CN109923127A - 用于治疗性用途的抗bag3抗体与免疫检查点抑制剂的组合 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及包含抗BAG3抗体和免疫检查点抑制剂的组合；涉及包含所述组合的药物制剂，所述药物制剂任选地具有药学上可接受的赋形剂；并涉及所述药物制剂在肿瘤性疾病的治疗中的用途。

Description

用于治疗性用途的抗BAG3抗体与免疫检查点抑制剂的组合
本发明涉及包含抗BAG3抗体和免疫检查点抑制剂的组合；涉及包含所述组合的药物制剂，所述药物制剂任选地具有药学上可接受的赋形剂；并涉及所述药物制剂在肿瘤性疾病(neoplastic disease)的治疗中的用途。
发明背景
BAG3蛋白是一种74kDa的胞质蛋白，其属于共伴侣蛋白(co-chaperons)家族，所述共伴侣蛋白家族通过称为BAG结构域(氨基酸110-124)的结构域与蛋白HSP70(热休克蛋白)的ATP酶结构域相互作用。此外，BAG3蛋白包含WW结构域(Trp-Trp)、脯氨酸富集区(PXXP)和两个保守的基序IPV(Ile-Pro-Val)，其可介导与其他蛋白的结合。由于BAG3蛋白作为适配体(adapter)的性质(可归因于许多功能结构域的存在)，因此此类蛋白可以与不同的蛋白相互作用。
在人类中，bag3基因表达对于包括肌细胞的数种正常细胞而言是组成型的，而其突变则与骨骼肌和心肌的疾病相关。此外，BAG3蛋白在许多类型的原发性肿瘤或肿瘤细胞系(淋巴性或骨髓性白血病、神经母细胞瘤、胰腺癌、甲状腺癌、乳腺癌和前列腺癌、黑素瘤、骨肉瘤、胶质母细胞瘤和肾肿瘤、结肠肿瘤、卵巢肿瘤等)中表达(Rosati A.等人,CellDeath Dis.2011 Apr 7；2:e141)。
在正常的细胞类型，诸如白细胞、上皮细胞和神经胶质细胞和视网膜细胞中，bag3基因表达可通过应激原(stressor)，诸如氧化剂、高温、血清缺乏、重金属、HIV-1感染等来诱导。这些发现表明，bag3基因表达调控是细胞对应激的反应中的重要组成部分，并与响应转录因子HSF1(热休克转录因子)的元件的存在相关，所述元件在bag3基因启动子中以各种形式的细胞应激被激活。此外，由于其结构中许多蛋白-蛋白相互作用结构域的存在，BAG3蛋白影响不同类型的细胞中的细胞存活，与不同的分子伴侣相互作用(Rosati A.等人，Cell Death Dis.2011 Apr 7；2:e141)。被报道与BAG3抗凋亡活性有关的第一个机制在骨肉瘤和黑素瘤细胞中被鉴定出，其中观察到BAG3蛋白调节转录因子NF-kB的活化和细胞存活(Ammirante M.等人，Proc Natl Acad Sci U S A.2010；107(16):7497-502)。已描述了胶质母细胞瘤细胞中的不同的分子机制，其中BAG3蛋白以正向方式(in a positive way)与HSP70蛋白合作，以维持细胞溶胶中的BAX蛋白并阻止其转位进入线粒体(Festa M.等人，Am J Pathol.2011；178(6):2504-12)。最后，已示出BAG3在某些肿瘤中调控调节细胞粘附的蛋白。
胞质BAG3蛋白的存在也已经在许多不同的细胞系统中被描述，并且不但与各种肿瘤相关，而且与涉及细胞存活的一般病理学相关。
此外，专利申请号WO2011/067377描述了由一些细胞类型分泌的作为血清中的生化标志物的细胞外BAG3蛋白，其对于某些病理学状况，诸如心脏病理学和胰腺肿瘤的诊断是高度特异性的。
近期已报道了BAG3蛋白在患有胰腺导管腺癌(PDAC)的346/346患者中表达，并由胰腺肿瘤的细胞释放，但此蛋白既不在周围的非肿瘤性组织中表达，也不在正常胰腺中表达；同样地，已报道了BAG3表达的水平与患者存活相关。研究的结果证明，使用对BAG3 mRNA特异性的siRNA分子可以沉默bag3基因表达并诱导细胞死亡，证实了BAG3蛋白是对于胰腺肿瘤细胞而言重要的存活因子，且证实了BAG3蛋白的下调当与吉西他滨(gemcitabine)结合时，可以有助于根除肿瘤细胞(Rosati A.等人，Am J Pathol.2012 Nov；181(5):1524-9)。
此外，在近期的一篇论文中(Rosati A.等人，Nat Commun.2015 Nov 2；6:8695)，我们报道了PDAC释放的BAG3结合巨噬细胞，诱导其活化和PDAC支持因子的分泌。我们还将IFITM-2鉴定为BAG3受体，并示出了IFITM-2通过PI3K和p38 MAPK通路传导信号。最后，我们已经示出，在三种不同的小鼠模型中使用小鼠单克隆抗BAG3抗体导致肿瘤生长减少并预防转移形成。因此，我们已经鉴定出一个参与PDAC生长和转移性扩散的旁分泌环路(paracrine loop)，并示出了抗BAG3抗体具有治疗潜力(Rosati A.等人，NatCommun.2015Nov 2；6:8695)。事实上，我们示出了抗BAG3抗体阻断了巨噬细胞上的BAG3活性。在体内，我们示出了这种抗体在不同动物模型，包括患者来源的异种移植物模型和同基因(syngeneic)模型中阻断肿瘤生长的能力。该后一个模型非常重要，因为小鼠具有完整的免疫系统。
针对肿瘤病理的常规化疗疗法具有许多与副作用相关的缺点，并且目前还不是治疗此类病理的确定性手段。
近年来，免疫检查点抑制剂(即抑制/阻断免疫检查点系统的分子)已经成为晚期肿瘤的有效疗法；这些免疫检查点抑制剂中包括阻断细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA4)和程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)的治疗性抗体，这些抗体已被用于若干肿瘤(Topalian SL等人，Nat Rev Cancer.2016 May；16(5):275-87)。
PD-1(程序性细胞死亡蛋白，CD279)，B7/CD28受体家族的成员，是在活化的白细胞(包括T细胞、B细胞、NK细胞和髓系来源抑制性细胞)的细胞表面表达的单体分子，其表达受遗传和表观遗传机制之间的相互影响精细调节。已知的PD-1配体是PD-L1和PD-L2(FarkonaS.等人，BMC Med.2016 May 5；14:73)。
PD-L1(程序性细胞死亡蛋白配体1，B7H1，CD274)在造血细胞(包括T细胞、B细胞、髓系细胞和树突状细胞)和非造血细胞(诸如肺细胞、心脏细胞、内皮细胞、胰岛细胞、角质细胞)并且特别是癌细胞上以低水平表达，并在细胞活化时被上调。PD-L2(程序性细胞死亡蛋白配体2，B7-DC，CD273)在巨噬细胞、树突状细胞(DC)、活化的CD4+和CD8+淋巴细胞和一些实体瘤(卵巢癌、小细胞肺癌、食道癌)上表达。PD-L1和PD-L2二者的表达也在正常的以及癌症相关的成纤维细胞上被检测到。PD-L1和PD-L2二者与另外的受体相互作用：PD-L1与CD28配体CD80相互作用，且PD-L2与巨噬细胞和其他细胞类型上表达的排斥性导向分子(Repulsive Guidance Molecule，RGM)b相互作用。PD-1的胞质尾部含有基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(an Immunoreceptor Tyrosine-based Inhibition Motif；ITIM)和基于免疫受体酪氨酸的转换基序(an immunoreceptor tyrosine-based switch motif；ITSM)。在T淋巴细胞中，PD-1与其配体的相互作用导致PD-1胞内尾部的两个酪氨酸磷酸化；将含SH2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶(SHP-1和/或SHP-2)募集到PD-1的ITSM胞质区，然后抑制T细胞受体的下游信号，从而抑制T细胞增殖和细胞因子产生。PD-1也对T细胞产生其他作用：例如，通过抑制Akt和Ras通路，PD-1触发抑制了泛素连接酶组分SKP2的转录：这导致SKP2介导的p27(kip1)(一种周期蛋白依赖性激酶抑制剂)降解的受损，并从而阻断细胞周期进程。此外，PD-1可以通过多于一种机制促进细胞凋亡。除了直接抑制T细胞活化外，通过PD-L1的PD-1触发可诱导T调节细胞(Treg)的发育，所述T调节细胞(Treg)是主动抑制效应T细胞的外周耐受的关键介导物。通过PD-1触发的Treg诱导是通过调节关键信号传导分子诸如磷酸化-Akt(phospho-Akt)来介导的，所述磷酸化-Akt通过PD-1诱导的PTEN活性被保持在低水平。若干类型的癌细胞确实表达PD-L1。此外，在肿瘤微环境中的非肿瘤细胞(内皮细胞、白细胞、成纤维细胞)也可以表达PD-L1。这表明它们可耐受肿瘤浸润性PD-1+T淋巴细胞(TIL)，和/或诱导Treg发育；事实上，越来越多的证据表明，使用抗PD-1/PD-L1单克隆抗体(mAb)对受某些癌症类型(黑素瘤、肾癌、非小细胞肺癌等)影响的患者进行治疗可以减少肿瘤生长。
目前，超过100项临床试验正在研究PD-1和PD-L1在多种癌症中的阻断临床功效。然而，尽管取得了非常令人鼓舞的结果，但明显地，a)并非所有肿瘤类型都对抗PD-1或抗PD-L1mAb显示出显著的反应，以及b)在作出反应的癌症的亚群中，并非所有患者都作出反应并且一些反应是非常局部的。这些证据，加上目前研究阶段对反应持久性的不确定性表明，需要在抗PD-1/PD-L1mAb和作用于其他通路的工具之间的有效治疗性组合(TopalianSL等人，Cancer Cell.2015Apr 13；27(4):450-61)。
因此，存在对新的且改进的治疗性治疗(therapeutic treatment)的明显需要，与用于治疗肿瘤性疾病的常规、公知的疗法相比，所述新的且改进的治疗性治疗具有高度特异性及具有很少或无副作用的优势。
定义
除非另有定义，否则本文使用的所有技术术语、符号和其他科学术语意图具有本公开内容所属领域的技术人员通常理解的含义。在一些情况下，为了清楚和/或便于参考，本文定义了具有通常理解的含义的术语；因此，本文包括此类定义不应被解释为代表与本领域通常理解的内容有实质性的差异。
术语“药学上可接受的赋形剂”在本文中是指其本身没有任何药理学效果，并且当向哺乳动物(优选人类)施用时不会产生不良反应的物质。生理学上可接受的赋形剂在本领域中是众所周知的，并且例如在2009年第六版的“Handbook of PharmaceuticalExcipients”中公开，该文献通过引用并入本文。
术语“同时、单独或顺序地施用”在本文中是指同时施用第一化合物和第二化合物，或以两种化合物在患者体内同时起作用的方式施用第一化合物和第二化合物，或一种化合物在另一种化合物之后施用，以这样的方式提供治疗效果。在一些实施方案中，化合物随餐服用。在其他实施方案中，化合物在餐后服用，诸如餐后30分钟或60分钟服用。在一些实施方案中，将一种化合物施用至患者持续一段时间，然后施用另一种化合物。
术语“约(approximately)”和“大约(about)”在本文中指的是在测量中可能出现的实验误差的范围。
术语“包括/包含/含有(comprising)”、“具有(having)”、“包括/包含/含有(including)”和“包括/包含/含有(containing)”被解释为开放式术语(即，意指“包括但不限于”)，并且被认为也为术语如“主要由…组成(consist essentially of)”、“主要由…组成(consisting essentially of)”、“由…组成(consist of)”或“由…组成(consistingof)”提供了支持。
术语“主要由…组成(consist essentially of)”和“主要由…组成(consistingessentially of)”被解释为半封闭式术语，意指不包括实质上影响本发明的基本和新颖特征的其他成分(因此可以包括任选的赋形剂)。
术语“由…组成(consists of)”、“由…组成(consisting of)”被解释为封闭式术语。
本文所用的术语“抗体”包括“片段”或“衍生物”，其具有抗体的至少一个抗原结合位点和/或显示出相同的生物活性。
抗体优选包括至少一种免疫球蛋白重链和至少一种免疫球蛋白轻链。免疫球蛋白链包括可变结构域和任选的恒定结构域。可变结构域可以包括互补决定区(CDR)，例如CDR1、CDR2和/或CDR3区，以及框架区。
术语“人源化抗体”是指其高变区已替换为非人类单克隆抗体的同源区的人类起源的抗体。
术语“嵌合抗体”是指包含源自不同抗体的部分的抗体。
术语“重组抗体”是指使用重组DNA方法获得的抗体。
术语“scFv片段”(单链可变片段)是指仅能够与相关的抗原结合的免疫球蛋白片段。scFv片段还可使用肽接头合成为二聚体(双体(diabodies))、三聚体(三体(triabodies))和四聚体(四体(tetrabodies))。
术语“Fab片段”(抗原结合片段)和“Fab2片段”是指由连接至相邻重链的Fc片段的轻链组成的免疫球蛋白片段，且此类片段是单价抗体。当Fab部分成对时，片段称为Fab2。
术语“杂交瘤”是指产生单克隆抗体的细胞。
术语“单特异性抗体”是指所有抗体对同一抗原具有亲和力的抗体。
术语“多特异性抗体”是指对若干抗原具有亲和力的抗体。
术语“双特异性抗体”是指对两种不同抗原具有亲和力的抗体。
术语“免疫检查点抑制剂”指的是阻断由一些类型的免疫系统细胞(诸如T细胞)和一些癌细胞产生的某些蛋白的一种类型的药物。
术语“A2A”指腺苷A2A受体。
术语“B7-H3”，也被称为CD276，指的是在实体瘤上表达的参与调节T细胞介导的免疫反应的蛋白。
术语“B7-H4”，也被称为VTCN1，指的是由肿瘤细胞和肿瘤相关巨噬细胞表达的在肿瘤逃逸中发挥作用的分子。
术语“BTLA”，也被称为CD272，指的是B和T淋巴细胞衰减因子。
术语“CTLA-4”，也被称为CD152，指的是细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4。
术语“IDO”指的是吲哚胺2,3-双加氧酶，它是一种具有免疫抑制性质的色氨酸分解代谢酶。
术语“KIR”，杀伤细胞免疫球蛋白样受体，指的是天然杀伤细胞上MHC I类分子的受体。
术语“LAG3”指的是淋巴细胞活化基因3。
术语“TIM-3”指的是T细胞免疫球蛋白结构域和黏蛋白结构域3。
术语“VISTA(蛋白)”指的是T细胞活化的V结构域Ig抑制因子。
在两个多肽序列之间的术语“序列同一性”表示序列之间相同氨基酸的百分比。
附图描述
图1.抗BAG3 mAb诱导免疫活性小鼠中胰腺癌同种异体移植物中PD-1的表达。
图2.抗BAG3 mAb诱导免疫活性小鼠中胰腺癌同种异体移植物中PD-1的表达。
图3.抗BAG3和抗PD-1的组合抑制免疫活性小鼠中胰腺癌同种异体移植物中的肿瘤生长。
本发明的公开内容
令人惊讶地发现，包含特异性抗BAG3抗体和免疫检查点抑制剂(例如抗PD-1抗体)的组合有效抑制胰腺癌中的肿瘤生长。
特别地，首次观察到，除了阻断BAG3蛋白与其在巨噬细胞表面的受体之间的相互作用之外，抗BAG3抗体能够诱导肿瘤细胞表面的PD-1和/或PDL-1分子的产生，并因此增强抗PD-1或抗PDL-1抗体对肿瘤细胞的作用。
对此，一个假设的机制可以与通过抗BAG3抗体诱导的肿瘤微环境中若干细胞因子的下调有关(Rosati A.等人，Nat Commun.2015Nov 2；6:8695)。
因此，本发明中报道的实验数据表明，所要求保护的组合在肿瘤性疾病(特别是胰腺癌)的治疗中特别有效。
因此，本发明的第一个实施方案涉及包含抗BAG3抗体或其片段和至少一种免疫检查点抑制剂的组合。
根据本发明的抗BAG3抗体或其片段可以是多克隆或单克隆抗体。单克隆抗体是优选的。
优选地，抗BAG3抗体或其片段是人源化抗体，所述人源化抗体包含：
a)由SEQ ID NO:12编码的重链氨基酸序列或至少所述重链氨基酸序列的可变结构域或与所述重链氨基酸序列具有至少80％的序列同一性的氨基酸序列，和
b)由SEQ ID NO:20编码的轻链氨基酸序列或至少所述轻链氨基酸序列的可变结构域或与所述轻链氨基酸序列具有至少80％的序列同一性的氨基酸序列。
如本文中使用的，两个多肽序列之间的序列同一性指示序列之间相同氨基酸的百分比，优选跨越由SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:20编码的氨基酸序列的全长的序列之间相同氨基酸的百分比。
本发明的优选的多肽序列具有至少85％，更优选90％，甚至更优选93％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性。
在本发明的优选实施方案中，相对于SEQ ID N.12具有至少80％序列同一性的所述氨基酸序列选自SEQ ID N.14、SEQ ID N:16或SEQ ID N.18。
在另外的优选实施方案中，相对于SEQ ID N.20具有至少80％序列同一性的所述氨基酸序列选自SEQ ID N.22、SEQ ID N:24或SEQ ID N.26。
在优选实施方案中，本发明的抗体是其中重链氨基酸序列由SEQ ID NO.18编码并且轻链氨基酸序列由SEQ ID NO 22或SEQ ID N.26编码的抗体。
在优选实施方案中，重链氨基酸序列或至少所述重链氨基酸序列的可变结构域或与所述重链氨基酸序列具有至少80％的序列同一性的氨基酸序列包含具有以下氨基酸组成的CDR区：H-CDR1包括氨基酸GFNIKDTYMY(SEQ ID N.3)、H-CDR2包括氨基酸GVDPANGNTRYDPKFQG(SEQ ID N.4)、H-CDR3包括氨基酸DGAMDY(SEQ ID N.5)，并且轻链氨基酸序列或至少所述轻链氨基酸序列的可变结构域或与所述轻链氨基酸序列具有至少80％的序列同一性的氨基酸序列包含具有以下氨基酸组成的CDR区：L-CDR1包括氨基酸KSSQSLLYSSNQKNYLA(SEQ ID N.6)、L-CDR2包括氨基酸WASTRES(SEQ ID N.7)以及L-CDR3包括氨基酸QQYYTYPLT(SEQ ID N.8)。
本发明的另一个实施方案是与BAG3蛋白结合并且包含以下的抗体或其片段：
a)由SEQ ID NO:11编码的重链核苷酸序列或至少所述重链核苷酸序列的可变结构域或与所述重链核苷酸序列具有至少80％的序列同一性的核苷酸序列，和
b)由SEQ ID NO:19编码的轻链核苷酸序列或至少所述轻链核苷酸序列的可变结构域或与所述轻链核苷酸序列具有至少80％的序列同一性的核苷酸序列。
如本文中使用的，两个核苷酸序列之间的“序列同一性”指示序列之间相同的核苷酸的百分比，优选跨越由SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:19编码的核苷酸序列的全长的序列之间相同的核苷酸的百分比。本发明的优选的核苷酸序列具有至少85％，更优选90％，甚至更优选93％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性。
在本发明的优选实施方案中，相对于SEQ ID N.11具有至少80％序列同一性的所述核苷酸序列选自SEQ ID N.13、SEQ ID N:15或SEQ ID N.17。
在另外的优选实施方案中，相对于SEQ ID N.19具有至少80％序列同一性的所述氨基酸序列选自SEQ ID N.21、SEQ ID N:23或SEQ ID N.25。
在优选的实施方案中，本发明的抗体是其中重链氨基酸序列由SEQ ID NO.17编码并且轻链氨基酸序列由SEQ ID NO 21或SEQ ID N.25编码的抗体。
根据本发明的免疫检查点抑制剂可以是与以下免疫检查点分子结合的抗体或其片段：PD-1、PDL-1、A2AR、B7-H3、B7-H4、BTLA、CTLA-4、IDO、KIR、LAG3、TIM-3或VISTA蛋白，优选PD-1、PDL-1或CTLA-4蛋白。
在本发明的优选实施方案中，至少一种免疫检查点抑制剂选自抗体、蛋白、小分子和/或si-RNA。
更优选地，所述至少一种免疫检查点抑制剂是抗体。
优选地，所述抗体是选自匹利珠单抗(Pidilizumab)、阿特珠单抗(Atezolizumab)、阿维鲁单抗(Avelumab)、德瓦鲁单抗(Durvalumab)、伊匹单抗(Ipilimumab)、曲美木单抗(Tremelimumab)、纳武单抗(Nivolumab)和派姆单抗(Pembrolizumab)的单克隆抗体。
在优选的实施方案中，本发明的组合包含一种抗BAG3抗体或其片段和一种抗PD-1抗体或其片段。
优选地，所述抗PD1抗体选自纳武单抗和派姆单抗，更优选为纳武单抗。
在另外的优选实施方案中，前述组合包含一种抗BAG3抗体或其片段和一种抗PDL-1抗体和/或其片段。
优选地，所述抗PDL-1抗体选自阿特珠单抗、阿维鲁单抗和德瓦鲁单抗，更优选为阿特珠单抗。
为了本发明的目的，抗体优选地选自由鼠抗体、重组抗体、人源化抗体或完全人类抗体、嵌合抗体、多特异性抗体(特别是双特异性抗体)、或其片段组成的组。
单克隆抗体可以通过任何合适的方法，诸如和Milstein(1975)的方法，或通过重组DNA方法产生。单克隆抗体还可以使用Clackson等人(1991)中描述的技术从噬菌体抗体文库分离。
人源化形式的抗体可以根据本领域已知的方法(Kettleborough C.A.等人,1991)诸如嵌合或CDR移植来产生。用于产生人源化抗体的可选方法是本领域众所周知的，并且在例如EP 0239400和WO 90/07861中描述。人类抗体还可以通过体外方法衍生获得。合适的实例包括但不限于噬菌体展示、酵母展示等。
根据本发明，“嵌合抗体”涉及包含来自不同物种(诸如，例如小鼠和人类)的多肽的抗体。嵌合抗体的产生在例如WO 89/09622中描述。
术语抗体包括具有该抗体的至少一个抗原结合位点的“片段”或“衍生物”。
根据优选的实施方案，抗体或其片段可以是Fab片段、Fab’片段、F(ab')片段、Fv片段、双体(diabody)、ScFv、小型模块化免疫药物(small modular immunopharmaceutical)(SMIP)、亲和体(affibody)、avimer、纳米抗体(nanobody)、结构域抗体和/或单链。
本发明的抗体可以优选地为IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgAsec、IgD和IgE抗体类型。应理解的是，所产生的抗体不需要初始地具有此类同种型，而是，所产生的抗体可以具有任何同种型并且抗体可以是同种型转换的。
优选地，根据本发明的抗体或其片段是人源化抗体。
本发明的另外的实施方案是前述组合作为药物的用途。优选用于肿瘤性疾病的治疗。
在优选的实施方案中，肿瘤性疾病选自胰腺癌、黑素瘤、膀胱癌、小细胞肺癌、头颈癌、乳腺癌、前列腺癌和结肠癌，优选为胰腺癌。
另外的实施方案是药物制剂，其包含本发明的组合，任选地具有至少一种药学上可接受的赋形剂或载体。
本发明的另外的实施方案是所述药物制剂作为药物的用途。
本发明的优选实施方案是所述药物制剂在治疗肿瘤性疾病中的用途，所述肿瘤性疾病选自胰腺癌、黑素瘤、膀胱癌、小细胞肺癌、头颈癌、乳腺癌、前列腺癌和结肠癌。
优选地，所述肿瘤性疾病是胰腺癌。
本发明的制剂可以被配制为适合于口服施用的形式或适合于肠胃外或局部施用的形式。
在本发明的优选实施方案中，所述口服形式可选自以下：片剂、胶囊、溶液、悬浮液、颗粒剂、和油性胶囊(oily capsule)。
在本发明的另外的优选实施方案中，所述局部形式可选自以下：乳膏、软膏、溶液、悬浮液、阴道栓剂、雾化器溶液(nebuliser solution)、喷雾剂、粉末或凝胶。
在本发明的另外的优选实施方案中，所述肠胃外形式可以是水性缓冲溶液或油性悬浮液。
所述肠胃外施用包括通过肌内、静脉内、皮内、皮下、腹膜内、结内(intranodal)、或脾内手段进行的施用。
在另外的实施方案中，本发明组合的活性成分，即抗BAG3抗体或其片段和至少一种免疫检查点抑制剂，可以被同时、单独或顺序地施用，也可以遵循每种活性成分的不同施用途径施用。
根据本发明的另外的实施方案，组合的活性成分可以通过相同的施用途径或通过不同的施用途径一起施用，或者它们可以通过相同的施用途径或通过不同的施用途径单独施用。
在本发明的优选方面，抗BAG3抗体或其片段被配制为口服形式，优选片剂、胶囊、溶液、悬浮液、颗粒剂和油性胶囊的形式，而至少一种免疫检查点抑制剂被配制为经肠胃外施用，优选被配制为水性缓冲溶液或油性悬浮液。
根据本发明的优选实施方案，含有抗BAG3抗体或其片段的制剂被每天施用，优选被一天一次或更多次施用，而含有至少一种免疫检查点抑制剂的制剂则通过肠胃外途径，优选一周一次至若干次被施用。
以下实施例被包括以增加对本发明的理解，而不具有对本发明的任何限制作用。
实施例
实施例1-AC2抗体的嵌合和人源化。
AC-2鼠抗体从由2002年12月17日保藏在热那亚高级生物技术中心(the CentroBiotecnologie Avanzate di Genova)并在WO03/055908中公开的杂交瘤亲本克隆n°PD02009分离的杂交瘤产生。提取总RNA，并使用常规程序(例如，通过使用能够特异性结合到编码鼠抗体重链和轻链基因的寡核苷酸探针)进行RT-PCR以克隆和测序抗体的可变区。
基于AC-2鼠抗体可变区、重链和轻链的序列信息(对于氨基酸序列为SEQ ID No.1和SEQ ID N.2，并且对于核苷酸序列为SEQ ID 9和SEQ ID N.10)，通过使用标准程序的基因合成获得了所述区的不同人源化变体。
编码抗体变体的序列被克隆在Evi-5表达载体(Evitria AG，瑞士)中，并在CHO-K1细胞中表达。
对于抗体嵌合，鼠恒定区被人类恒定区取代。重链(HC)的一个嵌合形式是在IgG1背景下制备的。
对于抗体人源化，将来自鼠的互补决定区(CDR)移植到人类抗体框架中。
重链(HC)的二十四个人源化形式是在IgG1和LC-κ背景下制备的。每种形式通过FR中的特定点突变来表征。
实施例2-抗BAG3 mAb诱导免疫活性小鼠中胰腺癌同种异体移植物中PD-1的表达。
用抗BAG3抗体处理的肿瘤显示出PD-1蛋白的显著更高表达(图1A)。图1B中示出了代表性图像。
实施例3-抗BAG3 mAb诱导免疫活性小鼠中胰腺癌同种异体移植物中PDL-1的表达。
用抗BAG3抗体处理的肿瘤显示出PDL-1蛋白的显著更高表达(图2A)。图2B中示出了代表性图像。
实施例4-抗BAG3和抗PD1的组合抑制免疫活性小鼠中胰腺癌同种异体移植物中的肿瘤生长。
在胰腺癌的同基因鼠模型中，我们示出了用抗BAG3 mAb和抗PD-1mAb的组合处理能够抑制肿瘤生长。
材料和方法(参考实施例2-4)
体内模型：将mt4-2D鼠细胞(0.20×106)悬浮在1:1PBS 1X/基质胶的溶液中，并注射到雌性C57BL6小鼠(6周龄；Harlan Laboratories，意大利)的右侧腹和左侧腹中。10天后，小鼠被分成四组(arms)，每组由10只小鼠组成，其中肿瘤体积平均值为约100mm3。一组接受每周3次单独的或与抗PD-1抗体(10mg Kg-1，每周两次，Bioxcell Clone:J-43)组合的PBS中的20mg Kg-1抗BAG3 mAb的腹腔(i.p.)注射，而另一组接受不相关的IgG(BioxcellClone:MOPC-21)持续3周。另一组接受抗PD-1抗体施用。每周两次称重动物并用卡尺测量肿瘤体积。在实验结束时，所有动物都被处死并收集肿瘤样品用于后续分析。
免疫荧光：实验结束时，将肿瘤进行石蜡包埋，并且切片使用抗PD-1抗体或抗PDL-1(Abcam，英国剑桥，以1:100)通过免疫荧光进行分析。免疫荧光方案包括Clear-RiteTM3(ThermoScientific，美国马萨诸塞州沃尔瑟姆)中的脱石蜡处理，通过逐渐减少醇的度数直至为水进行再水合，在柠檬酸钠缓冲液(10mM，0.05％Tween，pH 6.0)中在700Watt的微波中持续3分钟进行非酶促抗原修复。洗涤后，用在PBS 1X中的10％FBS阻断非特异性结合。然后将切片与抗PD1或抗PDL-1的一抗在加湿室中于4℃孵育过夜。在另一个洗涤步骤后，将切片与二抗一起孵育。细胞核用1μg ml-1的DAPI(Molecular Probes，美国俄勒冈州)复染。使用除一抗以外的所有试剂进行阴性对照。当比较实验材料和对照材料时，通过使用相同的采集参数(激光强度、增益光电倍增器、针孔光圈、物镜×63、变焦1)以顺序扫描模式采集图像。关于图像制备，图像的亮度和对比度通过注意留下亮细胞荧光背景来进行调整，以便视觉上审鉴最低荧光强度特征并有助于进行不同实验组之间的比较。通过使用ImageJ软件，根据来自×63倍视野放大的至少10幅图像，将PD-1阳性或PDL-1阳性细胞计算为与DAPI染色的比率。
序列表
<110> 比奥尤尼沃萨有限责任公司
<120> 用于治疗性用途的抗BAG3抗体与免疫检查点抑制剂的组合
<160> 26
<170> BiSSAP 1.2
<210> 1
<211> 115
<212> PRT
<213> 小鼠(mouse)
<400> 1
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Val Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Arg Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Gly Arg Asp Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr
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<210> 12
<211> 445
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<213> 小鼠(mouse)
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
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Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Val Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Arg Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
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Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Asp Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
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Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
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Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
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Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
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Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
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Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
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Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
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Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
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<210> 13
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<220>
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gtgtatatgg agctgtccag cctgaggtcc gaagatacag cagtgtacta ttgtgggcgg 360
gacggtgcta tggactactg gggccaggga actctggtga ccgtctcgag cgctagcaca 420
aagggcccta gtgtgtttcc tctggctccc tcttccaaat ccacttctgg tggcactgct 480
gctctgggat gcctggtgaa ggattacttt cctgaacctg tgactgtctc atggaactct 540
ggtgctctga cttctggtgt ccacactttc cctgctgtgc tgcagtctag tggactgtac 600
tctctgtcat ctgtggtcac tgtgccctct tcatctctgg gaacccagac ctacatttgt 660
aatgtgaacc acaaaccatc caacactaaa gtggacaaaa aagtggaacc caaatcctgt 720
gacaaaaccc acacctgccc accttgtcct gcccctgaac tgctgggagg accttctgtg 780
tttctgttcc cccccaaacc aaaggatacc ctgatgatct ctagaacccc tgaggtgaca 840
tgtgtggtgg tggatgtgtc tcatgaggac cctgaggtca aattcaactg gtacgtggat 900
ggagtggaag tccacaatgc caaaaccaag cctagagagg aacagtacaa ttcaacctac 960
agagtggtca gtgtgctgac tgtgctgcat caggattggc tgaatggcaa ggaatacaag 1020
tgtaaagtct caaacaaggc cctgcctgct ccaattgaga aaacaatctc aaaggccaag 1080
ggacagccta gggaacccca ggtctacacc ctgccacctt caagagagga aatgaccaaa 1140
aaccaggtgt ccctgacatg cctggtcaaa ggcttctacc cttctgacat tgctgtggag 1200
tgggagtcaa atggacagcc tgagaacaac tacaaaacaa ccccccctgt gctggattct 1260
gatggctctt tctttctgta ctccaaactg actgtggaca agtctagatg gcagcagggg 1320
aatgtctttt cttgctctgt catgcatgag gctctgcata accactacac tcagaaatcc 1380
ctgtctctgt ctcccgggaa atgatagtaa aagctt 1416
<210> 16
<211> 445
<212> PRT
<213> 人类(Homo sapiens)
<400> 16
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Val Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Arg Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Leu Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Gly Arg Asp Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
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Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
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Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
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Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
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Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
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Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
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Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
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Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
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Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
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Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
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Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
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Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
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His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 17
<211> 1416
<212> DNA
<213> 人类(Homo sapiens)
<220>
<221> source
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<400> 17
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agatacgatc ctaagtttca aggacgggtg accatcacag ctgacactag caccgatacg 300
gcatatatgg agctgtccag cctgagatct gaagatacag cagtgtacta ttgtgccagg 360
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gatggctctt tctttctgta ctccaaactg actgtggaca agtctagatg gcagcagggg 1320
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<211> 445
<212> PRT
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340 345 350
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355 360 365
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370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
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Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
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accagggaat ctggagtgcc cgaccggttc agcggttctg gcagtggaac agattttacc 300
ctgacaattt catccctgca agccgaggac gtggctgtct actattgtca gcagtactat 360
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gctctgcaga gtgggaattc ccaggaatct gtcactgagc aggactctaa ggatagcaca 600
tactccctgt cctctactct gacactgagc aaggctgatt acgagaaaca caaagtgtac 660
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gagtgctgat agtaaaagct t 741
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<211> 220
<212> PRT
<213> 人类(Homo sapiens)
<400> 20
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
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Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
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Tyr Tyr Thr Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
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gcggccgcca tgaattttgg actgaggctg attttcctgg tgctgaccct gaaaggcgtc 60
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ctgacaattt catccctgca agccgaggac gtggctgtct actattgtca gcagtactat 360
acttatccac tgaccttcgg cggagggacc aagctcgaga tcaaacgtac ggtcgcggcg 420
ccttctgtgt tcattttccc cccatctgat gaacagctga aatctggcac tgcttctgtg 480
gtctgtctgc tgaacaactt ctaccctaga gaggccaaag tccagtggaa agtggacaat 540
gctctgcaga gtgggaattc ccaggaatct gtcactgagc aggactctaa ggatagcaca 600
tactccctgt cctctactct gacactgagc aaggctgatt acgagaaaca caaagtgtac 660
gcctgtgaag tcacacatca ggggctgtct agtcctgtga ccaaatcctt caatagggga 720
gagtgctgat agtaaaagct t 741
<210> 22
<211> 220
<212> PRT
<213> 人类(Homo sapiens)
<400> 22
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Thr Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 23
<211> 741
<212> DNA
<213> 人类(Homo sapiens)
<220>
<221> source
<222> 1..741
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/生物体="人类"
<400> 23
gcggccgcca tgaattttgg actgaggctg attttcctgg tgctgaccct gaaaggcgtc 60
cagtgtgaca tcgtgatgac acagtcacct gattccctgg cagtctccct gggcgagaga 120
gccactatga gttgcaagtc cagccagtct ctgctgtact ctagtaacca gaaaaattat 180
ctggcttggc accagcagaa gccagggcag ccccctaaac tgctgatcta ctgggcaagc 240
accagggaat ctggagtgcc cgaccggttc agcggttctg gcagtggaac agattttacc 300
ctgacaattt catccctgca agccgaggac gtggctgtct actattgtca gcagtactat 360
acttatccac tgaccttcgg cggagggacc aagctcgaga tcaagcgtac ggtcgcggcg 420
ccttctgtgt tcattttccc cccatctgat gaacagctga aatctggcac tgcttctgtg 480
gtctgtctgc tgaacaactt ctaccctaga gaggccaaag tccagtggaa agtggacaat 540
gctctgcaga gtgggaattc ccaggaatct gtcactgagc aggactctaa ggatagcaca 600
tactccctgt cctctactct gacactgagc aaggctgatt acgagaaaca caaagtgtac 660
gcctgtgaag tcacacatca ggggctgtct agtcctgtga ccaaatcctt caatagggga 720
gagtgctgat agtaaaagct t 741
<210> 24
<211> 220
<212> PRT
<213> 人类(Homo sapiens)
<400> 24
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Thr Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 25
<211> 741
<212> DNA
<213> 人类(Homo sapiens)
<220>
<221> source
<222> 1..741
<223> /分子_类型="未指定的 DNA"
/生物体="人类"
<400> 25
gcggccgcca tgaattttgg actgaggctg attttcctgg tgctgaccct gaaaggcgtc 60
cagtgtgaca tcgtgatgac acagtcacct gattccctgg cagtctccct gggcgagaga 120
gccactatga gttgcaagtc cagccagtct ctgctgtact ctagtaacca gaaaaattat 180
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accagggaat ctggcgtgcc cgaccggttc agcggctctg gaagtgggac agattttacc 300
ctgacaatct catccctgca agccgaggac ctggctatct actattgtca gcagtactat 360
acttatccac tgaccttcgg tgccggcacc aagctcgaga tcaaacgtac ggtcgcggcg 420
ccttctgtgt tcattttccc cccatctgat gaacagctga aatctggcac tgcttctgtg 480
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gagtgctgat agtaaaagct t 741
<210> 26
<211> 220
<212> PRT
<213> 人类(Homo sapiens)
<400> 26
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Leu Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Thr Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220

Claims (11)

1.组合，所述组合包含抗BAG3抗体或其片段和至少一种免疫检查点抑制剂。
2.根据权利要求1所述的组合，其特征在于，所述至少一种免疫检查点抑制剂是抗体、蛋白、小分子和/或si-RNA。
3.根据权利要求1所述的组合，其特征在于，所述抗BAG3抗体或其片段是人源化抗体，所述人源化抗体包含：
a)由SEQ ID NO:12编码的重链氨基酸序列或至少所述重链氨基酸序列的可变结构域或与所述重链氨基酸序列具有至少80％的序列同一性的氨基酸序列，和
b)由SEQ ID NO:20编码的轻链氨基酸序列或至少所述轻链氨基酸序列的可变结构域或与所述轻链氨基酸序列具有至少80％的序列同一性的氨基酸序列。
4.根据权利要求1所述的组合，其特征在于，所述免疫检查点抑制剂是与PD-1、PDL-1、A2AR、B7-H3、B7-H4、BTLA、CTLA-4、IDO、KIR、LAG3、TIM-3或VISTA蛋白，优选PD-1、PDL-1或CTLA-4蛋白结合的抗体或其片段。
5.根据任一前述权利要求所述的组合，所述组合包含一种抗BAG3抗体或其片段和一种抗PD-1抗体和/或一种抗PDL-1抗体或其片段。
6.根据权利要求5所述的组合，其特征在于，所述抗PD-1抗体选自纳武单抗和派姆单抗，优选为纳武单抗；并且所述抗PDL-1抗体选自阿特珠单抗、阿维鲁单抗和德瓦鲁单抗，优选为阿特珠单抗。
7.根据任一前述权利要求所述的组合，其特征在于，所述抗BAG3抗体或所述至少一种免疫检查点抑制剂是选自鼠抗体、重组抗体、人源化抗体或完全人类抗体、嵌合抗体、多特异性抗体、特别地双特异性抗体的单克隆抗体或其片段。
8.药物制剂，所述药物制剂包含根据权利要求1至6所述的组合和任选地至少一种药学上可接受的赋形剂或载体。
9.根据任一前述权利要求所述的组合/药物制剂，用于作为药物使用。
10.根据权利要求8所述的用于使用的组合/药物制剂在治疗选自以下的肿瘤性疾病中使用：胰腺癌、黑素瘤、膀胱癌、小细胞肺癌、头颈癌、乳腺癌、前列腺癌和结肠癌，优选胰腺癌。
11.根据权利要求9所述的用于使用的组合/药物制剂，其特征在于，所述抗BAG3抗体或其片段和所述至少一种免疫检查点抑制剂被同时、单独或顺序地施用。
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