EP2566511A2 - Utilisation d'anticorps anti-cd71 pour la preparation d'un medicament - Google Patents

Utilisation d'anticorps anti-cd71 pour la preparation d'un medicament

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Publication number
EP2566511A2
EP2566511A2 EP11723558A EP11723558A EP2566511A2 EP 2566511 A2 EP2566511 A2 EP 2566511A2 EP 11723558 A EP11723558 A EP 11723558A EP 11723558 A EP11723558 A EP 11723558A EP 2566511 A2 EP2566511 A2 EP 2566511A2
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EP
European Patent Office
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seq
antibody
acid sequence
amino acid
fragment
Prior art date
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Withdrawn
Application number
EP11723558A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Laurence Boumsell
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LFB SA
Original Assignee
LFB Biotechnologies SAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by LFB Biotechnologies SAS filed Critical LFB Biotechnologies SAS
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Withdrawn legal-status Critical Current

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2881—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD71
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/69—Boron compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • G01N33/57492—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds localized on the membrane of tumor or cancer cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding

Definitions

  • the present invention relates to the use of anti-CD71 antibodies or anti-CD71 antibody fragments for the preparation of a medicament for the prevention or treatment of cancers.
  • CD71 is a Type II glycoprotein that exists as a 180 kDa homodimer.
  • CD71 is a receptor for transferrin, a protein that transports iron from the intestine to liver stores and reticulocytes.
  • Ferrotransferrin Fe3 + associated transferrin
  • Ferrotransferrin Fe3 + associated transferrin
  • the Fe3 + ions are then transported to the cytoplasm by an unknown mechanism.
  • the apotransferrin, transferrin without Fe3 + remains fixed at CD71 at pH5 and returns to the cell membrane at approximately pH 7.4.
  • apotransferrin has no affinity for CD71. The dissociation of the complex formed by the apotransferrin and the CD71 makes it possible to begin another cycle of transport.
  • CD71 plays an important role in cell proliferation because it controls the consumption of iron, an essential process in many metabolic pathways. This control is implemented by the binding and endocytosis of transferrin by CD71.
  • the expression of CD71 is post-transcriptionally regulated by the stability of CD71 RNA, and the intracellular level of iron.
  • IRP-1 and IRP-2 iron response protein
  • IREs iron response elements
  • Myeloma also known as multiple myeloma, or Kahler's disease, is a cancer of the plasma cells. These are produced in the spleen and migrate into the bone marrow. Plasma cells are specialized B cells that normally produce antibodies. Normal plasma cells are characterized by an inability to proliferate. Nevertheless, when these cells become malignant, they acquire a great capacity for proliferation and secrete all the same type of immunoglobulin. In most cases, this immunoglobulin is IgG or IgA, but it can also be IgD, IgE or IgM. Therefore, the blood or urine of patients with myeloma often has a very large amount of a single type of antibody called paraprotein.
  • Myeloma can be divided into 3 stages according to the Durie and Salmon classification established in 1986. This classification is based on the amount of paraprotein produced, the severity of the bone lesion, the blood calcium level and the insufficiency of bone marrow production ( hemoglobin). Stage I corresponds to a low tumor mass myeloma, whereas Stage III is a high tumor mass myeloma. A possible impairment of renal function adds a subclassification, in which stage A has no renal involvement and stage B is characterized by renal failure.
  • chemotherapeutic agents used in the treatment of myelomas are alkylating agents, such as melphalan or cyclophosphamide, often combined with cortisone drugs, such as prednisone, or proteasome inhibitors, such as bortezomib (Velcade®). ), or anti-angiogenic agents, such as thalidomide.
  • alkylating agents such as melphalan or cyclophosphamide
  • cortisone drugs such as prednisone
  • proteasome inhibitors such as bortezomib (Velcade®).
  • anti-angiogenic agents such as thalidomide.
  • Another approach to treating myeloma involves autologous stem cell techniques. These techniques involve the use of healthy stem cells from the peripheral blood or bone marrow of the subject himself. The stem cells thus recovered can be frozen until the moment of use and then thawed and reinjected or retransplanted into the patient's body intravenously. About two weeks after the injection, the stem cells can begin to produce new blood cells and regenerate the bone marrow. In the past 10 years, autologous stem cell transplantation has become a preferred treatment. Because, if the patients are able to support this treatment, this method makes it possible to give a better survival of these patients. However, since autologous stem cell transplantation is often combined with chemotherapy before transplantation at high doses, this method can lead to very serious side effects, such as a sharp decrease in white blood cells.
  • a first aspect of the invention aims to provide a new drug for the prevention or treatment of myeloma.
  • Another aspect of the invention is to provide an in vitro diagnostic method for myeloma.
  • the present invention relates to the use of an anti-CD71 monoclonal antibody or a fragment of a said antibody capable of binding to the CD71 antigen, said antibody or fragment of said antibody comprising:
  • variable region of a heavy chain comprising or consisting of the amino acid sequence SEQ ID NO: 1, and
  • variable region of a light chain comprising or consisting of an amino acid sequence chosen from SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13,
  • the present invention is based on an unexpected finding made by the inventors in a study on the level of expression of CD71 on tumor cell lines of myeloma. Indeed, CD71 is overexpressed on plasma cells that become malignant.
  • the invention shows both in vitro and in vivo that blocking CD71 by an anti-CD71 antibody can inhibit the development of myelomas and prolong the survival of mice bearing myeloma.
  • the first mechanism is the inhibition of proliferation of myeloma cells by blocking the delivery of iron to tumor cells via the anti-CD71 antibody.
  • An anti-CD71 antibody can also trigger or activate an immune response, such as the production of cytokines, or the induction of apoptosis in tumor cells, thereby destroying cancer cells.
  • Myeloma cells can also be specifically removed by effector cells by the antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) or complement-dependent cytotoxicity (CDC) process.
  • ADCC antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity
  • CDC complement-dependent cytotoxicity
  • antibody refers to an immunoglobulin, a multimeric protein consisting of 4 chains participating in the acquired immune response.
  • Immunoglobulins are well known to those skilled in the art and consist of an assembly of two dimers each consisting of a heavy chain and a light chain.
  • the multimeric complex is assembled by the binding of a light chain and a heavy chain by a disulfide bridge between two cysteines, the two heavy chains being itself also interconnected by two disulfide bridges.
  • Each of the heavy chains and light chains consists of a constant region and a variable region.
  • the assembly of the chains which compose an antibody makes it possible to define a characteristic three-dimensional scree in Y, where
  • the base of Y corresponds to the constant region Fc which is recognized by the complement and the Fc receptors, and
  • the end of the Y arms corresponds to the respective assembly of the variable regions of the light and variable chain of the heavy chain.
  • each light chain consists of a variable region (VL) and a constant region (CL).
  • Each heavy chain consists of a variable region (VH) and a constant region consisting of three constant domains CH1, CH2 and CH3. The association of the two domains CH2 and CH3 composes the domain Fc.
  • variable region of the light chain consists of three domains determining antigen recognition (CDR) surrounded by four framework domains (FR).
  • CDR antigen recognition
  • FR framework domains
  • the three-dimensional folding of the variable region is such that the 3 CDRs are exposed on the same side of the protein and allow the formation of a specific structure recognizing a specific antigen.
  • the term "the ability to bind to the CD71 antigen” means the ability of an antibody to recognize and specifically bind to an antigen. This specificity is conferred by the variable region of the light chain or heavy chain.
  • the ability of an antibody to recognize and specifically bind to an antigen can be assayed by techniques such as ELISA, indirect immunofluorescence, or western blot.
  • a fragment of a said antibody capable of binding to the CD71 antigen may be a Fab fragment, F (ab) '2, scFV, ScFv dimer or a diabody, a triabody or a tetrabody
  • a Fab fragment consists of a light chain comprising a constant region of a light chain of a human immunoglobulin and a variable region of a murine immunoglobulin, and a heavy chain comprising a constant region of a chain heavy with a human immunoglobulin and a variable region of a murine immunoglobulin.
  • An F (ab) '2 fragment consists of the disulfide bonding of two Fabs described above.
  • An scFv fragment consists of the combination of a heavy chain variable fragment and a light chain variable fragment of an immunoglobulin.
  • a scFv dimer consists of two covalently bound ScFv fragments, each ScFv being themselves a variable fragment of a heavy chain and a variable fragment of a light chain.
  • a diabody consists of the non-covalent association of two polypeptides containing themselves two variable chains of the same nature (VL-VL and VH-VH) which may be of the same or different specificity.
  • a triabody or a tetrabody can be constituted.
  • the invention relates to the use of an anti-CD71 monoclonal antibody or a fragment of a said antibody capable of binding to the CD71 antigen, said antibody or fragment of said antibody comprising :
  • variable region of a heavy chain comprising or consisting of an amino acid sequence encoded by a nucleic sequence SEQ ID NO: 3, and
  • variable region of a light chain comprising or consisting of an amino acid sequence encoded by a nucleic sequence chosen from SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 12,
  • the nucleic acid sequence SEQ ID NO: 3 encodes the amino acid sequence SEQ ID NO: 1.
  • the nucleic sequences SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 12 respectively coding the amino acid sequences SEQ ID NO: 2 and SEQ ID NO: 11.
  • the invention relates to the use of an anti-CD71 antibody as defined above, wherein the constant regions of said light and heavy chains are constant regions of a human antibody.
  • Said human antibody may be an IgG, IgA, IgD, IgE or IgM antibody.
  • This embodiment of the invention makes it possible to reduce the immunogenicity of the antibody in humans and thereby to improve its effectiveness during its therapeutic or prophylactic administration in humans.
  • the constant region of each of the heavy chains of the antibody according to the invention is in particular the constant region of human IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgD, IgE, IgA1 or IgA2.
  • the constant region of each of the heavy chains of the antibody according to the invention is the constant region of a human immunoglobulin of Gl type, because such an antibody shows an ability to generate ADCC activity in the greatest number of of individuals (humans).
  • the constant region of each of the light chains of the antibody according to the invention is the constant region of the ⁇ (kappa) or ⁇ (lambda) chain.
  • the invention relates to the use of an anti-CD71 antibody defined above, in which:
  • At least the constant region of a light chain comprises or consists of the amino acid sequence chosen from SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 14
  • At least the constant region of a heavy chain comprises or consists of the amino acid sequence chosen from SEQ ID NO: 5 or SEQ ID NO: 9.
  • the invention relates to the use of an anti-CD71 antibody as defined above, wherein:
  • At least the constant region of a light chain comprises or consists of the amino acid sequence encoded by the nucleic acid sequence SEQ ID NO: 8,
  • the constant region of a heavy chain comprises or consists of the amino acid sequence encoded by a nucleic sequence chosen from SEQ ID NO: 7 or SEQ ID NO: 10.
  • the nucleic acid sequence SEQ ID NO: 8 encodes the amino acid sequence SEQ ID NO: 6.
  • the nucleic sequences SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 10 respectively encode the amino acid sequences SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 9.
  • the anti-CD71 antibody for the implementation of the invention may be an antibody where:
  • variable region of each of its light chains comprises or consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 2, and
  • variable region of each of its heavy chains comprises or consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 1, and
  • the constant region of each of its light chains comprises or consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 14, and
  • the constant region of each of its heavy chains comprises or consists of the amino acid sequence chosen from SEQ ID NO: 5 or SEQ ID NO: 9.
  • the anti-CD71 antibody for the implementation of the invention is produced by the hybridoma BA120g, deposited on June 14, 2005 at the CNCM under number CNCM 1-3449.
  • An anti-CD71 monoclonal antibody for the practice of the present invention may be produced by conventional methods known to those skilled in the art, for example, the construction of a DNA vector which expresses:
  • vectors are, for example, plasmids, cosmids, artificial chromosomes of yeasts, artificial chromosomes of bacteria and artificial chromosomes derived from bacteriophage PI, vectors derived from viruses.
  • a fragment of an anti-CD71 antibody implemented in the use described above may be Fab, F (ab) '2, scFV, ScFv dimer or a diabody. , a triabody or a tetrabody.
  • fragments can be recombinant fragments, synthetic, or produced by enzymatic cleavage according to methods known to those skilled in the art. These fragments can also be produced by introducing one or more stop codons into the gene encoding an anti-CD71 antibody. For example, when a stop codon is introduced after the CH1 domain of the gene encoding the heavy chain, the chain thus produced is a heavy chain capable of forming an Fab fragment with a light chain. On the other hand, if a stop codon is added after the hinge region downstream of the CH1 domain of a heavy chain, this truncated chain may constitute an F (ab) '2 fragment with a light chain.
  • the anti-CD71 antibody used in the use described above is coupled to a bioactive molecule.
  • This bioactive molecule may be a radioisotope, for example a range radiation emitter, a beta radiation emitter or an alpha emitter.
  • a radioisotope coupled to the anti-CD71 antibody or a fragment of the anti-CD71 antibody is a radioisotope that can be used for a therapeutic or diagnostic purpose, such as Actinium 225, Actinium 227 or Arsenic 72.
  • radioisotopes can be directly linked to the antibody or via a chelator, such as DTA (9,10-dithioanthracene), or DTPA (diethylene triamine penta acid).
  • a chelator such as DTA (9,10-dithioanthracene), or DTPA (diethylene triamine penta acid).
  • a bioactive molecule can also be a non-radioactive metal.
  • the said bioactive molecule can also be:
  • a toxin for example ricin, abrin, diphtheria toxin, Phytolacca antiviral protein, or a functional fragment of a toxin;
  • nucleic acid such as an antisense RNA, a siRNA, or a miRNA
  • a cyto-toxic agent for example mitomycin C, methotrexate, adriamycin, doxorubicin, daunorubicin, vinblastine, bleomycin, taxol, taxotere, navelbine; an enzyme such as Raise;
  • a galenic vector for example liposomes, nanoparticles, polymers, cationic emulsions, anionic emulsions, neutral emulsions, or dendritomes;
  • biotin, avidin or streptavidin are biotin, avidin or streptavidin.
  • a bioactive molecule mentioned above can be directly linked to the antibody or via a linker.
  • a particular aspect of the invention relates to the use
  • variable region of a heavy chain comprising or consisting of the amino acid sequence SEQ ID NO: 1, and
  • variable region of a light chain comprising or consisting of an amino acid sequence chosen from SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 or SEQ ID NO: 17, and
  • Effector cells are used simultaneously with the anti-CD71 antibody for the preparation of a medicament for the prevention or treatment of myelomas.
  • effector cells are cells capable of expressing Fc domain receptors, such as human T lymphocytes, human NK lymphocytes, human monocytes, human granulocytes, or human macrophages.
  • Fc domain receptors such as human T lymphocytes, human NK lymphocytes, human monocytes, human granulocytes, or human macrophages.
  • Effector cells may be autologous or allogeneic cells.
  • effector cells are cells from a patient in need of myeloma treatment. Effector cells are separated from peripheral blood taken from a donor or patient according to conventional methods well known to those skilled in the art (Boyum et al, Scand J Clin Lab Invest, Suppl 1976. 5 : 9-15).
  • the invention relates to the use of an anti-CD71 antibody described above and effector cells for the preparation of a medicament for the prevention or treatment of myelomas, wherein the constants of the light and heavy chains of said antibody are constant regions of a human antibody.
  • the invention relates to the use of an anti-CD71 antibody described above and effector cells for the preparation of a medicament for the prevention or treatment of myeloma, wherein:
  • At least the constant region of a light chain comprises or consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 14,
  • At least the constant region of a heavy chain comprises or consists of the amino acid sequence chosen from SEQ ID NO: 5 or SEQ ID NO: 9.
  • the invention relates to the use of an anti-CD71 antibody described above and effector cells for the preparation of a medicament for the prevention or treatment of myeloma, wherein:
  • variable region of each of its light chains comprises or consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 2, and
  • variable region of each of its heavy chains comprises or consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 1, and
  • the constant region of each of its light chains comprises or consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 14, and
  • the constant region of each of its heavy chains comprises or consists of the amino acid sequence chosen from SEQ ID NO: 5 or SEQ ID NO: 9.
  • the invention relates to the use of effector cells and of an anti-CD71 antibody produced from hybridoma BA120g, deposited on June 14, 2005 at CNCM under number CNCM 1-3449, for the preparation of a medicament for the prevention or treatment of myeloma.
  • the invention relates to the use of an anti-CD71 antibody described above and effector cells for the preparation of a medicament for the prevention or treatment of myelomas. wherein the antibody is coupled to a bioactive molecule selected from:
  • toxins selected from ricin, abrin, diphtheria toxin,
  • nucleic acids chosen from antisense ARs,
  • cytotoxic agents chosen from mitomycin C, methotrexate,
  • biotin, avidin or streptavidin are biotin, avidin or streptavidin.
  • the anti-CD71 antibody described above is intended for the prevention or treatment of a myeloma selected from stage I myeloma (low mass tumor), stage II myeloma (tumor mass). intermediate), or stage III myeloma (high tumor mass).
  • myeloma The classification of myeloma is based on the criteria established by Dr. Durie and Dr. Salmon in 1986. It is a classification according to the quantity of paraprotein produced, the severity of bone lesion, the blood calcium level and the insufficient marrow production (hemoglobin).
  • Stage I corresponds to a low tumor mass myeloma, in which all the following criteria are present:
  • Stage II does not meet the definition of Stage I or Stage III.
  • Stage III is a myeloma of high tumor mass, which has at least one of the following criteria:
  • Another aspect of the present invention is to provide an anti-CD71 antibody for the treatment of myelomas.
  • the invention relates to an anti-CD71 monoclonal antibody or a fragment of a said antibody capable of binding to the CD71 antigen, said antibody or fragment of said antibody comprising
  • variable region of a heavy chain comprising or consisting of the amino acid sequence SEQ ID NO: 1, and
  • variable region of a light chain comprising or consisting of an amino acid sequence chosen from SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 or SEQ ID NO: 17,
  • the invention relates to a monoclonal antibody
  • variable region of a heavy chain comprising or consisting of an amino acid sequence encoded by a nucleic sequence SEQ ID NO: 3, and
  • variable region of a light chain comprising or consisting of an amino acid sequence encoded by a nucleic sequence chosen from SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 12,
  • the invention relates to an anti-CD71 antibody for the treatment of myelomas, wherein the constant regions of said light and heavy chains are constant regions of a human antibody.
  • the invention relates to an anti-CD71 antibody, wherein: at least the constant region of a light chain comprises or consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 14,
  • At least the constant region of a heavy chain comprises or consists of the amino acid sequence chosen from SEQ ID NO: 5 or SEQ ID NO: 9,
  • the invention relates to an anti-CD71 antibody, wherein:
  • At least the constant region of a light chain comprises or consists of the amino acid sequence encoded by the nucleic acid sequence SEQ ID NO: 8,
  • At least the constant region of a heavy chain comprises or consists of the amino acid sequence encoded by a nucleic sequence chosen from SEQ ID NO: 7 or SEQ ID NO: 10,
  • the invention relates to an anti-CD71 antibody, wherein:
  • variable region of each of its light chains comprises or consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 2, and
  • variable region of each of its heavy chains comprises or consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 1, and
  • the constant region of each of its light chains comprises or consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 14, and
  • the constant region of each of its heavy chains comprises or consists of the amino acid sequence chosen from SEQ ID NO: 5 or SEQ ID NO: 9,
  • the antibody used for the treatment of myeloma is produced from a hybridoma BA120g, deposited on June 14, 2005 at CNCM under number CNCM 1-3449.
  • the anti-CD71 antibody described above for the treatment of myelomas may be associated with pharmaceutically acceptable containers or vehicles.
  • an anti-CD71 antibody described above for the treatment of myeloma can be administered intravenously, for example by injection or infusion.
  • an anti-CD71 antibody described above for the treatment of myelomas is coupled to a bioactive molecule chosen from:
  • toxins selected from ricin, abrin, diphtheria toxin,
  • nucleic acids chosen from antisense ARs,
  • cytotoxic agents chosen from mitomycin C, methotrexate, adriamycin,
  • Another aspect of the invention relates to a product containing:
  • variable region of a heavy chain comprising or consisting of the amino acid sequence SEQ ID NO: 1, and
  • variable region of a light chain comprising or consisting of an amino acid sequence chosen from SEQ ID NO: 2 and SEQ ID NO: 11,
  • an anticancer agent selected from Velcade ®, ® Melphalan, Prednisone ® as combination product for simultaneous, separate or spread out over time in tumor therapy.
  • the invention relates to a product containing:
  • variable region of a heavy chain comprising or consisting of the amino acid sequence SEQ ID NO: 1, and
  • variable region of a light chain comprising or consisting of an amino acid sequence chosen from SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 or SEQ ID NO: 17, and
  • an anticancer agent chosen from Velcade, Melphalan, Prednisone, as a combination product, for simultaneous, separate or spread over time use in tumor therapy.
  • the invention relates to a product containing: at least one anti-CD71 monoclonal antibody or a fragment of the above-mentioned antibody capable of binding to the CD71 antigen, said antibody or fragment of said antibody comprising:
  • variable region of a heavy chain comprising or consisting of the amino acid sequence SEQ ID NO: 1, and
  • variable region of a light chain comprising or consisting of an amino acid sequence chosen from SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 or SEQ ID NO: 17, and
  • At least one constant region of a light chain comprises or consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 14,
  • At least the constant region of a heavy chain comprises or consists of the amino acid sequence chosen from SEQ ID NO: 5 or SEQ ID NO: 9,
  • an anticancer agent selected from Velcade ®, ® Melphalan, Prednisone ®,
  • the invention relates to a product containing:
  • variable region of each of its light chains comprises or consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 2, and
  • variable region of each of its heavy chains comprises or consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 1, and
  • the constant region of each of its light chains comprises or consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 14, and
  • the constant region of each of its heavy chains comprises or consists of the amino acid sequence chosen from SEQ ID NO: 5 or SEQ ID NO: 9,
  • an anticancer agent selected from Velcade ®, ® Melphalan, Prednisone ®, as a combination product, for simultaneous, separate or spread over time use in tumor therapy.
  • the invention relates to a product containing:
  • an anticancer agent selected from Velcade ®, ® Melphalan, Prednisone ®,
  • the invention relates to a product containing:
  • the invention relates to a product containing:
  • variable region of a heavy chain comprising or consisting of the amino acid sequence SEQ ID NO: 1, and
  • variable region of a light chain comprising or consisting of an amino acid sequence chosen from SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 or SEQ ID NO: 17
  • an anticancer agent selected from Velcade ®, ® Melphalan, Prednisone ®,
  • the invention relates to a product containing:
  • At least one anti-CD71 monoclonal antibody or a fragment of the above-mentioned antibody capable of binding to the CD71 antigen said antibody or fragment of said antibody comprising: at least the variable region of a heavy chain comprising or consisting of the amino acid sequence SEQ ID NO: 1, and
  • variable region of a light chain comprising or consisting of an amino acid sequence chosen from SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 or SEQ ID NO: 17, and
  • an anticancer agent selected from Velcade ®, ® Melphalan, Prednisone ®, and
  • the invention relates to a product containing:
  • variable region of a heavy chain comprising or consisting of the amino acid sequence SEQ ID NO: 1, and
  • variable region of a light chain comprising or consisting of an amino acid sequence chosen from SEQ ID NO: 2 and SEQ ID NO: 11, and
  • At least one constant region of a light chain comprises or consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 6 or SEQ ID NO: 14,
  • At least the constant region of a heavy chain comprises or consists of the amino acid sequence chosen from SEQ ID NO: 5 or SEQ ID NO: 9,
  • an anticancer agent selected from Velcade ®, ® Melphalan, Prednisone ®,
  • the invention relates to a product containing:
  • the variable region of each of its light chains comprises or consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 2
  • variable region of each of its heavy chains comprises or consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 1, and
  • the constant region of each of its light chains comprises or consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 14, and
  • the constant region of each of its heavy chains comprises or consists of the amino acid sequence chosen from SEQ ID NO: 5 or SEQ ID NO: 9,
  • an anticancer agent selected from Velcade ®, ® Melphalan, Prednisone ®, and
  • the invention relates to a product containing:
  • an anticancer agent selected from Velcade ®, ® Melphalan, Prednisone ®,
  • Another aspect of the invention aims to provide a method for in vitro diagnosis of myeloma.
  • This method is based on the unexpected finding made by the inventors that CD71 is often overexpressed on myeloma cells. Therefore, overexpression of CD71 on plasma cells may mean that these cells become malignant.
  • This method includes:
  • variable region of a heavy chain comprising or consisting of the amino acid sequence SEQ ID NO: 1
  • variable region of a light chain comprising or consisting of an amino acid sequence chosen from SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 11 or SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 or SEQ ID NO: 17
  • the anti-CD71 antibody used in this method is an antibody in which:
  • variable region of each of its light chains comprises or consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 2, and
  • variable region of each of its heavy chains comprises or consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 1, and
  • the constant region of each of its light chains comprises or consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 14, and
  • the constant region of each of its heavy chains comprises or consists of the amino acid sequence chosen from SEQ ID NO: 5 or SEQ ID NO: 9.
  • the anti-CD71 antibody used in this method is produced from a hybridoma BA120g, deposited on June 14, 2005 at CNCM under number CNCM 1-3449.
  • the anti-CD71 antibody used in this method can be used directly or coupled with a marker.
  • this antibody When this antibody is used directly, the presence of this antibody can be detected by another detection antibody, the latter being linked to a marker, such as a radioactive agent, or an enzyme capable of catalyzing a substrate emitting fluorescence radiation. or capable of emitting radiation at a wavelength different from that of absorption, or any other marker making it possible to detect the binding of the detection antibody to the anti-CD71 antibody.
  • a marker such as a radioactive agent, or an enzyme capable of catalyzing a substrate emitting fluorescence radiation. or capable of emitting radiation at a wavelength different from that of absorption, or any other marker making it possible to detect the binding of the detection antibody to the anti-CD71 antibody.
  • the anti-CD71 antibody used in this method may be coupled beforehand with a marker for detecting the binding of this antibody to the plasma cells.
  • This marker may be a radioactive agent, or an enzyme capable of catalyzing a substrate emitting fluorescence radiation or capable of emitting radiation at a wavelength different from that of absorption, or any other marker for detecting fixation.
  • anti-CD71 antibody on the plasma cells may be coupled beforehand with a marker for detecting the binding of this antibody to the plasma cells.
  • This marker may be a radioactive agent, or an enzyme capable of catalyzing a substrate emitting fluorescence radiation or capable of emitting radiation at a wavelength different from that of absorption, or any other marker for detecting fixation.
  • anti-CD71 antibody on the plasma cells may be coupled beforehand with a marker for detecting the binding of this antibody to the plasma cells.
  • This marker may be a radioactive agent, or an enzyme capable of catalyzing a substrate emitting fluorescence radiation or capable of emitting radiation at a wavelength different from that of ab
  • Figure 1 shows a calibration curve for measuring the ability of an antibody to bind to cells.
  • the x-axis represents the logarithm of MFI (mean fluorescence intensity) of coupled secondary antibody.
  • the y-axis represents the logarithm of the ability of an antibody to bind to cells.
  • the crosses represent the data actually obtained by the measurement.
  • Figure 2 shows the measurement of the survival of mice tested in 5 groups.
  • Group 1 black square
  • Group 2 black spot
  • Group 3 receives an irrelevant antibody at 0.24 mg / kg / injection.
  • Group 4 reverse triangle
  • Group 5 receives an anti-CD71 antibody at 0.24 mg / kg / injection.
  • the x-axis represents the number of days after injection of tumor cells.
  • the y-axis represents the percentage of living mice.
  • Figure 3 shows the measurement of the survival of mice tested in 5 groups.
  • Group 1 square in black receives twice a week an injection of 1.2 mg of an irrelevant antibody.
  • Group 2 black spot receives twice a week an injection of 1.2 mg of the anti-CD71 antibody.
  • Group 3 (triangle) receives twice a week an injection of 1.2 mg of the anti-CD71 antibody and an injection of 0.5 mg / kg of VELCADE®.
  • Group 4 (reverse triangle) receives twice a week an injection of 0.5 mg / kg of VELCADE®.
  • Group 5 empty square receives no treatment.
  • the x-axis represents the number of days after injection of tumor cells.
  • the y-axis represents the percentage of living mice.
  • the detection of the CD71 antigen by the anti-CD71 antibody was measured on the ARH-77 cell line, a myeloma line.
  • This cell line is cultured in suspension at 37 ° C. in a humidified atmosphere (5% of C0 2 , 95% humidity).
  • the culture medium is RPMI (Ref # BE12-702F, Lonza, Verviers, Belgium) containing 2mM L-glutamine and supplemented with 10% fetal bovine serum (Ref # DE14-801E, Lonza).
  • MycoAlert® Mycoplasma Detection Kit (Ref # LT07-318, Lonza) according to the manufacturer's instructions. This kit allows a selective biochemical test that highlights the enzymatic activity of mycoplasma. The cell culture supernatant is recovered and tested by MycoAlert® kit. The test is repeated twice and the result is compared with a negative control and a positive control (Mycoalert® Assay Control Set, Ref # LO07-518, Lonza). Viable mycoplasmas are lysed and released enzymes react with the MycoAlert® kit substrate, catalyzing the conversion of ADP to ATP. Measuring the level of ATP before and after the addition of MycoAlert® substrate provides a ratio indicating the presence or absence of mycoplasma.
  • PCA-96 Personal Cell Analysis-96 (PCA-96) Systems). The data obtained is analyzed by FCS Express software (De Novo Software).
  • the negative control antibody is IgG1 (MAT002).
  • the positive control antibody is an anti-CD71 antibody from MAT (MAT201).
  • the antibody to be tested is the anti-CD71 antibody produced by the hybridoma BA120g, diluted to 1 ⁇ g / ml, 1 ⁇ g / ml, 0 ⁇ g / ml, 0 ⁇ g / ml, 0, 0 ⁇ g / ml, 0.005 ⁇ g / ml
  • the secondary antibody coupled is an anti-mouse IgG PE antibody
  • the dilution and washing buffer (PBS (phosphate buffered saline) 2% FCS (fetal calf serum)) is prepared from 490ml of PBS (wo Ca2 + / Mg2 +) and 10ml of defrosted SVF, PBS (Cambrex Biowhittaker BE 17-516F) is stored at room temperature until use, and SVF (Cambrex Ref5S
  • the concentration of control antibody is 10 ⁇ g / ml.
  • IgG1 controls 10 ⁇ g / ml 96.3 3.7 4.9
  • Anti-CD71 0.25 g / ml 25.2 74.8 17.6
  • Anti-CD71 0.05 ⁇ / ⁇ 1 34.3 65.7 12.7
  • Anti-CD71 0.0 ⁇ g / ml 59.9 40.1 6.6
  • the anti-CD71 antibody can bind specifically to the cell membrane of ARH-77 cells relative to the IgG1 control antibody.
  • concentration of anti-CD71 antibody is greater than 1 g / ml, this antibody can recognize about 90% of ARH-77 cells in the sample.
  • the number of CD71 antigens on the surface of ARH-77 cells is determined by indirect immunofluorescence using QIFIKIT kit (Dakocytomation, Trappes, France) according to the manufacturer's instructions. The result of immunofluorescence is detected by flow cytometry.
  • the ARH-77 cells are first incubated respectively with the purified anti-CD71 antibody from the BA120g hybridoma and an irrelevant antibody (anti-mouse IgG1) as a negative control.
  • the white particles provided in the kit are used to establish the background noise.
  • Four reference particle populations, having a different number of control antibodies, are used to establish the calibration curve.
  • the antibodies binding to the cells are then revealed by a second antibody coupled with a fluorescent agent (anti-mouse IgG-FITC).
  • the mean fluorescence intensity (MFI) measured for the four reference particle populations makes it possible to establish a calibration curve (FIG. 1). This curve varies according to the device used. In the present experiment, the formula corresponding to this curve is as follows:
  • - A is equal to 0.013248
  • X is MFI (mean fluorescence intensity) derived from the flow cytometry reading
  • Y is the total capacity of an antibody to bind to a cell population.
  • SABC anti-CD71 antibodies to bind specifically to ARH-77 cells
  • Table 2 below shows the result of determining the number of CD71s on ARH-77.
  • mice with severe combined immunodeficiency (SCID), aged 6 to 7 weeks, weighing 16 to 20 g are obtained from Charles River (France).
  • SCID severe combined immunodeficiency
  • the mice used in the experiments are first observed for 7 days in an animal care unit free of specific pathogenic organisms (EOPS). This animal care unit is authorized by the French Ministry of Agriculture and the French Ministry of Research (Agreement No.A21231011). Animal experiments are implemented according to the European Animal Testing Directive and the UK Animal Welfare Guidelines for Experimental Neoplasia.
  • EOPS animal care unit free of specific pathogenic organisms
  • the tumor-expressing ARH-77 cells on the cell surface are suspended in RPMI 1640 medium (Ref # BE12-702F, Lonza, Verviers, Belgium) containing 2mM L-glutamine and supplemented with 10% fetal bovine serum (Ref. # DE14-801E, Lonza).
  • Severe combined immunodeficiency (SCID) female mice were first injected intravenously with a volume of 0.2 ml of RPMI 1640 medium containing 5 million suspended ARH-77 tumor cells. The injection was carried out between 24 to 72 hours after exposure of the mice tested in this experiment to radiation gamma (1.8 Gy, Co, BioMEP sari, France).
  • the day of injection of the tumor cells is considered as day 0.
  • the treatment starts on day 5.
  • mice are then separated into 5 groups:
  • group 1 (mice not receiving any treatment), a mouse is found dead at day 28, the 7 others are sacrificed between day 25 and day 32 after the injection of the ARH-77 cells, because of the presence of pathological signs.
  • mice In group 2 (mice receiving irrelevant antibody at 0.048 mg / kg / injection), three mice died on day 35 and were sacrificed between day 29 and day 96 after injection of ARH-77 cells and were sacrificed and finally 2 mice were sacrificed at the end of study at day 106.
  • mice receiving irrelevant antibody at 0.24 mg / kg / injection one mouse died at day 28, 6 are sacrificed between day 29 and 32 after injection of the cells ARH-77 and were sacrificed and finally 1 mouse was sacrificed at the end of study at day 106.
  • mice that received the anti-CD71 antibody at 0.048 mg / kg / injection
  • one mouse was found dead at day 102, two were sacrificed at day 57 and 67 because they had pathological signs and the other five survived the study and are sacrificed on day 106.
  • mice In group 5 (mice given the anti-CD71 antibody at 0.24 mg / kg / injection) a mouse is sacrificed at day 43 because of the presence of pathological signs and the 7 others survive the study and are sacrificed to day 106. During the experiments, the animals will be killed by cervical dislocation under isoflurane anesthesia if any of the following signs present:
  • An autopsy by microscopy is carried out on all the animals sacrificed or dead during these experiments.
  • the autopsy focuses on the heart, lungs, liver, spleen, kidney, and intestine.
  • Isoflurane forene (Minerve, Bondoufle, France) is used to anaesthetize mice before intravenous tumor cell injections and during sacrifice of animals by cervical dislocation. Viability, clinical signs and behaviors are noted daily during the experiments. The body weight of each mouse is measured and recorded twice a week.
  • the day of injection of tumor cells is considered as day 0 (D0).
  • the treatments with the anti-CD71 antibody and with the irrelevant antibody begin on day J1.
  • the Velcade® treatment begins on day 4 and is therefore performed on Days D4, D7, D11, D14, D18, D25, D28 and D32.
  • mice The 40 mice are separated into 5 groups. Table 4 below summarizes the treatment schedule for each group.
  • Velcade® injection volume (10ml / kg) is adjusted to most individuals.
  • mice during the experiment are sacrificed after 144 days after injection of tumor cells.
  • An autopsy is performed on all mice found dead or sacrificed during the experiment because of the presence of one of the pathological signs specified in the above section.
  • mice In group 1 (mice that received irrelevant antibody), a mouse died at 2g ith our j ⁇ ⁇ sister [s exhibited signs of disease between 24 th day and 56 th day after injection of ARH-77 cells and were sacrificed and finally 2 mice were sacrificed at study at J144.
  • mice In group 2 (Mice that received anti-CD71 antibody), a mouse is found dead in the 42 th day, one is sacrificed 98 th day as it showed signs of disease and the other 6 have survived to the study and are sacrificed to J144.
  • mice In group 3 (mice given anti-CD71 antibody and Velcade®, all mice survive the study and are sacrificed on J144.
  • Group 4 (mice only Velcade®), one mouse died at the 27 th day, the remaining 7 are sacrificed because of the presence of signs of disease between day 24 and day 31.
  • the autopsy revealed different signs (tumors on the bladder, ovary, and kidney, small spleen or inflammation on right axillary lymph nodes, and on left inguinal ganglia).
  • mice In group 5 (untreated mice), the mice are sacrificed between day 24 and day 45 due to the presence of pathological signs.
  • Table 5 below compares the average survival of the mice in the 5 dead or sacrificed groups before the end of the experiment because of the presence of the pathological signs specified above.

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Abstract

La présente invention concerne l'utilisation d'un anticorps monoclonal anti-CD71 ou d'un fragment d'un susdit anticorps capable de se lier à l'antigène CD71 pour la préparation d'un médicament destiné à la prévention ou au traitement de myélomes.

Description

Utilisation d'anticorps anti-CD71 pour la préparation d'un médicament
La présente invention concerne l'utilisation d'anticorps anti-CD71 ou des fragments d'anticorps anti-CD71 pour la préparation d'un médicament destiné à la prévention ou au traitement de cancers.
Le CD71 est une glycoprotéine de type II qui existe sous forme d'un homodimère de 180 kDa. Le CD71 est un récepteur de la transferrine, une protéine responsable du transport du fer de l'intestin vers les réserves hépatiques et vers les réticulocytes.
La ferrotransferrine, transferrine associée à Fe3+, est liée au CD71 à pH neutre, et est internalisée au compartiment endosomal à environ pH5. Les ions Fe3+ sont ensuite transportés vers le cytoplasme par un mécanisme inconnu. Après la libération des ions Fe3+, l'apotransferrine, transferrine sans Fe3+, reste fixée au CD71 à pH5 et retourne vers la membrane cellulaire à environ pH7,4. Aux conditions de pH neutre, l'apotransferrine n'a plus d'affinité pour le CD71. La dissociation du complexe formé par l'apotransferrine et le CD71 permet de commencer un autre cycle de transport.
Le CD71 joue un rôle important dans la prolifération de cellules, car il contrôle la consommation du fer, un processus essentiel dans plusieurs voies métaboliques. Ce contrôle est mis en œuvre par la liaison et l'endocytose de la transferrine par CD71. L'expression de CD71 est régulée post-transcriptionnellement par la stabilité de l'ARN de CD71, et le niveau intracellulaire du fer. A la présence d'un signal de la déficience en fer, IRP-1 et IRP-2 (iron response protein) se fixent sur des séquences spécifiques, désignées IREs (iron response éléments), situées dans la région 5'UTR d'ARN du CD71. Cette fixation stabilise l'ARN de CD71. En revanche, lorsque le niveau du fer est suffisamment haut, l'affinité du IRP-1 et IRP-2 pour les IREs est diminuée et l'ARN de CD71 devient plus sensible à la dégradation par les RNases.
Le myélome, connu également sous le nom de myélome multiple, ou maladie de Kahler, est un cancer des plasmocytes. Ceux-ci sont produits dans la rate et migrent dans la moelle osseuse. Les plasmocytes sont des lymphocytes B spécialisés qui produisent normalement les anticorps. Les plasmocytes normaux sont caractérisés par une incapacité de prolifération. Néanmoins, lorsque ces cellules deviennent malignes, elles acquièrent une grande capacité de prolifération et sécrètent tous un même type d'immunoglobuline. Dans la plupart des cas, cette immunoglobuline est IgG ou IgA, mais elle peut être aussi IgD, IgE ou IgM. Par conséquent, le sang ou les urines des patients atteints d'un myélome présentent souvent une très grande quantité d'un seul type d'anticorps appelé paraprotéine. Lorsqu'un échantillon du sang ou d'urine d'un tel patient est analysé par électrophorèse, ces paraprotéines forment souvent un pic monoclonal. Parfois, au lieu de la sécrétion d'une immunoglobuline complète, les plasmocytes tumoraux sécrètent une partie incomplète de Γ immunoglobuline dite « chaînes légères Kappa ou Lambda ». Dans ce dernier cas, il y a peu ou pas de pic monoclonal dans le sang, par contre il existe une hypogammaglobulémie sévère et une protéinurie dans les urines, faite de chaîne Kappa ou Lambda, nommée « BENCE JONES ».
En France, l'incidence de cette maladie est d'environ 4000 nouveaux cas par an. La survie moyenne est de 5 ans, mais elle dépend du stade de la maladie.
Les myélomes peuvent être divisés en 3 stades selon la classification de Durie et Salmon établie en 1986. Cette classification est basée sur la quantité de paraprotéine produite, la gravité de la lésion osseuse, le taux de calcium sanguin et l'insuffisance de production médullaire (hémoglobine). Le stade I correspond à un myélome de faible masse tumorale, alors que le stade III est un myélome de forte masse tumorale. Une éventuelle atteinte de la fonction rénale ajoute une sous classification, dans laquelle le stade A ne présente pas d'atteinte rénale et le stade B est caractérisé par une insuffisance rénale.
Dans les dernières années, les nouveaux systèmes de classifications basés sur la détection de marqueurs génétiques permettent de préciser davantage le pronostic sur la survie d'un patient. Par exemple, la délétion du chromosome 13q (Fonseca et al, Blood 2003 ; 101 : 4569-4575) ou du locus 17pl3 (locus pour un gène suppresseur de tumeurs) (Avet-Loiseau et al, Blood 2007 ; 109 : 3489-3495) dans les plasmocytes peuvent annoncer un très mauvais pronostic.
Le traitement classique du myélome repose principalement sur un traitement par chimiothérapie, qui a pour objectif de contrôler la prolifération des cellules tumorales. Actuellement, des agents chimiothérapeutique utilisés dans le traitement de myélomes sont des agents alkylants, comme le melphalan ou le cyclophosphamide, combinés souvent à des médicaments à la cortisone, tels que le prédnisone, ou des inhibiteurs des protéasomes, tels que le bortézomib (Velcade®), ou bien des agents anti-angiogéniques, tels que le thalidomide. Bien que ces médicaments aient apporté une certaine prolongation de survie des patients, les effets secondaires entraînés par ceux-ci sont aussi considérables. De plus, ces médicaments peuvent rarement apporter une guérison durable.
Une autre approche de traitement de myélomes fait appel aux techniques d' autogreffe de cellules souches. Ces techniques consistent en l'utilisation des cellules souches saines provenant du sang périphérique ou de la moelle osseuse du sujet lui-même. Les cellules souches ainsi récupérées peuvent être congelées jusqu'au moment d'utilisation et ensuite décongelées et réinjectées ou retransplantées dans le corps du patient par voie intraveineuse. Environ deux semaines après l'injection, les cellules souches peuvent commencer à produire de nouvelles cellules sanguines et à régénérer la moelle osseuse. Au cours de ces 10 dernières années, l'autogreffe de cellules souches est devenue un traitement privilégié. Car, si les patients sont aptes à supporter ce traitement, cette méthode permet de donner une meilleure survie de ces patients. Cependant, étant donné qu'une autogreffe de cellules souches est souvent combinée avec une chimiothérapie avant la greffe, à haute dose, cette méthode peut entraîner des effets secondaires très graves, tels qu'une forte diminution des globules blancs.
Par conséquent, il est nécessaire de développer de nouveaux médicaments ou nouvelle approches afin d'augmenter la survie des patients atteints des myélomes.
Un premier aspect de l'invention a pour objectif de proposer un nouveau médicament destiné à la prévention ou au traitement de myélomes.
Un autre aspect de l'invention a pour but de fournir une méthode diagnostic in vitro de myélomes.
La présente invention concerne l'utilisation d'un anticorps monoclonal anti-CD71 ou d'un fragment d'un susdit anticorps capable de se lier à l'antigène CD71, ledit anticorps ou ledit fragment du susdit anticorps comprenant :
- au moins la région variable d'une chaîne lourde comprenant ou constituée de la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 1, et
- au moins la région variable d'une chaîne légère comprenant ou constituée d'une séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID NO : 2, SEQ ID NO : 11, SEQ ID NO : 13,
SEQ ID NO : 15, SEQ ID NO : 16 ou SEQ ID NO : 17,
pour la préparation d'un médicament destiné à la prévention ou au traitement de myélomes.
La présente invention repose sur une constatation inattendue faite par les Inventeurs, lors d'une étude sur le niveau d'expression du CD71 sur des lignées cellulaires tumorales de myélomes. En effet, le CD71 est surexprimé sur les plasmocytes qui deviennent malins. L'invention montre à la fois in vitro et in vivo que le blocage du CD71 par un anticorps anti- CD71 permet d'inhiber le développement de myélomes et de prolonger la survie des souris portant un myélome.
Plusieurs schémas de mécanismes peuvent être impliqués dans l'inhibition de développement de myélomes par un anticorps anti-CD71. Le premier mécanisme est l'inhibition de prolifération de cellules myélomeuses par blocage de la fourniture du fer aux cellules tumorales par intermédiaire de l'anticorps anti- CD71.
Un anticorps anti-CD71 peut également déclencher ou activer une réponse immunitaire, telle que la production des cytokines, ou l'induction d'une apoptose dans les cellules tumorales, cela permettant de détruire les cellules cancéreuses.
Les cellules myélomeuses peuvent aussi être éliminées spécifiquement par des cellules effectrices par le processus ADCC (antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity) ou CDC (complement-dependent cytotoxicity) .
Dans l'invention, le terme « anticorps » se réfère à une immunoglobuline, protéine multimérique constituée de 4 chaînes participant à la réponse immunitaire acquise.
Les immunoglobulines sont bien connues de l'homme de métier et sont constituées d'un assemblage de deux dimères constitués chacun d'une chaîne lourde et d'une chaîne légère. Le complexe multimérique est assemblé par la liaison d'une chaîne légère et d'une chaîne lourde par un pont disulfure entre deux cystéines, les deux chaînes lourdes étant elle-même également reliées entre elles par deux ponts disulfure.
Chacune des chaînes lourdes et des chaînes légères est constituée d'une région constante et d'une région variable. L'assemblage des chaînes qui composent un anticorps permet de définir une scture tridimensionnelle caractéristique en Y, où
- la base du Y correspond à la région constante Fc qui est reconnue par le complément et les récepteurs Fc, et
- l'extrémité des bras du Y correspond à l'assemblage respectif des régions variables de la chaîne légère et variable de la chaîne lourde.
Plus précisément, chaque chaîne légère est constituée d'une région variable (VL) et d'une région constante (CL). Chaque chaîne lourde est constituée d'une région variable (VH) et d'une région constante constituée de trois domaines constants CH1, CH2 et CH3. L'association des deux domaines CH2 et CH3 compose le domaine Fc.
La région variable de la chaîne légère est constituée de trois domaines déterminant la reconnaissance de l'antigène (CDR) entourées de quatre domaines charpentes (FR). Le repliement tridimensionnel de la région variable est tel que les 3 CDR sont exposés du même coté de la protéine et permettent la formation d'une structure spécifique reconnaissant un antigène déterminé. L'expression « la capacité de se lier à l'antigène CD71 » signifie la capacité d'un anticorps de reconnaître et de se fixer de manière spécifique sur un antigène. Cette spécificité est conférée par la région variable de la chaîne légère ou de la chaîne lourde.
La capacité d'un anticorps de reconnaître et de se fixer de manière spécifique sur un antigène peut être testée par les techniques telles que l'ELISA, l'immunof uorescence indirecte, ou le western-blot.
« Un fragment d'un susdit anticorps capable de se lier à l'antigène CD71 » peut être un fragment Fab, F(ab)'2, scFV, dimère de ScFv ou encore un diabody, un triabody ou un tetrabody
Un fragment Fab est constitué d'une chaîne légère comprenant une région constante d'une chaîne légère d'une immunoglobuline humaine et d'une région variable d'une immunoglobuline murine, et d'une chaîne lourde comprenant une région constante d'une chaîne lourde d'une immunoglobuline humaine et d'une région variable d'une immunoglobuline murine.
Un fragment F(ab)'2 est constitué de l'association par un pont disulfure de deux Fab décrits ci-dessus.
Un fragment scFv est constitué de l'association d'une fragment variable de chaîne lourde et d'un fragment variable de chaîne légère d'une immunoglobuline.
Un dimère de ScFv est constitué de deux fragments ScFv liés covalemment, chaque ScFv étant eux même constitués d'un fragment variable d'une chaîne lourde et d'un fragment variable d'une chaîne légère.
Un diabody est constitué de l'association non covalente de deux polypeptides contenant eux-mêmes deux chaînes variables de même nature (VL-VL et VH-VH) qui peuvent être de même spécificité ou de spécificité différentes.
De la même manière, un triabody ou un tétrabody peut être constitué.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation d'un anticorps monoclonal anti-CD71 ou d'un fragment d'un susdit anticorps capable de se lier à l'antigène CD71, ledit anticorps ou ledit fragment du susdit anticorps comprenant :
- au moins la région variable d'une chaîne lourde comprenant ou constituée d'une séquence d'acides aminés codée par une séquence nucléique SEQ ID NO : 3, et
- au moins la région variable d'une chaîne légère comprenant ou constituée d'une séquence d'acides aminés codée par une séquence nucléique choisie parmi SEQ ID NO : 4 et SEQ ID NO : 12,
pour la préparation d'un médicament destiné à la prévention ou au traitement de myélomes. Dans la présente invention, la séquence nucléique SEQ ID NO : 3 code la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 1. Les séquences nucléiques SEQ ID NO : 4 et SEQ ID NO : 12 codant respectivement les séquences d'acides aminés SEQ ID NO : 2 et SEQ ID NO : 11. Avantageusement, l'invention concerne l'utilisation d'un anticorps anti-CD71 tel que défini ci-dessus, où les régions constantes desdites chaînes légères et chaînes lourdes sont des régions constantes d'un anticorps humain.
Ledit anticorps humain peut être un anticorps de type IgG, IgA, IgD, IgE, IgM.
Ce mode de réalisation de l'invention permet de diminuer l'immunogénicité de l'anticorps chez l'homme et par là même d'améliorer son efficacité lors de son administration thérapeutique ou prophylactique chez l'homme.
La région constante de chacune des chaînes lourdes de l'anticorps selon l'invention est notamment la région constante de IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgD, IgE, IgAl ou IgA2 humain.
De manière avantageuse, la région constante de chacune des chaînes lourdes de l'anticorps selon l'invention est la région constante d'une immunoglobuline humaine de type Gl, car un tel anticorps montre une capacité à engendrer une activité ADCC chez le plus grand nombre d'individus (humains).
Avantageusement, la région constante de chacune des chaînes légères de l'anticorps selon l'invention est la région constante de la chaîne κ (kappa) ou λ (lambda).
Dans un mode de réalisation particulier, l'invention concerne l'utilisation d'un anticorps anti-CD71 défini précédemment, dans lequel :
- au moins la région constante d'une chaîne légère comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID NO : 6 et SEQ ID NO : 14
- au moins la région constante d'une chaîne lourde comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID NO : 5 ou SEQ ID NO : 9.
Dans un autre mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation d'un anticorps anti- CD71 tel que défini ci-dessus, dans lequel :
- au moins la région constante d'une chaîne légère comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés codée par la séquence nucléique SEQ ID NO : 8,
- au moins la région constante d'une chaîne lourde comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés codée par une séquence nucléique choisie parmi SEQ ID NO : 7 ou SEQ ID NO : 10. Dans la présente invention, la séquence nucléique SEQ ID NO : 8 code la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 6. Les séquences nucléiques SEQ ID NO : 7 et SEQ ID NO : 10 codent respectivement les séquences d'acides aminés SEQ ID NO : 5 et SEQ ID NO : 9. Dans un mode de réalisation particulier, l'anticorps anti-CD71 pour la mise en œuvre de l'invention peut être un anticorps où :
- la région variable de chacune de ses chaînes légères comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 2, et
- la région variable de chacune de ses chaînes lourdes comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 1, et
- la région constante de chacune de ses chaînes légères comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 14, et
- la région constante de chacune de ses chaînes lourde comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID NO : 5 ou SEQ ID NO : 9.
Avantageusement, l'anticorps anti-CD71 pour la mise en œuvre de l'invention est produit par l'hybridome BA120g, déposé le 14 juin 2005 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-3449. Un anticorps monoclonal anti-CD71 pour la mise en œuvre de la présente invention peut être produit par des méthodes conventionnelles connues de l'homme du métier, par exemple, la construction d'un vecteur d'ADN qui exprime :
- la chaîne lourde, ou
- un fragment de la chaîne lourde, ou
- la chaîne légère, ou
- un fragment de la chaîne légère, ou
- la chaîne lourde et la chaîne légère, ou
- un fragment de la chaîne lourde et un fragment de la chaîne légère.
Ces vecteurs sont par exemple les plasmides, les cosmides, les chromosomes artificiels de levures, les chromosomes artificiels de bactéries et les chromosomes artificiels dérivés du bactériophage PI, les vecteurs dérivés de virus. Dans un mode de réalisation de l'invention, un fragment d'un anticorps anti-CD71 mis en œuvre dans l'utilisation décrite ci-dessus peut être Fab, F(ab)'2, scFV, dimère de ScFv ou encore un diabody, un triabody ou un tétrabody.
Ces fragments peuvent être des fragments recombinants, synthétiques, ou produits par clivage enzymatique selon les méthodes connues de l'homme du métier. Ces fragments peuvent aussi être produits par introduction d'un ou plusieurs codons stop dans le gène codant d'un anticorps anti-CD71. Par exemple, lorsqu'un codon stop est introduit après le domaine CHl du gène codant la chaîne lourde, la chaîne ainsi produite est une chaîne lourde apte à former un fragment Fab avec une chaîne légère. En revanche, si un codon stop est ajouté après la région hinge située en aval du domaine CHl d'une chaîne lourde, cette chaîne tronquée pourra constituer un fragment F(ab)'2 avec une chaîne légère.
Dans un autre mode de réalisation particulier de l'invention, l'anticorps anti-CD71 mis en œuvre dans l'utilisation décrite ci-dessus est couplé à une molécule bioactive.
Cette molécule bioactive peut être un radio-isotope, par exemple un émetteur des rayonnements gamme, un émetteur des rayonnements beta ou un émetteur des rayonnements alpha.
Avantageusement, un radio-isotope couplé à l'anticorps anti-CD71 ou un fragment de l'anticorps anti-CD71 est un radio-isotope apte à être utilisé dans un but thérapeutique ou diagnostique, tel que Actinium 225, Actinium 227, Arsenic 72, Asiate 211 (TEP (Tomographie par émission de positons)), Bismuth 212 ou 213, Brome 75 (TEP), Brome 77, Cobalt 55 (TEP), Cuivre 61 (TEP), Cuivre 64 (TEP et traitement), Cuivre 67(TEP), Iode 123 (TEP), Iode 131, Lutétium 177(TEP et traitement), Osmium 194, Radon 223, Rhénium 186, Ruthénium 105, Terbium 149, Thallium 228 et 229, Yttrium 90 et 91.
Ces radio-isotopes peuvent être directement liés à l'anticorps ou par l'intermédiaire d'un chélateur, tel que DTA (9,10-dithioanthracene), ou DTPA (diéthylène triamine penta acide).
Une molécule bioactive peut être aussi un métal non-radioactif.
Ladite molécule bioactive peut être aussi :
- une toxine, par exemple la ricine, l'abrine, la toxine diphtérique, la protéine antivirale de Phytolacca, ou un fragment fonctionnel d'une toxine ;
- un acide nucléique tel qu'un ARN anti-sens, un siARN, ou un miARN ;
- un agent cyto toxique, par exemple la mitomycine C, le méthotrexate, l'adriamycine, la doxorubicine, la daunorubicine, la vinblastine, la bléomycine, le taxol, la taxotere, la navelbine ; - une enzyme telle qu'une R ase ;
- un vecteur galénique, par exemple des liposomes, des nanoparticules, des polymères, des émulsions cationiques, des émulsions anioniques, des émulsions neutres, ou des dendritomes ;
- un autre anticorps ou un fragment d'un autre anticorps qui reconnaît un antigène autre que le CD71 ;
- la biotine, l'avidine ou la streptavidine.
Une molécule bioactive susmentionnée peut être directement liée à l'anticorps ou par intermédiaire d'un linker.
Un aspect particulier de l'invention concerne l'utilisation
- d'un anticorps monoclonal anti-CD71 ou d'un fragment d'un susdit anticorps capable de se lier à l'antigène CD71, ledit anticorps ou ledit fragment du susdit anticorps comprenant :
- au moins la région variable d'une chaîne lourde comprenant ou constituée de la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 1, et
- au moins la région variable d'une chaîne légère comprenant ou constituée d'une séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID NO : 2, SEQ ID NO : 11, SEQ ID NO : 13, SEQ ID NO : 15, SEQ ID NO : 16 ou SEQ ID NO : 17, et
- des cellules effectrices,
pour la préparation d'un médicament destiné à la prévention ou au traitement de myélomes.
Des cellules effectrices sont utilisées simultanément avec l'anticorps anti-CD71 pour la préparation d'un médicament destiné à la prévention ou au traitement de myélomes.
Ces cellules effectrices sont des cellules capables d'exprimer des récepteurs du domaine Fc, telles que des lymphocytes T humains, des lymphocytes NK humains, des monocytes humains, les granulocytes humains, ou des macrophages humains. L'interaction du récepteur de Fc sur les cellules de effectrices avec le domaine Fc de l'anticorps anti-CD71 permet d'induire une activité ADCC visant les cellules cibles, c'est-à-dire les cellules reconnues par l'anticorps spécifique, et de les éliminer par la suite.
Des cellules effectrices peuvent être des cellules autologues ou allogéniques.
Avantageusement, des cellules effectrices sont des cellules provenant d'un patient ayant besoin d'un traitement de myélomes. Des cellules effectrices sont séparées du sang périphérique prélevé d'un donneur ou d'un patient selon les méthodes conventionnelles bien connues de l'homme du métier (Boyum et al, Scand. J. Clin. Lab. Invest. Suppl. 1976. 5:9-15).
Dans un mode de réalisation avantageux, l'invention concerne l'utilisation d'un anticorps anti-CD71 décrite ci-dessus et des cellules effectrices pour la préparation d'un médicament destiné à la prévention ou au traitement de myélomes, dans laquelle les régions constantes des chaînes légères et chaînes lourdes dudit anticorps sont des régions constantes d'un anticorps humain.
Dans un mode de réalisation plus avantageux, l'invention concerne l'utilisation d'un anticorps anti-CD71 décrite ci-dessus et des cellules effectrices pour la préparation d'un médicament destiné à la prévention ou au traitement de myélomes, dans laquelle:
- au moins la région constante d'une chaîne légère comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 14,
- au moins la région constante d'une chaîne lourde comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID NO : 5 ou SEQ ID NO : 9.
Dans un mode de réalisation plus avantageux, l'invention concerne l'utilisation d'un anticorps anti-CD71 décrite ci-dessus et des cellules effectrices pour la préparation d'un médicament destiné à la prévention ou au traitement de myélomes, dans laquelle:
- la région variable de chacune de ses chaînes légères comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 2, et
- la région variable de chacune de ses chaînes lourdes comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 1, et
- la région constante de chacune de ses chaînes légères comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 14, et
- la région constante de chacune de ses chaînes lourde comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID NO : 5 ou SEQ ID NO : 9.
Plus avantageusement, l'invention concerne l'utilisation des cellules effectrices et d'un anticorps anti-CD71 produit de l'hybridome BA120g, déposé le 14 juin 2005 à CNCM sous le numéro CNCM 1-3449, pour la préparation d'un médicament destiné à la prévention ou au traitement de myélomes. Dans un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, l'invention concerne l'utilisation d'un anticorps anti-CD71 décrite ci-dessus et des cellules effectrices pour la préparation d'un médicament destiné à la prévention ou au traitement de myélomes, dans laquelle l'anticorps est couplé à une molécule bioactive choisi parmi :
- les radio-isotopes,
- métaux non-radioactifs,
- toxines choisies parmi la ricine, l'abrine, la toxine diphtérique,
- les acides nucléiques choisis parmi les AR s anti-sens,
- les agents cytotoxiques choisis parmi la mitomycine C, le méthotrexate,
l'adriamycine,
- les enzymes telles que les RNases,
- la biotine, l'avidine ou la streptavidine.
Dans un mode de réalisation particulier, l'anticorps anti-CD71 décrit ci-dessus est destiné à la prévention ou au traitement d'un myélome choisi parmi le myélome de stade I (faible mass tumorale), le myélome de stade II (mass tumorale intermédiaire), ou le myélome de stade III (forte masse tumorale).
La classification des myélomes est basée sur les critères établis par Docteur Durie et Docteur Salmon en 1986. Il s'agit d'une classification en fonction de la quantité de paraprotéine produite, la gravité de lésion osseuse, le taux de calcium sanguin et l'insuffisance de production médullaire (hémoglobine).
Le stade I correspond à un myélome de faible masse tumorale, dans lequel touts les critères suivants sont présents :
- Hémoglobine > 100 g/1
- Calcémie < 120 mg/1 (3 mmol/1)
- Absence de lésion osseuse ou un plasmocytome osseux isolé
- Taux d'Ig monoclonale faible :
* IgG< 50 g/1
* IgA < 30 g/1
* Protéinurie de Bence Jones < 4 g/24 H.
Le stade II ne répond pas à la définition ni du stade I, ni du stade III.
Le stade III est un myélome de forte masse tumorale, qui présent d'au moins un des critères suivants :
- Hémoglobine < 8,5 g/dl - Calcémie > 120 mg/1 (>3 mmol/1)
- Lésions osseuses multiples ( > 3)
- Taux élevé d'Ig monoclonale :
* IgG > 70 g/1
* IgA > 50 g/1
* Protéinurie de Bence Jones > 12 g/24 H
Un autre aspect de la présente invention a pour objet de proposer un anticorps anti- CD71 pour le traitement de myélomes.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un anticorps monoclonal anti-CD71 ou un fragment d'un susdit anticorps capable de se lier à l'antigène CD71, ledit anticorps ou ledit fragment du susdit anticorps comprenant
- au moins la région variable d'une chaînes lourde comprenant ou constituée de la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 1, et
- au moins la région variable d'une chaîne légère comprenant ou constituée d'une séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID NO : 2, SEQ ID NO : 11, SEQ ID NO : 13, SEQ ID NO : 15, SEQ ID NO : 16 ou SEQ ID NO : 17,
pour le traitement de myélomes.
Dans un autre mode de réalisation, l'invention concerne un anticorps monoclonal anti-
CD71 ou d'un fragment d'un susdit anticorps capable de se lier à l'antigène CD71, ledit anticorps ou ledit fragment du susdit anticorps comprenant :
- au moins la région variable d'une chaîne lourde comprenant ou constituée d'une séquence d'acides aminés codée par une séquence nucléique SEQ ID NO : 3, et
- au moins la région variable d'une chaîne légère comprenant ou constituée d'une séquence d'acides aminés codée par une séquence nucléique choisie parmi SEQ ID NO : 4 et SEQ ID NO : 12,
pour le traitement de myélomes.
Dans un mode de réalisation avantageux, l'invention concerne un anticorps anti-CD71 pour le traitement de myélomes, dans lequel les régions constantes des dites chaînes légères et chaînes lourdes sont des régions constantes d'un anticorps humain.
Dans un mode de réalisation plus avantageux, l'invention concerne un anticorps anti- CD71, dans lequel : - au moins la région constante d'une chaîne légère comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 14,
- au moins la région constante d'une chaîne lourde comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID NO : 5 ou SEQ ID NO : 9,
pour le traitement de myélomes.
Dans un autre mode de réalisation plus avantageux, l'invention concerne un anticorps anti-CD71, dans lequel :
- au moins la région constante d'une chaîne légère comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés codée par la séquence nucléique SEQ ID NO : 8,
- au moins la région constante d'une chaîne lourde comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés codée par une séquence nucléique choisie parmi SEQ ID NO : 7 ou SEQ ID NO : 10,
pour le traitement de myélomes.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, l'invention concerne un anticorps anti-CD71, dans lequel :
- la région variable de chacune de ses chaînes légères comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 2, et
- la région variable de chacune de ses chaînes lourdes comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 1, et
- la région constante de chacune de ses chaînes légères comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 14, et
- la région constante de chacune de ses chaînes lourde comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID NO : 5 ou SEQ ID NO : 9,
pour le traitement de myélomes.
Dans un mode de réalisation avantageux, l'anticorps mis en œuvre pour le traitement de myélome est produit d'un hybridome BA120g, déposé le 14 juin 2005 à CNCM sous le numéro CNCM 1-3449.
L'anticorps anti-CD71 décrit ci-dessus et destiné au traitement de myélomes peut être associé avec les récipients ou les véhicules pharmaceutiquement acceptable.
L'anticorps anti-CD71 décrit ci-dessus et destiné au traitement de myélomes peut être administré par voie intraveineuse, par exemple par injection ou perfusion. Dans un mode de réalisation particulier, un anticorps anti-CD71 décrit ci-dessus pour le traitement de myélomes, est couplé à une molécule bioactive choisi parmi :
- les radio-isotopes,
- métaux non-radioactifs,
- toxines choisies parmi la ricine, l'abrine, la toxine diphtérique,
- les acides nucléiques choisis parmi les AR s anti-sens,
- les agents cytotoxiques choisis parmi la mitomycine C, le méthotrexate, l'adriamycine,
- les enzymes telles que les RNases,
- la biotine, l'avidine ou la streptavidine
Un autre aspect de l'invention concerne un produit contenant:
- au moins un anticorps monoclonal anti-CD71 ou un fragment du susdit anticorps capable de se lier à l'antigène CD71, ledit anticorps ou ledit fragment du susdit anticorps comprenant :
* au moins la région variable d'une chaîne lourde comprenant ou constituée de la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 1, et
* au moins la région variable d'une chaîne légère comprenant ou constituée d'une séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID NO : 2 et SEQ ID NO : 11,
- un agent anticancéreux choisi parmi Velcade®, Melphalan®, Prednisone® comme produit de combinaison, pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps en thérapie tumorale.
Dans un mode de réalisation particulier, l'invention concerne un produit contenant:
- au moins un anticorps monoclonal anti-CD71 ou un fragment du susdit anticorps capable de se lier à l'antigène CD71, ledit anticorps ou ledit fragment du susdit anticorps comprenant :
* au moins la région variable d'une chaîne lourde comprenant ou constituée de la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 1, et
* au moins la région variable d'une chaîne légère comprenant ou constituée d'une séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID NO : 2, SEQ ID NO : 11, SEQ ID NO : 13, SEQ ID NO : 15, SEQ ID NO : 16 ou SEQ ID NO : 17, et
* les régions constantes des chaînes légères et chaînes lourdes provenant d'un anticorps humain, - un agent anticancéreux choisi parmi Velcade , Melphalan , Prednisone , comme produit de combinaison, pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps en thérapie tumorale.
Dans un mode de réalisation particulier, l'invention concerne un produit contenant: - au moins un anticorps monoclonal anti-CD71 ou un fragment du susdit anticorps capable de se lier à l'antigène CD71, ledit anticorps ou ledit fragment du susdit anticorps comprenant :
* au moins la région variable d'une chaîne lourde comprenant ou constituée de la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 1, et
* au moins la région variable d'une chaîne légère comprenant ou constituée d'une séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID NO : 2, SEQ ID NO : 11, SEQ ID NO : 13, SEQ ID NO : 15, SEQ ID NO : 16 ou SEQ ID NO : 17, et
* au moins la région constante d'une chaîne légère comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 6 et SEQ ID NO : 14,
* au moins la région constante d'une chaîne lourde comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID NO : 5 ou SEQ ID NO : 9,
- un agent anticancéreux choisi parmi Velcade®, Melphalan®, Prednisone®,
comme produit de combinaison, pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps en thérapie tumorale.
Dans un mode de réalisation particulier, l'invention concerne un produit contenant:
- au moins un anticorps monoclonal anti-CD71 ou un fragment du susdit anticorps capable de se lier à l'antigène CD71, ledit anticorps ou ledit fragment du susdit anticorps comprenant :
* la région variable de chacune de ses chaînes légères comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 2, et
* la région variable de chacune de ses chaînes lourdes comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 1, et
* la région constante de chacune de ses chaînes légères comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 14, et
* la région constante de chacune de ses chaînes lourde comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID NO : 5 ou SEQ ID NO : 9,
- un agent anticancéreux choisi parmi Velcade®, Melphalan®, Prednisone®, comme produit de combinaison, pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps en thérapie tumorale.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, l'invention concerne un produit contenant:
- l'anticorps anti-CD71 produit d'un hybridome BA120g, déposé le 14 juin 2005 à CNCM sous le numéro CNCM 1-3449,
- un agent anticancéreux choisi parmi Velcade®, Melphalan®, Prednisone®,
comme produit de combinaison, pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps en thérapie tumorale.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, l'invention concerne un produit contenant :
- l'anticorps anti-CD71 produit d'un hybridome BA120g, déposé le 14 juin 2005 à CNCM sous le numéro CNCM 1-3449, et
- Velcade®.
Dans un autre mode de réalisation, l'invention concerne un produit contenant:
- au moins un anticorps monoclonal anti-CD71 ou un fragment du susdit anticorps capable de se lier à l'antigène CD71, ledit anticorps ou ledit fragment du susdit anticorps comprenant :
* au moins la région variable d'une chaîne lourde comprenant ou constituée de la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 1, et
* au moins la région variable d'une chaîne légère comprenant ou constituée d'une séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID NO : 2, SEQ ID NO : 11 et SEQ ID NO : 13, SEQ ID NO : 15, SEQ ID NO : 16 ou SEQ ID NO : 17
- des cellules effectrices, et
- un agent anticancéreux choisi parmi Velcade®, Melphalan®, Prednisone®,
comme produit de combinaison, pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps en thérapie tumorale.
Dans un mode de réalisation particulier, l'invention concerne un produit contenant :
- au moins un anticorps monoclonal anti-CD71 ou un fragment du susdit anticorps capable de se lier à l'antigène CD71, ledit anticorps ou ledit fragment du susdit anticorps comprenant : * au moins la région variable d'une chaîne lourde comprenant ou constituée de la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 1, et
* au moins la région variable d'une chaîne légère comprenant ou constituée d'une séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID NO : 2, SEQ ID NO : 11, SEQ ID NO : 13, SEQ ID NO : 15, SEQ ID NO : 16 ou SEQ ID NO : 17, et
* les régions constantes des chaînes légères et chaînes lourdes provenant d'un anticorps humain,
- un agent anticancéreux choisi parmi Velcade®, Melphalan®, Prednisone®, et
- des cellules effectrices,
comme produit de combinaison, pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps en thérapie tumorale.
Dans un mode de réalisation particulier, l'invention concerne un produit contenant:
- au moins un anticorps monoclonal anti-CD71 ou un fragment du susdit anticorps capable de se lier à l'antigène CD71, ledit anticorps ou ledit fragment du susdit anticorps comprenant :
* au moins la région variable d'une chaîne lourde comprenant ou constituée de la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 1, et
* au moins la région variable d'une chaîne légère comprenant ou constituée d'une séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID NO : 2 et SEQ ID NO : 11, et
* au moins la région constante d'une chaîne légère comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 6 ou SEQ ID NO : 14,
* au moins la région constante d'une chaîne lourde comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID NO : 5 ou SEQ ID NO : 9,
- un agent anticancéreux choisi parmi Velcade®, Melphalan®, Prednisone®,
- des cellules effectrices,
comme produit de combinaison, pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps en thérapie tumorale. Dans un mode de réalisation particulier, l'invention concerne un produit contenant:
- au moins un anticorps monoclonal anti-CD71 ou un fragment du susdit anticorps capable de se lier à l'antigène CD71, ledit anticorps ou ledit fragment du susdit anticorps comprenant : * la région variable de chacune de ses chaînes légères comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 2, et
* la région variable de chacune de ses chaînes lourdes comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 1, et
* la région constante de chacune de ses chaînes légères comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 14, et
* la région constante de chacune de ses chaînes lourde comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID NO : 5 ou SEQ ID NO : 9,
- un agent anticancéreux choisi parmi Velcade®, Melphalan®, Prednisone®, et
- des cellules effectrices,
comme produit de combinaison, pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps en thérapie tumorale.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, l'invention concerne un produit contenant:
- l'anticorps anti-CD71 produit d'un hybridome BA120g, déposé le 14 juin 2005 à CNCM sous le numéro CNCM 1-3449,
- un agent anticancéreux choisi parmi Velcade®, Melphalan®, Prednisone®,
- des cellules effectrices,
comme produit de combinaison, pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps en thérapie tumorale.
Un autre aspect de l'invention a pour objectif de fournir une méthode de diagnostic in vitro de myélomes.
Cette méthode est basée sur la constatation inattendue faite par les Inventeurs que le CD71 est souvent surexprimé sur les cellules myélomateuses. Par conséquent, la surexpression de CD71 sur les plasmocytes peut signifier que ces cellules deviennent malignes.
Cette méthode comprend :
(i) l'incubation d'un échantillon cellulaire prélevé d'un patient suspecté de présenter un myélome, avec un anticorps anti-CD71 ou d'un fragment d'un susdit anticorps capable de se lier à l'antigène CD71, ledit anticorps ou ledit fragment du susdit anticorps comprenant :
- au moins la région variable d'une chaîne lourde comprenant ou constituée de la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 1, et - au moins la région variable d'une chaîne légère comprenant ou constituée d'une séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID NO : 2, SEQ ID NO : 11 ou SEQ ID NO : 13, SEQ ID NO : 15, SEQ ID NO : 16 ou SEQ ID NO : 17
(ii) la mesure de la quantité d'antigènes CD71 présents sur la surface de cellules présentes dans ledit échantillon,
(iii) la comparaison de la valeur obtenue dans l'étape précédente avec une valeur de référence établie dans un échantillon cellulaire sain.
Avantageusement, l'anticorps anti-CD71 utilisé dans cette méthode est un anticorps dans lequel :
- la région variable de chacune de ses chaînes légères comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 2, et
- la région variable de chacune de ses chaînes lourdes comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 1, et
- la région constante de chacune de ses chaînes légères comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 14, et
- la région constante de chacune de ses chaînes lourde comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID NO : 5 ou SEQ ID NO : 9.
Plus avantageusement, l'anticorps anti-CD71 utilisé dans cette méthode est produit d'un hybridome BA120g, déposé le 14 juin 2005 à CNCM sous le numéro CNCM 1-3449.
L'anticorps anti-CD71 utilisé dans cette méthode peut être utilisé directement ou couplé avec un marqueur.
Lorsque cet anticorps est utilisé directement, la présence de cet anticorps peut être détectée par un autre anticorps de détection, ce dernier étant lié à un marqueur, tel qu'un agent radioactif, ou une enzyme capable de catalyser un substrat émettant une radiation par fluorescence ou capable d'émettre une radiation à une longueur d'onde différente de celle d'absorption, ou tout autre marqueur permettant de détecter la fixation de l'anticorps de détection sur l'anticorps anti-CD71.
L'anticorps anti-CD71 mis en œuvre dans cette méthode peut être couplé préalablement avec un marqueur permettant de détecter la fixation de cet anticorps sur les plasmocytes. Ce marqueur peut être un agent radioactif, ou une enzyme capable de catalyser un substrat émettant une radiation par fluorescence ou capable d'émettre une radiation à une longueur d'onde différente de celle d'absorption, ou tout autre marqueur permettant de détecter la fixation de l'anticorps anti-CD71 sur les plasmocytes. L'invention est illustrée par les exemples et les figures suivantes. Les exemples ci-après visent à éclaircir l'objet de l'invention et illustrer des modes de réalisation avantageux, mais en aucun cas ne vise à restreindre la portée de l'invention.
Figure 1 : la figure 1 représente une courbe de calibration pour mesurer la capacité d'un anticorps à se fixer sur des cellules. L'axe des abscisses représente le logarithme de MFI (mean fluoresence intensity) d'anticorps secondaire couplé. L'axe des ordonnées représente le logarithme de la capacité d'un anticorps à se fixer sur des cellules. Les croix représentent les données réellement obtenues par la mesure.
Figure 2 : la figure 2 représente la mesure de la survie de souris testées dans 5 groupes. Le groupe 1 (carré en noir) ne reçoit rien. Le groupe 2 (point noir) reçoit un anticorps irrelevant à 0.048 mg/kg/injection. Le groupe 3 (triangle) reçoit un anticorps irrelevant à 0.24 mg/kg/injection. Le groupe 4 (triangle inverse) reçoit de l'un anticorps anti-CD71 à 0.048 mg/kg/injection. Le groupe 5 (carré vide) reçoit de l'un anticorps anti-CD71 à 0.24 mg/kg/injection. L'axe des abscisses représente le nombre de jours après l'injection de cellules tumorales. L'axe des ordonnées représente le pourcentage de souris vivantes.
Figure 3 : la figure 3 représente la mesure de la survie de souris testées dans 5 groupes. Le groupe 1 (carré en noir) reçoit deux fois par semaine une injection de 1,2 mg d'un anticorps irrelevant. Le groupe 2 (point noir) reçoit deux fois par semaine une injection de 1,2 mg de l'anticorps anti-CD71. Le groupe 3 (triangle) reçoit deux fois par semaine une injection de 1,2 mg de l'anticorps anti-CD71 et une injection de 0,5 mg/kg de VELCADE®. Le groupe 4 (triangle inverse) reçoit deux fois par semaine une injection de 0,5 mg/kg de VELCADE®. Le groupe 5 (carré vide) ne reçoit aucun traitement. L'axe des abscisses représente le nombre de jours après l'injection de cellules tumorales. L'axe des ordonnées représente le pourcentage de souris vivantes.
RESULTAT
1. Détection de l'antigène CD71 par l'anticorps anti-CD71
La détection de l'antigène CD71 par l'anticorps anti-CD71 a été mesurée sur la lignée cellulaire ARH-77, une lignée de myélome.
Cette lignée cellulaire est cultivée en suspension à 37°C dans une atmosphère humidifiée (5% de C02, 95% humidité). Le milieu de culture est RPMI (Réf. #BE12-702F, Lonza, Verviers, Belgique) contenant 2mM L-glutamine et complété par 10% du sérum bovine fœtal (Réf. #DE14-801E, Lonza).
Une éventuelle contamination de la culture de cellules par des mycoplasmes est détectée à l'aide de MycoAlert® Mycoplasma Détection Kit (Réf. #LT07-318, Lonza) selon les instructions du fabricant. Ce kit permet de réaliser un test biochimique sélectif qui met en évidence l'activité enzymatique de mycoplasmes. Le surnageant de culture cellulaire est récupéré et testé par MycoAlert® kit. Le test est répété deux fois et le résultat est comparé avec un control négatif et un control positif (Mycoalert® Assay Control Set, Réf. #LO07-518, Lonza). Des mycoplasmes viables sont lysés et des enzymes libérées réagissent avec le substrat de MycoAlert® kit, en catalysant la conversion d'ADP en ATP. La mesure du niveau d'ATP avant et après l'addition de substrat MycoAlert® permet d'obtenir un ratio indiquant la présence ou l'absence de mycoplasmes.
La détection d'anticorps anti-CD71 est effectuée par cytométrie en flux (GUAVA
Personal Cell Analysis-96 (PCA-96) Systems). Les données obtenues sont analysées par logiciel FCS Express (De Novo Software).
L'anticorps de contrôle négatif est IgGl (MAT002). L'anticorps de contrôle positif est un anticorps anti-CD71 provenant de la société MAT (MAT201). L'anticorps à tester est l'anticorps anti-CD71 produit par l'hybridome BA120g, dilué à l(^g/ml, ^g/ml, 0,^g/ml, 0,(^g/ml, 0,0^g/ml, 0,005 μg/ml. L'anticorps secondaire couplé est un anticorps anti- souris IgG PE. Le tampon de dilution et de lavage (PBS (tampon phosphate salin) 2% SVF (sérum de veau fœtal)) est préparé à partir de 490ml de PBS (wo Ca2+/Mg2+) et 10ml de SVF dé- complémenté. PBS (Cambrex Biowhittaker BE 17-516F) est conservé à température ambiante jusqu'à l'utilisation. SVF (Cambrex Ref5SB0008) est conservé à -20°C jusqu'à l'utilisation. Le bleu de Trypan (Sigma T8154) est conservé à température ambiante.
La concentration en anticorps de contrôle est de 10μg/ml.
Environ 100 000 cellules dans un volume de ΙΟΟμΙ sont d'abord incubées respectivement avec l'anticorps anti-CD71 en différente dilution ou l'anticorps de contrôle. Les anticorps anti-CD71 sont ensuit révélés par un anticorps secondaire couplé à un agent fluorescent (anti-souris IgG-PE 1/100). Les résultats sont présentés dans le tableau 1 suivant.
Tableau 1
Anticorps primaire CD71-% CD71+% MFI
- 94,8 5,2 6,2
IgGl contrôle 10 μg/ml 96,3 3,7 4,9
Anti-CD71 ΙΟμ^ηύ 5,3 94,7 32,4
Anti-CD71 ^g/ml 10,6 89,4 28,8
Anti-CD71 0,^g/ml 25,2 74,8 17,6 Anti-CD71 0,05μ§/ηι1 34,3 65,7 12,7
Anti-CD71 0,0^g/ml 59,9 40,1 6,6
Anti-CD71 0,005 μg/ml 70,0 30,0 5,6
L'anticorps anti-CD71 peut se fixer spécifiquement sur la membrane cellulaire des cellules ARH-77 par rapport à l'anticorps de contrôle IgGl . Lorsque la concentration en anticorps anti-CD71 est supérieure à ^g/ml, cet anticorps peut reconnaître environ 90% de cellules ARH-77 dans l'échantillon.
2. Détermination du nombre des antigènes CD71 sur la surface de cellules ARH- 77 Le nombre des antigènes CD71 sur la surface de cellules de ARH-77 est déterminé par immunofluorescence indirecte à l'aide de kit QIFIKIT (Dakocytomation, Trappes, France) selon les instructions du fabricant. Le résultat de Γ immunofluorescence est détecté par cytométrie en flux.
Les cellules ARH-77 sont d'abord incubées respectivement avec l'anticorps anti- CD71 purifié à partir de l'hybridome BA120g et un anticorps irrelevant (anti-souris IgGl) comme contrôle négatif. Les particules blanches fournies dans le kit sont utilisées pour établir le bruit de fond. Quatre populations de particules de référence, présentant un nombre différent d'anticorps de contrôle, sont utilisées pour établir la courbe de calibration. Les anticorps se fixant sur les cellules sont ensuite révélés par un deuxième anticorps couplé avec un agent fluorescent (anti-souris IgG-FITC).
Les MFI (mean fluorescence intensity) mesurées pour les quatre populations de particules de référence permettent d'établir une courbe de calibration (figure 1). Cette courbe se varie selon l'appareil utilisé. Dans la présente expérience, la formule correspond à cette courbe est la suivante :
Y=A*X2+B*X+C,
dans laquelle :
- A égale 0,013248 ;
- B égaie 449,282318 ;
- C égale -31,588965 ;
- X est MFI (mean fluorescence intensity) issue de la lecture de cytométrie en flux ;
- Y est la capacité totale d'un anticorps de se fixer sur une population de cellules. On obtient la capacité d'anticorps anti-CD71 à se fixer de manière spécifique sur les cellules ARH-77 (SABC) selon la formule suivante : SABC=ABC-BAE, dans laquelle BAE représente le bruit de fond et ABC est la capacité de l'anticorps anti-CD71 à se fixer sur les cellules ARH-77. Le bruit de fond est la capacité d'un anticorps irrelevant à se fixer de manière non spécifique sur les cellules.
Le tableau 2 suivant montre le résultat de la détermination du nombre de CD71 sur ARH-77.
Tableau 2
3. Test in vivo de l'efficacité anti-tumorale de l'anticorps anti-CD71 chez les souris à immunodéficience sévère combinée
3.1 Effet de l'anticorps anti-CD71 sur le poids des souris portant des cellules tumorales ARH-77
Les souris femelles à immunodéficience sévère combinée (SCID), âgées de 6 à 7 semaines, pesant de 16 à 20 g sont obtenues de Charles River (France). Les souris utilisées dans les expériences sont d'abord observées pendant 7 jours dans une unité de soin pour animaux exempt d'organismes pathogènes spécifiques (EOPS). Cette unité de soin pour animaux est autorisée par le ministère de l'agriculture et le ministère de la recherche français (Agreement No.A21231011). Les expériences animales sont mises en œuvre selon la directive européenne sur l'expérimentation animale et la directive de la Grande Bretagne sur le bien- être des animaux utilisés dans la néoplasie expérimentale.
Les cellules ARH-77 tumorales exprimant CD71 sur la surface cellulaire sont suspendues dans le milieu RPMI 1640 (Réf. #BE12-702F, Lonza, Verviers, Belgique) contenant 2mM L-glutamine et complété par 10% du sérum bovine fœtal (Réf. #DE14-801E, Lonza).
40 souris femelles à immunodéficience sévère combinée (SCID) ont d'abord subi une injection par la voie intraveineuse d'un volume de 0,2ml du milieu RPMI 1640 contenant 5 millions de cellules tumorales ARH-77 suspendues. L'injection a été effectuée entre de 24 à 72 heures après l'exposition des souris testées dans cette expérience aux rayonnements gamma (1,8 Gy, Co, BioMEP sari, France).
Le jour d'injection des cellules tumorales est considéré comme le jour 0. Le traitement commence au jour 5.
Les 40 souris sont ensuite séparées en 5 groupes :
Le tableau 3 ci-dessous résume le programme de traitement pour chaque groupe.
Tableau 3
Le traitement a lieu aux jours 5, 8, 11 et 14. Les résultats sont présentés sur la figure 2.
Dans le groupe 1 (souris n'ayant reçu aucun traitement), une souris est trouvée morte au jour 28, les 7 autres sont sacrifiées entre le jour 25 et le jour 32 après l'injection des cellules ARH-77, du fait de la présence de signes pathologiques.
Dans le groupe 2 (souris ayant reçu l'anticorps irrelevant à 0.048 mg/kg/injection), trois souris sont mortse au jour 35 et, 5 sont sacrifiées entre le jour 29 et 96 après l'injection des cellules ARH-77 et ont été sacrifiées et enfin 2 souris ont été sacrifiées en fin d'étude au jour 106.
Dans le groupe 3 (souris ayant reçu l'anticorps irrelevant à 0.24 mg/kg/injection), une souris est morte au jour 28, 6 sont sacrifiées entre le jour 29 et 32 après l'injection des cellules ARH-77 et ont été sacrifiées et enfin 1 souris a été sacrifiée en fin d'étude au jour 106.
Dans le groupe 4 (souris ayant reçu l'anticorps anti-CD71 à 0.048mg/kg/injection), une souris est trouvée morte au jour 102, deux sont sacrifiées au jour 57 et 67 car elles présentaient des signes pathologiques et les 5 autres ont survécues à l'étude et sont sacrifiées au jour 106.
Dans le groupe 5 (souris ayant reçu l'anticorps anti-CD71 à 0.24 mg/kg/injection) une souris est sacrifiée au jour 43 en raison de la présence de signes pathologiques et les 7 autres survivent à l'étude et sont sacrifiées au jour 106. Pendant les expériences, les animaux serons tués par dislocation cervicale sous anesthésie par l'isoflurane si l'un des signes suivants présente :
- les signes de souffrance (la cachexie, la faiblesse, la difficulté de mouvement et de manger) ;
- la toxicité composée (la convulsion)
- une perte de 15% de poids corporel pendant 3 jours consécutifs ou de 20% de poids corporel dans une journée.
Une autopsie par microscopie est effectuée sur touts les animaux sacrifiés ou morts pendant ces expériences. L'autopsie porte sur le cœur, les poumons, le foie, la rate, le rein, et l'intestin.
L'isoflurane forene (Minerve, Bondoufle, France) est utilisé pour anesthésier les souris avant les injections de cellules tumorales par voie intraveineuse et lors du sacrifice des animaux par dislocation cervicale. La viabilité, les signes cliniques et les comportements sont notés chaque jour pendant les expériences. Le poids corporel de chaque souris est mesuré et noté deux fois par semaine.
3.2 Effet de l'anticorps anti-CD71 sur la survie des souris portant des cellules tumorales ARH-77
40 souris femelles à immunodéfïcience sévère combinée (SCID) ont d'abord subi une injection par la voie intraveineuse d'un volume de 0,2ml du milieu RPMI 1640 contenant Cinq millions de ARH-77 cellules tumorales suspendues. L'injection a été effectuée entre de 24 à 72 heures après l'exposition du corps entier des souris aux rayonnements gamma (1,8 Gy, 60Co, INRA, Dijon, France).
Le jour d'injection de cellules tumorales est considéré comme jour 0 (D0). Les traitements par l'anticorps anti-CD71 et par l'anticorps irrelevant débutent au jour J-l . Le traitement par le Velcade® commence au jour 4 et ont donc lieu aux jours J4, J7, Jl 1, J14, J18, J25, J28 et J32.
Les 40 souris sont séparées en 5 groupes. Le tableau 4 ci-dessous résume le programme de traitement pour chaque groupe.
:
Tableau 4
Le volume d'injection d'anticorps irrelevant et d'anticorps anti-CD71 est
200μί/8ουή8/ίη|'6ΰίίοη. Le volume d'injection de Velcade® (10ml/kg) est ajusté à la plupart des individus.
Les souris survivantes pendant l'expérience sont sacrifiées au bout de 144 jours après l'injection de cellules tumorales. Une autopsie est réalisée sur toutes les souris trouvées mortes ou sacrifiées pendant l'expérience à cause de la présence de l'un des signes pathologiques précisés dans la partie ci-dessus.
Dans le groupe 1 (souris ayant reçu l'anticorps irrelevant), une souris est morte au 2gieme jour^ ^ sour[s ont présenté des signes pathologiques entre le 24ieme jour et le 56ieme jour après l'injection des cellules ARH-77 et ont été sacrifiées et enfin 2 souris ont été sacrifiées en fin d'étude à J144.
Dans le groupe 2 (Souris ayant reçu l'anticorps anti-CD71), une souris est trouvée morte au 42ieme jour, une est sacrifiée au 98ieme jour car elle présentait des signes pathologiques et les 6 autres ont survécues à l'étude et sont sacrifiées à J144.
Dans le groupe 3 (souris ayant reçu l'anticorps anti-CD71 et le Velcade®, toutes les souris survivent à l'étude et sont sacrifiées à J144.
Dans le groupe 4 (souris ayant reçu le Velcade® seul), 1 souris est morte au 27ieme jour, les 7 autres sont sacrifiées en raison de la présence de signes pathologiques entre le jour 24 et le jour 31. Les autopsies révèlent différents signes (tumeurs sur la vessie, l'ovaire, et le rein, petite rate ou encore inflammation sur des ganglions axillaires droits, et sur ganglions inguinaux gauches).
Dans le groupe 5 (souris n'ayant reçu aucun traitement), les souris sont sacrifiées entre le jour 24 et le jour 45 du fait de la présence de signes pathologiques.
Les résultats sont présentés sur la figure 3.
Le tableau 5 ci-dessous compare la moyenne de survie des souris dans les 5 groupes morts ou sacrifiés avant la fin de l'expérience à cause de la présence des signes pathologiques précisés ci-dessus.
Tableau 5
Le traitement par l'anticorps anti-CD71 seul permet d'inhiber le développement d'un myélome chez les souris à immunodéfîcience sévère combinée et de prolonger la survie de souris de 29,6 jours, pour les souris non traitées, à plus de 70 jours pour les souris traitées par l'injection d'anticorps anti-CD71.
L'association d'anticorps anti-CD71 avec Velcade® présente un effet synergique sur l'inhibition de développement de myélome et la prolongation de survie de souris atteinte, par rapport à l'utilisation d'anticorps anti-CD71 seul, ou de Velcade® seul (figure 3). Chez toutes les souris ayant reçu ce traitement, cette association a réussi à inhiber le développement de myélome.

Claims

REVENDICATIONS
1. Utilisation d'un anticorps monoclonal anti-CD71 ou d'un fragment d'un susdit anticorps capable de se lier à l'antigène CD71, ledit anticorps ou ledit fragment du susdit anticorps comprenant :
- au moins la région variable d'une chaîne lourde comprenant ou constituée de la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 1, et
- au moins la région variable d'une chaîne légère comprenant ou constituée d'une séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID NO : 2, SEQ ID NO : 11, SEQ ID NO : 13, SEQ ID NO : 15, SEQ ID NO : 16 ou SEQ ID NO : 17,
pour la préparation d'un médicament destiné à la prévention ou au traitement de myélomes.
2. Utilisation d'un anticorps selon la revendication 2, dans lequel les régions constantes desdites chaînes légères et chaînes lourdes sont des régions constantes d'un anticorps humain.
3. Utilisation d'un anticorps selon la revendication 1 et 2, dans lequel
- au moins la région constante d'une chaîne légère comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID NO : 6 ou SEQ ID NO : 14,
- au moins la région constante d'une chaîne lourde comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID NO : 5 ou SEQ ID NO : 9.
4. Utilisation d'un anticorps selon les revendications 1 à 3, dans lequel ledit fragment est Fab, F(ab)'2, Fd, scFV, dimère de ScFv, diabody, triabody ou tetrabody.
5. Utilisation d'un anticorps selon les revendications 1 à 4, dans lequel ledit anticorps ou ledit fragment d'anticorps est couplé à une molécule bioactive choisi parmi :
- les radio-isotopes,
- métaux non-radioactifs,
- toxines choisies parmi la ricine, l'abrine, la toxine diphtérique,
- les acides nucléiques choisis parmi les ARNs anti-sens,
- les agents cytotoxiques choisis parmi la mitomycine C, le méthotrexate, l'adriamycine,
- les enzymes telles que les RNases,
- la biotine, l'avidine ou la streptavidine.
6. Utilisation d'un anticorps selon les revendications 1 à 5, dans lequel le myélome est choisi parmi le myélome de stade I (faible masse tumorale), le myélome de stade II (masse tumorale intermédiaire), le myélome de stade III (forte masse tumorale).
7. Produit contenant:
- au moins un anticorps monoclonal anti-CD71 ou un fragment du susdit anticorps capable de se lier à l'antigène CD71, ledit anticorps ou ledit fragment du susdit anticorps comprenant
- au moins la région variable d'une chaîne lourde comprenant ou constituée de la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 1, et
- au moins la région variable d'une chaîne légère comprenant ou constituée d'une séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID NO : 2, SEQ ID NO : 11, SEQ ID NO : 13, SEQ ID NO : 15, SEQ ID NO : 16 ou SEQ ID NO : 17,
- un agent anticancéreux choisi parmi Velcade®, Melphalan®, Prednisone®.
comme produit de combinaison, pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps en thérapie tumorale.
8. Produit selon la revendication 7, dans lequel les régions constantes des dites chaînes légères et chaînes lourdes sont des régions constantes d'un anticorps humain.
9. Produit selon la revendication 8, dans lequel :
- au moins la région constante d'une chaîne légère comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 6 ou SEQ ID NO : 14,
- au moins la région constante d'une chaîne lourde comprend ou est constituée de la séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID NO : 5 ou SEQ ID NO : 9.
10. Méthode de diagnostic in vitro de myélomes, comprenant :
(i) l'incubation d'un échantillon cellulaire prélevé d'un patient suspecté de présenter un myélome, avec un anticorps anti-CD71 ou d'un fragment d'un susdit anticorps capable de se lier à l'antigène CD71, ledit anticorps ou ledit fragment du susdit anticorps comprenant :
- au moins la région variable d'une chaîne lourde comprenant ou constituée de la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 1, et - au moins la région variable d'une chaîne légère comprenant ou constituée d'une séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID NO : 2, SEQ ID NO : 11, SEQ ID NO : 13, SEQ ID NO : 15, SEQ ID NO : 16 ou SEQ ID NO : 17,
(ii) la mesure de la quantité d'antigènes CD71 présents sur la surface de cellules présentes dans ledit échantillon,
(iii) la comparaison de la valeur obtenue dans l'étape précédente avec une valeur de référence établie dans un échantillon cellulaire sain.
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Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110251668A (zh) 2010-11-30 2019-09-20 霍夫曼-拉罗奇有限公司 低亲和力血脑屏障受体抗体及其用途
US9696312B2 (en) 2011-09-02 2017-07-04 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Diagnosis and treatment of cancer expressing ILT3 or ILT3 ligand
SG10201913762QA (en) 2015-05-04 2020-03-30 Cytomx Therapeutics Inc Anti-cd71 antibodies, activatable anti-cd71 antibodies, and methods of use thereof
WO2017015227A1 (fr) 2015-07-17 2017-01-26 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Procédés de traitement du cancer exprimant cd166
EP3156417A1 (fr) * 2015-10-13 2017-04-19 Affimed GmbH Anticorps fv multivalents
TWI752012B (zh) 2016-03-04 2022-01-11 美商Ｊｎ生物科學有限責任公司 針對tigit之抗體
WO2018165619A1 (fr) 2017-03-09 2018-09-13 Cytomx Therapeutics, Inc. Anticorps de cd147, anticorps activables de cd147 et procédés associés de fabrication et d'utilisation
EP3762420A1 (fr) 2018-03-09 2021-01-13 CytomX Therapeutics, Inc. Anticorps activables de cd147 et procédés de fabrication et d'utilisation associés
JP2022548310A (ja) 2019-09-23 2022-11-17 シートムエックス セラピューティクス，インコーポレイテッド 抗ｃｄ４７抗体、活性化可能抗ｃｄ４７抗体、およびその使用方法
WO2021163033A1 (fr) * 2020-02-10 2021-08-19 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Compositions et méthodes de détection de cellules subissant une ferroptose à l'aide d'un anticorps
AU2021284273A1 (en) 2020-06-02 2022-12-15 Arcus Biosciences, Inc. Antibodies to TIGIT
CN116120451A (zh) * 2021-06-17 2023-05-16 南京蓝盾生物科技有限公司 抗cd70内化的抗体、抗体偶联物及其应用
IL311175A (en) 2021-09-01 2024-04-01 Biogen Ma Inc Anti-transferrin receptor antibodies and their uses

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005094364A2 (fr) * 2004-03-31 2005-10-13 Chimeric Technologies, Inc. Proteine d'anticorps iga utilisee en tant que medicament cytotoxique
US7736647B2 (en) * 2005-06-15 2010-06-15 Monoclonal Antibodies Therapeutics Anti-CD71 monoclonal antibodies and uses thereof for treating malignant tumor cells

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
See references of WO2011138557A2 *

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