EP3541182A1 - Composition stable solide a base de compose aromatique et utilisations - Google Patents

Composition stable solide a base de compose aromatique et utilisations

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EP3541182A1
EP3541182A1 EP17828781.9A EP17828781A EP3541182A1 EP 3541182 A1 EP3541182 A1 EP 3541182A1 EP 17828781 A EP17828781 A EP 17828781A EP 3541182 A1 EP3541182 A1 EP 3541182A1
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EP
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composition according
composition
acid
aromatic alcohol
caused
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EP17828781.9A
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Mounia OUKHOUIA
Chaimae Imane SENNOUNI
Hakima MOUSSA
Meryem MARZOUQ
Adnane Remmal
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    • Y02A40/90—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in food processing or handling, e.g. food conservation

Definitions

  • the present invention relates to a stable composition based on natural or synthetic aromatic compound and its various uses, particularly in the agricultural field.
  • biopesticides based on plant extracts are also not suitable because of both their liquid form which makes the storage rather delicate because it requires a precise temperature and humidity, and both the risk of evaporation of the active ingredients.
  • biopesticides based on plant extracts several studies have focused on essential oils and their major compounds such as thymol, carvacrol and eugenol in particular (Koulo et al., 2008) Essential Oils as Green Pesticides: Potential and Constraints Biopestic 4 (1): 63-84, lsman, MB and Machial, CM (2006) .Pesticides basedon plant essential oils: from traditional practice tocommercialization.In M.
  • the object of the present invention is therefore to find a solution to these problems and to propose in particular a stable formulation comprising aromatic compounds of volatile nature having antimicrobial (antibacterial, antifungal, antiviral and antiparasitic) and / or anti-insect activity.
  • the subject of the invention is a composition in solid form, stable and dispersible in water, comprising:
  • At least one aromatic alcohol or at least one mixture containing it as an essential oil at least one aromatic alcohol or at least one mixture containing it as an essential oil
  • At least one emulsifying agent and / or an oil at least one emulsifying agent and / or an oil
  • At least one effervescent acid-base pair at least one effervescent acid-base pair.
  • Aromatic alcohols have many properties depending on their chemical formula, and the composition according to the invention can be advantageously used in particular as a phytosanitary product or fertilizer, but the composition according to the invention can also be used for other applications such as for example anti-insect or antimicrobial to sanitize ambient air, hands, buildings, reusable medical devices, etc.
  • FIG. 1 an image of the composition according to the invention of Example 1, before dispersion,
  • emulsifying agent within the meaning of the invention is meant any compound capable of improving the suspension and dispersion of a composition in water.
  • emulsifying agent when used in the singular in the present application, it means one or more emulsifying agents, the composition according to the invention may comprise one or more emulsifying agents.
  • texturing agent in the sense of the invention is meant any compound having the functions of stabilizer (improves stability), thickener (increases the viscosity) and / or emulsifier (improves the suspension).
  • texturizing agent when used in the singular in the present application, it means one or more texturing agents, the composition according to the invention may comprise one or more texturing agents.
  • aromatic alcohol means an aromatic molecule having an OH hydroxyl group attached to a carbon of a benzene ring.
  • Aromatic alcohol is also called phenol.
  • aromatic alcohol may be used interchangeably in the singular or the plural in the present application. Whether used singular or plural, it is always necessary to hear at least one aromatic alcohol that is to say one or more aromatic alcohols, the composition according to the invention may comprise one or more aromatic alcohols.
  • anti-insect in the sense of the invention is meant any inhibitory action and / or destructive insects and pests.
  • antimicrobial in the sense of the invention is meant any inhibitory action and / or destructive bacterial, fungal, parasitic and viral.
  • compound in the sense of the invention is meant a molecule or a mixture of molecules.
  • acid-base effervescent pair means the combination, the combination of an acid and a base capable of causing an effervescent phenomenon when said pair is put in solution.
  • acid-base pair effervescent when used in the singular in the present application, it means one or more acid-base pairs, the composition according to the invention may comprise one or more acid-base pairs.
  • dispenser in water in the sense of the invention is meant capable of dispersing, of solubilizing in water without forming non-dispersible masses, especially in the sprinkler irrigation water of plants or watering animals
  • essential oil within the meaning of the invention is meant any extract obtained from one or more aromatic plant (s), preferably the concentrated and hydrophobic liquid volatile aromatic compounds (odérisings) of a plant.
  • An essential oil may in particular be obtained by mechanical extraction and steam distillation or by dry distillation.
  • essential oil is also meant products identical to those described above but obtained by chemical synthesis.
  • mixture containing an aromatic alcohol within the meaning of the invention means any mixture of molecules comprising at least one aromatic alcohol. It may be preferentially one or more essential oil (s) or one or more mixture (s) of molecules contained in one or more essential oil (s) or a mixture of one or more essential oils with one or more mixture (s) of molecules contained in one or more essential oils.
  • mixture containing an aromatic alcohol means one or more mixtures containing an alcohol aromatic composition
  • the composition according to the invention may comprise one or more mixtures containing an aromatic alcohol.
  • stable product within the meaning of the invention means a product whose molecular composition and texture, color and efficiency are constant over time.
  • solid means a non-liquid form that is preferably uniform: powder, pellet or tablet.
  • the invention therefore relates to a composition in solid form, stable and dispersible in water.
  • composition according to the invention may especially be in the form of powder, pellets or tablets.
  • composition according to the invention comprises at least one aromatic alcohol or at least one mixture containing at least one aromatic alcohol.
  • Said at least one aromatic alcohol is a natural or synthetic aromatic alcohol.
  • said at least one aromatic alcohol is mono, di or sesquiterpeniques. It may in particular be chosen from thymol, menthol, eugenol, carvacrol and cinnamaldehyde.
  • the composition comprises at least one aromatic alcohol contained in an essential oil, and preferably the composition according to the invention comprises at least one essential oil, such as for example the essential oil of thyme, oregano , clove, mint.
  • Said at least one aromatic alcohol and / or said at least one mixture comprising at least one aromatic alcohol, present in the composition according to the invention play a role of active principle. They have effects and efficiencies that vary according to their nature, but they preferably have antibacterial and / or anti-insect activity, as is the case in particular aromatic alcohols chosen from thymol, menthol, eugenol, carvacrol and cinnamaldehyde.
  • the aromatic alcohol or the mixture comprising at least one aromatic alcohol represents between 0.1 and 25% by weight of the composition.
  • the composition according to the invention also comprises at least one emulsifying agent and / or an oil.
  • the emulsifying agent and / or the oil are preferably chosen from vegetable oils, mineral oils, soy lecithin, cellulose, pectin and glycerol.
  • Said at least one emulsifying agent and / or oil makes it possible in particular to liquefy and / or maintain in suspension the aromatic alcohol when it is dissolved. Indeed ; Emulsifiers and / or oils interact with both aromatic alcohol molecules and water molecules, which prevents aromatic alcohol molecules from floating on the surface of the water.
  • the emulsifying agent and / or the oil represents between 0.01 and 2% by weight of the composition.
  • composition according to the invention in addition to these first two constituents, also comprises at least one texturing agent. It is preferably chosen from locust bean gum, guar gum and cassia gum.
  • Said at least one texturing agent makes it possible in particular to improve the stabilization of the aromatic alcohols present in the composition both during storage and during dissolution.
  • the texturing agent allows, at the time of manufacture, to set the aromatic alcohols and emulsifiers and / or oils that are liquid and therefore to obtain a sieving powder.
  • the volatile aromatic alcohols remain fixed on the texturizing agents and do not evaporate.
  • the texturizing agents create a viscosity that promotes the dispersion of aromatic alcohols and prevents them from floating.
  • said at least one texturing agent represents between 5 and 12% by weight of the composition.
  • the ratio of the gum must not exceed 12%, preferably 10%, in the final composition, if not once in solution, the texturing agent may form a paste difficult to disperse.
  • the composition according to the invention also comprises at least one effervescent acid-base pair. It is preferentially chosen from the following acid-base pairs: sodium bicarbonate-citric acid, calcium bicarbonate-citric acid, potassium bicarbonate-citric acid, sodium bicarbonate-tartaric acid, calcium bicarbonate-tartaric acid, potassium bicarbonate - tartaric acid, sodium bicarbonate-maleic acid, sodium bicarbonate-maleic acid, potassium bicarbonate-maleic acid, sodium bicarbonate-ascorbic acid, calcium bicarbonate-ascorbic acid and potassium bicarbonate-ascorbic acid.
  • the couple's acid effervescent represents between 20 and 25% by weight of the composition and the base of the effervescent couple represents between 60 and 74.89% by weight of the composition.
  • Said at least one effervescent acid-base pair present in the composition in particular makes it possible to improve the dissolution of the aromatic alcohol once in solution.
  • said at least one effervescent acid-base pair represents between 50 and 94.89% by weight of the composition.
  • composition according to the invention consists exclusively of:
  • emulsifying agent s
  • oil s
  • one or more effervescent acid-base couple (s).
  • composition according to this variant may in particular be constituted as follows:
  • the aromatic alcohol (s) or the mixture (s) of aromatic alcohol (s) represent (s) between 0.1 and 25% by weight of the composition
  • the emulsifying agent (s) and / or the oil (s) represent (s) between 0.01 and 2% by weight of the composition
  • the texturizing agent (s) represents (s) between 5 and 12% by weight of the composition
  • the effervescent acid-base pair (s) represent (s) between 61 and 94.89% by weight of the composition.
  • the composition according to the invention comprises at least one other compound, such as for example at least one compound chosen from vitamins, minerals, hormones, dyes, etc.
  • composition according to the invention can be obtained by any suitable method for obtaining a composition in solid form with the aforementioned constituents.
  • stirring in particular in a tank with agitator rotating between 30 and 120 revolutions per minute, preferably for 5 to 45 minutes, at a temperature of between 40 and 60 ° C., and / or
  • This first step makes it possible to obtain a good dissolution of the aromatic alcohols, without any problem of recrystallization.
  • the solution is then added to a powder containing at least one texturing agent and an effervescent acid-base pair, preferably under the following conditions:
  • stirring in particular in a mixer / mixer, still more preferably for 10 to 40 minutes, and / or
  • the texturing agent makes it possible to stabilize the volatile molecules by absorption in the final composition.
  • the effervescent acid-base pair improves the dissolution of the composition which can be carried out without necessarily resorting to manual or mechanical agitation.
  • the initial powder consisting of the texturizing agent and the acid-base pair progressively absorbs the liquid consisting of the aromatic alcohol and the emulsifying agent and / or oil until a powder sometimes containing small lumps. These little lumps are converted into powder by the action of the calibrator; the calibration is done after the powder has been removed from the mixer. (The final powder obtained after calibration is preferably stored in hermetically sealed bags away from heat and humidity at room temperature).
  • the composition according to the invention can be used for different applications.
  • the solid composition according to the invention is preferably dissolved.
  • the composition / water ratio is between 100g per 1000 liters of water up to 25 kg per 1000 liters of water.
  • the aromatic alcohols have antibacterial and / or antifungal and / or antiviral and / or anti-insect properties.
  • the invention therefore aims in particular at using a composition according to the invention as a phytosanitary product, in particular for preventing and / or controlling plant diseases (all or part of the plants) caused by fungi, bacteria, bacteria viruses, nematodes and / or pests.
  • composition according to the invention can be used in irrigation water or leaf sprinkling.
  • Plant diseases caused by bacteria for which the composition according to the invention is particularly useful in prevention and / or treatment are preferably chosen from soft rot caused by Erwinia species, bacterial canker caused by Pseudomonas species or gall. snout caused by Agrobacterium species.
  • the plant diseases caused by fungi for which the composition according to the invention is particularly useful in prevention and / or treatment are preferably chosen from Fusarium wilt caused by Fusarium species, late blight caused by Phytophthora species, powdery mildew caused by fungi. by the species Podosphaera and Oidium, Alternaria caused by Alternaria species, sooty mold caused by Alternaria and Cladosporium species, or Botrytis gray mold.
  • the pests causing plant diseases against which the composition according to the invention is particularly useful in prevention and / or treatment are chosen from aphids, midges, soil mites or noctuids.
  • composition according to the invention can be used specifically to prevent and / or fight against post-harvest diseases of fruits, vegetables and / or flowers caused by fungi, bacteria, viruses, nematodes and / or pests. .
  • the composition according to the invention can be used to prevent and / or fight against citrus rot caused by Penicillium and Geotrichum species, or to prevent and / or fight against the fungal deterioration of dates caused by Aspergillus species.
  • composition according to the invention can also be used for antifungal treatment during the coating of seeds, in particular seeds selected from wheat, barley, lentils, chickpeas and beans.
  • composition according to the invention can be used as a phytosanitary product for:
  • composition according to the invention can also advantageously be used to stimulate plant growth, in particular to stimulate rhizogenesis in plants.
  • composition according to the invention can be used directly on objects, floors, walls, etc., in particular for:
  • composition according to the invention can also be used as a bath for decontaminating animal carcasses in slaughterhouses or for decontaminating poultry eggs before placing them in incubators.
  • composition according to the invention is particularly effective and can be used to disinfect reusable medical devices, in particular fibroscopes, colonoscopes, bronchoscopes and sinuscopes.
  • reusable medical devices in particular fibroscopes, colonoscopes, bronchoscopes and sinuscopes.
  • the composition can also be used:
  • the composition according to the invention can therefore be used for many applications. It has the advantage of being in solid and stable form which allows long-term storage of at least two years and easy and economical transportation. In addition, the composition is very easily dispersible in water, which allows an easy and economical use in solution.
  • compositions according to the invention uses and test results demonstrating their effectiveness.
  • Example 1 The composition of Example 1 consists of:
  • Example 2 The composition of Example 2 consists of:
  • This composition is obtained by the implementation of the following steps: 15 g of menthol are preheated to 50 ° C and mixed with 0.2 ml of mineral oil, then the mixture is added to the combination 10 g of guar gum, 50.54 g of potassium bicarbonate and 24.26 g of tartaric acid. The whole is suspended in 10 l of water.
  • Example 3 The composition of Example 3 consists of:
  • Example 4 The composition of Example 4 consists of:
  • Aromatic alcohols do not readily disperse in water due to their hydrophobic nature.
  • the prior art proposes a method for dispersing these compounds by the addition of a surfactant and a solvent (WO2009124392A1), but this method is not suitable because it is known that surfactants and solvents decrease the activity of phenolic compounds (Remmal A., Bouchikhi T., Tantaoui-Elaraki A., Ettayebi M. (1993) Inhibition of antibacterial activity of essential oils by Tween 80 and ethanol in liquid medium J. Pharm. 352-356).
  • certain aromatic alcohols such as thymol or menthol, are in crystallized form at room temperature and once in contact with water, if one tries to make them liquid by heating them, they recrystallize.
  • composition according to the invention associating the aromatic alcohols with a texturizing agent, an emulsifying agent (and / or an oil) and an effervescent acid-base pair makes it possible at the same time to prevent the recrystallization of the aromatic alcohols in crystallized form, from ensure the stability of the aromatic alcohols and the composition, its homogeneity and facilitate its dispersion during its dissolution.
  • the shape and dispersion in water of the composition of Example 1 was evaluated in comparison with other compositions comprising an aromatic alcohol alone or with only one or more other constituents of the composition according to the invention.
  • composition Cl consists of 15% of Thymol only.
  • This composition is obtained by suspending 15 g of Thymol in 10 l of water.
  • composition C2 constituted by:
  • composition C3 constituted by:
  • the mixture is then added to the combination of sodium bicarbonate and citric acid,
  • composition C4 constituted by:
  • Example 1 In order to evaluate the effectiveness of the composition according to the invention (Example 1). It has been tested in vitro on several strains of bacteria, yeasts and mold causing disease and damage in plants.
  • strains tested in this study were isolated, purified and identified.
  • 11 strains of fungal origin including 5 of the genus Fusarium, one of the genus Penicillium, one of the genus Geotrichum, one of the genus Alternaria, one of the genus Sclerotonia and the last of the genus Helminthosporium.
  • Two strains of yeast origin one of the genus Candida and the other of the genus Saccharomyces. The two remaining strains are of bacterial origin.
  • the culture media used are: Sabouraud dextrose agar and broth (Biokar) for the cultivation and testing of the antifungal activity of fungal strains.
  • the culture media were prepared according to the instructions of the supplier, different concentrations of the composition were used to determine the MIC (minimum inhibitory concentration) in an agar medium and in a liquid medium, the CMF (minimum fungicidal concentration) in a liquid medium. using the macrodilution technique.
  • agar medium In flasks containing 60 ml of the appropriate medium, autoclaved for 20 minutes at 121 ° C. and cooled to 45 ° C., different amounts of the composition of Example 1 are added, making it possible to obtain the final concentrations: (0.41, 0.82, 1.65, 3.33, 6.67, 13.34, 26.68 and 53.36 g / l). Negative controls containing the medium alone are also prepared, the flasks are then poured into petri dishes (90 ⁇ 16 mm) and allowed to cool at 4 ° C. for 24 hours, then inoculated with a volume of 10 .mu.l of a stock suspension. 10 6 spores / ml of the appropriate mold. After diffusion of the deposited drop, the dishes are incubated at 27 ° C. for 5 days. The test is carried out in triplicate and repeated three times.
  • liquid medium Sabouraud culture broth sterilized by autoclaving for 20 min at 121 ° C and cooled to room temperature was dispensed into sterile test tubes. Then, increasing concentrations of the composition according to the invention of: (0.41, 0.82, 1.65, 3.33, 6.67, 13.34, 26.68 and 53.36 g / l) have been tested. All the tubes were inoculated with 20 ⁇ l of the mother suspension of spores (10 6 spores / ml). The final concentration in each tube is calculated for a final volume of 5ml. The tubes are thus incubated at 27 ° C. with stirring at 130 rpm for 5 days.
  • CMF Comparative Mortality Figure
  • the test of the antibacterial activity of the composition according to the invention was carried out following the same procedure as that carried out in the test of the antifungal activity except that the culture medium used for this test is Mueller Hinton (agar and broth). ), the inoculum of bacteria inoculated is of the order of 10 7 bacteria / ml and the incubation temperature is of the order of 37 ° C.
  • Tobleou 2 Thieves of MIC and CMF of the composition according to the invention for fungal species
  • composition proved very effective against the fungal species used in this test.
  • MIC and CMB values obtained with the composition of Example 1 in the test of antifungal activity on bacterial species are presented in Table 3.
  • Example 1 In order to evaluate the effectiveness of the composition according to the invention of Example 1, it has been tested in vitro or in vivo on several insects, parasites and nematodes.
  • Macrosiphum rosae (rose-flowering aphid) were removed using a fine brush and brought into contact with different doses of the composition according to the invention.
  • a paper towel absorbent soaked with solutions containing increasing doses of the composition according to the invention (1.67; 3,33; 6,67 and 13,34 g / 1).
  • Petri dishes served as controls containing normal water. 20 adults were put in each box, the experiment was established in triplicate.
  • Example 1 the in vivo efficacy of the composition according to the invention (Example 1) was tested on the species Rhizoglyphus callae (soil mite) in their usual medium which is soil.
  • Rhizoglyphus callae soil mite
  • flower pots freesia
  • solutions containing increasing doses of the composition according to the invention (1 67, 3.33, 6.67 and 13.34 g / l).
  • Control pots received only water as irrigation solution, the experiment was repeated three times. After a few hours of contact with the irrigation solution, a few grams of soil from each pot were taken and suspended in water, an observation and a binocular magnifying glass count were made to determine the percentage. mortality for each dose used in this test.
  • composition according to the invention was also tested in vitro on nematodes and more specifically the species Heterodera spp from an infected soil (previously treated with different concentrations of the composition of Example 1).
  • the method used is that of Baerrman. It is a method of separating nematodes from soil particles according to their sizes and weights according to the following steps:
  • the nematodes thus counted are brought into contact with different doses of the composition according to the invention.
  • the dilutions used are:
  • Nt and Nm respectively represent the total number of insects and the number of dead insects. The results are shown in Table 4.
  • composition according to the invention generates a very powerful insecticidal effect.
  • the dose of 6.67 g / 1 was lethal for aphids and nematodes while the 3.33 g / 1 dose was effective against soil mites after only a few hours of contact.
  • composition according to the invention (Example 1) was tested in vivo on Fusarium vascular wilt caused by Fusgrium oxysporum sp dignthi. Eight seedlings per lot of the Martina variety were used in this test.
  • Fusarium spores (10 6 spores / ml) were inoculated into the siliceous sand near the roots of each plant.
  • PNINT Uninfected, untreated plants.
  • PIT 3.33 g / l Infected plants treated with 3.3 g / l of the composition according to the invention.
  • PIT 6.67 g / l Infected plants treated with 6.67 g / l of the composition according to the invention.
  • PIT 13.34 g / l Infected plants treated with 13.34 g / l of the composition according to the invention.
  • the dilutions used are:
  • the mode of application is an irrigation application.
  • Tobleou 6 Effect of the composition according to the invention on the growth of carnations infected by fusimiosis.
  • the 13.34 g / l dose was found to be too high for carnations, since it generated a phytotoxic effect on the aerial part and even on the root system of the plant.
  • composition in the irrigation water thus makes it possible to reduce the fungal load of the soil. This will have a positive impact on the health and well-being of the young plant that will develop.
  • Example 1 The stimulating effect of the growth of the composition according to the invention (Example 1) was also tested on carnation seedlings of the West diamond variety.
  • PT 1 g / 1 Plants treated with 1 g / 1 of the composition according to the invention.
  • PT 1.65 g / 1 Plants treated with 1.65 g / 1 of the composition according to the invention.
  • PT 3.33 g / 1 Plants treated with 3.33 g / 1 of the composition according to the invention.
  • the stimulating effect of the composition according to the invention was quantified by taking measurements of the agromorphological characters (the number of shoots, the distance between nodes, the number of nodes, the length of the stem, the diameter of stem and number of flower buds) after three months of treatment with three applications per week in irrigation water.
  • the dilutions used are:
  • the mode of application is by irrigation.
  • Table 7 Stimulating effect of the growth of the composition according to the invention on carnation seedlings
  • Example 1 The stimulating effect of the composition according to the invention (Example 1) was tested on seedlings of date palms resulting from the germination of date kernels of the Mejhoul variety.
  • One-leaf seedlings received different doses of the composition of Example 1 according to the invention (0; 1.65; 3.33; 6.67 g / l).
  • the seedlings were harvested and the fresh and dry weight of the root portion of each seedling was determined.
  • the dilutions used are:
  • the mode of application is by irrigation.
  • Table 8 Stimulating effect of the rhizogenesis of the composition according to the invention in date palm seedlings
  • a swab sample of eight dates from each box was taken.
  • the sampling area is 1 cm 2 per date.
  • the dilutions used are:
  • the mode of application is by soaking.
  • Table 9 Bacterial load contained in the dates treated with the composition according to the invention and those not treated (cfu / cm 2 )
  • Tables 9 and 10 respectively show the results of the bacterial load and the fungal load contained in the processed and untreated dates.
  • the 6.67 g / l dose was found to be the most effective since the dates soaked in this dose remain free of bacteria and fungi that can affect their storage for one month at room temperature.
  • composition according to the invention (Example 1) was also tested on the vase performance of cut flowers and more specifically carnations. To do this the carnation flowers were cut and equalized to 55 cm in length before being soaked in solutions containing two concentrations of the composition according to the invention (1.6 and 3.3 g / 1) immediately after harvesting.
  • the dilutions used are:
  • the mode of application is as follows: setting in vase.
  • composition according to the invention improves the vase performance of the cut flowers.
  • Example 1 The effectiveness of the composition according to the invention (Example 1) was tested on the microbial load (bacteria, yeasts and molds, parasites) of water used in watering poultry. The sample is transported to the laboratory and kept cool for the in vitro test.
  • microbial load bacteria, yeasts and molds, parasites
  • the culture media used are:
  • PCA Plate Count Agar
  • TSC Teryptone Sulphite Cycloserine Agar (Biokar) for cultivation and testing of antibacterial activity of anaerobic bacteria.
  • Wilson-blair agar (Biokar) for culture and testing of the antibacterial activity of salmonella.
  • the antibacterial activity test of the composition according to the invention was carried out as follows:
  • Example 1 Different concentrations of the composition of Example 1 (1 g / l, 2 g / l, 4 g / l) were added to the water sample. A negative control containing the water alone sample is also prepared.
  • the culture media were prepared according to the supplier's instructions, sterilized by autoclaving for 15 minutes at 121 ° C and cooled to 45 ° C. They were then poured into petri dishes (90 ⁇ 16 mm) and allowed to cool at 4 ° C for 24 hours and then inoculated with a volume of 100 ⁇ of the water sample. The plates are incubated at 37 ° C for 24h for revivable, total compliant aerobic bacteria, salmonella, staphylococci and anaerobic bacteria. For faecal conforms, the dishes are incubated at 44 ° C. for 24 hours.
  • the test of the antifungal activity of the composition according to the invention was carried out following the same protocol as that carried out in the antibacterial activity test, except that the incubation temperature is of the order of 27.degree. the incubation time is 3 to 5 days.
  • the pest control activity test a volume of ⁇ of water sample was placed between a glass slide and the Malassez cell. The number of cells in 10 rectangles was then counted.
  • composition according to the invention has also been tested in vivo on chicks. Twelve chicks per batch were used in this test. Throughout the test period, the temperature of the facility was adjusted to 28 ° C and the animals had free access to the water and feed that was available continuously.
  • the water used in this test is the surface water taken from the drinking water distribution tank that was used in the in vitro test.
  • each batch of chicks is weighed from the first day. Then, individual weighings are performed at the end of each phase. Average live weight is determined as follows:
  • Mean live weight (g) Weight of all chicks in a batch / Number of chicks in this batch
  • the gain in live weight the chicks of each batch were weighed on arrival for the calculation of average weight at startup. Subsequently, the weighings were carried out at the end of each rearing phase until the end of the experiment.
  • the weight gain is determined by the following formula:
  • the live weight gain (g) P2 - PI
  • the consumption index (IC) corresponds to the quantity of food necessary to produce 1 kilogram of live weight.
  • the IC is determined for each phase by the following formula:
  • IC Quantity of food consumed during a phase
  • Mortality rate mortality is recorded daily. The mortality rate is determined for each batch during a given phase by the following formula:
  • Mortality rate (%) number of dead chicks during a phase x 100
  • Tobleou 14 Effect of the composition according to the invention on the average live weight and the average weight gain
  • composition according to the invention on reducing the intestinal load of animals (broiler chicks)
  • Example 1 The effect of the composition according to the invention (Example 1) was tested on reducing the intestinal load (revivable aerobic bacteria and parasite load) of the broiler chicks for 35 days. Every 7 days, droppings samples from the different batches were taken and solubilized in physiological saline (1 g of droppings in 9 ml of physiological saline).
  • the culture medium used is:
  • PCA Platinum Count Agar
  • Biokar PCA (Plate Count Agar) for the culture of revivable aerobic bacteria.
  • the culture medium was prepared according to the instructions of the supplier, sterilized by autoclaving for 15 minutes at 121 ° C. and cooled to 45 ° C., then poured into Petri dishes (90 to 16 mm) and allowed to cool. at 4 ° C for 24 hours, then inoculated with a volume of 100 ⁇ of the sample. The dishes are incubated at 37 ° C. for 24 hours. The test is performed in triplicate.
  • Tobleou 16 Effect of the composition according to the invention on the reduction of the intestinal charge in revivable aerobic bacteria
  • Second sampling carried out under the same conditions and respecting the same steps as during the first sampling.
  • Tobleou 19 Action ontibocterian between the two products tested.
  • the results obtained detected the presence of a bacterial carpet before disinfection; the same result was obtained after disinfection with glutaraldehyde, whereas after disinfection by the composition according to the invention, the bacterial load was only 50 CFU / ml with the concentration 1/1000 and zero with the concentration 1/500.
  • composition according to the invention on post-harvest fruit treatment of clementines (variety "Afourar") Drencher and Waxing. Fruits infected experimentally by spore injection
  • Lot 1 contains 10 fruits, washed with a slurry consisting of chemical fungicides (Imazalil at a dose of 500cc / hl and Orthophenylphenol at a dose of 750 ppm).
  • chemical fungicides Imazalil at a dose of 500cc / hl and Orthophenylphenol at a dose of 750 ppm.
  • Lot 2 contains 10 fruits, washed with a slurry constituted by the composition according to the invention at a dose of 3kg per ton of water.
  • Lot 3 contains 10 fruits, waxed by a mixture of wax and imazalil at a dose of 3000ppm, then dried with hot air (50 ° C).
  • Lot 4 contains 10 fruits, waxed with a mixture of wax and the composition according to the invention at a dose of 10 kg per ton, and then dried (50 ° C.).
  • Lot 5 contains 10 fruits washed by a slurry consisting of chemical fungicides (Imazalil at a dose of 500cc / hl and Orthophenylphenol at a dose of 750 ppm), after drying they were waxed with a mixture of wax and the imazalil at a dose of 3000ppm, and then dried (50 ° C).
  • chemical fungicides Imazalil at a dose of 500cc / hl and Orthophenylphenol at a dose of 750 ppm
  • Lot 6 contains 10 fruits washed with a slurry constituted by the composition according to the invention at a dose of 3 kg per ton of water, after drying they were waxed with a mixture of the wax and the composition according to the invention at a dose of 10kg per ton, then dried (50 ° C).
  • the washing was carried out using a hand shower that allows the fruits to be washed in a manner comparable to that of the Drencher in the packing station.
  • the waxing was applied by nebulisation in a manner comparable to that of a waxing system in the packing station.
  • each fruit of the six lots was infected by injection of a volume of 100 ⁇ l of a suspension of spores of the strain Penicillium digitatum (10 6 spores / ml), using a syringe equipped with a very fine needle (30 gauges), so inclined tangential to the surface of the albedo.
  • the injection site is marked by a circle marked with an indelible marker.
  • the fruits were then incubated at a temperature of 20 ° C.
  • results obtained show that the rot starts from the third day after the infection in the batch washed with the chemical fungicides, whereas in batch washed with the composition according to the invention the rot only begins after four days.
  • results also show that the decay in the batch washed with the chemical fungicides develops more rapidly with a diameter of 3.2 cm ⁇ 0.7 after 7 days, compared to the batch washed with the composition according to the invention where the diameter rot only reaches 2 cm ⁇ 0.6 after 7 days.
  • results also show a delay in the appearance of spores in the batch treated with the composition according to the invention in comparison with the batch treated with chemical fungicides.
  • the preparation of the invention provides better protection than chemical fungicides when used for washing and waxing fruit experimentally infected with an extreme number of spores located in the injection site.
  • Lot 2 10 fruits washed with a slurry constituted by the composition according to the invention at a dose of 3 kg per ton of water, then waxed with a mixture of wax plus the preparation of the invention at a dose of 10 kg per ton then dried at 50 ° C
  • Tobleou 20 Percentage of the surface rots on fruits treated with the composition of the invention compared to fruits treated with imazalil and untreated fruits:
  • composition according to the invention allows preservation of fruit for 12 days without rotting while for the group treated with chemical fungicides rot appeared in the 6 th day. For lot without treatment, rot appeared in the 4 th day.
  • Field trials were conducted on a citrus farm. In these tests, a batch of four cases of fruit of the variety "Afourar” soaked directly after their picking in the water containing the preparation of the invention at a dose of 1 kg per ton, another batch of 4 cases of fruit dipped directly after picking in water alone. 30 fruits were taken from each lot, and the fungal load of each fruit was evaluated as a number of spores (colony-forming units) per square centimeter of fruit surface.
  • results obtained show that the fungal load of fruits soaked in a solution with the composition according to the invention is of the order of 10 5 spores per cm 2 , lower than the fungal load of fruits soaked in water alone which reaches 10 8 spores per cm 2 .
  • results show that the fruits soaked in the preparation of the invention will arrive at the packing station with a lower initial load (1000 times lower) than that of the fruits soaked in water alone.
  • Tobleou 21 Fruit fungal load treated with the composition according to the invention or with chemical fungicides in the drencher step and the waxing step. Load expressed as number of spores (CFU / cm2) per cm2
  • results obtained show that there is a significant difference in the fungal load of the fruits treated with the composition according to the invention which is a thousand times lower than that of the fruits treated with the chemical fungicides after the drencher step and after step of waxing.
  • a second batch of 6 tons of fruits of the variety "Afourar" (batch composition) was washed with a slurry containing the water and the composition according to the invention at the dose of 3 kg per ton, and waxed with a mixture of the wax and the composition according to the invention at the dose of 5 kg per ton.
  • two sub-lots of 15 crates were taken from each lot and distributed as follows:
  • Sub-batch a 15 boxes of the Imazalil lot, stored at 8 ° C.
  • Sub-batch b 15 cases of the composition batch stored at 8 ° C.
  • sub batch c 15 boxes of the Imazalil lot stored at 25 ° C.
  • Sub-batch d 15 cases of the batch composition stored at 25 ° C. Sub lots were checked once a week for one month. Counting the rotten fruit in each batch reveals the evolution of the decay rate as a function of the storage temperature and the treatment used.
  • results obtained show that the rate of rotting in sub-batches preserved at a temperature of 25 ° C is higher compared to sub-batches kept at a temperature of 4 ° C.
  • results also show that the fruits treated with the composition according to the invention have a decay rate between 0.5% and 2.82% at a temperature of 4 ° C. and between 4.5% and 6.91% at 25 ° C. ° C, this rate is lower compared to the decay rate in fruits treated with chemical fungicides, which varies between 1.35% and 4.67% at a storage temperature of 4 ° C, and between 4.62% % and 9.68% at a temperature of 25 ° C.
  • Tests were carried out in a citrus packing station. In these tests, the ambient air of different areas of the station was sprayed with the preparation of the invention at a dose of 10 kg per ton of water twice a day; between 12 pm and 1 pm and at 6 pm Air samples (petri dish with PDA medium opened for 5 minutes) were made to evaluate the fungal load of the ambient air of each zone of the station before and after treatment and this four times a day:
  • Tobleou 23 number of colonies per petri dish
  • the growth rate of the three strains is monitored daily by measuring the diameter of the colonies.
  • Table 24 Evolution of the thallus diameter of the three strains cultivated in the presence of different concentrations of the composition according to the invention
  • composition according to the invention exerts a very strong partial inhibition on the three strains studied at the concentration of 0.75 g / l which corresponds to a treatment with 0.75 kg per ton of the composition. From the 1.25 concentration, there is complete inhibition on the three strains studied.
  • composition according to the invention has a very high efficacy against the main fungi responsible for citrus rot in post-harvest.
  • Lot 1 containing 120 tomatoes washed with a slurry containing the water and the composition according to the invention at a dose of 0.5 g / l.
  • a sub-lot has: 60 tomatoes from lot 1, stored at 25 ° C
  • a sub-lot d 60 tomatoes of lot 1, stored at 8 ° C Tomatoes from each sub-lot were monitored daily, and the percentage of dehydrated tomatoes was noted.
  • Table 25 Percentage of rotten cherry tomatoes in the batch washed with the composition of the invention, in comparison with the batch washed with chlorine, depending on storage conditions
  • results obtained show that the percentage of dehydrated tomatoes in sublots kept at a temperature of 25 ° C is higher compared to sub-batches kept at a temperature of 8 ° C.
  • results also show that the batch treated with the composition according to the invention has a lower percentage of dehydrated tomatoes compared to the dehydrated tomato level in the batch treated with chlorine.
  • Lot 1 containing 20 cherry tomatoes washed the composition according to the invention at a dose of 0.5 g / l.
  • Lot 3 containing 20 cherry tomatoes washed with water alone (Witness). After treatment, the tomatoes of each batch were wounded in the peduncle by a fine syringe (22G xl 1 ⁇ 4 "), and kept at a temperature of 27 ° C.
  • Tomatoes were monitored daily, and the percentage of tomatoes that showed peduncle rot was noted.
  • Tobleou 26 Percentage of cherry tomatoes that show peduncle rot depending on the treatment used

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Abstract

L'objet de l'invention est une composition sous forme solide, stable et dispersible dans l'eau, caractérisée en ce qu'elle comprend : au moins un alcool aromatique, au moins un agent émulsifiant et/ou une huile, - au moins un agent texturant, et au moins un couple acide-base effervescent. L'invention vise également ses utilisations, en particulier comme produit phytosanitaire.

Description

COMPOSITION STABLE SOLIDE A BASE DE COMPOSE AROMATIQUE
ET UTILISATIONS
La présente invention se rapporte à une composition stable à base de composé aromatique naturel ou synthétique ainsi qu'à ses différentes utilisations, en particulier dans le domaine agricole.
Face à une population sans cesse croissante l'agriculture mondiale est confrontée à plusieurs défis notamment la demande accrue en denrées alimentaires. Or, le domaine agricole végétal et animal est sujet à plusieurs problèmes biotiques à savoir les maladies causées par les bactéries, les virus, les champignons, les nématodes et tous autres insectes et ravageurs. Pour pallier à ces problèmes la plupart des agriculteurs et des éleveurs utilisent des produits chimiques (pesticides et désinfectants) qui sont très nocifs pour la santé humaine et pour l'environnement.
Il est donc urgent et nécessaire de trouver une alternative à ces produits qui soit à la fois efficace contre les attaques biotiques des cultures et inoffensive pour l'homme et l'environnement.
Plusieurs alternatives ont été récemment proposées pour remplacer les pesticides et les désinfectants chimiques, en particulier :
l'utilisation de biopesticides microbiens (bactéries, champignons ou virus) mais ces produits présentent un coût élevé, sont non industrialisables à grande échelle, et il existe des risques importants de mutation et de développement de résistance,
le recours à des variétés de plantes résistantes en utilisant des gènes de résistance, mais ces produits ne sont pas satisfaisants notamment du fait de leur temps de développement important, de la qualité médiocre des fruits obtenus et des gènes qui sont très influencés par l'environnement et sont souvent mal exprimés,
les biopesticides à base d'extraits de plantes, mais ces produits ne sont pas non plus adaptés en raison à la fois de leur forme liquide qui rend l'entreposage assez délicat car il nécessite une température et une humidité précises, et à la fois du risque d'évaporation des principes actifs. Parmi les biopesticides à base d'extraits de plantes, plusieurs recherches ont porté sur les huiles essentielles et leurs composés majoritaires tels que thymol, carvacrol, eugénol notamment (KoulO. et al. (2008). Essential Oils as Green Pesticides: Potential and Constraints. Biopestic. Int. 4(1): 63-84;lsman, M.B. and Machial, CM. (2006). Pesticides basedon plant essential oils: from traditional practice tocommercialization. In M. Rai and M.C Carpinella(eds.), Naturally Occurring Bioactive Compounds,Elsevier, BV, pp 29-44). Ces composés ont en effet des propriétés très prometteuses. Cependant, ils présentent des problèmes liés à leur volatilité, à leur faible solubilité dans l'eau et à leur aptitude à être oxydés rapidement (Moretti MDL et al. (2002). Essential OU Formulations Useful as a New Tool for Insect PestControl. AAPS Pharm. Sci. Tech. 3 (2): 13). La volatilité de ces composés est à l'origine de leur faible durée de vie en solution. Ceci se répercute négativement sur la qualité de la formulation puisque les fabricants doivent en utiliser de grandes quantités ou utiliser des méthodes de stabilisation sophistiquées et onéreuses telles que la micro et la nano- encapsulation (WO2007063267A1), qui rend ces produits non compétitifs par rapport aux pesticides chimiques.
Le but de la présente invention est donc de trouver une solution à ces problématiques et de proposer en particulier une formulation stable comprenant des composés aromatiques de nature volatile ayant une activité antimicrobienne (antibactérienne, antifongique, antivirale et antiparasitaire) et/ou anti-insecte.
Pour y répondre, l'invention a pour objet une composition sous forme solide, stable et dispersible dans l'eau, comprenant :
- au moins un alcool aromatique ou au moins un mélange en contenant comme une huile essentielle,
- au moins un agent émulsifiant et/ou une huile,
- au moins un agent texturant, et
- au moins un couple acide-base effervescent.
Avantageusement, une telle composition :
est stable alors qu'elle comprend des molécules, à l'origine volatiles,
se présente sous forme solide, ce qui facilite son stockage, et
- est dispersible dans l'eau, ce qui permet son utilisation mélangée avec de l'eau avant utilisation. Les alcools aromatiques ont de nombreuses propriétés en fonction de leur formule chimique, et la composition selon l'invention peut être avantageusement utilisée en particulier comme produit phytosanitaire ou engrais, mais la composition selon l'invention peut également être utilisée pour d'autres applications comme par exemple anti-insecte ou comme antimicrobien pour aseptiser l'air ambiant, les mains, les bâtiments, les dispositifs médicaux réutilisables, etc.
D'autres caractéristiques et avantages de l'invention ressortiront de la description de l'invention, en détails, qui va suivre et des résultats d'essais réalisés avec l'invention démontrant son efficacité dans de nombreuses applications, résultats en particulier illustrés par les figures annexées qui représentent :
Figure 1 : une image de la composition selon l'invention de l'exemple 1, avant dispersion,
Figure 2 : une image de la composition C3 comparée à la composition selon l'invention dans le Tableau 1,
- Figure 3 : une image de la composition C4 comparée à la composition selon l'invention dans le Tableau 1.
Définitions
Par « agent émulsifiant » au sens de l'invention on entend tout composé capable d'améliorer la suspension et la dispersion d'une composition dans l'eau.
Lorsque le terme agent émulsifiant est utilisé au singulier dans la présente demande, il faut entendre un ou plusieurs agents émulsifiants, la composition selon l'invention pouvant comprendre un ou plusieurs agents émulsifiants.
Par « agent texturant » au sens de l'invention on entend tout composé ayant les fonctions de stabilisateur (améliore la stabilité), épaississant (augmente la viscosité) et/ou émulsifiant (améliore la suspension).
Lorsque le terme agent texturant est utilisé au singulier dans la présente demande, il faut entendre un ou plusieurs agents texturants, la composition selon l'invention pouvant comprendre un ou plusieurs agents texturants.
Par « alcool aromatique » au sens de l'invention on entend une molécule aromatique, possédant un groupe hydroxyle OH fixé sur un carbone d'un cycle benzénique. L'alcool aromatique est également appelé phénol. Le « terme alcool aromatique » peut être utilisé indifféremment au singulier ou au pluriel dans la présente demande. Qu'il soit utilisé au singulier ou au pluriel, il faut toujours entendre au moins un alcool aromatique c'est-à-dire un ou plusieurs alcools aromatiques, la composition selon l'invention pouvant comprendre un ou plusieurs alcools aromatiques.
Par « anti-insecte » au sens de l'invention on entend toute action inhibitrice et/ou destructrice des insectes et ravageurs.
Par « antimicrobien » au sens de l'invention on entend toute action inhibitrice et/ou destructrice des germes bactériens, fongiques, parasitaires et viraux.
Par « composé » au sens de l'invention on entend une molécule ou un mélange de molécules. Par « couple acide-base effervescent » au sens de l'invention on entend l'association, la combinaison d'un acide et d'une base capable de provoquer un phénomène effervescent lorsque ledit couple est mis en solution.
Lorsque le terme couple acide-base effervescent est utilisé au singulier dans la présente demande, il faut entendre un ou plusieurs couples acide-base, la composition selon l'invention pouvant comprendre un ou plusieurs couples acide-base.
Par « dispersible dans l'eau » au sens de l'invention on entend capable de se disperser, de se solubiliser dans l'eau sans former de masses non dispersibles, en particulier dans l'eau d'irrigation d'aspersion des plantes ou d'abreuvement des animaux
Par « huile essentielle » au sens de l'invention on entend tout extrait obtenu à partir d'une ou plusieurs plante(s) aromatique(s), préférentiellement le liquide concentré et hydrophobe des composés aromatiques (odérifiants) volatils d'une plante. Une huile essentielle peut être notamment obtenue par extraction mécanique et un entraînement à la vapeur d'eau ou par distillation à sec. Par « huile essentielle » on entend également des produits identiques à ceux décrits ci-avant mais obtenus par synthèse chimique.
Par « mélange contenant un alcool aromatique » au sens de l'invention on entend tout mélange de molécules comprenant au moins un alcool aromatique. Il peut s'agir préférentiellement d'une ou plusieurs huile(s) essentielle(s) ou d'un ou plusieurs mélange(s) de molécules contenues dans une ou plusieurs huile(s) essentielle(s) ou d'un mélange d'une ou plusieurs huiles essentielles avec un ou plusieurs mélange(s) de molécules contenues dans une ou plusieurs huiles essentielles.
Lorsque le terme mélange contenant un alcool aromatique est utilisé au singulier dans la présente demande, il faut entendre un ou plusieurs mélanges contenant un alcool aromatique, la composition selon l'invention pouvant comprendre un ou plusieurs mélanges contenant un alcool aromatique.
Par produit « stable » au sens de l'invention on entend un produit dont la composition moléculaire ainsi que la texture, la couleur et l'efficacité sont constantes dans le temps. Par « solide » au sens de l'invention on entend une forme non liquide préférentiellement uniforme : poudre, pellet ou comprimé.
Description détaillée de l'invention
L'invention a donc pour objet une composition sous forme solide, stable et dispersible dans l'eau.
La composition selon l'invention peut notamment se présenter sous forme de poudre, pellets ou de comprimés.
La composition selon l'invention comprend au moins un alcool aromatique ou au moins un mélange contenant au moins un alcool aromatique.
Ledit au moins un alcool aromatique est un alcool aromatique naturel ou de synthèse.
Préférentiellement ledit au moins un alcool aromatique est mono, di ou sesquiterpeniques. Il peut en particulier être choisi parmi le thymol, le menthol, l'eugénol, la carvacrol et le cinnamaldéhyde.
Selon un mode de réalisation particulièrement adapté, la composition comprend au moins un alcool aromatique contenu dans une huile essentielle, et préférentiellement la composition selon l'invention comprend au moins une huile essentielle, comme par exemple l'huile essentielle de thym, d'origan, de clou de girofle, de menthe.
Ledit au moins un alcool aromatique et/ou le dit au moins un mélange comprenant au moins un alcool aromatique, présents dans la composition selon l'invention jouent un rôle de principe actif. Ils présentent des effets et des efficacités qui varient en fonction de leur nature, mais ils présentent préférentiellement une activité antibactérienne et/ou anti-insecte, comme c'est le cas en particulier des alcools aromatiques choisis parmi le thymol, le menthol, l'eugénol, la carvacrol et le cinnamaldéhyde.
De façon préférée, l'alcool aromatique ou le mélange comprenant au moins un alcool aromatique représente entre 0,1 et 25% en poids de la composition.
En plus de l'alcool aromatique (ou du mélange en contenant), la composition selon l'invention comprend également au moins un agent émulsifiant et/ou une huile. L'agent émulsifiant et/ou l'huile sont préférentiellement choisis parmi les huiles végétales, les huiles minérales, la lécithine de soja, la cellulose, la pectine et le glycérol.
Ledit au moins un agent émulsifiant et/ou huile permet en particulier de liquéfier et/ou de maintenir en suspension l'alcool aromatique lorsqu'il est mis en solution. En effet ; les émulsifiants et/ou huiles interagissent à la fois avec les molécules d'alcool aromatique et avec les molécules d'eau, ce qui empêche les molécules d'alcool aromatique de flotter à la surface de l'eau.
De façon préférée, l'agent émulsifiant et/ou l'huile représente entre 0,01 et 2% en poids de la composition.
La composition selon l'invention, en plus de ces deux premiers constituants, comprend aussi au moins un agent texturant. Il est préférentiellement choisi parmi la gomme de caroube, la gomme de guar et la gomme de casse.
Ledit au moins un agent texturant permet notamment d'améliorer la stabilisation des alcools aromatiques présents dans la composition à la fois lors du stockage et lors de la mise en solution. En effet, l'agent texturant permet, au moment de la fabrication, de fixer les alcools aromatiques et les émulsifiants et/ou huiles qui sont liquides et par conséquent d'obtenir une poudre tamisable. Lors du stockage, les alcools aromatiques volatils restent fixés sur les agents texturants et ne s'évaporent pas. Au moment de la mise en solution, les agents texturants créent une viscosité qui favorise la dispersion des alcools aromatiques et les empêchent de flotter.
De façon préférée, ledit au moins un agent texturant représente entre 5 et 12% en poids de la composition. Le ratio de la gomme ne doit pas dépasser 12%, préférentiellement 10%, dans la composition finale, sinon une fois en solution, l'agent texturant risque de former une pate difficile à disperser.
Enfin, la composition selon l'invention comprend également au moins un couple acide-base effervescent. Il est préférentiellement choisi parmi les couples acide-base suivants : bicarbonate de Sodium-acide citrique, bicarbonate de Calcium-acide citrique, bicarbonate de Potassium-acide citrique, bicarbonate de Sodium-acide tartrique, bicarbonate de Calcium- acide tartrique, bicarbonate de Potassium-acide tartrique, bicarbonate de Sodium-acide maléique, bicarbonate de Sodium-acide maléique, bicarbonate de Potassium-acide maléique, bicarbonate de Sodium-acide ascorbique, bicarbonate de Calcium-acide ascorbique et bicarbonate de Potassium-acide ascorbique. Préférentiellement, l'acide du couple effervescent représente entre 20 et 25% en poids de la composition et la base du couple effervescent représente entre 60 et 74,89% en poids de la composition.
Ledit au moins un couple acide-base effervescent présent dans la composition notamment permet d'améliorer la dissolution de l'alcool aromatique une fois en solution.
De façon préférée, ledit au moins un couple acide-base effervescent représente entre 50 et 94,89% en poids de la composition.
Selon une variante, la composition selon l'invention est constituée exclusivement par :
un ou plusieurs alcool(s) aromatique(s) ou un ou plusieurs mélange(s) contenant un ou plusieurs alcool(s) aromatique(s),
- un ou plusieurs agent(s) émulsifiant(s) et/ou une ou plusieurs huile(s),
un ou plusieurs agent(s) texturant(s), et
un ou plusieurs couple(s) acide-base effervescent(s).
Une composition selon cette variante, peut notamment être constituée comme suit :
le (ou les) alcool(s) aromatique(s) ou le (ou les) mélange(s) d'alcool(s) aromatique(s) représente(nt) entre 0,1 et 25% en poids de la composition, le (ou les) agent(s) émulsifiant et/ou la (ou les) huile(s) représente(nt) entre 0,01 et 2% en poids de la composition,
le (ou les) agent(s) texturant représente(nt) entre 5 et 12% en poids de la composition,
- le (ou les) couple(s) acide-base effervescent(s) représente(nt) entre 61 et 94,89% en poids de la composition.
Selon une autre variante, en plus dudit au moins un alcool aromatique (ou au moins un mélange contenant au moins un alcool aromatique), dudit au moins un agent émulsifiant et/ou huile, dudit au moins un agent texturant, et dudit au moins un couple acide-base effervescent, la composition selon l'invention comprend au moins un autre composé, comme par exemple au moins un composé choisi parmi les vitamines, les minéraux, les hormones, les colorants, etc.
La composition selon l'invention peut être obtenue par tout procédé adapté permettant d'obtenir une composition sous forme solide avec les constituants précités.
II peut s'agit notamment d'un procédé comprenant les étapes suivantes :
au moins un alcool aromatique ou au moins un mélange contenant au moins un alcool aromatique, ledit alcool ou ledit mélange étant sous forme liquide ou cristallisée, est mélangé avec au moins un agent émulsifiant et/ou une huile jusqu'à obtention d'une solution limpide, préférentiellement dans les conditions suivantes :
o sous agitation, en particulier dans une cuve avec agitateur tournant entre 30 et 120 tours par minutes, préférentiellement pendant 5 à 45 minutes, o à une température comprise entre 40 et 60°C, et/ou
o sans lumière, à l'obscurité.
Cette première étape permet d'obtenir une bonne dissolution des alcools aromatiques, sans aucun problème de recristallisation.
- la solution est ensuite ajoutée à une poudre contenant au moins un agent texturant et un couple acide-base effervescent, préférentiellement dans les conditions suivantes :
o sous agitation, en particulier dans un mixeur/mélangeur, encore plus préférentiellement pendant 10 à 40 minutes, et/ou
o à température ambiante, et/ou
o sans lumière, à l'obscurité.
L'agent texturant permet de stabiliser les molécules volatiles par absorption dans la composition finale. Le couple acide-base effervescent améliore la mise en solution de la composition qui peut être effectuée sans avoir nécessairement recours à une agitation manuelle ou mécanique.
Pendant l'agitation dans la mélangeuse mécanique, la poudre initiale constituée par l'agent texturant et le couple acide-base absorbe progressivement le liquide constitué par l'alcool aromatique et l'agent émulsifiant et/ou huile jusqu'à obtention d'une poudre contenant parfois des petits grumeaux. Ces petits grumeaux sont convertis en poudre par l'action du calibreur ; le calibrage se fait après la sortie de la poudre de la mélangeuse. (La poudre finale obtenue après calibrage est préférentiellement stockée dans des sacs hermétiquement fermés à l'abri de la chaleur et de l'humidité à température ambiante).
En fonction des alcools aromatiques et/ou des mélanges en contenant, présents dans la composition, la composition selon l'invention peut être utilisée pour différentes applications. Avant utilisation, la composition solide selon l'invention est préférentiellement mise en solution. De façon préférée le ratio composition/eau est compris entre de 100g par 1000 litres d'eau jusqu'à 25 kg pour 1000 litres d'eau. En particulier, les alcools aromatiques présentent des propriétés antibactériennes et/ou antifongiques et/ou antivirales et/ou anti-insectes.
L'invention vise donc notamment l'utilisation d'une composition selon l'invention comme produit phytosanitaire, en particulier pour prévenir et/ou lutter contre les maladies des plantes (tout ou partie des plantes) causées par des champignons, des bactéries, des virus, des nématodes et/ou des ravageurs.
Pour son utilisation en application sur les plantes (tout ou partie des plantes) y compris sur les fruits, légumes et/ou fleurs en post-récolte, la composition selon l'invention peut être utilisée en eau d'irrigation ou en aspersion foliaire.
Les maladies des plantes causées par des bactéries pour lesquelles la composition selon l'invention est particulièrement utile en prévention et/ou en traitement sont préférentiellement choisies parmi la pourriture molle causée par les espèces Erwinia, le chancre bactérien causé par les espèces Pseudomonas ou la galle du collet causée par les espèces Agrobacterium.
Les maladies des plantes causées par des champignons pour lesquelles la composition selon l'invention est particulièrement utile en prévention et/ou en traitement sont préférentiellement choisies parmi la fusariose causée par les espèces Fusarium, le mildiou causé par les espèces Phytophtora, l'oïdium causé par les espèces Podosphaera et Oïdium, l'alternariose causée par les espèces Alternaria, la fumagine causée par les espèces Alternaria et Cladosporium ou la pourriture grise causée par les espèces Botrytis.
Les ravageurs causant des maladies aux plantes contre lesquels la composition selon l'invention est particulièrement utile en prévention et/ou en traitement sont choisis parmi les pucerons, les moucherons, les acariens du sol ou les noctuelles.
La composition selon l'invention peut être utilisée spécifiquement pour prévenir et/ou lutter contre les maladies des fruits, des légumes et/ou des fleurs en post récolte causées par des champignons, des bactéries, des virus, des nématodes et/ou des ravageurs. En particulier, la composition selon l'invention peut être utilisée pour prévenir et/ou lutter contre la pourriture des agrumes causée par les espèces Pénicillium et Geotrichum, ou pour prévenir et/ou lutter contre la détérioration fongique des dattes causée par les espèces Aspergillus.
La composition selon l'invention peut aussi être utilisée pour un traitement antifongique lors de l'enrobage des semences, notamment des semences choisies parmi le blé, l'orge, les lentilles, les pois chiches et les fèves. Selon un autre aspect, la composition selon l'invention peut être utilisée comme produit phytosanitaire pour :
augmenter la tenue en vase des fleurs coupées, ou
- nettoyer et éliminer les traces de pesticides et les microbes contenues dans les fruits et légumes, en particulier pour décontaminer les raisins, les abricots et les poivrons avant le séchage.
La composition selon l'invention peut aussi avantageusement être utilisée pour stimuler la croissance des plantes, notamment pour stimuler la rhizogenèse chez les plantes.
Indépendamment de son utilisation en application sur les végétaux, soit comme produit phytosanitaire, soit pour stimuler leur croissance, la composition selon l'invention peut être utilisée directement sur les objets, des sols, des murs, etc., en particulier pour :
- décontaminer les supports de culture en agriculture hors sol et en sol (par exemple sable, terre végétale et perlite) et/ou aseptiser l'air ambiant, notamment de bâtiments industriels,
- nettoyer et prévenir la formation de calcaire, notamment dans les goutteurs,
- dans les bâtiments d'élevage animal, par exemple dans les bâtiments d'élevage avicole, notamment :
* Aseptiser l'air ambiant des bâtiments, et/ou
* Décontaminer l'eau d'abreuvement, et/ou
* Nettoyer les surfaces des bâtiments,
- pour éliminer les biofilms et prévenir leur formation, notamment dans les tuyaux d'alimentation d'eau dans les bâtiments d'élevage animal, par exemple dans les bâtiments d'élevage avicole,
- dans les bâtiments d'élevage avicole, pour prévenir et/ou traiter la grippe aviaire, en application sur le bâtiment, en éliminant les virus présents sur les murs et les sols des bâtiments.
La composition selon l'invention peut également être utilisée comme bain de décontamination des carcasses d'animaux dans les abattoirs ou pour décontaminer des œufs de volaille avant de les placer dans des couveuses.
Selon un autre aspect, la composition selon l'invention est particulièrement efficace et peut être utilisée pour désinfecter des dispositifs médicaux réutilisables, en particulier des fibroscopes, des coloscopes, des bronchoscopes et des sinuscopes. La composition peut aussi être utilisée :
comme bain de douche désinfectant pour les dents et les gencives, ou comme produit désinfectant pour les mains, en particulier pour le personnel hospitalier et médical.
La composition selon l'invention peut donc être utilisée pour de nombreuses applications. Elle présente l'avantage de se présenter sous forme solide et stable ce qui permet un stockage longue durée d'au moins deux ans et un transport facile et économique. En outre, la composition est très facilement dispersible dans l'eau, ce qui permet une utilisation aisée et économique en solution.
L'invention est à présent illustrée par des exemples non limitatifs de compositions selon l'invention, d'utilisations et de résultats d'essais démontrant leur efficacité.
Exemple 1
La composition de l'exemple 1 est constituée de :
- 15% de Thymol
- 0,2% de lécithine de soja
10% de gomme de caroube
50,54% de bicarbonate de sodium
24,26% d'acide citrique.
Cette composition est obtenue par la mise en œuvre des étapes suivantes :
15g de thymol sont préchauffés à 50°C et mélangés à 0,2 ml de lécithine de soja ensuite le mélange est ajouté à la combinaison 10g de gomme de caroube, 50,54g de bicarbonate de sodium et 24,26g d'acide citrique. Le tout est mis en suspension dans 10 I d'eau.
Exemple 2
La composition de l'exemple 2 est constituée de :
- 15% de Menthol
0,2% d'huile minérale
10% de gomme de guar
50,54% de bicarbonate de potassium
24,26% d'acide tartrique.
Cette composition est obtenue par la mise en œuvre des étapes suivantes : 15g de menthol sont préchauffés à 50°C et mélangés à 0,2 ml d'huile minérale ensuite le mélange est ajouté à la combinaison 10g de gomme de guar, 50,54g de bicarbonate de potassium et 24,26g d'acide tartrique. Le tout est mis en suspension dans 10 I d'eau.
Exemple 3
La composition de l'exemple 3 est constituée de :
15% de carvacrol
0,2% de glycérol
10% de gomme de xanthane
50,54% de bicarbonate de potassium
- 24,26% d'acide maléique.
Cette composition est obtenue par la mise en œuvre des étapes suivantes :
15ml de carvacrol sont préchauffés à 50°C et mélangés à 0,2 ml de glycérol ensuite le mélange est ajouté à la combinaison 10g de gomme de xanthane, 50,54g de bicarbonate de potassium et 24,26g d'acide maléique. Le tout est mis en suspension dans 10 I d'eau. Exemple 4
La composition de l'exemple 4 est constituée de :
- 15% d'eugénol
0,2% de lécithine de soja
10% de gomme de caroube
- 50,54% de bicarbonate de sodium
24,26% d'acide tartrique
Cette composition est obtenue par la mise en œuvre des étapes suivantes :
15ml de menthol sont préchauffés à 50 °C et mélangés à 0,2 ml de lécithine de soja ensuite le mélange est ajouté à la combinaison 10g de gomme de caroube, 50,54g de bicarbonate de sodium et 24,26g d'acide tartrique. Le tout est mis en suspension dans 10 I d'eau. Essais comparatifs démontrant la nécessité de la combinaison des différents constituants de la composition pour rendre la composition stable, homogène et dispersible dans l'eau
Les alcools aromatiques ne se dispersent pas aisément dans l'eau en raison de leur nature hydrophobe. L'art antérieur propose une méthode de dispersion de ces composés par l'adjonction d'un tensioactif et d'un solvant (WO2009124392A1), mais cette méthode n'est pas adaptée car il est connu que les tensioactifs et les solvants diminuent l'activité des composés phénoliques (Remmal A., Bouchikhi T., Tantaoui-Elaraki A., Ettayebi M. (1993). Inhibition of antibacterial activity of essential oils by Tween 80 and ethanol in liquid médium. J. Pharm. Belg. 48:352-356). De plus, certains alcools aromatiques, comme le thymol ou le menthol, sont sous forme cristallisée à température ambiante et une fois en contact avec l'eau, si on essaie de les rendre liquides en les chauffant, ils recristallisent.
La composition selon l'invention associant les alcools aromatiques à un agent texturant, un agent émulsifiant (et/ou une huile) et un couple acide-base effervescent permet à la fois d'empêcher la recristallisation des alcools aromatiques sous forme cristallisée, d'assurer la stabilité des alcools aromatiques et de la composition, son homogénéité et de faciliter sa dispersion lors de sa mise en solution.
La forme et la dispersion dans l'eau de la composition de l'exemple 1 a été évaluée en comparaison à d'autres compositions comprenant un alcool aromatique seul ou avec seulement un ou des autres constituants de la composition selon l'invention.
Composition Cl
La composition Cl est constituée par 15% de Thymol uniquement.
Cette composition est obtenue par la mise en suspension de 15g de Thymol dans 10 I d'eau.
Composition C2
La composition C2 constituée par :
- 15% de Thymol
- 0,2 % de lécithine de soja
Cette composition est obtenue par la mise en œuvre des étapes suivantes :
- 15g de thymol sont préchauffés à 50°C et mélangés à 0,2 ml de lécithine de soja,
- le tout et mis en suspension dans 10 I d'eau. Composition C3
La composition C3 constituée par :
- 15% de Thymol
- 0,2% de lécithine de soja
- 56,54% de bicarbonate de sodium
- 28,26% d'acide citrique
Cette composition est obtenue par la mise en œuvre des étapes suivantes :
- 15g de thymol sont préchauffés à 50 °C et mélangés à 0,2 ml de lécithine de soja,
- ensuite le mélange est ajouté à la combinaison bicarbonate de sodium et acide citrique,
- le tout est mis en suspension dans 10 I d'eau.
Composition C4
La composition C4 constituée par :
- 15% de Thymol
- 0,2% de lécithine de soja
- 84,8% de gomme de caroube
Cette composition est obtenue par la mise en œuvre des étapes suivantes :
15g de thymol sont préchauffés à 50°C et mélangés à 0,2 ml de lécithine de soja, - ensuite le mélange est ajouté à 84,8 g de gomme de caroube,
le tout est mis en suspension dans 10 I d'eau.
Les résultats sont présentés dans le Tableau 1 et sur les figures.
Tableau 1 : Résultats des différentes tentatives de formulation
NA : Non applicable
Ces résultats montrent que seule la combinaison des constituants de la composition selon l'invention permet d'obtenir une poudre contenant un alcool aromatique, stable, homogène et facilement dispersible. Test in vitro de l'activité antimicrobienne de la composition selon l'invention
En vue d'évaluer l'efficacité de la composition selon l'invention (Exemple 1). Elle a été testée in vitro sur plusieurs souches de bactéries, levures et moisissures causant des maladies et des dégâts chez les plantes.
Les 15 souches testées dans cette étude ont été isolées, purifiées et identifiées. 11 souches d'origine fongiques dont 5 du genre Fusarium, une du genre Pénicillium, une du genre Geotrichum, une du genre Alternaria, une du genre Sclerotonia et la dernière du genre Helminthosporium. Deux souches d'origine levuriennes, une du genre Candida et l'autre du genre Saccharomyces. Les deux souches qui restent sont d'origine bactérienne.
Les milieux de culture utilisés sont : Sabouraud dextrose agar et bouillon (Biokar) pour la culture et le test de l'activité antifongique des souches fongiques.
Mueller Hinton agar et bouillon (Biokar) pour la culture et le test de l'activité antibactérienne des souches bactériennes.
Le test de l'activité antifongique de la composition selon l'invention a été effectué comme suit :
Les milieux de culture ont été préparés selon les instructions du fournisseur, différentes concentrations de la composition ont été utilisées en vue de déterminer la CMI (concentration minimale inhibitrice) en milieu gélosé et en milieu liquide, la CMF (concentration minimale fongicide) en milieu liquide en utilisant la technique de macrodilution.
En milieu gélosé : Dans des flacons contenant 60 ml du milieu approprié, stérilisé à l'autoclave pendant 20 mn à 121°C et refroidi à 45°C, différentes quantités de la composition de l'exemple 1 sont ajoutées, permettant d'obtenir les concentrations finales suivantes : (0,41 ; 0,82 ; 1,65 ; 3,33 ; 6,67 ; 13,34 ; 26,68 et 53,36 g/1). Des témoins négatifs contenant le milieu seul sont également préparés, les flacons sont ensuite coulés dans des boites de Pétri (90 χ 16 mm) et laissés refroidir à 4°C pendant 24h, puis inoculées d'un volume de 10μΙ d'une suspension mère de 106 spores/ml de la moisissure appropriée. Après diffusion de la goutte déposée, les boites sont incubées à 27°C pendant 5 jours, L'essai est réalisé en triplicate et répété trois fois.
En milieu liquide : Le bouillon de culture Sabouraud stérilisé à l'autoclave pendant 20min à 121°C et refroidi à température ambiante a été distribué dans des tubes à essais stériles. Ensuite, des concentrations croissantes de la composition selon l'invention de : (0,41 ; 0,82 ; 1,65 ; 3,33 ; 6,67 ; 13,34 ; 26,68 et 53,36 g/1) ont été testées. Tous les tubes ont été inoculés avec 20μΙ de la suspension mère de spores (106 spores/ml). La concentration finale dans chaque tube est calculée pour un volume final de 5ml. Les tubes sont ainsi incubés à 27°C avec une agitation de 130 tours/min pendant 5 jours.
Détermination de la CMF (Comparative Mortalité Figure) : A partir des puits où il n'y a pas eu de croissance positive visible, une fraction de 20 μΙ est aseptiquement prélevée et transférée dans des tubes Eppendorf contenants 1 ml du bouillon Sabouraud. Ainsi, le risque de transporter l'effet inhibiteur de la composition est éliminé par une dilution de 50 fois. La CMF de chaque composition est définie comme étant la plus faible concentration de la composition pour laquelle il y a absence totale de toute croissance fongique en comparaison avec le témoin.
Le test de l'activité antibactérienne de la composition selon l'invention a été effectué en suivant la même démarche que celle réalisée dans le test de l'activité antifongique sauf que le milieu de culture utilisé pour ce test est Mueller Hinton (agar et bouillon), l'inoculum de bactéries inoculé est de l'ordre de 107 bactéries/ml et la température d'incubation est de l'ordre de 37°C.
Les valeurs de CMI et de CMF obtenues avec la composition selon l'invention sont résumées dans le Tableau 2.
Tobleou 2 : Voleurs de CMI et CMF de la composition selon l'invention pour les espèces fongiques
Selon ces résultats, la composition s'est avérée très efficace contre les espèces fongiques utilisées dans ce test. En outre, les valeurs de CMI et CMB obtenues avec la composition de l'exemple 1 dans le test de l'activité antifongique sur les espèces bactériennes sont présentées dans le Tableau 3.
Tableau 3 : Valeurs de CMI et CMB de la composition selon l'invention pour les espèces bactériennes
Ces résultats montrent une activité antibactérienne très importante de la composition selon l'invention.
Test de l'activité anti-insecte de la composition selon l'invention
En vue d'évaluer l'efficacité de la composition selon l'invention de l'exemple 1, elle a été testée in vitro ou in vivo sur plusieurs insectes, parasites et nématodes.
Les adultes de l'espèce Macrosiphum rosae (puceron du rosier) ont été prélevés à l'aide d'un pinceau fin et mis en contact avec différentes doses de la composition selon l'invention . Dans des boîtes de pétri, nous déposons un disque de papier absorbant imbibé avec des solutions contenant des doses croissantes de la composition selon l'invention (1,67 ; 3,33 ; 6,67 et 13,34 g/1). Des boîtes de pétri ont servi de témoins contenant de l'eau normale. 20 adultes ont été mis dans chaque boite, l'expérience a été établie en triplicate.
De même, l'efficacité in vivo de la composition selon l'invention (exemple 1) a été testée sur l'espèce Rhizoglyphus callae (acarien du sol) dans leur milieu habituel qui est le sol. Pour ce faire, des pots de fleurs (freesia) contenant du sol naturellement infesté par ces animalcules (ramené d'une ferme de production de fleurs coupées) ont été irrigués avec des solutions contenant des doses croissantes de la composition selon l'invention (1,67 ; 3,33 ; 6,67 et 13,34 g/1). Des pots servant de témoins ont reçu uniquement de l'eau comme solution d'irrigation, l'expérience a été répétée trois fois. Après quelques heures de contact avec la solution d'irrigation, quelques grammes de sol de chaque pot ont été prélevés et mis en suspension dans de l'eau, une observation et un comptage sous la loupe binoculaire ont été effectués en vue de déterminer le pourcentage de mortalité pour chaque dose utilisée dans ce test.
De plus, la composition selon l'invention a été également testée in vitro sur les nématodes et plus précisément l'espèce Heterodera spp à partir d'un sol infecté (préalablement traité avec différentes concentrations de la composition de l'exemple 1). La méthode utilisée est celle de Baerrman. C'est une méthode qui consiste à séparer les nématodes des particules du sol en fonction de leurs tailles et de leurs poids selon les étapes suivants :
- Prendre une aliquote de sol de 100 g, puis, la faire passer à travers un tamis, dont les mailles sont de 2 mm de diamètre, sous un courant d'eau, afin d'éliminer toutes les particules de grande taille (gravier).
- Récupérer la suspension dans un bocal, ensuite, remuer pour homogénéiser le contenu (solution boueuse), décanter pendant quelques minutes, puis verser la suspension contenant les nématodes sur un tamis.
- Récupérer dans un bêcher de 50 ml la suspension contenant les nématodes et faire passer le contenu dans un entonnoir, sur lequel est déposé un papier filtre. Après 24 h, collecter les nématodes dans un volume de 10 ml de suspension puis compter sous la loupe binoculaire.
- Les nématodes ainsi comptés sont mis en contact avec différentes doses de la composition selon l'invention.
Les dilutions utilisées sont :
1,67 g de la composition dans 1 1 d'eau
3,33 g de la composition dans 1 1 d'eau
6,67 g de la composition dans 1 1 d'eau
13,34 g de la composition dans 1 1 d'eau
Le mode d'application par aspersion
Le pourcentage de mortalité des insectes utilisés dans ce test a été calculé selon la formule suivante :
Nt - Nm
(%) = x 100
Dt
Où Nt et Nm représentent respectivement, le nombre d'insectes total et le nombre d'insectes morts. Les résultats sont présentés dans le Tableau 4.
Tableau 4 : Pourcentage de mortalité de quelques insectes en contact avec la composition selon l'invention
Ces résultats montrent clairement que la composition selon l'invention génère un effet insecticide très puissant. La dose de 6,67 g/1 s'est avérée mortelle pour les pucerons et les nématodes tandis que la dose 3,33 g/1 est efficace contre les acariens du sol et ce après quelques heures de contact seulement.
Test in vivo de l'activité antifongique de la composition selon l'invention
La composition selon l'invention (exemple 1) a été testée in vivo sur la fusariose vasculaire des œillets causée par Fusgrium oxysporum sp dignthi. Huit plantules par lot de la variété Martina ont été utilisées dans ce test.
Les spores de fusarium (106 spores/ml) ont été inoculés dans le sable siliceux près des racines de chaque plante.
Cinq lots ont été établis :
PNINT : Plantes non infectées non traitées.
PINT : Plantes infectées non traitées.
PIT 3,33 g/l : Plantes infectées traitées avec 3,3 g/l de la composition selon l'invention.
PIT 6,67 g/l : Plantes infectées traitées avec 6,67 g/l de la composition selon l'invention. PIT 13,34 g/l : Plantes infectées traitées avec 13,34 g/l de la composition selon l'invention. Pour évaluer l'efficacité de la composition, les mesures de plusieurs caractères agromorphologiques ont été comparées, notamment le nombre de pousses, la distance entre nœuds, le nombre de nœuds, la longueur de la tige, le diamètre de la tige et le nombre de boutons floraux.
Les dilutions utilisées sont :
3,33 g de la composition dans 1 1 d'eau.
6,67 g de la composition dans 1 1 d'eau.
13,34 g de la composition dans 1 1 d'eau
Le mode d'application est une application par irrigation.
Les résultats obtenus sont présentés dans le Tableau 6.
Tobleou 6 : Effet de lo composition selon l'invention sur lo croissance des œillets infectés par lo fusoriose.
Ces résultats montrent clairement que les plantes infectées et traitées par la composition selon l'invention se portent mieux que les plantes non infectées, la dose qui a donné les meilleurs résultats en termes de caractères agromorphologiques est 3,3 g/l.
Par ailleurs la dose 13, 34 g/l s'est avérée trop élevée pour les œillets, puisqu'elle a généré un effet phytotoxique sur la partie aérienne et même sur le système racinaire de la plante.
L'importance de ces résultats vient du fait que la charge fongique du sol est un facteur déterminant pour la santé de la plante, en effet plus cette charge est élevée plus la plante est stressée par les bactéries et les champignons qui entrent en compétition avec la plante sur les nutriments essentiels pour sa croissance.
L'utilisation de la composition dans l'eau d'irrigation permet donc de diminuer la charge fongique du sol. Ceci se répercutera positivement sur la santé et le bien-être de la jeune plante qui se développera.
Effet stimulateur de la croissance de la composition selon l'invention
L'effet stimulateur de la croissance de la composition selon l'invention (exemple 1) a également été testé sur des plantules d'œillets de la variété West diamond.
Pour ce faire cinq lots ont été établis :
PNT : Plantes non traitées.
PT 1 g/1 : Plantes traitées avec 1 g/1 de la composition selon l'invention.
PT 1,65 g/1 : Plantes traitées avec 1,65 g/1 de la composition selon l'invention.
PT 3,33 g/1 : Plantes traitées avec 3,33 g/1 de la composition selon l'invention.
PT 6,67 g/1 : traitées avec 6,67 g/1 de la composition selon l'invention.
L'effet stimulateur de la composition selon l'invention (exemple 1) a été quantifié par une prise de mesures des caractères agromorphologiques (le nombre de pousses, la distance entre nœuds, le nombre de nœuds, la longueur de la tige, le diamètre de la tige et le nombre de boutons floraux) après trois mois de traitement à raison de trois applications par semaine en eau d'irrigation.
Les dilutions utilisées sont :
1 g de la composition dans 1 1 d'eau.
1,67 g de la composition dans 1 1 d'eau.
3,3 g de la composition dans 1 1 d'eau.
6,67 g de la composition dans 1 1 d'eau.
Le mode d'application est par irrigation.
Les résultats obtenus sont présentés dans le Tableau 7. Tableau 7 : Effet stimulateur de la croissance de la composition selon l'invention sur les plantules d' œillets
Ces résultats montrent un effet probant de la composition selon l'invention, la dose 3,3 g/1 s'est avérée la plus efficace puisque les plantes ayant reçus cette dose en eau d'irrigation présentent des caractères agromorphologiques très performants par rapport aux plantes témoins.
Effet stimulateur de la rhizogenèse de la composition selon l'invention
L'effet stimulateur de la composition selon l'invention (exemple 1) a été testé sur des plantules de palmiers dattiers issues de la germination des noyaux de dattes de la variété Mejhoul. Des plantules au stade une feuille ont reçu différentes doses de la composition de l'exemple 1 selon l'invention (0 ; 1,65 ; 3,33 ; 6,67 g/1). Après 4 mois de traitement (à raison de 2 fois par semaine), les plantules ont été récoltées et le poids frais et sec de la partie racinaire de chaque plantule a été déterminé.
Les dilutions utilisées sont :
1,65 g de la composition dans 1 1 d'eau
3,3 g de la composition dans 1 1 d'eau 6,67 g de la composition dans 1 1 d'eau
Le mode d'application est par irrigation.
Les résultats sont présentés dans le Tableau 8.
Tableau 8 : Effet stimulateur de la rhizogenèse de la composition selon l'invention chez des plantules de palmier dattier
Ces résultats montrent l'effet stimulateur de la rhizogenèse de la composition selon l'invention chez des plantules de palmier dattier, les deux doses 1,65 et 3,33 g/1 se sont avérées les plus efficaces avec une supériorité de la dose 1,65 g/1 en comparant avec les plantules témoins qui n'ont reçu que de l'eau tout au long de l'expérience. Par ailleurs, la dose 6,67 g/l s'est révélée phytotoxique sur les cellules du système racinaire des jeunes plantules.
Effet de la composition selon l'invention sur la conservation post récolte des dattes
Afin de vérifier la faisabilité de l'utilisation de la composition selon l'invention sur la conservation post récolte des dattes, un essai a été effectué. Cet essai a consisté à tremper les dattes pendant 10 minutes dans des solutions contenant différentes concentrations de la composition de l'exemple 1 (0 ; 3,33 et 6,6 g/1). Ensuite les dattes ont été rincées avec de l'eau puis séchées avant d'être stockées dans des boîtes en plastique hermétiquement fermées.
En vue d'évaluer la charge bactérienne (FMAT) et la charge fongique des dattes traitées, un prélèvement par écouvillonnage de huit dattes de chaque boîte a été effectué. La surface de prélèvement est de 1 cm2 par datte.
Les dilutions utilisées sont :
3,33 g de la composition dans 1 1 d'eau
6,6 g de la composition dans 1 1 d'eau
Le mode d'application est par trempage.
Les résultats obtenus sont présentés dans les tableaux 9 et 10. Tableau 9 : Charge bactérienne contenue dans les dattes traitées avec la composition selon l'invention et celles non traitées (ufc/cm2)
Tp : Tapis non dénombrable
Tableau 10 : Charge fongique contenue dans les dattes traitées avec la composition selon l'invention et celles non imitées (ufc/cm2)
Tp : Tgpis non dénombmble
Les tableaux 9 et 10 présentent respectivement les résultats de la charge bactérienne et la charge fongique contenue dans les dattes traitées et celles non traitées. La dose 6,67 g/l s'est révélée la plus efficace puisque les dattes trempées dans cette dose restent indemnes de bactéries et de champignons qui peuvent nuire à leur conservation pendant un mois et ce à température ambiante.
Effet de la composition selon l'invention sur la tenue en vase des fleurs coupées
La composition selon l'invention (exemple 1) a également été testée sur la tenue en vase des fleurs coupées et plus précisément des œillets. Pour ce faire les fleurs d'œillets ont été coupées et égalisées à 55 cm de longueur avant d'être mises à tremper dans des solutions contenant deux concentrations de la composition selon l'invention (1,6 et 3,3 g/1) immédiatement après la récolte.
Les mesures prises en considération pour évaluer l'effet de la composition selon l'invention sont :
- Poids de la tige florale tous les 4 jours
Pourcentage d'ouverture des boutons floraux
Les dilutions utilisées sont :
1,6 g de la composition dans 1 1 d'eau
3,3 g de la composition dans 1 1 d'eau
Le mode d'application est le suivant : mise en vase.
Les résultats obtenus sont présentés dans les Tableaux 11 et 12.
Tableau 11 : Effet de la composition selon l'invention sur le poids des tiges florales en vase
Tableau 12 : Effet de la composition selon l'invention sur l'ouverture des boutons floraux
Ces résultats montrent que la composition selon l'invention améliore la tenue en vase des fleurs coupées. Test in vitro de l'activité antimicrobienne de la composition selon l'invention
L'efficacité de la composition selon l'invention (exemple 1) a été testée sur la charge microbienne (bactéries, levures et moisissures, parasites) d'une eau utilisée en abreuvement de la volaille. L'échantillon est transporté au laboratoire et conservé au frais pour le test in vitro.
Les milieux de culture utilisés sont :
PCA (Plate Count Agar)(Biokar) pour la culture et le test de l'activité antibactérienne des bactéries aérobies revivifiables.
Désoxycholate lactose agar (Biokar) pour la culture et le test de l'activité antibactérienne des conformes totaux et fécaux.
- Slanetz agar pour la culture et le test de l'activité antibactérienne des staphylocoques.
TSC (Tryptone Sulfite Cycloserine Agar) (Biokar)pour la culture et le test de l'activité antibactérienne des bactéries anaérobies.
Wilson-blair agar (Biokar) pour la culture et le test de l'activité antibactérienne de salmonelle.
- Sabouraud Chloramphénicol agar (Biokar) pour la culture et le test de l'activité antifongique des levures et moisissures.
Le test de l'activité antibactérienne de la composition selon l'invention a été effectué comme suit :
- Différentes concentrations de la composition de l'exemple 1 (lg/l ; 2g/l ; 4g/l) ont été additionnées à l'échantillon d'eau. Un témoin négatif contenant l'échantillon d'eau seul est également préparé.
Les milieux de culture ont été préparés selon les instructions du fournisseur, stérilisés à l'autoclave pendant 15 mn à 121°C et refroidi à 45°C. Ils ont ensuite été coulés dans des boîtes de Pétri (90 χ 16 mm) et laissés refroidir à 4°C pendant 24h, puis inoculés d'un volume de 100 μΙ de l'échantillon d'eau. Les boîtes sont incubées à 37°C pendant 24h pour les bactéries aérobies revivifiables, conformes totaux, salmonelles, staphylocoques et les bactéries anaérobies. Pour les conformes fécaux, les boîtes sont incubées à 44°C pendant 24h. Le test de l'activité antifongique de la composition selon l'invention a été effectué en suivant le même protocole que celui réalisé dans le test de l'activité antibactérienne sauf que la température d'incubation est de l'ordre de 27°C et le temps d'incubation est de 3 à 5jours. Concernant le test de l'activité antiparasitaire, un volume de ΙΟμΙ d'échantillon d'eau a été 5 placé entre une lamelle de verre et la cellule Malassez. Le nombre de cellules dans 10 rectangles a été ensuite compté.
Les résultats obtenus sont présentés dans le Tableau 13.
Tableau 13 : Effet de la composition selon l'invention sur la réduction de la charge microbienne d'une eau de surface
Ces résultats montrent que le traitement de l'eau de surface par la composition provoque une baisse importante de la charge microbienne. Cette baisse augmente avec la concentration de la composition. Test in vivo de l'activité antimicrobienne de la composition selon l'invention
La composition selon l'invention a également été testée in vivo sur des poussins. Douze poussins par lot ont été utilisés dans ce test. Pendant toute la période du test, la température de l'animalerie était ajustée à 28°C et les animaux avaient accès libre à l'eau et à l'aliment qui ont été disponibles en permanence.
L'eau utilisée dans ce test est l'eau de surface prélevée du réservoir de distribution d'eau d'abreuvement qui a été utilisé dans le test in vitro.
Les objectifs de ce test sont :
- Tester in vivo l'effet du traitement d'eau d'abreuvement par la composition de l'exemple 1 sur le comportement des animaux
Comparer in vivo l'effet de la composition de l'exemple 1 sur une ea u fraîche non stagnante et une eau stagnante
La répartition des lots est comme suit :
ENS : Eau non stagnante
ES : Eau stagnante Pour évaluer l'efficacité de la composition, les mesures de plusieurs caractères zootechniques durant les trois phases d'élevage suivants ont été comparés :
- Le poids vif moyen : chaque lot de poussins est pesé dès le premier jour. Ensuite, des pesées individuelles sont effectuées à la fin de chaque phase. Le poids vif moyen est déterminé comme suit :
Poids vif moyen (g) = Poids de la totalité des poussins d'un lot / Nombre de poussins de ce lot
- Le gain du poids vif : les poussins de chaque lot ont été pesés à l'arrivée pour le calcul du poids moyen au démarrage. Par la suite, les pesées ont été effectuées à la fin de chaque phase d'élevage jusqu'à la fin de l'expérience. Le gain de poids est déterminé par la formule suivante :
Le gain de poids vif (g) = P2 - PI
P2: poids moyen final d'une phase d'élevage
PI: poids moyen initial de cette phase d'élevage
- La consommation alimentaire : les différents aliments sont pesés et distribués quotidiennement jusqu'au 35ème jour. Le reste de d'aliment contenu dans les mangeoires est pesé quotidiennement pour chaque lot. Ainsi, les quantités d'aliment consommées par lot, ont été enregistrées à la fin de chaque phase d'élevage. La quantité moyenne d'aliment consommé a été déterminée par la formule suivante : Consommation alimentaire (g) = Quantité d'aliment distribuée - Quantité d'aliment restante
Nombre de poussins
- L'indice de consommation (IC) : correspond à la quantité d'aliment nécessaire pour produire 1 kilogramme de poids vif. L'IC est déterminé pour chaque phase par la formule suivante :
IC = Quantité d'aliment consommée pendant une phase
Gain de poids moyen de cette phase
- Le taux de mortalité : la mortalité est notée quotidiennement. Le taux de mortalité est déterminé pour chaque lot durant une phase donnée par la formule suivante :
Taux de mortalité (%) = Effectif des poussins morts au cours d'une phase x 100
Effectif total des poussins durant cette phase Les résultats obtenus sont présentés dans le Tableau 14.
Tobleou 14 : Effet de la composition selon l'invention sur Le poids vif moyen et le gain de poids moyen
ENS : Eau non stagnante
ES : Eau stagnante
Tableau 15 : Effet de la composition selon l'invention sur la consommation alimentaire, l'indice de consommation et du taux de mortalité
ENS : Eau non stagnante
ES : Eau stagnante
Ces résultats montrent que les animaux traités par la composition selon l'invention se portent mieux que les animaux non traités, la dose qui a donné les meilleurs résultats en termes de 5 caractères zootechniques est 2 g/1.
Effet de la composition selon l'invention sur la réduction de la charge intestinale des animaux (poussins poulet de chair)
L'effet de la composition selon l'invention (exemple 1) a été testé sur la réduction de la charge intestinale (bactéries aérobies revivifiables et la charge parasitaire) des poussins poulet de 10 chair pendant 35jours. Tous les 7 jours, des échantillons de fientes des différents lots ont été prélevés et solubilisés dans l'eau physiologique (lg de fiente dans 9ml d'eau physiologique).
Des dilutions sont ensuite préparées à partir de la solution mère.
Le milieu de culture utilisé est :
PCA (Plate Count Agar)(Biokar) pour la culture des bactéries aérobies revivifiables. 15 - Le milieu de culture a été préparé selon les instructions du fournisseur, stérilisé à l'autoclave pendant 15 mn à 121°C et refroidi à 45°C, puis coulé dans des boîtes de Pétri (90 χ 16 mm) et laissé refroidir à 4°C pendant 24h, puis inoculé d'un volume de 100 μΙ de l'échantillon. Les boîtes sont incubées à 37°C pendant 24h. L'essai est réalisé en triplicate.
Concernant la charge parasitaire, un volume de 10μΙ d'échantillon est placé entre une lamelle de verre et la cellule Malassez. On compte ensuite le nombre de cellules dans 10 rectangles. 5 Les résultats sont présentés dans les Tableaux 16 et 17.
Tobleou 16 : Effet de la composition selon l'invention sur la réduction de la charge intestinale en bactéries aérobies revivifiables
Les résultats obtenus montrent clairement que les animaux traités par la composition selon l'invention ont une charge intestinale moins élevée par rapport aux animaux non traités, la dose qui a donné les meilleurs résultats en termes de réduction de la charge intestinale est 2 g/1. Etude comparative entre l'action antibactérienne de la composition selon l'invention et du glutaraldéhyde contre E.coli in vitro.
Dans des microplaques à 96 puits contenant chacun 130 μΙ du bouillon Muiller Hinton stérile (autoclavage 15 min à 110 °C), un volume variable de la solution mère de glutaraldéhyde [1/10 (100 mg/ml), 1/100 (10 mg/ml), 1/250 (4 mg/ml), 1/500 (2 mg/ml), 1/1000 (1 mg/ml), 1/2000 (0,5 mg/ml), 1/4000 (0,25 mg/ml), 1/8000 (0,125 mg/ml) et 1/16000 (0,062 mg/ml)] et de la composition selon l'invention de l'exemple 1 [1/10 (133,4 mg/ml), 1/100 (66,7 mg/ml), 1/250 (26,68 mg/ml)l/500 (13,34 mg/ml), 1/1000 (6,67 mg/ml), 1/2000 (3,33 mg/ml), 1/4000 (1,66 mg/ml), 1/8000 (0,83 mg/ml) et 1/16000 (0,42 mg/ml)]a été ajouté afin d'obtenir les concentrations finales pour chaque désinfectant. Après on ajoute 20μΙ de l'inoculum dans chaque puits. Des témoins positifs et négatifs ont été également préparés. Les plaques sont ensuite incubées à 37°C pendant 24h. La croissance bactérienne a été suivie par la densité optique à l'aide du spectrophotomètre à une longueur d'onde de 600 nm.
Les résultats sont présentés dans le Tableau 18. Tobleou 18 : comporoison entre l'action du glutaraldéhyde et de la composition selon l'invention contre E.coli.
Ces résultats présentent l'effet du glutaraldéhyde et de la préparation des HE à différentes concentrations sur une suspension d'E.coli d'ordre 108 UFC/ml. Ils montrent que la composition selon l'invention est plus efficace que le désinfectant (glutaraldéhyde). La concentration minimale inhibitrice (CMI) est de 1/100 pour la composition selon l'invention, alors que pour le glutaraldéhyde la CMI n'est obtenu qu'avec le désinfectant pur. On remarque une inhibition partielle plus importante pour les concentrations 1/250 à 1/1000 de la composition selon l'invention par rapport au glutaraldéhyde.
Activité antibactérienne du glutaraldéhyde et de la composition selon l'invention dans la désinfection du fibroscope.
Afin de comparer l'action antibactérienne de la composition selon l'invention et du glutaraldéhyde, les étapes suivantes ont été réalisées :
- Contamination artificielle :6 ml de la suspension d'E.coli préalablement préparée sont introduits à l'aide d'une seringue dans l'orifice proximal du canal opérateur, et dans l'orifice proximal du canal d'aspiration (Dusseau et coll., 2001). Emballage du fibroscope et incubation pendant 20 minutes à 37°C.
- Rinçage intermédiaire avec l'eau distillé.
- Premier prélèvement (avant désinfection).
- Premier nettoyage.
- Rinçage par l'eau de robinet pendant 2 minutes.
- Deuxième nettoyage.
- Désinfection soit par glutaraldéhyde soit par la composition selon l'invention.
- Rinçage terminal.
- Deuxième prélèvement (après désinfection) effectué dans les mêmes conditions et en respectant les mêmes étapes que lors du premier prélèvement.
Les résultats obtenus sont présentés dans le Tableau 19.
Tobleou 19 : Action ontiboctérienne entre les deux produits testés.
Les résultats obtenus ont décelé la présence d'un tapis bactérien avant la désinfection ; le même résultat a été obtenu après la désinfection par le glutaraldéhyde, alors qu'après la désinfection par la composition selon l'invention, la charge bactérienne était seulement de 50 UFC/ml avec la concentration 1/1000 et nulle avec la concentration 1/500.
Par ailleurs, ces résultats montrent une diminution importante de la charge microbienne du fibroscope après la désinfection par la composition selon l'invention. Ceci démontre l'intérêt d'utiliser la composition selon l'invention comme traitement alternatif au glutaraldéhyde.
Effet de la composition selon l'invention sur les fruits post-récolte traitement des clémentines (variété « Afourar ») Drencher et Cirage. Fruits infectés expérimentalement par injection de spores
Six lots de 10 fruits de la variété « Afourar » ont été traités avec différentes préparations : Lot 1 : contient 10 fruits, lavés par une bouillie constituée par les fongicides chimiques (Imazalil à une dose de 500cc/hl et Orthophenylphénol à une dose de 750 ppm).
Lot 2 : contient 10 fruits, lavés par une bouillie constituée par la composition selon l'invention à une dose de 3kg par tonne d'eau.
Lot 3 : contient 10 fruits, cirés par un mélange de la cire et l'imazalil à une dose de 3000ppm, puis séchés à l'air chaud (50°C).
Lot 4 : contient 10 fruits, cirés par un mélange de cire et de la composition selon l'invention à une dose de 10kg par tonne, puis séchés (50°C).
Lot 5 : contient 10 fruits lavés par une bouillie constituée par les fongicides chimiques (Imazalil à une dose de 500cc/hl et Orthophenylphénol à une dose de 750 ppm), après leur séchage ces derniers ont été cirés par un mélange de cire et l'imazalil à une dose de 3000ppm, puis séchés (50°C ).
Lot 6 : contient 10 fruits lavés par une bouillie constitué par la composition selon l'invention à une dose de 3kg par tonne d'eau, après leur séchage ces derniers ont été cirés par un mélange de la cire et la composition selon l'invention à une dose de 10kg par tonne, puis séchés (50°C).
> Le lavage a été réalisé à l'aide d'une douchette qui permet de laver les fruits d'une façon comparable à celle du Drencher dans la station d'emballage.
> Le cirage a été appliqué par nébulisation d'une façon comparable à celle de système de cirage dans la station d'emballage.
24 heures après le traitement, chaque fruit des six lots, a été infecté par injection d'un volume de 100 μΙ d'une suspension de spores de la souche Pénicillium digitatum (106 spores /ml), à l'aide d'une seringue équipée d'une aiguille très fine (30 gauges), inclinée de façon tangentielle à la surface de l'albedo. Le point d'injection est marqué par un rond tracé au marqueur indélébile. Les fruits ont été ensuite incubés à une température de 20°C.
Un suivi quotidien des six lots a été effectué, et l'apparition ainsi que le développement de la pourriture au niveau des points d'injection a été noté pour les fruits de chaque lot.
Les résultats obtenus montrent que la pourriture commence à partir du troisième jour après l'infection chez le lot lavé avec les fongicides chimiques, alors que chez lot lavé avec la composition selon l'invention la pourriture ne commence qu'après quatre jours. Les résultats montrent également que la pourriture chez le lot lavé avec les fongicides chimiques se développe d'une façon plus rapide avec un diamètre de 3.2 cm ± 0.7 après 7 jours, par rapport au lot lavé avec la composition selon l'invention où le diamètre de la pourriture atteint seulement 2 cm ± 0.6 après 7 jours. Les résultats montrent aussi un retard de l'apparition des spores chez le lot traité avec la composition selon l'invention en comparaison avec le lot traité avec les fongicides chimiques.
Pout les lots 3 et 4, la pourriture commence à partir du quatrième jour après l'infection chez le lot traité avec le mélange de la cire plus la composition de l'invention et le lot traité avec le mélange de la cire plus l'imazalil. Cependant, un développement plus rapide de la pourriture a été noté chez le lot traité avec le mélange de la cire et l'imazalil (2.55 cm ± 0.3 de diamètre après 7j), par rapport au développement de la pourriture chez le lot traité avec le mélange de la cire et la composition selon l'invention (1.66cm ± 0.3 de diamètre après 7j).
Pour les lots 5 et 6 : La pourriture chez le lot lavé et ciré avec la préparation de l'invention (1.2cm ± 0.4 de diamètre après 7j) se développe d'une façon faible par rapport le lot lavé et ciré avec les fongicides chimiques (2.07cm ± 0.5 de diamètre après 7j). Des résultats similaires ont été obtenus pour la variété « Maroc-late ».
Donc la préparation de l'invention permet une protection meilleure que les fongicides chimiques lorsqu'elle est utilisée pour le lavage et le cirage des fruits infectés expérimentalement avec un nombre extrême de spores localisés dans le point d'injection.
Traitement des clémentines (variété « Afourar ») Drencher et Cirage. Fruits blessés expérimentalement non infectés
Trois lots de 10 fruits de la variété « Afourar » ont été préparés : • Lot 1 : 10 fruits lavés avec une bouillie constituée par les fongicides chimiques (Imazalil à une dose de 500cc/hl et Orthophénylphénol à une dose de 750 cc/hl), ensuite cirés avec un mélange de cire plus l'imazalil à une dose de 3000ppm, puis séchés à 50°C.
• Lot 2 : 10 fruits lavés avec une bouillie constituée par la composition selon l'invention à une dose de 3kg par tonne d'eau, ensuite cirés avec un mélange de cire plus la préparation de l'invention à une dose de 10kg par tonne, puis séchés à50°C
• Lot 3 : 10 fruits lavés avec l'eau seule, ensuite cirés avec la cire seule, puis séchés à 50°C.
Deux trous (diamètre 1mm + profondeur 2mm) équidistants traversant le flavedo et l'albédo, et arrivant jusqu'à la pulpe, ont été effectués sur chaque fruit. Ensuite ces fruits ont été conservés dans des boîtes fermées hermétiquement et saturée en humidité. Les boîtes ont été incubées à une température de 27 C°.
Le pourcentage de la surface de fruits pourris au niveau des trous, a été noté pour les fruits de chaque lot.
Les résultats sont présentés dans le Tableau 20.
Tobleou 20 : Pourcentage de la surface pourrit sur les fruits traités par la composition de l'invention par rapport aux fruits traités avec l'imazalil et les fruits non traité :
Les résultats montrent une réduction très significative dans le pourcentage de surface pourrie chez les fruits traités avec la préparation de l'invention par rapport aux fruits témoin traités avec l'eau et la cire seule. Cette réduction est remarquable également par rapport aux fruits traités avec les fongicides chimiques.
Ces résultats montrent que la composition selon l'invention permet une conservation des fruits pendant 12 jours sans pourriture alors que pour le lot traité avec les fongicides chimiques, la pourriture est apparue au 6ème jour. Pour le lot sans traitement, la pourriture est apparue au 4ème jour.
Traitement par trempage de clémentines, directement sur le terrain dans une ferme d'agrumes
Des essais terrains ont été effectués dans une ferme d'agrume. Dans ces essais, un lot de quatre caisses de fruits de la variété « Afourar » trempés directement après leurs cueillette dans l'eau contenant la préparation de l'invention à la dose de 1 kg par tonne, un autre lot de 4 caisses de fruits trempés directement après leur cueillette dans de l'eau seule. 30 fruits ont été prélevés à partir de chaque lot, et la charge fongique de chaque fruit a été évaluée en nombre de spores (Unités formant colonie) par centimètre carré de surface du fruit.
Les résultats obtenus montrent que la charge fongique des fruits trempés dans une solution avec la composition selon l'invention est de l'ordre de 105 spores par cm2, plus faible que la charge fongique des fruits trempés dans l'eau seule qui atteint 108 spores par cm2. Ces résultats montrent que les fruits trempés dans la préparation de l'invention arriveront à la station d'emballage avec une charge initiale plus réduite (1000 fois plus faible) par rapport à celle des fruits trempés dans l'eau seule.
- Drencher et cirage sur des clémentines infectées, tests dans une station d'emballage
Des essais terrain ont été effectués dans une station d'emballage d'agrumes. Dans ces essais, un lot de 6 tonnes de fruits de la variété « Afourar » a été lavé au niveau du drencher par une bouillie qui contient l'eau et la préparation de l'invention à une dose de 3 kg par tonne, ensuite à l'étape de cirage, ce même lot a été ciré avec un mélange de la cire et la préparation de l'invention à une dose de 5 kg par tonne. Un autre lot de 6 tonnes de fruit de la variété « Afourar » a été lavé au niveau de l'étape du drencher par une bouillie constituée par les fongicides chimiques (Imazalil à une dose de 500cc/hl et Orthophenylphénol à une dose de 750 cc/hl), ensuite ciré avec le mélange de la cire et l'imazalil à une dose de 3000ppm. 30 fruits de chaque lot ont été prélevés après l'étape de drencher, et 30 fruits après l'étape de cirage afin d'évaluer leur charge fongique.
Les résultats sont présentés dans le Tableau 21.
Tobleou 21 : Charge fongique des fruits traité avec la composition selon l'invention ou avec les fongicides chimiques à l'étape de drencher et à l'étape de cirage. Charge exprimée en nombre de spores (UFC/cm2) par cm2
Les résultats obtenus montrent qu'il y a une différence significative dans la charge fongique des fruits traités avec la composition selon l'invention qui est mille fois plus faible que celle des fruits traités avec les fongicides chimiques après l'étape de drencher et après l'étape de cirage.
- Suivi du taux de pourriture de clémentines dans une station d'emballage
Des essais terrain ont été effectués dans une station d'emballage des agrumes. Dans ces essais, un premier lot de 6 tonnes (lot Imazalil) de fruits de la variété « Afourar » a été lavé avec une bouillie constituée par les fongicides chimiques (Imazalil à une dose de 500cc/hl et Orthophenylphénol à une dose de 750 cc/hl) à l'étape de drencher, et cirés avec un mélange de la cire et l'imazalil à une dose de 300ppm à l'étape de cirage. Un deuxième lot de 6 tonnes de fruits de la variété « Afourar » (lot composition) a été lavé avec une bouillie contenant l'eau et la composition selon l'invention à la dose de 3 kg par tonne, et ciré avec un mélange de la cire et de la composition selon l'invention à la dose de 5 kg par tonne. Après la mise en caisses, deux sous lots de 15 caisses ont été prélevés à partir de chaque lot et répartis comme suit :
• Sous lot a : 15 caisses du lot Imazalil, stockées à 8 °C .
• Sous lot b : 15 caisses du lot composition stockées à 8 °C.
• sous lot c : 15 caisses du lot Imazalil stockées à 25 °C.
• Sous lot d : 15 caisses du lot composition stockées à 25°C. Les sous lots ont été contrôlés une fois par semaine pendant un mois. Un comptage des fruits pourris dans chaque lot permet de révéler l'évolution du taux de pourriture en fonction de la température de stockage et du traitement utilisé.
Les résultats sont présentés dans le Tableau 22.
Tableau 22 : Pourcentage des fruits pourris en fonction du traitement utilisé dans deux conditions de stockage différent
Les résultats obtenus montrent que le taux de pourriture chez les sous lots conservés à une température de 25°C est plus élevé en comparaison avec les sous lots conservés à une température de 4°C. Les résultats montrent aussi que les fruits traités avec la composition selon l'invention présentent un taux de pourriture entre 0,5% et 2,82% à une température de 4°C et entre 4,5% et 6,91% à 25°C, ce taux est plus faible par rapport au taux de pourriture chez les fruits traités avec les fongicides chimiques, qui varie entre 1,35% et 4,67% à une température de stockage de 4°C, et entre 4,62% et 9,68% à une température de 25°C.
Traitement de l'air ambiant dans une station d'emballage de clémentines
Des essais ont été réalisés dans une station d'emballage des agrumes. Dans ces essais, l'air ambiant de différentes zones de la station a été traité par pulvérisation de la préparation de l'invention à une dose de 10 kg par tonne d'eau deux fois par jour ; entre 12 h et 13 h, et à 18h. Des prélèvements d'air (boîte de pétri avec milieu PDA ouverte pendant 5 minutes) ont été réalisés afin d'évaluer la charge fongique de l'air ambiant de chaque zone de la station avant et après traitement et ceci quatre fois par jour :
à 07h30, avant le début de l'activité des ouvriers ; 13h après le traitement de la veille à 12h00, avant le premier traitement de l'air (12h30min) pendant la pause ouvriers,
à 13h30, une heure après le premier traitement
- à 18h00,avant le 2ème traitement (18h30).
Les résultats obtenus sont présentés dans le Tableau 23.
Tobleou 23 : nombre de colonies par boite de pétri
Les résultats montrent que la charge fongique de l'air des différentes zones était très basse, en début de la journée grâce au traitement de l'air avec la préparation de l'invention effectué à la fin de la journée précédente. Pendant la journée, cette charge augmente progressivement jusqu'à midi ou une pulvérisation de la préparation de l'invention provoque une diminution significative de cette charge. De l'après-midi jusqu'à la fin de la journée, une légère augmentation de la charge fongique de l'air ambiant de différentes zones a été notée, qui sera diminuée par une deuxième pulvérisation de la préparation de l'invention. Cette solution permet d'emballer les fruits sans risque de contamination par la microflore de l'air. - Evaluation de l'effet de la composition selon l'invention en laboratoire
Une souche de pénicillium digitatum , une souche de pénicillium italicum, et une souche de géotrichum candidum, ont été isolées à partir des oranges pourries, puis purifiées et identifiées, afin d'étudier la
Une goutte de 10 μβ d'une suspension mère de 106 spores /ml de chacune de 3 souches, à été cultivée à la surface des boites des pétri du milieu sabouraud au chloramphinicol contenant différentes concentrations de la composition selon l'invention . La vitesse de croissance des trois souches, est suivie quotidiennement en mesurant le diamètre des colonies.
Les résultats obtenus sont présentés dans le Tableau 24. Tableau 24 : Evolution du diamètre des thalles des trois souches cultivées en présence de différentes concentrations de la composition selon l'invention
Ces résultats montrent que la composition selon l'invention exerce une très forte inhibition partielle sur les trois souches étudiées à la concentration 0,75 g/1 qui correspond à un traitement avec 0,75 kg par tonne de la composition. A partir de la concentration 1,25 on assiste à une inhibition totale sur les trois souches étudiées.
Ces résultats montrent clairement que la composition selon l'invention possède une très forte efficacité contre les principaux champignons responsables de la pourriture des agrumes en post-récolte. - Evaluation de l'effet de la composition selon l'invention sur des tomates cerise en postrécolte
Deux lots de 120 tomates cerise de la variété Angel DlAl ont été traités avec deux préparations différentes:
> Lot 1: contenant 120 tomates lavées avec une bouillie contenant l'eau et la composition selon l'invention à une dose de 0.5g/l.
> Lot 2: contenant 120 tomates lavées avec une bouillie contenant le Chlore.
Après le lavage, chaque lot a été divisé en deux sous lots de 60 tomates cerise :
> Un sous-lot a : 60 tomates du lot 1, stocké à 25°C
> Un sous-lot b : 60 tomates de lot 2, stocké à 25°C
> Un sous-lot c : 60 tomates du lot 1, stocké à 8°C
> Un sous-lot d : 60 tomates du lot 1, stocké à 8°C Les tomates de chaque sous-lot ont été suivies quotidiennement, et le pourcentage des tomates déshydratées a été noté.
Les résultats sont présentés dans le Tableau 25.
Tableau 25 : Pourcentage des tomates cerise pourries dans le lot lavé avec la composition de l'invention, en comparaison avec le lot lavé avec le chlore, en fonction de conditions de stockage
Les résultats obtenus montrent que le pourcentage des tomates déshydratées chez les sous- lots conservés à une température de 25°C est plus élevé en comparaison avec les sous lots conservés à une température de 8°C. Les résultats montrent aussi que le lot traité avec la composition selon l'invention présente un pourcentage de tomates déshydratées plus faible par rapport au taux de tomates déshydratées chez le lot traité avec le chlore.
Un autre test a été réalisé. Quatre lots de 20 tomates cerise de la variété Angel D1A1 ont été traités avec trois préparations différentes :
> Lot 1: contenant 20 tomates cerise lavées la composition selon l'invention à une dose de 0.5g/l.
> Lot 2: contenant 20 tomates cerise lavées avec le Chlore.
> Lot 3: contenant 20 tomates cerise lavées avec l'eau seul (Témoin). Après traitement, les tomates de chaque lot ont été blessées au niveau du pédoncule par une Seringue fine (22G xl ¼"), et conservées a une température de 27°C.
Les tomates ont été suivies quotidiennement, et le pourcentage de tomates qui présentent une pourriture de pédoncule a été notée.
Les résultats sont présentés dans le Tableau 26.
Tobleou 26 : Pourcentage des tomates cerise qui présente une pourriture de pédoncule en fonction de traitement utilisé
Les résultats montrent une réduction très significative dans le pourcentage de tomates pourries chez les fruits lavés avec la composition de l'invention par rapport aux fruits témoin lavés avec l'eau. Cette réduction est remarquable également par rapport aux fruits lavés avec le chlore.

Claims

REVENDICATIONS
1. Composition sous forme solide, stable et dispersible dans l'eau, se présentant sous forme de poudre, pellets ou comprimés, caractérisée en ce qu'elle comprend :
au moins un alcool aromatique ou au moins un mélange contenant au moins un alcool aromatique,
- au moins un agent émulsifiant et/ou une huile,
au moins un agent texturant, et
au moins un couple acide-base effervescent.
2. Composition selon la revendication 1 caractérisée en ce que :
le (ou les) alcool(s) aromatique(s) ou le (ou les) mélange(s) d'alcool(s) aromatique(s) représente(nt) entre 0,1 et 25% en poids de la composition, le (ou les) agent(s) émulsifiant et/ou la (ou les) huile(s) représente(nt) entre 0,01 et 2% en poids de la composition,
le (ou les) agent(s) texturant représente(nt) entre 5 et 12% en poids de la composition,
- le (ou les) couple(s)acide-base effervescent(s) représente(nt) entre 50 et 94,89% en poids de la composition.
3. Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce qu'elle est constituée exclusivement par :
au moins un alcool aromatique ou au moins un mélange contenant au moins un alcool aromatique,
au moins un agent émulsifiant et/ou une huile,
au moins un agent texturant, et
au moins un couple acide-base effervescent.
4. Composition selon la précédente revendication, caractérisée en ce que :
- le (ou les) alcool(s) aromatique(s) ou le (ou les) mélange(s) d'alcool(s) aromatique(s) représente(nt) entre 0,1 et 25% en poids de la composition, le (ou les) agent(s) émulsifiant et/ou la (ou les) huile(s) représente(nt) entre 0,01 et 2% en poids de la composition,
le (ou les) agent(s) texturant représente(nt) entre 5 et 12% en poids de la composition, le (ou les) couple(s) acide-base effervescent(s) représente(nt) entre 61 et 94,89% en poids de la composition.
5. Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que dans un couple effervescent, l'acide du couple effervescent représente entre 20 et 25% en poids de la composition et la base du couple effervescent représente entre 60 et 74,89% en poids de la composition.
6. Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que le (ou les) alcool(s) aromatique(s) est(sont) mono, di ou sesquiterpeniques.
7. Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que le (ou les) alcool(s) aromatique(s) est(sont) choisi(s) parmi le thymol, l'eugénol, la carvacrol.
8. Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que le (ou les) alcool(s) aromatique(s) est(sont) un (des) alcool(s) aromatique(s) naturel(s) ou de synthèse.
9. Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que le (ou les) agent(s) émulsifiant est (sont) choisi(s) parmi la lécithine de soja, la cellulose, la pectine et le glycérol.
10. Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que la (ou les) huile(s) est (sont) choisies parmi les huiles végétales et les huiles minérales.
11. Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que le (ou les) agent(s) texturant est (sont) choisi(s) parmi la gomme de caroube, la gomme de guar et la gomme de casse.
12. Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que le (ou les) couple(s) acide-base effervescent(s) est (sont) choisi(s) parmi les couples suivants : bicarbonate de Sodium-acide citrique, bicarbonate de Calcium-acide citrique, bicarbonate de Potassium-acide citrique, bicarbonate de Sodium-acide tartrique, bicarbonate de Calcium- acide tartrique, bicarbonate de Potassium-acide tartrique, bicarbonate de Sodium-acide maléique, bicarbonate de Potassium-acide maléique, bicarbonate de Sodium-acide ascorbique, bicarbonate de Calcium-acide ascorbique et bicarbonate de Potassium-acide ascorbique.
13. Utilisation d'une composition selon l'une des précédentes revendications comme produit phytosanitaire pour prévenir et/ou lutter contre les maladies des plantes causées par des champignons, des bactéries, des virus, des nématodes et/ou des ravageurs.
14. Utilisation selon la revendication 13, pour prévenir et/ou lutter contre les maladies des fruits, des légumes et/ou des fleurs en post récolte.
15. Utilisation selon l'une des revendications 13 ou 14, pour l'eau d'irrigation ou en aspersion foliaire.
16. Utilisation selon l'une des revendications 13 à 15, caractérisée en ce que les maladies des plantes causées par des bactéries sont choisies parmi la pourriture molle causée par les espèces Erwinia, le chancre bactérien causé par les espèces Pseudomonas ou la galle du collet causée par les espèces Agrobacterium.
17. Utilisation selon l'une des revendications 13 à 16, caractérisée en ce que les maladies des plantes causées par des champignons sont choisies parmi la fusariose causée par les espèces Fusarium, le mildiou causé par les espèces Phytophtora, l'oïdium causé par les espèces Podosphaera et Oïdium, l'alternariose causée par les espèces Alternaria, la fumagine causée par les espèces Alternaria et Cladosporium ou la pourriture grise causée par les espèces Botrytis.
18. Utilisation selon l'une des revendications 13 à 17, caractérisée en ce que les ravageurs sont choisis parmi les pucerons, les moucherons, les acariens du sol ou les noctuelles.
19. Utilisation selon l'une des revendications 13 à 18, pour prévenir et/ou lutter contre la pourriture des agrumes causée par les espèces Pénicillium et Geotrichum, ou pour prévenir et/ou lutter contre la détérioration fongique des dattes causée par les espèces Aspergillus.
20. Utilisation selon l'une des revendications 13 à 19, pour un traitement antifongique lors de l'enrobage des semences.
21. Utilisation selon la précédente revendication, dans laquelle les semences sont choisies parmi le blé, l'orge, les lentilles, les pois chiches et les fèves.
22. Utilisation d'une composition selon l'une des revendications 1 à 12 :
- comme produit phytosanitaire pour augmenter la tenue en vase des fleurs coupées, et/ou
- comme produit phytosanitaire pour nettoyer et éliminer les traces de pesticides et les microbes contenues dans les fruits et légumes, et/ou
- pour stimuler la croissance des plantes, et/ou
- pour décontaminer les supports de culture en agriculture hors sol et en sol et/ou aseptiser l'air ambiant, et/ou - pour nettoyer et prévenir la formation de calcaire.
23. Utilisation d'une composition selon la revendication 22, comme produit phytosanitaire pour nettoyer et éliminer les traces de pesticides et les microbes contenues dans les fruits et légumes, pour décontaminer les raisins, les abricots, les poivrons et les tomates avant le séchage.
24. Utilisation selon la revendication 22, pour stimuler la rhizogenèse chez les plantes.
25. Utilisation d'une composition selon l'une des revendications 1 à 12, dans les bâtiments d'élevage animal pour :
Aseptiser l'air ambiant des bâtiments, et/ou
- Décontaminer l'eau d'abreuvement, et/ou
Nettoyer les surfaces des bâtiments.
26. Utilisation d'une composition selon l'une des revendications 1 à 12 :
- pour éliminer les biofilms et prévenir leur formation, et/ou
dans les bâtiments d'élevage animal pour prévenir et traiter la grippe aviaire e
- comme bain de décontamination des carcasses d'animaux dans les abattoirs ou pour décontaminer des œufs de volaille avant de les placer dans des couveuses, et/ou
- pour désinfecter des dispositifs médicaux réutilisables, et/ou
- comme bain de douche désinfectant pour les dents et la gencive ou comme produit désinfectant pour les mains.
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