EP1466006A1 - Verfahren zur herstellung von cephalexin - Google Patents

Verfahren zur herstellung von cephalexin

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Publication number
EP1466006A1
EP1466006A1 EP03775191A EP03775191A EP1466006A1 EP 1466006 A1 EP1466006 A1 EP 1466006A1 EP 03775191 A EP03775191 A EP 03775191A EP 03775191 A EP03775191 A EP 03775191A EP 1466006 A1 EP1466006 A1 EP 1466006A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
monomers
ratio
weight
cephalexin
radically polymerizable
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
EP03775191A
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Stefan Menzler
Thomas Boller
Hans-Ulrich Petereit
Christian Meier
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Roehm GmbH Darmstadt
Original Assignee
Roehm GmbH Darmstadt
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Roehm GmbH Darmstadt filed Critical Roehm GmbH Darmstadt
Publication of EP1466006A1 publication Critical patent/EP1466006A1/de
Withdrawn legal-status Critical Current

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Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P35/00—Preparation of compounds having a 5-thia-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring system, e.g. cephalosporin
    • C12P35/04—Preparation of compounds having a 5-thia-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring system, e.g. cephalosporin by acylation of the substituent in the 7 position

Definitions

  • the invention relates to a process for the preparation of cephalexin with the aid of a penicillin amidase immobilized on a pearl-shaped, cross-linked hydrophilic copolymer which is active against ligands with nucleophilic groups.
  • beta-lactam residue beta-lactam nucleus
  • an activated side chain such as an amide or an ester
  • penicillin acylase penicillin amidase
  • the enzyme is usually bound to a solid, water-insoluble carrier and then brought into contact with the beta-lactam nucleus and the activated side chain in aqueous solution.
  • a disadvantage of the previously disclosed processes is the fact that the ratio of the synthesis of the desired compound by the enzyme to the hydrolysis of the activated side chain to worthless side chain acids and also to the hydrolysis of the desired product, the so-called S / H value, is often unfavorable , and difficult economic production.
  • WO97 / 04086 discloses a penicillin amidase from E. coli which is immobilized on a carrier material composed of a swelling agent and a polymer with free amino groups, and the use thereof for the preparation of beta-lactam derivatives.
  • the disclosed process for the preparation of cephalexin has the disadvantage that the beta-lactam nucleus 7-aminodesacetoxycephalosporanic acid (7-ADCA) is used in a three-fold molar excess to the activated side chain D-phenylglycinamide (PGA).
  • beta-lactam core If excess stoichiometric amounts of beta-lactam core are used, the core must be recycled on an industrial scale in order to be able to work economically. This is expensive and leads to losses in yield. In addition, this fact also leads to contamination in the product, since the core is unstable.
  • EP 0 730 035 also teaches the production of cephalexin on a specific support in acceptable yields.
  • the grain size of the carrier material used is only 60-80 ⁇ m. This is of great disadvantage for technical applications. Chromatography columns packed with such material have only a low flow rate.
  • a carrier material for enzymes is described in DE 198 04 518. It is mentioned that the material can be used for the enzymatic Synthesis of amoxycillin and ampicillin. A suitability for the synthesis of cephalexin by means of immobilized penicillin amidase is not mentioned.
  • the object of the present invention was therefore to provide an improved process for the synthesis of cephalexin which overcomes the disadvantages mentioned above.
  • this method should enable the realization of a favorable S / H value.
  • the carrier material used should have a grain size of 120 to 250 ⁇ m which is favorable for industrial processes.
  • a), b) and c) add up to 100% by weight are contained and a mixture of methanol and water in a ratio of 1: 1, 0 to 1: 4.0 is used as the diluent, where the monomer phase is distributed in droplets in a continuous phase from an organic solvent of an aliphatic hydrocarbon having 5-7 carbon atoms, the ratio of monomer phase to continuous phase being 1: 2.0 to 1: 4.0, and in this form in the presence are radically polymerized by a polymerization initiator and a protective colloid, with the proviso that the ratio of the monomers to the diluent is 1: 1.7 to 1: 2.4, coated with penicillin amidase and bringing these coated supports into contact with an aqueous solution, the
  • Hydrophilic monomers are understood to mean those monomers which form at least 10% aqueous solutions at room temperature and preferably contain no ionic groups or groups which can be ionized by addition of acid or base.
  • the monomers a) are 5-40, 8-35, in particular 9-12,% by weight of hydrophilic, free-radically polymerizable monomers with a vinyl group which form at least 10% aqueous solutions at room temperature.
  • Particularly suitable monomers a) are acrylamide and / or methacrylamide, with methacrylamide being preferred.
  • Further examples are hydroxyalkyl esters of unsaturated polymerizable carboxylic acids, such as hydroxyethyl acrylate and hydroxyethyl methacrylate or N-vinylpyrrolidone.
  • Monomers b) are 30-50, preferably 35-45% by weight of radically polymerizable monomers having a vinyl group and an additional functional group, preferably an oxirane group (epoxy group), which are in a polymer-analogous reaction with the nucleophilic groups of the ligands can form covalent bonds.
  • Oxirane groups in particular are suitable for binding ligands while maintaining their biological activity.
  • Preferred monomers b) are glycidyl methacrylate and / or allyl glycidyl ether. Both monomers are particularly preferably used simultaneously in approximately equal amounts.
  • Monomers c) are 20-60, in particular 25-55, particularly preferably 40-55% by weight of hydrophilic, crosslinking free-radically polymerizable monomers with two or more ethylenically unsaturated polymerizable groups.
  • Preferred monomers c) are N, N ' -methylene-bis-acrylamide or N, N ' - methylene-bis-methacrylamide.
  • N, N '-methylene-bis-methacrylamide is particularly preferred.
  • 0-10% by weight of further crosslinking, free-radically polymerizable monomers with two or more ethylenically unsaturated polymerizable groups can also be used.
  • Hydrophilic di (meth) acrylates such as, for. B. polyethylene oxide di (meth) acrylates.
  • Monomers a), b) and c) add up to 100% by weight.
  • the monomer phase consists of the monomers a) to c), which are dissolved in a diluent, which must be a mixture of methanol and water in a ratio of 1: 1, 0 to 1: 4.0.
  • a diluent which must be a mixture of methanol and water in a ratio of 1: 1, 0 to 1: 4.0.
  • Particularly favorable mixing ratios for methanol and water are 1: 1, 2 to 1: 2.5, in particular 1: 1, 3 to 1: 1, 7.
  • the ratio of monomers to diluent is particularly critical. This must be in the range from 1: 1.7 to 1: 2.4, particularly preferably in the range from 1.9 to 2.1.
  • An organic solvent that is an aliphatic hydrocarbon with 4 to 7 carbon atoms is suitable as the continuous phase.
  • Preferred is n-heptane and particularly preferred cyclohexane.
  • the ratio of the monomer phase to the continuous phase formed by the organic solvent must be 1: 2.0 to 1: 4.0, preferably between 1: 2.8 to 1: 3.3.
  • the suspended monomer in a known manner contains polymerization initiators, preferred are sulfur-free initiators, especially preferred is 4,4-azobis (4-valeric acid), as well as protective colloids (emulsifiers), such as.
  • sulfur-free initiators especially preferred is 4,4-azobis (4-valeric acid)
  • protective colloids emulsifiers
  • B a copolymer of 95 parts of n-butyl methacrylate and 5 parts of 2-trimethylammonium ethyl methacrylate chloride with molecular weights (weight average) in the range of 30,000 to 80,000.
  • the bead polymerization (also referred to as suspension polymerization) is otherwise carried out in a known manner by, for. B. the continuous Phase and the protective colloid is presented and the monomer phase, in which the initiator is also with stirring z. B. at 40 to 60 ° C in the organic phase and then heated to 60 - 70 ° C.
  • the water / methanol mixture can e.g. B. can be almost completely azeotroped over a period of 6 hours. The mixture is left to react for about 3 to 5 hours and then cooled to room temperature. The resulting beads are suctioned off and z. B. dried in vacuo for 12 hours.
  • the polymers can also be filtered off and washed with water.
  • the binding capacity is understood to mean that enzymatic activity which can be achieved with a particular enzyme when the carrier polymer material is loaded to the maximum.
  • the binding capacity is expressed as penicillin amidase activity in units per g of carrier polymer beads [U / g wet].
  • the binding capacity of the carrier polymer beads according to the invention in this measuring method is at least 220 [U / g moist].
  • the swellability of the polymer beads in water is expressed by the swelling number [ml wet / ml dry].
  • the carrier polymer beads according to the invention have a swelling number of not more than 1.5.
  • the support material is coated at pH 7.5 in potassium phosphate buffer.
  • potassium phosphate buffer there are a large number of there are other processes that ensure a satisfactory coating.
  • the starting materials (i) 7-aminodesacetoxycephaiosporanic acid and (ii) D-phenylglycinamide are used in concentrations of 10-500 mM, preferably 50-300 mM and particularly preferably 150-250 mM.
  • the process according to the invention enables the synthesis of cephalexin with a favorable S / H ratio (synthesis / hydrolysis). It is advantageous that this is achieved using a carrier material with particle sizes in the range from 50 to 500 ⁇ m, in particular from 120 to 250 ⁇ m. This results in better application properties, e.g. B. higher flow rates in fixed bed reactors. Better space-time yields result from the higher flow rates.
  • the larger carrier particles also offer advantages in batch processes because they can be filtered off more quickly. This in turn increases the space-time yield and thus the economics of the process.
  • carrier polymer material 1 g is added to 1530 units of penicillin amidase in 5 ml of sterile 1 M potassium phosphate buffer pH 7.5 and incubated at 23 ° C. for 48 h.
  • the polymer beads are then placed on a sintered glass frit (porosity 2 or 3) and twice with deionized water and then twice with 0.1 M potassium phosphate buffer pH 7.5, containing 0.05% ethyl 4-hydroxybenzoate Suction washed on the frit. The wet weight of the beads loaded with penicillin acylase is determined.
  • the polymer beads are then obtained as in a) through a glass frit by sucking through 20 ml of 0.05 M potassium phosphate buffer pH 7.5, containing 0.05% ethyl 4-hydroxybenzoate, and the measurement is repeated twice.
  • the linear range of the measurement curves (usually the range of 1 - 5 min) is used for the calculation and extrapolated to a 10 min interval.
  • the binding capacity is given as penicillin amidase units per g wet carrier polymer material (U / g wet). One unit corresponds to one ⁇ mol hydrolyzed penicillin G per minute ( ⁇ mol / min); 1 I 0.5M NaOH is equivalent to 500 ⁇ mol hydrolyzed penicillin G. (The water content of the carrier polymer material is approximately constant and can therefore be neglected.)
  • Eupergit® C (a copolymer of N, N'-methylenebis-methacrylamide, allyl glycidyl ether and methacrylamide) and processes for its preparation are described in DE-C 27 22 751, US-A 4 90 713 and US-A 45 11 694.
  • Penicillin amidase from E. coli is immobilized on Sepabeads® FP-EP or Sepabeads® FP-EP / G (Resindion S.R.I., Milan, Italy) as shown in Comparative Example 1.
  • the subsequent cephalexin synthesis and the determination of the S / H value follow Examples 5 and 6, respectively.
  • Sepabeads® FP-EP or Sepabeads® FP-EP / G is a highly polymeric cross-linked acrylic copolymer which, like Eupergit ®, carries oxirane groups. According to the manufacturer, the average particle size is 150-300 ⁇ m. Comparative Example 4
  • Chromatography columns made of borosilicate glass with a glass frit bottom and polypropylene end caps were checked empty for a comparable discharge speed.
  • the carrier materials were suspended in water overnight and then rinsed with water into the respective column and a packed bed with a height of 6.5 cm was obtained by sedimentation and slow leakage of the liquid. Any voids were removed by tapping lightly.
  • the columns open at the top had a constant water column of 23 cm due to the water inlet.
  • the flow rate was only achieved through the hydrostatic pressure. The flow rate was determined using a stopwatch and 10 ml measuring cylinder.
  • a flow rate of 4.25 ml per minute was determined for the preparation which can be used according to the invention.
  • a flow rate of 0.71 ml per minute was determined for Emphaze TM.
  • the pressure drop in fixed bed reactors can also be calculated mathematically: K. Buchholz and B. Gödelmann in "Characterization of immobilized biocatalysts", Dechema Monographien Volume 84, ed. K. Buchholz, VCH Weinheim 1979, pages 128-129).
  • An organic solvent 3 g of a copolymer made from 95 parts of n-butyl methacrylate and 5 parts of 2-trimethylammonium ethyl methacrylate chloride as protective colloid and 5 g of dry ice are placed in a 2 l stirred flask with thermometer, water separator, reflux condenser, nitrogen inlet tube.
  • a monomer phase consisting of water and methanol in a ratio of 1: 1, 5 (example 1) or of formamide (examples 2 and 3) as a diluent and at
  • the reaction is carried out at 25 ° C. and pH 7.5 in a fixed bed reactor. 10 ml of an aqueous solution of a mixture of 0.2 M 7-ADCA and 0.2 M D-phenlyglycinamide are passed over a column with 0.5 ml of the immobilized penicillin amidase. During the reaction, the pH is kept constant by adding HCI in a connected stirred storage container. Samples are taken at certain intervals and analyzed by HPLC as shown in Example 5.
  • Example 4 The products of the reaction from Example 4 and Comparative Examples 1 to 3 were analyzed by HPLC using an RP-8 column (Merck KGaA, Darmstadt, Germany). Sterile 67 mM potassium phosphate buffer pH 7.5 was used as the eluent. Cephalexin was eluted with a 30% (volume / volume) aqueous methanol solution.
  • the value for the method according to the invention is composed of 7 test series carried out in parallel, which gave the following S / H values: 5.3; 4.7; 3.6; 4.6; 4.3; 5.2; 4.7;

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Abstract

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von Cephalexin mit Hilfe einer auf einem perlförmigen, vernetzten hydrophilen, gegenüber Liganden mit nucleophilen Gruppen bindungsaktiven Mischpolymerisat immobilisierten Penicillinamidase.

Description

Verfahren zur Herstellung von Cephalexin
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von Cephalexin mit Hilfe einer auf einem perlförmigen, vernetzten hydrophilen, gegenüber Liganden mit nucleophilen Gruppen bindungsaktiven Mischpolymerisat immobilisierten Penicillinamidase.
Stand der Technik
Verfahren zur Synthese von halbsynthetischen Betalaktam Antibiotika durch Acylierung eines Betalaktam Rests (Betalaktamkern) mit einer aktivierten Seitenkette, wie etwa einem Amid oder einem Ester, unter Verwendung des Enzyms Penicillinacylase (Penicillinamidase) sind dem Fachmann gut bekannt.
Zumeist wird das Enzym dabei an einen festen, wasserunlöslichen Träger gebunden, und anschließend in wässriger Lösung mit dem Betalaktamkern und der aktivierten Seitenkette in Kontakt gebracht.
Nachteilig an den bisher offenbarten Verfahren ist die Tatsache, dass das Verhältnis der Synthese der gewünschten Verbindung durch das Enzym gegenüber der Hydrolyse der aktivierten Seitenkette zu wertlosen Seitenkettensäuren sowie auch zur Hydrolyse des gewünschten Produktes, der so genannte S/H-Wert, oft ungünstig ist, und eine wirtschaftliche Produktion erschwert.
Aus der WO 93/12250 ist es bekannt, dass der S/H-Wert bei der Synthese der halbsynthetischen Betalaktam-Antibiotika, Cephadroxil und Cephalexin durch auf Eupergit® (Röhm GmbH & Co. KG, Darmstadt, Deutschland, siehe auch Vergleichsbeispiel 1) immobilisierter Penicillinamidase aus E. co// durch die Wahl der Reaktionsbedingungen günstig beeinflusst werden kann. Ein Einfluss der Natur des Trägermaterials wird hingegen nicht gelehrt. Nachteilig an dem in der WO 93/12250 gelehrten Verfahren ist insbesondere, dass das Cephalexin im Komplex mit beta-Naphthol aus dem Reaktionsgemisch isoliert wird, so dass nachfolgende Aufreinigungsschritte nötig sind, und Produktverluste auftreten.
Es wurde daher versucht, optimierte Trägermaterialen zu entwickeln. So offenbart die WO97/04086 eine Penicillinamidase aus E. coli, die auf einem Trägermaterial aus einem Quellmittel und einem Polymer mit freien Aminogruppen immobilisiert ist, sowie deren Verwendung zur Herstellung von Betalaktamderivaten. Das offenbarte Verfahren zur Herstellung von Cephalexin weist jedoch den Nachteil auf, dass der Betalaktamkern 7- Aminodesacetoxycephalosporansäure (7-ADCA) im dreifachen molaren Überschuss zu der aktivierten Seitenkette D-Phenylglycinamid (PGA) eingesetzt wird. Werden überstöchiometrische Mengen Betalaktamkern eingesetzt, muss der Kern im industriellen Maßstab recycelt werden, um wirtschaftlich arbeiten zu können. Dies ist teuer und führt zu Ausbeuteverlusten. Außerdem führt dieser Umstand auch zu Verunreinigungen im Produkt, da der Kern labil ist.
Die EP 0 730 035 lehrt ebenfalls die Herstellung von Cephalexin auf einem spezifischen Träger in akzeptablen Ausbeuten. Allerdings beträgt die Korngröße des verwendeten Trägermaterials (Emphaze™) nur 60-80 μm. Dies ist von großem Nachteil für technische Anwendungen. So haben mit solchem Material gepackte Chromatographiesäulen nur eine geringe Fließgeschwindigkeit.
Ein Trägermaterial für Enzyme wird in der DE 198 04 518 beschrieben. Es wird erwähnt, dass das Material Verwendung finden könne für die enzymatische Synthese von Amoxycillin und Ampicillin. Eine Eignung für die Synthese von Cephalexin mittels immobilisierter Penicillinamidase wird nicht erwähnt.
Aufgabe und Lösung
Angesichts des oben diskutierten Stands der Technik lag der vorliegenden Erfindung daher die Aufgabe zugrunde, ein verbessertes Verfahren für die Synthese von Cephalexin zur Verfügung zu stellen, welches die oben genannten Nachteile überwindet.
Insbesondere sollte dieses Verfahren die Realisierung eines günstigen S/H- Wertes ermöglichen. Weiterhin sollte das verwendete Trägermaterial eine für industrielle Verfahren günstige Korngröße von 120 bis 250 μm aufweisen.
Diese Aufgabe wird gelöst durch das in Anspruch 1 definierte Verfahren. Bevorzugte Ausführungsformen des erfindungsgemäßen Verfahrens sind in den auf Anspruch 1 zurückbezogenen Unteransprüchen definiert.
Insbesondere gelingt es auf nicht vorhersehbare und technisch einfache Weise, die obige Aufgabe zu lösen, indem man perlförmige, vernetzte hydrophile, gegenüber Liganden mit nucleophilen Gruppen bindungsaktive Trägerpolymermaterialien, die herstellbar sind durch inverse Perlpolymerisation einer Monomerenphase, die aus Monomeren und einem Verdünnungsmittel bestehen, wobei als Monomere
(a) 5 - 40 Gew.-% hydrophile radikalisch polymerisierbare Monomere mit einer Vinylgruppe, die bei Raumtemperatur wenigstens 10 %- ige wässrige Lösungen bilden (b) 30 - 50 Gew.-% radikalisch polymerisierbaren Monomere mit einer Vinylgruppe und einer zusätzlichen funktionellen Gruppe, die in einer polymeranalogen Reaktion mit den nucleophilen Gruppen der Liganden kovalente Bindungen eingehen kann
(c) 20 - 60 Gew.-% vernetzende radikalisch polymerisierbare Monomere mit zwei oder mehr ethylenisch ungesättigten polymerisierbaren Gruppen
mit der Maßgabe, dass sich a), b) und c) zu 100 Gew.-% addieren, enthalten sind und als Verdünnungsmittel ein Gemisch aus Methanoi und Wasser im Verhältnis 1 : 1 ,0 bis 1 : 4,0 verwendet wird, wobei die Monomerenphase in einer kontinuierlichen Phase aus einem organischen Lösungsmittel aus einem aliphatischen Kohlenwasserstoff mit 5 - 7 Kohlenstoffatomen zu Tröpfchen verteilt ist, wobei das Verhältnis Monomerenphase zu kontinuierlicher Phase 1 : 2,0 bis 1 : 4,0 beträgt, und in dieser Form in Gegenwart von eines Polymerisationsinitiators und eines Schutzkolloids radikalisch polymerisiert werden, mit der Maßgabe, dass das Verhältnis der Monomeren zum Verdünnungsmittel 1 : 1 ,7 bis 1 : 2,4 beträgt, mit Penicillinamidase beschichtet, und diese beschichteten Träger in Kontakt bringt mit einer wässrigen Lösung, die
(i) 7-Aminodesacetoxycephalosporansäure und (ii) D-Phenylglycinamid
in Verhältnissen von 1 : 2 bis 2 : 1 , bevorzugt 1 ,5 : 1 bis 1 : 1 ,5, besonders bevorzugt in annähernd equimolaren Verhältnissen, d.h. in Verhältnissen von 1 ,2:1 bis 1 :1 ,2 enthält. Das verwendete Trägermaterial und das Verfahren zu seiner Herstellung sind in der DE 198 04 518 beschrieben.
Ausführung der Erfindung
Herstellung des Trägermaterials
Monomere
Um die Hydrophilie des Monomerengemischs zu gewährleisten, muss dieses zum überwiegenden Teil aus hydrophilen Monomeren bestehen. Unter hydrophilen Monomeren sind solche Monomere zu verstehen, die bei Raumtemperatur wenigstens 10%-ige wässrige Lösungen bilden und vorzugsweise keine ionischen oder durch Säure- oder Basenzusatz ionisierbaren Gruppen enthalten.
Die Monomere a) sind 5 - 40, 8 - 35, insbesondere 9 - 12 Gew.-% hydrophile radikalisch polymerisierbare Monomere mit einer Vinylgruppe, die bei Raumtemperatur wenigstens 10 %-ige wässrige Lösungen bilden.
Als Monomere a) sind insbesondere Acrylamid und/oder Methacrylamid geeignet, wobei Methacrylamid bevorzugt wird. Weitere Beispiele sind Hydroxyalkylester von ungesättigten polymerisierbaren Carbonsäuren, wie Hydroxyethylacrylat und Hydroxyethylmethacrylat oder N-Vinylpyrrolidon.
Monomere b) sind 30 - 50, bevorzugt 35 - 45 Gew.-% radikalisch polymerisierbaren Monomere mit einer Vinylgruppe und einer zusätzlichen funktionellen Gruppe, bevorzugt einer Oxirangruppe (Epoxygruppe), die in einer polymeranalogen Reaktion mit den nucleophilen Gruppen der Liganden kovalente Bindungen eingehen kann. Insbesondere Oxirangruppen sind geeignet, um Liganden unter Erhaltung ihrer biologischen Aktivität zu binden.
Bevorzugte Monomere b) sind Glycidylmethacrylat und/oder Allylglycidylether. Besonders bevorzugt werden gleichzeitig beide Monomere in etwa gleichen Mengen eingesetzt.
Monomere c) sind 20 - 60, insbesondere 25 - 55, besonders bevorzugt 40 - 55 Gew.-% hydrophile, vernetzende radikalisch polymerisierbare Monomere mit zwei oder mehr ethylenisch ungesättigten polymerisierbaren Gruppen. Bevorzugte Monomere c) sind N,N'-Methylen-bis-Acrylamid oder N,N'- Methylen-bis-Methacrylamid. N,N '-Methylen-bis-Methacrylamid wird besonders bevorzugt. Gegebenenfalls können auch 0 - 10 Gew.-% weiterer vernetzender, radikalisch polymerisierbarer Monomere mit zwei oder mehr ethylenisch ungesättigten polymerisierbaren Gruppen eingesetzt werden. Geeignet sind hydrophile Di(meth)acrylate, wie z. B. Polyethylenoxid-Di(meth)acrylate.
Die Monomere a), b) und c) addieren sich jeweils zu 100 Gew.-%.
Verdünnungsmittel
Die Monomerenphase besteht aus den Monomeren a) bis c), die in einem Verdünnungsmittel, das ein Gemisch aus Methanol und Wasser im Verhältnis 1 : 1 ,0 bis 1 : 4,0 sein muss, gelöst sind. Besonders günstige Mischungsverhältnisse für Methanol und Wasser liegen bei 1 : 1 ,2 bis 1 : 2,5, insbesondere bei 1 : 1 ,3 bis 1 : 1 ,7. Verhältnis Monomere zu Verdünnungsmittel
Besonders kritisch ist das Verhältnis Monomere zu Verdünnungsmittel. Dieses muss im Bereich von 1 : 1 ,7 bis 1 : 2,4, besonders bevorzugt im Bereich von 1 ,9 bis 2,1 liegen.
Kontinuierliche Phase
Als kontinuierliche Phase eignet sich ein organisches Lösungsmittel, das ein aliphatischer Kohlenwasserstoff mit 4 bis 7 C-Atomen ist. Bevorzugt ist n- Heptan und besonders bevorzugt Cyclohexan.
Verhältnis Monomerenphase/kontinuierlicher Phase
Das Verhältnis von der Monomerenphase zur kontinuierlichen Phase, gebildet durch das organische Lösungsmittel muss bei 1 : 2,0 bis 1 : 4,0, bevorzugt zwischen 1 : 2,8 bis 1 : 3,3.
Weitere Verfahrensbedingungen
Als weitere Bestandteile enthält die suspendierte Monomerphase in an sich bekannter Weise Polymerisations-Initiatoren, bevorzugt sind schwefelfreie Initiatoren, besonders bevorzugt ist 4,4,-Azobis-(4-Valeriansäure), sowie Schutzkolloide (Emulgatoren), wie z. B. ein Mischpolymerisat aus 95 Teilen n- Butylmethacrylat und 5 Teilen 2-Trimethylammoniumethlymethacrylat-Chlorid mit Molekulargewichten (Gewichtsmittel) im Bereich von 30.000 bis 80.000.
Die Perlpolymerisation (auch als Suspensionspolymerisation bezeichnet) wird ansonsten in bekannter Weise ausgeführt, indem z. B. die kontinuierliche Phase und dem Schutzkolloid vorgelegt wird und die Monomerenphase, in der sich auch der Initiator befindet unter Rühren z. B. bei 40 bis 60 °C in der organischen Phase verteilt wird und anschließend auf 60 - 70 °C erhitzt wird. Das Wasser/Methanol-Gemisch kann z. B. über einen Zeitraum von 6 Stunden nahezu vollständig azeotrop ausgekreist werden. Man lässt den Ansatz für ca. 3 - 5 Stunden zu Ende reagieren und kühlt anschließend auf Raumtemperatur ab. Die entstandenen Perlen werden abgesaugt und z. B. für 12 Stunden im Vakuum getrocknet. Alternativ dazu können die PerIpolymerisate auch abfiltriert und mit Wasser gewaschen werden. Bevorzugt wird ein Trocknung in einem Wirbelschichttrockner vorgenommen, da sich auf diese Weise Lösungsmittelreste besonders effektiv entfernen lassen. Die erhaltenen Polymerperlen (= Trägerpolymermaterial) haben eine Größe im Bereich von 50 bis 500 μm, insbesondere von 120 bis 250 μm. Unter der Bindungskapazität wird diejenige enzymatische Aktivität verstanden, die sich bei maximaler Beladung des Trägerpolymermaterials mit einem bestimmten Enzym erreichen lässt. Die Bindungskapazität wird ausgedrückt als Penicillinamidase-Aktivität in Units pro g Trägerpolymerperlen [U/g feucht]. Die Bindungskapazität der erfindungsgemäßen Trägerpolymerperlen beträgt bei dieser Meßmethode mindestens 220 [U/g feucht].
Die Quellbarkeit der Polymerperlen in Wasser wird ausgedrückt durch die Quellungszahl [ml feucht / ml trocken]. Die erfindungsgemäßen Trägerpolymerperlen weisen eine Quellungszahl von nicht mehr als 1 ,5 auf.
Beschichtung des erfindungsgemäß verwendbaren Trägermaterials
In den Beispielen wird das Trägermaterial bei pH 7,5 in Kaliumphosphatpuffer beschichtet. Es ist dem Fachmann jedoch klar, dass es eine ganze Vielzahl von weiteren Verfahren gibt, mit denen eine zufriedenstellende Beschichtung gewährleistet wird.
Synthese von Cephalexin
Die Edukte (i) 7-Aminodesacetoxycephaiosporansäure und (ii) D- Phenylglycinamid werden in Konzentrationen von 10-500 mM, bevorzugt 50- 300 mM und besonders bevorzugt von 150-250 mM eingesetzt. Vorteilhafte Wirkungen der Erfindung
Das erfindungsgemäße Verfahren ermöglicht die Synthese von Cephalexin mit günstigem S/H-Verhältnis (Synthese/Hydrolyse). Vorteilhaft ist es dabei, daß dies unter Verwendung eines Trägermaterials mit Teilchengrößen im Bereich von 50 - 500 μm, insbesondere von 120 bis 250 μm erreicht wird. Dadurch werden bessere anwendungstechnische Eigenschaften erzielt, z. B. höhere Fiießgeschwindigkeiten in Festbettreaktoren. Aus den höheren Fließgeschwindigkeiten resultieren bessere Raum-Zeit-Ausbeuten. Auch in Batchverfahren bieten die größeren Trägerteilchen Vorteile, da sie schneller abfiltriert werden können. Dies erhöht wiederum die Raum-Zeit-Ausbeute und damit die Wirtschaftlichkeit des Prozesses.
Beispiele
(Die folgende Bestimmungsmethode ist dem Fachmann auf den Gebiet poröser Trägerpolymermaterialien an sich geläufig und wird nur der Vollständigkeit halber aufgeführt)
Bestimmung der Bindungskapazität für Penicillinamidase ( = Penicillin G- Acylase) aus E. coli (EC 3.5.1.11 )
a) Kovalente Bindung von Penicillinamidase an das Trägerpolvmermaterial
1 g Trägerpolymermaterial werden zu 1530 Units Penicillinamidase in 5 ml sterilem 1 M Kalium-Phosphat-Puffer pH 7,5 gegeben und für 48 h bei 23 °C inkubiert.
Anschließend werden die Polymerperlen auf eine Fritte aus gesintertem Glas (Porosität 2 oder 3) gegeben und zweimal mit entionisierten Wasser und anschließend zweimal mit 0,1 M Kalium-Phosphatpuffer pH 7,5, enthaltend 0,05 % EthyI-4-hydroxybenzoat, mittels Absaugens auf der Fritte gewaschen. Das Feuchtgewicht der erhaltenen, mit Penicillin-Acylase beladenen Perlen wird bestimmt.
b) Bestimmung der Bindungskapazität
250 - 300 mg feuchtes mit Penicillinamidase gekoppeltes Trägerpolymermaterial (Polymerperlen) werden in 20 ml einer 2 %-igen Penicillin-G-Lösung in 0,05 M Kalium-Phosphatpuffer pH 7,5, enthaltend 0,05 % Ethyl-4-hydroxybenzoat, bei 37 °C gegeben. Unter gleichmäßiger Rührung erfolgt eine Titration frei gewordener Phenylessigsäure mit 0,5 M NaOH bei einem konstantem pH-Wert von 7.8 für die Dauer von 10 Minuten, wobei der Verbrauch an NaOH aufgezeichnet wird.
Anschließend werden die Polymerperlen wie unter a) über eine Glasfritte mittels Durchsaugen von 20 ml 0,05 M Kalium-Phosphatpuffer pH 7,5, enthaltend 0,05 % Ethyl-4-hydroxybenzoat, gewonnen und die Messung zweimal wiederholt.
c) Berechnung der Bindungskapazität
Der lineare Bereich der Messkurven (üblicherweise der Bereich von 1 - 5 min) wird für die Berechnung zugrunde gelegt und auf ein 10 min Intervall extrapoliert. Die Bindungskapazität wird als Penicillinamidase Einheiten pro g feuchten Trägerpolymermaterials (U/g feucht) angegeben. Eine Einheit entspricht einem μmol hydrolysiertem Penicillin G pro Minute (μmol/min); 1 I 0,5M NaOH ist dabei äquivalent zu 500 μmol hydrolysiertem Penicillin G. (Der Wassergehalt des Trägerpolymermaterials ist in etwa konstant und kann daher vernachlässigt werden.)
Vergleichsbeispiel 1
1530 Units Penicillinamidase aus E. co/ werden in 6 ml sterilem 1 M Kaliumphosphatpuffer, pH 7,5 gelöst. Die Lösung wird zu 1 g Eupergit ® C (Röhm GmbH & Co. KG, Darmstadt, Deutschland) gegeben, und die erhaltene Suspension wird 72 Stunden bei 23° C inkubiert. Die Polymerperlen werden auf einem gesinterten Glasfilter gesammelt und mit 0,1 M Kaliumphosphat-Puffer gewaschen. Die nachfolgende Cephalexin-Synthese und die Bestimmung des S/H-Wertes folgen den Beispielen 5 bzw. 6. Eupergit® C (ein Copolymer aus N,N'-methylenbis-methacrylamid, Allylglycidylether und Methacrylamid) sowie Verfahren zu seiner Herstellung werden in der DE-C 27 22 751 , der US-A 4 90 713 bzw. der US-A 45 11 694 beschrieben.
Vergleichsbeispiel 2
Der WO 97/04086 folgend wird unter Verwendung des dort offenbarten Typ A Enzyms bzw. Typ B Enzyms eine Cephalexin-Synthese wie in Beispiel 6 beschrieben durchgeführt.
Vergleichsbeispiel 3
Auf Sepabeads® FP-EP bzw. Sepabeads® FP-EP/G (Resindion S.R.I., Mailand, Italien) wird Penicillinamidase aus E. coli immobilisiert wie in Vergleichsbeispiel 1 gezeigt. Die nachfolgende Cephalexin-Synthese und die Bestimmung des S/H-Wertes folgen den Beispielen 5 bzw. 6.
Sepabeads® FP-EP bzw. Sepabeads® FP-EP/G ist ein hochpolymeres vernetztes acrylisches Copolymer, welches wie Eupergit ® Oxirangruppen trägt. Die durchschnittliche Teilchengröße beträgt nach Herstellerangaben 150-300 μm. Vergleichsbeispiel 4
Ermittlung der Fließgeschwindigkeit einer mit Emphaze™ bzw. dem erfindungsgemäß verwendbaren Material gepackten Chromatographiesäule.
Material: Emphaze Ultralink™ Biosupport Medium, Lot#DC53515, Pierce, mittlere Teilchengröße nach Herstellerangaben 50-80 μm; Erfindungsgemäß verwendbares Material, mittlere Teilchengröße 208 μm.
Chromatographiesäulen aus Borsilikatglas mit Glasfrittenboden und Polypropylenendkappen (Abmessung der Säule 1x20 cm) wurden leer auf eine vergleichbare Auslaufgeschwindigkeit geprüft. Die Trägermaterialien wurden über Nacht in Wasser suspendiert und anschließend mit Wasser in die jeweilige Säule gespült und durch Sedimentation und langsames Auslaufen der Flüssigkeit wurde ein gepacktes Bett mit einer Höhe von 6,5 cm erhalten. Durch leichtes Klopfen wurden eventuelle Hohlräume entfernt. Die oben offenen Säulen hatten durch Wasserzulauf eine konstante Wassersäule von 23 cm. Die Fließgeschwindigkeit wurde nur durch den hydrostatischen Druck erzielt. Mittels Stoppuhr und 10ml-Meßzylinder wurde die Fließgeschwindigkeit bestimmt.
Für das erfindungsgemäß verwendbare Präparat wurde eine Fließgeschwindigkeit von 4,25 ml pro Minute bestimmt. Für Emphaze™ wurde eine Fließgeschwindigkeit von 0.71 ml pro Minute bestimmt. Die Eignung sphärischer Partikel zum Betrieb in Festbettreaktoren ist umso besser, je höher die Fließgeschwindigkeit ist (höhere Raum-Zeit-Ausbeute). Der Druckabfall in Festbettreaktoren lässt sich auch mathematisch berechnen: K. Buchholz und B. Gödelmann in „Characterization of immobilized biocatalysts", Dechema Monographien Band 84, Hrsg. K. Buchholz, VCH Weinheim 1979, Seiten 128- 129).
Man erkennt deutlich die gegenüber Emphaze™ besseren anwendungstechnischen Eigenschaften des erfindungsgemäß einsetzbaren Materials für den Einsatz in Festbettreaktoren.
Beispiele 1 - 3
Übereinstimmende Versuchsbedingungen in den Beispielen 1 - 3:
In einem 2 I Rührkolben mit Thermometer, Wasserabscheider, Rückflusskühler, Stickstoffeinleitungsrohr werden ein organisches Lösungsmittel, 3 g eines Mischpolymerisats aus 95-Teilen n-Butylmethacrylat und 5 Teilen 2-Trimethylammoniumethlymethacrylat-Chlorid als Schutzkolloid und 5 g Trockeneis vorgelegt. Unter Rühren und Durchleiten von Stickstoff wird bei 50 °C eine Monomerenphase bestehend aus Wasser und Methanol im Verhältnis 1 : 1 ,5 (Beispiel 1) bzw. aus Formamid (Beispiele 2 und 3) als Verdünnungsmittel, sowie
10 g Methacrylamid,
20 g Allylglycidylether,
20 g Glycidylmethacrylat und
50 g Methylen-bis-methacrylamid
sowie
2 g 4,4'-Azobis-4-cyanovaleriansäure (als Polymerisationsinitiator) in der organischen Phase verteilt und anschließend zum Sieden bei 65 - 70 °C erhitzt. Der Ansatz wird für ca. 6 h inkubiert und anschließend auf Raumtemperatur abgekühlt. Die entstandenen Polymerperlen werden abgesaugt, gewaschen und im Wirbelschichttrockner getrocknet. Anschließend wird die Bindungskapazität für Penicillinamidase [U/g feucht] und die Quellzahl bestimmt [ml feucht/ml trocken] bestimmt.
Die wesentlichen Versuchsparameter und die Ergebnisse der Beispiele 1 - 3 sind der nachstehenden Tabelle zu entnehmen.
Beispiel 4
Synthese von Cephalexin
Die Reaktion wird bei 25° C und pH 7.5 in einem Festbettreaktor durchgeführt. 10 ml einer wässrigen Lösung eines Gemisches aus 0,2 M 7-ADCA und 0,2 M D-Phenlyglycinamid werden über eine Säule mit 0,5 ml der immobilisierten Penicillinamidase geführt. Während der Reaktion wird der pH-Wert durch Zusatz von HCI in einem angeschlossenen gerührten Vorratsbehälter konstant gehalten. Zu bestimmten Zeitabständen werden Proben entnommen und wie in Beispiel 5 gezeigt mittels HPLC analysiert.
Beispiel 5
Die Produkte der Reaktion aus Beispiel 4 sowie der Vergleichsbeispiele 1 bis 3 wurden durch HPLC unter Verwendung einer RP -8 Säule (Merck KGaA, Darmstadt, Deutschland) analysiert. Als Laufmittel wurde steriler 67 mM Kaliumphosphatpuffer pH 7,5 verwendet. Cephalexin wurde mit einer 30 %igen (Volumen/Volumen) wässrigen Methanol-Lösung eluiert.
Aus der HPLC-Analyse wurde die Synthesegeschwindigkeit von Cephalexin (Vceph) sowie die Hydrolysegeschwindigkeit von D-Phenylglycin (Vo-phβ) bestimmt und daraus der S/H-Wert (Verhältnis
Synthesegeschwindigkeit/Hydrolysegeschwindigkeit (Vceph D-phβ) errechnet. Die Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle dargestellt:
Der Wert für das erfindungsgemäße Verfahren setzt sich aus 7 parallel durchgeführten Versuchsreihen zusammen, die folgende S/H-Werte ergaben: 5,3; 4,7; 3,6; 4,6; 4,3; 5,2; 4,7;
Man erkennt deutlich den gegenüber den Vergleichsbeispielen signifikant um ca. 30% verbesserten S/H-Wert, der mit dem erfindungsgemäßen Verfahren erreichbar ist.

Claims

PATENTANSPRÜCHE
1. Verfahren zur Herstellung von Cephalexin, dadurch gekennzeichnet, dass perlförmige, vernetzte hydrophile, gegenüber Liganden mit nucleophilen Gruppen bindungsaktive Trägerpolymermaterialien, die herstellbar sind durch inverse Peripolymerisation einer Monomerenphase, die aus Monomeren und einem Verdünnungsmittel bestehen, wobei als Monomere
(a) 5 - 40 Gew.-% hydrophile radikalisch polymerisierbare Monomere mit einer Vinylgruppe, die bei Raumtemperatur wenigstens 10 %- ige wässrige Lösungen bilden,
(b) 30 - 50 Gew.-% radikalisch polymerisierbare Monomere mit einer Vinylgruppe und einer zusätzlichen funktionellen Gruppe, die in einer polymeranalogen Reaktion mit den nucleophilen Gruppen der Liganden kovalente Bindungen eingehen kann,
(c) 20 - 60 Gew.-% vernetzende radikalisch polymerisierbare Monomere mit zwei oder mehr ethylenisch ungesättigten polymerisierbaren Gruppen, mit der Maßgabe, dass sich a), b) und c) zu 100 Gew.-% addieren, enthalten sind und als Verdünnungsmittel ein Gemisch aus Methanol und Wasser im Verhältnis 1 : 1 ,0 bis 1 : 4,0 verwendet wird, wobei die Monomerenphase in einer kontinuierlichen Phase aus einem organischen Lösungsmittel aus einem aliphatischen Kohlenwasserstoff mit 5 - 7 Kohlenstoffatomen zu Tröpfchen verteilt ist, wobei das Verhältnis Monomerenphase zu kontinuierlicher Phase 1 : 2,0 bis 1 : 4,0 beträgt, und in dieser Form in Gegenwart von eines Polymerisationsinitiators und eines Schutzkolloids radikalisch polymerisiert werden, mit der Maßgabe, dass das Verhältnis der Monomeren zum Verdünnungsmittel 1 : 1 ,7 bis 1 : 2,4 beträgt, mit Penicillinamidase beschichtet werden, und diese beschichteten Träger in Kontakt gebracht werden mit einer wässrigen Lösung, die (i) 7-Aminodesacetoxycephalosporansäure und (ii) D-Phenylglycinamid im Verhältnis von 1:2 bis 2:1 , enthält.
2. Verfahren nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass als Monomere a) Acrylamid und/oder Methacrylamid b) Glycidylmethacrylat und/oder Allylglycidylether c) N,N'-Methylen-bis-Acrylamid oder N,N'-Methylen-bis- Methacrylamid eingesetzt werden.
3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass als organisches Lösungsmittel Cyclohexan verwendet wird.
4. Verfahren nach mindestens einem der vorstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Penicillinamidase aus £. coli stammt.
5. Verwendung eines Trägerpolymermaterials nach einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 4 zur Synthese von Cephalexin.
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Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE10251144A1 (de) 2002-10-31 2004-05-19 Röhm GmbH & Co. KG Makroporöses Kunststoffperlenmaterial
DE102005005828A1 (de) * 2005-02-08 2006-08-17 Röhm GmbH & Co. KG Makroporöses Kunststoffperlenmaterial
WO2009016642A1 (en) * 2007-07-27 2009-02-05 Fermenta Biotech Limited Process for the preparation of immobilized recombinant penicillin acylase catalyst from achromobacter sp. ccm 4824 expressed in e. coli bl 21 ccm 7394 and its use for the synthesis of beta-lactam antibiotics
US11551534B2 (en) 2020-04-17 2023-01-10 Oshkosh Corporation Thermal management controls

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4582860A (en) * 1983-12-15 1986-04-15 Rohm And Haas Company Oxirane resins for enzyme immobilization
AU3345193A (en) * 1991-12-19 1993-07-19 Novo Nordisk A/S An improved method for the preparation of certain beta-lactam antibiotics
WO1997004086A1 (en) 1995-07-18 1997-02-06 Gist-Brocades B.V. An improved immobilized penicillin g acylase
US6060268A (en) * 1995-07-18 2000-05-09 Gist-Brocades B.V. Penicillin G acylase immobilized with a crosslinked mixture of gelled gelatin and amino polymer
DE19804518C2 (de) * 1998-02-05 2000-10-05 Roehm Gmbh Verfahren zur Herstellung von perlförmigen Mischpolymerisaten auf Acrylatbasis, danach hergestellte Trägerpolymermaterialien und deren Verwendung

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
See references of WO2004050893A1 *

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US7264943B2 (en) 2007-09-04
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AU2003283271A1 (en) 2004-06-23
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WO2004050893A1 (de) 2004-06-17
DE10256656A1 (de) 2004-06-17
US20050084925A1 (en) 2005-04-21

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