WO2021089967A1 - Preparation combinee et procede pour la lutte contre les fourmis champignonnistes - Google Patents

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WO2021089967A1
WO2021089967A1 PCT/FR2020/052033 FR2020052033W WO2021089967A1 WO 2021089967 A1 WO2021089967 A1 WO 2021089967A1 FR 2020052033 W FR2020052033 W FR 2020052033W WO 2021089967 A1 WO2021089967 A1 WO 2021089967A1
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ants
preparation
insecticide
combined
laccase
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Application number
PCT/FR2020/052033
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English (en)
Inventor
Bernard Jacquet
Juliette POIDATZ
François-Foulques DES PORTES
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Soleo Eco-Solutions
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Publication date
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N47/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid
    • A01N47/02—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid the carbon atom having no bond to a nitrogen atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N41/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a sulfur atom bound to a hetero atom
    • A01N41/02—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a sulfur atom bound to a hetero atom containing a sulfur-to-oxygen double bond
    • A01N41/04—Sulfonic acids; Derivatives thereof
    • A01N41/06—Sulfonic acid amides

Definitions

  • the invention relates to the field of pest control. It offers a new combined preparation against mushroom ants as well as a new control process capable of destroying colonies of mushroom ants.
  • the present invention also provides a method of making such a combined preparation.
  • Mushroom ants or "leaf cutter ants” or “cassava ants” belong to the family Formicidae, subfamily Myrmicinae, Attini tribes, comprising several genera such as Atta or Acromyrmex. Mushroom ants are found in the tropics and subtropics such as Central and South America.
  • the fungus supplied with raw material by the ants, constitutes a source of nutrients for the brood, the queen, and the workers (Qinlan et al., 1978, Fisher et al., 1994) and the fungus is a source of enzymes ensuring degradation of plant material.
  • the ants provide protection by secreting antibiotics and the fungus, during its growth, helps maintain the architecture of the nest (Ronald Zanetti et al., 2014).
  • Mushroom ants represent a pest for agricultural and forestry crops. Indeed, they are found without a predator when they invade monocultures developed by humans (a phenomenon accentuated with deforestation), which results in a strong unregulated presence. Polyphagous, they collect leaves, flowers, fruits and seeds and thus ravage most agricultural crops, in particular food crops, vegetables and ornamental plants. [0006] The damage caused by mushroom ants represents an increase in the costs of crop management. For example, damage to Eucalyptus plantations has been estimated at over 14.5%, with defoliation in Pine and Eucalyptus crops decreasing the increase in plant size and diameter (Resi Filho et al. , 2001, Cantarelli et al. 2008).
  • organochlorine insecticides such as aldrin or dechlorane were widely used in agriculture, until their use was suspended by the US-EPA in 1974.
  • these conventional insecticidal compounds are generally difficult to biodegrade and cause persistent toxic activity in soils and waters and a danger to human health.
  • Organophosphate and organohalogen insecticides and pyrethroids have also been used.
  • these insecticides resulting from chemical syntheses have a harmful impact on humans and the environment.
  • they present difficulty in use and low efficacy with low mortality rates (Isenring and Neumeister, 2010).
  • laccase This enzyme breaks down lignin and acts on certain polyphenols.
  • the laccases oxidize the phenolic derivatives making it possible to form monolignols from lignin.
  • laccase was the enzyme mainly expressed in the enzymatic profiles produced from lysates extracted from grindstones and ants.
  • formicidal compositions comprising a laccase inhibitor (WO2017 / 121881) have been developed.
  • compositions comprising a laccase inhibitor have also been coupled with an antibacterial in order to optimize the disappearance of the colony.
  • antibacterials is less and less recommended following the development of certain resistant strains.
  • Boulogne et al. (2012) list insecticidal and antifungal compounds produced by plants as an alternative to synthetic pesticides in the control of fungal ants.
  • Compositions based on peppermint oil are mentioned in international application W001 / 00034 as pesticide compositions for household use.
  • International application WO2009 / 117623 mentions pesticide and antiparasitic compositions based on essential oils.
  • the present invention proposes a new combined preparation against mushroom ants as well as a new control process capable of rapidly stopping the activity of harvesting ants, of limiting the phenomena of learning and displacement of nests by destroying quickly the colonies of fungal ants in particular by a rapid action on the grindstone and the ants, while reducing the quantities of synthetic insecticide necessary until now.
  • the invention relates to a combined formicidal preparation comprising, formulated separately or in a single composition, at least one insecticide and at least one laccase inhibitor, said laccase inhibitor being present in the preparation at a level greater than or equal to 0.5% by weight of the preparation and the mass ratio between the at least one laccase inhibitor and the at least one insecticide being greater than or equal to 2.
  • Such a combined preparation makes it possible to maintain a high level of efficiency in controlling ant harvesting activities while reducing the amounts of insecticide required. It also allows the destruction of the fungus millstones leading to a lasting destruction of the nest.
  • the combined preparation according to the invention is inexpensive and reduces the negative impacts on the environment and on human and animal health due to the small amounts of insecticide used.
  • the laccase inhibitor inhibits the laccase activity present in the grindstone and in ants.
  • the content of laccase inhibitor helps control ants, and also affects the grindstone.
  • the content used in laccase inhibitor is easily degradable and environmentally friendly.
  • the use, in addition to the laccase inhibitor, of at least one insecticide with activity against ants allows the harvesting activity of ants to be quickly stopped.
  • the invention further relates to a combined formicidal preparation
  • a combined formicidal preparation comprising, formulated separately or in a single composition, at least one insecticide belonging to the family of phenylpyrazoles, neonicotinoids or to the family of sulfonamides and at least one laccase inhibitor selected from: an antioxidant molecule, a chelator, a detergent, a non-oxidizing organic acid and a cationic metal, said laccase inhibitor being present in the preparation at a content greater than or equal to 0.5% by weight of the preparation, and the mass ratio between the at least one laccase inhibitor and the at least one insecticide being greater than or equal to 2.
  • At least one insecticide is selected from: fipronil, sulfluramide or their mixture.
  • Fipronil and sulfluramide make it possible to quickly stop the activity of harvesting ants by a quick and efficient action on the harvesters.
  • sulfluramide is inexpensive, has high efficacy, and is of low toxicity or danger to humans.
  • the mass ratio between the at least one laccase inhibitor and the at least one insecticide is greater than 5, preferably greater than or equal to 10.
  • Such a mass ratio between the at least one laccase inhibitor and the at least an insecticide makes it possible to couple their effects and to obtain a rapid elimination of the ants, a destruction of the colony as a whole as well as an absence of reappearance of the colonies.
  • the insecticide content in the preparation is less than or equal to 0.3% by weight, of the preparation preferably less than or equal to 0.1%.
  • concentrations for example, sulfluramide shows lower toxicity to humans and the environment.
  • At least one laccase inhibitor is selected from: an antioxidant molecule, a chelator, a detergent, a non-oxidizing organic acid and a cationic metal. These molecules inhibit the activity of laccase and therefore contribute, among other things, to the destruction of the fungus millstone.
  • At least one laccase inhibitor is selected from: glutathione, L-cysteine, sodium thiosulfate, ascorbic acid, eugenol and their mixtures. These molecules are rapidly biodegradable and exhibit strong anti-laccase activity.
  • at least one laccase inhibitor is selected from: L-cysteine, ascorbic acid and mixtures thereof. More preferably the at least one laccase inhibitor is ascorbic acid.
  • At least one laccase inhibitor is ascorbic acid or L-cysteine
  • at least one insecticide is fipronil, sulfluramide or a mixture thereof.
  • the content of laccase inhibitor in the preparation is greater than or equal to 1% by weight of the preparation, preferably it is between 1 and 10%, limits included. In addition, the content of laccase inhibitor in the preparation is typically less than or equal to 10% by weight of the preparation. Such a content of laccase inhibitor allows, in combination with an insecticide, affects both the grindstone and the different social categories of ants.
  • the at least one laccase inhibitor is selected from L-cysteine and ascorbic acid, and the at least one insecticide is fipronil and / or sulfluramide.
  • the at least one laccase inhibitor is ascorbic acid, and the at least one insecticide is sulfluramide.
  • the preparation further includes an appetizing.
  • the use of an appetizer makes it possible to increase the number of ants ingesting the combined preparation and / or to increase the spread of the combined preparation to the whole colony and therefore to increase the exposure of ants and a mushroom wheel at the combined drug.
  • the appetite is selected from: an oligosaccharide appetite, a polysaccharide appetite and mixtures thereof.
  • At least one laccase inhibitor and at least one insecticide are part of a single composition
  • the invention further relates to a method of controlling fungal ants, comprising the use of a combined preparation according to the invention.
  • a method of controlling fungal ants comprising the use of a combined preparation according to the invention.
  • Such a process makes it possible to protect crops by destroying the nests and preventing their development in or around the fields and crops to be protected.
  • such a method is particularly suited to the control of mushroom ants, because it targets both colony members and the grindstone, it is inexpensive and environmentally friendly.
  • the invention also relates to a method of manufacturing a combined preparation according to the invention comprising the following steps:
  • Such a manufacturing process is simple to perform, inexpensive and makes it possible to protect crops by preventing the development of nests in or around the fields to be protected and to destroy the colonies of mushroom ants.
  • Figure 1 diagram of a sub-colony such as those used for the calibrated tests of the preparations of the invention.
  • the garden part (A) is connected via a tunnel (C) to the mushroom part (B) where the mushroom (1) is housed under a bell (D) as well as a drinking trough (E), the ants (2) passing from the garden to the mushroom house via the tunnel.
  • Prep. 1 preparation containing 1% cysteine (laccase inhibitor); Prep.
  • Figure 3 cumulative mortality of ants over time.
  • Prep. 4 preparation containing 0.3% sulfluramide
  • Prep. 5 preparation containing 0.1% sulfluramide
  • Prep 7 preparation containing 1% ascorbic acid (laccase inhibitor)
  • Prep 8 preparation containing 1% ascorbic acid (laccase inhibitor) combined with 0.1% sulfluramide.
  • the dotted gray horizontal line marks the 50% mortality level.
  • muscle ants is understood to mean ants belonging to the Attini tribe and in particular to the Atta or Acromyrmex genera.
  • the most widely represented species Acromyrmex ambiguus, Acromyrmex aspersus, Acromyrmex balzani, Acromyrmex biscutatus, Acromyrmex coronatus, Acromyrmex crassispinus, Acromyrmex diasi, Acromyrmex disciger, Acromyrmex evenkul, Acromyrmexyerxyerxyxyricrixis, Acromyrmexyerxyxyxyricrixis, Acromyrmexyerxyxyxidicicornis, Acromyrmexyerxyxidicex, hepsidrix Acromyrmex lobicornis, Acromyrmex mondayi, Acromyrmex niger, Acromyrmex mondayi, Acro
  • the expression “fight against mushroom ants” corresponds here to an action leading to the abandonment of the nest and / or to the destruction of the colony.
  • colony should be understood here to mean a group of ants, other than a single pair and comprising at least one queen, building nests in order to raise offspring in a cooperative manner.
  • grindingstone also called “mushroom garden” (ie fungus garden) in the literature, it is necessary to understand here the fungal structure cultivated by the mushroom ants and composed mainly of the saprophytic basidiomycete fungus of the species Leucophorusgongylophorus growing on ⁇ vegetable matter reclaimed by es tournis.
  • “Grinding wheel”, “mushroom wheel” or “mushroom” are used interchangeably here.
  • combined formicidal preparation a preparation formulated so as to target the fungal ants and the fungus grindstone and whose surprising potentiation effects resulting from the combination between the insecticide and the laccase inhibitor allow in particular a reduction in the doses of insecticides introduced into the environment.
  • the combined formicidal preparation according to the invention has little or no impact on bees or other invertebrates.
  • the combined formicidal preparation can comprise these active ingredients formulated separately or in a single composition.
  • laccase should be understood to mean enzymes of the polyphenol oxidase type. They make it possible to degrade lignin and provide protection against the toxicity of certain polyphenols. In the nomenclature relating to enzymes, laccases are grouped under the code EC 1 .10.3.2. The laccases found in or on the fungi of mushroom ants and in or on the mushroom ants are particularly targeted.
  • laccase inhibitor or "compound exhibiting laccase inhibitory activity” should be understood to mean a compound which inhibits the activity of laccases as measured for example by the substrate ABTS (2,2'-azino-bis ( 3-ethylbenz-thiazoline-6-sulfonic acid) according to the method published by Bourbonnais et al. (1990).
  • antioxidant molecule should be understood to mean the common meaning given to this term, namely a molecule capable of reducing or preventing the oxidation of other chemical substances.
  • the antioxidant potential of a molecule can be verified, for example, by using ABTS radicals (Bourbonnais et al., 1990).
  • the term "appetizing” or “bait” should be understood to mean a compound having an attracting power on mushroom ants and thus increasing the amount of preparation according to the invention harvested by said ants.
  • carbohydrate appetite it is necessary to understand a molecule belonging to the group of carbohydrates.
  • oligosaccharide or polysaccharide appetizing it is necessary to understand a molecule of oligosaccharide or polysaccharide type such as for example fructans, glucans, galactans, mannans or hemicelluloses.
  • Cultures protected from infestation and degradation by colonies of fungal ants by the use of the combined preparation according to the invention are preferably all plant cultures of socio-economic interest for the activity human.
  • it can be any agricultural crop (forestry, cereals, fruit growing, floriculture, fodder crops) or pleasure such as gardens.
  • the invention relates to a combined preparation comprising at least one insecticide and at least one laccase inhibitor, said laccase inhibitor being present in the preparation at a content greater than or equal to 0.5% in weight of the preparation.
  • laccase inhibitors There is a wide variety of laccase inhibitors.
  • laccase inhibitor any molecule which, in the context of the combined preparation mentioned above, causes a decrease in the activity of laccase by more than 50%, preferably more 75%, more preferably more than 90%.
  • these inhibitions of the laccase activity are obtained at contents of laccase inhibitor of less than 10% by weight of the preparation. Even more preferably, these inhibitions of the laccase activity are obtained at contents less than or equal to 5% by weight of the preparation.
  • antioxidant molecules have the capacity to inhibit the activity of a laccase. Nevertheless, there are laccase inhibitors which do not exhibit antioxidant activity. Among the molecules exhibiting anti-laccase activity and not being antioxidant molecules, it is possible to cite chelators, detergents, non-oxidizing organic acids and cationic metals.
  • the following molecules are also molecules exhibiting anti-laccase activity without being antioxidant molecules: ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), calcium chloride (CaC), rhodotorulic acid, enterobactin, thioglycolic acid, diethyldithiocarbamic acid, azide of sodium, cetyltrimethylammonium bromide, Fe 2+ , Cu 2+ , Ag + , Li + , Sn + , Hg + , Mn 2+ , Zn 2+ , Al 3+ , sodium lauryl sulfate, sodium cyanide (NaCN), thiosulphate sodium, oxalic acid and beta-mercaptoethanol.
  • at least one laccase inhibitor is selected from: an antioxidant molecule, a chelator, a detergent, a non-oxidizing organic acid and a cationic metal.
  • laccase inhibitor The molecules preferred for their use as a laccase inhibitor are:
  • - for detergents sodium lauryl sulphate
  • - for cationic metals Fe 2+ , Cu 2+ , Ag + , Li + , Sn + , Hg + , Mn 2+ , Zn 2+ , Al 3+ ,
  • oxalic acid thioglycolic acid
  • diethyldithiocarbamic acid diethyldithiocarbamic acid
  • the laccase inhibitor is an antioxidant molecule.
  • antioxidant molecules are generally known to those skilled in the art (Lu et al., 2010). He will also be able to verify this activity via standard tests for measuring the antioxidant potential such as that described in Bourbonnais et al. (1990).
  • the molecules exhibiting an anti-laccase activity and an anti-oxidant activity can for example be selected from: ascorbic acid (E300), citric acid (E330), coumaric acid, ferulic acid, gallic acid, palmityl acid 6-1 - ascorbic (E304), syringic acid, sodium / calcium / potassium (E301) / (E302) / (E303) ascorbates, butylhydroxyanisole (BHA), butylhydroxytoluol, cysteine, octyl (E31 1) or dodecyl (E312) gallates ), glutathione, sodium / potassium / calcium lactates (E325) / (E326) / (E327), lecithins (E322), lipoate, carotenoids (E160) like lutein, luteolin, carotenes like lycopene, sodium tartrates (E335) / potassium (E336) or sodium and potassium (E337), eugen
  • the laccase inhibitor is selected from one of the following compounds: ascorbic acid, citric acid (E330), coumaric acid, palmityl 6- 1 -ascorbic acid (E304), sodium / calcium / potassium ascorbates (E301 ) / (E302) / (E303), L- cysteine, octyl (E311) or dodecyl (E312) gallates, glutathione, sodium (E325), potassium (E326) or calcium (E327) lactates, lecithins (E322), carotenoids (E160) such as lutein, luteolin, carotenes such as lycopene, sodium (E335) / potassium (E336) or sodium and potassium (E337) tartrates, eugenol, sodium thiosulphate, vitamin E (natural tocopherols (E306)), synthetic a-tocopherol (E307), synthetic g-tocopherol (E308) and synthetic d-
  • the laccase inhibitor preferably has little impact on the environment and is rapidly degraded there.
  • the laccase inhibitor is selected from one of the following compounds: ascorbic acid, sodium / calcium ascorbates (E301) / (E302), sodium / potassium / calcium lactates (E325) / (E326 / (E327), lutein, lycopene, sodium (E335) / potassium (E336) or sodium and potassium (E337) tartrates, sodium thiosulfate, vitamin E (natural tocopherols (E306)), synthetic a-tocopherol (E307 ), synthetic g-tocopherol (E308) and synthetic d-tocopherol (E309), L-cysteine and glutathione.
  • the laccase inhibitor is selected from one of the following compounds: L-cysteine, coumaric acid , glutathione, eugenol, sodium thiosulfate, ferulic acid, syringic acid, ascorbic acid, gallic acid.
  • the laccase inhibitor is selected from one of the following compounds: L-cysteine, glutathione, eugenol, sodium thiosulfate, ferulic acid, syringic acid, ascorbic acid and gallic acid.
  • the laccase inhibitor is selected from L-cysteine, ascorbic acid, sodium thiosulphate, glutathione, eugenol and their mixtures.
  • the laccase inhibitor is selected from L-cysteine and ascorbic acid or their mixtures.
  • This laccase inhibitor is used at a sufficient concentration to cause an inhibition of the activity of the laccases present in the grindstone and in ants.
  • the laccase inhibitor is present in the preparation at a content greater than or equal to 0.25% by weight of the preparation.
  • the laccase inhibitor is present in a content greater than or equal to 0.5% and even more preferably in a content greater than or equal to 1%.
  • the content of laccase inhibitor in the preparation is less than 10% by weight of the preparation.
  • the content of laccase inhibitor in the preparation is comprised, limits included, between 0.25 and 15% by weight of the preparation, more preferably between 0.5 and 10% by weight of the preparation, limits included , and even more preferably between 1 and 5% by weight of the preparation, limits included.
  • This laccase inhibitor allows an inhibition of the laccase activity present in the grindstone and in ants.
  • the content used in laccase inhibitor is easily degradable and environmentally friendly.
  • the use of at least one laccase inhibitor has an activity on the grinding wheel.
  • this action is not immediate and does not quickly stop the harvesting activity of the ants, which can also displace the nest. It is therefore necessary to be able to target the ants in the colony as well.
  • the invention relates to a combined preparation comprising at least one insecticide and at least one laccase inhibitor, said laccase inhibitor being present in the preparation at a higher content or equal to 0.5% by weight of the preparation.
  • the use, in addition to the laccase inhibitor, of at least one insecticide having an activity against ants makes it possible to destroy the colonies around the location of the combined preparation by reducing the risk of reappearance. colonies.
  • the combination of at least one insecticide and at least one laccase inhibitor has an earlier and much greater inhibitory effect on the growth of the fungus than the inhibitor of laccase used alone. This is all the more surprising since no effect is observed on the fungus when the insecticide is used as the only active agent, at the same concentrations as those used in the combined preparation of the invention.
  • the fungus is essential for the colony because it provides food for adult ants and larvae by degrading the plants harvested by the ants.
  • the grindstone is the site of the larvae which are covered with mycelium by the workers, for protection and / or food supply. It is known that the grindstone secretes numerous enzymes of fungal origins which can reduce the effectiveness of insecticides on the one hand and act on adult ants on the other hand. It is also known from the prior art that the larvae play an essential role in the colony: a colony lacking in larvae quickly decays following the disorganization of the workers (lopes et al 2005). Thus, brought by the ants in the mushroom wheel, the combined preparations of the invention will cause the rapid withering away of the fungus, a source of food for the worker ants and the larvae which results in the death of ants and larvae. This implies a non-renewal of populations and therefore reduces the risk of resurgence of nests.
  • the combination of at least one insecticide and at least one laccase inhibitor has a faster formicidal effect on colony ants than the insecticide used alone, yet at lower rates. higher concentrations.
  • a surprising potentiation of the effect of the insecticide is therefore observed within the combined preparations, resulting in an identical overall mortality despite a decrease in the amounts of insecticide and also a reduction in the action time of the insecticide.
  • the mass ratio between the at least one laccase inhibitor and the at least one insecticide in the combined preparation according to the invention is greater than or equal to 2, preferably greater than or equal to 5, so more preferably greater than or equal to 10, particularly preferably greater than or equal to 30 and even more preferably greater than or equal to 50.
  • the mass ratio between the at least one laccase inhibitor and the at least one insecticide in the combined preparation according to the invention is comprised, limits comprised between 2 and 10,000, between 5 and 5,000, preferably between 10 and 15,000, preferably between 30 and 500, more preferably 50 and 300.
  • Such a mass ratio between at least one insecticide and at least one laccase inhibitor makes it possible to obtain the unexpected effects on the grindstone and the mortality of ants described above. It eliminates the ants and destroys the grindstone which prevents the reappearance of colonies, unlike conventional insecticide treatments, for which a displacement of the nests can be observed.
  • insecticides such as those belonging to the families of phenylpyrazoles, neonicotinoids or even sulfonamides.
  • the combined preparation according to the invention is characterized in that at least one insecticide belongs to the family of phenylpyrazoles, neonicotinoids or to the family of sulfonamides.
  • the combined preparation according to the invention is characterized in that at least one insecticide is selected from fipronil, sulfluramide or their mixture.
  • C12H4CI2F 6 N4OS trifluoromethylsulfinyl pyrazole-3-carbonitrile
  • C12H4CI2F 6 N4OS trifluoromethylsulfinyl pyrazole-3-carbonitrile
  • GABA gamma aminobutyric acid
  • Fipronil has a direct mode of action by simple contact or ingestion and an indirect effect by horizontal transfer of toxicity by necrophoresis, grooming and trophallaxis.
  • Sulfluramide or N-Ethylperfluorooctylsulfonamide is an insecticide which when present in the body is metabolized to form a compound perfluorooctane sulfonamide (DESFA) which is involved in the process of oxidative phosphorylation (aerobic respiration ), disrupting the production of ATP in the mitochondria as opposed to dechlorane which acts on the nervous system.
  • DESFA perfluorooctane sulfonamide
  • DESFA perfluorooctane sulfonamide
  • Poisoning by sulfluramide leads among other things to a sharp decrease in the energy of the ants organism until the interruption of the metabolism resulting in the death of the ants.
  • these insecticide treatments have the disadvantage of causing a warning phenomenon in the ants which then move the colony and the nest.
  • the combined preparation according to the invention allows a rapid effect on the ants and the colony and the accelerated decay of the grindstone, thus preventing the displacement of the colony.
  • sulfluramide is inexpensive, has high efficacy and is of low toxicity or danger to humans, especially since, still in the combined preparation according to the invention, the doses used may be lower than the doses used. usual indicated doses for these insecticides used alone.
  • a mixture of fipronil and sulfluramide can be used as an insecticide within the meaning of the invention. This makes it possible to couple both the effects of fipronil with the effects of sulfluramide.
  • the combined preparations according to the invention comprise significantly smaller amounts of insecticide compared to conventional insecticide treatments, while having a faster lethal effect and without reducing the overall mortality, which is particularly advantageous from the point of view of the environment and toxicity to humans.
  • insecticide content can be divided by a factor greater than or equal to 1, preferably by a factor greater than or equal to 2 and even more preferably by a factor greater than or equal to 3, relative to the prescribed treatment. for the insecticide used alone.
  • the content in the insecticide preparation is less than or equal to 0.3% by weight, preferably less than or equal to 0.15% by weight, more preferably less than or equal to 0.1% by weight of the preparation.
  • the insecticide is used in a formicidal preparation at a concentration of between 0.001% and 0.3% by weight of the preparation, limits included. Preferably, it is between 0.01 and 0.1% by weight, limits included and more preferably between 0.02 and 0.075% by weight of preparation, limits included.
  • sulfluramide exhibits low toxicity to humans and the environment.
  • the total insecticide content can be further reduced. It is less than or equal to 0.1%, preferably less than or equal to 0.075% by weight of the preparation, which makes it possible to maintain a high efficiency for the destruction of ants while further reducing the toxicity for humans and animals. environment.
  • this concentration may be even lower.
  • fipronil it can be less than or equal to 0.1% by weight, preferably less than or equal to 0.01% by weight of the preparation, even more preferably, less than or equal to 0.003% by weight of the preparation, particularly preferably, less than or equal to 0.001% by weight of the preparation.
  • the different contents, concentrations and the different mass ratios can be determined by a person skilled in the art using conventional tests for evaluating the concentration.
  • At least one laccase inhibitor is L-cysteine and the at least one insecticide is fipronil, sulfluramide or a mixture thereof.
  • L-cysteine is a potent inhibitor of phenol oxidases and, its combined use with fipronil or sulfluramide, leads to accelerated decay of the wheel, and to increase the effectiveness of fipronil or sulfluramide in terms of toxicity. for the ants of the colony, which results in the death of the colony, without displacement of nests or reappearances of new colonies or nests.
  • the at least one laccase inhibitor is ascorbic acid and the at least one insecticide is fipronil, sulfluramide or a mixture thereof.
  • ascorbic acid is also a potent inhibitor of phenol oxidase its use combined with fipronil and / or sulfluramide in terms of toxicity to the ants of the colony, which results in the death of the colony, without displacement of the colony. nest or reappearance of new colonies or nests.
  • the combined preparation further comprises an appetizer. This is because the use of an appetizer makes it possible to attract mushroom ants more effectively, as opposed to the absence of the appetite.
  • an appetizing allows to increase the number of ants ingesting the combined preparation or to increase the importation of the combined preparation inside the colony, in particular on the fungus, and therefore to increase the exposure of ants and the grindstone to the combined preparation.
  • the combined preparation according to the invention is characterized in that the appetite is selected from an appetizing oligosaccharide, an appetizing polysaccharide, and mixtures thereof.
  • the appetizing oligosaccharide or polysaccharide can be chosen from
  • starch starch, amylose, amylopectin, cellobiose, glycogen, glucose, sucrose, laminarin ((1-3) - beta-D-glucan), maltodextrin, polymers of cyclodextrin, polymers of isomaltose, icodextrins, dextran, maltoheptose, maltohexose, maltopentose , maltotetrose, maltotriose, maltobiose, cellulose, hemicellulose, holocellulose, lignocellulose, cellulose ethers, esters of cellulose, alkyl cellulose, hydroxy cellulose, levoglucosan, pectin, pectocellulose, microcrystalline cellulose, powdered cellulose, paper, wood fiber, their derivatives and their mixtures.
  • the oligosaccharide or polysaccharide appetite is chosen from: starch, amylose, cellobiose, laminarin, maltodextrin, maltobiose, glucose, sucrose, glycogen, cellulose, hemicellulose, holocellulose, lignocellulose, cellulose ethers, cellulose esters , alkyl cellulose, hydroxy cellulose, levoglucosan, pectin, pectocellulose, their derivatives and their mixtures.
  • the oligosaccharide or polysaccharide appetite is chosen from: starch, amylose, laminarin, maltodextrin, glycogen, cellulose, hemicellulose, holocellulose, lignocellulose, cellulose ethers, cellulose esters, alkyl cellulose, hydroxy cellulose, levoglucosan, pectin, pectocellulose, their derivatives and their mixtures.
  • the appetite is starch or cellulose.
  • the oligosaccharide or polysaccharide appetite can be a flour or a cereal porridge or a mixture of flours or grits of different cereals, such as, for example, wheat or corn flour, gruel of wheat, oats or corn.
  • the appetizing oligosaccharide or polysaccharide can be a fruit puree or a mixture of fruit puree or a composition based on fruit pulp or a mixture of fruit pulps, such as citrus fruits or the banana.
  • the oligosaccharide or polysaccharide appetite is a flour mixture or a cereal porridge or a mixture of flours or grits of different cereals such as, for example, those mentioned above, and of fruit puree or of a mixture of fruit puree or of a composition based on fruit pulp or a mixture of fruit pulp or fruit pulp derivatives (eg dehydrated pulp).
  • the concentration of appetite depends in particular on the presence and amount of laccase inhibitor and / or insecticide.
  • the amount of appetizing is between 600 g / kg and 999 g / kg; preferably between 800 g / kg and 999 g / kg, preferably between 850 g / kg and 990 g / kg, or even between 870 g / kg and 950 g / kg of the formicidal preparation.
  • the combination of the at least one laccase inhibitor and of the at least one insecticide in the combined preparations of the invention has no repellent effect on ants, in particular when it is used in combination with an appetizing oligosaccharide or polysaccharide as described above, as demonstrated in the experimental part.
  • the at least one laccase inhibitor and the at least one insecticide of the combined formicidal preparation according to the invention are suitable for being used simultaneously, jointly or separately, in one or more dispersions.
  • the preparation according to the invention can be dispersed all at once on or around the nest or near the collection columns.
  • the preparation according to the invention is dispersed regularly, in several times, over a period of time or at defined intervals, on or around the nest or near the collection columns.
  • the dispersions can take place every 5 to 10 days.
  • the dispersions can be daily, or spaced 2, 3, 4, 5, or 6 days, or one, two or three weeks.
  • the preparation according to the invention can be dispersed directly on or around the nest when the latter is located (for example less than 5 meters) or preferably near the harvest columns (for example less than 2 meters).
  • At least one laccase inhibitor and at least one insecticide are formulated separately, as active compounds of the combined preparation against fungal ants.
  • a formulation comprising the laccase inhibitor will be combined with a formulation comprising the insecticide, in doses and ratios as described above.
  • these two compounds are the only compounds active against fungal ants of said combined preparation. That is, they are the only ones to act negatively directly on the members of the colony and / or the fungus.
  • This variant has the advantage of being able to adapt the amounts of each of the active agents in the preparation independently of each other.
  • At least one laccase inhibitor and at least one insecticide form part of a single composition as compounds active against fungal ants.
  • these two compounds are the only compounds active against fungal ants. That is, they are the only ones to act negatively directly on the members of the colony and / or the fungus.
  • the combined preparation according to the invention can take different forms.
  • the combined preparation takes a form selected from: one or more granules or one or more powders.
  • the combined preparation according to the invention may comprise granules comprising the laccase inhibitor, granules comprising the laccase inhibitor and the insecticidal compound, or granules comprising the laccase inhibitor combined with granules. comprising the insecticidal compound or granules comprising the insecticidal compound.
  • the combined preparation may comprise one or more powders such as a powder comprising the laccase inhibitor, a powder comprising the laccase inhibitor and the insecticidal compound, or else a powder comprising the laccase inhibitor combined with a powder comprising the insecticidal compound or a powder comprising the insecticidal compound.
  • the combined preparation according to the invention can comprise granules comprising one of the active agents and a powder comprising another of its active agents.
  • these types of forms are suitable for a direct mode of action by simple contact or ingestion and for an indirect mode of action by horizontal transfer of toxicity.
  • the granules or powders can be spread by a manual pump or even by an automatic dispensing device capable of spreading a defined quantity. Spreading is therefore particularly simple and easy and can also be carried out in a localized and targeted manner (in comparison for example with spraying), particularly for granules.
  • the granules can be placed in a container in which is provided one or more passages for the ants, allowing them to take the granules and import them within the colony.
  • This type of treatment has the advantage of protecting the treatment from climatic conditions such as rain or wind, and therefore makes it possible to renew the treatment less often. These forms do not require specific equipment, on the contrary, they are practical and economic.
  • the use of the preparations of the invention in the form of granules limits the risks of contamination of the operator by the insecticides contained in the preparations as well as the risks of uncontrolled dissemination in nature by the wind, for example.
  • the invention relates to a method of controlling fungal ants comprising the use of a combined preparation according to the invention.
  • a process makes it possible to protect crops by preventing the development of nests on the outskirts of fields and crops to be protected.
  • such a process is particularly suitable for fungus ants because of its effects explained above, and is also inexpensive and more environmentally friendly than conventional solutions based on treatments based solely on chemical insecticides. , by nature, the quantity of its components, and its form.
  • the process according to the invention comprises the use of a combined preparation according to the invention at concentrations and / or mass ratios making it possible to obtain in particular, in addition to its many advantages inherent in the particularly suitable combination of effects in the fight against fungus ants, the synergistic effect observed by the inventors on the growth of the grindstone fungus and the potentiating effect of the toxicity of the insecticide on the ants of the colony and of its speed of action .
  • the preparation can be dispensed indirectly on or around the nest or preferably near the harvest columns.
  • the amount of preparation dispensed is between 1 g and 200 g per square meter, preferably between 2 g and 100 g per square meter and even more preferably 4 g and 50 g per square meter, particularly more preferably 8 and 45g per square meter, terminals included.
  • the quantity dispensed can vary depending on the floor area of the nest or more simply on the area that is to be treated. Those skilled in the art know how to determine the area to be treated.
  • the laccase inhibitor and the insecticide are dispensed separately in the control method of the invention, this makes it possible to vary the respective concentrations of the active compounds, in particular according to the place where the preparation of the laccase The invention is filed and of a particular target, that is to say, on or near the nest, near the harvest columns, on or near the plants or the target: the castes of ants (minor , major, medium, larvae ...) or the mushroom wheel.
  • the combined preparation can also be formulated together, in the form of granules or powder, as described above and dispensed manually and / or automatically.
  • the invention relates to a method of manufacturing a combined preparation according to the invention comprising the following steps:
  • a mixing step, and A shaping step are identical to A mixing step, and A shaping step.
  • the dosing step includes measuring a predetermined amount of at least one insecticide and at least one laccase inhibitor.
  • the dosage corresponds to the production of a composition comprising at least one insecticide and of a composition comprising at least one laccase inhibitor in levels defined to obtain the combined preparations of the invention at the contents, concentrations and / or mass ratio such as as described above or the production of a single composition comprising a laccase inhibitor and an insecticide also defined to obtain the combined preparations of the invention at the contents, concentrations and / or mass ratio as described above.
  • the technical realization of an assay is established in the usual way according to a person skilled in the art.
  • the mixing step comprises incorporating the at least one laccase inhibitor and the at least one insecticide homogeneously, separately or together in a matrix, said matrix being an excipient suitable for shaping. the combined preparation.
  • at least one appetizer is added during this step in the concentrations described. Even more advantageously the at least one appetizing constitutes the matrix.
  • one or more stages of evaporation of the solvents in which the weakly water-soluble active compounds would be dissolved perhaps applied.
  • the duration of each step may vary depending on the solvent used; those skilled in the art will easily be able to determine the total evaporation of the solvent (s).
  • the manufacturing process further comprises a shaping step in the form of granules or powder.
  • the granules may have the laccase inhibitor or the insecticidal compound, may have the laccase inhibitor and the insecticidal compound, or granules may have the laccase inhibitor in combination with granules comprising the insecticidal compound.
  • said granules are of a suitable size so that the harvester ants can bring them back to the colony, in the nest. Even more advantageously, the size of the granules is suitable for transport regardless of the size of the ant among the different castes of ants in the colony, thus promoting the importation and dispersion of the granules and therefore of the composition within the colony. the colony.
  • the granules may have a size which resembles that of a grain of rice, typically about 5 mm long and 1 to 2 mm wide.
  • any shape may be suitable, the criterion being that said granule is transportable by ants as mentioned above.
  • the combined preparation can also take the form of powders so that the powder can contain the laccase inhibitor or can include the laccase inhibitor and the insecticidal compound or can include the laccase inhibitor combined with a powder. comprising the insecticidal compound.
  • the shaping step comprises binding, for example with water or any other acceptable solution or liquid (such as for example soybean oil) having no repellent effect on ants, the mixture resulting from the mixing step, so as to obtain the desired consistency to allow adequate shaping, in the case of granules for example.
  • the binder can itself constitute or comprise an appetite for ants.
  • the powder or the granules obtained are dried before storage.
  • the combined preparation according to the invention was tested in the form of granules comprising a combination of a microdosed insecticide (sulfluramide or fipronil) with a laccase inhibitor (cysteine or ascorbic acid), on sub-colonies of mushroom ants. These sub-colonies are calibrated, which ensures good comparability of the different conditions tested.
  • a microdosed insecticide sulfluramide or fipronil
  • laccase inhibitor cyste or ascorbic acid
  • the tests are carried out on sub colonies of ants which originate from colonies of Atta cephalotes originating from Trinidad. These sub-colonies are calibrated and formed by associating 20 medium workers + 20 minor workers and a mushroom wheel of about 3cm 3 at the start of the experiment, placed in an enclosure as described in figure 1: Each sub-colony has a mushroom part and a "garden" part in which plants are renewed at will according to their consumption by the ants (cf. figure 1). All the tests are carried out on so-called stabilized colonies, for which, depending on the installation, we no longer observe any mortality which started the harvesting activity. Conventionally, the stabilization of colonies can take 5 to 15 days during which the dead ants are replaced.
  • the combined preparations according to the invention as well as the control preparations were prepared in the form of granules.
  • the different preparations are prepared in semi-sterile conditions, in a fume cupboard, the containers and tools are disinfected between each preparation.
  • These granules are modeled so as to have the size and shape resembling that of a grain of rice (ie easy to transport by ants, conventionally 5 mm long and one to two mm wide) .
  • a dough is formed with the different constituents (percentage by mass): -
  • the matrix which is also appetizing, consists of a mixture of white wheat flour (such as that conventionally used in human food, of sucrose (10%, D (+) - sucrose, supplier: Labosi)) and citrus powder (10%, citrablend, dehydrated lemon zest powder from organic cultivation, mesh 80, supplier: Bureau Couecou, France).
  • the active components are added at the concentrations as stated in Tables 1 or 2.
  • the laccase inhibitors tested are L-cysteine (L-cysteine hydrochloride, SBM formulation) and ascorbic acid.
  • an evaporation step may be required to evaporate said solvent.
  • the sulfluramide (supplier: Sigma-Aldrich, ref. 91242) is previously diluted in methanol (Normapur quality, supplier: Prolabo) and the fipronil (supplier: VWR, ref. SUPL16785-50MG) in de acetone (Normapur quality, supplier: VWR), then mixed with the matrix, the mixture was subjected to evaporation (approximately 48 hours) before wetting.
  • the preparations were made pasty by adding water (1 ml of water / 2g of preparation for a single composition), and then shaped in the form of granules as specified above .
  • preparation 18 (Table 2, preparation in which the active ingredients are formulated separately), the granules of insecticides and laccase inhibitor are modeled separately, and subsequently combined. The quantity and mass concentrations of each of the formulations is established so as to obtain a combined preparation having the same concentrations and the same mass ratio between the laccase inhibitor and the insecticide as for preparation 2.
  • the granules were dried for 48 hours in the fume cupboard and stored in sealed bottles.
  • the plant is replaced by a small dish 3 cm in diameter containing 2 g of preparation to be tested.
  • the cup containing the granules is left in place for 24 hours, then removed, before putting the plants back.
  • the amount of preparation taken by the ants is deducted from the weighing of the amount remaining after 24 hours of presence in the colony (the weighing is carried out after drying for approximately 24 hours at room temperature due to the experimental humidity conditions).
  • T + 1 then every 3 days up to 21 days measurements concerning the survival of the ants, the volume of the fungus and the consumption of plants is measured.
  • the grinding wheel dieback is assessed by two aspects: the color of the grinding wheel and its volume.
  • the mushroom wheels of leaf-cutter ant colonies under normal conditions are at least their upper third of a gray or salt and pepper color.
  • the withering grindstones take on a whitish color.
  • a bleaching index was therefore developed as a grinding wheel withering index; it corresponds to the ratio of gray grinding wheel height / total grinding wheel height; it makes it possible to measure the whitening of the grinding wheel.
  • the variation in volume of each fungus of each colony at a time T is measured by assuming that the fungus has a shape similar to that of a cone and by relating the volume measured at time T to volume measured at T0.
  • the volume V of the grinding wheel is therefore calculated according to the formula:
  • H being the height of the grinding wheel and r being the radius of its base.
  • Mortality corresponds to the cumulative number of deaths during the test (therefore a maximum of 40 over 21 days).
  • the mortality can also be expressed according to the Abott formula which makes it possible to estimate the insecticidal efficacy of the preparations tested (EA, Abott efficacy), taking into account the existing mortality in the control trials.
  • EA (1 - (number of deaths / number of deaths in witness) * 100
  • preparation 18 which comprises the insecticide and the laccase inhibitor in two separate formulations.
  • the grindstone fungus is important for the colony, because it is its gongylidia (hypertrophied hyphae) which provide food to all the actors of the colony (larvae, workers, soldiers and the queen).
  • the fungus is particularly important for the larvae since they are placed there and covered with hyphae by the workers.
  • the dieback of the larvae leads to the decline of the colony as the workers become listless (Lopes et al., 2005).
  • the combined preparations of the invention therefore make it possible to target the colony as a whole by touching the grindstone fungus, a source of food for the entire colony and probably of paramount importance for the larvae.
  • the suddenness of this effect on the fungus, associated with the mortality on the ants makes it possible to consider the inhibition of any relocation of the nests, as well as the prevention of the survival of a colony after the cessation of treatment, probably being affected by the destruction of the fungus.
  • FIG. 3 No significant mortality is observed for the ants of the colonies treated with ascorbic acid alone (preparation 7). 50% mortality in the colonies are achieved from the 5th day for the colonies treated with the preparation comprising 1% ascorbic acid and 0.1% of sulfluramid, or preparation comprising 0.3% of sulfluramid as the sole active agent. It takes 8 days to observe 50% mortality in colonies treated with 0.1% sulfluramide alone.

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Abstract

La présente invention propose une préparation combinée formicide comprenant au moins un insecticide et au moins un inhibiteur de laccase, ledit inhibiteur de laccase étant présent dans la préparation à une teneur supérieure ou égale à 0,5 % en poids de la préparation, et le rapport massique entre l'au moins un inhibiteur de laccase et l'au moins un insecticide étant supérieur ou égal à 2. La présente invention concerne également un procédé de lutte contre les fourmis champignonnistes et un procédé de fabrication d'une préparation combinée formicide.

Description

DESCRIPTION
PREPARATION COMBINEE ET PROCEDE POUR LA LUTTE CONTRE LES FOURMIS
CHAMPIGNONNISTES DOMAINE DE L’INVENTION
[0001] L’invention se rapporte au domaine du contrôle des nuisibles. Elle propose une nouvelle préparation combinée contre les fourmis champignonnistes ainsi qu’un nouveau procédé de lutte capable de détruire les colonies de fourmis champignonnistes. La présente invention propose également un procédé de fabrication d’une telle préparation combinée.
ART ANTERIEUR
[0002] Les fourmis champignonnistes ou « fourmis coupe-feuille » ou « fourmis manioc » appartiennent à la famille des Formicidae, sous famille Myrmicinae, tribus Attini, comprenant plusieurs genres tels que Atta ou Acromyrmex. Les fourmis champignonnistes sont présentes dans les régions tropicales et subtropicales telles que l’Amérique Centrale et l’Amérique du Sud.
[0003] La particularité de la tribu Attini, et plus particulièrement des genres Atta et Acromyrmex , est que les fourmis appartenant à cette tribu cultivent, au sein même de la fourmilière, un champignon basidiomycète saprophyte du genre Leucoagaricus appartenant à la famille Agaricaceae, avec lequel elles sont en symbiose. [0004] Les fourmis assurent la croissance du champignon tandis qu’il assure l'apport de nutriments pour la colonie en dégradant des molécules complexes, non assimilables par les fourmis (Richard et al., 2005). Le champignon, alimenté en matière première par les fourmis, constitue une source nutritive pour le couvain, la reine, et les ouvrières (Qinlan et al., 1978, Fisher et al., 1994) et le champignon est une source d'enzymes assurant la dégradation de la matière végétale. En outre, les fourmis assurent sa protection en sécrétant des antibiotiques et le champignon permet, lors de sa croissance, de maintenir l’architecture du nid (Ronald Zanetti et al., 2014).
[0005] Les fourmis champignonnistes représentent un nuisible pour les cultures agricoles et forestières. En effet, elles se retrouvent sans prédateur lorsqu'elles envahissent des monocultures développées par l'homme (phénomène accentué avec la déforestation) ce qui entraîne une forte présence non régulée. Polyphages, elles y collectent feuilles, fleurs, fruits et graines et ravagent ainsi la plupart des cultures agricoles notamment les cultures vivrières, maraîchères et de plantes ornementales. [0006] Les dégâts provoqués par les fourmis champignonnistes représentent une augmentation des coûts de gestion des cultures. Par exemple, les dommages provoqués sur les plantations en Eucalyptus ont été estimés à plus de 14,5 %, la défoliation dans les cultures de Pins et d’Eucalyptus diminuant l’augmentation de taille et de diamètre des plantes (Resi Filho et al., 2001 , Cantarelli et al. 2008). En outre, les dégâts dans les cultures de graminées entraînent des pertes d’une part sur la chaîne alimentaire avec des pertes se chiffrant entre 512 et 870 milles têtes de bétail par an et d’autre part sur les pertes de cultures de graminées elles-mêmes, une colonie consommant entre 90 et 250 Kg/an (Fowler et al., 1990 et Amante, 1967). Dans les cultures de canne à sucre, les pertes peuvent aller jusqu’à 3,2 t/ha correspondant à 5,3 % de la productivité (Precetti et al., 1988) et dans les cultures de fruits, les pertes peuvent atteindre 100 % (Forti and Boaretto, 1997).
[0007] Les problèmes liés aux fourmis champignonnistes ont conduit au développement de traitements utilisés pour contrôler leur expansion, principalement basés sur des produits chimiques pesticides, qui ont entraîné pollution et détérioration des sols. Ces composés sont aujourd'hui peu à peu retirés du marché car ils présentent un risque pour l'homme et l'environnement.
[0008] Dans le cadre de la lutte contre les fourmis champignonnistes, pendant plus de 20 ans, il a largement été utilisé dans l'agriculture des insecticides organochlorés tels que l’aldrine ou le dechlorane, jusqu'à ce que leur utilisation ait été suspendue par l'US-EPA en 1974. De plus, ces composés insecticides classiques sont généralement difficilement biodégradables et entraînent une activité toxique persistante dans les sols et les eaux et un danger pour la santé humaine. Des insecticides organophosphorés, organohalogénés et des pyréthrinoïdes ont également été utilisés. Cependant, ces insecticides issus de synthèses chimiques ont un impact néfaste sur l'homme et sur l'environnement. En outre, ils présentent des difficultés d’utilisation et une faible efficacité avec des taux de mortalité bas (Isenring and Neumeister, 2010).
[0009] La plupart de ces insecticides avaient comme point commun de cibler le système nerveux ou l’activité métabolique des insectes en général et pas seulement celui des fourmis champignonnistes. Ainsi ces composés, non spécifiques, affectent d'autres espèces vulnérables (e.g. abeilles). Par ailleurs, leur action est généralement assez rapide et cible l'insecte en tant que tel. Or, contre les insectes sociaux tels que les fourmis champignonnistes, il est préférable de cibler la colonie dans sa globalité notamment via une action conjointe contre les fourmis et leur champignon symbiotique. Cette rapidité d’action a le mérite de stopper rapidement l’activité de récolte des fourmis coupeuses de feuilles. Elle entraîne cependant des mécanismes d’alerte dans la colonie qui se traduisent par un déplacement du nid ou la condamnation de la partie du nid impactée ainsi qu’un apprentissage du danger par les fourmis. [0010] Enfin, il a été mis en lumière que les fourmis champignonnistes ainsi que la meule à champignon, expriment une enzyme de type polyphénol oxydase : la laccase. Cette enzyme permet de dégrader la lignine et agit sur certains polyphénols. En effet, les laccases oxydent les dérivés phénoliques permettant de former des monolignols à partir de lignine. Plus récemment, les travaux du Pr Mora ont mis en évidence que la laccase était l’enzyme majoritairement exprimée dans les profils enzymatiques réalisés à partir de lysats extraits de la meule et des fourmis. Ainsi, il a été développé des compositions formicides comprenant un inhibiteur de laccase (WO2017/121881 ). Néanmoins, l’action de ces compositions qui tuent la meule à champignon et donc les nids en profondeur s’observe sur des délais importants et ne permet pas de stopper rapidement l’activité de récolte des fourmis. Les compositions comprenant un inhibiteur de laccase ont aussi été couplées avec un antibactérien afin d’optimiser la disparition de la colonie. Toutefois, l’utilisation d’antibactérien est de moins en moins recommandée suite au développement de certaines souches résistantes. Boulogne et al. (2012) liste les composés insecticides et antifongiques produits par les plantes comme alternative aux pesticides synthétiques dans la lutte contre les fourmis champignonnistes. Des compositions à base d’huile de menthe poivrée sont mentionnées dans la demande internationale W001/00034 comme compositions pesticides à usage ménager. La demande internationale W02009/117623 mentionne des compositions pesticides et antiparasitaires à base d’huiles essentielles.
[0011] Il existe donc un besoin de nouvelles préparation et méthode permettant de lutter efficacement contre les fourmis champignonnistes tout en diminuant les quantités d’insecticides de synthèse utilisés, en évitant les phénomènes d’apprentissage développés par les fourmis et en tuant en profondeur les nids par une action rapide sur la meule à champignon.
PROBLEME TECHNIQUE
[0012] Actuellement, le problème d'infestation par les fourmis champignonnistes reste prégnant.
[0013] Ainsi, il existe un besoin pour un moyen innovant de lutte contre les fourmis champignonnistes qui serait peu coûteux, peu nocif pour l'environnement. Dans ce contexte, la présente invention propose une nouvelle préparation combinée contre les fourmis champignonnistes ainsi qu’un nouveau procédé de lutte capable de stopper rapidement l’activité de récolte des fourmis, de limiter les phénomènes d’apprentissage et de déplacement des nids en détruisant rapidement les colonies de fourmis champignonnistes notamment par une action rapide sur la meule et les fourmis, tout en diminuant les quantités d’insecticide de synthèse jusqu’ici nécessaires. BREVE DESCRIPTION DE L’INVENTION
[0014] A cet effet, l’invention porte sur une préparation combinée formicide comprenant, formulés séparément ou dans une composition unique, au moins un insecticide et au moins un inhibiteur de laccase, ledit inhibiteur de laccase étant présent dans la préparation à une teneur supérieure ou égale à 0,5 % en poids de la préparation et le rapport massique entre l’au moins un inhibiteur de laccase et l’au moins un insecticide étant supérieur ou égal à 2.
[0015] Une telle préparation combinée permet de maintenir un niveau élevé d’efficacité dans le contrôle des activités de récolte des fourmis tout en diminuant les quantités d’insecticide requises. Elle permet également la destruction des meules à champignon entraînant une destruction durable du nid. En outre, la préparation combinée selon l’invention est peu coûteuse et diminue les impacts négatifs sur l’environnement et la santé humaine et animale du fait des faibles quantité d’insecticide utilisées. L’inhibiteur de laccase permet une inhibition de l’activité laccase présente dans la meule et chez les fourmis. La teneur en inhibiteur de laccase permet un contrôle des fourmis, et affecte aussi la meule. En outre, la teneur utilisée en inhibiteur de laccase est facilement dégradable et respecte l’environnement. L’utilisation, en complément de l’inhibiteur de laccase, d'au moins un insecticide ayant une activité contre les fourmis, permet de stopper rapidement l’activité de récolte des fourmis. En outre, il a été observé que l’utilisation combinée d'au moins un insecticide et d’au moins un inhibiteur de laccase permet d'augmenter de manière surprenante la cinétique d'effet de l'inhibiteur de laccase sur le champignon. Également, l’effet de l’insecticide sur les fourmis est augmenté et agit plus rapidement. Cela aboutit à la destruction de la colonie et notamment des fourmis adultes, au dépérissement accéléré de la meule et ainsi la destruction pérenne du nid. Ainsi, la combinaison d'un inhibiteur de laccase avec un insecticide permet d'une part d'optimiser la disparition à long terme de la colonie par une action efficace sur l’ensemble des acteurs de la colonie ainsi que sur la meule.
[0016] Plus particulièrement, l’invention porte en outre sur une préparation combinée formicide comprenant, formulés séparément ou dans une composition unique, au moins un insecticide appartenant à la famille des phénylpyrazoles, des néonicotinoïdes ou à la famille des sulfonamides et au moins un inhibiteur de laccase sélectionné parmi : une molécule anti oxydante, un chélateur, un détergent, un acide organique non oxydant et un métal cationique, ledit inhibiteur de laccase étant présent dans la préparation à une teneur supérieure ou égale à 0,5 % en poids de la préparation, et le rapport massique entre l’au moins un inhibiteur de laccase et l’au moins un insecticide étant supérieur ou égal à 2.
[0017] Selon d’autres caractéristiques optionnelles de la préparation combinée : l’au moins un insecticide est sélectionné parmi : le fipronil, le sulfluramide ou leur mélange.
Le fipronil et le sulfluramide permettent de stopper rapidement l’activité de récolte des fourmis par une action rapide et efficace sur les récolteuses. En outre, le sulfluramide est peu coûteux, présente une efficacité élevée et il est de faible toxicité ou danger pour l’homme.
- le rapport massique entre l’au moins un inhibiteur de laccase et l’au moins un insecticide est supérieur à 5 de préférence supérieur ou égal à 10. Un tel rapport massique entre l’au moins un inhibiteur de laccase et l’au moins un insecticide permet de coupler leurs effets et d’obtenir une élimination rapide des fourmis, une destruction de la colonie dans sa globalité ainsi qu’une absence de réapparition des colonies.
- la teneur en insecticide dans la préparation est inférieure ou égale à 0,3 % en poids, de la préparation de préférence inférieure ou égale à 0,1 %. A ces concentrations, par exemple, le sulfluramide présente une plus faible toxicité pour l’homme et l’environnement.
- l’au moins un inhibiteur de laccase est sélectionné parmi : une molécule anti-oxydante, un chélateur, un détergent, un acide organique non oxydant et un métal cationique. Ces molécules permettent une inhibition de l’activité de la laccase et contribuent donc entre autres, la destruction de la meule à champignon.
- l’au moins un inhibiteur de laccase est sélectionné parmi : le glutathion, la L-cystéine, le thiosulfate de sodium, l'acide ascorbique, l’eugénol et leurs mélanges. Ces molécules sont biodégradables rapidement et présentent une forte activité anti-laccase. De préférence l’au moins un inhibiteur de laccase est sélectionné parmi : la L-cystéine, l'acide ascorbique et leurs mélanges. De façon plus préférée l’au moins un inhibiteur de laccase est l'acide ascorbique.
- l’au moins un inhibiteur de laccase est l’acide ascorbique ou la L-cystéine, et l’au moins un insecticide est du fipronil, du sulfluramide ou leur mélange.
- la teneur en inhibiteur de laccase dans la préparation est supérieure ou égale à 1 % en poids de la préparation, de préférence elle est comprise entre 1 et 10 %, bornes comprises. En outre, la teneur en inhibiteur de laccase dans la préparation est typiquement inférieure ou égale à 10 % en poids de la préparation. Une telle teneur en inhibiteur de laccase permet, en combinaison avec un insecticide, affecte aussi bien la meule que les différentes catégories sociales des fourmis.
- l’au moins un inhibiteur de laccase est sélectionné parmi la L-cystéine et l’acide ascorbique, et l’au moins un insecticide est du fipronil et/ou du sulfluramide. De façon préférée, l’au moins un inhibiteur de laccase est l’acide ascorbique, et l’au moins un insecticide est du sulfluramide.
- la préparation comprend en outre un appétant. L’utilisation d’un appétant permet d’augmenter le nombre de fourmis ingérant la préparation combinée et/ou d’augmenter la propagation de la préparation combinée à l’ensemble de la colonie et donc d’augmenter l’exposition des fourmis et de la meule à champignon à la préparation combinée.
- l’appétant est sélectionné parmi : un appétant oligosaccharidique, un appétant polysaccharidique et leurs mélanges.
- l’au moins un inhibiteur de laccase et l’au moins un insecticide font partie d’une composition unique,
[0018] L’invention porte en outre sur un procédé de lutte contre les fourmis champignonnistes, comprenant l’utilisation d’une préparation combinée selon l’invention. Un tel procédé permet de protéger les récoltes en détruisant les nids et en empêchant leur développement dans ou aux abords des champs et cultures à protéger. En outre, un tel procédé est particulièrement adapté à la lutte contre les fourmis champignonnistes, car il cible à la fois les membres de la colonie et la meule, il est peu coûteux et respectueux de l’environnement.
[0019] L’invention porte également sur un procédé de fabrication d’une préparation combinée selon l’invention comprenant les étapes suivantes :
- une étape de dosage,
- une étape de mélange, et
- une étape de mise en forme.
[0020] Un tel procédé de fabrication est simple à réaliser, peu coûteux et permet de protéger les récoltes en empêchant le développement des nids dans ou aux abords des champs à protéger et de détruire les colonies de fourmis champignonnistes.
FIGURES
Figure 1 : schéma d’une sous colonie tel que celles utilisées pour les essais calibrés des préparations de l’invention. La partie jardin (A) est reliée via un tunnel (C) à la partie champignonnière (B) où se trouve le champignon (1) abrité sous une cloche (D) ainsi qu’un abreuvoir (E), les fourmis (2) passant du jardin à la champignonnière via le tunnel. Figure 2 : Diminution du volume de la meule à champignon au court du temps. La diminution du volume est exprimée en pourcentage du volume de la meule mesurée à T= 0. Prep. 1 : préparation contenant 1 % de cystéine (inhibiteur de laccase) ; Prep. 3 : préparation contenant 1 % de cystéine (inhibiteur de laccase) combinée à 0,075 % de sulfluramide ; Prep 6 préparation contenant 0,075 % de sulfluramide ; Prep 4 : préparation contenant 0,3 % de sulfluramide. La ligne horizontale pointillée grise marque le niveau de 50 % de diminution de volume du champignon.
Figure 3 : mortalité cumulée des fourmis au court du temps. Prep. 4 : préparation contenant 0,3 % de sulfluramide ; Prep. 5 : préparation contenant 0.1 % de sulfluramide; Prep 7 : préparation contenant 1 % d’acide ascorbique (inhibiteur de laccase); Prep 8 : préparation contenant 1 % d’acide ascorbique (inhibiteur de laccase) combiné à 0,1 % de sulfluramide. La ligne horizontale pointillée grise marque le niveau de 50 % de mortalité.
DESCRIPTION DETAILLEE
[0021] Dans la suite de la description on entend par « fourmis champignonnistes », les fourmis appartenant à la tribu des Attini et en particulier aux genres Atta ou Acromyrmex. Les espèces les plus représentées Acromyrmex ambiguus, Acromyrmex aspersus, Acromyrmex balzani, Acromyrmex biscutatus, Acromyrmex coronatus, Acromyrmex crassispinus, Acromyrmex diasi, Acromyrmex disciger, Acromyrmex evenkul, Acromyrmex fracticornis, Acromyrmex heyeri, Acromyrmex hispidus, Acromyrmex hystrix, Acromyrmex landolti, Acromyrmex laticeps, Acromyrmex lobicornis, Acromyrmex lundii, Acromyrmex niger, Acromyrmex nobilis, Acromyrmex octospinosus, Acromyrmex pulvereus, Acromyrmex rugosus, Acromyrmex silvestrii, Acromyrmex striatus, Acromyrmex subterraneus, Acromyrmex versicolor, Atta bisphaerica, Atta capiguara, Atta cephalotes, Atta columbica, Atta dissimilis, Atta domicola, Atta goiana, Atta insularis, Atta laevigata, Atta mexicana, Atta opaciceps, Atta robusta, Atta saltensis, Atta sexdens, Atta sexdens rubropilosa, Atta silvae, Atta texana, Atta vollenweideri. Ces fourmis sont également connues dans l’art antérieur comme fourmis « coupe-feuilles », fourmis-manioc ou encore fourmis parasol.
[0022] Au sens de l'invention, l'expression « lutte contre les fourmis champignonnistes » correspond ici à une action conduisant à l'abandon du nid et/ou à la destruction de la colonie.
[0023] Les termes « fourmilière » et « nid » peuvent être utilisés ici de manière interchangeable. Ils correspondent à la structure abritant la colonie de fourmis champignonnistes.
[0024] Par « colonie », il faut comprendre ici un groupe de fourmis, autre qu'un couple unique et comprenant au moins une reine, construisant des nids pour y élever une progéniture de manière coopérative. [0025] Par « meule » également appelée « jardin à champignon » (i.e. fungus garden) dans la littérature, il faut comprendre ici la structure fongique cultivée par les fourmis champignonnistes et composée majoritairement du champignon basidiomycète saprophyte de l'espèce Leucophorusgongylophorus poussant sur \a matière végétale récoWée par es tournis. « Meule », « Meule à champignon » ou « champignon » sont ici utilisés de manière interchangeable.
[0026] Par « préparation combinée formicide », il faut comprendre ici une préparation formulée de façon à cibler les fourmis champignonnistes et la meule à champignon et dont les effets de potentialisation surprenants résultants de la combinaison entre l’insecticide et l’inhibiteur de laccase permettent notamment une diminution des doses d’insecticides introduites dans l’environnement. Ainsi, avantageusement, la préparation combinée formicide selon l'invention a peu ou pas d’impact sur les abeilles ou d’autres invertébrés. La préparation combinée formicide peut comporter ces principes actifs formulés séparément ou dans une composition unique.
[0027] Par « laccase », il faut comprendre des enzymes de type polyphénol oxydases. Elles permettent de dégrader la lignine et apportent une protection contre la toxicité de certains polyphénols. Dans la nomenclature relative aux enzymes, les laccases sont regroupées sous le code EC 1 .10.3.2. Les laccases retrouvées dans ou sur les champignons de meules de fourmis champignonnistes et dans ou sur les fourmis champignonnistes sont particulièrement ciblées.
[0028] Par « inhibiteur de laccase » ou « composé présentant une activité inhibitrice de laccase », il faut comprendre un composé inhibant l'activité des laccases telle que mesurée par exemple par le substrat ABTS (2,2'-azino-bis (3-ethylbenz-thiazoline-6- sulfonic acid) selon la méthode publiée par Bourbonnais et al. (1990).
[0029] Par « molécule antioxydante », il faut comprendre le sens commun donné à ce terme à savoir une molécule capable de diminuer ou d'empêcher l'oxydation d'autres substances chimiques. Le potentiel antioxydant d'une molécule peut être vérifié par exemple via l'utilisation des radicaux ABTS (Bourbonnais et al., 1990).
[0030] Par « appétant » ou « appât », il faut comprendre un composé ayant un pouvoir attractif sur les fourmis champignonnistes et augmentant ainsi la quantité de préparation selon l'invention récoltée par lesdites fourmis. Par appétant glucidique, il faut comprendre une molécule appartenant au groupe des glucides. Par appétant oligosaccharidique ou polysaccharidique, il faut comprendre une molécule de type oligosaccharidique ou polysaccharidique comme par exemple les fructanes, glucanes, galactanes, mannanes ou hémicelluloses.
[0031] Les cultures protégées de l’infestation et de la dégradation par les colonies de fourmis champignonnistes par l’utilisation de la préparation combinée selon l’invention, sont de préférence toutes les cultures de végétaux présentant un intérêt socio-économique pour l’activité humaine. Par exemple, il peut s’agir de toute culture agricole (sylviculture, céréales, arboriculture fruitière, floriculture, cultures fourragères) ou d’agrément tels que les jardins.
[0032] Selon un premier aspect, l'invention porte sur une préparation combinée comprenant au moins un insecticide et au moins un inhibiteur de laccase, ledit inhibiteur de laccase étant présent dans la préparation à une teneur supérieure ou égale à 0,5 % en poids de la préparation.
[0033] Il existe une grande variété d'inhibiteurs de laccase.
[0034] En particulier, est considéré comme étant un inhibiteur de laccase toute molécule qui, dans le cadre de la préparation combinée mentionnée ci-dessus, entraîne une diminution de l'activité de la laccase de plus de 50 %, de préférence de plus de 75 %, de façon plus préférée de plus de 90 %. De préférence, ces inhibitions de l'activité de la laccase sont obtenues à des teneurs en inhibiteur de laccase inférieures à 10 % en poids de la préparation. De manière encore plus préférée, ces inhibitions de l'activité de la laccase sont obtenues à des teneurs inférieures ou égales à 5 % en poids de la préparation.
[0035] Toutes les molécules anti-oxydantes ont la capacité d'inhiber l'activité d'une laccase. Néanmoins, il existe des inhibiteurs de laccases ne présentant pas une activité anti-oxydante. Parmi les molécules présentant une activité anti-laccase et n'étant pas des molécules anti oxydantes, il est possible de citer les chélateurs, les détergents, les acides organiques non oxydants et les métaux cationiques. Par exemple, les molécules suivantes sont également des molécules présentant une activité anti-laccase sans être des molécules antioxydantes : acide éthylène diamine tétraacétique (EDTA), chlorure de calcium (CaC ), acide rhodotorulique, entérobactine, acide thioglycolique, acide diéthyldithiocarbamique, azoture de sodium, bromure de cétyltriméthylammonium, Fe2+, Cu2+, Ag+, Li+, Sn+, Hg+, Mn2+, Zn2+, Al3+, laurylsulfate de sodium, cyanure de sodium (NaCN), thiosulphate de sodium, acide oxalique et beta- mercaptoéthanol. [0036] Ainsi, au moins un inhibiteur de laccase est sélectionné parmi : une molécule anti oxydante, un chélateur, un détergent, un acide organique non oxydant et un métal cationique.
[0037] Les molécules préférées pour leur utilisation en tant qu'inhibiteur de laccase sont :
- pour les chélateurs : EDTA, acide rhodotorulique, entérobactine
- pour les détergents : laurylsulfate de sodium, - pour les métaux cationiques : Fe2+, Cu2+, Ag+, Li+, Sn+, Hg+, Mn2+, Zn2+, Al3+,
- pour les acides organiques non oxydants : acide oxalique, acide thioglycolique, acide diéthyldithiocarbamique.
[0038] De manière préférée, l'inhibiteur de laccase est une molécule anti-oxydante. [0039] De telles molécules anti-oxydantes sont généralement connues de l'homme du métier (Lu et al., 2010). Il pourra par ailleurs, vérifier cette activité via des tests classiques de mesure du potentiel antioxydant tel que celui décrit dans Bourbonnais et al. (1990).
[0040] Les molécules présentant une activité anti-laccase et une activité anti-oxydante peuvent par exemple être sélectionnées parmi : acide ascorbique (E300), acide citrique (E330), acide coumarique, acide férulique, acide gallique, acide palmityl 6-1 - ascorbique (E304), acide syringique, ascorbates de sodium/calcium/potassium (E301)/(E302)/(E303), butylhydroxyanisole (BHA), butylhydroxytoluol, cystéine, gallates d'octyle (E31 1 ) ou de dodécyle (E312), glutathion, lactates de sodium/potassium/calcium (E325 )/ (E326)/(E327), lécithines (E322), lipoate, des caroténoïdes (E160) comme la lutéine, lutéoline, des carotènes comme la lycopène, tartrates de sodium (E335)/potassium (E336) ou de sodium et de potassium (E337), l’eugénol, thiosulfate de sodium, vitamine E (tocophérols naturels (E306)), a-tocophérol de synthèse (E307), y-tocophérol de synthèse (E308) et d-tocophérol de synthèse (E309), sélénium et chlorure d'hydroxylammonium. En particulier, l'inhibiteur de laccase est sélectionné parmi l'un des composés suivants : acide ascorbique, acide citrique (E330), acide coumarique, acide palmityl 6- 1 -ascorbique (E304), ascorbates de sodium/calcium/potassium (E301)/(E302)/(E303), L- cystéine, gallates d'octyle (E311) ou de dodécyle (E312), glutathion, lactates de sodium (E325), de potassium (E326) ou de calcium (E327), lécithines (E322), des caroténoïdes (E160) comme la lutéine, lutéoline, des carotènes comme la lycopène, tartrates de sodium (E335)/potassium (E336) ou de sodium et de potassium (E337), l’eugénol, thiosulfate de sodium, vitamine E (tocophérols naturels (E306)), a-tocophérol de synthèse (E307), g-tocophérol de synthèse (E308) et d-tocophérol de synthèse (E309), sélénium et chlorure d'hydroxylammonium. L'inhibiteur de laccase a de préférence peu d'impact sur l'environnement et y est rapidement dégradé. Ainsi, de façon préférée l'inhibiteur de laccase est sélectionné parmi l'un des composés suivants : acide ascorbique, ascorbates de sodium/calcium (E301 )/ (E302), lactates de sodium/potassium/ calcium (E325)/(E326/(E327), lutéine, lycopène, tartrates de sodium (E335)/potassium (E336) ou de sodium et de potassium (E337), thiosulfate de sodium, vitamine E (tocophérols naturels (E306)), a-tocophérol de synthèse (E307), g-tocophérol de synthèse (E308) et d-tocophérol de synthèse (E309), L-cystéine et glutathion. De préférence, l'inhibiteur de laccase est sélectionné parmi l'un des composés suivants : L-cystéine, acide coumarique, glutathion, l’eugénol, thiosulfate de sodium, acide férulique, acide syringique, acide ascorbique, acide gallique.
[0041] En outre, les molécules préférées sont des molécules naturelles ou facilement dégradables et respectent donc l’environnement. Ainsi, de manière encore plus préférée, l'inhibiteur de laccase est sélectionné parmi l'un des composés suivants : L-cystéine, glutathion, l’eugénol, thiosulfate de sodium, acide férulique, acide syringique, acide ascorbique et acide gallique. [0042] De manière particulièrement préférée, l'inhibiteur de laccase est sélectionné parmi la L- cystéine, l'acide ascorbique, le thiosulfate de sodium, le glutathion, l’eugénol et leurs mélanges. De manière encore plus préférée l’inhibiteur de laccase est sélectionné parmi la L-cystéine et l’acide ascorbique ou leurs mélanges.
[0043] Cet inhibiteur de laccase est utilisé à une concentration suffisante pour entraîner une inhibition de l'activité des laccases présentes dans la meule et chez les fourmis.
[0044] Cette concentration peut être déterminée par l'homme du métier grâce à des tests conventionnels d'évaluation de la concentration minimale inhibitrice. Typiquement, l'inhibiteur de laccase est présent dans la préparation à une teneur supérieure ou égale à 0,25 % en poids de la préparation. De préférence, l’inhibiteur de laccase est présent à une teneur supérieure ou égale 0,5 % et de manière encore plus préférée à une teneur supérieure ou égale à 1 %. Par ailleurs, la teneur en inhibiteur de laccase dans la préparation est inférieure à 10 % en poids de la préparation. Par exemple, la teneur en inhibiteur de laccase dans la préparation est comprise, bornes comprises, entre 0,25 et 15 % en poids de la préparation, de manière plus préférée entre 0,5 et 10 % en poids de la préparation, bornes comprises, et de manière encore plus préférée entre 1 et 5 % en poids de la préparation, bornes comprises.
[0045] Cet inhibiteur de laccase permet une inhibition de l’activité laccase présente dans la meule et chez les fourmis. En outre, la teneur utilisée en inhibiteur de laccase est facilement dégradable et respecte l’environnement.
[0046] Comme présenté dans la partie expérimentale, l'utilisation d’au moins un inhibiteur de laccase a une activité sur la meule. Néanmoins, cette action n’est pas immédiate et ne permet pas de stopper rapidement l’activité de récolte des fourmis, qui peuvent en outre déplacer le nid. Ainsi il est nécessaire de pouvoir également cibler les fourmis de la colonie.
[0047] Ainsi, toujours selon le premier aspect de l’invention, l'invention porte sur une préparation combinée comprenant au moins un insecticide et au moins un inhibiteur de laccase, ledit inhibiteur de laccase étant présent dans la préparation à une teneur supérieure ou égale à 0,5 % en poids de la préparation.
[0048] Avantageusement, l’utilisation, en complément de l’inhibiteur de laccase, d'au moins un insecticide ayant une activité contre les fourmis permet de détruire les colonies autour de l’emplacement de la préparation combinée en réduisant le risque de réapparition des colonies. En effet, il a été observé que, de manière surprenante, la combinaison d'au moins un insecticide et d’au moins un inhibiteur de laccase a un effet inhibiteur plus précoce et beaucoup plus important sur la croissance du champignon que l’inhibiteur de laccase utilisé seul. Ceci est d’autant plus surprenant qu’aucun effet n’est observé sur le champignon quand l’insecticide est utilisé comme seul agent actif, aux mêmes concentrations que celles utilisées dans la préparation combinée de l’invention. Le champignon est essentiel pour la colonie car il fournit la nourriture aux fourmis adultes et aux larves en dégradant les végétaux récoltés par les fourmis. En outre, la meule est le siège de l’emplacement des larves qui sont recouvertes de mycélium par les ouvrières, à des fins de protection et/ ou de fourniture de nourriture. Il est connu que la meule sécrète de nombreuses enzymes d’origines fongiques qui peuvent réduire l’efficacité des insecticides d’une part et agir sur les fourmis adultes d’autre part. Il est également connu de l’art antérieur que les larves ont un rôle essentiel dans la colonie : une colonie manquant de larves dépérit rapidement suite à la désorganisation des ouvrières (lopes et al 2005). Ainsi, apportées par les fourmis dans la meule à champignon, les préparations combinées de l’invention vont entraîner le dépérissement rapide du champignon, source de nourriture pour les fourmis ouvrières et les larves qui a pour conséquence la mort des fourmis et des larves. Cela implique un non- renouvellement des populations et diminue donc les risques de résurgence des nids.
[0049] Outre le manque de nourriture les fourmis et les larves sont également ciblées par l’insecticide. De manière également surprenante, comme démontré dans la partie expérimentale, la combinaison d'au moins un insecticide et d’au moins un inhibiteur de laccase a un effet formicide plus rapide sur les fourmis des colonies que l’insecticide utilisé seul, pourtant à des concentrations plus importantes. On observe donc une potentialisation surprenante de l’effet de l’insecticide au sein des préparations combinées se traduisant par, une mortalité globale identique malgré une diminution des quantités d’insecticide et également une diminution du temps d’action de l’insecticide.
[0050] Un tel effet synergique sur le champignon, associé à la combinaison d’effets sur les différents acteurs de la colonie, au même moment et dans un temps très limité du fait de la potentialisation de l’insecticide, aboutit donc à la destruction efficace du nid et de la colonie. En outre, le risque de déplacement de la colonie est fortement diminué, les fourmis adultes étant ciblées par l’activité insecticide rapide de la préparation combinée au manque de nourriture survenant également rapidement du fait du dépérissement de la meule. De même le risque de reformation de la colonie à partir de larves et ou de champignon subsistants est faible car ceux- ci sont également ciblés. Ainsi, la combinaison d'un inhibiteur de laccase avec un insecticide permet d'une part d'optimiser la disparition de la colonie et d'autre part d'éviter l'apparition de nouvelles colonies.
[0051] Par ailleurs, le rapport massique entre l’au moins un inhibiteur de laccase et l’au moins un insecticide dans la préparation combinée selon l’invention est supérieur ou égal à 2, de préférence supérieure ou égale à 5, de façon plus préférée supérieure ou égale à 10, de manière particulièrement préférée supérieure ou égale à 30 et de façon encore plus préférée supérieur ou égale à 50. Par exemple, le rapport massique entre l’au moins un inhibiteur de laccase et l’au moins un insecticide dans la préparation combinée selon l’invention est compris, bornes comprises, entre 2 et 10000 entre 5 et 5000, de préférence entre 10 et 15000 de façon préférée entre 30 et 500, de façon plus préférée 50 et 300.
[0052] Un tel rapport massique entre l’au moins un insecticide et l’au moins un inhibiteur de laccase permet d’obtenir les effets inattendus sur la meule et la mortalité des fourmis décrits ci- dessus. Il permet d’obtenir une élimination des fourmis et une destruction de la meule qui empêche la réapparition des colonies, au contraire des traitements insecticides classiques, pour lesquels on peut observer un déplacement des nids.
[0053] Il existe une grande variété d’insecticides tels que ceux appartenant aux familles des phénylpyrazoles, des néonicotinoïdes ou encore des sulfonamides.
[0054] Comme mentionné, l’utilisation d’un insecticide permet notamment de stopper efficacement l’activité de récolte des fourmis en tuant rapidement les fourmis tout en optimisant la destruction du nid des fourmis champignonnistes, en permettant un dépérissement accéléré de la meule. [0055] La préparation combinée selon l’invention est caractérisée en ce que l’au moins un insecticide appartient à la famille des phénylpyrazoles, des néonicotinoïdes ou à la famille des sulfonamides.
[0056] En particulier, la préparation combinée selon l’invention est caractérisée en ce que l’au moins un insecticide est sélectionné parmi le fipronil, le sulfluramide ou leur mélange. [0057] Le fipronil ou (RS)-5-amino-1-[2,6-dichloro-4-(trifluoromethyl)phenyl]^l·-
(trifluoromethylsulfinyl)pyrazole-3-carbonitrile (C12H4CI2F6N4OS) est un insecticide à large spectre appartenant à la famille des phénylpyrazoles. Il agit sur le système nerveux central et plus précisément sur l’acide gamma aminobutyrique (GABA) principal neurotransmetteur et neuromodulateur chez les insectes. Le fipronil possède un mode d’action direct par simple contact ou ingestion et un effet indirect par transfert horizontal de toxicité par nécrophorèse, toilettage et trophallaxie.
[0058] Le sulfluramide ou N-Ethylperfluorooctylsulfonamide (C10H6F17NO2S) est un insecticide qui lorsqu’il est présent dans le corps est métabolisé pour former un composé perfluorooctane sulfonamide (DESFA) qui intervient dans le processus de phosphorylation oxydative (respiration aérobie), interrompant la production d’ATP dans les mitochondries par opposition au dechlorane qui agit sur le système nerveux. Le DESFA bloque le couplage des protons dans la phosphorylation oxydative empêchant ainsi la production d’ATP et est donc létal pour les fourmis. L’intoxication par le sulfluramide entraîne entre autres une forte diminution de l’énergie de l’organisme des fourmis jusqu’à l’interruption du métabolisme entraînant la mort des fourmis. [0059] Utilisés classiquement, ces traitements insecticides présentent le désavantage d’entrainer un phénomène d’alerte chez les fourmis qui déplacent alors la colonie et le nid. La préparation combinée selon l’invention, permet un effet rapide sur les fourmis et la colonie et le dépérissement accéléré de la meule, empêchant ainsi le déplacement de la colonie. En outre, le sulfluramide est peu coûteux, présente une efficacité élevée et il est de faible toxicité ou danger pour l’homme, d’autant que, toujours dans la préparation combinée selon l’invention, les doses utilisées peuvent être plus faibles que les doses indiquées usuelles pour ces insecticides utilisés seuls.
[0060] En particulier, dans la présente préparation combinée selon l’invention un mélange de fipronil et de sulfluramide peut être utilisé comme insecticide au sens de l’invention. Cela permet de coupler à la fois les effets du fipronil avec les effets du sulfluramide.
[0061] Comme démontré dans la partie expérimentale, les préparations combinées selon l’invention comprennent des quantités significativement moindres d’insecticide comparé aux traitements insecticides classiques, tout en ayant procurant un effet létal plus rapide et sans diminuer la mortalité globale, ce qui est particulièrement avantageux du point de vue de l’environnement et de la toxicité pour l’homme. Néanmoins, en fonction des caractéristiques de l’insecticide, il peut être également décidé de maintenir une quantité d’insecticide conventionnelle, les préparations combinées de l’invention permettant d’augmenter leur effet formicide. Ainsi la teneur en insecticide peut être divisée d’un facteur supérieur ou égal à 1 , de préférence d’un facteur supérieur ou égale à 2 et de manière encore plus préférée d’un facteur supérieur ou égal à 3, par rapport au traitement prescrit pour l’insecticide utilisé seul.
[0062] La teneur dans la préparation en insecticide est inférieure ou égale à 0,3 % en poids, de préférence inférieure ou égale à 0,15 % en poids, de façon plus préférée inférieure ou égale à 0,1 % en poids de la préparation. Par exemple, l’insecticide est utilisé dans une préparation formicide à une concentration comprise entre 0,001 % et 0,3 % en poids de la préparation, bornes comprises. De préférence, elle est comprise entre 0,01 et 0,1 % en poids bornes comprises et de manière plus préférée entre 0,02 et 0,075 % en poids de préparation, bornes comprises.
[0063] Ainsi, à cette concentration, par exemple, le sulfluramide présente une faible toxicité pour l’homme et l’environnement. De plus, en présence d’un mélange d’insecticides, la teneur totale en insecticide peut encore être diminuée. Elle est inférieure ou égale à 0,1 %, de préférence inférieure ou égale à 0.075 % en poids de la préparation ce qui permet de garder une efficacité élevée pour la destruction des fourmis tout en diminuant encore la toxicité pour l’homme et l’environnement.
[0064] En fonction des doses usuelles utilisées pour ces insecticides, pour d’autres insecticides cette concentration peut-être encore inférieure. Par exemple pour le fipronil elle peut être inférieure ou égale à 0,1 % en poids, de préférence inférieure ou égale à 0,01 % en poids de la préparation, de manière encore plus préférée, inférieure ou égale à 0,003 % en poids de la préparation, de manière particulièrement préférée, inférieure ou égale à 0,001 % en poids de la préparation. [0065] Les différentes teneurs, concentrations et les différents rapports massiques peuvent être déterminés par l'homme du métier grâce à des tests conventionnels d'évaluation de la concentration.
[0066] De manière préférée, l’au moins un inhibiteur de laccase est de la L-cystéine et l’au moins un insecticide est du fipronil, du sulfluramide ou leur mélange. En effet, la L-cystéine est un puissant inhibiteur des phénol oxydases et, son utilisation combinée avec le fipronil ou le sulfluramide, entraîne un dépérissement accéléré de la meule, et d’augmenter l'efficacité du fipronil ou du sulfluramide en termes de toxicité pour les fourmis de la colonie, ce qui résulte en la mort de la colonie, sans déplacement de nid ou réapparitions de nouvelles colonies ou nids.
[0067] De manière plus préférée, l’au moins un inhibiteur de laccase est l’acide ascorbique et l’au moins un insecticide est du fipronil, du sulfluramide ou leur mélange. En effet, l’acide ascorbique est également un puissant inhibiteur des phénols oxydase son utilisation combinée avec le fipronil et/ou le sulfluramide en termes de toxicité pour les fourmis de la colonie, ce qui résulte en la mort de la colonie, sans déplacement de nid ou réapparition de nouvelles colonies ou nids. [0068] Selon un mode de réalisation de l’invention, la préparation combinée comprend en outre un appétant. En effet, l’utilisation d’un appétant permet d’attirer plus efficacement, par opposition à l’absence d’appétant, les fourmis champignonnistes.
[0069] Ainsi, l’utilisation d’un appétant permet d’augmenter le nombre de fourmis ingérant la préparation combinée ou encore d’augmenter l’importation de la préparation combinée à l’intérieur de la colonie, notamment sur le champignon, et donc d’augmenter l’exposition des fourmis et de la meule à la préparation combinée.
[0070] En particulier la préparation combinée selon l’invention est caractérisée en ce que l’appétant est sélectionné parmi un appétant oligosaccharidique, un appétant polysaccharidique, et leurs mélanges. [0071] En particulier, l'appétant oligosaccharidique ou polysaccharidique peut être choisi parmi
: amidon, amylose, amylopectine, cellobiose, glycogène, glucose, saccharose, laminarine ((1-3)- beta-D-glucane), maltodextrine, polymères de cyclodextrine, polymères d'isomaltose, icodextrines, dextrane, maltoheptose, maltohexose, maltopentose, maltotetrose, maltotriose, maltobiose, cellulose, hemicellulose, holocellulose, lignocellulose, éthers de cellulose, esters de cellulose, alkyl cellulose, hydroxy cellulose, lévoglucosan, pectine, pectocellulose, cellulose microcristalline, cellulose en poudre, papier, fibre de bois, leurs dérivés et leurs mélanges.
[0072] De manière préférée, l'appétant oligosaccharidique ou polysaccharidique est choisi parmi : amidon, amylose, cellobiose, laminarine, maltodextrine, maltobiose, glucose, saccharose, glycogène, cellulose, hemicellulose, holocellulose, lignocellulose, éthers de cellulose, esters de cellulose, alkyl cellulose, hydroxy cellulose, lévoglucosan, pectine, pectocellulose, leurs dérivés et leurs mélanges.
[0073] De manière particulièrement préférée, l'appétant oligosaccharidique ou polysaccharidique est choisi parmi : amidon, amylose, laminarine, maltodextrine, glycogène, cellulose, hemicellulose, holocellulose, lignocellulose, éthers de cellulose, esters de cellulose, alkyl cellulose, hydroxy cellulose, lévoglucosan, pectine, pectocellulose, leurs dérivés et leurs mélanges.
[0074] De manière encore plus préférée l'appétant est de l'amidon ou de la cellulose.
[0075] En particulier, l’appétant oligosaccharidique ou polysaccharidique peut être une farine ou un gruau de céréale ou un mélange de farines ou gruaux de différentes céréales, tels que, par exemple, de la farine de blé ou de maïs, du gruau de blé, d’avoine ou de maïs.
[0076] De manière encore plus particulière, l’appétant oligosaccharidique ou polysaccharidique peut être une purée de fruit ou un mélange de purée de fruit ou une composition à base de pulpe de fruit ou un mélange de pulpes de fruit, tels que des agrumes ou la banane. [0077] De manière préférée, l’appétant oligosaccharidique ou polysaccharidique est un mélange farine ou un gruau de céréale ou un mélange de farines ou gruaux de différentes céréales telles que, par exemple, celles susmentionnées, et de purée de fruit ou d’un mélange de purée de fruit ou d’une composition à base de pulpe de fruit ou un mélange de pulpes de fruit ou de dérivés de pulpe de fruits (e.g. de la pulpe déshydratée). [0078] Typiquement, la concentration en appétant est notamment fonction de la présence et de la quantité de d'inhibiteur de laccase et/ou de l’insecticide. Ainsi, la quantité d'appétant est comprise entre 600 g/kg et 999 g/kg ; de préférence entre 800 g/kg et 999 g/kg, de préférence entre 850 g/kg et 990 g/kg, voire entre 870 g/kg et 950 g/kg de la préparation formicide.
[0079] De manière avantageuse, la combinaison de l’au moins un inhibiteur de laccase et de l’au moins un insecticide dans les préparations combinées de l’invention n’a pas d’effet répulsif sur les fourmis, en particulier quand elle est utilisée en combinaison avec un appétant oligosaccharidique ou polysaccharidique tel que décrit ci-dessus, comme démontré dans la partie expérimentale. [0080] L’au moins un inhibiteur de laccase et l’au moins un insecticide de la préparation combinée formicide selon l’invention sont aptes à être utilisés de façon simultanée, conjointement ou séparément, en une ou plusieurs dispersions. La préparation selon l'invention peut être dispersée en une seule fois sur ou autour du nid ou à proximité des colonnes de récolte.
[0081] Dans un mode de réalisation particulier, la préparation selon l'invention est dispersée régulièrement, en plusieurs fois, sur une période de temps ou à intervalles définis, sur ou autour du nid ou à proximité des colonnes de récolte. Par exemple les dispersions peuvent avoir lieu tous les 5 à 10 jours. Typiquement les dispersions peuvent être journalières, ou espacées de 2, 3, 4, 5, ou 6 jours, ou d'une, deux ou trois semaines. La préparation selon l'invention peut être dispersée directement sur ou autour du nid lorsque ce dernier est localisé (par exemple à moins de 5 mètres) ou de préférence à proximité des colonnes de récoltes (par exemple à moins de 2 mètres).
[0082] Selon une variante, l’au moins un inhibiteur de laccase et l’au moins un insecticide sont formulés séparément, comme composés actifs de la préparation combinée contre les fourmis champignonnistes. Ainsi selon cette variante, une formulation comprenant l’inhibiteur de laccase sera associée à une formulation comprenant l’insecticide, dans des doses et rapports tels que décrits précédemment. De préférence, ces deux composés sont les seuls composés actifs contre les fourmis champignonnistes de ladite préparation combinée. C’est-à-dire qu’ils sont les seuls à agir négativement directement sur les membres de la colonie et/ou le champignon. Cette variante présente l’avantage de pouvoir adapter les quantités de chacun des agents actifs dans la préparation indépendamment l’un de l’autre.
[0083] Selon une variante préférée, l’au moins un inhibiteur de laccase et l’au moins un insecticide font partie d’une composition unique comme composés actifs contre les fourmis champignonnistes. De préférence, ces deux composés sont les seuls composés actifs contre les fourmis champignonnistes. C’est-à-dire qu’ils sont les seuls à agir négativement directement sur les membres de la colonie et/ou le champignon.
[0084] La préparation combinée selon l’invention peut prendre différentes formes. Ainsi, la préparation combinée prend une forme sélectionnée parmi : un ou plusieurs granulés ou une ou plusieurs poudres.
[0085] Par exemple, la préparation combinée selon l’invention peut comprendre des granulés comportant l’inhibiteur de laccase, des granulés comprenant l’inhibiteur de laccase et le composé insecticide, ou des granulés comprenant l’inhibiteur de laccase combinés à des granulés comprenant le composé insecticide ou des granulés comprenant le composé insecticide. La préparation combinée peut comprendre une ou des poudres telles qu’une la poudre comportant l’inhibiteur de laccase, une poudre comportant l’inhibiteur de laccase et le composé insecticide, ou encore une poudre comportant l’inhibiteur de laccase combinée à une poudre comportant le composé insecticide ou une poudre comportant le composé insecticide. Également, la préparation combinée selon l’invention peut comprendre des granulés comprenant un des agents actifs et une poudre comprenant un autre de ses agents actifs. Ces types de formes sont adaptés pour un mode d’action direct par simple contact ou ingestion et pour un mode d’action indirect par transfert horizontal de toxicité. En outre, les granulés ou poudres peuvent être répandus par une pompe manuelle ou encore par un dispositif de distribution automatique apte à répandre une quantité définie. L’épandage est donc particulièrement simple et aisé et peut être en outre réalisé de manière localisée et ciblée (en comparaison par exemple avec les pulvérisations), particulièrement pour les granulés. Alternativement, les granulés peuvent être déposés dans un contenant dans lequel est ménagé un ou plusieurs passages pour les fourmis, leur permettant de prélever les granulés et de les importer au sein de la colonie. Ce type de traitement présente l’intérêt de protéger le traitement des conditions climatiques comme la pluie ou le vent, et permet donc de renouveler moins souvent le traitement, Ces formes ne requièrent pas un équipement spécifique, au contraire, celles-ci sont pratiques et économiques. De plus l’utilisation des préparations de l’invention sous forme de granulés limite les risques de contamination de l’opérateur par les insecticides contenus dans les préparations ainsi que les risques dissémination incontrôlée dans la nature par le vent par exemple.
[0086] Selon un autre aspect, l’invention porte sur un procédé de lutte contre les fourmis champignonnistes comprenant l’utilisation d’une préparation combinée selon l’invention. Un tel procédé permet de protéger les récoltes en empêchant le développement de nids aux abords des champs et cultures à protéger. En outre, un tel procédé est particulièrement adapté aux fourmis champignonnistes du fait de ses effets explicités ci-dessus, et est en outre peu coûteux et plus respectueux de l’environnement que les solutions conventionnelles basée sur des traitements uniquement à base d’insecticides chimiques, de par la nature, la quantité de ses composants, et sa forme. De manière préférée, le procédé selon l’invention comprend l’utilisation d’une préparation combinée selon l’invention à des concentrations et/ou rapports massiques permettant d’obtenir notamment, outre ses nombreux avantages inhérents à la combinaison d’effets particulièrement adaptée à la lutte contre les fourmis champignonnistes, l’effet synergique observé par les inventeurs sur la croissance du champignon de la meule et l’effet de potentialisation de la toxicité de l’insecticide sur les fourmis de la colonie et de sa vitesse d’action.
[0087] Ces nouvelles méthodes de lutte contre les fourmis et les préparations combinées associées comprenant au moins un insecticide et au moins un inhibiteur de laccase sont particulièrement adaptées aux fourmis champignonnistes, elles présentent un impact plus faible sur l'environnement que les compositions formicides classiques. De plus, dans certains modes de réalisation, ces compositions sont rapidement dégradées. [0088] La préparation peut être dispensée indirectement sur ou autour du nid ou de préférence à proximité des colonnes de récoltes. La quantité de préparation dispensée est comprise entre 1 g et 200 g par mètre carré de manière préférée entre 2 g et 100 g par mètre carré et de manière encore plus préférée 4 g et 50 g par mètre carré, de manière particulièrement plus préférée 8 et 45g par mètre carré, bornes comprises. En effet, la quantité dispensée peut varier en fonction de la superficie au sol du nid ou plus simplement de la superficie que l’on souhaite traiter. L’homme de l’art sait déterminer la superficie à traiter.
[0089] Avantageusement, l’inhibiteur de laccase et l’insecticide sont dispensés séparément dans le procédé de lutte de l’invention, cela permet de varier les concentrations respectives des composés actifs, notamment en fonction de l’endroit où la préparation de l’invention est déposée et d’une cible particulière c’est-à-dire, sur ou à proximité du le nid, à proximité des colonnes de récoltes, sur ou à proximité des végétaux ou de la cible : les castes de fourmis (minor, major, moyenne, larves ...) ou la meule à champignon.
[0090] Dans le procédé de lutte contre les fourmis champignonnistes de l’invention la préparation combinée peut également être formulés conjointement, sous forme de granulés ou de poudre, tel que décrit précédemment et répandue de manière manuelle et/ou automatisée.
[0091] Selon un autre aspect, l’invention porte sur un procédé de fabrication d’une préparation combinée selon l’invention comprenant les étapes suivantes :
Une étape de dosage,
Une étape de mélange, et Une étape de mise en forme.
[0092] L’étape de dosage comprend la mesure d’une quantité prédéterminée d’au moins un insecticide et d’au moins un inhibiteur de laccase. Le dosage correspond à la réalisation d’une composition comprenant au moins un insecticide et d’une composition comprenant au moins un inhibiteur de laccase dans des teneurs définies pour obtenir les préparations combinées de l’invention aux teneurs, concentrations et/ou rapport massiques telles que décrits précédemment ou la réalisation d’une composition unique comprenant un inhibiteur de laccase et un insecticide également définies pour obtenir les préparations combinées de l’invention aux teneurs, concentrations et/ou rapport massiques telles que décrits précédemment . La réalisation technique d’un dosage est établie de façon courante selon l’homme du métier.
[0093] L’étape de mélange comprend l’incorporation de l’au moins un inhibiteur de laccase et de l’au moins un insecticide de façon homogène, séparément ou ensemble dans une matrice, ladite matrice étant un excipient propre à mettre en forme la préparation combinée. Avantageusement, au moins un appétant est ajouté au cours de cette étape dans les concentrations décrites. Encore plus avantageusement l’au moins un appétant constitue la matrice.
[0094] De manière optionnelle une ou plusieurs étapes d’évaporation des solvants dans lesquels les composés actifs faiblement hydrosolubles seraient dissous peut-être appliquée. La durée de chaque étape peut varier selon le solvant utilisé ; l’homme de l’art saura aisément déterminer l’évaporation totale du ou des solvants.
[0095] Le procédé de fabrication comprend en outre une étape de mise en forme sous forme de granulés ou poudre. Les granulés peuvent comporter l’inhibiteur de laccase ou le composé insecticide, peuvent comporter l’inhibiteur de laccase et le composé insecticide, ou des granulés peuvent comporter l’inhibiteur de laccase combinés à des granulés comportant le composé insecticide. De manière avantageuse, les dits granulés sont de taille adaptée pour que les fourmis récolteuses puissent les ramener à la colonie, dans le nid. De manière encore plus avantageuse, la taille des granulés est adaptée au transport quelle que soit la taille de la fourmi parmi les différentes castes de fourmis de la colonie, favorisant ainsi l’importation et la dispersion des granulés et donc de la composition au sein de la colonie. L’homme de l’art sait aisément déterminer la taille adéquate des granulés. Par exemple, les granulés peuvent avoir une taille qui s’apparente à celle d’un grain de riz, soit classiquement environ 5 mm de long pour 1 à 2 mm de large. Bien sûr toute forme peut convenir, le critère étant que ledit granule soit transportable par les fourmis comme mentionné ci-dessus. [0096] La préparation combinée peut également prendre la forme de poudres de telle sorte que la poudre peut comporter l’inhibiteur de laccase ou peut comporter l’inhibiteur de laccase et le composé insecticide ou peut comporter l’inhibiteur de laccase combinés à une poudre comportant le composé insecticide.
[0097] Optionnellement l’étape de mise en forme comprend le liage, par exemple par de l’eau ou toute autre solution ou liquide acceptable (comme par exemple de l’huile de soja) n’ayant pas d’effet répulsif sur les fourmis, du mélange résultant de l’étape de mélange, de façon à obtenir la consistance souhaitée pour permettre la mise en forme adéquate, dans le cas de granulés par exemple. De manière avantageuse, le liant peut lui-même constituer ou comprendre un appétant pour les fourmis. [0098] Optionnellement, la poudre ou les granulés obtenus sont séchés avant stockage. EXEMPLE
[0099] La préparation combinée selon l’invention a été testée sous forme de granulés comprenant une association un insecticide microdosé (sulfluramide ou fipronil) avec un inhibiteur de laccase (cystéine ou acide ascorbique), sur des sous-colonies de fourmis champignonnistes. Ces sous-colonies sont calibrées, ce qui permet d’assurer la bonne comparabilité des différentes conditions testées.
[00100] Les tests réalisés sont en accord avec les instructions normatives n°36 du 24 novembre 2009 émises par le ministère brésilien de l’agriculture, de l’élevage et de l’approvisionnement (MAPA), dans le cadre du développement de procédés de lutte contre les fourmis coupeuses de feuilles.
[00101] Matériels et méthodes
[00102] Sous colonies de fourmis champignonnistes
[00103] Les tests sont effectués sur des sous colonies de fourmis qui sont issues de colonies d ’Atta céphalotes provenant de Trinidad. Ces sous colonies sont calibrées et constituées en associant 20 ouvrières médium + 20 ouvrières minor et une meule à champignon d'environ 3cm3 au début de l’expérimentation, placées dans une enceinte telle que décrite par la figure 1 : Chaque sous-colonie a une partie champignonnière et une partie "jardin" dans laquelle des végétaux sont renouvelés à volonté suivant leur consommation par les fourmis (cf. figure 1). [00104] Tous les tests sont effectués sur des colonies dites stabilisées, pour lesquelles, suivant l’installation, on n’observe plus de mortalité qui ont débuté l’activité de récolte. Classiquement, la stabilisation des colonies peut prendre 5 à 15 jours pendant lesquels les fourmis mortes sont remplacées.
[00105] Préparations combinées testées et nombre de tests
[00106] Sauf indication contraire, les concentrations sont exprimées en pourcentage massique.
Tableau 1
Figure imgf000024_0001
Tableau 2
Figure imgf000024_0002
[00107] Fabrication des préparations
[00108] Dans cet exemple, les préparations combinées selon l’invention ainsi que les préparations témoins ont été préparées sous forme de granules. Les différentes préparations sont préparées en conditions semi-stériles, sous sorbonne, les récipients et outils sont désinfectés entre chaque préparation.
[00109] Ces granules sont modelés de façon à avoir la taille et une forme s’apparentant à celle d’un grain de riz (i.e. de transport aisé par les fourmis, classiquement de 5 mm de long pour un à deux mm de large).
[00110] Une pâte est formée avec les différents constituants (pourcentage massiques) : - La matrice, qui constitue aussi l’appétant, est constituée d’un mélange de farine de blé blanche (telle que celle classiquement utilisée en alimentation humaine, de saccharose (10 %, D(+)-saccharose, fournisseur : Labosi)) et de poudre d’agrume (10 %, citrablend, poudre zeste de citron déshydratée issue de la culture biologique, mesh 80, fournisseur : Bureau Couecou, France). - Les composants actifs sont ajoutés aux concentrations telles que stipulées dans les tableaux 1 ou 2. Les inhibiteurs de laccase testés sont la L- cystéine (L-cystéine hydrochloride, SBM formulation) et l’acide ascorbique.
De l’eau est ajoutée de manière à obtenir une consistance satisfaisante permettant le modelage. [00111] Selon la solubilité de l’insecticide testé, afin d’obtenir une répartition homogène, dans les granules, celui-ci est dissout dans le solvant adéquat, avant mélange avec les autres constituants.
[00112] Selon le solvant utilisé, une étape d’évaporation peut être nécessitée pour évaporer ledit solvant. Ainsi, dans cet exemple, le sulfluramide (fournisseur : Sigma-Aldrich, réf. 91242) est préalablement été dilué dans du méthanol (qualité Normapur, fournisseur : Prolabo) et le fipronil (fournisseur : VWR, réf. SUPL16785-50MG) dans de l’acétone (qualité Normapur, fournisseur : VWR), puis mélangés à la matrice, le mélange a été soumis à évaporation (48 heures environ) en amont de l’humectation.
[00113] Pour permettre le modelage, les préparations ont été rendues pâteuses par l'ajout d'eau (1 ml d'eau/2g de préparation pour une composition unique), et ensuite modelées sous forme de granulés tel que précisé ci-dessus.
[00114] Pour la préparation 18 (tableau 2, préparation dans laquelle les principes actifs sont formulés séparément), les granulés d’insecticides et d’inhibiteur de laccase sont modelés séparément, et associés par la suite. La quantité et les concentrations massiques de chacune des formulations est établie de façon à obtenir une préparation combinée présentant les mêmes concentrations et le même ratio massique entre l’inhibiteur de laccase et l’insecticide que pour la préparation 2.
[00115] Après leur modelage, les granulés ont été séchés pendant 48h dans la sorbonne et conservés en flacons étanches.
[00116] Administration de la préparation combinée à la colonie
[00117] A T0 on remplace le végétal par une petite coupelle de 3 cm de diamètre contenant 2g de préparation à tester. La coupelle contenant les granulés est laissée en place 24h, puis retirée, avant de remettre les végétaux.
[00118] La quantité de préparation prélevée par les fourmis est déduite du pesage de la quantité restante après 24 heures de présence dans la colonie (la pesée est effectuée après séchage environ 24 heures à température ambiante du fait des conditions d’humidité expérimentales).
[00119] L’administration des préparations à tester et les mesures ont toujours lieu à la même période de la journée, ici l'après-midi entre 14h30 et 17h00.
[00120] A T0, T+1 puis tous les 3 jours jusqu'à 21 jours des mesures concernant la survie des fourmis, le volume du champignon et la consommation des végétaux est mesurée.
[00121] Effets mesurés sur le champignon : [00122] Le dépérissement la meule est apprécié par deux aspects : la couleur de la meule et son volume. Les meules à champignons des colonies de fourmis coupe-feuille en conditions normales sont sur au moins leur tiers supérieur de couleur grise ou poivre et sel. Les meules en train de dépérir prennent une couleur blanchâtre.
[00123] Index de blanchiment : [00124] Un index de blanchiment a donc été élaboré comme indice de dépérissement de la meule il correspond au ratio de hauteur de meule grise / hauteur totale de la meule ; il permet de mesurer le blanchiment de la meule.
[00125] Index volumique
[00126] La variation de volume de chaque champignon de chaque colonie à un temps T est mesurée en posant l’hypothèse que le champignon a une forme se rapprochant de celle d’un cône et en rapportant le volume mesuré à l’instant T au volume mesuré à T0. [00127] Le volume V de la meule étant donc calculer selon la formule :
Figure imgf000027_0001
[00128] H étant la hauteur de la meule et r étant le rayon de sa base. [00129] Mesure de la mortalité des fourmis
[00130] La mortalité correspond au cumul des morts durant l’essai (donc un maximum de 40 sur 21 jours) .
[00131 ] La mortalité peut également être exprimée selon la formule de Abott qui permet d’estimer l’efficacité insecticide des préparations testées (EA, efficacité de Abott), en tenant compte de la mortalité existante dans les essais témoins.
EA = (1 — (nombre de morts /nombre de morts dans le témoin) * 100
[00132] Enfin la DL50 permet également d’estimer l’efficacité des préparations testées, en mesurant le temps nécessaire pour tuer la moitié des fourmis de la colonie. [00133] Résultats
[00134] Consommation des préparations
[00135] Aucune différence significative quant à la consommation des préparations en fonction de leur composition n’a été observée (non montré).
[00136] Ainsi une bonne appétence des fourmis pour les préparations combinées de l’invention est observée, comparable au témoin, sans effet répulsif particulier dû à la présence de l’inhibiteur de laccase et/ou de l’insecticide.
[00137] Volume du champignon
[00138] La diminution moyenne (observée à T21 , par rapport à T0) en pourcentage du volume du champignon est reportée dans le tableau 3.
[00139] D’une manière générale, le suivi régulier tous les trois jours du volume du champignon des colonies, montre qu’une diminution du volume du champignon importante est observée dès le troisième jour d’expérimentation quand une préparation combinée selon l’invention, comprenant un inhibiteur de laccase et un insecticide, est administrée aux colonies de fourmis, celle-ci étant bien moindre quand les anti-laccases sont utilisés seuls. Les préparations contenant de l’insecticide comme seul agent actif ne présentent pas de toxicité notable pour le champignon. Ces résultats sont illustrés par la figure 2 et au tableau 3.
Tableau 3
Figure imgf000028_0001
* en pourcentage par rapport au volume initial † temps (en jour) auquel est observé 50 % de diminution de volume du champignon na: inhibition non atteinte nd : données non disponibles
[00140] Une diminution est certes observée pour les préparations ne contenant que l’inhibiteur de laccase (préparations 1 et 7) cependant la diminution peut être jusque plus de deux fois plus rapide avec les préparations combinées selon l’invention (e.g. tableau 3 et figure 2). Comparé au témoin, aucune toxicité significative pour le champignon n’est observée pour l’insecticide utilisé seul (préparations 4 et 6) et ce même lorsqu’une concentration jusque 4 fois plus importante d’insecticide est utilisée en comparaison avec celles utilisées dans les préparations combinées de l’invention (tableau 3). [00141 ] Par exemple, une diminution de 50 % du volume de la meule à champignon est observée un peu avant le 6eme jour d’expérimentation pour la combinaison cystéine 1 % et sulfluramide 0.075 % (préparation 3), alors qu’il faut attendre 13 jours pour observer une diminution de la même ampleur pour les colonies traitées avec des préparations ne contenant que la cystéine. Les préparations ne contenant que le sulfluramide à la même concentration ne permettent pas de dépasser pas une diminution de volume de 24 % (figure 2). Une inhibition maximale comparable de 32 % est observée quand le sulfluramide est utilisé seul à une concentration pourtant 4 fois plus importante.
[00142] De manière identique aux préparations se présentant sous une seule formulation, un dépérissement accéléré du champignon est également observé pour la préparation 18 qui comprend l’insecticide et l’inhibiteur de laccase dans deux formulations distinctes.
[00143] Des résultats comparables sont observés pour les préparations 10 à 17 concernant le fipronil.
[00144] Ainsi, de manière inattendue l’utilisation combinée d’un insecticide et d’un inhibiteur de laccase tels que décrits dans la présente invention, résulte en une augmentation importante de la vitesse de diminution du volume du champignon comparée à celle provoquée par l’inhibiteur de laccase utilisé seul, aucune activité significative de l’insecticide utilisé seul n’étant détecté sur le volume ou la couleur du champignon quand celui-ci est utilisé seul, aux mêmes concentrations.
[00145] Une méthode de détermination de l’effet synergique de composés herbicides est mentionnée dans Colby (1967) et peut s’appliquer ici. Colby mentionne que l’efficacité attendue E (c’est-à-dire l’efficacité résultant d’un simple effet additif) de la combinaison de deux composés x et y peut être déterminée selon la formule :
XY
E = X + Y —
ÏÔÔ
X étant l’inhibition observée à une quantité donnée du produit x, et Y l’inhibition observée pour un quantité donnée de produit y.
[00146] Quand l’effet observé est plus grand que celui attendu (calculé par la formule ci- dessous), alors la combinaison est synergique, si l’effet est inférieur à celui attendu, alors la combinaison est antagoniste, si l’effet est identique, alors, la combinaison est additive. Tableau 4
Figure imgf000030_0001
[00147] Ainsi, comme le montre le tableau 4, l’effet observé est bien supérieur à celui attendu calculé selon Colby pour les premiers jours d’expérimentation. Ainsi un effet synergique de la combinaison de l’inhibiteur de laccase et de l’insecticide est observé pour les combinaisons de l’invention sur le volume de la meule à champignon.
[00148] Le champignon de la meule est important pour la colonie, car ce sont ses gongylidia (hyphes hypertrophiés) qui fournissent la nourriture à tous les acteurs de la colonie (larves, aux ouvrières, aux soldats et à la reine). Le champignon est particulièrement important pour les larves puisqu’elles y sont placées et recouvertes d’hyphes par les ouvrières. En outre le dépérissement des larves entraîne le déclin de la colonie du fait que les ouvrières deviennent apathiques (Lopes et al., 2005).
[00149] Les préparations combinées de l’invention permettent donc de cibler la colonie dans son entier en touchant le champignon de la meule, source de la nourriture pour toute la colonie et vraisemblablement d’importance primordiale pour les larves. La soudaineté de cet effet sur le champignon, associé à la mortalité sur les fourmis permet d’envisager l’inhibition de tout déménagement des nids, ainsi que l’empêchement de la survie d’une colonie après l’arrêt du traitement, les larves étant vraisemblablement atteintes par la destruction du champignon. [00150] Mortalité des fourmis.
[00151] De manière également surprenante, une accélération de la mortalité des fourmis est également observée pour les colonies traitées avec les préparations combinées de l’invention comprenant un inhibiteur de laccase et un insecticide, alors même que les compositions comprenant uniquement des inhibiteurs de laccase comme agent actif n’induisent pas de mortalité significative dans les expérimentations. En outre ces combinaisons s’avèrent aussi efficaces à tuer les fourmis que les préparations ne comprenant que l’insecticide comme agent actif et ce malgré des concentrations en insecticide plus faibles pour les préparations de l’invention (tableau 5). Tableau 5
Figure imgf000031_0001
*Par rapport à un colonie traitée avec de l’insecticide seul à dose équivalente
[00152] Cela est notamment illustré par la figure 3. Aucune mortalité significative n’est observée pour les fourmis des colonies traitées avec l’acide ascorbique seul (préparation 7). Les 50 % de mortalité dans les colonies sont atteints dès le 5 ème jour pour les colonies traitées avec la préparation comprenant 1 % d’acide ascorbique et 0.1 % de sulfluramide, ou la préparation comprenant 0.3 % de sulfluramide comme seul agent actif. Il faut attendre 8 jours pour observer 50 % de mortalité dans les colonies traitées avec 0,1 % de sulfluramide seul.
[00153] Conclusion
[00154] Ces expérimentations effectuées dans des conditions standardisées ont permis une analyse optimisée des résultats obtenus en minimisant les variations expérimentales. [00155] Elles montrent que la combinaison d’un inhibiteur de laccase avec un insecticide résulte en des effets de potentialisation de la toxicité de l’insecticide et de l’inhibiteur de laccase dans son effet sur la meule.
[00156] Ces effets permettent un déclin brusque de la colonie et ciblent en quelques jours tous les acteurs de la colonie de manière simultanée, à la différence de l’inhibiteur de laccase ou de l’insecticide utilisés seuls.
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Claims

REVENDICATIONS
1. Préparation combinée formicide comprenant, formulés séparément ou dans une composition unique, au moins un insecticide appartenant à la famille des phénylpyrazoles, des néonicotinoïdes ou à la famille des sulfonamides et au moins un inhibiteur de laccase sélectionné parmi : une molécule anti-oxydante, un chélateur, un détergent, un acide organique non oxydant et un métal cationique, ledit inhibiteur de laccase étant présent dans la préparation à une teneur supérieure ou égale à 0,5 % en poids de la préparation, et le rapport massique entre l’au moins un inhibiteur de laccase et l’au moins un insecticide étant supérieur ou égal à 2.
2. Préparation combinée formicide selon la revendication 1 , caractérisée en ce que l’au moins un insecticide appartenant à la famille des phénylpyrazoles, des néonicotinoïdes ou à la famille des sulfonamides, est sélectionné parmi : le fipronil, le sulfluramide ou leur mélange.
3. Préparation combinée formicide selon l’une des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que le rapport massique entre l’au moins un inhibiteur de laccase et l’au moins un insecticide est supérieur ou égal à 5, de préférence supérieur ou égal à 10.
4. Préparation combinée formicide selon l’une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que la concentration en insecticide dans la préparation est inférieure ou égale à 0,3 % en poids de la préparation, de préférence inférieure ou égale à 0,1 %.
5. Préparation combinée formicide selon l’une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que l’au moins un inhibiteur de laccase est sélectionné parmi : le glutathion, L-cystéine, le thiosulfate de sodium, l'acide ascorbique, l’eugénol et leurs mélanges.
6. Préparation combinée formicide selon l’une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que la teneur en inhibiteur de laccase dans la préparation est supérieure ou égale à 1 % en poids de la préparation, de préférence comprise entre 1 et 10 %.
7. Préparation combinée formicide selon l’une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que l’au moins un inhibiteur de laccase est l’acide ascorbique ou la L- cystéine, et l’au moins un insecticide est du fipronil, du sulfluramide ou leur mélange.
8. Préparation combinée formicide selon l’une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que l’au moins un inhibiteur de laccase est l’acide ascorbique, et l’au moins un insecticide est du sulfluramide.
9. Préparation combinée formicide selon l’une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisée en ce que l’au moins un inhibiteur de laccase et l’au moins un insecticide font partie d’une composition unique.
10. Procédé de lutte contre les fourmis champignonnistes caractérisé en ce que ledit procédé comprend l’utilisation d’une préparation combinée selon l’une quelconque des revendications 1 à 9.
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