1) lo que proporcionó
96 mg (100%) del aducto deseado.
El material purificado (96 mg) se disolvió en 2,5
ml de acetonitrilo y se enfrió a 0ºC. Se añadieron con agitación 635
\mul de una disolución 1 M de ácido fluorhídrico en acetonitrilo
y la disolución resultante se dejó que se calentase hasta
temperatura ambiente y agitó durante 0,5 h. Se diluyó la reacción
con acetato de etilo-metanol (1: 1, 2 ml) y se trató
con 200 \mul de hidrogenocarbonato de sodio, después se filtro a
través de un tapón pequeño de gel de sílice con acetato de
etilo-metanol (20: 1, 10 x 1 mL). Se concentró a
vacío el filtrado y se sometió a cromatografía en 20 g de gel de
sílice ultrarrápido eluyendo con cloroformo-metanol
(10: 1), lo cual proporcionó 55,8 mg (88%) del compuesto de la
fórmula XI en forma un sólido blanco: Rf 0,19
(cloroformo-metanol, 10: 1); IR (KBr)
3517(f), 3468 (f), 2974 (m), 2928 (m), 1746 (f), 1715 (f),
1682 (f), 1383 (m), 1248 (m), 1121 (f), 1053 (f) cm^{-1} 1;
^{1}H-RMN (C_{5}D_{5}N) 500 MHz \sigma 9,74
(s anch, 1 H); 9,41 (s anch, 1 H); 7,44 (d, 1 H, J = 4,7 Hz); 6,40
(d anch, 1 H, J = 11,7 Hz); 6,27 (t anch, 1 H, J = 6,0 Hz); 6,09 (s
anch, 1 H); 4,81 (s anch, 1 H); 4,19 (s anch, 1 H); 4,13 (d, 1 H, J
= 8,8 Hz); 4,05 - 3,98 (m, 3 H), 3,79 (d, 1 H, J = 8,8.Hz); 3,37
(s, 1 H), 3,10 (d anch, 1 H, J = 13,3 Hz); 2.67 (dd, 1 H, J = 11,7;
6,3 Hz); 2,59 (m, 1 H); 2,14, (dt, 1H, J = 14,5; 3,2 Hz); 2,00 (t
anch, 1 H, J = 14,5 Hz); 1,70 (s, 3 H); 1,55 (s, 3 H); 1,48 (s, 6
H); 1,46 (d, 3 H, J = 7,4 Hz); ^{13}C-RMN
(C_{5}D_{5}N) 125 MHz \sigma 197,26; 176,38; 168,54; 162,41;
126,13; 110,67; 84,40; 80,09; 78,46; 71,33; 71,21; 69,43; 48,19;
46,23; 45,59; 45,45; 42,23; 32,81; 25,93; 22,25; 22,23; 22,17;
15,71; 10,70. Se preparó una muestra analítica mediante
recristalización desde acetato de etilo-metanol:
p.f. 259 - 261ºC; [\alpha]_{D}^{25} = -17,1 (C 0,59,
piridina). Anal. calcd. para C_{25}H_{34}O_{10}: C: 60,72; H:
6,93; encontrado C: 60,63; H: 6,92.
15-Oxy-(N,N-dimetilglicina)glaucarubolona
(fórmula XIII). Se dispusieron en un vial pequeño 10 mg (0,02 mmol)
de
1,11-bis(trimetilsililoxi)glaucarubolona
(fórmula IX), 4 mg (0,04 mmol) de la N,
N-dimetilglicina (fórmula XII), 5 mg (0,04 mmol) de
4-dimetilaminopiridina y 10 mg (0,04 mmol) de 1,
3-diciclohexilcarbodiimida. Se añadió diclorometano
(93 \mul) y se dejó a la disolución resultante en agitación a
temperatura ambiente durante 12 h. Se filtro la mezcla heterogénea a
través de un lecho corto de gel de sílice con acetato de etilo (10 x
1 mL) y el filtrado se concentró al vacío. La cromatografía en 10 g
de gel de sílice ultrarrápido eluyendo con
cloroformo-metanol (20: 1) proporcionó el producto
puro, todavía altamente contaminado con diciclohexilurea.
El producto bruto (20,3 mg) se disolvió en 370
\mul de acetonitrilo y se enfrió a 0ºC. Se añadieron con
agitación 185 \mul de una disolución 1 M de ácido fluorhídrico en
acetonitrilo y la disolución resultante se agitó a 0ºC durante 0,5
horas. Se añadieron 185 \mul adicionales de una disolución 1 M de
ácido fluorhídrico en acetonitrilo y la disolución se dejó calentar
hasta temperatura ambiente y agitándose durante 0,5 h. Se diluyó la
reacción con 200 \mul de agua, después se añadieron 50 mg (0,60
mmol) de hidrógeno carbonato de sodio y la mezcla se agitó a
temperatura ambiente hasta que no se observó más efervescencia. Se
filtró la mezcla a través de un lecho corto de gel de sílice con
acetato de etilo-metanol (20: 1, 10 x 1 ml). El
filtrado se concentró a vacío y se sometió a cromatografía en 10 g
de gel de sílice ultrarrápido eluyendo con cloroformo- metanol (20:
16 \rightarrow 5: 1), lo cual proporcionó 217,7 mg de (4) (87%)
en forma de un sólido blanco: Rf 0,30
(cloroformo-metanol, 5: 1); IR (KBr) 3520 (m), 3395
(m), 2944 (m), 2890 (m), 1740 (f), 1674 (f), 1458 (d), 1385 (d),
1229 (m), 1192 (m), 1049 (m) cm^{-1}, ^{1}H-RMN
(C_{5}D_{5}N) 500 MHz \sigma 9,78 (s anch, 1 H), 9,45 (s
anch, 1 H); 7,46 (d, 1 H, J = 4,7 Hz); 6,51 (d anch, 1 H, J = 11,3
Hz); 6,10 (s anch, 1 H); 4,78 (s anch, 1 H); 4,24 (s anch); 4,15
(d, 1 H, J = 8,8 Hz); 4,03 (t anch, 1 H, J = 4,7 Hz); 3,85 (d, 1 H,
J = 8,8 Hz); 3,43 (c aparente, 2 H, J = 16.6 Hz); 3,40 (s, 1 H),
3,08 (d anch, 1 H, J = 12,4 Hz); 2,58 (m, 2 H), 2,38 (s, 6 H), 2,16
(dt, 1 H, J = 14, 7; 2,8 Hz); 2,03 (t anch, 1 H, J = 14,7 Hz), 1,73
(s, 3 H), 1,56 (s, 3 H), 1,32 (d, 3 H, J = 6,7 Hz);
^{13}C-RMN (C_{5}D_{5}N) 125 MHz \sigma
197,36; 170,15; 168,12; 162,22; 126,16; 110,73; 84,29; 79,90;
78,55; 71,27; 70,43; 60,64; 48,00; 46,06; 45,51; 45,45; 45,04;
42,16; 32,69; 25,88; 22,28; 15,32; 10,65.
Como apreciarán los expertos en la técnica los
métodos sintéticos empleados para los compuestos anteriores pueden
extenderse para abarcar las cadenas laterales inventivas del
C-15 con una selectividad, toxicidad, potencia,
solubilidad, y efectividad terapéutica diferenciadas.
Cuando se ensayó in vitro la
glaucarubinona se encontró que es selectiva de los tumores sólidos
(Tabla 1, de aquí en adelante) demostrando una zona diferencial de
400 unidades entre C38 y L1210 (a 1 ug/ disco). Se apreció una
diferencia similar, mayor para P03, mientras que no se encontró
diferencia para M 17/Adr, indicando una probable resistencia cruzada
con otros productos naturales tales como la adriamicina. Además,
dependiendo de la línea celular humana usada en el ensayo se
demostró una citotoxicidad diferencial (H 125,
MX-1) o no (CX-1,
H-8).
Los posteriores ensayos in vivo (Tabla 2,
de aquí en adelante) demostraron una actividad curativa tanto frente
a C38 como a P03. También se apreció actividad antitumoral frente a
los otros dos modelos de tumores estudiados, Col26 y Mam 16/C. Uno
de los hallazgos más intrigantes con este compuesto fue que la dosis
pudo ser aumentada durante el tratamiento por encima de un orden de
magnitud de diferencia desde el comienzo de la terapia; por tanto,
se pudieron administrar dosis supraletales de glaucarubinona si los
animales habian sido pretratados durante unos pocos días con dosis
más bajas, no tóxicas del compuesto.
Se examinó también la actividad anticancerosa de
los análogos de quasinoide que tienen sustituyentes diferentes en la
posición del C-15. Los resultados de los cinco
compuestos se presentan en la Tabla 1. Sorprendentemente, aunque que
la ailantinona, que carece de un grupo hidroxilo en la cadena
lateral del C-15, tuvo una potencia similar a la
glaucarubinona, esta no demostró selectividad por los tumores
sólidos. Debido a esto no se ensayó in vivo. No obstante,
según disminuye la cadena lateral en longitud, los 3 compuestos
restantes, holacantona (el éster de acetato), glaucarubolona (el
análogo hidroxílico), y chaparinona (en la que no hay cadena lateral
en el C-15), no sólo demostraron selectividad por
los tumores sólidos tanto en células humanas como murinas, sino que
también demonstraron selectividad por un tumor de mama
multirresistente a fármacos que expresa una glicoprteína P
(Mam17/Adr). Finalmente, una reciente adquisición, la
peninsularinona, que tiene 2 carbonos más que la glaucarubinona,
parece similar en potencia y en el espectro de actividad a la
glaucarubinona.
Dos de estos compuestos, la glaucarubolona y la
chaparrinona se ensayaron in vivo. Según se muestra en la
tabla 2, ambos tienen actividad terapéutica frente a C38, teniendo
también el último compuesto actividad frente a Mam 16/C y Mam
17/Adr. Según se observó en los estudios in vitro, la
potencia tanto de glaucarubolona como de chaparrinona fue
aproximadamente de un orden de magnitud menor que la de
glaucarubinona, esto también se observa en los estudios in
vivo.
(Tabla pasa a página
siguiente)
Los ratones de pura raza usados fueron C57131/ 6,
C3H/He, Balb/c, y DBA/2; los hibridos fueron : B6D2F1 (C57B1/ 6
hembras x DBA/ 2 machos), y CD2F1 (Balb/ c hembras x DBA/ 2 machos).
Todos los ratones se obtuvieron en Frederick Cancer Research
Facility, Frederick, Maryland.
Se usaron los siguientes tumores sólidos
transplantables de ratones para los ensayos in vitro y/o in
vivo; adenocarcinoma ductal pancreático NE 02 [PO2] (3),
adenocarcinoma ductal pancreático Nº03 [PO3], adenocarcinomas de
colon Nº07/A [C7], Nº38 [C38] y Nº51/A [C51], carcinoma de colon no
diferenciado Nº26 [C26], adenocarcinoma mamario Nº16/ C [Mamm 16/C],
17/A [Mamm 17] y 17/A/ADR [Mam 17/Adr]. Las leucemias usadas fueron
L1210, P388, leucemia linfocítica, y la leucemia mielógénica
mielógenas C1498. Todos los tumores proceden del depósito de tumores
congelados del Developmental Therapeutics Program (DTP), mantenido
por the Biological Testing Branch, Frederick, Maryland. Cada uno
tiene una descripción detallada, un número de código de
identificación, y una lista de referencias en el National Tumor
Repository.
Para los ensayos terapéuticos los tumores se
mantuvieron en las cepas de ratón de origen y se transplantaron al
híbrido F1 adecuado o a la cepa de origen. Todos los ratones
pesaban más de 17 g al comienzo de la terapia; el intervalo de pesos
corporales individuales en cada experimento fue de 2 g. El
suministro de comida y agua a los ratones fue ad libitum.
Se usaron los siguientes tumores humanos: el
tumor pulmonar adenoescamoso humano H-125 (7) y los
tumores de colon H8, HCT-116 y CX-1
se usaron sólo para los ensayos in vitro. Cada línea celular
humana se mantuvo en cultivo hasta que se realizo el implante. Los
HCT-116, H8 y CX-1 se mantuvieron en
medio de McCoy y el suero bovino fetal inactivado por
calor(FBS al 11%). Se subcultivó dos veces por semana
(dilución 1: 5) continuando con una disociación enzimática usando
una mezcla de tripsina/ PBS-EDTA. Se mantuvo el
H-125 en medio CMRL/ Fischer (1:1) con FBS al 11%.
Se separó del sustrato mecánicamente y se subcultivó semanalmente
(dilución 3:10). Para el ensayo de placa se dispersaron todas las
células mecánicamente y se diluyeron en la mezcla de medios
CMRL/Fischer.
El compuesto se disolvió fácilmente en el
diluyente que consistía en etanol al 3% [V/ V(Puro al 100%)],
monopalmitato de polioxietilensorbitano (P. O. E. 40) y agua
destilada esterilizada al 96%. La vía primaria de administración
fue la intravenosa (IV).
Para este ensayo se dispusieron en placas de agar
blando las células de leucemia y las de tumores sólidos. Se
dispersó el fármaco en un disco de papel de filtro que después se
depositó sobre la superficie del agar blando que contenía las
células tumorales (9, 10). Brevemente, se vertió una capa de fondo
dura [que contiene caldo de soja tripticasa (0,8%), agar noble
(0,8%), los medios CNRL/Fischer y el suero de caballo (al 11%) a
480] dentro de a placas de plástico de 60 mm (3 ml en cada una), se
dejó solidificar y almacenó a 37ºC en CO_{2} al 5%. Las capas de
fondo se usaron de 4 a 10 días después de su preparación. Una fase
superior de agar blando, que contenía agar noble (al 0,44%), los
medio CMRL/ Fischer, suero de caballo (al 11%) y las celulas
tumorales tituladas se vertió sobre la superficie y se dejo que
solidificase.
Se añadió un volumen de 50 \mul de una dilución
en etanol de cada fármaco a los discos de 6,5 mm, los cuales se
dejaron secarse y después se situaron en la placa que contenía las
células tumorales. Las placas se incubaron durante 6 a 10 días y se
examinaron en un microscopio invertido (aumentos 40X). Dependiendo
de la sensibilidad innata, de las células hacia el fármaco (y la
concentración del fármaco), apareció una zona de inhibición de
formación de colonia. La zona de inhibición (medida desde el borde
del disco hasta las primeras colonias) se determinó en unidades:
200 unidades = 6,5 mm (el tamaño del disco de papel de filtro).
Los tumores sólidos de ratón y la leucemia L1210
se cultivaron subcutáneamente en el apropiado ratón de pura raza.
P388 se mantuvo en condiciones de cultivo de tejidos para los
estudios in vitro descritos. Se obtuvieron las células para
los ensayos in vitro derivaban directamente de estos
tumorescultivados subcutáneamente, como se discutió previamente. Los
recuentos celulares estaban calculados para producir aproximadamente
500 colonias por placa.
Se han presentado los procedimientos de diseño
de protocolo, transplante de tumores, tratamiento con fármacos,
determinación de parámetros, definición de las expresiones,
evaluación de la toxicidad, análisis de datos, la cuantificación
del exterminio de células tumorales, y la significancia biológica de
los resultados del tratamiento de los tumores transplantables con
el fármaco. Lo que sigue es un breve resumen de los procedimientos
según se aplican al trabajo descrito.
Necesariamente, para empezar un experimento se
agruparon los animales, se les implantaron bilateralmente por vía
subcutanea 30-60 mg de fragmentos tumorales usando
un trocar del calibre del 12 en el día 0, y otra vez se les agrupó
antes de ser distribuidos al azar en los diversos grupo testigo y de
tratamiento. La quimioterapia se empezó bien tres días después de
la implantación del tumor mientras el número de células por ratón
era relativamente pequeño (de 10^{7} a 10^{8} células), o bien
se dejó crecer hasta que fue palpable (aproximadamente 3 x 10^{8}
células) en una etapa más avanzada del ensayo.
Se midieron los tumores con un calibre una o dos
veces semanalmente (según se necesitó) hasta que los tumores
sobrepasaron los 1500 mg o se comprobó la curación. El peso de los
tumores se estimó a partir de las medidas en las dos
dimensiones.
Peso del tumor (mg) = (a x b)^{2}/2,
siendo a y b respectivamente la longitud y la anchura (mm).
Se usaron los siguientes parametros cuantitativos
para ensayar la actividad antitumoral:
(valor T-C), siendo T el tiempo
medio (en días) requerido para que los tumores del grupo en
tratamiento alcancen un tamaño predeterminado, y siendo c el tiempo
medio (en días) para que los tumores del grupo testigo alcancen el
mismo tamaño. Se excluyeron los supervivientes libres de tumores de
estos cálculos (los sanados se calcularon separadamente).
Para los tumores en crecimiento subcutáneo se
calculó el log_{10} del exterminio de células a partir de la
siguiente fórmula:
\dotable{\tabskip\tabcolsep\hfil#\hfil\+\hfil#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{
Log _{10} exterminio (total) \+ \hskip1cm
T - C\cr \+ \hskip1cm (3,32)
(Td)\cr}
Siendo T-C el retraso en el
crecimiento del tumor (en días) según se describió anteriormente y
siendo Td el tiempo en el que se duplica el volumen del tumor (en
días), este último estimado a partir de la recta de regresión mejor
ajustada a partir de una gráfica logarítmica lineal del grupo de
tumores testigo en crecimiento exponencial (de 500 a 1500 mg de
intervalo). Los valores T-C del log_{10} del
exterminio celular se pueden convertir porque la Td para tumores que
volvieron a desarrollarse después del tratamiento se aproximó a los
valores Td de los tumores de los ratones testigos no tratados.
Las medidas se llevaron a cabo simultáneamente
las medidas en los grupos en tratamiento y testigo. Cuando los
tumores del grupo testigo alcanzaron aproximadamente
750-1500 mg en tamaño (media del grupo), se
determinó el peso medio del tumor de cada grupo (incluyendo los
ceros). El valor T/C en porcentaje es una indicación de la eficacia
antitumoral. Un T/C igual o menor que el 42% se considera una
actividad antitumoral significativa. Un valor T/C menor que 10% es
indicativo de un alto grado de actividad antitumoral y es el nivel
usado por NO para justificar un posterior desarrollo si se cumplen
otros requisitos (llamado actividad de nivel
DN-2).
Un punto mínimo de perdida de peso del 20% o
mayor por ratón (media del grupo) o un 20% o más de muertes por el
fármaco se considera una dosisficación excesivamente tóxica. Los
pesos corporales de los animales incluían los pesos de los
tumores.
Se ensayó también la potencial actividad
antiviral y anti-NADH oxidasa de la glaucarubolona
purificada y aislada y ciertos análogos sintéticos. Según se indica
en las Figuras 4-7 y en las Tablas
3-5, de aquí en adelante, la glaucarubolona y los
análogos identificados en una serie de experimentos exhibieron una
actividad antiviral eficaz frente a rinovirus, virus pseudorábicos,
y retrovirus tales como el virus de la inmunodeficiencia felina
(VIF) y el virus de la imunodeficiencia humana (VIH). La inhibición
de la NADH oxidasa con glaucarubolona se observó tanto en células
animales en cultivo como en segmentos de tejidos escindidos de
plantas
A. Se infectaron las células Crandall de riñón
felino (células CFF) con virus de la inmunodeficiencia felina (VIF)
y se ensayaron con glaucarubolona y el conjugado
glaucarubolona-brefeldin A según lo expuesto en la
figura 6. Como se observa en las figuras 6 y 7, y en la tabla 3 de
aquí en adelante, ambos exhibieron una eliminación diferencial de
la células infectadas comparadas con las células no infectadas.
B. Según se observa en la figura 8, fueron
eliminadas diferencialmente las células MOLT-4
humanas infectadas con VIH en dos ordenes logarítmicos menos de
glaucarubolona que en las células no infectadas. Según se ve en la
figura 9, se observó una actividad similar con un conjugado
glaucarubolona-brefeldin A.
C. Se pusieron en contacto células HeLa (cepa de
Wisconsin, de Berlín, Alemania) con el rinovirus-14
humano. La células infectadas (cepa de Wisconsin) se observaron
visualmente. El efecto citopático se retrasó por la glaucarubolona,
simalikalactona D, quasimarina, y la peninsularinona. Las células
HeLa no murieron con ninguno de los compuestos usados. Las células
de otras líneas HeLa (por ejemplo ATCC, CCL2) si murieron. Se
hicieron ensayos de exterminio de células y de producción de virus
por monocitos sanguíneos primarios con la glaucarobolona,
simalikalactona D y chaparrinona. Todos los fármacos se ensayaron a
cinco concentraciones (0, 10^{-9}, 10^{-8}, 10^{-7} y
10^{-6} M). Los fármacos se dieron en cinco momentos diferentes
antes de la infección, se dieron en el momento de la infección, o se
administraron en diferentes momentos después de la infección. Se
obtuvieron resultados equivalentes sugiriendo que los efectos de
toxicidad fueron contra las células en lugar de contra los virus
per se.
D. Se pusieron en contacto células de riñón de
conejo con virus pseudorábicos porcinos y se controlaron
visualmente. La glaucarubolona inhibió el efecto citopático del
virus y no exhibió un efecto citopático en las células testigo no
infectadas tratadas con glaucarubolona. Se observó también un efecto
inhibitorio con la quasimarina, similakalactona D, bruceantina, y la
peninsularona.
E. La inhibición de la actividad NADH oxidasa en
células animales y de plantas se indica en referencia a la tabla 4 y
a las figuras 10 y 11. Se encontró que la glaucarubolona inhibe la
oxidación del NADH en la membrana plasmática de células HeLa
infectadas con el virus de la inmunodeficiencia felina, así como en
células no infectadas. Según se observa en la figura 10, la
glaucarubolona inhibe la oxidación del NADH tanto en células HeLa
(cepa ATCC CCL2) como en membranas plasmáticas aisladas de células
de hígado. Según se ve en la figura 11, la oxidación del NADH se
inhibe similarmente en tejido de hipocotilo de la planta de
soja.
| Horas | ||
| Glaucarubolona, M | No infectadas | Infectadas con VIF |
| 3 x 10^{-4} | 120 | > 168 |
| 3 x 10^{-5} | 120 | > 168 |
| 3 x 10^{-6} | 144 | > 168 |
| 3 x 10^{-7} | 192 | > 168 |
| 3 x 10^{-8} | > 192 | > 168 |
| 3 x 10^{-9} | > 192 | > 168 |
La tabla 4 muestra la inhibición por
gaucarubolona de la actividad NADH oxidasa de fracciones
celulares
| Fracción celular | ED_{50} |
| Aparato de Golgi de hígado de rata | > 10^{-5} M |
| Microsomas de hígado de rata | > 10^{-5} M |
| Membrana plasmática de higado de rata | > 10^{-5} M |
| Microsomas libres de membranas | > 10^{-5} M |
| plasmáticas (enriquecidos en Golgi) de | |
| células CFK no infectadas | |
| Microsomas libres de membranas | > 10^{-8} M |
| plasmáticas (enriquecidos en Golgi) de | |
| células CFK infectadas |
La tabla 5 muestra la inhibición por
concentraciones variables de simalikalactona D de la actividad NADH
oxidasa de las vesículas de membrana plasmática aislada obtenidas de
secciones de elongación de hipocotilos de soja crecida en la
oscuridad y del crecimiento de secciones de 1 cm cortadas de la zona
de elongación de hipocotilos de soja crecidas en la oscuridad y
flotando en una disolución. Se determinó la inhibición de la NADH
oxidasa añadiendo las soluciones de simalikalactona D directamente a
las vesículas de membranas plasmáticas aisladas.
| Parámeto | DE_{50} |
| Inhibición de la NADH oxidasa^{1} | 0,4 \muM |
| Inhibición del crecimiento inducido por 2, 4-D | 3,5 \muM |
| (1 \muM)^{2} | |
| Inhibición del crecimiento TESTIGO^{2} | 2,5 \muM |
| ^{1} Vesículas PM aisladas | |
| ^{2} Segmentos escindidos de hipocotilos de soja etiolados ( 1 8h) |
Se ha encontrado que los compuestos de acuerdo a
la presente invención afectan al fenotipo de crecimientode las
plantas, típicamente inhibiendo el crecimiento continuo de las
plantas o causando la muerte celular en la planta. La presente
invención comprende por tanto la utilización de quasinoides tales
como la glaucarubolona como herbiestatos o herbicidas, útiles junto
con vehículos herbistáticos o herbicidas convencionales conocidos
por los expertos en la técnica para controlar del crecimiento de
las plantas. Se cree que el mecanismo de la acción herbistática y
herbicida recae en modificaciones de la actividad de la NADH oxidasa
celular. Excepcionalmente se comprobó una inhibición del componente
tanto basal como del estimulado por auxina de la NADH oxidasa en las
plantas.
Para evaluar el fenotipo de crecimiento de un
grupo de plantas, se disolvió una muestra de 1 mg de glaucarubolona
en DMSO o etanol a una concentración final de 100 mM (disolución
QD-2). Esta disolución se diluyó serialmente con
agua , con o sin Triton X-100, etanol o DMSO y se
usó directamente para la medición de los efectos en la germinación
de semilla o se aplicó usando una jeringa de microlitro al follaje
para evaluar los efectos de crecimiento en las plantas.
Con germinación de semilla se evaluó el compuesto
en cinco especies: repollo (Early Jersey Wakefield), rábano (Scarlet
Turnip White Tipped), zanahoria (Danvers Half Long), tomate
(Rutgers) y sorgo (DeKalb 18). Con las diluciones de agua se inhibió
la germinación de las semillas de todas las especies a 10
\muM(una disolución acuosa de 10 \mul de 100 mM 1:1000 en
100 \mul de agua) (concentración final de DMSO 1:10.000 = 0,01%).
La germinación del tomate se inhibió a 10 \mul/ 100 \muL de una
dilución acuosa de 1:10.000 = 1 \muM de concentración final. Con
las diluciones de DMSO y etanol se observaron inhibiciones a
diluciones finales tan bajas como 1: 10^{6} o 1: 10^{7}
(10-100 nM), los mismos disolventes por si solos
tendieron también a retardar la germinación.
Cuando se aplicó a Arabidopsis (var.
Columbia) que crecía en tierra dentro de macetas de plástico de 4
pulgadas, la preparación de la glaucarubolona fue herbicida a
diluciones de 1:100 y 1:1000 (10 \mul/ media maceta). Las plantas
se trataron después de 10 días de la germinación. A una dilución de
1: 10.000 las plantas no murieron sino que se paró completamente el
crecimiento durante aproximadamente tres semanas. El crecimiento
reapareció 30 días después del tratamiento. La velocidad de
aplicación en el área tratada (se estimó que era un círculo de 2
pulgadas de diámetro) se calculó para dar 2,5 x 10^{-4} oz/ A.
Aproximadamente el 10% de las plantas que sobrevivieron a una
dilución 1:1000 no crecieron durante > 50 días. La velocidad de
aplicación calculada fue de 2,5 x 10^{-3} oz/A.
Las plantas de sorgo (Dekalb 18) que crecían en
tierra se trataron como se hizo anteriormente con Arabadopsis
thaflani después de 6 días de germinación cuando las plantas
tenían aproximadamente 5 cm de altura (cuando la hoja emergía desde
la vaina del coleoptilo). El crecimiento estaba retrasado. Después
de veinte días de tratamiento las plantas testigo tenían 16 cm de
altura y las plantas tratadas tenían 12 cm de altura. La velocidad
de aplicación fue de 10 \mul de 1:1.000/ media maceta = 2,5 x
10^{-3} oz/ A.
Las plantas del tomate de aproximadamente 3,5 cm
de altura en el momento del tratamiento se dejaron crecer en turba
en un plano de compartimentos de 1,5 pulgadas de diámetro y se las
dejó bien con simalikalactone (solución QD-1) o
glaucarubolona acuosa (solución QD-2), las cuales
contenían Triton X-100 al 0,1%. El volumen final/
planta fue de 10 \mul para la solución acuosa y 200 \mul de la
solución acuosa que contenía Triton X-100. A una
velocidad de aplicación de 100 mM diluido 1:100 (10 \mul en 200
\mul de Triton X-100 al 0,1%), las plantas
tratadas no crecieron y finalmente murieron después de 30 días. A
los 30 días después del tratamiento las plantas tratadas que
recibieron las diluciones 1:1.000 y 1:10.000 en una disolución
detergente estaban todavía inhibidas. Con el tratamiento acuoso las
plantas estaban también inhibidas, pero no tan marcadamente como con
el detergente.
En un experimento con Arabidopsis en la que
preparación del quasinoide se administró en etanol se observó que la
actividad herbicida por debajo de la dilución 1:10^{4} (2,5 x
10^{-5} oz/A) y de la dilución 1:10^{5} (2,5 x 10^{-6} oz/A)
pareció detener el crecimiento durante al menos 30 días. Todas las
plantas se regaron desde el fondo para reducir la diseminación
superficial del material. El fenotipo inhibido incluye una
capacidad disminuida de las plantas de crecimiento, es decir, se
impide o reduce la elongación celular/ expansión celular al menos un
50% durante varias semanas.
El sitio del fármaco para la tNOX se localiza en
la superficie externa de las células cancerosas. De esta forma el
fármaco no necesita entrar en la célula para ser efectivo. De
hecho, un propósito de los conjugados descritos aquí es reducir la
toxicidad impidiendo la entrada del fármaco en las células.
El crecimiento de las células, la preparación de
las membranas plasmáticas y las medidas espectrofotométricas se
hicieron según lo descrito anteriormente en la presente memoria.
Durante los estudios preliminares se preparó una
glaucarubolona derivada (más adelante) para su conjugación con
anticuerpos. El fármaco derivado se acopló a aminopropilenglicol
(Ave PM 5000) en presencia de 10 mM del agente de aclopamiento
diciclohexilcarbodiimida (DCC) (de Sigma).
Esta realización es la base para una nueva
estrategia de diseño de fármacos anticancerosos en la que los
quasinoides anticancerosos dirigidos a tNOX se combinan con
polímeros para mejorar la eficacia y reducir las toxicidades no
deseadas. Los fármacos conjugados no necesitan entrar en las células
para ser efectivos y pueden ser dirigidos específicamente a células
que posean los determinantes específicos. La invención es una mejora
sobre lo que existe ahora porque proporciona un objetivo en la
superficie celular y un alto grado de especificidad. En
consecuencia, los fármacos no necesitan entra en la célula para ser
efectivos. Al dirigirse específicamente a las células cancerosas,
sólo las células cancerosas son eliminadas y las células normales
permanecen no dañadas.
La entidad de molécula pequeña hecha impermeable
mediante una conjugación con polímeros puede incluir cualquier
inhibidor quasinoide de tNOX incluyendo, pero sin restricciones, a
la glaucarubolona. Los polímeros pueden incluir cualquier
macromolécula fraccionadas apropiadamente soluble en agua,
incluyendo, pero sin estar restringiendo, a proteínas, dextranos,
ciclodextrinas, polietilenglicoles, ácidos nucleicos, polímeros de
etilen- o propilenglicol y diversos polímeros de carbohidrato
complejos y simples. Las características del polímero apropiadas
para la preparación de los conjugados
anti-tNOX-fármaco eficaces para uso
en el tratamiento del cáncer incluyen un alto grado de solubilidad
en agua, una baja toxicidad y una baja antigenicidad. Las
ciclodextrinas, polietilenglicoles y los polímeros de óxido de
etileno o propileno exhiben características casi ideales en este
sentido. El número de subunidades de polímero puede variar de n = 1
a n = 1000 o más alto dependiendo de las características de
solubilidad y permeabilidad requeridas para optimizar la liberación
del fármaco en el sitio diana. En el ejemplo más sencillo en la que
n = 1, el fármaco estaría conjugado sólo para asegurar la liberación
en el objetivo tNOX y para restringir la entrada celular, pero no
para limitar la entrada del fármaco en los tumores sólidos y en
agregados celulares tumorales, impidiendo por tanto el desarrollo de
un conjugado con una buena biodisponibilidad oral. La unión de
pequeñas moléculas y polímeros se pueden hacer de varias formas
incluyendo pero sin estar restringido a los ejemplos dados
anteriormente. Los factores importantes en el procedimiento de unión
incluirán la facilidad de fabricación, la reproducibilidad y la
estabilidad relativa del conjugado.
Según se observa en la figura 12, la dependencia
de la actividad NADH oxidasa de las membranas plasmáticas de las
células HeLa de la concentración de la glaucarubolona se ve afecta
poco por el equilibrio redox. Eso parece representar un inhibidor de
tNOX independiente del equilibrio redox. Además, según se ve en la
figura 13, el conjugado del fármaco glaucarubolona-
aminopolietilenglicol parece inhibir la actividad tNOX
constitutivamente activada a concentraciones subnanomolares en
presencia de GSSG oxidada 1\muM en presencia de GSH.
La tabla 6 muestra la independencia redox de la
inhibición del crecimiento de las células HeLa por el conjugado
glaucarubolona-aminopolietilenglicol si se compara
con la glaucarubolona sóla. El medio reducido se obtuvo por adición
de 100 \muM de cisteína y el medio oxidado por adición de 10
\muM de hidroperoxido de tert-butilo.
| Crecimiento de las células HeLa después de 72 horas | |||
| Acción redox | |||
| Tratamiento | Reducido | In situ (células/mm^{2}) | Oxidado |
| Sin fármaco | 725 | 725 | 725 |
| Glaucarubolona 10^{-7} | 700 | 720 | 500 |
| M | |||
| Conjugado | 480 | 530 | 270 |
| glaucarubolona-amino | |||
| PEG 10^{-7} M | |||
| Conjugado | 50 | 50 | 30 |
| glaucarubolona-amino PEG 10^{-6} M |
La tabla 7 muestra la respuesta al conjugado
glaucarubolona-aminoPEG de células CFK normales y
células persistentemente infectadas ensayada a 10^{-6} M.
| Línea celular | Células/mm^{2} | |||
| Conjugado | Inicial | Después de 48h | Aumento | |
| Normal | Ninguno | 27 | 67 | 40 |
| 10^{-6} M | 26 | 73 | 45 | |
| Persistentemente | Ninguno | 27 | 43 | 16 |
| infectadas | ||||
| (transformadas) | ||||
| 10^{-6} M | 20 | 9 | -11 |
Mientras que la presente invención se ha descrito
en conexión con realizaciones específicas, será evidente para los
expertos en la técnica que se pueden hacer diversos cambios en las
mismas sin apartarse del alcance de la invención.
Claims (10)
1. Un compuesto caracterizado por la
fórmula:
en la que R_{1} representa hidrogeno, alquilo o
alquenilo, e Y se representa por la
fórmula
(III)---
\
\melm{\delm{\para}{R _{4} }}{C}{\uelm{\para}{R _{2} }}---R_{3}en la que R_{2}, R_{3}, tomados conjuntamente
forman un anillo de carbono de tres a ocho miembros
(C_{3}-C_{8}), y R_{4} tomada separadamente
representa hidrógeno, alquilo, hidroxialquilo, carboxilo, arilo,
alquenilo, cicloalcanos, cicloalquenos, glicina, glicosacáridos, un
aminoácido, peptido, polipéptido, proteína, y cualquiera de los
anteriores unidos al carbono central por un enlace éter, éster,
carbonilo, o glicosídico,
o
Y se representa mediante la fórmula:
(IV)--–C---
\
\melm{\delm{\para}{R _{7} }}{C}{\uelm{\para}{R _{5} }}---R_{6}en la que R_{5} y R_{6} tomados conjuntamente
forman un anillo de carbono de 3 a 8 miembros
(C_{3}-C_{8}), y R_{7} además comprende
hidrógeno, alquilo, hidroxialquilo, carboxilo, arilo, alquenilo,
cicloalcanos, cicloalquenos, glicina, glicosacáridos, un
aminoácido, péptido, polipéptido, proteína, y cualquiera de los
anteriores unidos por un enlace éter, éster, carbonilo, o
glicosídico.
2. El compuesto de la reivindicación 1, en el que
R_{2} y R_{3} tomados conjuntamente forman un anillo de carbono
de 3 a 8 miembros (C_{3}-C_{8}) y R_{4} es
un grupo hidroximetilo.
3. El compuesto de la reivindicación 2, en el que
R_{2} y R_{3} tomados conjuntamente forman un cicloalcano de
tres miembros, y R_{4} es un grupo hidroximetilo.
4. El compuesto caracterizado por las
fórmulas II y IV en las que R_{1} se define según la
reivindicación 1 y R_{5} y R_{6} tomados conjuntamente forman
un cicloalcano de cuatro miembros, y R_{7} es un grupo
hidroxilo.
5. El compuesto caracterizado por las
fórmulas II y IV en las que R_{1} se define según la
reivindicación 1 y R_{5} y R_{6} tomados conjuntamente forman
un cicloalcano de cinco miembros, y R_{7} es un grupo
hidroxilo.
6. El compuesto caracterizado por las
fórmulas II y IV en las que R_{1} se define según la
reivindicación 1 y R_{5} y R_{6} tomados conjuntamente forman
un cicloalcano de seis miembros, y R_{7} es un grupo
hidroxilo.
7. El compuesto caracterizado por las
fórmulas II y IV en las que R_{1} se define según la
reivindicación 1 y R_{5} y R_{6} tomados conjuntamente forman
un cicloalcano de siete miembros, y la R_{7} es un grupo
hidroxilo.
8. El compuesto caracterizado por las
fórmulas II y IV en las que R_{1} se define según la
reivindicación 1 y R_{5} y R_{6} tomados conjuntamente forman
un cicloalcano de cuatro miembros, y R_{7} comprende un grupo que
tiene la fórmula:
9. El uso de un quasinoide según una de las
reivindicaciones 1 a 8 para la preparación de una composición
farmacéuticamente activa para el tratamiento de tumores sólidos.
10. El uso de un quasinoide según la
reivindicación 9 para la preparación de una composición
farmacéuticamente activa para el tratamiento de vertebrados con
concentraciones supraletales.
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Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030039960A1 (en) * | 2000-01-13 | 2003-02-27 | Ml Laboratories Plc | Therapeutic treatment |
| WO2001078005A2 (en) * | 2000-04-11 | 2001-10-18 | Cornell Research Foundation, Inc. | System and method for three-dimensional image rendering and analysis |
| US20020193425A1 (en) * | 2001-02-05 | 2002-12-19 | Pezzuto John M. | Cancer chemopreventative compounds and compositions and methods of treating cancers |
| US20050226947A1 (en) * | 2004-02-04 | 2005-10-13 | Dale Kern | Agents for sequestering serum aging factors and uses therefore |
| EP1758576A1 (en) * | 2004-03-12 | 2007-03-07 | Christian Diehl | Topical and intravaginal microbicidal and antiparasitic compositions comprising quassinoids or quassionid-containing plant extracts |
| WO2006036956A2 (en) * | 2004-09-27 | 2006-04-06 | Tapestry Pharmaceuticals, Inc. | Therapeutic regimen for treating cancer using quassinoids and other chemotherapeutic agents |
| US20090246152A1 (en) * | 2008-03-28 | 2009-10-01 | Nu Skin International, Inc. | Naractin compositions for the inhibition of reactive oxygen species |
| US20090246153A1 (en) * | 2008-03-28 | 2009-10-01 | Nu Skin International, Inc. | Cosmetic compositions for the inhibition of reactive oxygen species |
| US8519163B2 (en) * | 2008-09-26 | 2013-08-27 | National Centre For Cell Science | Anti-tumor activity of AECHL-1, novel triterpenoid isolated from Ailanthus excelsa in vitro and in vivo |
| CN111620888B (zh) * | 2018-02-13 | 2022-09-02 | 陕西含光生物科技有限公司 | 一种利用生物发酵技术制备臭椿苦酮的方法 |
| CN115487179B (zh) * | 2022-11-18 | 2023-03-17 | 暨南大学 | 抗肿瘤的联合用药物及其应用 |
-
1994
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