EP2131864A2 - Composition angiogénique comprenant un complexe entre un polymère amphiphile et un pdgf - Google Patents

Composition angiogénique comprenant un complexe entre un polymère amphiphile et un pdgf

Info

Publication number
EP2131864A2
EP2131864A2 EP08737361A EP08737361A EP2131864A2 EP 2131864 A2 EP2131864 A2 EP 2131864A2 EP 08737361 A EP08737361 A EP 08737361A EP 08737361 A EP08737361 A EP 08737361A EP 2131864 A2 EP2131864 A2 EP 2131864A2
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
group
pdgf
polymer
branched
optionally
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
EP08737361A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Olivier Soula
Gérard Soula
Rémi SOULA
Rosy Eloy
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Adocia SAS
Original Assignee
Adocia SAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Adocia SAS filed Critical Adocia SAS
Publication of EP2131864A2 publication Critical patent/EP2131864A2/fr
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A61K38/1858—Platelet-derived growth factor [PDGF]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/61—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule the organic macromolecular compound being a polysaccharide or a derivative thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis

Definitions

  • the present invention relates to a novel angiogenic treatment based on PDGF, platelet derived growth factor.
  • This invention is useful for the treatment of ischemia problems.
  • ischemia problems include peripheral ischemia such as lower limb ischemia, pressure ulcers, venous ulcers, compression ulcers, myocardial ischemia, colitis, Raynaud's syndrome, osteonecrosis of the femoral head, certain ophthalmic problems of vascular origin, ischemia of the papilla of the eye, ulcerations of the cornea and certain complications occurring during diabetes, particularly diabetic foot ulcers.
  • Angiogenesis represents a major therapeutic challenge.
  • the only therapeutic agents available are vasodilator agents which temporarily increase the diameter and / or flow rate of existing vessels.
  • vasodilator agents which temporarily increase the diameter and / or flow rate of existing vessels.
  • the vascular surgery makes it possible to ensure by derivation or bridging a flow under the lesion, using prostheses or vascular grafts (respectively in synthetic or biological materials).
  • Angiogenesis is now well described on the scientific level and the growth factors involved are well known, among others in order of importance, VEGF, TNF ⁇ , TGF ⁇ , thrombin, proliferin, PDGF, MMP-1, MMP-2, MMP-9, IL-1, IL-4, IL-6, IL-8 and IL-1 3.
  • VEGF vascular endothelial growth factor
  • VEGF Vascular Endothelial Growth Factor VEGF
  • VEGF Vascular Endothelial Growth Factor
  • This growth factor has recently been tested on a diabetic mouse wound model by Genentech (Galiano, Robert D. et al., Am.J.Pathol 2004, 164 (Q), 1935-1947.).
  • This growth factor demonstrates much greater control efficacy in this model both in terms of granulation tissue formation, neovascularization and healing time. The results confirm the importance of neovascularization in the healing process.
  • VEGF is developed by Genentech for the treatment of diabetic foot ulcers.
  • VEGF is not approved to date and there is a risk of uncontrolled vascularisation.
  • VEGF is an initiator of angiogenesis but is not sufficient for the formation of a mature vascular network (Yancopoulos, GD et al., Nature 2000, 407 (6801), 242- 248.). Angiogenesis with VEGF is therefore transient.
  • the PDGF is the only growth factor approved for the civatrisation indication. It is produced by genetic recombination and is marketed by Johnson & Johnson under the name of Regranex for the treatment of diabetic foot ulcer.
  • PDGF-BB administered by gene therapy confirms the angiogenic potential of this growth factor.
  • This method has the advantage of sustaining PDGF production at the wound site for a relatively long time.
  • An application of this product to the wound of a diabetic mouse model has shown that granulation, neovascularization and epithelization are strongly stimulated (Keswani, Sundeep G. et al., Wound Repair Regen 2004, 12, 497). -504.).
  • Hsieh P. et al. Another type of PDGF administration has been published by Hsieh P. et al. These are PDGF-BB formulations with a synthetic oligopeptide capable of forming nanofibers that are injected into the myocardium (Hsieh, PC et al., J.Clin.Invest 2006, 116 (1), 237-248. ) (Hsieh,
  • nanofibers seem to have a power intrinsic angiogenesis (Narmoneva, Daria A. et al., Biomaterials 2005, 26, 4837-4846.).
  • PDGF by its intrinsic angiogenic activity and its proven nontoxic character after years of use in patients is a unique candidate for treating ischemia-related diseases.
  • the present invention provides stimulation of angiogenesis by comparison with equivalent doses of Regranex.
  • This angiogenic effect is observed during the tissue reconstruction of diabetic rat wounds, and is expressed by the haemorrhagic features of newly formed tissue, assessed by a semiquantitative score established by an independent observer, unaware of the treatment administered.
  • This angiogenic effect is dose dependent.
  • intense haemorrhagic phenomena were observed which resulted in the premature interruption of administration of the PDGF complex.
  • the dose-dependence observed indicates the pharmacological nature of the observed effect.
  • the observed effect is also confirmed by histological analysis of the vascular density of the neoformed tissue.
  • the present invention relates to the use of an amphiphilic polymer for the preparation of a therapeutic composition intended for promoting angiogenesis at its site of administration comprising a complex between a polymer and a PDGF characterized in that the polymer is amphiphilic.
  • the present invention relates to the use of an amphiphilic polymer for the preparation of a therapeutic composition for promoting angiogenesis at its site of administration comprising a complex between an amphiphilic polymer and a PDGF characterized by what the amphiphilic polymer is selected from the group:
  • amphiphilic polymers consisting of a hydrophilic polymer skeleton functionalized with hydrophobic substituents and hydrophilic groups of general formula I.
  • R and R 'identical or different represent a bond or a chain comprising between 1 and 18 carbons, linear, branched and / or unsaturated optionally comprising one or more heteroatoms, chosen from O, N and / or S,
  • F and F 'identical or different represent a function selected from the following functions ester, thioester, amide, carbonate, carbamate, ether, thioether or amine,
  • X represents a hydrophilic group selected from the group consisting of the following groups: o Carboxylate, o phosphate, o phosphonate
  • Y represents a hydrophilic group chosen from the group consisting of the following groups: phosphate, phosphonate
  • Hy represents hydrophobic selected from the group consisting of the following groups: linear or branched C8 to C30 alkyl, optionally unsaturated, and or containing one or more heteroatoms, chosen from O, N or S, linear or branched C8 to C18 alkylaryl or arylalkyl, optionally unsaturated and / or containing one or more heteroatoms, chosen from O, N or S, o polycycle en C8 to C30 optionally unsaturated,
  • n and o are between 1 and 3
  • h represents the mole fraction of hydrophobic unit with respect to a monomeric unit of between 0.01 and 0.5
  • x represents the mole fraction of hydrophilic groups with respect to a monomeric unit, including between 0 and 2.0
  • y represents the mole fraction of hydrophilic groups relative to a monomeric unit, between 0 and 0.5.
  • the present invention relates to the use of an amphiphilic polymer for the preparation of a therapeutic composition for promoting angiogenesis at its site of administration comprising a complex between an amphiphilic polymer and a PDGF characterized by the amphiphilic polymer is a difunctionalized dextran with at least one imidazolyl radical Im and at least one hydrophobic group Hy, said radical and group being each identical and / or different, and grafted or bound to dextran by one or more arms of R, Ri or Rh link and F, Fi or Fh functions, R being a bond or a chain comprising between 1 and 18 carbons, optionally branched and / or unsaturated comprising one or more heteroatoms, such as O, N or / and S,
  • R will be called Ri in the case of imidazoies and Rh in the case of hydrophobes, Ri and Rh being identical or different,
  • F being an ester, a thioester, an amide, a carbonate, a carbamate, an ether, a thioether or an amine
  • Fi in the case of imidazoles and Fh in the case of hydrophobes, Fi and Fh being identical or different.
  • Hy is a hydrophobic group that can be:
  • the PDGF is selected from the group of PDGFs (Platelet-Derivated Growth Factors).
  • the complex is characterized in that the PDGF is selected from the group consisting of human recombinant PDGFs having two B chains (rhPDGF-BB). In one embodiment, the PDGF is PDGF-BB.
  • Substituents for amphiphilic polymers consisting of a hydrophilic polymeric backbone functionalized with hydrophobic substituents and hydrophilic groups of general formula I.
  • polymers having a controlled distribution of substituents there may be mentioned, for example, alternating block copolymers and copolymers.
  • the polymer is chosen from polymers whose substituents are randomly distributed.
  • amphiphilic polymer is chosen from polyamino acids.
  • the polyamino acids are selected from the group consisting of polyglutamates or polyaspartates.
  • the polyamino acids are homopolyglutamates.
  • the polyamino acids are homopolyaspartates.
  • the polyamino acids are copolymers of aspartate and glutamate. These copolymers are either blocky or random.
  • the polymer is selected from polysaccharides.
  • the polysaccharides are selected from the group consisting of hyaluronans, alginates, chitosans, galacturonans, chondroitin sulfate, dextrans, celluloses.
  • the group of celluloses consists of celluloses functionalized with acids such as carboxymethylcellulose.
  • the polysaccharides are selected from the group consisting of dextrans, hyaluronans, alginates, chitosans. These different polysaccharides can be represented as follows:
  • R CH 2 COOH or H, Carboxymethyl Dextran
  • the polysaccharide may have an average degree of polymerization m of between 10 and 10,000.
  • it has an average degree of polymerization m of between 10 and 5000.
  • it has an average degree of polymerization m of between 10 and 500.
  • the hydrophobic group Hy is selected from the group consisting of fatty acids, fatty alcohols, fatty amines, benzyl amines, cholesterol derivatives and phenols.
  • the cholesterol derivative is cholic acid.
  • the phenol is alpha-tocopherol.
  • the difunctionalized dextran can meet the following general formulas:
  • n is between 1 and 3
  • i represents the mole fraction of imidazolyl radical relative to a monosaccharide unit, between 0.1 and 0.9
  • h represents the mole fraction of hydrophobic group relative to a monosaccharide unit of between 0 and 1; , 01 and 0.5.
  • n is between 1 and 3
  • i represents the mole fraction of imidazolyl radical relative to a monosaccharide unit, between 0 and 0.9
  • k represents the mole fraction of hydrophobic group with respect to a monosaccharide unit of between 0.01 and and 0.5.
  • dextran is characterized in that the group R 1, when not a bond, is selected from the following groups:
  • R2 being selected from alkyl radicals having from 1 to 18 carbon atoms.
  • the dextran of formulas II and III is characterized in that the group R1 is a bond.
  • the dextran of formulas II and III is characterized in that the imidazole-Ri group is chosen from the groups obtained by grafting an ester of histidine, histidinol, histidinamide or histamine.
  • imidazole derivatives can be represented as follows:
  • the dextran of formulas II and III is characterized in that Hy will be selected from the group consisting of fatty acids, fatty alcohols, fatty amines, cholesterol derivatives including cholic acid, phenols. including alpha-tocopherol.
  • the dextran of formulas II and III is characterized in that the Rh group, when not a bond, is selected from the groups:
  • the dextran of formulas II and III is characterized in that the Rh group is a bond.
  • the dextran of formulas II and III is characterized in that the group R 1, when not a bond, is selected in groups:
  • R1 H, CO
  • R2 being selected from alkyl radicals having 1 to 18 carbon atoms and the Rh group is a bond.
  • the dextran of formulas II and III is characterized in that the imidazole-Ri group is selected from histidine esters, histidinol, histidinamide or histamine and that Hy will be selected from the group consisting of fatty acids, fatty alcohols, fatty amines, cholesterol derivatives including cholic acid, phenols including alpha-tocopherol.
  • the dextran of formulas II and III may have a degree of polymerization m of between 10 and 10,000.
  • it has a degree of polymerization m of between 10 and 1000.
  • it has a degree of polymerization m of between 10 and 500.
  • the polymers used are synthesized according to the techniques known to those skilled in the art or purchased from suppliers such as, for example, Sigma-Aldrich, NOF Corp. or CarboMer Inc.
  • the PDGFs are chosen from human recombinant PDGFs, obtained according to the techniques known to those skilled in the art or purchased from suppliers, for example from the companies Gentaur (USA) or Research Diagnostic Inc. (USA).
  • the pharmaceutical composition according to the invention is preferably a composition with topical and / or topical application which can be present in the form of a gel, a cream, a solution, a spray or a paste, a patch or a bandage of the active dressing type.
  • composition according to the invention when in the form of a gel, it is for example a gel made from polymers such as carboxymethylcelluloses (CMC), vinyl polymers, PEO-PPO type copolymers. polysaccharides, PEOs, acrylamides or acrylamide derivatives.
  • CMC carboxymethylcelluloses
  • vinyl polymers vinyl polymers
  • PEO-PPO type copolymers polysaccharides, PEOs, acrylamides or acrylamide derivatives.
  • excipients may be used in this invention to adjust the formulation parameters such as a pH adjusting buffer, an isotonicity adjusting agent, preservatives such as methyl parahydroxybenzoate, propyl parahydroxybenzoate, m-cresol, or phenol or an antioxidant such as L-lysine hydrochloride.
  • the therapeutic composition is characterized in that it allows an administration of 10 ⁇ g to 10 mg per ml of PDGF. In another embodiment, the therapeutic composition allows an administration of 100 to 1000 ⁇ g / ml.
  • the present invention also relates to the use of an amphiphilic polymer-PDGF complex as defined above for the preparation of a therapeutic composition with angiogenic action.
  • the invention also relates to a therapeutic treatment method for human or veterinary use characterized in that it consists in locally administering an angiogenic therapeutic composition comprising a PDGF polymer complex characterized in that the polymer is amphiphilic.
  • the PDGF is selected from the group of PDGFs (Platelet-Derivated Growth Factors).
  • the amphiphilic polymer is chosen from the group: amphiphilic polymers consisting of a hydrophilic polymer skeleton functionalized with hydrophobic substituents and hydrophilic groups of general formula I.
  • R and R 'identical or different represent a bond or a chain comprising between 1 and 18 carbons, linear, branched and / or unsaturated optionally comprising one or more heteroatoms, chosen from O, N and / or S ,
  • F and F 'identical or different represent a function chosen from the following functions ester, thioester, amide, carbonate, carbamate, ether, thioether or amine,
  • X represents a hydrophilic group selected from the group consisting of the following groups: Carboxylate, phosphate, phosphonate,
  • Y represents a hydrophilic group selected from the group consisting of the following groups: o phosphate, o phosphonate, Hy represents hydrophobic selected from the group consisting of the following groups: linear or branched C8 to C30 alkyl, optionally unsaturated and / or containing one or more heteroatoms, chosen from O, N or S. o alkylaryl or linear or branched arylalkyl C8 to C18, optionally unsaturated and / or containing one or more heteroatoms selected from O, N or S. o C8 to C30 polycycle optionally unsaturated.
  • n and o are between 1 and 3
  • h represents the mole fraction of hydrophobic unit with respect to a monomeric unit of between 0.01 and 0.5
  • x represents the mole fraction of hydrophilic groups with respect to a monomeric unit, between 0 and 2.0.
  • y represents the mole fraction of hydrophilic groups with respect to a monomeric unit, between 0 and 0.5.
  • radical and group being each identical and / or different and grafted or bound to the dextran by one or more link arms R, Ri or Rh and functions F, Fi or Fh,
  • R being a bond or a chain comprising between 1 and 18 carbons, optionally branched and / or unsaturated comprising one or more heteroatoms, such as O, N or / and S,
  • R will be denoted Ri in the case of imidazoles and Rh in the case of hydrophobes, Ri and Rh being identical or different,
  • F being an ester, a thioester, an amide, a carbonate, a carbamate, an ether, a thioether or an amine
  • Fi in the case of imidazoles and Fh in the case of hydrophobes, Fi and Fh being identical or different.
  • Hy is a hydrophobic group that may be: linear or branched C8 to C30 alkyl, optionally unsaturated and / or containing one or more heteroatoms, such as O, N or S.
  • the use according to the invention makes it possible to obtain results which are said to be dose-dependent in terms of angiogenesis.
  • the dextran of average degree of polymerization 1 50, D40, (10 g, Sigma) is solubilized in 25 ml of DMSO at 40 ° C.
  • DMSO DMSO
  • succinic anhydride dissolved in DMF (6.2 g in 25 ml) and N-methylmorpholine, NMM, diluted in DMF (6.2 g in 25 ml).
  • the reaction medium is diluted with water (400 ml) and the polymer is purified by ultrafiltration.
  • the molar fraction of succinic ester formed per glycoside unit is 1.0 by 1 H NMR in D 2 O / NaOD.
  • Succinicaciddextran, sodium salt, in aqueous solution 350 g of a 28 mg / ml solution
  • aqueous solution 350 g of a 28 mg / ml solution
  • ion exchange resin 300 ml of wet resin, Purolite, C100H
  • the solution obtained is frozen and freeze-dried.
  • Lyophilized succinicaciddextran (8 g) was solubilized in DMF (1 ml) at room temperature. To the cooled solution at 0 ° C. are added ethyl chloroformate (3.3 g) and then NMM (3.1 g). The ethyl ester hydrochloride of tryptophan (3.7 g, Bachem) neutralized with TEA (1.4 g) in DMF (37 ml) is then added to the reaction medium at 40 ° C. and the medium is shaken for 45 minutes. After hydrolysis of the remaining activated acids, the polymer is diluted in water (530 ml) and the pH is fixed at 7 by adding sodium hydroxide. The polymer is then purified by ultrafiltration. The grafting reaction is summarized in the following scheme.
  • R H or COCH 5 2C u H ⁇ 2 9 C ⁇ OOH
  • R H or COCH 2 CH 2 COONa or COCH 2 CH 2 COTrpOEt
  • the acids of a carboxymethyldextran of average molar mass of about 40 kg / mol are activated in the form of mixed anhydrides according to the procedure described in Example 1.
  • the ethyl ester of tryptophan is grafted onto the acids of this polymer according to the procedure described in Example 1.
  • the mole fraction of unmodified acids per glycosidic unit is 0.55
  • Example 2 The polymer obtained in Example 2 is dissolved in water (30 mg / ml) and the pH is fixed at 12.5 by adding 1N sodium hydroxide. After stirring overnight at room temperature, the product is purified by ultrafiltration.
  • the grafting reaction is summarized in the following scheme.
  • the level of unmodified acids is zero.
  • the acids of a carboxymethyldextran of average molar mass of about 40 kg / mol are activated in the form of mixed anhydrides according to the procedure described in Example 1.
  • the dodecylamine and then the ethyl ester of histidine are added to the activated polymer solution and the reaction is carried out at 40 ° C. for 4 hours.
  • the grafting reaction is summarized in the following scheme.
  • the level of unmodified acids is 5%.
  • the acids of a carboxymethyldextran of average molar mass of about 40 kg / mol are activated in the form of mixed anhydrides according to the procedure described in Example 1. Benzylamine and then histidinamide are added to the activated polymer solution and the reaction is carried out at 40 ° C. for 4 hours.
  • the grafting reaction is summarized in the following scheme.
  • the level of unmodified acids is 5%.
  • the acids of a carboxymethyldextran of average molar mass of about 40 kg / mol are activated in the form of mixed anhydrides according to the procedure described in Example 1. Benzylamine and then the ethyl ester of histidine are added to the activated polymer solution and the reaction is carried out at 40 ° C. for 4 hours.
  • the grafting reaction is summarized in the following scheme.
  • the acids of a carboxymethyldextran of average molar mass of about 40 kg / mol are activated in the form of mixed anhydrides according to the procedure described in Example 1. Benzylamine and then the ethyl ester of histidine are added to the activated polymer solution and the reaction is carried out at 40 ° C. for 4 hours.
  • the grafting reaction is summarized in the following scheme.
  • the level of unmodified acids is 35%.
  • PDGF-BB is produced by Peprotech or hnExport.
  • PDGF-BB is either produced in yeast (Saccharomyces Cerevisiae) or in bacteria (Escherichia CoIi).
  • a sterile Falcon tube 1. 1 mg of freeze-dried PDGF-BB are solubilized in 3.55 ml of 10 mM sodium acetate buffer pH 5.
  • 3.14 g of the amphiphilic polymer obtained in Example 2 are solubilized in 1.15 g of sterile water to which a solution of sterile 0.9% NaCl water, bidistilled sterile water and 1N NaOH is added to adjust the polymer concentration to 200 mg / ml, the pH at 7.4 and the osmolality at 300 mOsm.
  • the 3.55 ml of the first solution are added to 3.55 ml of the second solution to obtain a complex whose concentration of PDGF-BB is 1 mg / ml and that of the polymer is 100. mg / ml.
  • the solution obtained is filtered on 0.22 ⁇ m before being distributed in two sterile Falcons tubes.
  • a sterile Falcon tube 7.1 mg of freeze-dried PDGF-BB are solubilized in 3.55 ml of 10 mM sodium acetate buffer pH 5.
  • 1. 57 g of the amphiphilic polymer obtained in Example 2 are solubilized in 1.15 g of sterile water to which are added a solution of sterile water 0.9% NaCl, bidistilled sterile water and 1 N NaOH to adjust the polymer concentration at 100 mg / ml, the pH at 7.4 and the osmolality at 300 mOsm.
  • PDGF-BB In a sterile Falcon tube, 14.2 mg of freeze-dried PDGF-BB are solubilized in 3.55 ml of 10 mM sodium acetate buffer pH 5. In a second tube, 3.14 g of the amphiphilic polymer obtained in Example 2 are solubilized in 1.15 g of sterile water to which a solution of sterile 0.9% NaCl water, bidistilled sterile water and 1N NaOH is added to adjust the polymer concentration to 200 mg / ml, the pH at 7.4 and the osmolality at 300 mOsm.
  • a sterile Falcon tube 28.4 mg of freeze-dried PDGF-BB are solubilized in 3.55 ml of 10 mM sodium acetate buffer pH 5.
  • 3.14 g of the amphiphilic polymer obtained in Example 2 are solubilized in 1.15 g of sterile water to which are added a solution of sterile water 0.9% NaCl, bidistilled sterile water and 1 N NaOH to adjust the polymer concentration at 200 mg / ml, the pH at 7.4 and the osmolality at 300 mOsm.
  • the surprising angiogenic activity obtained by the use of PDGF complex according to the invention is demonstrated in an in vivo model of cutaneous cicatrization.
  • the formulations had to be applied to the wounds every 2 days for 22 days after wound cleaning.
  • the reference group is treated by the commercial formulation of
  • PDGF-BB in gel form Regranex 5 (Johnson & Johnson), with a dose of 500 ⁇ l per application.
  • the group treated with the complex described in Example 10 received a dose of 100 ⁇ l, twice as much PDGF-BB as in the group treated with Regranex.
  • the haemorrhagic score is assessed by visual observation on a qualitative linear scale from 0 to 4, where 0 represents the absence of bleeding and 4 bleeding maximum. At the 8 th day after excision and the start of treatment or after 4 product applications, this score averaged 2.8 in the group treated with PDGF-BB complex against 1, 3 for the group treated with Regranex . This difference is significant from a statistical point of view.
  • a PDGF-BB complex formulation as described in Example 10 was applied according to 2 different protocols.
  • Group 1 consists of 2 applications of 100 ⁇ l at day 0 and 90 ⁇ at day 2 after wound cleansing. The wounds were then simply cleaned with saline every 2 days for 16 days.
  • Group 2 consists of 4 applications of 100 ⁇ l at day 0, 90 ⁇ at day 2, 80 ⁇ at day 4 and 70 ⁇ at day 6. The wounds were then cleaned with saline solution. every 2 days for 16 days.
  • the volume of the PDGF-BB complex solution is decreasing to maintain a constant dose per area area taking into account the reduction in wound area.
  • hemorrhagic score averaged 2.2 in the group treated with 4 times the PDGF-BB complex against 1, 4 for the group treated 2 times with the same complex PDGF-BB. This difference is significant from a statistical point of view.
  • the PDGF-BB complex reveals a dose-dependent angiogenic activity applied unlike Regranex for which no dose effect is reported in the literature.
  • Three complex formulations with PDGF-BB concentrations of 1, 2 and 4 mg / ml were prepared with the same amphiphilic polymer at 100 mg / ml as described in Examples 10, 1 2 and 1 3.
  • the treatment with the three PDGF-BB complex formulations is the same and consists of 3 applications of 90 ⁇ l at day 0, 65 ⁇ at day 2 and 55 ⁇ at day 4.
  • the haemorrhagic score measured at day 7 shows a dose-dependent effect of PDGF-BB with the complex.
  • the single dose gives a haemorrhagic score of 1, the double dose of 2, 1 and the quadruple dose of 2.5.
  • the treatment with the PDGF-BB complex described in Example 11 is to apply after cleaning the wound 100 ⁇ l at day 0 and 90 ⁇ ⁇ at day 2.
  • the wounds were simply cleaned with a saline solution.
  • Treatment with Regranex consists of 3 applications of 500 ⁇ at day 0, 450 ⁇ at day 2 and 400 ⁇ at day 4 after wound cleansing.
  • the rats were euthanized at day 6 and histological sections of the wounds were taken. Photographs of histological sections are given in Figure 1.
  • a quantification by image analysis makes it possible to estimate at 3.6% the surface level of the new blood vessels formed with respect to the neoformed dermal surface in the case of the PDGF-BB complex (Photo B) and at 1 .8% for Regranex (Photo A).
  • This histological analysis at day 6 shows the higher angiogenic potency of the PDGF-BB complex compared to a simple formulation of the protein.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

La présente invention concerne l'utilisation d'un polymère amphiphile pour la préparation d'une composition thérapeutique destinée à favoriser l'angiogénèse sur son site d'administration comprenant un complexe entre un polymère et un PDGF caractérisée en ce que le polymère est amphiphile. Dans un mode de réalisation le PDGF est choisi dans le groupe des PDGFs (Platelet-Derivated Growth Factors) et le polymère amphiphile est choisi dans le groupe : des polymères amphiphiles constitués d'un squelette polymérique hydrophile fonctionnalisé par des substituants hydrophobes et des groupements hydrophiles de formule générale (I). L'invention concerne également l'utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la composition thérapeutique est sous forme d'un gel, d'une crème, d'une solution, d'un spray, d'une pâte ou d'un patch ou d'un pansement.

Description

Composition angiogénique
La présente invention concerne un nouveau traitement angiogénique à base de PDGF, platelet derived growth factor.
Cette invention est utile pour le traitement des problèmes d'ischémie. On pense notamment à l'ischémie périphérique comme l'ischémie d'un membre inférieur, aux escarres, aux ulcères veineux, aux ulcères de compression, à l'ischémie myocardique, à la colite, au syndrome de Raynaud, à l'ostéonécrose de la tête fémorale, à certains problèmes ophtalmiques d'origine vasculaire, à l'ischémie de la papille de l'oeil, aux ulcérations de la cornée et à certaines complications survenant lors du diabète en particulier des ulcérations du pied diabétique.
L'angiogénèse représente un défi thérapeutique majeur. D'une part, il y a un enjeu parfois vital de revasculariser des organes, des tissus et d'autre part, il n'existe aucun moyen pharmacologique de créer de nouveaux vaisseaux. Les seuls agents thérapeutiques disponibles sont les agents vasodilatateurs qui augmentent temporairement le diamètre et / ou le débit de vaisseaux existants. Créer de novo un vaisseau reste encore aujourd'hui un objectif diificile non encore achevé et lorsque le flux sanguin est réduit du fait de lésions de la paroi vasculaire (athérome, athérosclérose), la chirurgie vasculaire permet d'assurer par dérivation ou pontage un flux sous la lésion, en utilisant des prothèses ou des greffes vasculaires (respectivement en matériaux de synthèse ou biologiques). Seuls des vaisseaux de diamètre égal ou supérieur à 4 mm sont accessibles à ces remplacements malgré l'utilisation de techniques microchirurgicales. La revascularisation périphérique des tissus, qui dépend de capillaires de quelques centaines de microns de diamètre, ne peut donc pas être envisagée par ces techniques chirurgicales et seule la stimulation d'une croissance de néovaisseaux ou angiogénèse peut être envisagée.
L'angiogénèse est aujourd'hui bien décrite sur le plan scientifique et les facteurs de croissance impliqués sont bien connus avec entre autres par ordre d'importance, le VEGF, le TNFα, le TGFα, la thrombine, la proliférine, le PDGF, la MMP-1 , la MMP-2, la MMP-9, l'IL-1 , l'IL-4, riL-6, l'IL-8 et riL-1 3. De nombreux groupes scientifiques académiques et industriels travaillent à une utilisation thérapeutique de ces protéines. Pour deux de ces facteurs de croissance, leur intérêt a été démontré en clinique.
Le plus efficace de ces facteurs de croissance angiogéniques est le VEGF, Vascular Endothelial Growth Factor VEGF (Pandya, N. M. et al., Vascul.Pharmacol. 2006, 44 (5), 265-274.). Ce facteur de croissance a été récemment testé sur un modèle de plaie de souris diabétique par Genentech (Galiano, Robert D. ét al., Am.J.Pathol. 2004, 164 (Q), 1935-1947.). Ce facteur de croissance démontre une efficacité bien supérieure au contrôle dans ce modèle à la fois en terme de formation du tissu de granulation, de néovascularisation et de temps de cicatrisation. Les résultats confirment l'importance de la néovascularisation dans le processus de cicatrisation. Le VEGF est développé par Genentech pour le traitement des ulcères de pied diabétique. Les résultats de phase clinique l/ll ont montré un taux de cicatrisation de 41 % au bout de 6 semaines contre 26% pour les traitements conventionnels sans facteur de croissance. Cependant le VEGF n'est pas approuvé à ce jour et des risques de vascularisation non contrôlée sont possibles. De plus, il a été démontré que le VEGF est un initiateur de l'angiogénèse mais n'est pas suffisant pour la formation d'un réseau vasculaire mature (Yancopoulos, G. D. et al., Nature 2000, 407 (6801 ), 242-248.). L'angiogénèse avec le VEGF est donc transitoire.
Le PDGF est le seul facteur de croissance qui soit approuvé dans l'indication civatrisation. Il est produit par recombinaison génétique et est commercialisé par Johnson & Johnson sous le nom de Regranex pour le traitement de l'ulcère de pied diabétique.
Dans le dossier déposé par Johnson & Johnson pour l'approbation de Regranex, (Tiwari, Jawahar, PLA 96-1408 REGRANEX (becaplermin) Gel (recombinant human platelet-deήved growth factor) in the treatment of diabetic foot ulcers. 5 Sept. 1997, Food and Drug Administration), il est intéressant de noter qu'au cours des essais cliniques, Johnson & Johnson a décrit un pouvoir angiogénique sans pouvoir montrer un véritable effet-dose au-delà de 0,01 %, en raison vraisemblablement d'un manque de solubilité.
Le PDGF-BB administré par thérapie génique confirme le potentiel angiogénique de ce facteur de croissance.
En effet l'administration du PDGF par thérapie génique donne de biens meilleurs résultats sur l'angiogénèse. Il s'agit d'une administration de gènes encodant le PDGF-B par un adénovecteur formulé dans une matrice de collagène. Cette thérapie génique, Excellarate, est développée par Tissue Repair Company acquise récemment par Cardium Therapeutics.
Cette méthode a l'avantage d'entretenir une production de PDGF sur le site de la plaie sur une durée assez longue. Une application de ce produit sur la plaie d'un modèle de souris diabétique a montré que la granulation, la néovascularisation ainsi que l'épithélisation sont fortement stimulées (Keswani, Sundeep G. et al., Wound Repair Regen. 2004, 12, 497-504.).
D'autres chercheurs japonais, équipe de Y. Yonemitsu, ont montré que la microangiopathie du membre inférieur du diabétique est une maladie causée par le dérèglement du couple PDGF-BB/Protéine C kinase et non pas due à un défaut d'expression des autres facteurs angiogéniques en particulier VEGF, HGF, FGF-2, Angiopoïétine-1 et -2 (Tanii, Mitsugu et al., Circ.Res, 2006, 98, 55-62.). Dans ces travaux, l'approche est à nouveau la thérapie génique.
Cependant la thérapie génique est plus difficile à développer dans un avenir proche à cause de ses risques potentiels en particulier du fait de la transfection non sélective des cellules.
Un autre type d'administration du PDGF a été publié par Hsieh P. et al. Il s'agit de formulations du PDGF-BB avec un oligopeptide synthétique capable de former des nanofibres qui sont injectées dans le myocarde (Hsieh, P. C. et al., J.Clin.Invest. 2006, 116 (1 ), 237-248.)(Hsieh,
Patrick C. H. et al., Circulation 2006, 114, 637-644.). Leur technique permet une libération du PDGF sur 14 jours. Une régénération du myocarde sur un modèle de rat porteur d'un infarctus a été obtenue. Selon les mêmes auteurs, dans cette formulation, les nanofibres semblent avoir un pouvoir angiogénique intrinsèque (Narmoneva, Daria A. et al., Biomaterials 2005, 26, 4837-4846.).
Ainsi, il apparaît que le PDGF par son activité angiogénique intrinsèque et par son caractère non toxique prouvé après des années d'utilisation chez les patients est un candidat unique pour traiter les maladies liées à des ischémies.
Mais, il existe un besoin d'une méthode et/ou d'un moyen d'administration locale et/ou topique du PDGF permettant d'augmenter l'activité angiogénique in vivo afin d'obtenir une densité de vaisseaux significative et susceptible de permettre la formation d'une structure néovasculaire fonctionnelle pérenne.
II y a également un besoin insatisfait d'une méthode et/ou d'un moyen d'administration locale et/ou topique du PDGF permettant d'augmenter les doses de PDGF afin de stimuler plus efficacement l'angiogénèse et de s'affranchir des problèmes de solubilité préalablement observés.
La présente invention permet d'obtenir une stimulation de l'angiogénèse par comparaison avec des doses équivalentes de Regranex . Cet effet angiogénique est observé au cours de la reconstruction tissulaire de plaies de rat diabétique, et s'exprime par les caractères hémorragiques du tissu néoformé, appréciés par un score semiquantitatif établi par un observateur indépendant, n'ayant pas connaissance du traitement administré. Cet effet angiogénique est dose dépendant. En effet, aux mêmes doses que Regranex, on a observé des phénomènes hémorragiques intenses ayant abouti à l'interruption prématurée de l'administration du complexe du PDGF. La dose-dépendance observée signe la nature pharmacologique de l'effet observé.
L'effet observé est également confirmé par l'analyse histologique de la densité vasculaire du tissu néoformé.
La présente invention concerne l'utilisation d'un polymère amphiphile pour la préparation d'une composition thérapeutique destinée à favoriser l'angiogénèse sur son site d'administration comprenant un complexe entre un polymère et un PDGF caractérisé en ce que le polymère est amphiphile.
Dans un mode de réalisation, la présente invention concerne l'utilisation d'un polymère amphiphile pour la préparation d'une composition thérapeutique destinée à favoriser l'angiogénèse sur son site d'administration comprenant un complexe entre un polymère amphiphile et un PDGF caractérisé en ce que le polymère amphiphile est choisi dans le groupe :
- des polymères amphiphiles constitués d'un squelette polymérique hydrophile fonctionnalisé par des substituants hydrophobes et des groupements hydrophiles de formule générale I.
DP = m unités monomère
-formule I dans laquelle,
R et R' identiques ou différents représentent une liaison ou une chaîne comprenant entre 1 et 1 8 carbones, linéaire, branchée et/ou insaturée comprenant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes, choisis parmi O, N ou/et S,
F et F' identiques ou différents représentent une fonction choisie parmi les fonctions suivantes ester, thioester, amide, carbonate, carbamate, éther, thioéther ou aminé,
X représente un groupe hydrophile choisi dans le groupe constitué par les groupes suivants : o Carboxylate, o phosphate, o phosphonate, • Y représente un groupe hydrophile choisi dans le groupe constitué par les groupes suivants : o phosphate, o phosphonate, • Hy représente hydrophobe choisi dans le groupe constitué par les groupes suivants : o alkyle linéaire ou ramifié en C8 à C30, éventuellement insaturé et/ou contenant un ou plusieurs hétéroatomes, choisis parmi O, N ou S, o alkylaryle ou arylalkyle linéaire ou ramifié en C8 à C1 8, éventuellement insaturé et/ou contenant un ou plusieurs hétéroatomes, choisis parmi O, N ou S, o polycycle en C8 à C30 éventuellement insaturé,
n et o sont compris entre 1 et 3, h représente la fraction molaire de motif hydrophobe par rapport à une unité monomérique comprise entre 0,01 et 0,5, x représente la fraction molaire de groupements hydrophiles par rapport à une unité monomérique, comprise entre 0 et 2,0, y représente la fraction molaire de groupements hydrophiles par rapport à une unité monomérique, comprise entre 0 et 0,5.
Dans un mode de réalisation, la présente invention concerne l'utilisation d!un polymère amphiphile pour la préparation d'une composition thérapeutique destinée à favoriser l'angiogénèse sur son site d'administration comprenant un complexe entre un polymère amphiphile et un PDGF caractérisé en ce que le polymère amphiphile est un dextran bifonctionnalisé par au moins un radical imidazolyle Im et au moins un groupement hydrophobe Hy, lesdits radical et groupement étant chacuns, identiques et/ou différents, et, greffés ou liés au dextran par un ou plusieurs bras de liaison R, Ri ou Rh et fonctions F, Fi ou Fh, • R étant une liaison ou une chaîne comprenant entre 1 et 18 carbones, éventuellement branchée et/ou insaturée comprenant un ou plusieurs hétéroatomes, tels que O, N ou/et S,
R sera dénommé Ri dans le cas des imidazoies et Rh dans le cas des hydrophobes, Ri et Rh étant identiques ou différents,
• F étant un ester, un thioester, un amide, un carbonate, un carbamate, un éther, un thioéther, une aminé,
F sera dénommé Fi dans le cas des imidazoles et Fh dans le cas des hydrophobes, Fi et Fh étant identiques ou différents.
• Im étant un radical imidazolyle, éventuellement substitué sur l'un des carbones par un groupement alkyle (Alky) en C1 à C4, de formule
• Hy étant un groupement hydrophobe pouvant être :
• un alkyle linéaire ou ramifié en C8 à C30, éventuellement insaturé et/ou contenant un ou plusieurs hétéroatomes, tels que O, N ou S.
• un alkylaryle ou un arylalkyle linéaire ou ramifié en C8 à C30, éventuellement insaturé et/ou contenant éventuellement un hétéroatome
• un polycycle en C8 à C30 éventuellement insaturé.
Dans un mode de réalisation, le PDGF est choisi dans le groupe des PDGFs (Platelet-Derivated Growth Factors).
Dans un mode de réalisation, le complexe est caractérisé en ce que le PDGF est choisi dans le groupe constitué par les PDGFs recombinants humains comportant deux chaînes B (rhPDGF-BB). Dans un mode de réalisation, le PDGF est le PDGF-BB.
Les substituants des polymères amphiphiles constitués d'un squelette polymérique hydrophile fonctionnalisé par des substituants hydrophobes et des groupements hydrophiles de formule générale I.
DP = m unités monomère
formule I
sont répartis de façon contrôlée ou statistique. Parmi les polymères ayant une répartition contrôlée des substituants, on peut citer, par exemple, les copolymères à blocs et les copolymères alternés.
Copolymère statistique
* — Monomer — Monomer Monomer -Monomer Monomer Monomer-
Hydrophobe Hydrophobe Hydrophobe
Copolymère à blocs
* — Monomer — Monomer Monomer — Monomer Monomer Monomer — *
Hydrophobe Hydrophobe Hydrophobe
Copolymère alterné
* — Monomer — Monomer Monomer Monomer Monomer Monomer — *
Hydrophobe Hydrophobe Hydrophobe Ainsi dans un mode de réalisation, le polymère est choisi parmi les polymères dont les substituants sont répartis de façon statistique.
Dans un mode de réalisation, le polymère amphiphile est choisi parmi les polyaminoacides.
Dans un mode de réalisation, les polyaminoacides sont choisis dans le groupe constitué par les polyglutamates ou les polyaspartates.
Dans un mode de réalisation, les polyaminoacides sont des homopolyglutamates.
Dans un mode de réalisation, les polyaminoacides sont des homopolyaspartates.
Dans un mode de réalisation, les polyaminoacides sont des copolymères d'aspartate et de glutamate. Ces copolymères sont soit à blocs, soit statistiques.
Dans un mode de réalisation, le polymère est choisi parmi les polysaccharides.
Dans un mode de réalisation, les polysaccharides sont choisis dans le groupe constitué par les hyaluronanes, les alginates, les chitosans, les galacturonanes, la chondroitin-sulfate, les dextrans, les celluloses.
Le groupe des celluloses est constitué des celluloses fonctionnalisées par des acides comme la carboxyméthylcellulose.
Dans un mode de réalisation, les polysaccharides sont choisis dans le groupe constitué par les dextrans, les hyaluronanes, les alginates, les chitosans. Ces différents polysaccharides peuvent être représentés comme suit :
Galacturonane
Hyaluronane
R = H, Dextran
R = CH2COOH ou H, Carboxymethyl Dextran
Chitosan
Alginate Le polysaccharide peut avoir un degré de polymérisation moyen m compris entre 10 et 10000.
Dans un mode de réalisation, il a un degré de polymérisation moyen m compris entre 10 et 5000.
Dans un autre mode de réalisation, il a un degré de polymérisation moyen m compris entre 10 et 500.
Dans un mode de réalisation, le groupe hydrophobe Hy est choisi dans le groupe constitué par les acides gras, les alcools gras, les aminés grasses, les aminés benzyliques, les dérivés du cholestérol et les phénols.
Dans un mode de réalisation, le dérivé du cholestérol est l'acide cholique.
Dans un autre mode de réalisation, le phénol est l'alpha- tocophérol.
Le dextran bifonctionnalisé peut répondre aux formules générales suivantes :
Formule II
n est compris entre 1 et 3, i représente la fraction molaire de radical imidazolyle par rapport à une unité monosaccharidique, comprise entre 0, 1 et 0,9, h représente la fraction molaire de groupement hydrophobe par rapport à une unité monosaccharidique comprise entre 0,01 et 0,5.
Formule III
n est compris entre 1 et 3, i représente la fraction molaire de radical imidazolyle par rapport à une unité monosaccharidique, comprise entre 0 et 0,9, k représente la fraction molaire de groupement hydrophobe par rapport à une unité monosaccharidique comprise entre 0,01 et 0,5.
Dans un mode de réalisation, dans les formules II et III, le dextran est caractérisé en ce que le groupe Ri, lorsqu'il n'est pas une liaison est choisi dans les groupes suivants :
R1 = H, COOH, COOR2, CONH2 R3 = H,R2, Hy
R2 étant choisi parmi les radicaux alkyle comprenant de 1 à 18 atomes de carbone.
Dans un mode de réalisation, le dextran des formules II et III est caractérisé en ce que le groupe Ri est une liaison.
Dans un mode de réalisation, le dextran des formules II et III est caractérisé en ce que le groupement Imidazole-Ri est choisi parmi les groupements obtenus par greffage d'un ester de l'histidine, de l'histidinol, de l'histidinamide ou de l'histamine. Ces dérivés de l'imidazole peuvent être représentés comme suit :
Ester de l'histidine Histidinol Histidinamide Histamme
R=Et, [93923-84-3] [1596-64-1] [71666-95-0] [51-45-6]
R=Me, [7389-87-9]
Dans un mode de réalisation, le dextran des formules II et III est caractérisé en ce que Hy sera choisi dans le groupe constitué par les acides gras, les alcools gras, les aminés grasses, les dérivés du cholestérol dont l'acide cholique, les phénols dont l'alpha-tocophérol.
Dans un mode de réalisation, le dextran des formules II et III est caractérisé en ce que le groupe Rh, lorsqu'il n'est pas une liaison est choisi dans les groupes :
Dans un mode de réalisation, le dextran des formules II et III est caractérisé en ce que le groupe Rh est une liaison.
Dans un mode de réalisation, le dextran des formules II et III est caractérisé en ce que le groupe Ri, lorsqu'il n'est pas une liaison, est choisi dans les groupes :
R1 = H, CO
R2 étant choisi parmi les radicaux alkyle comprenant de 1 à 1 8 atomes de carbone et le groupe Rh est une liaison.
Dans un mode de réalisation, le dextran des formules II et III est caractérisé en ce que le groupement Imidazole-Ri est choisi parmi les esters de l'histidine, l'histidinol, l'histidinamide ou l'histamine et en ce que Hy sera choisi dans le groupe constitué par les acides gras, les alcools gras, les aminés grasses, les dérivés du cholestérol dont l'acide cholique, les phénols dont l'alpha-tocophérol.
Le dextran des formules II et III peut avoir un degré de polymérisation m compris entre 10 et 10000.
Dans un mode de réalisation, il a un degré de polymérisation m compris entre 10 et 1000.
Dans un autre mode de réalisation, il a un degré de polymérisation m compris entre 10 et 500.
Les polymères utilisés sont synthétisés selon les techniques connues de l'Homme de l'art ou achetés auprès de fournisseurs comme par exemple Sigma-AIdrich, NOF Corp. ou CarboMer Inc.
Les PDGF sont choisis parmi les PDGF recombinants humains, obtenus selon les techniques connues de l'Homme de l'art ou achetés auprès de fournisseurs comme par exemple auprès des sociétés Gentaur (USA) ou Research Diagnostic Inc. (USA).
La composition pharmaceutique selon l'invention est de préférence une composition à application locale et/ou topique pouvant se présenter sous la forme d'un gel, de crème, d'une solution, d'un spray ou d'une pâte, d'un patch ou d'un pansement de type pansement actif.
La nature des excipients susceptibles d'être formulés avec le complexe polymère amphiphile-PDGF selon l'invention est choisie en fonction de sa forme de présentation selon les connaissances générales du galéniste.
Ainsi, lorsque la composition selon l'invention est sous la forme d'un gel, celui-ci est par exemple un gel réalisé à partir de polymères tels que les carboxyméthylcelluloses (CMC), les polymères vinyliques, les copolymères de type PEO-PPO, les polysaccharides, les PEO, les acrylamides ou les dérivés d'acrylamides.
D'autres excipients peuvent être utilisés dans cette invention afin d'ajuster les paramètres de la formulation comme un tampon pour ajuster le pH, un agent permettant d'ajuster l'isotonicité, des conservateurs comme le parahydroxybenzoate de méthyle, le parahydroxybenzoate de propyle, le m-crésol, ou le phénol ou encore un agent anti-oxydant comme le chlorhydrate de L-lysine.
Selon l'invention, la composition thérapeutique est caractérisée en ce qu'elle permet une administration de 10 μg à 10 mg par ml de PDGF. Dans un autre mode de réalisation, la composition thérapeutique permet une administration de 100 à 1000 μg/ml.
La présente invention concerne également l'utilisation d'un complexe polymère amphiphile-PDGF tel que précédemment défini pour la préparation d'une composition thérapeutique à action angiogénique.
L'invention concerne également une méthode de traitement thérapeutique à usage humain ou vétérinaire caractérisée en ce qu'elle consiste à administrer localement une composition thérapeutique angiogénique comprenant un complexe polymère PDGF caractérisé en ce que le polymère est amphiphile.
Dans un mode de réalisation, le PDGF est choisi dans le groupe des PDGFs (Platelet-Derivated Growth Factors). Dans un autre mode de réalisation, le polymère amphiphile est choisi dans le groupe : des polymères amphiphiles constitués d'un squelette polymérique hydrophile fonctionnalisé par des substituants hydrophobes et des groupements hydrophiles de formule générale I.
DP = m unités monomère
formule I dans laquelle, • R et R' identiques ou différents représentent une liaison ou une chaîne comprenant entre 1 et 1 8 carbones, linéaire, branchée et/ou insaturée comprenant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes, choisis parmi O, N ou/et S,
• F et F' identiques ou différents représentent une fonction choisie parmi les fonction suivantes ester, thioester, amide, carbonate, carbamate, éther, thioéther ou aminé,
• X représente un groupe hydrophile choisi dans le groupe constitué par les groupes suivants : o Carboxylate, o phosphate, o phosphonate,
• Y représente un groupe hydrophile choisi dans le groupe constitué par les groupes suivants : o phosphate, o phosphonate, • Hy représente hydrophobe choisi dans le groupe constitué par les groupes suivants : o alkyle linéaire ou ramifié en C8 à C30, éventuellement insaturé et/ou contenant un ou plusieurs hétéroatomes, choisis parmi O, N ou S. o alkylaryl ou arylalkyle linéaire ou ramifié en C8 à C18, éventuellement insaturé et/ou contenant un ou plusieurs hétéroatomes, choisis parmi 0, N ou S. o polycycle en C8 à C30 éventuellement insaturé.
n et o sont compris entre 1 et 3, h représente la fraction molaire de motif hydrophobe par rapport à une unité monomérique comprise entre 0,01 et 0,5 x représente la fraction molaire de groupements hydrophiles par rapport à une unité monomérique, comprise entre 0 et 2,0. y représente la fraction molaire de groupements hydrophiles par rapport à une unité monomérique, comprise entre 0 et 0,5.
- ou dans le groupe des dextrans bifonctionnalisés par au moins un radical imidazolyle Im et au moins un groupement hydrophobe Hy, lesdits radical et groupement étant chacun, identique et/ou différent, et, greffés ou liés au dextran par un ou plusieurs bras de liaison R, Ri ou Rh et fonctions F, Fi ou Fh,
• R étant une liaison ou une chaîne comprenant entre 1 et 18 carbones, éventuellement branchée et/ou insaturée comprenant un ou plusieurs hétéroatomes, tels que O, N ou/et S,
R sera dénommé Ri dans le cas des imidazoles et Rh dans le cas des hydrophobes, Ri et Rh étant identiques ou différents,
• F étant un ester, un thioester, un amide, un carbonate, un carbamate, un éther, un thioéther, une aminé, F sera dénommé Fi dans le cas des imidazoles et Fh dans le cas des hydrophobes, Fi et Fh étant identiques ou différents.
• Im étant un radical imidazolyle, éventuellement substitué sur l'un des carbones par un groupement alkyle (Alky) en C1 à C4, de formule
• Hy étant un groupement hydrophobe pouvant être : • un alkyle linéaire ou ramifié en C8 à C30, éventuellement insaturé et/ou contenant un ou plusieurs hétéroatomes, tels que O, N ou S.
• un alkylaryle ou un arylalkyle linéaire ou ramifié en C8 à C30, éventuellement insaturé et/ou contenant éventuellement un hétéroatome
• un polycycle en C8 à C30 éventuellement insaturé.
Des exemples de préparation, des différents complexes selon l'invention sont décrits dans la demande de brevet IB 2006/002666 au nom de la demanderesse.
L'utilisation selon l'invention permet d'obtenir des résultats qui sont dits dose-dépendants en terme d'angiogénèse.
L'activité angiogénique surprenante obtenue par l'utilisation selon l'invention est démontrée dans les exemples qui suivent. Exemples
A Préparation des polymères amphiphiles Exemple 1 :
Synthèse d'un succinicaciddextran modifié par Tester éthylique du tryptophane
Le dextran de degré de polymérisation moyen 1 50, D40, (10 g, Sigma) est solubilisé dans 25 ml de DMSO à 400C. A cette solution sont ajoutés l'anhydride succinique en solution dans du DMF (6,2 g dans 25 ml) et la N- MéthylMorpholine, NMM, diluée dans le DMF (6,2 g dans 25 ml). Après 1 heure de réaction, le milieu réactionnel est dilué dans de l'eau (400 ml) et le polymère est purifié par ultrafiltration. La fraction molaire d'ester succinique formé par unité glycosidique est de 1 ,0 d'après la RMN 1H dans D2O/NaOD.
Du succinicaciddextran, sel de sodium, en solution aqueuse (350 g d'une solution à 28 mg/ml) est acidifié sur résine échangeuse d'ions (300 ml de résine humide, Purolite, C100H). La solution obtenue est congelée puis lyophilisée.
Du succinicaciddextran lyophilisé (8 g) est solubilisé dans le DMF (1 15 ml) à température ambiante. A la solution refroidie à 00C, sont ajoutés le chloroformate d'éthyle (3,3 g) puis la NMM (3, 1 g). Le chlorhydrate de l'ester éthylique du tryptophane (3,7 g, Bachem) neutralisé par la TEA (1 ,4 g) dans le DMF (37 ml) est ensuite ajouté au milieu réactionnel à 40C et le milieu est agité pendant 45 minutes. Après hydrolyse des acides activés restants, le polymère est dilué dans l'eau (530 ml) et le pH est fixé à 7 par ajout de soude. Le polymère est ensuite purifié par ultrafiltration. La réaction de greffage est résumée dans le schéma suivant.
R = H ou COCH5 2CuHπ29Cι OOH
R = H ou COCH2CH2COONa ou COCH2CH2COTrpOEt
La fraction molaire des acides modifiés par l'ester éthylique du tryptophane est de 0,45 d'après la RMN 1H dans DaO/NaOD (h = 0,45). La fraction molaire des acides non modifiés par unité glycosidique est de 0,55 (x = 0, 55).
Exemple 2 :
Synthèse du carboxyméthyldextran modifié par l'ester éthylique du tryptophane
Les acides d'un carboxyméthyldextran de masse molaire moyenne d'environ 40 kg/mol (fraction molaire moyenne de 1 ,0 acide par unité glycosidique) sont activés sous forme d'anhydrides mixtes selon la procédure décrite à l'exemple 1 . L'ester éthylique du tryptophane est greffé sur les acides de ce polymère selon la procédure décrite dans l'exemple 1 .
La fraction molaire des acides modifiés par l'ester éthylique du tryptophane est de 0,45 d'après la RMN 1H dans D20/Na0D (h = 0,45). La fraction molaire des acides non modifiés par unité glycosidique est de 0,55
(x = 0,55). Exemple 3 :
Synthèse du carboxyméthyldextran modifié par le tryptophane, sel de sodium
Le polymère obtenu dans l'exemple 2 est mis en solution dans l'eau (30 mg/ml) et le pH est fixé à 12,5 par ajout de soude 1 N. Après une nuit d'agitation à température ambiante, le produit est purifié par ultrafiltration.
La fraction molaire des acides modifiés par le sel de sodium du tryptophane est de 0,45 d'après la RMN 1H dans D2O (h = 0.45). La fraction molaire des acides non modifiés par unité glycosidique est de 0,55 (i = 0,55).
Exemple 4 :
Synthèse d'un carboxyméthyldextran modifié par l'histidinamide et la benzylamine Les acides d'un carboxyméthyldextran de masse molaire moyenne d'environ 40 kg/mol (fraction molaire moyenne de 1 ,0 acide par unité glycosidique) sont activés sous forme d'anhydrides mixtes selon la procédure décrite à l'exemple 1 . La benzylamine puis l'histidinamide sont ajoutés à la solution de polymère activé et la réaction est menée à 400C pendant 4h.
La réaction de greffage est résumée dans le schéma suivant.
1. Agent de couplage
2. HisOEt, C12NH2
R = H ou CH2CONHBn ou CH2COHisNH2 HisNH2 =
Le taux de fonctions acides modifiées par
-l'histidinamide est de 55%,
-la benzylamine est de 45%
Le taux d'acides non modifiés est nul.
Exemple 5 :
Synthèse d'un carboxymethyldextran modifié par Tester éthylique de l'histidine et la dodécylamine
Les acides d'un carboxymethyldextran de masse molaire moyenne d'environ 40 kg/mol (fraction molaire moyenne de 1 ,0 acide par unité glycosidique) sont activées sous forme d'anhydrides mixtes selon la procédure décrite à l'exemple 1 . La dodécylamine puis l'ester éthylique de l'histidine sont ajoutés à la solution de polymère activé et la réaction est menée à 400C pendant 4h. La réaction de greffage est résumée dans le schéma suivant.
1. Agent de couplage
2. HisOEt, C12NH2
ou CH2CONHC12 ou CH2COHJsOEt
=
Le taux de fonctions acides modifiées par
- l'ester éthylique d'histidine est de 85%
- la dodécylamine est de 10%
Le taux d'acides non modifiés est de 5%.
Exemple 6 :
Synthèse d'un carboxymethyldextran modifié par l'histidinamide et la benzylamine
Les acides d'un carboxymethyldextran de masse molaire moyenne d'environ 40 kg/mol (fraction molaire moyenne de 1 ,0 acide par unité glycosidique) sont activées sous forme d'anhydrides mixtes selon la procédure décrite à l'exemple 1 . La benzylamine puis l'histidinamide sont ajoutés à la solution de polymère activé et la réaction est menée à 4O0C pendant 4h. La réaction de greffage est résumée dans le schéma suivant.
1. Agent de couplage
2. HisOEt, C12NH2 H ou CH2CONHBn ou CH2COHisNH2 NH2 =
Le taux de fonctions acides modifiées par
-l'histidinamide est de 65%,
-la benzylamine est de 30%
Le taux d'acides non modifiés est de 5%.
Exemple 7 :
Synthèse d'un carboxymethyldextran modifié par l'ester éthylique de l'histidine et la benzylamine
Les acides d'un carboxymethyldextran de masse molaire moyenne d'environ 40 kg/mol (fraction molaire moyenne de 1 ,0 acide par unité glycosidique) sont activées sous forme d'anhydrides mixtes selon la procédure décrite à l'exemple 1 . La benzylamine puis l'ester éthylique de l'histidine sont ajoutés à la solution de polymère activé et la réaction est menée à 4O0C pendant 4h. La réaction de greffage est résumée dans le schéma suivant.
R = H ou CKCOOH
1. Agent de couplage
2. HisOEt, BnNH.
H ou CH5CONHBn ou CHXOHisOEt OEt =
Le taux de fonctions acides modifiées par : -l'ester éthylique de l'histidine est de 10%, -la benzylamine est de 45% Le taux d'acides non modifiés est de 45%.
Exemple 8 :
Synthèse d'un carboxymethyldextran modifié par l'ester éthylique de l'histidine et la benzylamine
Les acides d'un carboxymethyldextran de masse molaire moyenne d'environ 40 kg/mol (fraction molaire moyenne de 1 ,0 acide par unité glycosidique) sont activées sous forme d'anhydrides mixtes selon la procédure décrite à l'exemple 1 . La benzylamine puis l'ester éthylique de l'histidine sont ajoutés à la solution de polymère activé et la réaction est menée à 400C pendant 4h. La réaction de greffage est résumée dans le schéma suivant.
H ou CHXOOH
1. Agent de couplage
2. HisOEt, BnNHo
CH2CONHBn ou CH2COHiSOEt
Le taux de fonctions acides modifiées par : -l'ester éthylique de l'histidine est de 20%, -la benzylamine est de 45% Le taux d'acides non modifiés est de 35%.
Exemple 9 :
Synthèse d'un alginate modifié par la dodécylamine
Produit préparé selon le brevet FR2781677 et dont la formule est la suivante.
Le taux de fonctions acides modifiées par La dodécylamine est de 10%. B Préparation des complexes
La préparation des complexes est réalisée sous hotte à flux laminaire dans une zone à atmosphère contrôlée. Le PDGF-BB est produit par Peprotech ou hnExport. Le PDGF-BB est soit produit en levure (Saccharomyces Cerevisiae) ou en bactérie (Escherichia CoIi).
Exemple 10 :
Préparation d'un complexe PDGF-BB/Polymère 1 /100 mg/ml
Dans un tube Falcon stérile, 7, 1 mg de PDGF-BB lyophilisé sont solubilisés dans 3,55 ml de tampon acétate de sodium 10 mM pH 5. Dans un second tube, 3, 14 g du polymère amphiphile obtenu à l'exemple 2 sont solubilisés dans 1 1 ,5 g d'eau stérile auxquels sont ajoutés une solution d'eau stérile à 0,9% en NaCI, d'eau stérile bidistillée et de NaOH 1 N afin d'ajuster la concentration en polymère à 200 mg/ml, le pH à 7,4 et l'osmolalité à 300 mOsm. Après homogénéisation des deux solutions, les 3,55 ml de la première solution sont ajoutés à 3,55 ml de la deuxième solution pour obtenir un complexe dont la concentration du PDGF-BB est de 1 mg/ml et celle du polymère est de 100 mg/ml. La solution obtenue est filtrée sur 0,22 μm avant d'être répartie dans deux tubes Falcons stériles.
Exemple 1 1 :
Préparation d'un complexe PDGF-BB/Polymère 1 /50 mg/ml
Dans un tube Falcon stérile, 7,1 mg de PDGF-BB lyophilisé sont solubilisés dans 3,55 ml de tampon acétate de sodium 10 mM pH 5. Dans un second tube, 1 ,57 g du polymère amphiphile obtenu à l'exemple 2 sont solubilisés dans 1 1 ,5 g d'eau stérile auxquels sont ajoutés une solution d'eau stérile à 0,9% en NaCI, d'eau stérile bidistillée et de NaOH 1 N afin d'ajuster la concentration en polymère à 100 mg/ml, le pH à 7,4 et l'osmolalité à 300 mOsm. Après homogénéisation des deux solutions, les 3,55 ml de la première solution sont ajoutés à 3,55 ml de la deuxième solution pour obtenir un complexe dont la concentration du PDGF-BB est de 1 mg/ml et celle du polymère est de 50 mg/ml. La solution obtenue est filtrée sur 0,22 μm avant d'être répartie dans deux tubes Falcons stériles.
Exemple 12 :
Préparation d'un complexe PDGF-BB/Polymère 2/100 mg/ml
Dans un tube Falcon stérile, 14,2 mg de PDGF-BB lyophilisé sont solubilisés dans 3,55 ml de tampon acétate de sodium 10 mM pH 5. Dans un second tube, 3, 14 g du polymère amphiphile obtenu à l'exemple 2 sont solubilisés dans 1 1 ,5 g d'eau stérile auxquels sont ajoutés une solution d'eau stérile à 0,9% en NaCI, d'eau stérile bidistillée et de NaOH 1 N afin d'ajuster la concentration en polymère à 200 mg/ml, le pH à 7,4 et l'osmolalité à 300 mOsm. Après homogénéisation des deux solutions, les 3,55 ml de la première solution sont ajoutés à 3,55 ml de la deuxième solution pour obtenir un complexe dont la concentration du PDGF-BB est de 2 mg/ml et celle du polymère est de 100 mg/ml. La solution obtenue est filtrée sur 0,22 μm avant d'être répartie dans deux tubes Falcons stériles.
Exemple 13 :
Préparation d'un complexe PDGF-BB/Polymère 4/100 mg/ml
Dans un tube Falcon stérile, 28,4 mg de PDGF-BB lyophilisé sont solubilisés dans 3,55 ml de tampon acétate de sodium 10 mM pH 5. Dans un second tube, 3, 14 g du polymère amphiphile obtenu à l'exemple 2 sont solubilisés dans 1 1 ,5 g d'eau stérile auxquels sont ajoutés une solution d'eau stérile à 0,9% en NaCI, d'eau stérile bidistillée et de NaOH 1 N afin d'ajuster la concentration en polymère à 200 mg/ml, le pH à 7,4 et l'osmolalité à 300 mOsm. Après homogénéisation des deux solutions, les 3,55 ml de la première solution sont ajoutés à 3,55 ml de la deuxième solution pour obtenir un complexe dont la concentration du PDGF-BB est de 4 mg/ml et celle du polymère est de 100 mg/ml. La solution obtenue est filtrée sur 0,22 μm avant d'être répartie dans deux tubes Falcons stériles.
C Démonstration de l'activité angiogénique des complexes
L'activité angiogénique surprenante obtenue par l'utilisation de complexe du PDGF selon l'invention est démontrée dans un modèle in vivo de cicatrisation cutanée.
Les essais in vivo ont été effectués sur des plaies de rat diabétique db/db. Les groupes comprennent au minimum 4 plaies. Le premier jour, deux excisions de 2,5x2,5 cm2 ont été faites sur le dos du rat.
Exemple 14 :
Augmentation de la réponse angiogénique avec le complexe de PDGF-BB par rapport à la formulation commerciale de PDGF-BB
Selon le protocole, les formulations devaient être appliquées sur les plaies tous les 2 jours pendant 22 jours, après un nettoyage de la plaie.
Le groupe de référence est traité par la formulation commerciale de
PDGF-BB sous forme de gel, Regranex5 (Johnson & Johnson), avec une dose de 500 μ\ par application. Le groupe traité avec le complexe décrit dans l'exemple 10 a reçu une dose de 100 μ\, soit deux fois plus de PDGF- BB que dans le groupe traité avec Regranex.
Le score hémorragique est évalué par une observation visuelle sur une échelle linéaire qualitative de 0 à 4, 0 représentant l'absence de saignement et 4 un saignement maximum. Au 8ème jour après l'excision et le début du traitement, soit après 4 applications des produits, ce score atteint en moyenne 2,8 pour le groupe traité avec le complexe de PDGF-BB contre 1 ,3 pour le groupe traité avec Regranex. Cette différence est significative d'un point de vue statistique.
Ce score hémorragique de 2,8 en moyenne dans le groupe traité par le complexe de PDGF-BB a nécessité l'interruption du traitement après 4 applications alors que le traitement avec Regranex a pu être poursuivi jusqu'au 22àme jour comme prévu. Cet exemple démontre qu'il y a un bénéfice à augmenter les doses de PDGF-BB pour accroître l'angiogénèse ce qui n'a pas été rapporté avec le produit Regranex.
Exemple 1 5 :
Effet angiogénique du complexe dépendant de la dose de PDGF-BB appliquée
Sur les plaies, une formulation de complexe de PDGF-BB telle que décrite dans l'exemple 10, a été appliquée selon 2 protocoles différents. Le groupe 1 consiste en 2 applications de 100 //I au jour 0 et de 90 μ\ au jour 2 après nettoyage de la plaie. Les plaies ont ensuite été simplement nettoyées avec une solution saline tous les 2 jours pendant 16 jours. Le groupe 2 consiste en 4 applications de 100 //I au jour 0, de 90 μ\ au jour 2, de 80 μ\ au jour 4 et de 70 μ\ au jour 6. Les plaies ont ensuite été nettoyées avec une solution saline tous les 2 jours pendant 16 jours. Le volume de la solution de complexe de PDGF-BB est décroissant pour maintenir une dose par unité de surface constante en tenant compte de la réduction de surface de la plaie.
Au iθème jour après l'excision et le début du traitement, le score hémorragique atteint en moyenne 2,2 pour le groupe traité 4 fois avec le complexe de PDGF-BB contre 1 ,4 pour le groupe traité 2 fois avec le même complexe de PDGF-BB. Cette différence est significative d'un point de vue statistique. Le complexe de PDGF-BB permet de révéler une activité angiogénique dépendant de la dose appliquée contrairement au Regranex pour lequel aucun effet dose n'est rapporté dans la littérature. Exemple 16 :
Effet angiogénique du complexe dépendant de la dose de PDGF-BB appliquée
Trois formulations de complexes avec des concentrations de PDGF-BB de 1 , 2 et 4 mg/ml ont été préparées avec un même polymère amphiphile à 1 00 mg/ml comme décrites dans les exemples 10, 1 2 et 1 3. Sur ces plaies après nettoyage, le traitement avec les trois formulations de complexe de PDGF-BB est le même et consiste en 3 applications de 90 μ\ au jour 0, de 65 μ\ au jour 2 et de 55 μ\ au jour 4. Le score hémorragique mesuré au jour 7 montre un effet dépendant de la dose de PDGF-BB avec le complexe. En effet, la dose simple donne un score hémorragique de 1 , la dose double de 2, 1 et la dose quadruple de 2,5.
Exemple 17 :
Effet angiogénique de la formulation de complexe de PDGF-BB comparée à la formulation commerciale de PDGF-BB
Le traitement avec le complexe de PDGF-BB décrit dans l'exemple 1 1 consiste à appliquer après un nettoyage de la plaie 1 00 μl au jour 0 et 90 μ\ au jour 2. Les plaies ont été simplement nettoyées avec une solution saline au jour 4. Le traitement avec Regranex consiste en 3 applications de 500 μ\ au jour 0, de 450 μ\ au jour 2 et de 400 μ\ au jour 4 après nettoyage de la plaie. Les rats ont été euthanasiés au jour 6 et des coupes histologiques des plaies ont été réalisées. Les photographies des coupes histologiques sont données dans la figure 1 . Une quantification par analyse d'image permet d'estimer à 3.6 % le taux de surface des nouveaux vaisseaux sanguins formés par rapport à la surface de derme néoformé dans le cas du complexe de PDGF-BB (Photo B) et à 1 .8% pour Regranex (Photo A). Cette analyse histologique au jour 6 montre le pouvoir angiogénique supérieur du complexe de PDGF-BB comparativement à une simple formulation de la protéine.

Claims

Revendications
1 . Utilisation d'un polymère amphiphile pour la préparation d'une composition thérapeutique destinée à favoriser l'angiogènèse sur son site d'administration comprenant un complexe entre un polymère et un PDGF caractérisée en ce que le polymère est amphiphile.
2. Utilisation selon la revendication 1 , caractérisée en ce que le PDGF est choisi dans le groupe des PDGFs (Platelet-Derivated Growth Factors).
3. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que le polymère amphiphile est choisi dans le groupe :
- des polymères amphiphiles constitués d'un squelette polymérique hydrophile fonctionnalisé par des substituants hydrophobes et des groupements hydrophiles de formule générale I.
DP = m unités monomère
formule I dans laquelle,
• R et R' identiques ou différents représentent une liaison ou une chaîne comprenant entre 1 et 18 carbones, linéaire, branchée et/ou insaturée comprenant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes, choisis parmi O, N ou/et S, • F et F' identiques ou différents représentent une fonction choisie parmi les fonctions suivantes ester, thioester, amide, carbonate, carbamate, éther, thioéther ou aminé,
• X représente un groupe hydrophile choisi dans le groupe constitué par les groupes suivants : o carboxylate o phosphate o phosphonate
• Y représente un groupe hydrophile choisi dans le groupe constitué par les groupes suivants : o phosphate o phosphonate
• Hy représente un groupe hydrophobe choisi parmi les groupes suivants : o alkyle linéaire ou ramifié en C8 à C30, éventuellement insaturé et/ou contenant un ou plusieurs hétéroatomes, choisis parmi O, N ou S. o alkylaryl ou arylalkyle linéaire ou ramifié en C8 à C 1 8, éventuellement insaturé et/ou contenant un ou plusieurs hétéroatomes, choisis parmi O, N ou S. o polycycle en CS à C30 éventuellement insaturé.
n et o sont compris entre 1 et 3, h représente la fraction molaire de motif hydrophobe par rapport à une unité monomérique comprise entre 0.01 et 0.5 x représente la fraction molaire de groupements hydrophiles par rapport à une unité monomérique, comprise entre 0 et 2.0. y représente la fraction molaire de groupements hydrophiles par rapport à une unité monomérique, comprise entre 0 et 0.5.
- ou dans le groupe des dextrans bifonctionnalisés par au moins un radical imidazolyle Im et au moins un groupement hydrophobe Hy, lesdits radical et groupement étant chacuns, identiques et/ou différents, et, greffés ou liés au dextran par un ou plusieurs bras de liaison R, Ri ou Rh et fonctions F, Fi ou Fh,
• R étant une liaison ou une chaîne comprenant entre 1 et 1 8 carbones, éventuellement branchée et/ou insaturée comprenant un ou plusieurs hétéroatomes, tels que O, N ou/et S, R sera dénommé Ri dans le cas des imidazoles et Rh dans le cas des hydrophobes, Ri et Rh étant identiques ou différents,
• F étant un ester, un thioester, un amide, un carbonate, un carbamate, un éther, un thioéther, une aminé,
F sera dénommé Fi dans le cas des imidazoles et Fh dans le cas des hydrophobes, Fi et Fh étant identiques ou différents.
• Im étant un radical imidazolyle, éventuellement substitué sur l'un des carbones par un groupement alkyle (Alky) en C 1 à C4, de formule
• Hy étant un groupement hydrophobe pouvant être : • un alkyle linéaire ou ramifié en C8 à C30, éventuellement insaturé et/ou contenant un ou plusieurs hétéroatomes, tels que O, N ou S.
• un alkylaryle ou un arylalkyle linéaire ou ramifié en C8 à C30, éventuellement insaturé et/ou contenant éventuellement un hétéroatome
• un polycycle en C8 à C30 éventuellement insaturé.
4. Utilisation selon selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le PDGF est choisi dans le groupe constitué par les PDGFs recombinants humains comportant deux chaînes B (rhPDGF-BB).
5. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le PDGF est le PDGF-BB.
6. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle permet une administration de 10 μg à 10 mg par ml de PDGF.
7. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la composition thérapeutique est sous forme d'un gel, d'une crème, d'une solution, d'un spray, d'une pâte ou d'un patch ou d'un pansement.
8. Méthode de traitement thérapeutique à usage humain ou vétérinaire caractérisée en ce qu'elle consiste à administrer localement une composition thérapeutique angiogénique comprenant un complexe polymère PDGF caractérisé en ce que le polymère est amphiphile.
9. Méthode selon la revendication 8, caractérisée en ce que le
PDGF est choisi dans le groupe des PDGFs (Platelet-Derivated Growth Factors).
10. Méthode selon l'une quelconque des revendications 8 ou 9, caractérisée en ce que le polymère amphiphile est choisi dans le groupe :
- des polymères amphiphiles constitués d'un squelette polymérique hydrophile fonctionnalisé par des substituants hydrophobes et des groupements hydrophiles de formule générale I.
DP = m unités monomère
formule I dans laquelle,
R et R' identiques ou différents représentent une liaison ou une chaîne comprenant entre 1 et 1 8 carbones, linéaire, branchée et/ou insaturée comprenant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes, choisis parmi O, N ou/et S, • F et F' identiques ou différents représentent une fonction choisie parmi les fonction suivantes ester, thioester, amide, carbonate, carbamate, éther, thioéther ou aminé,
• X représente un groupe hydrophile choisi dans le groupe constitué par les groupes suivants : o carboxylate o phosphate o phosphonate
• Y représente un groupe hydrophile choisi dans le groupe constitué par les groupes suivants : o phosphate o phosphonate
• Hy représente un groupe hydrophobe choisi parmi les groupes suivants : o alkyle linéaire ou ramifié en C8 à C30, éventuellement insaturé et/ou contenant un ou plusieurs hétéroatomes, choisis parmi O, N ou S. o alkylaryl ou arylalkyle linéaire ou ramifié en C8 à C18, éventuellement insaturé et/ou contenant un ou plusieurs hétéroatomes, choisis parmi O, N ou S. o polycycle en C8 à C30 éventuellement insaturé.
n et o sont compris entre 1 et 3, h représente la fraction molaire de motif hydrophobe par rapport à une unité monomérique comprise entre 0.01 et 0.5 x représente la fraction molaire de groupements hydrophiles par rapport à une unité monomérique, comprise entre 0 et 2.0. y représente la fraction molaire de groupements hydrophiles par rapport à une unité monomérique, comprise entre 0 et 0.5.
- ou dans le groupe des dextrans bifonctionnalisés par au moins un radical imidazoiyle Im et au moins un groupement hydrophobe Hy, lesdits radical et groupement étant chacuns, identiques et/ou différents, et, greffés ou liés au dextran par un ou plusieurs bras de liaison R, Ri ou Rh et fonctions F, Fi ou Fh,
• R étant une liaison ou une chaîne comprenant entre 1 et 1 8 carbones, éventuellement branchée et/ou insaturée comprenant un ou plusieurs hétéroatomes, tels que O, N ou/et S,
R sera dénommé Ri dans le cas des imidazoles et Rh dans le cas des hydrophobes, Ri et Rh étant identiques ou différents,
• F étant un ester, un thioester, un amide, un carbonate, un carbamate, un éther, un thioéther, une aminé,
F sera dénommé Fi dans le cas des imidazoles et Fh dans le cas des hydrophobes, Fi et Fh étant identiques ou différents.
• Im étant un radical imidazolyle, éventuellement substitué sur l'un des carbones par un groupement alkyle (Alky) en C1 à C4, de formule
• Hy étant un groupement hydrophobe pouvant être :
• un alkyle linéaire ou ramifié en C8 à C30, éventuellement insaturé et/ou contenant un ou plusieurs hétéroatomes, tels que O, N ou S. • un alkylaryle ou un arylalkyle linéaire ou ramifié en C8 à
C30, éventuellement insaturé et/ou contenant éventuellement un hétéroatome
• un polycycle en C8 à C30 éventuellement insaturé,
EP08737361A 2007-03-29 2008-03-31 Composition angiogénique comprenant un complexe entre un polymère amphiphile et un pdgf Withdrawn EP2131864A2 (fr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US90736807P 2007-03-29 2007-03-29
FR0702314A FR2914191A1 (fr) 2007-03-29 2007-03-29 Composition angiogenique.
PCT/IB2008/000762 WO2008120085A2 (fr) 2007-03-29 2008-03-31 Composition angiogenique comprenant un complexe entre un polymere amphiphile et un pdgf

Publications (1)

Publication Number Publication Date
EP2131864A2 true EP2131864A2 (fr) 2009-12-16

Family

ID=38567015

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EP08737361A Withdrawn EP2131864A2 (fr) 2007-03-29 2008-03-31 Composition angiogénique comprenant un complexe entre un polymère amphiphile et un pdgf

Country Status (4)

Country Link
US (2) US20080293635A1 (fr)
EP (1) EP2131864A2 (fr)
FR (1) FR2914191A1 (fr)
WO (1) WO2008120085A2 (fr)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2012503643A (ja) 2008-09-26 2012-02-09 アドシア 多糖類とｈｂｐとからなる複合体

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5457093A (en) * 1987-09-18 1995-10-10 Ethicon, Inc. Gel formulations containing growth factors
FR2718026B1 (fr) * 1994-03-30 1997-01-17 Paris Val Marne Universite Médicament et composition pharmaceutique pour le traitement des muscles.
FR2772382B1 (fr) * 1997-12-11 2000-03-03 Solutions Derives de dextrane, leur procede de preparation et leurs applications comme medicaments a action biologique specifique
FR2781485B1 (fr) * 1998-07-21 2003-08-08 Denis Barritault Polymeres biocompatibles leur procede de preparation et les compositions les contenant
JP4434584B2 (ja) * 2001-01-26 2010-03-17 ジェネティックス ファーマシューティカルズ， インク． 血管新生を促進する方法及び組成物
US7368125B2 (en) * 2002-06-05 2008-05-06 Ethicon, Inc. Amphiphilic polymers for medical applications
US7473678B2 (en) * 2004-10-14 2009-01-06 Biomimetic Therapeutics, Inc. Platelet-derived growth factor compositions and methods of use thereof
WO2007013100A1 (fr) * 2005-07-26 2007-02-01 Virchow Biotech Private Limited Formulation de gel comprenant le facteur de croissance dérivé des plaquettes
FR2891149B1 (fr) * 2005-09-26 2007-11-30 Biodex Sarl Composition pharmaceutique a action cicatrisante comprenant un derive de dextrane soluble et un facteur de croissance derive des plaquettes.
JP2009532552A (ja) * 2006-04-07 2009-09-10 アドシア 二官能化された多糖類

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
See references of WO2008120085A3 *

Also Published As

Publication number Publication date
WO2008120085A2 (fr) 2008-10-09
US20100190709A1 (en) 2010-07-29
WO2008120085A3 (fr) 2009-09-11
FR2914191A1 (fr) 2008-10-03
US20080293635A1 (en) 2008-11-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP1150723B1 (fr) Materiau de suture de plaies a base de methylidene malonate
TWI480069B (zh) 用以改善心肌梗塞之醫藥組成物
EP1117695B1 (fr) Polymeres biocompatibles, les compositions les contenant et leur utilisation pour la préparation de médicaments
FR2919188A1 (fr) Complexes entre un polymere amphiphile et une proteine osteogenique appartenant a la famille des bmps
WO2007116143A1 (fr) Polysaccharides bifonctionnalises
FR2812551A1 (fr) Forme pharmaceutique comprenant un materiau support a base de methylidene malonate et un facteur de regulation cellulaire
EP1940448A2 (fr) Complexe polymere amphiphile-pdgf
JP6284956B2 (ja) 瘢痕組織の外観及び形成を改善するための方法並びに組成物
EP0752863B1 (fr) Utilisation de biopolymeres pour le traitement de lesions du tractus digestif
EP0462194B1 (fr) Compositions stabilisees a base de fgf
EP2349338A2 (fr) Complexe constitue d'un polysaccharide et d'une hpb
WO2009144578A2 (fr) Composition synergique osteogenique
EP2624842B1 (fr) Utilisation de hyaluronane pour stimuler l'angiogenèse
EP1406637B1 (fr) Compositions pharmaceutiques a action cicatrisante ou anti-complementaire comprenant un derive de dextrane
RU2450816C2 (ru) Композиции на основе солей гиалуроновой кислоты для лечения эпителиальных повреждений
WO2008120085A2 (fr) Composition angiogenique comprenant un complexe entre un polymere amphiphile et un pdgf
EP2162491A1 (fr) Compositions liquides ou pateuses destinees a l'apport en elements essentiels a la synthese et a la constitution des proteoglycanes, notamment pour le traitement de la degradation du cartilage
CN110624112A (zh) 一种连接前列腺素e2的水凝胶及其制备方法和应用
WO2019080983A1 (fr) Nouvelle formulation a base de chitosane et son procede de preparation.
BE1030448B1 (fr) Complexe glutamine acide - tannique
JP2023182864A (ja) 強皮症または瘢痕を治療するためのｈｇｆアプタマーを含む医薬組成物
JP2016509027A (ja) 瘢痕組織の外観及び形成を改善するための方法並びに組成物
CN112043818A (zh) 一种用于皮肤创伤的药物及其制备方法和应用
WO2011135401A1 (fr) Polysaccharides comportant des groupes fonctionnels carboxyles substitues par esterification par un alcool hydrophobe
WO2009004152A2 (fr) Utilisation d'une composition d'oligomères d'acide galacturonique en tant qu'agent pour inhiber la dégradation du collagène

Legal Events

Date Code Title Description
PUAI Public reference made under article 153(3) epc to a published international application that has entered the european phase

Free format text: ORIGINAL CODE: 0009012

17P Request for examination filed

Effective date: 20090924

AK Designated contracting states

Kind code of ref document: A2

Designated state(s): AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HR HU IE IS IT LI LT LU LV MC MT NL NO PL PT RO SE SI SK TR

17Q First examination report despatched

Effective date: 20100324

DAX Request for extension of the european patent (deleted)
STAA Information on the status of an ep patent application or granted ep patent

Free format text: STATUS: THE APPLICATION IS DEEMED TO BE WITHDRAWN

18D Application deemed to be withdrawn

Effective date: 20101005